WO2003082332A1

WO2003082332A1 - Remedy for glioblastoma

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Publication number: WO2003082332A1
Application number: PCT/JP2003/003867
Authority: WO
Inventors: Shogo Ishiuchi
Original assignee: Yamanouchi Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Yamanouchi Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2002-03-29
Filing date: 2003-03-27
Publication date: 2003-10-09
Anticipated expiration: 2004-09-29
Also published as: CN1642572A; EP1491211A4; US20050165009A1; JP4200902B2; CA2479495A1; AU2003220825A1; EP1491211A1; US7750024B2; JPWO2003082332A1; MXPA04009496A; KR20040097236A

Description

明細書

神経膠芽腫治療剤技術分野，

本発明は， AMPA受容体拮抗作用を有する化合物の神経膠芽腫の治療剤としての新規な医薬用途に関する。背景技術

ダリオ一マは、グリアの幹細胞である上衣膠芽細胞から、上衣細胞、ァストログリア、ォリゴデンドログリアなどへ分化する過程で腫瘍化したものの総称である（生化学辞典第三版東京化学同人、東京、 1998) 。

神経膠芽腫 (glioblastoms multiforme^ 以下 glioblastomaともいう。 ) は、グリオ一マの中でも、中枢神経系において最も蔓延し、悪性度が高く、悪性脳腫瘍の代表的なものである。

また、その致死率も非常に高く、発症してから 9〜1 2ヶ月で死に至る。各種治療法が進歩した今日でも、 1986年から 1990年の 5年生存率 (8.0%)は、 2 0年前の 1969年から 1975 年の 5年生存率（11.9 % )と比較しても、殆ど変化がなく（神経進歩 43(3) ,338-350, 1999)、有効な治療法の確立が切望されている。

神経膠芽腫の癌細胞は、脳腫瘍の中でも最も未分化型で、遊走性 ·増殖性が高く、高い浸潤性を有し、予後が極めて悪い。

神経膠芽腫は、未分化星細胞又は前駆細胞からの悪性化の遺伝子的な機序の違いにより、原発性神経膠芽腫（Primary glioblastoma de novo) 、及び続発性神経膠芽腫 (Secondary glioblastoma) に分類される。続発性神経膠芽腫は、 4 5歳以下の若年層に発症し、星細胞腫から平均 4— 5年のうちに未分化星細胞腫を経て発症する。一方、原発性神経膠芽腫は、平均 5 5歳の高年齢層に多く発症し、通常、何ら臨床的，病理学的に異常の見られない状態から 3ヶ月以内で発症する劇症型の神経膠芽腫（de novo glioblastomaとも §われる。 ) である iPatholoay and Genetics of the Nervous Systems. 29-39 (I ARC Press, Lyon, France, 2000))。

神経膠芽腫は有髄神経に沿って遊走し、中枢神経中に広範に拡大することから、外科的処置では十分な治療効果は得られない（Neurol. Med. Chir. (Tokyo) 34, 91 -94, 1994， Neurol. Med. Chir. (Tokyo) 33 425-428, 1993, Neuropathology 17, 186-188, 1997) 。また、日本において、神経膠芽腫の適応症を有する薬剤は、ラニムスチンや、インタ一フェ口ン等限られたものであり、その有効性は不十分である。

α—ァミノ— 3—ヒドロキシ— 5—メチルー 4一イソキサゾ一ルプロピオン酸 (ΑΜΡΑ)型グルタミン酸受容体は、イオン型グルタミン酸受容体の 1つであり、中枢神経で、殆ど全ての興奮性シナプスの早い神経伝達を司っている (Trends Neurosci. 16, 359-365， 1993， Annu. Rev. Neuroscに 17, 31 -108, 1994， Prog. Neurobiol. 54， 581 -618， 1998)。 AMPA受容体は神経細胞と同様に多くのグリア細胞にも発現している (Trends Pharmacol. Sci. 21 , 252-258, 2000)。 AMPA受容体は、 4つのサブュニット GluR1 -4からなる。 AMPA受容体の C a ^{2 +}透過性はサブユニットの構成に依存する。即ち、 GluR2 サブユニットを有する受容体は、 C a ^{2 +}透過性が低く、 GIUR2を持たない受容体は、 C a ^{2 +}透過性が高い。 GluR2サブユニットが多いほど、 C a ^{2 +}透過性は減少する (Trends Neurosci. 16, 359-365, 1993, Annu. Rev. Neuroscに 17， 31 -108, 1994, Prog. Neurobiol. 54, 581 -618, 1998)。さらに， GluR2の独特の性質として、通常アルギニン (R)である 2 番目の疎水部分 (M2)の 1アミノ酸残基がグルタミン (Q)に置き換えられた場合、置換 GluR2(Q)によって構成されるホモマー受容体は、高 C a ² +透過性を示す (Trends Neurosci. 16, 359-365, 1993， Annu. Rev. Neurosci. 17, 31 -108, 1994) ことがあげられる。すなわち、 GluR2サブユニットが多くてもそのサブユニットが GluR(Q)型であれば高 C a ^{2 +}透過性を示すが、 GluR2(R)型であれば C a ^{2 +}透過性を示さない。

