WO2000027425A2 - Pharmazeutische präparation, enthaltend einen rezeptor-antagonisten zur behandlung von blutgerinnungsstörungen - Google Patents

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Definitions

  • the invention relates to a pharmaceutical preparation based on blood coagulation proteins and measures to extend their biological half-life.
  • Therapeutic proteins especially preparations for the treatment of blood coagulation disorders, which blood coagulation proteins, e.g. von Willebrand factor (vWF), often have relatively short half-lives in the organism. Thereby, therapeutic administration of such preparations can become ineffective within a short time or at least be severely impaired in their effectiveness.
  • vWF von Willebrand factor
  • activated factor VIII binds to the lipoprotein receptor related protein (LRP) via its A2 domain, this binding being responsible both for the internalization of factor VIII and for its degradation. It is also known that a receptor-associated protein (RAP), an inhibitor of LRP, can inhibit the internalization of the A2 domain of factor VIII, it being assumed that the dissociation of the A2 subunit from the remaining activated factor VIII Molecule is reversible.
  • LRP lipoprotein receptor related protein
  • RAP receptor-associated protein
  • the "low density lipoprotein related protein” is a multifunctional endocytotically active receptor that binds different ligands structurally and functionally and can endocytose.
  • RAP receptor-associated protein
  • LRP can act as a clearance receptor for tissue plasminogen activator (tPA), ie it is responsible for its removal from the blood circulation. Furthermore, other receptors, such as the mannose receptor, also seem to be important.
  • tPA tissue plasminogen activator
  • LRP can be involved in the clearance of many different ligands, such as proteinases, inhibitors, their complexes with proteinases, and various lipoproteins. LRP can be cell-bound as well as a soluble form (Quinn KA et al., XVIIth Congress of the International Society of Thrombosis and Haemostasis, 1999, abstract).
  • EP-0 713 881-A2 describes von Willebrand factor (vWF) concentrates in combination with antithrombolytics and / or fibrinolytics. The purpose of these preparations is to reduce the risk of bleeding during anticoagulation therapy.
  • vWF von Willebrand factor
  • US Pat. No. 5,304,383 describes a pharmaceutical preparation containing lys-plasminogen in combination with a serine protease inhibitor, such as aprotinin or ⁇ 2 -macroglobulin, which can be used for the treatment of plasminogen deficiency and thromboses.
  • a serine protease inhibitor such as aprotinin or ⁇ 2 -macroglobulin
  • the object of the invention is to provide a pharmaceutical preparation based on a blood coagulation protein which is characterized by an improved in vivo half-life.
  • the invention is also about Task to extend the in vivo half-life of a blood coagulation protein, on the one hand to stabilize the endogenous content of the blood coagulation protein and on the other hand to increase the efficiency of an exogenous blood coagulation protein.
  • a pharmaceutical preparation for the treatment of blood coagulation disorders which preparation contains at least one protein selected from the group of a pro-protein of blood coagulation.
  • This pharmaceutical preparation is further characterized by a content of a receptor binding competitor, which alone is coagulation physiologically inert, such as lipoproteins. This does not directly affect the effect of the protein on blood coagulation, the receptor binding competitor only contributes to the stabilization of the protein in vivo.
  • the protein in the preparation according to the invention is preferably a blood coagulation protein, selected from the group of factor II, V, VII, VIII, IX, X, XI, XII, vWF and protein C.
  • factor II prothrombin
  • factor II-active thrombin which enzymatically cleaves fibrinogen to fibrin and thus causes a blood clot.
  • vitamin K-dependent proteins which also occur in a prothrombin complex preparation based on factors II, IX and X and, if appropriate, factor VII and protein C.
  • vWF shows its independence as a blood coagulation factor, especially in platelet-rich plasma, regardless of its role as a carrier and stabilizer of factor VIII (Beguin et al., Thrombosis and Haemostasis 78 (1), 590-594 (1997)).
  • vWF is obtained from plasma or a plasma fraction, for example, but can also be produced by recombinant DNA technology, by expression of a transformed cell.
  • a recombinant vWF according to the instructions of Pannekoek (EP 0 197 592) or Fischer et al. (WO 96/10584).
  • the group of blood coagulation enzymogens or precursors of the coagulation physiologically active blood coagulation proteins are also available on the one hand from plasma or a plasma fraction and correspond to the native proteins.
  • the native proteins or their derivatives can also be obtained from cell culture supernatants.
  • the cells are preferably transformed by recombinant DNA technology in order to obtain the recombinant forms of the blood coagulation proteins.
  • Mutants or analogs are contained in the preparation according to the invention to the extent that they can still be used for the treatment of blood coagulation disorders and can bind functionally, ie competitively, to a receptor.
  • the lipoprotein receptor or LRP is to be mentioned above all as the receptor for the proteins of the preparation according to the invention.
  • Another receptor to which the proteins bind is the mannose receptor, for example.
  • the ligands of LRP have a positive effect in vivo, especially for pro-proteins of blood coagulation, in that these ligands bind competitively to the receptor. This was surprising in that it could not be assumed that pro-proteins from blood coagulation and vWF can bind to LRP.
  • LRP was primarily known for the binding of enzymes or their complexes with inhibitors. The competitive property of binding to LRP prevents premature binding of the protein in the pharmaceutical preparation or the endogenous blood coagulation zymogen and vWF, which significantly improves its bioavailability.
  • a number of proteins can be used as the receptor binding competitor, preference being given to those whose physiological tolerance has been checked.
  • the receptor binding competitor is preferably selected from the group of enzymes, in particular tissue-type plasminogen activator (tPA), urokinase (u-PA), pro-urokinase (pro-u-PA), lipoprotein lipase (LPL) and kallikrein; Inhibitors, in particular plasminogen activator inhibitor-1 (PAI-1), tissue factor pathway inhibitor (TFPI) and aprotinin; Enzyme inhibitor Complexes, in particular t-PA-PAI-1, u-PA-PAI-1 and thrombin-PAI-1, ⁇ 2 -Macroglobulin proteinase (fast form) ⁇ 2 M, ⁇ 2 M ', Pregnancy zone protein proteinase, Elastase-o ⁇ -antitrypsin, thrombin-antithrombin III, thrombin-heparin cofactor II and u-PA protease nexin I; Lipoproteins, in particular low density lipoproteinse
  • the competitive ligand is preferably selected from the physiological proteins that occur in the circulation as (human physiological) extracellular proteins. These can be used in native form or as their analogs with the property of binding to the receptor.
  • the competitive ligands are preferably RAP or a derivative thereof.
  • a fragment of RAP is particularly preferred which comprises the domain which prevents the binding of proteins to LRP and thereby inhibits the internalization and clearance of the proteins (I. Warshawsky et al., J. Biol. Chem., 1993, vol. 15 , pp. 22046-22054; Bu G., EMBO J., 1995, vol. 14, pp. 2269-2280).
  • It can be RAP or a derivative thereof which is of human origin, but also animal RAP or a derivative thereof, for example from mice, rats or other animals.
  • the receptor binding competitor is selected from the proteins which are coagulation physiologically inert, including, for example, "low density lipoprotein” (LDL) and apolipoprotein.
  • LDL low density lipoprotein
  • apolipoprotein apolipoprotein
  • mixtures of these receptor binding competing agents can also be used, which may not act as individual proteins, but in any case in a mixture do not have any undesirable influence on the exercise coagulation system.
  • examples of such mixtures are thrombin with ATIII or with heparin cofactor II, or with plasminogen activator inhibitor-1 (PAI-1), further also elastase and ⁇ x -antitrypsin, tPA with PAI-1.
