WO2007125946A1

WO2007125946A1 - ペプチド

Info

Publication number: WO2007125946A1
Application number: PCT/JP2007/058926
Authority: WO
Inventors: Yukiko Kunieda; Satoshi Higurashi; Mutsumi Motouri; Hiroaki Matsuyama; Atsushi Serizawa; Hiroshi Kawakami
Original assignee: Snow Brand Milk Products Co Ltd
Current assignee: Snow Brand Milk Products Co Ltd
Priority date: 2006-04-28
Filing date: 2007-04-25
Publication date: 2007-11-08
Anticipated expiration: 2008-10-28
Also published as: CN101432295B; KR20090009862A; EP2017283A1; AU2007244352A1; NZ572152A; US20100075909A1; EP2017283A4; KR20130140215A; US8207131B2; CN101432295A; AU2007244352B2; NZ594814A

Abstract

　抗酸化効果及びアディポネクチンの産生促進効果があるHis-Pro-Ile-Lys-His-Gln-Gly-Leu-Pro-Gln、His-Pro-Ile-Lys　もしくは His-Gln-Gly-Leu-Pro-Glnで表されるアミノ酸配列からなるペプチドを有効成分とする抗酸化剤及びこの抗酸化剤を配合した飲食品、アディポネクチンの産生促進剤及びこの産生促進剤を配合した飲食品。さらには、チーズに含まれる成分を有効成分とする血中アディポネクチン濃度増加促進及び／又は減少抑制剤、あるいはチーズに含まれる有効成分を配合した血中アディポネクチン濃度増加促進及び／又は減少抑制用飲食品。

Description

明細書

ペプチド

技術分野

[0001] 本発明は乳タンパク質に由来する抗酸ィ匕作用を有するペプチド、該ペプチドを有効成分とする抗酸化剤および該ペプチドを配合した抗酸化用飲食品または飼料に関する。

また、本発明は、乳タンパク質に由来するアディポネクチン産生促進作用を有するペプチド、該ペプチドを有効成分とするアディポネクチン産生促進剤および該ぺプチドを配合したアディポネクチン産生促進用飲食品または飼料に関する。

さらに、本発明は、チーズに含まれる成分を有効成分とする血中アディポネクチン濃度増加促進及び Z又は減少抑制剤、あるいはチーズに含まれる成分を配合した血中アディポネクチン濃度増加促進及び Z又は減少抑制用飲食品に関する。

背景技術

[0002] 不飽和脂肪酸の酸化によって生じる過酸化物やフリーラジカルは、食品の風味や栄養価等を損ない、品質の劣化を引き起こすだけではなぐ生体においては、その強い酸ィ匕力により細胞内のタンパク質や遺伝子 DNAを傷つけるとともに、細胞膜を構成する脂質を攻撃して、毒性の強いハイド口パーオキサイド等の過酸ィ匕脂質を作り、細胞損傷や組織障害を惹き起こすとヽわれてヽる。こうした活性酸素やフリーラジカルによる生体への有害な作用の蓄積が、老化を促進したり、ガンや動脈硬化、心臓病をはじめとする、いわゆる生活習慣病の原因の一つとして関係があることが明らかとなってきた。特に生活習慣病は、食生活と密接な関係にあることから、食事内容の改善による疾病予防の重要性が注目されている。そのため、食品成分による酸化ストレスの防止や抑制の観点から、食品の抗酸ィ匕性と食品成分との関係に関する研究ゃ抗酸化性を持つ成分の探索が行われてヽる。

[0003] 抗酸ィ匕性を持つ成分に関しては、植物由来のビタミンやポリフエノール等が以前から知られている。ビタミンに関しては多くの報告があり、特にビタミン C、ビタミン E及びカロテン等に抗酸ィ匕性が認められている。また、ポリフエノールについては、カテキン類ゃフラボノイド類等が強い抗酸ィ匕性をもつことが明らかにされている。さらに、タンパク質のプロテアーゼ加水分解物力も多種多様な抗酸ィ匕ペプチドが分離-同定されており、卵白アルブミンの酵素分解物から 3種類の抗酸ィ匕ペプチドを分離したという報告がある (例えば、非特許文献 1参照。 ) oまた、大豆タンパク質の )8 -コンダリシニンのプロテアーゼ加水分解物から、 6種類の抗酸化ペプチドを分離'同定したという報告もある (例えば、非特許文献 2参照。 )₀

一方、乳タンパク質の酵素分解物についてはォピオイド活性作用、カルシウム吸収促進作用、細胞増殖作用、抗菌作用、アンジォテンシン I変換酵素阻害作用等、多くの生理作用が明らかにされている。魚油等のエイコサペンタエン酸含有油脂を水溶性タンパク質溶液により乳化して魚油臭を抑制する方法 (例えば、特許文献 1参照。 ) や、高度不飽和脂肪酸含有油脂を乳の部分加水分解物により乳化し、酸化安定性の高い高度不飽和脂肪酸含有油脂の粉末を得る方法 (例えば、特許文献 2参照。 ) が開示されている。また、高度不飽和脂肪酸含有油脂、チーズ及び水を乳化させて抗酸化乳化物を調製して、高度不飽和脂肪酸含有油脂の酸化を防止し、高度不飽和脂肪酸含有魚油由来の魚臭や保存中の異臭をマスキングすると!、う方法 (例えば、特許文献 3参照。）が開示されている。しかし、これらはいずれも高度不飽和脂肪酸含有油脂に、水溶性タンパク質溶液、乳の部分加水分解物、またはチーズを加えてそれぞれ乳化させた高度不飽和脂肪酸含有油脂の乳化物であって、主体となる高度不飽和脂肪酸含有油脂自体の魚臭や保存中の異臭を防止するものである。しかしながら、高度不飽和脂肪酸含有油脂と混合し乳化させることなぐ乳タンパク質由

、う報告は数少なヽ。本発明者らはチーズの水溶性ペプチド画分が抗酸化作用を持つことを見出し、特許出願を行った (特許文献 4参照。 )₀また、特定のアミノ酸配列を有するペプチドが抗酸化作用を有することも見出した (特許文献 5参照。；)。し力しながら、これらのペプチドは特にカビ熟成型のチーズに多く含まれるものである。世界的にチーズの生産量を見ると、乳酸菌のみで熟成したチーズは、カビ熟成型のチーズよりもはるかに多く生産 *消費されている。乳酸菌のみで熟成したチーズは、プロセスチーズの原料としても多く利用される。このことから、乳酸菌のみで熟成したチーズにおいて高い抗酸ィ匕作用を示すペプチド成分の単離が望まれる。

[0005] 上述のように、活性酸素やフリーラジカルによる生体への有害な作用の蓄積力いわゆる生活習慣病の原因の一つとして関係があることが明ら力となっている力高血圧、高脂血症、糖尿病などの生活習慣病発症'進展の危険因子を予防することが重要である。現在、わが国で、心疾患ならびに脳血管疾患による死亡力年々増加する傾向にあり、心血管疾患と脳血管疾患による死亡が死因の約 3分の 1を占め、この対策が国民的な課題となっている。これらの動脈硬化性疾患においては、高血圧、高脂血症、耐糖能障害などのリスクファクターが一個人に集積することで発症の危険度が著しく上昇することが知られており、このリスクファクターの集積した状態はメタボリックシンドロームと呼ばれ、広く認識されるようになってきた。