ダリォーマ細胞とダル夕ミン酸に関しては、 C6-gliomaには GluR2遺伝子の発現が低いこと (丄 Nuerosci. Res. 46， 164-178, 1996)や， 66%の glioblastoma培養細胞がグルタミン酸受容体ァゴニストに反応し脱分極する（Euに丄 Neurosci. 10, 2153-2162, 1998) ことが報告されている。

イオン型グル夕ミン酸受容体ファミリ一の拮抗剤によるダリォーマ等の抑制作用についての報告は、以下のものがある。

1 )特許文献 1には、癌治療のための AMPA受容体複合体とグルタミン酸の相互作用を阻害する方法に関する発明が開示され、脳腫瘍の具体例として、胎児性腫瘍に分類される髄芽腫（medulloblastoma) 、ダリオ一マの一種である脳星細胞腫（human brain astrocytoma) が挙げられ、脳星細胞腫に対する AMPA受容体拮抗剤 GYK 2446の in vitroの効果が示されている。

しかしながら、上記文献には、 AMPA受容体拮抗剤を、悪性度が高く、放射線治療や化学療法に抵抗性を有する神経膠芽腫の治療に用いることについては、開示も示唆もない。

2 ) 上記発明者による非特許文献 1には、 NMDAや AMPA受容体の拮抗剤は、末梢由来の癌細胞には感受性が高いが、神経やダリァ細胞由来の癌細胞には感受性が低い旨の記載がある。更に、これらの拮抗剤は末梢癌の治療剤として有用であるとの記載がある。従って、神経膠芽腫よりも悪性度が低い癌細胞を用いた in vitroの効果からでは、本発明の神経膠芽腫に対する効果は予測できない。

3 ) 非特許文献 2には、 NMDA受容体拮抗剤である MK-801及び memantinが、ラットの C6及び RG2glioma移植モデルに対し、増殖抑制効果を示したことが報告されている。

しかしながら、動物モデルを用いた従来のダリオ一マ研究は、実際の腫瘍の播種を再現していないとの判がある（非特許文献 3 ) 。

4 ) また、上記非特許文献 1の批評文である非特許文献 4には、グリア細胞腫の複合的な治療方法の 1つとして、 AMPA受容体と NMDA受容体の阻害の可能性を示唆している。しかしながら、著者らは、非特許文献 1で用いている C6及び RG2gliomaを用いた動物モデルが、ヒトの癌を反映するのかについても、疑問視している。

以上のことから、これらの先行技術には AMPA受容体拮抗剤が、ダリオ一マの中で最も悪性なヒトの神経膠芽腫に対し治療剤になりうるとの具体的な記載はなく、 C6及び RG2gliomaによる効果は、ヒトの神経膠芽腫の治療効果を予測できるものでもない。従って、本発明は、これらの先行技術には記載が無く、容易に導き出せるものではない。

【特許文献 1】

P C T国際公開パンフレツト WO 0 0 / 2 4 3 9 5

【非特許文献 1】

Proceedings of the National Academy of Sciences of United States of America 98(11), 6372-6377, 2001 【非特許文献 2】

Nature Medicine 7(9), 1010-1015, 2001

【非特許文献 3】

Nature Medicine 6(4)， 369-370, 2000

【非特許文献 4】

Nature Medicine 7(9), 994-995, 2001 発明の開示

本発明の目的は新規な作用機序を有する神経膠芽腫治療剤を提供することである。本発明者らは上記の課題を達成すべく鋭意研究を行ったところ、神経膠芽腫細胞、特に、ヒトの原発性神経膠芽腫細胞には、 GluR1及び Z又は GluR4サブュニットが広範に発現し、 C a ^{2 +}透過性 AMPA受容体として機能していることを見いだした。即ち、ァデノウィルスべクタ一仲介による GluR2(R)遺伝子の導入によって、生体内の C a ^{2 +}透過性 AMPA受容体が、 C a ^{2 +}不透過性 AMPA受容体に転換したことが、遊走性を抑制し、神経膠芽腫細胞のアポトーシスを誘発したことを確認した。即ち、 GluR2(R)サブュニットの存在による Ca ^{2 +}透過性の阻害が神経膠芽腫細胞の細胞死を誘発する。また、逆に、 C a ^{2 +}透過性 AMPA受容体の過剰な発現が癌細胞の形態変化と増殖亢進だけでなく、遊走性をも促進したことを見いだした。