  • PAI-1 plasminogen activator inhibitor-1
  • tPA plasminogen activator inhibitor-1
  • a preferred mixture is tPA and aprotinin, which is excellently suitable for stabilizing factor VIII in vivo.
  • the selected receptor binding competitor is therefore a ligand, the coagulation physiological effect of which is prevented, possibly by antagonization with the corresponding inhibitor.
  • a mutated form of the receptor binding competitor can also be used, which is inactivated by suitable mutations (for example in the active center) (but does not significantly change its affinity for the receptor ( is reduced.)
  • suitable mutations for example in the active center
  • suitable mutations for example in the active center
  • mutated forms of tPA, urokinase, kallikrein, renin, thrombin WO 96/418678 etc.
  • rtPA recombinant tPA
  • rtPA stabilized the endogenous factor VIII content in a vWF-deficient dog over a longer period of time, which made it possible to treat hemophilia.
  • the natural stabilizer of factor VIII namely vWF
  • the LRP ligand or the mixture of LRP ligands was able to take over the function of the vWF.
  • the factor VIII content was increased by approximately 50% and remained at this level for several days.
  • the enzyme tPA is a known ligand of the LRP. The administration of the rtPA to a mammal thus blocks LRP and thus prevents the metabolic breakdown of the coagulation factors, e.g. Factor VIII.
  • aprotinin Another preferred receptor binding competitor is aprotinin, which is ideal for stabilizing the vWF.
  • aprotinin cannot only be used in a vWF preparation. ration contribute to the improved bioavailability, but also, when administered as a single active substance, contribute to the improved condition of a vWF-deficient patient.
  • a patient with a deficiency in a certain protein is then treated with the respective receptor binding competitor in order to enable the formation of the endogenous protein or to stabilize the protein. This is possible in patients with phenotypic coagulation protein deficiency.
  • the preparation according to the invention or the active substances mentioned are preferably used as treated preparations or proteins in order to exclude the transmission of possible pathogens such as viruses or prions (TBE).
  • pathogens such as viruses or prions (TBE).
  • the effective measures for inactivating viruses include, for example, treatment with organic solvents and / or detergents (EP-0 131 740, EP-0 050 061, virus inactivating eluent), treatment with chaotropic agents (WO 90 15 613), heat treatment processes, preferably in the lyophilized, dry or moist state (see EP-0 159 311), combination methods such as that of (EP-0 519901) and physical methods.
  • the latter cause the inactivation of viruses, for example by irradiation with light, for example in the presence of photosensitizers (EP-0 471 794 and WO / AT 97/00068).
  • the depletion process of human pathogens includes in particular the filtration using ultrafilters, depth filters or nanofilters (A 341/98). Precipitation steps or other protein purification measures, such as adsorption, also contribute to the depletion of pathogens that may be present.
  • the preparation according to the invention can be made available on the one hand as a finished formulation, ie as a mixture of the protein with the receptor binding competitor. on the other hand it is also possible to provide a set which contains A) the protein and B) the receptor binding competitor.
  • the set has the advantage that the dose of the individual components is variable and the form of administration can be adapted to the existing conditions.
  • intravenous administration intramuscular, subcutaneous or oral administration of the active ingredients is also possible.
  • the active substances can be administered to the patient together, that is simultaneously, but also in parallel or consecutively.
  • the preparation according to the invention is preferably prefabricated in prefilled syringes with the individual components.
  • An indication according to the invention for the preparation is, for example, treatment of a patient with a phenotypic coagulation factor deficiency, e.g. of a vWF-deficient patient.
  • a preparation is produced on the basis of the coagulation factor, which is deficient in the patient, with the combination of the receptor binding competitor according to the invention.
  • the receptor binding competitor alone also corresponds to the indication according to the invention.
  • the receptor binding competitor for factor VIII is administered, which may be the mixture of tPA and aprotinin.
  • the present invention also relates to the use of an LRP ligand preparation for the preparation of an agent for the treatment of phenotypic coagulation factor deficiency (e.g. vWF, factor VIII or factor IX deficiency) or to extend the biological half-life of a protein.
  • phenotypic coagulation factor deficiency e.g. vWF, factor VIII or factor IX deficiency
  • Fig. 1 Factor VIII determination in the vWF-deficient dog
  • Fig. 2 vWF and factor VIII determination in vWF-deficient dog Examples:
  • a Kooiker dog with severe von Willebrand factor 3 deficiency (Rieger et al., Thromb. Haemost. (1998), 80: 332-337) male, 8.5 kg body weight, 2 years old, was given 10 mg / kg body weight anesthetized with ketamine (Ketasol, Dr. E. Graub AG, Bern, Switzerland) and 1 mg / kg xylaxin (Xylasol, Dr. E. Graub AG, Bern, Switzerland). Subsequently, permanent venous access was created via a forearm and a cannot of aprotinin (Pantinol 100,000 K.I.E. ampoules, Gerot Pharmazeutika, Vienna) in a dose of 10,000 K.I.E.
  • rtPA tissue plasminogen activator
  • blood coagulation factor VIII was determined quantitatively in the frozen blood samples using two different determination methods.
  • Factor VIII was measured against a human plasma factor VIII standard that had been calibrated against the third international standard 91/666.
  • the factor VIII activity is expressed in human factor VIII units per ml.
  • FIG. 1 The result of this determination is summarized in FIG. 1.
  • the two factor VIII determination methods carried out independently of one another, there was an increase in the factor VHI plasma activity, which persisted over a period of 24 to 48 hours and then at a level of approx. 150% of the initial value, regardless of the test method used remained constant for up to 96 hours after the start of the experiment.
  • a von Willebrand factor-deficient dog as in Example 1 was anesthetized and then pretreated with aprotinin (Pantinol) at a dose of 100,000 KIE as an intravenous bolus.
  • the animal was then given a recombinant von Willebrand factor preparation in a dose of 70 RcoF U / kg.
  • the production and characterization of the recombinant von Willebrand factor preparation is described in Fischer et al. , FEBS Lett. 375: 259 (1995).
  • an infusion of 100,000 KIE aprotinin was administered intravenously over three hours.
  • a human plasma standard served as the von Willebrand factor standard.
  • Factor VIII was also tested as described in Example 1. The results of the determination of the blood samples of von Willebrand factor and factor VIII activity can be seen in FIG. 2. A mean value of factor VIII activity, measured according to the two factor VIII determination methods, is plotted in the graph.
  • Von Willebrand factor as is known from the literature (Turecek et al., Blood 90: 3555 (1997)), was eliminated with a half-life of 10 to 20 h, so that after 48 h hardly any von Willebrand factor in the circulation was detectable. Simultaneously with the administration of the recombinant von Willebrand factor and aprotinin, the plasma factor VHI level rose to approx.
  • a mouse strain with severe factor VIII (FVIII) deficiency was genetically engineered by targeted disruption of the mouse factor VIII gene according to Bi et al. Nature Genetics 10: 119-121 create (1995) ⁇ ge. Factor VIII knock-out mice were inserted created a neo gene in the 3 'end of exon 17 of the mouse factor VIII gene.
  • the affected male animals (X'Y) had undetectable factor VIII levels of ⁇ 0.02 + 0.01 U / ml when measured either with a chromogenic factor VIII test, Hyland Immuno, Vienna, Austria, as recently described (Turecek et al., Thromb. Haemostas. Suppl. 769 (1997)) or by antigen ELISA as described below.
