WO2001095938A1 - Medicaments preventifs et therapeutiques destines au granulome - Google Patents

Medicaments preventifs et therapeutiques destines au granulome Download PDF

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Hiroshi Suzuki
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Definitions

  • the present invention relates to a preventive / therapeutic agent for granulomas, particularly granulomas occurring after ligation of vas deferens.
  • sperm After vasectomy, a type of sterilization, sperm is thought to be processed by lysis and lysis in the epididymis and phagocytosis of macrophages. It is known that phagocytosis of macrophages is generally carried out via a scavenger receptor or the like expressed on the surface of cells of macrophages.
  • an object of the present invention is to provide a novel preventive or therapeutic agent for granuloma, particularly sperm granuloma which occurs after ligation of vas deferens.
  • the present inventor in particular, used a scavenger-receptor knockout mouse and a normal mouse in which the expression of a scavenger receptor was genetically manipulated, and ligated the vas deferens to these mice.
  • Granules develop in knockout mice after administration
  • the present invention was completed.
  • the absence of sperm granuloma after vasectomy in a Schiavenger receptor knockout mouse indicates that sperm granulomas that occur after vasectomy can be prevented or treated by antagonist against the squamous receptor. The reason for this is to make it reasonably presumable.
  • Ryoaki Moto provides a granuloma prophylactic / therapeutic agent using an agonist against the scavenger receptor of macrophages as an active ingredient, and particularly an antagonist against a scavenger receptor of macula phage as an active ingredient. It is intended to provide a preventive / therapeutic agent for sperm granuloma occurring after vasectomy.
  • Examples of the antagonist to the scavenger receptor used in the present invention include antibodies against the scavenger receptor, such as monoclonal antibodies, chimeric antibodies, humanized antibodies and single-chain antibodies, and binding to the scavenger receptor. Fragments of the above antibodies that can be used.
  • examples of the above-mentioned antagonists include antisense nucleic acids and low molecular weight compounds against nucleic acids encoding a scavenger receptor.
  • Figure 1 shows a rough graph showing the time course of sperm counts in wild-type mice and scavenger receptor knockout mice after vasectomy.
  • FIG. 2 is a daraf showing the time-dependent changes in testis weight in wild type mice and scavenger receptor knockout mice after vasectomy.
  • the present inventors performed granulation after ligation of vaccinia in Schiavenger receptor mice and normal mice in which the expression of Schiavenger-receptor A (SR-A) was deleted by genetic manipulation. Observation of the tumor development revealed that, despite no substantial difference in sperm generation rate or testis weight between the two mice, granulomas developed in normal mice, and Schiavenger receptor knockout mice. They found that granuloma did not occur in the stomach, and that blocking of the scavenger receptor could prevent sperm granuloma after vasectomy.
  • SR-A Schiavenger-receptor A
  • Mactophage phage skibavenger receptor is a trimeric membrane glycoprotein with a molecular weight of about 22 OkD, extracellular C-terminal specific domain, collagen-like domain, Hi-helical coil Consisting of a coil domain and a spacer domain; a transmembrane domain; and a cytoplasmic domain (Kodama T. et al., Ature Vol 343, p.531-535 (1990); Matsumoto A. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87: 9133-9137 (1990)) is expressed on the cell surface of macrophage cells.
  • MSR-A Mactophage phage skibavenger receptor
  • the isolated scavenger receptor particularly its extracellular domain, and genetic recombination, are required.
  • the produced recombinant scavenger receptor protein particularly its extracellular domain, for example, a C-terminal specific domain, can be used as an immunogen.
  • a polyclonal antibody against the Schiavenger receptor is used to immunize animals other than human, such as rabbits and goats, with the above-mentioned immunogen. It can be obtained from animal serum. Monoclonal antibodies can also be produced by methods well known in the art. For example, a laboratory animal such as a mouse is immunized with the above-mentioned immunogen, antibody-producing cells, for example, spleen cells are collected, and fused with a myeloma cell line, for example, SP20, to obtain a target monoclonal antibody. It is possible to obtain a hybridoma producing a lonal antibody.
