WO2000014532A1

WO2000014532A1 - Procede de prevention de la denaturation sanguine et dispositif d'analyse sanguine utile a cette fin

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Publication number: WO2000014532A1
Application number: PCT/JP1999/004691
Authority: WO
Inventors: Satoshi Nishimura; Kouji Higashino
Original assignee: Arkray Inc; Kyoto Daiichi Kagaku KK
Current assignee: Arkray Inc
Priority date: 1998-09-02
Filing date: 1999-08-30
Publication date: 2000-03-16
Anticipated expiration: 2001-03-02
Also published as: DE69929527T8; EP1111384A4; DE69929527T2; DE69929527D1; EP1111384A1; AU5445799A; US6379318B1; JP3380230B2; EP1111384B1

Description

血液変性防止方法およびそれに用いる血液検査用具技術分野

本発明は、血液の変性、特にヘモグロビンの変性を防止する方法およびそれを用いる血液検査用具に関する。

明

背景技術田

ヘモグロビン（Hb) にグルコースが結合したヘモグロビン A 1 c ( Hb A l c ) は、生体の 1〜 2か月前の平均血糖値を反映するため、成人病検診や治療指導に広く用いられている。しかし、 H b A l cの測定には時間がかかることから、例えば、外来患者が病院に来たときに採血したとしても、 H b A l cの検査結果は、その患者の次回の受診の際に、評価することが一般的である。このため、 H b A l cの測定値が、糖尿病診断の重要な指標であっても、これを治療などに有効に活用することができないのが現状であった。

この問題を解決するために、濾紙等から形成された採血カードが提案されている（「糖尿病」 3 8卷 1 0号（ 1 9 9 5年）、特開平 1 0— 1 04 2 2 6号公報等）。患者は、この採血カードに、自分自身で採血した血液を含浸乾燥させ、これを病院に郵送する。このカードを受けとつた病院では、前記カードの血液含浸部分を切り取り若しくは打ち抜き（パンチアウト）、これから血液を溶出して、 H b A l c等の所定の項目について検査するのである。そして、患者が病院に来たときに、前記検査結果を基に、治療や診断をする。

しかしながら、血液を採取し、前記採血カードにより血液を郵送して検査するまでには、 1 日から数日の時間がかかり、また乾燥状態で血液を保持していることから、 H bが変性するおそれがある。例えば、採血カードにおいて、 H bとグルコースとが反応し、新たに H b A l eが生成すると、生体内で生成した H b A 1 cの値を正確に測定できなくなる。また、 H bがタンパク変性すると、高速液体クロマトグラフィー（H P L C) を用いた測定において、変性 H b ピークが出現し、これが H b A 1 cのピークに影響を与え、測定不能若しくは測定誤差を生じる要因になる。発明の開示

そこで、本発明の目的は、乾燥状態の血液の変性を防止する方法およびそれを用いた血液検査用具の提供である。

前記目的を達成するために、本発明の血液変性防止方法は、乾燥状態の血液の変性を防止する方法であって、乾燥状態の血液とカルボン酸とを共存させることを特徴とする。

カルボン酸と血液とを共存させると、乾燥状態であっても、新たな H b A l c生成が抑制され、また H bのタンパク変性も抑制される。 H b A l eの生成は、まず、 H bとグルコースとが非酵素的に反応（可逆反応）して、不安定型であるアルドィミンが生じ、これがアマドリ転移して、安定型のケトァミン（H b A l c) に変化する。カルボン酸は、前記不安定型のアルドィミンの生成を抑制することにより、新たな H b A 1 cの生成を防止すると推察される。一方、カルボン酸による H bのタンパク変性抑制機構は不明であるが、後述する実施例から分かるように、その効果は顕著である。

なお、本発明において、 H bが変性するとは、タンパク変性のように H bのタンパク構造が変化するだけでなく、他の物質により修飾されること等も含む。

本発明の血液変性防止方法において、非乾燥状態の血液にカルボン酸を添加してから前記血液を乾燥させることが好ましい。このように、乾燥前の液状血液にカルボン酸を添加すれば、前記血液とカルボン酸とが充分に接触できるため、その後の乾燥状態における血液の変性をより防止することができる。

カルボン酸のなかで、クェン酸が H bの変性抑制効果が高いため、本発明では、クェン酸を用いることが好ましい。しかし、本発明では、シユウ酸、ピルビン酸、酢酸等のカルボン酸を用いてもよい。カルボン酸の添加量は、非乾燥状態の血液 1 0 0重量部に対し、通常、 1 . 5 〜 1 0重量部であり、好ましくは 2 . 5 〜 6重量部である。

