WO2000069466A1

WO2000069466A1 - Trapping agent for blood carbonyl compounds

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Inventors: Toshio Miyata
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Description

明細書血中カルボニル化合物トラップ剤

技術分野

本発明は、血中のカルポニル化合物の除去に関する。具体的には、カルポニル化合物トラップ剤を用いる、血中のカルボニル化合物の除去に関する。背景技術

血液透析は慢性腎不全患者に対して一般的に行われる治療であり、半透膜を介して血液と透析液が接触することにより、血中の老廃物や毒性物質が除去される。しかし、腎不全の病態は、透析により完全に食い止められるものではない。そのような病態として、腎不全患者における AGE (advanced glycation end products) やその前駆体であるカルポニル中間体のレベルの上昇が挙げられる。 AGE は、夕ンパク質を構造的および機能的に修飾し、透析アミロイドーシスや動脈硬化などの透析合併症の発症に関与することが報告されている（Makita 1, et al. N Eng 1 J Med 325: 836-842, 1991； Miyata T， et al. J Clin Invest 92: 1243-1252,

1993; Miyata T, et al. J Clin Invest 93: 521-528, 1994; Miyata T， et al.

Proc Natl Acad Sci USA 93: 2353-2358, 1996; Horie K, et al. J Clin Inve st 100: 2995 - 3004, 1997; Miyata T, et al. FEBS letters 445: 202-206, 199 9)。腎不全では血漿中にダリオキサール、メチルダリオキサール、 3-デォキシグルコソン、ァラビノース（Odani et al. , Biochem. Biophys. Res. Co画 n. 256:

89-93， 1999; Niwa et al. , Nephron 69: 438-443, 1995; Miyata et al. , Kid ney Int. 55: 389-399, 1999; Miyata et al. , J. Am. Soc. Nephrol. 9: 2349- 2356, 1998) などのカルボニル中間体が蓄積すること（いわゆるカルボ二ルストレス）により、 AGE産物レベルが上昇することが、近年明らかにされた（Miyata T, et al. J Am Soc Nephrol 9: 2349-2356, 1998; Miyata T, et al. Kidney I nt 55: 389-399, 1999)。 AGE前駆体であるさまざまなカルボニル中間体は、主として炭水化物および脂質に由来する (Miyata T, et al. Kidney Int 55: 389-39 9, 1999; Miyata T, et al. Kidney Int 54; 1290-1295， 1998; Miyata T， et a 1. Kidney Int 51: 1170-1181, 1997)。腎不全患者における、これら AGEやカルポニル中間体のレベルの上昇、すなわち、「力ルポニルストレス」は、現行の血液透析では有効に改善することはできない。発明の開示

本発明は、血中のカルボニル化合物を除去するためのカルポニル化合物トラップ剤の提供を課題とする。また、本発明は、生体のカルボニルストレス状態を改善するための方法および薬剤の提供を課題としている。本発明により、特にカルポニルストレス状態に陥りやすい血液透析患者において、カルボニル化合物による障害を防止することが可能となる。血液透析患者のカルポニル化合物による障害をできるだけ小さくすることが本発明の課題である。

本発明者は、まず、血液透析に使用される血液透析膜が、患者血中のカルボ二ル化合物量にどのような影響を及ぼすのかを検討した。カルボニル中間体の蓄積 (カルボニルストレス）を表すマ一カーであるペントシジンの血中含量を、高速液体クロマトグラフィー（HPLC)により定量し、患者が透析に使用している透析膜の種類別に比較した。その結果、遊離ペントシジンは、いずれの透析膜を使用した場合でも透析により顕著に除去されるものの、体内のペントシジンの大半を占める蛋白結合型ペントシジンは、透析によっては効果的に除去できていないことが判明した。

透析膜の種類別では、 low-iluxセルロース、 high-fluxポリメチルメタクリレ —ト（PMMA)、および AN69においては、蛋白結合型および遊離型ペントシジンは、両者とも同様の値を示したが、 high- flux ポリスルフォン（PS) においては低い値を示した（P〈0. 01)。患者が日本人であるかベルギー人であるか、または PS膜のメーカーなどで差は認められなかった。患者が使用する透析膜を AN69から PSに変更した 3人の患者では、蛋白結合型ペントシジンのレベルが低下し、再び AN69 に戻すと、もとのレベルまで上昇した。これらの結果から、カルポニル化合物の生成を抑制するための透析膜としては、ポリスルフォン膜が有効であることが判明した。

本発明者は次に、血中のカルボニル化合物をより効果的に除去するため、カルボニル化合物トラップ剤を利用することを考えた。透析患者血液から血漿を調製し、カルポニル化合物トラップ剤を固定化した担体と共にインキュベートし、血中カルボニル化合物量の定量を行った。その結果、カルボニル化合物トラップ剤を固定化した担体とのインキュベーションにより、血中カルボニル化合物量は有意に低下することが判明した。

このようなことから、本発明者は、血中に蓄積するカルポニル化合物をより重視し、タンパク質修飾を中心とした透析患者のカルボニルストレスを改善するためには、血中に蓄積するカルボニル化合物の除去が必要と考えた。そこでこの課題の解決のために、カルボニル化合物との化学的な反応や吸着によってカルボ二ル化合物のタンパク質に対する修飾活性を失わせる、または低下させる機能を有する化合物の利用が有効であることを見出し本発明を完成した。本発明において、このような機能を有する化合物を固定化した担体、あるいはこのような化合物そのものを「カルポニル化合物トラップ剤」と呼ぶ。

すなわち本発明は、以下に記載の、血中のカルポニル化合物を除去するための、カルポニル化合物トラップ剤、および生体の力ルポニルストレス状態を改善するための方法および薬剤に関する。

〔 1〕血中のカルボニル化合物を除去するための、カルボニル化合物トラップ剤。〔2〕血液透析に用いるための、〔1〕に記載のカルポニル化合物トラップ剤。〔 3〕カルボニル化合物トラップ剤が、血液に不溶性の担体に固定化されたものである〔1〕に記載のカルボニル化合物トラップ剤。

〔4〕担体が透析膜である、〔3〕に記載のカルポニル化合物トラップ剤。〔5〕透析膜がポリスルフォン膜である、〔4〕に記載のカルポニル化合物トラップ剤。

〔6〕カルポニル化合物トラップ剤がメイラード反応阻害剤である、〔1〕に記載のカルボニル化合物トラップ剤。

〔7〕メイラード反応阻害剤が、アミノグァ二ジン、ピリドキサミン、ヒドラジン、 S H基含有化合物、およびそれらの誘導体からなる群から選択された少なくとも 1つの化合物である、〔6〕に記載のカルボニル化合物トラップ剤。〔 8〕カルポニル化合物トラップ剤が、血液に不溶性の化合物からなることを特徵とする〔1〕に記載のカルボニル化合物トラップ剤。

