WO2006042950A2 - Utilisation de derives de pyrrolo- pyraz ines pour le traitement de la mucoviscidose - Google Patents

Utilisation de derives de pyrrolo- pyraz ines pour le traitement de la mucoviscidose Download PDF

Info

Publication number
WO2006042950A2
WO2006042950A2 PCT/FR2005/002558 FR2005002558W WO2006042950A2 WO 2006042950 A2 WO2006042950 A2 WO 2006042950A2 FR 2005002558 W FR2005002558 W FR 2005002558W WO 2006042950 A2 WO2006042950 A2 WO 2006042950A2
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
alkyl
cells
treatment
cftr
protein
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Ceased
Application number
PCT/FR2005/002558
Other languages
English (en)
Other versions
WO2006042950A3 (fr
Inventor
Frédéric BECQ
Laurent Meijer
Yvette Mettey
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Centre National de la Recherche Scientifique CNRS
Universite de Poitiers
Original Assignee
Centre National de la Recherche Scientifique CNRS
Universite de Poitiers
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Centre National de la Recherche Scientifique CNRS, Universite de Poitiers filed Critical Centre National de la Recherche Scientifique CNRS
Priority to DE602005025383T priority Critical patent/DE602005025383D1/de
Priority to CA002583363A priority patent/CA2583363A1/fr
Priority to AT05804722T priority patent/ATE491454T1/de
Priority to EP05804722A priority patent/EP1807084B1/fr
Priority to US11/665,294 priority patent/US20090048260A1/en
Publication of WO2006042950A2 publication Critical patent/WO2006042950A2/fr
Publication of WO2006042950A3 publication Critical patent/WO2006042950A3/fr
Anticipated expiration legal-status Critical
Ceased legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/4985—Pyrazines or piperazines ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/18—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for pancreatic disorders, e.g. pancreatic enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]

