WO2003013557A1 - Verwendung von fliegenlarvenextrakten zur wundbehandlung - Google Patents

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WO2003013557A1
WO2003013557A1 PCT/EP2002/008497 EP0208497W WO03013557A1 WO 2003013557 A1 WO2003013557 A1 WO 2003013557A1 EP 0208497 W EP0208497 W EP 0208497W WO 03013557 A1 WO03013557 A1 WO 03013557A1
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fly
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larvae extract
homogenization
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Rainer Pooth
Heinz Mehlhorn
T. Ruzicka
Helger Stege
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    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/56—Materials from animals other than mammals
    • A61K35/63—Arthropods
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like

Definitions

  • the invention relates to the topical application of fly larvae extracts of various species, which belong for example to the genera Sarcophaga or Lucilia, for the treatment of superficial or deep chronic and acute wounds of any origin.
  • Wound healing is a complex process in which multiple target cells and target structures must interlock in an orderly sequence of processes. These processes take place regardless of the type of wound (chronic / acute), while the duration of individual phases is variable. There are generally three main phases, the exudative phase, the proliferative phase and the epithelialization or repair phase.
  • the proliferative phase begins due to the migration of fibroblasts and vascular endothelial cells.
  • the cell content increases massively due to the immigrated fibroblasts and endothelial cells.
  • cytokines and growth factors are released, which in turn stimulate new vascularization and cell proliferation.
  • a matrix conversion takes place in this phase. This takes place through the formation and conversion of collagen type III into collagen type I. This creates a well-capillaryized, macrophage, fibroblast and mast cell-rich granulation tissue.
  • the epithelization and repair phase follows this proliferative phase. In this final phase there is wound contraction and migration of marginal keratinocytes into the wound. Neoangiogenesis and capillary density decrease. The collagen content, however, increases. This process is relevant for the mechanical strength of the resulting scar tissue.
  • Wound healing disorders These occur in a variety of immunologically related diseases, varicose veins, arterial occlusive disease, after infections and, for example, diabetes mellitus. Measures to promote wound healing serve the accelerated or regular sequence of the processes described above. Wound cleansing procedures, in addition to granulation-promoting processes, are to be mentioned here. Epithelization can also be promoted by modern "wound dressings".
  • One of the main causes of delayed wound healing is the lack of formation of granulation tissue. This can either be caused by reduced endogenous wound debridement, or it can result from infections, circulatory disorders, immunological diseases an excessive formation of cell and tissue detritus.
  • wound cleansing measures are used.
  • the aim of cleaning is to create a clean wound bed.
  • ointment residues and crusts must first be removed and any existing necrosis removed. The latter is done either surgically with a sharp spoon (curettage) or with tweezers and scissors.
  • enzymatic ointments that preferentially break down denatured protein. They contain enzymes such as trypsin, chymotrypsin, enzymes from bovine material such as pancreatic enzymes, or collagenase, fibrolysin, streptokinase or calf blood dialysates.
  • regular disinfection is carried out, for example with potassium permanganate or with Rivanol® baths.
  • Disinfectant measures can also be carried out with preparations containing silver or iodine
  • the enzymatic preparations often show only limited effectiveness on the patient.
  • the dosage of the enzyme is often very low and the half-life of the known enzyme preparations is 6 to 12 hours. For this reason, daily, even repeated dressing changes are necessary.
  • Some of the preparations are combination preparations with topical antibiotics.
  • the disadvantage of combination products is the risk of epicutaneous sensitization. Almost 60-70% of patients with chronic leg ulcers suffer from one or more sensitizations based on ointments or other components of topical externals.
  • maggots larvae of the species Lucilia sericata on wounds. This therapy is based on ancient folk medicine and partly on war medicine findings and observations about the contamination of war injuries with fly maggots.
  • the maggots of this species feed exclusively on necrotic tissue. This material is, as it were, digested by secretion of saliva and only then absorbed by the maggot.
  • the maggots of L. sericata do not actively chew or bite. This ensures that the maggots cannot penetrate other parts of the body or unaffected body cavities.
  • the treatment with the maggot shows very high therapeutic effectiveness. However, the current treatment method is extremely complicated, expensive and requires a high logistical effort. For use in humans, the maggots should be grown under controlled conditions.
  • Patent application WO 01/31033 describes a protein secreted to the outside by living maggots of the species Lucilia sericata, for which a wound healing property is assumed. However, physiological experiments on wounds that could support this assumption are missing.
  • the application WO 01/31033 describes the isolation of a very small amount of the secreted protein, but an economical method for obtaining marketable amounts of protein would still have to be developed.
  • an oily formulation of a powder from dried fly larvae in oil is known, which is or has been used for wound treatment in China (Yang Zheng .: China Science: House fly yields medicine, expert say. In: Inter Press Service; 03.09. 1997, 97: 314231 NLDB).
  • a disadvantage of the oil is that it can cause allergies as a side effect.
  • fly larvae extracts according to the invention represent a clear one
  • maggot therapy in terms of application and dosage. It is also possible to use the extracts in modern, hydrophilic wound dressings. The therapy can be better controlled by standardizing the manufacturing process. As a finished product, the fly larvae extracts have a continuous performance that does not depend on the maggot development cycle.
  • the invention therefore relates to fly larvae extracts obtainable from fly larvae, the fly larvae first being cooled and then homogenized and the homogenate obtained finally being freed from undissolved components of the fly larvae.
  • an extraction medium can be added before homogenization.
  • the extraction medium contains water or is an organic solvent. Furthermore, the soluble components can be preserved or applied topically to the wounds immediately. When applied topically, the extract according to the invention has a wound healing effect in the case of superficial, deep, chronic or acute wounds of any origin.
  • Suitable fly larvae come, for example, from the genera Sarcophaga, Lucilia, Musca, Calliphora and Stomoxys. Mixtures of Fly larvae from the genera mentioned are used in the process according to the invention.
  • Suitable species from the genera mentioned are, for example, Lucilia sericata, Lucilia caesar, Lucilia cuprina, Sarcophaga carnaria, Sarcophaga agyrostoma, Musca domestica, Calliphora erythrocephala, Calliphora vicina or Stomoxys caicitrans.
  • the genera Sarcophaga and Lucilia are, for example, ubiquitous and a person skilled in the art can easily find these insects, for example by laying out fresh meat.
  • the fly larvae extracts according to the invention are produced, for example, by keeping eggs or larvae of the species Lucilia sericata and / or Sarcophaga carnaria on fresh meat.
