WO2005115174A2 - Conjugues dipeptidiques antagonistes de l’alpha-msh - Google Patents

Conjugues dipeptidiques antagonistes de l’alpha-msh Download PDF

Info

Publication number
WO2005115174A2
WO2005115174A2 PCT/FR2005/001164 FR2005001164W WO2005115174A2 WO 2005115174 A2 WO2005115174 A2 WO 2005115174A2 FR 2005001164 W FR2005001164 W FR 2005001164W WO 2005115174 A2 WO2005115174 A2 WO 2005115174A2
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
arg
palm
acid
group
pro
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Ceased
Application number
PCT/FR2005/001164
Other languages
English (en)
Other versions
WO2005115174A3 (fr
Inventor
Anne-Marie Pinel
Pascal Verdie
Pascaline Dubs
Jean Martinez
Gilles Subra
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Centre National de la Recherche Scientifique CNRS
Institut Europeen de Biologie Cellulaire
Universite de Montpellier
Original Assignee
Centre National de la Recherche Scientifique CNRS
Institut Europeen de Biologie Cellulaire
Universite de Montpellier
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from FR0405069A external-priority patent/FR2870242B1/fr
Application filed by Centre National de la Recherche Scientifique CNRS, Institut Europeen de Biologie Cellulaire, Universite de Montpellier filed Critical Centre National de la Recherche Scientifique CNRS
Priority to CA002566478A priority Critical patent/CA2566478A1/fr
Priority to JP2007512280A priority patent/JP4897969B2/ja
Priority to EP05770970A priority patent/EP1750528A2/fr
Priority to US11/596,286 priority patent/US8097590B2/en
Publication of WO2005115174A2 publication Critical patent/WO2005115174A2/fr
Publication of WO2005115174A3 publication Critical patent/WO2005115174A3/fr
Anticipated expiration legal-status Critical
Ceased legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08—Tripeptides
    • C07K5/0815—Tripeptides with the first amino acid being basic
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; PREPARATION OR TREATMENT THEREOF
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/17—Amino acids, peptides or proteins
    • A23L33/18—Peptides; Protein hydrolysates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
    • A61K8/64—Proteins; Peptides; Derivatives or degradation products thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/16—Emollients or protectives, e.g. against radiation
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/18—Antipsychotics, i.e. neuroleptics; Drugs for mania or schizophrenia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A61Q19/02—Preparations for care of the skin for chemically bleaching or whitening the skin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06008—Dipeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/06078—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aromatic or cycloaliphatic
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06086—Dipeptides with the first amino acid being basic
    • C07K5/06095—Arg-amino acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2800/00—Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
    • A61K2800/40—Chemical, physico-chemical or functional or structural properties of particular ingredients
    • A61K2800/57—Compounds covalently linked to a(n inert) carrier molecule, e.g. conjugates, pro-fragrances
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Definitions