  • the humanized antibody is used to determine the complementarity-determining regions (CDRs) in the variable regions (V regions) of the heavy (H chain) and light (L chain) chains of the human antibody, and to determine the complementarity-determining regions (CDR) in mice other than human. It has been replaced with the corresponding CDR of an animal monoclonal antibody.
  • the constant region (C region) and the framework region (FR) in the V region are derived from a human antibody, and only the CDR is a non-human monoclonal antibody. It has the advantage of having very low immunogenicity in humans because it is derived from a primary antibody. '
  • Methods for producing humanized antibodies are well known. For example, by cloning cDNA encoding the V regions of the H chain and L chain of a mouse monoclonal antibody against the Schiavenger monoreceptor, Determine the acid sequence, distinguish between ⁇ 01 and 1, select the V region of the human monoclonal antibody that has high homology to the amino acid sequence of the mouse FR region, and select the cDNA encoding the V region.
  • the CDR coding region is replaced with the CDR coding region of a mouse monoclonal antibody by a well-known gene recombination method, and a vector containing the H chain coding sequence thus prepared and an L chain coding sequence are prepared. Is expressed in a host animal cell, and the resulting H-chain protein and L-chain protein are allowed to assemble.
  • the chimeric antibody is obtained by linking the C region of a human monoclonal antibody and the V region of a non-human animal monoclonal antibody with respect to the H chain and the L chain, respectively.
  • the V region of the mouse monoclonal antibody to the receptor receptor may be linked to the C region of any human antibody.
  • Methods for producing chimeric antibodies are also well known in the art.For example, a DNA fragment encoding a V region is cloned from DNA encoding a mouse monoclonal antibody against a scavenger receptor, and the resulting fragment is isolated from a human antibody.
  • an expression vector is prepared for each of the H chain and the L chain, and these are expressed in host cells, and the resulting chimeric H chain protein and chimeric L chain are produced. You just need to assemble the protein.
  • Single-chain antibodies include, for example, the H chain V region and L chain V of a monoclonal antibody such as a mouse, a humanized monoclonal antibody, or a chimeric antibody against the scavenger receptor as described above.
  • the region is linked to the region via an appropriate spacer.
  • Methods for producing single-chain antibodies are also well known.For example, DNAs encoding the V regions of the H chain and L chain of the above-mentioned monoclonal antibody, chimeric antibody or humanized antibody are obtained, and these are used as linkers. It may be ligated via the DNA to be coded, and the expression vector containing the gene may be introduced into an animal host cell for expression.
  • an antisense nucleic acid against a nucleic acid encoding this scavenger receptor may be used.
  • the gene encoding the human macrophage scavenger receptor has been cloned (Matsumoto. A. Proc. Natl. Aced Sci. USA 87:91 33-9137 (1990)).
  • Complementary nucleic acids can be used as antisense nucleic acids.
  • Antagonists of the present invention may also be low molecular weight compounds.
  • scavenger receptor antagonists include, for example, For example, polyvinyl sulfate (polyvinyl sulfate), polyinosinic acid Lysanthininoleic acid, polyxanthinylic acid, polyguanylic acid, poly G, I (l: l) (poly G, 1 (1: 1)), dextran sulfate, fucoidin (f ucoidin), carragheenan, bovin e sulfatides, malaylatecl LDL (malelatecl LDL), maleylated albumin, and maleylated albumin.
  • Antagonists for macrophage scavenger receptors that can be used in the present invention are described, for example, in PCT publications W02000006147, W02000003704, W09907382, JP-A-11-246512, JP-A-11-246511, J. Pharmacol.Exp.Ther. (1999), 289 (3), 1277-1285, ⁇ .S. Brow ⁇ , S. ⁇ .Basu, JR Falck, YKHo, and J.L Goldstein
  • the Scavenger Cell Pathway for Lipoprotein Degradation Specificity of the Binding Site That Mediates the Uptake of Negatively-Charged LDL by Macrophages, Journal of Supramolecular Structure, Vol. 13, 67-81 (1980).
  • the prophylactic / therapeutic agent of the present invention can be administered orally or parenterally, and the antibody is preferably administered by injection, for example, intravenous injection.
  • the antibody is preferably administered by injection, for example, intravenous injection.