また、本発明者は、ヒトの神経膠芽腫の病理学的特徴をよく反映する動物モデルを構築し、本発明の効果の確認に用いた。本発明者が樹立したヒト glioblastomaの細胞株 CGNH-89 を移植した動物モデルは、脳実質内、脳軟膜下に激しく浸潤し、髄膜播種を生じ、ヒトの神経膠芽腫の病理学的特徴を反映するものである。

従つて、神経膠芽腫細胞の AMPA受容体が GluR1及び Z又は GluR4サブュニットで構成され GluR2を発現していないことから、該 AMPA受容体の高い C a ^{2 +}透過性が、神経膠芽腫細胞の高い増殖性、遊走性に関与するとの知見に基づき、実際に、 AMPA受容体の阻害活性を有する化合物が、ヒト神経膠芽腫を反映する動物モデルでの増殖抑制効果を有することを確認し、本発明を完成した。

即ち、本発明は、 AMPA受容体阻害活性を有する化合物を有効成分とする神経膠芽腫治療剤に関する。好ましくは、 AMPA受容体阻害活性を有する化合物が、 [ 7— （ 1 H—イミダゾール一 1一ィル）—6—ニトロ一 2， 3—ジォキソ一 3， 4ージヒドロキノキサリン一 1 (2 H) —ィル] 酢酸又はその塩若しくは水和物である神経膠芽腫治療剤に関する。

また、 AMPA受容体阻害活性を有する化合物が、 2， 3—ジヒドロキシ— 6—二トロ ― 7—スルファモイルーベンゾ (F)—キノキサリン又はその塩である神経膠芽腫治療剤に関する。

更にまた、 AMPA受容体阻害活性を有する化合物が 2— [N— (4—クロ口フエニル） —N—メチルァミノ] 一 4H—ピリド [3， 2-e] — 1, 3—チアジン— 4—オン又はその塩である神経膠芽腫治療剤に関する。

また、本発明は、治療有効量の AMPA受容体阻害活性を有する化合物を有効成分とし、製薬学的に許容される担体を含む神経膠芽腫治療剤用医薬組成物；

好ましくは、 AMPA受容体阻害活性を有する化合物が、 [ 7— ( 1 H—イミダゾール - 1一^ rル）一 6—ニトロ一 2， 3—ジォキソ一 3， 4ージヒドロキノキサリンー 1 (2 H) —ィル] 酢酸又はその塩若しくは水和物である上記医薬組成物；

AMPA受容体阻害活性を有する化合物が、 2, 3—ジヒドロキシー 6—二トロー 7— スルファモイルーベンゾ (F)—キノキサリン又はその塩である上記医薬組成物；

AMPA受容体阻害活性を有する化合物が、 2— [N— (4—クロ口フエニル）一 N— メチルァミノ] —4H—ピリド [3, 2-e] — 1， 3—チアジン一 4一オン又はその塩を投与することからなる上記医薬組成物；に関する。

更に本発明は、治療有効量の AMPA受容体阻害活性を有する化合物を含有する神経膠芽腫治療用医薬の製造のための使用；

好ましくは、 AMPA受容体阻害活性を有する化合物が、 [ 7— （ 1 H—イミダゾール一 1一ィル）一 6—ニトロ— 2, 3ージォキソー 3， 4ージヒドロキノキサリン— 1 (2 H) 一ィル] 酢酸又はその塩若しくは水和物である上記の使用；

AMPA受容体阻害活性を有する化合物が、 2, 3—ジヒドロキシー 6—ニトロ—7— スルファモイルーベンゾ (F)—キノキサリン又はその塩である上記の使用；

AMPA受容体阻害活性を有する化合物が、 2_ [N— （4—クロ口フエニル） — N— メチルァミノ] 一 4H—ピリド [3， 2-e] 一 1， 3—チアジン一 4一オン又はその塩若しくは水和物である上記の使用；に関する。更にまた、本発明は、患者に治療有効量の AMPA受容体阻害活性を有する化合物を投与することからなる神経膠芽腫治療のための方法；

好ましくは、 AMPA受容体阻害活性を有する化合物が、 [ 7— （ 1 H—イミダゾール一 1一ィル）一 6—二トロー 2 , 3—ジォキソ— 3 , 4—ジヒドロキノキサリン一 1 ( 2 H) 一ィル] 酢酸又はその塩若しくは水和物である上記の方法；