  • the present invention relates to novel alpha-MSH antagonist dipeptide conjugates and their use as a medicament or as a depigmentant.
  • the melanocortin receptors belong to the superfamily of seven transmembrane receptors coupled to the G protein and they stimulate the cAMP signal transduction pathway (Cône et al. Recent Prog. Horm. Res. 1996, 51, pages 287 -317).
  • the melanocortin system is involved in multiple physiological pathways including pigmentation, inflammation, erectile function, eating behavior, energy homeostasis, weight homeostasis and the function of the exocrine glands.
  • the ligands of the endogenous agonists for these melanocortin receptors are derived by post-translational modification of the transcript of the proopiomelanocortin gene, which during differential treatment leads to the generation of the hormones ⁇ , ⁇ and stimulating melanocytes (MSH) and of the corticotrophin (ACTH).
  • the melanocortin receptor subtypes are activated by all endogenous melanocortin peptides, with the exception of the melanocortin MC 2 receptor which is only stimulated by corticotrophin.
  • the melanocortin receptor family also has two endogenous antagonists, agouti and agouti related protein (AGRP) (Lu et al.
  • this compound is of high molecular weight and therefore has very limited therapeutic or cosmetic activity. Indeed, its size makes it difficult to optimize and its bioavailability is limited. In addition, it is expensive and difficult to prepare.
  • the tripeptide D-Trp-Arg-Leu-NH 2 (Proc. Natl. Acad. Sci. (1995), 92, pages 2894 - 2898) also has antagonistic activity. However, it contains tryptophan which is an unstable amino acid and can therefore cause storage stability problems.
  • EP 1 174 437 describes di or tripeptides comprising a naphthyl group and in particular a naphthylalanyl group. However, the presence of the naphthyl group increases the manufacturing price of the product. Furthermore, in certain countries such as Japan, peptides based on non-natural amino acids cannot be sold for cosmetic applications. In addition, no dipeptide activity is indicated.
  • dipeptides conjugated at the C-terminal with carboxylic acids have an alpha MSH antagonist activity. These antagonists have a very low molecular weight, are therefore easy to optimize, have good bioavailability and are very easy to prepare.
  • the present invention therefore relates to a dipeptide conjugate of general formula I below: A-AA2 -AA1 -NH 2 I in which A represents the radical corresponding to a monocarboxylic acid of general formula II below: HOOC-R II in which R represents
  • AA1 and AA2 represent identical or different amino acids chosen from the group formed by Ala, Asn, Cys, Gin, Gly, Ile, Leu, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr, Val, Asp, Glu, Arg, His, Lys, Orn, Dap, Dab, les corresponding amino homo acids and corresponding beta amino acids, in the form of enantiomers or diastereoisomers and their mixtures, including racemic mixtures.
  • the amino acids in the dipeptide conjugate of formula (I) can have a D, L or DL configuration if not otherwise specified.
  • the dipeptide conjugates of formula (I) can contain one or more asymmetric carbon atoms. They can therefore exist in the form of enantiomers or diastereoisomers. These enantiomers, diastereoisomers, as well as their mixtures, including racemic mixtures are part of the invention.
  • Gly Gly, Glycine, - Ile, 1 Isoleucine, - Leu, Leucine, - Met, Methionine, - Phe, Phenylalanine, or its analogs, in particular a halogen derivative, in particular para-fluoro-Phe, Homo-Phe, para-nitro-Phe or phenylglycine, - Pro, Proline, - Ser, Serine, - Thr, Th eonine, Trp, Tryptophan, - Tyr, Tyrosine, - Val, Valine, - Asp, Aspartic Acid, - Glu, Glutamic Acid,
  • dipeptide conjugates mentioned above and forming the subject of the present invention are obtained in the terminal NH 2 form (in other words having an amide function).
  • the conjugated dipeptides according to the present invention are linked in the form of salts or esters to the acid of formula II.
  • the conjugations according to this invention can be carried out by reacting the acid function of the amino acid with the acid function of the acid of formula II, or even it is possible to take advantage of the presence of a hydroxy function on the acid of formula II .
  • the present invention relates to all of these conjugations as well as the non-functional conjugates.
  • the conjugations are physical or chemical.
  • At least one of the amino acids AA2 or AA1, advantageously both, represents a basic amino acid, advantageously chosen from the group consisting of Arg, His, Dap, Dab, Orn or Lys, advantageously it is Arg.
  • Advantageously AA2 represents a basic amino acid advantageously chosen from the group consisting of Arg, His, Lys, Orn, Dap or Dab, advantageously it is Arg.
  • Advantageously AA1 and / or AA2 do not represent Trp.
  • Advantageously AA1 and / or AA2 do not represent Cys.
  • at least one of the amino acids AA1 or AA2 is chosen from the group consisting of Ser and Pro.
  • Advantageously AA1 represents Pro.
  • Advantageously AA2 represents Ser.
  • the acid of formula (II) is a polyunsaturated fatty acid, that is to say comprising from 1 to 6 unsaturations. Even more advantageously, it is an omega-3 acid.
  • these omega-3 acids there may be mentioned in particular ⁇ -linolenic acid, cervonic acid, timnodonic acid and pinolenic acid.
  • Acids cervonic, timnodonic and pinolenic are also known by the respective names of 4, 7, 10, 13, 16, 19-docosahexaenoic acid (DHA), 5, 8, 11, 14, 17-eicosapentaenoic acid (EPA) and 5,9,12- octodecatrienoic acid.
  • A represents a monocarboxylic acid radical of general formula (II), it can advantageously be chosen from acetic acid, myristic acid, palmitic acid, hydroxydecenoic and decenoic acids and in particular, trans- 10-hydroxy- ⁇ 2-decenoic and trans-oxo-9-decene-2-oic acid.
  • the acid of formula (II) is an acid chosen from lipoic acid (Lip) or its reduced form dihydrolipoic acid, N-lipoyl-lysine or phenylbutyric acid (Pbu).
  • Lip lipoic acid
  • Pbu phenylbutyric acid
  • A represents the radical corresponding to palmitic acid (Palm).
  • dipeptide conjugates of the invention mention may be made of the dipeptide conjugates chosen from the group consisting of a) A-Arg-His-NH 2 , b) A-Arg-Arg-NH 2 , c) A-Arg-Pro- NH 2 . d) A-Arg-Lys-NH 2 , e) A-Ser-Pro-NH 2 . f) A-DPhe-Arg-NH 2 . in which A has the definition given above.
  • dipeptide conjugates of the invention mention may be made of the dipeptide conjugates chosen from the group consisting of 39) Palm-Arg-His-NH 2 , 41) Palm-Arg-Arg-NH 2 , 49) Palm-Arg-Pro- NH 2 , 50) Palm-Arg-Lys-NH 2 , 125) Palm-Ser-Pro-NH 2 . 269) Palm-DPhe-Arg-NH 2 , 362) Pbu-DPhe-Arg-NH 2 , 363) Lip-DPhe-Arg-NH 2 .
  • the dipeptide conjugates which are the subject of the present invention can be obtained either advantageously by conventional chemical synthesis, or by enzymatic synthesis, according to any methods known to those skilled in the art.
  • the present invention further relates to a cosmetic, dermatological or pharmaceutical composition or a food supplement comprising a dipeptide conjugate according to the present invention and optionally a cosmetically or pharmaceutically acceptable excipient.
  • the dipeptide conjugates can be administered for cosmetic or pharmaceutical use topically. They can also be used in food supplements, in other words in the oral nutraceutical field.
  • the dipeptide conjugates according to the invention are preferably administered, topically.
  • compositions according to the present invention intended for topical administration may be in the forms which are usually known for this type of administration, that is to say in particular lotions, foams, gels, dispersions, sprays, serums, masks, body milks, ointments, solutions, emulsions, gels, or creams for example, with excipients allowing in particular skin penetration to improve the properties and accessibility of the active ingredient.
  • compositions generally contain, in addition to the dipeptide conjugate according to the present invention, a physiologically acceptable medium, generally based on water or on a solvent, for example alcohols, ethers or glycols.
  • They can also contain surfactants, preservatives, stabilizing agents, emulsifiers, thickeners, other active ingredients leading to a complementary or possibly synergistic effect, trace elements, essential oils, perfumes, dyes, collagen, chemical or mineral filters, moisturizers or thermal waters.
  • the dipeptide conjugate according to the invention can be present at a concentration between 10 "8 M and 10 " 3M, advantageously between 10 "7 M and 10 " 5 M.
  • the present invention further relates to a dipeptide conjugate according to the present invention or a pharmaceutical composition according to the present invention for its use as a medicament, advantageously intended to prevent, improve or treat immune abnormalities, immunodeficiency, regulate body weight by controlling appetite, treating disorders of the central nervous system, regulating satiety, treating anorexia or certain skin cancers.
  • the present invention further relates to the use of a cosmetic composition according to the present invention as a depigmenting agent, for lightening or whitening the epidermis, eliminating spots on the skin, in particular of old age or freckle, or preventing pigmentation. of the epidermis.
  • the present invention relates to a cosmetic treatment method for lightening, depigmenting or whitening the epidermis, eliminating spots on the skin, in particular of old age or freckles, or preventing pigmentation of the epidermis, comprising application to the skin of a cosmetic composition according to the present invention.
  • a 361-member acylated dipeptide library was synthesized using SynPhase TM Lanterns and a "split and pool” color marking strategy as described in the article by Feliu et al. (J. Comb. Chem., 2003, 5, pages 256-361).
  • the chemicals used are the following: Amino acids protected at the N-terminus by an ⁇ -Fmoc group, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-D-Ala-OH, Fmoc- Arg (Pbf) -OH, Fmoc -D-Arg (Pbf) -OH, Fmoc-His (Trt) -OH, Fmoc-D-His (Trt) -OH, Fmoc-Lys (Boc) -OH, Fmoc-Phe-OH, Fmoc-D-Phe -OH, Fmoc-Trp (Boc) -OH, Fmoc-D-Trp (Boc) -OH, Fmoc-Met-OH, Fmoc-Glu (OtBu) -OH, Fmoc-Ser (tBu) -OH, Fmoc- Leu -OH, Fmoc-Tyr (
  • the coupling agent HBTU (2- (1-H-benzotriazol-1-yl) -1, 1, 3, 3-tetramethyl-uronium hexafluorophosphate) was purchased from SENN chemicals.
  • N N-dimethylformamide (DMF), dichloromethane, methanol, acetonitrile, ethyl ether, trifluoroacetic acid (TFA), piperidine were purchased from Riedel-de Ha ⁇ n, Carlo Erba or Acros organics and used without purification.
  • N, N-diisopropylethylamine (DIEA), triisopropylsilane, palmitic acid were purchased from Aldrich or Avocado. All reagents and chemicals were of analytical grade and were used without further purification.
  • the Rink amide Synphase Polystyrene Lanterns of the D series were supplied by Mi otopes, Pty.
  • the standard process for manufacturing these dipeptides includes the following steps: 1- Standard Fmoc deprotection protocol
  • the Fmoc deprotection steps were carried out by immersing the lanterns immobilized on a support of 96 stems in a mixture of dimethylsulfoxide (DMF) / piperidine (80/20, v / v) for 30 minutes. Rectangular polypropylene containers the same size as a standard 96-well plate were used. The excess deprotection solution was simply removed by vigorously shaking the support of the rods.
  • DMF dimethylsulfoxide
  • piperidine 80/20, v / v
  • washing steps were carried out by successively immersing the lanterns arranged in a Multipin format in polypropylene containers containing DMF (3 x 5 min), methanol (2 x 5 min) and dichloromethane (DCM) (1 x 5 min), successively.
  • the lanterns were air dried for 5 min in a steam hood after the last washing with DCM.
  • 3- Standard coupling protocol 0.4 M solutions of each amino acid Fmoc, HBTU and DIEA were prepared in DMF and kept at 4 ° C. throughout the synthesis. 200 ⁇ l of amino acid solution were distributed in 96-well deep plates. 200 ⁇ l of DIEA solution and 200 ⁇ l of HBTU solution were added then and finally, the support of the rods carrying the lanterns was adapted to the deep well plate for 2 hours.
  • HPLC analyzes were performed on a Waters Alliance 2690 HPLC system and a Waters 996 photodiode array detector and a C18 Merck Chromolith Speed ROD column of 50 x 4.6 mm. A flow rate of 5 ml / min and a gradient from 100% B to 100% C over 3 min were used (Eluent B, water / 0.1% TFA; Eluent C, acetonitrile / 0.1% TFA ). The purity estimates are based on the percentage area of the peaks detected at 214 nm.
  • the LC / SM system consisted of a Waters Alliance 2690 HPLC coupled to a Micromass Platform II spectrometer (ionization by electrospray mode, ESI +). All analyzes were performed using a Waters Symmetry C18 column, 3.5 ⁇ m, 2.1 x 30 mm. A flow rate of 600 ⁇ l / min and a gradient from 100% B to 100% C over 3 min were used (Eluent B, water / 0.1% TFA; Eluent C, acetonitrile / 0.1% TFA ).
  • the mass spectra by positive ion electrospray were acquired at a solvent flow rate of 100 ml / min. Nitrogen was used for both the nebulizing gas and the drying gas. The data was acquired in read mode from / z 400 to 1400 in 0.1 ⁇ 3 intervals; 10 readings were added to produce the final spectrum.
  • Palm Leu Lys NH 2 100 496.4 146 Palm Leu Asn NH 2 15 482.4 147 Palm Leu Met NH 2 100 499.3 148 Palm Leu DPhe NH 2 100 515.4 149 Palm Leu DTrp NH 2 87 554.4 150 Palm Leu DArg NH 2 100 524.4 151 Palm Leu DHisNH 2 86 505.4 152 Palm Leu DAlaNH 2 100 439.3
  • Palm- dipeptides according to the present invention were added at various concentrations and each The measurement was made in triplicate and two or three series of experiments were carried out.
  • the cells were maintained in modified Eagle medium from Dulbecco with 10% fetal calf serum (FCS), 1 mM glutamine, 100 U / ml of penicillin and 10 "4 g / ml of streptomycin.
  • FCS fetal calf serum
  • the cells were maintained at 37 ° C in a 5% CO 2 atmosphere and the cell culture media were renewed every two days.
  • the cells were plated on a 96-well plate (Nunc, Roskilde) 24 hours before contact with the dipeptides according to the invention.
  • the cAMP was measured as follows: The cells plated the day before at 8.10 4 cells per well are placed in the presence of one of the 5 dipeptide conjugates according to the invention at various concentrations for 10 minutes at 37 ° C. with 5.10 " 8M of ⁇ -MSH. After this time, the lysis of the cells was carried out and the cAMP content was measured using a competitive binding test kit (RPN225, Amersham Pharmacia Biotech). Each independent experiment was carried out at least twice in triplicate.
  • the peptide activity was determined by referring to the level of cAMP synthesized by untreated cells and to the production of cAMP induced by -MSH alone. The curves were adjusted and the IC 50 values were determined with nonlinear regression in the GraphPad Prism (GraphPad software, San Diego, CA, United States). The results are presented in the following Table 2.
  • the Palm-dipeptides tested appeared to be antagonists of the human MC X melanocortin receptor using lines M4Be melanoma cells. These dipeptide conjugates have an IC 50 in a micromolar range. These dipeptides are the first example of short synthetic antagonist compounds binding to the MCi receptor and they open up the field of non-peptide small molecule antagonists of ⁇ -MSH. In particular, these compounds comprise an arginine residue in position AA2. Interestingly, compound 125 (Palm-Ser-Pro-NH 2 ), having no basic residue in its sequence, showed an IC 50 value of 17 ⁇ M. This result has shown that the binding to the MC X receptor does not necessarily require a positively charged radical. With only two amino acid residues, these palmitoyl compounds can be considered as useful lead compounds for the design of non-peptide ⁇ -MSH antagonists.