[0006] メタボリックシンドロームの概念の中で、最重要視されて!/、るのが内臓脂肪の過剰な蓄積である。生体最大の分泌組織である脂肪組織は、種々の内分泌因子を産生し、生体における恒常性の維持に関わっている。し力しながら内臓脂肪の過剰な蓄積に伴い、内分泌因子の分泌バランスが崩れ、種々の病態につながっていくと考えられる。脂肪組織はこれまで、エネルギーの貯蔵庫としての役割しか考えられていな力つた力生活習慣病を中心とした代謝異常症候群の病態を考えるうえでの脂肪組織の重要性が、近年、注目されるようになった。すなわち、脂肪組織は、プラスミノーゲンァクチベータ一インヒビター、腫瘍壊死因子（TNF— α )、レプチン、アディポネクチンなどの内分泌因子を分泌し、生体のホメォスタシスの維持に寄与している力その産生、分泌の過剰あるいは過少と言ったバランスの破綻が、糖'脂質代謝異常、高血圧、動脈硬化の発症 ·進展に深く関わっていることが明らかになつてきた。

[0007] 脂肪組織に由来する内分泌因子の一つであるアディポネクチン (Adiponectin)は、 244個のアミノ酸よりなる、 30kDaのホルモンで、動脈硬化抑制作用などのほかに、肝臓や筋肉における脂肪燃焼を促進する効果があると言われている。また、アディポネクチンには血液中のブドウ糖と脂肪酸が細胞内に取り込まれるのを促進する働きを持っていることが明らかにされている。筋肉や肝臓などに脂肪がたまると、糖分の取り込みが悪くなり糖尿病につながる。しかし、通常、アディポネクチンは、一時的に過剰となった脂肪や糖分を分解することで、体内の栄養バランスを保つとみられ、肥満が進むと、アディポネクチンを分泌する脂肪細胞の働きが弱くなり、体内の栄養バランスが崩れてしまうと言われている。

脂肪組織が特異的に分泌するアディポネクチンは通常血中に高濃度で存在するが、内臓脂肪が蓄積するにつれて分泌が減少していくことが知られている。アディポネクチンは、抗糖尿病、抗動脈硬化、抗炎症、抗高血圧など様々な生理機能を持つことが知られており、血中において、アディポネクチン濃度の増加を促進すること、もしくはアディポネクチン濃度の減少を抑制することは、メタボリックシンドロームを治療する上で非常に重要になってくる。

[0008] 従来、メタボリックシンドロームの個々の病態への対策として薬物療法も行われている力処方が必要なことや副作用を伴うことなどが問題となっている。さらに、一つの病態に対する治療を行っても、その他の病態がきっかけとなって重篤な病態へと発展することが分っており、これらの状態の上流に存在する脂肪細胞由来の内分泌因子の分泌バランスを整えることが必要となってくる。また、内臓脂肪の蓄積に起因するメタボリックシンドロームの治療には、薬物療法よりも運動療法や食事療法など日々の生活を見直すことが重要とされている。そこで、日常的に摂取でき、長期にわたつて摂取しても安全性の高、、内臓脂肪の蓄積に起因するメタボリックシンドロームの治療に有効な飲食品が望まれてヽる。

最近では、合成医薬品による治療よりは、食生活を通じて病状の進展を出来るだけ抑制するような機能を持った食品成分に対する研究も注目されるようになってきている。

[0009] アディポネクチンに関しては、アディポネクチンによる肝線維化抑制や正常肝細胞増殖促進効果ゃ抗炎症効果 (例えば、特許文献 6参照。）が知られており、飲食品由来のアディポネクチン産生促進物としては発酵茶抽出物を有効成分とする糸且成物（例えば、特許文献 7参照。）、アムラーというコミカンソゥ属に属する落葉の亜高木抽出物からなる血中脂肪組織特異分泌蛋白増強組成物 (例えば、特許文献 8参照。 ) が開示されている。

一方、チーズは高脂肪含有食品であるのにも関わらず、血中トリグリセリド濃度の低下促進作用やコレステロール代謝の改善作用を有することが報告されている（特許文献 9、特許文献 10)。し力しながら、チーズの機能として、血中アディポネクチン濃度の増加を促進する作用、あるいは血中アディポネクチン濃度の減少を抑制する作用につ、ては、何等知られて、な、。

特許文献 1 :特開昭 60- 102168号公報

特許文献 2 :特開平 2- 305898号公報

特許文献 3 :特開平 7- 274823号公報

特許文献 4 :特開 2004- 352958号

特許文献 5 :特願 2005 - 294358号

特許文献 6：特開 2000- 256208号公報

特許文献 7：特開 2002- 363094号公報

特許文献 8：特開 2006 - 56836号公報

特許文献 9：特開 2003 - 300890号公報

特許文献 10：特開 2003 - 144090号公報

非特許文献 1 :柘植信昭ら、日本農芸化学会誌、 65号、 ρ.1635、 1991年

非特許文献 2 :エッチ'ェム 'チェンら（Chen, H.M. et al.) ,ジャーナル'ァグリカルチュラル'アンド 'フード'ケミストリー（J. Agric. Food Chem.) , 43号， p.574, 1995年発明の開示

発明が解決しょうとする課題

本発明は、食品の風味や栄養価等を損ない、品質の劣化を引き起こすだけではなぐ生体においては疾病や老化等に悪影響を及ぼす活性酸素やフリーラジカル等による生体の酸ィ匕的障害を抑制するのに有効な抗酸ィ匕作用を有するペプチドを提供することを課題とする。また、本発明は、生体においてアディポネクチンの産生を促進させることにより、動脈硬化を抑制し、肝臓や筋肉における脂肪の燃焼を促進するべプチドを提供することを課題とする。

また、本発明は、これを摂取することで血中アディポネクチン濃度の増加促進、あるいは減少抑制に有用であり、しかも、日常的な摂取が可能であるチーズに含まれる成分を有効成分とする血中アディポネクチン濃度増加促進及び Z又は減少抑制剤、あるいは血中アディポネクチン濃度増加促進及び z又は減少抑制用飲食品を提供することを課題とする。

課題を解決するための手段

[0011] 本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意研究を重ねた結果、次の式（1)〜（3) で表されるいずれかのアミノ酸配列力なるペプチドに抗酸ィ匕効果があり、し力も低用量で効果を有することを見出し、本発明を完成するに至った。

His- Pro- lie- Lys- His- Gin- Gly- Leu- Pro- Gin 式（ 1 )

His- Pro- lie- Lys 式（2)

His- Gin- Gly- Leu- Pro- Gin 式（3)

すなわち、本発明は、上記の式（1)〜（3)のいずれかで表されるアミノ酸配列からなる抗酸化作用を持つペプチドに関する。

また、本発明は、乳タンパク質に由来する式（1)〜（3)のいずれかで表されるァミノ酸配列からなる抗酸ィ匕作用を持つペプチドに関する。

また、本発明は、式（1)〜（3)のいずれかで表される 1以上のペプチドを有効成分とする抗酸化剤に関する。

また、本発明は、式（1)〜（3)のいずれかで表される 1以上のペプチドを配合した抗酸ィ匕用飲食品または飼料に関する。

さらに、本発明者らは、上記の式（1)で表されるアミノ酸配列からなるペプチドはァディポネクチンの産生を促進する効果があり、し力も低用量で効果を有することを見出し、本発明を完成するに至った。

