WO2001030366A2 - Verwendung von parvoviren zur verbesserung des allgemeinzustandes bei tumorpatienten oder patienten mit chronischen oder konsumierenden erkrankungen - Google Patents

Verwendung von parvoviren zur verbesserung des allgemeinzustandes bei tumorpatienten oder patienten mit chronischen oder konsumierenden erkrankungen Download PDF

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    • C12N2750/14011—Parvoviridae
    • C12N2750/14111—Dependovirus, e.g. adenoassociated viruses
    • C12N2750/14132—Use of virus as therapeutic agent, other than vaccine, e.g. as cytolytic agent

Definitions

  • the invention relates to the use of parvoviruses to improve the general condition of tumor patients or patients with chronic or consuming diseases.
  • Tumor patients but also patients with chronic or consuming illnesses, often have to suffer from a poor general condition in addition to their illnesses.
  • This poor general condition manifests itself among other things in abnormal blood values, fatigue, weariness and loss of appetite.
  • This poor general condition is often exacerbated by the need for therapy with genotoxic agents. This is especially true for patients with malignancies.
  • the treatment of malignant diseases has so far mainly been based on the use of genotoxic agents which attack and destroy tumor cells as chemotherapeutic or radiotherapeutic agents.
  • the death of the tumor cells is caused by the triggering of the programmed cell death (apoptosis).
  • the use of the genotoxic agents is limited by the occurrence of side effects such as nausea, hyperemesis, depression of blood formation, gastrointestinal complaints, bleeding, etc.
  • the genotoxic agents can therefore not be used in higher doses than the maximum tolerable Side effects allow it. In many cases, the side effects are so unpleasant, even life-threatening for the patient, that the tolerable doses of the genotoxic substance are not sufficient to eliminate all tumor cells.
  • chronic inflammatory diseases any form of autoimmune diseases or other indications in which genotoxic therapies, for example in the form of chemotherapy, radio or immunotherapeutics, are used. It is therefore particularly desirable to provide ways to alleviate the side effects in therapy so as to make the genotoxic agents more effective.
  • Such approaches should also improve the general clinical condition of tumor patients or patients with chronic or consuming diseases.
  • the present invention is therefore based on the object of significantly improving the general condition of tumor patients or patients with chronic or consuming diseases.
  • the problem of side effects induced by genotoxic therapy is also to be reduced. This should enable the genotoxic agents to be used in higher amounts and to be better tolerated by the patient even in higher doses, which increases the efficiency of the treatment and improves the survival rate of patients.
  • parvoviruses in particular adeno-associated viruses, alleviates the side effects which otherwise occur Patients appear who have to undergo genotoxic therapy. Furthermore, the general condition of the sick individuals is significantly improved. This is particularly true for tumor patients, because the development of tumor cachexia and your neoplastic disease is significantly reduced.
  • the present invention is based on the observation that the administration of parvoviruses in the context of genotoxic therapy leads to a significant reduction in the otherwise usual side effects. This is accompanied by an increased effect (especially anti-neoplastic effect) of the therapy, since now higher doses of the genotoxic agent are tolerated and the duration of the therapy can be extended.
  • the combined use of genotoxic therapy with the administration of parvoviruses can increase the effectiveness of a (tumor) treatment, while at the same time the side effects of the genotoxic treatment can be drastically reduced. This effect is not reduced by repeated application of the joint administration of genotoxic agent and parvovirus infection. This approach can significantly increase the effectiveness and, above all, the tolerance of chemotherapy or radiotherapy.
  • parvoviruses in combination with genotoxic therapy, for example chemo- or radiotherapeutic measures, increases the efficiency of the conventional therapy and reduces side effects, so that further therapy can be carried out more promisingly than before.
  • any apathogenic Parvoviruses are used.
  • Adeno-associated viruses (AAV) are particularly promising and therefore preferred. Fragments of parvoviruses, especially AAV, can also be used as long as they can have the desired effect.
  • the AAV-2 virus or fragments thereof is particularly preferably used.
  • the AAV virus is a human parvovirus that requires co-infection with a helper virus in order for a productive infection to take place.
  • AAV infects people in early childhood and is considered apathogenic since no human disease could be linked to AAV infection (Adv. In Vir. Res. 1987, 32, 43-306).
  • the AAV infection does not lead to the formation of a neutralizing immune response, so that reinfections can occur at any time.
  • Seroepidemiological data show that the incidence of tumor diseases occurs less frequently in patients with antibodies against AAV than in patients who did not have antibodies against AAV.