Definitions

  • the invention relates to the use of pyrrolopyrazine derivatives for the manufacture of drugs capable of restoring the addressing of proteins of the endoplasmic reticulum to plasma membranes. It is particularly aimed at the treatment of cystic fibrosis.
  • Cystic fibrosis (CF: Cystic Fibrosis) is the most common recessive genetic, autosomal, lethal disease in European and American populations. '. The CF gene (locus 7q31) encodes the transmembrane protein called CFTR (Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator).
  • Mutations in the CF gene cause abnormal transport of water and electrolytes across cell membranes of various organs such as the lungs, sweat glands, intestine and exocrine pancreas. Although it 'is more than 1000 mutations in the CFTR protein, the most frequent mutation (70% of patients) is the deletion of a phenylalanine in the NBFl domain at position 508 (delF508). The main cause of death of CF patients is related to this deletion and leads to infections or pulmonary insufficiency caused by an increase in mucus viscosity. This viscosity causes occlusion of the airways and promotes infections Ie 1 S opportunistic bacteria.
  • the CFTR protein is a 1480 amino acid glycoprotein belonging to the superfamily of ABC membrane transporters.
  • CFTR is a chloride channel located in the apical plasma membrane of pulmonary epithelial cells in healthy individuals.
  • CFTR is responsible for the trans-epithelial transport of water and water . electrolytes and allows in an individual healthy hydration of lung airways.
  • the hydration of the pulmonary airways is no longer functional in this case.
  • the Delf-508 deletion disrupts the folding of NBFl domain and prevents the complete maturation of the protein that is' therefore degraded very early during its biosynthesis.
  • the delF508 protein reaches the membrane, it functions as a chloride channel.
  • One of the keys to a treatment of this disease therefore consists in a re-addressing of delF508 to the plasma membrane of the cells at which the delF508 transport activity can be stimulated by physiological agonists.
  • proliferative were capable of activating the CFTR wild 'and mutated forms a membrane and cause re-l ⁇ calisation of delF508-CFTR protein and its restaurant' transport capacity trans-membrane. In general, these derivatives are capable of restoring a defect in the targeting of proteins in the cells.
  • the invention therefore aims to provide a new use of these derivatives to manufacture drugs for the treatment of cystic fibrosis and diseases related to a lack of addressing of proteins in cells.
  • the derivatives used in accordance with the invention correspond to formula (I): ' .
  • R2 and R3 are identical or different and represent H, C1-C6 alkyl, said alkyl being a 'straight or branched alkyl chain, where appropriate substituted, - R ⁇ is Ar aromatic ring or a cycloalkyl, where appropriate substituted, said cycloalkyl where appropriate substituted with an aryl group which may be: also-substituted,
  • CH 2 -CH CH 2 , CH 2 -cycloalkyl, CH 2 -Ar,
  • Z is H 'CH 3 .or.
  • R2 and R3 and / or Z and / or R7 are different from H.
  • Ar is preferably phenyl, naphthyl, furyl, thienyl, pyridyl, cyclopropyl phenyl, phenyl dioxolyl.
  • Cycloalkyl is a C3-C6 cycloalkyl.
  • substitutions of the alkyl group, the aromatic ring or cycloalkyl are chosen from the group comprising one or more halogens (F, Cl, Br, I, CF 3 ), OH, NH 2 , N (H, alkyl), N (alkyl ) 2, O-alkyl, COOH, COO-alkyl, CONH 2, CON (H, alkyl), CON (alkyl) 2, - NHCONH 2, 'NHCON (H, alkyl),' NHCON (alkyl) 2, N ( alkyl) CONH 2 , N (alkyl) CON (H, alkyl), N (alkyl) CON (alkyl) 2 , alkoxy, CN, O-SO 2 -NH 2 , O-SO 2 -N (H, alkyl), -O-SO 2 -N (alkyl) 2 , SH, S-alkyl.
  • One or more substituents may be present.
  • "Alkyl” is a C
  • Alkoxy includes a C1-C6 alkyl group.
  • Alk is a C1-C6 alkylene group, n is 1-6, and "hal.” is F, Cl, Br, I or CF 3 .
  • Said pyrrolo [2,3-b] pyrazines also referred to as aloisines below, are capable of restoring the addressing of the CFTR protein to the plasma membranes of the cells and therefore constitute compounds of great interest for the treatment of pathologies related to such addressing defect problems.
  • Preferred pyrrolopyrazine derivatives have the formula (II):.
  • Z is H or CH 3 . . .. In a preferred group, Z and / or. R7 are different from H.
  • a very particularly preferred compound corresponds to aloisine A corresponding to formula (III)
  • These vehicles can be solid or liquid.
  • the medicaments prepared as' form of capsules, tablets, dragees, capsules, pills, drops, syrups and the like.
  • Such drugs may contain from 1 to 100 mg of active ingredient per unit.
  • the drugs are in the form of sterile or sterilizable solutions.
  • They can also be in the form of emulsions or suspensions.
  • the medicaments of the invention are more particularly administered in the form of aerosols.
  • the doses per unit dose may vary from 1 to 50 mg of active ingredient.
  • the daily dosage is chosen so as to obtain a final concentration of at most 100 ⁇ M pyrrolo-pyrazine derivative in the blood of the treated patient.
  • FIGS. 1 to 7 which represent, respectively:
  • FIG. 4 shows the location of delF508 in CF patients and its re-addressing to the membrane after treatment with aloisine A;
  • FIGS. 6A to 6C the immunolocalization of delF508-CFTR after 2 h of treatment with the . aloisine A>
  • CHO-WT Cells CHO (Chinese Hamster Ovary) cells are fibroblasts that have been transfected with wild-type CFTR gene (CFTR-WT). These cells will therefore overexpress • CFTR.
  • Culture medium Middle MEM alpha (GIBCO) + 7% of. fetal calf serum + 0.5% penicillin / streptomycin + 100 ⁇ M methotrexate (amethopterin, Sigma). . '
  • CF15 cells are human nasal epithelial cells that express the ⁇ F508-CFTR gene.
  • Culture medium DMEM + HAM F12 + 10% FCS + 0.6% penicillin / streptomycin + 1 growth factors (insulin 5 mcg / ml Transferrin 5 ug / ml, Epinephrine 5.5 microM, adenine 0, 18 mM, EGF, 10 ng / ml, 2 nM T3, 1.1 ⁇ M hydrocortisone).
  • Calu-3 'cells Calu-3 cells are human lung epithelial cells that express the wild-type CFTR gene.
  • Immunolabeling allows to visualize the cellular localization of the CFTR protein by means of an anti-CFTR primary antibody (Ab). then a secondary antibody anti-primary antibody labeled with the fluorophore Cy3.
  • the cells are seeded on slides in the appropriate culture medium. 3 washings with TBS (NaCl: 157 mM, Tris base: 20 ⁇ M, pH 7.4) of 5 min each are carried out. The cells are then fixed by adding TBS-paraformaldehyde (3.%) for 20 min. After 3 ' TBS washes (5.min), the cells are incubated with 0.1% TBS-triton (10 min) which allows for the formation of holes in the cell membrane, and then 3 TBS washes are again performed . performed before the cells were placed with TBS-BSA 0.5% -saponin 0.05% for 1 h.
  • TBS NaCl: 157 mM, Tris base: 20 ⁇ M, pH 7.4
  • the cells are then incubated with the CFTR anti-C terminal primary antibody (2 ⁇ g / ml) for 1 h.
  • 3 washes with TBS-BSA-Saponin '5 minutes each are carried out before one incubation with the secondary antibody GAM-cy3 (1/400) for 1 h.
  • the nuclei are marked by incubation with Topro3
  • Rinsing with efflux medium (NaCl: 136.6 mM, KCl: 5.4 mM, KH 2 PO 4 : 0.3 mM, NaH 2 PO 4 : 0.3 mM, NaHCO 3 : 4, 2 mM, CaCl 2 : l, -3 mM, MgCl 2 : 0.5 mM, MgSO 4 : 0.4 mM, HEPES: 10 mM, D-glucose: 5.6 mM) are carried out in order to eliminate the cells deaths that release the radioactivity anarchically.
  • the cells are incubated with 500 .mu.l of load (1 .mu.Ci / ml of 125 INa) 'for 30 min to -the CHO-WT or 1 hr for CF15 and Calu-3. Iodide equilibrates on both sides of the cell membrane.
  • the robot MultiPROBE, Packard performs the steps
  • the charge medium is rinsed with efflux medium to eliminate the extracellular radioactivity.
  • the supernatant is collected every minute in hemolysis tubes and the medium is replaced by an equivalent volume (500 ⁇ l).
  • Samples of the first 3 minutes . do not undergo the addition of drugs, they allow to obtain a line of. stable base, characterizing the passive output, ions I.
  • the following 7 samples are obtained in the presence of the molecule to be tested.
  • cells were lysed by adding 500 .mu.l of NaOH (0,1.N) / 0.1% SDS (30 min), and, • the radioactivity remained within the cell can be determined.
  • the radioactivity present in the hemolysis tubes is counted in counts per minute (cpm) thanks to a gamma counter (Cobra II, Packard).
  • the MTT toxicity test is a colorimetric test based on the ability of mitochondrial dehydrogenases to metabolize MTT (yellow tetrazolium salt) to formazan.
  • 96-well plates with the presence of the agent to be tested for 2 hours. 3 controls are carried out: 100% living cells: cells without agent. ; 0% living cells: cells left in the open air; white: medium without cell.
  • the cells are rinsed with RPMI medium without phenol red so that the color of the medium does not interfere with the absorbance measurements. . They are then incubated for 4 h with 100 ⁇ l of RPMI solution supplemented with MTT (0.5 mg / ml). The medium is then removed, the addition of 100 .mu.l of DMSO makes it possible to solubilize the converted dye (formazan). Absorbance is measured spectrophotometrically at 570 nm (purple); 630 nm (noise of fo.nd).
  • the mutant G551D and delF508 Two mutated forms of CFTR have also been tested. This is the mutant G551D and delF508.
  • delF508-CFTR was' - achieved by combining. des-pharmacological approaches, cellular imaging, electrophysiological and biochemical tests on cells • CF15 human lung axethéliaies homozygous for the deletion delF508.
  • Figure 3A shows that after a treatment of 2 h with 100 ⁇ M alolsin A delF508-CFTR 'activity is restored.
  • the delF50.8 protein is not membrane-bound and there is no efflux of iodide stimulated by the cocktail (Forskolin 10 ⁇ M, Genistein 30 ⁇ M).
  • the EC 50 concentration of the molecule that gives 50% of the maximal efficacy of aloisine A was determined at 50 ⁇ M
  • delF508 is
  • 100 ⁇ M aloisine A allows to redirect the protein " delF508 to the membrane as shown in Figure 4.” .
  • CF15 is also shown in the figures . 6A to ⁇ C which respectively show, Figure 6A: confocal visualization of CFTR-delF508 in CF15 cells with mouse anti-CFTR monoclonal antibody; Figure 6B: CF15 cells treated 24 h at 27 0 C, used as a positive control; FIG. 6C: CF15 cells treated for 2 h with aloisine A (100 ⁇ M). .
  • Figure 7 depicts the activation of delF508-CFTR in CF15 cells after treatment with aloisine A.
  • CF15 cells having undergone a treatment for 24 h at 27 ° C. were used as a positive control and untreated CF15 cells as a negative control (37 ° C.).
  • the table below gives a summary of competition experiments performed by the iodide efflux technique between aloisine A and the ER chaperone machinery.