すなわち、本発明は、上記の式（1)で表されるアミノ酸配列からなるアディポネクチン産生促進作用を持つペプチドに関する。

また、本発明は、乳タンパク質に由来する式（1)で表されるアミノ酸配列からなるァディポネクチン産生促進作用を持つペプチドに関する。

また、本発明は、式（1)で表されるペプチドを有効成分とするアディポネクチン産生促進剤に関する。

また、本発明は、式（1)で表されるペプチドを配合したアディポネクチン産生促進用飲食品または飼料に関する。

[0012] 加えるに、本発明者らは、日常的に摂取が可能である食品素材によって生体の種々の機能異常を予防や改善できな!、かと!、う観点で、チーズに含まれる成分に着目し、その生理機能を確認してきたところ、血中アディポネクチン濃度の増加を促進する作用、あるいは血中アディポネクチン濃度の減少を抑制する作用を見出した。そして、これらの生理機能を利用した血中アディポネクチン濃度増加促進及び Z又は減少抑制剤、あるいは血中アディポネクチン濃度増加促進及び Z又は減少抑制用飲食品を供することにより、血中アディポネクチン濃度の増加を促進すること、あるいは血中アディポネクチン濃度の減少を抑制することができることを見出し、本発明を完成するに至った。

つまり、チーズに含まれる成分の血中アディポネクチン濃度の増加を促進する作用、あるいは血中アディポネクチン濃度の減少を抑制する作用を利用し、チーズに含まれる成分を有効成分とする血中アディポネクチン濃度増加促進及び Z又は減少抑制剤、あるいはチーズに含まれる成分を配合した血中アディポネクチン濃度増加促進及び Z又は減少抑制用飲食品を提供することにより課題を解決することができた。また、チーズに含まれる血中アディポネクチン濃度増加促進及び Z又は減少抑制の有効成分について鋭意研究を重ねた結果、有効成分の一つとして、チーズに含まれるペプチドを見出すに至った。

発明の効果

本発明の式（1)〜（3)のいずれかで表されるアミノ酸配列からなる抗酸ィ匕作用を持つペプチドは、食品の風味や栄養価等を損ない品質の劣化を惹き起こすだけではなぐ生体においては疾病や老化等に悪影響を及ぼす活性酸素やフリーラジカル等による生体の酸ィヒ的障害を抑制するのに有効であり、このペプチドを有効成分とする抗酸化剤として、また、このペプチドを配合した抗酸ィ匕用飲食品または飼料として有用である。

また、本発明の式（1)で表されるアミノ酸配列からなるアディポネクチン産生促進作用を持つペプチドは、アディポネクチンの産生を促進するのに有効であり、このぺプチドを有効成分とするアディポネクチン産生促進剤として、また、このペプチドを配合したアディポネクチン産生促進用飲食品または飼料として有用である。

さらに、本発明のチーズに含まれる成分を有効成分とする血中アディポネクチン濃度増加促進及び z又は減少抑制剤や血中アディポネクチン濃度増加促進及び z又は減少抑制用飲食品は、これらを摂取することにより血中アディポネクチン濃度の増加を促進及び Z又は減少を抑制するため、内臓脂肪の過剰な蓄積を抑制し、血栓症、インスリン抵抗性、糖代謝異常、高血圧などのメタボリックシンドロームの治療及び予防に有効である。

図面の簡単な説明

[0014] [図 1]ゴーダチーズを原料とする水溶性ペプチド画分の分離クロマトグラムを示す (実施例 1)。

[図 2]合成ペプチド画分の分離クロマトグラムを示す (実施例 2)。

[図 3]合成ペプチド画分の抗酸化活性評価を示す (実施例 2、試験例 2)。

[図 4]トリプシン消化後のペプチド画分の分離クロマトグラムを示す (実施例 3)。

[図 5]トリプシン消化後のペプチド画分の抗酸ィ匕活性評価を示す (実施例 3、試験例 3

) o

[図 6]ペプチド濃度の違いによるアディポネクチン産生量（単位 DNA量あたり)を示す（実施例 1、試験例 4)。

[図 7]ペプチド濃度の違いによる蓄積脂肪量を示す (実施例 1、試験例 4)。

符号の説明

[0015] [図 1] 矢印は本発明の His- Pro- lie- Lys- His- Gin- Gly- Leu- Pro- Ginなるアミノ酸配列を示す。

[図 4] 図中 1は本発明の His-Pro-Ile-Lysなるアミノ酸配列を、図中 2は本発明の His -Gin- Gly- Leu- Pro- Ginなるアミノ酸配列を示す。

[図 5] ペプチド消化物 1は本発明の His-Pro-Ile-Lysなるアミノ酸配列を、ペプチド消化物 2は本発明の His-Gln-Gly-Leu-Pro-Glnなるアミノ酸配列を示す。

発明を実施するための最良の形態

[0016] 本発明に用いることのできる His- Pro- lie- Lys- His- Gin- Gly- Leu- Pro- Gln、 His- Pro -Ile-Lys,あるいは His-Gln-Gly-Leu-Pro-Glnで表されるアミノ酸配列からなるぺプチドは、例えばチーズを溶媒に懸濁した後、脱脂、遠心分離によって不溶性物質の除去を行って得ることができる。さらにその得られた画分力タンパク質を除去してもよい。本発明においてチーズを溶媒に懸濁するということは、チーズに溶媒をカ卩えて均質化したり、または溶媒中で破砕したりして、水溶性ペプチド画分を得やすい大きさにすることをいう。溶媒としては、水、リン酸緩衝液等の水性溶媒を用いることができる。その後、透析膜やイオン交換榭脂等によって脱塩を行ってもよいし、さらに、凍結乾燥や噴霧乾燥等によって乾燥させることにより粉末ィ匕してもよい。

[0017] また、式（1)〜（3)で表されるアミノ酸配列からなるペプチドを得るためのチーズ原料、また、本発明のチーズに含まれる成分を有効成分とする血中アディポネクチン濃度増加促進及び Z又は減少抑制剤や血中アディポネクチン濃度増加促進及び Z又は減少抑制用飲食品を得るためのチーズ原料としては、パルメザンチーズ、グリュイエーノレチーズ、マリボーチーズ、ゴーダチーズ、チェダーチーズ、エメンターノレチーズ、エダムチーズ、力マンべ一ノレチーズ、ブリーチーズ、マンステーノレチーズ、ポン' レヴェックチーズ、スチノレトンチーズ、ダナブルーチーズ、ブノレーチーズ等のナチユラルチーズ、及びこれらのナチュラルチーズを原料としたプロセスチーズ等を用いることができる力式（1)〜（3)で表されるアミノ酸配列力なるペプチドを得るためには、熟成度の進んだ乳酸菌熟成型ナチュラルチーズを用いることが望まし、。これらのチーズ自体を使用することもできるし、チーズを溶媒に懸濁した後、脱脂、不溶性物質除去、タンパク質除去等を行った画分を使用することもできる。また、これらの画分を透析膜やゲル濾過、イオン交換等の各種クロマトグラフィーにより精製した画分を使用することもできる。なお、これらの画分については、濃縮や乾燥を行って使用することちでさる。