  • the larvae grow and thrive on the meat and are harvested shortly before entering the pupation stage. It is advantageous to harvest the larvae from day 5 to day 8 after hatching from the egg.
  • the larvae are killed and processed about 5 to 8 days after the larvae hatch from the egg, but each time before pupation.
  • the killed larvae are cooled before and during the further processing to the fly larvae extract.
  • Possible cooling temperatures are temperatures below 0 ° C, i.e. in the frozen state, for example at temperatures from 0 ° C to - 80 ° C. However, it is also possible to work at temperatures from 0 ° C. to 15 ° C., preferably from 0 ° C. to 10 ° C., in particular from 2 ° C. to 6 ° C.
  • the larvae can also be frozen for homogenization or for further processing, or crushed and homogenized in the frozen state.
  • the larvae are first made largely sterile on the outside and freed of possible secretions and excretions (SE) that could adhere to the body of the female. This is done by several washing steps in aseptic solutions in decreasing concentration. Sterilized NaCI solution is used in the last washing steps, thereby ensuring that the larvae are largely sterile. Further all secretions and excretions of the maggots are washed off and the maggots are preserved on ice.
  • SE secretions and excretions
  • the larvae are homogenized, for example, by mechanical comminution or ultrasound.
  • the fly larvae can be homogenized as such or preferably with the addition of an extraction medium.
  • 0.1 ml to 500 ml of extraction solution preferably 0.5 ml to 100 ml, very preferably 1 to 5 ml of extraction solution, are added per gram of wet weight of fly larvae.
  • Sterile extraction solutions for example aqua purificata, physiological salt solutions, buffers, electrolyte, sugar or protein solutions and aqueous emulsions and organic solvents are particularly suitable.
  • the addition of extraction media can also be dispensed with entirely and only the liquid components of the maggots can be squeezed.
  • the extract can also be prepared in such a way that the active ingredients are precipitated by adding organic solvents and then extracted.
  • the homogenate is separated into solid and soluble constituents, for example by filtration or centrifugation.
  • the fly larvae extracts may be preserved by freezing or freeze-drying.
  • other known agents for stabilizing active molecules can be used, for example protease inhibitors, trehalose, ectoin or buffers.
  • the extract is filtered, for example sterile filtered, using a filter which has a pore diameter of 0.1 ⁇ m to 0.4 ⁇ m.
  • the extract is aliquoted and frozen in liquid nitrogen. Permanent storage takes place at a temperature of around -21 ° C to -80 ° C or in liquid nitrogen.
  • the sterile-filtered extracts obtained can also be lyophilized.
  • the extracts according to the invention can also be further purified or fractionated using conventional purification methods, such as by selective precipitation steps or chromatographic or electrophoretic processes.
  • the invention also relates to pharmaceuticals, characterized by an effective content of the fly larvae extracts according to the invention together with a pharmaceutically suitable and physiologically compatible carrier, additive and / or other active substances and auxiliaries.
  • fly larvae extracts according to the invention are suitable for the therapy of superficial or deep chronic and acute wounds of any origin.
  • chronic and acute wounds of any genesis is understood to mean, for example, wounds such as surgical wounds which are intended to heal secondarily or unintentionally, cuts, stab wounds, abrasions, bites, burns or bullet wounds, and other wounds which are not can be treated primarily with surgical sutures or primary wound closure.
  • acute wounds means all wounds which cannot be healed primarily by superinfection and all wounds whose manifestation is 4 weeks and less.
  • Chronic wounds are all injuries associated with the loss of epithelial integrity that are manifest for more than 4 weeks.
  • the invention also relates to a method for producing a medicament, which is characterized in that the fly larvae extracts according to the invention are brought into a suitable dosage form with a pharmaceutically suitable and physiologically tolerable carrier and, if appropriate, other suitable active ingredients, additives or auxiliaries.
  • the invention also relates to the use of the fly larvae extracts according to the invention for the production of medicaments for the therapy of superficial or deep chronic and acute wounds of any origin.
  • the medicaments according to the invention are generally applied topically.
  • Suitable pharmaceutical compositions for topical application on the skin are preferably in the form of a solution, suspension, powder, liposomal formulations, gel, lotion, paste, spray or aerosol.
  • Polyethylene glycols, alcohols and combinations of two or more of these substances can also be used as carriers. The list can in no way be interpreted as restrictive.
  • the fly larvae extracts according to the invention are present in a concentration of 0.1% by weight to 100% by weight of the composition, for example from 1.0% by weight to 60% by weight.
  • Suitable pharmaceutical compositions for transdermal applications can be presented as individual patches which are suitable for long-term close contact with the patient's epidermis.
  • Such plasters suitably contain the fly larvae extracts according to the invention in an optionally buffered aqueous solution, dissolved and / or dispersed in an adhesive or dispersed in a polymer.
  • a suitable active ingredient concentration is from about 0.1% by weight to 75% by weight, preferably from 1% by weight to 70% by weight.
  • the active ingredient can be released by electrotransport or iontophoresis, as described, for example, in Pharmaceutical Research, 2 (6): 318 (1986).
  • the fly larvae extracts according to the invention can also be applied to the wound by wound dressings made of gauze, from alginates, from hydrocolloid materials, foams and silicone dressings which have been coated, soaked or treated with these fly larvae extracts and are therefore able to place the fly larvae extracts in or on the Deliver the wound or wound surface.
  • suitable solid or galenical forms of preparation are, for example, granules, powders, solutions, suspensions, emulsions or drops, as well as preparations with a protracted release of active ingredient, in the preparation of which conventional auxiliaries or carriers are used.
  • fly larvae extracts according to the invention can also be used in pharmaceutical preparations which contain the fly larvae extracts in inactive form and which are then applied to or on the wound and are activated by adding specific substances.
  • Simple examples are the use of a powder or of lyophilisates, which are dissolved with physiological solutions (e.g. 0.9% NaCl). If the stability is sufficient, the pharmaceutical preparation can also be a solution.
  • the appropriate pharmaceutical compositions are applied after mechanical wound cleaning.
  • Mechanical wound cleaning is carried out, for example, by bathing or flushing the wound with Ringer's lactate.
  • the wound is optionally covered by means of hydrocolloid wound dressings or by means of a self-adhesive surgical film. Dressing changes with new administration of the fly larvae extracts according to the invention take place daily. example 1
  • Larvae of the species Lucilia sericata and / or Sarcophaga carnaria were kept on fresh and not or only slightly contaminated horse meat and harvested shortly before entering the pupation stage.