本発明の血液変性防止方法において、カルボン酸に加え、非還元糖と血液とを共存させることが好ましい。非還元糖であれば、 H b と反応するおそれもなく、 H bの変性をさらに抑制できるからである。前記非還元糖としては、ショ糖が好ましいが、この他に、トレハロース等の非還元糖も使用できる。非還元糖の量は、非乾燥状態の血液 1 0 0重量部に対し、通常、 1 0 〜 5 0重量部であり、好ましくは 2 0 〜 3 0重量部である。

本発明の血液変性防止方法において、血液と、前記カルボン酸および非還元糖に加え、血液凝固防止剤および酸化防止剤の少なくとも一方とを共存させることが好ましい。前記血液凝固防止剤としては、エチレンジァミン四酢酸（E D T A ) 、へパリン、シユウ酸塩等があげられ、この中で、 E D T Aが好ましい。前記血液凝固防止剤の量は、非乾燥状態の血液 1 0 0重量部に対し、通常、 1 〜 5重量部であり、好ましくは 1 . 5 〜 3重量部である。前記酸化防止剤としては、グルタチオン（G S H ) 、 α — トコフエロールなどがあげられ、このなかで、 G S Hが好ましい。前記酸化防止剤の量は、非乾燥状態の血液 1 0 0重量部に対し、通常、 0 . 1〜 8重量部であり、好ましくは 0 . 1〜3重量部である。本発明の血液変性防止方法において、前記乾燥状態は、血液を多孔質材に含浸させて乾燥した状態であることが好ましい。

つぎに、本発明の血液検査用具は、血液を多孔質材に含浸させて乾燥状態で保持する血液検査用具であって、前記多孔質材の血液を保持する部分（以下、「血液保持部分」という）にカルボン酸を有する。

本発明の血液検査用具において、前記本発明の血液保存方法と同様に、カルボン酸としてはクェン酸が好ましく、前述したカルボン酸も使用できる。また、カルボン酸の量は、前述と同様である。

本発明の血液検査用具において、前記血液保持部分に、カルボン酸に加え、非還元糖も有することが好ましい。前記非還元糖としては、ショ糖が好ましく、前述した非還元糖も使用できる。また、非還元糖の量は、前述と同様である。

本発明の血液検査用具において、前記血液保持部分に、前記カルボン酸および非還元糖に加え、血液凝固防止剤および酸化防止剤の少なくとも一方を有することが好ましい。前記血液凝固防止剤としては、 E D T Aが好ましく、前述した血液凝固防止剤も使用できる。また、血液凝固防止剤の量は、前述と同様である。前記酸化防止剤としては、 G S Hが好ましく、また前述の酸化防止剤も使用できる。前記酸化防止剤の量は、前述と同様である。

本発明の血液検査用具において、前記血液保持部分が、前記多孔質材の内部またはその周囲に設けた血液拡散防止層により囲まれていることが好ましい。

このように、前記液体拡散防止層を有すれば、多孔質材に付着した血液が必要以上に面方向に拡散することを防ぎ、厚み方向への拡散が促進されるため、血液を前記多孔質材の一定領域内（血液保持部分）に確保できる。また、前記血液保持部分が一定領域であるため、多孔質材による篩い効果を防止でき、例えば、血液を付着した中心部分と、血液が広がった面方向における拡散部分との間に血球等の成分の濃度差が起こりにくくなる。このように、前記血液保持部分の面方向における血液中成分の濃度を均一に保つことができるため、例えば、血液保持部分の打ち抜き箇所も特に制限されず、作業が非常に簡単になり、再現性に優れた測定を行なうことも可能になる。

本発明の血液検査用具において、前記血液保持部分の外部へ血液が拡散することを確実に防止できることから、前記血液拡散防止層が、無孔構造の層であることが好ましい。

前記無孔構造の層は、例えば、前記多孔質材に樹脂を含浸させて、前記多孔質材の孔構造を無孔化させたものでもよい。前記多孔質材に含浸させる樹脂としては、例えば、ポリビュルプチラール、ェチルセルロース、酢酸セノレロース、ポリエチレンテレフタレート、ポリエチレン、ゼラチン等が使用できる。

また、前記液体拡散防止層は、ポリスチレン、ポリエチレンテレフタレート、ポリビュルクロライド等のプラスチック、ガラス、金属等の部材でもよく、前記多孔質材をこれらの部材で囲んでもよい。

また、前記血液拡散防止層は、無孔構造および多孔構造にはかかわらず、血液の拡散を防止できることから、疎水性であることも好ましい。疎水性の血液拡散防止層としては、例えば、前記多孔質材に前記疎水性樹脂を含浸させることにより形成された層であってもよい。前記疎水性樹脂としては、例えば、ポリアセタール樹脂、フッ素樹脂、シリコン樹脂等が使用できる。

本発明の血液検査用具において、前記多孔質材が、カード状であることが好ましい。カード状であれば、取り扱い性に優れ、郵送等にも便利だからである。

本発明の血液検査用具において、前記血液保持部分が、支持体に支持され、前記支持体からの脱着が可能であることが好ましい。このように、前記血液保持部分が、前記支持体からの脱着可能であれば、例えば、前述のような打ち抜き工程を省略でき、これによりクズの発生も防止できる。このため、測定前に、濾過や遠心分離により前記クズを除去する必要がなく、より簡便に測定を行なうことができる。