[0018] さらに、チーズを溶媒に懸濁した後、脱脂、不溶性物質の除去及びタンパク質の除去によって得られる式（1)〜（3)で表されるアミノ酸配列力なるペプチドを含む画分は、 C18カラムを用いた逆相クロマトグラフィーによりさらに精製することも可能である。本ペプチドを含む画分をトリフルォロ酢酸 (TFA)等の酸性条件下あるいは蒸留水等の中性条件下で C18カラムに通した時に、抗酸化活性を有する画分は、カラムに吸着されない透過画分と、カラムに吸着されて 80%ァセトニトリルで溶出されてくる画分に主として分かれる。

さらに、このペプチドを含む画分を蒸留水で溶解した後、 YMC- Pack ODS-A力ラム（4.6mm X 150mm； YMC社）を用、て逆相 HPLCに供してペプチドを分画する。クロマトグラフィーは、溶媒 (A液： 50mM酢酸アンモ-ゥム水溶液； B液： 80%ァセトニトリル）、濃度勾配（12%B→60%B,60min)、流速 0.8ml/min、検出波長 215nmの条件で行うことが望ましい。

[0019] 本発明の式（1)〜（3)で表されるアミノ酸配列からなるペプチド及び該ペプチドを含む画分は、飲食品に配合して飲食品の品質劣化防止に使用することができる。飲食品に配合する場合は、チーズを水中で摩砕した後、脱脂、遠心分離によって不溶性物質の除去を行って、さらにタンパク質を除去することにより得たチーズの水溶性ペプチドをそのまま配合することができるし、透析膜やイオン交換榭脂等によって脱塩を行ったもの、さらに、凍結乾燥や噴霧乾燥等によって乾燥を行い粉末ィ匕したものも配合することができる。また、合成して得られたペプチドについても利用可能である

[0020] 本発明の式（1)〜（3)で表されるアミノ酸配列力なる抗酸ィ匕作用を持つペプチド及び該ペプチドを含む画分は、経口あるいは非経口的に投与して、生体において活性酸素やフリーラジカル等を消去することにより疾病や老化等の進行を防止することができる。また、本発明の式（1)で表されるアミノ酸配列からなるアディポネクチン産生促進作用を持つペプチド及び該ペプチドを含む画分は、経口あるいは非経口的に投与して、生体においてアディポネクチン産生を促進することにより動脈硬化を抑制し、肝臓や筋肉における脂肪の燃焼を促進することができる。経口あるいは非経口的に投与する場合、本発明の抗酸化作用やアディポネクチン産生促進作用を持つペプチド、あるいは、チーズに含まれる成分を有効成分とする血中アディポネクチン濃度増加促進及び Z又は減少抑制剤の剤形としては、錠剤、カプセル剤、細粒剤、散剤、丸剤、トローチ、舌下剤または液剤等の経口投与用の製剤、あるいは、注射剤、座剤等の非経口投与用の製剤を例示することができる。

[0021] 本発明の式（1)〜（3)で表されるアミノ酸配列力なる抗酸ィ匕作用を持つペプチド、あるいは本発明の式（1)で表されるアミノ酸配列力なるアディポネクチン産生促進作用を持つペプチドの経口による投与量は、治療や予防の目的、症状、体重、年齢や性別等を考慮して適宜決定すればよいが、通常、成人 1日あたり、式（1)〜（3)で表されるアミノ酸配列力もなる抗酸ィ匕作用を持つペプチド、あるいは本発明の式（1) で表されるアミノ酸配列力なるアディポネクチン産生促進作用を持つペプチドとして

10 g〜500mg投与すれば、疾病や老化等に悪影響を及ぼす活性酸素やフリーラジカル等による生体の酸ィ匕的障害を抑制する、あるいは、アディポネクチン産生を促進する効果が得られる。このように本発明は低用量で効果がある。

また、本発明のチーズに含まれる成分を有効成分とする血中アディポネクチン増加促進及び Z又は減少抑制剤や血中アディポネクチン増加促進及び Z又は減少抑制用飲食品の投与量は、治療や予防の目的、症状、体重、年齢や性別等を考慮して適宜決定すればよいが、成人の場合、 1食当たり 20〜200g程度のチーズに相当する有効成分を摂取するようにする。

[0022] 本発明の式（1)〜（3)で表されるアミノ酸配列力なるペプチドは、それらを配合した飲食品または飼料を経口摂取することによって生体内で抗酸ィ匕作用あるいはアディポネクチン産生促進作用を発揮するだけでなぐ飲食品または飼料に配合した飲食品または飼料自体の酸ィ匕による劣化をも防ぐ。

また、本発明の血中アディポネクチン濃度増加促進及び Z又は減少抑制剤や血中アディポネクチン濃度増加促進及び Z又は減少抑制用飲食品は、チーズに含まれる成分を有効成分とする。さらに、本発明の血中アディポネクチン濃度増加促進及び Z又は減少抑制剤や血中アディポネクチン増加濃度促進及び Z又は減少抑制用飲食品は、チーズに含まれる血中アディポネクチン濃度増加促進及び z又は減少抑制作用を有する成分を配合する。

本発明の抗酸ィ匕用あるいはアディポネクチン産生促進用飲食品として、また、チーズに含まれる成分を有効成分とする血中アディポネクチン濃度増加促進及び Z又は減少抑制用飲食品としては、、チーズ、バター、乳飲料、清涼飲料、ジュース、ョーグルト、ゼリー、パン、アイスクリーム、麵、ソーセージ、スナック菓子、ケーキ、プリン、ソ一セージ、育児用調製乳や離乳食等を挙げることができる。

[0023] さらに、本発明の式（1)〜（3)で表されるアミノ酸配列からなる抗酸ィ匕作用を持つぺプチドは、各ペプチド 1種だけを有効成分として抗酸化剤としたり、 1種だけを配合して抗酸ィ匕用飲食品または飼料とすることもできるが、各ペプチド 1種以上を有効成分として抗酸化剤としたり、 1種以上を配合して抗酸ィ匕用飲食品または飼料とすることもできる。

[0024] 以下に実施例及び試験例を示し、本発明をより詳細に説明するが、これらは単に例示するのみであり、本発明はこれらによって何ら限定されるものではない。

実施例 1

[0025] (ゴーダチーズのペプチドの調製）

ゴーダチーズ 40gに蒸留水 160mlをカ卩え、ワーリンダブレンダー（日本精機製作所）で 15分間摩砕した後、ポリトロンホモジナイザー（キネマチ力社)で 30秒間さらに破砕した。破砕時に生じた乳脂肪を取り除き、得られたチーズスラリー力も遠心分離 (6,00 0 X g、 20min、 4°C)で不溶物を除き、上清をろ紙 (No.113 ;ワットマン社）によりろ過した。得られたろ過液にエタノールを 70%濃度になるようにカ卩え、 4°Cでー晚静置した後、遠心分離（9,000 X g、 20min、 4°C)により不溶物を除去し、エバポレーターでェタノ一ルを除、た後、凍結乾燥してゴーダチーズの水溶性ペプチド画分を得た。