〔9〕血液に不溶性の化合物が、イオン交換樹脂、活性炭、シリカゲル、アルミナ、および炭酸カルシウムからなる群から選択された少なくとも 1つの化合物である、〔8〕に記載のカルボニル化合物トラップ剤。

〔1 0〕カルボニル化合物トラップ剤を有効成分とする、生体のカルボ二ルストレス状態改善剤。

〔1 1〕カルポニル化合物トラップ剤を有効成分とする、血液における力ルポニルス卜レス状態改善剤。

〔1 2〕血液回路内に固定化するための、〔1 1〕に記載の力ルポ二ルストレス状態改善剤。

〔1 3〕カルボニル化合物トラップ剤がメイラード反応阻害剤である、〔1 1〕に記載のカルボニルストレス状態改善剤。

〔1 4〕メイラード反応阻害剤が、アミノグァ二ジン、ピリドキサミン、ヒドラジン、 S H基含有化合物、およびそれらの誘導体からなる群から選択される少なくとも 1つの化合物である、〔1 3〕に記載の力ルポニルストレス状態改善剤。〔1 5〕患者血液を血液回路内においてカルボニル化合物トラップ剤に接触させる工程を含む、力ルポニルストレス状態の改善方法。

〔1 6〕カルボニル化合物トラップ剤が血液に不溶性の担体に固定化されていることを特徴とする、〔1 5〕に記載の方法。

あるいは本発明は、カルポニル化合物トラップ剤の、血中のカルボニル化合物の除去における使用に関する。更に本発明は、カルボニル化合物トラップ剤の、血中の力ルポニルストレス状態改善剤の製造のための使用に関する。

本発明において、トラップの対象となるカルボニル化合物とは、例えば腎不全患者の血中に酸化ストレスにともなつて蓄積する以下のような化合物が含まれる炭水化物に由来するカルポニル化合物：

•ァラビノース

•ダリオキサール

•メチルグリオキサール

• 3-デォキシグルコゾン

ァスコルビン酸に由来するカルポニル化合物：

•デヒドロアスコルビン酸

脂質に由来するカルボニル化合物：

• ヒドロキシノネナール

•マロンジアルデヒド

-ァクロレイン

本発明におけるカルポニル化合物トラップ剤としては、これら全てのカルボ二ル化合物に対し、化学的な反応や吸着によってカルボニル化合物のタンパク質に対する修飾活性を失わせる、または低下させるものであることが望ましいが、これらのカルボニル化合物の中で主要なもののみに対して有効な場合も含まれる。本発明において使用することができるカルボニル化合物トラップ剤には、例えば以下のようなものが含まれる。 'アミノグァ二ジン（Foote, E. F. et al., Am. J. Kidney Dis., 25: 420-425 (1995))

•土 2-ィソプ口ピリデネヒドラゾノ -4-ォクソ -チアゾリジン- 5-ィルァセ夕ニリド (,+ 2-isopropyl idenehydrazono-4-oxo-thiazol idin-5-ylacetani 1 ide: 0PB-91 95) (S.Nakamura, 1997, Diabetes.46： 895-899)

さらに力ルポニル化合物トラップ剤としては、例えば以下のような化合物またはそれらの誘導体であつて、力ルポニル化合物トラップ剤として機能する化合物を用いることができる。なお、誘導体とは、化合物のいずれかの位置で原子または分子の置換が起きている化合物を指す。これらの化合物は血液との分離を容易にするために担体に結合させて本発明によるカルボニル化合物トラップ剤とすることができる。あるいは、化合物自体が血液に対して不溶性であれば、担体に固定することなく本発明のカルボニル化合物トラップ剤として用いることができる

(1)メチルダァニジンなどのグァニジン誘導体（特開昭 62 - 142 1 14号、特開昭 62— 249908号、特開平 1 _ 566 14号、特開平 1— 83059 号、特開平 2— 1 56号、特開平 2— 765号、特開平 2— 42053号、特開平 6— 9380号、特表平 5— 505 1 89号）。

(2)スルホニルヒドラジンなどのヒドラジン誘導体。

(3)ピラゾロン（特開平 6— 287 1 79号）、ピラゾリン（特開平 1 0— 1 6 7965号）、ピラゾ一ル（特開平 6— 1 92089号、特開平 6— 298737 号、特開平 6— 2987 38号）、イミダゾリジン（特開平 5— 20 1 993号、特開平 6— 1 35968号、特開平 7— 1 33264号、特開平 1 0— 1 824 60号）、ヒダン卜イン（特開平 6— 1 35968号）などの 2個の窒素原子を有する 5員複素環式化合物。

(4)トリァゾール（特開平 6— 1 92089号）などの 3個の窒素原子を有する 5員複素環式化合物。

(5)チアゾリン（特開平 1 0— 1 6 7965号）、チアゾール（特開平 4一 93 W

7

7 5号、特開平 9— 5 9 2 5 8号）、チアゾリジン（特開平 5— 2 0 1 9 9 3号、特開平 3— 2 6 1 7 7 2号、特開平 7— 1 3 3 2 6 4号、特開平 8— 1 5 7 4 7 3号）などの 1個の窒素原子と 1個の硫黄原子を有する 5員複素環式化合物。

(6)ォキサゾール（特開平 9一 5 9 2 5 8号）などの 1個の窒素原子と 1個の酸素原子を有する 5員複素環式化合物。

(7)ピリジン（特開平 1 0— 1 5 8 2 4 4号、特開平 1 0— 1 7 5 9 5 4号）、ピリミジン（特表平 7— 5 0 0 8 1 1号）などの含窒素 6員複素環式化合物。

(8)インダゾール（特開平 6— 2 8 7 1 8 0号）、ベンゾイミダゾール（特開平 6 - 3 0 5 9 6 4号）、キノリン（特開平 3— 1 6 1 4 4 1号）などの含窒素縮合複素環式化合物。

(9)ベンゾチアゾール（特開平 6— 3 0 5 9 6 4号）などの含硫含窒素縮合複素環式化合物。

(10)ベンゾチォフェン（特開平 7— 1 9 6 4 9 8号）などの含硫縮合複素環式化合物。

(1 1)ベンゾピラン（特開平 3— 2 0 4 8 7 4号、特開平 4一 3 0 8 5 8 6号）などの含酸素縮合複素環式化合物。

(12)力ルバゾィル（特開平 2— 1 5 6号、特開平 2— 7 5 3号）、カルバジン酸 (特開平 2— 1 6 7 2 6 4号）、ヒドラジン（特開平 3 _ 1 4 8 2 2 0号）などの窒素化合物。

