WO2007142323A1 - 側鎖にスピロ環構造を有する新規インダゾール誘導体 - Google Patents

Description

明 細 書

側鎖にスピロ環構造を有する新規インダゾール誘導体

技術分野

[0001] 本発明は医薬として有用な、側鎖にスピロ環構造を有する新規インダゾール誘導 体又はその塩に関する。本発明に係るインダゾール誘導体は、 Rhoキナーゼ阻害作 用を有し、 Rhoキナーゼが関与する疾患、例えば、緑内障等の眼疾患治療剤として 有用である。

背景技術

[0002] 低分子量 GTP結合タンパク質である Rhoは種々の細胞膜受容体からのシグナル により活性化される。活性化された Rhoは、 Rhoキナーゼ情報伝達系及びァクトミオ シン情報伝達系を介して、平滑筋収縮、細胞の形態変化、細胞運動、細胞分裂、細 胞間接着、血小板凝集、白血球凝集、癌細胞の浸潤'亢進等、種々の細胞現象の 分子スィッチとして機能する。

[0003] また、これらの細胞現象が、高血圧症、狭心症、喘息、末梢循環障害、早産、動脈 硬化症、癌、炎症性疾患、 自己免疫疾患、 AIDS,受精及び受精卵の着床、骨粗鬆 症、脳機能障害、細菌の消化管障害、緑内障、網膜症等の疾患に深く関与している ことが知られている。

[0004] したがって、 Rhoを阻害することで、 Rhoが関与する前記疾患の予防及び/又は治 療が可能になると考えられている。

[0005] 一方、 Rhoを介する情報伝達系の下流に存在する Rhoキナーゼを阻害することに よっても、 Rhoによる種々の細胞現象を抑制できることが知られている。

[0006] すなわち、 Rhoキナーゼを阻害する化合物は、 Rhoが関与する前記疾患、例えば 、高血圧症、狭心症、喘息、末梢循環障害、早産、動脈硬化症、癌、炎症性疾患、 自己免疫疾患、 AIDS,受精及び受精卵の着床、骨粗鬆症、脳機能障害、細菌の消 化管障害、緑内障、網膜症等の有効な予防及び/又は治療剤となると考えられてい る（特許文献 1)。

[0007] Rhoキナーゼ阻害剤は、一般的に Rhoの活性化に伴い活性化されるセリン/スレ ォニンキナーゼの阻害剤として定義されている。その Rhoキナーゼ阻害剤には、 RO

Κ α (ROCK— 11)、 R〇K i3 (ROCK— I、 pl60ROCK：)、その他のセリン/スレオニ ンキナーゼ活性を有するタンパク質を阻害する化合物等が含まれる。

[0008] 公知の Rhoキナーゼ阻害剤としては、特許文献 1に開示されてレ、るアミド誘導体、 特許文献 2、非特許文献 1及び特許文献 3に開示されているイソキノリンスルホニル 誘導体、特許文献 4に開示されているヘテロサイクルァミノ誘導体、特許文献 5及び 特許文献 6に開示されているインダゾール誘導体、特許文献 7及び特許文献 8に開 示されているキナゾリン誘導体等が挙げられる。

[0009] また、 Rhoキナーゼ阻害剤が緑内障の治療剤として有用であることが、特許文献 6

、特許文献 9及び特許文献 10に開示されている。

[0010] し力、しながら、上記いずれの文献にも本発明に係る側鎖にスピロ環構造を有するィ ンダゾール誘導体にっレ、ての具体的な開示はなレ、。

非特許文献 1 : Nature, 389, 990- 994 (1997)

特許文献 1：国際公開 WO98/06433号パンフレット

特許文献 2：国際公開 W097/23222号パンフレット、

特許文献 3 :国際公開 WO99/64011号パンフレット

特許文献 4 :国際公開 WO2001/56988号パンフレット

特許文献 5：国際公開 WO2002/100833号パンフレット

特許文献 6：国際公開 WO2005/035506号パンフレット

特許文献 7：国際公開 WO2002/076976号パンフレット

特許文献 8：国際公開 WO2002/076977号パンフレット

特許文献 9 :国際公開 WO2000Z09162号パンフレット

特許文献 10 :国際公開 WO2000Z57914号パンフレット

発明の開示

発明が解決しょうとする課題

[0011] 医薬として有用な、側鎖にスピロ環構造を有する新規インダゾール誘導体を創製す ること、また、その誘導体の新たな薬理作用を見出すことは非常に興味深い課題であ る。 課題を解決するための手段

[0012] 本発明者等は、上記の課題を解決するために側鎖にスピロ環構造を有する新規ィ ンダゾール誘導体（以下、本インダゾール誘導体とする）の合成研究を行レ、、新規化 合物を創製することに成功した。

[0013] また、本インダゾール誘導体の医薬としての有用性を種々検討したところ、本インダ ゾール誘導体は Rhoキナーゼ阻害作用を有し、 Rhoキナーゼが関与する疾患の治 療剤として有用であることを見出した。

[0014] さらに、本インダゾール誘導体の Rhoキナーゼが関与する具体的な疾患への適用 を検証するために、本インダゾール誘導体の眼圧下降作用についても検討した。そ の結果、本インダゾール誘導体は優れた眼圧下降作用を有しており、緑内障等の眼 疾患治療剤として有用であることも併せて見出し、本発明を完成させた。

[0015] 本発明は下記一般式 [I]で表される化合物又はその塩 (以下、特記なき限り『本発 明化合物』とする)及び本発明化合物を含有する医薬組成物に関する。詳しくは、本 発明化合物を有効成分とする Rhoキナーゼ阻害剤に関する発明であり、より具体的 には、緑内障等の眼疾患治療剤に関する発明である。

[0016] 本発明化合物は、下記一般式 [I]に示されているとおり、 X環の側鎖にスピロ環構造 の置換基を有する点に化学構造的特徴を有する。

[式中、環 Xはベンゼン環、又はピリジン環を示し；

R¹と R²は同一又は異なって、ハロゲン原子、水素原子、ヒドロキシ基、置換若しくは無 置換アルコキシ基、置換若しくは無置換アルケニルォキシ基、置換若しくは無置換ァ ルキニルォキシ基、置換若しくは無置換シクロアルキルォキシ基、置換若しくは無置 換シクロアルケニルォキシ基、置換若しくは無置換ァリールォキシ基、置換若しくは 無置換アルキル基、置換若しくは無置換アルケニル基、置換若しくは無置換アルキ ニル基、置換若しくは無置換シクロアルキル基、置換若しくは無置換シクロアルケ二 ル基、置換若しくは無置換ァリール基、カルボキシ基又はそのエステル若しくはその アミド、ヒドロカルボニル基、置換若しくは無置換アルキルカルボニル基、置換若しく は無置換ァリールカルボニル基、アミノ基、置換若しくは無置換アルキルアミノ基、置 換若しくは無置換ァリールアミノ基、メルカプト基、置換若しくは無置換アルキルチオ 基、置換若しくは無置換ァリールチオ基、スルフィン酸基又はそのエステル若しくは そのアミド、ヒドロスルフィニル基、置換若しくは無置換アルキルスルフィニル基、置換 若しくは無置換ァリールスルフィニル基、スルホン酸基又はそのエステル若しくはそ のアミド、ヒドロスルホニル基、置換若しくは無置換アルキルスルホニル基、置換若し くは無置換ァリールスルホニル基、ニトロ基、シァノ基、及び置換若しくは無置換単環 式複素環からなる群より選択される 1又は複数の基を示し；

