WO2004048973A1

WO2004048973A1 - 生体分子の金属担体への固定法

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Publication number: WO2004048973A1
Application number: PCT/JP2003/015010
Authority: WO
Inventors: Naoki Kimura; Ryuichi Oda
Original assignee: Nisshinbo Industries Inc; Nisshin Spinning Co Ltd
Current assignee: Nisshinbo Holdings Inc
Priority date: 2002-11-25
Filing date: 2003-11-25
Publication date: 2004-06-10
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Description

明細書生体分子の金属担体への固定法技術分野

本発明は、核酸等の生体分子を担体に固定化する方法に関する。本発明の方法は、ハイブリダィゼ一シヨンによる核酸の分析等の操作に有用である。背景技術

従来、ハイブリダィゼ一シヨンによる核酸の分析や、ィムノアッセィ等においては、核酸やタンパク質を膜や平板などの担体に固定化する技術が利用されている。このような生体分子の固定化法として、核酸では、以下のものが知られている。

(1) 5' 末端にチオール基を有する核酸とチオール基を含むビーズ状基材間のジスルフイド結合による固定（P. J.R.Day, P.S.Flora, J.E.Fox, M.R.Walker, B iochem. J. , 278, 735-740 (1991)) 等のような、修飾基を導入した核酸を化学結合させる方法。

(2) 核酸を、紫外線（UV) 照射又は加熱処理により、ニトロセルロース、ナイロンメンブレン、又はポリ一Lーリジン等のカチオンポリマ一で被覆されたガラス等の担体等に、吸着固定させる方法 (J.Sambrok, E.F.Fritsch and T. Mania" s， Molecular Cloning, Cold Spring Harbor Laboratory Pres, Second Edition, pages 2.109-2.113 and pages 9.34-9.46、特表平 1 0— 5 0384 1号公報）。

(3) ポリリジン溶液で処理されたマイクロプレートのゥエル中に核酸を注入し、 37°Cに加熱することにより、物理吸着させることにより固定する方法（G.C.N.Pa rry and A. D. B. Mai com, Biochem. So Trans., 17, 230-231 (1989)) 。

(4) 基材上に結合させたヌクレオチドを用い、基材上で DNAを合成する方法 (国際公開第 9 7Z 1 0 3 6 5号パンフレット（W097/10365) ) 。

(5) カルポジイミド基を有する高分子化合物を担持させたガラス等の基材に核酸を固定する方法（特開平 8— 23 9 7 5号公報）。

しかし、上記の（1) の方法は、極めて特殊な機械と試薬を必要とする。また、 (2) 及び（3) の方法においては、ハイブリダィゼーシヨンを行った場合、特に操作過程で担体から核酸が剥がれ落ち、結果として検出感度が下がったり、再現性が得られない等の欠点がある。また、この方法では、長い核酸は固定できるが、オリゴマー等約 5 Omer以下の短い核酸になると、効率よく固定化できないという欠点がある。尚、これらの方法では、 UV照射量は数十 mJ/cm²程度である。さらに、（4) の方法は、基材上で DNAを合成するために、極めて特殊な機械と試薬を必要とし、さらに、合成できる核酸も 2 5mer程度までに限られるという欠点がある。また、（5) の方法は、基材の材料が限られ、表面のコーティング工程が必要である。発明の開示

本発明は、上記従来技術の状況に鑑み、生体分子、例えば核酸、特に短鎖長の核酸を担体に、簡便、かつ、効率よく固定する方法を提供することを課題とする。本発明者は、上記課題を解決するために鋭意検討を行った結果、核酸溶液を金属製の担体上にスポットした後に、紫外線を担体に照射することによって、核酸を担体に効率よく固定化することができることを見い出し、本発明を完成するに至った。

すなわち本発明は、以下のとおりである。

(1) 生体分子を担体に固定化する方法であって、生体分子の溶液を担体上にスポッ卜する工程と、前記生体分子溶液をスポットした担体に波長 280 nmの成分を含む紫外線を照射する工程を含み、前記担体は金属製であることを特徴とする方法。

(2) 前記紫外線が、波長 220〜300 nmの成分を含むことを特徴とする

(1) に記載の方法。

(3) 前記金属は、周期律表第 2周期〜第 7周期の I、 II、 III、 IV、 V、 VI、 VII 族および遷移元素から選ばれる金属、又は同金属を含む合金である（ 1) 又は

(2) に記載の方法。

(4) 前記紫外線の照射量は 1 0 Om J/cm²以上である（1) 〜（3) のいずれかに記載の方法。 (5) 前記生体分子は核酸、タンパク質、糖、抗原、抗体、ペプチド、酵素から選ばれる（1) 〜（4) のいずれかに記載の方法。

(6) 生体分子が担体上に固定化された生体分子固定化担体の製造法であって、生体分子の溶液を担体上にスポッ卜する工程と、前記生体分子溶液をスポッ卜した担体に波長 280 nmの成分を含む紫外線を照射し、前記生体分子を担体に固定化する工程を含む方法。

(7) 前記紫外線が、波長 220〜 300 nmの成分を含むことを特徴とする (6) に記載の方法。

(8) 前記生体分子は核酸であって、核酸固定化担体はハイブリダィゼーシヨンによる核酸の分析に用いられるものである（6)又は（7) に記載の方法。図面の簡単な説明

図 1は、実施例で作製したオリゴヌクレオチド固定化平板を用いたハイプリダィゼ一シヨンの結果を示す図（写真）。

点線は、実施例 1及び比較例 1でオリゴヌクレオチドを固定化した領域、及びコントロールである 1XTE緩衝液をスポットした領域を示す。発明を実施するための最良の形態

以下、本発明を詳細に説明する。

本発明に用いる担体は、生体分子を固定化するためのものであり、金属製であることを特徴とする。金属としては、紫外線照射により生体分子を固定化することができるものであれば特に制限されず、好ましくは、周期律表第 2周期〜第 7 周期の I、 II、 III、 IV、 V、 VI、 VII族および遷移元素から選ばれる金属、又は同金属を含む合金が挙げられる。

上記周期律表第 2周期〜第 7周期の I、 II、 III、 IV、 V、 VI、 VII族および遷移元素から選ばれる金属として特に好ましいものとしては、アルミニウム、チタン、白金、タングステン、モリブデン、金、銅、ニッケル等が挙げられる。