  • X'Y Two affected, hemizygous male mice (X'Y) were treated intravenously with a dose of 200 U / kg body weight of a recombinant human factor VIII (rhFVIII) preparation derived from Chinese hamster ovary cells, which were produced as described were (PCT WO / 85/01961), and had been pharmaceutically formulated without stabilizing protein.
  • rhFVIII recombinant human factor VIII
  • mice Under anesthesia, the tail tips of the mice were cut with a scalpel blade as described by Novak et al. , Brit. J. Haematol. 69: 371-378 (1998).
  • a volume of 50 ⁇ l of blood was collected from the tail wounds using capillary tubes (Ringcaps, Hirschmann, Germany), the capillary tubes being coated with lithium heparin as an anticoagulant.
  • the capillary tubes were closed and centrifuged to separate the blood cells from the plasma. The capillary tubes were then opened and the cell and plasma fractions were collected by further centrifugation.
  • RAP receptor-associated protein
  • the resulting protein consisted mainly of the fusion protein and cleavage products of RAP and glutathione-S-transferase.
  • the fusion protein was formulated in an injectable buffer ready for administration to the factor VIII knock-out mice.
  • blood samples were taken one hour after the administration of recombinant factor VIII and measured for factor VIII activity using factor VIII antigen ELISA. The results are shown in the table.
  • factor VIII recovery was more than 200% of the plasma level after treatment with recombinant factor VIII alone.

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Abstract

Beschrieben wird eine pharmazeutische Präparation zur Behandlung von Blutgerinnungsstörungen, die dadurch gekennzeichnet ist, daß sie mindestens ein Protein, ausgesucht aus der Gruppe von pro-Proteinen der Blutgerinnung und weiters einen gerinnungsphysiologisch inerten Rezeptor-Bindungskompetitor enthält, sowie deren medizinische Verwendung.

Description

Pharmazeutische Präparation enthaltend einen Rezeptor- Antagonisten zur Behandlung von Blutgerinnunσsstörunσen
Die Erfindung betrifft eine pharmazeutische Präparation auf Basis von Blutgerinnungsproteinen und Maßnahmen zur Verlängerung deren biologischen Halbwertszeit.
Therapeutische Proteine, insbesondere Präparationen zur Behandlung von Blutgerinnungsstörungen, welche Blutgerinnungsproteine, wie z.B. von Willebrand-Faktor (vWF) , beinhalten, haben oft relativ kurze Halbwertszeiten im Organismus. Dadurch kann eine therapeutische Verabreichung solcher Präparationen innerhalb kurzer Zeit wirkungslos werden oder zumindest in ihrer Wirksamkeit stark beeinträchtigt werden.
Vieles an den physiologischen Abbauwegen von Blutgerinnungsproteinen ist ebenso unbekannt wie die genauen Faktoren, die deren Halbwertszeit im Körper bestimmen.
So ist lediglich bekannt, daß aktivierter Faktor VIII über seine A2 -Domäne an das Lipoproteinrezeptor-verwandte Protein (lipopro- tein receptor related protein; LRP) bindet, wobei diese Bindung sowohl für die Internalisierung von Faktor VIII als auch für dessen Abbau zuständig ist. Es ist auch bekannt, daß durch ein Rezeptor-assoziiertes Protein (RAP) , einem Inhibitor von LRP, die Internalisierung der A2 -Domäne von Faktor VIII gehemmt werden kann, wobei angenommen wird, daß die Dissoziation der A2- Untereinheit vom übrigen aktivierten Faktor VIII-Molekül reversibel ist.
Das "low density lipoprotein related protein" ist ein multi- funktionell endozytotisch aktiver Rezeptor, der strukturell wie funktioneil unterschiedliche Liganden bindet und endozytieren kann. RAP ( "receptor-associated protein") inhibiert alle Interaktionen der Liganden mit LRP in vitro.
Prinzipiell wird vermutet, daß dieser Mechanismus von Bedeutung bei der Aktivitätsregulierung von Faktor Villa sein könnte (Blood 90 (10) Suppl. 1: 31a (1997)). Es ist auch bekannt, daß LRP als Abbaurezeptor (Clearence receptor) für Gewebeplasminogenaktivator (tPA) fungieren kann, d.h. für dessen Entfernung aus der BlutZirkulation verantwortlich ist. Weiters scheinen dabei auch weitere Rezeptoren, wie z.B. der Mannose-Rezeptor, von Bedeutung zu sein. Andererseits ist auch bekannt, daß LRP bei der Clearence von vielen verschiedenen Liganden, wie Proteinasen, Inhibitoren, deren Komplexe mit Proteinasen, sowie verschiedenen Lipoproteinen, beteiligt sein kann. LRP kann sowohl zellgebunden vorliegen als auch als lösliche Form (Quinn K.A. et al . , XVIIth Congress of the International Society of Thrombosis and Haemostasis, 1999, Abstract) .
Es wurde gefunden, daß tPA eine sehr schnelle Clearence im Blutkreislauf erfährt, und daß Mutanten von tPA sowie Inhibitoren der Clearence dazu verwendet werden können, um die Dosierung von tPA bei der Thrombolysetherapie zu verringern (Fibrinolysis and Proteolysis (1997), S. 173-186).
In RAP-defizienten Mäusen konnte nachgewiesen werden, daß die Clearence von α2-Makroglobulin in der Leber gestört ist. Hierbei wurde auch nachgewiesen, daß die Menge von reifem prozessierten LRP sowohl in der Leber als auch im Gehirn reduziert ist (PNAS, 92 (1995) , S. 4537-4541) .
In der EP-0 713 881-A2 werden von Willebrand-Faktor (vWF) -Konzentrate in Kombination mit Antithrombolytika und/oder Fibrino- lytika beschrieben. Zweck dieser Präparate ist die Verringerung der Blutungsrisiken bei einer Antikoagulationstherapie .
In der US 5 304 383 wird eine pharmazeutische Präparation, enthaltend lys-Plasminogen in Kombination mit einem Serinprotea- seinhibitor, wie Aprotinin oder α2-Makroglobulin, beschrieben, welche zur Behandlung von Plasminogen-Mangel und Thrombosen eingesetzt werden kann.
Die Erfindung stellt sich zur Aufgabe, eine pharmazeutische Präparation zur Verfügung zu stellen, auf Basis von einem Blutgerinnungsprotein, welches sich durch eine verbesserte in vivo- Halbwertszeit auszeichnet. Die Erfindung stellt sich weiters zur Aufgabe, die in vivo Halbwertszeit eines Blutgerinnungsproteins zu verlängern, um einerseits den endogenen Gehalt an dem Blutgerinnungsprotein zu stabilisieren und andererseits die Effizienz von einem exogenen Blutgerinnungsprotein zu steigern.
Die Aufgabe wird erfindungsgemäß durch eine pharmazeutische Präparation zur Behandlung von Blutgerinnungsstörungen gelöst, welche Präparation mindestens ein Protein, ausgesucht aus der Gruppe von einem pro-Protein der Blutgerinnung enthält. Diese pharmazeutische Präparation ist weiters durch einen Gehalt an einem Rezeptor-Bindungskompetitor gekennzeichnet, welcher alleine gerinnungsphysiologisch inert ist, wie beispielsweise Li- poproteine. Dadurch wird die Wirkung des Proteins auf die Blutgerinnung nicht unmittelbar beeinflußt, der Rezeptor-Bindungskompetitor trägt lediglich zur Stabilisierung des Proteins in vivo bei.