  • Knockout mice (Suzuki H. et al., Nature, Vol. 386, pp. 292-296 (1997)) and wild-type mice were purified from pentoparbital sodium (Suzuki H. et al.). (Nembutal, Abbot La boratories, USA). A small vertical midline abdominal incision was made. Each vas deferens was ligated twice with 5-zero silk (Matsuda Sutures, Tokyo).
  • F8 Monoclonal antibody against mouse SR-A (Fraser et al., Ature Vol.364, p.343-346 (1993))
  • F4 / 80 Monoclonal antibody against mouse macrophage (Leener PJ. Et al. J. Immunol. Methods, Vol. 175, p. 5-19 (1992))
  • FA / 11 Monoclonal antibody against murine macroline (CD68) (Holness CD et al., J. Biol. Chem., Vol. 30, p. 9661-9666 (1993)).
  • the testes weight and the number of sperm production per day were not substantially different between the knockout mice and the wild-type mice.
  • the number of sperm production per day was significantly reduced two weeks after the operation, but returned to the value of the non-operated control mice four weeks after the operation.
  • the value of sperm production per day two weeks after surgery in knockout mice was not significantly different from the number of sperm production per day two weeks after surgery in wild-type mice. .
  • mice In wild-type mice, during the observation period, about half of the operated mice had granuloma. The granulomas were mainly located in the epididymis of the wild-type mouse (corpus ep ididymi s) and in the epididymis tail (cauda epididym is). However, none of the 17 SR-A knockout mice that had undergone surgery produced sperm granulomas (Table 1).
  • Table 2 shows the expression of the scavenger receptor antigen in the epididymis head, body and tail as well as in the epididymis granulomas of wild type mice. Basal cells in the epididymis head, body, and tail were positive for F4 / 80 but negative for 2F8. S The RA antigen was expressed on macophage phage in stromal tissue in all parts of the epididymis.

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Description

明 細 書 肉芽腫の予防 · 治療剤 発明の分野