また、上記合金として具体的には、洋白（成分： Cu， Ni, Zn) 、真鍮（成分： Cu, Zn) 、ブロンズ（成分： Cu, Be) 、モネル（成分： Cu， Ni, Fe, Mn) 、ニッケルコバルト合金（成分： Ni, Co) 、ニッケルクロム合金（成分： Ni, Cr) 、コバルト合金（成分： Co, Ni, Cr) 、ステンレス（成分： Ni, Cr, Fe) 、銀タンダステン（成分： Ag, W) 、 βチタン（成分： Ti, V, A1) 、 αβチタン（成分： Ti， V, AO 、 NT合金（成分： Ti, Ni) 、アルミニウム合金（成分： Al, Cu， Mg, Si, Mn, Zn) 、ジュラルミン（成分： Al, Cu， Si, Fe, Mn, Mg, Zn) 、マグネシゥム合金（成分： Mg, Al, Zn) 、 K24 (成分： Au) 、 K18 (成分： Au, Ag, Cu) 、ベリリウム銅（成分： Cu, Be) 、铸鉄（成分： Fe, Mn, S， 0 、炭素鋼（成分： Fe, C, Si, Mn, P, S) 、青銅錡物（成分： Cu, Sn, Zn, Pb) 、りん青銅錡物（成分： Cu, Ζη,Ρ) 、黄銅铸物（成分： Cu， Zn, Pb) 、マンガン黄銅（成分： Cu， Zn, Mn, Fe, Al) 、シルジン青銅铸物（成分： Cu， Si, Zn) 、アルミニウム青銅铸物 (成分： Cu， Al, Fe, Ni, Mn) 、エリンバー（成分： Ni， Cr, Mn) 、エリンバーェクストラ（成分： Ni, Cr, Co, Mn) 、インパー（成分： Ni， Fe) 、スーパーィンバ一（成分： Fe, Ni, Co) 、ステンレスィンバー (成分： Fe， Co, Cr) 、 Malo ttes (成分： Sn, Bi， Pb) 、リポウイッツ（Lipowitz) (成分： Sn, Bi, Pb, C d) 、ウッズ（Wood' s) (成分： Sn， Bi, Pb, Cd) 、マンガニン（成分： Cu， Mn, Ni, Fe) 、イザベリン（成分： Cu， Mn, Al) 、コンスタンタン（成分： Cu， N i) 、アルクレス (成分： Fe, Cr,Al) 、カンタル (成分： Cr, Fe, Al, Co) 、 7 ルメル（成分： Ni， Al) 、磁性材料（Fe，Ni，Co等強磁性遷移元素を含む材料）、パ一マロイ（成分： Fe， Ni) 、アルパ一ム（成分： Fe， Al) 、フェライト（Fe₂0 ₃を主成分とする複合酸化物）、センダスト（成分： Fe, Si, AO 、スーパーセンダスト（成分： Fe, Si, Al, Ni,) 、アルニコ（成分： Fe， Al, Ni, Co) 、水素吸蔵金属（ランタンニッケル合金（成分： La， Ni) 等）、 Co- Cr系合金、 Sn0₂系酸化物、 Nb- Ti合金、制振合金（振動を低減もしくは吸収、振動の伝播を遮断する合金材料、 A卜 Zn超塑性合金、サイレントァロイ、ニチノール等）、電極用材料、半導体材料（シリコン、ゲルマニウム、力リゥムヒ素等) 等が挙げられる。また、上記金属は、他の金属で蒸着又はメツキ処理（加工）されていても良い。更に、前記金属は、形状を保持するために異なる種類の前記金属が積層してもよく、単一金属であっても良い。

本発明における担体は、本質的に上記金属からなる。担体は、金属のみから構成されていてもよいし、非金属材料上に金属が接着、蒸着又はメツキ等により積層されていてもよい。

上記担体の形状は、特に問われないが、箔（フオイル）状、平板（プレート）状、薄片（ゥエーハ）状、フィルター状、ピーズ状等が挙げられる。また、マイクロタイタープレートのような形状であっても良い。さらに、得られる結果の保存を容易にするため、平板等の裏面をシール等に使用できる材料（接着剤等）を塗布、コート等をすることによって、シールとしても使用することもできる。上記担体の所定の位置に、生体分子の溶液をスポットする。生体分子としては、核酸、タンパク質、糖、抗原、抗体、ペプチド、酵素などが挙げられる。以下、生体分子として核酸を例として説明するが、固定の際に紫外線を照射する以外は、他の物質でも通常固定化に用いられている方法や条件を採用することができる。核酸としては、通常の固相化核酸を用いた核酸同士のハイブリダィゼーシヨンに用いられる固相化核酸と特に変わるところはなく、ハイブリダィゼーシヨンが可能な核酸であれば特に制限されず、例えば、天然又は合成の DNA (オリゴヌクレオチドを含む）もしくは RNA (オリゴヌクレオチドを含む）が挙げられる。また、上記核酸は 1本鎖であっても、 2本鎖であっても構わない。核酸の鎖長は、ハイプリダイゼーションが可能な長さであれば特に制限されないが、通常 5〜 5 0000塩基、好ましくは 20〜 1 0000塩基である。また、核酸の 5 '末端あるいは 3 '末端にチミジン等、紫外線によつて反応活性基を有するォリゴヌクレオチドの重合体を有しても良い。

核酸を溶解する溶媒も特に制限されず、蒸留水、又は通常核酸溶液の調製に用いられる緩衝液、例えば TE緩衝液（lOmM Tris塩酸， pH8.0/lmM EDTA) 等の Tris 緩衝液、食塩を含む水溶液、カルボン酸塩を含む水溶液（クェン酸ナトリウム、クェン酸アンモニゥム、酢酸ナトリウム等）、スルホン酸塩を含む水溶液（ドデシル硫酸ナトリウム、ドデシル硫酸アンモニゥム等）、ホスホン酸塩を含む水溶液等（リン酸ナトリウム、リン酸アンモニゥム等）等を挙げることができる。また、一般に市販されている溶媒、 Micro Spotting Solution (TeleCHem Internat ional, Inc.社製）等も挙げることができる。また、核酸溶液の濃度も特に制限されないが、通常 limnol/mI〜lfmol/ml、好ましくは 100pmol/ml〜100fmol/mlの濃度である。

核酸溶液を担体上にスポットする方法としては、ピぺットで核酸溶液を担体上に滴下する方法、又は市販のスポッ夕を用いる方法等が挙げられる。スポットの形状及びスポット量としては、核酸溶液をスポットした位置を把握することができる程度であれば、特に制限されないが、形状としては点状又は円状が好ましい。また、好ましいスポット量は 10nl〜10mlである。核酸溶液は、担体上に 1箇所又は複数箇所にスポットされる。スポットされる核酸溶液は、 1種類でも 2種類又はそれ以上であってもよい。尚、担体に核酸が固定されたことを示す陽性コントロールとして、標識した核酸を固定化しておいてもよい。