AMPA受容体阻害活性を有する化合物が、 2， 3—ジヒドロキシ— 6—ニトロ— 7—スルファモイルーベンゾ (F)—キノキサリン又はその塩である上記の方法；

AMPA受容体阻害活性を有する化合物が、 2— [N— （4ークロロフヱニル）一 N—メチルァミノ] —4 H—ピリド [ 3， 2 - e ] - 1 , 3—チアジン— 4 _オン又はその塩である上記の方法；に関する。図面の簡単な説明

図 1 図 1はコント口一ル（PBS) 及び化合物 A 100 mg/kgを腫瘍移植翌日より 14日間反復腹腔内投与した際の、腫瘍体積を比較するグラフである。発明を実施するための最良の形態

本発明について更に説明すると，次の通りである。

神経膠芽腫とは、原発性神経膠芽腫及び続発性神経膠芽腫を意味し、好ましくは、原発性神経膠芽腫である。

神経膠芽腫治療剤とは、神経膠芽腫の増殖抑制効果、生存期間の延長、或いは生存率の上昇効果を意味する。

増殖抑制効果とは、本発明に用いる化合物を神経膠芽腫を発症する動物、好ましくはヒトの神経膠芽腫患者に投与したとき、その神経膠芽腫の体積が、該化合物を投与しない場合に比較して減少或いは増殖しない効果を意味する。

生存期間の延長とは、本発明に用いる化合物を神経膠芽腫を発症する動物、好ましくはヒトの神経膠芽腫患者に投与したとき、該疾患に適用される各種治療の処置或いは無処置の平均生存期間よりも生存期間が延長する効果を意味する。好ましくは、前記生存期間が有意に延長する効果である。 , '

生存率の上昇とは、本発明に用いる化合物を神経膠芽腫を発症する動物、好ましくはヒトの神経膠芽腫患者に投与したときの、 1ヶ月乃至 1 2ヶ月間、 1年乃至 5年間、或いは 5年以上の生存率が、該疾患に適用される各種治療の処置或いは無処置の生存率より上昇する効果を意味する。好ましくは前記生存率が有意に上昇する効果である。

本発明に従い使用することのできる化合物は、グルタミン酸レセプターの AMPA受容体を阻害する化合物である。

AMPA受容体の阻害活性を有する化合物とは、 AMPA受容体のリガンド結合部位に競合的或いは、非競合的に結合し、 AMPA受容体とグルタミン酸との結合を阻害する作用を有する化合物、或いは AMPA受容体の結合部位に直接結合しないが、 AMPA受容体のァロステリック調節部位に結合し、グルタミン酸による神経伝達を遮断する作用を有する化合物が含まれる。

好ましくは、 2 , 3—ジヒドロキシ一 6—ニトロ— 7—スルファモイルーベンゾ (F) —キノキサリン（NBQX) 、及び WO 96/10023に開示された AM P A受容体拮抗剤である [ 7— （1 H—イミダゾールー 1—ィル）一 6 _ニトロー2， 3—ジォキソ—3 , 4 —ジヒドロキノキサリン一 1 ( 2 H) —ィル] 酢酸（ゾナンパネル）又はその塩、又は 2 - [N— ( 4—クロ口フエニル）一N—メチルァミノ] — 4 H—ピリド [ 3， 2— e ] 一 1， 3—チアジン一 4一オン（以下、化合物 Bとする。）又はその塩である。

[ 7 - ( 1 H—イミダゾ一ル— 1—ィル） _ 6—二トロ— 2， 3—ジォキソー 3 , 4 —ジヒドロキノキサリン一 1 ( 2 H) —ィル] 酢酸は酸又は塩基と塩を形成する。好ましくは、製薬学的に許容される塩である。

酸との塩としては塩酸，臭化水素酸，ヨウ化水素酸，硫酸，硝酸，リン酸との鉱酸等の無機酸や，ギ酸，酢酸，プロピオン酸，シユウ酸，マロン酸，コハク酸，フマル酸，マレイン酸，乳酸，リンゴ酸，クェン酸，酒石酸，炭酸，ピクリン酸，メン夕スルホン酸，ェン夕スルホン酸，グルタミン酸等の有機酸との酸付加塩を挙げることができる。塩基との塩としてはナトリウム，カリウム，マグネシウム，カルシウム，アルミニウム等の無機塩基，メチルァミン，ェチルァミン，エタノールァミン等の有機塩基又はリジン，アルギニン，オル二チン等の塩基性アミノ酸との塩やアンモニゥム塩が挙げられる。さらに，水和物，エタノール等との溶媒和物や結晶多形を形成することができる。

