WO2002071043A1 - Verfahren zur untersuchung chemischer und/oder biologischer proben - Google Patents

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Stefan Hummel
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    • G02B21/0076—Optical details of the image generation arrangements using fluorescence or luminescence

Definitions

  • the invention relates to a method for examining chemical and / or biological samples, in particular in high and medium throughput screening.
  • the invention further relates to a microscope for carrying out the method, as is used in particular in fluorescence spectroscopy.
  • the processes taking place in an observation volume are optically recorded with microscopes.
  • Known confocal microscopes have an illumination unit, such as a laser, for generating an observation beam, in particular an excitation light.
  • the excitation light strikes a dichroic mirror, which reflects the light in the direction of the observation volume.
  • the light then passes through a lens system, in particular a microscope objective, from which the excitation light is focused in the observation volume.
  • the excitation light for example fluorescence
  • the resulting fluorescent light passes through the microscope objective and through the dichroic mirror to a detector unit.
  • the detector unit can be an aperture diaphragm upstream, in which the fluorescent light is focused, so that a confocal microscope is formed.
  • Another possibility is to move the excitation light beam.
  • To move the light beam it is known to provide one or more mirrors in the beam path of the microscope that can be tilted back and forth via a suitable drive mechanism. By providing two mirrors, it is possible to move the light beam within one plane of the observation volume.
  • Such arrangements have the disadvantage that the tilting movement of the mirror has a dead center, so that the movement of the light beam is braked and accelerated. This leads to an uneven excitation of the ensemble within the sample and thus to a falsification of the measurement results. This is due in particular to the fact that the fluorescence molecule is longer at the dead center is irradiated and thus can emit more photons or the molecule is bleached more.
  • microscopes with tiltable mirrors have the disadvantage that the light beam passes through the objective at different angles to the optical axis of the microscope objective. This results in an optical error that changes depending on the inclination of the tilt angle, which in turn has a negative influence on the measurement results. Furthermore, the focus of an obliquely guided light beam through the microscope objective becomes oval. The shape of the focus also changes depending on the position of the tilting mirror. This also leads to a falsification of the measurement results.
  • the object of the invention is to provide a method for examining chemical and / or biological samples, in particular for high and medium throughput screening, with which it is possible to move the focus through the observation volume while improving the measurement results. Furthermore, it is an object of the invention to provide an apparatus for performing the method.
  • the movement of the observation beam is essentially continuous.
  • the movement of the The observation beam, or the excitation light thus takes place in the observation volume of the sample without a reversal of direction, which leads to considerable braking and acceleration of the movement of the light beam.
  • This homogenization of the movement of the light beam in the observation volume results in a considerable homogenization of the excitation when examining samples which are to be excited to fluorescence. This prevents, for example, the destruction of fluorescent markers by increased excitation.
  • the quality of the measurement results can be considerably improved by moving the observation beam uniformly through the observation volume.
  • Another advantage of the method according to the invention is that with constant or even movement of the observation beam through the sample, fluctuation times of individual particles, such as molecules (FIMDA measurements), can be carried out better. This is because the speed of movement of the observation beam must be taken into account when determining the fluctuation times. A constant or approximately constant speed of the motion beam is considerably easier to take into account here. Furthermore, the observation times for each particle are evened out. This means that, for example, the same amount of information is recorded from each particle. This significantly improves the statistical quality of the data.
  • FIMDA measurements fluctuation times of individual particles, such as molecules
  • the observation beam can be a beam generated by an illumination device, such as a laser, which is moved evenly in the sample by the method according to the invention. This is, for example, excitation light.
  • the observation beam can also be the beam path of the observation. The beam path runs in the opposite direction.
  • that observed by a detector Area in the sample is moving.
  • the fluorescence of a sample, ie radiation emitted by the sample is observed.
  • the movement of the observation beam is preferably unidirectional. Reversing the direction of movement is thus avoided. As a result, large fluctuations within the illumination volume of the amount of photons generated or observed, i.e. Fluctuations in different lighting or observation locations are avoided.
  • the quantity of photons is understood to mean the number of photons generated or emitted per location. The amount of photons is therefore the intensity integrated over time. With a constant speed of movement of the observation beam in the sample, the dwell time of the beam at each location of the sample is constant or fluctuates within considerably lower limits than in known methods. This can significantly improve the quality of the measurement results.
  • the illumination beam is preferably moved on a self-contained path, preferably an elliptical path, and particularly preferably an essentially circular path.
  • a deflection mirror which can be rotated about an axis of rotation.
  • the axis of rotation includes an angle ⁇ 90 ° with the surface of the deflection mirror.
  • the resulting wobble movement of the deflection mirror moves the observation beam along an elliptical path in the observation volume.
  • different dwell times at individual illumination locations within the observation volume are considerably reduced compared to a back and forth movement of the observation beam.
  • the speed of movement of the observation beam in the observation volume is not constant. In the area of the apex of the ellipse in particular, the observation beam has a slower speed.
  • the rotational speed is set in such a way that the observation beam in the observation volume has a speed which fluctuates at most within narrow limits.
  • the speed is preferably substantially constant.
  • the observation beam or excitation beam in order to equalize the illumination intensity acting on different illumination locations in the sample, which is particularly dependent on the dwell time, i.e. the speed of movement, the observation beam or excitation beam varies, thereby causing the intensity of the observation beam to be controlled as a function of the movement speed.
  • the quantity of photons generated by the observation beam is evened out by speed-dependent control of the illumination intensity.
  • the intensity of the observation beam is thus reduced when the observation beam moves relatively slowly in the observation volume. This also enables the measurement results to be made more uniform. In particular in the case of measurements based on fluorescence, this can achieve that the individual particles are excited uniformly. This avoids falsifying the measurement results due to uneven excitation or destroying the fluorescent markers.
  • the control of the intensity of the observation beam which can be done, for example, by time-dependent modulation of a laser, is an independent invention that is independent of the continuous one Movement of the observation beam is.
  • the illumination intensity can be made more uniform by appropriately controlling the intensity of the illumination beam.
  • a combination of the speed variation and the variation of the illumination intensity for the purpose of homogenization is particularly preferred. This has the advantage that the speed of the rotating deflecting mirror, for example, only has to be varied slightly, so that the moments of inertia that occur do not become too high. Varying the intensity of the illumination beam is also much easier to implement with minor adjustments than with large fluctuations.