本発明の好ましい形態においては、核酸溶液を担体上にスポットした後に、 2 8 O nmの波長を含む紫外線を照射する。前記紫外線としては、波長 2 2 0〜 3 0 0 n mの成分を含む紫外線が挙げられる。また、前記核酸溶液をスポット後紫外線照射前に乾燥させることができる。前記核酸溶液の乾燥方法としては、自然に乾燥させてもよく、加熱して乾燥させてもよい。加熱する場合の温度は、通常 3 0〜 1 0 0 °C、好ましくは 3 5〜4 5。Cである。

次に、担体、少なくとも担体の核酸を固定した部位に、波長 280nmの成分を含む紫外線を照射する。具体的には、波長 280nmの単色光でもよいし、波長 280nmを含むプロ一ドな波形を有する紫外線であっても良い。波長 280nmを含むブロードな波形を有する紫外線としては、例えば波長 220〜300nmの成分を含む紫外線が挙げられる。また、波長 220〜300nmの成分を含む紫外線としては、 2 8 0 n m付近に極大値を有する紫外線が挙げられる。照射量は、累積照射量として通常 l OOmV cm²以上、好ましくは 200mJ/cm²以上である。

上記のようにして、核酸を担体上に固定化することにより、核酸固定化担体が製造される。本発明の方法により得られる核酸固定化担体は、例えば、ハイプリダイゼーシヨンによる核酸の分析に用いることができる。本発明の方法により担体に固定化された核酸は、通常のハイブリダィゼーシヨンの条件下で担体から脱離しにくいため、紫外線照射を行わない場合に比べて検出感度が良好で、再現性も良い。ハイブリダィゼ一シヨン及びその検出は、通常の固相化核酸を用いたハイブリダィゼーションと同様にして行うことができる。本発明では、核酸を固定化するのに用いる担体として、安価な金属材料を用いることができるので、低コスト化が可能である。また、金属材料は形成が容易なため、様々な形態の DNAマイクロアレイの作製が容易となる。また、長期保存が可能であり、保存安定性に優れている。さらに、本発明の方法は、担体表面のコーティング工程が不要であり、電極等に使用される金属に直接核酸を固定することができる。電極に核酸を固定することにより溶液中の相補的な核酸と固定された核酸とを効率良くハイブリダィゼーションを行うことができる。核酸は負電化をもっている為、正極に引き寄せられるため、正極の付近は核酸濃度が高くなりやすく、ハイブリダィゼ一ションが効率よく進むと考えられる。実施例

以下、実施例により本発明をさらに具体的に説明する。実施例 1 核酸の平板への固定化

常法に従い、オリゴヌクレオチド合成機（Perkin- elmer Applied biosystem s) を用いて、配列番号 1、 2に示す塩基配列を有するオリゴヌクレオチド（21m er) を合成した。また、プロ一ブとして、配列番号 3に示す塩基配列を有する D NA (262bp) を調製した。尚、配列番号 1に示すオリゴヌクレオチド及びプロ —ブは、 5 ' 末端をピオチン化した。また、配列番号 2に示すオリゴヌクレオチドはピオチン化プローブと相補性を持っている。これらのオリゴヌクレオチドを lpmol//i 1になるように 1XTE緩衝液 (10mM Tris塩酸, H 8/lmM EDTA) に溶解した。

市販品のアルミニウム箔（三菱アルミニウム株式会社製）の所定の位置に、上記オリゴヌクレオチド溶液それぞれを、 3箇所づっスポットした（図 1) 。スポットの量は 0.5 1づっであり、スポットの大きさは直径約 1腳であった。このァルミ二ゥム箔を乾燥機に入れ、 37°Cで 20分乾燥した。次に Uvstratalinker 2400 (STRATAGENE社製) を用い、波長 280nmを含む紫外線を 16cmの距離から 250mJ/cm² 照射した。照射時間は 100秒であった。その後、前記アルミニウム箔を水中で 30 分間振とうして洗浄した後、乾燥させた。一方、コントロールとして核酸を含まない溶液（1XTE緩衝液）も同様にアルミニゥム箔にスポットし、固定化の操作を行った。比較例 1

予め、アルミニウム箔に、 Uvstratal inker 2400 (STRATAGENE社製）を用い、波長 280nmを含む nmの紫外線を 16cmの距離から 250mJ/cm²照射した。実施例 1に記載のオリゴヌクレオチド溶液それぞれを、アルミニウム箔の所定の位置に、 3箇所づっスポットした。スポットの量は 0.5 1づっであり、スポットの大きさは直径約 lmmであった。照射時間は 100秒であった。このアルミニウム箔を乾燥機に入れ 37 で 20分乾燥した。その後、前記アルミニウム箔を水中で 30分間振とうして洗浄し、乾燥させた。

一方、コントロールとして核酸を含まない溶液（1XTE緩衝液）も同様にアルミニゥム箔にスポットし、固定化の操作を行った。実施例 2 八イブリダィゼ一シヨン及びその検出

(1) ハイブリダィゼ一ション

実施例 1及び比較例 1のオリゴヌクレオチド固定化アルミニウム箔の核酸を固定化した部分に、 3pmolピオチン化プローブ（262bp) を含むハイブリダィゼーシヨン溶液（Arrayit UniHyb (TeleCHem International, Inc.) 60 1をのせ、ァルミ二ゥム箔を水が浸入しないケース (八イブリカセッ卜) に入れてそのケースごとウォー夕一パスに沈め、 45°Cで 2時間加熱した。

(2) ポスト八イブリダィゼ一シヨン

上記ハイブリダィゼーションの後、以下の条件でボストハイブリダィゼ一ション洗浄を行い、オリゴヌクレオチド固定化アルミニウム箔に非特異的に吸着したプローブを除去した。

〔ポストハイプリダイゼーション洗浄の条件〕

1 ) 2XSSC, 0.1%SDS; 室温、 5分間、 2回

2) 0.2XSSC, 0.1%SDS; 40°C、 5分間、 2回

3) 2XSSC; 室温 1分間、 3回 ( 3 ) アルミニウム箔に固定化されたオリゴヌクレオチド及びハイプリダイゼーションの検出

アルミニウム箔のハイプリダイゼーション溶液を載せた部分に、乳夕ンパクを含むブロッキング溶液（ブロックエース雪印乳業製） 1. 5mlをのせ、室温で 3 0分間ブロッキングを行った。ブロッキング溶液を除いた後、ストレブトァビジンーアルカリホスファタ一ゼコンジュゲート溶液（VECTOR社製）を 1. 5mlのせ、室温で 30分間反応させた。つぎに、アルミニウム箔を TBST (50mM Tr i s-HCl (pH7. 5) , 0. 15M NaC l , 0. 05% Tween 20) 溶液に浸し、 5分間振とうして反応しなかつたコンジュゲ一トを除去した。最後に、アルミニウム箔のハイブリダィゼーシヨン溶液を載せた部分に基質溶液（TMB) を 1. 5mlのせて、 3 0分間放置し、発色反応を行つた。

