WO2006015557A1 - Vectores vivos recombinantes y su uso en composiciones farmaceuticas contra el virus de l a hepatitis c - Google Patents

Vectores vivos recombinantes y su uso en composiciones farmaceuticas contra el virus de l a hepatitis c Download PDF

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Ivis GUERRA AIZPÚRUA
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Alexis Musacchio Lasa
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    • C12N2770/24234—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein

Definitions

  • the present invention is related to the branch of immunology and viral vaccines, particularly with recombinant avian smallpox virus for protein combinations based on hepatitis C virus (HCV) antigens and pharmaceutical compositions capable of inducing a cellular immune response against HCV.
  • HCV hepatitis C virus
  • HCV is first identified in 1989, through the use of molecular biology techniques, as the main causative agent of post-transfusion hepatitis No-A, Non-B (Choo QL., Kuo G., et al. ( 1989) Isolation of a cDNA clone derived from a blood-borne non-A, non-B viral hepatitis genome. Science. 244: 359-62; EP0318216 Chiron Corp). There are currently more than 170 million people infected by this viral agent in the world. 85% of HCV infections are persistent, often causing cirrhosis and hepatocellular carcinoma (Caselmann WH, AIt M.
  • Recombinant live vectors are attractive candidates for generating a cellular immune response against HCV.
  • Immunization with recombinant adenovirus for the capsid and E1 in mice induced a specific cytotoxic T type response against these antigens (Bru ⁇ a-Romero O., et al. (1997) Induction of cytotoxic T-cell response against hepatitis C structural antigens virus using a defective recombinant adenovirus Hepatology 25: 470-7).
  • a-Romero O., et al. 1997 Induction of cytotoxic T-cell response against hepatitis C structural antigens virus using a defective recombinant adenovirus Hepatology 25: 470-7.
  • This group of viruses also includes avian smallpox virus (WA), whose use for the induction of immune response has not been previously reported for HCV antigens.
  • Avian smallpox virus does not replicate in mammalian cells, but it can infect and efficiently express the proteins encoded by its genome in the cytoplasm. Due to these characteristics, the regulatory risks related to employment in humans is much lower than in other viral variants.
  • This invention overcoming the limitations and prior art, solves the aforementioned problem by providing a recombinant avian smallpox virus which contains DNA fragments derived from the hepatitis C virus in a non-essential region of the WA genome, capable of inducing a specific cellular response against HCV depending on the amino acid regions from the HCV antigens contained in the protein expressed by the WA.
  • the FPCoEI virus expresses a protein comprising aa 79-338 (SEQ ID No: 1) that includes part of the protein of the capsid and E1 and the FPBS virus comprises a chimeric protein (SEQ ID No : 2) that includes specific epitopes for both CD4 + and CD8 + T cells corresponding to different HCV antigens.
  • the coding sequence for the HCV antigens comes from the cDNA from a Cuban isolation of HCV (Morales J, et al. WO 98/25960).
  • Another aspect of the present invention relates to a pharmaceutical composition for inducing specific cellular immune response against HCV in subjects.
  • composition comprises an effective immunizing amount of recombinant avian smallpox virus and a pharmaceutically acceptable excipient.
  • the avian smallpox viruses that make up the invention have the ability to penetrate human cells and express HCV antigens in their cytoplasm. The expression in human cells is directed by the transcriptional unit, composed of a synthetic immediate / early promoter for WA. These viruses also contain the xanthine guanosine phosphoribosyl transferase gene under the control of the 7.5K vaccinia promoter. These viruses have no ability to replicate in humans.
  • This composition can be administered intramuscularly, intraperitoneally or subcutaneously.
  • the method of administration may be by syringes, gene gun, spray or other administration devices. Each individual receives a dose ranging from 2.5 x 10 7 to 1 x 10 8 PFU / dose in a given volume.
  • WAs can also be administered in alternate schemes with proteins or other recombinant viruses for HCV antigens, or in parallel schemes with cytokines and other immunomodulatory compounds. These combinations allow the appearance of new epitopic specificities or the potentiation of some branch of the particular immune response.
  • the pharmaceutical composition of the present invention can be administered to induce immunity against HCV before, simultaneously or after another therapy or vaccine, also to induce preventive immunity against HCV infection and to induce immunity against HCV in patients with chronic hepatitis C, cirrhosis and liver cancer.
  • Figure 1 Schematic representation of the region corresponding to HCV antigens in recombinant avian smallpox viruses.
  • FIG. 1 Immunization scheme with the different avian smallpox viruses.
  • Antibody response A.
  • Response of interferon gamma secretory lymphocytes B.
  • Response to the challenge with vaccinia virus C)
  • Figure 3 Scheme of immunization with FPCoEI and FPBS by different routes of inoculation. Response to the challenge with recombinant vaccinia virus for the antigens of the HCV structural region.
  • Figure 4 Immunization scheme with FPCoEI and FPBS with different amounts. Response to the challenge with recombinant vaccinia virus for the antigens of the HCV structural region.