  • parvoviruses in particular AAV viruses
  • the use of the parvoviruses, in particular AAV viruses, according to the invention can take place without additional treatment or before, simultaneously or after a genotoxic treatment. However, it is preferably carried out before the first genotoxic treatment and is repeated with each treatment cycle in which the genotoxic agent is administered. Even in tumors that could not be treated with the usual doses of genotoxic agent, at least partial remission can be achieved. At the same time, the parvovirus infection leads to a significant improvement in the overall physiological situation, including the blood count and the maintenance of body weight.
  • the genotoxic therapy can preferably be any radio or chemotherapy which is adapted to the cancer to be treated.
  • Genotoxic agents in the context of these therapies are the chemotherapeutic agents which are well known to the person skilled in the art (see below) and various radiation sources, for example ⁇ , ⁇ rays, neutron, proton or other types of radiation.
  • Such therapies have been known for years and, in addition to the surgical removal of the tumor, the established method to cure cancer or to increase the life expectancy of a patient for some time.
  • the measures of radio or chemotherapy are therefore well known to the person skilled in the art.
  • the invention also includes Combination of parvovirus infections with any other form of anti-neoplastic therapy. The combination with gene therapy approaches is particularly worth mentioning here.
  • tumor therapy in any form of gene or immunotherapy is supported by recombinant viruses but also all non-viral vectors and applications by the simultaneous administration of parvoviruses.
  • parvoviruses in particular AAV viruses
  • AAV viruses can be applied to any type of cancer, with best success in all gastrointestinal tumors and tumors of the respiratory and upper digestive tract as well as the urinary tract, the nervous system, the genital organs and all mesenchymal tissues and hematopoietic system are expected.
  • Colon, lung, pancreatic and brain tumors (especially glioblastoma) should be mentioned as preferred.
  • the invention also includes all other indications in which chemotherapeutic or radiotherapeutic agents are used. This applies in particular to chronic inflammatory diseases (e.g. rheumatoid arthritis and other diseases of the rheumatic type), any form of autoimmune diseases (e.g.
  • the invention also includes any form of administration of parvoviruses in chronic, degenerative and / or consuming disease states with the aim of improving the general condition.
  • the use according to the invention is carried out intravenously, subcutaneously, intraarterially, intraperitoneally, intramuscularly, intratumorally, orally (also by inhalation) or cutaneously.
  • the parvovirus can be released by special drug application systems from a pharmacological point of view directly at the site of the disease.
  • the virus is formulated in a suitable preparation that is adapted to the route of administration.
  • intravenous also as an infusion
  • intratumoral administration of the virus in a physiological saline solution, Ringer's solution or PBS solution for cutaneous administration in the form of an ointment, suspension or gel
  • PBS solution phosphate-buffered saline solution
  • composition according to the invention can also contain customary auxiliaries.
  • auxiliaries such as pharmaceutical carriers, binders, disintegrants, lubricants, solvents, solubilizers, release accelerators, release retarders, emulsifiers, stabilizers, colorants or flavoring agents can be used.
  • a pharmaceutical composition which, in addition to a genotoxic agent, in particular a chemotherapeutic agent (cytostatic agent), contains parvoviruses, in particular adeno-associated viruses, for example AAV-2.
  • chemotherapeutic agents cytostatics
  • All chemotherapeutic agents (cytostatics) previously used in tumor therapy or other therapies of the above-mentioned diseases can be used individually or in combination as chemotherapeutic agents, for example cis-platinum and its derivatives, etoposide, methothrexate, doxorubicin, cyclophosphamide, ifosphamide, trofosfamide, busulfan, cytarabine , Mercaptopurine, vinblastine sulfate, vincristine sulfate, bleomycin sulfate, taxol or mitomycin.
  • chemotherapeutic agents for example cis-platinum and its derivatives, etoposide,
  • the invention is illustrated by the following example.
  • AAV-2 was administered weekly with 1x10 8 virus particles intratumorally per test animal. Tumor-bearing animals served without treatment as a control group. To control infection for tumor growth and physiological changes in the test animals, tumor-bearing Lewis rats were infected with 1x10 8 AAV-2 virus particles intratumorally (Table 1)
  • the tumor size (length x width), the occurrence of metastases and the weight were determined weekly for all animals. According to the recommendations of the working group of the LASA (Laboratory Animal Science Association), a SCORE was developed and evaluated once a week for the experimental animals (Report of the laboratory animal science association working party, in Laboratory animals, 1990, (24), 97-130).
  • Treatment was interrupted when the weight decreased by> 20%.