その結果を、表 1に示す。表 1中の記号の意味は、表 2以下でも同様である。配列番号 1のオリゴヌクレオチドを固定化した位置のシグナルは固定化されたォリゴヌクレオチドの量を、配列番号 2のオリゴヌクレオチドを固定化した位置のシグナルはハイブリダィゼーシヨンの強度を、それぞれ示す。表 1 固定化したオリゴヌクレオチド配列番号 1 配列番号 2 実施例 1 ◎ ◎

比較例 1 X X

◎：大部分のシグナルが非常に高感度かつ非常に明瞭に現れた。

〇：大部分のシク"ナルが高感度かつ明瞭に現れた。

△：一部のシク'ナルが低感度または不明瞭に現れた。

X ：大部分のシク'ナルが低感度または不明瞭に現れた。または

シグナルが全く現れなかった。表 1の結果から明らかなように、実施例 1のオリゴヌクレオチド固定化アルミ二ゥム箔は、比較例 1のオリゴヌクレオチド固定化アルミニウム箔に比べて、ォリゴヌクレオチドが確実にアルミニウム箔上に固定化されていることがわかる。また、実施例 1のオリゴヌクレオチド固定化アルミニウム箔では、ハイブリダィゼーシヨンシグナルも明瞭に現れた。なお、コントロールの位置（核酸を含まな •い溶液をスポットした箇所）にはシグナルはまったく現れなかった。実施例 3 核酸の平板への固定化

常法に従い、オリゴヌクレオチド合成機（Perkin- elmer Applied biosystem s) を用いて、配列番号 4、 5及び 6に示す塩基配列を有するオリゴヌクレオチド（31mer) を合成した。尚、配列番号 4に示すオリゴヌクレオチドは、 5 ' 末端をピオチン化した。また、配列番号 4及び 5に示すオリゴヌクレオチドは、実施例 1に記載の配列番号 1及び 2に示すオリゴヌクレオチドの 5 ' 末端に 1 0個のチミジンが連結した配列を有している。配列番号 5のオリゴヌクレオチドは、前記ピオチン化プローブと相補性を持っており、配列番号 6に示すオリゴヌクレォチドは、配列番号 5に示すォリゴヌクレオチドと 1塩基配列が異なるため相補性を持っていない。これらのオリゴヌクレオチドを lOOpmol/mlになるように 5XS SCに溶解した。

市販品のステンレス製の平板（特殊金属工業株式会社製）の所定の位置に、上記オリゴヌクレオチド溶液それぞれを、スポッター（Pyxsis5500 CARTESIAN社製）を用いて 3箇所づっスポットした。スポットの大きさは直径約 0.3iMiであつた。この平板を乾燥機に入れ、 42 で 2 0分乾燥した。次に Uvstratalinker 2 400 (STRATAGENE社製）を用い、波長 280nmを含む紫外線を 16cmの距離から 300mJ/ cm²照射した。照射時間は 1 2 0秒であった。その後、前記平板を水中で 3 0分間振とうして洗浄した後、乾燥させた。

一方、コントロールとして核酸を含まない溶液（2xSSC緩衝液）も同様に平板にスポットし、固定化の操作を行った。比較例 2

予め、ステンレス製の平板に、 Uvstratalinker 2400 (STRATAGENE社製）を用レ波長 280nmを含む紫外線を 16cmの距離から 300mJ/cm²照射した。実施例 3に記載のオリゴヌクレオチド溶液それぞれを、ステンレス製の平板の所定の位置に、スポッ夕一（Pyxs i s 5500 CARTESIAN社製）を用いて 3箇所づっスポットした。照射時間は 120秒であった。この平板を乾燥機に入れ 4 2 で 2 0分乾燥した。その後、前記平板を水中で 3 0分間振とうして洗浄し、乾燥させた。

一方、コントロールとして核酸を含まない溶液（2xSSC緩衝液）も同様に平板にスポットし、固定化の操作を行った。実施例 4 ハイブリダィゼーシヨン及びその検出

実施例 3及び比較例 2のオリゴヌクレオチド固定化平板の核酸を固定化した部分に、 3pmo lピオチン化プローブ（262bp) を含むハイブリダィゼーシヨン溶液 (Arrayi t UniHyb (Tel eCHem Int ernat i onal , Inc. ) 60mlをのせ、平板を水が浸入しないケース (八イブリカセット）に入れてそのケースごとウォーターパスに沈め、 451：で 2時間加熱した。

以下、実施例 2と同様にしてポストハイプリダイゼーシヨン、及び平板に固定化されたオリゴヌクレオチドならびにハイプリダイゼーションの検出を行った。その結果を、表 2に示す。配列番号 4のオリゴヌクレオチドを固定化した位置のシグナルは固定化されたオリゴヌクレオチドの量を、配列番号 5のオリゴヌクレォチドを固定化した位置のシグナルは八イブリダィゼーションの強度を、それぞれ示す。

^{¾ 2}

固定化したオリゴヌクレオチド配列番号 4 配列番号 5 配列番号 6 実施例 3 ◎ ◎ X

比較例 2 X X X

表 2の結果から明らかなように、実施例 3のオリゴヌクレオチド固定化平板は、比較例 2のオリゴヌクレオチド固定化平板に比べて、オリゴヌクレオチドが確実に平板上に固定化されていることがわかる。また、実施例 3のオリゴヌクレオチド固定化平板では、ハイブリダィゼーシヨンシグナルも明瞭に現れた。ここで、コントロールの位置（核酸を含まない溶液をスポットした箇所）及び配列番号 6 にはシグナルはまったく現れなかった。実施例 5 核酸の平板への固定化

銀タングステン製の平板（ィースタン技研株式会社製）の所定の位置に、実施例 3で調製したオリゴヌクレオチド溶液それぞれを、スポッターを用いて 3箇所づっスポットした。スポットの大きさは直径約 0. 3mmであった。この平板を乾燥機に入れ、 4 2 °Cで 2 0分乾燥した。次に Uvs t rat a l i nker 2400 (STRATAGENE社製）を用い、波長 280nmを含む紫外線を 16cmの距離から 400mJ/cin²照射した。照射時間は 1 6 0秒であった。その後、前記平板を水中で 3 0分間振とうして洗浄した後、乾燥させた。