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Child & Adolescent Psychology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Cosmetics (AREA)

Abstract

La présente invention concerne un conjugué dipeptidique de formule générale (I) suivante A-AA2-AAI-NH2 dans laquelle A représente le radical correspondant à un acide monocarboxylique de formule générale (II) suivante HOOC-R, dans laquelle R représente un . radical aliphatique en C1-C24 linéaire ou ramifié, éventuellement substitué par un groupe hydroxyle, pouvant comporter une ou plusieurs insaturations, avantageusement de 1 à 6 insaturations, et/ou pouvant comporter un groupe phényle ou l'acide lipoique ou sa forme réduite l'acide dihydrolipoique ou la N-lipoyl­lysine,, AA1 et AA2 représentent des acides aminés identiques ou différents choisis dans le groupe constitué par Ala, Asn, Cys, Gln, Gly, Ile, Leu, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr, Val, Asp, Glu, Arg, His, Lys, Orn, Dap, Dab les homoacides aminés correspondants et les béta-acides aminés correspondants sous forme d'énantiomères ou de diastéréoisomères ainsi que leurs mélanges, y compris les mélanges racémiques.

Description

Titre : CONJUGUES DIPEPTIDIQUES ANTAGONISTES DE L'ALPHA-MSH
La présente invention concerne de nouveaux conjugués dipeptidiques antagonistes de l'alpha-MSH et leur utilisation en tant que médicament ou en tant que dépigmentant .
Les récepteurs de la mélanocortine appartiennent à la superfamille de sept récepteurs transmembranaires couplés à la protéine G et ils stimulent la voie de la transduction du signal de l'AMPc (Cône et al. Récent Prog. Horm . Res . 1996 , 51, pages 287-317) . Le système de la mélanocortine est impliqué dans de multiples voies physiologiques y compris la pigmentation, l'inflammation, la fonction erectile, le comportement alimentaire, 1 'homéostasie énergétique, 1 'homéostasie pondérale et la fonction des glandes exocrines. Les ligands des agonistes endogènes pour ces récepteurs de la mélanocortine sont dérivés par modification post- traductionnelle du transcrit du gène de la proopiomélanocortine, qui lors du traitement différentiel entraîne la génération des hormones α, β et y stimulant les mélanocytes (MSH) et de la corticotrophine (ACTH) . Les sous-types des récepteurs de la mélanocortine sont activés par tous les peptides de la mélanocortine endogène, à l'exception du récepteur de la mélanocortine MC2 qui est uniquement stimulé par la corticotrophine. La famille des récepteurs de la mélanocortine a aussi deux antagonistes endogènes, l'agouti et la protéine apparentée à l'agouti (AGRP) (Lu et al. Nature 1994, 371, pages 799-802, Ollmann et al., Science 1997, pages 135-138, Shulter et al., Gènes Dev. 1997, 11, pages 593-602) qui sont les seuls antagonistes connus existant à l'état naturel de ces récepteurs couplés à la protéine G découverts à ce jour. Ce sont des polypeptides de, respectivement, 132 et 49 résidus d'acides aminés. Les ligands des récepteurs de la mélanocortine les mieux étudiés sont ceux des récepteurs MCi de la mélanocortine de la peau qui sont impliqués dans la pigmentation et la coloration du pelage des animaux (Hruby et al. Ann . N. Y. Acad. Sci . 1993, 680, pages 51-63 ; Lerner et al. Nature 1961 , pages 189, 176 ; Mountjoy, et al. Science 1992, 257, pages 1248-1251) .
Le nonapeptide 153 N- 6 Jayawickreme et al., J. Biol . Chem. 1994, 269, pages 29846-29854) (H-Met-Pro-D-Phe- Arg-d-Trp-Phe-Lys-Pro-Val-NH2 : Ki = 11 nM) est un antagoniste de synthèse du récepteur MCi. Toutefois, ce composé est de haut poids moléculaire et possède donc une activité thérapeutique ou cosmétique très limitée. En effet, sa taille le rend difficile à optimiser et sa biodisponibilité est limitée. De plus, il est cher et difficile à préparer.
Le tripeptide D-Trp-Arg-Leu-NH2 (Proc. Natl . Acad. Sci. (1995), 92, pages 2894 - 2898) a également une activité antagoniste. Toutefois, il contient le tryptophan qui est un acide aminé instable et peut donc poser des problèmes de stabilité au stockage. EP 1 174 437 décrit des di ou tripeptides comportant un groupe naphtyle et en particulier un groupe naphtylalanyle . Toutefois, la présence du groupe naphtyle augmente le prix de fabrication du produit . Par ailleurs, dans certains pays comme le Japon, les peptides à base d'acide aminé non naturel ne peuvent être vendus pour des applications cosmétiques. En outre aucune activité de dipeptides n'est indiquée.
Les inventeurs ont découvert de façon surprenante que des dipeptides conjugués au niveau du C-terminal avec des acides carboxyliques ont une activité antagoniste de l'alpha MSH. Ces antagonistes ont un très faible poids moléculaire, sont donc faciles à optimiser, ont une bonne biodisponibilité et sont très faciles à préparer .
La présente invention concerne donc un conjugué dipeptidique de formule générale I suivante : A-AA2 -AA1 -NH2 I dans laquelle A représente le radical correspondant à un acide monocarboxylique de formule générale II suivante : HOOC-R II dans laquelle R représente
-un radical aliphatique en Cι-C24 linéaire ou ramifié, éventuellement substitué par un groupe hydroxyle, pouvant comporter une ou plusieurs insaturations, avantageusement de 1 à 6 insaturations, et/ou pouvant comporter un groupe phényle -ou l'acide lipoïque ou sa forme réduite l'acide dihydrolipoïque ou la N-lipoyl -lysine, AA1 et AA2 représentent des acides aminés identiques ou différents choisis dans le groupe constitué par Ala, Asn, Cys, Gin, Gly, Ile, Leu, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr, Val, Asp, Glu, Arg, His, Lys, Orn, Dap, Dab, les homoacides aminés correspondants et les béta-acides aminés correspondan s , sous forme d' énantiomères ou de diastéréoisomères ainsi que leurs mélanges, y compris les mélanges racemiques.
Les acides aminés dans le conjugué dipeptidique de formule (I) peuvent avoir une configuration D, L ou DL si cela n'est pas spécifié autrement.
Ainsi, les conjugués dipeptidiques de formule (I) peuvent comporter un ou plusieurs atomes de carbone asymétriques. Ils peuvent donc exister sous forme d' énantiomères ou de diastéréoisomères. Ces énantiomères, diastéréoisomères, ainsi que leurs mélanges, y compris les mélanges racemiques font partie de l'invention.
Dans le cadre de la présente invention, on entend par :
- Ala, l'Alanine,
- Asn, l'Asparagine,
- Cys, la Cystéine, - Gin, la Glutamine,
- Gly, la Glycine, - Ile, 1 ' Isoleucine, - Leu, la Leucine, - Met, la Méthionine, - Phe, la Phénylalanine, ou ses analogues, en particulier un dérivé halogène, en particulier la para- fluoro-Phe, la Homo-Phe, la para-nitro-Phe ou la phénylglycine, - Pro, la Proline, - Ser, la Serine, - Thr, la Th éonine, Trp, le Tryptophane, - Tyr, la Tyrosine, - Val, la Valine, - Asp, l'Acide Aspartique, - Glu, l'Acide Glutamique,
- Arg, l'Arginine,
- His, l'Histidine,
- Lys, la Lysine,
- Orn, l'Ornithine, - Dap, l'Acide diaminopropionique,
- Dab, l'Acide diaminobutyrique .
Il est également précisé que les conjugués dipeptidiques mentionnés ci-dessus et faisant l'objet de la présente invention, sont obtenus sous la forme terminale NH2 (autrement dit présentant une fonction amide) .
Les dipeptides conjugués selon la présente invention sont liés sous forme de sels ou d'esters à l'acide de formule II. Les conjugaisons selon la présente invention peuvent être effectués en faisant réagir la fonction acide de l'acide aminé avec la fonction acide de l'acide de formule II, ou même il est possible de mettre à profit la présence d'une fonction hydroxy sur l'acide de formule II. La présente invention concerne l'ensemble de ces conjugaisons ainsi que les conjugués non fonctionnels. Les conjugaisons sont physiques ou chimique.