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)

Abstract

L'invention a pour objet l'utilisation de dérivés de pyrrolo-pyrazines pour fabriquer des médicaments pour le traitement de la mucoviscidose et de maladies liées à un défaut d'adressage des protéines dans les cellules, ces dérivés répondant à la formule (I): dans laquelle - R2 et R3 sont identiques ou différents et représentent H, C1-C6 alkyl, ledit alkyl étant une chaîne alkyle droite ou ramifiée, le cas échéant substituée, - R6 est un cycle aromatique Ar ou un cycloalkyle, le cas échéant substitué, ledit cycloalkyle étant le cas échéant substitué par un groupe aryle qui peut être également substitué, - R7 est H, C1-C6 alkyl, (alk.)<SUB>n</SUB>-hal., CH<SUB>2</SUB>-CH = CH<SUB>2</SUB>, CH<SUB>2</SUB>-cycloalkyl, CH<SUB>2</SUB>-Ar, - Z est H ou CH<SUB>3</SUB>.

Description

"UTILISATION DE DERIVES DE PYRROLO-PYRAZINES POUR LA
FABRICATION DE .MEDICAMENTS POUR LE TRAITEMENT DE LA
MUCOVISCIDOSE ET DE MALADIES LIEES A UN DEFAUT D'ADRESSAGE DES
PROTEINES DANS LES CELLULES"
L'invention vise l'utilisation de dérivés de pyrrolo- pyrazines pour fabriquer des médicaments capables de restaurer l'adressage, de protéines du r.éticulum endoplasmique vers les membranes plasmiques . Elle vise tout particulièrement le traitement de la mucoviscidose. • La mucoviscidose (CF : Cystic Fibrosis) est la maladie génétique récessive, autosomique, létale la plus répandue dans les populations européennes et nσrd américaines. '.Le gène CF (locus 7q31) code pour la protéine trans-membranaire nommée CFTR (pour Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator) . Des mutations du gène CF provoquent un transport anormal .d'eau et d' électrolytes à travers les membranes cellulaires de divers organes comme les poumons, les glandes sudoripares, l'intestin et le pancréas exocrine. Bien qu'il' existe plus de 1000 mutations de la protéine CFTR, la mutation la plus fréquente (70.% des patients) est la délétion d'une phénylalanine dans le domaine NBFl en position 508 (delF508) . La principale cause de mortalité des patients CF est liée à cette délétion et conduit à- des infections .ou à une insuffisance pulmonaire provoquées par une augmentation de la viscosité .du mucus. Cette viscosité entraîne l'occlusion des voies respiratoires et favorise les infections par Ie1S bactéries opportunistes. Une aggravation est de plus constatée au niveau digestif et notamment pancréatique (patient pancréatique-insuffisant) . La protéine CFTR est une glycoprotéine de 1480 acides- aminés, appartenant à la superfamille des transporteurs membranaires ABC. CFTR est un canal chlorure localisé dans la membrane plasmique apicale des cellules épithéliales pulmonaires chez les individus sains.
CFTR est responsable du transport trans-épithélial d'eau et d! électrolytes et permet chez un 'individu sain l'hydratation des voies aériennes pulmonaires.
Chez les patients CF, homozygotes pour la mutation' delF508, et plus généralement pour les mutants de classe II
(mutations produisant une protéine absente de la membrane plasmique) , cette protéine est absente des membranes plasmiques du fait d'un mauvais adressage de la protéine qui est retenue dans le réticulum endoplasmique (RE) .
L'hydratation des voies' aériennes pulmonaires n'est plus fonctionnelle dans ce cas. La délétion delF-508 perturbe le repliement du domaine NBFl et empêche la maturation complète de la protéine qui est' donc dégradée très tôt au cours de sa biosynthèse. Cependant, si la protéine delF508 atteint la membrane, elle fonctionne comme un canal chlorure.
Une des clés d'un traitement de cette maladie consiste donc en un ré-adressage de delF508 vers la membrane plasmique des cellules au niveau de laquelle l'activité de transport de delF508 peut être stimulée par des agonistes physiologiques.
De manière surprenante, les inventeurs ont mis en évidence que des dérivés notamment connus pour leur effet anti-
• prolifératif étaient capables d'activer le CFTR sauvage' et des formes mutées et de provoquer une re-lόcalisation membranaire de la protéine delF508-CFTR restaurant ainsi sa' capacité de transport trans-membranaire. De manière générale ces dérivés sont capables de restaurer un défaut d' adressage des protéines dans les cellules.
De plus, ces dérivés présentent l'intérêt d'une innocuité élevée.
L'invention à donc pour but de fournir une- nouvelle utilisation de ces dérivés pour fabriquer des médicaments pour le traitement de la mucoviscidose et de maladies liées à un défaut d'adressage des protéines dans les cellules. Les dérivés utilisés conformément à 1 ' invention répondent à la formule (I) : . ' .
Figure imgf000003_0001
• - Z (D ' dans laquelle
R2 et R3 sont identiques ou différents et représentent H, C1-C6 alkyl, ledit alkyl étant une ' chaîne alkyle droite ou ramifiée, le cas échéant substituée, - Rβ est un cycle aromatique Ar ou un cycloalkyle, le cas échéant substitué, ledit cycloalkyle étant le cas échéant substitué par un groupe aryle qui peut être : également- substitué,
- ' R7 est H, C1-C6 alkyl, (alk. )n-hal. , CH2-CH = CH2, CH2-cycloalkyl, CH2-Ar,
Z est H'.ou CH3.
De préférence, R2 et R3, et/ou Z et/ou R7 sont' différents de H.
Ar est de préférence un phényl, naphtyl, furyl, thiényl, pyridyl, cyclopropyl phényl, phényl dioxolyl. ."Cycloalkyl" est un C3-C6 cycloalkyl.
Les substitutions' du groupe alkyl, du cycle aromatique ou cycloalkyl sont choisies dans le groupe comprenant un ou plusieurs halogènes (F, Cl, Br, I, CF3), OH, NH2, N(H, alkyl), N (alkyl) 2, O-alkyl, COOH, COO-alkyl, CONH2, CON (H, alkyl) , CON (alkyl) 2, - NHCONH2, ' NHCON (H, alkyl) , ' NHCON (alkyl) 2, N (alkyl) CONH2, N (alkyl) CON (H, alkyl) , N (alkyl) CON (alkyl) 2, alkoxy, CN, 0-SO2-NH2, 0-SO2-N(H,alkyl) ,-0-SO2-N (alkyl)2, SH,S- alkyl. Un ou plusieurs substituants peuvent être présents. "Alkyl" est un C1-C6 alkyl et comprend les isomères..