Das Protein in der erfindungsgemäßen Präparation ist vorzugsweise ein Blutgerinnungsprotein, ausgesucht aus der Gruppe von Faktor II, V, VII, VIII, IX, X, XI, XII, vWF und Protein C. Diese Proteine sind die Proformen von der gerinnungsphysiologisch wirksamen aktiven Form. Beispielsweise ist Faktor II (Pro- thrombin) die Proform des gerinnungsaktiven Thrombins, welches Fibrinogen zu Fibrin enzymatisch spaltet und damit ein Blutgerinnsel hervorruft. Zu diesen Proteinen zählen einerseits die Vitamin K-abhängigen Proteine, welche auch in einem Prothrombin- komplex-Präparat auf Basis der Faktoren II, IX und X und gegebenenfalls Faktor VII und Protein C vorkommen. Weiters ist ein mögliches Protein in der erfindungsgemäßen Präparation des vWF bzw. dessen analoge Proteine. vWF zeigt vor allem in Plättchenreichem Plasma seine Eigenständigkeit als Blutgerinnungsfaktor, unabhängig von seiner Rolle als Träger und Stabilisator des Faktor VIII (Beguin et al . , Thrombosis and Haemostasis 78 (1), 590- 594 (1997) ) . vWF wird beispielsweise aus Plasma oder einer Plasmafraktion gewonnen, kann aber auch durch rekombinante DNA-Technologie, durch Expression einer transformierten Zelle, hergestellt werden. Beispielsweise wird ein rekombinanter vWF nach der Vorschrift von Pannekoek (EP 0 197 592) bzw. Fischer et al . (WO 96/10584) hergestellt. Auch die Gruppe der Blutgerinnungszymogene bzw. Vorstufen der gerinnungsphysiologisch aktiven Blutgerinnungsproteine sind einerseits aus Plasma oder einer Plasmafraktion erhältlich und entsprechen den nativen Proteinen. Andererseits können die nati- ven Proteine bzw. deren Derivate auch aus Zellkulturüberständen gewonnen werden. Die Zellen werden dabei vorzugsweise durch re- kombinante DNA-Technologie transformiert, um die rekombinanten Formen der Blutgerinnungsproteine zu erhalten.
Mutanten bzw. Analoge sind insoweit in der erfindungsgemäßen Präparation enthalten, wie diese noch zur Behandlung von Blutgerinnungsstörungen eingesetzt werden können und an einen Rezeptor funktioneil, also kompetitiv, binden können.
Als Rezeptor für die Proteine der erfindungsgemäßen Präparation ist vor allem der Lipoproteinrezeptor zu nennen bzw. LRP. Ein weiterer Rezeptor, an dem die Proteine binden, ist beispielsweise der Mannose-Rezeptor . Es hat sich erfindungsgemäß überraschenderweise herausgestellt, daß die Liganden des LRP vor allem für pro-Proteine der Blutgerinnung eine positive Wirkung in vivo zeigen, indem diese Liganden an den Rezeptor kompetitiv binden. Dies war insofern überraschend, da nicht vermutet werden konnte, daß pro-Proteine der Blutgerinnung und vWF an LRP binden können. LRP war vor allem zur Bindung von Enzymen bzw. deren Komplexe mit Inhibitoren bekannt. Durch die kompetitive Eigenschaft der Bindung an LRP wird die vorzeitige Bindung des Proteins in der pharmazeutischen Präparation bzw. des endogenen Blutgerinnungs- zymogens und vWF verhindert, wodurch dessen biologische Verfügbarkeit wesentlich verbessert wird.
Als Rezeptor-Bindungskompetitor können eine Reihe von Proteinen eingesetzt werden, wobei diejenigen bevorzugt sind, deren physiologische Toleranz geprüft ist.
Erfindungsgemäß bevorzugt ist der Rezeptor-Bindungskompetitor ausgewählt aus der Gruppe der Enzyme, insbesondere Tissue-type Plasminogenaktivator (tPA) , Urokinase (u-PA) , pro-Urokinase (pro-u-PA) , Lipoproteinlipase (LPL) und Kallikrein; Inhibitoren, insbesondere Plasminogen-Aktivator- Inhibitor-1 (PAI-1) , Tissue factor pathway Inhibitor (TFPI) und Aprotinin; Enzym- Inhibitor- Komplexe, insbesondere t-PA-PAI-1, u-PA-PAI-1 und Thrombin-PAI- 1, α2-Macroglobulin-Proteinase (fast form) α2M, α2M' , Pregnancy zone protein-Proteinase, Elastase-o^-Antitrypsin, Thrombin-Anti- thrombin III, Thrombin-Heparin-Cofactor II und u-PA-Protease- Nexin I; Lipoproteine, insbesondere low density-Lipoprotein (LDL) , Apolipoprotein E angereichertes ß-very low density-Lipoprotein, (apo E-ß-VLDL) , LPL angereichertes VLDL (LPL-VLDL) und LPL angereichertes ß-VLDL (LPL-ß-VLDL) ; Matrix-Proteine, insbesondere Thrombospondin 1 und 2; Toxine und Viren, insbesondere Pseudomonas Exotoxin A, und Minor-group human Rhinovirus; oder andere Liganden, insbesondere Apolipoprotein E (apo E) , Lac- toferrin, Rezeptor-assoziiertes Protein (RAP) , FVIII und vWF.
Der kompetitiv wirkende Ligand ist vorzugsweise ausgewählt unter den physiologischen Proteinen, die vorzugsweise in der Zirkulation als (humanphysiologische) extrazelluläre Proteine auftreten. Diese können in nativer Form eingesetzt werden, oder als deren Analoge mit der Eigenschaft der Bindung an den Rezeptor.
Bevorzugterweise handelt es sich bei den kompetitiv wirkenden Liganden um RAP oder ein Derivat davon. Besonders bevorzugt ist ein Fragment von RAP, das jene Domäne umfaßt, die die Bindung von Proteinen an LRP verhindert und dadurch die Internalisierung und Clearance der Proteine inhibiert (I. Warshawsky et al . , J. Biol.Chem., 1993, vol. 15, pp. 22046-22054; Bu G., EMBO J. , 1995, vol. 14, pp. 2269-2280) . Es kann sich dabei um RAP oder ein Derivat davon handeln, das humanen Ursprungs ist, aber auch um tierisches RAP oder ein Derivat davon, beispielsweise aus Mäusen, Ratten oder anderen Tieren.
Um die Wirkung der pharmazeutischen Präparation bzw. der endogenen Proteine nicht zu beeinträchtigen, ist der Rezeptor-Bindungskompetitor ausgewählt unter den gerinnungsphysiologisch inerten Proteinen, darunter beispielsweise "low density lipopro- tein" (LDL) und Apolipoprotein.
Als gerinnungsphysiologisch inerter Rezeptor-Bindungskompetitor können auch Gemische dieser Rezeptor-Bindungskompetitoren eingesetzt werden, die eventuell nicht als einzelne Proteine, jedenfalls aber im Gemisch keinen unerwünschten Einfluß auf das Ge- rinnungssystem ausüben. Beispiele für solche Gemische sind Thrombin mit ATIII oder mit Heparin-Cofaktor II, oder mit Plas- minogen-Aktivator-Inhibitor-1 (PAI-1) , weiters auch Elastase und αx -Antitrypsin, tPA mit PAI-1. Beispielsweise ist ein bevorzugtes Gemisch tPA und Aprotinin, welches sich hervorragend zur Stabilisierung etwa des Faktor VIII in vivo eignet. Der gewählte Rezeptor-Bindungskompetitor ist hier also ein Ligand, dessen gerinnungsphysiologische Wirkung unterbunden ist, gegebenenfalls durch die Antagonisierung mit dem entsprechenden Inhibitor.