Avantageusement au moins un des acides aminés AA2 ou AA1, avantageusement les deux, représente un acide aminé basique, avantageusement choisi dans le groupe constitué par Arg, His, Dap, Dab, Orn ou Lys, avantageusement il s'agit de Arg. De façon avantageuse AA2 représente un acide aminé basique avantageusement choisi dans le groupe constitué par Arg, His, Lys, Orn, Dap ou Dab, avantageusement il s'agit de Arg. Avantageusement AA1 et/ou AA2 ne représentent pas Trp. Avantageusement AA1 et/ou AA2 ne représentent pas Cys. Avantageusement au moins un des acides aminés AA1 ou AA2 est choisi dans le groupe constitué par Ser et Pro. Avantageusement AA1 représente Pro. Avantageusement AA2 représente Ser. Avantageusement, l'acide de formule (II) est un acide gras polyinsaturé, c'est-à-dire comprenant de 1 à 6 insaturations. De manière encore plus avantageuse, il s'agit d'un acide oméga-3. Parmi ces acides oméga-3 on peut notamment citer l'acide α-linolénique, l'acide cervonique, l'acide timnodonique et l'acide pinolénique. Les acides cervonique, timnodonique et pinolénique sont également connus sous les dénominations respectives d'acide 4, 7, 10, 13, 16, 19-docosahexaenoïque (DHA) , d'acide 5, 8, 11 , 14, 17-eicosapentaénoïque (EPA) et d'acide 5,9,12- octodécatriénoïque .
Lorsque A représente un radical d'acide monocarboxylique de formule générale (II) , il peut être avantageusement choisi parmi l'acide acétique, l'acide myristique, l'acide palmitique, les acides hydroxydecenoïques et décénoïques et notamment, l'acide trans-10-hydroxy-Δ2-décénoïque et l'acide trans-oxo-9- decene-2-oïque.
Avantageusement, l'acide de formule (II) est un acide choisi parmi l'acide lipoïque (Lip) ou sa forme réduite l'acide dihydrolipoïque, la N-lipoyl-lysine ou l'acide phénylbutyrique (Pbu) .
De façon avantageuse, A représente le radical correspondant à l'acide palmitique (Palm) .
Parmi les conjugués dipeptidiques de l'invention on peut citer les conjugués dipeptidiques choisis dans le groupe constitué par a) A-Arg-His-NH2, b) A-Arg-Arg-NH2, c) A-Arg-Pro-NH2. d) A-Arg-Lys-NH2, e) A-Ser-Pro-NH2. f) A-DPhe-Arg-NH2. dans lesquelles A à la définition indiquée ci-dessus. Parmi les conjugués dipeptidiques de l'invention on peut citer les conjugués dipeptidiques choisis dans le groupe constitué par 39) Palm-Arg-His-NH2, 41) Palm-Arg-Arg-NH2, 49) Palm-Arg-Pro-NH2, 50) Palm-Arg-Lys-NH2, 125) Palm-Ser-Pro-NH2. 269) Palm-DPhe-Arg-NH2, 362) Pbu-DPhe-Arg-NH2, 363) Lip-DPhe-Arg-NH2.
Les conjugués dipeptidiques objet de la présente invention, peuvent être obtenus soit avantageusement par synthèse chimique classique, soit par synthèse enzymatique, selon des procédés quelconques connus de l'homme du métier.
La présente invention concerne en outre une composition cosmétique, dermatologique ou pharmaceutique ou un complément alimentaire comprenant un conjugué dipeptidique selon la présente invention et éventuellement un excipient cosmétiquement ou pharmaceutiquement acceptable.
Les conjugués dipeptidiques peuvent être administrés pour leur utilisation cosmétique ou pharmaceutique par voie topique. Ils peuvent aussi être utilisés dans des compléments alimentaires, autrement dit dans le domaine nutraceutique par voie orale. Les conjugués dipeptidiques selon l'invention sont préférentiellement administrés, par voie topique.
La composition cosmétique, pharmaceutique ou dermatologique selon la présente invention destinée à une administration par voie topique pourra se présenter sous les formes qui sont habituellement connues pour ce type d'administration, c'est à dire notamment les lotions, les mousses, les gels, les dispersions, les sprays, les sérums, les masques, les laits corporels, les pommades, les solutions, les émulsions, les gels, ou les crèmes par exemple, avec des excipients permettant notamment une pénétration cutanée afin d'améliorer les propriétés et l'accessibilité du principe actif. Ces compositions contiennent généralement outre le conjugué dipeptidique selon la présente invention, un milieu physiologiquement acceptable, en général à base d'eau ou de solvant, par exemple des alcools, des éthers ou des glycols. Elles peuvent également contenir des agents tensioactifs, des conservateurs, des agents stabilisants, des émulsifiants, des épaississants, d'autres principes actifs conduisant à un effet complémentaire ou éventuellement synergique, des oligo-éléments, des huiles essentielles, des parfums, des colorants, du collagène, des filtres chimiques ou minéraux, des agents hydratants ou des eaux thermales.
Dans la composition selon la présente invention, le conjugué dipeptidique selon l'invention peut être présent à une concentration comprise entre 10"8 M et 10"3 M, avantageusement comprise entre 10"7 M et 10"5 M.
La présente invention concerne de plus un conjugué dipeptidique selon la présente invention ou une composition pharmaceutique selon la présente invention pour son utilisation en tant que médicament, avantageusement destiné à prévenir, améliorer ou traiter les anormalités immunitaires, 1' immunodéficience, réguler le poids du corps en contrôlant l'appétit, traiter les désordres du système nerveux central, réguler la satiété, traiter l'anorexie ou certains cancers cutanés .
La présente invention concerne en outre l'utilisation d'une composition cosmétique selon la présente invention en tant que dépigmentant, pour éclaircir ou blanchir l'épiderme, éliminer les tâches de la peau, en particulier de vieillesse ou de rousseur, ou prévenir la pigmentation de l'épiderme.
Enfin, la présente invention concerne un procédé de traitement cosmétique pour éclaircir, dépigmenter ou blanchir l'épiderme, éliminer les tâches de la peau, en particulier de vieillesse ou de rousseur, ou prévenir la pigmentation de l'épiderme comprenant l'application sur la peau d'une composition cosmétique selon la présente invention.
Les exemples suivants sont donnés à titre indicatif non limitatif . Exemple 1 : Préparation de 361 dipeptides selon l' invention
Une banque de dipeptides acylés de 361 membres a été synthétisée en utilisant des Lanternes SynPhase™ et une stratégie "split and pool" (séparation et groupage) de marquage de couleur tel que décrit dans l'article de Feliu et al. (J. Comb . Chem. , 2003, 5, pages 256-361). Ainsi, ces 361 composés ont été synthétisés sur des Lanternes SynPhase™ de série D avec de la résine Rink amide PS en utilisant la stratégie standard de synthèse F oc (9-fluorényl-méthoxycarbonyle) en phase solide utilisant un format d'arrangement Multipin 96. Les blocs constitutifs AA1 et AA2 ont été choisis dans un ensemble chimique de 19 acides aminés D et L comprenant plusieurs types de chaînes latérales (alkyle, aromatiques, acides, volumineuses, basiques) pour produire 19 x 19 = 361 combinaisons. Les produits chimiques utilisés sont les suivants : Les acides aminés protégés à l'extrémité N-terminale par un groupe α-Fmoc, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-D-Ala-OH, Fmoc- Arg(Pbf)-OH, Fmoc-D-Arg (Pbf) -OH, Fmoc-His (Trt) -OH, Fmoc-D-His (Trt) -OH, Fmoc-Lys (Boc) -OH, Fmoc-Phe-OH, Fmoc-D-Phe-OH, Fmoc-Trp (Boc) -OH, Fmoc-D-Trp (Boc) -OH, Fmoc-Met-OH, Fmoc-Glu (OtBu) -OH, Fmoc-Ser (tBu) -OH, Fmoc- Leu-OH, Fmoc-Tyr (tBu) -OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Asn (trt) -OH, ont été achetés chez SENN chemicals et chez Advanced Chemtech. L'agent de couplage, le HBTU (hexafluorophosphate de 2- (1-H-benzotriazol-l-yl) -1, 1, 3, 3-tétraméthyl-uronium) , a été acheté chez SENN chemicals. Le N,N-diméthylformamide (DMF) , le dichlorométhane, le méthanol, 1 'acétonitrile, 1 ' éther éthylique, l'acide trifluoroacétique (TFA) , la pipéridine ont été achetés chez Riedel-de Haën, Carlo Erba ou Acros organics et utilisés sans purification. La N,N-diisopropyléthylamine (DIEA) , le triisopropyl- silane, l'acide palmitique ont été achetés chez Aldrich ou Avocado. Tous les réactifs et produits chimiques étaient de qualité analytique et ils ont été utilisés sans autre purification. Les Lanternes Polystyrène Rink amide Synphase de la série D ont été fournies par Mi otopes, Pty.
Le procédé standard de fabrication de ces dipeptides comportent les étapes suivantes : 1- Protocole standard de déprotection Fmoc
Les étapes de la déprotection Fmoc ont été réalisées en immergeant les lanternes immobilisées sur un support de 96 tiges dans un mélange de diméthylsulfoxide (DMF) /pipéridine (80/20, v/v) pendant 30 minutes. Des récipients rectangulaires en polypropylene de la même taille qu'une plaque standard à 96 puits, ont été utilisé. L'excès de solution de déprotection a été simplement éliminé en agitant vigoureusement le support des tiges.
2- Protocole standard de lavage
