WO2004060360A1 - Verwendung von wirksubstanzen zur prophylaxe und/oder therapie von viruserkrankungen - Google Patents

Verwendung von wirksubstanzen zur prophylaxe und/oder therapie von viruserkrankungen Download PDF

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    • G01N33/5041—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics for testing non-proliferative effects involving analysis of members of signalling pathways

Definitions

  • the invention relates to a test system for the discovery of active substances which are suitable for the prophylaxis / or treatment and viral diseases, uses of such active substances] _g for preparing a pharmaceutical composition for the prophylaxis and / or treatment of viral diseases, the formulations of such pharmaceutical compositions and methods for preparing such pharmaceutical compositions.
  • RNA viruses include the negative strand RNA viruses, such as, for example, influenza viruses or the Borna disease virus. Infections with influenza viruses are still one of the great diseases of civilization and cause a large number of deaths every year. They are an immense cost factor in terms of the economy as a whole, for example due to illness-related incapacity to work. Infections with the Borna Disease Virus (BDV), which mainly affects horses and sheep, but have also been isolated in humans and are associated here with neurological diseases, are also of economic importance.
  • BDV Borna Disease Virus
  • the problem of combating RNA viruses in particular is the versatility of the viruses caused by a high error rate of the viral polymerases, which makes the production of suitable vaccines and the development of antiviral substances very difficult.
  • ] _0 Show effect, but due to mutations leads very quickly to the selection of resistant variants.
  • An example of this is the anti-influenza agent amantadine and its derivatives, which is or are directed against a transmembrane protein of the virus. Resistant variants of the virus form within a short time after use.
  • Another example are the new therapeutics for influenza infections that inhibit the influenza-viral surface protein neuraminidase.
  • Relanza-resistant variants have already been found in n patients (Gubareva et al., J Infect Dis 178, 1257-1262, 1998). The hopes placed in this therapeutic agent could not be fulfilled.
  • N and RNA viruses in the infected host cell preferably activate a defined signal transmission path, the so-called Raf / MEK / ERK kinase signal transmission path.
  • This signal transmission path is one of the most important signal transmission paths in a cell and plays an important role in proliferation and differentiation processes (Cohen, Trends in Cell Biol 7,
  • ] _g inhibit MEK or the SEK, which can drastically inhibit the intracellular multiplication of intranuclearly replicating negative strand viruses, for example of influenza A virus and Borna Disease Virus (BDV) (Pleschka et al., Nature Cell Biol 3, 301-305, 2001; Planz et al., J Virol 10, 4871-4877, 2001; PCT / DE
  • influenza viruses preferably use the Raf-MEK-ERK signal transmission path or the MEKK / SEK signal transmission path for their multiplication and consequently an inhibition
  • an inhibited signal transmission path can be bypassed by both the cell and the viruses and the therapeutic effect of an active substance that inhibits virus multiplication by inhibiting a specific signal transmission path
  • I Q is the nuclear factor of kappaB (NF-kB) signal transmission path.
  • the central component of this transmission path is the heterogeneous NF-kB transcription-protein complex, consisting on the one hand of p50 [originated from the proteolysis of NF-kBl (pl05)] or of p52 [originated from the proteolysis of NF-kappaB2 (pl00)]
  • NF-kB complex consists of p50 and p65.
  • NIK NF-kB-inducing kinase
  • kinase TAK the kinase AKT and possibly also the kinase
  • (IkB) kinase "(IKK) complex consisting of IKKalpha, IKKbeta and NEMO. Activated IKK phosphorylates IkB - and thus leads to its degradation and thus permits release, nuclear
  • NF-kB complex consists of 30 plOO and RELB. Activation of the cell by lymphotoxins leads to the activation of, presumably preferably mediated by NIK
  • IKKalpha The activated IKK induces phosphorylation and thus the proteolysis from plOO to p52, which in turn translocates in complex with the RELB into the cell nucleus and can become active there as a transcription factor.
  • NSAIDs non-steroidal anti-inflammatory substances
  • Sulindac Yamamoto et al., J Biol Chem 274, 27307-27314, 1999; Berman et al., Clin Cancer Res 8, 354 -360, 2002
  • derivatives of Sulindac such as Sulindac sulfoxide, Sulidac sulfone, Sulindac Sul _Q fid or benzylamide Sulindac analogues
  • acetylsalicylic acid or salicylic acid Yin et al ., Nature 396, 77-80, 1998) or curcumin (Oncogene 18, 6013-6020, 1999) by inhibiting the IKKbeta, ii) NEMO-binding peptides (May et al., Science 289, 1550-1554,
  • proteosome inhibitors such as PS-341 (Tan and Waldmann, Cancer Res 62, 1083-1086,2002; Adams Trends Mol Med 8, 49-54, 2002) or iii) antisense nucleotide sequences specific for p65 or p50 ( Higgins et al., PNAS-USA 90, 9901-9905, 1993) can inhibit the activation of the NF-kB signal transmission path.
  • the invention is based on the technical problem, a test
  • the invention is based on the surprising findings that i) active substances which inhibit the cellular NF-kB signal transmission path can inhibit the multiplication of viruses in an organism.
  • ⁇ n tylsalicylic acid in concentrations of 10 mM were comparatively no stronger, even higher doses (up to 50 mM) significantly less antiviral than the low concentrations according to the invention.
  • concentrations above 20mM after aerogenic administration proved to be toxic.
  • the present invention is thus the use of at least one viral disease, wherein the active substance (s) is applied at least one active substance for preparing a pharmaceutical composition for the prophylaxis and / or therapy to at least "a constituent of the NF-kB signal transduction pathway retardant, so that a virus multiplication in
  • the NF-kB signal transmission path includes, for example: Tumor necrosis factor receptor associated factor (TRAF), NF-kB inducing kinase (NIK), mitogen-activated protein kinase kinase kinase 1 (MEKKK1), mitogen-activated protein kinase kinase kinase 3 (MEKKK3), AKR mouse thymoma kinase (AKT), TGFß activated kinase (TAK1 ), Inhibitor of NF-kB kinase 5 alpha (IKKalpha), Inhibitor of NF-kB kinase beta
  • the active substances which can be used according to the invention include, for example: inhibitors of a kinase of the NF-kB signal transmission path [these include non-steroidal anti-inflammatory substances which inhibit NF-kB activation, such as, for example, phenylalkyl acid derivatives such as, for example, sulindac (Yamamoto et al., J Biol Chem 274, 27307-27314, 1999; - j e Berman et al Clin Cancer Res 8, 354-360, 2002) or derivatives of Sulindac such as Sulindac sulfoxide, Sulidac sulfone, Sulindac sulfide, benzylamide Sulindac analogues (Moon and Lerner , Cancer Research 62, 5711-5719, 002), salicylic acid derivatives such as, for example, salicylic acid itself or acetylsalicylic acid (Yin 2Q et al., Nature 396,
  • PMC pentamethyl-hydroxychroman
  • polyphenols of tea such as (-) -epigallocatechin-3-gallate " (EGCG, Lin et al Biochem harmacol 58, 911-30
  • peptides that inhibit the interaction of at least two components of the NF-kB signaling pathway include, for example, peptides binding to NEMO (May et al Science 289, 1550-1554, 2000), inhibitors of the proteosome, such as PS-341 (Tan and Waldmann, Cancer Res 62, 1083-1086, 2002; Adams Trends Mol Med 8 , 49-54, 2002) and Lacta-5 cystine (Morise and Grisham J Clin Gastroenterol 27, 87-90, 1998), antisense oligonucleotides which are specific to the DNA sequence or m-RNA sequence coding for a component of the Attach the NF-kB signal transmission path and inhibit its transcription or translation, for example antisense nucleotide ⁇ sequences specific for p65 or p50 (Higgins et al PNAS-USA 90, 9901-9905, 1993), dominant negative mutants of a component of the NF-kB signal transmission tragung
  • N perfragment for example an Fv fragment, which inhibit at least one component of the NF-kB signal transmission path.
  • Active substance in the sense of the present invention is a substance that is capable of at least one component of the
  • active substances in the sense of this invention are to be understood as derivatives of these active substances, which are converted, for example, by enzymatic cleavage into an active substance according to the invention.
  • Active substances in the context 'of the present invention are also which are metabolically converted into an inventive active substance precursors of active substances.
  • At least one active substance according to the invention is preferably used for the prophylaxis or therapy of viral diseases which are caused by RNA or DNA viruses, preferably 5 negative-strand RNA viruses, for example influenza viruses or Borna viruses.
  • the active substance according to the invention is administered systemically or locally, for example dermally, nasally, aerogenically, into a body cavity or into a tissue.
  • acetylsalicylic acid for the prophylaxis or therapy of an influenza virus infection, the acetylsalicylic acid being nasal or bronchial (aerogenic)
  • Concentrations of preferably 0.1 to 4 mM is administered.
  • the total daily dose in humans should be in the range of 0.1 to 30 mg (nasal) or 0.1 to 70 mg (bronchial). Depending on the application, the lower limit can also be between 0.1 and 20 mg or 50 mg. Depending on the application, the upper limit can also be between 1 mg and 2 mg
  • a daily dose is advantageously administered in 1 to 8 doses, which are expediently distributed evenly over a waking period of 16 hours. Treatment is expediently carried out over a period of 1 to 7 days and longer.
  • “_. in this respect also includes galenically prepared administration units, the amount of the active substance present in one administration unit being easily calculable in accordance with the above areas of a treatment plan.
  • a further embodiment of the present invention relates to a combination preparation for the prophylaxis and / or therapy of a viral disease, comprising at least two active substances with an antiviral effect, at least one antiviral active substance inhibits at least one component of the NF-kB signal transmission path in such a way that the multiplication of the virus in an organism is inhibited.
  • This antiviral active substance is preferably selected from the active substances according to the invention already mentioned above.
  • the further antiviral active substances in the combination preparation according to the invention include either at least one other active substance according to the invention and / or at least one antviral active substance such as, for example: amantadine ⁇ (1-adamantanamine) and its derivatives, which or which against a transmembrane protein of some influenza A Viruses, such as Rimantadine, are therapeutic agents for influenza infections that inhibit the influenza-viral surface protein neuraminidase.
  • antviral active substance such as, for example: amantadine ⁇ (1-adamantanamine) and its derivatives, which or which against a transmembrane protein of some influenza A Viruses, such as Rimantadine, are therapeutic agents for influenza infections that inhibit the influenza-viral surface protein neuraminidase.
  • inhibitors of the Raf-MEK-ERK signal transmission path such as U0126 or further inhibitors as described in PCT / DE 01/01292, inhibitors of the MEKK / SEK signal transmission path or the components of further signal transmission paths as they were n described in DE 10138 912 and synthetic nucleoside analogs, such as 3-deazaadenosine and ribavirin.
  • the combination preparation can be used systemically or locally in the form of a mixture or as individual components for simultaneous or temporally different use at the same or different locations 5.
  • the statements made above for dosage forms apply analogously.
  • the combination preparation can be administered as a mixture of the active substances.
  • the active substances can also be administered separately from each other at the same location, for example systemically by intravenous injection or locally, for example by nasal, aerogenic or dermal administration Administration or by injection into a tissue or at separate locations, simultaneously or at different times within a period in which the substance administered first is still effective, for example in a period of three days.
