WO2006034655A1

WO2006034655A1 - Steroidal saponin pharmaceutical composition, its preparation method and use

Info

Publication number: WO2006034655A1
Application number: PCT/CN2005/001621
Authority: WO
Inventors: Zhongrong Liu; Wei Qi; Tiejun Fu; Wenjun Zou; Yuanqiao Ji; Bogang Li; Yu Huang
Original assignee: Chengdu Diao Pharmaceutical Group Co Ltd
Current assignee: Chengdu Diao Pharmaceutical Group Co Ltd
Priority date: 2004-09-30
Filing date: 2005-09-29
Publication date: 2006-04-06
Anticipated expiration: 2007-03-30
Also published as: CN101035548A; EP1800685A4; EP1800685B1; EP1800685A1; RU2007115104A; US20070254847A1; RU2349337C2; CN1754541A; CN101035548B

Description

甾体皂苷药物组合物及其制备方法和应用所属技术领域

本发明涉及一种甾体皂苷药物组合物，具体地说，是主要以黄山药、穿龙薯蓣为原料提取的甾体皂苷药物组合物。

背景技术

甾体皂苷 (steroidal saponins)是植物中一类重要的生物活性物质，甾体皂苷的研究在天然产物化学中一直占有重要的地位。甾体皂苷的苷元是含有 27个碳原子的螺甾烷醇或呋甾烷醇，大多数存在于单叶子植物的百合科，石蒜科和薯蓣科植物中。

黄山药又名姜黄、姜黄草、老虎姜、猴节莲，为薯蓣科薯蓣属植物黄山药 Dio秦 a panthaica Prain et Burkill的根茎，分布于西南及湖北、湖南等地；能理气止痛，解毒消肿，主治胃气痛，吐泻腹痛，跌打损伤，疮疡肿毒，毒蛇咬伤等症【国家中医药管理局《中华本草编委会》：中华本草（1999年上海科学技术出版社）第 8卷， P8.247】。穿山龙为薯蓣科薯蓣属植物穿龙薯蓣 i½w_Comi ;p w»'cfl Makin₀的根茎，又名穿山骨、穿地龙、狗山药、山常山、穿山骨、火藤根、姜黄、土山薯、竹根薯、铁根薯、雄姜、黄鞭、野山药、地龙骨、金刚骨、串山龙、过山龙，分布于东北、华北、西北及河南、湖北、山东、江苏、安徽、浙江、江西、四川等地；能祛风除湿，活血通络，止晐；主治风湿痹痛，肢体麻木，胸痹心痛，慢性气管炎，跌打损伤，疟疾，痈肿等症【国家中医药管理局《中华本草编委会》：中华本草（1999年上海科学技术出版社）第 8卷， P238】。《中华人民共和国药典》 1977年版一部 P435-436将穿山龙作为中药材收入其中。

目前，对黄山药、穿山龙的研究甚少。李伯刚等人从黄山药中分离并鉴定得到 2种水难溶甾体皂苷：薯蓣皂苷 (dioscin)和纤细皂苷 (gracillin) [李伯刚等，植物学报， 1986， 28 (4)： 409-411]；董梅等人从黄山药中分离得到 3种甾体皂苷 [董梅等，药学学拫 2001, 36 (1)： 42-45], 其化学结构分别鉴定为，伪原薯蓣皂苷（甾体皂苷 1)， DI-9 (甾体皂苷 6); 方一苇等人从穿山龙中分离得到 2种水难溶甾体皂苷：薯蓣皂苷 (dioscin)和纤细皂苷 (gracillin) , 两种均为川龙冠心宁的药用成分【方一苇等，药学学报 1982， 17 (5)： 388-391]；都述虎等人从穿山龙中分离得到从穿龙薯蓣总皂苷中分得 2个甾体皂苷 (1个水难溶性皂苷和 1个水溶性皂苷)，其化学结构分别鉴定为纤细皂苷等【都述虎等，药学学报 2002， 37 (4)： 267-2701。另一项国内研究公开了薯蓣总皂苷提取物中含有的 8 种甾体皂苷的结构式 [李伯刚,周正质.中药新药与临床. 1994， 13 (2) : 75-76],治疗冠心病的有效成分为该八种甾体皂苷，其中包括薯蓣皂苷、原薯蓣皂苷、原纤细皂苷、纤细皂苷等。中国专利（申请号： CN02128119.X)螺甾烷醇类甾体皂苷在制备治疗心血管疾病药物中的应用，公开了六种螺甾垸醇类甾体皂苷的新用途。中国专利（申请号： CN 02112159.1 )具有治疗心肌缺血，心绞痛和心肌梗死功能的药物组合物，公开了含有薯蓣皂苷元的药物组合物的新用途。到目前为止仅从黄山药、穿山龙中分离鉴定了伪原薯蓣皂苷

( I ) 薯蓣阜苷（m)。

虽然上述资料公开了黄山药、穿山龙含有多种对治疗心血管疾病有效的甾体皂苷，确认本但仅仅是对两种植物中的有效成分的化学研究，由于有些成分含量极低，在制药上并无太大价值。众所周知，从植物中获得纯的有用价值的化合物极为困难，成本很高，同时也为了避免难以预料的副作用，一般不使用植物中的有效纯化合物，而使用药用植物提取物直接作用药用原料，成本低而且应用简便。但植物提取物的一个缺陷是，由于植物采收季节和产地不同都会造成有效成分含量的波动，同时，如果主要有效成分及其含量不清楚，都会给药品的质量控制造成很大困难，因此，为了保持植物药的质量稳定，清楚知道植物中各基本药效成分及其含量是很重要的，目前由于技术手段所限和甾体皂苷的种类复杂，至今未见确切的主要有效成分、含量及其纯度的报道。

传统的制备甾体总皂苷的方法：用甲醇或乙醇热提，所得的醇溶液浓缩，除去甲醇或乙醇，再用氯仿等脱脂，然后用含水的正丁醇提取，所得的正丁醇溶液浓缩即得甾体总皂苷。以上工艺存在如下缺点：（1)收率低，成本高，（2)生产周期长，（3)需要大量的有机溶剂，生产上存在易燃易爆有毒的危险，同时带来严重的环境污染，（4)能耗大，由于正丁醇沸点高，造成浓缩干燥困难，（5)产品色泽差；且不适合工业化生产。按传统的工艺制备甾体总皂苷，各甾体皂苷含量不稳定，导致药效不稳定。

发明内容

为了克服上述缺陷，本发明的技术方案是提供了一种甾体皂苷药物组合物，本发明的另一技术方案是提供了该甾体皂苷药物组合物的制备方法和用途。

本发明提供了一种甾体皂苷药物组合物，它含有通式 A和 /或通式 B的呋甾烷醇甾体皂苷，通式 C螺甾垸醇类甾体皂苷，其重量配比为：呋甾烷醇甾体皂苷 5— 25份、螺甾垸醇类甾体皂苷 1一 10份，

c

通式 C中, 、 _H、一 _glc、 -glc rha.