Après l'étape de couplage ou de déprotection, des étapes de lavage ont été réalisées en plongeant successivement les lanternes arrangées selon un format Multipin dans des récipients en polypropylene contenant du DMF (3 x 5 min) , du méthanol (2 x 5 min) et du dichlorométhane (DCM) (1 x 5 min), successivement. Les lanternes ont été séchées à l'air pendant 5 min sous une hotte à vapeurs après le dernier lavage avec du DCM. 3- Protocole standard de couplage Des solutions 0,4 M de chaque acide aminé Fmoc, de HBTU et de DIEA ont été préparées dans du DMF et maintenues à 4°C pendant toute la synthèse. 200 μl de solution d'acide aminé ont été distribués dans des plaques à 96 puits profonds. 200 μl de solution de DIEA et 200 μl de solution de HBTU ont été ajoutés ensuite et finalement, le support des tiges portant les lanternes a été adapté à la plaque à puits profonds pendant 2 heures.
4- Clivage
500 μl de solution de TFA/eau/triisopropylsilane (95/2,5/2,5, v/v/v) ont été distribués dans des tubes individuels en polypropylene arrangés dans les plaques Micronic à 96 puits. Le clivage a été réalisé pendant 3 heures. Le cocktail de clivage a été concentré directement à partir des plaques en utilisant une centrifugeuse sous vide Jouan RCIOIO. Les composés ont été précipités avec de l'éther diéthylique sec, centrifugés et décantés un par un. Les opérations de précipitation, de centrifugation et de décantation ont été répétées deux fois. 500 μl d ' acétonitrile/eau (50/50, v/v) contenant 0,1 % de TFA ont été distribués dans chaque tube pour solubiliser les échantillons. Les échantillons ont été ensuite congelés à -80°C et lyophilisés. Cette opération a été répétée deux fois pour éliminer complètement le groupe épurateur triisopropylsilane . 5-Préparation et analyse des échantillons Les banques complètes et les peptides simples re- synthétisés ont été analysés par CLHP en phase inverse et CL/SM. 500 μl d' acétonitrile/eau (50/50, v/v) contenant 0,1 % de TFA ont été distribués sur les composés lyophilisés. 10 μl de chaque tube ont été prélevés pour l'analyse de CLHP et de CL/SM ESI+. Les analyses de CLHP ont été réalisées sur un système de CLHP Waters Alliance 2690 et un détecteur à barrette de photodiodes Waters 996 et une colonne C18 Merck Chromolith Speed ROD de 50 x 4,6 mm. Un débit de 5 ml/min et un gradient de 100 % de B a 100 % de C sur 3 min ont été utilisés (Eluant B, eau/0,1 % de TFA ; Eluant C, acétonitrile/0 , 1 % de TFA). Les estimations de la pureté sont basées sur le pourcentage de surface des pics détectés à 214 nm.
Le système de CL/SM était constitué d'une CLHP Waters Alliance 2690 couplée à un spectromètre Micromass Platform II (mode ionisation par électronébulisation, ESI+) . Toutes les analyses ont été réalisées en utilisant une colonne Waters Symmetry C18, 3,5 μm, 2,1 x 30 mm. Un débit de 600 μl/min et un gradient de 100 % de B à 100 % de C sur 3 min ont été utilisés (Eluant B, eau/0,1 % de TFA ; Eluant C, acétonitrile/0, 1 % de TFA).
Les spectres de masse par électronébulisation ionique positive ont été acquis à un débit de solvant de 100 ml/min. De l'azote a été utilisé a la fois pour le gaz nébulisant et pour le gaz séchant. Les données ont été acquises en mode lecture de /z 400 à 1400 dans des intervalles de 0,1~3; 10 lectures ont été additionnées pour produire le spectre final.
Les poids moléculaires de tous les composés ont été calculés en utilisant des masses mono- isotopiques (C = 12,000, H = 1,007, N = 14,003, O = 15,994, S = 31,972) .
Les résultats des analyses sont présentés dans le Tableau 1 suivant.
Tableau 1 : Résul tats analytiques de la banque de Palm- dipeptides
Figure imgf000017_0001
Figure imgf000018_0001
Figure imgf000019_0001
110 Palm Ala DPheNH2 100 473,3 111 Palm Ala DTrpNH2 96 512,3 112 Palm Ala DArgNH2 100 482,4 113 Palm Ala DHisNH 84 463,3 114 Palm Ala DAlaNH2 100 397,3 115 Palm Ser His NH2 95 479,3 116 Palm Ser Phe NH2 100 489,3 117 Palm Ser Arg NH2' 100 498,4 118 Palm Ser Trp NH2 96 528,3 119 Palm Ser Glu NH2 100 471,3 120 Palm Ser Ala NH2 100 413,3 121 Palm Ser Ser NH2 100 429,3 122 Palm Ser Leu NH2 100 455,3 123 Palm Ser Tyr NH2 97 505,3 124 Palm Ser Gly NH2 100 399,3 125 Palm Ser Pro NH2 100 439,3 126 Palm Ser Lys NH2 100 470,4 127 Palm Ser Asn NH2 32 456,3 128 Palm Ser Met NH2 50 473,3 129 Palm Ser DPhe NH2 100 489,3 130 Palm Ser DTrpNH2 93 528,3 131 Palm Ser DArgNH2 0 498,4 132 Palm Ser DHisNH2 91 479,3 133 Palm Ser DAlaNH2 100 413,3
134 Palm Leu His NH2 92 505,4 135 Palm Leu Phe NH2 100 515,4 136 Palm Leu Arg NH2 100 524,4 137 Palm Leu Trp NH2 100 554,4 138 Palm Leu Glu NH2 100 497,4 139 Palm Leu Ala NH2 100 439,3 140 Palm Leu Ser NH2 100 455,3 141 Palm Leu Leu NH2 100 481,4 142 Palm Leu Tyr NH2 100 531,4 143 Palm Leu Gly NH2 100 425,3
145 Palm Leu Lys NH2 100 496,4 146 Palm Leu Asn NH2 15 482,4 147 Palm Leu Met NH2 100 499,3 148 Palm Leu DPhe NH2 100 515,4 149 Palm Leu DTrp NH2 87 554,4 150 Palm Leu DArg NH2 100 524,4 151 Palm Leu DHisNH2 86 505,4 152 Palm Leu DAlaNH2 100 439,3
153 Palm Tyr His NH2 96 555,3
Figure imgf000021_0001
Figure imgf000022_0001
Figure imgf000023_0001
Figure imgf000024_0001
Figure imgf000025_0001
Sauf pour 35 membres de la banque (grisés) , tous les composés ont été détectés par analyse ES+ CL/SM. La pureté moyenne déterminée sur la base du pourcentage de la surface du pic attendu détecté à 214 nm sur le chromatogramme est supérieure à 83 %. Exemple 2 : Propriétés biologiques de 5 conjugués dipeptides selon la présente invention
Des expériences d'inhibition de la production d'AMPc ont été réalisées sur la lignée cellulaire humaine M4Be avec une concentration de 5.10"8 M d'α-MSH. 5 Palm- dipeptides selon la présente invention ont été introduits à diverses concentrations et chaque mesure a été faite en triple. Deux ou trois séries d'expériences ont été réalisées.
Les essais ont été réalisés de la façon suivante : La lignée cellulaire humaine M4Be (Jacubovichet al. Cancer Iπununol . Immunother. 1979, 7, 59-64), une lignée cellulaire de mélanocytes capable de produire des mélanines, a été utilisée dans cette étude pour déterminer les valeurs de CI50-
Les cellules ont été maintenues dans du milieu Eagle modifié de Dulbecco avec 10 % de sérum de veau fœtal (FCS) , 1 mM de glutamine, 100 U/ml de pénicilline et 10"4 g/ml de streptomycine.
Toutes les lignées cellulaires ont été maintenues à 37°C dans une atmosphère à 5 % de C02 et les milieux de culture des cellules ont été renouvelés tous les deux jours. Les cellules ont été plaquées sur une plaque à 96 puits (Nunc, Roskilde) 24 heures avant le contact des dipeptides selon l'invention. L'AMPc a été mesuré de la façon suivante : Les cellules plaquées la veille à 8.104 cellules par puits sont mises en présence d'un des 5 conjugués dipeptidique selon l'invention à diverses concentrations pendant 10 minutes à 37°C avec 5.10"8 M d'α-MSH. Après ce temps, la lyse des cellules a été réalisée et la teneur en AMPc a été mesurée en utilisant un coffret de test de liaison par compétition (RPN225, Amersham Pharmacia Biotech) . Chaque expérience indépendante a été réalisée au moins deux fois en triple. L'activité peptidique a été déterminée en se reportant au taux d'AMPc synthétisé par des cellules non traitées et à la production d'AMPc induite par l' -MSH seule. Les courbes ont été ajustées et les valeurs de CI50 ont été déterminées avec la régression non linéaire dans le GraphPad Prism (logiciel GraphPad, San Diego, CA, Etats-Unis) . Les résultats sont présentés dans le Tableau 2 suivant.
Tableau 2 : Expériences d ' inhibi tion de la production d 'AMPc sur des cellules M4Be
Figure imgf000027_0001
Ainsi, de manière inattendue, les Palm-dipeptides testés sont apparus être des antagonistes du récepteur MCX humain de la mélanocortine en utilisant des lignées cellulaires de mélanome M4Be. Ces conjugués dipeptidiques présentent une CI50 dans une plage micromolaire. Ces dipeptides sont le premier exemple de composés antagonistes de synthèse courts se liant au récepteur MCi et ils ouvrent le champ des antagonistes à petite molécule non peptidique de l'α-MSH. En particulier ces composés comprennent un résidu arginine en position AA2. De manière intéressante, le composé 125 (Palm-Ser-Pro-NH2) , n'ayant aucun résidu basique dans sa séquence, a montré une valeur de CI50 de 17 μM. Ce résultat a montré que la liaison sur le récepteur MCX ne nécessite pas obligatoirement un radical chargé positivement. Avec seulement deux résidus d'acides aminés, ces composés palmitoyles peuvent être considérés comme des composés chefs de file utiles pour la conception d'antagonistes non peptidiques de l'α-MSH.

