WO2002066499A1 - Peptide cyclique - Google Patents

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WO2002066499A1 PCT/JP2002/001221 JP0201221W WO02066499A1 WO 2002066499 A1 WO2002066499 A1 WO 2002066499A1 JP 0201221 W JP0201221 W JP 0201221W WO 02066499 A1 WO02066499 A1 WO 02066499A1
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Toru Kurome
Naoyuki Awazu
Kazutoh Takesako
Ikunoshin Kato
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Takara Bio Inc
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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/10—Antimycotics
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/50—Cyclic peptides containing at least one abnormal peptide link
    • C07K7/54—Cyclic peptides containing at least one abnormal peptide link with at least one abnormal peptide link in the ring
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Definitions

  • the present invention relates to a novel cyclic peptide having antifungal activity, a pharmacologically acceptable salt thereof, and an antifungal pharmaceutical composition containing them.
  • Fungi are known to infect humans, animals, plants and the like and cause various diseases.
  • the main fungi that cause systemic mycosis in humans include fungi belonging to the genus Candida, the genus Cryptococcus, and the genus Aspergillus. Have been.
  • antifungal agents that can be used for the purpose of treatment and protection against fungal infections are known, and the systemic nature of the above humans and other animals
  • examples of drugs against the causative bacteria of mycosis include amphotericin B, flucytosine, miconazo monol, and fluconazol.
  • these drugs have problems in efficacy, toxicity, antibacterial spectrum, etc., and have not been sufficient as therapeutic agents.
  • An object of the present invention is to provide, among chemically synthesized cyclic lipopeptides having D-a11-threonine or various types of D-type a-amino acids having 3-hydroxy, Another object of the present invention is to provide a novel cyclic peptide having an antifungal activity.
  • n are the same or different and are 0 or 1,
  • X is O or NH
  • R 1 is hydrogen, alkyl having 6 to 21 carbon atoms, substituted alkyl, alkenyl, substituted alkenyl, acylamino, aryl, substituted aryl, heterocyclic or substituted heterocyclic,
  • the substituted alkyl, substituted alkenyl, substituted aryl, or substituted complex ring is a hydroxyl group, an alkyl having 1 to 8 carbons, an alkoxy having 1 to 8 carbons, an alkenyl having 2 to 8 carbons, It is substituted with at least one of 8 acyl, 2 to 8 carbon acyloxy, 6 to 14 carbon aryl, 6 to 14 carbon aryloxy, or 1 to 8 carbon heterocycle.
  • AA 1 -AA 6 are or] 3—amino acids
  • AA 7 is a D-type ⁇ -amino acid having HO— in the side chain
  • ⁇ 8 is one or 8—an amino acid
  • the present inventors have found that among the novel cyclic lipopeptides prepared by a chemical synthetic method, fungi that cause human systemic mycoses such as Candida albicans, Tallipococcus' neoformans, Aspergillus fumigatus, etc.
  • a compound consisting of 8 residues of ⁇ - or j3-amino acids and one residue of ⁇ - or] 3-hydroxy acids or fatty acids having a hydroxyl or amino group at the 3-position In the lipopeptide, a D-type a-amino acid having at least one residue of] 3-hydroxy, preferably an erythro-form] D-type single amino acid or D-a11 threonine having 3-hydroxy Cyclic lipopeptide compounds containing The present inventors have found that they show strong activity against the fungi causing human systemic mycosis, including Aspergillus fumigatus, which has few effective drugs, and completed the present invention. BRIEF DESCRIPTION OF THE FIGURES
  • FIG. 1 is a diagram showing a general solid-phase synthesis protocol performed in the present invention. Detailed description of the invention
  • the compound represented by the above formula (1) is a cyclic lipopeptide consisting of hydroxy acid or one amino acid residue having R 1 as a lipid moiety, one of eight residues AA 1 to AA 8 or; 3-amino acid It is. m and n are the same or different and are 0 or 1, and X is O or NH.
  • R 1 is hydrogen, alkyl having 6 to 21 carbon atoms, substituted alkyl, alkenyl, substituted alkenyl, acylamino, aryl, substituted aryl, heterocycle or substituted heterocycle.
  • the substituted alkyl, substituted alkenyl, substituted aryl, or substituted complex ring includes a hydroxyl group, an alkyl having 1 to 8 carbons, an alkoxy having 1 to 8 carbons, an alkenyl having 2 to 8 carbons, and a carbon having 2 to 8 carbons. Is substituted with at least one of an acyl having 2 to 8 carbon atoms, an aryl having 6 to 14 carbon atoms, an aryloxy having 6 to 14 carbon atoms, or a heterocyclic ring having 1 to 8 carbon atoms.
  • Suitable alkyl as R 1, 6 to 2 1 linear or branched alkyl Honoré carbon for example CH 3 (CH 2) 5 - s cyc 1 o C 6 H x! CH 2 , CH 3 (CH 2 ) 6 —, CH 3 (CH 2 ) 7 , CH 3 (CH 2 ) 8 , CH 3 (CH 2 ) 9 , CH 3 (CH 2 ) i 0 —, CH 3 (CH 2 ) 1 1- , CH 3 (CH 2 ) x
  • they are CH 3 (CH 2 ) i 2 — and CH 3 (CH 2 ) 11 CH (CH 3 ) 1, and the hydroxy acids having these are respectively 3-hydroxy-1-hexadex Canoic acid, 3-hydroxy-4-methyl-hexadecanoic acid (where m is 0 and n is 1).
  • the acyl moiety of the acylamino suitable as R 1 includes a linear or branched aliphatic or aromatic acyl having 6 to 21 carbon atoms, such as CH 3 (CH 2 ) 4 CO—, CH 3 ( CH 3 ) CH (CH 2 ) 2 CO—, CH 3 (CH 2 ) 5 CO_, eye 1 oC 6 K 1 t CH 2 CO- s CH 3 (CH 2 ) 6 CO—, CH 3 (CH 2 ) 7 CO_, CH 3 (CH 2 ) 8 CO—, CH 3 (CH 2 ) 9 CO—, CH 3
  • Preferred reels for R 1 include, for example, ferul, mesityl, toryl, naphthyl, anthryl and the like.
  • Heterocycles suitable as R 1 include, for example, groups such as furyl, phenyl, pyrazolyl, imidazolyl, tetrazolyl, thiazolyl, thiadiazolyl, and isooxazolyl.
  • hydroxyl group as the substituent include, for example, CH 3 (CH 2 ),, C (OH) (CH 3 ) —, and the hydroxy acid having this is 3,4-dihydroxy 4-methyl-hexadecane It is an acid (where m is 0 and n is 1).
  • alkyl moiety of the preferred alkyl and alkoxy substituents a straight-chain or branched alkyl of 1-8 carbon atoms, for example, CH 3 -, CH 3 CH 2 one, CH 3 (CH 2) 2 one, CH 3 (CH 2 ) 3 ⁇ , CH 3 (CH 3 ) CHCH 2 CH1, CH 3 (CH 2 ) 4 ⁇ , CH 3 (CH 3 ) CH (CH 2 ) 2 ⁇ , CH 3 (CH 2 ) 5 — , Cyc 1 o C 6 CH 2 , CH 3 (CH 2 ) 6 ⁇ , CH 3 (C H 2 ) 7 and the like.
  • Alkenyl suitable as the above-mentioned substituent includes linear or branched alkenyl having 2 to 8 carbon atoms, for example, CH 2 CHCHCH 2 —, CH 2 CHCH (CH 2 ) 3 —, CH 2
  • the aryl moiety of aryl and aryloxy suitable as the substituent includes arylene having 6 to 14 carbon atoms, such as phenyl, mesityl, tolyl, naphthyl, and anthryl. These have at least one group such as a linear or branched alkynole having 1 to 8 carbon atoms, a halogen (for example, a phenolic mouth, a black mouth, a promo, an amido), a hydroxy, or the above aryl. May be.
  • acyl and the acylole moiety of the acyloxy suitable as the above-mentioned substituent include a linear or branched aliphatic or aromatic acyl having 2 to 8 carbon atoms, for example, CH 3 CO—, CH 3 CH 2 CO—, CH 3 (CH 2 ) 2 CO—, CH 3 (CH 2 ) 3 CO—, CH 3 (CH 3 ) CHCH 2 CO_, CH 3 (CH 2 ) 4 CO—, CH
  • heterocycle suitable as the substituent examples include a heterocycle having 1 to 8 carbon atoms, such as furyl, phenyl, pyrazolyl, imidazolyl, tetrazolyl, thiazolyl, thiadiazolyl, and isoxazolyl.
  • the AA 1 is an ⁇ - or jS- amino acids that have a linear or branched alkyl group having 1 to 7 carbon atoms as a side chain, preferably CH 3 - Ru Aranin der with.
  • the AA 2 is an ⁇ - or —amino acid having a linear or branched alkyl group having 1 to 7 carbon atoms and substituted with an amino group, and is preferably 2 2 ⁇ — (CH 2 ) 3, Onolenitine and lysine having H 2 N— (CH 2 ) 4 —.
  • the AA 3 is an amino acid having hydrogen or a linear or branched alkyl group having 1 to 7 carbon atoms, or HO-, HOOC-, H 2 NOC- linear 1-7 carbon atoms like or minutes with It is an amino acid having a branched alkyl group or H—, preferably H— or CH.
  • AA 3 is] 3-alanine.
  • the AA 4 is an amino acid with a linear or branched alkyl Le group having a carbon number of 1-7 substituted by a hydroxyl group, preferably HO- CH 2 -, CH 3 CH (OH) - serine with , Is threonine.
  • the AA 5 is the amino acid having a linear or branched alkyl Le group having 1 to 7 carbon atoms substituted by a hydroxyl group, preferably HO- CH 2 -, CH 3 CH (OH) - serine with , Is threonine.
  • AA 6 is an amino acid having a linear or branched alkyl group having 1 to 7 carbon atoms and having H 2 NOC—, preferably H 2 NOC— (CH 2 ) 2 —, H 2 NOC—.
  • Glutamine with CH 2 — is asparagine.
  • the AA 7 is the D form of the amino acid having a linear or branched alkyl Le group having a carbon number of 1-7 substituted by a hydroxyl group, preferably CH 3 CH (OH) one, CH 3 (CH 3 ) D—a 11 o—threoyun having one C (OH), D—] 3-hydroxyparin.
  • the AA 8 is an ⁇ - or] 3-amino acid having hydrogen or a linear or branched alkyl group having 1 to 7 carbon atoms, or a linear or branched chain having 1 to 7 carbon atoms substituted with a hydroxyl group.