  • the lighting intensity can also be adjusted, for example, using filters that can be adapted to the shape of the web.
  • the microscope has a deflection mirror which deflects an observation beam, such as an excitation light, generated by an illumination unit. This moves the focus in the observation volume. Instead of a tilting movement, the deflection mirror performs a wobble movement according to the invention. As a result of the wobble movement, the focus is moved along a closed path in the observation volume. The movement is therefore continuous. A complete braking and subsequent acceleration of the light beam, as occurs in tilting mirrors, is not the case with a mirror that performs wobbling movements. Furthermore, the design of the microscope according to the invention can be realized at a considerably lower cost than the provision of tilting mirrors or so-called galvo scanners, which have complex drive and control electronics.
  • a microscope according to the invention for performing the method can only be used to observe the sample. With such a microscope, no beam generated by an illumination unit would be set in a wobble motion.
  • the wobble mirror or another suitable device serves to move the point in the sample observed by an observation detector.
  • the wobble movement can be caused, for example, by a three-point mount on the back of the mirror.
  • the mirror can be made to wobble by moving the individual images.
  • the mirror is rotated about an axis of rotation.
  • the deflection mirror encloses an angle not equal to 90 ° with the axis of rotation.
  • the rotation of the mirror alone results in a wobble movement and, as a result, a corresponding movement of the light beam in the observation volume.
  • the angle of the deflection mirror with respect to the axis of rotation is in the range from 90.1 ° to 95 °, preferably 90.1 ° to 92 °, particularly preferably 90 , 1 ° - 91 °.
  • a circular movement can preferably be brought about in a mirror performing a wobble movement in that the beam path is parallel to the axis of rotation.
  • the deflection mirror is preferably moved such that the focus in the observation volume is moved on a closed path.
  • the wobble movement depending on the surface of the mirror and the point of reflection of the light beam on the mirror relative to the center of the wobble movement must be taken into account.
  • good measurement results can be achieved in that the excitation light strikes the mirror essentially in the center of rotation of the deflection mirror.
  • Such an arrangement has the advantage that the light beam always passes the measurement lens at the same distance from the center axis of the measurement lens.
  • the deterioration of the focus compared to a light beam passing through the lens in the lens axis is therefore essentially constant and can therefore be compensated for in a targeted manner, for example by an adjusted adjustment. Since there is no change in the focus depending on the position of the mirror or the position of the focus in the sample, the measurement results that can be achieved are considerably improved.
  • the angle of the mirror with respect to the axis of rotation or with respect to the light beam striking the deflection mirror is preferably adjustable.
  • an adjustment unit for the automatic adjustment of the angle of the deflection mirror is provided for this purpose.
  • This has the advantage that, for example, the angle of the deflection mirror and thus the path of the focus in the sample can also be changed during the examination of a sample.
  • the radius of the Circular movement of the focus or the main axes of the ellipse in which the sample is changed In this way it is possible to completely scan the sample in one plane.
  • Another way of completely scanning a sample in one plane is to keep the angle of the deflection mirror constant during the examination so that the focus moves on a constant path.
  • the table from which the sample to be examined is held is also moved.
  • the movement of the table can be one-dimensional or two-dimensional. Furthermore, it is possible to combine the above two methods for scanning a sample, in particular in one plane, if the confocal principle is used.
  • the existing dichroic mirror serving as a beam splitter in such a way that it serves as a deflection mirror and can be set into a suitable wobble movement.
  • the dichroic mirror is preferably mounted in a link guide. The rotation takes place from the outside so that the beam path is not impaired. Since such a movement of the beam splitter also leads to a corresponding movement of the image imaged on the detector, a surface sensor, for example a large-area photodiode, is preferably used as the detector in this embodiment. With the aid of a large-area photodetector, the detector surface can be read out in an integrated manner with a non-confocal microscope, since the light incident on the detector generates the same signal regardless of the location at which it hits the detector.
  • the microscope described above is in particular a confocal microscope.
  • the Measurement results can be significantly improved by using the deflection mirror according to the invention.
  • the deflection unit has a deflection mirror connected to a drive unit, which can be set in a wobble movement by the drive unit.
  • the deflection unit is an additional component that can be connected with a conventional microscope.
  • the deflection unit preferably has a housing carrying the drive unit and / or the deflection mirror.
  • the housing has a connection element for connecting to a lens mount of a microscope and a mounting element for mounting a microscope lens. It is thus possible, for example, to remove the microscope objective in a conventional microscope, instead to insert the deflection unit into the objective holder and to fasten the previously removed microscope objective to the receiving element of the housing.
  • a conventional microscope can easily be converted by the deflection unit to a microscope according to the invention with a mirror that performs a wobble movement.
  • the deflection mirror provided in the deflection unit according to the invention can have the preferred developments described above.
  • the deflection unit described above is particularly suitable for use with a confocal microscope.
  • Show it : 1 shows a schematic view of a confocal microscope with a deflection mirror which can be rotated according to the invention
  • Fig. 2 is a schematic, partially sectioned side view of a deflection unit according to the invention.
  • Fig. 3 is a view of the microscope objective shown in Fig. 2 from above in the direction of arrow III shown in Fig. 2.
  • the confocal microscope shown schematically in FIG. 1 has an illumination device 10 in the form of a laser.
  • the excitation light 12 generated by the laser is directed onto a beam splitter 16 by a lens arrangement 14.
  • the excitation light is directed in the direction of a deflecting mirror 18 by the beam splitter 16. It is reflected by the latter in the direction of a deflection mirror 20, which reflects the excitation light in the direction of a microscope objective 22.
  • the excitation light 12 is focused into an observation volume 24 by the microscope objective 22.
  • the observation volume 24 is a depression in a titer plate 26, the openings 28 of which are closed by a glass bottom 30.
  • the light emitted by the sample provided in the depression 28 is passed through the microscope objective in the opposite direction and reflected by the deflection mirror 20 and deflection mirror 18 in the direction of the beam splitter 16.
  • the light coming from the observation volume 24 is deflected by the beam splitter 16 in the direction of a tube lens 32.
  • the tube lens 32 focuses the light in an opening 34 of an aperture diaphragm 36.
  • the light then arrives at a detector unit 38.
  • the deflection mirror 18 is arranged in the exemplary embodiment shown at an angle of 45 ° to the excitation light 12. This creates a deflection of the excitation light 12 from the usual beam path.
  • the usual arrangement of the confocal microscope is maintained, in which a sample is illuminated from below.