本発明の血液検査用具において、その形状が有底筒状であり、その底部が前記多孔質材であることが好ましい。このように、血液検査用具が有底筒状であれば、この血液検査用具自体を溶出容器として使用することができ、特別な溶出容器を準備する必要がない。また、例えば、前記血液検査用具の多孔質材に血液を含浸させ乾燥した後、その内部に溶出液を入れ、前記溶出液を底部の前記多孔質材に浸透 ·透過させることにより、血液の溶出も行なうことができるため、血液の溶出を簡便かつ迅速に行うことができる。具体的には、例えば、前記有底筒状血液検査用具の中に注いだ溶出液は、重力によって前記多孔質材に浸透し、前記多孔質材を通過する際に、保持された血液の溶出を行う。そして、前記多孔質材を通過した溶出液は、前記有底筒状血液検査用具の下部に配置した容器等に回収されることにより、溶出作業が完了する。このような血液検査用具を使用すれば、例えば、溶出作業完了後、直ちに測定を行うことができるため、前述のように打ち抜き作業の手間が省け、多孔質材の小さなクズも発生することがなく、また、振とう機等の専用機を用いることなく、短時間で簡単に溶出作業を行うことができる。図面の簡単な説明図 1は、本発明の血液検査用具の一実施例を示す平面図である。

図 2において、（a ) は、本発明の血液検査用具のその他の実施例を示す平面図であり、（b ) は、その断面図である。

図 3は、本発明の血液検査用具のさらにその他の実施例を示す平面図であり、（a ) は、液体拡散防止層に囲まれた血液保持部分を示し、（ b ) は、前記血液保持部分を支持するホルダーを示す。

図 4において、（a ) は、前記実施例における前記血液保持部分の断面図であり、（b ) は、前記ホルダーの断面図である。

図 5は、本発明の血液検査用具のさらにその他の実施例を示す平面図であり、（a ) は、液体拡散防止層に囲まれた血液保持部分を示し、（ b ) は、前記血液保持部分を支持するホルダーを示す。

図 6は、本発明の血液検査用具のさらにその他の実施例を示す断面図である。

図 7は、本発明の血液検査用具のさらにその他の実施例を示す断面図と、前記血液検査用具に保持された血液の回収に用いる溶出液回収槽の一例を示す断面図である。

図 8は、前記実施例において、前記血液検査用具に保持された血液を回収する際の、前記血液検査用具および溶出液回収槽の使用状態を示す断面図である。

図 9は、本発明の血液検査用具のさらにその他の実施例において、採血管により採血を行った血液検体を 1 日間保存した場合の H b A 1 c と前記血液検体の採血直後の H b A 1 c との相関関係を示すグラフである図 1 0は、本発明の血液検査用具の前記実施例において、採血管により採血を行った血液検体を 4 日間保存した場合の H b A 1 c と前記血液検体の採血直後の H b A 1 c との相関関係を示すグラフである。図 1 1は、本発明の血液検査用具の前記実施例において、採血管により採血を行った血液検体を 5 日間保存した場合の H b A 1 c と前記血液検体の採血直後の H b A 1 c との相関関係を示すグラフである。発明を実施するための最良の形態

本発明の血液検査用具は、例えば、多孔質材に、カルボン酸（必要に応じ、非還元糖、血液凝固防止剤および酸化防止剤）を溶解若しくは分散した液を含浸させ、ついで乾燥することにより製造できる。前記乾燥は、自然乾燥でも風乾でもよい。この多孔質材の平均孔径は、血液が浸透し、保持されるのであれば、特に制限されないが、通常、 3〜 1 0 μ mの範囲である。

前記多孔質材としては、特に制限されないが、通常、濾紙、ガラスフィルター、樹脂製の多孔質膜等が使用される。このなかで、コストや取り扱い性等の理由により、濾紙が好ましい。また、前記樹脂製多孔質膜の材料としては、例えば、ポリスルホン、ポリエステル、ナイロン、二トロセルロース、ポリカーボネート等があげられる。

(実施例 1 )

図 1に、本発明の血液検査用具の一例を示す。図示のように、この血液検査用具は、カード状であり、その下部に〇で示した三か所の血液付着部分（血液保持部分）があり、上部には、氏名等の所定事項が記載できるようになつている。この血液検査用具において、全体が濾紙等の多孔質材で形成されていてもよいが、前記血液保持部分のみ多孔質材で形成されていてもよい。この血液保持部分に、カルボン酸、必要に応じ非還元糖、血液凝固防止剤および酸化防止剤が存在する。この血液検査用具の大きさは、特に制限されないが、郵送等の利便性を考慮すると、ハガキサイズ若しくはこれより若干小さいことが好ましい。また、前記血液保持部分を外部環境から遮断するために、血液を含浸後、前記血液保持部分表面を、樹脂フィルム等でシールしてもよい。