  • Representative examples of the novel cyclic peptide of the present invention represented by the following formula (1 ′) include the compounds shown in Table 1. Equation (1,):
  • Boc—G1y-OBz1 or Fmoc—G1y—OBz1 can be used as a raw material.
  • Various aldehydes or ketones such as acetoaldehyde and acetone can be used as the electrophile to be reacted with these.
  • Fmoc-Gly-OBz1 is converted to a strong base such as lithium diisopropylamide (LD) in the presence of a metal salt such as lithium chloride.
  • LD lithium diisopropylamide
  • dichloromethane ethyl ether and the like can be used in addition to THF.
  • the metal salt magnesium chloride, cesium chloride, titanium chloride, aluminum chloride, a boron compound, and the like can be used in addition to lithium chloride.
  • the stereochemistry of the asymmetric center can be controlled to obtain a diastereomer derived from the asymmetric carbon newly formed in the reaction product as a mixture in an appropriate ratio, or to obtain only the desired diastereomer. Good yield can be obtained.
  • the strong base used to generate the metal enolate in addition to methyllithium L DA, Ru can be used (n- B u) 2 BOS 0 2 CF 3 and the like.
  • the control of the reaction temperature is important for obtaining a stereoscopically pure target substance, and is usually carried out at a low temperature of 180 ° C to 120 ° C.
  • the reaction mixture can be purified by reversed phase high performance liquid chromatography to obtain the desired compound as a single optically active substance or a mixture of diastereomers. Further, these compounds are prepared according to a known or applied method by removing the side chain functional groups of the constituent amino acids and the protecting groups used for the functional groups in the aldehyde or ketone used as the starting material to obtain the desired compound. Obtainable.
  • the compound of the present invention can be produced by a total synthesis method using a liquid phase synthesis method or a solid phase synthesis method.
  • a method of cyclizing a linear peptide represented by the following general formula (2) is preferably used.
  • this linear peptide by a total synthesis method using a liquid phase synthesis method, after synthesizing a few peptide fragments, A method of condensing them is desirable.
  • Various linear peptides can be easily prepared by a total synthesis method using a solid phase synthesis method.
  • Equation (4)
  • a method using a condensing agent such as BroP and HATU is mentioned, and a method using dicyclohexylcarpoimide (DCC) is preferably used together with a catalyst such as dimethylaminopyridine and 4-pyrrolidinopyridine.
  • DCC dicyclohexylcarpoimide
  • the reaction to be immobilized on 2-chlorotrityl mouth lid (C1-Trt (2-C1) -Resin) resin is triethylamine, N-methyl in an organic solvent such as dimethylformamide, tetrahydrofuran, and dichloromethane.
  • the reaction is performed in the presence of a base such as morpholine and disopropylethylamine at a temperature of 0 ° C to 50 ° C.
  • a base such as morpholine and disopropylethylamine at a temperature of 0 ° C to 50 ° C.
  • it is carried out in dichloromethane using diisopropylethylamine as a base.
  • the choice of solvent used in the reaction greatly affects the yield of immobilization, and dichloromethane, which is a solvent having a high resin swelling ratio, is suitably selected.
  • Elongation of the peptide chain on the resin can be performed by the Fmoc method or the Boc method, and is performed by a manual method or an automatic synthesizer, respectively. You.
  • the synthesis is performed by the Fmoc method using an automatic synthesizer.
  • Fig. 1 shows an example of peptide synthesis protocol by the Fmoc method using an automatic peptide synthesizer.
  • a method for condensing amino acids 7K-soluble carbodiimide (WSCD; EDC) -HOBt method, PyBOP-HOBt method, HATU method, etc. can be used in the presence of a base such as diisopropylethylamine or N-methylmorpholine. Is preferably carried out by the Py BOP-HOBT method using N-methylmorpholine as a base.
  • the selective deprotection reaction of the N-Fmoc group widely proceeds with a base, but is carried out with a 10 to 100% piperidine, preferably a 30% piperidine / dimethylformamide solution.
  • the reaction to release the synthesized peptide from the resin is usually performed using trisulfoacetic acid, hydrochloric acid, trofluoromethanesulphonic acid, etc. as scavengers such as lanole, thioanisole, and ethanol.
  • scavengers such as lanole, thioanisole, and ethanol.
  • This is carried out using a solution to which dithiol or the like is added.
  • the protecting group for the amino acid side chain is also removed at the same time. It is carried out using a mixed solution of ethanol and methylene chloride.
  • Both the N-terminal amino group and the C-terminal carboxyl group of the target amino acid side-chain protected peptide released from the resin are free groups, and the ring-Eich reaction using them is a lipoxyl activity as a C-terminal. It can be carried out by converting into a peptide having a group and then reacting in the presence of a base.
  • the setting of the reaction temperature of the above cyclization reaction varies depending on the selected carboxyl active group, but is generally set in the range of 30 to 60 ° C, and preferably in the range of 110 to 30 ° C.
  • the reaction time of the cyclization reaction is several minutes to several days, preferably 30 minutes to 4 hours.
  • activation of the C-terminal lipoxyl group may be performed, for example, by a method using N-hydroxysuccinimide (ONSu), a method using PyBroP, HATU, or a method using DCC-HOAt for activation. Can be used.
  • N-hydroxysuccinimide ONSu
  • PyBroP PyBroP
  • HATU HATU
  • DCC-HOAt DCC-HOAt
  • DI EA triethylamine
  • pyridine and the like can be used as the base.
  • cyclization solvents include tetrahydrofuran, methylene chloride, dimethyl Formamide, dimethyl sulfoxide and the like can be used.
  • dimethyl sulfoxide is suitably used.
  • the C-terminal carboxyl group is a peptide represented by the formula (4), that is, the N-terminal is a free or salt form of an amino group and the C-terminal is a free carboxyl group. It can be obtained by reacting it with HATU in the presence of a base, for example, in a solvent such as dimethyl sulfoxide at a temperature of 110 to 30 ° C. In this case, the above reaction proceeds simultaneously with cyclization. The cyclization yield can be further increased by precisely controlling the concentration of each reaction component and the reaction temperature in the reaction system, selecting a solvent, and the like.
  • the compound of the present invention is prepared by removing the amino acid side chain protected peptide from the resin, performing a cyclization reaction, and then removing the amino acid side chain protecting group using the above-mentioned mixed solution of acid and scavenger. Is done.
  • a novel non-toxic cyclic peptide having a low minimum growth inhibitory concentration (MIC, ⁇ g / m 1) against Candida albicans, Tarcipococcus neoformans, and Aspergillus fumigatus can be obtained.
  • the cyclic peptide of the present invention can be used in medicine as it is or as a pharmacologically acceptable salt thereof.
  • the salt is not particularly limited as long as it is pharmacologically acceptable.
  • salts of mineral acids such as hydrochloric acid, sulfuric acid, nitric acid, phosphoric acid, hydrofluoric acid, hydrofluoric acid and the like
  • Salts of organic acids such as acid, acetic acid, tartaric acid, lactic acid, citric acid, fumaric acid, maleic acid, succinic acid, methanesulfonic acid, ethanesulfonic acid, benzenesulfonic acid, toluenesulfonic acid, naphthalenesulfonic acid, camphorsulfonic acid, etc.
  • An alkali metal such as sodium, potassium and calcium or a salt of an alkaline earth metal and the like.
  • the cyclic peptide of the present invention or a pharmacologically acceptable salt thereof is administered as a medicament
  • the cyclic peptide of the present invention or a pharmacologically acceptable salt thereof is used as such or as a pharmaceutically acceptable salt. It is administered to animals including humans as a pharmaceutical composition containing, for example, 0.1 to 99.5%, preferably 0.5 to 90% in a non-toxic and inert carrier.
  • the carrier include solid, semi-solid or liquid diluents, fillers, and other auxiliaries for prescription. One or more of these can be used.
  • the above pharmaceutical composition is preferably administered in the form of a dosage unit, and can be administered orally, intradermally, topically (such as transdermally), or rectally. It goes without saying that the pharmaceutical composition is administered in a dosage form suitable for these administration methods.
  • the dose as an antifungal agent depends on the condition of the patient such as age and body weight, the administration route, the nature and extent of the disease, etc. It is desirable to adjust in consideration of the above, but usually, for humans, the amount of the active ingredient of the present invention for adults is in the range of 10 to 2000 mg per day. Dosages below the above range may be sufficient, while conversely, doses above the above range may be required. When administering large amounts, it is desirable to divide the dose into several times a day.
  • the above-mentioned oral administration can be carried out in solid, powder or liquid dosage units, for example, powders, powders, tablets, dragees, capsules, drops, sublinguals, other dosage forms, etc. .
  • a liquid dosage unit form for subcutaneous, intramuscular or intravenous injection such as a solution or a suspension.
  • a liquid dosage unit form for subcutaneous, intramuscular or intravenous injection such as a solution or a suspension.
  • a liquid dosage unit form for subcutaneous, intramuscular or intravenous injection such as a solution or a suspension.
  • These can be prepared by suspending a fixed amount of the cyclic peptide of the present invention or a pharmacologically acceptable salt thereof in, for example, a non-toxic liquid carrier suitable for injection such as an aqueous or oily medium. It is produced by dissolving and then sterilizing the suspension or solution.
  • the above-mentioned topical administration can be performed, for example, by using an external preparation such as a liquid, cream, powder, paste, gel, ointment or the like.
  • an external preparation such as a liquid, cream, powder, paste, gel, ointment or the like.
  • a certain amount of the cyclic peptide of the present invention or a pharmacologically acceptable salt thereof is used as a fragrance, coloring agent, filler, surfactant, humectant, It is produced by combining with one or more of a softener, a gelling agent, a carrier, a preservative, a stabilizer and the like.
  • the above-mentioned rectal administration includes the step of determining a fixed amount of the cyclic peptide of the present invention or a pharmacologically acceptable salt thereof, for example, by using higher esters such as myristyl palmitate; It can be carried out using a suppository mixed with a low melting point solid such as polyethylene glycol, cocoa butter, or a mixture thereof.
  • the cyclic peptide of the present invention exhibits high antifungal activity against typical fungi used for determination of antifungal activity, such as Candida anorrebicans, T. pallidum, and Nepaliformans and Asperginoles fumigatus.
  • typical fungi used for determination of antifungal activity
  • Compound 1 described above can inhibit the growth of Candida albicans and Taleptococcus neoformans at a concentration of 12.5 ⁇ g / ml or less.
  • the compound was administered intraperitoneally to mice at 10 OmgZkg each, but showed no toxicity.