  • the larvae were largely sterile.
  • the larvae were then decapitated, i.e. the front third was separated from the rest of the larval body. Both larval parts were immediately preserved separately on ice in a carrier medium.
  • the larvae were then homogenized. This was done in several steps by mechanical comminution and homogenization using ultrasound. Attention was paid to constant cooling at about 4 "Celsius.
  • the extract was sterile filtered (Millipore filter). In the last processing step, the extract was aliquoted and frozen in liquid nitrogen. The permanent storage took place at about -21 ° C to -80 ° C.
  • the fly larvae extract prepared according to Example 1 made from equal parts by weight maggots and physiological saline solution, was applied with 2 ml each.
  • the ulcers are of venous origin and were influenced by the use of painkillers in the sense of vasculitis.
  • the treatment began with systemic administration of steroids and simultaneous local application of the fly larvae extract prepared according to Example 1 to promote debridement. It became comparative Fibrolan® ointment and aqueous solutions of the extract according to the invention are used.
  • Fibrolan® ointment is a preparation on the red list containing plasmin from bovine plasma and deoxyribonuclease from bovine pancreas. In the case of the extracts from the larvae, a distinction was made between the extracts from the front part and the rear part of the larvae. The assignment was made at the beginning of the therapy and was maintained over the entire duration of the treatment.
  • the fly larvae extract prepared according to Example 1 was used in an 87-year-old patient who had been suffering from ulcera curum vasculitic genesis for years. No further ulcerations occurred after systemic steroid use. Local therapy was compared with Fibrolan® ointment and the extracts according to the invention.
  • the ulcer that was treated with the extracts according to the invention initially showed a stronger necrotic and fibrinous coverage than the comparative ulcer that was treated with Fibrolan® ointment.
  • After 8 days of treatment there was a significantly faster debridement of the ulcer, which was treated with the extracts according to the invention, in comparison with the Fibrolan® ointment.
  • the success of the treatment was documented using color photographs.

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Abstract

Die Erfindung betrifft die topische Applikation von Fliegenlarvenextrakten, erhältlich aus Fliegenlarven, die getötet und unter Kühlung in wässrigem Milieu oder in Lösungsmitteln extrahiert und von nicht gelösten Bestandteilen befreit werden. Die Fliegenlarvenextrakte verschiedener Arten eignen sich zur Behandlung von oberflächlichen oder tiefen chronischen und akuten Wunden jeglicher Genese. Die Fliegenlarvenextrakte mit wundheilender Wirkung sind beispielsweise erhältlich aus Fliegenlarven der Gattungen Sarcophaga oder Lucilia.

Description

Verwendung von Fliegenlarvenextrakten zur Wundbehandlung
Die Erfindung betrifft die topische Applikation von Fliegenlarvenextrakten verschiedener Arten, die beispielsweise zu den Gattungen Sarcophaga oder Lucilia gehören, zur Behandlung von oberflächlichen oder tiefen chronischen und akuten Wunden jeglicher Genese.
Die Wundheilung ist ein komplexes Geschehen, bei dem multiple Zielzellen und Zielstrukturen in einer geordneten Abfolge von Prozessen ineinander greifen müssen. Unabhängig von der Wundart (chronisch/akut) laufen diese Prozesse ab, während die Zeitdauer einzelner Phasen variabel ist. Es lassen sich generell drei Hauptphasen unterscheiden, die exsudative Phase, die proliferative Phase und die Epithelisierung- bzw. Reparationsphase.
In der exsudativen Phase steht die akute Traumatisierung der hämostaseologischen und vasokonstriktorischen Reaktionen im Vordergrund. Klinisch imponiert ein Wundödem und der Wundschmerz. Der entstandene Gefäßdefekt wird unter dem Einfluss der Thrombozyten verschlossen. Diese setzen chemotaktisch wirkende Thrombozyten frei. Es kommt zu einer Einwanderung von Makrophagen, Neutrophilen und Lymphozyten. Dadurch wird ein Phagozytosesystem aufgebaut, das hochwirksam für das Gewebedebridement verantwortlich ist.
Nach Beseitigung von Zelltrümmern beginnt durch die Migration von Fibroblasten und Gefäßendothelzellen die proliferative Phase. Der Zellgehalt nimmt durch die eingewanderten Fibroblasten und Endothelzellen massiv zu. Gleichzeitig werden vermehrt Zytokine und Wachstumsfaktoren freigesetzt, die ihrerseits die Gefäßneubildung und Zellproliferation stimulieren. Zusätzlich findet in dieser Phase ein Matrixumbau statt. Dies erfolgt durch die Bildung und den Umbau von Kollagen Typ III in Kollagen Typ I. Dadurch entsteht ein gut kapillarisiertes, Makrophagen-, Fibroblasten- und Mastzellreiches Granulationsgewebe. An diese proliferative Phase schließt sich die Epithelisierungs- und Reparationsphase an. In dieser abschließenden Phase kommt es zur Wundkontraktion und zur Migration randständiger Keratinozyten in die Wunde. Die Neoangiogenese und die Kapillardichte nimmt ab. Der Kollagengehalt hingegen nimmt zu. Dieser Prozess ist für die mechanische Festigkeit des entstehenden Narbengewebes relevant.
Bei Störungen dieser komplexen Wechselwirkungen können Verzögerungen der Wundheilung auftreten. In Abhängigkeit von der Genese der beeinträchtigten Prozesse spricht man nach einer 6-8 Wochen lang bestehenden Wunde von chronischen
Wundheilungsstörungen. Diese treten bei einer Vielzahl von immunologisch bedingten Erkrankungen, der Variköse, der arteriellen Verschlusserkrankung, nach Infektionen und beispielsweise beim Diabetes mellitus auf. Maßnahmen zur Förderung der Wundheilung dienen der beschleunigten oder regelrechten Abfolge der zuvor beschriebenen Prozesse. Hierbei sind in erster Linie wundreinigende, neben granulationsfördernen Verfahren anzuführen. Durch moderne „Wunddressings" kann aber auch die Epithelisierung gefördert werden. Eine der Hauptursachen der verzögerten Wundheilung liegt in der mangelnden Formation von Granulationsgewebe. Dies kann entweder durch vermindertes endogenes Wunddebridement verursacht sein, öder es kommt in Folge von Infektionen, Durchblutungsstörungen, immunologischen Erkrankungen zu einer überschiessenden Bildung von Zeil- und Gewebedetritus.