(13)ベンゾキノン（特開平 9一 3 1 5 9 6 0号）、ヒドロキノン（特開平 5 _ 9 1 1 4号）などのキノン類。

(14)脂肪族ジカルボン酸（特開平 1一 5 6 6 1 4号、特開平 5— 3 1 0 5 6 5 号)。

(15)ケィ素含有化合物（特開昭 6 2— 2 4 9 7 0 9号）。

(1 6)有機ゲルマニウム化合物（特開平 2— 6 2 8 8 5号、特開平 5— 2 5 5 1 3 0号、特開平 7 _ 2 4 7 2 9 6号、特開平 8— 5 9 4 8 5号）。 (17)フラポノィド類（特開平 3— 240725号、特開平 7 _ 206838号、特開平 9一 241 1 65号、 W〇 94 04520)。

(18)アルキルアミン類（特開平 6— 2068 1 8号、特開平 9— 59233号、特開平 9— 40626号、特開平 9一 1 2447 1号）。

(19)アミノ酸類（特表平 4— 5026 1 1号、特表平 7— 5037 1 3号）。

(20)ァスコクロリン（特開平 6— 305959号）、安息香酸（WO 9 1/1 1 997)、ピロ口ナフチリジニゥム（特開平 1 0— 1 58265号）などの芳香族化合物。

(21)ポリペプチド（特表平 7— 500580号）。

(22)ピリドキサミンなどのビタミン類（W〇 97/0998 Do

(23)グル夕チオンやシスティンなどの S H基含有化合物。

(24)還元型アルブミンなどの SH基含有蛋白。

(25)テトラサイクリン系化合物（特開平 6— 256280号）。

(26)キトサン類（特開平 9— 22 142 7号）。

(27)タンニン類（特開平 9一 405 1 9号）。

(28)第 4級アンモニゥムイオン含有化合物。

(29)メトホルミン、フェンホルミン、およびブホルミンなどのビグアナイド。

(30)ィォン交換樹脂などの高分子化合物。

(31)活性炭、シリカゲル、アルミナ、炭酸カルシウム等の無機化合物。

以上のような化合物の多くは、一般にメイラ一ド反応阻害剤として知られている。メイラ一ド反応とは、グルコースなどの還元糖とアミノ酸やタンパク質との間に生じる非酵素的な糖化反応であり、 1912年にメイラード（Mail lard) がアミノ酸と還元糖の混合物を加熱すると褐色に着色する現象に注目して報告した（Ma illard, L. ， Co即 t. Rend. So Biol. , 72: 599 (1912))。メイラード反応は、食品の加熱処理や貯蔵の間に生じる褐変化、芳香成分の生成、呈味、タンパク質変性などに関与していることから、食品化学の分野で研究が進められてきた。ところが、 1968年ヘモグロビンの微小画分であるグリコシルヘモグロビン（Hb Al e)が生体内で同定され、さらにこれが糖尿病患者において増加することが判明し（Rahbar. S. , Cl i n. Ch im. Ac t a, 22 : 296 (1968) )、それを契機に生体内におけるメイラード反応の意義並びに糖尿病合併症、動脈硬化などの成人病の発症や老化の進行との関係が注目されるようになってきた。そして、このような生体内のメイラード反応を阻害する物質の探索が精力的に行われ、前述の化合物類がメィラード反応阻害剤として見いだされた。

しかし、このようなメイラード反応阻害剤が、血中のカルポニル化合物を排除して血液透析患者等のカルボニルストレス状態を改善することができるということは知られていなかった。

本発明におけるカルボニル化合物のトラップ剤を固定化する担体としては、血液に不溶性で、人体に対して無害なもの、血液に直接接触する材料として安全性および安定性を有するものであれば特に制限されない。具体的には、例えば、合成または天然の有機高分子化合物や、ガラスビーズ、シリカゲル、アルミナ、活性炭などの無機材料、およびこれらの表面に多糖類、合成高分子などをコ一ティングしたものなどが挙げられる。

高分子化合物からなる担体としては、例えば、ポリメチルメタクリレート系重合体、ポリアクリロニトリル系重合体、ポリスルフォン系重合体、ビニル系重合体、ポリオレフイン系重合体、フッ素系ポリマー系重合体、ポリエステル系重合体、ポリアミド系重合体、ポリイミド系重合体、ポリウレタン系重合体、ポリアクリル系重合体、ポリスチレン系重合体、ポリケトン系重合体、シリコン系重合体、セルロース系重合体、キトサン系重合体などがあげられる。具体的には、ァガロース、セルロース、キチン、キトサン、セファロース、デキストラン等の多糖類およびそれらの誘導体、ポリエステル、ポリ塩化ビニル、ポリスチレン、ポリスルフォン、ポリエーテルスルフォン、ポリプロピレン、ポリビニルアルコール、ポリアリルエーテルスルフォン、ポリアクリル酸エステル、ポリメ夕クリル酸エステル、ポリカーボネート、ァセチル化セルロース、ポリアクリロニトリル、ポリエチレンテレフ夕レート、ポリアミド、シリコン樹脂、フッ素樹脂、ポリウレタン、ポリエーテルウレタン、ポリアクリルアミド、それらの誘導体などが挙げられる。これらの高分子材料は単独、あるいは 2種以上を組み合わせて使用され得る。 2種以上組み合わせる場合は、そのうち少なくとも 1種にカルボニル化合物トラップ剤が固定化される。固定化されるカルポニル化合物トラップ剤は、単独で固定化するほか、 2種類以上を固定化してもよい。またこれらの高分子材料には、適当な改質剤を添加したり、放射線架橋や過酸化物架橋などの変性処理を施すこともできる。

担体の形状に制限はなく、例えば膜状、繊維状、顆粒状、中空糸状、不織布状、多孔形状、ハニカム形状などがあげられる。これらの担体は、厚さ、表面積、太さ、長さ、形状、および Zまたは大きさを種々変えることにより、血液との接触面積を制御することができる。

上記担体にカルボニル化合物トラップ剤を固定化するには、公知の方法、例えば、物理的吸着法、生化学的特異結合法、イオン結合法、共有結合法、グラフト化などを用いればよい。また必要によりスぺーサーを担体とカルボニル化合物トラップ剤の間に導入してもよい。トラップ剤に毒性がある場合など、担体からの溶出が問題となる場合には、溶出量をできるだけ少なくするためにトラップ剤は担体に共有結合で固定化されていることが好ましい。カルボニル化合物トラップ剤を担体に共有結合するには、担体に存在する官能基を用いればよい。官能基としては、例えば、水酸基、アミノ基、アルデヒド基、カルボキシル基、チオール基、ヒドロキシル基、シラノール基、アミド基、エポキシ基、サクシ二ルイミド基等が挙げられるが、これらに制限されない。共有結合の例としてエステル結合、エーテル結合、ァミノ結合、アミド結合、スルフイド結合、ィミノ結合、ジスルフィド結合等が挙げられる。

カルボニル化合物トラップ剤が固定化された担体としては、例えば、スルホ二ルヒドラジン基を有するポリスチレン担体（PS- TsNHNH₂, ARGONAUT TECHNOLOGIE S社）などの市販のものを用いることもできる。