  • Example 1 Cyc 1 o (—L-A1a—L-Orn—] 3—A1a—L-Ser—L—Ser—D—Asn—D—alio—Thr— Synthesis of G ly— (Sat) I Hh d-) (Compound 1)
  • the resin obtained in the above 5) was mixed with acetic acid-trifluoroethanol monomethylene chloride. The mixture was suspended in 0.8 ml of a mixture of (1: 1: 8) and allowed to stand at room temperature for 1 hour. The resin was removed by filtration, the filtrate was concentrated under a stream of argon, and then getyl ether was added. The precipitated crystals were collected by centrifugation (10000 rpm, 5 minutes) to obtain 19.5 mg of the title compound. FAB—MS i inZz 14 2 9 [MH] +.
  • the antifungal activity of each compound synthesized in Examples 1 and 3 to 7 was determined by a liquid culture medium dilution method.
  • Candida albicans in medium containing serially diluted compounds Candida albicans in medium containing serially diluted compounds
  • AA 7 L-Th r-substituted analogs
  • AA 7 D- T hr substituted analogs force Njida albicans, Cryptococcus ⁇ neoformans, the antifungal activity against Asuperuginoresu fumigatus were determined by the method described in Example 8. As shown in Table 3, D-a 1 1 o-Th r body without AA 7 substitution Anorebikansu, Cryptococcus neoformans, the respectively Asuperugirusu-Fumigata scan MIC 6. 2 5 ⁇ g / m 1, 1 2. 5 ⁇ g / m 1 N 1.
  • AA 7 L- T hr substituted Ana port grayed
  • AA 7 D-Th r-substituted analogs ivy or a show activity against any of the bacteria (MI C> 200 ⁇ gZm 1 ).
  • Example 10 AA 4- substituted analog mixture: Cyc 1 o (—L—A 1 a—L—Orn-jS-A 1 a-AA 4— L—Ser—D—A—Sn—D— Preparation of a 1 1 o— Th r— G 1 y- (Sat) Hh d_)
  • Example 1 1 AA 5 of Amino acid substitutions
  • Ana port grayed mixture Cy clo (-L- A 1 a -LO r n- j3 -A 1 a- L one S er -AA 5 one D-A sn-D — A 1 1 o Preparation of -T hr -G 1 y- (Sat) -Hh d—)
  • Fmoc—L—Trp— A synthesis protocol was performed using a mixture of OH, Fmoc-L-Tyr (t-Bu) -OH, and Fmoc-L-Va1-OH.
  • the FAB-MS spectrum of the finally obtained residue was measured, and it was confirmed that it contained 20 types of the cyclic peptides.
  • Example 12 2 Amino acid-substituted analog mixture of AA 6 : Cyc 1 o (—L—A 1 a—L—O r ⁇ ⁇ ⁇ -A la—L—Ser—L—Ser-AA Preparation of 6 _D—a 1 1 o—Thr—Gly— (Sat) -Hhd—)
  • Example 13 Measurement of antifungal activity of amino acid-substituted analog mixture of AA 4 , AA 5 and AA 6
  • Example 10 Antifungal activity against mixtures of amino acid-substituted analogs at each position of AA 4 , AA 5 and AA 6 obtained in each of AA 4 , AA 5 and AA 6 , against T. pallidae, T. neophonoremans, and Aspergillus fumigatus Activity was determined by the method described in Example 8.
  • Amino substituted analogs mixture of AA 4 is crypto Tokokkasu neoformans, Asuperugirusu ⁇ each MIC 1 00 ⁇ g / m 1 , 50 ⁇ g / 1 at a concentration of active against A.
  • Amino acid substitution analog mixtures AA 5 is force Njida-Albi force Nsu, Kuriputoko'. Kas-Neoho Rumansu, each at a concentration of MIC 2 5 g / m 1, 50 ⁇ g / m 1 2 5 ⁇ gZm 1 against Asuperugirusu fumigatus, amino acid substitutions AA 6
  • the analog mixtures also showed antifungal activity at concentrations of 50 ⁇ g / ml, 50 ⁇ g / ml and 25 g / ml of MIC.

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Description

明 細 書 環状ぺプチド 技術分野
本発明は抗真菌活性を有する新規環状ペプチド及びその薬理学的に許容される 塩ならびにそれらを含有する抗真菌医薬組成物に関する。 背景技術
真菌は、 ヒ ト、 動物、 植物等に感染して種々の疾病を引き起こすことが知られ ている。 このうち、 ヒトに感染して、 全身性真菌症を起こす原因真菌の主なもの としては、 カンジダ （Candida) 属、 タリプトコッカス （Cryptococcus) 属、 ァ スペルギルス (Aspergillus) 属に属する真菌等が知られている。
真菌による感染症に対する治療、 防御の目的に使用可能である抗真菌剤は、 現 在のところ、 非常に少数のものが知られているにすぎず、 上記のヒトをはじめと する動物の全身性真菌症の原因菌に対する薬としては、 アンホテリシン B、 フル シトシン、 ミコナゾ一ノレ、 フルコナゾ一ル等を挙げる事ができる。 しかし、 これ らの薬剤は、 効力、 毒性、 抗菌スぺク トル等の点で問題があり、 治療剤としては 充分なものではなかつた。
詳細には、 力ンジダ■ァノレビ力ンス （Candida albicans) 、 タリプトコッカ ス 'ネオホノレマンス (Cryptococcus neoformans) 、 ァスぺノレギノレス · フミガタ ス （Aspergillus fumigatus) 等のヒ ト全身性真菌症を起こす原因真菌のうち特 にァスペルギルス属に属する真菌に対して有効な薬剤は少なく、 上記の既存薬の 欠点を補える治療剤が待望されていた。 発明の目的
本発明の目的は、 化学合成的に得られる、 D— a 1 1 o—トレオニンもしくは 種々の ]3—ヒドロキシを有する D型の a—了ミノ酸を有する環状リポぺプチド類 の中から、 優れた抗真菌活性を有する新規環状ぺプチドを提供することにある。 発明の概要
本発明を概説すれば、 下記一般式 （1 ) ：
(CH2) m-CH (R1) - (CH2) n-CO→AA1→AA2→AA3→AA→AA5→AA6→AA7→AA8
I I
x c=o
[式中、
mおよび nは同一または異なって 0または 1であり、
Xは Oまたは N Hであり、
R 1 は水素、 炭素数 6〜 2 1のアルキル、 置換アルキル、 アルケニル、 置換アル ケニル、 ァシルァミノ、 ァリール、 置換ァリール、 複素環もしくは置換複素環で あり、
(ただし、 前記置換アルキル、 置換アルケニル、 置換ァリール、 もしくは置換複 素環は、 水酸基、 炭素数 1〜 8のアルキル、 炭素数 1〜 8のアルコキシ、 炭素数 2〜 8のァルケニル、 炭素数 2〜 8のァシル、 炭素数 2〜 8のァシルォキシ、 炭 素数 6 ~ 1 4のァリール、 炭素数 6 ~ 1 4のァリールォキシ、 もしくは炭素数 1 〜 8の複素環の少なくとも一つで置換されたものである） 、
AA 1 〜AA 6 は または ]3—アミノ酸であり、
A A 7 は側鎖に H O—を有する D型の α—ァミノ酸であり、
ΑΑ 8 はひ一または; 8—アミノ酸である]
で表わされる環状ペプチドまたはその薬理学的に許容される塩に関する。