  • the deflection mirror 20 executes a wobble movement in which it can be rotated about an axis of rotation 40 in the direction of an arrow 42.
  • the mirror 20 forms an angle ⁇ with the axis of rotation which is not equal to 90 °.
  • the angle ⁇ is the larger of the two angles between the axis of rotation 40 and the mirror 20.
  • the rotation of the mirror 20 changes the angle of incidence between the excitation light 12 coming from the deflection mirror 18 depending on the rotational position of the deflection mirror 20. In the in 1, this results in a movement of a focus 44 in the observation volume 24 in the linear direction in the direction of the arrow 46.
  • the focus 44 moves on a closed path, which is an ellipse.
  • the excitation light essentially hits the deflection mirror 20 in the center of rotation 48, the circular movement is concentric to the beam axis.
  • deflection unit is an attachment for a conventional confocal microscope.
  • the deflection unit comprises a housing 50.
  • the housing 50 has a connection element 52. This is, for example, a clamping device.
  • the deflection unit can be connected to a conventional lens mount via a suitable adapter.
  • the connection element is connected to the confocal microscope in such a way that it is connected to the receptacle which is usually used to hold the microscope objective 22.
  • the microscope objective 22 is removed from the corresponding holder unscrewed and the deflection unit with the help of the connecting element 52, if necessary with the aid of an adapter, screwed into the corresponding receptacle of the confocal microscope.
  • a deflection mirror 18 arranged essentially at a 45 ° angle to the excitation light 12 is provided within the housing.
  • the deflecting mirror 18 is a prism in the exemplary embodiment shown.
  • the mirror 20 is arranged in a cavity 56 of the housing 50.
  • the mirror 20 is arranged according to the mirror 20 shown in FIG. 1 at an angle to the axis of rotation 40.
  • a drive unit 58 such as an electric motor, is provided to drive the deflection mirror 20 in a rotational movement.
  • the beam of the excitation light 12 is deflected as shown by the broken lines 60 in the microscope objective 22.
  • the deflection light is thus again moved in the direction of arrow 46.
  • the excitation light is moved on an ellipse 62.

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Abstract

Bei einem Verfahren zur Untersuchung einer chemischen und/oder biologischen Probe, insbesondere in Hoch- und Medium-Durchsatzscreeninganlagen wird ein Beobachtungsstrahl (12) in einem Beobachtungsvolumen (24) der Probe fokussiert. Zur Untersuchung der Probe wird der Beobachtungsstrahl (12) in der Probe bewegt. Zur Verbesserung der Qualität der Messung wird der Beobachtungsstrahl erfindungsgemäss kontinuierlich in dem Beobachtungsvolumen (24) bewegt.

Description

Verfahren zur Untersuchung chemischer und /oder biologischer Proben
Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Untersuchung chemischer und/oder biologischer Proben, insbesondere im Hoch- und Medium-Durchsatzscreening. Ferner betrifft die Erfindung ein Mikroskop zur Durchführung des Verfahrens, wie es insbesondere in der Fluoreszenzspektroskopie eingesetzt wird.
Mit Mikroskopen werden die sich in einem Beobachtungsvolumen abspielenden Prozesse optisch erfasst. Bekannte konfokale Mikroskope weisen eine Beleuchtungseinheit, wie beispielsweise einen Laser, zur Erzeugung eines Beobachtungsstrahls, insbesondere eines Anregungslichts, auf. Das Anregungslicht trifft ggf. nach Konditionierung durch eine Linsenanordnung auf einen dichroitischen Spiegel, der das Licht in Richtung des Beobachtungsvolumens reflektiert. Anschließend gelangt das Licht durch ein Linsensystem, insbesondere ein Mikroskopobjektiv, von dem das Anregungslicht in dem Beobachtungsvolumen fokussiert wird. In dem Beobachtungsvolumen, in dem sich beispielsweise biologische und/oder chemische Proben befinden, wird je nach deren Zusammensetzung durch das Anregungslicht, beispielsweise Fluoreszenz, hervorgerufen. Das hierbei entstehende Fluoreszenzlicht gelangt durch das Mikroskopobjektiv und durch den dichroitischen Spiegel zu einer Detektoreinheit. Der Detektoreinheit kann eine Aperturblende vorgeschaltet sein, in die das Fluoreszenzlicht fokussiert ist, so dass ein konfokales Mikroskop ausgebildet ist.
Bei konfokalen Mikroskopen, die sich in der Praxis grundsätzlich bewährt haben, besteht insbesondere bei großen Molekülen das Problem, dass diese sich aufgrund der Brownschen Molekularbewegung nur langsam bewegen. Es kann daher vorkommen, dass das zu untersuchende Molekül erst nach einem längeren Zeitraum durch den Fokus des Mikroskopobjektivs wandert. Dies kann zu einer Verfälschung der Messergebnisse führen, da die Reaktivität oder die Fluoreszenzemission des Moleküls beispielsweise schon wieder abgenommen hat. Ferner ist es insbesondere beim Hoch- und Medium- Durchsatzscreening, d. h. beim Untersuchen einer Vielzahl von Proben in kurzen Zeitabständen, nachteilig eine Probe relativ lang beobachten zu müssen, um ein Ergebnis zu erzielen.
Um diese Anforderungen zu erfüllen, ist es beispielsweise möglich, die Probe zu bewegen. Dies ist äußerst aufwendig und führt ggf. zu ungewollten Bewegungen oder Reaktionen innerhalb der Probe. Dies kann wiederum zur Verfälschung von Messergebnissen führen.
Eine weitere Möglichkeit besteht darin, den Strahl des Anregungslichts zu bewegen. Zur Bewegung des Lichtstrahls ist es bekannt, im Strahlengang des Mikroskops einen oder mehrere Spiegel vorzusehen, die über einen geeigneten Antriebsmechanismus hin und her kippbar sind. Durch das Vorsehen von zwei Spiegeln ist es möglich, den Lichtstrahl innerhalb einer Ebene des Beobachtungsvolumens zu bewegen. Derartige Anordnungen haben den Nachteil, dass die Kippbewegung des Spiegels einen Totpunkt aufweist, so dass die Bewegung des Lichtstrahls abgebremst und beschleunigt wird. Dies führt zu einer ungleichmäßigen Anregung des Ensembles innerhalb der Probe und somit zu einer Verfälschung der Messergebnisse. Dies beruht insbesondere darauf, dass am Totpunkt das Fluoreszenzmolekül länger bestrahlt wird und somit mehr Photonen abgeben kann oder das Molekül stärker gebleicht wird. Ferner weisen Mikroskope mit kippbaren Spiegeln den Nachteil auf, dass der Lichtstrahl in unterschiedlichen Winkeln zur optischen Achse des Mikroskopobjektivs durch das Objektiv hindurchtritt. Dies hat einen sich in Abhängigkeit der Neigung des Kippwinkels ändernden optischen Fehler zur Folge, der wiederum die Messergebnisse negativ beeinflusst. Ferner wird der Fokus eines schräg durch das Mikroskopobjektiv geleiteten Lichtstrahls oval. Die Form des Fokus ändert sich somit ebenfalls in Abhängigkeit der Lage des Kippspiegels. Dies führt ebenfalls zu einer Verfälschung der Messergebnisse.