この水溶性ペプチド画分を蒸留水で溶解した後、 YMC-Pack ODS-Aカラム (Y MC社; 4.6mm X 150mm)を用いて逆相 HPLCに供し、水溶性ペプチド精製画分に分画した。クロマトグラフィーは、溶媒 (A液: 50mM酢酸アンモ-ゥム水溶液; B液: 80 %ァセトニトリル）、濃度勾配（12%B→60%B,60 min)、流速 0.8ml/min、検出波長 21 5nmの条件で行った。結果を図 1に示す。分画した画分の抗酸化活性を以下に示す試験例 1の方法で測定したところ、クロマトグラムの矢印の画分に強い抗酸ィ匕活性が確認された。

得られたゴーダチーズのペプチドにつ!/、て、液体クロマトグラフ質量分析計 (サーモエレクトロン社)を用いて分子量を推定し、ペプチドシークェンサ一（アプライド 'バイオシステムズ社)でアミノ酸配列を解析したところ、図 1の矢印で示される 6番が His-Pr o-Ile-Lys-His-Gln-Gly-Leu-Pro-Glnなる配列であることが確認された。

このようにして得られたペプチドは、そのまま本発明の抗酸化剤あるいはアディポネクチン産生促進剤として利用可能である。

[0026] [試験例 1]

(ペプチドの抗酸ィヒ活性測定）実施例 1で分画したペプチドについて、リノール酸の酸ィ匕物が j8 -カロテンを退色させる作用を利用する方法で抗酸化活性を測定した。すなわち、 j8 -カロテン溶液（lm g/mlクロ口ホルム） 0.5ml、リノール酸溶液（100mg/mlクロ口ホルム） 0.2ml、ツイーン 40 溶液（200mg/mlクロ口ホルム） 1.0mlを 300 mlの三角フラスコに入れ、窒素ガスでクロ口ホルムを完全に除去した後、 100mlの蒸留水をカ卩えて溶解した。さらに、 0.2Mリン酸緩衝液 (PH7.0) 9.0 mlを添加して、リノール酸 · j8 -カロテン溶液を調製した。次に、あらかじめペプチド画分 0.02 mlを分注した 98穴マイクロウェルプレートに、上記のリノ一ル酸 · j8 -カロテン溶液 0.18 mlを加え、直ちに 490 nmの吸光度（S )を測定した。なお

0

、リノール酸 · j8 -カロテン溶液の調製に際しては、 Sが 1.2程度 (1.1〜1.3)になるように

0

-カロテン溶液の添加量を適宜増減した。 S測定後、直ちにマイクロウェルプレート

0

を 50°Cの恒温槽に入れ、 30分間インキュベートした。インキュベート終了後、直ちに吸光度 (S )を測定し、 30分間における 490 nmの吸光度の低下量、 A S = S— S を算

30 0 30 出した。ブランクには試料の代わりに 70%エタノールを用い、同様の操作を行なった。すなわち、リノール酸 · j8 -カロテン溶液を加えた直後の吸光度 (B )、及び 50°C

0 、 30 分間保持した後の吸光度 (B )を測定し、 30分間における 490 nmの吸光度の低下量

30

、 Δ Β = Β— B を求めた。抗酸ィ匕活性は次の式に代入し、抗酸ィ匕率（％)として表し

0 30

た。

[0027] [数 1] 抗酸化率（％) = [ ΔΒ- A S] / ( ΔΒ) Χ ΙΟΟ

[0028] なお、ポジティブコントロールとして、筋肉由来抗酸ィ匕活性ペプチドであるカルノシン（ β - Ala- L- His；ペプチド研究所）を 0.01 μ g/ml、 0.1 μ g/ml、 1 μ g/mlに調製したものを用いた。

[0029] 精製ペプチド及びポジティブコントロールとしてのカルノシンの抗酸ィ匕活性を測定した結果を表 1に示す。

[0030] [表 1] 抗酸化活性（％)

サンプル濃度（yg/ml) 0. 01 0. 1 1 カルノシン（Ala-His) 32. 9 57. 8 78. 3

His-Pro-Ile-Lys-His-Gln-Gly-Leu-Pro-Gln 13. 0 41. 0 64. 6

[0031] 表 1に見られるように、ペプチドを添加すると、濃度依存的な抗酸化活性を示した。

以上、本試験例の結果により His-Pro-Ile-Lys-His-Gln-Gly-Leu-Pro-Glnで表されるアミノ酸配列力なるチーズ由来のペプチドには抗酸ィ匕活性 (ラジカルス力べンジヤー活性)が認められ、活性酸素や過酸化脂質による酸化的細胞障害の予防'改善に有用であることがわ力つた。

実施例 2

[0032] (ペプチドの合成）上記の式（1)で表されるアミノ酸配列力なるペプチドについて、ペプチドシンセサイザ一にて合成を行った。ペプチドシンセサイザー 431 A (アプライド 'バイオシステムズ社）により、パラヒドロキシメチルフエノキシメチルポリスチレン（H MP)榭脂を用い、 9 フルォレニルメチルォキシカルボ-ル（Fmoc)基をァミノ末端の保護基として C末端側力ペプチド鎖を順次延長することにより 0.25mmolスケールで直鎖保護ペプチドを合成した。得られた HMP榭脂結合保護ペプチドをフエノール 1, 2—エタンジチオール、チオア-ノール存在下、トリフルォロ酢酸 (TFA)によりペプチドの HMP榭脂からの切り離しと保護基の除去を同時に行った。減圧濃縮により TFAを除去した後、ェチルエーテルで粗ペプチドを結晶化させ、これを 5%酢酸に溶解し凍結乾燥を行った。

得られた直鎖粗ペプチドを、 YMC- Pack ODS- Aカラム（YMC社; 4.6mm X 150m m)を用いた HPLCに供した。クロマトグラフィーは、溶媒 (A液： 50 mmol酢酸アンモニゥム水溶液； B液： 80%ァセトニトリル）、濃度勾配（12%B→60%B,60 min)、流速 0. 8ml/min、検出波長 215 の条件で行った。得られた直鎖精製ペプチドの純度は、 H PLCによる分析の結果 98%であった。結果を図 2に示す。

[0033] [試験例 2] (合成ペプチドの抗酸化活性測定）

実施例 2で得られたペプチドについて試験例 1と同様の方法で抗酸ィ匕活性を測定した。ポジティブコントロールとして、筋肉由来抗酸ィ匕活性ペプチドであるカルノシン ( j8 - Ala- L- His ;ペプチド研究所)及びカテキン（和光純薬工業社）を 1 m、 lO ^ m, 1 00 m、に調製したものを用いた。合成ペプチドの抗酸ィ匕活性を評価した結果を表 2 及び図 3に示す。表 2及び図 3に示されるように、得られた合成ペプチドに強い抗酸化活性が確認された。

[0034] [表 2] 抗酸化活性（％)

サンプル濃度（iim) 1 10 100 カテキン 52. 65 84. 45 97. 17 カルノシン 7. 07 21. 2 48. 41 合成べプチド 32. 86 61. 13 63. 6 実施例 3

[0035] (トリプシン消化物の調製）

実施例 2で得られたペプチドのトリプシン消化物を調製した。

実施例 2で得られたペプチドおよびトリプシン (シグマアルドリッチジャパン社)を、それぞれ lmg/mlになるように酵素反応溶液（50 mM Tris- HC1、 20mM CaCl、 pH8.0)

2 に溶解した。ペプチド溶液 500 1に、トリプシン溶液を 5 1添加して、 37°Cで 2時間反応させた後、さらにトリプシン溶液 5 1を加えて、 37°Cで 18時間反応させてトリプシン消化物を得た。