本発明者らは、 化学合成的手法により調製した新規環状リポぺプチドの中に、 カンジダ ·アルビカンス、 タリプトコッカス 'ネオホルマンス、 ァスペルギル ス · フミガタス等のヒ ト全身性真菌症を起こす原因真菌に対して強い活性を有す る化合物を探索した結果、 意外にも 8残基の α—または j3—アミノ酸と 1残基の α—または ]3—位にヒドロキシ基もしくはァミノ基を有する脂肪酸よりなる環状 リポぺプチドにおいて、 少なくとも 1残基の ]3—ヒドロキシを有する D型の a― アミノ酸、 好ましくはエリ トロ形 ]3—ヒドロキシを有する D型のひ一アミノ酸も しくは D— a 1 1 oトレオニンを含有する環状リポペプチド化合物が、 これまで に有効な薬剤の少ないァスペルギルス ·フミガタスを含めた上記ヒト全身性真菌 症を起こす原因真菌に対して強い活性を示すことを見い出し本発明を完成した。 図面の簡単な説明
図 1 ：本発明で実施した一般的な固相合成プロトコールを示す図である。 発明の詳細な説明
上記式 (1) で表わされる化合物は、 リピド部分として R1 を有するヒドロキ シ酸若しくはアミノ酸 1残基、 AA1 〜AA8の 8残基のひ一または ;3—ァミノ 酸よりなる環状リポペプチドである。 mおよび nは同一または異なって 0または 1であり、 Xは Oまたは NHである。
R1 は水素、 炭素数 6〜21のアルキル、 置換アルキル、 アルケニル、 置換ァ ルケニル、 ァシルァミノ、 ァリール、 置換ァリール、 複素環もしくは置換複素環 である。
ただし、 前記置換アルキル、 置換アルケニル、 置換ァリール、 もしくは置換複 素環は、 水酸基、 炭素数 1〜8のアルキル、 炭素数 1〜8のアルコキシ、 炭素数 2〜 8のァルケニル、 炭素数 2〜 8のァシル、 炭素数 2〜 8のァシルォキシ、 炭 素数 6〜14のァリール、 炭素数 6〜14のァリールォキシ、 もしくは炭素数 1 〜 8の複素環の少なくとも一つで置換されたものである。
R 1 として好適なアルキルには、 炭素数 6 ~ 2 1の直鎖状または分枝状アルキ ノレ、 例えば CH3 (CH2 ) 5 -s c y c 1 o C6 Hx ！ CH2 一、 CH3 (C H2 ) 6 —、 CH3 (CH2 ) 7 一、 CH3 (CH2 ) 8 一、 CH3 (CH2 ) 9 一、 CH3 (CH2 ) i 0 —、 CH3 (CH2 ) 1 1 -, CH3 (CH2 ) x
2 ―、 CH3 (CH2 ) i 3 —、 CH3 (CH2 ) x ! CH (CH3 ) ―、 CH a (CH2 ) ! 4 -N CH3 (CH2 ) i 5 —、 CH3 (CH2 ) x 6 CH a (CH2 ) 7 —、 CH3 (CH2 ) t 8 -, CH3 (CH2 ) x 9 - CH
3 (CH2 ) 2 。 一などが挙げられる。
好ましくは CH3 (CH2 ) i 2 —、 CH3 (CH2 ) 1 1 CH (CH3 ) 一 であり、 これらを有するヒドロキシ酸は、 それぞれ、 3—ヒドロキシ一へキサデ カン酸、 3—ヒドロキシー 4—メチルーへキサデカン酸である （このとき mは 0 であり、 nは 1である） 。
R1 として好適なァルケ-ルには、 炭素数 6〜 21の直鎖状または分枝状アル ケニル、 例えば CH3 (CH2 ) 4 CH=CH- (CH2 ) 2 一、 CH3 (CH 2 ) 5 CH=CH (CH2 ) 4 CH=CH (CH2 ) 3 一などが挙げられる。
R 1 として好適なァシルァミノのァシル部分には、 炭素数 6〜 21の直鎖状ま たは分枝状の脂肪族ァシルもしくは芳香族ァシル、 例えば CH3 (CH2 ) 4 C O—、 CH3 (CH3 ) CH (CH2 ) 2 CO—、 CH3 (CH2 ) 5 CO_、 e y e 1 oC6 K1 t CH2 CO-s CH3 (CH2 ) 6 CO—、 CH3 (CH 2 ) 7 CO_、 CH3 (CH2 ) 8 CO—、 CH3 (CH2 ) 9 CO—、 CH3
(CH2 ) 1 0 CO—、 CH3 (CH2 ) ! 1 CO—、 CH3 (CH2 ) x 2 C O—、 CH3 (CH2 ) 1 3 CO—、 CH3 (CH2 ) 4 CO -、 CH3 (C H2 ) x 5 CO—、 CH3 (CH2 ) 1 6 CO—、 CH3 (CH2 ) 1 7 CO—、 CH3 (CH2 ) 1 8 CO—、 CH3 (CH2 ) 1 9 CO—、 C6 H5 CO—、 C6 H5 — C6 H4 CO—、 C1 2 H7 CO—などが挙げられる。
R1 として好適なァリールには、 例えばフエュル、 メシチル、 トリル、 ナフチ ル、 アントリルなどが挙げられる。
R1 として好適な複素環には、 例えばフリル、 チェニル、 ピラゾリル、 イミダ ゾリル、 テトラゾリル、 チアゾリル、 チアジアゾリル、 イソォキサゾリルなどの 基が挙げられる。
上記置換基として水酸基を有するものには、 例えば CH3 (CH2 ) , , C (OH) (CH3 ) —があり、 これを有するヒドロキシ酸は、 3, 4—ジヒドロ キシー 4—メチルーへキサデカン酸である （このとき mは 0であり、 nは 1であ る） 。
上記置換基として好適なアルキルおよびアルコキシのアルキル部分には、 炭素 数 1〜 8の直鎖状または分枝状アルキル、 例えば CH3 ―、 CH3 CH2 一、 C H3 (CH2 ) 2 一、 CH3 (CH2 ) 3 ―、 CH3 (CH3 ) CHCH2 一、 CH3 (CH2 ) 4 ―、 CH3 (CH3 ) CH (CH2 ) 2 ―、 CH3 (CH 2 ) 5 —、 c y c 1 o C6 CH2 一、 CH3 (CH2 ) 6 ―、 CH3 (C H2 ) 7 一などが挙げられる。
上記置換基として好適なアルケニルには、 炭素数 2〜 8の直鎖状または分枝状 アルケニル、 例えば CH2 =CHCH2 ―、 CH2 =CH (CH2 ) 3—、 CH
2 =CHCH2 一などが挙げられる。
上記置換基として好適なァリールおよぴァリ一ルォキシのァリール部分には、 炭素数 6〜 14のァリ一ノレ、 例えばフエニル、 メシチル、 トリル、 ナフチル、 ァ ントリルなどが挙げられる。 これらは炭素数 1〜8の直鎖状または分枝状アルキ ノレ、 ハロゲン （例えば、 フノレオ口、 クロ口、 プロモ、 ョード） 、 ヒ ドロキシ、 も しくは上記ァリールなどの基を少なくとも一つ有していてもよい。
上記置換基として好適なァシルおよびァシルォキシのアシノレ部分には、 炭素数 2〜 8の直鎖状または分枝状脂肪族ァシルもしくは芳香族ァシル、 例えば C H 3 CO—、 CH3 CH2 CO—、 CH3 (CH2 ) 2 CO—、 CH3 (CH2 ) 3 CO—、 CH3 (CH3 ) CHCH2 CO_、 CH3 (CH2 ) 4 CO—、 CH
3 (CH3 ) CH (CH2 ) 2 CO_、 CH3 (CH2 ) 5 CO—、 c y c 1 o C6 H1 r CH2 CO—、 C6 H5 CO—、 C6 H5 — C6 H4 CO—、 C1 2 H7 CO—などが挙げられる。
上記置換基として好適な複素環には、 炭素数 1〜8の複素環、 例えばフリル、 チェニル、 ピラゾリル、 イミダゾリル、 テトラゾリル、 チアゾリル、 チアジアゾ リル、 ィソォキサゾリルなどの基が挙げられる。
上記 AA1 は、 側鎖として炭素数 1〜7の直鎖状または分枝状アルキル基を有 する α—または jS—アミノ酸であり、 好ましくは CH3 —を有するァラニンであ る。
上記 AA2 は、 ァミノ基で置換された炭素数 1〜7の直鎖状または分枝状アル キル基を有する α—または —アミノ酸であり、 好ましくは Η2 Ν— (CH2 ) 3一、 H2 N- (CH2 ) 4 —を有するオノレニチン、 リジンである。
上記 A A 3 は、 水素もしくは炭素数 1 ~ 7の直鎖状または分枝状アルキル基を 有するアミノ酸、 もしくは HO—、 HOOC―、 H2 NOC—を有する炭素数 1 〜 7の直鎖状または分枝状アルキル基もしくは H—を有するアミノ酸であり、 好 ましくは H―、 CH。一、 ΗΟ— CHn—、 CH3 CH (OH) 一、 HOOC- (CH2 ) 2 一、 HOOC-CH2 ―、 H2 NOC- (CH2 ) 2 ―、 H2 NO C一 CH2 —を有するグリシン、 ァラニン、 セリン、 トレ才ェン、 グノレタミン酸、 ァスパラギン酸、 グルタミン、 ァスパラギンである。 あるいは AA3 は ]3—ァラ ニンである。
上記 AA4 は、 水酸基で置換された炭素数 1〜 7の直鎖状または分枝状アルキ ル基を有するアミノ酸であり、 好ましくは HO— CH2 —、 CH3 CH (OH) —を有するセリン、 トレオニンである。
上記 AA5 は、 水酸基で置換された炭素数 1 ~ 7の直鎖状または分枝状アルキ ル基を有するアミノ酸であり、 好ましくは HO— CH2 —、 CH3 CH (OH) —を有するセリン、 トレオニンである。
上記 A A 6 は、 H2 NOC—を有する炭素数 1〜 7の直鎖状または分枝状アル キル基を有するアミノ酸であり、 好ましくは H2 NOC— (CH2 ) 2 —、 H2 NOC-CH2 —を有するグルタミン、 ァスパラギンである。
上記 AA7 は、 水酸基で置換された炭素数 1〜 7の直鎖状または分枝状アルキ ル基を有する D型のアミノ酸であり、 好ましくは CH3 CH (OH) 一、 CH3 (CH3 ) C (OH) 一を有する D— a 1 1 o—トレオユン、 D— ]3—ヒドロキ シパリンである。
上記 A A 8 は、 水素もしくは炭素数 1〜 7の直鎖状または分枝状アルキル基を 有する α—または ]3—アミノ酸、 もしくは水酸基で置換された炭素数 1〜 7の直 鎖状または分枝状アルキル基を有するアミノ酸であり、 好ましくは Η—、 CH3 一、 CH3 CH (OH) 一を有するグリシン、 ァラニン、 トレオニンである。 本発明の下記式 （1' ) で表わされる新規環状ペプチドの代表例として、 表 1 に示した化合物が挙げられる。 式 （1 ， ） ：
(CH2) m-CH (R1) - (CH2) n-C0→L-Ala1→L-0rn2→M3→M→M5→D-Asn6→ 7→AA8
X C=0 表 1
X m, n AA3 AA4 M5 AA7 AA8
1 CHg (Q¾) 12 - 0 0, 1 Ala L-Ser L-Ser D-alloThr Gly