  • the end point of the investigation was an expansive tumor size of> 400 mm 2 or the appearance of more than 3 metastases.
  • adeno-associated viruses e.g. AAV-2
  • AAV-2 adeno-associated viruses

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Abstract

Die Erfindung betrifft die Verwendung von Parvoviren zur Verbesserung des Allgemeinzustandes bei Tumorpatienten oder Patienten mit chronischen oder konsumierenden Erkrankungen.

Description

Verwendung von Parvoviren zur Verbesserung des Allgemeinzustandes bei Tumorpatienten oder Patienten mit chronischen oder konsumierenden Erkrankungen
Die Erfindung betrifft die Verwendung von Parvoviren zur Verbesserung des Allgemeinzustandes bei Tumorpatienten oder Patienten mit chronischen oder konsumierenden Erkrankungen.
Tumorpatienten, aber auch Patienten mit chronischen oder konsumierenden Erkrankungen, haben neben ihrer Erkrankungen auch oft unter einem schlechten Allgemeinzustand zu leiden. Dieser schlechte Allgemeinzustand äußert sich unter anderem in abnormen Blutwerten , Abgeschlagenheit, Mattigkeit und Appetitlosigkeit. Verstärkt wird dieser schlechte Allgemeinzustand oft noch durch eine notwendige Therapie mit genotoxischen Agentien. Dies gilt insbesondere für Patienten mit malignen Erkrankungen. Die Therapie maligner Erkrankungen basiert neben der chirurgischen Entfernung bisher vor allem auf der Anwendung genotoxischer Agentien, die als Chemo- oder Radiotherapeutika Tumorzelien angreifen und zerstören. In der Regel wird der Tod der Tumorzellen durch die Auslösung des programmierten Zelltods (Apoptose) hervorgerufen. Der Einsatz der genotoxischen Agentien wird jedoch durch das Auftreten von Nebenwirkungen, wie z.N. Nausea, Hyperemesis, Depression der Blutbildung, gastrointestinale Beschwerden, Blutungen usw., limitiert. Die genotoxischen Agentien können daher nicht in höherer Dosierung eingesetzt werden, als die maximal tolerierbaren Nebenwirkungen es erlauben. In vielen Fällen sind die Nebenwirkungen für den Patienten so ungenehm, ja sogar lebensgefährlich, daß die noch tolerierbaren Dosen des genotoxischen Stoffs nicht ausreichen, um alle Tumorzellen zu eliminieren. Dasselbe gilt für chronisch entzündliche Erkrankungen, jede Form der Autoimmunerkrankungen oder andere Indikationen, bei denen genotoxische Therapien, z.B. in Form von Chemo-, Radio- oder Immuntherapeutika eingesetzt werden. Es ist daher besonders wünschenswert, wenn Möglichkeiten bereitgestellt würden, die die Nebenwirkungen bei der Therapie abmildern, um so die Wirksamkeit der genotoxischen Agentien effizienter zu machen. Solche Ansätze sollten auch den allgemeinen klinischen Zustand von Tumorpatienten bzw. Patienten mit chronischen oder konsumierenden Erkrankungen verbessern.
Der vorliegenden Erfindung liegt daher die Aufgabe zugrunde, den Allgemeinzustand von Tumorpatienten oder Patienten mit chronischen oder konsumierenden Erkrankungen deutlich zu verbessern. Weiter soll das Problem der durch genotoxische Therapie induzierten Nebenwirkungen vermindert werden. Dadurch sollen die genotoxischen Agentien in höherer Menge einsetzbar werden und vom Patienten auch in höherer Dosierung besser toleriert werden können, was die Effizienz der Behandlung steigert und die Überlebensrate von Patienten - verbessert.
Diese Aufgabe wird durch die Gegenstände der Patentansprüche gelöst.
Erfindungsgemäß werden durch die Verwendung von Parvoviren, insbesondere adenoassoziierten Viren die Nebenwirkungen gemildert, die ansonsten bei Patienten auftreten, die sich einer genotoxischen Therapie unterziehen müssen. Ferner wird der Allgemeinzustand der erkrankten Individuen deutlich verbessert. Dies gilt insbesondere für Tumorpatienten, weil die Ausbildung von Tumorkachexie u n d d i e d u rc h e i n e n e o p l ast i s c h e E r k ra n k u n g h e rvo rg e r uf e n e Knochenmarksdepression deutlich reduziert wird.