R³はハロゲン原子、水素原子、ヒドロキシ基、置換若しくは無置換アルコキシ基、置 換若しくは無置換ァリールォキシ基、置換若しくは無置換アルキル基、及び置換若し くは無置換ァリール基からなる群より選択される 1又は複数の基を示し；

R⁴と R⁵は同一又は異なって、ハロゲン原子、水素原子、及び置換又は無置換アルキ ル基からなる群より選択される 1又は複数の基を示し；

R⁶と R⁷は同一又は異なって、水素原子、置換又は無置換アルキル基、及び置換又 は無置換ァリール基からなる群より選択される基を示し；

R⁶と R⁷は一緒になつて単環式複素環を形成してもよく；

m、 n、 p及び qは、同一又は異なって 0〜3の整数を示す、但し、 mと nの合計が 1以 上の整数であり、かつ、 pと qの合計が 1以上の整数である。以下、同じ。 ]

発明の効果

本発明は医薬として有用な、側鎖にスピロ環構造を有する新規インダゾール誘導 体又はその塩を提供する。本発明に係るインダゾール誘導体は、優れた Rhoキナー ゼ阻害作用を有し、 Rhoキナーゼが関与する疾患、例えば、高血圧症、狭心症、喘 息、末梢循環障害、早産、動脈硬化症、癌、炎症性疾患、自己免疫疾患、 AIDS, 受精及び受精卵の着床、骨粗鬆症、脳機能障害、細菌の消化管障害、緑内障、網 膜症等の治療剤として有用であることが期待される。

発明を実施するための最良の形態

[0019] 本明細書中で規定した各環、原子又は基について以下に詳しく説明する。

[0020] 『シクロアルカン環』とは、炭素原子数 3〜8個のシクロアルカン環を示す。具体例と して、シクロプロパン、シクロブタン、シクロペンタン、シクロへキサン、シクロヘプタン、 シクロオクタン等が挙げられる。

[0021] 『単環式複素環』とは、窒素原子、酸素原子及び硫黄原子から選択される 1若しくは 複数のへテロ原子を環内に有する飽和又は不飽和の単環式複素環を示す。

[0022] 飽和の単環式複素環の具体例として、窒素原子を環内に有するピロリジン、ビラゾリ ジン、イミダゾリジン、トリァゾリジン、ピぺリジン、へキサヒドロピリダジン、へキサヒドロ ピリミジン、ピぺラジン、ホモピぺリジン、ホモピぺラジン等力 S、酸素原子を環内に有す るテトラヒドロフラン、テトラヒドロピラン等が、硫黄原子を環内に有するテトラヒドロチォ フェン、テトラヒドロチォピラン等が、窒素原子と酸素原子を環内に有するォキサゾリ ジン、イソォキサゾリジン、モルホリン等が、窒素原子と硫黄原子を環内に有するチア ゾリジン、イソチアゾリジン、チオモルホリン等が挙げられる。

[0023] 不飽和の単環式複素環の具体例として、窒素原子を環内に有するジヒドロピロール 、ピロ一ノレ、ジヒドロピラゾーノレ、ピラゾーノレ、ジヒドロイミダゾーノレ、イミダゾーノレ、ジヒ ドロトリァゾール、トリァゾール、テトラヒドロピリジン、ジヒドロピリジン、ピリジン、テトラヒ ドロピリダジン、ジヒドロピリダジン、ピリダジン、テトラヒドロピリミジン、ジヒドロピリミジン 、ピリミジン、テトラヒドロピラジン、ジヒドロピラジン、ピラジン等力 酸素原子を環内に 有するジヒドロフラン、フラン、ジヒドロピラン、ピラン等が、硫黄原子を環内に有するジ ヒドロチォフェン、チォフェン、ジヒドロチォピラン、チォピラン等力 S、窒素原子と酸素 原子を環内に有するジヒドロォキサゾール、ォキサゾール、ジヒドロイソォキサゾール 、イソォキサゾール、ジヒドロォキサジン、ォキサジン等が、窒素原子と硫黄原子を環 内に有するジヒドロチアゾール、チアゾール、ジヒドロイソチアゾール、イソチアゾール 、ジヒドロチアジン、チアジン等が挙げられる。 [0024] 『ハロゲン原子』とは、フッ素、塩素、臭素又はヨウ素を示す。

[0025] 『アルコキシ』とは、炭素原子数 1〜6個の直鎖又は分枝のアルコキシを示す。具体 例として、メトキシ、エトキシ、 n—プロポキシ、 n—ブトキシ、 n—ペントキシ、 n—へキ シルォキシ、イソプロポキシ、イソブトキシ、 sec—ブトキシ、 tert—ブトキシ、イソペント キシ等が挙げられる。

[0026] 『ァルケニルォキシ』とは、炭素原子数 2〜8個の直鎖又は分枝のアルケニルォキシ を示す。具体例として、ビュルォキシ、ァリルォキシ、 1 _プロぺニルォキシ、 3—ブテ ニルォキシ、 3 _ペンテニルォキシ、 4 _へキセニルォキシ、 5 _ヘプテュルォキシ、 7—オタテュルォキシ、 1—メチルビニルォキシ等が挙げられる。

[0027] 『アルキニルォキシ』とは、炭素原子数 2〜8個の直鎖又は分枝のアルキニルォキシ を示す。具体例として、ェチュルォキシ、 2 _プロピニルォキシ、 2—ブチュルォキシ 、 3 _ペンチニルォキシ、 4 _へキシュルォキシ、 5 _ヘプチュルォキシ、 7—ォクチ ニルォキシ、 2—メチルブチェルォキシ等が挙げられる。

[0028] 『シクロアルキルォキシ』とは、炭素原子数 3〜8個のシクロアルキルォキシを示す。

具体例として、シクロプロピルォキシ、シクロブチルォキシ、シクロペンチルォキシ、シ クロへキシルォキシ、シクロへプチルォキシ、シクロォクチルォキシ等が挙げられる。

[0029] 『シクロアルケニルォキシ』とは、炭素原子数 3〜8個のシクロアルケ二ルォキシを示 す。具体例として、シクロプロべニルォキシ、シクロブテニルォキシ、シクロペンテニル ォキシ、シクロへキセニルォキシ、シクロへプテニルォキシ、シクロオタテニルォキシ 等が挙げられる。

[0030] 『ァリールォキシ』とは、炭素原子数が 6〜： 14個の単環式又は 2環式若しくは 3環式 の縮合多環式芳香族炭化水素ォキシを示す。具体例としてフエノキシ、ナフチルォ キシ、アントリルォキシ、フエナントリルォキシ等が挙げられる。

[0031] 『アルキル』とは、炭素原子数:!〜 6個の直鎖又は分枝のアルキルを示す。具体例と して、メチノレ、ェチル、 n—プロピル、 n—ブチル、 n—ペンチル、 n—へキシル、イソプ 口ピル、イソブチル、 sec—ブチル、 tert—ブチル、イソペンチル等が挙げられる。

[0032] 『ァルケニル』とは、炭素原子数 2〜8個の直鎖又は分枝のアルケニルを示す。具体 例として、ビュル、ァリノレ、 1 _プロぺニル、 3—ブテュル、 3 _ペンテニル、 4_へキセ ニル、 5—へプテニル、 7—ォクテニル、 1ーメチルビニル等が挙げられる。

[0033] 『アルキニル』とは、炭素原子数 2〜8個の直鎖又は分枝のアルキニルを示す。具体 例として、ェチェル、 2—プロピニル、 2—ブチニル、 3—ペンチニル、 4一へキシニル