Vorstehende Nachteile bestehen sowohl bei konfokalen als auch bei anderen Mikroskopen. Insbesondere beim Hoch- und Medium-Durchsatzscreening müssen die Messdaten in sehr kurzer Zeit erfasst werden. Dies hat zur Folge, dass Fluoreszenzmarker mit relativ hoher Energie angeregt werden müssen. Hierbei führen bereits geringfügige Unregelmäßigkeiten in der Anregung, insbesondere ein zu langes Anregen der Marker, zu Verfälschungen der Messergebnisse sowie ggf. zur Zerstörung der Marker.
Aufgabe der Erfindung ist es, ein Verfahren zur Untersuchung chemischer und/oder biologischer Proben, insbesondere für das Hoch- und Medium- Durchsatzscreening zu schaffen, mit dem ein Bewegen des Fokus durch das Beobachtungsvolumen bei Verbesserung der Messergebnisse möglich ist. Ferner ist es Aufgabe der Erfindung, eine Vorrichtung zur Durchführung des Verfahrens zu schaffen.
Die Lösung der Aufgabe erfolgt erfindungsgemäß durch die Merkmale des Anspruchs 1 bzw. 10.
Bei dem erfindungsgemäßen Verfahren erfolgt die Bewegung des Beobachtungsstrahls im Wesentlichen kontinuierlich. Die Bewegung des Beobachtungsstrahls, bzw. des Anregungslichtes, erfolgt in dem Beobachtungsvolumen der Probe somit ohne eine Richtungsumkehr, die zu einem erheblichen Abbremsen und Beschleunigen der Bewegung des Lichtstrahls führt. Durch diese Vergleichmäßigung der Bewegung des Lichtstrahls in dem Beobachtungsvolumen erfolgt bei der Untersuchung von Proben, die zur Fluoreszenz angeregt werden sollen, eine erhebliche Vergleichmäßigung der Anregung. Hierdurch ist beispielsweise das Zerstören von Fluoreszenzmarkern durch eine erhöhte Anregung verhindert. Durch das gleichförmige Bewegen des Beobachtungsstrahls durch das Beobachtungsvolumen kann die Qualität der Messergebnisse erheblich verbessert werden.
Ein weiterer Vorteil des erfindungsgemäßen Verfahrens besteht darin, dass bei einer konstanten bzw. vergleichmäßigten Bewegung des Beobachtungsstrahls durch die Probe Fluktuationszeiten von einzelnen Partikeln, wie Molekülen (FIMDA-Messungen), besser durchgeführt werden können. Dies ist darin begründet, dass die Bewegungsgeschwindigkeit des Beobachtungsstrahls bei der Bestimmung der Fluktuationszeiten berücksichtigt werden muss. Hierbei ist eine konstante oder annähernd konstante Geschwindigkeit des Bewegungsstrahls erheblich einfacher zu berücksichtigen. Des Weiteren sind die Beobachtungszeiten je Partikel vergleichmäßigt. Dies bedeutet, dass von jedem Partikel beispielsweise die selbe Anzahl an Informationen erfasst wird. Hierdurch ist die statistische Qualität der Daten erheblich verbessert.
Bei dem Beobachtungsstrahl kann es sich erfindungsgemäß um einen von einer Beleuchtungseinrichtung, wie einem Laser, erzeugten Strahl handeln, der durch das erfindungsgemäße Verfahren vergleichmäßigt in der Probe bewegt wird. Hierbei handelt es sich dann beispielsweise um Anregungslicht. Bei dem Beobachtungsstrahl kann es sich jedoch auch um den Strahlengang der Beobachtung handeln. Der Strahlengang verläuft hierbei in umgekehrter Richtung. Hierbei wird beispielsweise der von einem Detektor beobachtete Bereich in der Probe bewegt. Beobachtet wird somit beispielsweise die Fluoreszenz einer Probe, d.h. von der Probe abgegebene Strahlung.
Vorzugsweise erfolgt die Bewegung des Beobachtungsstrahls unidirektional. Ein Umkehren der Bewegungsrichtung ist somit vermieden. Dies hat zur Folge, dass starke Schwankungen innerhalb des Beleuchtungsvolumens der erzeugten oder beobachteten Photonen-Menge, d.h. Schwankungen an unterschiedlichen Beleuchtungs- bzw. Beobachungsorten, vermieden sind. Unter Photonen-Menge wird hierbei die Anzahl der erzeugten bzw. abgegebenen Photonen je Ort verstanden. Bei der Photonen-Menge handelt es sich somit um die über die Zeit integrierte Intensität. Bei einer konstanten Bewegungsgeschwindigkeit des Beobachtungsstrahls in der Probe ist die Verweilzeit des Strahls an jedem Ort der Probe konstant bzw. schwankt in erheblich geringeren Grenzen als bei bekannten Verfahren. Hierdurch kann die Qualität der Messergebnisse erheblich verbessert werden. Vorzugsweise wird der Beleuchtungsstrahl auf einer in sich geschlossenen Bahn, vorzugsweise einer elliptischen Bahn, und besonders bevorzugt einer im Wesentlichen kreisförmigen Bahn, bewegt.