Der vorliegenden Erfindung liegt die Beobachtung zugrunde, daß die Verabreichung von Parvoviren im Rahmen einer genotoxischen Therapie zu einer deutlichen Verminderung der dabei sonst üblichen Nebenwirkungen führt. Dies geht einher mit einer gesteigerten Wirkung (insbesondere anti-neoplastischen Wirkung) der Therapie, da jetzt auch höhere Dosen des genotoxischen Agens toleriert werden und die Dauer der Therapie ausgeweitet werden kann. So kann durch die kombinierte Anwendung von genotoxischer Therapie mit der Gabe von Parvoviren die Effektivität einer (Tumor)behandlung gesteigert werden, während gleichzeitig die Nebenwirkungen der genotoxischen Behandlung drastisch abgesenkt werden können. Dieser Effekt wird auch durch die wiederholte Applikation der gemeinsamen Gabe von genotoxischem Agenz und Parvoviren-Infektion nicht abgemindert. Durch diesen Ansatz kann die Wirksamkeit und vor allem die Verträglichkeit einer Chemo- oder Radiotherapie erheblich gesteigert werden.
Eine Infektion mit Parvoviren in Kombination mit genotoxischer Therapie, z.B. chemo- oder radiotherapeutischen Maßnahmen, steigert nach Erkenntnis der Erfinder die Effizienz der herkömmlichen Therapie und vermindert auftretende Nebenwirkungen, so daß eine weitere Therapie erfolgversprechender als bisher durchgeführt werden kann. Erfindungsgemäß können beliebige apathogene Parvoviren verwendet werden. Besonders erfolgsversprechend und somit bevorzugt sind adenoassoziierte Viren (AAV). Es können auch Fragmente von Parvoviren, insbesondere von AAV, verwendet werden, solange diese die gewünschte Wirkung ausüben können. Besonders bevorzugt wird das AAV-2-Virus oder Fragmente davon verwendet.
Das AAV-Virus ist ein humanes Parvovirus, das eine Koinfektion mit einem Helfervirus benötigt, damit eine produktive Infektion stattfinden kann. AAV infiziert Menschen in früher Kindheit und gilt als apathogen, da keine menschliche Krankheit mit der AAV-Infektion verbunden werden konnte (Adv. in Vir. Res. 1987, 32, 43-306). Ferner führt die AAV-Infektion auch nicht zur Ausbildung einer neutralisierenden Immunantwort, so daß Reinfektionen jederzeit vorkommen können . Seroepidemiologische Daten zeigen , daß die I nzidenz von Tumorerkrankungen bei Patienten mit Antikörpern gegen AAV seltener vorkommen als bei Patienten, die keine Antikörper gegen AAV aufwiesen.
In Tierversuchen mit immunkompetenten Lewis-Ratten, denen subkutan Pankreaskarzinomzellen implantiert wurden, konnte gezeigt werden, daß eine AAV- Infektion, die gleichzeitig mit einer chemotherapeutischen Behandlung vorgenommen wurde, zu einer verminderten Tumorprogression im Vergleich zu der Rattengruppe, die nur Chemotherapie erhalten hatte, führte. Außerdem wiesen die Ratten, die unter der Chemotherapie gleichzeitig mit AAV-2 infiziert worden waren, einen deutlich geringeren Gewichtsverlust auf, als die Tiere, die nur Chemotherapie erhalten hatten. Die Vigilanz der Tiere konnte ebenfalls durch kombinierte Gabe von AAV-2 und Chemotherapie deutlich verbessert werden, Auch die hämatologischen Parameter wurden durch die Chemotherapie in den AAV-2 infizierten Tieren deutlich weniger beeinträchtigt, als in den Tieren, die nur Chemotherapie erhalten hatten.
Die erfindungsgemäße Verwendung der Parvoviren, insbesondere AAV-Viren, kann ohne eine Zusatzbehandlung bzw. vor, gleichzeitig oder nach einer genotoxischen Behandlung erfolgen. Sie erfolgt jedoch bevorzugt vor der ersten genotoxischen Behandlung und wird mit jedem Behandlungszyklus, in dem das genotoxische Agenz verabreicht wird, wiederholt. Auch bei Tumoren, die durch die sonst üblicherweise verwendbaren Dosen an genotoxischem Agenz nicht therapierbar waren, kann so zumindest eine partielle Remission erzielt werden. Gleichzeitig führt die Parvoviren-Infektion zu einer erheblichen Verbesserung der gesamten physiologischen Situation einschließlich des Blutbildes und Erhalt des Körpergewichts.