Anstelle eines Gemisches aus einem prinzipiell zwar wirksamen Rezeptor-Bindungskompetitor und einem geeigneten Antagonisten kann auch eine mutierte Form des Rezeptor-Bindungskompetitors verwendet werden, der durch geeignete Mutationen (z.B. im aktiven Zentrum) inaktiviert ist (dessen Affinität gegenüber dem Rezeptor aber nicht wesentlich verändert (verringert) ist.) Beispiele hierfür sind u.a. mutierte Formen von tPA, Urokinase, Kallikrein, Renin, Thrombin (WO 96/41868) etc.
Es war überraschend, daß rekombinanter tPA (rtPA) den endogenen Faktor VIII-Gehalt in einem vWF-defizienten Hund über einen längeren Zeitraum stabilisierte, wodurch die Hämophilie behandelt werden konnte. Obwohl der natürliche Stabilisator des Faktor VIII, nämlich vWF, fehlte, konnte der LRP-Ligand bzw. das Gemisch der LRP-Liganden die Funktion des vWF übernehmen. Der Faktor VIII-Gehalt wurde um ca. 50 % erhöht und blieb bei diesem Niveau mehrere Tage. Das Enzym tPA ist ein bekannter Ligand des LRP. Die Verabreichung des rtPA an ein Säugetier blockiert also LRP und verhindert somit den metabolischen Abbau der Gerinnungs- faktoren, wie z.B. Faktor VIII. Dieser blockierende Effekt wird noch durch Aprotinin verstärkt. Der Effekt von Aprotinin alleine konnte auch in einem vWF-defizienten Hund gezeigt werden, der eine Kombination von rvWF und Aprotinin erhielt. Dadurch wurde wiederum eine Erhöhung des Faktor VIII-Gehaltes über einen längeren Zeitraum bewirkt.
Ein weiterer bevorzugter Rezeptor-Bindungskompetitor ist Aprotinin, welches sich hervorragend zur Stabilisierung des vWF eignet. Aprotinin kann beispielsweise nicht nur in einer vWF-Präpa- ration zur verbesserten biologischen Verfügbarkeit beitragen, sondern auch, als einzelne Wirksubstanz verabreicht, zu verbesserten Zustand eines vWF-defizienten Patienten beitragen.
In vielen Fällen wird ein Patient mit einem Mangel an einem bestimmten Protein dann mit dem jeweiligen Rezeptor-Bindungskompetitor behandelt, um die Bildung des endogenen Proteins zu ermöglichen bzw. das Protein zu stabilisieren. Dies ist bei Patienten mit einem phänotypischen Gerinnungsproteinmangel möglich.
Das erfindungsgemäße Präparat bzw. die genannten Wirksubstanzen werden vorzugsweise als behandelte Präparate bzw. Proteine eingesetzt, um eine Übertragung von möglicherweise vorhandenen Pa- thogenen, wie Viren oder Prionen (TBE) , auszuschließen. Bei der Gewinnung aus biologischen Materialien, wie Blut, Plasma, Plasmafraktionen oder Zellkulturen, existiert ein Risiko der Kontamination mit Humanpathogenen, das jedoch durch eine entsprechende Behandlung zur Inaktivierung bzw. Abreicherung eliminiert werden kann. Zu den effektiven Maßnahmen zur Inaktivierung von Viren zählen beispielsweise die Behandlung mit organischen Lösungsmitteln und/oder Detergenzien (EP-0 131 740, EP-0 050 061, virus inactivating eluent) , die Behandlung mit chaotropen Mitteln (WO 90 15 613) Hitzebehandlungsverfahren, vorzugsweise in lyophilisiertem, trockenem oder feuchtem Zustand (siehe EP-0 159 311) , Kombinationsverfahren wie das der (EP-0 519901) und physikalische Methoden. Letztere bewirken die Inaktivierung von Viren, beispielsweise durch Bestrahlung mit Licht, etwa in Gegenwart von Photosensibilisatoren (EP-0 471 794 und WO/AT 97/00068) .
Zu dem Abreicherungsverfahren der Humanpathogene zählen insbesondere die Filtrationen unter Verwendung von Ultrafiltern, Tiefenfiltern oder Nanofiltern (A 341/98) . Aber auch Fällungsschritte bzw. andere Proteinreinigungsmaßnahmen, wie die der Adsorption, tragen zur Abreicherung von möglicherweise vorhandenen Pathogenen bei .
Die erfindungsgemäße Präparation kann einerseits als fertige Formulierung, d.h. als Gemisch des Proteins mit dem Rezeptor- Bindungskompetitor zur Verfügung gestellt werden. Andererseits ist es auch möglich, ein Set zur Verfügung zu stellen, welches A) das Protein und B) den Rezeptor-Bindungskompetitor enthält. Das Set hat den Vorteil, daß die Dosis der einzelnen Komponenten variabel ist und die Form der Administration den vorliegenden Verhältnissen angepaßt werden kann. Beispielsweise ist neben der iv-Verabreichung auch die intramuskuläre, subkutane oder orale Verabreichung der Wirkstoffe möglich. Die Wirksubstanzen können gemeinsam, also simultan, aber auch parallel oder konsekutiv dem Patienten verabreicht werden. Bei Verwendung eines Sets ist die erfindungsgemäße Präparation vorzugsweise in Fertigspritzen mit den einzelnen Komponenten vorgefertigt.
Eine erfindungsgemäße Indikation für das Präparat ist beispielsweise eine Behandlung eines Patienten mit einem phänotypischen Gerinnungsfaktormangel, z.B. eines vWF-defizienten Patienten. Dabei wird erfindungsgemäß ein Präparat hergestellt auf Basis des Gerinnungsfaktors, der im Patienten mangelhaft ist, mit der erfindungsgemäßen Kombination des Rezeptor-Bindungskompetitors . Aber auch der Rezeptor-Bindungskompetitor alleine entspricht der erfindungsgemäßen Indikation. Beispielsweise wird bei einem Mangel an funktionellem Faktor VIII der Rezeptor-Bindungskompetitor für Faktor VIII verabreicht, welcher eventuell das Gemisch tPA und Aprotinin ist.
Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist auch die Verwendung einer LRP-Ligandenpräparation zur Herstellung eines Mittels zur Behandlung von phänotypischem Gerinnungsfaktormangel (z.B. vWF-, Faktor VIII- oder Faktor IX-Mangel) oder zur Verlängerung der biologischen Halbwertszeit eines Proteins.
Die Erfindung wird an Hand der nachfolgenden Beispiele und der Zeichnungen, auf die sie jedoch nicht beschränkt sein soll, näher erläutert.