好ましくは、 [ 7— （1 H—イミダゾ一ルー 1 _ィル）一 6—二トロー 2， 3—ジォキソー 3 , 4—ジヒドロキノキサリン— 1 ( 2 H) —ィル] 酢酸 ·一水和物（化合物 A) である。

2 - [N— （4一クロ口フエニル）一N—メチルァミノ] — 4 H—ピリド [ 3， 2 - e ] — 1， 3—チアジン一 4一オン（化合物 B ) は、酸と塩を形成することができる。酸との塩としては塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸等の無機酸や、ギ酸、酢酸、プロピオン酸、シユウ酸、マロン酸、コハク酸、フマ一ル酸、マレイン酸、乳酸、リンゴ酸、クェン酸、酒石酸、炭酸、ピクリン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸等の有機酸、ァスパラギン酸、グルタミン酸等の酸性アミノ酸との酸付加塩を挙げることができる。好ましくは、フリー体である。

さらに、化合物 B又はその塩は、水和物、エタノール和物等の各種溶媒和物として、あるいはそれらの結晶多形の物質として単離される場合もあり、化合物 Bにはそれら各種の水和物、溶媒和物や結晶多形の物質も包含される。

上記化合物の他、本発明に含まれるの AM P A受容体拮抗剤としては、例えば、以下の表に示す化合物も含まれる。化合物名起源会社文献等

CX 516 Cortex Phar International Clinical

1 -(Piperidin-1 -yl-)-1 -(quinoxalin-6-vl)met maceuticals¹ Psychopharmacology. 11： hanone 13-19, Mar 1996.

LU-73068 Abbott British Journal of

4,5-dihydro-1-methyl-4-oxo-7-(trifluorom GmbH & Pharmacology. 125:

ethyl)-lmidazo[1 ,2-a]quinoxaline-2-carb Co. KG 1258-1266, Nov 1998.

oxylic acid Germany

LU 115455 Abbott European Journal of

N-((1 -(1 -Carboxymethyl-5,6,7,8-tetrahyd GmbH & Neuroscience. 11： 250-262, ro-benzo [fj Co. KG Jan 1999.

quinoxaline-2,3-(1 H,4H)-dion-9-yl)-pyrro

l-3-yl)methyl-N'-(4-carboxyphenyl)-urea

aloracetam Aventis RN119610-26-3

鬥 Aventis WO 9512594

irampanel Boehringer RN206260-33-5

Inqelheim WO 9817652

E-2007 エーザィ Pharmaprojects No. 6432 amino-3-hydroxy-5-methyl-4-isoxazolepr

opionate

Y.,^P,530ddnNaei4ihiz32be . ----

^ i名 -f

SYM-2267 Transgenomic 224th ACS National

Meeting, Boston, MA, United States, August

MEDI-255 Publisher:

American Chemical Society, Washington, D. C.

t山 [ r -V t Jr製制楽

1 ,4-dihydro-6-(1 H-imidazol-1 -yl)-7-nitr

0-2,3-Quinoxalinedione

monohydrochloride

οτ journal OT ivis nGinai

7-Chloro-4-oxo-8-(4H-1 ,2,4-triazol-4-yl Florence Chemistry. 43: 3824-3826, )-4,5-dihydro- [1 ,2,4] triazolo [1 ,5-a] 19 Oct 2000. Italy.

quinoxaline-2-carboxylic acid

Kaitocephalin 東京大学 Society for Nsuroscisnce

3- [5- [2- [ [(3, 5-dichloro4-hydroxy) Abstracts. 24: 465, Part 1 , phenylcarbonyl] amino] carboxyethyl] 1998

-2-carboxypyrrolidin-2yll-Serine

RN： CAS Registry Number

上記化合物は、上記文献に記載された合成方法を参照し、或いは通常の合成法を用いることにより製造することができ、またこれらの化合物の製造、販売、開発会社等から入手することもできる。

本発明の治療剤は、更に他の薬剤との併用が可能である。たとえば、 AMPA受容体拮抗剤は単独で、あるいは他の抗腫瘍剤または他の増殖阻害剤もしくは他の薬剤または栄養剤とともに投与できる。

現在までに多数の抗腫瘍剤が市販或いは開発中にあり、これらは併用薬物として神経膠芽腫の処置に選択することができる。このような抗腫瘍剤は抗生物質型薬剤、アルキル化剤、抗代謝剤、免疫学的薬剤、インターフェロン型薬剤等がある。

具体的には、インターフェロンベータ（免疫強化薬インタ一フエロン）、塩酸ニムスチン（アルキル化薬）、ラニムスチン（アルキル化薬）、エトポシド（アルカロイド）、カルボプラスチン、シスプラチン（白金製剤）、テモゾ口マイド（temozolomide; アルキル化剤）等が挙げられる。