Therapeutisch kommen hierbei wundreinigende Maßnahmen zum Einsatz. Ziel der Reinigung ist die Herstellung eines sauberen Wundgrundes. Dazu müssen zunächst Salbenreste und Krusten beseitigt und eventuell vorhandene Nekrosen abgetragen werden. Letzteres geschieht entweder chirurgisch mit dem scharfen Löffel (Kürettage) oder mit Pinzette und Schere. Alternativ kann man enzymatische Salben verwenden, die vorzugsweise denaturiertes Protein abbauen. Sie enthalten Enzyme wie Trypsin, Chymotrypsin, Enzyme aus bovinem Material wie Pankreasenzyme, oder Kollagenase, Fibrolysin, Streptokinase oder Kälberblutdialysate. Parallel hierzu erfolgt die regelmäßige Desinfektion beispielsweise mit Kaliumpermanganat oder mit Rivanol® -Bädern. Desinfizierende Maßnahmen können auch mit Silber- oder mit jodhaltigen Präparationen durchgeführt werden
Die enzymatischen Präparate zeigen allerdings am Patienten häufig nur eine eingeschränkte Wirksamkeit. Denn die Dosierung des Enzyms ist häufig sehr niedrig und die Halbwertszeit der bekannten Enzympräparate liegt bei 6 bis 12 Stunden. Aus diesem Grund sind tägliche, auch mehrmalige Verbandswechsel notwendig. Einige der Präparate sind Kombinationspräparate mit topisch applizierbaren Antibiotika. Der Nachteil der Kombinationspräparate liegt in der Gefahr einer epikutanen Sensibilisierung. Fast 60-70% der Patienten mit chronischen Ulzera crurum leiden an einer oder mehreren Sensibilisierungen auf Salbengrundlagen oder anderen Bestandteilen topischer Externa.
Daher sollte auf den Einsatz lokaler Antibiotika verzichtet werden, da zum einen die Resistenzentwicklung, zum anderen die Sensibilisierungsrate hoch ist.
Ferner ist die Anlegung von Larven (Maden) der Art Lucilia sericata auf Wunden bekannt. Diese Therapie basiert auf uralten volksmedizinischen und teilweise auf kriegsmedizinischen Erkenntnissen und Beobachtungen über die Verunreinigung von Kriegsverletzungen mit Fliegenmaden. Die Maden dieser Art ernähren sich ausschließlich von nekrotischem Gewebe. Dabei wird dieses Material durch Sekretion von Speichel gleichsam vorverdaut und danach erst von der Made aufgenommen. Es kommt keinesfalls zu einer aktiven Nahrungsaufnahme durch die Maden der L. sericata im Sinne eines Kau- oder Beißaktes. Dadurch ist sichergestellt, dass die Maden nicht in andere Körperbereiche oder in nicht-betroffene Körperhöhlen eindringen können. Die Madentherapie zeigt sehr hohe therapeutische Effektivität. Allerdings ist die gegenwärtige Behandlungsmethode extrem kompliziert, kostenaufwendig und bedarf eines hohen logistischen Aufwandes. Für die Anwendung am Menschen sind die Maden unter kontrollierten Bedingungen zu züchten. Sowohl für die Aufzucht als auch für den Transport vom Labor zum Patienten ist Keimfreiheit zu gewährleisten. Die therapeutische Effektivität ist nicht zu dosieren. Zwar ist es möglich die Anzahl der Maden zu bestimmen, die auf die Wunde aufgebracht wird, nicht aber die von ihnen erbrachte enzymatische Wirksamkeit. Die Maden selber unterliegen einem biologischen Entwicklungsablauf, an dessen Ende die Metamorphose der Larve zur Puppe und danach zur Fliege steht. Aus diesem Grund ist die Applikation der Larven engmaschig zu wiederholen. Für Patienten und medizinische Leistungserbringer ist eine hohe Compliance erforderlich, um die Therapie durchzuführen, da kulturelle und zivilisatorische Grenzen psychologisch überwunden werden müssen. Zudem kann das Einhaken der Mundhaken der Larven recht schmerzhaft sein.
In der Patentanmeldung WO 01/31033 wurde ein von lebenden Maden der Art Lucilia sericata nach außen sekretiertes Protein beschrieben, für das eine wundheilende Eigenschaft angenommen wird. Physiologische Experimente an Wunden, die diese Vermutung stützen könnten fehlen jedoch. In der Anmeldung WO 01/31033 wird die Isolierung einer sehr kleinen Menge des sekretierten Proteins beschrieben, aber ein wirtschaftliches Verfahren zur Gewinnung vermarktungsfähiger Mengen an Protein wäre noch zu entwickeln. Ferner ist eine ölige Formulierung eines Pulvers aus getrockneten Fliegenlarven in Öl bekannt, die zur Wundbehandlung in China eingesetzt wird oder wurde (Yang Zheng.: China-Science: House fly yields medicine, expert say. In: Inter Press Service; 03.09. 1997, 97:314231 NLDB). Ein Nachteil des Öls besteht darin, daß es als Nebenwirkung Allergien auslösen kann. Die ölige Galenik des chinesischen Produkts steht dem Stand der Technik zur Wundbehandlung der Medizin in den westlichen Ländern entgegen: nach aktueller und allgemeiner Auffassung sollen moderne Wunddressings ein hydrophiles Milieu aufweisen, bei denen eine bessere Heilung beobachtet wird als bei der Anwendung von wundabdeckenden hydrophoben Formulierungen (Pontieri-Lewis V. (1999) Principles for selecting the right wound dressing. Medsurg Nurs 8:267-70; Casey G (2001 ) Wound dressings. Paediatr Nurs 13:39-42; Casey G (2000) Modem wound dressings. Nurs Stand 15:47-51 ; Ruszczak Z, Schwarz RA (2000) Modern aspects of wound healing: an update. Dermatol Surg 26:219-229; Probst W (2000) Lokale Behandlung chronischer Wunden. Pharm Ztg 145:3907-3920; Strobel H-G (2000) Wundfibel; Qualitätsstandards zur Wundbehandlung an der Universitätsklinik Essen. Krankenhauspharmazie 21 :350-361 ). Nachteile öliger Galeniken bestehen insbesondere darin, dass sie die Migration und Funktion von Immunzellen hemmen und die Proliferation von sich neu bildenden Zellen stören.