このトリプシン消化物を蒸留水で溶解した後、 YMC- Pack ODS-Aカラム（YMC 社; 4.6mm X 150mm)を用いて HPLCに供した。 HPLC分析は実施例 2のトリプシン消化前のペプチドと同じ条件で行った。結果を図 4に示す。図に示されるように 2つのピークに分かれた。

トリプシンで分解された 2つのフラグメント (His-Pro-Ile-Lys、ペプチド 1)及び（His-G ln-Gly-Leu-Pro-Gln,ペプチド 2)に相当する 2つのピークを、それぞれ 10回分回収し、遠心エバポレーターを用いて乾燥して、トリプシン消化物である 2種のペプチドを得た。得られた 2種のペプチド及び分画前のトリプシン消化物の抗酸ィ匕活性を以下に示す試験例 3の方法で測定したところ、図 5に示されるように、合成ペプチドに強い抗酸化活性が確認された。

このようにして得られた抗酸ィ匕作用を持つペプチドは、そのまま本発明の抗酸化剤として利用可能である。

[0036] [試験例 3]

(ペプチドの抗酸ィヒ活性測定）

実施例 3で得られたトリプシン消化物である 2種のペプチド及び分画前のトリプシン消化物について試験例 2と同様にカロテン退色法を用いて抗酸ィ匕活性を測定した。ペプチド濃度はそれぞれのペプチドを 500 μ 1の純水に溶解して、 Micro BCA Protein assay kit (ピアース社)を用いて測定した。ポジティブコントロールとして、試験例 2と同様に、カルノシン（ /3 - Ala- L- His；ペプチド研究所)及びカテキン (和光純薬工業社）を用いた。各フラグメントについて lng/ml、 10ng/mU 100ng/mlの希釈系列を調製し、 βカロテン退色法を用いて抗酸ィ匕活性を評価した。トリプシン消化ペプチドの抗酸ィ匕活性を評価した結果を図 5に示す。図 5に示されるように、得られたトリプシン消化べプチドに強！ヽ抗酸化活性が確認された。

[0037] [試験例 4]

(ペプチドの脂肪細胞投与実験）

実施例 1で得られたチーズから分離されたペプチドについて、初代培養内臓脂肪細胞への投与実験を行った。

ラットの初代培養内臓脂肪細胞 (VAC01、セルガレージ社)及び内臓脂肪細胞分ィ匕誘導培地 (セルガレージ社)を用いて実験を行った。セルガレージ社のプロトコルに従つて凍結保存した細胞を融解し、 24穴プレートに播種した日を 0日目とし、 2日目、 5日目、 7日目に合成ペプチドを溶解した培地 (ペプチド濃度: 100 Μ、 50 Μ、 10 Μ、 0 μ Μ)を加え、 8日間培養した。 5日目、 7日目、 8日目に培養上清を回収し、アディポネクチン濃度を測定した。また、 8日目に細胞を回収し、細胞内のグリセロール 3-リン酸脱水素酵素 (GPDH)酵素活性及び各ゥエルの DNA量、細胞内蓄積脂肪量を測定した。 GPDHはグルコースからトリグリセリドを合成する際に働く酵素で、成熟脂肪細胞が発現する。今回の培養系では、脂肪前駆細胞を分化させると同時に本発明のぺプチドを投与してその影響を見た。

DNA量は、セルガレージ社の DNA定量キットを用い、定量を行った。

細胞内のグリセロール 3-リン酸脱水素酵素（GPDH)酵素活性は、セルガレージ社の GPDH活性測定キットを用い、セルガレージ社プロトコルに従って測定を行った。測定結果は各ゥエルカゝら抽出した DNA量で標準化した。

アディポネクチン濃度の測定は、大塚製薬社のアディポネクチン ELISAキットを用い、培養上清中のアディポネクチン濃度を測定した。測定結果は各ゥエル力抽出した DNA量で標準化した。

細胞内蓄積脂肪の定量は、セルガレージ社の脂肪染色キットを用い、オイルレッド 0による脂肪染色および吸光度測定による蓄積脂肪定量を行った。

(ペプチドの脂肪細胞投与実験結果）

各ゥエルの細胞由来 DNAを定量した結果、 Student's t-testでは、本発明ペプチド無添加群と添加群の細胞 DNA量に有意差は検出されな力つた。

GPDH活性 (単位 DNA量あたり)を測定した結果、各ゥエルの細胞 DNA量で標準化した GPDH活性において、ペプチド無添加群よりも本発明ペプチド 10 Mまたは 50 M添加群で有意に高い活性が見られた。ペプチド 100 M添加群と、無添加群との有意な差は検出されなかった。

培養日数によるアディポネクチン濃度変化の測定結果では、培養 7日目でアディポネクチン産生量は最大になるが、 8日目では急激に減少することがわ力つた。培養上清中のアディポネクチン濃度が最も高力つた 7日目で、投与したペプチド濃度の違いによるアディポネクチン産生量の違、(単位 DNA量あたり)を図 6に示す。

ペプチド無添加で培養した細胞よりもペプチドを添カ卩した細胞のほうが、アディポネクチンを有意に多く産生していた。この傾向は、特にペプチド濃度 10 Mもしくは 50 Mで添加したものにおいて顕著に見られた。この結果は、このチーズ由来のぺプチドがアディポネクチン濃度増加促進及び Z又は減少抑制作用をもたらす成分の一つであることを示す。

しかし、本発明におけるアディポネクチン濃度増加促進及び Z又は減少抑制作用の有効成分はこれらのペプチドに限定されるものではなぐこの他にもさまざまな有効成分が含まれて、ると考えられる。

培養 8日目に、オイルレッド 0による脂肪染色および吸光度測定による蓄積脂肪量の定量を行った結果を図 7に示す。

脂肪細胞の染色には固定が必要であるため、脂肪定量を行つたゥエルの細胞数（細胞 DNA量)を定量することはできない。しかし、同じ条件で培養した細胞の DNA定量結果から、ペプチド添カ卩による細胞数への影響が見られな力つたことから、各ゥェルにはほぼ同数の細胞が存在すると推測される。 Studenfst-testでは、ペプチド無添加で培養したものと、ペプチドを加えて培養したものの脂肪蓄積量に有意な差は見られな力つた力ペプチドを 100 M添カ卩した細胞では、図 7に示されるように脂肪蓄積量がやや減少する傾向が見られた。

(ペプチドの脂肪細胞投与実験まとめ）

脂肪前駆細胞に本発明のペプチドを 10〜50 μ Μ添加して培養すると、

(1) GPDH活性が上がり、

(2)アディポネクチン産生量も増加するが、

(3)脂肪蓄積量には変化がな力つた。

この場合、ペプチド添カ卩によって脂肪前駆細胞力脂肪細胞への分ィ匕が促進されてヽるか、もしくは分化した熟成脂肪細胞における脂肪合成活性が促進されてヽると考えられる。し力しながら、ペプチド無添加の細胞と脂肪蓄積量には差がな力つたことから、何らかの別の分子メカニズムにより、合成された脂肪は分解されている可能性がある。アディポネクチンは、成熟脂肪細胞力も分泌される善玉サイト力インであり、本発明のペプチド添カ卩によってこのアディポネクチン産生促進効果が確認された。以上のことから、本発明のペプチドには、脂肪前駆細胞力脂肪細胞への機能的分化を促し、アディポネクチンの産生量を増加させる作用があることが認められ、また、細胞への脂肪蓄積は抑制する効果がある可能性が示唆された。