1I
"Alkoxy" comprend un groupe C1-C6 alkyl.
"AIk." est un groupe C1-C6 alkylène, n est 1-6, et "hal." est F, Cl, Br, I or CF3.
Lesdits pyrrolo [2,3-b] pyrazines, également désignés par aloïsines ci-après-, sont capables de restaurer l'adressage de la protéine CFTR vers les membranes plasmiques des cellules et constituent donc des composés de .grand intérêt pour le traitement de pathologies liées à de tels problèmes de défaut d'adressage-.
L •
Comme illustré par les exemples, ils sont particulièrement efficaces pour provoquer la re-localisation de la protéine delF508-CFTR .dans ' la mucoviscidose où cette protéine est retenue dans le réticμlum endoplasmique, et de restaurer ainsi sa capacité de transfert trans-membranaire.
Des dérivés préférés de pyrrolo-pyrazines présentent la formule (II) : ' .
Figure imgf000005_0001
dans laquelle ' . •
- le groupe phényl en position 6 est substitué par .un, deux ou trois substituants R choisis dans le groupe comprenant :
- H, -OH, alkyl, -0 alkyl, hal. , -NH2, -N(H,alkyl) , - N(alkyl)2, -0-SO2-NH2,' -0-SO2-N(H, alkyl), -0-SO2-N(alkyl)2, -
COOH, -COO-alkyl, CONH2, -CON(H,alkyl) , -CON(alkyl)2,
- R7 est H, alkyl, (alk.)n hal., -CH2-CH = CH2, (alk.)n- cycloalkyl, alk.-Ar, et • •
Z est H ou CH3. . .. Dans un groupe préféré, Z et/ou . R7 sont différents de H.
Un composé tout particulièrement préféré correspond à l'aloïsine A répondant à la formule (III)
RM39 (Aloisine A)
Figure imgf000005_0002
(III) Lors de l'élaboration des médicaments, . les ' principes actifs, utilisés en quantités thérapeutiquement efficaces, sont mélangés ' avec les véhicules pharmaceutiquement
. acceptables pour le mode d'administration choisi. Ces véhicules peuvent être solides ou liquides.
Ainsi pour une administration ' par voie orale, les médicaments préparés sous' forme de gélules, comprimés, dragées, capsules, pilules, gouttes, sirops et analogues. De tels médicaments peuvent renfermer de 1 à 100 mg de principe actif par unité.
Pour l'administration par voie injectable (intraveineuse, sous-cutanée, intramusculaire) , les médicaments se présentent sous forme de solutions stériles ou stérilisables.
Ils peuvent être également sous forme d'émulsions ou de suspensions .
Les médicaments de l'invention sont plus particulièrement administrés sous forme d'aérosols. - Les doses par unité de prise peuvent varier de 1 à 50 mg de principe actif. La posologie quotidienne est choisie de manière à obtenir une concentration finale d'au plus 100 μM en dérivé de pyrrolo-pyrazines dans le sang du patient traité.
D'autres caractéristiques et avantages de l'invention seront donnés dans les résultats rapportés ci-après afin • d'illustrer l'invention.
Dans ces exemples, il est fait référence aux figures 1 à 7 qui représentent, respectivement :
- les figures IA à ' IC, la formule. de l'aloïsine A, l'activation du canal chlorure CFTR par l'aloïsine A sur des cellules GHO (fig.lB) et sur des cellules épithéliales pulmonaires humaines Calu-3 (fig.lC) ;
- le figures 2A et 2B, l'activation par ' l'aloïsine A de la protéine G551D-CFTR dans les cellules- CHO (fig.-2A) et la protéine delF508 .dans les cellules épithéliales humaines pulmonaires de lignée CF15 (fig.2B) ; .
6
- les figures 3A et 3B, IΕC50 de l'aloïsine A à 50μM (fig.3A) et l'effet d'inhibiteurs de.CFTR sur 'l'activité de delF508 après traitement par l'.aloïsine A ; . .- la figure 4, la localisation de delF508 chez des patients CF et son re-adressage vers la membrane après traitement par l'aloïsine A ;
- les figures 5A et 5B, les tests de toxicité de l'aloïsine A sur des cellules CHO-WT après ' . incubation de 2 h (fig. 5A) et de 24 h (fig.5B),
- les figures 6A 'à 6C, l' immunolocalisation de delF508-CFTR après 2 h de traitement avec l'.aloïsine A>
- la figure 7, l' activation de delF508-CFTR ' dans les cellules CF15 après traitement avec l'aloïsine A. MATERIEL ET METHODES
Ml. Culture cellulaire . . '
Cellules CHO-WT : Les cellules CHO (Chinese Hamster Ovary) sont des fibroblastes qui .ont été transfectés avec le- gène du CFTR sauvage (CFTR-WT) . Ces cellules vont donc surexprimer • la protéine CFTR.
Milieu de culture : Milieu MEM alpha (GIBCO) + 7 % de. sérum de veau fœtal + 0,5 % de pénicilline/streptomycine + 100 μM de .méthotrexate (améthoptérine, Sigma) . . '
Cellules CF15 : Les cellules CF15 sont des cellules épithéliales humaines d'origine nasale qui expriment le gène ΔF508-CFTR.
Milieu de culture : Milieu DMEM + HAM F12 + 10 % de FCS + 0,6 % de pénicilline/streptomycine + facteurs de1 croissance (insuline 5 μg/ml, transferrine 5 μg/ml, épinéphrine 5,5 μM, adénine 0,18 mM, EGF . 10 ng/ml, T3 2 nM, hydrocortisone 1,1 μM) .
Cellules Calu-3' : Les cellules Calu-3 sont des cellules épithéliales humaines d'origine pulmonaire qui expriment le gène du CFTR sauvage.
Milieu de culture : Milieu DMEM/F12 avec glutamax + 7 % de sérum de veau fœtal + 1 % de pénicilline/streptomycine.' M2. Immanoiaarcpiage
L' immunomarquage permet de visualiser- la localisation cellulaire de la protéine CFTR grâce à un anticorps (Ac) .primaire anti-CFTR, . puis un anticorps secondaire anti- anticorps primaire marqué au fluorophore Cy3.
Les cellules sont préalablement ensemencées sur des lamelles dans, du milieu de culture approprié. 3 lavages au TBS (NaCl : 157 mM, Tris base : 20 μM, pH 7,4) de 5 min chacun sont effectués. Les cellules sont alors fixées par ajout de TBS-paraformaldéhyde (3.%) pendant 20 min. Après 3' lavages au TBS (5.min), les cellules sont incubées avec du TBS-triton 0,1 -% (10 min) qui permet la formation de trous dans la membrane cellulaire, puis 3 lavages au TBS sont à nouveau' effectués avant la mise en présence des cellules avec le TBS- BSA 0,5 %-saponine 0,05 % pendant 1 h. Les cellules sont ensuite, incubées avec l' anticorps primaire anti-C terminal CFTR (2 μg/ml) pendant 1 h. 3 lavages au TBS-BSA-saponine ' de 5 min chacun sont réalisés avant 1 ' incubation avec l'anticorps secondaire GAM-cy3 (1/400) pendant 1 h. Suite à 2 lavages au TBS de 5 min, les noyaux sont marqués par incubation au Topro3