本発明に用いる化合物又はその塩の 1種又は 2種以上を有効成分として含有する製剤は，通常製剤化に用いられる担体ゃ賦形剤，その他の添加剤を用いて調製される。製剤用の担体ゃ賦形剤としては，固体又は液体いずれでも良く，例えば乳糖，ステアリン酸マグネシウム，スターチ，タルク，ゼラチン，寒天，ぺクチン，アラビアゴム，オリ一ブ油，ゴマ油，カカオバタ一，エチレングリコール等やその他常用のものが挙げられる。

投与は錠剤，丸剤，カプセル剤，顆粒剤，散剤，液剤等による経口投与，あるいは静注，筋注等の注射剤，坐剤，経皮等による非経口投与のいずれの形態であってもよい。投与量は症状，投与対象の年令，性別等を考慮して個々の場合に応じて適宜決定されるが，通常成人 1日当り 100〜2000mg, 好ましくは 1日当り 900mg程度である。成人 1 日当り 100〜2000mgを， 1回で，あるいは 2〜4回に分けて投与してもよい。静脈内投与や、持続的静脈内投与の場合には、一日当たり 1時間から 2 4時間で投与しても良い。上記に示すとおり、投与量は種々の状態によって決められる。有効である場合は、上記の範囲よりも少ない投与量を用いることができる。

本発明に用いられる化合物は、主に非経口投与、具体的には、皮下投与、筋肉内投与、静脈内投与、経皮投与、髄腔内投与、硬膜外、関節内、及び局所投与、あるいは可能で有れば経口投与等、種々の投与形態で投与可能である。

非経口投与のための注射剤としては，無菌の水性又は非水性の溶液剤，懸濁剤，乳濁剤を包含する。水性の溶液剤，懸濁剤としては，例えば注射用蒸留水及び生理食塩水が含まれる。非水溶性の溶液剤，懸濁剤としては，例えばプロピレングリコール，ポリエチレングリコール，ォリーブ油のような植物油，エタノールのようなアルコ一ル類，ポリソルベート 8 0 (商品名）等がある。このような組成物はさらに防腐剤，湿潤剤，乳化剤，分散剤，安定化剤（例えば，ラクト一ス），溶解補助剤（例えば，メダルミン酸）のような補助剤を含んでいてもよい。これらは例えばバクテリア保留フィルターを通す濾過，殺菌剤の配合又は照射によって無菌化される。また，これらは無菌の固体組成物を製造し，使用前に無菌水又は無菌の注射用溶媒に溶解して使用することもできる。本発明による経口投与のための固体組成物としては、錠剤、散剤、顆粒剤等が用いられる。このような固体組成物においては、一つまたはそれ以上の活性物質が、少なくとも一つの不活性な希釈剤、例えば乳糖、マンニトール、ブドウ糖、ヒドロキシプロピルセルロース、微結晶セルロース、デンプン、ポリビニルピロリドン、メタケイ酸、アルミン酸マグネシウムと混合される。組成物は、常法に従って、不活性な希釈剤以外の添加剤、例えばステアリン酸マグネシウムのような潤滑剤や繊維素ダルコール酸カルシゥムのような崩壊剤、ラクトースのような安定化剤、グルタミン酸又はァスパラギン酸のような溶解補助剤を含有していてもよい。錠剤又は丸剤は必要によりショ糖、ゼラチン、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセル口一スフタレ一ト等の糖衣、又は胃溶性あるいは腸溶性物質のフィルムで被膜してもよい。

経口投与のための液体組成物は、薬剤的に許容される乳濁剤、溶液剤、懸濁剤、シロップ剤、エリキシル剤等を含み、一般的に用いられる不活性な希釈剤、例えば精製水、エタノールを含む。この組成物は不活性な希釈剤以外に湿潤剤、懸濁剤のような補助剤、甘味剤、風味剤、芳香剤、防腐剤を含有していてもよい。

【実施例】

次に，実施例により本発明をさらに詳細に説明するが，本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。

本発明の治療効果は、以下の実験方法により確認された。実験例 1

in vitro神経膠芽腫（ヒト glioblastoma) 抑制作用

本実験にはヒト glioblastoma細胞（CGNH-89 cell line) を使用し、これらをランダムにグルタミン酸非含有培地（対照）群，グルタミン酸非含有培地にグルタミン酸 100 Mを添加した群およびグルタミン酸非含有培地にグルタミン酸 100 M + NBQX 20 Mを添加した群の 3 グループに群分けし、 48時間培養した。 CGNH-89 cell は 10 %透析血言 ifetal calf serum) を含有" 5—る DMEM (Dulbecco's modified Eagle's medium) 中で培養した。