Claims

REVENDICATIONS
1. Conjugué dipeptidique de formule générale I suivante : A-AA2-AA1-NH2 I dans laquelle
A représente le radical correspondant à un acide monocarboxylique de formule générale II suivante :
HOOC-R II dans laquelle R représente -un radical aliphatique en Cι-C2 linéaire ou ramifié, éventuellement substitué par un groupe hydroxyle, pouvant comporter une ou plusieurs insaturations, avantageusement de 1 à 6 insaturations, et/ou pouvant comporter un groupe phényle
-ou l'acide lipoïque ou sa forme réduite l'acide dihydrolipoïque ou la N-lipoyl-lysine,
AAl et AA2 représentent des acides aminés identiques ou différents choisis dans le groupe constitué par Ala,
Asn, Cys, Gin, Gly, Ile, Leu, Met, Phe, Pro, Ser, Thr,
Trp, Tyr, Val, Asp, Glu, Arg, His, Lys, Orn, Dap, Dab les homoacides aminés correspondants et les béta-acides aminés correspondants sous forme d' énantiomères ou de diastéréoisomères ainsi que leurs mélanges, y compris les mélanges racemiques.
2. Conjugué dipeptidique selon la revendication 1 caractérisé en ce qu'au moins un des acides aminés AA2 ou AAl représente un acide aminé basique, avantageusement choisi dans le groupe constitué par Arg, His, Orn, Dap, Dab ou Lys.
3. Conjugué dipeptidique selon la revendication 2 caractérisé en ce que AA2 représente un acide aminé basique avantageusement choisi dans le groupe constitué par Arg, His, Lys, Orn, Dap ou Dab, avantageusement Arg.
4. Conjugué dipeptidique selon l'une quelconque des revendications 1 à 3 caractérisé en ce que A représente le radical correspondant à l'acide palmitique.
5. Conjugué dipeptidique selon l'une quelconque des revendications 1 à 4 caractérisé en ce qu'il est choisi dans le groupe constitué par a) A-Arg-His-NH2, b) A-Arg-Arg-NH2, c) A-Arg-Pro-NH2, d) A-Arg-Lys-NH2, e) A-Ser-Pro-NH2, f) A-DPhe-Arg-NH2. dans lesquelles A à la définition indiquée dans les revendications 1 ou 4.
6. Conjugué dipeptidique selon l'une quelconque des revendications 1 à 5 caractérisé en ce qu'il est choisi dans le groupe constitué par 39) Palm-Arg-His-NH2, 41) Palm-Arg-Arg-NH2, 49 ) Palm-Arg-Pro-NH2 , 50 ) Palm-Arg-Lys-NH2 , 125 ) Palm-Ser- Pro-NH2 . 269 ) Palm-DPhe-Arg-NH2 , 362 ) Pbu-DPhe-Arg-NH2 , 363 ) Lip -DPhe- Arg -NH2 .
7. Composition cosmétique ou pharmaceutique comprenant un conjugué dipeptidique selon l'une quelconque des revendications l à 6, et éventuellement un excipient cosmétiquement ou pharmaceutiquement acceptable.
8. Conjugué dipeptidique selon l'une quelconque des revendications 1 à 6 ou composition pharmaceutique selon la revendication 7 à titre de médicament, avantageusement destiné à prévenir, améliorer ou traiter les anormalités immunitaires, 1' immunodéficience, réguler le poids du corps en contrôlant l'appétit, traiter les désordres du système nerveux central, réguler la satiété, traiter l'anorexie ou traiter certains cancers cutanés.
9. Utilisation d'une composition cosmétique selon la revendication 7 en tant que dépigmentant, pour éclaircir ou blanchir l'épiderme, éliminer les tâches de la peau, en particulier de vieillesse ou de rousseur, ou prévenir la pigmentation de l'épiderme.
10. Procédé de traitement cosmétique pour éclaircir, dépigmenter ou blanchir l'épiderme, éliminer les tâches de la peau, en particulier de vieillesse ou de rousseur, ou prévenir la pigmentation de l'épiderme comprenant l'application sur la peau d'une composition cosmétique selon la revendication 7.
PCT/FR2005/001164 2004-05-11 2005-05-10 Conjugues dipeptidiques antagonistes de l’alpha-msh Ceased WO2005115174A2 (fr)