2 c (C¾) 12 - 0 0, 1 L-Ala L-Ser L-Ser D-alloThr Gly
3 CHg (C¾) - 0 o， 1 L-Asn L-Ser L-Ser D-alloThr Gly
4 CHg (C ) - 0 o, 1 L-Asp L-Ser L-Ser D-alloThr Gly
5 (¾((¾) 12- 0 o， 1 L-Glu L-Ser L-Ser D-alloThr Gly
6 c¾(c¾)12- 0 o, 1 Gly L-Ser L-Ser D-alloThr Gly
7 C (C¾) 12 - 0 o, 1 L-Ser L-Ser L-Ser D-alloThr Gly
8 (¾ (C¾) 12 - 0 o， 1 ]3 Ala L-Ser L-Ser D-alloThr D-alloThr
9 CHg (C¾) 12 - 0 o, 1 D-alloThr L-Ser L-Ser D-alloThr Gly
10 C (C¾) 12 - 0 o, 1 D-alloThr L-Ser L-Ser D-alloThr D-alloThr
11 C (C¾) 12 - 0 o, 1 ^Ala D-alloThr L-Ser D-alloThr Gly
12 c¾(c¾)12- 0 o, 1 βΑΐα L-Ser D-alloThr D-alloThr Gly
13 C (C¾) 12- 0 o， 1 i3Ala L-Ser L-Ser D- ]3H0Val Gly
14 CHg (C )12- 0 o, 1 jSAla L-Ser L-Ser D-j3H0Phe Gly
15 C¾ (C¾) 10CONH- 0 1, 0 j3Ala L-Ser L-Ser D-alloThr Gly
16 CH3(C ) 10C02C - NH 1, 0 ]3 Ala L-Ser L-Ser D-alloThr Gly β—ヒドロギシを有する D型の 一アミノ酸残基を本発明の化合物に導入する 方法としては、 あらかじめアミノ酸の段階で導入し、 これを原料として用いる方 法と ーヒドロキシの導入可能な環状ペプチドを合成した後に導入する方法によ り行うことができるが、 いずれの場合も例えば種々のアルデヒドおよびケトンと グリシン残基等との間でのアルドール縮合反応によって目的化合物を調製するこ とができる。
ァミノ酸の段階で —ヒドロキシを有する D型の α—アミノ酸を調製する場合、 原料として、 例えば B o c— G 1 y - O B z 1もしくは Fm o c— G 1 y— O B z 1を用いることができ、 これらと反応させる求電子試薬として、 ァセトアルデ ヒド、 アセトン等の種々のアルデヒドもしくはケトンを用いることができる。 例 えば、 T H Fなどの非プロトン性溶媒中、 F m o c— G l y— O B z 1を塩化リ チウム等の金属塩の存在下、 強塩基であるリチウムジイソプロピルァミド （L D A) と反応させ、 F m o c— G 1 y— O B z 1をリチウムエノラート体とする方 法や、 塩化トリメチノレシランにより F m o c一 G 1 y -O B z 1をシリノレエノー ルエーテル体とした後、 求電子剤として過剰量のアルデヒドもしくはケトンを加 え、 低温で数時間攪拌することによって ]3—ヒドロキシを有する D型のひ一アミ ノ酸の調製を行うことができる。 また、 グリシンまたは 一ァラニン残基等を有 し構成ァミノ酸の側鎖官能基を保護した環状べプチドを調製し、 上記と同様の反 応によって目的の J3—ヒドロキシー ーァミノ酸残基へ変換することができる 1 好ましくは L D A等の強塩基を用いてリチウムエノラート体とした後、 アルデヒ ドおよびケトンと反応を行うことができる。
非プロトン性溶媒としては、 T H Fの他にジクロロメタンゃェチルエーテル等 を用いることができる。 また、 金属塩としては塩化リチウムの他に塩化マグネシ ゥム、 塩化セシウム、 塩化チタン、 塩化アルミニウム、 ホウ素化合物等を用いる ことができる。 これらを適当に選択することによつて不斉中心の立体化学を制御 して、 反応生成物に新たに生じる不斉炭素に由来するジァステレオマーを適当な 比率に混合物として得たり、 目的のジァステレオマーのみを収率よく得ることが できる。 金属エノラートを生成させるために用いられる強塩基としては、 L DA の他にメチルリチウム、 （n— B u) 2 B O S 02 C F 3等を用いることができ る。 さらに、 立体ィ匕学的に純粋な目的物を得るためには反応?显度の制御は重要で あり、 通常一 8 0 °C〜一 2 0 °Cの低温で実施される。
反応混合物は逆相高速液体ク口マトグラフィ一等によって精製して目的の化合 物を単一の光学活性体もしくはジァステレオマーの混合物として得ることができ る。 さらにこれらの化合物は、 公知のまたはそれを応用した方法に従い、 構成ァ ミノ酸の側鎖官能基及び原料として用いたアルデヒドもしくはケトン中の官能基 に使用した保護基を除去して目的の化合物を得ることができる。
本発明の化合物の製造は、 液相合成法もしくは固相合成法を用いた全合成法に より行なうことができる。
いずれの方法を用いる場合も、 例えば下記の一般式 （2 ) で表わされる直鎖状 ぺプチドを環化する方法が好適に利用される。 液相合成法を用いた全合成法によ り、 この直鎖状ペプチドを調製するためには、 2、 3個のペプチド断片を合成後、 それらを縮合する方法が望ましい。 固相合成法を用いた全合成法によっても簡便 に各種直鎖状べプチドを調製することができる。
式 （2) ：
H-AAl→AA2→AA3→AA4→AA5→AA6→AA7→AA8-0- (CH2) m_CH (R1) - (CH2) n- C02H 上記の固相合成法を用いた全合成法について、 一般式 (1) において、 m=0、 n = 1であり、 R1 力 CH3 (CH2 ) τ 2 一であり、 ΑΑ1 力 L—A 1 a であり、 AA2 I L-O r nであり、 AA3 力 β_Α 1 aであり、 AA4が、 L-S e rであり、 AA5力 L一 S e rであり、 AA6 I D— A s nであり、 AA7力 D— a 1 1 o—Th rであり、 AA8 力 G 1 yである下記式 （3) で表わされる化合物 1を例として説明する。
式 （3) (化合物 1) ：
Cyclo [(土) - Hhd→L - Ala→L- Orn→ β - Ala→L - Ser→L- Ser→D- Asn→D- alio- Thr→ ' Gly]
[式中、 （土） 一 Hh dは （土） 一 3—ヒドロキシへキサデカン酸を示す。 L 一 Or nは L—オル二チンを示す] 。
固相合成用として一般に用いられている樹脂ビーズに、 あらかじめ調製したェ ステル結合を含むフラグメント Fmo c-G 1 y— Hh d— OHを公知の方法で 固定化した後、 通常の全自動ペプチド合成機を用いて、 下記式 （4) で表わされ る直鎖状保護ペプチドを樹脂ビーズ等の固相担体上に合成する。
式 （4) ：
H-L-Ala-L-Orn (Boc) - β - Ala- L- Ser (t-Bu) - L- Ser (t-Bu) - D- Asn- D-allo- Thr- Gly- (土） _Hhd-0H この直鎖状保護ペプチドを適当な公知の脱 薬を用いて樹脂から脱離させた 後、 環化反応を行ない、 下記式 (5) で表わされる環状保護ペプチドを得る。 最 終的にこの環状保護べプチドに含まれるアミノ酸側鎖保護基を適当な公知の脱離 試薬を用いて脱保護して式 （3) で表わされる目的の化合物 1を得る。 - 式 （5) ：
Cyclo [(土） - Hhd→L- Ala→L- Orn (Boc)→ β - Ala→L- Ser (t- Bu)→L- Ser (t—Bu)→D- Asn→D - alio- Thr→Gly] 一般式 （2) で表わされる直鎖状ペプチドを合成するために用いられる固相合 成用樹脂としてはぺプチド合成及びコンビナトリアル合成に用いられるいずれの 市販の樹脂を用いることができるが、 好ましくは、 Barlosら （テトラへドロン ' レターズ （Tetrahedron Letters) 、 30巻、 3½7頁、 年） が考案した 2—ク 口口トリチルーク口リド （C I— Tr t (2— C 1) — Re s i n、 100— 2 00メッシュ、 1%ジビュルベンゼン （DVB) 架橋） 樹脂が用いられる。
G l y9 と （土） 一 Hh d1 との間のエステル結合の形成には、 例えば Py
B r o P、 HATU等の縮合剤を用いる方法が挙げられるが、 好ましくはジシク 口へキシルカルポジィミド （D C C) をジメチルァミノピリジンや 4一ピロリジ ノピリジン等の触媒とともに用いる方法である。
上記のように合成した G 1 y 9 と （土） 一 Hh d1 との間のエステル結合を 含むフラグメントとして、 例えば Fmo c— G l y— （土） 一 Hh d— OHを
2—クロ口トリチルーク口リド （C 1一 Tr t (2-C 1 ) -Re s i n) 樹脂 上に固定化する反応は、 ジメチルホルムアミド、 テトラヒドロフラン、 ジクロロ メタン等の有機溶媒中、 トリェチルァミン、 N—メチルモルホリン、 ジィソプロ ピルェチルァミン等の塩基存在下 0°Cから 50°Cの温度条件下、 行われる。 好ま しくは、 ジクロロメタン中、 ジイソプロピルェチルァミンを塩基として用いて行 われる。 反応に用いる溶媒の選択は固定化の収率に大きく影響し、 樹脂の膨潤率 の大きい溶媒であるジクロロメタンが好適に選択される。
樹脂上でのぺプチド鎖の伸長は Fm o c法もしくは B o c法により実施するこ とができ、 それぞれマニュアル （手動） 法もしくは自動合成機によって実施され る。 好ましくは、 自動合成機を用いて Fmo c法により行われる。 自動ペプチド 合成機を用いた Fm o c法でのぺプチド合成プロトコーノレの一例を図 1に示した。 アミノ酸の縮合方法としては、 7K溶性カルポジイミド （WSCD； EDC) ― HOB t法、 PyBOP—HOB t法、 HATU法等をジイソプロピルェチルァ ミン、 N—メチルモルホリン等の塩基存在下、 用いることができるが、 好ましく は、 N—メチルモルホリンを塩基として用い、 Py BOP— HOB t法により実 施される。
N-Fmo c基の選択的脱保護反応は、 広く塩基により進行するが、 10〜 1 00 %ピぺリジン、 好ましくは 30 %ピぺリジン/ジメチルホルムァミド溶液に より行われる。