-glc<:^rha

进一步地，含有下列化合物：通式 A中，当 ^^RHA 时，为伪原薯蓣皂苷

( I )； Rl=

时，为伪原纤细薯蓣皂苷（ Π );通式 B中，当时；为原薯蓣皂苷（IV);

时，为原纤细皂苷（V); 通式 C 中，

时为薯蓣皂苷（m)，

其中，伪原薯蓣皂苷（ I )和/或原薯蓣皂苷（W) 5—22份原纤细皂苷 (Π)和 /或原纤细皂苷 (V) 1一 5份、薯蓣皂苷 (ΙΠ) 1—8份。

更进一步地，含有伪原薯蓣皂苷 ( I ) 5—20份、伪原纤细皂苷（Π) 1—3份、薯蓣皂苷（ΠΙ) 1—5份。

更进一歩地，含有伪原薯蓣皂苷 ( I ) 12-18份、伪原纤细皂苷（ Π ) 1份、薯蓣皂苷（DI) 1.2-2.5份。

所述的甾体皂苷来源于薯蓣科薯蓣属植物黄山药 Dios霸 a panthaica Prain et BurkilL 穿 %葛镊 Dioscorea nipponica Malino的提取物。其中，所述甾体总皂苷提取物中，甾体总皂苷含量大于 80%(w/_W)，甾体总皂昔以薯蓣皂苷计，其含量不少于 65%(w/_W)。

其中，所述的提取物中含有伪原薯蓣皂苷（ I )、伪原纤细皂苷（ Π )、薯蓣皂苷 (ΠΙ) 三种甾体皂苷的含量之和不少于甾体总皂苷的 50%_W/_W。

所述的提取物具有如图 1所示的 HPLC指紋图谱，其中，指紋图谱的特征峰分别为- 伪原薯蓣皂苷（ I )保留时间： 28.27min_; 伪原纤细皂苷（Π )保留时间： 29.5_min_; 薯蓣皂昔 (ΙΠ)保留时间： 57.10min。

色谱条件：色谱柱： AUtim_a C18 4.6X250mm，5um，梯度洗脱，蒸发光散射检测器检测，漂移管温度 100Ό，气体流速 2.0L/min。

所述的提取物是由如下方法制备- a、以中药黄山药、穿山龙或新鲜釆集的黄山药、穿山龙的根茎为原料，经切片或粉碎后，加水、甲醇、乙醇、正丁醇或其它低脂肪醇中的一种或任意两种或者多种溶剂以任意比例组成的混合溶液为溶媒提取，溶媒量为原料的 15— 25倍；

b、将 a步骤制备的提取液冷却过滤、滤液通过吸附树脂柱、弃去流出液，用水洗至流出液至无色，弃去水洗液；

c、将 b步骤的水洗后的吸附树脂柱用乙醇、甲醇、丙酮、 50%〜90%乙醇、 30—80 %含水甲醇或 60— 95%含水丙酮中的一种或多种洗脱，收集洗脱液，浓缩；

d、将 c步骤的浓缩液加 60—95%醇醇沉，过滤，收集滤液，浓缩，干燥，即得。其中，所述的提取物的制备方法步骤 b中：当提取液含甲醇、乙醇、正丁醇或其它低脂肪醇时，先减压浓缩，再冷却过滤。

所采用的溶剂提取法中，可选用水、甲醇、乙醇、正丁醇或者其他低级脂肪醇中的一种溶媒，也可以选用其中的任意两种或者多种溶剂以任意比例组成的混合溶媒，在室温下浸润提取或者用超声波振荡提取，或者在加热状态下浸润提取或回流提取。提取次数可以是一次，也可以是多次。

所采用的大孔树脂吸附法中，树脂可选用 HPD₁₍₎。、 HPD_3TO、 LD_M。、 D₁₍₁₁以及其他类型的大孔吸附树脂,或以上不同型号的大孔吸附树脂按一定比例混合，洗脱溶媒用水、甲醇、乙醇、丙酮、含水甲醇、含水乙醇或者含水丙酮中的一种或多种，洗脱时可以浓度洗脱，也可以梯度洗脱。

本发明药物组合物是由所述的甾体皂苷或提取物为活性成分，加上药学上可接受的辅料或辅料性成分制备而成的制剂。

其中，所述的制剂是：片剂、胶囊剂、软胶囊、颗粒剂、口服液、滴丸、注射剂。本发明还提供了该药物组合物的制备方法，它包括如下步骤：

称取含有通式 A和 /或通式 B的呋甾垸醇甾体皂苷，通式 C螺甾醇类甾体皂苷，重量配比为：呋垸醇甾体皂苷 5— 25份、螺留烷醇类体皂苷 1—5份；混合，加入药学上可接受的辅料或辅助性成分制备成药学上常用的制剂。

本发明提供的药物组合物还可以由以下方法制备：

a、以中药黄山药、穿山龙或新鲜采集的黄山药、穿山龙的根茎为原料，经切片或粉碎后，加水、甲醇、乙醇、正丁醇或其它低脂肪醇中的一种或任意两种或者多种溶剂以任意比例组成的混合溶液为溶媒提取，溶媒量为原料的 15— 25倍；

c、将 b步骤的水洗后的吸附树脂柱用乙醇、甲醇、丙酮、 50%〜90%乙醇、 30—80 %含水甲醇或 60— 95%含水丙酮中含水甲醇或含水丙酮中的一种或多种洗脱，收集洗脱液，浓缩；

d、将 c步骤的浓缩液加 60— 95%醇醇沉，过滤，收集滤液；

e、取 d步骤所述的滤液，浓缩干燥，加入药物上可接受的辅料或辅助性成分制备成药学上常用的制剂。

其中，步骤 b中，当提取液含甲醇、乙醇、正丁醇或其它低脂肪醇时，先减压浓缩，再冷却过滤。

本发明还提供了该药物组合物在制备治疗和预防心脑血管疾病药物中的应用。其中，所述药物是治疗冠心病、心绞痛、心肌梗死、心律失常、高血脂或缺血性脑血管病的药物。

通过对本发明药物组合物中三个甾体皂苷成分的测定，药效稳定性高，疗效可靠，同时提供三个甾体皂苷成分的鉴定方法，可控性强，且本发明药物日服剂量 300-600m_g，服用剂量少，为临床提供了一种新的选择。

显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。

以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

附图说明

图 1原薯蓣皂苷标样、化合物 1—8混合的 HPLC分析谱图，图中 1一 8号峰分别对应化合物 1-8；

图 2实施例 1的组合物的 HPLC分析谱图，图中 1号峰为化合物 1， 6号峰对化合物 2， 7 号峰对应化合物 9， 8号峰对应化合物 3， 11号峰对应化合物 5;

图 3实施例 2的组合物的 HPLC分析谱图，图中 1号峰为化合物 1， 6号峰对化合物 2， 7 号峰对应化合物 9， 8号峰对应化合物 3， 10号峰对应化合物 5;