  • a special form of administration of the active substance according to the invention in the sense of the invention is aerogenic, that is to say nasal or bronchial administration of the active substance for prophylaxis or therapy of those viral infections which infect aerogenically.
  • galenic aids and atomizers of the active substance are used, as are well known to the person skilled in the art.
  • a further embodiment of the present invention relates to a test system for finding active substances which inhibit at least one component of the NF-kB signal transmission path in such a way that virus multiplication is inhibited, comprising a. at least one cell that can be infected with at least one virus,
  • N which contains the NF-kB signal transmission path and at least one virus infecting the cells or b. at least one cell infected with at least one virus, in which at least one component of the NF-kB signal transmission path is missing or has a defective mutation.
  • Cells in the sense of the present invention are cells from different organs and tissues, for example cells of the blood and lymphatic vessels, cells that line the body cavities.
  • Cell cultures are also included, especially those which can be acquired from cell banks, for example the ATCC, in particular particularly permissive, eukaryotic cell cultures, for example
  • Mus musculus - BHK from Cricetus cricetus CHO from Cricetulus griseus, MDCK from Canis familiaris, Vero, COS-1 and COS-7 from Cercopithecus aethiops, as well as primary embryo fibroblasts from Gallus gallus (CEF cells).
  • the test system according to the invention for finding active substances by adding substances, preferably in concentrations of 0.001 ⁇ M to 100 ⁇ M, and viruses in a number of particles which can infect the selected cell, it is checked whether a substance is capable of Virusverme- Q inhibit currency, without damaging the cell.
  • the virus used in the test system according to the invention is preferably an RNA or DNA virus, preferably an influenza virus. 5
  • the cell a) of the test system according to the invention contains at least one overexpressed component of the NF-kB signal transmission path, also in the form of constitutively active mutants of these components, in particular n by introducing one or more genes encoding this component.
  • This overexpression detects substances which both strongly inhibit this component and can also reach a high concentration intracellularly to inhibit the overexpressed component.
  • the expression for at least one component of the NF-kB signal transmission path is inhibited in a cell b) of the test system according to the invention, for example by the introduction of an antisense DNA or an antisense RNA or by the introduction of at least one gene coding for at least one dominant negative Mutant of at least one component of the NF-kB signal transmission path.
  • Another embodiment of the present invention relates to a method for finding at least one Active substance according to the invention for the prophylaxis and / or therapy of viral diseases, which inhibits or inhibits the multiplication of viruses in viral diseases, comprising the following steps: a. Bringing at least one test system according to the invention into contact with at least one potential active substance, and b. Determination of the impact on virus replication.
  • contacting can take place, for example, by adding the active substances into the nutrient medium of a cell culture or by local or systemic administration of the active substances into an organism.
  • - j allow the introduction of substances into intact cells, for example infection, transduction, transfection and / or transformation and other methods known to the person skilled in the art. These methods are particularly preferred if the substance is a virus, naked nucleic acids, for example antisense
  • N is DNA and / or antisense RNA, viroids, virosomes and / or liposomes, whereby virosomes and liposomes are also suitable for bringing other active substances into the cell in addition to a nucleic acid molecule.
  • the effect on virus replication is determined, for example, by plaque assays or by determining the HA units to compare the virus titer of treated and untreated infected cells.
  • a further preferred embodiment of the present invention relates to a method for producing a medicament for the prophylaxis and / or therapy of at least one viral disease which increases the number of viruses Inhibits or inhibits viral diseases, comprising the following steps: a. Performing a test system according to the invention and b. Add at least one auxiliary and / or additive and defined galenic preparation to the active substance (s) found and dosed in physiologically effective doses.
  • the active substance according to the present invention for local or systemic administration to an organism by means of methods known to the expert and auxiliary Q and / or additives is prepared into a pharmaceutical composition.
  • auxiliaries and additives which are used, for example, to stabilize or preserve the medicament or diagnostic, are generally known to the person skilled in the art (see, for example, 5 Sucker H et al., (1991) Pharmaceutical Technology, 2nd edition, Georg Thieme Verlag, Stuttgart).
  • auxiliaries and / or additives are physiological saline solutions, Ringer's dextrose, dextrose, Ringer's lactate, demineralized water, stabilizers, antioxidants, complexing agents, antimicrobial compounds, proteinase inhibitors and / or inert gases.
  • Local administration can, for example, follow the skin, the mucous membrane, into a body cavity, into an organ, into a joint or into the connective or supporting tissue nasally or aerogenically.
  • Systemic administration is preferably carried out in the bloodstream, in the peritoneal cavity or in the abdominal cavity.
  • Active substance depends on the type of active substance and the
  • Nucleotide sequences are preferably inserted into a viral vector or a plasmid using methods known to the person skilled in the art and auxiliary substances for cell transfection are added. These auxiliaries include, for example, cationic polymers or cationic lipids.
  • Antisense oligonucleotides are derivatized using methods known to those skilled in the art in order to protect them from enzymatic degradation by DNAsen or RNAsen.
  • the active substance according to the invention can be in the form of a salt, ester, amide or as a precursor, preferably only modifications of the active substance are used which do not trigger excessive toxicity, irritation or allergic reactions in the patient.
  • the active substance is mixed under sterile conditions, with a physiologically acceptable carrier and possible preservatives, buffers or propellants, as required.
  • the active substance according to the invention is preferably administered in a single dose, particularly preferably in several doses, the individual doses not exceeding the maximum tolerable dose (MTD) of the respective active substance for humans.
  • a dose is preferably chosen which is half the MTD.
  • the daily dose can be administered once a day or in several portions over the day, preferably at approximately the same time intervals.
  • administration can be either local or systemic, only in one day or over several days daily or every second or third day for several weeks until a therapeutic effect is visible.
  • the corresponding Q cDNAs for IKK KD, mlkB and IKK EE were cloned in sense orientation into the retroviral expression vector pCFG5 IEGZ (Kuss et al. Eur J Immunol 29,3077-3088, 1999).
  • the vector DNA also codes for the messenger RNA of the "green fluorescent protein" (GFP), which is expressed during protein synthesis from an internal ribosome binding site. This allows the identification of stably transduced cells in flow cytometry.
  • GFP green fluorescent protein
  • the vector also imparts resistance to the antibiotic zeocin.
  • the various expression constructs and the empty vector would be transfected into the virus-producing cell line 0NX (Grignani et al., Cancer Res 58, 14-19, 1998) using the calcium phosphate precipitation method (Denk et al., J Biol Chem 276, 28451-28458, 2001) , The transfection efficiency was reduced after 24 hours controlled by GFP expression and was of the order of 70-80%. The cells were then selected for about 2 weeks with 1 mg / ml zeocin in the medium.
  • the retrovirus-containing medium supernatants of the virus-producing cell lines were filtered, mixed with 5 ⁇ g / ml polybrene (Sigma) and added to fresh cells. The infection occurred during 2 x 3-hour centrifugation (lOOOxg) on two consecutive days. Stably transduced cells were selected 24 hours after infection for two additional weeks with 400-600 ⁇ g / ml zeolite in the medium supernatant. After the stable cell lines had been generated in this way, both this and wild-type influenza A virus ⁇ c were infected as described below and the virus titers of
  • MDCK cells were transiently transfected with the same constructs using the transfection reagent Lipofectamine 2000 (Life Technologies) according to standard methods (Ludwig et al., J Biol Chem 276, 10990-10998, 2001). The transfection efficiencies were> 60%. As with the stable lines, infection with the influenza A virus strain occurred 24 hours after transfection
  • Example 2 Inhibition of viral NF-kB activation and reduction of the influenza virus in vitro 25
  • ASA acetylsalicylic acid
  • Salicylates such as ASA or sulfosalazines are widely used as painkillers and anti-inflammatory 30
  • MDCK cells were treated with 5 mM ASA one hour before infection or two and four hours after infection. Infection and detection of the newly formed viruses was carried out as above.
  • Antioxidants such as pyrrolidine dithiocarbamate (PDTC) are well known as inhibitors of NF-kB activation (review in: Piette et al., Biol Chem 378, 1237-1245, 1997). Therefore It was examined whether this class of substances can also have an inhibitory effect on the multiplication of influenza viruses.
  • A549 cells were treated with concentrations of 3-24 micromolar one hour before infection with PDTC. Infection and detection of the newly formed viruses 5 24 h pi took place as described for ASA in the presence or absence of PDTC over the entire experiment.
  • mice C57 Bl / 6 mice were nasally infected with 5000 pfu / 20 ⁇ l influenza virus (Fowl Plague Virus, FPV).
  • mice 25 administered in drinking water. PBS was injected or administered as a control. Body weight, death rate and survival were determined. 30 mice were treated per group.
  • mice C57 Bl / 6 mice were treated with 5000 pfu / 20 ⁇ l or with 10,000 pfu / 20 ml
  • Influenza virus (Fowl Plague Virus, FPV) infected nasally.
  • mice At the start of treatment on day 0, 30 min after infection, ⁇ was anesthetized in the mice (i.p. injection of 300 ⁇ l
  • Ketamine / Rompun; Serum plant in Bernburg; Bayer Ag Leverkusen) introduced a tracheotube and with the help of a nebulizer (Hugo Sachs Elektronik-Harvard App. GmbH March-Hugstetten) aerosol (administration of 600 ⁇ l) containing 2mM ( 0.36mg / ml PBS), 10 i ⁇ mM, 20mM or 50 mM ASA (Sigma-Aldrich Steinheim) or only PBS as a control.
  • This aerogenic administration of the test substances was repeated in some groups on days 1, 2, 3 or 1, 2, 5 and 6. In other groups, treatment with ASA was carried out on days 3, 4, 5, 6 after infection.
  • the results in vivo experiments according to Examples 3.1 and 5 3.2 show that the single or multiple (up to 3x) daily aerogenic administration of ASA in low non-toxic dose, i.e. in doses of 0.1 mg / kg to 300 mg / kg body weight, in particular 10 mg / kg to 100 mg / kg, preferably 20 mg / kg to 50 mg / kg, for example 30 mg / kg, to a clear therapeu- ⁇ effects against a fatal disease induced by nasal administration of the influenza virus.
  • the formulation should be selected such that the pharmaceutical composition ASS to be administered aerogenically in concentrations below 2 mM, preferably 0.01 mM to 1.99 mM, most preferably 0.1 mM or 0.5 mM to 1.5 mM, for example 1 mM.
  • the amount of liquid phase in aerosol should be calculated and set up according to the daily doses given above, taking into account the concentration used in the liquid phase. The latter can be achieved, for example, with conventional atomization devices which spray defined amounts of a solution into an aerosol.