  • Figure: 5 Immunization scheme based on combinations of FPCoEI and a formulation of a DNA vaccine. Antibody response against Core, E1 and E2 (A). Response to the challenge with recombinant vaccinia virus for the antigens of the HCV structural region (B).
  • Hepatitis C Virus As understood in this invention, the terms Hepatitis C Virus or HCV describe the virus in a generic manner, so that the terms are not limiting to a particular HCV viral sequence or isolation.
  • a coding sequence is understood as a nucleic acid molecule which is translated into a polypeptide, usually via mRNA, when placed under the control of an appropriate regulatory sequence.
  • a coding sequence may include, but is not limiting for cDNA and recombinant nucleotide sequences.
  • Example 1 Evaluation of FPCoEIc, FPCoEI, and FPBS viruses
  • FIG. 1 shows a schematic representation of the sequence corresponding to HCV antigens.
  • the virus were obtained as follows. Chicken fibroblasts were infected with WA and subsequently transfected with pFPCoElc, pFPCoEl or pFPBS plasmids using lipofectamine (Invitrogen, USA). These plasmids are derived from plasmid pFP67xgpt (Vázquez-Blomquist D., González S., Duarte CA.
  • the viral product of an infection plate was then amplified and the presence of the HCV-corresponding insert was confirmed by polymerase chain reaction.
  • the immunogenicity of the FPCoEIc, FPCoEI and FPBS viruses in female BALB / c mice of 8 weeks was analyzed, after administering 2 doses of 2.5x10 7 PFU intraperitoneally with a 3 week interval between them.
  • the immunization groups were composed of 10 animals.
  • Figure 2A shows that only the immunization with FPCoEI was able to induce detectable levels of antibodies against Core and El
  • Figure 2B shows the induction of a positive response of IFN-gamma secreting lymphocytes in animals immunized with FPCoEI and the FPBS, statistically superior (Student's T-test, p ⁇ 0.05) to that detected in animals immunized with the negative virus (FP9). Immunization with the FPCoEIc did not induce a positive response of IFN-gamma secreting lymphocytes.
  • the animals of the groups immunized with the FPCoEI and FPBS viruses were able to significantly reduce (Student's T-test, p ⁇ 0.05) the viral load in ovaries after challenge with 10 6 PFU of a recombinant vaccinia virus (vvRE) for the antigens of the HCV structural region (aa 1-650 of the viral polyprotein) in relation to that observed after the challenge with the non-recombinant vaccinia virus for HCV antigens (WR).
  • vvRE recombinant vaccinia virus
  • the viral load of vvRE in animals immunized with FPCoEI and FPBS was statistically lower than that detected in animals immunized with FP9 negative smallpox virus (Student's T-Test, p ⁇ 0.05). Immunization with the FPCoEIc did not significantly reduce Ia viral load in ovaries.
  • the challenge with vaccinia virus was performed intraperitoneally, 2 weeks after the last immunization with the smallpox virus. The ovaries were removed 5 days after the vvRE inoculated.
  • the challenge assay with recombinant vaccinia virus has been extensively evaluated to demonstrate the ability of a vaccine candidate to induce a strong cellular response in vivo. Particularly, the reduction of the viral titer in ovaries is fundamentally related to the induction of a strong response of CD8 + T cells.
  • Example 2 VVA administration routes (intraperitoneal, subcutaneous and intramuscular)
  • Example 3 Dose comparison (0.9x10 7 , 2.5x10 7 , 5x10 7 , 1x10 8 )
  • mice Female BALB / c mice were immunized intramuscularly at weeks 0 and 3 with different amounts of the recombinant viruses.
  • the immunization groups were composed of 10 animals. As can be seen in Figure 4, animals immunized with 0.9x10 7 PFU did not have significant differences between the viral load detected in the ovaries of vvRE after the challenge with 10 6 PFU of this vaccinia virus, 2 weeks after the last immunization with the avian smallpox virus.
  • mice of 8 weeks were immunized.
  • the immunization groups were composed of 10 animals.
  • One group (Co- plDKE2) was immunized intramuscularly at week 0, 3, 7 and 12 with a mixture of 100 ⁇ g of a plasmid expressing the first 650 aa of HCV polyprotein, plDKE2 (Due ⁇ as-Carrera S. , et al. (2004).
  • a group of animals (pAEC-K6) was immunized under similar conditions with the negative control plasmid pAEC-K6 (Herrera AM, et al. (2000). A family of compact plasmid vectors for DNA immunization in humans. Biochem. Biophys. Res Commun. 279: 548-51). Another group was immunized with 2.5x10 7 PFU of the FPCoEI intramuscularly at weeks 0 and 3. Animals were also immunized with FP9 negative control avian smallpox virus under the same conditions.
  • the lowest average viral load value was detected in animals immunized with CoPDKE2 in the first 2 doses and FPCoEI in the other 2.
  • the viral challenge was performed by intraperitoneal inoculation of 10 6 PFU of vvRE, 2 weeks after The last dose with avian smallpox viruses. The ovaries were removed 5 days after the vvRE inoculated.