Fmo c法による自動合成機での合成プロトコール終了後、 合成されたぺプチ ドを樹脂から脱離させる反応は、 通常、 トリフルォロ酢酸、 塩酸、 トロフルォロ メタンスルホン酸等にスカベンジャーとしてァュソール、 チオアニソール、 エタ ンジチオール等を添加した溶液を用いて実施され、 一般に、 この時、 同時にアミ ノ酸側鎖保護基も脱離されるが、 アミノ酸側鎖保護ペプチドとして脱離させる場 合、 好ましくは酢酸一トリフルォロエタノ一ルー塩化メチレンの混合溶液を用い て実施される。
樹脂から脱離した目的のァミノ酸側鎖保護ぺプチドの N末端ァミノ基及び C末 端カルボキシル基はいずれも遊離の基であり、 これを用いた環ィヒ反応は、 C末端 として力ルポキシル活性基を有するペプチドに変換し、 その後、 塩基の存在下に 反応させることにより実施することができる。 上記環化反応の反応温度の設定は、 選択したカルボキシル活性基により異なるが、 一般には、 一 30〜 60 °Cの範囲 に設定され、 好ましくは、 一 10~30°Cである。 上記環化反応の反応時間は、 数分間〜数日間であり、 好ましくは 30分間〜 4時間である。
上記環化反応において、 C末端力ルポキシル基の活性化は、 例えば、 N—ヒ ド ロキシスクシンイミド （ONSu) とする方法、 PyB r o P、 HATU, もし くは DCC— HOAtにより活性ィ匕する方法等を用いることができる。 また、 塩 基としては、 D I EA、 トリェチルァミン、 ピリジン等を用いることができる。 さらに、 環化反応溶媒としては、 テトラヒドロフラン、 塩化メチレン、 ジメチル ホルムアミド、 ジメチルスルホキシド等を用いることができ、 式 （4 ) で示され る直鎖ぺプチドの環化反応では、 ジメチルスルホキシドが好適に用いられる。
C末端カルボキシル基を HA TUにより活性化する場合、 C末端カルボキシノレ 活性体は、 式 （4 ) で表わされるペプチドすなわち N末端が遊離または塩形態の ァミノ基で、 C末端が遊離カルボキシル基であるものを、 塩基存在下、 例えばジ メチルスルホキシド等の溶媒中、 一 1 0〜 3 0 °Cの温度で、 HAT Uと反応させ て得ることができる。 この場合、 上記反応は、 同時に環化を伴って進行する。 反 応系における各反応成分の濃度及び反応温度の精密制御、 溶媒の選択等によりさ らにその環化収率を増大させることができる。
本発明の化合物は、 アミノ酸側鎖保護ペプチドを樹脂から脱離させ、 環化反応 を実施した後、 上記の酸及ぴスカベンジャーの混合液を用いてアミノ酸側鎖保護 基を脱離することによって調製される。
このようにして、 カンジダ'アルビカンス、 タリプトコッカス 'ネオホルマン ス、 ァスペルギルス ■フミガタスに対する最小生育阻害濃度 （M I C、 μ g /m 1 ) が低く、 毒性のない新規環状ペプチドを得ることができる。
医薬として有用な塩の形態に関する説明
本発明の環状ペプチドは、 そのまま、 又は、 その薬理学的に許容される塩とし て医薬に使用することができる。 上記塩としては薬理学的に許容されるものであ れば特に限定されず、 例えば、 塩酸、 硫酸、 硝酸、 りん酸、 ふつ化水素酸、 臭ィ匕 水素酸等の鉱酸の塩；ぎ酸、 酢酸、 酒石酸、 乳酸、 クェン酸、 フマール酸、 マレ イン酸、 こはく酸、 メタンスルホン酸、 エタンスルホン酸、 ベンゼンスルホン酸、 トルエンスルホン酸、 ナフタレンスルホン酸、 カンファースルホン酸等の有機酸 の塩；ナトリウム、 カリウム、 カルシウム等のアルカリ金属又はアルカリ土類金 属等の塩等を挙げることができる。
本発明の環状べプチド又はその薬理学的に許容される塩を医薬として投与する 場合、 本発明の環状ペプチド又はその薬理学的に許容される塩は、 そのまま、 又 は、 医薬的に許容される無毒かつ不活性の担体中に、 例えば、 0 . 1〜9 9 . 5 %、 好ましくは 0. 5〜 9 0 %含有する医薬組成物として、 ヒトを含む動物に 投与される。 上記担体としては、 例えば、 固形、 半固形若しくは液状の希釈剤、 充填剤又は その他の処方用の助剤等を挙げることができ、 これらは、 1種以上を用いること ができる。
上記医薬組成物は、 投与単位形態で投与することが好ましく、 経口投与、 組織 内投与、 局所投与 （経皮投与等） 又は経直腸的に投与することができる。 上記医 薬組成物は、 これらの投与方法に適した剤型で投与されることは当然である。 本発明の環状べプチド又はその薬理学的に許容される塩を医薬として投与する 場合、 抗真菌剤としての用量は、 年齢、 体重等の患者の状態、 投与経路、 病気の 性質および程度等を考慮した上で調整することが望ましいが、 通常は、 ヒトにつ いては、 成人に対して本発明の有効成分量として、 一日当たり、 1 0 ~ 2 0 0 0 m gの範囲である。 上記範囲未満の用量で足りる場合もあるが、 逆に上記範囲を 超える用量を必要とする場合もある。 多量に投与するときは、 一日数回に分割し て投与することが望ましい。
上記経口投与は、 固形、 粉末又は液状の用量単位で行うことができ、 例えば、 末剤、 散剤、 錠剤、 糖衣剤、 カプセル剤、 ドロップ剤、 舌下剤、 その他の剤型等 により行うことができる。
上記組織内投与は、 例えば、 溶液や懸濁剤等の皮下、 筋肉内又は静脈内注射用 の液状用量単位形態を用いることによって行うことができる。 これらのものは、 本究明の環状ペプチド又はその薬理学的に許容される塩の一定量を、 例えば、 水 性や油性の媒体等の注射の目的に適合する非毒性の液状担体に懸濁又は溶解し、 ついで上記懸濁液又は溶液を滅菌することにより製造される。
上記局所投与 （経皮投与等） は、 例えば、 液、 クリーム、 粉末、 ペースト、 ゲ ル、 軟膏剤等の外用製剤の形態を用いることによって行うことができる。 これら のものは、 本発明の環状べプチド又はその薬理学的に許容される塩の一定量を、 外用製剤の目的に適合する香料、 着色料、 充填剤、，界面活性剤、 保湿剤、 皮膚軟 化剤、 ゲル化剤、 担体、 保存剤、 安定剤等のうちの一種以上と組み合わせること により製造される。
上記経直腸的投与は、 本発明の環状べプチド又はその薬理学的に許容される塩 の一定量を、 例えば、 パルミチン酸ミリスチルエステル等の高級エステル類、 ポ リエチレングリコール、 カカオ脂、 これらの混合物等の低融点の固体に混入した 座剤等を用いて行うことができる。
本発明における代表的化合物の理化学的性質及び生物学的性質は次の通りであ る。
(1) 理化学的性質
既述の表 1に示した本発明における代表的化合物 1〜 7の理化学的性質を下記 表 2に示す。 表 2
化合物番号 分子式 FAB-MS
1 し 43 6 0リ 14 957
2 し 43 6 10〇14 957
3 44Η77]Ν Χ1015 1000
Figure imgf000015_0001
5 ^ 45^78^ 10〇16 1015
6 し 42h74Ni0Oi4 943
7 し 43h76Nio 15 973
(2) 生物学的性質
本発明の環状ぺプチドは、 抗真菌活性の判定に使用される代表的真菌である力 ンジダ ·ァノレビカンス、 タリプトコッカス ■ネ才ホルマンス、 ァスペルギノレス · フミガタスに対し高い抗真菌活性を示す。 例えば、 上記の化合物 1はカンジダ' アルビカンス、 タリプトコッカス 'ネオホルマンスの生育をすベて 12. 5 μ g /m 1以下の濃度で阻止することができる。
また、 化合物を各々 10 OmgZk gずつマウスに腹腔内投与したが、 何ら毒 性を示さなかった。
実施例
次に本発明を実施例によりさらに具体的に説明するが、 本発明はこれら実施例 に限定されない。 実施例 1 ： C y c 1 o (— L一 A 1 a— L一 Or n— ]3— A 1 a— L一 S e r — L— S e r—D—As n— D— a l i o— Th r— G l y— （土） 一 Hh d -) (化合物 1) の合成
1) (土） 一 3—ヒドロキシへキサデカン酸フエナシル ( (士） 一 Hh d— O P a c) (P a c ：フエナシノレ）
(土） 一3—ヒドロキシへキサデカン酸 500mg (1. 84mmo 1 ) を酢酸ェチル （3. 6ml ) に懸濁し、 臭化フエナシル 42 lmg (2. 12 mmo 1) 及ぴトリエチルァミン 294mg (2. 12 mm o 1 ) を加え、 室 温で終夜攪拌した。 反応液を水、 飽和炭酸水素ナトリウム水、 飽和食塩水で洗浄 した後、 硫酸マグネシウムで乾燥した。 硫酸マグネシウムを濾去し、 ろ液を減圧 濃縮して標記化合物 678mgを淡黄固体として得た。
2) Fmo c -G 1 y- (土） — Hh d— OPa c
上記 1) で調製した （土） 一Hh d—OP a c 30 Omg (0. 77mm o 1 ) を塩化メチレン （2ml ) に懸濁し、 Fmo c— G 1 y— OH 274m g (0. 92mmo 1 ) 、 ジメチルァミノピリジン 28. 2mg (0. 23m mo 1 ) s ジシクロへキシノレカルポジイミ ド 19 Omg (0. 92mmo 1 ) を加え、 室温で終夜攪拌した。 反応液に酢酸ェチルを加え、 これを 10%クェン 酸、 飽和炭酸水素ナトリウム水、 飽和食塩水で洗浄した後、 シリカゲル中圧カラ ムクロマトグラフィー （40 g、 CHC 13で溶出） で精製し、 標記化合物 5 63 mgを無色固体として得た。 FAB—MS :mZz 670 [MH] +。
3) Fmo c -G 1 y- (土） —Hh d— OH
上記 2) で調製した Fmo c— G 1 y— （土） 一 Hh d— OP a c 500 mg ( 0. 75 mm o 1 ) を 90 %酢酸 Z水 （37. 5ml ) に溶解し、 亜鉛末 を加え、 室温で 1. 5時間攪拌した。 析出物をろ去し、 ろ液に酢酸ェチルを加え、 10 %タエン酸、 飽和炭酸水素ナトリウム水、 飽和食塩水で洗浄し標記化合物 37 Omgを得た。
4) Fmo c -G 1 y- (土） — Hh d— T r i t y 1 (2-C 1 ) 一樹脂 上記 3) で調製した Fmo c—G 1 y— （土） 一Hh d— OH 16. 5m g (0. 03mmo 1 ) を塩化メチレン （0. 5ml) に溶解し、 2—クロロト リチルク口リ ド一樹脂 （ 100 ~ 200メッシュ、 渡辺化学工業社製） 5 Omg 及ぴジイソプロピノレエチルァミン 17. 4 μ 1 (0. 09mmo 1 ) を加え、 室温で 30分間放置した。 反応液にメタノール （40μ 1) を加えた後、 樹脂を ろ収し、 これを塩化メチレン、 ジメチルホルムアミド、 イソ一プロピルアルコー ル、 メタノール、 ジェチルエーテルで洗浄した後、 減圧乾燥した。