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Abstract

Die vorliegende Erfindung betrifft die Verwendung bevorzugt mindestens einer Wirksubstanz zur Prophylaxe und/oder Therapie einer Viruserkrankung, wobei diese Wirksubstanz mindestens eine Komponente des zellulären Signalübertragungsweges zur Aktivierung des Transkriptionsfaktors NF-kB derart hemmt, dass die Virusvermehrung gehemmt wird. Die vorliegende Erfindung betrifft des weiteren die lokale, bevorzugt die aerogene Verabreichung des erfindungsgemässen Wirkstoffes zur Hemmung einer Virusvermehrung. Die erfindungsgemässe Wirksubstanz kann mit mindestens einer weiteren antiviral wirksamen Substanz zur Prophylaxe und/oder Therapie einer Viruserkrankung kombiniert werden.

Description

Verwendung von Wirksubstanzen zur Prophylaxe und/oder Therapie von Viruserkrankungen
5 Gebiet der Erfindung.
Die Erfindung betrifft ein Testsystem zur Findung von Wirksubstanzen, welche zur Prophylaxe und/oder Behandlung von Viruserkrankungen geeignet sind, Verwendungen solcher Wirksubstanzen ]_g zur Herstellung einer pharmazeutischen Zusammensetzung zur Prophylaxe und/oder Behandlung von Viruserkrankungen, Formulierungen für solche pharmazeutischen Zusammensetzungen sowie Verfahren zur Herstellung solcher pharmazeutischen Zusammensetzungen.
15
Stand der Technik und Hintergrund der Erfindung
Infektionen mit RNA- oder DNA-Viren stellen eine bedeutende Ge- ^n sundheitsbedrohung für Mensch und Tier dar. Zu den RNA-Viren gehören die Negativ-Strang-RNA Viren, wie beispielsweise Influenza Viren oder das Borna-Disease Virus. Infektionen mit Influenza-Viren gehören immer noch zu den großen Seuchen der Menschheit und fordern Jahr für Jahr eine Vielzahl an Todesopfern. Sie sind gesamtwirtschaftlich, etwa durch krankheitsbedingte Arbeitsunfähigkeit, ein immenser Kostenfaktor. Von ebenfalls wichtiger wirtschaftlicher Bedeutung sind Infektionen mit dem Borna Disease Virus (BDV) , das vor allem Pferde und Schafe befällt, jedoch auch schon beim Menschen isoliert wurde und hier in Zusammenhang mit neurologischen Erkrankungen gebracht wird. Das Problem der Bekämpfung von insbesondere RNA-Viren ist die durch eine hohe Fehlerrate der viralen Polymerasen verursachte Wandlungsfähigkeit der Viren, die sowohl die Herstellung geeigneter Impfstoffe als auch das Entwickeln von antiviralen 5 Substanzen sehr schwierig macht.
Darüber hinaus hat sich gezeigt, dass die Anwendung von antiviralen Substanzen, die direkt gegen Funktionen des Virus gerichtet sind, zwar zu Therapiebeginn eine gute antivirale
]_0 Wirkung zeigen, aber mutationsbedingt sehr schnell zur Selektion resistenter Varianten führt. Ein Beispiel hierfür ist das antiInfluenza-Agens Amantadin und dessen Derivate, welches bzw. welche gegen ein Transmembranprotein des Virus gerichtet ist bzw. sind. Innerhalb kurzer Zeit nach Anwendung bilden sich re- ic sistente Varianten des Virus.
Ein weiteres Beispiel sind die neuen Therapeutika für Influenzainfektionen, die das Influenza-virale Oberflächenprotein Neuraminidase hemmen. Hierzu gehört beispielsweise Relanza. In „n Patienten wurden bereits Relanza-resistente Varianten gefunden (Gubareva et al., J Infect Dis 178, 1257-1262, 1998). Die Hoffnungen, die in dieses Therapeutikum gelegt wurden, konnten somit nicht erfüllt werden.
__ Aufgrund ihrer meist sehr kleinen Genome und damit verbundener 25 begrenzter Kodierungskapazität für replikationsnotwendige Funktionen sind alle Viren in starkem Maße auf Funktionen ihrer Wirtszellen angewiesen. Durch Einflussnahme auf solche zelluläre Funktionen, die für die virale Replikation notwendig sind, ist es möglich, die Virusreplikation in der infizierten Zelle neσa- 30 tiv zu beeinträchtigen. Hierbei besteht für das Virus nicht die
Möglichkeit, durch Anpassung, insbesondere durch Mutationen, die fehlende zelluläre Funktion zu ersetzen, um so dem Selektionsdruck zu entweichen. Dies konnte am Beispiel des Influenza A Virus mit relativ unspezifischen Hemmstoffen gegen zelluläre Kinasen und Methyltransferasen bereits gezeigt werden (Scholtissek und Müller, Arch Virol 119, 111-118, 1991) .
5
Es ist bekannt, dass Zellen über eine Vielzahl von Signalübertragungswegen verfügen, mit Hilfe derer auf die Zelle einwirkende Signale in den Zellkern übertragen werden. Dadurch kann die Zelle auf äußere Reize reagieren und mit Zellproliferation, ]_0 Zellaktivierung, Differenzierung oder kontrolliertem Zelltod reagieren.
Diesen Signalübertragungswegen ist gemeinsam, dass sie mindestens eine Kinase enthalten, welche durch Phosphorylierung ic mindestens ein nachfolgend signalübertragendes Protein aktivieren.
Bei Betrachtung der zellulären Prozesse, die nach Virusinfektionen induziert werden, findet man, dass eine Vielzahl von DNA-
„n und RNA-Viren in der infizierten Wirtszelle bevorzugt einen definierten Signalübertragungsweg, den sogenannte Raf/MEK/ERK- Kinase-Signalübertragungsweg aktivieren. Dieser Signalübertragungsweg ist einer der wichtigsten Signalübertragungswege in einer Zelle und spielt eine bedeutende Rolle in Proliferationsund Differenzierungsprozessen (Cohen, Trends in Cell Biol 7,
25
353-361, 1997; Robinson und Cobb, Curr . Opin. Cell Biol 9, 180-186, 1997; Treisman, Curr. Opin Cell Biol 8, 205-215, 1996) .
Die Untersuchung der Rolle dieses Signalübertragungsweges in zellulären EntScheidungsprozessen hat zur Identifizierung mehrerer pharmakologischer Inhibitoren geführt, welche den Signalübertragungsweg unter anderem auf der Ebene von MEK, also relativ am Beginn des Signalübertragungsweges hemmen (Alessi et al., J Biol Che 270, 27489-27494, 1995; Cohen, Trends in Cell Biol 7, 353-361, 1997; Dudley et al . , PNAS USA 92, 7686-7689, 1995; Favata et al., J Biol Chem 273, 18623-18632, 1998).
5 Neuere Daten zeigen, dass die Inhibition des Ras-Raf-MEK-ERK- Signalübertragungsweges oder eines weiteren Signalübertragungsweges, des MEKK/SEK/JNK-Signalübertragungsweges, durch Wirksubstanzen, welche relativ selektiv eine der an diesem Signalübertragungsweg beteiligten Kinasen, beispielsweise die
]_g MEK oder die SEK inhibieren, die intrazelluläre Vermehrung von intranukleär replizierenden Negativstrang-Viren, beispielsweise von Influenza A Virus und Borna Disease Virus (BDV) drastisch hemmen kann (Pleschka et al . , Nature Cell Biol 3, 301-305, 2001; Planz et al . , J Virol 10, 4871-4877, 2001; PCT/DE
15 01/01292; DE 101 38 912) .
Bislang war bekannt, dass Influenza- Viren vorzugsweise den Raf- MEK-ERK-Signalübertragungsweg oder den MEKK/SEK Signalübertragungsweg für ihre Vermehrung nutzen und demzufolge eine Hemmung
20 dieser Signalübertragungswege zu einer vollständigen Hemmung der Virusvermehrung führt. Da in einer Zelle die Signalübertragungswege jedoch kaum eine in sich abgeschlossene Funktionen aufweisen, sondern bei Aktivierung des einen
Signalübertragungsweges über Kreuzvernetzungen weitere Signalübertragungswege in unterschiedlichem Ausmaß zusätzlich ak¬
25 tiviert werden, ist grundsätzlich nicht auszuschließen, dass ein gehemmter Signalübertragungsweg sowohl von der Zelle als auch von den Viren umgangen werden kann und der therapeutische Effekt einer Wirksubstanz, die eine Virusvermehrung durch Hemmung eines bestimmten Signalübertragungsweges hemmt, hierdurch
30 eingeschränkt werden könnte Daher besteht ein großer Bedarf für das Auffinden und Verwenden antiviraler Wirksubstanzen, welche zusätzlich oder ergänzend zu solchen wirken, die Kinasen von zellulären Signalübertragungswegen, beispielsweise des Raf-MEK-ERK-Signalübertragungsweges 5 oder des MEKK/SEK/JNK-Signalübertragungsweges hemmen. Solche Wirkstoffe sind bereits in den Literaturstellen PCT/DE 01/01292 und DE 101 38 912 beschrieben worden.
Einer der bedeutenden Signalübertragungswege in der Zelle ist
IQ der nukleare Faktor von kappaB (NF-kB) -Signalübertragungs- weg.
Zentraler Bestandteil dieses Übertragungsweges ist der heterodi- ere NF-kB-Transkriptions-Proteinkomplex, bestehend einerseits aus p50 [entstanden aus der Proteolyse von NF-kBl (pl05) ] oder aus p52 [entstanden aus der Proteolyse von NF-kappaB2 (pl00)]
-je und andererseits aus p65 (RELA) , c-REL oder RELB. Der häufigste
NF-kB-Komplex besteht aus p50 und p65.
Die Transkriptionsaktivität dieses NF-kB-Komplexes wird gehemmt durch die Bindung der Inhibitorproteine von NFkB (IkB) an die nukleare Bindesequenz von p65. Hierdurch verbleibt der Komplex
^n im Zytoplasma. Aktivierung der Zelle beispielsweise durch
Wachstumsfaktoren, Chemokine, TNFalpha, 11-1, CD40-ligand, LPS oder im Rahmen einer Infektion mit Viren führt zur Aktivierung von Kinasen wie der "NF-kB-induzierenden Kinase" (NIK) , der
Kinase TAK, der Kinase AKT und möglicherweise auch der Kinase
_ MEKKl. Diese Kinase führen zur Aktivierung des "Inhibitor von kB 25 y
(IkB) -Kinase" (IKK) -Komplexes, bestehend aus IKKalpha, IKKbeta und NEMO. Aktiviertes IKK phosphoryliert IkB -und führt so zu dessen Degradierung und erlaubt damit die Freisetzung, nukleare
Translokation und Aktivierung der Transskriptionsaktivität des p50/p65- Heterodimers . Ein weiterer NF-kB Komplex besteht aus 30 plOO und RELB. Aktivierung der Zelle durch Lymphotoxine führt, vermutlich bevorzugt vermittelt durch NIK, zur Aktivierung von
IKKalpha. Das aktivierte IKK induziert die Phosphorylierung und damit die Proteolyse von plOO zum p52, welches wiederum im Komplex mit dem RELB in den Zellkern translozieren und dort als Transkriptionsfaktor aktiv werden kann.
5 Es ist bekannt, dass i) nicht-steroidale anti-inflammatorische Substanzen (NSAIDs) , wie beispielsweise Sulindac (Yamamoto et al., J Biol Chem 274,27307-27314, 1999; Berman et al . , Clin Cancer Res 8, 354-360, 2002) oder Derivate von Sulindac wie beispielsweise Sulindac Sulfoxid, Sulidac Sulfon, Sulindac Sul- _Q fid oder Benzylamid Sulindac-Analoga (Moon und Lerner, Cancer Research 62, 5711-5719,2002) oder Acetylsalizylsäure oder Salizylsäure (Yin et al . , Nature 396, 77-80,1998) oder Curcumin (Oncogene 18, 6013-6020, 1999) durch Hemmung der IKKbeta, ii) NEMO bindende Peptide (May et al . , Science 289, 1550-1554,
-ic 2000), Proteosom Inhibitoren wie beispielsweise PS-341 (Tan und Waldmann, Cancer Res 62, 1083-1086,2002; Adams Trends Mol Med 8, 49-54, 2002) oder iii) Antisense Nukleotidsequenzen spezifisch für p65 oder p50 (Higgins et al . , PNAS-USA 90, 9901-9905,1993) die Aktivierung des NF-kB-Signalübertragungsweges hemmen können.
?n Bislang wurden diese Hemmstoffe jedoch ausnahmslos geprüft für ihre Verwendung als Wirkstoffe zur Beeinflussung von Entzündungen und des Wachstums von Tumoren, da bei beiden Indikationen die beteiligten Zellen eine erhöhte Aktivierung des NF-kB Signalübertragungsweg aufweisen (Karin et al . , Nature Reviews Can-