一方、コントロールとして核酸を含まない溶液（2xSSC緩衝液）も同様に平板にスポットし、固定化の操作を行った。比較例 3

予め、銀タングステン製の平板に、 Uvs t rat a l i nker 2400 (STRATAGENE社製）を用い、波長 280nmを含む紫外線を 16cmの距離から 400mJ/cm²照射した。実施例 3 に記載のオリゴヌクレオチド溶液それぞれを、銀タングステン製の平板の所定の位置に、スポッター（Pyxs i s 5500 CARTES IAN社製）を用いて 3箇所づっスポッ卜した。照射時間は 160秒であった。この平板を乾燥機に入れ 4 2 で 2 0分乾燥した。その後、前記平板を水中で 3 0分間振とうして洗浄し、乾燥させた。一方、コントロールとして核酸を含まない溶液（2xSSC緩衝液）も同様に平板にスポットし、固定化の操作を行った。実施例 6 ハイブリダイゼーション及びその検出

実施例 5及び比較例 3のオリゴヌクレオチド固定化平板の核酸を固定化した部分に、 3pmo lピオチン化プローブ（262bp) を含むハイブリダィゼ一シヨン溶液 (Array" UniHyb (Te leCHem Internat i onal , Inc. ) 60mlをのせ、平板を水が浸入しないケース（ハイプリカセット）に入れてそのケースごとウォー夕一パスに沈め、 45°Cで 2時間加熱した。

以下、実施例 2と同様にしてポストハイブリダィゼーシヨン、及び平板に固定化されたオリゴヌクレオチドならびにハイプリダイゼーシヨンの検出を行った。その結果を、表 3に示す。

固定化したォリゴヌクレオチド配列番号 4 配列番号 5 配列番号 6 実施例 5 ◎ ◎ X

比較例 3 X X X

表 3の結果から明らかなように、実施例 5のオリゴヌクレオチド固定化平板は、比較例 3のオリゴヌクレオチド固定化平板に比べて、オリゴヌクレオチドが確実に平板上に固定化されていることがわかる。また、実施例 5のオリゴヌクレオチド固定化平板では、ハイブリダィゼーシヨンシグナルも明瞭に現れた。ここで、コントロールの位置（核酸を含まない溶液をスポットした箇所）及び配列番号 6 にはシグナルはまったく現れなかった。実施例 7 核酸の平板への固定化

常法に従い、配列番号 7及び 8に示す塩基配列を有するオリゴヌクレオチドをブライマーとして、 A D N A断片（Α) を増幅した。得られた断片をァガロース電気泳動し、ェチジゥムブロマイド染色により検出した結果、その断片の長さは約 3 0 0 bであった。また、前記 A DNAと相補的でない λ ϋΝΑ断片（Β) (約 3 0 0 b ) も同様に増幅した。市販品のアルミニウム箔（三菱アルミニウム株式会社製）の所定の位置に、上記 ADNA溶液それぞれを、スポッター（Pyxsis5500 CARTESIAN社製）を用いて 3 箇所づっスポットした。スポットの大きさは直径約 0.3龍であった。このアルミ二ゥム箔を乾燥機に入れ、 42 で 2 0分乾燥した。次に Uvstratalinker 2400 (STRATAGENE社製）を用い、波長 280nmを含む紫外線を 16cmの距離から 600mJ/cm² 照射した。照射時間は 240秒であった。その後、前記アルミニウム箔を水中で 30分間振とうして洗浄した後、乾燥させた。

一方、コントロールとして核酸を含まない溶液（1XTE緩衝液）も同様にアルミニゥム箔にスポットし、固定化の操作を行った。比較例 4

実施例 7に記載の ADNA溶液（濃度 lpmol/^1) それぞれを、アルミニウム箔の所定の位置に、スポッター（Pyxsis5500 CARTESIAN社製）を用いて 3箇所づっスポットした。このアルミニウム箔を乾燥機に入れ 42°Cで 20分乾燥した。その後、前記アルミニウム箔を水中で 3 0分間振とうして洗浄し、乾燥させた。

一方、コントロールとして核酸を含まない溶液（1XTE緩衝液）も同様にアルミニゥム箔にスポットし、固定化の操作を行った。実施例 8 ハイブリダィゼーシヨン及びその検出

( 1 ) ハイブリダイゼーシヨン

配列番号 7に示す塩基配列を有するオリゴヌクレオチドの 5 ' 末端にピオチンを標識したォリゴヌクレオチド及び配列番号 8に示す塩基配列を有するオリゴヌクレオチドをプライマ一として、 ADNA断片（C) を増幅した。この ADNA断片 (C) の配列は、実施例 7で作製した ADNA断片（A) の配列と同一である。

実施例 7及び比較例 4の ADNA固定化アルミニウム箔を 9 5 に暖めた水中に 5分間浸し、 4°Cに冷やした水中に 5分間浸した。次いで、 ADNA固定化アルミ二ゥム箔の核酸を固定化した部分に、前記 0.5pmolピオチン化 ADNA (C) を含むハイブリダィゼーシヨン溶液 (Arrayit UniHyb (TeleCHem International, In c.) 60mlをのせ、アルミニウム箔を水が浸入しないケース（ハイプリカセット）に入れてそのケースごとウォーターバスに沈め、 55 で 2時間加熱した。

(2) ポストハイプリダイゼ一シヨン

上記ハイプリダイゼ一ションの後、以下の条件でボストハイブリダィゼーション洗浄を行い、 ADNA固定化アルミニウム箔に非特異的に吸着したプローブを除去した。

〔ボストハイブリダィゼーション洗浄の条件〕

1 ) 2XSSC, 0.1%SDS; 室温、 5分間、 2回

2) 0.2XSSC, 0. USDS; 40°C、 5分間、 2回

3) 2XSSC; 室温 1分間、 3回

(3) ハイブリダィゼーシヨンの検出

アルミニウム箔のハイブリダィゼーシヨン溶液を載せた部分に、乳タンパクを含むブロッキング溶液（ブロックエース雪印乳業製） 1.5mlをのせ、室温で 3 0分間ブロッキングを行った。ブロッキング溶液を除いた後、ストレブトァビジンーアル力リホスファタ一ゼコンジュゲート溶液 (VECTOR社製) を 1.5mlのせ、室温で 30分間反応させた。つぎに、アルミニウム箔を TBST (50mM Tris-HCl (pH7. 5) , 0.15M NaCl, 0.05¾ Tween 20) 溶液に浸し、 5分間振とうして反応しなかつたコンジュゲートを除去した。最後に、アルミニウム箔（はく）のハイブリダィゼーシヨン溶液を載せた部分に基質溶液（TMB) を 1.5mlのせて、 3 0分間放置し、発色反応を行った。