、 5 _ヘプチュル、 7—オタチュル、 2—メチルブチュル等が挙げられる。

[0034] 『シクロアルキル』とは、炭素原子数 3〜8個のシクロアルキルを示す。具体例として

、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロへキシル、シクロへプチル、シ クロォクチル等が挙げられる。

[0035] 『シクロアルケニル』とは、炭素原子数 3〜8個のシクロアルケニルを示す。具体例と して、シクロプロぺニノレ、シクロブテニノレ、シクロペンテ二ノレ、シクロへキセニノレ、シクロ ヘプテュル、シクロオタテュル等が挙げられる。

[0036] 『ァリール』とは、炭素原子数 6〜： 14個の単環式又は 2環式若しくは 3環式の縮合多 環式芳香族炭化水素を示す。具体例として、フヱニル、ナフチル、アントリル、フエナ ントリル等が挙げられる。

[0037] 『カルボキシ基のエステル』とは、カルボキシ基とアルキルアルコール、ァリールアル コール等とからなるエステルを示す。アルキルアルコールの具体例として、メタノール 、エタノール、プロパノール、ブタノール等が挙げられ、ァリールアルコールの具体例 として、フエノール、ナフトール等が挙げられる。

[0038] 『カルボキシ基のアミド』とは、カルボキシ基とアンモニア、 1級又は 2級ァミン等とか らなるアミドを示す。アミンはアルキルァミンでもァリールァミンでもよぐアルキルアミ ンの具体例として、メチルァミン、ェチルァミン、ェチルメチルァミン、ジメチルァミン、 ジェチルァミン、ジへキシルァミン等が挙げられ、ァリールァミンの具体例として、ァニ リン、ナフチルァミン、メチルフエニルァミン、ェチルフエニルァミン、ジフエニルァミン 等が挙げられる。

[0039] 『アルキルカルボニル』とは、炭素原子数 2〜7個の直鎖又は分枝のアルキルカルボ ニルを示す。具体例として、メチルカルボニル、ェチルカルボニル、 n_プロピルカル ボニノレ、 n—ブチノレカノレボニノレ、 n_ペンチノレカノレボニノレ、 n_へキシノレカノレボニノレ、 イソプロピルカルボニル、イソブチルカルボニル、 see—ブチルカルボニル、 tert—ブ チルカルボニル、イソペンチルカルボニル等が挙げられる。 [0040] 『ァリールカルボニル』とは、炭素原子数が 7〜： 15個の単環式又は 2環式若しくは 3 環式の縮合多環式芳香族炭化水素カルボニルを示す。具体例としてフエニルカルボ ニル、ナフチルカルボニル、アントリルカルボニル、フエナントリルカルボニル等が挙 げられる。

[0041] 『アルキルァミノ』とは、モノ又はジアルキルアミノを示す。具体例として、メチルァミノ 、ェチノレアミノ、ェチルメチルァミノ、ジメチルァミノ、ジェチルァミノ、ジへキシルァミノ 等が挙げられる。

[0042] 『ァリールァミノ』とは、モノ又はジァリーノレアミノを示す。具体例として、フエニノレアミノ 、ナフチルァミノ、メチルフヱニルァミノ、ェチルフヱニルァミノ、ジフヱニルァミノ等が 挙げられる。

[0043] 『アルキルチオ』とは、炭素原子数:!〜 6個の直鎖又は分枝のアルキルチオを示す。

具体例として、メチルチオ、ェチルチオ、 n_プロピルチオ、 n—ブチルチオ、 n—ぺ ンチルチオ、 n—へキシルチオ、イソプロピルチオ、イソブチルチオ、 sec—ブチルチ ォ、 tert—ブチルチオ、イソペンチルチオ等が挙げられる。

[0044] 『ァリールチオ』とは、炭素原子数が 6〜： 14個の単環式又は 2環式若しくは 3環式の 縮合多環式芳香族炭化水素チォを示す。具体例としてフエ二ルチオ、ナフチルチオ 、アントリルチオ、フエナントリルチオ等が挙げられる。

[0045] 『スルフィン酸基のエステル』とは、スルフィン酸基とアルキルアルコール、ァリールァ ルコール等とからなるエステルを示す。アルキルアルコールの具体例として、メタノー ノレ、エタノール、プロパノール、ブタノール等が挙げられ、ァリールアルコールの具体 例として、フエノール、ナフトール等が挙げられる。

[0046] 『スルフィン酸基のアミド』とは、スルフィン酸基とアンモニア、 1級又は 2級ァミン等と 力、らなるアミドを示す。アミンはアルキルァミンでもァリールァミンでもよぐアルキルァ ミンの具体例として、メチノレアミン、ェチルァミン、ェチルメチルァミン、ジメチルァミン 、ジェチルァミン、ジへキシルァミン等が挙げられ、ァリールァミンの具体例として、ァ 二リン、ナフチルァミン、メチルフエニルァミン、ェチルフエニルァミン、ジフエニルアミ ン等が挙げられる。

[0047] 『アルキルスルフィエル』とは、炭素原子数 1〜6個の直鎖又は分枝のアルキルスル フィエルを示す。具体例として、メチルスルフィエル、ェチルスルフィニル、 n—プロピ ノレスノレフィニノレ、 n—ブチノレスノレフイエノレ、 n—ペンチルスルフィニル、 n—へキシノレス ノレフィニノレ、イソプロピルスルフィエル、イソブチルスルフィニル、 sec—ブチルスルフ ィニノレ、 tert—ブチルスルフィニル、イソペチルスルフィエル等が挙げられる。

[0048] 『ァリールスルフィエル』とは、炭素原子数が 6〜： 14個の単環式又は 2環式若しくは 3 環式の縮合多環式芳香族炭化水素スルフィニルを示す。具体例としてフエニルスル フィニノレ、ナフチルスルフィエル、アントリルスルフィニル、フヱナントリルスルフィエル 等が挙げられる。

[0049] 『スルホン酸基のエステル』とは、スルホン酸基とアルキルアルコール、ァリールアル コール等とからなるエステルを示す。アルキルアルコールの具体例として、メタノール 、エタノール、プロパノール、ブタノール等が挙げられ、ァリールアルコールの具体例 として、フエノール、ナフトール等が挙げられる。

[0050] 『スルホン酸基のアミド』とは、スルホン酸基とアンモニア、 1級又は 2級ァミン等とから なるアミドを示す。アミンはァノレキノレアミンでもァリーノレアミンでもよく、ァノレキノレアミン の具体例として、メチルァミン、ェチルァミン、ェチルメチルァミン、ジメチルァミン、ジ ェチルァミン、ジへキシルァミン等が挙げられ、ァリールァミンの具体例として、ァニリ ン、ナフチルァミン、メチルフエニルァミン、ェチルフエニルァミン、ジフエニルァミン等 が挙げられる。

[0051] 『アルキルスルホニル』とは、炭素原子数:!〜 6個の直鎖又は分枝のアルキルスルホ ニルを示す。具体例として、メチルスルホニル、ェチルスルホニル、 n—プロピルスル ホニノレ、 n—ブチノレスノレホニノレ、 n—ペンチノレスノレホニノレ、 n—へキシノレスノレホニノレ、 イソプロピルスルホニル、イソブチルスルホニル、 sec—ブチルスルホニル、 tert—ブ チルスルホニル、イソペンチルスルホニル等が挙げられる。

[0052] 『ァリールスルホニル』とは、炭素原子数が 6〜： 14個の単環式又は 2環式若しくは 3 環式の縮合多環式芳香族炭化水素スルホニルを示す。具体例としてフエニルスルホ ニル、ナフチルスルホニル、アントリルスルホニル、フヱナントリルスルホニル等が挙げ られる。