Fmo c—G l y— (土） 一 Hh d— OHの固定化量の算出：上記 4) で調 製した樹脂 10 m gに 50 %ピペリジン Z塩化メチレン溶液 (lml) を加え、 室温で 30分間穏ゃカ ^攪拌した。 反応液をろ過し、 ろ液と樹脂の洗浄液 （塩化 メチレン） を合わせて減圧濃縮した。 残さを塩化メチレン （20ml) に溶解し、 さらにこれを塩化メチレンで 25倍希釈した。 この溶液の A 267及び A301 の吸光度を測定しそれぞれ 0. 167及び 0. 079の値を得た。 換算式より、 それぞれ 0. 48 mm o 1 / g樹脂及び 0. 51 mm o 1 / g樹脂の固定化量で めった。
5) Fmo c -L-A 1 a -L-O r n (Bo c) — 3— A 1 a— L— S e r ( t -B u) -L-S e r (t— Bu) — D— A s n— D—a 1 1 o— Th r—
G 1 y— （土） — Hh d— T r t y 1 (2— C I) 一樹月旨
上記 4) で調製した樹月旨 50mg、 Fmo c— D— a 1 1 o— Th r— OH、 Fmo c— D— A s n— OH、 Fmo c -L-S e r ( t -B u) 一 OH：、 Fm o c— L— S e r (t— Bu) — OH、 Fm o c— ]3— A 1 a— OH、 Fmo c — L— Or n (B o c) —OH、 および Fmo c— L— A 1 a— OH (各 Fmo c一アミノ酸は Fmo c— G 1 y— （土） 一 H h d— OHの固定化量の 10倍 量を使用。 ） を用い、 ペプチド自動合成機 PSSM— 8 (島津製作所） を用いて、 P y BOP-HOB t法による通常の自動合成プロトコ一^^に従って合成した。 合成プロトコール終了を確認後、 樹脂をイソプロピルアルコール及びメタノール で洗浄し、 減圧乾燥した。
6) H-L-A 1 a -L-O r n (B o c) - β -A 1 a -L-S e r (t— B u) 一 L一 S e r ( t -B u) —D— A s n_D— a 1 1 o— Th r— G l y—
(土） 一 Hh d— OH
上記 5) で得られた樹脂を酢酸一トリフルォロエタノール一塩化メチレン (1 : 1 : 8) の混合液 0. 8m lに懸濁し、 室温で 1時間放置した。 樹脂をろ 去し、 ろ液をアルゴン気流下濃縮した後、 ジェチルエーテルを加えた。 析出した 結晶を遠心 （1 0000 r pm、 5分間） で回収し、 標記化合物 1 9. 5mg を得た。 FAB— MS i inZz 14 2 9 [MH] +。
7) C y c 1 o (-L-A l a— L— O r n (B o c) - β— A 1 a— L— S e r ( t -B u) 一 L— S e r (t— B u) — D— A s n— D— a 1 1 o—Th r 一 G 1 y— （土） 一 Hh d— )
上記 6) で得られた H— L— A l a— L— O r n (B o c) - ^ -A 1 a -L — S e r ( t -B u) —L一 S e r ( t— B u) — D— A s n—D— a 1 1 o— Th r— G l y— （土） 一Hh d— OH 1 5mg (1 0. 5 ^mo 1 ) のジ メチルスルホキシド溶液 （5. 2 5m l ) を HATU 27. 9mg (7 3. 5 μ mo 1 ) 及びジイソプロピルェチルァミン 1 2. 8 μ 1 (73. 5 μτηο 1 ) のジメチルスルホキシド溶液 (5. 2 5m l ) に 5時間かけて加え、 さらに、 室温で 2時間攪拌した後、 そのまま凍結乾燥した。 FAB-MS ： /z 14 1 1 [MH] +、 1 43 3 [MN a] +。
8) C y c l o (— L— A 1 a— L— O r n— ]3— A 1 a— L— S e r— L— S e r一 D— A s n— D— a l l o— Th r— G l y— （土） 一Hh d—）
上記 7) で得られた C y c 1 o (—L—A 1 a— L一 O r n (B o c) 一 β— A l a— L一 S e r ( t -B u) — L一 S e r ( t -B u) 一 D—A s n— D— a 1 1 o-Th r -G 1 y - (土） 一Hh d—) を含む残さにトリフルォロ酢 酸一ァニソ一ノレ一エタンジチォーノレ (94 : 5 : 1) の混合液 (1m l ) を加え、 室温で 2時間放置した。 反応液をアルゴン気流下濃縮し、 ェチルエーテルを加え た。 析出した結晶を遠心 （1 0000 r pm、 5分間） で回収し、 これをジメチ ルスルホキシドに再溶解して凍結乾燥して標記ィヒ合物を得た。 FAB— MS： m /z 9 5 7 [MH] +.
元素分析：理論値 (C4 3 H7 6 Nx 0 Οχ 4 · 2H2 Oとして） C： 5 2. 0 0%、 H： 8. 1 2 %s N : 1 4. 1 3%、 分析値 C : 5 1. 96%、 H : 8. 1 5%, N : 1 4. 1 0 %。
実施例 2 ： C y c l o (— L—A l a— L— O r n— L一 A l a— L— S e r -L-S e r一 D— As n— D—a l l o—Th r— G l y— (土） 一 Hh d 一） （化合物 2) の合成
実施例 1の 5) から 8) と同様の方法、 ただし 5) において、 Fmo c— 一 A 1 a— OHのかわりに Fmo c— L一 Al a— OHを用いることにより標記化 合物を得た。 FAB— MS : m/z 957 [MH] 十。
実施例 3 ： Cy c l o (— L一 Al a— L— Or n— L— As n— L_S e r -L-S e r—D— A s n— D— a l l o— Th r— G l y— (土） 一 Hh d 一） （化合物 3) の合成
実施例 1の 5) から 8) と同様の方法、 ただし 5) において、 Fmo c— 一 Al a—OHのかわりに Fmo c— L—A s n— OHを用いることにより標記化 合物 4. 8mgを得た。 FAB—MS : m/z 1000 [MH] 十。
実施例 4 ： C y c 1 o (—L—A 1 a一 L一 O r n— L一 A s p— L一 S e r -L-S e r—D— A s n— D— a l l o— Th r— G l y— （土） 一 Hh d 一） （化合物 4) の合成
実施例 1の 5) から 8) と同様の方法、 ただし 5) において、 Fmo c— ]3—
A 1 a— OHのかわりに Fmo c— L— As p—OHを用いることにより標記化 合物を得た。 FAB— MS ： m/z 1001 [MH] +。
実施例 5 ： Cy c l o (— L—Al a_L— Or n— L— G l u— L—S e r -L-S e r _D— As n— D—a l l o— Th r— G l y— （土） 一 Hhd ―) (化合物 5) の合成
実施例 1の 5) から 8) と同様の、 方法ただし 5) において、 Fmo c— 一 A 1 a—OHのかわりに Fmo c— L一 G 1 u— OHを用いることにより標記化 合物を得た。 FAB— MS ： m/z 1015 [MH] 十。
実施例 6 ： Cy c 1 o (-L-A 1 a— L— Or n— G l y— L— S e r— L —S e r— D— As n— D—a l l o— Th r— G l y— （士） —Hhd—)
(化合物 6) の合成
実施例 1の 5) から 8) と同様の方法、 ただし 5) において、 Fmo c— ]3— A 1 a— OHのかわりに Fmo c_G 1 y— OHを用いることにより標記化合物 を得た。 FAB— MS ： m/z 943 [MH] +。 実施例 7 ： C y c 1 o (-L-A 1 a— L一 Or n— L— S e r— L— S e r -L-S e r一 D— As n— D— a l l o— Th r— G l y— （土） 一 Hh d 一） （化合物 7) の合成
実施例 1の 5) から 8) と同様の方法、 ただし 5) において、 Fmo c— j3— A 1 a—OHのかわりに Fmo c— L— S e r (t— Bu) — OHを用いること により標記化合物を得た。 FAB—MS .'mZz 973 [MH] +。
実施例 8 ：抗真菌活性の確認
液体培地希釈法により、 実施例 1、 3〜 7で合成された各化合物の抗真菌活性 を澳 J定した。
段階希釈された上記の化合物を含有する培地にカンジダ ·アルビカンス
(Candida albicans TIMM0136) 、 タリプトコッカス 'ネオホノレマンス
(Cryptococcus neoforraans TIMM0354) 、 ァスぺノレギルス ■ フミガタス
(Aspergillus fumigatus TIMM1776) をそれぞれ接種し、 30°C、 2日間培養を 行った。 各真菌の増殖をほぼ完全に阻止した濃度を最小生育阻害濃度 （MI C、 g /m 1 ) として求めた。 測定培地は、 力ンジダ ·アルビ力ンス及ぴクリプト コッカス 'ネオホルマンスではィーストナイ トロジェンベース （ディフコ社製） 0. 67%、 グルコース 1. 0%を含有する培地 （YNBG培地） を用い、 ァス ペルギルス - フミガタスではブレインノヽ一トインフュージョンブイヨン （日水製 薬社製） 0. 5%を含有する培地 （BHI培地） を用いた。 測定の結果を表 3に 示す。
表 3に示すように、 化合物 1、 3、 4S 5、 6、 及ぴ 7はカンジダ■アルビ力 ンス （C. a. ) 、 クリプトコッカス 'ネオホルマンス （C. n. ) 、 及びァス ペルギルス 'フミガタス （A. f . ) に対し高い抗真菌活性を示すことが明らか となった。 表 3
Figure imgf000021_0001
化合物 C. a. A. C. n.