その結果を表 4に示す。 4

固定化した核酸

ADNA断片（A) ADNA断片（B) 実施例 7 ◎ X

比較例 4 X X 表 4の結果から明らかなように、ハイプリダイゼーシヨンシグナルが特異的かつ明瞭に現れたことから、実施例 7の ADNA断片固定化アルミニウムはくは ADNA 断片が確実にアルミニウムはく上に固定化されていることがわかる。一方、比較例 4の λ DNA断片固定化アルミニウムはくには、シグナルはまったく現れなかつた。さらに、実施例 7の λΜΑ断片固定化アルミニウムはく及び比較例 4の ADNA 断片固定化アルミニウムはくのコントロールの位置（核酸を含まない溶液をスポットした箇所）にもシグナルはまったく現れなかった。実施例 9 核酸の平板への固定化

市販品のステンレス製の平板（特殊金属工業株式会社製）の所定の位置に、実施例 7に記載の ADNA溶液それぞれを、スポッター（Pyxsis5500 CARTESIAN社製）を用いて 3箇所づっスポットした。スポットの大きさは直径約 0.3匪であつた。この平板を乾燥機に入れ、 42°Cで 2 0分乾燥した。次に Uvstratalinker 2 400 (STRATAGENE社製）を用い、波長 280nmを含む紫外線を 16cmの距離から 1200mJ /cm²照射した。照射時間は.48 0秒であった。その後、前記平板を水中で 3 0分間振とうして洗浄した後、乾燥させた。

一方、コントロールとして核酸を含まない溶液（1XTE緩衝液）も同様に平板にスポットし、固定化の操作を行った。比較例 5

実施例 7記載の ADNA溶液（濃度 lpmol/ tl) それぞれを、ステンレス製の平板の所定の位置に、スポッター（Pyxsis5500 CARTESIAN社製）を用いて 3箇所づつスポットした。この平板を乾燥機に入れ 42 で 20分乾燥した。その後、前記平板を水中で 3 0分間振とうして洗浄し、乾燥させた。

一方、コントロールとして核酸を含まない溶液（1XTE緩衝液）も同様に平板にスポットし、固定化の操作を行った。実施例 10 ハイブリダイゼーシヨン及びその検出実施例 9及び比較例 5の ADNA固定化平板を 95 に暖めた水中に 10分間浸し、 4°Cに冷やした水中に 5分間浸した。次いで、 ADNA固定化平板の核酸を固定化した部分に、実施例 8に記載の lpmolピオチン化 ADNA (0 を含むハイプリダイゼーシヨン溶液 (Arrayit UniHyb (TeleCHem International, Inc. ) 60mlをのせ、平板を水が浸入しないケース（ハイプリカセット）に入れてそのケースごとウォーターバスに沈め、 60°Cで 2時間加熱した。

以下、実施例 8と同様にしてボスト八ィプリダイゼーション及び八イブリダィゼーシヨンの検出を行った。その結果を表 5に示す。

固定化した核酸

ADNA断片（A) λΜΑ断片（Β) 実施例 9 ◎ X

比較例 5 X X

表 5の結果から明らかなように、ハイプリダイゼ一ションシグナルが特異的かつ明瞭に現れたことから、実施例 9の λ DNA断片固定化平板は λ DNA断片が確実に平板上に固定化されていることがわかる。一方、比較例 5の ADNA断片固定化平板には、シグナルはまったく現れなかった。さらに、実施例 9の λϋΝΑ断片固定化平板及び比較例 5の λ DNA断片固定化平板のコントロールの位置（核酸を含まない溶液をスポットした箇所）にもシグナルはまったく現れなかった。実施例 1 1 核酸の平板への固定化

市販品のシリコンゥエー八（三菱住友シリコン株式会社製）の所定の位置に、実施例 7に記載の ADNA溶液それぞれを、スポッター（Pyxsis5500 CARTESIAN社製）を用いて 3箇所づっスポットした。スポットの大きさは直径約 0.3mmであつた。このシリコンゥエーハを乾燥機に入れ、 42°Cで 20分乾燥した。次に Uvst ratal inker 2400 (STRATAGENE社製) を用い、波長 280nmを含む紫外線を 16cmの距離から 1200mJ/cm²照射した。照射時間は 48 0秒であった。その後、前記シリコンゥエーハを水中で 3 0分間振とうして洗浄した後、乾燥させた。

一方、コントロールとして核酸を含まない溶液（1XTE緩衝液）も同様にシリコンゥエーハにスポットし、固定化の操作を行った。比較例 6

実施例 7記載の ADNA溶液（濃度 lpmol/ 1) それぞれを、シリコンゥエー八の所定の位置に、スポッター（Pyxsis5500 CARTESIAN社製）を用いて 3箇所づっスポットした。この平板を乾燥機に入れ 42°Cで 2 0分乾燥した。その後、前記シリコンゥエーハを水中で 3 0分間振とうして洗浄し、乾燥させた。実施例 12 ハイプリダイゼーシヨン及びその検出

実施例 1 1及び比較例 6の ADNA固定化シリコンゥエーハを 9 5 に暖めた水中に 1 0分間浸し、 4°Cに冷やした水中に 5分間浸した。次いで、 λϋΝΑ固定化シリコンゥエー八の核酸を固定化した部分に、実施例 8に記載の lpmolピオチン化 ADNA (C) を含むハイプリダイゼーシヨン溶液（Arrayit UniHyb (TeleCHem I nternational, Inc. ) 60mlをのせ、シリコンゥエーハを水が浸入しないケース (八イブリカセット）に入れてそのケースごとウォーターバスに沈め、 60°Cで 2 時間加熱した。

以下、実施例 8と同様にしてボスト八イブリダィゼーション及び八イブリダィゼーシヨンの検出を行った。その結果を表 6に示す。表 6 固定化した核酸

ADNA断片（A) ADNA断片（B) 実施例 1 1 X

比較例 6 X 表 6の結果から明らかなように、ハイブリダイゼーシヨンシグナルが特異的かつ明瞭に現れたことから、実施例 1 1の ADNA断片固定化シリコンゥェ一ハは NA断片が確実にシリコンゥエーハ上に固定化されていることがわかる。一方、比較例 6の ADNA断片固定化シリコンゥェ一八には、シグナルはまったく現れなかつた。さらに、実施例 1 1の ADNA断片固定化シリコンゥェ一ハ及び比較例 6の ADNA断片固定化シリコンゥエーハのコントロールの位置（核酸を含まない溶液をスポッ卜した箇所）にもシグナルはまったく現れなかった。実施例 1 3 核酸の平板への固定化