アディポネクチンには動脈硬化抑制作用などのほかに、肝臓や筋肉における脂肪燃焼を促進する効果があると言われている。本発明のペプチドには、アディポネクチンを産生しやすい脂肪細胞をつくり、メタボリックシンドロームを予防する働きがあることが考えられる。

一方、脂肪前駆細胞に本発明のペプチドを 100 M添加して培養すると、

(1) GPDH活性には変化がなぐ

(2)アディポネクチン産生量は増加し、

(3)脂肪蓄積量には変化がない (有意な差はないが、減少傾向が見られるようである

) o

これらの結果から、脂肪細胞に対する本発明のペプチドの効果には濃度によって違いがあり、至適濃度が存在する可能性が示唆された。いずれにしても、本発明のペプチド添カ卩により、アディポネクチン産生量を促進する作用が確認された。また、脂肪蓄積量抑制効果があることには違いなぐ本発明ペプチドにメタボリックシンドローム予防効果がある可能性が示された。

なお、この His-Pro-Ile-Lys-His-Gln-Gly-Leu-Pro-Glnで表されるアミノ酸配列からなるペプチドのトリプシン分解物である His-Pro-Ile-Lys及び His-Gln-Gly-Leu-Pro- Glnで表されるアミノ酸配列力なるペプチドにつ、ても、同様のアディポネクチン産生を促進する作用が確認された。

実施例 4

[0040] (細菌熟成タイプのチーズの調製）

原料乳を加熱殺菌（75°C、 15秒間）した後、 30°Cまで冷却し、 0.01%塩ィ匕カルシゥムを添加した。さらに、市販のチーズ製造用乳酸菌スターター（クリスチャン 'ハンセン社） 1.5%及び多糖産生乳酸菌のラクトバチルス ·ヘルべチカス（L. helveticus) SBT21 71 (ΡΕΚΜΡ-14381) 3⁰/(^ ¾υ、さらにレンネット 0.003%を添カ卩して、乳を凝固させた。このようにして得られた凝乳をカッティングし、 ρΗが 6.2〜6.1となるまで撹拌してホエーを排出して、カード粒を得た。そして、このカード粒を型詰めして圧搾し、さらに加塩して、 10°Cで熟成させ、ゴーダチーズタイプの硬質ナチュラルチーズを調製した。この硬質ナチュラルチーズ（12ヶ月熟成）をミンチ器 (GM-DX、日本キャリア社製）によりミンチし、凍結乾燥を行った。その後、コーヒーミルにより微細化し、チーズ粉を得た。

[0041] [試験例 5] (血中アディポネクチン濃度増加促進及び z又は減少抑制作用の確認）実施例 4で得たチーズ粉を使用して、血中アディポネクチン濃度増加促進及び Z 又は減少抑制作用を確認した。動物実験は 1群 8匹とし、チーズ粉を配合した高脂肪飼料を投与した群 (チーズ食群)、チーズ粉を配合した高脂肪飼料を投与せずコントロール飼料を投与した群 (コントロール食群）として行った。コントロール飼料はチーズの成分分析の結果 (表 3参照）を元に、一般成分、主要ミネラル、ビタミン E —トコフエロール)の含有量を、チーズ粉を配合した高脂肪飼料にそろえ、タンパク質源としてミルクカゼイン、脂質源としてバターオイルを用いた。チーズ粉を配合した高脂肪飼料では、タンパク質、脂質とも、チーズ成分のみでまかなった。

[0042] [表 3]

—チーズの成分

タンパク質 44. 8 (g/100g)

脂肪 43. 4

灰分 6. 3

ナトリウム 1050 (mg/100g)

カリウム 130

カルシウム 1190

マグネシウム 41

リン 850

鉄 0. 22

α—トコフエ口ール 0. 9 (mg/100g)

[0043] 動物実験は、飼育後 4週目まではコントロール飼料を与え、その後 2群に分けて 8週目までコントロール飼料もしくはチーズ粉を配合した高脂肪飼料を与えた。 4週目、 8 週目に採血を行い、マウス Zラットアディポネクチン ELISAキット（大塚製薬社製)を用いて血中アディポネクチン濃度を測定した。また、 8週目における血中トリグリセリド濃度及び血中総コレステロール濃度を測定した。

[0044] 結果を表 4及び表 5に示す。これによるとコントロール食群の血中アディポネクチン濃度は時間の経過によって減少しているのに対し、チーズ食群ではむしろ増加することが明ら力となった。つまり、チーズを摂取することにより、血中アディポネクチン濃度が増加若しくは低下抑制されることが分った。また、血中トリグリセリド濃度はコントロール食群に比べ、チーズ食群では有意に低下していた。一方、血中総コレステロール濃度においても有意差こそ見られな力つたが、チーズ食群で低下する傾向があることが分った。

[0045] [表 4] 血中アディポネクチン濃度の変化

血中アディポネクチン濃度（ix g /ml)

食群変化率（％)

4週間 8週間

コント口一ル食群 11. 19 10. 40 93. 72

チーズ食群 10. 41 13. 14 129. 67

[0046] [表 5] 血中トリグリセリド濃度及ぴ血中総コレステロール濃度

トリグリセリド濃度総コレステロ

食群一ノレ濃度

(mg/dl) (mg/dl)

コントロール食群 111. 75 80. 38 チーズ食群 75. 63 68. 63 実施例 5

[0047] (錠剤の製造）

実施例 1で得られた抗酸化ペプチド（His-Pro-Ile-Lys-His-Gln-Gly-Leu-Pro-Gln

) 20重量％、乳糖 (DMV社) 46重量％、結晶セルロース (和光純薬工業社) 31重量％

、水 3重量部を十分混合した後、打錠機 (富士薬品機械社製)により打錠し、本発明の抗酸化用錠剤を製造した。

実施例 6

[0048] (果汁飲料の製造）

表 6に示した組成で各成分を混合し、容器に充填した後、加熱殺菌して、本発明の実施例 2で得られた合成抗酸化ペプチド（His-Pro-Ile-Lys-His-Gln-Gly-Leu-Pro- Gin)を配合した本発明の抗酸ィ匕用果汁飲料を製造した。

[0049] [表 6] 混合異性化糖 15. 4 (重量％) 果汁 10. 0

クェン酸 0. 5

抗酸化ぺプチド

(His-Pro-Ile-Lys-His-Gln-Gly-Leu-Pro-Gl n) 0. 1

香料 0. 2

水 73. 8 実施例 7

[0050] (清涼飲料水の製造）

表 7に示した組成で各成分を混合し、容器に充填した後、加熱殺菌して、本発明の実施例 3で得られたトリプシン消化ペプチド (His-Gln-Gly-Leu-Pro-Gln)を配合した本発明の抗酸化用清涼飲料水を製造した。

[0051] [表 7] マノレチトーノレ 7. 5 (重量％) 50%乳酸溶液 0. 12

抗酸化ぺプチド（His~Gln- Gly-Leu_Pro- Gin) 0. 1

香料 0. 2

水 92. 08 実施例 8

[0052] (清涼飲料水の製造）

表 8に示した組成で各成分を混合し、容器に充填した後、加熱殺菌して、本発明の実施例 3で得られたトリプシン消化ペプチド (His-Gln-Gly-Leu-Pro-Gln及び His-Pro -Ile-Lys)を配合した本発明の抗酸ィ匕用清涼飲料水を製造した。