In dem Bestreben, wirksame Behandlungsverfahren für oberflächliche, tiefe, chronische oder akute Wunden jeglicher Genese zu finden, wurde nun gefunden, dass die erfindungsgemäßen Extrakte aus frischen Fliegenlarven verschiedener Arten beispielsweise der Gattungen Sarcophaga oder Lucilia die genannten Nachteile beheben können.
Die erfindungsgemäßen Fliegenlarvenextrakte stellen eine deutliche
Weiterentwicklung der Madentherapie hinsichtlich der Applikation und Dosierung dar. Auch ist die Verwendung der Extrakte in modernen, hydrophilen Wunddressings möglich. Durch die Standardisierung des Herstellverfahrens kann die Therapie besser gesteuert werden. Als Fertigpräparat besitzen die Fliegenlarvenextrakte eine kontinuierliche Leistungsfähigkeit, die nicht vom Entwicklungszyklus der Maden abhängt.
Die Erfindung betrifft daher Fliegenlarvenextrakte, erhältlich aus Fliegenlarven, wobei die Fliegenlarven zuerst gekühlt und dann homogenisiert werden und das erhaltene Homogenisat abschließend von nicht gelösten Bestandteilen der Fliegenlarven befreit wird.
Gegebenfalls kann vor der Homogenisierung ein Extraktionsmedium zugefügt werden.
Das Extraktionsmedium enthält Wasser oder ist ein organisches Lösungsmittel. Ferner können die löslichen Bestandteile konserviert oder sofort topisch auf die Wunden appliziert werden. Der erfindungsgemäße Extrakt weist bei topischer Applikation eine wundheilende Wirkung bei oberflächlichen, tiefen, chronischen oder akuten Wunden jeglicher Genese auf.
Geeignete Fliegenlarven stammen beispielsweise von den Gattungen Sarcophaga, Lucilia, Musca, Calliphora und Stomoxys. Es können auch Mischungen von Fliegenlarven aus den genannten Gattungen im erfindungsgemäßen Verfahren eingesetzt werden.
Geeignete Arten aus den genannten Gattungen sind beispielsweise Lucilia sericata, Lucilia caesar, Lucilia cuprina, Sarcophaga carnaria, Sarcophaga agyrostoma, Musca domestica, Calliphora erythrocephala, Calliphora vicina oder Stomoxys caicitrans. Die Gattungen Sarcophaga und Lucilia sind beispielsweise ubiquitär vorhanden und ein Fachmann kann diese Insekten leicht auffinden, beispielsweise durch Auslegen von frischem Fleisch.
Die Herstellung der erfindungsgemäßen Fliegenlarvenextrakte erfolgt beispielsweise dadurch, dass Eier oder Larven der Arten Lucilia sericata und/oder Sarcophaga carnaria auf frischem Fleisch gehalten werden. Die Larven wachsen und gedeihen auf dem Fleisch und werden kurz vor Eintritt in das Verpuppungsstadium geerntet. Vorteilhaft ist dabei die Larven in der Zeit von Tag 5 bis Tag 8 nach dem Schlüpfen aus dem Ei zu ernten.
Die Tötung und Verarbeitung der Larven erfolgt etwa 5 bis 8 Tage nach dem Schlüpfen der Larven aus dem Ei, jedoch jeweils vor der Verpuppung. Die getöteten Larven werden vor und während der weiteren Verarbeitung zum Fliegenlarvenextrakt gekühlt. Mögliche Kühltemperaturen sind Temperaturen unter 0 °C, also im gefrorenen Zustand, beispielsweise bei Temperaturen von 0 °C bis - 80 °C. Es kann aber auch bei Temperaturen von 0 °C bis 15 °C, bevorzugt von 0 °C bis 10 °C, insbesondere von 2 °C bis 6 °C gearbeitet werden. Die Larven können auch für die Homogenisierung bzw. zur weiteren Verarbeitung eingefroren werden oder bereits im eingefrorenen Zustand zerkleinert und homogenisiert werden.
Die Larven werden dazu zunächst äußerlich weitgehend keimfrei gemacht und von möglichen Sekreten und Exkreten (SE) befreit, die am Madenkörper anhaften könnten. Dies erfolgt durch mehrere Waschschritte in aseptischen Lösungen in absteigender Konzentration. In den letzten Waschschritten wird sterilisierte NaCI-Lösung eingesetzt und dadurch eine weitgehende äußere Keimfreiheit der Larven hergestellt. Ferner werden dadurch alle Sekrete und Exkrete der Maden abgewaschen und die Maden auf Eis asserviert.
Die Homogenisierung der Larven erfolgt beispielsweise durch mechanisches Zerkleinern oder Ultraschall. Die Fliegenlarven können als solche oder bevorzugt mit Zusatz eines Extraktionsmediums homogenisiert werden. Pro Gramm Nassgewicht Fliegenlarven werden 0,1 ml bis 500 ml Extraktionslösung, vorzugsweise 0,5 ml bis 100 ml, ganz bevorzugt 1 bis 5 ml Extraktionslösung zugesetzt. Geeignet sind insbesondere sterile Extraktionslösungen, beispielsweise aqua purificata, physiologische Salzlösungen, Puffer, Elektrolyt-, Zucker- oder Proteinlösungen und wässrige Emulsionen sowie organische Lösungsmittel. Auf den Zusatz von Extraktionsmedien kann auch ganz verzichtet werden und nur die flüssigen Bestandteile der Maden abgepresst werden. Der Extrakt kann auch so hergestellt werden, dass die Wirkstoffe durch Zusatz von organischen Lösungsmitteln ausgefällt und nachfolgend extrahiert werden. Die Trennung des Homogenisats in feste und lösliche Bestandteile erfolgt beispielsweise durch Filtration oder Zentrifugation. Die Konservierung der Fliegenlarvenextrakte erfolgt gegebenenfalls durch Einfrieren oder durch Gefriertrocknung. Ferner können weitere bekannte Mittel zur Stabilisierung von Wirkmolekülen eingesetzt werden, beispielsweise Proteaseinhibitoren, Trehalose, Ectoin oder Puffer.
Nach Erhalt der homogenen Flüssigkeit wird der Extrakt filtriert, beispielsweise steril filtriert mit einem Filter, der einen Porendurchmesser von 0,1 μm bis 0,4 μm aufweist. Im letzten Schritt wird der Extrakt aliquotiert und in flüssigem Stickstoff eingefroren. Die dauerhafte Lagerung erfolgt bei einer Temperatur von etwa -21 °C bis -80 °C oder in flüssigem Stickstoff. Die erhaltenen sterilfiltrierten Extrakte können auch lyophilisiert werden.