Die genotoxische Therapie kann vorzugsweise eine beliebige Radio- oder Chemotherapie sein, die dem zu behandelnden Krebs angepaßt ist. Genotoxische Agentien im Rahmen dieser Therapien sind die dem Fachmann bestens bekannten Chemotherapeutika (s. unten) und verschiedenen Bestrahlungsquellen, z.B. , ß-, γ-Strahlen, Neutronen-, Protonen- oder anderen Strahlungsarten. Solche Therapien sind seit Jahren bekannt und neben der chirurgischen Entfernung des Tumors die etablierte Methode, um Krebserkrankungen zu heilen bzw. die Lebenserwartung eines Patienten um einige Zeit zu erhöhen. Dem Fachmann sind deshalb die Maßnahmen einer Radio- oder Chemotherapie bestens bekannt. Neben der klassischen bzw. Chemo- oder Radiotherapie schließt die Erfindung aber auch die Kombination von Parvovirus-Infektionen mit jeder anderen Form der anti- neoplastischen Therapie ein. Insbesondere die Kombination mit gentherapeutischen Ansätzen ist hier zu nennen. Erfindungsgemäß wird auch die Tumortherapie in jeglicher Form der Gen- oder Immuntherapie durch rekombinante Viren aber auch allen nicht-viralen Vektoren und Applikationen durch die gleichzeitige Gabe von Parvoviren unterstützt. Hierzu zählt insbesondere die Übertragung von sog. Tumorsuppressorgenen oder sog. Suizidgenen, der Einsatz von Antikörpern, Zytokinen und anderen Medikamenten jeglicher Art oder die gegen Tumorzellen gerichtet sind. Dies umfaßt auch die Therapie mit allen immunmodulatorischen Ansätzen einschließlich allen Vekzinierungsmaßnahmen, um gegen die Erkrankung eine Immunantwort aufzubauen.
Die erfindungsgemäße Verwendung der Parvoviren, insbesondere AAV-Viren, kann auf beliebige Krebsarten angewendet werden, wobei beste Erfolge bei allen gastrointestinalen Tumoren sowie Tumoren des Respirations- und oberen Verdauungstrakts als auch der ableitenden Harnwege, des Nervensystems, der Geschlechtsorgane sowie aller mesenchymaler Gewebe und des blutbildenden Systems zu erwarten sind. Bevorzugt sind Colon-, Lungen-, Pankreas- und Hirntumoren (insbesondere Glioblastom) zu nennen. Die Erfindung schließt aber auch alle anderen Indikationen, bei denen Chemo- oder Radiotherapeutika eingesetzt werden, mit ein. Dies betrifft insbesondere chronisch entzündliche Erkrankungen (z.B. rheumatoide Arthritis und weitere Erkrankungen des rheumatischen Formenkreises), jede Form der Autoimmunerkrankungen (z.B. Morbus Crohn, - Colitis ulcerosa, usw.) oder andere Indikationen, bei denen Chemo-, Radio- oder Immuntherapeutika eingesetzt werden. Ebenfalls eingeschlossen sind hier alle chronisch konsumierenden Erkrankungen (z.B. Tumorerkrankungen jeder Art, HIV- Infektionen usw.) bei denen der Allgemeinzustand der Patienten durch Gabe von Parvoviren verbessert werden kann.
Es zeigte sich ferner, daß schon die alleinige Gabe von Parvoviren, insbesondere AAV, ohne Chemotherapie den Zustand von Tieren mit chronisch konsumierenden Erkrankungen, wie z.B. einem wachsenden Tumor, deutlich verbessert werden kann. Daher schließt die Erfindung auch jegliche Form der Verabreichung von Parvoviren bei chronischen, degenerativen und/oder konsumierenden Krankheitszuständen mit dem Ziel der Verbesserung des Allgemeinzustandes ein.
Die erfindungsgemäße Verwendung erfolgt intravenös, subkutan, intraarteriell, intraperitoneal, intramuskulär, intratumoral, peroral (auch per inhalationem) oder kutan. Ferner kann das Parvovirus durch spezielle Drogenapplikationssysteme unter pharmakologischen Aspekten direkt am Ort der Erkrankung freigesetzt werden. Dabei wird das Virus in einem geeigneten, dem Verabreichungsweg angepaßten Präparat formuliert. So ist es bevorzugt für eine intravenöse (auch als Infusion) und intratumorale Verabreichung das Virus in einer physiologischen Kochsalzlösung, Ringerlösung oder PBS-Lösung (Phosphat-gepufferte Salzlösung), für eine kutane Verabreichung in Form einer Salbe, Suspension oder Gel, für eine orale Verabreichung in Form von Tabletten oder Dragees, sowie für Inhaltionszwecke als Aerosolspray bereitzustellen.