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Abstract

Virus de viruela aviar recombinantes para combinaciones proteicas basadas en antígenos del virus de la hepatitis C y su uso en composiciones farmacéuticas capaces de inducir una respuesta inmune celular contra el virus de la hepatitis C, después de la administración de un número reducido de dosis. Las composiciones farmacéuticas de esta invención son útiles para la prevención y tratamiento de infecciones asociadas con el virus de la hepatitis C en mamíferos.

Description

VECTORES VIVOS RECOMBI NANTES Y SU USO EN COMPOSICIONES FARMACÉUTICAS CONTRA EL VIRUS DE L A HEPATITIS C
Campo de Ia técnica La presente invención está relacionada con Ia rama de Ia inmunología y las vacunas virales, particularmente con el Virus de viruela aviar recombinante para combinaciones proteicas basadas en antígenos del virus de Ia hepatitis C (VHC) y composiciones farmacéuticas capaces de inducir una respuesta inmune celular contra el VHC.
Estado de Ia técnica anterior
El VHC es identificado por primera vez en el año 1989, mediante el empleo de técnicas de biología molecular, como el principal agente causal de las hepatitis No-A, No-B postransfusionales (Choo Q-L., Kuo G., et al. (1989) Isolation of a cDNA clone derived from a blood-borne non-A, non-B viral hepatitis genome. Science. 244:359- 62; EP0318216 Chiron Corp). Actualmente existen en el mundo más de 170 millones de personas infectadas por este agente viral. El 85 % de las infecciones por el VHC son persistentes, causando frecuentemente cirrosis y carcinoma hepatocelular (Caselmann W. H., AIt M. (1996) Hepatitis C virus infection as a major risk factor for hepatocellular carcinoma. J. Hepatol. 24:61-66). Se ha estimado que el 25 % de los portadores crónicos que viven al menos 20 años después de Ia infección por el VHC, desarrollan cirrosis y que de ellos, entre 1 y 4 % desarrolla carcinoma hepatocelular anualmente (Prince A.M., Shata MT. (2001) Immunoprophylaxis of hepatitis C virus infection. Clin. Liver. Dis. 5:1091-103). En Ia rama terapéutica, el tratamiento que ha rendido los mejores resultados consiste en Ia administración combinada de interferón alfa (IFN-α) pegilado y Ia ribavirina en regímenes intensivos. Sin embargo, este tratamiento es agresivo, costoso y efectivo en menos del 50 % de los casos (Prince A.M., Shata M.T. (2001) Immunoprophylaxis of hepatitis C virus infection. Clin. Liver. Dis. 5:1091-103). Se han evaluado como alternativas vacunales disímiles variantes de subunidades proteicas, partículas similares a virus, péptidos sintéticos, vectores vivos recombinantes y plasmidios para Ia inmunización con ADN, basadas en diferentes antígenos del VHC (US6635257, US6387662, US6235888, US6685944, US2003021805, Lechmann M., Liang TJ. (2000) Vaccine development for hepatitis C. Semin. Liver. Dis. 20:211-26). Algunas de estas variantes han demostrado su capacidad para inducir una respuesta inmune específica contra epitopos del VHC, aunque esta respuesta no parece ser aún suficiente. Hasta el momento no se han establecido completamente los parámetros inmunológicos que correlacionan con Ia protección a Ia infección por el VHC. Sin embargo, varios estudios sugieren que una respuesta temprana, vigorosa y multiespecífica de células T citotóxicas, caracterizadas por un patrón de citocinas característico de linfocitos T auxiliadores de tipo I1 favorece Ia resolución de Ia enfermedad y Ia inmunidad contra el virus. Por el contrario, una respuesta de células T tardía se relaciona con el establecimiento de Ia inmunopatología crónica del hígado (Cerny A., Chisari F.V. (1999) Pathogenesis of chronic hepatitis C: immunological features of hepatic injury and viral persistente. Hepatology. 30:595-601; Cooper S., et al. (1999) Analysis of a successful immune response against hepatitis C virus. Immunity 10:439-49; Lechner F., et al. (2000) Why do cytotoxic T lymphocytes fail to elimínate hepatitis C virus? Lessons from studies using major histocompatibility complex class I peptide tetramers. Philos. Trans. R. Soc. Lond. B. Biol. ScL 355:1085-92; Takaki A., et al. (2000). Cellular immune responses persist and humoral responses decrease two decades after recovery from a single-source outbreak of hepatitis C. Nat. Med. 6:578-82). Los vectores vivos recombinantes son candidatos atractivos para generar una respuesta inmune celular contra el VHC. La inmunización con adenovirus recombinantes para Ia cápsida y Ia E1 en ratones indujo una respuesta de tipo T citotóxica específica contra estos antígenos (Bruña-Romero O., et al. (1997) Induction of cytotoxic T-cell response against hepatitis C virus structural antigens using a defective recombinant adenovirus. Hepatology 25:470-7). Aunque estos resultados han sido alentadores, los problemas recientes con el uso de adenovirus recombinantes en terapia génica han creado incógnitas sobre su