图 4实施例 3的组合物的 HPLC分析谱图，图中 1号峰为化合物 1, 6号峰对化合物 2， 7 号峰对应化合物 9， 8号峰对应化合物 3， 10号峰对应化合物 5;

具体实施方式

实施例 1 本发明药物组合物的制备：

中药穿山龙的干燥根茎 100k_g，粉碎，用 95%乙醇（1200LX3) 回流，第一次 3小时，第二、三次各 2小时，滤过，合并提取液；回收乙醇，加水至 2g/ml，冷藏 24小时，离心；上清液过 HPD₃oo吸附树脂柱，先用水洗至流出液无色后，用 70%乙醇洗脱；接收 70%乙醇洗脱部分，浓缩，将浓缩液加 75%乙醇醇沉，过滤，收集滤液，浓缩，干燥，再经真空干燥即得穿山龙总甾体皂苷，收率为 232%。甾体总皂苷含量为 85%(w/w)。

实施例 2 本发明药物组合物的制备

中药黄山药的干燥根茎 100k_g，切片，用 12倍（V/W) 7 煎煮 4次，第一次 3小时，第二、三、四次各 2小时，滤过，合并提取液；放至室温，离心；上清液过大孔吸附树脂柱 [HPDnm LDnH ?: 3 (WAV) ], 先用水洗至流出液无色后，再用 10%乙醇洗脱，最后用 75%乙醇洗脱；接收 75%乙醇洗脱部分，浓缩，将浓缩液加 80%乙醇醇沉，过滤，收集滤液，浓缩，干燥回收乙醇至无醇味，再经喷雾干燥即得黄山药总甾体皂苷，收率为 1.15%。甾体总皂苷含量为 90%(w/w)。

实施例 3 本发明药物组合物的制备

新鲜穿山龙的干燥根茎 400k_g，切片，用 8倍（V/W)水煎煮 3次，第一次 3小时，第二、三次各 2小时，滤过，合并提取液；放至室温，离心; 上清液过大孔吸附树脂柱 [HPDi₀₀/LD₁₀i=6: 4 (WAV)】，先用水充分正反洗后，再用 10%乙醇洗脱，最后用 80% 乙醇洗脱；接收 80%乙醇洗脱部分，浓缩，将浓缩液加 90%乙醇醇沉，过滤，收集滤液，浓缩，回收乙醇至无醇味，再经喷雾干燥即得穿山龙总甾体皂苷，收率为 0.56%。甾体总皂苷为 95%(w/w)₀

实施例 4 本发明药物组合物中化合物的制备及鉴定

取实施例 1粗提物 1278 g, 分散于 11100 ml水中，依次用乙酸乙酯（7500 mlx4)、正丁醇（7500 mlx5)进行萃取，得乙酸乙酯萃取物 102 g和正丁醇萃取物 503 g。取正丁醇部分 236 g进行硅胶柱层析（《M0.5X52 cm，2000 g)，氯仿-甲醇-水 (9： 1 ： 0.1)梯度洗脱，每瓶接收 500 ml洗脱剂，共收集 160份。 Fr.16-21析出化合物 8 (140 mg), Fr.41-45 析出化合物 7 (427 mg), Fr.56-65析出化合物 6 (30g) Fr.94-104析出化合物 5 (8.62 g), 即为本发明的甾体皂苷（m)。 Fr.113-127合并为 E (26 g)，进行硅胶柱层析（Φ6.5Χ71 cm, 800 g), 氯仿 -甲醇（5:1)水饱和洗脱， E过柱 Fr.14-20合并为 B(4 g)，过 ODS纯化得化合物 4 (1.3 g)₀ Fr.128-143合并为 F(63 g)，进行硅胶柱层析（Φ7Χ52 cm, 850 g)，氯仿 -甲醇（5:1) 7j饱和洗脱， F过柱 Fr.36-60合并为 A(10 _g)，ODS纯化得化合物 3(115m_g)， F过柱 Fr.61-68合并为 B(llg),ODS纯化得化合物 9(105mg), 即为本发明的甾体皂苷 ( Π )。 F过柱 Fr.69-78合并为 C(10 g),ODS纯化得化合物 2(2.89 g),即为本发明的甾体皂苷（ 1 )。

柱层析用硅胶（160-200目， 200-300目）， TLC用 GF₂₅₄硅胶为青岛海洋化工厂产品，反向硅胶 ODS (Cosmosil 75C₁₈-OPN)为日本 Nacalai tesque公司产品，反相高效硅胶板 RP-18 F₂₅₄为 Merck产品。

经 MS、 ¾ NMR、 ¹³C NMR、 DEPT. HMQC、 HMBC等现代波谱学方法结合理化常数鉴定了它们的结构如下：

质谱仪为 Finnigan LCQ^DEeA _; 核磁共振仪为 Bruker AM-400, TMS为内标。化合物 9 (伪原纤细皂苷）化合物 9的 ¹³C NMR数据分别与伪原薯蓣皂苷 ^P1和纤细皂苷 ^[41比较，结果发现化合物 9的 26-C所接糖信号及苷元部分的化学位移与伪原薯蓣皂苷完全吻合，而剩余糖的信号与纤细皂苷的糖信号完全吻合，因此初步判断化合物 9为原纤细皂苷在 C ~C₂₂脱去 1分子水的产物（即伪原纤细皂苷（11 )。

在 HMBC谱中， 1-H-gk"" (δ 4.83)与苷元 26-C (S_c 74.7)相关； 1-H-rha" (δ_Η 6.40)， 1-H-glc'" ( δ_Η 5.10)分别与 2-C-glc' (5_C 76.8)， 3-C-glc' (6_C 89.3)相关， l-H-_gk' (δ_Η 4.95)与苷元 3-C (5_c 77.7)相关，也证实了上述推测的糖的连接位置和顺序。

综上所述，化合物 9的结构鉴定为 26-0-p-D-吡喃葡萄糖基 -3β，26-二醇 -25(R)-A⁵'^M(²²)- 二烯 -呋甾 -3-i?-〖a-L-吡喃鼠李糖基 (1→2)〗-〖P-D-吡喃葡萄糖基 (1→3)】-P-D-吡喃葡萄糖苷，即伪原纤细皂苷（Π )。

化合物 8 (延冷草次苷）：白色针状结晶。 ESIMS m/z: 577 [M+H]⁺, 415 [M-glc+H]⁺, 397 [M-glc-¾0+H]⁺, 1151 [2M-H]", 575 [M-H]-; 1H NMR (400 MHz, C₅D₅N): δ1.11(3Η， d. CH₃-21, / = 6.8 Hz), 0.87 (3H, s， CH₃-19), 0.80 (3H， s， CH₃-18), 0.67 (3H， d, CH₃-27, J= 4.6 Hz)显示薯蓣皂苷元的 4个甲基质子信号。 ¹³C NMR (100 MHz, C₅D₅N)见表 1, 苷元部分与薯蓣皂苷元比较 C-3由 S71.7"V78.6，C-2由 S31.4→30.2, C-4 由 δ42.3→39.3，说明苷元的 C-3位接糖。化合物 8的 ¹³C NMR数据（见 Table 3)与文献，²¹报道吻合。