患者等は、自分で指先等から血液を採取し、この血液を前記血液検査用具の〇で囲まれた血液保持部分に付着させる。付着した血液は、血液保持部分に速やかに浸透し、保持される。そして、自然乾燥若しくは風乾等により乾燥させたのち、これを封筒等に入れて、所定の病院や検査機関に郵送する。この郵送から検査までの間において、前記カルボン酸の作用により、 H bの変性が抑制される。そして、病院等において、前記血液検査用具の血液保持部分を切り取るか若しくは打ち抜き、さらに溶出処理を行い、得られた溶出液を用いて H b A 1 c等の所定の検査を行う。

(実施例 2 )

図 2に液体拡散防止層を有する本発明の血液検査用具の一例を示す。同図（a ) は、前記血液検査用具の構成概略を示す上面図であり、同図（b ) は、前記血液検査用具の I 一 I方向断面図である。図示のように、この血液検査用具は、全体が長方形板状の多孔質材 8からなり、この内部にリング状の液体拡散防止層 1が形成され、これに囲まれた部分が血液保持部分 2となっている。また、多孔質材 8の表面の一部には、被検者の氏名、住所、 I D番号等を記入する記入部 3が設けられている。

この血液検査用具の大きさは、例えば、最大長さ 4 0〜 1 5 0 m mの範囲、最大幅 1 0〜 1 0 0 m mの範囲、最大厚み 5〜 1 0 0 μ mの範囲である。

血液保持部分 2の大きさおよび形状は、特に制限されないが、円形状の場合、例えば、直径 5〜 5 0 m mの範囲である。なお、前述と同様に、この血液保持部分 2に、カルボン酸、必要に応じ非還元糖、血液凝固防止剤および酸化防止剤が存在する。また、液体拡散防止層 1の形状や幅も、特に制限されないが、その幅は、例えば、 0 . 5〜 5 m mの範囲である。

この血液検査用具において、前述のように全体が多孔質材であっても良いし、血液保持部分 2のみが多孔質材であっても良い。前記多孔質材としては、例えば、濾紙、ガラスフィルター、多孔質樹脂等が使用でき、この中でも、コストや取り扱いの簡便性等の点から、濾紙が好ましい。この多孔質材の平均孔径は、血液が浸透し、保持されるのであれば、特に制限されず、例えば、 1〜 1 0 /i mの範囲である。

液体拡散防止層 1は、例えば、前述のような樹脂を溶剤に溶解または分散した溶液（以下、「樹脂溶液」という）を調製し、これを多孔質材 8に印刷や塗布すること等によって形成できる。この液体拡散防止層 1 の形成により、血液保持部分 2の大きさを適宜決定できる。このようにして形成された液体拡散防止層 1は、例えば、前述のように多孔質材の孔構造が前記樹脂により無孔化されていてもよいし、多孔構造であっても、疎水性樹脂を含浸させることにより疎水性にすれば問題ない。

この血液検査用具では、例えば、血液保持部分 2表面に血液を付着させると、前記血液は、血液保持部分 2を面方向および厚み方向に向って拡散 ·浸透する。この際に、液体拡散防止層 1により、血液が血液保持部分 2外部の多孔質材 8に向って拡散することが防止される。

(実施例 3 )

図 3および図 4に、血液保持部分が脱着可能である本発明の血液検査用具の一例を示す。図 3 ( a ) は、液体拡散防止層に囲まれた血液保持部分の上面図であり、図 3 ( b ) は、前記血液保持部分を支持するホルダ一の上面図である。また、図 4 ( a ) は、前記図 3に示す前記液体拡散防止層に囲まれた血液保持部分の I 一 I方向断面図であり、図 4 ( b ) は、前記図 3に示す前記ホルダーの I I一 I I方向断面図である。なお、図 3および図 4において、図 2と同一部分には同一符号を付している。このような血液検査用具は、例えば、両図（a ) に示す液体拡散防止層 1に囲まれた血液保持部分 2を、両図（b ) に示すホルダー 7の凹部状支持部 4にはめ込むことにより使用できる。なお、前記両者は、脱着可能な程度に接着剤等によって接着してもよい。

両図（ a ) に示す液体拡散防止層 1に囲まれた血液保持部分 2は、例えば、多孔質材を円形に打ち抜いて、その側面に前述のような樹脂溶液等を塗布することにより作製できる。なお、前述と同様に、この血液保持部分 2に、カルボン酸、必要に応じ非還元糖、血液凝固防止剤および酸化防止剤が存在する。