Die erfindungsgemäßen Extrakte können auch mit üblichen Reinigungsmethoden weiter gereinigt oder fraktioniert werden wie durch selektive Fällungsschritte oder chromatografische oder elektrophoretische Verfahren. Die Erfindung betrifft auch Arzneimittel, gekennzeichnet durch einen wirksamen Gehalt an den erfindungsgemäßen Fliegenlarvenextrakte zusammen mit einem pharmazeutisch geeigneten und physiologisch verträglichen Trägerstoff, Zusatzstoff und/oder anderen Wirk- und Hilfsstoffen.
Aufgrund der pharmakologischen Eigenschaften eignen sich die erfindungsgemäßen Fliegenlarvenextrakte zur Therapie von oberflächlichen oder tiefen chronischen und akuten Wunden jeglicher Genese.
Unter dem Begriff "chronische und akute Wunden jeglicher Genese" werden beispielsweise Wunden verstanden wie Operationswunden, die gezielt oder ungewollt sekundär heilen sollen, Schnitt-, Stich-, Schürf-, Beiß-, Brand-, oder Schussverletzungen, und andere Wunden, die nicht primär mittels chirurgischer Naht oder einem primären Wundverschluss behandelt werden können. Ferner sind mit dem Begriff der akuten Wunden, alle Wunden gemeint, die durch eine Superinfektion nicht primär abheilen können und alle Wunden, deren Manifestation 4 Wochen und weniger beträgt. Chronische Wunden sind alle Verletzungen, die mit der Aufhebung der Integrität des Epithels einhergehen und länger als 4 Wochen manifest sind. Insbesondere sind hiermit schlecht heilende Wunden auf der Basis eines Diabetes mellitus, einer Variköse oder einer Venenthrombose, eines rheumatischen Leidens, einer Vaskulitis, einer arteriellen Verschlusskrankheit, eines Leidens der Lymphgefäße, hämatologischer Erkrankungen und unter oder nach Infektionen der Wunden gemeint.
Die Erfindung betrifft auch ein Verfahren zur Herstellung eines Arzneimittels, das dadurch gekennzeichnet, dass man die erfindungsgemäßen Fliegenlarvenextrakte mit einem pharmazeutisch geeigneten und physiologisch verträglichen Träger und gegebenenfalls weiteren geeigneten Wirk-, Zusatz- oder Hilfsstoffen in eine geeignete Darreichungsform bringt. Die Erfindung betrifft auch die Verwendung der erfindungsgemäßen Fliegenlarvenextrakte zur Herstellung von Arzneimitteln zur Therapie von oberflächlichen oder tiefen chronischen und akuten Wunden jeglicher Genese.
Die Applikation der erfindungsgemäßen Arzneimittel erfolgt in der Regel topisch.
Geeignete pharmazeutische Zusammensetzungen für die topische Anwendung auf der Haut liegen vorzugsweise als Lösung, Suspension, Puder, liposomalen Formulierungen, Gel, Lotion, Paste, Spray oder Aerosol vor. Als Träger können auch Polyethylenglycole, Alkohole und Kombinationen von zwei oder mehreren dieser Substanzen verwendet werden. Die Aufzählung kann in keinerWeise als einschränkend aufgefasst werden. Die erfindungsgemäßen Fliegenlarvenextrakte sind abhängig von den Extraktionsbedingungen in einer Konzentration von 0,1 Gew.-% bis 100 Gew.-% der Zusammensetzung vorhanden, beispielsweise von 1 ,0 Gew.-% bis 60 Gew.-%.
Auch eine transdermale Verabreichung ist möglich. Geeignete pharmazeutische Zusammensetzungen für transdermale Anwendungen können als einzelne Pflaster vorliegen, die für einen langzeitigen engen Kontakt mit der Epidermis des Patienten geeignet sind. Solche Pflaster enthalten geeigneterweise die erfindungsgemäßen Fliegenlarvenextrakte in einer gegebenenfalls gepufferten wässrigen Lösung, gelöst und/oder dispergiert in einem Haftmittel oder dispergiert in einem Polymer. Eine geeignete Wirkstoff-Konzentration beträgt von etwa 0,1 Gew.-% bis 75 Gew.-%, vorzugsweise von 1 Gew.-% bis 70 Gew.-%. Als eine besondere Möglichkeit kann der Wirkstoff, wie beispielsweise in Pharmaceutical Research, 2(6): 318 (1986) beschrieben, durch Elektrotransport oder lontophorese freigesetzt werden.
Die erfindungsgemäßen Fliegenlarvenextrakte können ferner auch auf die Wunde appliziert werden durch Wundauflagen aus Gaze, aus Alginaten, aus hydrokolloidalen Materialen, Schaumstoffen und Silikonauflagen, die mit diesen Fliegenlarvenextrakten beschichtet, getränkt oder behandelt wurden und deshalb in der Lage sind, die Fliegenlarvenextrakte in oder auf die Wunde oder Wundoberfläche abzugeben. Geeignete feste oder galenische Zubereitungsformen sind beispielsweise Granulate, Pulver, Lösungen, Suspensionen, Emulsionen oder Tropfen, sowie Präparate mit protrahierter Wirkstoff-Freigabe, bei deren Herstellung übliche Hilfsmittel oder Trägerstoffe, Verwendung finden. Als häufig verwendete Hilfsstoffe seien Magnesiumcarbonat, Titandioxid, Laktose, Mannit und andere Zucker, Talkum, Milcheiweiß, Gelatine, Stärke, Cellulose und ihre Derivate, Polyethylenglykol und Lösungsmittel wie etwa steriles Wasser und ein- oder mehrwertige Alkohole wie Glycerin, genannt.
Ferner können die erfindungsgemäßen Fliegenlarvenextrakte auch in galenischen Zubereitungen eingesetzt werden, die die Fliegenlarvenextrakte in inaktiver Form enthalten und die dann in oder auf die Wunde auftragen werden und durch Zugabe von spezifischen Substanzen aktiviert werden. Einfache Beispiele sind die Verwendung eines Pulvers oder von Lyophylisaten, die mit physiologischen Lösungen (z.B. 0,9% NaCI) aufgelöst werden. Bei ausreichender Stabilität kann die galenische Zubereitung auch eine Lösung sein.