Priority Applications (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CA002566478A CA2566478A1 (fr) 2004-05-11 2005-05-10 Conjugues dipeptidiques antagonistes de l'alpha-msh
JP2007512280A JP4897969B2 (ja) 2004-05-11 2005-05-10 アルファ−ｍｓｈの拮抗複合ジペプチド
EP05770970A EP1750528A2 (fr) 2004-05-11 2005-05-10 Conjugues dipeptidiques antagonistes de l'alpha-msh
US11/596,286 US8097590B2 (en) 2004-05-11 2005-05-10 α-MSH-antagonist dipeptide conjugates

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FR0405069 2004-05-11
FR0405069A FR2870242B1 (fr) 2004-05-11 2004-05-11 Peptides ou conjugues peptidiques derives de la msh et leur utilisation dans le traitement cosmetique de la canitie.
FR0411279A FR2870244B1 (fr) 2004-05-11 2004-10-22 Conjugues dipeptidiques antagonistes de l'alpha-msh
FR0411279 2004-10-22

Publications (2)

Publication Number Publication Date
WO2005115174A2 true WO2005115174A2 (fr) 2005-12-08
WO2005115174A3 WO2005115174A3 (fr) 2006-05-26

Family

ID=34973223

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/FR2005/001164 Ceased WO2005115174A2 (fr) 2004-05-11 2005-05-10 Conjugues dipeptidiques antagonistes de l’alpha-msh

Country Status (6)

Country Link
US (1) US8097590B2 (fr)
EP (2) EP2228381A3 (fr)
JP (2) JP4897969B2 (fr)
CA (1) CA2566478A1 (fr)
FR (3) FR2870244B1 (fr)
WO (1) WO2005115174A2 (fr)

Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2007129270A3 (fr) * 2006-05-05 2008-12-04 Sederma Sa Nouvelles compositions cosmétiques contenant au moins un peptide doté d'au moins un cycle aromatique immobilisé
JP2009529513A (ja) * 2006-03-09 2009-08-20 バイヤースドルフ・アクチエンゲゼルシヤフト 色素脱失のためのトロポロン−およびヒドロキシベンゾール置換オリゴペプチド
EP2228381A3 (fr) * 2004-05-11 2010-12-29 Centre National de la Recherche Scientifique (CNRS) Conjugués dipeptidiques antagonistes de l'alpha-MSH
EP2827907B1 (fr) * 2012-03-20 2019-03-06 Helix Biomedix Inc. Lipopeptides antimicrobiens courts
EP4018997A1 (fr) * 2016-03-14 2022-06-29 NeoStrata Company, Inc. Acide aminé ou peptide n-lipoïque, dérivés et leurs utilisations
US12435056B2 (en) 2016-03-14 2025-10-07 Neostrata Company, Inc. N-lipoic-amino acid or peptide, derivatives and their uses

Families Citing this family (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107028792A (zh) * 2008-05-29 2017-08-11 唐纳德·欧文 皮肤美容组合物中的寡聚生物表面活性剂
CA2853791C (fr) * 2011-10-28 2017-10-24 Ruey J. Yu Derives n-acyldipeptides et leurs utilisations
FR2998570B1 (fr) 2012-11-26 2016-12-02 Sederma Sa Peptides, compositions les comprenant et utilisations notamment cosmetiques propigmentantes
KR101553637B1 (ko) * 2014-01-27 2015-09-16 (주)셀인바이오 펩타이드 지방산 유도체 및 이를 함유하는 주름 개선용 화장품 조성물
EP3393604B1 (fr) 2015-12-24 2026-02-11 Unilever Global IP Limited Inhibiteurs de la tyrosinase
FR3047990B1 (fr) * 2016-02-18 2020-12-25 Rpm Dermatologie Composition cosmetique cutanee comprenant un peptide sdkp ou un analogue de celui-ci
WO2019208700A1 (fr) * 2018-04-26 2019-10-31 ゼリア新薬工業株式会社 Dipeptide et composition pharmaceutique le contenant
CN111100890B (zh) * 2018-10-26 2022-04-08 中国石油化工股份有限公司 一种提高木质纤维素糖化率的方法
KR102163568B1 (ko) * 2020-08-21 2020-10-07 주식회사 비드테크 지방산 항균펩타이드 및 이를 함유하는 항균 조성물
CN114292312B (zh) * 2022-01-13 2025-10-14 湖南微肽生物医药有限公司 一种全液相合成9肽-1的方法