Zur Durchführung der Bewegung des Beobachtungsstrahls in dem Beobachtungsvolumen ist es besonders bevorzugt, einen Auslenkspiegel zu verwenden, der um eine Rotationsachse drehbar ist. Die Rotationsachse schließt hierbei mit der Fläche des Auslenkspiegels einen Winkel ≠ 90° ein. Durch die hierdurch entstehende Taumelbewegung des Auslenkspiegels wird der Beobachtungsstrahl entlang einer elliptischen Bahn in dem Beobachtungsvolumen bewegt. Hierdurch sind unterschiedliche Verweildauern an einzelnen Beleuchtungsorten innerhalb des Beobachtungsvolumens gegenüber einem Hin- und Herbewegen des Beobachtungsstrahls erheblich verringert. Auf Grund der elliptischen Form der Bahn ist die Bewegungsgeschwindigkeit des Beobachtungsstrahls in dem Beobachtungsvolumen jedoch nicht konstant. Insbesondere im Bereich der Scheitel der Ellipse weist der Beobachtungsstrahl eine langsamere Geschwindigkeit auf. Es ist daher erfindungsgemäß besonders bevorzugt, die Verweildauer des Beleuchtungsstrahls dadurch zu vergleichmäßigen, dass die Rotationsgeschwindigkeit des Auslenkspiegels variiert wird. Dies bedeutet, dass die Rotationsgeschwindigkeit so eingestellt wird, dass der Beobachtungsstrahl in dem Beobachtungsvolumen eine allenfalls innerhalb enger Grenzen schwankende Geschwindigkeit aufweist. Vorzugsweise ist die Geschwindigkeit im Wesentlichen konstant.
Bei einer weiteren bevorzugten Ausführungsform wird zur Vergleichmäßigung der auf unterschiedliche Beleuchtungsorte in der Probe wirkende Beleuchtungsintensität, die insbesondere in Abhängigkeit der Verweilzeit, d.h. der Bewegungsgeschwindigkeit, des Beobachtungsstrahls bzw. Anregungsstrahls variiert, dadurch bewirkt, dass die Intensität des Beobachtungsstrahls in Abhängigkeit der Bewegungsgeschwindigkeit gesteuert wird. Die durch den Beobachtungsstrahl erzeugte Photonen-Menge wird durch ein geschwindigkeitsabhängiges Steuern der Beleuchtungsintensität vergleichmäßigt. Erfindungsgemäß wird die Intensität des Beobachtungsstrahls somit verringert, wenn sich der Beobachtungsstrahl relativ langsam in dem Beobachtungsvolumen bewegt. Hierdurch kann ebenfalls eine Vergleichmäßigung der Messergebnisse erzielt werden. Insbesondere bei auf Fluoreszenz basierenden Messungen kann hiermit erzielt werden, dass die einzelnen Partikel gleichmäßig angeregt werden. Hiermit ist ein Verfälschen der Messergebnisse durch ungleichmäßige Anregung oder ein Zerstören der Fluoreszenzmarker vermieden.
Bei der Steuerung der Intensität des Beobachtungsstrahls, die beispielsweise durch eine zeitabhängige Modulation eines Lasers erfolgen kann, handelt es sich um eine selbständige Erfindung, die unabhängig von der kontinuierlichen Bewegung des Beobachtungsstrahls ist. Beispielsweise kann auch bei einem einfachen Hin- und Herbewegen des Beobachtungsstrahl, beispielsweise durch einen kippenden Spiegel, eine Vergleichmäßigung der Beleuchtungsintensität durch entsprechende Steuerung der Intensität des Beleuchtungsstrahls erzielt werden. Besonders bevorzugt ist jedoch eine Kombination der Geschwindigkeitsvariierung und der Variierung der Beleuchtungsintensität zur Vergleichmäßigung. Dies hat den Vorteil, dass die Geschwindigkeit des beispielsweise rotierenden Ablenkspiegels nur geringfügig variiert werden muss, so dass die auftretenden Trägheitsmomente nicht zu hoch werden. Auch das Variieren der Intensität des Beleuchtungsstrahls ist bei geringen Anpassungen erheblich einfacher realisierbar als bei großen Schwankungen.
Das Anpassen der Beleuchtungsintensität kann beispielsweise auch durch Filter, die an die Bahnform angepasst sein können, erfolgen.
Das Mikroskop weist zur Durchführung des erfindungsgemäßen Verfahrens einen Auslenkspiegel auf, der einen von einer Beleuchtungseinheit erzeugten Beobachtungsstrahl, wie ein Anregungslicht, ablenkt. Hierdurch wird der Fokus in dem Beobachtungsvolumen bewegt. Anstelle einer Kippbewegung führt der Auslenkspiegel erfindungsgemäß eine Taumelbewegung durch. Durch die Taumelbewegung wird der Fokus entlang einer geschlossenen Bahn in dem Beobachtungsvolumen bewegt. Die Bewegung ist somit kontinuierlich. Ein vollständiges Abbremsen und anschließendes Beschleunigen des Lichtstrahls, wie es bei Kippspiegeln auftritt, ist bei einem eine Taumelbewegungen ausführenden Spiegel nicht der Fall. Ferner ist die erfindungsgemäße Ausgestaltung des Mikroskops erheblich preisgünstiger zu realisieren als das Vorsehen von Kippspiegeln bzw. sogenannten Galvo-Scannern, die aufwendige Antriebs- und Steuerelektronik aufweisen. Da eine kontinuierliche Bewegung des Lichtstrahls auf einer Bahn mit der erfindungsgemäßen Vorrichtung realisiert ist und ein starkes Abbremsen und Beschleunigen vermieden ist, sind ferner höhere Scanngeschwindigkeiten als mit Kippspiegeln möglich. Bei Kipp- spiegeln muss insbesondere die erhebliche Massenträgheit der Spiegel berücksichtigt werden, durch die schnelle Spiegelbewegungen verhindert sind. Bei schnellen Spiegelbewegungen können ferner Vibrationen auftreten, die die Messung beeinträchtigen.
Ferner kann ein erfindungsgemäßes Mikroskop zur Durchführung des Verfahrens lediglich zur Beobachtung der Probe dienen. Bei einem derartigen Mikroskop würde kein von einer Beleuchtungseinheit erzeugter Strahl in eine Taumelbewegung versetzt. Der Taumelspiegel oder eine andere geeignete Vorrichtung dient hierbei zum Bewegen der von einem Beobachtungsdetektor beobachteten Stelle in der Probe.
Die Taumelbewegung kann beispielsweise durch eine Dreipunktaufnahme an der Rückseite des Spiegels hervorgerufen werden. Hierbei kann der Spiegel durch Bewegung der einzelnen Aufnahmen in eine Taumelbewegung versetzt werden.