Die Applikation der geeigneten pharmazeutischen Zusammensetzungen erfolgt nach mechanischer Wundreinigung. Die mechanische Wundreinigung erfolgt beispielsweise durch ein Bad oder Spülung der Wunde mit Ringerlaktat. Die Wunde wird wahlweise nach Applikation der erfindungsgemäßen Fliegenlarvenextrakte mittels hydrokolloidaler Wunddressings oder mittels selbstklebender Operations-Folie bedeckt. Verbandswechsel mit jeweils neuer Gabe der erfindungsgemäßen Fliegenlarvenextrakte erfolgen täglich. Beispiel 1
Herstellung des erfindungsgemäßen Fliegenlarvenextrakts
Larven der Arten Lucilia sericata und/oder Sarcophaga carnaria wurden auf frischem, und nicht oder gering kontaminiertem Pferdefleisch gehalten und kurz vor Eintritt in das Verpuppungsstadium geerntet. In mehreren Waschschritten in aseptischen Lösungen in absteigender Konzentration und in den letzten Waschschritten in sterilisierter NaCI-Lösung wurde eine weitgehende äußere Keimfreiheit der Larven hergestellt. Danach wurden die Larven dekapitiert, d.h. das vordere Drittel wurde vom Rest des Larvenkörpers abgetrennt. Beide Larventeile wurden sofort getrennt in einem Trägermedium auf Eis asserviert. Danach wurden die Larven homogenisiert. Dies geschah in mehreren Schritten durch mechanische Zerkleinerung und Homogenisation mittels Ultraschall. Auf eine ständige Kühlung bei etwa 4 "Celsius wurde geachtet. Nach Erhalt einer homogenen Flüssigkeit wurde der Extrakt steril filtriert (Milliporefilter). Im letzten Bearbeitungsschritt wurde der Extrakt aliquotiert und in flüssigem Stickstoff eingefroren. Die dauerhafte Lagerung erfolgte bei etwa -21 °C bis -80 °C.
Beispiel 2
Wundbehandlung
Bei einer 82 Jahre alten Patientin, die seit Jahren an chronisch rezidivierender Ulcera curum leidet, wurde der gemäß Beispiel 1 hergestellte Fliegenlarvenextrakt, hergestellt aus gleichen Gewichtsanteilen Maden und physiologischer Salzlösung, mit jeweils 2 ml appliziert. Die Ulzera sind venöser Herkunft und wurden durch die Einnahme von Schmerzmitteln im Sinne einer Vaskulitis mit beeinflusst. Bei Beginn der Behandlung lagen mehrere zum Teil fibrinös belegte Ulzera an beiden Unterschenkeln vor. Nach Rücksprache mit der Patientin begann die Behandlung mit systemischer Gabe von Steroiden und gleichzeitiger lokaler Applikation des gemäß Beispiel 1 hergestellten Fliegenlarvenextrakts zur Förderung des Debridements. Es wurden vergleichend Fibrolan® Salbe und wässrige Lösungen des erfindungsgemäßen Extraktes eingesetzt. Fibrolan® Salbe ist ein in der Roten Liste angegebenes Präparat enthaltend als Wirkstoffe Plasmin aus Rinderplasma und Desoxyribonuclease aus Rinderpankreas. Bei den Extrakten aus den Larven wurde zwischen den Extrakten aus dem Vorderteil und dem Hinterteil der Larven unterschieden. Die Zuordnung erfolgte am Anfang der Therapie und wurde über die gesamte Dauer der Behandlung beibehalten.
Es zeigte sich, dass die okklusive Applikation der erfindungsgemäßen Extrakte der Anwendung mit Fibrolan® Salbe in bezug auf debridierende Wirkung und der Geschwindigkeit des Wundverschlusses deutlich überlegen war. Der Behandlungserfolg wurde an Hand von Farbaufnahmen dokumentiert.
Bei einer 87 Jahre alten Patientin, die seit Jahren an Ulzera curum vaskulitischer Genese leidet, wurde der gemäß Beispiel 1 hergestellte Fliegenlarvenextrakt eingesetzt. Nach der systemischen Einnahme von Steroiden traten keine weiteren Ulzerationen auf. Die Lokaltherapie erfolgte vergleichend mit Fibrolan® Salbe und den erfindungsgemäßen Extrakten. Das Ulkus, welches mit den erfindungsgemäßen Extrakten behandelt wurde zeigte am Anfang eine stärkere nekrotische und fibrinöse Belegung als der Vergleichsulkus, der mit Fibrolan® Salbe behandelt wurde. Nach 8 Tagen Behandlung zeigte sich ein deutlich schnelleres Debridement des Ulcus, welches mit den erfindungsgemäßen Extrakten behandelt wurde, im Vergleich mit der Fibrolan® Salbe. Der Behandlungserfolg wurde an Hand von Farbaufnahmen dokumentiert.

Claims

Patentansprüche:
1 . Fliegenlarvenextrakt, erhältlich aus Fliegenlarven, wobei die Fliegenlarven gekühlt und dann homogenisiert werden und aus dem erhaltenen Homogenisat abschließend die nicht gelösten Bestandteile der Fliegenlarven abgetrennt werden.
2. Fliegenlarvenextrakt gemäß Anspruch 1 , dadurch gekennzeichnet, dass vor der Homogenisierung ein Extraktionsmedium zugefügt wird.
3. Fliegenlarvenextrakt gemäß der Ansprüche 1 oder 2, erhältlich aus Fliegenlarven der Gattungen Sarcophaga, Lucilia, Musca, Calliphora und/oder Stomoxys oder Mischungen aus Vertretern dieser Gattungen oder aus den Arten Lucilia sericata, Lucilia caesar, Lucilia cuprina, Sarcophaga carnaria,
Sarcophaga agyrostoma, Musca domestica, Calliphora erythrocephala, Calliphora vicina oder Stomoxys caicitrans.
4. Fliegenlarvenextrakt gemäß einem oder mehreren der Ansprüche 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, dass die Fliegenlarven 5 bis 8 Tage alt sind.
5. Fliegenlarvenextrakt gemäß einem oder mehreren der Ansprüche 1 bis 4, dadurch gekennzeichnet, dass die Homogenisierung der Fliegenlarven in gefrorenem Zustand bei Temperaturen unter 0 °C oder die Homogenisierung und Abtrennung von unlöslichen Bestandteilen bei Temperaturen von 0 °C bis
15 °C, bevorzugt von 0 °C bis 10 °C, insbesondere von 2 °C bis 6 °C erfolgt.