[0053] 『アルコキシィミノ』とは、炭素原子数:!〜 6個の直鎖又は分枝のアルコキシイミノを示 す。具体例として、メトキシィミノ、エトキシィミノ、 n—プロボキシィミノ、 n—ブトキシイミ ノ、 n—ペントキシィミノ、 n キシルォキシィミノ、イソプロポキシィミノ、イソブトキシ ィミノ、 sec—ブトキシイミ入 tert—ブトキシィミノ、イソペントキシィミノ等が挙げられる

[0054] 『ァリールォキシィミノ』とは、炭素原子数が 6〜： 14個の単環式又は 2環式若しくは 3 環式の縮合多環式芳香族炭化水素ォキシィミノを示す。具体例としてフエノキシィミノ 、ナフチルォキシイミ入アントリルォキシィミノ、フエナントリルォキシィミノ等が挙げら れる。

[0055] 『置換シクロアルカン環』とは、ハロゲン原子、ヒドロキシ基、アルコキシ基、ァリール ォキシ基、アルキル基、シクロアルキル基、ァリーノレ基、カルボキシ基又はそのエステ ル若しくはそのアミド、アミノ基、ァノレキノレアミノ基、ァリーノレアミノ基、ニトロ基、及びシ ァノ基から選択される 1又は複数の基を置換基として有するシクロアルカン環を示す。

[0056] 『置換単環式複素環』とは、その炭素原子部分がハロゲン原子、ヒドロキシ基、アル コキシ基、ァリールォキシ基、アルキル基、シクロアルキル基、ァリーノレ基、カルボキ シ基又はそのエステノレ若しくはそのアミド、アミノ基、ァノレキノレアミノ基、ァリーノレァミノ 基、メルカプト基、アルキルチオ基、ァリールチオ基、ヒドロカルボニル基すなわちホ ノレミル基、アルキルカルボニル基、ァリールカルボニル基、ニトロ基、及びシァノ基か ら選択される 1又は複数の基を置換基として有する単環式複素環基を示す。

[0057] 『置換アルコキシ基』とは、ハロゲン原子、ヒドロキシ基、アルコキシ基、ァリールォキ シ基、シクロアルキル基、ァリーノレ基、ハロゲン原子で置換されたァリール基、アルコ キシ基で置換されたァリール基、カルボキシ基又はそのエステル若しくはそのアミド、 アミノ基、ァノレキノレアミノ基、ァリーノレアミノ基、ニトロ基、シァノ基、ヒドロキシィミノ基、 アルコキシィミノ基、及びァリールォキシィミノ基から選択される 1又は複数の基を置 換基として有するアルコキシ基を示す。

[0058] 『置換アルケニルォキシ基』とは、ハロゲン原子、ヒドロキシ基、アルコキシ基、ァリー ルォキシ基、シクロアルキル基、ァリーノレ基、ハロゲン原子で置換されたァリール基、 アルコキシ基で置換されたァリール基、カルボキシ基又はそのエステル若しくはその アミド、アミノ基、ァノレキノレアミノ基、ァリーノレアミノ基、二卜口基、及びシァノ基力ら選択 される 1又は複数の基を置換基として有するアルケニルォキシ基を示す。

[0059] 『置換アルキニルォキシ基』とは、ハロゲン原子、ヒドロキシ基、アルコキシ基、ァリー ルォキシ基、シクロアルキル基、ァリーノレ基、ハロゲン原子で置換されたァリール基、 アルコキシ基で置換されたァリール基、カルボキシ基又はそのエステル若しくはその アミド、アミノ基、ァノレキノレアミノ基、ァリーノレアミノ基、二卜口基、及びシァノ基力ら選択 される 1又は複数の基を置換基として有するアルキニルォキシ基を示す。

[0060] 『置換シクロアルキルォキシ基』とは、ハロゲン原子、ヒドロキシ基、アルコキシ基、ァ リールォキシ基、アルキル基、シクロアルキル基、ァリール基、カルボキシ基又はその エステル若しくはそのアミド、アミノ基、ァノレキノレアミノ基、ァリーノレアミノ基、ニトロ基、 及びシァノ基から選択される 1又は複数の基を置換基として有するシクロアルキルォ キシ基を示す。

[0061] 『置換シクロアルケニルォキシ基』とは、ハロゲン原子、ヒドロキシ基、アルコキシ基、 ァリールォキシ基、アルキル基、シクロアルキル基、ァリーノレ基、カルボキシ基又はそ のエステル若しくはそのアミド、アミノ基、アルキノレアミノ基、ァリーノレアミノ基、ニトロ基 、及びシァノ基から選択される 1又は複数の基を置換基として有するシクロアルケ二 ルォキシ基を示す。

[0062] 『置換ァリールォキシ基』とは、ハロゲン原子、ヒドロキシ基、アルコキシ基、ァリーノレ ォキシ基、アルキル基、シクロアルキル基、ァリーノレ基、カルボキシ基又はそのエステ ル若しくはそのアミド、アミノ基、ァノレキノレアミノ基、ァリーノレアミノ基、ニトロ基、及びシ ァノ基から選択される 1又は複数の基を置換基として有するァリールォキシ基を示す

[0063] 『置換アルキル基』とは、ハロゲン原子、ヒドロキシ基、アルコキシ基、ァリールォキシ 基、シクロアルキル基、ァリール基、ハロゲン原子で置換されたァリール基、アルコキ シ基で置換されたァリール基、カルボキシ基又はそのエステル若しくはそのアミド、ァ ミノ基、ァノレキノレアミノ基、ァリーノレアミノ基、ニトロ基、シァノ基、ヒドロキシィミノ基、ァ ルコキシィミノ基、及びァリールォキシィミノ基から選択される 1又は複数の基を置換 基として有するアルキル基を示す。

[0064] 『置換アルケニル基』とは、ハロゲン原子、ヒドロキシ基、アルコキシ基、ァリールォキ シ基、シクロアルキル基、ァリーノレ基、ハロゲン原子で置換されたァリール基、アルコ キシ基で置換されたァリーノレ基、力ノレボキシ基又はそのエステノレ若しくはそのアミド、 了ミノ基、了ノレキノレアミノ基、了リーノレ了ミノ基、二卜口基、シ了ノ基、ヒドロキシ ミノ基、 アルコキシィミノ基、及びァリールォキシィミノ基から選択される 1又は複数の基を置 換基として有するアルケニル基を示す。

[0065] 『置換アルキニル基』とは、ハロゲン原子、ヒドロキシ基、アルコキシ基、ァリールォキ シ基、シクロアルキル基、ァリーノレ基、ハロゲン原子で置換されたァリール基、アルコ キシ基で置換されたァリーノレ基、力ノレボキシ基又はそのエステノレ若しくはそのアミド、 アミノ基、アルキルアミノ基、ァリールアミノ基、ニトロ基、及びシァノ基から選択される 1又は複数の基を置換基として有するアルキニル基を示す。

[0066] 『置換シクロアルキル基』とは、ハロゲン原子、ヒドロキシ基、アルコキシ基、ァリーノレ ォキシ基、アルキル基、シクロアルキル基、ァリーノレ基、カルボキシ基又はそのエステ ル若しくはそのアミド、アミノ基、ァノレキノレアミノ基、ァリーノレアミノ基、ニトロ基、及びシ ァノ基から選択される 1又は複数の基を置換基として有するシクロアルキル基を示す

[0067] 『置換シクロアルケニル基』とは、ハロゲン原子、ヒドロキシ基、アルコキシ基、ァリー ルォキシ基、アルキル基、シクロアルキル基、ァリーノレ基、カルボキシ基又はそのエス テル若しくはそのアミド、アミノ基、アルキルアミノ基、ァリールアミノ基、ニトロ基、及び シァノ基から選択される 1又は複数の基を置換基として有するシクロアルケ二ル基を 示す。