uso en humanos. El empleo de virus recombinantes de tipo vaccinia y virus de viruela de canarios, conteniendo diferentes genes del VHC ha inducido respuestas de tipo T citotóxicas en ratones, de acuerdo al antígeno evaluado, cuando se han combinado con candidatos basados en vacunas de ADN (Pancholi P., et al. (2000) DNA prime- canarypox boost with polycistronic hepatitis C virus (HCV) genes generates potent immune responses to HCV structural and nonstructural proteins. J. Infecí Dis. 182:18-27; Pancholi P., et al. (2003) DNA immunization with hepatitis C virus (HCV) polycistronic genes or immunization by HCV DNA priming-recombinant canarypox virus boosting induces immune responses and protection from recombinant HCV- vaccinia virus infection in HLA-A2.1-transgenic mice. J. Virol. 77:382-90). De hecho, no se ha evidenciado hasta el momento que Ia administración única de virus de viruela de canario recombinantes para antígenos de Ia región estructural del VHC induzca una respuesta celular in vivo efectiva por ejemplo en el modelo de reto con virus vaccinia recombinante. A este grupo de virus pertenece también el virus de viruela aviar (WA), cuyo empleo para Ia inducción de respuesta inmune no se ha reportado previamente para antígenos del VHC. El virus de viruela aviar no se replica en células de mamíferos, pero puede infectar y expresar eficientemente las proteínas codificadas por su genoma en el citoplasma. Debido a estas características, los riesgos regulatorios relacionados con el empleo en humanos es muy inferior al de otras variantes virales.
Actualmente no existe ninguna vacuna disponible en el mercado y Ia mayoría de los estudios se concentran aún en Ia fase pre-clínica. Por tanto, Ia urgente necesidad de desarrollar un agente preventivo y/o terapéutico efectivo contra Ia infección por el VHC es un problema por solucionar.
Explicación de Ia invención
Esta invención venciendo las limitaciones y el arte previo, resuelve el problema antes mencionado al proporcionar un virus de viruela aviar recombinante el cual contiene fragmentos de ADN derivados del virus de Ia hepatitis C en una región no esencial del genoma del WA, capaz de inducir una respuesta celular específica contra el VHC dependiendo de las regiones aminoacídicas provenientes de los antígenos del VHC contenidas en Ia proteína expresada por el WA. De acuerdo a Ia presente invención el virus FPCoEI expresa una proteína que comprende los aa 79-338 (SEQ ID No: 1) que incluye parte de Ia proteína de Ia cápsida y Ia E1 y el virus FPBS comprende una proteína quimérica (SEQ ID No: 2) que incluye epitopos específicos para linfocitos T tanto CD4+ como CD8+ correspondientes a diferentes antígenos del VHC. En estos virus, Ia secuencia codificante para los antígenos del VHC procede del ADNc proveniente de un aislamiento cubano del VHC (Morales J, et al. WO 98/25960). Otro aspecto de la presente invención se refiere a una composición farmacéutica para inducir respuesta inmune celular específica contra el VHC en sujetos vacunados. Dicha composición comprende una cantidad inmunizante efectiva del virus de viruela aviar recombinante y un excipiente farmacéuticamente aceptable. Los virus de viruela aviar que componen Ia invención tienen Ia capacidad de penetrar las células humanas y expresar los antígenos del VHC en el citoplasma de las mismas. La expresión en células humanas está dirigida por Ia unidad transcripcional, compuesta por un promotor inmediato/temprano sintético para WA. Estos virus contienen también el gen de Ia xantin guanosin fosforribosil transferasa bajo el control del promotor 7.5K de vaccinia. Estos virus no tienen capacidad para replicarse en humanos. Esta composición puede ser administrada por vía intramuscular, intraperitoneal o subcutánea. El método de administración puede ser mediante jeringuillas, pistola de genes, spray u otros dispositivos de administración. Cada individuo recibe una dosis que oscila desde 2.5 x 107 a 1 x 108 UFP/dosis en un volumen determinado. En esta invención se describen también los procedimientos para Ia inmunización de los WA en esquemas alternos con plasmidios para Ia inmunización con ADN. Los WA también pueden ser administrados en esquemas alternos con proteínas u otros virus recombinantes para antígenos del VHC, o en esquemas paralelos con citocinas y otros compuestos inmunomoduladores. Estas combinaciones permiten Ia aparición de nuevas especificidades epitópicas o Ia potenciación de alguna rama de Ia respuesta inmune en particular.
Las composiciones farmacéuticas compuestas por virus de viruela aviar recombinantes para antígenos del VHC pueden tener las siguientes ventajas:
- Es posible obtener una respuesta celular específica vigorosa.
- Se requiere un reducido número de dosis para lograr el efecto deseado. - Es posible el empleo de estas formulaciones como núcleo para vacunas combinadas.
- No se requiere adyuvación.