化合物 7 ( Progenin H : 3-0- [α- L-鼠李吡喃糖 (1→4) ] -β - D-葡萄吡喃糖-薯蓣皂苷元）：白色针状结晶。 ESI-MS m/z: 723 [M+H]⁺, 577[M-rha+H]⁺, 415[M-rha-gIc+H]⁺, 397[M-rha-gIu-¾0 +H]⁺, 721 [M-H] , 575 [M-rha-H]-; 1H NMR (400 MHz, C5D5N): δ1.11(3Η， d, CH3-2I, J = 6.9 Hz), 0.88 (3H, s， CH₃-19), 0.80(3H, s， CH3-I8), 0.66 (3H, d, CHa-27, J= 5.2 Hz)显示薯蓣皂苷元的 4个甲基质子信号，葡萄糖的端基质子 δ 4.94 (1H, d, •7= 7.7 Hz)表明葡萄糖为 β构型，鼠李糖端基质子8 6.54 (1 1^)表明鼠李糖为(_¾构型。化合物 7的 ¹³C NMR数据（见 Table 3)与文献 ^[1'²¹报道吻合。

化合物 6 ( Progeninffl: 3-0- [α- L-鼠李吡喃糖 (1 2) ] - β-D-葡萄吡喃糖-薯蓣皂苷元）：白色粉末。 ESI-MS m/z: 723 [M+H】⁺， 577 [M-rha+Hl⁺, 415 [M-rha-glc+HJ⁺, 397 [M-rha-gIc-H₂0 +H]⁺; ^JH NMR (400 MHz, C₅D_SN): 51.11 (3H， d, CH₃-21, /= 7.0 Hz), 1.02 (3H, s， CH₃-19), 0.80 (3H, s, CH3-I8), 0.66 (3H, d， CH₃-27, /= 5.0 Hz)显示薯蓣皂苷元的 4 个甲基质子信号。 δ 6.36 (1H, br, s)表明鼠李糖的构型为 α型， δ 5.04 (1H, d, /= 9.0 Hz)表明葡萄糖的构型为 β型。化合物 6的 ¹³C NMR数据（见 Table 3)与文献 U，²】报道吻合。

化合物 5 (薯蓣皂苷 dioscin ): 白色针状结晶。 ESI-MS wa z: 891 [M+Na]⁺, 869 [M +H]⁺, 577 [M-rha-rha+H]⁺, 437 [M-rha-rha-glc+ Na】⁺， 903 [M+CI]", 867 [M-Hl , 721 [M-rha-H]-_; 1H NMR (400 MHz, C₅D_SN): δ 1.74(3H, d, /= 6.5 Hz), 1.60(3H， d, J= 6.2 Hz) 分别显示 2个鼠李糖的甲基质子信号， 66.37 (1H, br, s), 5.83 (1H, br, s)显示两个鼠李糖的构型为 α型， 54.92 (1H, d, J= 6.4 Hz)显示葡萄糖的构型为 β型: δ1.11(3Η, d， CH₃-21, /= 6.8 Hz), 1.02(3H, s， CH₃-19), 0.79(3H, s, CH3-I8), 0.66(3H， d, CH₃-27， J- 4.9 Hz)分别显示薯蓣皂苷元的 4个甲基质子信号。化合物 5的 ¹³C NMR数据（见 Table 4)与文献 ^f11报道吻合。为薯蓣皂苷。化合物 4 ( 3β， 26-二醇- ( 25R ) Δ ⁵' ²⁰⁽²²⁾-二烯 -呋甾- 26 - — β - D-吡喃葡萄糖苷 ) 白色粉末。 ESI-MS m/z: 907 [M+Na]⁺, 885 [M+H]⁺, 723 [M-gIc+H]⁺, 577 [M-glc-rha+H]⁺, 437 [M-glc-rha-glc+Na]⁺, 883 [M-H] ; 1H NMR (400 MHz, C₅D₅N): 51.61 (3H， s， CH₃-21)， 0.99 (3H， d, CH₃-27, /= 6.4 Hz), 0.89 (3H， s, CH₃-19)， 0.70 (3H， s， CH₃-18)显示甾体皂苷元的 4个甲基质子信号。 δ 4.95 (1H， d, /= 7.5 Hz), 4.82 (1H, d, /= 6.1 Hz)表明化合物 4中的葡萄糖为 β构型， δ 5.90 (1H， br, s)表明化合物 4中含有一个 oc构型的鼠李糖；化合物 4 的 ¹³C NMR数据（见 Table 4),苷元部分与化合物 7比较 C-3由 δ71.2→783说明除了 C-26 位接糖外， C-3位也接糖，化合物 4的 "C NMR数据与文献 W报道吻合。

化合物 3 ( 26— ί?"β— D—吡喃葡萄糖 -3β, 26—二醇—（ 25R )—— Δ ⁵' ^{20 (22>}-3- - { [a— L- (25R)— 吡喃鼠李糖 ( 1→4 ) ]- β- D-吡喃葡萄糖苷 } ): 白色粉末。 ESI-MS /z: 907 [M+Na]⁺, 885 [M+H]⁺, 723 [M-glc+H]⁺, 577 [M-gIc-rha+H]⁺; 1H MR(600 MHz, C₅D₅N): 51.62 (3H, s, CH3-2I), 1.02 (3H, d, CH3-27, J= 6.5 Hz), 0.88 (3H， s, CH₃-19), 0.70 (3H, s， CH₃-18)显示甾体皂苷元的 4个甲基质子信号， 51.77 (3H, d， /= 6.0 Hz)显示鼠李糖末端甲基质子信号; ¹³C NMR (150 MHz, C₅D_SN)数据（见 Table 4)，苷元部分同化合物 8，化合物 3的 NMR数据与文献【^s]报道吻合。

化合物 2(伪原薯蓣皂苷）：白色粉末。 ESI-MS m/z: 1053 [M+Na]⁺, 723 [M-rha-glc+H]⁺, 577 [M-rha-glc-rha +H]⁺， 415 [M-rha-glc-rha-glc+H]⁺, 1029 [M-H]-, 883 [M-rha-H]"; 1H NMR (400 MHz, C₅D₅N): 61.61 (3H， s, CH₃-21), 1.03 (3H， s, CH₃-19), 0.99 (3H, d, CH₃-27, /= 6.8 Hz), 0.70 (3H, s， CH₃-18)显示 4个甲基质子信号， δΐ.74 (3Η, d, J = 7.2 Hz), 1.60 (3H， d, /= 7.7 Hz)分别显示 2个鼠李糖的甲基质子信号， 66.37 (1H, br, s)， 5.83 (1H, br， s) 表明两个鼠李糖的构型是 α型， 64.92 (1H， d, /= 6.9 Hz), 4.81 (1H， d, J= 7.7 Hz)表明两个葡萄糖的构型是 β型；化合物 2的 ¹³C NMR数据（见 Table 4)与文献 ^[s]报道吻合。