Die verwendete Virusdosis beträgt abhängig vom Körpergewicht des Patienten 109- 1010 Virus-Partikel/kg KG. Die Dosis wird jedoch von einem Arzt festgesetzt und ist abhängig von Gewicht, Alter und Geschlecht des Patienten sowie Schwere der Erkrankung, Art der Verabreichung und Dauer der Verabreichung. Eine erfindungsgemäße Zusammensetzung kann auch übliche Hilfsstoffe enthalten. Als Hilfsstoffe können die üblichen, wie Arzneimittelträger, Bindemittel, Sprengmittel, Gleitmittel, Lösungsmittel, Lösungsvermittler, Freigabe-Beschleuniger, Freigabe- Verzögerer, Emulgatoren, Stabilisatoren, Färbemittel oder Geschmackskorrgenzien verwendet werden.
Erfindungsgemäß wird auch eine pharmazeutische Zusammensetzung bereitgestellt, die neben einem genotoxischen Agenz, insbesondere einem Chemotherapeutikum (Zytostatikum), Parvoviren, insbesondere adeno-assoziierte Viren, z.B.AAV-2, enthält. Als Chemotherapeutikum sind alle bisher in der Tumortherapie oder anderen Therapien oben genannter Erkrankungen gebräuchlichen Chemotherapeutika (Zytostatika) einzeln oder in Kombination einsetzbar, beispielsweise Cis-Platin und seine Derivate, Etoposid, Methothrexat, Doxorubicin, Cyclophosphamid, Ifosphamid, Trofosfamid, Busulfan, Cytarabin, Fluoruracil, Mercaptopurin, Vinblastinsulfat, Vincristinsulfat, Bleomycinsulfat, Taxol oder Mitomycin.
Die Erfindung wird anhand des nachfolgenden Beispiels näher erläutert.
Beispiel 1
In Tierversuchen mit immunkompetenten Lewis-Ratten wurden syngene DSL6A- Pankreaskarzinomzellen mit einer Tumorzellzahl von 1x106 subcutan an Tieren in der Bauchleiste inokuliert. Diese Zellen wuchsen in allen so behandelten Tieren zu Tumoren an. Nach 4 bzw. 6 Wochen erreichten die Tumoren eine durchschnittliche Größe von 30 mm2 respektive 60 mm2. Es wurden zwei unterschiedliche Dosierungen für 5-Fluoruracil (5-FU), (5 mg/kg/KG (Minimaldosis) bzw. 50 mg/kg/K- G (Maximaldosis) einmal wöchentlich pro Tier verwendet. Tiere mit einer Tumorgröße von durchschnittlich von 30 mm2 vier Wochen nach Tumorinokkulation wurden mit der Minimaldosierung für 5-FU (5 mg/kg/KG) behandelt. Demgegenüber wurden Tiere mit einer Tumorgröße von durchschnittlich 60 mm2 sechs Wochen nach Tumorinokkulation mit der Hochdosis für 5-FU (50 mg/kg/KG) therapiert. Zur Untersuchung des Effekts einer gleichzeitigen AAV-2-lnfektion erfolgte die wöchtenliche Applikation von AAV-2 mit 1x108 Viruspartikel intratumoral pro Versuchstier. Als Kontrollgruppe dienten tumortragende Tiere ohne Behandlung. Um den Effekt einer alleinigen AAV-Infektion auf das Tumorwachstum und die physiologischen Veränderungen in den Versuchstieren kontrollieren zu können, wurden tumortragenden Lewis-Ratten mit 1x108 AAV-2-Viruspartikel intratumoral infiziert (Tabelle 1 )
Figure imgf000010_0001
Für alle Tiere wurde wöchentlich die Tumorgröße (Länge x Breite), das Auftreten von Metastasen und das Gewicht bestimmt. Nach den Empfehlungen der Arbeitsgruppe der LASA (Laboratory Animal Science Association) wurde ein SCORE entwickelt und für die Versuchstiere einmal wöchtenlich evaluiert (Report of the laboratory animal science association working party, in Laboratory animals, 1990, (24), 97-130).
Figure imgf000011_0001
Nach 5-6 Behandlungswochen wurde für jeweils 6 Tiere der verschiedenen Versuchsgruppen 1 ml Blut aus der Schwanzvene entnommen und die Hämatologi- schen Parameter; Leukozytenzahl (gesamt), Hämoglobin , Hämatokrit, Thrombozytenzahl und das Differentialblutbild (Neutrophile, Lymphozyten, Monozyten) untersucht.