本発明のカルポニル化合物トラップ剤を固定化した担体の滅菌は、公知の滅菌法から、トラップ剤や担体などの種類により適当な滅菌法が選択される。滅菌処理には高圧蒸気滅菌、ガンマ線照射滅菌、ガス滅菌などが挙げられる。

カルボニル化合物トラップ剤を固定化した担体と血液との接触は、種々の形態が考えられる。例えば、カルボニル化合物トラップ剤を固定化した担体が充填された血液バッグに採血した患者の血液を入れ、この中で患者血液のカルボニル化合物をトラップする方法、カルボニル化合物トラップ剤を固定化したビーズ状、または繊維状等の担体をカラムに充填したものに血液を循環させる方法、などが挙げられる。血液は、全血でなくても、血漿を分離したのち、血漿を処理してもよい。処理された血液は患者に戻されるか、必要に応じて血液バッグ中などに保存することもできる。血液バッグ内にカルポニル化合物トラップ剤を固定化した担体を含めておくことにより、血液バッグ内に保存中の血液で生成 ·蓄積する力ルポニル化合物をトラップすることも可能である。

本発明のカルポニル化合物トラップ剤を固定化した担体と血液との接触は、血液透析や血液濾過、血液濾過透析、血液吸着、血漿分離を含む血液浄化の過程で行うことができる。

例えば、血液透析患者に対しては、血液透析回路内にカルポニル化合物トラップ剤を固定化した担体を配置させることにより、血液透析とカルポニル化合物のトラップとを同時に行うことができる。この場合、血液透析膜を担体として利用し、カルボニル化合物トラップ剤を血液透析膜に固定化しておくことが好ましい。担体として用いられる透析膜の種類は公知のものを使用することができる。例えば、再生セルロース、セルローストリアセテート等のセルロース誘導体、ポリメチルメ夕クリレート、ポリオレフイン、ポリスルフォン、ポリアクリロニトリル (PAN) , ポリアミド、ポリイミド、ポリエーテルナイロン、シリコン、ポリエステル系共重合体等が挙げられ、特に限定されない。実施例に示されたように、透析膜としてポリスルフォンを用いた場合に、カルポニル中間体（ペントシジン）レベルの低下が認められた。従って、上記透析膜の中でも、特にポリスルフォン膜を担体として用いるのが好ましい。もちろん透析膜を担体とせず、上記のように、カルボニル化合物トラップ剤を固定化した担体を充填したカラムを血液透析回路中に配置させてもよい。このように患者血液をカルポニル化合物トラップ剤を固定化した担体に接触させることにより、血中由来のカルボニル化合物が捕捉され、その生体に対する障害活性がうばわれ、無害化される。体外循環時に血液の凝固を防ぐため、抗凝固剤を併用することもできる。抗凝固剤としては、例えば、へパリン、低分子へパリン、フサン（メシル酸ナファモスタツト）等が挙げられる。これらは、担体に固定化されていてもよい。

血液との接触時に用いるトラップ剤が少ないと、透析時に患者血中のカルボ二ル化合物を処理することができなくなるケースが予想される。特に患者血中の力ルポニル化合物の量をあらかじめ予測することは困難なので、患者に対する安全性を保障できる範囲内でできるだけ多量のトラップ剤が活性を維持できるようにするのが効果的である。トラップ剤の用量は、担体へのトラップ剤の固定化量、またはトラップ剤が固定化された担体の使用量を変更して調整することができる。本発明のカルポニル化合物トラップ剤には、上述のメイラード反応阻害剤に代表される有機化合物の他、イオン交換樹脂などの高分子化合物、あるいは活性炭やシリカゲル、アルミナ、炭酸カルシウムなどの無機化合物も使用できる。これらの化合物は、クロマトグラフィーの充填剤として知られているものであるが、その吸着能を利用してカルポニル化合物をトラップすることができる。このような化合物は、それ自体が担体として機能するため、例えば、外部血液循環回路に装置された濾過器内に充填して使用することができる。このような化合物も、本発明によるカルボニルストレス状態改善剤を構成する「カルボニル化合物トラップ剤」として利用することができる。この場合、これらの化合物そのものが、前記カルポニル化合物トラップ剤を固定化した担体として機能する。あるいは、このような自らカルポニル化合物トラップ能を有する担体に、更に他のカルボニル化合物トラップ剤を固定化することもできる。

なお、活性炭を使用した吸着型血液浄化器が公知である。吸着型血液浄化器は、薬物中毒や肝性昏睡時の血液浄化、多臓器不全としての急性腎不全発症の初期に増加する内因性 ·外因性の各種トキシンや血管作動性物質の除去を目的とした血液透析の補助療法として使用されている。しかしながら、かかる吸着型血液浄化器が、力ルポニル化合物トラップ剤として有効であるということは全く知られていなかった。図面の簡単な説明

図 1は、 3人の患者における、血漿ペントシジンレベル（pmo l /mg pro t e i n) に及ぼす血液透析膜の種類の変更の効果を示す図である。結果は初期値（患者 1 (◊)、患者 2 (口）、患者 3 (Δ)で、それぞれ 41 . 8、 22. 1、 28. 5 pmo l/mg pro t e i n) に対する％で表した。各値は各期間の最後に 2週間の間隔をあけて採取された 2サンプルの平均である（AN69で透析していた- 2および 0週目、 PSに変更後の 8および 10週目、 AN69に戻した後の 14および 16週目）。

図 2は、カルボニル化合物トラップ剤を固定化したビーズとのィンキュベーションによる、透析患者血漿中のペントシジンレベルの抑制効果を示す図である。図 3は、活性炭によるジカルボニル化合物溶液中のカルボニル化合物のトラップ作用を示す図である。

図 4は、活性炭による腹膜透析液中のジカルボニル化合物のトラップ作用を示す図である。

図 5は、透析患者血漿を 37°Cでインキュベートしたときの、活性炭によるペントシジンの生成抑制効果を示す図である。

図 6は、活性炭、あるいはスルホニルヒドラジン結合ポリスチレンビーズによる、腎不全患者血漿におけるカルボニル化合物の除去作用を示す図。図中、縦軸はカルボニル化合物の濃度を示す。

図 7は、アミノグァ二ジンによる、腎不全患者血漿におけるカルポニル化合物の除去作用を示す図。図中、縦軸はカルボニル化合物の濃度を示す。

図 8は、ジァミノグァニジン結合ポリアミドの作製方法を示す図である。

図 9は、ジァミノグァニジン結合ポリアミドによるジカルポニル化合物溶液中のカルボニル化合物の除去作用を示す図である。発明を実施するための最良の形態

以下、本発明を実施例により具体的に説明するが、本発明はこれら実施例に制限されるものではない。

[実施例 1 ] 血漿ペントシジンに及ぼす血液透析膜の種類の影響ベルギー人（π=29)または日本人（n=97)で、週 3回の血液透析を行っている患者 126名（男性 69名、女性 57名）を調査した。年齢は 61.2±13(標準偏差)歳であつた。 2名のみが、軽い II型糖尿病であった。すべての患者は、少なくとも 3ケ月間（または、 2、 3名の患者は 3ヶ月以内であるが、血液透析の開始以来）にわたって同じ種類の血液透析膜を使用していた。ベルギー人患者 29名中 26名においては、透析膜を再使用したが、日本人患者においては、再使用はなかった。各患者のカルテから、残存腎機能 (ml/day)、透析膜表面積、および血液透析の透析時間のデータを得た。