[0068] 『置換ァリール基』とは、ハロゲン原子、ヒドロキシ基、アルコキシ基、ァリールォキシ 基、アルキル基、シクロアルキル基、ァリール基、カルボキシ基又はそのエステル若し く ίまその ミド、アミノ基、ァノレキノレアミノ基、ァリーノレアミノ基、二卜口基、シ ノ基、ヒド 口キシィミノ基、ァノレコキシィミノ基、及びァリールォキシィミノ基から選択される 1又は 複数の基を置換基として有するァリール基を示す。

[0069] 『置換アルキルカルボニル基』とは、ハロゲン原子、ヒドロキシ基、アルコキシ基、ァリ ールォキシ基、シクロアルキル基、ァリーノレ基、ハロゲン原子で置換されたァリール 基、アルコキシ基で置換されたァリール基、カルボキシ基又はそのエステル若しくは そのアミド、アミノ基、ァノレキノレアミノ基、ァリーノレアミノ基、ニトロ基、及びシァノ基から 選択される 1又は複数の基を置換基として有するアルキルカルボ二ル基を示す。

[0070] 『置換ァリールカルボニル基』とは、ハロゲン原子、ヒドロキシ基、アルコキシ基、ァリ ールォキシ基、アルキル基、シクロアルキル基、ァリーノレ基、カルボキシ基又はその エステル若しくはそのアミド、アミノ基、ァノレキノレアミノ基、ァリーノレアミノ基、ニトロ基、 及びシァノ基から選択される 1又は複数の基を置換基として有するァリールカルボ二 ノレ基を示す。

[0071] 『置換アルキルアミノ基』とは、そのアルキル部分がハロゲン原子、ヒドロキシ基、ァ ルコキシ基、ァリールォキシ基、シクロアルキル基、ァリーノレ基、ハロゲン原子で置換 されたァリール基、アルコキシ基で置換されたァリール基、カルボキシ基又はそのェ ステノレ若しく〖まその ミド、アミノ基、ァノレキノレアミノ基、ァリーノレアミノ基、二卜口基、及 びシァノ基から選択される 1又は複数の基を置換基として有するアルキルアミノ基を 示す。

[0072] 『置換ァリールアミノ基』とは、そのァリール部分がハロゲン原子、ヒドロキシ基、アル コキシ基、ァリールォキシ基、アルキル基、シクロアルキル基、ァリーノレ基、カルボキ シ基又はそのエステノレ若しくはそのアミド、アミノ基、ァノレキノレアミノ基、ァリーノレァミノ 基、ニトロ基、及びシァノ基から選択される 1又は複数の基を置換基として有するァリ ールァミノ基を示す。

[0073] 『置換アルキルチオ基』とは、ハロゲン原子、ヒドロキシ基、アルコキシ基、ァリール ォキシ基、シクロアルキル基、ァリーノレ基、ハロゲン原子で置換されたァリール基、ァ ルコキシ基で置換されたァリール基、カルボキシ基又はそのエステル若しくはそのァ ミド、アミノ基、アルキルアミノ基、ァリールアミノ基、ニトロ基、及びシァノ基から選択さ れる 1又は複数の基を置換基として有するアルキルチオ基を示す。

[0074] 『置換ァリールチオ基』とは、ハロゲン原子、ヒドロキシ基、アルコキシ基、ァリールォ キシ基、アルキル基、シクロアルキル基、ァリーノレ基、カルボキシ基又はそのエステル 若しく〖まその ミド、アミノ基、ァノレキノレアミノ基、ァリーノレ ミノ基、二卜口基、及びシ ノ基から選択される 1又は複数の基を置換基として有するァリールチオ基を示す。

[0075] 『置換アルキルスルフィエル基』とは、ハロゲン原子、ヒドロキシ基、アルコキシ基、ァ リールォキシ基、シクロアルキル基、ァリール基、ハロゲン原子で置換されたァリール 基、アルコキシ基で置換されたァリール基、カルボキシ基又はそのエステル若しくは そのアミド、アミノ基、ァノレキノレアミノ基、ァリーノレアミノ基、ニトロ基、及びシァノ基から 選択される 1又は複数の基を置換基として有するアルキルスルフィニル基を示す。

[0076] 『置換ァリールスルフィニル基』とは、ハロゲン原子、ヒドロキシ基、アルコキシ基、ァ リールォキシ基、アルキル基、シクロアルキル基、ァリール基、カルボキシ基又はその エステル若しくはそのアミド、アミノ基、ァノレキノレアミノ基、ァリーノレアミノ基、ニトロ基、 及びシァノ基から選択される 1又は複数の基を置換基として有するァリールスルフィ 二ル基を示す。

[0077] 『置換アルキルスルホニル基』とは、ハロゲン原子、ヒドロキシ基、アルコキシ基、ァリ ールォキシ基、シクロアルキル基、ァリーノレ基、ハロゲン原子で置換されたァリール 基、アルコキシ基で置換されたァリール基、カルボキシ基又はそのエステル若しくは そのアミド、アミノ基、ァノレキノレアミノ基、ァリーノレアミノ基、ニトロ基、及びシァノ基から 選択される 1又は複数の基を置換基として有するアルキルスルホ二ル基を示す。

[0078] 『置換ァリールスルホニル基』とは、ハロゲン原子、ヒドロキシ基、アルコキシ基、ァリ ールォキシ基、アルキル基、シクロアルキル基、ァリーノレ基、カルボキシ基又はその エステノレ若しく (まそのアミド、了ミノ基、了ノレキノレアミノ基、了リーノレ了ミノ基、二卜口基、 及びシァノ基から選択される 1又は複数の基を置換基として有するァリールスルホニ ノレ基を示す。

[0079] 本発明化合物が、遊離の、ヒドロキシ基、アミノ基、アルキルアミノ基又はァリールァ ミノ基を置換基として有する場合、それらの基は保護基で保護されてレ、てもよレ、。

[0080] 遊離のヒドロキシ基の保護基とは、メトキシメチル基、ベンジル基、トリチノレ基、 4—メ トキシフヱニルメチル基、ベンジルォキシメチル基、メチノレ基、ァリル基等の置換若し くは無置換アルキル基又は無置換アルケニル基； 3 -ブロモテトラヒドロビラニル基、 テトラヒドロピラニル基、テトラヒドロフラニル基等の置換若しくは無置換複素環基；トリ フルォロアセチル基、ァセチル基、 4_クロ口ベンゾィル基、ベンゾィル基等の置換若 しくは無置換アルキルカルボニル基又は置換若しくは無置換ァリールカルボニル基； ベンジルォキシカルボニル基、 4—メトキシベンジルォキシカルボニル基、 9—フノレオ レニルメトキシカルボニル基、メトキシカルボニル基、エトキシカルボニル基、イソブト キシカルボニル基、 tert ブトキシカルボニル基、ビニルォキシカルボニル基、ァリル ォキシカルボニル基、 4一二トロフエノキシカルボニル基、フエノキシカルボ二ル基等 の置換若しくは無置換アルキルォキシカルボニル基、無置換アルケニルォキシカル ボニル基又は置換若しくは無置換ァリールォキシカルボニル基；トリメチルシリル基、 トリェチルシリノレ基、トリイソプロピルシリノレ基、 tert ブチルジメチルシリノレ基、 tert— プチルジフヱニルシリル基等の置換シリル基；等の遊離のヒドロキシ基の保護基として 汎用されるものを示す。