6 25 1. 56 . 5
3 6 25 1. 56 . 12
4 6 25 . 25
5 3 12 0. 39 . 25
6 2 5 . 12
7 6 25 0. 78 . 12 実施例 9 ：化合物 1 AA7 (D-a 1 1 o-Th r) の L— Th r、 D-Th r置換アナログ： Cy c 1 o (— L— Al a -L-O r n-j3 -A 1 a—L—S e r— L— S e r -D-A s n— AA7 -G 1 y- (土） 一Hh d—） の合成 及ぴそれらの抗真菌活性の比較
1) AA7 ： L一 Th r置換アナログの合成
実施例 1の 5) から 8) と同様の方法、 ただし 5) において、 Fmo c— D— a 1 1 o-Th r一 OHのかわりに Fmo c—L— Th r (t Bu) 一 OHを用 いることにより、 化合物 1 AA7が L一 Th rに置換された化合物 （AA7 ： L — Th r置換アナログ） を得た。 FAB— MS mZz 957 [MH] +。
2) AA7 ： D— Th r置換アナログの合成
実施例 1の 5) から 8) と同様の方法、 ただし 5) において、 Fmo c— D— a 1 1 o-Th r—OHのかわりに Fmo c -D-Th r ( t— B u) —OHを 用いることにより、 化合物 1 AA7が D— Th rに置換された化合物 （AA7 ： D— Th r置換アナログ） を得た。 FAB— MS : mZz 957 [MH] 十。
3) 抗真菌活性の比較
AA7 ： L—Th r置換アナログおよび AA7 ： D— T h r置換アナログの力 ンジダ ·アルビカンス、 クリプトコッカス ■ネオホルマンス、 ァスペルギノレス · フミガタスに対する抗真菌活性を、 実施例 8に記載の方法により測定した。 A A 7 が置換されていない D— a 1 1 o— Th r体は表 3に示すように、 力ンジダ · ァノレビカンス、 クリプトコッカス ·ネオホルマンス、 ァスペルギルス · フミガタ スに対してそれぞれ M I C 6. 2 5 μ g/m 1、 1 2. 5 μ g/m 1 N 1. 5 6 μ g/m lの濃度で抗真菌活性を示したが、 A A 7 ： L— T h r置換アナ口グ および AA7 ： D-Th r置換アナログはいずれの菌に対しても活性を示さなか つた （MI C〉 200 μ gZm 1 ) 。
実施例 1 0 ： AA4置換アナログ混合物： C y c 1 o (—L— A 1 a— L— O r n-jS-A 1 a -AA4 一 L一 S e r— D— A s n— D— a 1 1 o— Th r— G 1 y- (土） 一Hh d_) の調製
化合物1の 4の位置に —八 1 &、 L— A r g、 L一 A s n、 L一 A s p、 L_Cy s、 L一 G l n、 L一 G l u、 L— G l y、 L— H i s、 L— I l e、
L— L e u L— L y s L一 Me t、 L— P h e、 L— P r o、 ： L— S e r、 L_Th r、 L— T r p、 L一 T y r、 および L一 V a 1のいずれかを有する 2 0種類の標記環状ぺプチドの混合物を調製した。
実施例 1の 5) から 8) と同様の方法、 ただし 5) において、 AA4のァミノ 酸の導入のために使用する Fmo c _L— S e r ( t— B u) —OHのかわりに、 その 1/20量 （モル数） の Fmo c— L— A 1 a— OH、 Fmo c— L— Ar g (Pmc) 一 OH、 Fmo c— L— A s n (T r t) — OH：、 Fmo c— L— A s (O t -B u) — OH、 Fmo c— L— Cy s (T r t) 一 OH、 Fmo c— L— G i n (T r t) — OH、 Fmo c -L-G 1 u (O t -B u) 一 OH、 Fmo c— L— G l y— OH、 Fmo c _L— H i s (T r t) — OH、 Fmo c— L— I 1 e— OH、 Fmo c— L— L e u一 OH、 Fmo c— L— L y s (B o c) —OH、 Fmo c— L_Me t— OH、 Fm o c— L一 P h e— OH、 Fmo c— L— P r o—OH、 Fmo c— L— S e r ( t -B u) 一 OH、 Fm o c -L-Th r ( t -B u) 一 OH、 Fm o c— L— T r p— OH、 Fmo c -L-Ty r ( t— B u) — OH、 および Fmo c _ L— V a 1— OHの混合物 を用いて合成プロトコールを実施した。 最終的に得られた残さの FAB— MSス ぺクトルを測定し、 20種類の標記環状ぺプチドを含むことを確認した。
実施例 1 1 ： AA5 のァミノ酸置換アナ口グ混合物： Cy c l o (—L— A 1 a -L-O r n- j3 -A 1 a— L一 S e r -AA5 一 D— A s n— D— a 1 1 o -T h r -G 1 y- (土） 一 Hh d—） の調製
化合物 1の AA4 の位置に L一 A l a、 L— Ar g、 L—A s n、 L-A s p L— Cy s、 L一 G l n、 L一 G 1 u、 L一 G l y、 L一 H i s、 L一 I l e、 L— L e us L一 L y s、 L一 Me t；、 L一 P h e、 L一 P r o、 L— S e r、 L一 Th r、 L一 T r p、 L— T y r、 および L— V a 1のいずれかを有する 2
0種類の標記環状ぺプチドの混合物を調製した。
実施例 1の 5) から 8) と同様の方法、 ただし 5) において、 AA5 のァミノ 酸の導入のために使用する Fmo c— L— S e r ( t -B u) 一 OHのかわりに、 その 1/20量 （モル数） の Fmo c— L— A l a— OH、 Fmo c -L-A r g (Pmc) — OH、 Fmo c -L-A s n (T r t) — OH、 Fmo c— L—
A s (O t -B u) 一 OH、 Fmo c— L一 Cy s (T r t) —OH、 Fmo c -L-G 1 n (T r t) — OH、 Fmo c -L-G 1 u (O t -B u) —OH、 Fmo c— L— G l y— OH、 Fmo c一 L—H i s (T r t) -OHN Fmo c一 L一 l i e— OH、 Fmo c— L— L e u— OHs Fmo c— L— L y s (B o c) —OH、 Fmo c— L— Me t— OH、 Fm o c— L一 P h e— OH、
Fmo c— L— P r o— OH、 Fmo c— L— S e r ( t— B u) — OH、 Fm o c -L-Th r ( t ~B u) 一 OH、 Fm o c— L— T r p— OH、 Fmo c -L-Ty r ( t -B u) 一 OH、 および Fmo c— L— V a 1—OHの混合物 を用いて合成プロトコールを実施した。 最終的に得られた残さの FAB— MSス ぺクトルを測定し、 20種類の標記環状ぺプチドを含むことを確認した。
実施例 1 2 ： AA6 のァミノ酸置換アナ口グ混合物： C y c 1 o (― L— A 1 a— L一 O r η~ β -A l a—L— S e r—L—S e r -AA6 _D— a 1 1 o — Th r—G l y— （土） 一 Hh d—） の調製
化合物 1の AA6 の位置に D— A l a、 D— A s n、 D— A s p、 D— G 1 u、 D— H i s、 D— I l e、 D— L e u、 D— P h e、 D— S e r、 D— Th r、
D-T r ps D— Ty r、 および D— V a 1のいずれかを有する 1 3種類の標記 環状ぺプチドの混合物を合成した。
実施例 1の 5) から 8) と同様の方法、 ただし 5) において、 AA6 のァミノ 酸の導入のために使用する Fmo c—D— A s n (T r t) — OHのかわりに、 その 1/1 3量 （モノレ数） の Fmo c -D-A l a—OH、 Fmo c— D—A s n (T r t) 一 OH、 Fmo c— D— A s p (O t— B u) — OH、 Fmo c— D— G l u (O t— B u) — OH、 Fmo c— D— H i s (T r t) 一〇H、 F mo c -D— I 1 e -OH, Fmo c— D— L e u—OH：、 Fmo c _D— P h e—OH、 Fmo c— D—S e r ( t -B u) 一 OH、 Fmo c— D— Th r
(t一 B u) -OH, Fmo c—D_T r p—OH、 Fmo c—D— T y r ( t — B u) —OH、 および Fmo c— D— Va 1 —OHの混合物を用いて合成プロ トコールを実施した。 最終的に得られた残さの FAB—MSスぺクトルを測定し、
1 3種類の標記環状ぺプチドを含むことを確認した。
実施例 1 3 ： AA4 、 AA5および AA6 のアミノ酸置換アナログ混合物の抗 真菌活性測定
実施例 1 0、 1 1および 1 2で得た AA4 、 AA5および AA6の各位置での ァミノ酸置換アナログの各混合物の力ンジダ■ァノレビカンス、 タリプトコッカ ス ·ネオホノレマンス、 ァスペルギルス · フミガタスに対する抗真菌活性を、 実施 例 8に記載の方法により調べた。 AA4 のアミノ酸置換アナログ混合物はクリプ トコッカス ·ネオホルマンス、 ァスペルギルス ■ フミガタスに対してそれぞれ M I C 1 00 μ g /m 1、 50 μ g / 1の濃度で活性を示し、 AA5 のァミノ 酸置換アナログ混合物は、 力ンジダ ·アルビ力ンス、 クリプトコッ.カス ·ネオホ ルマンス、 ァスペルギルス · フミガタスに対してそれぞれ M I C 2 5 g/m 1、 50 μ g/m 1 2 5 μ gZm 1の濃度で、 AA6 のアミノ酸置換アナログ 混合物は同様に、 M I C 50 μ g /m 1、 5 0 μ g /m 1、 2 5 g /m 1の 濃度で抗真菌活性を示した。

Claims

請 求 の 範 囲
1. 下記一般式 （1) ：
(CH2) ra-CH (R1)― (CH2) n-C0→AA1→AA2→AA3→AA4→AA5→AA6→AA7→M8
I I
x c=o
[式中、
mおよび nは同一または異なって 0または 1であり、
Xは Oまたは NHであり、
R1 は水素、 炭素数 6〜 21のアルキル、 置換アルキル、 アルケニル、 置換アル ケニル、 ァシルァミノ、 アリ^"ル、 置換ァリール、 複素環もしくは置換複素環で あり、
(ただし、 前記置換アルキル、 置換アルケニル、 置換ァリール、 もしくは置換複 素環は、 水酸基、 炭素数 1〜 8のアルキル、 炭素数 1〜8のアルコキシ、 炭素数 2〜 8のァルケニル、 炭素数 2〜8のァシル、 炭素数 2〜 8のァシルォキシ、 炭 素数 6〜14のァリール、 炭素数 6〜14のァリールォキシ、 もしくは炭素数 1 〜 8の複素環の少なくとも一つで置換されたものである） 、
AA1 〜AA6 はひ一または jS—アミノ酸であり、
AA7 は側鎖に HO—を有する D型の α—アミノ酸であり、
ΑΑ8 はひ一または ]3—アミノ酸である]
で表わされる環状ペプチドまたはその薬理学的に許容される塩。
2. 上記一般式 （1) において、
ΑΑ1 は疎水性の α—または ]3—アミノ酸であり、
A Α2 は側鎖にァミノ基を有する α—または /3—ァミノ酸であり、
ΑΑ3 は —ァラニン、 グリシン、 または側鎖に ΗΟ—、 HOOC—、 H2 NO
C一を有する α一もしくは —アミノ酸であり、
ΑΑ4 は側鎖に ΗΟ—を有する α—または 一アミノ酸であり、
ΑΑ5 は側鎖に ΗΟ—を有する α—または —アミノ酸であり、
AA6 は側鎖に H2 NOC—を有する 一または J3—アミノ酸であり、 A A 7 は側鎖に HO—を有する D型の α—アミノ酸であり、
ΑΑ8 はグリシン、 または側鎖に ΗΟ—を有する α—もしくは] 3—アミノ酸であ る、 請求項 1記載の環状べプチドまたはその薬理学的に許容される塩。
3. 上記一般式 （1) において
ΑΑ1 はァラニン、 バリン、 ロイシンであり、
ΑΑ2 はリジン、 オル二チンであり、
ΑΑ3 は /3—ァラニン、 グリシン、 または側鎖に ΗΟ—、 HOOC—、 H2 NO
C—を有するひ一もしくは j3—アミノ酸であり、
AA4は側鎖に HO—を有する アミノ酸であり、
AA5 は側鎖に HO—を有する α—アミノ酸であり、
AA6 はァスパラギン、 グルタミンであり、
A A 7 は側鎖に HO—を有する D型の α—ァミノ酸であり、
ΑΑ8 はグリシン、 または側鎖に ΗΟ—を有するひ一アミノ酸である、 請求項 1 記載の環状ぺプチドまたはその薬理学的に許容される塩。
4. 請求項 1記載の環状べプチドまたはその薬理学的に許容される塩を含有す る抗真菌医薬組成物。
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