このように血液保持部分 2が脱着可能な血液検査用具を用いて血液を溶出する際には、例えば、液体拡散防止層 1に囲まれた血液保持部分 2 をホルダー 7からはずし、溶出液に浸漬すればよい。血液保持部分 2の周囲には、例えば、前述のような樹脂等が塗布されているため、多孔質部材がほどけて溶出液中に放出されることがない。そのため、測定を行う前に濾過や遠心分離によって小さなクズを分離する手間を省くことができる。なお、本発明において、血液保持部分および液体拡散防止層の形状等は、特に制限されない。

(実施例 4 )

図 5に、前記実施例 3の血液検査用具とは異なる形状の液体拡散防止層を有する本発明の血液検査用具の一例を示す。同図（ a ) は、液体拡散防止層に囲まれた血液保持部分の上面図であり、同図（b ) は、前記血液保持部分を支持するホルダーの上面図であり、同図において、図 3 と同一部分には同一符号を付している。図示のように、液体拡散防止層 1は、その外形が正方形であり、その内部に円形の血液保持部分 2が形成されている。

液体拡散防止層 1および血液保持部分 2は、例えば、多孔質材の円形部分の周囲に、前記樹脂溶液等を印刷 ·塗布して含浸させ、正方形に打ち抜くことによって作製できる。

なお、本実施例の血液検査用具において、その他の構成および使用方法は、前記実施例と同様である。

(実施例 5 )

図 6の断面図に、液体拡散防止層に囲まれた血液保持部分が脱着可能である本発明の血液検査用具のその他の例を示す。図示のように、この血液検査用具では、液体拡散防止層 1に囲まれた血液保持部分 2が、平らなホルダー 7上に積層されている。また、ホルダー 7からの血液保持部分 2の脱落を防止するため、脱着が可能な程度に前記両者が接着剤等により接着されている。

なお、本実施例の血液保持用具において、その他の構成および使用方法は、前記実施例と同様である。

(実施例 6 )

つぎに、図 7の断面図に有底筒状の本発明の血液検査用具の一例を示す。同図において、 9は、有底筒状の血液検査用具を示し、 1 0は、溶出液回収槽を示す。この有底筒状の血液検査用具 9は、図示のように、筒状体の底部に多孔質材が嵌入されて構成されており、前記筒状体が血液拡散防止層 1であり、多孔質材が血液保持部分 2である。また、溶出液回収槽 1 0は、容器 5の内壁に血液検査用具 9を保持するための保持部 6が配置されている。なお、図 7において、図 2と同一部分には同一符号を付している。

前記筒状体（液体拡散防止層 1 ) の形状は、特に制限されず、例えば、円筒状や、角筒状等があげられる。

このような有底筒状血液検査用具 9は、例えば、多孔質材を前記筒状体の底部になるように打ち抜き、これを前記筒状体に嵌入することにより作製できる。この際、前記両者の接触面を、接着剤等により接着することが好ましい。なお、前述と同様に、この血液保持部分 2 (底部の多孔質材）に、カルボン酸、必要に応じ非還元糖、血液凝固防止剤および酸化防止剤が存在する。

有底筒状血液検査用具 9は、例えば、内部の深さが 5〜 5 O m mの範囲であり、容量が 1〜 3 m 1 の範囲である。また、溶出液回収槽 1 0は、その内径が有底筒状血液検査用具 9の外径よりも大きいことが好ましく、例えば、内径 7〜 5 5 m mの範囲であり、内部の深さが 5〜 5 0 m mの範囲であり、容量が 1 〜 5 m 1 の範囲である。有底筒状血液検査用具 9と溶出液回収槽 1 0とは、脱着可能であることが好ましい。保持部 6は、有底筒状血液検査用具 9を保持できれば、その形状は特に制限されないが、図示のように傾斜した形状であれば、これを伝って血液を含む溶出液を回収できるため好ましい。

有底筒状血液検査用具 9の筒状体（液体拡散防止層） 1および溶出液回収槽 1 0の容器 5の材質は、特に制限されず、例えば、プラスチック、ガラス、金属等が使用できるが、添加する溶出液量および回収した溶出液量が外部から確認できることから、透明部材が好ましく、例えば、ポリスチレン、ポリエチレンテレフタレート等のプラスチックが使用できる。また、保持部 6の材質としては、特に制限されず、例えば、ポリスチレン、ポリエチレンテレフタレート等のプラスチックがあげられるこのような有底筒状血液検査用具 9を用いて、血液を回収する方法の一例を、図 8の断面図に基づいて説明する。同図において、図 7と同一部分には同一符号を付している。