[0081] 遊離の、アミノ基、アルキルアミノ基又はァリールァミノ基の保護基とは、ベンジル基 、トリチノレ基、ジフヱニルメチル基、（4—メトキシフヱニル)ジフヱニルメチル、ァリル基 等の置換アルキル基又は無置換アルケニル基；ヒドロカルボニル基すなわちホルミル 基；トリクロロアセチル基、トリフルォロアセチル基、ァセチル基、 4_クロ口べンゾィノレ 基、ベンゾィル基、ピコリノィル基等の置換若しくは無置換アルキルカルボニル基、置 換若しくは無置換ァリールカルボニル基又は無置換複素環カルボニル基； 2, 2, 2— トリクロ口エトキシカルボニル基、ベンジルォキシカルボニル基、ジフエニルメトキシカ ノレボニル基、メトキシカルボニル基、イソブトキシカルボニル基、 tert ブトキシカルボ ニル基、 3—二トロフエノキシカルボニル基、フエノキシカルボニル基等の置換若しく は無置換アルキルォキシカルボニル基又は置換若しくは無置換ァリールォキシカル ボニル基；ベンジルスルホニル基、トリルスルホニル基、メチルスルホニル基、 4 クロ 口フエニノレスノレホニノレ基、 2, 4, 6—トリメチノレフエニノレスノレホニノレ基、フエニノレスノレホ ニル基等の置換若しくは無置換アルキルスルホニル基又は置換若しくは無置換ァリ 一ルスルホニル基；等の遊離の、アミノ基、アルキルアミノ基又はァリールァミノ基の 保護基として汎用されるものを示す。

[0082] また、本発明化合物のインダゾール環の窒素原子は、保護基で保護されていてもよ レ、。

[0083] インダゾール環の窒素原子の保護基とは、ベンジノレ基、トリチル基、ジフヱ二ルメチ ル基、（4—メトキシフヱニル)ジフヱニルメチル基、ァリル基等の置換アルキル基又は 無置換アルケニル基；ヒドロカルボニル基すなわちホルミル基；トリクロロアセチル基、 トリフルォロアセチル基、ァセチル基、 4 クロ口ベンゾィル基、ベンゾィル基、ピコリノ ィル基等の置換若しくは無置換アルキルカルボニル基、置換若しくは無置換ァリー ルカルボニル基又は無置換複素環カルボニル基； 2, 2, 2—トリクロ口エトキシカルボ ニル基、ベンジルォキシカルボニル基、ジフヱニルメトキシカルボニル基、メトキシカ ルボニル基、イソブトキシカルボニル基、 tert_ブトキシカルボニル基、フエノキシ力 ルポ二ル基、 3 _ニトロフエノキシカルボニル基等の置換若しくは無置換アルキルォ キシカルボニル又は置換若しくは無置換ァリールォキシカルボニル基；ベンジルスル ホニル基、トリルスルホニル基、メチルスルホニル基、 4—クロロフヱニルスルホニル基 、 2, 4， 6 _トリメチルフエニルスルホニル基、フエニルスルホニル基等の置換若しくは 無置換アルキルスルホニル基又は置換若しくは無置換ァリールスルホニル基；等のィ ンダゾール環の窒素原子の保護基として汎用されるものを示す。

[0084] 本発明化合物における『塩』とは、医薬として許容される塩であれば、特に制限はな ぐ塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硝酸、硫酸、リン酸等の無機酸との塩;酢酸、 フマル酸、マレイン酸、コハク酸、クェン酸、酒石酸、アジピン酸、乳酸、メタンスルホ ン酸、トリフルォロメタンスルホン酸、 p—トルエンスルホン酸、トリフルォロ酢酸等の有 機酸との塩；リチウム、ナトリウム、カリウム等のアルカリ金属との塩；カルシウム、マグ ネシゥム等のアルカリ土類金属との塩；アンモニア、ヨウ化メチル等との四級塩等が挙 げられる。

[0085] 本発明でいう『複数の基』は、それぞれの基が同一であっても異なるものであっても よぐ R²の場合、 2〜3個の基を意味し、 R³の場合、 2〜4個の基を意味し、 R⁴と R⁵の 場合、 2〜： 12個の基を意味する。また、ハロゲン原子、水素原子及び単環式複素環 も『基』の中に含まれる。

[0086] 本発明化合物に幾何異性体、例えば、シン一アンチ (syn_anti)異性体又は光学異 性体が存在する場合は、それらの異性体も本発明の範囲に含まれる。

[0087] さらに本発明化合物は水和物又は溶媒和物の形態をとつていてもよい。

[0088] 一般式 [I]で上記のように規定される本発明化合物において、好ましい例としては、 前記置換アルコキシ基、置換アルキル基、置換アルケニル基、及び/又は置換ァリ ール基がハロゲン原子、ヒドロキシ基、無置換アルコキシ基、無置換ァリール基、ヒド 口キシィミノ基、及び無置換アルコキシィミノ基からなる群より選択される 1又は複数の 基で置換された化合物又はその塩が挙げられる。

[0089] 一般式 [I]で上記のように規定される本発明化合物において、別の好ましい例とし ては、下記の 7つの選択肢 i)力 vii)のうちの 1又は 2以上の組み合わせで規定され る化合物又はその塩が挙げられる：

i)環 Xがベンゼン環、又はピリジン環を示し；

iD R¹が水素原子、置換アルキル基、無置換アルケニル基、カルボキシ基又はそのェ ステル若しくはそのアミド、アミノ基、又はシァノ基を示し；

iii) R²が水素原子、ヒドロキシ基、置換若しくは無置換アルコキシ基、無置換アルケニ ルォキシ基、無置換シクロアルキルォキシ基、置換若しくは無置換アルキル基、無置 換アルケニル基、無置換シクロアルキル基、アミノ基、無置換アルキルアミノ基、ニトロ 基、シァノ基、又は単環式複素環基を示し；

iv) R³がハロゲン原子、又は水素原子を示し；

v) R⁴及び R⁵が水素原子を示し；

vi) R⁶及び R⁷が水素原子を示し；

vii) m、 n、 p及び qが、同一又は異なって 0〜2の整数を示す、但し、 mと nの合計が 1 以上の整数であり、かつ、 pと qの合計が 1以上の整数である。

[0090] 中でも好ましくは、下記の 5つの選択肢 i)力 V)のうちの 1又は 2以上の組み合わせ で規定される化合物又はその塩が挙げられる：

i)環 Xがピリジン環を示し；

ii)

R⁵、 R⁶及び R⁷水素原子を示し；

iii) R²が無置換シクロアルキル基を示し；

iv) m及び nが 1を示し；

v) p及び qのどちらか一方が 0を、他方が 1を示す。

[0091] 一般式 [I]で上記のように規定される本発明化合物において、別の好ましい例とし ては、置換アルコキシ基がハロゲン原子で置換され、及び Z又は、置換アルキル基 力 Sヒドロキシ基、及びヒドロキシィミノ基からなる群より選択される 1又は複数の基で置 換された化合物又はその塩が挙げられる。 [0092] 一般式 [I]で上記のように規定される本発明化合物において、さらに好ましい例とし ては、下記の 8つの選択肢 i)力 viii)のうちの 1又は 2以上の組み合わせで規定され る化合物又はその塩が挙げられる：

i)環 Xがベンゼン環、又はピリジン環を示し；

iD R¹が水素原子、ヒドロキシメチル基、ヒドロキシィミノメチル基、 1—メチルビニル基、 カルボキシ基、メトキシカルボニル基、ァミノカルボニル基、アミノ基、又はシァノ基を 示し；