„-. cer 2, 301-310, 2002) . 25
Bislang bestand die Vorstellung, dass eine Virusinfektion, im Besonderen auch eine Infektion mit Influenza-Virus, über die Aktivierung der IKK den NF-kB Signalweg aktiviert, welcher wiederum entscheidend beteiligt ist an 30 der durch diese Infektion erhöhten Expression von antivi- ral aktiven Proteinen wie beispielsweise Interferon (Chu et al., Immunity 11,721-731,1999). In Übereinstimmung mit dieser Vorstellung ist der Befund, dass die Influenza- Virus induzierte Aktivität des Interferon-ß-Promotors stark reduziert ist in Zellen, welche eine transdominant negative Mutation von IKK2 oder von IkBalpha exprimieren 5 (Wang et al., Virol 74,11566-11573,2000). Andererseits gibt es den diesen Vorstellungen und Befunden widersprechenden Hinweis, dass Acetylsalizylsäure, bekannt als Inhibitor der IKK , in der Zellkultur auch Influenza-Virus Infektionen hemmen kann, dieses jedoch erst ab Konzentrationen von 5-10 mM (entsprechend
]_0 0,9-1,8 mg/ml) . Derartige Konzentrationen sind im Blut nach oraler Verabreichung von Acetylsalizylsäure ohne erhebliche Nebenwirkungen praktisch nicht erreichbar (Huang und Dietsch, New Engl J Med 319,797, 1988). Acetylsalizylsäure gilt als das toxischste aller derzeit frei verfügbare Analgetika mit der gering-
-^5 sten therapeutischen Breite (Jones, Am J Ther 9, 245-257,2002). Zwar spekulierten Huang und Dietsch, durch eine Verabreichung von Aerosol höhere und damit antiviral wirksame Konzentrationen lokal in den Atemwegen zu erzielen. Diese Empfehlungen wurden bislang jedoch nicht umgesetzt, da allein schon die bisher
^n bekannten klinischen Nebenwirkungen nach oraler Verabreichung einer ansonsten als nicht-toxisch geltenden Dosis von 100mg Acetylsalizylsäure dazu führten, vor der Einnahme von Aspirin bei Virusgrippe besonders bei Kindern zu warnen (Gebrauchsinformation Z.Nr.14.252 der Bayer AG zum Acetylsalicylsäure (ASS)-
^,_ Präparat Aspirin®). 25
Technisches Problem der Erfindung
Der Erfindung liegt das technische Problem zu Grunde, ein Test¬
30 system zu schaffen, mit welchen sich verbesserte Wirksubstanzen zur Prophylaxe und/oder Behandlung von Viruserkrankungen finden lassen, sowie pharmazeutische Zusammensetzungen und Formulierungen für solche Indikationen anzugeben.
5 Grundzüge der Erfindung und Ausführungsformen.
Die Erfindung beruht auf den überraschenden Erkenntnissen, dass i) Wirkstoffe, welche den zellulären NF-kB Signalübertragungsweg hemmen, die Vermehrung von Viren in einem Organismus hemmen kön-
]_0 nen, ii) bei lokaler Verabreichung geringere Konzentrationen des erfindungsgemäß eingesetzten Wirkstoffes antiviral wirksam sind als aus den in vitro Daten ableitbar, iii) der erfindungsgemäß eingesetzte Wirkstoff Acetylsalizylsäure aerogen in Konzentrationen von 0.1 bis 4 mM verabreicht eine deutliche Hemmung der
-j^c; Influenza-Virusvermehrung in der Lunge und im Gesamtorganismus und einen systemischen Heileffekt ohne Beeinträchtigung des Allgemeinbefindens bewirkt, obwohl derartige Konzentrationen der Acetylsalizylsäure in vitro keine antivirale Wirksamkeit gezeigt haben. Höhere Dosen von Acetylsalizylsäure, beispielsweise Ace-
^n tylsalizylsäure in Konzentrationen von 10 mM, waren vergleichsweise nicht stärker, noch höhere Dosen (bis 50 mM) deutlich geringer antiviral wirksam als die niedrigen, erfindungsgemäßen Konzentrationen. Zusätzlich erwiesen sich Konzentrationen ab 20mM nach aerogener Verabreichung als toxisch.
25
Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist somit die Verwendung mindestens einer Wirksubstanz zur Herstellung einer pharmazeutischen Zusammensetzung zur Prophylaxe und/oder Therapie von mindestens einer Viruserkrankung, wobei die Wirksubstanz (en) auf mindestens" einen Bestandteil des NF-kB Signalübertragungsweges hemmend einwirkt, sodass eine Virusvermehrung im Organismus gehemmt wird. Bestandteil des NF-kB Signalübertragungs- weges sind beispielsweise: Tumor necrosis factor receptor associated factor (TRAF) , NF-kB inducing kinase (NIK) , Mitogen-activated protein kinase kinase kinase 1 (MEKKK1) , Mitogen-activated protein kinase kinase kinase 3 (MEKKK3) , AKR mouse thymoma Kinase (AKT) , TGFß activated kinase (TAK1) , Inhibitor of NF-kB kinase 5 alpha (IKKalpha) , Inhibitor of NF-kB kinase beta (IKKbeta) , NEMO, Inhibitor von kB (IkB), RELA (p65) , C-REL, RELB, NF-kBl (pl05), NF-kB2 (plOO) , P50, P52.
Zu den erfindungsgemäß einsetzbaren Wirksubstanzen gehören θ beispielsweise: Inhibitoren einer Kinase des NF-kB Signalübertragungsweges [hierzu gehören nicht-steroidale anti- inflammatorische, die NF-kB Aktivierung inhibierende Substanzen, wie beispielsweise Phenylalkylsäurederivate wie beispielsweise Sulindac (Yamamoto et al . , J Biol Chem 274,27307-27314, 1999; -je Berman et al Clin Cancer Res 8, 354-360, 2002) oder Derivate von Sulindac wie Sulindac- Sulfoxid, Sulidac- Sulfon, Sulindac- Sulfid, Benzylamid Sulindac-Analoga (Moon und Lerner, Cancer Research 62, 5711-5719,2002), Salicylsäurederivate wie beispielsweise Salicylsäure selber oder Acetylsalizylsäure (Yin 2Q et al., Nature 396, 77-80,1998) Salicylamid, Salacetamid, Ethen- zamid, Diflunisal, Olsalazin oder Salazosulfapyridin, Curcumin (Oncogene 18, 6013-6020, 1999), Antioxidantien wie Pyrrolidine- dithiocarbamate (PDTC; Piette et al . Biol Chem 378, 1237-1245, 1997), Oxicame wie beispielsweise Piroxicam (Liu et al . , J Biol
Chem 13, , 2002), Vitamin E und Derivate hiervon, wie
25 beispielsweise Pentamethyl-hydroxychroman (PMC, Hattori et al.,
Biochem Mol Biol Int 35, 177-183, 1995), 17 beta Oestradiol und
Derivate hiervon (Deshpande et al Am J Reprod Immunol 38, 46-54,
1997), Polyphenole des Tees wie beispielsweise (-) -epigallo- catechin-3-gallat " (EGCG, Lin et al Biochem harmacol 58, 911- 30
915, 1999) , Bayll-7182 Misra und Pizzo Arch Biochem Biophys 386,
227-232,2001)], Peptide, welche die Interaktion von mindestens zwei Komponenten des NF-kB Signalübertragungsweges inhibieren; hierzu gehören beispielsweise an NEMO bindende Peptide (May et al Science 289, 1550-1554, 2000) , Inhibitoren des Proteosoms, wie beispielsweise PS-341 ( Tan und Waldmann, Cancer Res 62, 1083-1086, 2002; Adams Trends Mol Med 8, 49-54, 2002) und Lacta- 5 cystin (Morise und Grisham J Clin Gastroenterol 27, 87-90,1998), Antisense-Oligonukleotide, welche sich spezifisch an die DNA- Sequenz oder m-RNA Sequenz kodierend für eine Komponente des NF-kB Signalübertragungsweges anlagern und deren Transkription oder Translation inhibieren, beispielsweise Antisense Nukleotid- θ Sequenzen spezifisch für p65 oder p50 ( Higgins et al PNAS-USA 90, 9901-9905,1993), Dominant negative Mutanten einer Komponente des NF-kB Signalüber- tragungsweges; dsOligonukleotide, die geeignet sind zur gezielten Degradierung der mRNAs einer Komponente des NF-kB Signalübertragungsweges durch die RNAi- ic Technologie entsprechend der Methode, wie von Tuschl et al
(Genes Dev 13: 3191-3197, 1999) und von Zamore et al (Cell 101: 25-33, 2000) beschrieben, Antikörper oder Antikörperfragmente spezifisch für eine Komponente des NF-kB Signalübertragungsweges, oder Fusionsproteine, enthaltend mindestens ein Antikör-
„n perfragment, beispielsweise ein Fv-Fragment, welche mindestens eine Komponente des NF-kB Signalübertragungsweges inhibieren.
Wirksubstanz im Sinne der vorliegenden Erfindung ist eine Substanz, die in der Lage ist, auf mindestens eine Komponente des
NF-kB Signalübertragungsweges direkt derart einzuwirken, dass --o eine Virusvermehrung im wesentlichen gehemmt ist. Weiterhin sind als Wirksubstanzen im Sinne dieser Erfindung Derivate dieser Wirksubstanzen zu verstehen, die beispielsweise durch enzyma- tische Spaltung in eine erfindungsgemäße aktive Wirksubstanz umgewandelt werden. Wirksubstanzen im Sinne' der vorliegenden Erfindung sind außerdem Vorstufen von Wirksubstanzen, welche metabolisch in eine erfindungsgemäß aktive Substanz umgewandelt werden. Bevorzugt erfolgt die Verwendung mindestens einer erfindungsgemäßen Wirksubstanz zur Prophylaxe oder Therapie einer Viruserkrankungen, die durch RNA- oder DNA-Viren, vorzugsweise 5 Negativstrang-RNA Viren, beispielsweise Influenza-Viren, oder Borna-Viren, hervorgerufen werden. Hierzu wird die erfindungsgemäße Wirksubstanz systemisch oder lokal, beispielsweise dermal, nasal, aerogen, in eine Körperhöhle oder in ein Gewebe verabreicht.
10
Weiterhin bevorzugt ist die Verwendung von Acetylsalizylsäure zur Prophylaxe oder Therapie einer Influenza-Virus-Infektion, wobei die Acetylsalizylsäure nasal oder bronchial (aerogen) in
Konzentrationen von vorzugsweise 0,1 bis 4 mM verabreicht wird.
-ic Die Gesamtdosis einer pro Tag beim Menschen sollte zweckmäßigerweise im Bereich von 0,1 bis 30 mg (nasal) bzw. von 0,1 bis 70 mg (bronchial) liegen. Je nach Anwendung kann die Untergrenze aber auch zwischen 0,1 und 20 mg bzw. 50 mg liegen. Je nach Anwendung kann aber auch die Obergrenze zwischen 1 mg bzw. 2 mg
,-,n und den angegebenen Maximalwerten liegen. Eine Tagesdosis wird vorteilhafterweise in 1 bis 8 Gaben verabreicht, welche zweckmäßigerweise gleichmäßig über eine Wachdauer von 16 Stunden verteilt sind. Eine Behandlung erfolgt zweckmäßigerweise über einen Zeitraum von 1 bis 7 Tagen und länger. Die Erfindung um-
„_. faßt insofern auch galenisch hergerichtete Gabeeinheiten, wobei 25 die in einer Gabeeinheit vorliegende Menge des Wirkstoffes gemäß vorstehenden Bereichen eines Behandlungsplanes unschwer errechenbar ist.
Eine weitere Ausführungsform der vorliegenden Erfindung betrifft ein Kombinationspräparat für die Prophylaxe und/oder Therapie einer Viruserkrankung, enthaltend mindestens zwei antiviral wirkende Wirksubstanzen, wobei mindestens eine antiviral wirkende Wirksubstanz mindestens eine Komponente des NF-kB Signalübertragungsweges derart hemmt, dass die Vermehrung des Virus in einem Organismus gehemmt wird. Vorzugsweise wird diese antiviral wirkende Wirksubstanz ausgewählt aus den bereits vorste- 5 hend aufgeführten erfindungsgemäßen Wirksubstanzen. Zu den weiteren antiviral wirkenden Wirksubstanzen in dem erfindungsgemäßen Kombinationspräparat gehören entweder mindestens eine andere erfindungsgemäße Wirksubstanz und/oder mindestens eine antvirale Wirksubstanz wie beispielsweise: Amantadin θ (1-Adamantanamin) und dessen Derivate, welches bzw. welche gegen ein Transmembranprotein von einigen Influenza-A Viren gerichtet ist bzw. sind, wie beispielsweise das Rimantadine, Therapeutika für Influenzainfektionen, die das Influenza-virale Oberflächenprotein Neuraminidase hemmen. Hierzu gehört beispielsweise Re- c lanza, Inhibitoren des Raf-MEK-ERK- Signalübertragungsweges wie zum Beispiel U0126 oder weiterer Inhibitoren, wie sie in der PCT/DE 01/01292 beschrieben wurden, Inhibitoren des MEKK/SEK- Signalübertragungsweges oder der Komponenten weiterer Signalübertragungswege wie sie in der DE 10138 912 beschrieben n wurden und synthetische Nucleosidanaloga wie beispielweise 3-Deaza adenosin und Ribavirin.