Bei einer Gewichtsabnahme von > 20% erfolgte eine Unterbrechung der Behandlung. Endpunkt der Untersuchung war eine expansive Tumorgröße von > 400 mm2 bzw. Auftreten von mehr als 3 Metastasen. ERGEBNISSE
Im Verlauf dieses Experimentes stellte sich heraus, daß die Tiere, die den Tumor trugen und nicht behandelt wurden (Kontrollgruppe), ein rasches Tumorwachstum aufwiesen. In der Folge kam es zu Gewichtsverlust, einer Leukopenie im Blutbild und einer prozentual verstärkten Abnahme der polymorphkernigen Granulozyten und Monozyten im Differentialblutbild im Vergleich zu gesunden Tieren ohne Tumor. Die Tiere, die mit AAV-2 infiziert wurden, hatten trotz progredientem Tumorwachstum eine altersentsprechende Gewichtszunahme und zeigten keine Leukopenie. Insgesamt waren diese Tiere sehr viel vitaler und wiesen einen signifikant besseren LASA-Score zur Beurteilung des Allgemeinzustandes auf.
Tabelle: Vergleich tumortragende Tiere ohne Therapie und tumortragende Tiere mit AAV-Infektion nach maximal 1 0 Wochen post Tumorinokkulation (durchschnittliche Angabe)
Figure imgf000012_0001
Bei einer durchschnittlichen Tumorgröße von 30 mm2 vier Wochen nach _ __
Tumorinokkulation zeigte die alleinige Chemotherapie mit 5-FU in einer Dosierung von 5 mg/kg/KG keinen inhibitorischen Effekt auf das Tumorwachstum. Demgegenüber konnte die Kombinationsbehandlung mit 5-FU der gleichen Dosierung (5 mg/kg/KG) und einer gleichzeitigen AAV-Infektion einen Wachstumsstop des Tumors für 2-3 Wochen bewirken. Danach zeigte sich eine verminderte Tumorprogression im Vergleich zu den ausschließlich 5-FU (5 mg/kg/KG) therapierten Tieren. So waren von 13 Tieren nach 6 Behandlungwochen alle Tiere am Leben, während bei den allein chemotherapierten Tieren 5 von 9 Tieren verstorben waren. Darüberhinaus wiesen die zusätzlich mit AAV-infizierten Tiere einen besseren LASA-Score und eine größere Anzahl von Leukozyten im Vergleich zu den ausschließlich chemotherapierten Tieren auf.
Tabelle: Vergleich 5-FU-Monotherapie (5 mg/kg/KG, Minimaldosis) und Kombinationsbehandlung von 5-FU (5 mg/kg/KG) mit gleichzeitiger AAV-Infektion nach 6 Behandlungswochen (durchschnittliche Angabe).
Figure imgf000013_0001
Behandlungsbeginn vier Wochen nach Tumorinokkulation (TU-Größe ~ 30 mm2) Sechs Wochen nach Tumorinokkulation erreichten die Tumore eine durchschnittliche Größe von 60 mm2. Für diese Tiere erfolgte die 5-FU- Chemotherapie mit der Maximaldosis von 50 mg/kg/KG entweder als Monotherapie oder in Kombination mit der AAV-Infektion. Dabei konnte für die Tiere die ausschließlich mit 5-FU behandelt wurden, ein kurzfristiger Stillstand des Tumorwachstums erreicht werden. Im weiteren Therapieverlauf zeigten sich erhebliche Nebeneffekte der Chemotherapie. So mußte nach der zweiten Behandlungswoche aufgrund des schlechten Allgemeinzustandes der Tiere und einer durchschnittlichen Gewichtsabnahme von mehr als 20% die Therapie ausgesetzt werden. Tiere mit einer zusätzlichen AAV-Infektion hatten diese Nebenwirkungen nicht und wiesen initial eine Abnahme des Tumors auf. Anschließend sistierte das Tumorwachstum für ca. 4 Wochen und die Überlebenszeit der Ratten wurde gegenüber den kontrollierten bzw. den mit ausschließlich 5-FU behandelten Tieren signifikant verlängert. So waren nach 6 Behandlungswochen von den ausschließlich Hochdosis chemotherapierten Tieren 9 von 12 Ratten verstorben. Demgegenüber waren in der Gruppe mit den zusätzlich AAV-infizierten Tieren nur 3 von insgesamt 12 Ratten verstorben. Die Bestimmung der Verlaufsparameter 5-6 Wochen nach Behandlungsbeginn demonstrierte für chemotherapierte Tiere ohne gleichzeitige Infektion mit AAV-2 eine ausgeprägte Leukopenie, einen erniedrigten LASA-Score und ein deutlich reduziertes Gewicht. Bei den Tieren, die sowohl die Chemotherapie als auch die AAV-Infektion erhielten, konnte keine Chemotherapie- bzw. Tumorinduzierte Leukopenie festgestellt werden. Diese Tiere waren erheblich vitaler (LASA-Score) und wiesen keinen Gewichtsverlust auf. Tabelle: Vergleich 5-FU-Monotherapie (50 mg/kg/KG, Hochdosis) und Kombinationsbehandlung von 5-FU (50 mg/kg/KG) mit gleichzeitiger AAV-Infektion nach 6 Behandlungswochen (durchschnittliche Angabe).