本発明は肉芽腫、 特に精管結紮後に生ずる肉芽腫の予防 · 治療剤 に関する。 背景技術
不妊手術の 1つである精管結紮の後、 精子は精巣上体腔内におけ る分解 ·溶解や、 マクロファージのファゴサイ トーシスによ り処理 されるものと考えられている。 マクロファージのファゴサイ トーシ スは一般にマク 口ファージ細胞表面に発現されるスキヤベンジャー レセプター等を介して行われることが知られている。
他方、 精管結紮後には、 その副作用と して、 数％の患者に精子肉 芽腫が発症し、 しばしば痛みを伴う ことが知られている。 この治療 のために抗炎症剤が用いられているが、 発症の原因、 メカニズムに ついては不明な点が多く、 十分に効果的な予防又は治療剤も知られ ていない。 発明の開示
従って本発明は、 肉芽腫、 特に精管結紮後に生ずる精子肉芽腫の 新規な予防又は治療剤を提供しよう とするものである。
本発明者は、 上記の課題を解決すべく、 特に、 スキヤベンジャー レセプターの発現を遺伝子操作によりプロ ックしたスキヤべンジャ 一レセプターノ ックァゥ トマウスと正常マウスを用い、 これらのマ ウスに精管結紮を施した後にノ ックァゥ トマウスには肉芽腫が発生 しないことを見出し、 本発明を完成した。 すなわち、 スキヤべンジ ヤーレセプターノ ックァゥ トマウスに精管結紮した後に精子肉芽腫 が発生しないことは、 精管結紮後発生する精子肉芽腫が、 スキヤべ ンジャーレセプターに対するアンタゴニス トによ り予防又は治療で きることを合理的に推定させるものである。
従って、 本亮明は、 マクロファージのスキヤベンジャーレセプタ 一に対するアンタゴニス トを活性成分とする肉芽腫予防 ·治療剤を 提供し、 特にマク口ファージのスキヤベンジャーレセプターに対す るアンタゴニス トを活性成分とする、 精管結紮後に発生する精子肉 芽腫の予防 · 治療剤を提供するものである。
本発明において使用するスキヤベンジャーレセプターに対するァ ンタ ゴニス ト と しては、 スキヤベンジャーレセプターに対する抗体 、 例えばモノ ク ローナル抗体、 キメラ抗体、 ヒ ト型化抗体及び一本 鎖抗体、 並びにスキヤベンジャーレセプターに結合することができ る上記抗体の断片が挙げられる。
さ らには、 上記アンタゴニス トと しては、 スキヤベンジャーレセ プターをコー ドする核酸に対するアンチセンス核酸、 低分子化合物 等が挙げられる。 図面の簡単な説明
図 1 は精管結紮後の、 野性型マウス及びスキヤベンジャーレセプ ターノ ックアウ トマウスにおける精子数の経時変化を示すダラフで める。
図 2は、 精管結紮後の、 野性型マウス及びスキヤベンジャーレセ プターノ ックァゥ トマウスにおける睾丸重量の経時変化を示すダラ フである。 発明の実施の形態
実施例において後記するごとく、 本発明者らは、 スキヤべンジャ 一レセプター A ( S R - A) の発現を遺伝子操作により欠失させた スキヤベンジャーレセプターマウス及び正常マウスに精管結紮を行 つた後に肉芽腫の発生状況を観察したところ、 両マウス間に、 精子 の生成速度や睾丸重量に実質的な差がないにも拘らず、 正常マウス には肉芽腫が発生し、 スキヤベンジャーレセプターノ ックァゥ トマ ウスには肉芽腫が発生しないことを見出し、 スキヤベンジャーレセ プターをブロ ックすることによ り、 精管結紮後の精子肉芽腫の発生 を防止できるこ とを見出した。
スキヤベンジャーレセプターのアンタゴニス ト と しては、 スキヤ ベンジャーレセプターに対する抗体を挙げることができる。 マク 口 ファージスキヤベンジャーレセプター （MS R— A) は分子量約 2 2 OkDの三量体膜型糖蛋白質であり、 細胞外にある C端側特異的ド メイン、 コラーゲン様ドメイン、 ひ一ヘリカルコィルドコイルドメ イ ン及びスぺーサー ドメイ ン ； 膜貫通ドメイ ン ； 並びに細胞質ドメ ィンから成り (Kodama T. ら、 ature Vol 343, p.531— 535 (1990) ； Matsumoto A. ら、 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87: 9133 - 9137 (199 0)) 、 マク ロファージ系細胞の細胞表面に発現される。
従って、 抗体の調製に当っては、 細胞表面にスキヤベンジャーレ セプターを発現しているマクロファージやその細胞膜画分、 単離さ れたスキヤベンジャーレセプター、 特にその細胞外ドメイン、 遺伝 子組換によ り製造された組換えスキヤベンジャーレセプター蛋白質 、 特にその細胞外ドメイ ン、 例えば C一末端側特異的ドメイ ン等を 免疫原と して使用することができる。