iii) R²が水素原子、ヒドロキシ基、メトキシ基、エトキシ基、 n—プロピルォキシ基、 n_ ブチルォキシ基、イソプロピルォキシ基、ジフルォロメトキシ基、 2 _フルォロエトキシ 基、 2、 2、 2 _トリフルォロエトキシ基、ァリルォキシ基、シクロプロピルォキシ基、シク 口プロピルメチルォキシ基、ェチル基、ビュル基、ヒドロキシメチル基、 1ーヒドロキシ ェチル基、 2—ヒドロキシェチル基、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチ ル基、シクロへキシル基、アミノ基、メチルアミノ基、ジメチルァミノ基、ジェチルァミノ 基、ニトロ基、シァノ基、ピロリジン環、ピロール環、ピラゾール環、ォキサゾール環、ィ ソォキサゾール環、ピぺリジン環、ピリジン環、又はモルホリン環を示し；

iv) R³が塩素原子、又は水素原子を示し；

v) R⁴及び R⁵が水素原子を示し；

vi) R⁶及び R⁷が水素原子を示し；

vii) m及び n力 S 1を示し；

viii) p及び qのどちらか一方が 0を、他方が 1を示す。

[0093]

一般式 [I]で前記のように規定される本発明化合物において、環 X力 sインダゾール 環の 5位に置換された化合物又はその塩が特に好ましい。

[0094] 本発明化合物は前述したとおり、一般式 [I]に示される、 X環の側鎖にスピロ環構造 の置換基を有する点に化学構造的特徴を有する。すなわち、一般式 [I]の下記の置 換基が、

[化 2]

[0095] a)環 Xがベンゼン環である場合にはその 4位に、また、

b)環 Xがピリジン環である場合にはその 5位に、

結合した本発明化合物がとりわけ好ましい。

[0096] 本発明化合物における特に好ましい具体例として、以下に示す化合物又はその塩 が挙げられる。

[0097] 5— 一（1—アミノ一スピロ [2， 2]ペンタ _1_ィル）ピリジン _2—ィル }_4_シク 口プロピノレ一 1H—インダゾーノレ

[化 3]

5-{5- (1—アミノ一スピロ [2， 3]へキサ一 1—ィル）ピリジン一 2—ィル }— 4—シク 口プロピノレ一 1H—インダゾーノレ

[化 4]

[0099] 5— {5— (5—アミノ一スピロ [2, 3]へキサ一 5—ィル）ピリジン一 2—ィル }—4—シク 口プロピル一 1 H—インダゾール

[化 5]

₅_{₄一（₅_アミノースピロ [2， 3]へキサ一 5_ィル）フエ-ル}_4_シクロフ口ピル 一 1H—インダゾール

[化 6]

5_{5— (2—アミノ―スピロ [3， 3]ヘプタ— 2—ィル)ピリジン一 2—ィル }— 4—シク 口プロピノレー 1H—インダゾール

[化 7]

本発明化合物の代表的な製造方法を下記に記す。尚、本発明化合物の個々の具 体的な製造方法については、後述の実施例 [製造例の項]で詳細に説明する。 [化 8]

化合物 C 化合物 D 本発明化合物

[0103] 合成経路 1又は合成経路 2 :化合物 Aと化合物 B又は化合物 Cと化合物 Dとを有機 溶媒中、金属触媒及び/又は塩基存在下、カップリング反応させることで本発明化 合物を得ること力 Sできる。

[0104] 上記の製造方法において、製造の便宜上、保護基を使用した場合には、その保護 基を汎用される方法にて除去することができる。

[0105] 環 X及び/又はインダゾール環の置換基は、当初から所望の置換基を導入してお レ、てもよく、また、上記の方法により基本骨格を製造した後に、酸化、還元、アルキル ィ匕、エステル化、アミド化、ォキシム化、脱水反応、脱保護反応、ァセチル化、加水分 解、トリフラート化、カップリング反応、環化反応及び Z又はそれらの反応を組み合わ せた汎用される合成方法を使用して、基本骨格に所望の置換基を導入してもよい。

[0106] 本発明化合物の合成中間体の製造方法については、後述の実施例 [製造例の項] で詳述する。

[0107] また、合成中間体は国際公開 WO2005Z035506号パンフレットに記載の方法に 準じて製造することができる。

[0108] 本発明化合物の有用性を見出すため、本発明化合物の Rhoキナーゼ阻害活性に ついて評価検討した。その詳細は後述の実施例 [薬理試験の項 (Rhoキナーゼ阻害 活性評価試験）]で説明するが、ジャーナル'ォブ'バイオロジカル 'ケミストリー， 274 卷， 32418頁， 1999年発行 [J.Biol.Chem., 274,32418(1999)]に記載の方法及び巿 販の活性型 ROCKII [アップステイツ'バイオテクノロジー，カタログ 番号 14— 338, (5ユニット /50マイクロリットル） upstate biotechnology, Catalog No.14-338, (5Unit/50 μ 1)]付属の説明書記載の方法に準じて、本発明化合物の Rhoキナーゼ阻害活性を 評価検討した。その結果、本発明化合物は優れた Rhoキナーゼ阻害作用を有して おり、 Rhoキナーゼが関与する疾患の治療剤として非常に有用であることを見出した

[0109] さらに本発明化合物の Rhoキナーゼが関与する具体的な疾患への適用を検証す るために、本発明化合物の眼圧下降作用についても検討した。その詳細は後述の実 施例 [薬理試験の項（眼圧下降作用測定試験) ]で説明するが、力二クイザノレ (性別： 雄性、一群 4〜5匹）に本発明化合物を点眼投与したところ、本発明化合物は優れた 眼圧下降作用を有しており、緑内障等の眼疾患の治療剤としても有用であることも併 せて見出した。

[0110] 前述したように Rhoキナーゼは、高血圧症、狭心症、喘息、末梢循環障害、早産、 動脈硬化症、癌、炎症性疾患、 自己免疫疾患、 AIDS,受精及び受精卵の着床、骨 粗鬆症、脳機能障害、細菌の消化管障害、緑内障、網膜症等の疾患と深く関係して レ、ることが知られている。したがって、本発明化合物は Rhoキナーゼの関与するそれ ら疾患の治療剤として非常に期待されるものである。

[0111] また、本発明における Rhoキナーゼ阻害剤とは Rhoの活性化に伴い活性化される セリン/スレオニンキナーゼを阻害する化合物を意味する。

[0112] さらに本発明における緑内障としては、原発性開放隅角緑内障、正常眼圧緑内障 、房水産生過多緑内障、高眼圧症、急性閉塞隅角緑内障、慢性閉塞隅角緑内障、 混合型緑内障、ステロイド緑内障、アミロイド緑内障、血管新生緑内障、悪性緑内障 、水晶体の嚢性緑内障、台地状虹彩シンドローム（plateau iris syndrom)等が例示さ れる。

[0113] 本発明化合物は経口でも、非経口でも投与することができる。投与剤型として、錠 剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、注射剤、点眼剤等が挙げられ、それらは汎用される 技術を組合わせて使用することで製剤化することができる。

[0114] 錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤等の経口剤は、例えば、乳糖、マンニトール、デ ンプン、結晶セルロース、軽質無水ケィ酸、炭酸カルシウム、リン酸水素カルシウム等 の賦形剤；ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、タルク等の滑沢剤；バレイショデ ンプン、トウモロコシデンプン等のデンプン、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシ メチルセルロース、ポリビュルピロリドン等の結合剤；カルボキシメチルセルロース、力 ノレボキシメチルセルロースカルシウム、低置換度ヒドロキシプロピルメチルセルロース 、クェン酸カルシウム等の崩壊剤；ヒドロキシプロピルメチルセルロース、マクロゴール 、シリコーン樹脂等のコーティング剤；パラォキシ安息香酸ェチル、ベンジルアルコー ル等の安定化剤；甘味料、酸味料、香料等の矯味矯臭剤等を必要に応じて本発明 化合物に組合わせて、調製することができる。