- Pueden ser empleadas en combinación con agentes antivirales. Dependiendo de las circunstancias, a determinar en cada caso, Ia composición farmacéutica de Ia presente invención puede administrarse para inducir inmunidad contra el VHC antes de, simultáneamente o después de otra terapia o vacuna, igualmente para inducir inmunidad preventiva contra Ia infección por el VHC y para inducir inmunidad contra el VHC en pacientes con hepatitis C crónica, cirrosis y cáncer de hígado. Breve descripción de los dibujos
Figura 1: Representación esquemática de Ia región correspondiente a los antígenos del VHC en los virus de viruela aviar recombinantes.
Figura 2: Esquema de inmunización con los diferentes virus de viruela aviar. Respuesta de anticuerpos (A). Respuesta de linfocitos secretores de interferón gamma (B). Respuesta frente al reto con virus vaccinia (C)
Figura 3: Esquema de inmunización con FPCoEI y FPBS por diferentes vías de inoculación. Respuesta frente al reto con virus vaccinia recombinante para los antígenos de Ia región estructural del VHC. Figura: 4: Esquema de inmunización con FPCoEI y FPBS con diferentes cantidades. Respuesta frente al reto con virus vaccinia recombinante para los antígenos de Ia región estructural del VHC.
Figura: 5: Esquema de inmunización basado en combinaciones de FPCoEI y una formulación de una vacuna de ADN. Respuesta de anticuerpos contra Core, E1 y E2 (A). Respuesta frente al reto con virus vaccinia recombinante para los antígenos de Ia región estructural del VHC (B).
EJEMPLOS DE REALIZACIÓN
Como se entiende en esta invención, los términos Virus de Hepatitis C o VHC describen al virus de una manera genérica, por Io que los términos no son limitantes a una secuencia viral particular del VHC o aislamiento.
A si mismo por secuencia codificante se entiende una molécula de ácido nucleico Ia cual es traducida a un polipéptido, usualmente vía ARNm, cuando es colocada bajo control de una secuencia regulatoria apropiada. En este caso una secuencia codificante puede incluir, pero no es limitante para ADNc y secuencias nucleotidicas recombinantes.
La presente invención será descrita más completamente mediante los ejemplos siguientes, los cuales son ilustrativos y no limitan el alcance de Ia invención.
Ejemplo 1: Evaluación de los virus FPCoEIc, FPCoEI, y el FPBS
Con el objetivo de evaluar Ia capacidad de virus de viruela aviar recombinantes para antígenos del VHC de inducir una respuesta inmune celular específica se obtuvieron los virus FPCoEIc, FPCoEI y FPBS. La Figura 1 muestra una representación esquemática de la secuencia correspondiente a los antígenos del VHC. Los virus fueron obtenidos de Ia siguiente forma. Fibroblastos de pollo fueron infectados con WA y posteriormente fueron transfectados con los plasmidios pFPCoElc, pFPCoEl o pFPBS utilizando lipofectamina (Invitrogen, USA). Estos plasmidios son derivados del plasmidio pFP67xgpt (Vázquez-Blomquist D., González S., Duarte CA. (2002) Effect of promoters on cellular immune response induced by recombinant fowlpox virus expressing multi-epitope polypeptides from HIV-1. Biotechnol. Appl. Biochem. 36:171-9) que contienen Ia secuencia codificante para las regiones que comprenden los aa 1-338, aa 79-338 (SEQ ID No: 1), o Ia secuencia codificante para una proteína quimérica basada en epitopos específicos para linfocitos T (SEQ ID No: 2) (plasmidios pFPCoElc, pFPCoEl y pFPBS, respectivamente). A continuación se realizaron varios ciclos de purificación viral en medio selectivo con xantina, hipoxantina y ácido micofenolico. Después se amplificó el producto viral de una placa de infección y se confirmó Ia presencia del inserto correspondiente al VHC mediante reacción en cadena de Ia polimerasa. Se analizó Ia inmunogenicidad de los virus FPCoEIc, FPCoEI y FPBS en ratones BALB/c hembras de 8 semanas, después de administrar 2 dosis de 2.5x107 UFP por vía intraperitoneal con un intervalo de 3 semanas entre ellas. Los grupos de inmunización estuvieron compuestos por 10 animales. La Figura 2A muestra que solo Ia inmunización con el FPCoEI fue capaz de inducir niveles detectables de anticuerpos contra Core y El Sin embargo, Ia Figura 2B muestra Ia inducción de una respuesta positiva de linfocitos secretores de IFN-gamma en los animales inmunizados con el FPCoEI y el FPBS, estadísticamente superior (Prueba T de Student, p<0.05) a Ia detectada en los animales inmunizados con el virus negativo (FP9). La inmunización con el FPCoEIc no indujo una respuesta positiva de linfocitos secretores de IFN-gamma. Adicionalmente, como se muestra en Ia Figura 2C, los animales de los grupos inmunizados con los virus FPCoEI y FPBS fueron capaces de reducir de manera significativa (Prueba T de Student, p<0.05) Ia carga viral en ovarios después del reto con 106 UFP de un virus vaccinia recombinante (vvRE) para los antígenos de Ia región estructural del VHC (aa 1-650 de Ia poliproteína viral) con relación a Ia observada después del reto con el virus vaccinia no recombinante para antígenos del VHC (WR). Igualmente Ia carga viral del vvRE en los animales inmunizados con el FPCoEI y el FPBS fue estadísticamente inferior a Ia detectada en los animales inmunizados con el virus de viruela aviar negativo FP9 (Prueba T de Student, p<0.05). La inmunización con el FPCoEIc no redujo de forma significativa Ia carga viral en ovarios. El reto con virus vaccinia se realizó por vía intraperitoneal, 2 semanas después de Ia última inmunización con los virus de viruela aviar. La extracción de los ovarios se realizó 5 días después de inoculado el vvRE. El ensayo de reto con virus vaccinia recombinante ha sido ampliamente evaluado para evidenciar Ia capacidad de un candidato vacunal de inducir una respuesta celular fuerte in vivo. Particularmente, Ia reducción del título viral en ovarios se relaciona fundamentalmente con Ia inducción de una fuerte respuesta de linfocitos T CD8+.