例えば、まず、有底筒状血液検査用具 9の底部（血液保持部分 2) に血液を付着させ乾燥した後、図示のように、この有底筒状血液検査用具 9を、溶出液回収槽 1 0の保持部 6上に配置する。そして、検体保持用具 9の内部に溶出液 1 1をいれる。溶出液 1 1は、自然落下により、血液保持部分 2内を厚み方向（図中の矢印方向）に向って浸透しながら、保持された血液を溶出し、血液保持部分 2を透過する。透過した血液を含む溶出液 1 2は、溶出液回収槽 1 0に設けられた保持部 6を伝って、溶出液回収槽 1 0に溜められる。なお、血液の溶出を行なう場合、例えば、有底筒状血液検査用具 9の内部を陽圧にして、溶出液 1 1を多孔質材（血液保持部分） 2に強制的に浸透 ·透過させてもよい。

(実施例 7)

つぎに、本発明の血液検査用具を用いて、実際に乾燥状態における血液の変性防止を確認した実施例について、比較例と併せて説明する。

(実施例 7— 1、比較例 1 )

クェン酸 1水和物を、 2 0 m g /m 1および 5 0 m g /m 1 の割合で純水に溶解し、 2種類の処理液を調製した。これらの処理液 2. 5 m l をそれぞれ円形濾紙（ADVANTE C 1 0 1、直径 1 0 0 mm、東洋濾紙社製）に含浸後、風乾させ 2つの血液検査用具（a， b) を作製した。 2 0 m g /m 1濃度の処理液を用いたのは、血液検査用具 aであり、 5 0 m g/m 1濃度の処理液を用いたのは、血液検査用具 bである。また、比較例 1 として、クェン酸水溶液未処理の前記濾紙を、血液検査用具 c とした。

前記 3つの血液検査用具（a , b， c ) に、健常人新鮮血液を含浸させた後、風乾した。そして、前記 3つの血液検査用具（a， b， c ) を、 0 日、 2 日、 7 日、 8 日、 1 0日間、室温で保存後、血液含浸部分を、パンチを用いて直径約 6 mmの円形に打ち抜いた。この打ち抜き部分を、溶出液（ハイオートエーワンシー専用希釈液、京都第一科学社製） 0. 6 m 1 中に入れて約 1 0分間静置し、溶出処理を行った。この溶出液中の H b A l cを、全自動グリコヘモグロビン測定装置（ハイオートエーワンシー H A— 8 1 5 0、京都第一科学社製）を用い、溶血モードで測定した。また、対照として、前記健常人新鮮血液の H b A 1 cも、採血後、直ちに前記全自動グリコヘモグロビン測定装置で測定した。これらの結果を、下記の表 1に示す。なお、前記表において、 H b A l c の量は、全 H bに対する割合（％) で示しており、以下の表も同様である。

(表 1 )

H b A 1 c量— (％)

保存日数

血液検査用具 0 曰 2 曰 4 曰 7 曰 1 0 曰 a 4. 9 7 5. 3 2 5. 3 0 5. 5 8 5. 8 8 b 4. 74 4. 84 4. 8 8 4. 8 6 4. 9 9 c 5. 7 8 測定不可測定不可測定不可測定不可対照 5. 0 3 - 一一一前記表 1から分かるように、クェン酸水溶液で処理した血液検査用具 a , bでは、 H b A 1 cの生成を抑制することができた。これに対し、クェン酸水溶液未処理の血液検査用具 cでは、保存日数の経過とともに H b A 1 cおよぴ変性へモグ口ビンが増加して測定不可能となった。

(実施例 7— 2、比較例 2)

下記の表 2に示すように、クェン酸 1水和物、 EDTA ' 2 N a、ショ糖および還元型ダルタチオンを、純水に溶解し、 5つの処理液（d， e， f , g , h) を調製した。

(表 2)

処理液 (m g m 1 ) d e f g h クェン酸 1水和物 3 0 3 0 5 0 5 0 0

E D T A · 2 N a 1 7 1 7 1 7 1 7 0 ショ糖 3 0 0 3 0 0 3 0 0 6 0 0 0 還元型ダルタチオン 1 0 1 1 0 前記 5つの処理液 2. 5 m l を、それぞれ前記円形濾紙に含浸させたのち風乾させて、 5つの血液検査用具（d， e， f , g , h) を作製した。なお、血液検査用具の記号（d， e， f , g， h) は、前記処理液の記号（d， e， f , g， h ) に対応する。また、血液検査用具 hは、比較例 2である。

前記 5つの血液検査用具に、へパリン採血の健常人新鮮血液を含浸させ風乾させた。そして、前記 5つの血液検査用具（d， e， f , g， h ) を、 0 日、 1 日、 3 日、 6 日間、室温で保存後、血液含浸部分を、パンチを用いて直径約 6 mmの円形に打ち抜いた。この打ち抜き部分を、前記溶出液 0. 6 m I 中に入れて約 1 0分間静置し、溶出処理を行った。この溶出液中の H b A l cを、前記全自動グリコヘモグロビン測定装置を用い、溶血モードで測定した。また、対照として、前記へパリン採血の健常人新鮮血液も同様に保存して、その H b A l cを前記全自動グリコヘモグロビン測定装置で測定した。これらの結果を、下記の表 3に示す。