Family Cites Families (30)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE1184770C2 (de) 1961-06-01 1965-09-02 Hoffmann La Roche Verfahren zur Herstellung von antibacteriell wirksamen Peptiden
FR1327363A (fr) * 1962-05-21 1963-05-17 Hoffmann La Roche Peptides et procédé pour leur préparation
US5674839A (en) 1987-05-22 1997-10-07 Competitive Technologies, Inc. Cyclic analogs of alpha-MSH fragments
EP0389950A1 (fr) 1989-03-23 1990-10-03 Lion Corporation Inhibiteur de l'hormone stimulant les mélanocytes et préparation à usage externe la contenant
AU5609694A (en) * 1992-11-24 1994-06-22 University Of Cincinnati, The Melanogenic inhibitor, and methods of producing and using the same
FR2710340B1 (fr) 1993-09-22 1995-12-15 D Hinterland Lucien Dussourd Dérivés peptidiques de l'alpha-MSH et leur application .
US5786332A (en) * 1995-03-06 1998-07-28 Trega Biosciences, Inc. Cytokine restraining agents and methods of use in pathologies and conditions associated with altered cytokine levels
US6054556A (en) * 1995-04-10 2000-04-25 The Arizona Board Of Regents On Behalf Of The University Of Arizona Melanocortin receptor antagonists and agonists
JP4105763B2 (ja) * 1995-06-23 2008-06-25 ザ ガバメント オブ ザ ユナイテッド ステイツ オブ アメリカ，アズ リプレゼンテッド バイ ザ セクレタリー デパートメント オブ ヘルス アンド ヒューマン サービシーズ アグーチシグナルタンパク質およびそのペプチドの脱色活性
FR2741075B1 (fr) * 1995-11-15 1998-01-30 Rech De Pathologie Appliquee S Conjugues peptidiques, leur utilisation a titre de medicament et compositions les contenant
US5714567A (en) * 1996-02-15 1998-02-03 Council Of Scientific & Ind. Research Process for the preparation of aromatic polyesters
US6372717B1 (en) * 1996-08-23 2002-04-16 Sederma S.A. Synthetic peptides and their use in cosmetic or dermopharmaceutical compositions
DE19653736C2 (de) 1996-12-12 2002-11-21 Lancaster Group Gmbh Kosmetisches Präparat mit Peptidzusatz
US6228840B1 (en) * 1998-02-27 2001-05-08 Edward T. Wei Melanocortin receptor antagonists and modulations of melanocortin receptor activity
FR2781157B1 (fr) 1998-07-15 2000-08-25 Oreal Composition anti-inflammatoire
WO2000064926A1 (fr) * 1999-04-26 2000-11-02 Ajinomoto Co., Inc. Inhibiteur hormonal stimulant les melanocytes
FR2805744B1 (fr) 2000-03-03 2006-08-25 Sederma Sa Compositions cosmetiques ou dermopharmaceutiques contenant le dipeptide val-trp pour faciliter le drainage lymphatique et diminuer la masse adipeuse
BR0111718A (pt) 2000-06-16 2003-09-09 Hercules Inc Peptìdeos quimicamente modificados, composições e métodos de produção e uso
FR2810323B1 (fr) 2000-06-16 2002-09-06 Shiseido Int France Utilisation cosmetique d'un lipopeptide
US6911447B2 (en) 2001-04-25 2005-06-28 The Procter & Gamble Company Melanocortin receptor ligands
US20030194445A1 (en) * 2001-11-12 2003-10-16 Kuhner Carla H. Compositions and methods of use of peptides in combination with biocides and/or germicides
JP4158382B2 (ja) * 2002-01-30 2008-10-01 株式会社ナリス化粧品 口紅用組成物
FR2835528B1 (fr) * 2002-02-01 2004-03-12 Inst Europ Biolog Cellulaire Nouveaux derives peptidiques, leur preparation et leur application therapeutique et cosmetique
FR2836042B1 (fr) * 2002-02-15 2004-04-02 Sederma Sa Compositions cosmetiques ou dermopharmaceutiques pour diminuer les poches et cernes sous les yeux
US20040010010A1 (en) * 2002-04-30 2004-01-15 Ebetino Frank Hallock Melanocortin receptor ligands
US7034004B2 (en) 2002-05-07 2006-04-25 University Of Florida Peptides and methods for the control of obesity
PL1625150T3 (pl) 2003-05-08 2007-05-31 Dsm Ip Assets Bv Tripeptydy i ich pochodne do stosowania w kosmetyce w celu poprawy struktury skóry
WO2004110341A2 (fr) 2003-06-19 2004-12-23 Yeda Research & Development Co. Ltd. Lipopeptides antimicrobiens et anticancereux
FR2870244B1 (fr) * 2004-05-11 2011-01-07 Centre Nat Rech Scient Conjugues dipeptidiques antagonistes de l'alpha-msh
FR2870242B1 (fr) 2004-05-11 2010-08-20 Inst Europeen Biologie Cellulaire Peptides ou conjugues peptidiques derives de la msh et leur utilisation dans le traitement cosmetique de la canitie.

Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2228381A3 (fr) * 2004-05-11 2010-12-29 Centre National de la Recherche Scientifique (CNRS) Conjugués dipeptidiques antagonistes de l'alpha-MSH
JP2009529513A (ja) * 2006-03-09 2009-08-20 バイヤースドルフ・アクチエンゲゼルシヤフト 色素脱失のためのトロポロン−およびヒドロキシベンゾール置換オリゴペプチド
WO2007129270A3 (fr) * 2006-05-05 2008-12-04 Sederma Sa Nouvelles compositions cosmétiques contenant au moins un peptide doté d'au moins un cycle aromatique immobilisé
EP2510982A1 (fr) * 2006-05-05 2012-10-17 Sederma Nouvelles compositions cosmétiques contenant au moins un peptide doté d'au moins un cycle aromatique immobilisé
EP2827907B1 (fr) * 2012-03-20 2019-03-06 Helix Biomedix Inc. Lipopeptides antimicrobiens courts
EP4018997A1 (fr) * 2016-03-14 2022-06-29 NeoStrata Company, Inc. Acide aminé ou peptide n-lipoïque, dérivés et leurs utilisations
US12435056B2 (en) 2016-03-14 2025-10-07 Neostrata Company, Inc. N-lipoic-amino acid or peptide, derivatives and their uses

Also Published As

Publication number Publication date
JP4897969B2 (ja) 2012-03-14
US8097590B2 (en) 2012-01-17
CA2566478A1 (fr) 2005-12-08
EP1750528A2 (fr) 2007-02-14
FR2945809A1 (fr) 2010-11-26
FR2941459A1 (fr) 2010-07-30
WO2005115174A3 (fr) 2006-05-26
US20070231284A1 (en) 2007-10-04
EP2228381A2 (fr) 2010-09-15
JP2010235608A (ja) 2010-10-21
FR2870244B1 (fr) 2011-01-07
JP2007537213A (ja) 2007-12-20
FR2870244A1 (fr) 2005-11-18
EP2228381A3 (fr) 2010-12-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
FR2941459A1 (fr) Conjugues dipeptidiques antagonistes de l'alpha-msh
WO2000043417A1 (fr) Utilisation cosmetique ou pharmaceutique de peptides pour la regulation des dysfonctionnements immunologiques et dans l'inflammation cutanes
US11357783B2 (en) Conjugate of finasteride with peptide
FR2835528A1 (fr) Nouveaux derives peptidiques, leur preparation et leur application therapeutique et cosmetique
CA2566481C (fr) Peptides ou conjugues peptidiques derives de la msh et leur utilisation dans le traitement cosmetique de la canitie
EP1745071B1 (fr) Conjugues tripeptidiques agonistes de la msh
EP0316322B1 (fr) Tetrapeptide inhibiteur de l'entree en cycle des cellules souches hematopo etiques, procedes pour son obtention et ses applications
EP0837881A2 (fr) CONJUGUES D'alpha-MSH AVEC UN ACIDE GRAS, LEUR PROCEDE DE PREPARATION ET LEUR UTILISATION A TITRE DE MEDICAMENT
CN110612125B (zh) 异维a酸和肽的偶联物
CA2532869C (fr) Nouveaux conjugues peptidiques utiles dans le traitement preventif et curatif de l`alopecie
OA19680A (en) Conjugate of Isotretinoin and Peptide.
EA041637B1 (ru) Конъюгат изотретиноина с пептидом

Legal Events

Date Code Title Description
AK Designated states

Kind code of ref document: A2

Designated state(s): AE AG AL AM AT AU AZ BA BB BG BR BW BY BZ CA CH CN CO CR CU CZ DE DK DM DZ EC EE EG ES FI GB GD GE GH GM HR HU ID IL IN IS JP KE KG KM KP KR KZ LC LK LR LS LT LU LV MA MD MG MK MN MW MX MZ NA NG NI NO NZ OM PG PH PL PT RO RU SC SD SE SG SK SL SM SY TJ TM TN TR TT TZ UA UG US UZ VC VN YU ZA ZM ZW

AL Designated countries for regional patents

Kind code of ref document: A2

Designated state(s): BW GH GM KE LS MW MZ NA SD SL SZ TZ UG ZM ZW AM AZ BY KG KZ MD RU TJ TM AT BE BG CH CY CZ DE DK EE ES FI FR GB GR HU IE IS IT LT LU MC NL PL PT RO SE SI SK TR BF BJ CF CG CI CM GA GN GQ GW ML MR NE SN TD TG

121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application
WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2566478

Country of ref document: CA

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2007512280

Country of ref document: JP

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

WWW Wipo information: withdrawn in national office

Country of ref document: DE

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2005770970

Country of ref document: EP

WWP Wipo information: published in national office

Ref document number: 2005770970

Country of ref document: EP

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 11596286

Country of ref document: US

Ref document number: 2007231284

Country of ref document: US

WWP Wipo information: published in national office

Ref document number: 11596286

Country of ref document: US