(1/1000) pendant 5 min. Enfin, les lamelles peuvent être montées sur lame après 3 derniers lavages au TBS de 5 min. Les lames sont observées au microscope confocal (Bio-Rad) grâce à une excitation au laser aux longueurs d'onde appropriées. Afin de différencier le marquage entre Cy3 et Topro3 la couleur de fluorescence de Topro3 a été changée en bleu (couleur des noyaux) . . •
M3. Efflvix de radiotraceurs Les mesures de transport d'ions chlorure dans les .cellules ont été réalisées à l'aide de la technique des efflux d'iodure radioactif (Bec.q et al., 1999 ; .Dormer et al., 2001) . Le traceμr (125I) est incorporé dans le milieu intracellulaire. Puis, la quantité de radiotraceur qui sort de la- cellule est comptée après l'ajout de différents agents pharmacolαgiques.' . L'iodure' est utilisé comme un traceur du transport d'ions chlorure. 125I a de plus l'avantage d'avoir une courte durée de vie comparée à' celle d'autres marqueurs comme 35Cl (1/2 vie respective : 30 jours et 300 000 ans) . Les cellules sont mises en culture sur des plaques 24 puits dans un milieu adéquat. 2. rinçages avec du -milieu d'efflux (NaCl : 136,6 mM, KCl : 5,4 mM, KH2PO4 : 0,3 mM, NaH2PO4 : 0,3 mM, NaHCO3 : 4,2 mM, CaCl2 : l,-3 mM, MgCl2 : 0,5 mM, MgSO4 : 0,4 mM, HEPES : 10 mM, D-glucose : 5,6 mM) sont effectués afin d'éliminer les cellules mortes qui relarguent la radioactivité de façon anarchique. Puis, les cellules .sont mises à incuber avec 500 μl de charge (1 μCi/ml de 125INa)' pendant 30 min pour -les CHO-WT ou 1 h pour les CF15 et Calu-3. L'iodure s'équilibre de part et d'autre de la membrane cellulaire. Le robot (MultiPROBE, Packard) réalise les étapes
-suivantes : le milieu de charge est rincé avec du milieu d'efflux pour éliminer la radioactivité -extracellulaire. Le surnageant est collecté toutes les minutes dans des tubes à hémolyse et le milieu est remplacé par un volume équivalent (500 μl) . Les prélèvements des 3 premières minutes . ne subissent pas l'addition de drogue, ils permettent d'obtenir une ligne de. base stable, caractérisant la sortie passive, des ions I. Les 7 prélèvements suivants sont obtenus en présence de la molécule à tester. A la fin de l'expérience, les cellules sont lysées par ajout de 500 μl de NaOH (0,1.N) /0,1 % SDS (30 min), ainsi, la • radioactivité restée à l'intérieur de la cellule peut être déterminée. La radioactivité présente dans les tubes à hémolyse est comptée en coups par minute (cpm) grâce à un compteur gamma (Cobra II, Packard) . Les résultats en cpm sont- exprimés sous forme de vitesse de sortie d'iodure radioactif (R) d'après la formule suivante : R (min"1) = [In (125I tx) -In (125I t2) ] / (tx-t2) avec 125I ti : cpm au temps tx ;. 125I t2 : cpm au temps t2. Ce flux d'iodure est représenté sous forme de courbe. Afin de quantifier la sortie d'iodure due à l'administration de la molécule testée, on calcule le- flux relatif suivant qui permet de s'affranchir du flux de base : Vitesse relative (min"1) =Rpic-Rbasal. Enfin,-, ces résultats sont normalisés pour pouvoir comparer l'effet des différentes drogues entre elles. Les résultats sont présentés sous la forme de moyenne +/- SEM. Le test statistique de Student est utilisé pour comparer l'effet des drogues aux contrôles (les valeurs correspondantes à P<0,01 sont- - considérées comme statistiquement significatives) . M4. Test de cytotox±c±té
Le test de toxicité au MTT est un test colorimétrique qui repose sur la capacité des déshydro.génases mitochondriales à - métabolisër le MTT (sel de tétrazolium jaune) en formazan
(pourpre) . • L'absorbance,- proportionnelle à la concentration de colorant converti/ peut . être alors mesurée par spectrophotométrie. Les cellules sont mises à incuber sur des
•plaques 96 puits eri présence de l'agent à tester pendant 2 h- 3 contrôles sont réalisés : 100 % cellules vivantes : cellules sans agent. ; 0 % cellules vivantes : cellules laissées à l'air libre ; blanc : milieu sans cellule. Les cellules sont rincées avec du milieu RPMI sans rouge de phénol pour que la couleur du milieu n'interfère pas dans les mesures de 1 'absorbance.. Puis, elles sont incubées pendant 4 h avec 100 μl de solution de RPMI supplémentée en MTT (0,5 mg/ml) . Le milieu est alors éliminé,, l'ajout de 100 μl de DMSO permet de solubiliser le colorant converti (formazan) . L'absorbance est mesurée par spectrophotométrie à 570 nm (pourpre)- ; 630 nm (bruit de fo.nd) . Afin de s'affranchir du bruit de fond, le calcul suivant est effectué : DOréeiie=Dθ570nm-Dθ630nm- Puis,- les résultats sont normalisés par rapport aux contrôles (100 % et 0 % de- cellules vivantes) et sont présentés sous forme de moyenne +/- SEM. RESULTATS
Rl. .L'aloxsine A active CFTR sauvage (wt) , G551D et delF508
Une première série d'expérimentations montre que' l'aloxsine A est capable d'activer le canal chlorure CFTR dans les cellules CHO (EC50 = 152,1 nM, figure IA) et dans les cellules épithéliales pulmonaires humaines de lignée Calu-3
(EC50 = 140,1 nM, figure IB) .
Deux formes mutées de CFTR ont été également testées. Il s'agit du mutant G551D et de delF508. La - figure 2 montre que l'aloïsine A active la protéine G551D-CFTR dans la cellule CHO (EC50 = 1,5 nM, . figure 2A) et la protéine- delF508 (EC50 ≈ 110 nM, figure 2B) dans les cellules épithéliales humaines pulmonaires de- lignée CF15. après incubation des cellules à 270C (une procédure qui permet de relocaliser, la. protéine delF508 vers la membrane) .