化合物 1 (原薯蓣皂苷）：分离鉴定方法见李伯刚，周正质.中药新药与临床. 1994, 13 (2) : 75-76。

表 1. 化合物 2-9的 ¹³C NMR数据（溶剂： C₅D₅N )

C 9 8 7 6 5 4 3 2

1 37..3 37.4(t) 37.4(t) 37.5(t) 37.5(t) 37.S(t) 37.5(t) 37.5(t)

2 29.9 30.2(t) 30.2(t) 30.1(t) 30.1(t) 30.2(t) 30.2(t) 30.1(t)

3 77.7 78.6(d) 78.3(d) 78.2(d) 77.8(d) 78.3(d) 78.3(d) 78.0(d)

4 38.4 39.3(t) 39.3(t) 38.9(t) 38.9(t) 39.3(t) 38.9(t) 38.9(t)

5 140.5 140.9(s) 140.9(s) 140.8(s) 140.8(s) 140.9(s) 140.8(s) 140.8(s)

6 121.6 121.7(d) 121.7(d) 121.7(d) 121.7(d) 121.7(d) 121.7(d) 121.8(d)

7 32.2 32.2(t) 32.2(t) 32.3(t) 32.3(t) 32.3(t) 32.4(t) 32.4(t)

8 31.2 31.6(d) 31.6(d) 31.6(d) 31.6(d) 31.4(d) 31.4(d) 31.4(d)

9 50.1 50.3(d) 50.3(d) 50.3(d) 50.3(d) 50.3(d) 50.2(d) 50.3(d)

10 36.9 37.0(s) 37.0(s) 37.1(s) 37.1(s) 37.0(s) 37.1(s) 37.1(s)

11 21.0 21.1(t) 21.1(t) 21.0(t) 21.1(t) 21.1(t) 21.2(t) 21.2(t)

12 39.4 39.9(t) 39.8(t) 39.8(t) 39.8(t) 39.6(t) 39.6(s) 39.6(t)

13 43.2 40.4(s) 40.4(s) 40.4(s) 40.4(s) 43.4(s) 43.4(s) 43.4(s)

14 54.7 56.6(d) 56.6(d) 56.6(d) 56.6(d) 54.9(d) 54.9(d) 54.9(d) 15 34.3 32.2(t) 32.2(t) 32.2(t) 32.2(t) 34.4(t) 34.5(t) 34.5(t)

16 84.3 81.1(d) 81.1(d) 81.1(d) 81.1(d) 84.4(d) 84.4(d) 84.4(d)

17 64.3 62.9(d) 62.9(d) 62.8(d) 62.9(d) 64.5(d) 64.4(d) 64.5(d)

18 13.9 16.3(q) 16.3(q) 16.3(q) 16.3(q) 14.1(q) 14.1(q) 14.1(q)

19 19.2 19.4(q) 19.4(q) 19.3(q) 19.3(q) 19.4(q) 19.4(q) 19.4(q)

20 103.4 42.0(d) 41.9(d) 41.9(d) 41.9(d) 103.5(s) 103.6(s) 103.5(s)

21 11.6 15.0(q) 15.0(q) 14.9(q) 15.0(q) H.8(q) 11.8(q)

22 152.2 109.2(s) 109.3(s) 109.2(s) 109.2(s) 152.4(s) 152.3(s) 152.4(s)

23 31.2 31.8(t) 31.8(t) 31.8(t) 31.8(t) 31.4(t) 31.4(t) 31-4(t)

24 23.5 29.2(t) 29.2(t) 29.2(t) 29.2(t) 23.7(t) 23.6(t) 23.7(t)

25 33.7 30.6(d) 30.6(d) 30.5(d) 30.5(d) 33.5(d) 33.5(d) 33.4(d)

26 74.7 66.8(t) 66.8(t) 66.8(t) 66.8(t) 74.9(t) 74.9(t) 74.9(t)

27 17.1 17.3(q) 17,3(q) 17.2(q) 17.2(q) 17.3(q) 173(q) 17.3(q) C-3

sugar

art

glc Γ 99.7 102.6(d) 102.7(d) 100.3(d) 100.2(d) 102.7(d) 100.3(d) 100.2(d)

(inner)2' 76.8 75.4(d) 75.5(d) 79.6(d) 78.1(d) 75.5(d) 79.6(d) 78.6(d)

3' 89.3 78.5(d) 76.7(d) 77.8(d) 76.8(d) 76.7(d) 77.8(d) 76.8(d)

4' 71.3 71.7(d) 78.2(d) 71.6(d) 78.7(d) 78.5(d) 71.7(d) 78.6(d)

5' 78.3 78.1(d) 77.1(d) 77.9(d) 77.9(d) 77.1(d) 77.7(d) 77.7(d)

6' 62.2 62.9(t) 61.5(t) 62.6(t) 61.3(t) 61.5(t) 62.6(t) 61.3(t) rha 1" 102.0 102.4(d) 102.0(d) 102.4(d) 102.0(d)

(l- 4)2" 72.5 72.8(d) 72.4(d) 72.8(d) 72.5(d)

3" 72.2 72.6(d) 72.8(d) 72.6(d) 72.8(d)

4" 73.9 74.0(d) 74.1(d) 74.0(d) 74.1(d)

5" 69.3 70.3(d) 69.4(d) 70.3(d) 69.5(d)

6" 18.5 18.5(q) 18.6(q) 18.5(q) 18.6(q) rha 1'" 104.3 102.0(d) 102.9(d) 102.0(d) 102.9(d)

(1→2) 74.7 72.5(d) 72.4(d) 72.5(d) 72.5(d)

< 〃

3"' 78.3 72.8(d) 72.7(d) 72.8(d) 72.7(d)

4"' 71.3 74.1(d) 73.8(d) 74.1(d) 73.9(d)

5"' 77.4 69.4(d) 70.4(d) 69.5(d) 70.4(d)

6"' 62.2 18.6(q) 18.4(q) 18.7(q) 18.4(q)

C-26

sugar

art

glc 1"" 104.7 1049(d) 104.9(d) 104.9(d)

2"" 75.0 75.2(d) 75.2(d) 75.2(d)

3"" 78.5 78.6(d) 78.6(d) 78.5(d)

4"" 71.5 ' 71.7(d) 71.7(d) 71.7(d)

5"" 78.4 78.2(d) 78.3(d) 77.9(d)