Es zeigen:
Fig. 1: Faktor VIII-Bestimmung im vWF-defizienten Hund
Fig. 2: vWF und Faktor VIII-Bestimmung in vWF-defizientem Hund B e i s p i e l e :
B e i s p i e l 1 :
Ein Kooiker Hund mit schwerem von Willebrand Faktor-Mangel vom Typ 3 (Rieger et al . , Thromb. Haemost. (1998), 80: 332-337) männlichen Geschlechts, 8,5 kg Körpergewicht, 2 Jahre alt, wurde mit 10 mg/kg Körpergewicht Ketamin (Ketasol, Dr. E. Gräub AG, Bern, Schweiz) und 1 mg/kg Xylaxin (Xylasol, Dr. E. Gräub AG, Bern, Schweiz) narkotisiert. Anschließend wurde ein permanenter venöser Zugang über einen Unterarm geschaffen und über eine Kanüle Aprotinin (Pantinol 100.000 K.I.E. Ampullen, Gerot Pharma- zeutika, Wien) in einer Dosis von 10 000 K.I.E. pro kg Körpergewicht als Bolus verabreicht. Anschließend wurde rekombinanter Gewebeplasminogenaktivator (Actilyse, Boehringer Mannheim) (rtPA) gemäß Herstellerangabe mit destilliertem Wasser rekonstituiert und dem von Willebrand-defizienten Hund in einer Dosis von 0,25 mg/kg Körpergewicht als Bolus verabreicht. Gleichzeitig wurde eine Blutprobe auf Zitrat entnommen. Innerhalb der ersten Stunde der Behandlung wurde eine Coinfusion von Aprotinin (3000 K.I.E. pro kg Körpergewicht) und rtPA 0,75 mg/kg Körpergewicht verabreicht und nach einer Stunde wurde auf eine Infusion gewechselt, die Aprotinin in einer Dosis von 3000 K.I.E. pro kg Körpergewicht und rtPA von 0,5 mg/kg Körpergewicht enthielt, und diese über eine Stunde verabreicht. Anschließend, d.h. nach zwei Stunden, wurde über eine weitere Stunde Aprotinin in einer Dosis von 3000 K.I.E. /kg Körpergewicht infundiert. Zu den Zeitpunkten 30 min, 1, 3, 24, 48, 92 und 96 Stunden nach Versuchsbeginn wurden Blutproben auf Zitrat abgenommen und durch Zentrifugation daraus plättchenarmes Plasma hergestellt und bei -20°C tiefgefroren und bis zur weiteren Analyse gelagert.
In den gefrorenen Blutproben wurde nach Abschluß des Infusions- experimentes Blutgerinnungsfaktor VIII mit zwei unterschiedlichen Bestimmungsmethoden quantitativ bestimmt. Erstens wurde die Zweistufengerinnungsmethode gemäß der Methode von Austen, D.E.G. und Rhymes, I.L., A Laboratory Manual of Blood Coagulation, Oxford, UK, Blackwell Scientific, (1975) , unter Verwendung der Reagentien des Zweistufen-Faktor VIII - Test-Kits der IMMUNO AG, Wien, verwendet. Zweitens wurde Faktor VIII mit dem chromogenen Faktor VIII-Test-Kit , Immunochrom FVIII:C der Immuno AG, Wien, bestimmt (Lang H. , Oberreiter M. , Moritz, B. Thromb. Haemost . 65:943, (1991)). Faktor VIII wurde gegen einen humanen Plasma Faktor VIII-Standard, der gegen den dritten internationalen Standard 91/666 kalibriert worden war, gemessen. Die Faktor VIII-Aktivität wird in humanen Faktor VIII-Einheiten pro ml ausgedrückt. Das Resultat dieser Bestimmung ist in der Fig. 1 zusammengefaßt. In den beiden unabhängig voneinander durchgeführten Faktor VIII-Bestimmungsmethoden zeigte sich ein Anstieg der Faktor VHI-Plasmaaktivität , der über einen Zeitraum von 24 bis 48 Stunden anhielt und anschließend auf einem Niveau von ca. 150 % des Ausgangswertes, unabhängig von der verwendeten Testmethode, über einen Zeitraum bis zu 96 Stunden nach Versuchsbeginn konstant blieb. Da bekannt ist, daß von Willebrand-Faktor gegen den proteolytischen Abbau durch Plasmin empfindlich ist, mußte angenommen werden, daß die Gabe von rtPA eine vermehrte von Willebrand-Faktor-Inaktivierung, verbunden mit einer sekundären Reduktion des Plasma-Faktor VIII-Spiegels durch Fehlen des Stabilisierungsproteins für Faktor VIII zu finden sein wird. Die gleichzeitige Gabe von Aprotinin als Inhibitor der Fibrinolyse und des Plasmins ließ lediglich eine Inhibition des rtPA-Effek- tes erwarten. Der scheinbar paradoxe Anstieg des Plasma-Faktor VIII-Levels kann daher durch die Interferenz von Aprotinin und/oder rtPA mit den Metabolisierungsmechanismen für Faktor VIII erklärt werden.
B e i s p i e l 2 :
Ein von von Willebrand-Faktor-defizienter Hund wie in Beispiel 1 wurde narkotisiert und anschließend mit Aprotinin (Pantinol) mit einer Dosis von 100.000 K.I.E. als intravenöser Bolus vorbehandelt. Anschließend wurde dem Tier ein rekombinantes von Willebrand-Faktor-Präparat in einer Dosis von 70 RcoF E/kg gegeben. Die Herstellung und Charakterisierung des rekombinanten von Willebrand-Faktor-Präparates ist in Fischer et al . , FEBS Lett . 375:259 (1995), beschrieben. Unmittelbar nach der Gabe des rekombinanten von Willebrand-Faktor-Präparates wurde über drei Stunden eine Infusion von 100.000 K.I.E. Aprotinin intravenös verabreicht. Blutproben auf Zitrat wurden vor Beginn des Versuches (= Zeitpunkt 0) 15 min, 30 min, 1 h, 3 h, 24 h und 48 h nach der Behandlung mit rekombinantem von Willebrand-Faktor entnommen und daraus Plasma, wie in Beispiel 1 beschrieben, hergestellt und bis zur weiteren Analyse bei -20°C tiefgefroren. Von diesen Blutproben wurde anschließend von Willebrand-Faktor-Anti- gen unter Verwendung eines Kaninchen Anti-Human-von Willebrand- Faktor-Antikörpers mit dem Test Asserachrom vWF, Boehringer Mannheim, gemessen. Außerdem wurde die Ristocetin-Cofaktor-Akti- vität, gemessen durch Ristocetin induzierte Aggregation Formaldehyd-fixierter humaner Blutplättchen und nach der Methode von Evans und Austen, Brit. J. Hetamol . 37:289 (1977) bestimmt. Als von Willebrand-Faktor-Standard diente ein humaner Plasma-Standard. Außerdem wurde Faktor VIII, wie in Beispiel 1 beschrieben, getestet. Die Resultate der Bestimmung der Blutproben an von Willebrand-Faktor und Faktor VIII-Aktivität sind der Fig. 2 zu entnehmen. In der Grafik ist ein Mittelwert der Faktor VIII-Aktivität, gemessen nach den beiden Faktor VIII-Bestimmungsmetho- den, als Graph eingezeichnet. Von Willebrand-Faktor wurde, wie aus der Literatur bekannt (Turecek et al . , Blood 90: 3555 (1997)), mit einer Halbwertszeits von 10 bis 20 h eliminiert, so daß nach 48 h kaum mehr von Willebrand-Faktor in der Zirkulation nachweisbar war. Gleichzeitig mit Gabe des rekombinanten von Willebrand-Faktors und des Aprotinins stieg der Plasma-Faktor VHI-Spiegel innerhalb von 3 h auf ca. 150 % des Ausgangswertes an und blieb dann auf diesem Niveau stabil oder zeigte sogar einen leicht steigenden Trend bis zu 48 h nach der Verabreichung. Auch dieses Ergebnis kann wie Beispiel 1 interpretiert werden, daß durch die Gabe des Aprotinins trotz fehlender Stabilisierung des Faktor VIII durch den rekombinanten von Willebrand-Faktor, durch eine Interferenz mit dem Faktor VIII-Metabolismus der Faktor VHI-Plasma-Spiegel anhaltend erhöht bleibt.