CGNH-89 cell line

CGNH-89 cell line は、 5 6歳女性の右前頭側頭葉腫瘍より摘出し、 Nicolas らの Explant法（Science 196， 60-63, 1977) に従って樹立した。該 cell lineはグリア細胞繊維性酸性蛋白（GFAP) 、 vimentin、 A2B5、 04及びミエリン基礎蛋白に活性を示す (丄 Neuropathol. Exp. Neurol., 57653-663, 1998)。また、 AMPA受容体のサブユニット GluR1 , GluR2, GluR2/3, GluR4抗体、及び RT-PCTによる GluR1 -4 mRNAの解析の結果、該細胞株は GluR1及び GluR4を発現し、 GluR2及び GluR3は発現していないという原発性神経膠芽腫細胞と同様の特徴を呈する。

なお、本 cell lineは発明者において所有するものであり、入手については発明者に依頼することができる。

抗腫瘍作用の評価は、培養後 48 時間に、 TUNEL (terminal deoxynucleotide transferase (TdT)-mediated dUTP nick end labeling) 法にてアポ I ^一シススコアを算定した。また、 Ki67抗体を用いることによりヒト glioblastoma細胞の増殖能を評価した。結果は平均値士標準誤差で示し、 Student's t-test法を用いて統計解析を行った。 p<0.05を有意水準とした。試験結果

グルタミン酸非含有群では、 48時間の培養期間中、 18% のヒト glioblastoma細胞にアポトーシスが誘導された。また、細胞増殖はほとんど観察されなかった。これに対して、グルタミン酸 100 Mを培地中に添加すると、アポトーシスは 3% まで減少し、細胞増殖能は 18.5% 増加した。一方、 AMPA受容体拮抗薬の NBQXはグルタミン酸誘発アポトーシス抑制作用を阻害し、アポトーシスを誘導した。また、 NBQXはグルタミン酸誘発細胞増殖能を抑制した（表 1 ) 。

【表 1】 AMPA受容体拮抗薬 NBQXの抗腫瘍作用

TUNEしスコア：顕微鏡視野におけるアポト一シスにより断片化された DNAを有する細胞を意味する TUNEL陽性細胞の数を同視野における PI (propidium iodine) 陽性核で示される総細胞数で除した割合を示す。

Ki-67 染色指数：顕微鏡視野における Ki-67 陽性細胞の数を同視野における PI (propidium iodine) 陽性核の総数で除した割合を示す。

*Pく 0.03, ** Pく 0.001 この結果から、 AMPA受容体拮抗薬は、 in vitroにおいて、グルタミン酸による神経膠芽腫細胞のアポトーシス抑制を阻害し，グルタミン酸誘発細胞増殖を抑制する作用を有することが確認された。実験例 2

in vivo神経膠芽腫（ヒト glioblastoma) 抑制作用

本実験にはヌードマウス (5-6 weeks old)を使用し、実験例 1で用いた CGNH-89を皮下に 10⁷個移植した。移植翌日にマウスをランダムに化合物 A 100 mg/kg 投与群 (n=12) および PBS (phosphate buffered saline) 投与群 (n=12) の 2 グループに群分けした。薬物は移植翌日より 14日間反復腹腔内投与し、投与終了後 8日間まで経過観察した。腫瘍サイズはノギスにより隔日に測定し、（length X width²) X 1/2 という計算式により体積を算出した。

結果は平均値土標準誤差で示し、 Student's t-test法を用いて統計解析を行った。 p<0.05を有意水準とした。

試験結果

AMPA受容体拮抗薬の化合物 Aは投与開始後 11および 13 日、投与終了後 2， 4， 6および 8日で有意な増殖抑制作用を示した（図 1 ) 。

この結果から、 AMPA受容体拮抗剤は、 in vivoにおいても、ヒトの神経膠芽腫の病理学的特徴を有する神経膠芽腫細胞の増殖に対して優れた抑制作用を有することが確認された。実験例 3

同所移植モデルにおける神経膠芽腫（ヒト glioblastoma) 抑制作用

CGNH-89をマウスあるいはラットの脳実質に移植する同所移植モデルを用いて、 AMPA 受容体拮抗薬の抗腫瘍作用を測定する。化合物 Aの投与用量は 50mg/kg, 10mg/kgとし、腫瘍移植翌日に連日 1 4日腹腔内投与し、 2 1日に標本作製し病理学的に解析する。実施例（凍結乾燥製剤の製造）