6"" 62.6 62.9(t) 62.8(t) 62.8(t) 通过上述方法，可分离并鉴定本发明药物组合物中各化合物。

实施例 5 本发明药物组合物的质量控制

32456789222211111111111

1325934 0467801 将 9个已经结构鉴定的对照品混合进样通过 HPLC分析，色谱条件：色谱柱： Alltima C18 4.6X 250mm，5wn,梯度洗脱，蒸发光散射检测器检测，漂移管温度 100°C，气体流速 2.0L/mhi。梯度洗脱表如下：

表 2 梯度洗脱表

0(mim) 30(mim) 50(mim) 60(mim) 80(mim)

乙晴 15% 40% 40% 100% 100%

水 85% 60% 60% 0 100%

色谱图见附图 1。

将实施例 1、 2、 3所得的组合物经 HPLC分析，色谱图分别见附图 1、 2、 3, 用外标两点法对数方程计算化合物 I、 n、 m的重量百分含量，见表 3。

表 3 化合物（ I )、（n)、（m) 的对甾体总皂苷的重量百分比

化合物（ I ) % 化合物 ( Π ) % 化合物（ffl) %

实施例 1 59. 8 4. 7 5. 7

实施例 2 63. 8 4. 8 6. 8

实施例 3 58. 4 23988923030876468975571 6. 8 9. 5 通过对本发明组合物 20批次的跟踪测试，表明三个化合物在组合物中含量相对稳定，故将三个化合物作为质量指标，可控性强。见表 4: 表 4 各批次本发明组合物各甾体皂苷对甾体总皂苷的1重量百分比批号原薯蓣皂苷 (％) 伪原薯蓣皂苷(％) 伪原纤细皂苷 (％) 化合物 3 薯蓣皂苷 C½) "2 8308283382445458729711

,1

•1

.2

•1

.1

1621 上述试验证明，本发明药物组合物中伪原薯蓣皂苷 ( I )、伪原纤细皂苷（Π )、薯蓣皂苷（m)均在恒定的比例中，通过直接控制三个化合物的含量，可以达到控制本发明药物质量的目的。在不同原料、不同提取工艺中，上表中伪原薯蓣皂苷 ( I )与原薯蓣皂昔 (IV )可以相互转换；但是通过试验表明，相同原料，相同工艺的批次中，伪原薯蓣皂苷 ( I )或原薯蓣皂苷 (IV)的含量基本恒定，伪原纤细皂苷（π )或原纤细皂苷（V )的含量基本恒定，可以将其中含量较高的一种或二者之和作为质量控制成分之一，即本发明药物组合物伪原薯蓣皂苷 ( I )和 /或原薯蓣皂苷 (IV ),伪原纤细皂苷（II )和 /或原纤细皂苷（v )、薯蓣皂苷（m)均在恒定的比例中，通过直接控制该三类化合物的含量，可以达到控制本发明药物质量的目的。

实施例 6 本发明药物组合物胶囊剂的制备

每粒胶囊的组成：

总甾体皂苷（实施例 2制得） 100g

淀粉 150g (共制成 1000粒）

按上述比例取、淀粉，混匀，装胶囊。每粒装 250mg, 用于心脑血管疾病治疗，口服，每日三次，每次 1〜2粒。二月为一疗程。

每粒含甾体皂苷以薯蓣皂苷计，不少于 65.0 mg。

实施例 7: 片剂的制备

片剂组成：

总甾体皂苷（实施例 2制得） 100g

HPMC Lvioo 30g

乳糖 70g

硬脂酸镁 lg (共制成 1000片）

总甾体皂苷、 HPMC；、乳糖混匀，以 75%乙醇为粘合剂制湿颗粒，过 22目筛， 50°C干燥 3h, 22目筛整粒，加入硬脂酸镁混勾压片，每片重 0. 15g。用于心脑血管疾病治疗，口服，每日三次，每次 1〜2片。二月为一疗程。

每片含甾体皂苷以薯蓣皂苷计，不得少于 65.0 mg。

实施例 8注射液的制备

注射液组成：总甾体皂苷 50g

吐温 80 10ml

氯化钠 8g (共制成 1000ml)

总甾体皂苷，加 10%N¾C0₃调 PH至 7.0- 7. 5，冷藏滤过，加吐温 -80， NaCl, 加注射用水至 1000ml， G₃垂熔漏斗（玻璃）滤过，分装，灌封， 100*0流通蒸气灭菌 30min即得。用于心脑血管疾病治疗，皮下注射，每日二次，每次 l〜2ml。二月为一疗程。

每支含甾体皂苷以薯蓣皂苷计，不得少于 65. 0 mg。

软胶囊、滴丸可按常规方法，加入常用基质制备。以下通过药效学试验证明本发明药物组合物的有益效果。

试验例 1 伪原纤细皂苷 (Π)对大鼠急性心肌梗死的影响：

使用实施例 4所得伪原纤细皂苷 (Π) 的进行了以下相关药理试验：

取 Wistar大鼠， 180— 220g/只，随机分为 3组，即对照组、伪原纤细皂苷高、低剂量组，每组 12只。对照组灌胃给予蒸馏水，其余各组按表中高剂量 (3 mg/kg), 低剂量 (1.5 mg/kg)分别灌胃给予相应药液（均以蒸馏水配制）。每天给药 1次，连续给药一周。末次给药 lh后，氨基甲酸乙酯（Ur_atha_n，l_g/k_g)腹腔麻醉大鼠，仰位固定，沿胸骨中线剪开动物皮肤，在胸骨左缘 3— 5肋开口，迅速挤出心脏后，立即结扎左心冠状动脉前降支根部，将心脏放回胸腔，关闭胸腔并缝合恢复自主呼吸。结扎 3h后结束试验，心脏结扎线以下横切 5片，硝基四氮唑蓝染色，采用多媒体彩色病理图分析系统（MPIAS-500), 以固定象距测量正常心肌及梗塞心肌面积，观察心肌梗塞程度，结果进行统计学处理（t 检验)，结果见表 4。

伪原纤细皂苷 (Π)对心肌缺血致心肌梗塞的影响

剂量梗塞心肌面积梗塞区重量梗塞区占心室梗塞区占全心组别

mg/kg mm² g 比（％) 脏比（％) 对照组 112.23+9.46 0.301 ±0. 055 32.9±3. 1 28.6±1. 5 高剂量组 3 80.56+7. 69** 0.227 ±0. 032** 24.5 ±2. 6** 20.7 ±1.9** 低剂量组 1.5 91.31 ±11.49* 0.241 ±0.045* 28.1 ±1. 9* 25.2 ±2.3* 注：与模型组比较， *Ρ<0.05 **Ρ<0.01

表 4结果显示，与模型组比较，化合物（Π )高、低剂量组大鼠梗塞心肌面积、梗塞区重量、梗塞区占心室比以及梗塞区占全心比均明显降低（分别？<0.01和？<0.05)，且呈量效关系，说明本发明新化合物伪原纤细皂苷 ( Π )具有明显减轻心肌梗塞程度，縮小梗塞面积，减轻梗塞区重量，对心肌缺血有明显的保护作用。