B e i s p i e l 3 :
Wirkung von RAP auf Faktor VIII-Gewinnung in Knock-out-Mäusen mit schwerem Faktor VIII-Mangel
Auf gentechnischem Wege wurde ein Mäusestamm mit schwerem Faktor VIII (FVIII) -Mangel durch gezielte Disruption des Mäuse-Faktor VIII-Gens gemäß Bi et al . Nature Genetics 10:119-121 (1995) ge¬ schaffen. Faktor VIII-Knock-out-Mäuse wurden durch eine Inser- tion eines neo-Gens in das 3 ' -Ende von Exon 17 des Mäuse-Faktor VIII-Gens geschaffen. Die betroffenen männlichen Tiere (X'Y) hatten nicht nachweisbare Faktor VIII-Levels von <0,02 + 0,01 E/ml, wenn Messungen entweder mit einem chromogenen Faktor VIII- Test, Hyland Immuno, Wien, Österreich, wie kürzlich beschrieben (Turecek et al . , Thromb. Haemostas . Suppl . 769 (1997)) oder mittels Antigen-ELISA, wie nachstehend beschrieben, vorgenommen wurden.
Zwei betroffene, hemizygote männliche Mäuse (X'Y) wurden intravenös mit einer Dosis von 200 E/kg Körpergewicht einer rekombinanten Human-Faktor VIII (rhFVIII) -Präparation behandelt, die von Chinese Hamster-Ovarien-Zellen stammte, die wie beschrieben hergestellt worden waren (PCT WO/85/01961) , und ohne stabilisierendes Protein pharmazeutisch formuliert worden war.
Unter Narkose wurden eine Stunde nach der Behandlung die Schwanzspitzen der Mäuse mit der Klinge eines Skalpells, wie von Novak et al . , Brit . J. Haematol . 69:371-378 (1998) beschrieben, eingeschnitten. Ein Volumen von 50 μl Blut wurde mit Kapillarrohrchen (Ringcaps, Hirschmann, Deutschland) aus den Schwanzwunden gesammelt, wobei die Kapillarrohrchen mit Lithium-Heparin als Antikoagulans beschichtet waren. Die Kapillarrohrchen wurden geschlossen und zentrifugiert , um die Blutzellen vom Plasma zu trennen. Danach wurden die Kapillarrohrchen geöffnet, und die Zeil- und die Plasma-Fraktion wurden durch weiteres Zentrifugie- ren gesammelt. Schließlich wurden die Plasmaproben der Faktor VIII-Bestimmung mittels Faktor VIII-Antigen ELISA, Test-Set IMMUNOZYM FVIII Ag, Hyland Immuno, Wien, Österreich, unter Verwendung von monoklonalen Antifaktor VIII-Antikörpern sowohl für das Abfangen wie für den Nachweis, wie beschrieben (Stel et al . , Nature 303:530-532 (1983); Lenting et al . , J. Biol . Chem. 269: 7150-7155 (1994); Leyte et al . , Biochem. J. 263:187-194 (1989)) unterzogen. Die resultierenden Faktor VIII-Werte wurden in internationalen Einheiten von humanem Faktor VIII ausgedrückt. Die Ergebnisse der Faktor VIII-Plasma-Level sind in der Tabelle angegeben.
Zwei andere betroffene hemizygote männliche Mäuse (X'Y) wurden mit rekombinantem Rezeptor-assoziiertem Protein (GST-RAP) 10 min vor der Behandlung mit dem rekombinanten humanen Faktor VIII mit einer Dosis von 40 mg/kg Körpergewicht vorbehandelt. Das bei dieser Untersuchung verwendete Rezeptor-verwandte Protein (RAP) , welches mit dem Low-Density-Lipoprotein-Rezeptor in Wechselwirkung tritt, wurde durch bakterielle Fermentation, wie von Hertz et al., J. Biol. Chem. 266:21232-21238 (1991) beschrieben, erhalten. Ein Fusionsprotein des RAP mit Glutathion-S-Transferase wurde in E. coli exprimiert und mittels Affinitätschromatographie auf Glutathion-Agarose gereinigt. Das resultierende Protein bestand hauptsächlich aus dem Fusionsprotein und Spaltprodukten von RAP und Glutathion-S-Transferase. Das Fusionsprotein wurde in einem injizierbaren Puffer bereit für eine Verabreichung an die Faktor VIII-Knock-out-Mäuse formuliert. Wie bei der Kontrollgruppe (Behandlung nur mit Faktor VIII) wurden Blutproben eine Stunde nach der Verabreichung von rekombinantem Faktor VIII genommen und unter Verwendung von Faktor VIII-Antigen-ELISA auf Faktor VIII-Aktivität gemessen. Die Ergebnisse sind in der Tabelle angeführt.
Figure imgf000015_0001
Bei mit GST-RAP vorbehandelten Mäusen betrug die Faktor VIII-Ge- winnung mehr als 200 % der Plasma-Level nach der Behandlung mit rekombinantem Faktor VIII allein.

Claims

P a t e n t a n s p r ü c h e :
1. Pharmazeutische Präparation zur Behandlung von Blutgerinnungsstörungen, enthaltend mindestens ein Protein, ausgesucht aus der Gruppe von einem pro-Protein der Blutgerinnung und weiters einen gerinnungsphysiologisch inerten Rezeptor-Bindungskompetitor.
2. Präparation nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß das pro-Protein der Blutgerinnung ausgesucht ist aus der Gruppe von Faktor II, V, VII, VIII, IX, X, XI, XII, vWF und Protein C.
3. Präparation nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß das Protein vWF ist .
4. Präparation nach einem der Ansprüche 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, daß das Protein aus einem biologischen Material ausgesucht aus der Gruppe von Humanplasma, einer Plasmafraktion und einem Zellkulturüberstand gewonnen ist.
5. Präparation nach einem der Ansprüche 1 bis 4, dadurch gekennzeichnet, daß der Rezeptor-Bindungskompetitor ein Ligand des Lipoprotein-Rezeptor-Related-Proteins (LRP) ist.
6. Präparation nach einem der Ansprüche 1 bis 5, dadurch gekennzeichnet, daß der Rezeptor-Bindungskompetitor RAP ist.
7. Präparation nach einem der Ansprüche 1 bis 6, dadurch gekennzeichnet, daß der Rezeptor-Bindungskompetitor ein Gemisch aus einem gerinnungsphysiologisch aktivem Protein und dessen Inhibitor ist, insbesondere tPA und Aprotinin.
8. Präparation nach einem der Ansprüche 1 bis 7, dadurch gekennzeichnet, daß das Gemisch tPA und Aprotinin enthält.
9. Präparation nach einem der Ansprüche 1 bis 8, dadurch gekennzeichnet, daß es als Set zur Verfügung gestellt wird, enthaltend a) das Protein und b) den Rezeptor-Bindungskompetitor.
10. Präparation nach einem der Ansprüche 1 bis 9, dadurch gekennzeichnet, daß das Protein Faktor VIII ist und der Rezeptor- Bindungskompetitor Aprotinin, gegebenenfalls gemeinsam mit tPA.
11. Präparation nach einem der Ansprüche 1 bis 9, dadurch gekennzeichnet, daß das Protein vWF ist und der Rezeptor-Bindungskompetitor Aprotinin ist.
12. Präparation nach einem der Ansprüche 1 bis 11, dadurch gekennzeichnet, daß der Rezeptor-Bindungskompetitor ein humanphysiologisches extrazelluläres Protein ist, oder dessen Analoges.