6. Fliegenlarvenextrakt gemäß einem oder mehreren der Ansprüche 1 bis 5, dadurch gekennzeichnet, dass die Homogenisierung durch mechanisch Zerkleinerung oder durch Ultraschall erfolgt.
7. Fliegenlarvenextrakt gemäß einem oder mehreren der Ansprüche 1 bis 6, dadurch gekennzeichnet, dass als Extraktionsmedium Wasser, physiologische Salzlösungen, Puffer, Elektrolyt-, Zucker- oder Proteinlösungen, Emulsionen oder organische Lösungsmittel eingesetzt werden.
5
8. Fliegenlarvenextrakt gemäß einem oder mehreren der Ansprüche 1 bis 6, dadurch gekennzeichnet, dass als Extraktionsmedium ein organisches Lösungsmittel eingesetzt wird zur Fällung und nachfolgenden Extraktion der Wirkstoffe.
10
9. Fliegenlarvenextrakt gemäß einem oder mehreren der Ansprüche 2 bis 8, dadurch gekennzeichnet, dass je Gramm Nassgewicht Fliegenlarven 0,1 ml bis 500 ml Extraktionsmedium, vorzugsweise 0,5 ml bis 100 ml, ganz bevorzugt 1 bis 5 ml Extraktionsmedium zugesetzt werden.
15
10. Fliegenlarvenextrakt gemäß einem oder mehreren der Ansprüche 1 bis 9, dadurch gekennzeichnet, dass im Homogenisat die Trennung von unlöslichen Bestandteilen durch Zentrifugation oder Filtration erfolgt.
20 11. Fliegenlarvenextrakt gemäß einem oder mehreren der Ansprüche 1 bis 10, dadurch gekennzeichnet, dass der Fliegenlarvenextrakt durch Einfrieren oder Lyophilisation konserviert wird.
12. Verfahren zur Herstellung des Fliegenlarvenextrakts gemäß einem oder
25 mehreren der Ansprüche 1 bis 11 , dadurch gekennzeichnet, dass Fliegenlarven vor der Verpuppung getötet und unter Kühlung homogenisiert und aus dem erhaltenen Homogenisat nicht gelöste Bestandteile abgetrennt werden.
13. Verfahren gemäß Anspruch 12, dadurch gekennzeichnet, dass Fliegenlarven 30 der Gattungen Sarcophaga, Lucilia, Musca, Calliphora und/oder Stomoxys oder
Mischungen der Gattungen eingesetzt werden oder die Arten Lucilia sericata, Lucilia caesar, Lucilia cuprina, Sarcophaga carnaria, Sarcophaga agyrostoma, Musca domestica, Calliphora erythrocephala, Calliphora vicina oder Stomoxys caicitrans eingesetzt werden.
14. Verfahren gemäß der Ansprüche 12 oder13, dadurch gekennzeichnet, dass die Fliegenlarven vor der Homogenisierung von ausgeschiedenen Sekreten und
Exkreten der Larven durch Waschen befreit werden.
15. Verfahren gemäß einem oder mehreren der Ansprüche 12 bis 14, dadurch gekennzeichnet, dass vor der Homogenisierung ein Extraktionsmedium zugesetzt wird und die Homogenisierung mechanisch oder durch Ultraschall erfolgt.
16. Verfahren gemäß einem oder mehreren der Ansprüche 12 bis 15, dadurch gekennzeichnet, dass als Extraktionsmedium Wasser, physiologische Salzlösungen, Puffer, Elektrolyt-, Zucker- oder Proteinlösungen, Emulsionen oder organische Lösungsmittel eingesetzt werden
17. Verfahren gemäß einem oder mehreren der Ansprüche 12 bis 16, dadurch gekennzeichnet, dass die Homogenisierung bei Temperaturen unter 0 °C oder bei Temperaturen von 0 °C bis 15 °C, bevorzugt von 0 °C bis 10 °C, insbesondere von 2 °C bis 6 °C erfolgt.
18. Verfahren gemäß einem oder mehreren der Ansprüche 12 bis 17, dadurch gekennzeichnet, dass die Trennung von unlöslichen Bestandteilen durch Zentrifugation oder Filtration erfolgt.
19. Arzneimittel, gekennzeichnet durch einen wirksamen Gehalt des Fliegenlarvenextrakts gemäß der Ansprüche 1 bis 11 zusammen mit einem pharmazeutisch geeigneten und physiologisch verträglichen Trägerstoff.
20. Verwendung des Fliegenlarvenextrakts gemäß der Ansprüche 1 bis 1 1 zur Herstellung von Arzneimitteln zur Therapie von oberflächlichen oder tiefen chronischen und akuten Wunden jeglicher Genese.
5 21. Verwendung gemäß Anspruch 20, dadurch gekennzeichnet, dass eine galenische Zusammensetzung zur topischen Anwendung auf der Haut eingesetzt wird, beipielsweise als Lösung, Suspension, Puder, Creme, liposomalen Formulierungen, Gel, Lotion, Paste, Spray oder Aerosol.
10 22. Verwendung gemäß der Ansprüche 20 oder 21 , dadurch gekennzeichnet, dass der Fliegenlarvenextrakt in einer Konzentration von 0,1 Gew.-% bis 100 Gew.-% in der galenischen Zusammensetzung eingesetzt werden.
23. Verwendung gemäß Anspruch 21 , dadurch gekennzeichnet, dass eine
15 galenische Zusammensetzung für transdermale Anwendungen als Pflaster vorliegt.
24. Verwendung gemäß Anspruch 21 , dadurch gekennzeichnet, dass der Fliegenlarvenextrakt gemäß der Ansprüche 1 bis 11 in einer Wundauflage aus 0 Gaze, aus Alginaten, aus hydrokolloidalen Materialen, Schaumstoffen oder
Silikonauflagen, die jeweils mit dem genannten Fliegenlarvenextrakt beschichtet oder getränkt sind, vorliegt.
25. Verwendung gemäß Anspruch 21 , dadurch gekennzeichnet, dass der 5 Fliegenlarvenextrakt gemäß der Ansprüche 1 bis 1 1 in galenischen
Zubereitungen eingesetzt wird, worin der Fliegenlarvenextrakt in inaktiver Form enthalten ist und die Zubereitung anschließend auf die Wunde auftragen und durch Zugabe von spezifischen Substanzen der Fliegenlarvenextrakt aktiviert wird. 0
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