上述药效试验说明，本发明药物组合物中的新化合物伪原纤细皂苷（Π )不仅仅是新的发现，且实验充分证明该新化合物具有药效，可单独用于制剂使用，药效明确。

试验例 2 本发明药物组合物治疗心绞痛, 对血脂、血小板聚集功能的影响临床共观察胸痹（心绞痛）患者 1084例患者，采用随机、对照、双盲法。随机分别给与 Al、 Α2 、 A3、 Α4、复方丹参片或硝酸异山梨酯。

从性别、年龄、病程、合并症等几个方面，对参加服用药物的病例，进行了均衡性 (可比性）检验。检验结果表明 Al、 Α2 、 A3、 Α4胶囊组和复方丹参片组与硝酸异山梨酯组病人之间在性别、年龄、病程和合并症方面没有显著差异，具有可比性。

Al、 Α2 、 A3、 A4、 B、 C六药均装入胶囊，外观一致。五组药物均口服，每次 1 粒，每天 3次，五药均以 8周为一疗程。在服上述六种药物期间，病人停用一切对冠脉血流、血脂及血压有影响的药物。在病情急需时，可临时加用，一旦病情好转则停药，并记录用药量。

最后揭盲： Al、 A2 、 A3为实施例 1、 2、 3组合物按实施例 6的方法制得胶囊， A4为老工艺组合物按实施例 6的方法制得胶囊， Al、 A2 、 A3、 A4每粒胶囊中总皂苷含量相同，剂量每次 200mg，每天 3次； B为复方丹参片，剂量每次 3片，每天 3次； C为硝酸异山梨酯，剂量每次 5 mg，每天 3次。

接受治疗者用药前停用对冠性病有效的药物 3天，进行血、尿常规，肝、肾功能，血脂分析，静息心电图和负荷试验。疗程结束，全部复查以上各项指标。

治疗期间停用降压、降脂、扩张冠状动脉药物，仅对心绞痛发作频繁或严重心率失常患者临时给以硝酸甘油类药物，并记录停减量。

疗效评定标准：按 1979年全国中西医结合防治冠心病、心绞痛心律失常研究座谈会修订的《冠心病心绞痛及心电图疗效评定标准》进行评定。

结果见表 5、表 6:

表 5 五组药物对心绞痛疗效的比较

组别总例数显效例数 % 有效例数％无效例数 % 总有效％

A1组 178 72 40.4 86 48.3 20 10.1 89.9

A2组 179 74 41.3 88 49.2 17 9.5 90.5

A3组 178 71 39.9 90 50.6 17 9.6 90.4

A4组 258 99 38.4 117 45.3 42 16.3 83.7 复方丹参片 123 34 27.6 44 35.8 45 36.6 63.4 硝酸异山梨酯 168 37 22.0 80 47.6 51 30.4 69.6 经 Ridit分析， Al、 A2、 A3组分别与 B组、 Al、 A2、 A3组分别与 C组比较，均 Ρ<0.01。 χ²分析比较 Al、 Α2、 A3组分别和 Β组显效率， Ρ<0.05; Al、 Α2、 A3组分别组和 C组显效率比较， Ρ<0.01。表明实施例 1、 2、 3的本发明组合物胶囊对心绞痛的疗效均优于复方丹参片（Β)和硝酸异山梨酯（C)。对缓解心绞痛症状总有效率为 89.9 %、 90.5%、 90.4%, 疗效确切，即证明通过控制三个成分，达到了有效、稳定的药效。

用本发明的制备方法与常规方法相比，成本降低 35%以上，收率提供 13%，在相同原料用量，经 258例临床观察，采用本发明药物药效提高 5%以上。

对心肌缺血的疗效 8周疗程，本发明药物组合物对心肌缺血疗效的比较，见表 6。五组药物对心肌缺血疗效的比较

组别总例数显效例数 % 有效例数 % 无效例数％总有效％

A1组 132 41 31.1 31 23.5 60 45.4 55.5

A2组 132 42 31.8 32 24.2 58 43.9 56.0

A3组 131 41 31.1 31 23.7 59 45.0 54.8

A4组 258 76 29.4 58 22.5 124 48.1 51.9 复方丹参片 57 10 17.5 12 21.1 35 61.4 38.6 硝酸异山梨酯 85 25 29.4 20 23.5 38 44.7 52.9 经 Ridit分析， Al、 A2、 A3组分别与硝酸异山梨酯组对心肌缺血的疗效无显著性差异（均 P>0.05)、但 Al、 A2、 A3组优于复方丹参片，均 /»<0.01。 χ²分析比较 Al、 A2、 A3组显效率分别优于复方丹参片， P<0.05_; Al、 A2、 A3组显效率分别与硝酸异山梨酯无显著差异，均 P>0.05。表明实施例 1、 2、 3的本发明组合物胶囊对心绞痛的疗效均优于复方丹参片（B)，与硝酸异山梨酯（C) 等效。对静息心电图 ST-T段总有效率为 55.5% 6.0% 54.8% , 疗效确切，即证明通过控制三个成分，达到了有效、稳气胸心乏头头、 5 、

定的药效痛悸短力暈闷。本发明组合物疗效比按老工艺提取的组合物疗效提高 5%以上。

对血脂的作用治疗前有高胆固醇血症者 164例，高甘油三脂血症 162例，治疗后高胆固醇患者中有 78例恢复正常，高甘油三脂患者中有 87例恢复正常。血胆固醇由治疗前 6.8±l.lmmol/L降至治疗后 6.3±l.lmmol/L, 血甘油三脂由治疗前 2.4±0.8mmol/L降至治疗后 1.9±0.7mmol/L，经 t检验，差别有非常显著意义（P<0.01)。

对血小板聚集功能的影响该药对二磷腺苷（ADP)和肾上腺素诱导的血小板聚集均有明显影响， ADP使聚集率有治疗前 68%±15%降至治疗后 60%±15%，肾上腺素使聚集率由治疗前 73%±15%降至治疗后 64%±12%，经经 t检验，差别有非常显著意义（P <0.01)。

本发明药物组合物对冠心病人临床症状改善：

表 7 本发明药物组合物胶囊治疗前后主要症状改变总例数显效有效无效加重显效率(％) ~~总有效率(％)

244 12 212 12 0 46 87

225 23 193 31 1 55 86

263 10( '4 203 59 1 40 77

不良反应本组 826例在服药期间有头晕 5例，胃腹部不适 9例，头痛 2例，面部发热 1例，均不影响治疗。治疗前后所作血、尿常规，肝、肾功能结果均在正常范围内。

通过上述制备工艺、结构测定、定量控制及药效学试验说明，本发明药物组合物中的三种化合物伪原薯蓣皂苷（ I )、伪原纤细皂苷（ Π )、薯蓣皂苷 (ΙΠ) 同时进行控制, 有效的控制质量，提高药效及药物的稳定性，药物服用剂量小，使用方便。

参者 X故

1 . P. K. AGRAWAL, D. C. JAIN, R. K. GUPTA, et al. CARBON-13 NMR SPECTROSCOPY OF STEROIDAL SAPOGENINS AND STEROIDAL SAPONINS. Phytochemistry, 1985， 24 (11): 2479-2496.