スキヤべンジャ一レセプターに対するポリ クローナル抗体は、 ゥ サギ、 ャギ等のヒ ト以外の動物を上記免疫原によ り免疫感作し、 該 動物の血清から得ることができる。 モノ ク ローナル抗体も、 当業界 においてよく知られている方法によ り製造することができる。 例え ば、 マウスなどの実験動物を上記の免疫原によ り免疫し、 抗体産生 細胞、 例えば脾細胞を採取し、 これをミエローマ細胞系、 例えば S P 2 0等と融合させて、 目的とするモノク ローナル抗体を産生す るハイプリ ドーマを得ることができる。
ヒ ト型化抗体は、 ヒ ト抗体の重鎖 （H鎖） 及び軽鎖 （L鎖） の可 変領域 （V領域） 中の相補性決定領域 （C DR) を、 マウスなどヒ ト以外の動物モノクローナル抗体の対応する C DRにより置換した ものであり、 定常領域 （C領域） 及び V領域中のフレームワーク領 域 （F R) がヒ ト抗体に由来し、 C D Rのみがヒ ト以外のモノク 口 ーナル抗体に由来するため、 ヒ トに対する免疫原性が非常に低いと いう利点を有する。 '
. ヒ ト型化抗体の作製方法は周知であり、 例えば、 スキヤべンジャ 一レセプターに対するマウスモノクローナル抗体の H鎖及び L鎖の V領域をコー ドする c DNAをクローニングすることによ りァミ ノ 酸配列を決定し、 〇 01 と 1 を区別し、 マウスの F R領域のアミ ノ酸配列と相同性の高いヒ トモノ ク ローナル抗体の V領域を選択し 、 その V領域をコー ドする c DNAの C DRコー ド領域を、 マウス モノクローナル抗体の C D Rコー ド領域と、 周知の遺伝子組換え法 によ り置換し、 このようにして作製した H鎖コー ド配列を含有する ベクター、 及び L鎖コード配列を含有するベクターを、 宿主動物細 胞内で発現せしめ、 生成した H鎖蛋白質と L鎖蛋白質をアセンブリ 一させればよレ、。
キメラ抗体は、 ヒ トのモノク ローナル抗体の C領域と、 ヒ ト以外 の動物のモノ ク ローナル抗体の V領域とを、 それぞれ H鎖及び L鎖 について連結したものであり、 本発明においては、 例えばスキヤべ ンジャーレセプターに対するマウスモノクローナル抗体 V領域と、 任意のヒ ト抗体の C領域とを連結すればよい。 キメラ抗体の作製方 法も当業界において周知であり、 例えば、 スキヤベンジャーレセプ ターに対するマウスモノ ク ローナル抗体をコードする DNAから、 V領域をコードする DN A断片をクローニングし、 それをヒ ト抗体 の C領域をコー ドする DN A断片と連結して、 H鎖及び L鎖のそれ ぞれについて発現ベクターを作製し、 これらを宿主細胞中で発現せ しめ、 生成したキメラ H鎖蛋白質とキメラ L鎖蛋白質とをァセンブ リ一させればよレ、。
一本鎖抗体は、 例えば上記のごとき、 スキヤベンジャーレセプタ 一に対する、 マウス等のモノ ク ローナル抗体、 ヒ ト型化モノ ク ロ一 ナル抗体、 又はキメラ抗体の、 H鎖 V領域と、 L鎖 V領域とを適当 なスぺーサーを介して連結したものである。 一本鎖抗体の作製方法 も周知であり、 例えば、 上記のモノク ローナル抗体、 キメラ抗体又 はヒ ト型化抗体の H鎖及び L鎖の V領域をコードする DNAを得、 これらをリ ンカーをコー ドする DNAを介して連結し、 これを含む 発現べクターを動物宿主細胞に導入して発現させればよい。
マク 口ファージスキヤベンジャーレセプターに対するアンタゴニ ス トの別の態様と しては、 このスキヤベンジャーレセプターをコー ドする核酸に対するアンチセンス核酸であってもよい。 ヒ トマクロ ファージスキヤベンジャーレセプターをコー ドする遺伝子はク ロー ニングされており （Matsumoto.A ¾ Proc. Natl. Aced Sci.USA 87:91 33-9137 (1990)) 、 この遺伝子配列の一部分に対して相補的な核酸 をアンチセンス核酸と して用いることができる。
本 明のアンタゴニス トはさらに、 低分子化合物であってもよい スカベンジャーレセプターアンタゴニス トの例と しては、 たとえ ばポリ ビニルサルフェー ト（polyvinyl sulfate) 、 ポリイ ノシン酸
Figure imgf000007_0001