Ejemplo 2: Vías de administración de VVA (intraperitoneal, subcutánea e intramuscular)
Con el objetivo de evaluar Ia influencia de Ia vía de inoculación sobre Ia respuesta inmune generada por los virus de viruela aviar recombinantes, se inmunizaron ratones BALB/c hembras de 8 semanas. Los grupos de inmunización estuvieron compuestos por 10 animales. Los virus (2.5x107 UFP) fueron administrados por vía intraperitoneal, intramuscular o subcutánea en 2 ocasiones con intervalo de 3 semanas entre ellas. La Figura 3 evidencia que no existió diferencias significativas entre las vías de inmunización en cuanto a Ia capacidad de los virus de viruela aviar recombinantes FPCoEI y FPBS para reducir Ia carga viral del virus vaccinia recombinante vvRE en ovarios. Estos 2 recombinantes indujeron una respuesta positiva de reducción de Ia carga viral con relación al virus de viruela aviar control negativo FP9 (Prueba T de Student, p<0.05). El reto viral se realizó mediante Ia inoculación intraperitoneal de 106 UFP del vvRE, 2 semanas después de Ia última dosis con los virus de viruela aviar. La extracción de los ovarios se realizó 5 días después de inoculado el vvRE.
Ejemplo 3: Comparación de las dosis (0.9x107, 2.5x107, 5x107, 1x108)
Fueron inmunizados por vía intramuscular, ratones BALB/c hembras en las semanas 0 y 3 con diferentes cantidades de los virus recombinantes. Los grupos de inmunización estuvieron compuestos por 10 animales. Como se aprecia en Ia Figura 4, los animales inmunizados con 0.9x107 UFP no tuvieron diferencias significativas entre Ia carga viral detectada en ovarios del vvRE después del reto con 106 UFP de este virus vaccinia, 2 semanas después de Ia última inmunización con los virus de viruela aviar. En cambio, Ia administración de 2.5x107, 5x107, 1x108, de FPCoEI y FPBS redujo de manera significativa el título de vvRE en ovarios con relación al detectado en animales inmunizados con cantidades similares del virus de viruela aviar control negativo FP9 (Prueba T de Student, p<0.05). En todos los casos, Ia extracción de los ovarios se realizó 5 días después de inoculado el vvRE.
Ejemplo 4: Esquemas alternos con ADN y VVA
Con el objetivo de evaluar Ia respuesta inmune inducida en esquemas que combinasen un candidato vacunal de ADN con un virus de viruela aviar recombinante para antígenos del VHC se inmunizaron ratones BALB/c hembras de 8 semanas. Los grupos de inmunización estuvieron compuestos por 10 animales. Un grupo (Co- plDKE2) fue inmunizado por vía intramuscular en Ia semana 0, 3, 7 y 12 con una mezcla de 100 μg de un plasmidio que expresa los primeros 650 aa de Ia poliproteína del VHC, plDKE2 (Dueñas-Carrera S., et al. (2004). Immunization with a DNA vaccine encoding the hepatitis-C-virus structural antigens elicits a specific immune response against the capsid and envelope proteins in rabbits and Macaca ¡rus (crab- eating macaque monkeys). Biotechnol Appl Biochem. 39:249-55) y 10 μg de Ia proteína recombinante de Ia cápsida del VHC, Co.120 (Alvarez-Obregon J. C, et al. (2001). A truncated HCV core protein elicits a potent immune response with a strong participation of cellular immunity components in mice. Vaccine 19:3940-46). Un grupo de animales (pAEC-K6) fue inmunizado en condiciones similares con el plasmidio control negativo pAEC-K6 (Herrera A.M., et al. (2000). A family of compact plasmid vectors for DNA immunization in humans. Biochem. Biophys. Res. Commun. 