Figure imgf000015_0001
*Behandlungsbeginn sechs Wochen nach Tumorinokkulation (TU-Größe ~ 60 mm2)
Der signifikant bessere Allgemeinzustand der zusätzlich mit AAV-infizierten Tiere und die dadurch verminderten Nebenwirkungen der Hochdosis-Chemotherapie (5- FU, 50 mg/kg/KG) spiegelte sich in allen untersuchten hämatologischen Parametern wieder. So hatten die ausschließlich mit 5-FU (50 mg/kg/KG) behandelten Tiere signifikant erniedrigte Werte für das Hämoglobin, die Thrombozytenzahl und die im Differentialblutbild bestimmten Werte für Neutrophile, Lymphozyten und Granulozyten.
Tabelle: Vergleich der hämatologischen Parameter von 5-FU-Monotherapie (50 mg/kg/KG, Hochdosis) und von 5-FU (50 mg/kg/KG) mit gleichzeitiger AAV- Infektion nach 6 Behandlungswochen (durchschnittliche Angabe).
Figure imgf000016_0001
* Behandlungsbeginn sechs Wochen nach Tumorinokkulation (TU-Größe ~ 60 mm2)
Diese Arbeiten zeigen, daß die begleitende Infektion von tumortragenden Ratten mit adeno-assoziierten Viren (z.B. AAV-2) zu einer erheblichen Verbesserung des Blutbildes und des gesamten physiologischen Zustandes sowie zu einer Verminderung des Gewichtsverlustes der Tiere führt.

Claims

PATENTANSPRÜCHE
1 ) Verwendung von Parvoviren zur Verbesserung des Allgemeinzustandes von Patienten mit chronischen und/oder konsumierenden Erkrankungen.
2) Verwend ung nach Anspruch 1 , wobei d ie Ve rbesse ru ng des Allgemeinzustandes im Rahmen einer Therapie mit genotoxischen Agentien erfolgt.
3) Vewendung nach Anspruch 2, wobei durch die Gabe der Parvoviren die bei Therapien mit genotoxischen Agentien auftretenden Nebenwirkungen gemindert werden.
4) Verwendung nach einem der Ansprüche 1 bis 3, wobei die verwendeten Parvoviren adeno-assoziierte Viren sind.
5) Verwendung nach Anspruch 4, wobei die adeno-assoziierten Viren AAV-2 sind.
6) Verwendung nach einem der Ansprüche 1 bis 5, wobei die Parvoviren in einer Dosis von 109-1010 Partikel/kg KG eingesetzt werden.
7) Verwendung nach einem der Ansprüche 1 bis 6, wobei die Erkrankung eine Tumorerkrankung ist. 8) Verwendung nach einem der Ansprüche 1 bis 7, wobei die Gabe der Parvoviren intravenös, kutan, oral, intraperitoneal, intraarteriell oder intratumoral erfolgt.
9) Verwendung nach einem der Ansprüche 2 bis 8, wobei die Gabe der Parvoviren vor oder gleichzeitig zu einer Therapie mit genotoxischen Agentien erfolgt.
10) Verwendung nach einem der Ansprüche 2 bis 9, wobei die genotoxischen Agentien im Rahmen einer Chemo- und/oder Radiotherapie, einer Gentherapie oder einer Immuntherapie gegeben werden.
11 ) Pharmazeutische Zusammensetzung enthaltend genotoxische Agentien und Parvoviren.
12) Pharmazeutische Zusammensetzung nach Anspruch 11 , wobei diese eine Injektions- oder Infusionslösung, ein Aerosolspray oder eine Salbe ist.
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