Ces résultats démontrent que cette molécule est un activateur de CFTR' sauvage, G551D et delF508. R2. Effet de 1 'alolsine A sur l'adressage de delF508 dans les cellules, CF15 .
L'étude de l'adressage de la protéine. delF508-CFTR a été'- réalisée en combinant. des- approches de pharmacologie, d'imagerie cellulaire, des tests biochimiques et électrophysiologiques sur • des cellules CF15 épithéliaies humaines pulmonaires homozygotes pour la délétion delF508.
Pour chaque expérience, l'addition d'un cocktail
(Forskoline 10 μM + Génistéine 30 μM) permet l'activation du
CFTR quand celui-ci est fixé à la membrane. Ainsi, un efflux d'iodure pourra- être observé si l'adressage de delF508 a été restauré.
Les résultats, présentés sous forme d'histogramme ont été normalisés par rapport à un . traitement de référence (traitement des cellules au MPB-91 250 μM pendant 2 h) pour lequel on considère qu'on a 100 % d'activité CFTR.
La figure 3A montre qu'après un traitement de 2 h avec 100 μM d'alolsine A l'activité delF508-CFTR' est restaurée.
Ces résultats démontrent ainsi que le traitement par l'aloïsine A des cellules CF15 pendant 2 h à 370C restaure un adressage de la protéine delF508 et permet à celle-ci de fonctionner en tant que transporteur ionique.
En l'absence de traitement des cellules, la protéine delF50.8 n'est pas membranaire et il n'y a pas d' efflux d'iodure stimulé par le cocktail (Forskoline 10 μM, Génistéine 30 μM) . L'EC50 (concentration de la molécule qui donne 50 % de l'efficacité maximale) de l'aloïsine A a été déterminé à 50 μM
, (figure 3A, n=4, pour chaque condition) . Pour préciser l'effet observé des inhibiteurs connus de CFTR sur l'activité de delF508- ont été testés après traitement par l'aloïsine A. Les résultats présentés figure 3B montrent que ce transport est. bloqué par le glibenclamide' et le DPC mais insensible au DIDS et- au calixarène. Ce profil pharmacologique correspond à celui de CFTR. Chez les patients CF, la protéine delF508 est absente- des membranes plasmiques du' fait' d'un mauvais • adressage de la protéine qui est retenue -.dans le réticulum endoplasmique (RE) .
Par imagerie cellulaire dans les cellules CF15, delF508 est
5 effectivement localisée dans des ' compartiments intracellulaires • (figure 4) . En revanche le traitement avec
100 μM d'aloïsine A permet de rediriger la protéine "delF508 vers la membrane comme le présente la figure 4. " .
L' immunolocalisation de delF508-CFTR dans des cellules
10 CF15 est également représentée sur les figures .6A à βC qui montrent respectivement, la figure 6A : la visualisation r confocale de CFTR-delF508 dans des cellules CF15 avec un anticorps monoclonal anti-CFTR de souris ; la figure 6B : les cellules CF15 traitées 24 h à 270C, utilisées comme témoin 15 positif ; la figure 6C : les cellules CF15 traitées 2 h avec de l'aloïsine A (lOOμM) . .
Sur la .figure 7, on a représenté l'activation de delF508-CFTR dans les cellules CF15 - après traitement avec l'aloïsine A. .
20 Les efflux d' iodure ont été observés- après 2 h d'incubation avec ces composés ou en l'absence de traitement.
Les cellules CF15 ayant subi un traitement 24 h à 27°C. ont été utilisées comme contrôle positif et les cellules CF15 non traitées comme contrôle négatif (370C) . 25 Le tableau ci-dessous donne un résumé d'expériences de compétition réalisées par la technique d' efflux d' iodure entre l'aloïsine A et la machinerie de la chaperone du RE.
de dégradation
Figure imgf000012_0001
On observe une inhibition de l'effet de l'aloïsine A par la Brefeldine A (BFA) , inhibiteur du trafic vésiculaire ERGIC, ce qui montre que l'aloïsine A induit un réadressage de la protéine delF508-CFTR.
R3. Cytotoxicité de l'aloïsine A Dans le but de tester la cytotoxicité' de l'aloïsine A, des' cellules CHO-WT ont été incubées 2 h (figure 5A) du 24 h
(figure 5B) avec différentes concentrations d'aloxsine A avant de subir le test de viabilité cellulaire au MTT. Les résultats montrent que les cellules sont viables pour toutes les concentrations'. Cette molécule ne présente donc pas de cytotoxicité cellulaire. • •
Des expériences menées en efflux d'iodure, en patch clamp ainsi qu'en chambre de Ussing ont montré que l'aloisine A était- • un activateur des protéine CFTR sauvage et mutées (F508del, G551D, G1349D) . Cette molécule affine présente des-
EC50 variant de 1.5 à 303 nM suivant le mutant testé.
De plus, les expériences effectuées ont démontrés qu'un traitement des cellules CF15 (F508del/F508del) par l'aloisine
A. permettait le réadressage de la protéine mutée F508del CFTR à la membrane.
Des expériences d' efflux d'iodure ont montré que l'aloisine A - permet le réadressage de -la protéine F508del-CFTR après 2- h de traitement avec une EC50 de 49μM.
Ces résultats démontrent .que l'aloisine A est un activateur de CFTR à faible concentration mais que cette molécule peut aussi agir aussi comme chaperonne pharmacologique à forte . concentration.
De plus, des études de toxicité de' 1 'aloïsine A, réalisées chez l'animal, ont révélé une toxicité très faible. Les résultats ci-dessus ont été également vérifiés avec d'autres dérivés de pyrrolo-pyrazines . ±ό
Exemple de formulation
On prépare une solution .pour inhalation -avec un • 'nébuliseur ampoule à partir de chlorure de sodium, de chlorure de- calcium déshydraté et d'eau pour préparations injectables. L'aloïsine A est ajoutée comme ingrédient actif. La solution est formulée dans des ampoules de 2,5ml. Des ampoules renfermant 5, 10 mg ou 20 mg l'aloïsine sont ainsi •préparées . - •
BIBLIOGRAPHIE
BECQ et al. (1999) Journal of Biological Chemistry 274, 27415-27425. . DORMER et al. (2001) Journal .of CeIl Science 114, 4073- 4081.