279:548-51). Otro grupo fue inmunizado con 2.5x107 UFP del FPCoEI por vía intramuscular en las semanas 0 y 3. También se inmunizaron animales con el virus de viruela aviar control negativo FP9 en las mismas condiciones. Adicionalmente, un grupo (Co-plDKE2/FPCoE1) fue inmunizado por vía intramuscular en las semanas 0 y 3 con Ia mezcla Co-plDKE2 y en las semanas 9 y 12 con el FPCoEl Otro grupo (Co-plDKE2/FP9) fue inmunizado de forma similar, pero las dosis de Ia semana 6 y 9 fueron administradas con el FP9. En Ia Figura 5 A se aprecia que los mayores niveles de anticuerpos se indujeron en el grupo Co-plDKE2 (Prueba T de Student, p<0.05). Además, Ia administración alterna de Co-plDKE2 y FPCoEI indujo niveles de anticuerpos superiores a los detectados en el grupo inmunizado con el FPCoEI solo (Prueba T de Student, p<0.05). En Ia Figura 5 B se puede apreciar que tanto los grupos inmunizados con FPCoEI, Co-plDKE2, como los inmunizados con Co- plDKE2 en las 2 primeras dosis y FPCoEI en las otras 2, redujeron de forma significativa (Prueba T de Student, p<0.05) Ia carga viral del vvRE después del reto con relación a los animales inmunizados con los controles negativos. El valor promedio más bajo de carga viral fue detectado en los animales inmunizados con Co- plDKE2 en las 2 primeras dosis y FPCoEI en las otras 2. El reto viral se realizó mediante Ia inoculación intraperitoneal de 106 UFP del vvRE, 2 semanas después de Ia última dosis con los virus de viruela aviar. La extracción de los ovarios se realizó 5 días después de inoculado el vvRE.
LISTADO DE SECUENCIAS <110> Centro de Ingeniería Genética y Biotecnología
<120> VECTORES VIVOS RECOMBINANTES Y SU USO EN COMPOSICIONES FARMACÉUTICAS CONTRA EL VIRUS DE LA HEPATITIS C
<130> Sec VHC
<140>
<141> <150> CU 2004-0174
<151> 2004-08-11
<160> 2 <170> Patentln Ver. 2.1
<210> 1
<211> 831
<212> ADN <213> Fragmento de ADN del VHC del nucleótido 237 al 1014
<400> 1 atgaggcctc ccgggtaccc ttggcccctc tatggtaacg agggcatggg atgggcagga 60 tggctcctgt caccccgtgg ctctcggcct agttggggcc ccactgaccc ccggcgtagg 120 tcgcgtaatt tgggtaaggt catcgatacc ctcacatgcg gcttcgccga cctcatgggg 180 tacattccgc tcgtcggcgc ccccctaggg ggcgctgcca gggccctggc gcatggcgtc 240 cgggttctgg aggacggcgt gaattatgca acagggaatc tgcccggttg ctctttctct 300 ctcttccttt tggctttgct gtcctgtttg accatcccag tttccgccta tgaagtgcgc 360 aacgcgtccg gggtgtacca tgtcacgaac gactgctcca actcaagcat tgtgtatgag 420 gcagacgaca tgatcatgca cacccccgga tgcgtgccct gcgttcggga ggacaacacc 480 tcccgctgct gggtagcgct cacccccaca ctcgcggcca ggaatgccag cgtccccacc 540 acgacaatac gacgccacgt cgatttgctc gttggggcgg ctgctctctg ctccgctatg 600 tacgtggggg atctctgcgg atctgttttc ctcgtttccc agctgttcac cttctcgcct 660 cgccggcatg agacagcaca ggactgcaac tgctcaatct atcccggcca cgtatcaggt 720 caccgcatgg cctgggatat gatgatgaac tggtcacctt caacagccct agtggtatcg 780 cagttactcc ggatccgtcg acctgcagca tgccatggca taagtgacta g 831
<210> 2
<211> 602
<212> DNA
<213> Secuencia Artificial que incluye epitopos del VHC <400> 2 atgggatcca cccacgtgac cggcggcagc caggcccgca ccacccacag cttcacctcc 60 ctgctgcgcc agggcgccaa gcagaacgtg cagctgatcg gcaaggtgat cgacaccctg 120 accagcggct tcgccgacct gatgggctac atcccactgg tgggcgcccc actgggcggc 180 gccgcccgcg ccaagaaggg ccacgtgagc ggccaccgca tggcctggga catgatgatg 240 aactgggcca gcaagaaggc cgccagccgc gccgccggct tgcaggacag caccatgctg 300 gtgagcgaag gccgcagctg ggcccagcct ggctacccat ggccactgta tggcaacgag 360 ggcatgggca agaagggctc cagcttcagc ctgttcctgt tggccctcct gagcagcttg 420 accatcaaga agatgagcta ctcctggacc ggcgccctgg tgaccccaag cgccgccgag 480 aagaagctgt tgttcaacat cctgggcggc tgggtgaaga agagcatggt gggcaactgg 540 gccaaggtga agaagtacac cggcgacttc gacagcgtga tcgactccag gccttaactg 600 ca 602

Claims

REIVINDICACIONES
1. Un virus de viruela aviar recombinante caracterizado por que contiene fragmentos de ADN derivados del virus de Ia hepatitis C, en una región no esencial del genoma del WA, capaz de inducir una respuesta celular específica contra antígenos del VHC.