Das Kombinationspräparat kann in Form eines Gemisches oder als einzelne Komponenten zur gleichzeitigen oder zeitlich unterschiedlichen Anwendung an gleichen oder unterschiedlichen Orten 5 systemisch oder lokal angewendet werden. Es gelten die vorstehend zu Darreichungsformen getroffenen Ausführungen analog.
Die Verabreichung des Kombinationspräparates kann als Mischung der Wirksubstanzen erfolgen. Die Wirksubstanzen können pro Vera0 breichung jedoch auch getrennt voneinander an dem gleichen Ort, beispielsweise systemisch durch intravenöse Injektion oder lokal, beispielsweise durch nasale, aerogene oder dermale Verabreichung oder durch Injektion in ein Gewebe oder auch an voneinander getrennten Orten, gleichzeitig oder auch zu unterschiedlichen Zeitpunkten innerhalb eines Zeitraumes, in welchem die zuerst verabreichte Substanz noch Wirkung zeigt, beispiel- 5 sweise in einem Zeitraum von drei Tagen, verabreicht werden.
Eine besondere Form der Verabreichung der erfindungsgemäßen Wirksubstanz im Sinne der Erfindung ist die aerogene, das heißt nasale oder bronchiale Verabreichung der Wirksubstanz zur Pro- χθ phylaxe oder Therapie derjenigen Virusinfektionen, welche aerogen infizieren. Hierzu werden galenische Hilfsmittel und Zerstäuber der Wirksubstanz verwendet, wie sie dem Fachmann hinreichend bekannt sind.
ιc Eine weitere Ausführungsform der vorliegenden Erfindung betrifft ein Testsystem zum Auffinden von Wirksubstanzen, welche mindestens eine Komponente des NF-kB Signalübertragungsweges derart hemmen, dass eine Virusvermehrung gehemmt wird, enthaltend a. mindestens eine mit mindestens einem Virus infizierbare Zelle,
„n die den NF-kB Signalübertragungsweg enthält und mindestens einen die Zellen infizierenden Virus oder b. mindestens eine mit mindestens einem Virus infizierte Zelle, bei welcher mindestens eine Komponente des NF-kB Signalübertragungsweges fehlt oder defekt mutiert ist.
25
Zellen im Sinne der vorliegenden Erfindung sind Zellen aus unterschiedlichen Organen und Geweben, beispielsweise Zellen der Blut- und Lymphgefäße, Zellen, die Körperhöhlen auskleiden. Ebenfalls umfasst sind Zellkulturen, besonders solche, welche von Zellbanken, beispielsweise der ATCC, zu erwerben sind, ins- 30 besonders permissive, eukaryotische Zellkulturen, beispielsweise
A549, 293, 293T und 293T7 { Homo sapiens) , B82, NIH 3T3, L929 aus
Mus musculus - BHK aus Cricetus cricetus , CHO aus Cricetulus griseus, MDCK aus Canis familiaris , Vero, COS-1 und COS-7 aus Cercopithecus aethiops , sowie primäre Embryo-Fibroblasten aus Gallus gallus (CEF cells) .
5 Beispielsweise wird in dem erfindungsgemäßen Testsystem zum Auffinden von Wirksubstanzen durch Zugabe von Substanzen, vorzugsweise in Konzentrationen von 0.001 μM bis 100 μM, und Viren in einer Partikelzahl, welche die ausgewählte Zelle infizieren können, geprüft, ob eine Substanz in der Lage ist, die Virusverme- Q hrung zu hemmen, ohne die Zelle zu schädigen.
Vorzugsweise handelt es sich bei dem in dem erfindungsgemäßen Testsystem verwendeten Virus um ein RNA- oder DNA-Virus, vorzugsweise um ein Influenza-Virus. 5
In einer bevorzugten Ausführungsform enthält die Zelle a) des erfindungsgemäßen Testsystems mindestens eine überexprimierte Komponente des NF-kB Signalübertragungsweges, auch in Form von konstitutiv aktiven Mutanten dieser Komponenten, insbesondere n durch Einführung eines oder mehrerer diese Komponente kodierenden Gens bzw. Gene. Durch diese Überexpression werden Substanzen entdeckt, welche diese Komponente sowohl stark inhibieren wie auch intrazellulär zur Inhibition der überexprimierten Komponente eine hohe Konzentration erreichen können. Zur Kontrolle ist in einer Zelle b) des erfindungsgemäßen Testsystems die Ex- 5 pression für mindestens eine Komponente des NF-kB Signalübertragungsweges inhibiert, beispielsweise durch die Einführung einer antisense DNA oder einer antisense RNA oder durch die Einführung mindestens eines Gens kodierend für mindestens eine dominantnegative Mutante mindestens einer Komponente des NF-kB Signalübertragungsweges .
Eine weitere Ausführungsform der vorliegenden Erfindung betrifft ein Verfahren zum Auffinden von mindestens einer erfindungsgemäßen Wirksubstanz zur Prophylaxe und/oder Therapie von Viruserkrankungen, welche die Vermehrung von Viren bei Viruserkrankungen hemmt bzw. hemmen, enthaltend folgende Schritte: a. Inkontaktbringen mindestens eines erfindungsgemäßen Testsys- 5 tems mit mindestens einer potentiellen Wirksubstanz, und b. Bestimmung der Auswirkung auf die Virusvermehrung.
Inkontaktbringen im Sinne dieser Erfindung kann beispielsweise durch Zugabe der Wirksubstanzen in das Nährmedium einer Zellkul- χθ tur oder durch lokale oder systemische Verabreichung der Wirksubstanzen in einen Organismus erfolgen.
Inkontaktbringen im Sinne der vorliegenden Erfindung umfasst ebenfalls die nach dem Stand der Technik üblichen Verfahren, die
-j das Einführen von Substanzen in intakte Zellen erlauben, beispielsweise Infektion, Transduktion, Transfektion und/oder Transformation und weitere dem Fachmann bekannte Methoden. Diese Verfahren sind insbesondere bevorzugt, wenn es sich bei der Substanz um Viren, nackte Nukleinsäuren, beispielsweise antisense
„n DNA und/oder antisense RNA, Viroide, Virosomen und/oder Liposomen handelt, wobei Virosomen und Liposomen ebenfalls geeignet sind, neben einem Nukleinsäuremolekül weitere Wirksubstanzen in die Zelle zu bringen.
Das Bestimmen der Auswirkung auf die Virusvermehrung erfolgt 25 beispielsweise durch Plaque-Assays oder durch Bestimmung der HA-Units zum Vergleich des Virustiters behandelter und nicht behandelter infizierter Zellen.
Eine weitere bevorzugte Ausführungsform der vorliegenden Er- 30 findung betrifft ein Verfahren zur Herstellung eines Arzneimittels zur Prophylaxe und/oder Therapie von mindestens einer Viruserkrankung, welche die Vermehrung von Viren bei Viruserkrankungen hemmt bzw. hemmen, enthaltend folgende Schritte: a. Durchführen eines erfindungsgemäßen Testsystems und b. Versetzen des/der aufgefundenen und in physiologisch wirksamer Dosis dosierten Wirksubstanz/en mit mindestens einem Hilfs- 5 und/oder Zusatzstoff und definierter galenischer Herrichtung.
Vorzugsweise wird die Wirksubstanz gemäß vorliegender Erfindung für die lokale oder systemische Verabreichung in einen Organismus mit Hilfe der dem Fachmann geläufigen Methoden und Hilfs- Q und/oder Zusatzstoffen zu einem Arzneimittel zubereitet.
Geeignete Hilfs- und Zusatzstoffe, die beispielsweise der Stabilisierung oder Konservierung des Arzneimittels oder Diag- nostikums dienen, sind dem Fachmann allgemein bekannt (siehe z. 5 B. Sucker H et al . , (1991) Pharmazeutische Technologie, 2. Auflage, Georg Thieme Verlag, Stuttgart) . Beispiele für solche Hilfs- und/oder Zusatzstoffe sind physiologische Kochsalzlösungen, Ringer-Dextrose, Dextrose, Ringer-Laktat, entmineralis- iertes Wasser, Stabilisatoren, Antioxidantien, Komplexbildner, 0 antimikrobielle Verbindungen, Proteinaseinhibitoren und/oder inerte Gase.
Die lokale Verabreichung kann beispielsweise auf die Haut, auf die Schleimhaut, in eine Körperhöhle, in ein Organ, in ein Gelenk oder in das Binde- oder Stützgewebe nasal oder aerogen er5 folgen. Die systemische Verabreichung erfolgt vorzugsweise in den Blutkreislauf, in die Peritonealhöhle oder in die Bauchhöhle.
Die ArzneimittelZubereitung enthaltend die erfindungsgemäße 0
Wirksubstanz richtet sich nach der Art der Wirksubstanz und der
Art ihrer Verabreichung und kann beispielsweise eine Lösung, eine Suspension, eine Salbe, ein Puder, eine Sprayform oder eine andere Inhalationszubereitung darstellen. Vorzugsweise werden Nukleotidsequenzen mit dem Fachmann bekannten Methoden in einen viralen Vektor oder ein Plasmid eingefügt und mit Hilfsstoffen für die Zelltransfektion versetzt. Zu diesen Hilfsstoffen ge- 5 hören beispielsweise kationische Polymere oder kationische Lipide . Antisense-Oligonukleotide werden mit den dem Fachmann geläufigen Methoden derivatisiert, um sie vor dem enzymatischen Abbau durch DNAsen oder RNAsen zu schützen.
χθ Die Wirksubstanz gemäß der Erfindung kann in Form eines Salzes, Esters, Amids oder als eine Vorstufe vorliegen, wobei vorzugsweise nur Modifikationen der Wirksubstanz verwendet werden, die keine übermäßige Toxizität, Irritationen oder allergische Reaktionen am Patienten auslösen.
15
Die Wirksubstanz wird unter sterilen Bedingungen, mit einem physiologisch akzeptablen Trägerstoff und möglichen Preserva- tiven, Puffern oder Treibmitteln, je nach Bedarf, vermischt.
Derartige Trägerstoffe für Arzneimittelzubereitungen sind dem
,->n Fachmann geläufig.
Bevorzugt wird die erfindungsgemäße Wirksubstanz in einer einmaligen Dosis, besonders bevorzugt in mehreren Dosen verabreicht, wobei die einzelnen Dosen die maximal tolerable Dosis (MTD) der jeweiligen Wirksubstanz für den Menschen nicht übersteigt. Vorzugsweise wird eine Dosis gewählt, welche die Hälfte der MTD beträgt. Die Tagesdosis kann einmalig am Tag oder in mehreren Teilportionen aufgeteilt über den Tag hinweg, vorzugsweise in etwa gleichen Zeitabständen verabreicht werden.
30
Gemäß der vorliegenden Erfindung kann die Verabreichung entweder lokal oder systemisch, nur an einem Tag oder über mehrere Tage täglich oder an jedem zweiten oder dritten Tag über mehrere Wochen erfolgen, bis eine therapeutische Wirkung sichtbar wird.
5 Beispiel 1: Testsystem zur Auffindung von antiviralen Wirkstoffen
Mit Hilfe retroviraler Transduktion der humanen Lungenepithel- zellen A549, der caninen Nierenepitehlzellen MDCK und der Affen- θ zellen Vero wurden Zelllinien hergestellt, welche stabil entweder eine dominant negative Form der IKK (IKK KD) oder eine dominant-interferierende mutierte Form des Inhibitors von NF-kB, mlkB, exprimieren. Darüber hinaus wurden ebenfalls entsprechende Linien generiert, welche eine aktive Form der IKK (IKK EE) ex- c primieren. Sowohl die Konstrukte als auch Ihre Wirksamkeit auf die NF-kB vermittelte Genexpression in Zellen wurden bereits beschrieben (Denk et al J Biol Chem 276, 28451-28458, 2001) .