Claims

REVENDICATIONS
1/ Utilisation de dérivés de pyrrolo-pyrazines - pour fabriquer des médicaments pour le traitement ' de la mucoviscidose et de maladies liées à un défaut d'adre-ssage des protéines dans les cellules, ces . dérivés répondant à la
- formule (I) : '
Figure imgf000016_0001
z (D
dans laquelle '
R2 ' et R3 sont identiques ou différents et' représentent H, Cl-Cβ alkyl, ledit alkyl étant une chaîne alkyle droite ou ramifiée, le cas échéant substituée, - R6 est un cycle aromatique Ar ou un cycloalkyle, le cas échéant substitué, ledit cycloalkyle étant le cas échéant substitué par un groupe aryle qui peut être également substitué,
R7 est H, Cl-Cβ alkyl, (alk. )n-hal., CH2-CH = CH2, CH2-cycloalkyl, CH2-Ar, • • .
Z est H ou CH3.
• 2/ Utilisation selon la revendication 1, caractérisée en ce que R2 et R3, et/ou Z et/ou R7 sont différents de .H.
3/ Utilisation selon la revendication 1, caractérisée en ce que lesdits dérivés de pyrrolo-pyrazines présentent la formule (II) : • . '
Figure imgf000017_0001
. (H)
dans laquelle - .
- le groupe phényl en position 6 est substitué par ' un, deux ou trois substituants R' choisis dans'- le groupe comprenant : • . ••
- H, -OH, alkyl, -O alkyl, hal. , -NH2, -N(H,alkyl), - N(alkyl)2, -0-SO2-NH2, -0-SO2-N(H, alkyl),- -0-SO2-N(alkyl)2, - COOH, -COO-alkyl, CONH2, -CON(H,alkyl) , -CON(alkyl)2,
- R7 est H, 'alky.l, (alk.)n hal., -CH2-CH = CH2, (alk.)n- cycloalkyl, alk.-Ar, et
Z est H ou CH3.
4/ Utilisation selon la revendication 3, caractérisée- en ce que Z et/ou R7 sont différents de H. • ,
'5/ Utilisation de l'aloïsine A de formule (III)
RM39 (Aloisine A)
Figure imgf000017_0002
. pour fabriquer des médicaments' pour- le traitement de la. mucoviscidose. 6/ Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, caractérisée en ce que les médicaments sont préparés pour une administration sous formes de . gélules, comprimés, dragées ou capsules. 7/ Utilisation selon l'une quelconque des revendications, l à 5, caractérisée en ce que les médicaments sont préparés, pour une administration par voie injectable, sous forme de solution.
' 8/ Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, caractérisée en ce que les médicaments sont' préparés pour une administration sous forme d'aérosol.
9/ Utilisation selon l'une quelconque des • revendications 1 à 8, pour le traitement de la mucoviscidose.
PCT/FR2005/002558 2004-10-15 2005-10-14 Utilisation de derives de pyrrolo- pyraz ines pour le traitement de la mucoviscidose Ceased WO2006042950A2 (fr)

Priority Applications (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE602005025383T DE602005025383D1 (de) 2004-10-15 2005-10-14 Verwendung von pyrrolo-pyrazinderivaten zur behandlung der zystischen fibrose
CA002583363A CA2583363A1 (fr) 2004-10-15 2005-10-14 Utilisation de derives de pyrrolo- pyraz ines pour le traitement de la mucoviscidose
AT05804722T ATE491454T1 (de) 2004-10-15 2005-10-14 Verwendung von pyrrolo-pyrazinderivaten zur behandlung der zystischen fibrose
EP05804722A EP1807084B1 (fr) 2004-10-15 2005-10-14 Utilisation de derives de pyrrolo-pyrazines pour le traitement de la mucoviscidose
US11/665,294 US20090048260A1 (en) 2004-10-15 2005-10-14 Use of pyrrolopyrazine derivatives for the production of medicaments for the treatment of mucoviscidosis and diseases related to protein addressing errors in cells

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FR0410962 2004-10-15
FR0410962A FR2876582B1 (fr) 2004-10-15 2004-10-15 Utilisation de derives de pyrrolo-pyrazines pour la fabrication de medicaments pour le traitement de la mucoviscidose et de maladies liees a un defaut d'adressage des proteines dans les cellules

Publications (2)

Publication Number Publication Date
WO2006042950A2 true WO2006042950A2 (fr) 2006-04-27
WO2006042950A3 WO2006042950A3 (fr) 2006-06-29

Family

ID=34950739

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/FR2005/002558 Ceased WO2006042950A2 (fr) 2004-10-15 2005-10-14 Utilisation de derives de pyrrolo- pyraz ines pour le traitement de la mucoviscidose

Country Status (7)

Country Link
US (1) US20090048260A1 (fr)
EP (1) EP1807084B1 (fr)
AT (1) ATE491454T1 (fr)
CA (1) CA2583363A1 (fr)
DE (1) DE602005025383D1 (fr)
FR (1) FR2876582B1 (fr)
WO (1) WO2006042950A2 (fr)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8658649B2 (en) 2006-09-11 2014-02-25 Sanofi Kinase inhibitor

Families Citing this family (27)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1388541A1 (fr) * 2002-08-09 2004-02-11 Centre National De La Recherche Scientifique (Cnrs) Pyrrolopyrazines utilisées comme inhibiteurs de kinases
WO2012088266A2 (fr) 2010-12-22 2012-06-28 Incyte Corporation Imidazopyridazines et benzimidazoles substitués en tant qu'inhibiteurs de fgfr3
CA2836463A1 (fr) 2011-05-17 2012-11-22 Discoverybiomed Inc. Traitement des troubles lies au repliement des proteines avec des correcteurs de cftr a petite molecule
HRP20170430T1 (hr) 2012-06-13 2017-06-16 Incyte Holdings Corporation Supstituirani triciklični spojevi kao inhibitori fgfr
WO2014026125A1 (fr) 2012-08-10 2014-02-13 Incyte Corporation Dérivés de pyrazine en tant qu'inhibiteurs de fgfr
WO2014081820A1 (fr) * 2012-11-20 2014-05-30 Discoverybiomed, Inc. Correcteurs de cftr à petites molécules
WO2014081821A2 (fr) 2012-11-20 2014-05-30 Discoverybiomed, Inc. Correcteurs de cftr bicycliques et tricycliques à petites molécules
US9266892B2 (en) 2012-12-19 2016-02-23 Incyte Holdings Corporation Fused pyrazoles as FGFR inhibitors
PL2986610T4 (pl) 2013-04-19 2019-06-28 Incyte Holdings Corporation Bicykliczne heterocykle jako inhibitory FGFR
US10851105B2 (en) 2014-10-22 2020-12-01 Incyte Corporation Bicyclic heterocycles as FGFR4 inhibitors
MY197720A (en) 2015-02-20 2023-07-10 Incyte Corp Bicyclic heterocycles as fgfr inhibitors
WO2016134294A1 (fr) 2015-02-20 2016-08-25 Incyte Corporation Hétérocycles bicycliques utilisés en tant qu'inhibiteurs de fgfr4
MA41551A (fr) 2015-02-20 2017-12-26 Incyte Corp Hétérocycles bicycliques utilisés en tant qu'inhibiteurs de fgfr4
AR111960A1 (es) 2017-05-26 2019-09-04 Incyte Corp Formas cristalinas de un inhibidor de fgfr y procesos para su preparación
BR112020022392A2 (pt) 2018-05-04 2021-02-02 Incyte Corporation formas sólidas de um inibidor de fgfr e processos para preparação das mesmas
JP7568512B2 (ja) 2018-05-04 2024-10-16 インサイト・コーポレイション Ｆｇｆｒ阻害剤の塩
US11628162B2 (en) 2019-03-08 2023-04-18 Incyte Corporation Methods of treating cancer with an FGFR inhibitor
WO2021007269A1 (fr) 2019-07-09 2021-01-14 Incyte Corporation Hétérocycles bicycliques en tant qu'inhibiteurs de fgfr
US12122767B2 (en) 2019-10-01 2024-10-22 Incyte Corporation Bicyclic heterocycles as FGFR inhibitors
JP7675711B2 (ja) 2019-10-14 2025-05-13 インサイト・コーポレイション Ｆｇｆｒ阻害剤としての二環式複素環
WO2021076728A1 (fr) 2019-10-16 2021-04-22 Incyte Corporation Hétérocycles bicycliques en tant qu'inhibiteurs de fgfr
CA3163875A1 (fr) 2019-12-04 2021-06-10 Incyte Corporation Heterocycles tricycliques en tant qu'inhibiteurs de fgfr
PE20221504A1 (es) 2019-12-04 2022-09-30 Incyte Corp Derivados de un inhibidor de fgfr
WO2021146424A1 (fr) 2020-01-15 2021-07-22 Incyte Corporation Hétérocycles bicycliques en tant qu'inhibiteurs de fgfr
WO2022221170A1 (fr) 2021-04-12 2022-10-20 Incyte Corporation Polythérapie comprenant un inhibiteur de fgfr et un agent de ciblage de nectine-4
EP4352060A1 (fr) 2021-06-09 2024-04-17 Incyte Corporation Hétérocycles tricycliques utiles en tant qu'inhibiteurs de fgfr
AR126102A1 (es) 2021-06-09 2023-09-13 Incyte Corp Heterociclos tricíclicos como inhibidores de fgfr