リ ヤサンチニノレ酸、 polyxanthinyl ic ac i d)、 ポリ グァニル酸（polyguanylic acid) 、 ポリ G, I(l:l)(poly G , 1(1:1)) 、 硫酸デキス トラン（dextran sulfate) 、 フコィジン（f ucoidin)、 カラキーナン ( carragheenan)、 ゥシフノレファチ ド (bovin e sulfatides) 、 マ レイノレイ匕 LDL(maleylatecl LDL) 、 マ レイノレイ匕ァ ノレブニン (maleylated albumin)など力 S失口られてレヽる。
本発明において使用し得るマク ロファージスキヤベンジャーレセ プターに対するアンタゴニス トは、 例えば PCT 公開 W02000006147、 W02000003704, W09907382 、 特開平 11- 246512 、 特開平 11-246511 、 J. Pharmacol. Exp. Ther. (1999) , 289(3) , 1277-1285 、 Μ. S. Brow η, S. Κ. Basu, J. R. Falck, Y.K.Ho、 及び J. L Goldstein The Scaven ger Cell Pathway for Lipoprotein Degradation: Specificity of the Binding Site That Mediates the Uptake of Negat ively-Cha rged LDL by Macrophages , Journal of Supramolecular Structure ， Vol.13, 67 - 81(1980) などに記載されている。
本発明の予防 · 治療剤は経口的に又は非経腸的に投与するこ とが でき、 抗体は注射、 例えば静脈内注射によ り投与するのが好ましい スキヤベンジャーレセプターのアンタゴニス ト と しての抗体の投 与量は、 体重、 症状などによ り適宜選択し得るが、 例えば 1人当 り 、 1 日、 体重 kg当 り、 0. 1〜： L 0 0 0 mg、 好ましく は：！ 〜 3 0 0 mgでめる。 実施例
次に、 本発明を実施例によ り さ らに具体的に説明する。
実施例 方法
雄のスキヤベンジャーレセプター A ( S R - A) ノ ックアウ トマ ウス （Suzuki H. ら、 Nature, Vol.386, p.292-296 (1997))及び野 性型マウスをペントパルビタールナ ト リ ウム （Nembutal, Abbot La boratories, 米国） の注射により麻酔して手術した。 小さな垂直中 線腹部切開を行った。 各輸精管を 5—ゼロ絹糸 （Matsuda Sutures, 東京） によ り 2回結紮した。
精管結紮から 1〜 4週間後、 動物をと殺し、 そして睾丸及び輸精 管を伴う精巣上体を摘出した。 睾丸の重量を測定し、 そして一日あ たりの精子生産数を Joyce ら、 J.Androl. Vol.14, p.448-455 (199 3)の方法によ り測定した。 輸精管を伴う精巣上体を、 それぞれへマ トキシンーェォジン染色又は免疫組織化学法のために中性緩衝化 2 0 %ホルマリ ン溶液又は 2 %過ヨウ素酸—リ ジン一パラホルムアル デヒ ドにより固定した。
免疫組織化学法のため、 次の抗体を使用した。 2 F 8 ： マウス S R— Aに対するモノク ローナル抗体 （Fraserら、 ature Vol.364, p.343-346 (1993)) 、 F 4 / 8 0 ： マウスマク ロファージに対する モノ ク ローナル抗体 （Leener PJ. ら、 J. Immunol. Methods, Vol.175 ， p.5-19 (1992) ) 、 及び F A/ 1 1 ： ネズミマク ロシアリ ンに対 するモノ ク ローナル抗体 （C D 6 8 ) (Holness C. D. ら、 J. Biol. C hem. , Vol.30, p.9661-9666 (1993)) 。
すべての動物は光制御され （ 0 5 0 0〜 1 9 0 0 hの光点灯） 及 び空気調節された室に保持した。 動物室の温度は 2 4 ± 2 °Cにセッ ト し、 湿度を 5 5 ± 1 0 %にコ ン ト口ールした。 この実験に使用し た動物は、 uidmg Principles for the Care and Use of Researc h Animals (中外製薬） に従って取扱った。