ガラス板に金蒸着させた基板の所定の位置に、実施例 7に記載の ADNA溶液それぞれを、スポッター（Pyxsis5500 CARTESIAN社製）を用いて 3箇所づっスポットした。スポットの大きさは直径約 0.3iMiであった。この金蒸着ガラス基板を乾燥機に入れ、 42°Cで 2 0分乾燥した。次に Uvstratalinker 2400 (STRATAGEN E社製）を用い、波長 280nmを含む紫外線を 16cmの距離から 1200mJ/cm²照射した。照射時間は 48 0秒であった。その後、前記金蒸着ガラス基板を水中で 30分間振とうして洗浄した後、乾燥させた。

一方、コントロールとして核酸を含まない溶液（1XTE緩衝液）も同様に金蒸着ガラス基板にスポットし、固定化の操作を行った。比較例 7

実施例 7記載の ADNA溶液（濃度 lpmol / 1) それぞれを、金蒸着ガラス基板の所定の位置に、スポッター（Pyxsis5500 CARTESIAN社製）を用いて 3箇所づっスポットした。この平板を乾燥機に入れ 42でで 2 0分乾燥した。その後、前記金蒸着ガラス基板を水中で 3 0分間振とうして洗浄し、乾燥させた。実施例 14 ハイブリダィゼーシヨン及びその検出

実施例 1 3及び比較例 7の ADNA固定化金蒸着ガラス基板を 9 5 に暖めた水中に 1 0分間浸し、 4°Cに冷やした水中に 5分間浸した。次いで、 ADNA固定化金蒸着ガラス基板の核酸を固定化した部分に、実施例 8に記載の lpmolピオチン化 ADNA (0 を含むハイブリダィゼーシヨン溶液（Arrayit UniHyb (TeleCHem I nternational, Inc.) 60mlをのせ、金蒸着ガラス基板を水が浸入しないケース (ハイプリカセット）に入れてそのケースごとゥォ一ターバスに沈め、 60 で 2 時間加熱した。

以下、実施例 8と同様にしてボストハイプリダイゼーシヨン及びハイブリダィゼーシヨンの検出を行った。その結果を表 7に示す。

固定化した核酸

ADNA断片（A) ADNA断片（B) 実施例 1 3 ◎ X

比較例 7 X X

表 7の結果から明らかなように、ハイブリダィゼーションシグナルが特異的かつ明瞭に現れたことから、実施例 1 3の ADNA断片固定化金蒸着ガラス基板は NA断片が確実に金蒸着ガラス基板上に固定化されていることがわかる。一方、比較例 7の λϋΝΑ断片固定化金蒸着ガラス基板には、シグナルはまったく現れなかつた。さらに、実施例 1 3の ADNA断片固定化金蒸着ガラス基板及び比較例 7の ADNA断片固定化金蒸着ガラス基板のコントロールの位置（核酸を含まない溶液をスポットした箇所）にもシグナルはまったく現れなかった。実施例 1 5 核酸の平板への固定化

市販の銅箔（日鉱金属加工株式会社製）の所定の位置に、実施例 7に記載の λ DNA溶液それぞれを、スポッター（PyxsisSSOO CARTESIAN社製）を用いて 3箇所づっスポットした。スポットの大きさは直径約 0.3mmであった。この銅箔を乾燥機に入れ、 4 で 2 0分乾燥した。次に Uvstratalinker 2400 (STRATAGENE社製）を用い、波長 2 54nmを含む紫外線を 16cmの距離から 1200mJ/cm²照射した。照射時間は 480秒であった。その後、前記銅箔を水中で 30分間振とうして洗浄した後、乾燥させた。

一方、コントロールとして核酸を含まない溶液（1XTE緩衝液）も同様に銅箔にスポットし、固定化の操作を行った。比較例 8

実施例 7記載の ADNA溶液（濃度 lpmol/t ) それぞれを、銅箔の所定の位置に、スポッ夕一（Pyxsis5500 CARTESIAN社製）を用いて 3箇所づっスポットした。この銅箔を乾燥機に入れ 42°Cで 20分乾燥した。その後、前記銅箔を水中で 3 0分間振とうして洗浄し、乾燥させた。実施例 16 ハイブリダィゼーシヨン及びその検出

実施例 1 5及び比較例 8の ADNA固定化銅箔を 9 5でに暖めた水中に 1 0分間浸し、 4 に冷やした水中に 5分間浸した。次いで、 ADNA固定化銅箔の核酸を固定化した部分に、実施例 8に記載の lpmolピオチン化 ADNA (C) を含むハイブリダィゼ一シヨン溶液 (Arrayit UniHyb (TeleCHem International, Inc.) 60ml をのせ、銅箔を水が浸入しないケース (八イブリカセッ卜) に入れてそのケースごとウォー夕一バスに沈め、 60 °Cで 2時間加熱した。

以下、実施例 8と同様にしてボスト八イブリダイゼ一ション及び八ィブリダイゼ一シヨンの検出を行った。その結果を表 8に示す。表 8 固定化した核酸

ADNA断片（A) ADNA断片（B) 実施例 1 5 ◎ X

比較例 8 X X

表 8の結果から明らかなように、ハイブリダイゼーシヨンシグナルが特異的かつ明瞭に現れたことから、実施例 1 5の ADNA断片固定化銅箔は ADNA断片が確実に銅箔上に固定化されていることがわかる。一方、比較例 8の ADNA断片固定化銅箔には、シグナルはまったく現れなかった。さらに、実施例 1 5の ADNA断片固定化金蒸着ガラス基板及び比較例 8の ADNA断片固定化銅箔のコントロールの位置（核酸を含まない溶液をスポットした箇所）にもシグナルはまったく現れなかった。実施例 1 7 核酸の平板への固定化

市販の純ニッケル箔（日鉱金属加工株式会社製）の所定の位置に、実施例 7に記載の ADNA溶液それぞれを、スポッター (Pyxsis5500 CARTESIAN社製）を用いて 3箇所づっスポットした。スポットの大きさは直径約 0.3MIであった。この純ニッケル箔を乾燥機に入れ、 42°Cで 2 0分乾燥した。次に Uvstratalinker 240 0 (STRATAGENE社製）を用い、波長 280nmを含む紫外線を 16cmの距離から 1200mJ/c m²照射した。照射時間は 48 0秒であった。その後、前記純ニッケル箔を水中で 30分間振とうして洗浄した後、乾燥させた。