2. 膜の種類

血液透析膜は、 igh-flux (UFインデックス〉 10ml /mmHg/h) AN69 (Hospal (Fra nce)社製) (AN69群）、 high- f luxポリスルフォン (Fresenius (Germany)社製) (P S群）、 high-fluxポリスルフォン (旭メディカル（Japan)社製) (APS群）、 high- f lux ホリメチルメタクリレー卜（polymethylmethacrylate) (Toray (Japan; ±¾) (PMMA群）、および l ow- f luxセルロース（旭メディカル（Japan)社製）（セル口一ス群）を使用した。

3 . 血漿試料

血漿試料は、 1 回目の血液透析開始に先立って 126名の患者全員から採取し、毎週の透析後に 66名から採取した。

すべての試料は直ちに遠心分離を行い、 -20でに凍結した血漿について下記の検査をおこなった。

4 . 全ペントシジンおよび遊離ペントシジンの定量

全ペントシジンの定量には、試料（50 1)を凍結乾燥させ、 100 1の 6N HC1に溶解させ窒素封入後 110でで 16時間インキュベートし、 100 1の 5N NaOHおよび 200 1の 0. 5M リン酸バッファ一（pH7. 4)で中和後、孔径 0. 5 mのフィルターで濾過し、 PBSで 20倍に希釈した。遊離型ペントシジンの定量には、試料（50 1) に等量の 10% TCAを混合後、 5000 X g 10分で遠心した。上清を孔径 0. 5 imのフィルターで濾過し、蒸留水で 4倍に希釈した。

これらの試料中のペントシジンを C18逆相カラム（Waters, Tokyo, Japan) を用いた逆相 HPLC (Miyat a T, e t al . J Am Soc Nephro l 7 : 1 198-1206, 1996) で分析した。蛍光検出器（RF-10A ; Sh imadzu) を用い、励起波長/検出波長を 335/3 85mnで流出液をモニターした。合成ペントシジンを用いて標準曲線を作成した。蛋白結合型ペントシジン（ペントシジン/蛋白）（pmo 1/mg prote in) は、 [血漿全ペントシジン（pmo 1 /m 1 )—遊離ペントシジン（pmo 1 /m 1 ) ] Z [血漿蛋白濃度（mg/m 1) ]により算出した。

5 . 患者群間の統計解析

ペントシジンレベルの定量の結果を含む各数値は平均土標準偏差またはパーセンテージ（％) として表した。残存腎機能のデータは l og変換した。一元配置分散分析（one-way AN0VA) (F 検定つき）により、個人データとペントシジンレべルを、異なる透析膜を用いている血液透析患者のグループ間で比較した。さらに Bonferroni t-test を用いて透析膜のグループを比較分析した。カイ二乗検定により、残存腎機能の程度を、さまざまな群間で比較した。

5群の患者間の cross- sectionalな解析の結果を表 1に示す。年齢に関してはグループ間に大きな違いはなかった。血漿蛋白レベルは AN69およびセルロース群ではより高かった。透析膜面積は APS群において大きく、また研究前の血液透析期間 · 1回の透析時間も APS群で長かった。一方、残存腎機能は PS群で高かった。

群眭 VVV¾J¾: SUA-

P 値残存腎機能（％) § 33% 50%· 20% 28% 17% く 0.001

***： pく 0.001で PS群および PMMA群に対し有意

** : pく 0.001で PMMA群に対し有意

*: pく 0.05で AN69群に対し有意

◊： p〈0.05で APS群に対し有意

OO： pく 0.01で PMMA群およびセル口一ス群に対し有意

△： pく 0.05でセルロース群に対し有意

a： pく 0.01で他のすべての群に対し有意

β： ρく 0.001で他のすべての群に対し有意

•： ρ=0.05でセルロース群に対し有意

≠:透析膜の表面積は医者により固定されているので変数とは考えることはできない

従って統計学的検定により比較することはできない。

§：無尿でない患者の割合

N69、 PMMA、およびセルロース群では同じレベルであり、 PS群および APS群では有意に低かった。 PS群と APS群との間では有意差はなかった（表 2 )。

膜の違いによる 5群における透析前のペントシジンレベル

APS PS AN69 PMMA セルロース ANOVA n=29 n=28 n=15 n=25 n=29 P値ペン卜ンンン /蛋 H (pmol/mg protein; 16·2±4·8 15±6.1 25.4 ±8.4** 23.2 ±9.3** 21.7±6.3** ぐ 001 IS 遊離ペントシジン (pmol/ml) 32.4±11.3 41.4± 22.9 76.4±28.5+* 68.8±26.7*+ 53.7 ±18.2** 001

**:p<0.01で PS群および APS群に対し有意

透析前の血漿ペントシジンに対し影響を与えうる様々な因子を、単変量分析に

より分析した結果、残存腎機能が、蛋白結合型および遊離ペントシジンに対し有

意に影響を与えることが判明した。具体的には、残存腎機能が高いほど、ベント

シジンレベルは低かった。血漿蛋白レベルやアルブミンレベル ·年齢 ·透析歴は、

ペントシジンレベルと相関は認められなかった（表 3 )。ポリスルフォン群（PS群

および APS群）の場合、 Freseni us社または旭メディカル社（Asah i社）のポリス

ルフォン膜による透析を受けたベルギー人患者または日本人患者の透析前のペン

トシジンレベルは同様の値を示した（表 4 )。

表 3 一変数分析によるペントシジンレベルと潜在説明継続変数との閱係: Hi

l og (残存腎機能) 全蛋白アルブミン年 j$ 透析歴

ペントシジン/蛋白 -0.28 一 0.08 0 0.14 0.03

遊離ペントシジン -0.36 0.01 -0.12 0.15 0.02

**: pく 0.01で有意

***: pく 0.001で有意

表 4 ポリスルフォン群中におけるポリスルフォンのメーカー

および/または患者の国別のペントシジンレベルと残存腎機能

Fresenius rresenius Asahi Ρ値

ベルギー人日本人日本人

ペントシジン/蛋白 14.6 ±6.2 15.3 ±6.3 16.2±4.8 NS

(pmo l /mg prote i n)