(表 3)

H b A l c量（％)一

保存日数

血液検査用具 0 曰 1 曰 3 曰 6 曰

d 5. 2 7 4. 8 5 4. 7 5 4. 7 7 e 5. 1 9 4. 8 5 4. 7 7 4. 8 1 f 5. 1 6 4. 9 6 4. 9 7 4. 9 8 g 5. 24 5. 00 5. 0 5 5. 0 5 h 5. 9 1 6. 7 0 7. 1 0 測定不可対照 5. 3 1 5. 3 3 5. 3 3 5. 2 6

前記表 3から分かるように、クェン酸に加え、ショ糖、 EDTA, グルタチオンを用いた血液検査用具（d， e ， f ， g) では、効果的に H b A 1 cの生成を防止できた。これに対し、クェン酸等を用いない血液検査用具 h (比較例 2) では、 H b A 1 cの顕著な増加が確認された。

(実施例 7 - 3)

E D T A、へパリンおよび N a Fを用いて採血した 2 6個の血液検体を、前記実施例 7— 2の血液検査用具 f にそれぞれ含浸させて風乾し、 1 日、 4 日および 5 日間室温で保存した。そして、前記血液検査用具 f の血液含浸部分を、パンチを用いて直径約 6 mmの円形に打ち抜いた。この打ち抜き部分を、前記溶出液 0. 6 m 1 中に入れて約 1 0分間静置し、溶出処理を行った。そして、前記全自動グリコヘモグロビン測定装置を用い、前記溶出液の H b A l cを測定した。また、前記血液検体の採取直後の H b A l cを、前記全自動グリコヘモグロビン測定装置を用いて測定した。そして、前記血液検査用具 f を用いて保存した場合の H b A l eの量と、採血直後の H b A 1 c との相関関係を調べた。図 9のグラフに 1 日間保存した場合の相関関係を示し、図 1 0のグラフに 4 日間保存した場合の相関関係を示し、図 1 1のグラフに 5 日間保存した場合の相関関係を示す。

図 9のグラフ、図 1 0のグラフおよび図 1 1のグラフから分かるように、血液検査用具 f を用いて保存した場合の H b A 1 cの量と、採血直後の H b A l cの量とは、高い相関関係を示した。以下に、回帰直線の式と相関係数を示す。

( 1 ) 1 日間保存

回帰直線式 y = 0. 9 6 6 7 + 0. 0 9 7 9

相関係数 r = 0. 9 9 8 7

(2) 4 日間保存

回帰直 /線式 y = 0. 9 1 9 6 x + 0. 2 0 5 6

相関係数 r = 0. 9 9 5 3

(3) 5 日間保存

回帰直線式 y = 0. 9 2 6 1 x + 0. 1 7 2 0

相関係数 r = 0. 9 9 8 3 (実施例 7— 4、比較例 3)

下記の表 4に示すように、クェン酸 1水和物およびショ糖を純水に溶解させて、 6種類の処理液（ i， j， k， 1， m， n) を調製した。これらの処理液 2. 5m l を、それぞれ前記円形濾紙に含浸させた後風乾し、 6つの血液検査用具（ i , j， k， 1， m, n) を作製した。なお、前記血液検査用具（ i， j , k , 1 , m, η) の記号は、前記処理液の記号（ i， j， k , 1， m， n) に対応する。また、血液検査用具（ 1， m， n ) は、比較例 3である。 (表 4)

処理液 (m g m 1 )

k m n クェン酸 1水和物 5 0 5 0 5 0 0 0 0 ショ糖 0 1 00 3 00 0 1 0 0 3 0 0 つぎに、前記血液検査用具に、へパリン採血の健常人新鮮血液を含浸した後、風乾し、 0 日間、 1 日間おょぴ 3 日間室温で保存した。そして、各保存期間の血液検査用具の血液含浸部分をパンチを用いて直径約 6 mmの円形に切り取り、これを前記溶出液 0. 6 m l に入れて約 1 0分間静置して溶出処理を行った。前記溶出液の H b A l cを、前記全自動ダリコへモグロビン測定装置を用い溶血検体モードで測定した。また、前記各溶出液を用い、汎用 HP L C (L a c h r o 日立製作所社製 ) によりタンパク変性 H bも測定した。なお、対照として、前記へパリン採血の健常人新鮮血液を冷蔵保存し、 0 日間、 1 日間および 3 日間保存後の H b A 1 cを前記同様にして測定した。これらの結果を、下記の表 5および表 6に示す。 (表 5)

H b A l c量（％)

保存日数

血液検査用具 0 日間 1 日間 3 日間 i 5 . 3 6 5. 3 0 5 . 2 8 j 5 . 4 9 5. 4 1 5 . 4 7 k 5 . 6 1 5. 5 3 5 . 6 1