結果 図 1及び図 2に示す通り、 観察期間中、 睾丸重量及び 1 日あたり の精子生産数は、 ノ ックァゥ トマウスと野性型マウスの間で実質的 に異らなかった。 ノ ックァゥ トマウスでは、 手術から 2週間後に 1 日精子生産数が有意に低下したが、 手術から 4週間後には、 手術し なかった対照マウスの値.に復した。 尚、 ノ ックアウ トマウスにおけ る手術から 2週後の 1 日あたりの精子生産数の値は野性型マウスの 術後 2週目の 1 日あたりの精子生産数と有意差のない値であった。
野性型マウスにおいては、 観察期間中、 手術を受けたマウスの約 半数が肉芽腫にかかった。 肉芽腫は主と して野性型マウスの精巣上 体体部 ( corpus ep ididymi s ) 及び精巣上体尾邰 cauda epididym i s) に位置した。 しかしながら、 手術を受けた S R— Aノ ックァゥ トマウス 1 7匹の内、 精子肉芽腫を生成したものは存在しなかった (表 1 ) 。 もし、 肉芽腫の原因の 1つが、 輸精管のブロックに続く 精管圧の上昇の結果と しての精巣上体管からの精子の溢出であれば 、 精管結紮された S R— Aノ ックァゥ トマウスは、 精管結紮された 野性型マウスにおいて観察されるのと同様に精子肉芽腫を生ずるは ずである。
精管結紮後の S R— Aノ ックァゥ トマウスにおける 1 日あたりの 精子生産数及び睾丸重量が野性型マウスのそれらと異らないのに対 して （図 1及び図 2 ) 、 精管結紮された S R— Aノ ックアウ トマウ スは観察期間中肉芽腫の形成を示さなかった。 従って、 輸精管内の 圧力の上昇が精子の溢出をもたらし、 精子肉芽腫の形成を導いたの ではないであろう。
表 2は、 野性型マウスの精巣上体頭部、 体部及び尾部における並 びに精巣上体の肉芽腫におけるスキヤベンジャーレセプター抗原の 発現を示す。 精巣上体頭部、 体部及び尾部における基底細胞は F 4 / 8 0について陽性であつたが 2 F 8については陰性であった。 S R— A抗原は、 精巣上体のすべての部分における間質組織中のマク 口 ファージ上で発現していた。
精巣上体頭部、 体部及び尾部の基底細胞及び上皮細胞中に S R— A抗原の発現は観察されず、 又は弱く観察された。 精子の消失を司 る有意な数の食細胞は副睾丸の間質組織及び管腔のいずれにも存在 しなかったが、 肉芽腫は 2 F 8 に対して強い陽性を示した。 これら の観察は、 上皮細胞の抗原性が肉芽腫の開始及び発達によ り変化す るこ とを示唆している （表 2 ) 。
上記の結果が明らかに示すと ころによれば、 スキヤベンジャーレ セプタ一 Aは精管結紮後の肉芽腫発達に関連している。 従って、 ス キヤベンジャーレセプター A活性の阻害は肉芽腫の形成の予防及び 治療のために有効である。
¾ _ L
精管結紮後の野性型マウス及びスキヤベンジャーレセプタ一 ノックァゥトマウスにおける精子肉芽腫の形成
肉芽腫形成マウス数 全ノックアウトマウス数 （％) 精管結紮後の日数
マ ウ ス
7曰 10日 14日 1ヶ月 ノ ックァゥ トマウス 0/6 (0) 0/2 (0) 0/4 (0) 0/5 (0) 野性型マゥス 2/5 (40) 3/4 (75) 2/3 (67) 2/6 (33)
2
精管結紮後のマウスの精巣上体におけるスキヤベンジャーレセプタ の発現の免疫組織化学的検出の結果 抗 体
2F8 F4/80 FA11 精巣上体頭部 管 腔 中 ― ― ― 基底細胞 +
上皮細胞 土 土 + 間質組織 + + 精巣上体体部 管 腔 中
基底細胞 +
上皮細胞
間質組織 + + + 精巣上体尾部 管 腔 中
基底細胞 +
上皮細胞
間質組織 + + + 肉 芽 腫 + + +

Claims

請 求 の 範 囲
1 · マク 口ファージのスキヤベンジャーレセプターに対するアン タゴニス トを活性成分とする肉芽腫の予防 · 治療剤。
2. 前記肉芽腫が精管結紮後に発生する肉芽腫である、 請求項 1 に記載の予防 · 治療剤。
3. 前記アンタゴニス トが、 マク ロファージのスキヤベンジャー レセプターに対する抗体である請求項 1又は 2に記載の予防 · 治療 剤。
4. 前記抗体が、 モノ ク ローナル抗体、 キメラ抗体'、 ヒ ト型化抗 体もしく は一本鎖抗体、 又はマク 口ファージのスキヤベンジャーレ セプターに結合することができる前記抗体の断片である、 請求項 3 に記載の予防 · 治療剤。
5. 前記アンタゴニス トが、 前記スキヤベンジャーレセプターに 対するアンチセンス核酸である、 請求項 1又は 2に記載の予防 ' 治 療剤。
6. 前記アンタゴニス トが低分子化合物である、 請求項 1又は 2 に記載の予防 · 治療剤。