[0053] [表 8] マノレチト一ノレ

50%乳酸溶液 0. 12

抗酸ィヒペプチド (His- -Pro-Ile-Lys) 0. 05

抗酸化ペプチド (His- -Gln-Gl y-Leu-Pro-Gl n) 0. 05

香料 0. 2

水 92. 08 実施例 9

表 9に示す組成のドウを作成し、成形した後、焙焼して本発明の実施例 1で得られたペプチド（His- Pro- lie- Lvs-His-Gln-Gly- Leu- Pro-Gin )を配合した本発明の抗酸化用ビスケットを製造した。

[表 9] 小麦粉 51. 0 (重量％) 砂糖 20. 0

食塩 0. 5

マーガリン 12. 5

卵 12. 5

水 2. 5

ミネラル混合物 0. 8

抗酸化ペプチド (実施例 1 ) 0. 2 実施例 10

[0056] 表 10に示す組成で各成分を混合し、本発明の実施例 1で得られた抗酸化ペプチド

(His-Pro-Ile-Lys-His-Gln-Gly-Leu- Pro-Gin )を配合した本発明のィヌ飼育用飼料を製造した。

[0057] [表 10] 大豆粕 12. 0 (重量％) 脱脂粉乳 14. 9

大豆油 4. 0

コーン油 2. 0

パ―ム油 28. 0

とうもろこし澱粉 15. 0

小麦粉 8. 0

ふすま 2. 0

ビタミン混合物 9. 0

ミネラル混合物 2. 0

セノレ口一ス 3. 0

抗酸化ペプチド (実施例 1 ) 0. 1 実施例 11

[0058] (錠剤の製造）

実施例 1で得られた抗酸化ペプチド（His-Pro-Ile-Lys-His-Gln-Gly-Leu-Pro-Gln) 20重量％、乳糖 (DMV社) 46重量％、結晶セルロース（和光純薬工業社) 31重量％、水 3重量部を十分混合した後、打錠機 (富士薬品機械社)により打錠し、本発明のアディポネクチン産生促進用錠剤を製造した。

実施例 12

[0059] (果汁飲料の製造）

表 11に示した組成で各成分を混合し、容器に充填した後、加熱殺菌して、本発明の実施例 2で得られた合成ペプチド（His- Pro- lie- Lys- His- Gin- Gly- Leu- Pro- Gin) を配合した本発明のアディポネクチン産生促進用果汁飲料を製造した。

[0060] [表 11] 混合異性化糖 15. 4 (重量％) 果汁 10. 0

クェン酸 0. 5

ペプチド

(His-Pro-Ile-Lys-His-Gln-Gly-Leu-Pro-Gl n) 0. 1

香料 0. 2

水 73. 8 実施例 13

[0061] (チーズ羊羹の製造）

牛乳 200mlと粉寒天 2.5gをよく混ぜ加熱し、寒天を溶解後、砂糖 50gを加えて煮溶かし、軽く沸騰させた。さら〖こ、チーズに含まれる有効成分を配合する目的でゴーダチーズ 150gを 1ロ大にちぎってカ卩え、粗熱を取り、型に流し冷蔵庫で固め、血中アディポネクチン濃度増加促進及び Z又は減少抑制用チーズ羊羹を得た。

実施例 14

[0062] (粉末チーズの製造）

チーズに含まれる有効成分を配合する目的でゴーダチーズ 10kgをミートチョッパーで細断し、溶融塩 (リン酸 Naを 1.2%、ポリリン酸 Naを 1%)、乳化剤（シュガーエステルを 0.6%)と共に 90°Cの熱水 5kgが入っている溶解タンク中に投入して pH6.2に調整した後、撹拌、蒸気吹き込みにより乳化液を調製した。この乳化液を均質してフィルターでろ過し、噴霧乾燥を行い、血中アディポネクチン濃度増加促進及び Z又は減少抑制用粉末チーズを得た。

実施例 15

[0063] (スティック状栄養健康食品の製造）

実施例 15で得られた血中アディポネクチン濃度増加促進及び Z又は減少抑制用粉末チーズ 100gと、ビタミン C40g、グラニュー糖 100g、コーンスターチと乳糖の等量混合物 60gを混合し袋に詰め、血中アディポネクチン濃度増加促進及び Z又は減少抑制用のスティック状栄養健康食品を 100袋製造した。

Claims

請求の範囲

[I] 次の式（1)で表されるアミノ酸配列力なる抗酸ィ匕作用を持つペプチド。

His- Pro- lie- Lys- His- Gin- Gly- Leu- Pro- Gin 式（ 1 )

[2] 次の式（2)で表されるアミノ酸配列力なる抗酸ィ匕作用を持つペプチド。

His- Pro- lie- Lys 式（2)

[3] 次の式（3)で表されるアミノ酸配列力なる抗酸ィ匕作用を持つペプチド。

His- Gin- Gly- Leu- Pro- Gin 式（3)

[4] 乳タンパク質に由来する請求項 1〜3のいずれかに記載のアミノ酸配列力なる抗酸化作用を持つペプチド。

[5] 請求項 1〜4のいずれかに記載の 1以上のペプチドを有効成分とする抗酸化剤。

[6] 請求項 1〜4のいずれかに記載の 1以上のペプチドを配合した抗酸ィ匕用飲食品または飼料。

[7] 次の式（1)で表されるアミノ酸配列力なるアディポネクチン産生促進作用を持つぺプチド。

His- Pro- lie- Lys- His- Gin- Gly- Leu- Pro- Gin 式（ 1 )

[8] 乳タンパク質に由来する請求項 7に記載のアミノ酸配列力もなるアディポネクチン産生促進作用を持つペプチド。

[9] 請求項 7または 8に記載のペプチドを有効成分とするアディポネクチン産生促進剤。

[10] 請求項 7または 8に記載のペプチドを配合したアディポネクチン産生促進用飲食品または飼料。

[I I] チーズに含まれる成分を有効成分とする血中アディポネクチン濃度増加促進及び Z又は減少抑制剤。

[12] チーズ自体を使用した請求項 11記載の血中アディポネクチン濃度増加促進及び Z又は減少抑制剤。

[13] チーズに含まれる成分が次の式（1)で表されるアミノ酸配列力なるチーズ由来のペプチドである請求項 11記載の血中アディポネクチン濃度増加促進及び Z又は減少抑制剤。

His- Pro- lie- Lys- His- Gin- Glv- Leu- Pro- Gin 式 (1)

[14] チーズに含まれる成分を配合した血中アディポネクチン濃度増加促進及び Z又は減少抑制用飲食品。

[15] チーズ自体を配合した請求項 14記載の血中アディポネクチン濃度増加促進及び

Z又は減少抑制用飲食品。

[16] チーズに含まれる成分が次の式（1)で表されるアミノ酸配列力なるチーズ由来のペプチドである請求項 14記載の血中アディポネクチン濃度増加促進及び Z又は減少抑制用飲食品。

His- Pro- lie- Lys- His- Gin- Glv- Leu- Pro- Gin 式 (1)