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1388541A1 (fr) 2002-08-09 2004-02-11 Centre National De La Recherche Scientifique (Cnrs) Pyrrolopyrazines utilisées comme inhibiteurs de kinases
WO2004032874A2 (fr) 2002-10-09 2004-04-22 Scios Inc. Derives d'azaindole utilises en tant qu'inhibiteurs de la kinase p38

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SK14082001A3 (sk) * 2000-02-05 2002-03-05 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Deriváty pyrazolu ako inhibítory ERK a farmaceutická kompozícia, ktorá ich obsahuje
JP4510383B2 (ja) * 2001-05-23 2010-07-21 田辺三菱製薬株式会社 軟骨疾患修復治療用組成物
CA2482991A1 (fr) * 2002-04-19 2003-10-30 Cellular Genomics, Inc. Imidazo[1,2-a]pyrazin-8-ylamines, leur procede de production et leur utilisation
KR20050033659A (ko) * 2002-09-04 2005-04-12 쉐링 코포레이션 사이클린 의존성 키나제 억제제로서의 피라졸로[1,5-ａ]피리미딘 화합물

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1388541A1 (fr) 2002-08-09 2004-02-11 Centre National De La Recherche Scientifique (Cnrs) Pyrrolopyrazines utilisées comme inhibiteurs de kinases
WO2004032874A2 (fr) 2002-10-09 2004-04-22 Scios Inc. Derives d'azaindole utilises en tant qu'inhibiteurs de la kinase p38

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
METTEY ET AL., J.MED.CHEM., vol. 46, 2003, pages 222 - 235

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8658649B2 (en) 2006-09-11 2014-02-25 Sanofi Kinase inhibitor

Also Published As

Publication number Publication date
FR2876582A1 (fr) 2006-04-21
EP1807084B1 (fr) 2010-12-15
FR2876582B1 (fr) 2007-01-05
WO2006042950A3 (fr) 2006-06-29
US20090048260A1 (en) 2009-02-19
DE602005025383D1 (de) 2011-01-27
CA2583363A1 (fr) 2006-04-27
EP1807084A2 (fr) 2007-07-18
ATE491454T1 (de) 2011-01-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP1807084B1 (fr) Utilisation de derives de pyrrolo-pyrazines pour le traitement de la mucoviscidose
US8492420B2 (en) Use of purine derivatives for the production of medicaments for the treatment of mucoviscidosis and diseases related to protein addressing errors in cells
EP1680105B1 (fr) Utilisation d&#39;inhibiteurs de glucosidase pour une therapie de la mucoviscidose
US20100311767A1 (en) Method for the treatment of amyloidoses
JP2018529698A (ja) Ｅｚｈ２阻害剤により卵巣の悪性ラブドイド腫瘍（ｍｒｔｏ）／高カルシウム血症型の卵巣の小細胞癌（ｓｃｃｏｈｔ）を処置するための方法
JPH10502340A (ja) 視神経炎の治療
JP2004504376A (ja) 医薬製剤としてのセロトニンアゴニスト（５ｈｔ２）とアンタゴニスト（５ｈｔ６）の新規組み合わせ
EP1954289A2 (fr) Utilisation du guanabenz et de ses derives pour la fabrication de medicaments pour le traitement de la mucoviscidose et de maladies liees a un defaut d&#39;adressage des proteines dans les cellules
EP1799225B1 (fr) Utilisation de derives de paullones pour la fabrication de medicaments pour le traitement de la mucoviscidose et de maladies liees a defaut d&#39;adressage des proteines dans les cellules
US20240197817A1 (en) Compositions for treating autoimmune, alloimmune, inflammatory, and mitochondrial conditions, and uses thereof
Nakamichi et al. Phase I and pharmacokinetics/pharmacodynamics study of the MEK inhibitor RO4987655 in Japanese patients with advanced solid tumors
CN114652715A (zh) 联合疗法
EP4045074B1 (fr) Utilisation d&#39;esculentine et de ses dérivés pour une utilisation dans le traitement de la fibrose kystique
CN101267837B (zh) 用于治疗系统性肥大细胞增生症的组合物
US20070191493A1 (en) Use of n-alkanols as activators of the cftr channel
WO2007042776A1 (fr) Modulateurs de la voie de signalisation purinergique pour traiter l&#39;homeostasie du sodium, l&#39;hypertension et l&#39;hyperaldosteronisme

Legal Events

Date Code Title Description
AK Designated states

Kind code of ref document: A2

Designated state(s): AE AG AL AM AT AU AZ BA BB BG BR BW BY BZ CA CH CN CO CR CU CZ DE DK DM DZ EC EE EG ES FI GB GD GE GH GM HR HU ID IL IN IS JP KE KG KM KP KR KZ LC LK LR LS LT LU LV LY MA MD MG MK MN MW MX MZ NA NG NI NO NZ OM PG PH PL PT RO RU SC SD SE SG SK SL SM SY TJ TM TN TR TT TZ UA UG US UZ VC VN YU ZA ZM ZW

AL Designated countries for regional patents

Kind code of ref document: A2

Designated state(s): BW GH GM KE LS MW MZ NA SD SL SZ TZ UG ZM ZW AM AZ BY KG KZ MD RU TJ TM AT BE BG CH CY CZ DE DK EE ES FI FR GB GR HU IE IS IT LT LU LV MC NL PL PT RO SE SI SK TR BF BJ CF CG CI CM GA GN GQ GW ML MR NE SN TD TG

121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application
WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2005804722

Country of ref document: EP

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2583363

Country of ref document: CA

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 11665294

Country of ref document: US

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

WWP Wipo information: published in national office

Ref document number: 2005804722

Country of ref document: EP