ン群では、尿量が 300ml/minを超える患者を除外してもペントシジンレベルの差異における統計学的な有意性に変化は来さなかった。

AN69も high-fluxであり、また、 high- fluxの AN69と low-fluxのセルロースによる透析が、透析前のペントシジンレベルに関して同様の結果を示したことから、ペントシジンレベルの差異と透析膜の除去性能は無関係であると考えられる。蛋白補正ペントシジンレベルおよび遊離ペントシジンレベルと残存腎機能との関係を、線形回帰分析により分析した。従属変数（蛋白補正ペントシジンレベル · 遊離ペントシジンレベル）に対する各説明変数の効果を、変数選択一重回帰分析

(変数増カ卩法) (Forward stepwise multiple regression analysis) により検定した。すべての分析は、 BMDP統計ソフトウェア（BMDPは New System Professio nal Edition: Statistical Solutions Inc. , University 01 California Press, Berkeley, 1995 の商標）を用いて行った。 Ρ<0· 05を有意とした。

分析の結果、透析膜の種類と残存腎機能のみが、蛋白結合型および遊離ベントシジンレベルの独立決定因子であることが示された（表 5 )。相互作用はどれも有意でなかったことから、ペントシジンレベルに対する残存腎機能の影響は、透析膜の種類によって影響されないと考えられる。

表 5 ペントシジンレベルの決定因子の変数選択一重回帰分析（変数増加法）ペントシジン/蛋白遊離ペントシジン

Rの増加 Rの増加

(increase in R) P値 (increase in R) P値膜の種類 0.53 く 0.001 0.59 く 0.001 log (残存腎機能） -0.21 く 0.001 - 0.36 く 0.001 全蛋白 -0.17 NS 0.05 NS アルブミン -0.05 NS -0.1 NS 年齢 0.12 NS 0.16 NS 血液透析の期間一 0.01 NS -0.08 NS

6. 血液透析前後のペントシジンレベルに及ぼす透析膜の効果

に対して透析膜が効果を及ぼす機構をさらに解析するため、 high- fluxポリスルフォン (Fresenius)、 AN69、 PMMA、または low- fl uxセルロース透析膜を使った 4群の患者に対し、透析前および後のペントシジンレベルを定量した（表 6)。

表 6 一回の血液透析におけるペントシジンレベルに対する影響

PS AN69 Ρ Α セルロース

前 37.3±19.6 76.4±28.5 70.3±26 53.5±18.5 後 10.9±6.6 17.5 ±4.9 21.7±7 14.7 ±6.9

(滅少率）（％) (71±11) (76±7) (67±9) (73 ±6) 上記の実験により予想された通り、蛋白結合型べントシジンはほとんど変化せず、また、透析膜の種類とも無関係であった。唯一、遊離ペントシジンが顕著に減少したが、その比率はすべての群で似ており、 76% (ΑΝ69) から 67% (ΡΜΜΑ) の間であった。グループ間に有意な差はなかった。従って、ポリスルフォン膜による透析患者で透析前のペン卜シジンレベルが低かったことを、透析膜の透析能力の差異によって説明することはできないことが判明した。

本発明者は、以前、血液透析そのものは、全ペントシジンまたは蛋白結合型べントシジンレベルに変更を与えないことを示した（Miyata T， et al. Kidney In t 51: 880-887, 1997)。この知見は、ペントシジンの 95%は、透析で除去されないアルブミンと結合している（Miyata T， et al. J Am Soc Nephrol 7: 1198-12 06， 1996) という事実に一致する。この知見は、上記の 4つの異なる種類の透析膜による実施例で裏付けられた。これに対し、遊離ペントシジンは血液透析により減少し、すべての透析膜で似た現象が観察されたが、この結果は、遊離ベントシジンの分子量（379 Da) を考えれば予想されることである。血液透析の前後のペントシジンレベルが、すべての透析膜で同様であったことは、受動輸送だけでなく、ペントシジンの吸収も、ポリスルフォンや他の透析膜による透析中に同様に起こっていることを示唆している。インビト口において、放射性標識された遊離ペントシジンの吸収を測定したところ、吸収はセルロース膜およびポリスルフオン膜ではごく僅かであり、事実上、差は認められなかった。

従って、ポリスルフォン膜によりペントシジンの除去が向上するということで、透析前のペントシジンの低レベルを説明することはできないと思われる。別の可能性としては、ポリスルフォン膜による透析が、ペントシジン産生の抑制と係わつている可能性が考えられる。

既に指摘したように、ペントシジンレベルは炭水化物に由籴するカルボニル中間体の濃度を反映している。ポリスルフォン膜は、これらのカルボニル化合物の除去に特異的な効果を有しており、それによりペントシジン産生に効果を発揮している可能性がある。または、ポリスルフォン膜は尿毒症に関連しているとされる酸化的ストレスを減少させる可能性も考えられる（Miyata T, et al. Kidney Int 54; 1290-1295, 1998; Miyata T, et al. Kidney Int 51: 1170-1181, 199 7; Loughrey CM, et al. Q J Med 87: 679-683, 1994; Ueda Y， et al. Biochem Biophys Res Commun 245: 785-790， 1998; Kumano K， et al. Adv Perit Dial 1 992; 8: 127-130; Witko-Sarsat V, et al. Kidney Int 49: 1304-1313, 1996)。酸化的ストレスの減少により、カルボニル化合物の産生が抑えられ、それによりペントシジンの生成が減少する可能性もある（Miyata T， et al. Kidney Int 51: 1170-1181, 1997)。

7. ペントシジンレベルに及ぼす透析膜の変更の効果

ポリスルフォン膜において特異的にペントシジンレベルが低くなる効果を確かめるため、長期間（>5年） AN69による透析を受けている 3人の無尿症患者について longitudinalな解析を行った。患者は 10週間の間、同様の表面積を持つポリスルフォンの透析膜（Fresenius) による透析に変更し、その後 AN69に再変更した。 PSへの変更の 2週間前の透析前試料（2試料）、 PS透析期間中の透析前試料（5試料）、および AN69へ戻した後、 14〜16週の透析前試料（2試料）を採取した。

PSの透析へ変更後、各患者の蛋白結合型ペントシジンレベルは次第に減少し、 AN69の透析へ戻した後は、 PSに変更前の AN69使用時のレベルまで戻ることが判明した（図 1)。

AN69から PSによる透析に移行した患者の longitudinalな研究において観察されたベントシジンレベルの減少は、 cros s- sec tionalな研究において観察された P S群と AN69群との間の違いの 1/3に過ぎない（3.6に対し 10.4 pmol/mg protein)₀ この相異は、 PS透析移行による観察が、 10週間しか行われなかったことによることが考えられる。ポリスルフォンが、ペントシジンの生成速度を減少させているとすれば、蛋白結合型ペントシジンの減少がこのように緩やかであったことも説明できると思われる。このような環境下では、蛋白結合型ペントシジンレベルの減少は、そのタンパク質の代謝によってしか起こらないと考えられる。同様の観察が、腎臓移植成功後においてもなされている。このとき、蛋白結合型ペントシジンの減少は、血漿 02 ミクログロブリンの減少と比べ、非常にゆっくりとしか起こらず、蛋白結合型ペントシジンの崩壊が遅いことが示されている（Miyata T, et al. Kidney Int 51: 880-887, 1997; Hricik DE, et al. Clin Transplanta tion 10: 568-573, 1996)。