メダルミン 3 3 . 3 gを注射用水 4 0 0 m 1に溶解させ、これに化合物 A 1 0 gを加えて攪拌溶解させた。この液に、注射用水 1400mlを加え、更にマンニトール 40 gを溶解させた後、注射用水を加えて 2000mlとした。この液を常法により除菌ろ過した後、 30ml容量のパイアルに 15ml充填し、常法により凍結乾燥して本発明に用いられる化合物の凍結乾燥製剤を得た。産業上の利用可能性

本発明によれば、 AMPA受容体拮抗作用を有する化合物、好ましくはゾナンパネル又はその塩若しくは水和物、又は NBQX等は、神経膠芽腫、特に悪性度の高い原発性神経膠芽腫に対する治療薬として有用である。

Claims

請求の範囲

1. AMPA受容体阻害活性を有する化合物を有効成分とする神経膠芽腫治療剤。

2. AMPA受容体阻害活性を有する化合物が、 [7— (1H—イミダゾールー 1一ィル） —6—二トロ一 2， 3—ジォキソ一 3， 4—ジヒドロキノキサリン一 1 (2H) —ィル] 酢酸又はその塩若しくは水和物である請求の範囲 1記載の神経膠芽腫治療剤。

3. AMPA受容体阻害活性を有する化合物が、 2， 3—ジヒドロキシ _ 6 _ニトロ一 7 ースルファモイル—ベンゾ (T—キノキサリン又はその塩である請求の範囲 1記載の神

4. AMPA受容体阻害活性を有する化合物が 2— [N— （4—クロ口フエニル） — N— メチルァミノ] 一 4H—ピリド [3， 2— e] — 1， 3—チアジン一 4一オン又はその塩である請求の範囲 1記載の神経膠芽腫治療剤。

5. 治療有効量の AMPA受容体阻害活性を有する化合物を有効成分とし、製薬学的に許容される担体を含む神経膠芽腫治療剤用医薬組成物。

6. AMPA受容体阻害活性を有する化合物が、 [7— (1H—イミダゾールー 1一ィル） —6—二トロ— 2, 3—ジォキソ— 3, 4—ジヒドロキノキサリン— 1 (2H) —ィル] 酢酸又はその塩若しくは水和物を投与することからなる請求の範囲 5記載の医薬組成物。

7. AMPA受容体阻害活性を有する化合物が、 [2, 3—ジヒドロキシ— 6—ニトロ— 7—スルファモイルーベンゾ (F)—キノキサリン又はその塩を投与することからなる請求の範囲 5記載の医薬組成物。

8. AMPA受容体阻害活性を有する化合物が、 2— [N— （4—クロ口フエニル）一 N —メチルァミノ] —4H—ピリド [3， 2— e] — 1， 3一チアジン一 4—オン又はその塩を投与することからなる請求の範囲 5記載の医薬組成物。

9.治療有効量の AMPA受容体阻害活性を有する化合物を含有する神経膠芽腫治療用医薬の製造のための使用。

10. AMPA受容体阻害活性を有する化合物が、 [ 7— （ 1 H—イミダゾ一ルー 1一ィル） —6—二トロー 2， 3—ジォキソー 3， 4ージヒドロキノキサリン一 1 (2H) —ィル] 酢酸又はその塩若しくは水和物である請求の範囲 9記載の使用。

11. AMPA受容体阻害活性を有する化合物が、 2， 3—ジヒドロキシー 6—ニトロ一 7ースルファモイルーベンゾ (F)—キノキサリン又はその塩である請求の範囲 9記載の使用。

12. AMPA受容体阻害活性を有する化合物が、 2— [N— (4—クロ口フエニル） ― N—メチルァミノ] — 4H—ピリド [3， 2-e] — 1， 3 _チアジン一 4一オン又はその塩である請求の範囲 9記載の使用。

13.患者に治療有効量の AMPA受容体阻害活性を有する化合物を投与することからなる神経膠芽腫治療のための方法。

14. AMPA受容体阻害活性を有する化合物が、 [ 7— （ 1 H—イミダゾールー 1ーィル）一 6—ニトロ一 2, 3—ジォキソー 3， 4ージヒドロキノキサリン一 1 (2H) — ィル] 酢酸又はその塩若しくは水和物である請求の範囲 13記載の方法。

15. AMPA受容体阻害活性を有する化合物が、 2， 3—ジヒドロキシ— 6—二トロ— 7—スルファモイル—ベンゾ (F)—キノキサリン又はその塩である請求の範囲 13記載の方法。

16. AMPA受容体阻害活性を有する化合物が、 2— [N— （4ークロロフヱニル）一 N—メチルァミノ] —4H—ピリド [3, 2-e] - 1, 3—チアジン一 4一オン又はその塩である請求の範囲 13記載の方法。