Bei der bevorzugten Ausführungsform wird der Spiegel um eine Rotationsachse gedreht. Hierbei schließt der Auslenkspiegel mit der Rotationsachse einen Winkel ungleich 90° ein. Allein aufgrund der Rotation des Spiegels entsteht eine Taumelbewegung und hierdurch eine entsprechende Bewegung des Lichtstrahls in dem Beobachtungsvolumen.
Bei einem Mikroskop zur Untersuchung von Kleinstproben, die beispielsweise im Mikroliter- oder auch Submikroliterbereich liegen können, ist der Winkel des Auslenkspiegels gegenüber der Rotationsachse im Bereich von 90,1° - 95°, vorzugsweise 90,1° - 92°, besonders bevorzugt 90,1° - 91°. Dies führt bei einer typischen Objektivbrennweite von f = 5 mm zu Kreisbewegung mit Radien von r = f • tan (d - 90°) = 8 μm - 450 μm (bevorzugt 8 μm - 180 μm, besonders bevorzugt 8 μm - 90 μm). Eine Kreisbewegung kann bei einem eine Taumelbewegung ausführenden Spiegel vorzugsweise dadurch hervorgerufen werden, dass der Strahlengang parallel zur Rotationsachse ist. Bei einem in einem Winkel zur Rotationsachse verlaufenden Strahl erfolgt eine elliptische Bewegung des Beobachtungsstrahls in der Probe bzw. in dem Beobachtungsvolumen.
Vorzugsweise wird der Auslenkspiegel derart bewegt, dass der Fokus in dem Beobachtungsvolumen auf einer geschlossenen Bahn bewegt wird. Hierbei muss die Taumelbewegung in Abhängigkeit der Oberfläche des Spiegels und dem Reflektionspunkt des Lichtstrahls auf dem Spiegel relativ zum Zentrum der Taumelbewegung berücksichtigt werden. Bei einer durch Rotation hervorgerufenen Taumelbewegung und einem vorzugsweise ebenen Auslenkspiegel können gute Messergebnisse dadurch erzielt werden, dass das Anregungslicht im Wesentlichen im Rotationszentrum des Auslenkspiegels auf den Spiegel trifft. Eine derartige Anordnung weist den Vorteil auf, dass der Lichtstrahl stets im gleichen Abstand zur Mittelachse des Messobjektivs das Messobjektiv passiert. Die Verschlechterung des Fokus gegenüber einem das Objektiv in der Objektivachse passierenden Lichtstrahls ist somit im Wesentlichen konstant und kann daher, beispielsweise durch eine angepasste Justage, gezielt kompensiert werden. Da somit keine Änderung des Fokus in Abhängigkeit der Lage des Spiegels bzw. der Lage des Fokus in der Probe hervorgerufen wird, sind die erzielbaren Messergebnisse erheblich verbessert.
Vorzugsweise ist der Winkel des Spiegels gegenüber der Rotationsachse bzw. gegenüber dem auf den Auslenkspiegel treffenden Lichtstrahl einstellbar. Beispielsweise ist hierzu eine Verstelleinheit für das automatische Verstellen des Winkels des Auslenkspiegels vorgesehen. Dies hat den Vorteil, dass beispielsweise auch während des Untersuchens einer Probe der Winkel des Auslenkspiegels und damit die Bahn des Fokus in der Probe verändert werden kann. Bei einem im Rotationszentrum des Auslenkspiegels auftreffenden Anregungsstrahl kann durch Verstellen des Winkels der Radius der Kreisbewegung des Fokus bzw. der Hauptachsen der Ellipse, in der Probe verändert werden. Auf diese Weise ist es möglich ein vollständiges Abtasten der Probe in einer Ebene zu realisieren.
Eine weitere Möglichkeit zum vollständigen Abtasten einer Probe in einer Ebene besteht darin, den Winkel des Auslenkspiegels während der Untersuchung konstant zu halten, so dass sich der Fokus auf einer gleich bleibenden Bahn bewegt. Zum Abtasten der Probe wird nun zusätzlich der Tisch, von dem die zu untersuchende Probe gehalten wird, bewegt. Die Bewegung des Tisches kann hierbei ein- oder zweidimensional sein. Ferner ist es möglich, die beiden vorstehenden Verfahren zum Abtasten einer Probe insbesondere in einer Ebene zu kombinieren, wenn nach dem konfokalen Prinzip gearbeitet wird.
Es ist ferner möglich, bei einem Mikroskop den vorhandenen als Strahlteiler dienenden dichroitischen Spiegel derart auszugestalten, dass dieser als Auslenkspiegel dient und in eine geeignete Taumelbewegung versetzt werden kann. Hierzu ist der dichroitische Spiegel vorzugsweise in einer Kulissenführung gelagert. Die Drehung erfolgt von außen, so dass der Strahlengang nicht beeinträchtigt wird. Da ein derartiges Bewegen des Strahlteilers auch zu einer entsprechenden Bewegung des auf dem Detektor abgebildeten Bildes führt, wird als Detektor bei dieser Ausführungsform vorzugsweise ein Flächensensor, beispielsweise eine großflächige Photodiode, eingesetzt. Mit Hilfe eines großflächigen Photodetektors kann bei einem nicht konfokalen Mikroskop die Detektorfläche integriert ausgelesen werden, da das auf den Detektor auftreffende Licht unabhängig von dem Ort, an dem es auf den Detektor auftrifft, dasselbe Signal erzeugt.
Bei dem vorstehend beschriebenen Mikroskop handelt es sich insbesondere um ein konfokales Mikroskop. Bei einem konfokalen Mikroskop können die Meßergebnisse durch den Einsatz des erfindungsgemäßen Auslenkspiegels erheblich verbessert werden.
Eine weitere Ausführungsform der Erfindung betrifft eine Auslenkeinheit für ein Mikroskop zum optischen Erfassen eines Beobachtungsvolumens. Die Auslenkeinheit weist einen mit einer Antriebseinheit verbundenen Auslenkspiegel auf, der von der Antriebseinheit in eine Taumelbewegung versetzt werden kann. Bei der Auslenkeinheit handelt es sich um ein Zusatzbauteil, das mit einem herkömmlichen Mikroskop verbunden werden kann. Hierzu weist die Auslenkeinheit vorzugsweise ein die Antriebseinheit und/oder den Auslenkspiegel tragendes Gehäuse auf. Das Gehäuse weist ein Anschlusselement zum Verbinden mit einer Objektivaufnahme eines Mikroskops und ein Aufnahmeelement zur Aufnahme eines Mikroskopobjektivs auf. Es ist somit beispielsweise möglich, bei einem herkömmlichen Mikroskop das Mikroskopobjektiv zu entfernen, statt dessen die Auslenkeinheit in die Objektivaufnahme einzusetzen und das vorher entfernte Mikroskopobjektiv an dem Aufnahmeelement des Gehäuses zu befestigen. Somit ist ein herkömmliches Mikroskop durch die Auslenkeinheit einfach auf ein erfindungsgemäßes Mikroskop mit einem eine Taumelbewegung ausführenden Spiegel umrüstbar.