2. El virus de viruela aviar recombinante de Ia reivindicación 1 , donde el fragmento de ADN del virus de hepatitis C es Ia secuencia codificante para una poliproteína cápsida-E1 que comprende los aa 79-338 (SEQ ID No: 1).
3. El virus de viruela aviar recombinante de Ia reivindicación 1, donde el fragmento de ADN del virus de hepatitis C es Ia secuencia codificante para una proteína quimérica basada en epitopos específicos para linfocitos T (SEQ ID No: 2).
4. Un virus de viruela aviar recombinante como el reivindicado en 1 y 2, el cual es el FPCoEl
5. Un virus de viruela aviar recombinante como el reivindicado en 1 y 3, el cual es el FPBS.
6. Una composición farmacéutica para inducir una respuesta inmune celular específica contra el VHC, que comprende una cantidad inmunizante efectiva del virus de viruela aviar recombinante como el de las reivindicaciones de Ia 1 a Ia 5 y un excipiente farmacéuticamente aceptable.
7. La composición farmacéutica según Ia reivindicación 6, donde Ia dosis inmunizante efectiva es entre 2.5 x107 y 1x 108 UFP/ dosis.
8. La composición farmacéutica según las reivindicaciones 6 y 7 para inducir inmunidad preventiva contra Ia infección por el VHC.
9. La composición farmacéutica según las reivindicaciones 6 y 7 para inducir inmunidad contra el VHC en pacientes con hepatitis C crónica, cirrosis y cáncer de hígado.
10. La composición farmacéutica según las reivindicaciones 6 y 7 para inducir inmunidad contra el VHC antes de, simultáneamente o después de otra terapia o vacuna.
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Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1992015672A1 (en) * 1991-03-07 1992-09-17 Virogenetics Corporation Genetically engineered vaccine strain
WO1998025960A1 (es) 1996-12-12 1998-06-18 Centro De Ingenieria Genetica Y Biotecnologia (Cigb) Secuencias derivadas del genoma del virus de la hepatitis c y su uso

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
PT992580E (pt) * 1993-11-04 2005-07-29 Innogenetics Nv Epitopos para celulas t humanas imunodominantes do virus da hepatite c
WO2001021189A1 (en) * 1999-07-19 2001-03-29 Epimmune Inc. Inducing cellular immune responses to hepatitis c virus using peptide and nucleic acid compositions
JP2004527524A (ja) * 2001-04-05 2004-09-09 カイロン コーポレイション 非経口初回抗原刺激後の粘膜追加免疫

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1992015672A1 (en) * 1991-03-07 1992-09-17 Virogenetics Corporation Genetically engineered vaccine strain
WO1998025960A1 (es) 1996-12-12 1998-06-18 Centro De Ingenieria Genetica Y Biotecnologia (Cigb) Secuencias derivadas del genoma del virus de la hepatitis c y su uso

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ANONYMOUS: "WHO informal consultation on characterization and quality aspects of vaccines based on live viral vectors", December 2003 (2003-12-01), pages 1 - 27, XP002360387, Retrieved from the Internet <URL:http://www.who.int/vaccine_research/documents/viral%20vectors%20report%20full.pdf> [retrieved on 20051221] *
LECHMANN M ET AL: "Vaccine development for hepatitis C", SEMINARS IN LIVER DISEASE, STUTTGART, DE, vol. 20, no. 2, 2000, pages 211 - 226, XP002316999 *
PANCHOLI P ET AL: "DNA immunization with hepatitis C virus (HCV) polycistronic genes or immunization by HCV DNA priming-recombinant canarypox virus boosting induces immune responses and protection from recombinant HCV-vaccinia virus infection in HLA-A2.1-transgenic mice", JOURNAL OF VIROLOGY, THE AMERICAN SOCIETY FOR MICROBIOLOGY, US, vol. 77, no. 1, January 2003 (2003-01-01), pages 382 - 390, XP002308334, ISSN: 0022-538X *
PAOLETTI E ET AL: "HIGHLY ATTENUATED POXVIRUS VECTORS: NYVAC, ALVAC AND TROVAC", DEVELOPMENTS IN BIOLOGICAL STANDARDIZATION, KARGER, BASEL, CH, vol. 84, 1995, pages 159 - 163, XP002048184, ISSN: 0301-5149 *
YAP C C ET AL: "Expression of target genes by coinfection with replication-deficient viral vectors.", THE JOURNAL OF GENERAL VIROLOGY. AUG 1998, vol. 79 ( Pt 8), August 1998 (1998-08-01), pages 1879 - 1888, XP002360316, ISSN: 0022-1317 *

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