7. 前記低分子化合物が、 ポリ ビュルサノレフェー ト（polyvinyl s ulfate) 、 ポリイ ノシン酸（polyinosinic acid) 、 ポリ キサンチニ ノレ酸 (polyxanthinylic acid)、 ホリ グ尸二ノレ酸 (polyguanyl ic acid ) 、 ポリ G， I (1:1) (poly G, 1(1:1)) 、 硫酸デキス トラン（dextran sulfate) 、 フコインン (fucoidin 、 カフキーナン ( carragheenan) 、 ゥシフノレファチ ド（bovine sulfatides) 、 マレイノレイ匕 LDL(maleyl ated LDL) 、 マレイ ノレィ匕ゾノレプニン (maleylated
Figure imgf000012_0001
ら成る 群から選択される、 請求項 6に記載の予防 · 治療剤。
8. 肉芽腫の予防 . 治療剤の製造のための、 マクロファージのス キヤベンジャーレセプターに対するアンタゴニス トを活性成分の使 用。
9. 前記肉芽腫が精管結紮後に発生する肉芽腫である、 請求項 8 に記載の使用。
10. 前記アンタゴニス トが、 マク ロ ファージのスキヤベンジャー レセプターに対する抗体である請求項 8又は 9に記載の使用。
11. 前記抗体が、 モノ ク ローナル抗体、 キメラ抗体、 ヒ ト型化抗 体も しく は一本鎖抗体、 又はマク 口 ファージのスキヤベンジャーレ セプターに結合することができる前記抗体の断片である、 請求項 10 に記載の使用。
12. 前記アンタゴニス トが、 前記スキヤベンジャーレセプターに 対するァンチセンス核酸である、 請求項 8又は 9に記載の使用。
13. 前記アンタゴニス トが低分子化合物である、 請求項 8又は 9 に記載の使用。
14. 前記低分子化合物が、 ポリ ビニルサルフェート（polyvinyl s ulfate) 、 ポ リ イ ノ シン酸（polyinosinic acid) 、 ポジ キサンチニ ノレ酸、 polyxanthiny丄 ic acid) % ポリ グ ァニノレ酸、 polyguanylic acid ) 、 ポ リ G， I(l:l)(poly G, 1(1:1)) , 硫酸デキス ト ラ ン（dextran sulfate) 、 フ コイ シン ( fucoidin)、 カ フキーナン ( carragheenan) 、 ゥシフノレファチド（bovine sulfatides) 、 マレイノレイ匕 LDL(maleyl ated LDL) 、 マレイノレイ匕ァノレブニン（maleylated albumin)力、ら成る 群から選択される、 請求項.13に記載の使用。
15. マク 口 ファージのスキヤベンジャーレセプターに対するアン タゴニス トを対象に投与することを含んで成る肉芽腫の予防 · 治療 方法。 ·
16. 前記肉芽腫が精管結紮後に発生する肉芽腫である、 請求項 15 に記載の予防 · 治療方法。
17. 前記アンタゴニス トが、 マク ロファージのスキヤベンジャー レセプターに対する抗体である請求項 15又は 16に記載の予防 · 治療 方法。
18. 前記抗体が、 モノク ローナル抗体、 キメラ抗体、 ヒ ト型化抗 体もしく は一本鎖抗体、 又はマク ロファージのスキヤベンジャーレ セプターに結合することができる前記抗体の断片である、 請求項 17 に記載の予防 · 治療方法。
19. 前記アンタゴニス トが、 前記スキヤベンジャーレセプターに 対するアンチセンス核酸である、 請求項 15又は 16に記載の予防 · 治 療方法。
20. 前記アンタゴニス トが低分子化合物である、 請求項 15又は 16 に記載の予防 · 治療方法。
21. 前記低分子化合物が、 ポリ ビニルサルフェート（polyvinyl s ulfate) 、 ポジイ ノシン酸（polyinosinic acid) 、 ポジ キサンチニ ノレ酸 (polyxanthinylic acid) ^ ^；リ グァニノレ酸 (polyguanylic acid ) 、 ポリ G， I(l:l)(poly G, 1(1:1)) 、 硫酸デキス トラン（dextran sulfate) 、 フコインン (fucoidin)、 カフヤーナン ( carragheenan) 、 ゥシフノレファチド（bovine sulfatides) 、 マレイノレイ匕 LDL(maleyl ated LDL) 、 マ レイノレイ匕ァノレブニン（maleylated albumin)力 ら成る 群から選択される、 請求項 20に記載の方法。
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