2. 徐成基. 中国薯蓣资源甾体激素药源植物的研究与开发. 四川科学技术出版社，2000.

3. Mei Dong et al TWO novel furostanol saponins from the rhizomes of Dioscorea panthaica Prain et Burldll and their cytotoxic activity. Tetrahedron, 2001， 57, 501-506.

4. Zhou Zhong Liang, Rita Aquino, Francesco et al. Oligofurostanosides from Asparagus cochinchinensis. Plant medica. 1988, 50 (4): 344-346.

5.董梅，吴立军，陈泉等。黄山药中甾体皂苷的分离与鉴定。药学学报， 2001, 36(1): 42-45.

6.都述虎，刘文英，付铁军等。穿龙薯蓣总皂苷中甾体皂苷的分离与鉴定。药学学报, 2002, 37 (4): 267-270.

Claims

权利要求书

1、一种甾体皂苷药物组合物，其特征在于：

它含有通式 A和 /或通式 B的呋甾烷醇甾体皂苷，通式 C螺甾垸醇类甾体皂苷，其重量配比为：呋甾烷醇甾体皂苷 5— 25份、螺甾垸醇类甾体皂苷 1一 10份，

C

其中，通式 A 中，呋甾烷醇甾体皂苷为：

、 H、 "§^LC

;

- _glc ^ha -glc ^glC

通式 B中： = 4 rha 或 _rh_a ; 通式 C中，

。

2、根据权利要求 1所述甾体皂苷药物组合物，其特征在于：含有下列化合物：通式 A中，当

时，为伪原纤

时，为原纤细皂苷 ( V ); 通式 C中，（_m)，

其中，伪原薯蓣皂苷（ I )和 /或原薯蓣皂苷（W) 5—22份、伪原纤细皂苷（Π )和 /或原纤细皂苷 ( V ) 1一5份、薯蓣皂苷 (ΠΙ) 1—8份。

3、根据权利要求 2所述的甾体皂苷药物组合物，其特征在于：含有伪原薯蓣皂苷（ I ) 5—20份、伪原纤细皂苷（Π ) 1—3份、薯蓣皂苷 (ΙΠ) 1—5份。

4、根据权利要求 3所述的甾体皂苷药物组合物，其特征在于：含有伪原薯蓣皂苷（ I ) 12—18份、伪原纤细皂苷（Π ) 1份、薯蓣皂苷（EI) 1.2—2.5份。

5、根据权利要求 1-4任一项所述的甾体阜苷药物组合物，其特征在于：所述的甾体皂苷来源于薯蓣科薯蓣属植物黄山药 Dioscorea panthaica Prain et Burkil 穿龙薯蓣 Dioscorea nipponica Makino的提取物。

6、根据权利要求 5所述的甾体皂苷药物组合物，其特征在于：所述提取物中，甾体总皂苷以薯蓣皂苷计，其含量不少于 65%(_W/w)。

7、根据权利要求 5或 6所述的甾体皂苷药物组合物，其特征在于：所述的提取物中含有伪原薯蓣皂苷 ( I )、伪原纤细皂苷（Π )、薯蓣皂苷（m)三种甾体皂苷的含量之和不少于甾体总皂苷的 50%w/w。

8、根据权利要求 5、 6或 7所述的甾体皂苷药物组合物，其特征在于：所述的提取物具有如图 1所示的 HPLC指紋图谱，其中，指紋图谱的特征峰分别为：伪原薯蓣阜苷 ( I ) 保留时间： 28.27min; 伪原纤细皂苷（II )保留时间： 29.5min; 薯蓣皂苷（ΠΙ)保留时间： 57.10min 。

色谱条件：色谱柱： AUtima C18 4.6X250_mm，5um，梯度洗脱，蒸发光散射检测器检测，漂移管温度 100°C，气体流速 2.0L/min。

9、根据权利要求 5〜8任一项所述的甾体皂苷药物组合物，其特征在于：所述的提取物是由如下方法制备：

d、将 c步骤的浓缩液加 60—95%醇醇沉，过滤，收集滤液，浓缩，干燥，即得。

10、根据权利要求 9所述的甾体皂苷药物组合物，其特征在于：所述的提取物的制备方法步骤 b中：当提取液含甲醇、乙醇、正丁醇或其它低脂肪醇时，先减压浓縮，再冷却过滤。

11、根据权利要求 1-10任一项所述的甾体皂苷药物组合物，其特征在于：它是由所述的甾体皂苷或黄山药、穿山龙提取物为活性成分，加上药学上可接受的辅料或辅料性成分制备而成的制剂。

12、根据权利要求 11所述的甾体皂苷药物组合物，其特征在于：所述的制剂是：片剂、胶囊剂、软胶囊、颗粒剂、口服液、滴丸、注射剂。

13、一种制备权利要求 1-12任一项所述的药物组合物的方法，它包括如下步骤：称取含有通式 A和 /或通式 B的呋甾烷醇甾体皂苷，通式 C螺甾醇类甾体皂苷，重量配比为：呋甾垸醇甾体皂苷 5—25份、螺甾垸醇类甾体皂苷 1一5份；混合，加入药学上可接受的辅料或辅助性成分制备成药学上常用的制剂。

14、一种制备权利要求 1-12任一项所述的药物组合物的制备方法，它包括如下步骤： a、以中药黄山药、穿山龙或新鲜采集的黄山药、穿山龙的根茎为原料，经切片或粉碎后，加水、甲醇、乙醇、正丁醇或其它低脂肪醇中的一种或任意两种或者多种溶剂以任意比例组成的混合溶液为溶媒提取，溶媒量为原料的 15— 25倍；

b、将 a步骤制备的提取液冷却过滤、滤液通过吸附树脂柱、弃去流出液，用水洗至流出液至无色，弃去水洗液； c、将 b步骤的水洗后的吸附树脂柱用乙醇、甲醇、丙酮、 50%〜90%乙醇、 30—80 %含水甲醇或 60— 95%含水丙酮中含水甲醇或含水丙酮中的一种或多种洗脱，收集洗脱液，浓缩；

d、将 c步骤的浓缩液加 60— 95%醇醇沉，过滤，收集滤液；

15、根据权利要求 14所述的药物组合物的制备方法，其特征在于：步骤 b中，当提取液含甲醇、乙醇、正丁醇或其它低脂肪醇时，先减压浓缩，再冷却过滤。

16、权利要求 1-12任一项所述的药物组合物在制备治疗和预防心脑血管疾病药物中的应用。

17、权利要求 16所述的用途，其特征在于：在制备治疗和预防治疗冠心病、心绞痛、心肌梗死、心律失常、高血脂或缺血性脑血管病的药物中的应用。