[実施例 2] カルポニル化合物トラップ剤固定化担体による血中カルボニル化合物の除去

架橋したポリスチレン樹脂にスルホニルヒドラジン基を結合したもの（PS-TsN HNH2, ARGONAUT TECHNOLOGIES 社）をカルボニル化合物トラップビーズとして用いて、血中カルポニル化合物の除去効果を検討した。透析患者血漿及びカルボ二ル化合物トラップビーズを添加した透析患者血漿を 37°Cでィンキュベ一卜し、ぺントシジンの形成抑制効果を確認した。カルポニル化合物トラップビーズの入つたチューブに、ジメチルスルホキシド 100 1加え膨潤させた後、濾過滅菌した透析患者の透析前の血漿を添加し、 37°Cで 1週間インキュベートした。インキュべート終了後、ポア一サイズ 0.22 zmの遠心式フィル夕一（ミリポア製、 UFC30GV0 0) を用いてビーズを除去した。つぎに、ビーズを除去した溶液 50 1 に 10%トリクロル酢酸 50 1を加え、遠心してタンパク質を沈殿させた。タンパク質を 3 00 1の 5%トリクロル酢酸で洗浄し、乾固させた。つぎに、 6Ν HC1を ΙΟΟ Ι添加し、 110 で 16時間加熱した後、 HPLCでペントシジンを定量した（T. Miyata ら， 1996， J. Am. So Nephrol. , 7: 1198-1206, T, Miyata ら， 1996， Pro Natl. Acad. Sci. USA, 93: 2353-2358)。

37°Cでィンキュベートしたときに生成するペントシジン量を図 2に示した。力ルポニル化合物トラップビーズの添加により、ベントシジンの生成が抑制されることが判明した。また、ペントシジンの生成の抑制は添加したカルポニル化合物トラップビーズの量に依存した。

これらの結果から、カルポニル化合物トラップ剤を固定化した担体を用いて、血中のカルボニル化合物を除去できることが明らかとなった。また、血液透析膜としては、特にポリスルフォン膜が、カルボニルストレス状態の改善に好適であることが判明した。

[実施例 3] 活性炭によるジカルボニル化合物溶液中のカルボニル化合物の除去作用

活性炭（和光純薬製） 25mgまたは 50mgの入ったチューブに、ダリオキサール、メチルグリォキサール、 3-デォキシダルコソンを PBS (-)に溶解したジカルポニル溶液（各 100/_iMの濃度）をそれぞれ 900 l添加しローテ一ターを用いて室温で 19時間攪拌した。次に、溶液をポア一サイズ 0.22/ Π1の遠心式濾過チューブ（ミリポア製、 UFC30GV00) で濾過し、濾液中のダリオキサール、メチルダリオキサ一ル、 3-デォキシダルコソン濃度を高速液体クロマトグラフィーを用いて測定した。活性炭 25mgにジカルポニル溶液を 900^1添加した場合、ダリオキサールは 7 1%、メチルダリオキサールは 96%、 3-デォキシダルコソンは 97%トラップされた。活性炭 50mgの場合、ダリオキサールは 85%、メチルダリオキサールは 98%、 3-デォキシダルコソンは 98%トラップされた（図 3)。

[実施例 4 ] 活性炭による腹膜透析液中のジカルポニル化合物の除去作用腹膜透析液は通常、高濃度のブドウ糖を含有することから、滅菌時や保存時にブドウ糖由来のカルボニル化合物が生成し、これらのカルポニル化合物が腹膜透析施工中に生体内に導入され、カルボニルストレス状態の発生の一因となる。そこで、本発明のカルボニル化合物トラップ剤による腹膜透析液中の力ルポニル化合物の除去効果を検討した。

活性炭 25mgまたは 50nigの入ったチューブに、腹膜透析液（バクス夕一製、ダィァニール PD- 4， 1.5) を 900 1添加しローテ一夕一を用いて室温で 19時間攪拌した。次に、溶液をポア一サイズ 0.22 zmの遠心式濾過チューブ（ミリポア製、 UFC30GV00) で濾過し、濾液中のダリオキサール、メチルダリオキサール、 3-デォキシダルコソン濃度を高速液体クロマトグラフィーを用いて測定した。

活性炭 25mgに腹膜透析液を 900^1添加した場合、ダリオキサールは 56%、メチルダリオキサールは 71%、 3-デォキシダルコソンは 62%トラップされた。活性炭 50mgに腹膜透析液を 900 1添加した場合、ダリォキサールは 64%、メチルダリオキサールは 78%、 3-デォキシダルコソンは 77%トラップされた（図 4)。

[実施例 5] 活性炭による透析患者血漿を 37°Cでインキュベートしたときのペントシジンの生成抑制効果

PBS (-)に懸濁させた活性炭 12mgの入ったチューブに、濾過滅菌した透析患者の透析前の血漿 250 1 を添加し、 37°Cで 1週間ィンキュベートした。ィンキュベ一ト終了後、遠心後の上清 50^ 1 に、 12N HC1 を 50 1添加し、 110でで 16時間加熱し、加水分解した後、高速液体クロマトグラフィーを用いてペントシジンを定量した (T. Miyataら, 1996, J.Am. Soc. Nephrol. , 7:1198-1206, T. Miyataら， 1996, Pro Natl. Acad. Sci. USA.， 93 : 2353-2358) ₀

37°Cでィンキュベートしたときに生成するペントシジン量を図 5に示した。活性炭の添加により、対照と比較してペントシジンの生成が 51%抑制された。このことから、ペントシジンの前駆体となるカルボニル化合物が活性炭により吸着されることが示唆された。

[実施例 6] 活性炭による血漿中のカルボニル化合物の除去作用

活性炭（和光純薬製） 20 mg, または 50mgの入ったチューブに、腎不全患者の血漿を添加しローテ一夕一を用いて室温で 12時間撹拌した。つぎに、遠心により活性炭を分離後、血漿中のダリオキサールとメチルダリオキサール濃度を高速液体クロマトグラフィーを用いて測定した。

血漿中のグリォキサールとメチルグリォキサール濃度は、以下のようにして測定した。すなわち、血漿 200^1に 0.67M過塩素酸 300/^1を添加して撹拌後、遠心して上清を分離した。この上清 150^1に 1% 0-フエ二レンジァミン 20^ 1、内部標準として 10 M の 2， 3-ブタンジオン 50;α 1を加え撹拌後、 25°Cで 1時間反応させた。 Ohmori らの方法（Ohmori S, et al. J. Chromatogr. 414: 149-155, 198 7) によりグリオキサールあるいはメチルダリオキサールと 0-フエ二レンジアミンとの反応で生成するキノキサリン誘導体を逆相カラムを用いた HPLC 分離し定量した。