一方、コントロールとして核酸を含まない溶液（1XTE緩衝液）も同様に純二ッケル箔にスポットし、固定化の操作を行った。比較例 9

実施例 7記載の λΟΝΑ溶液（濃度 lpmol/^l) それぞれを、純ニッケル箔の所定の位置に、スポッター（Pyxsis5500 CARTESIAN社製）を用いて 3箇所づっスポットした。この純ニッケル箔を乾燥機に入れ 42°Cで 2 0分乾燥した。その後、前記純ニッケル箔を水中で 30分間振とうして洗浄し、乾燥させた。実施例 1 8 ハイブリダィゼ一シヨン及びその検出

実施例 1 7及び比較例 9の ADNA固定化純ニッケル箔を 9 5 °Cに暖めた水中に 1 0分間浸し、 4°Cに冷やした水中に 5分間浸した。次いで、 ADNA固定化純二ッケル箔の核酸を固定化した部分に、実施例 8に記載の lpmolピオチン化 ADNA (C) を含むハイブリダィゼーシヨン溶液（Arrayit UniHyb (TeleCHem Internat i onal , Inc. ) 60mlをのせ、純ニッケル箔を水が浸入しないケース（ハイプリカセット）に入れてそのケースごとウォーターパスに沈め、 60 で 2時間加熱した。以下、実施例 8と同様にしてボストハイプリダイゼーション及びハイブリダィゼーシヨンの検出を行った。その結果を表 9に示す。表 9 固定化した核酸 A DNA断片（A) A DNA断片（B) 実施例 1 7 ◎ X

比較例 9 X X

表 9の結果から明らかなように、ハイブリダィゼ一シヨンシグナルが特異的かつ明瞭に現れたことから、実施例 1 7の A DNA断片固定化銅箔は A DNA断片が確実に純ニッケル箔上に固定化されていることがわかる。一方、比較例 9の A DNA断片固定化純ニッケル箔には、シグナルはまったく現れなかった。さらに、実施例 1 7の λ DNA断片固定化純ニッケル箔及び比較例 9の λ DNA断片固定化純二ッゲル箔のコントロールの位置（核酸を含まない溶液をスポットした箇所）にもシグナルはまったく現れなかった。実施例 1 9

常法に従い、オリゴヌクレオチド合成機（Perki n- e lmer App l i ed b i osys t em s) を用いて、配列番号 9、 1 0及び 1 1に示す塩基配列を有するオリゴヌクレォチド（26mer) を合成した。尚、配列番号 9に示すオリゴヌクレオチドは、 5 ' 末端をピオチン化した。また、配列番号 9及び 1 0に示すオリゴヌクレオチドは、実施例 1に記載の配列番号 1及び 2に示すオリゴヌクレオチドの 5 ' 末端に 5個のチミジンが連結した配列を有している。配列番号 1 1に示すオリゴヌクレオチドは、配列番号 5に示すォリゴヌクレオチドと 1塩基配列が異なるため相補性を持っていない。すなわち、これらのオリゴヌクレオチドは、実施例 3の配列番号 4、 5及び 6のオリゴヌクレオチドの 5 ' 末端のチミジンを 5個に減らしたものである。

上記オリゴヌクレオチドを、実施例 3と同様にして市販品のステンレス製の平板（特殊金属工業株式会社製）に固定化した。以下、実施例 2と同様にしてボストハイブリダィゼーシヨン、及び平板に固定化されたオリゴヌクレオチドならびにハイブリダィゼーションの検出を行った。比較例 1 0

実施例 1 9に記載のオリゴヌクレオチド溶液を用いた他は、比較例 2と同様にして、ステンレス製の平板に各々のオリゴヌクレオチドを固定化した。実施例 2 0

実施例 1 9及び比較例 1 0のオリゴヌクレオチド固定化平板の核酸を固定化した部分に、 3pmo lピオチン化プローブ（262bp) を含むハイプリダイゼーシヨン溶液 (Arrayi t UniHyb (Te l eCHem Int ernat i onal , Inc. ) 60mlをのせ、平板を水が浸入しないケース（八イブリカセット）に入れてそのケースごとウォー夕一パスに沈め、 45でで 2時間加熱した。

以下、実施例 2と同様にしてポストハイブリダィゼーシヨン、及び平板に固定化されたオリゴヌクレオチドならびにハイブリダィゼ一ションの検出を行った。その結果を、表 1 0に示す。配列番号 9のオリゴヌクレオチドを固定化した位置のシグナルは固定化されたオリゴヌクレオチドの量を、配列番号 1 0のオリゴヌクレオチドを固定化した位置のシグナルはハイブリダィゼーションの強度を、それぞれ示す。表 1 0 固定化したオリゴヌクレオチド配列番号 9 配列番号 1 0 配列番号 1 1 実施例 1 9 ◎ ◎ X

比較例 1 0 X X X

産業上の利用の可能性

本発明の方法により、生体分子、例えば核酸、特に鎖長の短い核酸を、金属製担体に簡便、かつ、効率よく固定することができる。また、担体表面のコーティングが不要であるため、金属製の電極等に直接生体分子を固定化することができる。

Claims

請求の範囲

1. 生体分子を担体に固定化する方法であって、生体分子の溶液を担体上にスポットする工程と、前記生体分子溶液をスポットした担体に波長 280 nmの成分を含む紫外線を照射する工程を含み、前記担体は金属であることを特徴とする方法。

2. 前記紫外線が、波長 220〜300 nmの成分を含むことを特徴とする請求項 1に記載の方法。

3. 前記金属は、周期律表第 2周期〜第 7周期の I、 II、 III、 IV、 V、 VI、 V II族および遷移元素から選ばれる金属、又は同金属を含む合金である請求項 1又は 2に記載の方法。

4. 前記紫外線の照射量は 1 00m JZcm²以上である請求項 1〜3のいずれか一項に記載の方法。

5. 前記生体分子は核酸、タンパク質、糖、抗原、抗体、ペプチド、酵素から選ばれる請求項 1〜4のいずれか一項に記載の方法。

6. 生体分子が担体上に固定化された生体分子固定化担体の製造法であって、生体分子の溶液を担体上にスポッ卜する工程と、前記生体分子溶液をスポットした担体に波長 280 nmの成分を含む紫外線を照射し、前記生体分子を担体に固定化する工程を含む方法。

7. 前記紫外線が、波長 220〜300 nmの成分を含むことを特徴とする請求項 6に記載の方法。

8. 前記生体分子は核酸であって、核酸固定化担体はハイブリダィゼーションによる核酸の分析に用いられるものである請求項 6に記載の方法。