13. Präparation nach einem der Ansprüche 1 bis 12, dadurch gekennzeichnet, daß der Rezeptor-Bindungskompetitor ausgewählt aus der Gruppe der Enzyme, insbesondere Tissue-type Plasminogenakti- vator (tPA) , Urokinase (u-PA) , pro-Urokinase (pro-u-PA) , Lipo- proteinlipase (LPL) und Kallikrein; Inhibitoren, insbesondere Plasminogen-Aktivator-Inhibitor-1 (PAI-1) , Tissue factor pathway Inhibitor (TFPI) und Aprotinin; Enzym-Inhibitor-Komplexe, insbesondere t-PA-PAI-1, u-PA-PAI-1 und Thrombin-PAI-1, oc2-Macroglo- bulin-Proteinase (fast form) α2M, α2M', Pregnancy zone protein- Proteinase, Elastase-o^-Antitrypsin, Thrombin-Antithrombin III, Thrombin-Heparin-Cofactor II und u-PA-Protease-Nexin I; Lipopro- teine, insbesondere low density-Lipoprotein (LDL) , Apolipoprotein E angereichertes ß-very low density-Lipoprotein, (apo E-ß- VLDL) , LPL angereichertes VLDL (LPL-VLDL) und LPL angereichertes ß-VLDL (LPL-ß-VLDL) ; Matrix-Proteine, insbesondere Thrombospon- din 1 und 2; Toxine und Viren, insbesondere Pseudomonas Exotoxin A, und Minor-group human Rhinovirus; oder andere Liganden, insbesondere Apolipoprotein E (apo E) , Lactoferrin, Rezeptor assoziiertes Protein (RAP), FVIII und vWF, ist.
14. Kombinationspräparat enthaltend Aprotinin und tPA zur medizinischen Verwendung.
15. Verwendung eines Präparates nach einem der Ansprüche 1 bis 13 zur Herstellung eines Mittels zur Behandlung eines Patienten mit einem phänotypischen Gerinnungsfaktor-Mangel.
16. Verwendung nach Anspruch 15, dadurch gekennzeichnet, daß der Patient vWF-defizient ist.
17. Verwendung eines Präparates nach einem der Ansprüche 1 bis 13 zur Herstellung eines Mittels zur Verlängerung der biologischen Halbwertszeit des Proteins in vivo.
18. Verwendung eines Präparates nach Anspruch 17 enthaltend Aprotinin und tPA.
19. Verwendung nach Anspruch 17, dadurch gekennzeichnet, daß das Protein Blutgerinnungsfaktor VIII ist.
20. Verwendung einer pharmazeutischen Präparation eines LRP-Li- ganden zur Herstellung eines Mittels zur Behandlung eines Patienten mit phänotypischem Gerinnungsfaktor-Mangel.
21. Verwendung eines Präparates nach Anspruch 20 enthaltend Aprotinin und PA.
22. Verwendung nach Anspruch 20, dadurch gekennzeichnet, daß der Patient vWF-defizient ist.
23. Verwendung einer pharmazeutischen Präparation eines LRP-Li- ganden zur Herstellung eines Mittels zur Verlängerung der biologischen Halbwertszeit eines Proteins.
24. Verwendung einer pharmazeutischen Präparation nach Anspruch 23 enthaltend Aprotinin und tPA.
25. Verwendung nach Anspruch 23, dadurch gekennzeichnet, daß das Protein Blutgerinnungsfaktor VIII ist.
PCT/AT1999/000271 1998-11-10 1999-11-10 Pharmazeutische präparation, enthaltend einen rezeptor-antagonisten zur behandlung von blutgerinnungsstörungen Ceased WO2000027425A2 (de)

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Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2000071714A3 (en) * 1999-05-24 2001-01-18 American Nat Red Cross Methods of reducing factor viii clearance and compositions therefor
WO2003039580A1 (en) * 2001-11-09 2003-05-15 Novo Nordisk Health Care Ag Pharmaceutical composition comprising factor vii polypeptides and pai-1 polypeptides
WO2003099324A1 (en) * 2002-05-23 2003-12-04 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Agent neutralizint tissue factor inhibitor and agent neutralizing activated blood coagulation factor viii preparation
EP1454632A1 (de) * 2003-02-07 2004-09-08 Aventis Behring GmbH, Intellectual Property/Legal Pharmazeutische Zusammensetzung zur Behandlung von Blutgerinnungsstörungen enthaltend Peptide von Faktor VIII
JP2005535588A (ja) * 2002-04-29 2005-11-24 バクスター・インターナショナル・インコーポレイテッド 第ｖｉｉｉ因子と低密度リポタンパク質レセプター関連タンパク質との相互作用のアンタゴニスト
US7211559B2 (en) 2003-10-31 2007-05-01 University Of Maryland, Baltimore Factor VIII compositions and methods
US7615622B2 (en) 2001-01-12 2009-11-10 University Of Maryland, Baltimore Methods and compositions for reducing heparan sulfate proteoglycan-mediated clearance of factor VIII

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE4115453A1 (de) * 1991-05-11 1992-11-12 Knoll Ag Neue wirkstoffkombination
AT402263B (de) * 1991-06-20 1997-03-25 Immuno Ag Pharmazeutische präparation enthaltend eine thrombolytisch wirkende substanz
US5474766A (en) * 1992-12-18 1995-12-12 Washington University Methods and compositions for inhibition of hepatic clearance of tissue-type plasminogen activator
US5650391A (en) * 1994-03-21 1997-07-22 Jewish Hospital Of St. Louis Methods and compositions for inhibition of hepatic clearance of tissue factor pathway inhibitor
DE4437544A1 (de) * 1994-10-20 1996-04-25 Behringwerke Ag Einsatz von vWF-enthaltenden Konzentraten als Kombinationstherapie bei Therapie mit Antithrombotika und Fibrinolytika
AT403764B (de) * 1996-03-15 1998-05-25 Immuno Ag Stabiler faktor viii/vwf-komplex
HUP9700603A3 (en) * 1996-03-20 2001-08-28 Baxter Ag Pharmaceutical preparation for the treatment of blood coagulation disorders
CA2278823A1 (en) * 1997-01-29 1998-07-30 Joe M. Mccord Plasminogen activator as an anti-inflammatory agent

Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2000071714A3 (en) * 1999-05-24 2001-01-18 American Nat Red Cross Methods of reducing factor viii clearance and compositions therefor
US7615622B2 (en) 2001-01-12 2009-11-10 University Of Maryland, Baltimore Methods and compositions for reducing heparan sulfate proteoglycan-mediated clearance of factor VIII
WO2003039580A1 (en) * 2001-11-09 2003-05-15 Novo Nordisk Health Care Ag Pharmaceutical composition comprising factor vii polypeptides and pai-1 polypeptides
JP2005535588A (ja) * 2002-04-29 2005-11-24 バクスター・インターナショナル・インコーポレイテッド 第ｖｉｉｉ因子と低密度リポタンパク質レセプター関連タンパク質との相互作用のアンタゴニスト
WO2003099324A1 (en) * 2002-05-23 2003-12-04 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Agent neutralizint tissue factor inhibitor and agent neutralizing activated blood coagulation factor viii preparation
EP1454632A1 (de) * 2003-02-07 2004-09-08 Aventis Behring GmbH, Intellectual Property/Legal Pharmazeutische Zusammensetzung zur Behandlung von Blutgerinnungsstörungen enthaltend Peptide von Faktor VIII
US7211559B2 (en) 2003-10-31 2007-05-01 University Of Maryland, Baltimore Factor VIII compositions and methods

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