Zur Generierung der stabilen Zelllinen wurde die entsprechenden Q cDNAs für IKK KD, mlkB und IKK EE in sense-Orientierung in den retroviralen Expressionsvektor pCFG5 IEGZ (Kuss et al . Eur J Immunol 29,3077-3088,1999) einkloniert. Neben der Boten-RNA des 'gene of interest' kodiert die Vektor DNA noch für die Boten-RNA des "green fluorescent protein" (GFP) , welches während der Proteinsynthese ausgehend von einer internen Ribosomenbindestelle exprimiert wird. Dies erlaubt die Identifizierung stabil trans- duzierter Zellen in der Durchflusszytometrie. Darüber hinaus vermittelt der Vektor eine Resistenz gegen das Antibiotikum Zeo- cin. Die verschiedenen Expressionskonstrukte sowie der Leervektor würden mit Hilfe der Calciumphosphatprezipitationsmethode in die virusproduzierende Zelline 0NX (Grignani et al . , Cancer Res 58,14-19,1998) transfiziert (Denk et al . , J Biol Chem 276, 28451-28458, 2001) . Die Transfektionseffizienz wurde nach 24h anhand der GFP Expression kontrolliert und war in der Größenordnung von 70-80%. Die Zellen wurden darauf hin für ca. 2 Wochen mit 1mg/ml Zeocin im Medium selektioniert .
5 Zur Infektion der verschiedenen Zielzellen (A549, MDCK, Vero) mit den rekombinanten Retroviren wurden die retrovirushaltigen Mediumüberstände der virusproduzierenden Zellinien filtriert, mit 5 μg/ml Polybrene (Sigma) versetzt und auf frische Zellen gegeben. Die Infektion erfolgte während 2mal 3-stündiger Zen- χθ trifugation (lOOOxg) an zwei aufeinander folgenden Tagen. Stabil transduzierte Zellen wurden 24h nach Infektion für zwei weitere Wochen mit 400-600 μg/ml Zeozin im Mediumüberstand selektioniert. Nach der so erfolgten Generierung der stabilen Zellinien wurden sowohl diese als auch Wildtyp Influenza A Virus ιc wie im folgenden beschrieben infiziert und die Virustiter von
Zellen, welche stabil den Vektor, IKK KD, mlkB und IKK EE trugen im Vergleich zum Titer aus dem Überstand von Wildtyp Zellen bestimmt.
20 Parallel wurden MDCK Zellen mit Hilfe des Transfektionsreagenz Lipofectamine 2000 (Life Technologies) nach Standardmethoden (Ludwig et al . , J Biol Chem 276,10990-10998, 2001) mit den gleichen Konstrukten transient transfiziert . Die Transfektion- seffizienzen lagen bei >60%. 24h nach Transfektion erfolgte wie bei den stabilen Linien Infektion mit dem Influenza A Virusstamm
25 fowl plaque virus (FPV) mit einer Multiplizität der Infektion von 1 (M.0.I.=1) . Weitere 24h nach Infektion wurden die Titer der neu gebildeten Viren im Zellkulturüberstand in Standard Plaque-Assays auf MDCK Zellen überprüft. Verglichen wurde auch hier der Virustiter von Influenza A Virus-infizierten Zellen,
30 welche entweder mit dem Leervektor oder Konstrukten welche IKK KD, mlkB und IKK EE exprimierten, transfiziert waren. Es zeigten sich die folgenden Ergebnisse. Der Vergleich der Virustiter von Influenza A Virus-infizierten MDCK Zellen, welche zuvor entweder mit dem Leervektor oder einem Konstrukt, welches IKK KD oder mlkB exprimierte, transfiziert worden waren, zeigte, 5 dass in IKK KD oder mlkB exprimierenden Zellen die Vermehrung der Viren nach 24h zu 50%-70% gehemmt war. Entsprechend fand man in Zellen, welche die aktive Form von IKK, IKK EE exprimierten, ein Steigerung der Virusvermehrung. Diese Ergebnisse waren in mehreren unabhängigen Ansätzen reproduzierbar. Entsprechende θ Ergebnisse konnten auch in den stabilen A549, MDCK und Vero Zelllinien erhalten werden, welche entweder IKK KD, mlkB oder IKK EE exprimierten, wobei die größten Effekte in stabil trans- fizierten A549 Zellen beobachtet wurden. Hier führte eine Hemmung der NF-kB Aktivierung durch IKK KD oder mlkB zu einer bis ic zu 10-fachen Reduktion der Virustiter, während konstitutive Aktivierung des Signalwegs durch stabile Expression von IKK EE die Virusausbeute um das zehnfache verstärkte. Diese Befunde zeigen, dass Aktivierung von IKK und NF-kB essentiell für die Influenza Virus Vermehrung ist und die spezifische Inhibition des IKK/NF- pn kB Signalmoduls s zu einer signifikanten Reduktion der Virusproduktion führt.
Beispiel 2: Hemmung der viralen NF-kB Aktivierung und Reduktion der Influenza Virus in vitro 25
2.1: Acetylsalizylsäure (ASS)
Salicylate, wie ASS oder Sulfosalazine finden weitgehende klinische Anwendung als Schmerzmittel und antiinflammatorische 30
Agenzien. Neuere Publikationen zeigen, dass diese Substanzen direkte und effektive Inhibitoren der IKK sind (Yin et al . , Nature 396, 77-80, 1998; Weber et al . , Gastroenterology 119,1209-1218, 2000) wie auch in vitro die Vermehrung von Influenzaviren hemmen können (Huang und Dietsch, New Engl J Med 319,797,1988 ). Als Positivkontrolle diente somit ASS. A549 Lun- genepithelzellen wurden mit ansteigenden Konzentrationen von ASS 5 im Bereich 0,01 mM-5mM behandelt. Diese Konzentrationen verblieben über das gesamte Experiment im Kulturmedium. Eine Stunde nach Behandlung erfolgte Infektion mit dem Influenza A Virusstamm fowl plaque virus (FPV) mit einer Multiplizität der Infektion von 1 (M.O.I.=l) . Weitere 24h nach Infektion wurden die χθ Titer der neu gebildeten Viren im Zellkulturüberstand in Standard Plaque-Assays auf MDCK Zellen überprüft.
In einem zweiten Ansatz wurden MDCK Zellen ein Stunde vor Infektion bzw. zwei und vier Stunden nach Infektion mit 5 mM ASS be- ic handelt. Infektion und Nachweis der neu-gebildeten Viren erfolgte wie oben.
Es zeigten sich die folgenden Ergebnisse. Nach Vergleich der Virustiter aus A549 Kulturüberständen 24h p.i. von nicht ASS- 7(-, behandelten mit ASS-behandelten Zellen ergab sich ein konzentrationsabhängige Inhibition der Virusvermehrung, die jedoch erst deutlich war bei 5mM und hier 2 log Stufen umfasste. Eine entsprechende hemmende Wirkung (> 2 log Stufen) von 5mM ASS konnte auch bei infizierten MDCK Zellen beobachtet werden, wobei hier bei Zugabe von ASS 4h nach Infektion immer noch eine Reduktion 25 der Virustiter um das 10-fache bewirkte.
2.2: Pyrrolidine-dithiocarbamate (PDTC)
30
Antioxidantien wie Pyrrolidine-dithiocarbamate (PDTC) sind hinlänglich als Inhibitoren von NF-kB Aktivierung bekannt (Übersicht in: Piette et al . , Biol Chem 378, 1237-1245, 1997). Daher wurde untersucht, ob auch diese Substanzklasse hemmend auf die Influenza Virus Vermehrung wirken kann. A549 Zellen wurden eine Stunde vor Infektion mit PDTC in Konzentrationen von 3-24 micromolar behandelt. Infektion und Nachweis der neu-gebildeten Viren 5 24h p.i. erfolgte wie für ASS beschrieben in An- bzw. Abwesenheit von PDTC über das gesamte Experiment.
Es zeigten sich die folgenden Ergebnisse. Auch PDTC Behandlung führte zu einer konzentrationsabhängigen Inhibition der Virus- θ titer in A549 Zellen bis zu hin zu einer etwa 10-fachen Reduktion bei Gabe der maximal eingesetzten Konzentration von 24 micromolar. Diese Daten zeigen, dass die IKK und NF-kB hemmenden Agenzien ASS und PDTC, analog der Wirkung dominant-negativer Mutanten aus dem NF-kB Signalmodul, einen signifikant hemmenden
•i Effekt auf die Influenza Virus-Vermehrung in Zellkultur haben.
Beispiel 3: Wirkung von ASS auf die Influenzainfektion in der Maus
„n 3.1: i . p. /parenterale Verabreichung
C57 Bl/6 Mäuse wurden mit 5000 pfu/20μl Influenza-Virus (Fowl Plague Virus , FPV) nasal infiziert. 30 min vor Infektion wurden 500μl ASS (50mM = 9mg/ml PBS, Sigma-Aldrich Steinheim) i.p. injiziert, nachfolgend wurde ASS (50 mM = 9mg/ml) kontinuierlich
25 im Trinkwasser verabreicht. Zur Kontrolle wurde PBS injiziert bzw, verabreicht. Körpergewicht, Todesrate und Überlebensdauer wurde bestimmt. Pro Gruppe wurden 30 Mäuse behandelt.
Es zeigten sich die folgenden Ergebnisse. Während in der Kontrollgruppe alle Tiere an Influenza starben, überlebten in der ASS Gruppe etwa 20% der Tiere die Infektion. Des weiteren war die mittlere Überlebenszeit der verstorbenen Tiere im Vergleich zur Kontrollgruppe deutlich verlängert. ASS in Konzentrationen von 50 mM verabreicht führte jedoch zu einer deutlichen Verminderung des Körpergewichtes aufgrund der toxischen Dosis.
5 3.2: aerogene Verabreichung
C57 Bl/6 Mäuse wurden mit 5000 pfu/20μl bzw mit 10.000 pfu/20 ml
Influenza-Virus (Fowl Plague Virus , FPV) nasal infiziert.
Bei Behandlungsbeginn am Tag 0 wurde 30 min nach der Infektion χθ in die Mäuse unter Betäubung (i.p. Injektion von 300μl
Ketamin/Rompun; Serum Werk Bernburg; Bayer Ag Leverkusen) ein Tracheotubus eingeführt und mit Hilfe eines Nebulizers (Hugo Sachs Elektronik-Harvard App. GmbH March-Hugstetten) Aerosol (Verabreichung von 600 μl) enthaltend 2mM (= 0,36mg/ml PBS), 10 i^ mM, 20mM oder 50 mM ASS (Sigma-Aldrich Steinheim) oder zur Kontrolle nur PBS verabreicht. Diese aerogene Verabreichung der PrüfSubstanzen wurde in einigen Gruppen an den Tagen 1, 2, 3 oder 1, 2, 5 und 6 wiederholt. In weiteren Gruppen wurde die Behandlung mit ASS an den Tagen 3, 4, 5, 6 nach Infektion durch-
„n geführt. Pro Gruppe wurden 5-6 Tiere behandelt. Körpergewicht, Todesrate und Überlebensdauer wurde bestimmt. In einem weiteren Versuch wurden nach Behandlung mit ASS am Tag 1 am Tag 3 die Tiere getötet und die Viruskonzentration in dem Lungengewebe bestimmt.
25
Es zeigten sich die folgenden Ergebnisse. Geringere Dosen von ASS reduzierten die Viren in der Lunge deutlicher als hohe Dosen. ASS erwies sich ab 20 mM als toxisch (Abnahme des Körpergewichtes) . Während in der Kontrollgruppe alle Tiere an Influenza "starben, überlebten in den Gruppen behandelt mit
30 niedrigen nichttoxischen Dosen (2mM) von ASS etwa 40% die Infektion. Des weiteren war die mittlere Überlebenszeit der verstorbenen Tiere nach ASS im Vergleich zur Kontrollgruppe deutlich verlängert.
Die Ergebnisse in vivo Experimente gemäß der Beispiele 3.1 und 5 3.2 zeigen, dass die einfache oder mehrfache (bis zu 3x) tägliche aerogene Verabreichung von ASS in niedriger nichtoxischer Dosis, i.e. in Dosen von 0,1 mg/kg bis 300 mg/kg Körpergewicht, insbesondere 10 mg/kg bis 100 mg/kg, vorzugsweise 20 mg/kg bis 50 mg/kg, beispielsweise 30 mg/kg, zu einer deutlichen therapeu- χθ tischen Wirkung gegen eine tödliche durch nasale Verabreichung des Influenza-Virus induzierte Erkrankung führt. Dabei sollte die Formulierung so gewählt sein, dass die aerogen zu verabreichende pharmazeutische Zusammensetzung ASS in Konzentrationen unterhalb 2 mM, vorzugsweise 0,01 mM bis 1,99 mM, höchstvorzug- ιr sweise 0,1 mM oder 0,5 mM bis 1,5 mM, beispielsweise 1 mM liegt. Die Flüssigphasenmenge an Aerosol ist dabei entsprechend der oben angegebenen Tagesdosen unter Berücksichtigung der eingesetzten Konzentration in der Flüssigphase auszurechnen und einzurichten. Letzteres läßt sich beispielsweise mit üblichen 0 Zerstäubungsvorrichtungen erreichen, welche definierte Mengen einer Lösung zu einem Aerosol versprühen.
25
30