Der in der erfindungsgemäßen Auslenkeinheit vorgesehene Auslenkspiegel kann die vorstehend beschriebenen bevorzugten Weiterbildungen aufweisen.
Die vorstehend beschriebene Auslenkeinheit ist insbesondere zum Einsatz bei einem konfokalen Mikroskop geeignet.
Nachfolgend wird die Erfindung anhand bevorzugter Ausführungsformen unter Bezugnahme auf die anliegenden Zeichnungen näher erläutert.
Es zeigen : Fig. 1 eine schematische Ansicht eines konfokalen Mikroskops mit einem erfindungsgemäß rotierbaren Auslenkspiegel,
Fig. 2 eine schematische, teilweise geschnittene Seitenansicht einer erfindungsgemäßen Auslenkeinheit und
Fig. 3 eine Ansicht des in Fig. 2 dargestellten Mikroskopobjektivs von oben in Richtung des in Fig. 2 dargestellten Pfeils III.
Das in Fig. 1 schematisch dargestellte konfokale Mikroskop weist eine Beleuchtungseinrichtung 10 in Form eines Lasers auf. Das von dem Laser erzeugte Anregungslicht 12 wird durch eine Linsenanordnung 14 auf einen Strahlteiler 16 gelenkt. Durch den Strahlteiler 16 wird das Anregungslicht in Richtung eines Umlenkspiegels 18 gelenkt. Von diesem wird es in Richtung eines Auslenkspiegels 20 reflektiert, der das Anregungslicht in Richtung eines Mikroskopobjektivs 22 reflektiert. Von dem Mikroskopobjektiv 22 wird das Anregungslicht 12 in ein Beobachtungsvolumen 24 fokussiert.
Im dargestellten Ausführungsbeispiel ist das Beobachtungsvolumen 24 eine Vertiefung einer Titerplatte 26, deren Öffnungen 28 durch einen Glasboden 30 verschlossen sind.
Das von der in der Vertiefung 28 vorgesehenen Probe abgegebene Licht wird in entgegengesetzte Richtung durch das Mikroskopobjektiv geleitet und von dem Auslenkspiegel 20 und Umlenkspiegel 18 in Richtung des Strahlenteilers 16 reflektiert. Von dem Strahlenteiler 16 wird das aus dem Beobachtungsvolumen 24 kommende Licht in Richtung einer Tubuslinse 32 umgelenkt. Die Tubuslinse 32 fokussiert das Licht in einer Öffnung 34 einer Aperturblende 36. Anschließend gelangt das Licht auf eine Detektoreinheit 38. Der Umlenkspiegel 18 ist in dem dargestellten Ausführungsbeispiel in einem Winkel von 45° zu dem Anregungslicht 12 angeordnet. Hierdurch entsteht ein Auslenken des Anregungslichts 12 aus dem üblichen Strahlenverlauf. Dies hat den Vorteil, dass eine Antriebseinheit des Auslenkspiegels 20 einfach außerhalb des Strahlengangs vorgesehen werden kann. Ferner ist die übliche Anordnung des konfokalen Mikroskops gewahrt, bei dem eine Probe von unten beleuchtet wird.
Der Auslenkspiegel 20 führt eine Taumelbewegung aus, in dem er um eine Rotationsachse 40 in Richtung eines Pfeils 42 drehbar ist. Der Spiegel 20 schließt mit der Rotationsachse einen Winkel α ein, der ungleich 90° ist. Bei dem Winkel α handelt es sich um den größeren der beiden Winkel zwischen der Rotationsachse 40 und dem Spiegel 20. Durch die Rotation des Spiegels 20 ändert sich der Einfallswinkel zwischen dem vom Umlenkspiegel 18 kommenden Anregungslicht 12 je nach Rotationslage des Auslenkspiegels 20. In der in Fig. 1 dargestellten Projektion erfolgt hierdurch eine Bewegung eines Fokus 44 in dem Beobachtungsvolumen 24 in linearer Richtung in Richtung des Pfeils 46. Von oben gesehen, erfolgt eine Bewegung des Fokus 44 auf einer geschlossenen Bahn, bei der es sich um eine Ellipse handelt. Wenn das Anregungslicht im Wesentlichen im Rotationszentrum 48 auf den Auslenkspiegel 20 trifft, ist die Kreisbewegung konzentrisch zur Strahlachse.
Bei der in den Fign. 2 und 3 dargestellten Auslenkeinheit handelt es sich um ein Anbauteil für ein herkömmliches konfokales Mikroskop. Die Auslenkeinheit umfasst ein Gehäuse 50. Das Gehäuse 50 weist ein Anschlusselement 52 auf. Hierbei handelt es sich beispielsweise um eine Klemmvorrichtung. Über einen geeigneten Adapter kann die Auslenkeinheit mit einer üblichen Objektivaufnahme verbunden werden. Das Anschlusselement wird mit dem konfokalen Mikroskop in der Weise verbunden, dass es mit der üblicherweise zur Aufnahme des Mikroskopobjektivs 22 dienenden Aufnahme verbunden wird. Hierzu wird das Mikroskopobjektiv 22 aus der entsprechenden Halterung herausgeschraubt und die Auslenkeinheit mit Hilfe des Anschlusselements 52 ggf. unter zu Hilfenahme eines Adapters in die entsprechende Aufnahme des konfokalen Mikroskops eingeschraubt.
Innerhalb des Gehäuses ist ein im Wesentlichen im 45°-Winkel zu dem Anregungslicht 12 angeordneter Umlenkspiegel 18 vorgesehen. Bei dem Umlenkspiegel 18 handelt es sich im dargestellten Ausführungsbeispiel um ein Prisma.