1 6 . 6 0 7. 2 7 7 . 8 9 m 6 . 6 4 7. 1 9 8 . 1 5 n 6 . 8 4 7. 1 1 7 . 9 5 対照 5 . 9 1 5. 9 0 5 . 8 7

(表 6)

タンパク変性 H b量 (%)

保存日数

血液検査用具 0 日間 1 日間 3 日間

1 4 8 5 1 5. 0 2 6 7. 0 5 8 j 3 2 3 6 4. 3 9 5 6. 3 7 1 k 3 4 1 4 4. 1 8 8 5. 8 8 7

1 6 8 6 9 9. 3 9 5 1 7. 1 2 3 m 4 5 6 8 7. 6 00 9. 4 3 2 n 3 7 0 3 4. 8 24 6. 6 9 5 対照 3 1 43 3. 1 4 9 3. 0 6 8 前記表 5から分かるように、本発明の実施例となる血液検査用具（ i

， j , k ) では、 H b A l cの生成が抑制された。これに対し、クェン酸を用いなかった血液検査用具（ 1， m， n) では、前記血液検査用具 ( i , j , k) に比べ、 H b A 1 cの生成量は多かった。また、前記表 6から分かるように、本発明の実施例となる血液検査用具（ i， j , k ) では、 H bのタンパク変性が抑制され、またショ糖を使用した血液検査用具（ j， k) において、それが顕著であった。これに対し、クェン酸を用いなかった血液検査用具（ 1， m, n) では、ショ糖の量が増加すれば、 H bのタンパク変性が抑制される傾向が確認できたが、前記血液検査用具（ i， j， k ) に比べ、タンパク変性した H bの量は多かつた。産業上の利用可能性

本発明の血液変性防止方法および血液検査用具によれば、乾燥状態の血液において、 H b A l cの生成および H bのタンパク変性を抑制できる。したがって、例えば、本発明の血液検査用具を臨床医療に適用すれば、糖尿病診断の重要な指標となる H b A 1 cの測定を、正確かつ効果的に行うことが可能となる。

Claims

請求の範囲

I . 乾燥状態の血液の変性を防止する方法であって、乾燥状態の血液とカルボン酸とを共存させる血液変性防止方法。

2. 非乾燥状態の血液にカルボン酸を添加してから前記血液を乾燥させる請求項 1記載の血液変性防止方法。

3. カルボン酸が、クェン酸、シユウ酸、ピルビン酸および酢酸からなる群から選択された少なくとも一つのカルボン酸である請求項 1または 2記載の方法。

4. カルボン酸がクェン酸である請求項 3記載の方法。

5. 非乾燥状態の血液 1 00重量部に対して、 1. 5〜 1 0重量部の範囲のカルボン酸を添加する請求項 2記載の方法。

6. 非還元糖とも共存させる請求項 1または 2記載の方法。

7. 非還元糖がショ糖である請求項 6記載の方法。

8. 血液凝固防止剤および酸化防止剤の少なくとも一方を共存させる請求項 1または 2記載の方法。

9. 血液凝固防止剤が、エチレンジァミン四酢酸、へパリンおよびシユウ酸塩からなる群から選択される少なくとも一つの物質である請求項 8記載の方法。

1 0. 酸化防止剤が、ダルタチオンおよび α— トコフエロールのいずれか一方の物質である請求項 8記載の方法。

I I . 血液の乾燥状態が、血液が多孔質材に含浸して乾燥した状態である請求項 1または 2記載の方法。

1 2. 血液を多孔質材に含浸させて乾燥状態で保持する血液検査用具であって、前記多孔質材の血液を保持する部分にカルボン酸を有する血液検査用具。

1 3. カルボン酸が、クェン酸、シユウ酸、ピルビン酸および酢酸からなる群から選択された少なくとも一つのカルボン酸である請求項 1 2記載の血液検査用具。

1 4. カルボン酸がクェン酸である請求項 1 3記載の血液検査用具。

1 5. 多孔質材の血液を保持する部分に非還元糖も有する請求項 1 2 〜 1 4のいずれか一項に記載の血液検査用具。

1 6. 非還元糖がショ糖である請求項 1 5記載の血液検査用具。

1 7. 多孔質材の血液を保持する部分が、前記多孔質材の内部またはその周囲に設けた血液拡散防止層により囲まれている請求項 1 2〜 1 4 のいずれか一項に記載の血液検査用具。

1 8. 血液拡散防止層が、無孔構造の層である請求項 1 7記載の血液検査用具。

1 9. 血液拡散防止層が、疎水性である請求項 1 7記載の血液検査用具材。

2 0. 多孔質材の血液を保持する部分が、支持体に支持され、前記支持体からの脱着が可能である請求項 1 2または 1 7に記載の血液検査用具。

2 1. 有底筒状の血液検査用具であって、その底部が多孔質材である請求項 1 2または 1 7記載の血液検査用具。