Claims

Patentansprüche
1) Verwendung mindestens einer Wirksubstanz, welche eine Komponente des NF-kB Signalübertragungsweges derart hemmt, dass
5 eine Virusvermehrung gehemmt wird zur Herstellung einer pharmazeutischen Zusammensetzung zur Prophylaxe und/oder Therapie von mindestens einer Viruserkrankung.
2) Verwendung mindestens einer Wirksubstanz nach Anspruch 1, χθ wobei die Komponente des NF-kB Signalübertragungsweges ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus "Tumor necrosis factor receptor associated factor (TRAF) , NF-kB inducing kinase
(NIK) , Mitogen-activated protein kinase kinase kinase 1 (MEKKKl) , Mitogen-activated protein kinase kinase kinase 3 5 (MEKKK3) , AKR mouse thymoma Kinase (AKT) , TGFß activated kinase (TAK1) , Inhibitor of NF-kB kinase alpha (IKKalpha), Inhibitor of NF-kB kinase beta (IKKbeta) , NEMO, Inhibitor von kB (IkB), RELA (p65) , C-REL, RELB, NF-kBl (pl05) , NF-kB2 (plOO), P50, P52
20
Verwendung mindestens einer Wirksubstanz nach einem der Ansprüche 1 bis 2, wobei die Wirksubstanz (en) aus der Gruppe bestehend aus "Inhibitoren einer Kinase des NF-kB Signalübertragungsweges, z.B. nicht-steroidale anti-inflammatorische, die NF-kB Aktivierung inhibierende Substanzen wie beispiel¬
25 sweise Phenylalkylsäurederivate wie beispielsweise Sulindac oder Derivate von Sulindac wie Sulindac- Sulfoxid, Sulidac- Sulfon, Sulindac- Sulfid, Benzylamid Sulindac-Analoga, Sali- cylsäurederivate, wie beispielsweise Salicylsäure oder Acetylsalizylsäure, Salicylamid, Salacetamid, Ethe zamid,
30 Diflunisal, Olsalazin oder Salazosulfapyridin, Curcumin, An- tioxidantien wie Pyrrolidine-dithiocarbamate (PDTC) , Oxicame wie beispielsweise Piroxicam, Vitamin E und Derivate hiervon, wie beispielsweise Pentamethyl-hydroxychroman (PMC) , 17 beta Oestradiol und Derivate hiervon, Polyphenole des Tees wie beispielsweise (-) - epigallocatechin-3-gallat (EGCG) , Bayll-7182, Peptide, welche die Interaktion von mindestens 5 zwei Komponenten des NF-kB Signalübertragungsweges inhibieren, beispielsweise an NEMO bindende Peptide, Inhibitoren des Proteosoms, beispielsweise PS-341 und Lactacystin, Antisense-Oligonukleotide, welche sich spezifisch an die DNA- Sequenz oder m-RNA Sequenz kodierend für eine Komponente des O NF-kB Signalübertragungsweges anlagern und deren Transkription oder Translation inhibieren, beispielsweise Antisense Nukleotidsequenzen spezifisch für p65 oder p50, Dominant negative Mutanten einer Komponente des NF-kB Signalübertragungsweges, dsOligonukleotide, die geeignet sind zur geziel- ι ten Degradierung der mRNAs einer Komponente des NF-kB
Signalübertragungsweges durch die RNAi-Technologie, Antikörper oder Antikörperfragmente spezifisch für eine Komponente des NF-kB Signalübertragungsweges, oder Fusionsproteine, enthaltend mindestens ein Antikörperfrag¬
20 ment, beispielsweise ein Fv-Fragment, welche mindestens eine Komponente des NF-kB Signalübertragungsweges inhibieren
4) Verwendung mindestens einer Wirksubstanz nach einem der Ansprüche 1 bis 3, wobei die Viruserkrankung durch Infektion mit RNA- oder DNA-Viren, vorzugsweise Influenza-Viren, her¬
25 vorgerufen wird.
Kombinationspräparat zur Prophylaxe und/oder Therapie von mindestens einer Viruserkrankung, enthaltend mindestens zwei voneinander verschiedene Wirksubstanzen, wobei mindestens
30 eine Wirksubstanz aus der Gruppe gemäß Anspruch 3 ausgewählt ist, wobei das Kombinationspräparat in Form eines Gemisches oder als einzelne Komponenten zur gleichzeitigen oder zeitlich unterschiedlichen Anwendung an gleichen oder unterschiedlichen Orten anwendbar ist.
6) Kombinationspräparat nach Anspruch 5, bei welchem mindestens 5 eine antiviral wirkende Substanz 1-Adamantanamin, Riman- tadine, ein Neuraminidaseinhibitor oder ein Nukleosidanalogon wie Ribavirin ist.
7) Verwendung eines Wirkstoffes oder Kombinationspraeparates χθ nach einem der Ansprüche 1 bis 6 für die Prophyllaxe und/oder Therapie einer Infektion mit Negativstrang-RNA Viren, im besonderen Influenza Viren oder Bornaviren.
8) Verwendung eines Wirkstoffes oder Kombinationspräparat nach ic einem der Ansprüche 1 bis 7 in einer Zubereitung für die nasale, bronchiale oder aerogene Verabreichung, wobei der Wirkstoff in einer Konzentration von 0,1 bis 4 mM in der Zubereitung vorliegt, wobei die Gesamtmenge des Wirkstoffes pro Gabeeinheit vorzugsweise im Bereich von 0,1 bis 70 mg
?(-, liegt, wobei die pharmazeutische Zusammensetzung mit der
Maßgabe hergerichtet und konfektioniert ist, dass die Tagesdosis beim Menschen 70 mg nicht überschreitet.
Testsystem zum Auffinden von Wirksubstanzen, welche auf mindestens eine Komponente des NF-kB Signalübertragungsweges
25 derart wirken dass eine Virusvermehrung im wesentlichen gehemmt wird, enthaltend a. mindestens eine mit mindestens einem Virus infiz:ierbare Zelle, die den NF-kB Signalübertragungsweg enthält und mindestens einen die Zellen infizierenden Virus oder b. mindestens eine mit mindestens einem
30 Virus infizierte Zelle, die den NF-kB Signalübertragungsweg überexprimiert . 10) Testsystem nach Anspruch 9, wobei es sich bei dem Virus um ein RNA- oder DNA-Virus, vorzugsweise um ein Influenza-Virus handelt.
11) Testsystem nach Anspruch 9 oder 10, wobei die Zelle mindestens eine überexprimierte Komponente des NF-kB Signalübertragungsweg, auch in konstitutiv aktiv mutierter Form, enthält .
12) Testsystem nach einem der Ansprüche 9 bis 12, wobei es eine Zelle enthält, in welcher mindestens ein Gen kodierend für mindestens eine dominant negative Mutante mindestens einer Komponente des NF-kB Signalübertragungsweges überexprimiert ist.
13) estsystem nach einem der Ansprüche 9 bis 12, wobei es eine
Zelle enthält, in der die Expression für mindestens eine
Komponente des NF-kB Signalübertragungsweges überexprimiert ist .
14) Verfahren zum Auffinden von mindestens einer Wirksubstanz zur
Prophylaxe und/oder Therapie von Viruserkrankungen, welche die Vermehrung von Viren bei Viruserkrankungen im wesentlichen hemmen, enthaltend folgende Schritte: a. In- kontaktbringen mindestens eines Testsystems nach einem der Ansprüche 9 bis 13 mit mindestens einer potentiellen Wirksubstanz, b. Bestimmung der Auswirkung auf die Virusvermehrung und c. Selektion einer potentiellen Wirksubstanz als Wirkstoff, wenn die Virusvermehrung gegenüber einer Durchführung der Stufe "a. jedoch ohne potentielle Wirksubstanz oder mit einer Wirk-Referenzsubstanz oder mit einer Kontrollsubstanz verringert ist. 5) Verfahren zur Herstellung eines Arzneimittels zur Prophylaxe und/oder Therapie von mindestens einer Viruserkrankung, welches die Vermehrung von Viren bei Viruserkrankungen im wesentlichen hemmt bzw. hemmen, enthaltend folgende Schritte: a. Durchführen eines Testsystems nach einem der Ansprüche 9 bis 14, b. Versetzen des/der aufgefundenen Wirksubstanz/en in physiologisch wirksamer Dosis mit mindestens einem Hilfsund/oder Zusatzstoff und definierter galenischer Herrichtung.
PCT/DE2004/000012 2003-01-03 2004-01-02 Verwendung von wirksubstanzen zur prophylaxe und/oder therapie von viruserkrankungen Ceased WO2004060360A1 (de)

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DK04700037.7T DK1599194T3 (da) 2003-01-03 2004-01-02 Anvendelse af acetylsalicylsyre til profylaksen og/eller terapi af virussygdomme
JP2006500466A JP2006517204A (ja) 2003-01-03 2004-01-02 ウイルス性疾患の予防及び／又は治療用活性成分の使用
DE502004011897T DE502004011897D1 (de) 2003-01-03 2004-01-02 Verwendung von acetylsalizilsäure zur prophylaxe und/oder therapie von viruserkrankungen
US12/199,694 US8313751B2 (en) 2003-01-03 2008-08-27 Compositions and methods for the prophylaxis or treatment of viral diseases

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Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE102008004386A1 (de) 2008-01-14 2009-07-23 Activaero Gmbh Verwendung eines Acetylsalicylsäuresalzes zur Behandlung viraler Infektionen
DE102009009245A1 (de) 2009-02-17 2010-08-19 Alekseev Sergey Spüllösung zur Vorbeugung und Behandlung von Virusinfektionen
US7893108B2 (en) 2004-07-14 2011-02-22 President And Fellows Of Harvard College Antiviral methods and compositions
EP2374461A1 (de) * 2010-04-08 2011-10-12 Hans Otto Meyer Zu Spelbrink Piroxicam zur prohylaktischen und therapeutischen Behandlung von Herpes-Infektionen
CN102697872A (zh) * 2012-06-27 2012-10-03 苏州科牧动物药品有限公司 鸡喉净酊及制备工艺
DE102014111892A1 (de) 2014-08-20 2016-02-25 Eberhard Karls Universität Tübingen Medizinische Fakultät Prophylaxe und Behandlung einer Infektion mit dem Hantavirus
WO2017109037A1 (en) * 2015-12-22 2017-06-29 Ventaleon Gmbh Treatment of moderate to severe influenza

Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE102006008321A1 (de) * 2006-02-17 2007-08-30 Virologik Gmbh Mittel zur Behandlung von Infektionen mit Influenzaviren
US7981930B2 (en) * 2007-03-13 2011-07-19 Adamas Pharmaceuticals, Inc. Compositions and kits for treating influenza
US20110003393A1 (en) * 2007-10-25 2011-01-06 President And Fellows Of Harvard College Systems and methods for studying influenza
WO2018078532A1 (en) * 2016-10-24 2018-05-03 Agro Innovation International (A.I.I.) Methods of rapidly preventing the spread of avian influenza virus in poultry flocks
HUE055738T2 (hu) * 2017-10-17 2021-12-28 Atriva Therapeutics Gmbh Új MEK-inhibitor vírus- és baktérium-fertõzések kezelésére
CN114306326B (zh) * 2022-01-17 2023-06-20 中国科学院武汉病毒研究所 吡咯烷二硫代甲酸铵盐的应用