Ferner ist in einem Hohlraum 56 des Gehäuses 50 der Spiegel 20 angeordnet. Der Spiegel 20 ist entsprechend dem in Fig. 1 dargestellten Spiegel 20 in einem Winkel zu der Rotationsachse 40 angeordnet. Zum Antrieb des Auslenkspiegels 20 in einer Rotationsbewegung ist eine Antriebseinheit 58, wie beispielsweise ein Elektromotor vorgesehen. Durch Rotation des Auslenkspiegels 20 wird der Strahl des Anregungslichts 12 wie durch die gestrichelten Linien 60 in dem Mikroskopobjektiv 22 dargestellt, abgelenkt. In der in Fig. 2 dargestellten Projektion erfolgt somit wiederum eine Bewegung des Auslenkungslichts in Richtung des Pfeils 46. In einer Ansicht von oben auf das Objektiv 22 (Fig. 3) wird das Anregungslicht auf einer Ellipse 62 bewegt.

Claims

Patentansprüche
1. Verfahren zur Untersuchung einer chemischen und/oder biologischen Probe, insbesondere in Hoch- und Medium-Durchsatzscreeninganlagen, mit den Schritten:
Fokussieren eines Beobachtungsstrahls (12) in einem Beobachtungsvolumen (24) der Probe und
Bewegen des Beobachtungsstrahls (12) in der Probe,
d a d u r c h g e k e n n z e i c h n e t,
dass der Beobachtungsstrahl (12) kontinuierlich in dem Beobachtungsvolumen (24) bewegt wird.
2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass der Beobachtungsstrahl (12) unidirektional bewegt wird.
3. Verfahren nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, dass der Beobachtungsstrahl (12) auf einer in sich geschlossenen Bahn bewegt wird.
4. Verfahren nach einem der Ansprüche 1-3, dadurch gekennzeichnet, dass der Beobachtungsstrahl durch einen Auslenkspiegel (20) abgelenkt wird.
5. Verfahren nach Anspruch 4, dadurch gekennzeichnet, dass der Auslenkspiegel (20) um eine Rotationsachse (40) gedreht wird und mit der Rotationsachse (40) einen Winkel (α) ≠ 90° einschließt.
6. Verfahren nach einem der Ansprüche 1-5, dadurch gekennzeichnet, dass zur Vergleichmäßigung der Verweildauer des Beobachtungsstrahls (12) an Beleuchtungsorten im Beleuchtungsvolumen (24) die Rotationsgeschwindigkeit des Auslenkspiegels variiert wird.
7. Verfahren nach einem der Ansprüche 1-6, dadurch gekennzeichnet, dass zur Vergleichmäßigung der auf Beleuchtungsorte der Probe wirkenden Photonen-Menge die Intensität des Beobachtungsstrahls (12) in Abhängigkeit der Bewegungsgeschwindigkeit des Beobachtungsstrahls (12) in dem Beobachtungsvolumen (24) gesteuert wird.
8. Verfahren nach einem der Ansprüche 1-7, dadurch gekennzeichnet, dass durch den Beobachtungsstrahl (12) in der Probe enthaltene Partikel zur Lumineszenz angeregt werden.
9. Verfahren nach Anspruch 8, dadurch gekennzeichnet, dass die von den Partikeln abgegebene Strahlung, insbesondere Fluoreszenzstrahlung, detektiert wird.
10. Mikroskop zur Durchführung des Verfahrens nach einem der Ansprüche 1-9, mit
einer Beleuchtungseinheit (10) zur Erzeugung eines Anregungslichts (12),
einem Mikroskopobjektiv (22) zur Fokussierung des Anregungslichts (12) in dem Beobachtungsvolumen (24) und
einem das Anregungslicht (12) ablenkenden Auslenkspiegel (20) zum Bewegen des Fokus in dem Beobachtungsvolumen (24), wobei der Auslenkspiegel (20) eine Taumelbewegung ausführt.
11. Mikroskop nach Anspruch 10, dadurch gekennzeichnet, dass der Auslenkspiegel (20) um eine Rotationsachse (40) drehbar ist und mit der Rotationsachse (40) einen Winkel (α) ≠ 90° einschließt.
12. Mikroskop nach Anspruch 11, dadurch gekennzeichnet, dass der Betrag des Winkels (α) des Auslenkspiegels gegenüber der Rotationsachse (40) 90,1° - 95°, vorzugsweise 90,1° - 92°, besonders bevorzugt 90,1° - 91 o ist.
13. Mikroskop nach einem der Ansprüche 9-12, dadurch gekennzeichnet, dass das Anregungslicht (12) im Wesentlichen im Rotationszentrum (48) des Auslenkspiegels (20) auf den Auslenkspiegel (20) trifft.
14. Mikroskop nach einem der Ansprüche 10-13, dadurch gekennzeichnet, dass der Winkel (α) des Auslenkspiegels (20) einstellbar ist.
15. Mikroskop nach Anspruch 14, dadurch gekennzeichnet, dass eine Verstelleinheit zum automatischen Verstellen des Winkels (α) des Auslenkspiegels (20) vorgesehen ist.
16. Mikroskop nach einem der Ansprüche 9-14, dadurch gekennzeichnet, dass der Auslenkspiegel (20) eben ist.
17. Mikroskop nach einem der Ansprüche 9-16, gekennzeichnet durch einen senkrecht zur Rotationsachse (40) des Auslenkspiegels (20) angeordneten Umlenkspiegel (18).
18. Mikroskop zur Durchführung des Verfahrens nach einem der Ansprüche 1-8, gekennzeichnet durch einen Strahlteiler (16), der das von der Beleuchtungseinheit (10) kommende Anregungslicht (12) in Richtung des Beobachtungsvolumens (24) lenkt und von dem Beobachtungsvolumen (24) abgegebenes Licht durchlässt, wobei der Strahlteiler (16) zusätzlich als Auslenkspiegel dient.
19. Auslenkeinheit für ein Mikroskop nach einem der Ansprüche 9-18, zum optischen Erfassen eines Beobachtungsvolumens (24), mit einem mit einer Antriebseinheit (58) verbundenen Auslenkspiegel (20), der von der Antriebseinheit (58) in eine Taumelbewegung versetzbar ist.
20. Auslenkeinheit nach Anspruch 19, gekennzeichnet durch eine die Antriebseinheit (58) und/ oder den Auslenkspiegel (20) tragendes Gehäuse (50) mit einem Anschlusselement (52) zum Verbinden mit einer Objektivaufnahme eines konfokalen Mikroskops und einem Aufnahmeelement (54) zur Aufnahme eines Mikroskopobjektivs (22).
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