結果は図 6に示した。血漿に活性炭 20mgを添加することにより、ダリオキサ一ルは 5 8 %、メチルダリオキサールは 6 5 %トラップされた。活性炭 50mgを添加した場合には、ダリオキサールは 7 5 %、メチルダリオキサールは 8 0 %がトラップされた。

[実施例 7 ] スルホニルヒドラジン結合ポリスチレンビーズ (Ps-TsNHNH₂)による血漿中のカルボニル化合物の除去作用

スルホニルヒドラジン結合ポリスチレンビーズ 10mg、または 20 mgの入ったチュ一ブに、腎不全患者の血漿を 500/zl添加しローテ一夕一を用いて室温で 12時間撹拌した。つぎに、遠心によりスルホニルヒドラジン結合ポリスチレンビーズを分離後 [実施例 6] と同様の方法により血漿中のグォキサールとメチルダリォキサール濃度を高速液体クロマトグラフィーを用いて測定した。結果は図 6に W

28 示した。血漿にスルホニルヒドラジン結合ポリスチレンビーズ 1 Omgを添加することにより、グリオキサールは 4 5 %、メチルダリオキサールは 3 9 %トラップされた。スルホニルヒドラジン結合ポリスチレンビーズ 20mgを添加した場合には、ダリオキサール、メチルダリオキサールともに 7 5 %がトラップされた。

[実施例 8 ] アミノグァ二ジンによる血漿中のカルボニル化合物の除去作用アミノグァ二ジンを 0. 1 Mリン酸ナトリウム緩衝液（pH7. 4) に溶かした溶液（5 OmM, l OOmM) 50 / 1 と腎不全患者の血漿を 450 1 を混合し室温で 1 2時間静置した。 1 2間後に血漿中のダリオキサールとメチルダリオキサール濃度を [実施例 6 ] と同様の方法により高速液体クロマトグラフィーを用いて測定した。

結果は図 7に示した。血漿のアミノグァ二ジン濃度が 5mMのとき、ダリオキサ —ルは 5 0 %、メチルダリオキサールは 4 6 %トラップされた。アミノグァニジン濃度が 10mMの場合には、グリオキサールは 5 8 %、メチルダリオキサールは 7 0 %がトラップされた。

[実施例 9 ] カルボニル化合物トラップ剤を固定化した担体によるカルボニル化合物の除去作用

カルボニル化合物トラップ剤を固定化した担体によるカルボニル化合物の除去作用を、ジァミノグァニジン結合ポリアミドを用いて検討した。ジァミノグァニジン結合ポリアミドは、ポリアミドにェピクロルヒドリンを反応させた後、ジァミノグァニジンの水溶液（pH 1 2) を添加し 80 で約 1時間反応させることにより作製した（図 8 )。反応後、得られたジァミノグァニジン結合ポリアミドを水で洗浄し乾燥させたのち、実験に用いた。

PBS (pH 7. 4) に溶かしたジカルボニル化合物溶液（ダリオキサール、メチルダリオキサール、 3-デォキシダルコソン各 1 M) 1m lを、ジァミノグァニジン結合ポリアミド 30mgを含むチューブに添加し、ローテ一夕一を用いて室温（25で）で 5時間攪拌した。溶液 100 1を遠心し、上清に残留したダリオキサール、メチルダリオキサール、 3-デォキシダルコソンの濃度を、これらを誘導体に転換したのち、高速液体クロマトグラフィーを用いて測定した。結果を図 9に示した。ダリォキサールは 30 %、メチルダリオキサールは 56 %、 3-デォキシダルコソンは 1 1 % がトラップされた。同じ条件下で、ジァミノグァニジンを結合していないポリアミドをネガティブコントロールとして用いた場合、上記カルボニル化合物に対するトラップ作用は観察されなかった。

以上の結果から、カルボニル化合物トラップ剤を固定化した担体により、効果的に液体中のカルボニル化合物を除去できることが確認された。産業上の利用の可能性

本発明によれば、血中のカルボニル化合物を効果的に取り除くことができる。本発明の力ルポニルストレス状態改善剤は、血液透析用透析膜に固定化することにより、またはその他の担体に固定化して血液回路内に配置することにより簡単に実施することができる。これにより、腎不全患者等を苦しめていたカルポニル化合物による障害（カルボニルストレス）を改善することが可能となる。

Claims

請求の範囲

血中のカルボニル化合物を除去するための、カルポニル化合物トラップ剤。血液透析に用いるための、請求項 1に記載のカルボニル化合物トラップ剤。カルボニル化合物トラップ剤が、血液に不溶性の担体に固定化されたものである請求項 1に記載のカルボニル化合物トラップ剤。

担体が透析膜である、請求項 3に記載のカルボニル化合物トラップ剤。

透析膜がポリスルフォン膜である、請求項 4に記載のカルボニル化合物トラップ剤。

カルボニル化合物トラップ剤がメイラード反応阻害剤である、請求項 1に記載のカルボニル化合物トラップ剤。

メイラード反応阻害剤が、アミノグァ二ジン、ピリドキサミン、ヒドラジン、 S H基含有化合物、およびそれらの誘導体からなる群から選択された少なくとも 1つの化合物である、請求項 6に記載のカルボニル化合物トラップ剤。カルボニル化合物トラップ剤が、血液に不溶性の化合物からなることを特徴とする請求項 1 に記載のカルボニル化合物トラップ剤。

血液に不溶性の化合物が、イオン交換樹脂、活性炭、シリカゲル、アルミナ、および炭酸カルシウムからなる群から選択された少なくとも 1つの化合物である、請求項 8に記載のカルボニル化合物トラップ剤。

. カルポニル化合物トラップ剤を有効成分とする、生体のカルボニルストレス状態改善剤。

. カルボニル化合物トラップ剤を有効成分とする、血液におけるカルボニルストレス状態改善剤。

. 血液回路内に固定化するための、請求項 1 1に記載のカルボニルストレス状態改善剤。

. カルボニル化合物トラップ剤がメイラード反応阻害剤である、請求項 1 1 に記載のカルボニルストレス状態改善剤。

. メイラ一ド反応阻害剤が、アミノグァ二ジン、ピリドキサミン、ヒドラジン、 S H基含有化合物、およびそれらの誘導体からなる群から選択される少なくとも 1つの化合物である、請求項 1 3に記載のカルボニルストレス状態改善剤。

. 患者血液を血液回路内においてカルボニル化合物トラップ剤に接触させる工程を含む、力ルポニルストレス状態の改善方法。

. カルボニル化合物トラップ剤が血液に不溶性の担体に固定化されていることを特徴とする、請求項 1 5に記載の方法。