Citations (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE3832799A1 (de) * 1988-09-25 1990-03-29 Huang Tzong Chou Prof Dr Anwendung von acetylsalicylsaeure und verwandter verbindungen fuer die direkte bekaempfung von viren und damit verbundener erkrankungen
EP0417385A2 (de) * 1989-09-14 1991-03-20 Mitsui Norin Co., Ltd. Thee oder Thee-Polyphenole enthaltendes Vorbeugungs- und Behandlungsmittel gegen Influenzavireninfektion
WO1998052540A1 (en) * 1997-05-22 1998-11-26 The Boots Company Plc Pharmaceutical compositions
US6107281A (en) * 1997-01-13 2000-08-22 Nutri-Quest, Inc. Compounds and their combinations for the treatment of influenza infection
WO2000050633A1 (en) * 1999-02-24 2000-08-31 The General Hospital Corporation Method for cloning signal transduction intermediates
US6130226A (en) * 1996-08-12 2000-10-10 Celgene Corporation Immunotherapeutic agents
WO2001083547A2 (en) * 2000-05-02 2001-11-08 Yale University Anti-inflammatory compounds and uses thereof
WO2002051413A2 (en) * 2000-12-27 2002-07-04 Shire Biochem Inc. Macrocyclic anti-viral compounds
GB2374008A (en) * 2001-04-04 2002-10-09 John Carter Compositions including copper and their uses
US6514955B1 (en) * 1993-05-13 2003-02-04 Hiv Diagnostics, Inc. Multi-faceted method to repress reproduction of latent viruses in humans and animals

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ATE221379T1 (de) * 1991-05-01 2002-08-15 Jackson H M Found Military Med Verfahren zur behandlung infektiöser respiratorischer erkrankungen
IT1289250B1 (it) * 1996-12-13 1998-09-29 Consiglio Nazionale Ricerche Impiego di 2 ciclopenten 1-one e suoi derivati come inibitori del fattore nf-kb
AU5620598A (en) * 1996-12-31 1998-07-31 Antioxidant Pharmaceuticals Corporation Pharmaceutical preparations of glutathione and methods of administration thereof
US7122544B2 (en) * 2000-12-06 2006-10-17 Signal Pharmaceuticals, Llc Anilinopyrimidine derivatives as IKK inhibitors and compositions and methods related thereto
EP1273297A1 (de) * 2001-07-06 2003-01-08 Deutsches Krebsforschungszentrum Stiftung des öffentlichen Rechts Vitamin E für die Behandlung von Krankheiten in denen die Bindung des Transkriptionsfaktors NF-KB und/oder AP-1 an die Zielorte des Promotors einen günstigen Effekt hat (z.B. AIDS, Herzinfarkt)
DE10138912A1 (de) 2001-08-08 2003-02-27 Medinnova Ges Med Innovationen Verwendung von Wirksubstanzen zur Prophylaxe und/oder Therapie von Viruserkrankungen sowie Testsystem zum Auffinden solcher Wirksubstanzen

Patent Citations (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE3832799A1 (de) * 1988-09-25 1990-03-29 Huang Tzong Chou Prof Dr Anwendung von acetylsalicylsaeure und verwandter verbindungen fuer die direkte bekaempfung von viren und damit verbundener erkrankungen
EP0417385A2 (de) * 1989-09-14 1991-03-20 Mitsui Norin Co., Ltd. Thee oder Thee-Polyphenole enthaltendes Vorbeugungs- und Behandlungsmittel gegen Influenzavireninfektion
US6514955B1 (en) * 1993-05-13 2003-02-04 Hiv Diagnostics, Inc. Multi-faceted method to repress reproduction of latent viruses in humans and animals
US6130226A (en) * 1996-08-12 2000-10-10 Celgene Corporation Immunotherapeutic agents
US6107281A (en) * 1997-01-13 2000-08-22 Nutri-Quest, Inc. Compounds and their combinations for the treatment of influenza infection
WO1998052540A1 (en) * 1997-05-22 1998-11-26 The Boots Company Plc Pharmaceutical compositions
WO2000050633A1 (en) * 1999-02-24 2000-08-31 The General Hospital Corporation Method for cloning signal transduction intermediates
WO2001083547A2 (en) * 2000-05-02 2001-11-08 Yale University Anti-inflammatory compounds and uses thereof
WO2002051413A2 (en) * 2000-12-27 2002-07-04 Shire Biochem Inc. Macrocyclic anti-viral compounds
GB2374008A (en) * 2001-04-04 2002-10-09 John Carter Compositions including copper and their uses

Non-Patent Citations (20)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
BERNASCONI P ET AL: "Evaluation of a new pharmaceutical form of nimesulide for the treatment of influenza.", DRUGS UNDER EXPERIMENTAL AND CLINICAL RESEARCH. 1985, vol. 11, no. 10, 1985, pages 739 - 743, XP009031193, ISSN: 0378-6501 *
BETTINI R ET AL: "Diclofenac sodium versus acetylsalicylic acid: a randomized study in febrile patients.", THE JOURNAL OF INTERNATIONAL MEDICAL RESEARCH. 1986, vol. 14, no. 2, 1986, pages 95 - 100, XP009031192, ISSN: 0300-0605 *
BROGGINI M ET AL: "Flurbiprofen versus ASA in influenza symptomatology: a double-blind study.", INTERNATIONAL JOURNAL OF CLINICAL PHARMACOLOGY RESEARCH. 1986, vol. 6, no. 6, 1986, pages 485 - 488, XP009031176, ISSN: 0251-1649 *
CHU WEN-MING ET AL: "JNK2 and IKKbeta are required for activating the innate response to viral infection", IMMUNITY, vol. 11, no. 6, December 1999 (1999-12-01), pages 721 - 731, XP002282727, ISSN: 1074-7613 *
COX N J N J ET AL: "Influenza", LANCET, XX, XX, vol. 354, no. 9186, 9 October 1999 (1999-10-09), pages 1277 - 1282, XP004262683, ISSN: 0140-6736 *
DENK ET AL., J BIOL CHEM, vol. 276, 2001, pages 28451 - 28458
GRIGNANI ET AL., CANCER RES, vol. 58, 1998, pages 14 - 19
HUANG R T ET AL: "Anti-influenza viral activity of aspirin in cell culture.", THE NEW ENGLAND JOURNAL OF MEDICINE. 22 SEP 1988, vol. 319, no. 12, 22 September 1988 (1988-09-22), pages 797, XP009031184, ISSN: 0028-4793 *
HUANG; DIETSCH, NEW ENGL J MED, vol. 319, 1988, pages 797
INGLOT A D: "Comparison of the antiviral activity in vitro of some non-steroidal anti-inflammatory drugs.", THE JOURNAL OF GENERAL VIROLOGY. MAR 1969, vol. 4, no. 2, March 1969 (1969-03-01), pages 203 - 214, XP009031196, ISSN: 0022-1317 *
JONES, AM J THER, vol. 9, 2002, pages 245 - 257
KUSS ET AL., EUR J IMMUNOL, vol. 29, 1999, pages 3077 - 3088
MAY M J ET AL: "Selective inhibition of NF-kB activation by a peptide that blocks the interaction of NEMO with the IkB kinase complex", SCIENCE, AMERICAN ASSOCIATION FOR THE ADVANCEMENT OF SCIENCE,, US, vol. 289, 1 September 2000 (2000-09-01), pages 1550 - 1554, XP002189523, ISSN: 0036-8075 *
MILVIO C: "TREATMENT OF INFLUENZA SYNDROME A DOUBLE-BLIND CONTROLLED TRIAL OF NIMESULIDE VS. ASPIRIN", CLINICAL TRIALS JOURNAL, vol. 22, no. 1, 1985, pages 111 - 117, XP009031194, ISSN: 0009-9325 *
MONTO A S: "The role of antivirals in the control of influenza", VACCINE, BUTTERWORTH SCIENTIFIC. GUILDFORD, GB, vol. 21, no. 16, 1 May 2003 (2003-05-01), pages 1796 - 1800, XP004418060, ISSN: 0264-410X *
PRIMACHE V ET AL: "In vitro activity of acetylsalicylic acid on replication of varicella-zoster virus.", THE NEW MICROBIOLOGICA : OFFICIAL JOURNAL OF THE ITALIAN SOCIETY FOR MEDICAL, ODONTOIATRIC, AND CLINICAL MICROBIOLOGY (SIMMOC). OCT 1998, vol. 21, no. 4, October 1998 (1998-10-01), pages 397 - 401, XP009031179, ISSN: 1121-7138 *
WANG ET AL., VIROL, vol. 74, 2000, pages 11566 - 11573
YIN M-J ET AL: "THE ANTI-INFLAMMATORY AGENTS ASPIRIN AND SALICYLATE INHIBIT THE ACTIVITY OF IKAPPAB KINASE-BETA", NATURE, MACMILLAN JOURNALS LTD. LONDON, GB, vol. 396, 5 November 1998 (1998-11-05), pages 77 - 80, XP002938591, ISSN: 0028-0836 *
YOUNKIN S W ET AL: "Reduction in fever and symptoms in young adults with influenza A/Brazil/78 H1N1 infection after treatment with aspirin or amantadine.", ANTIMICROBIAL AGENTS AND CHEMOTHERAPY. APR 1983, vol. 23, no. 4, April 1983 (1983-04-01), pages 577 - 582, XP009031195, ISSN: 0066-4804 *
YU K-L ET AL: "Novel quinolizidine salicylamide influenza fusion inhibitors", BIOORGANIC & MEDICINAL CHEMISTRY LETTERS, OXFORD, GB, vol. 9, no. 15, 2 August 1999 (1999-08-02), pages 2177 - 2180, XP004174154, ISSN: 0960-894X *

Cited By (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7893108B2 (en) 2004-07-14 2011-02-22 President And Fellows Of Harvard College Antiviral methods and compositions
DE102008004386A1 (de) 2008-01-14 2009-07-23 Activaero Gmbh Verwendung eines Acetylsalicylsäuresalzes zur Behandlung viraler Infektionen
RU2524304C2 (ru) * 2008-01-14 2014-07-27 Фенталеон Гмбх Применение соли ацетилсалициловой кислоты для лечения вирусных инфекций
US9492413B2 (en) 2008-01-14 2016-11-15 Ventaleon Gmbh Use of salt of an acetylsalicylic acid for the treatment of viral infections
DE102009009245A1 (de) 2009-02-17 2010-08-19 Alekseev Sergey Spüllösung zur Vorbeugung und Behandlung von Virusinfektionen
EP2374461A1 (de) * 2010-04-08 2011-10-12 Hans Otto Meyer Zu Spelbrink Piroxicam zur prohylaktischen und therapeutischen Behandlung von Herpes-Infektionen
WO2011124366A1 (de) * 2010-04-08 2011-10-13 Hans Otto Meyer Zu Spelbrink Piroxicam zur prophylaktischen und therapeutischen behandlung von herpes - infektionen
CN102697872A (zh) * 2012-06-27 2012-10-03 苏州科牧动物药品有限公司 鸡喉净酊及制备工艺
DE102014111892A1 (de) 2014-08-20 2016-02-25 Eberhard Karls Universität Tübingen Medizinische Fakultät Prophylaxe und Behandlung einer Infektion mit dem Hantavirus
WO2017109037A1 (en) * 2015-12-22 2017-06-29 Ventaleon Gmbh Treatment of moderate to severe influenza
CN108472375A (zh) * 2015-12-22 2018-08-31 文塔里昂有限责任公司 中重度流感的治疗方法
US11376265B2 (en) 2015-12-22 2022-07-05 Aspiair Gmbh Treatment of moderate to severe influenza

Also Published As

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US8313751B2 (en) 2012-11-20
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US20060247161A1 (en) 2006-11-02
US20090191207A1 (en) 2009-07-30
DK1599194T3 (da) 2011-02-21
JP2006517204A (ja) 2006-07-20
ATE488241T1 (de) 2010-12-15
DE502004011897D1 (de) 2010-12-30
EP2289520A1 (de) 2011-03-02

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