[0115] また、注射剤、点眼剤等の非経口剤は、例えば、グリセリン、プロピレングリコール、 塩化ナトリウム、塩ィ匕カリウム、ソルビトール、マンニトール等の等張化剤；リン酸、リン 酸塩、クェン酸、氷酢酸、 ε -アミノカプロン酸、トロメタモール等の緩衝剤；塩酸、タエ ン酸、リン酸、氷酢酸、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、炭酸ナトリウム、炭酸水素 ナトリウム等の ρΗ調節斉 IJ ;ポリソルベート 80、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油 60、マ クロゴール 4000、精製大豆レシチン、ポリオキシエチレン（160)ポリオキシプロピレ ン（30)グリコール等の可溶化又は分散剤；ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒド ロキシプロピルセルロース等のセルロース系高分子、ポリビニルアルコール、ポリビニ ルピロリドン等の増粘剤；ェデト酸、ェデト酸ナトリウム等の安定化剤；汎用のソルビン 酸、ソルビン酸カリウム、塩化ベンザルコニゥム、塩化べンゼトニゥム、パラォキシ安息 香酸メチル、パラォキシ安息香酸プロピル、クロロブタノール等の保存又は防腐剤；ク ロロブタノール、ベンジルアルコール、リドカイン等の無痛化剤等を必要に応じて本発 明化合物に組合わせて、調製することができる。

[0116] 尚、注射剤又は点眼剤の場合、 ρΗは 4. 0〜8. 0に設定することが望ましぐまた、 浸透圧比は 1. 0付近に設定することが望ましい。

[0117] 本発明はまた、患者に本発明化合物又はその塩の有効な量を投与することからなる

Rhoキナーゼの阻害方法、および、患者に本発明化合物又はその塩の有効な量を 投与することからなる緑内障の治療方法に関する。

[0118] 本発明化合物の投与量は、症状、年齢、剤型等により適宜選択して使用することが できる。例えば、経口剤であれば通常 1日当たり 0. 01〜： 1000mg、好ましくは 1〜： 10 Omgを 1回又は数回に分けて投与することができる。

[0119] また、点眼剤であれば通常 0. 0001 %~ 10% (w/v)、好ましくは 0. 001 %〜5% ( w/v)の濃度のものを 1回又は数回に分けて投与することができる。

[0120] 以下に本発明化合物（実施例:!〜 2)及び合成中間体 (参考例:!〜 9)の製造例、製 剤例並びに薬理試験の結果を示す。尚、これらの例示は本発明をよりよく理解するた めのものであり、本発明の範囲を限定するものではなレ、。また、実施例の物性におけ る Rf値は、薄層クロマトグラフィー（メルク社製、 TLCプレートシリカゲル 60F (商品

254 名））を用いて測定した値を表し、特記なき限り化学構造式中の Bocは tert ブトキシ カルボニル基を、 THPはテトラヒドロビラ二ル基を表す。

[0121] (参考例 1)

3 シクロプロピル 2—メチルァセトァニリド（参考化合物 1)の合成

[化 9]

H

[0122] 窒素気流下、トノレエン 2000mlに 3 _クロ口 _ 2—メチノレアセトァユリド 184g (l . 00m ol)、シクロプロピルボロン酸 129g (l . 50mol)、リン酸カリウム二水禾ロ物 745g (3. 0 Omol)、水 120ml、 20重量％トリシクロへキシルホスフィン Zトルエン溶液 63. Oml ( 0. 040mol)、酢酸ノ ラジウム 4. 49g (0. 020mol)を順次カロえ、 90°C力ら 100。Cで 7時間加熱撹拌した。

[0123] 反応終了後、反応溶液を室温まで冷却し、 7X1000ml,酢酸ェチル 1000mlをカロ え、セライト（商品名）濾過を行い、濾液を分液した。有機層を水 1000ml、飽和塩化 ナトリウム水溶液 1000mlで順次洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した後、減圧 濃縮した。得られた残渣に n—へキサン 2000mlをカ卩え、生成した固体を濾取し、乾 燥することにより、標記の化合物 156gを灰白色固体として得た (収率 82%)。

[0124] 融点： 119-120°C。

[0125] Rf値： 0.25 (n—へキサン：酢酸ェチル = 1： 1 (V/V) )。

[0126] マススぺクトノレ（CI, m/z)： 190 (M+ + 1)。

[0127] ^H— NMRスぺクトノレ（DMSO- d , δ卯 m) : 0.54-0.59(m,2H)，0.87-0.93(m,2H)，1.85- 1

.94(m,lH),2.04(s,3H),2.23(s,3H),6.83(d,J=7.3Hz,lH),7.01-7.06(m,lH),7.12(d,J=7.3 Hz, lH)，9.32(brs，lH)。

[0128] (参考例 2)

4_ブロモ _ 3—シクロプロピル— 2—メチルァセトァニリド（参考化合物 2)の合成 [化 10]

[0129] 窒素気流下、 3—シクロプロピル— 2—メチルァセトァニリド（参考化合物 l) 185g (0.

978mol)の醉酸 1800ml溶 ί夜に、醉酸ナトリウム 88. 2g (l . 08mol)をカロ免た。反応 溶液に 20°Cから 30°Cで臭素 55. lml (l . 08mol)を滴下し、室温で 3時間撹拌した

[0130] 反応終了後、反応溶液に水 1800ml、 5重量％亜硫酸水素ナトリウム水溶液 300m 1を加え、室温で 30分間撹拌した。生成した固体を濾取、水 1000mlで洗浄、乾燥す ることにより標記の化合物 242gを白色固体として得た (収率 92%)。

[0131] 融点： 170-172°C。

[0132] Rf値：0.25 (n—へキサン：酢酸ェチル = 1： 1 (V/V) )。

[0133] マススぺクトノレ（CI, m/z)： 268,270 (M+ + 1)。

[0134] ¹H_NMRスぺクトノレ（DMSO— d , δ ppm) : 0.50-0.56(m,2H),l.08-1.14(m,2H),l.72-1

.81(m,lH),2.04(s,3H),2.29(s,3H),7.16(d,J=8.5Hz,lH),7.37(d,J=8.5Hz,lH),9.34(brs,l H)。

[0135] (参考例 3)

1 ァセチルー 5—ブロモー 4ーシクロプロピル 1H—インダゾール（参考化合物 3) の合成

[化 11]

[0136] 窒素気流下、 4_ブロモ _ 3—シクロプロピル _ 2 メチルァセトァニリド（参考化合物 2) 228g (0. 850mol)の酢酸ェチノレ 2280ml溶液に、臭化テトラ一 n—ブチルアン モユウム 13. 7g (0. 042mol)、酢酸カリウム 167g (l . 70mol)、無水酢酸 240ml (2 . 54mol)、亜硝酸イソアミノレ 230ml (l . 72mol)を順次加え、加熱還流条件下で 11 時間撹拌した。

[0137] 反応終了後、反応溶液を室温まで冷却し、水 2280mlを力卩ぇ分液した。有機層中 に析出した固体を濾取し、乾燥することにより、標記の化合物 139gを淡黄色固体とし て得た（収率 59%)。

[0138] 融点： 125-126°C。

[0139] Rf値：0.25 (n へキサン：酢酸ェチル = 9： 1 (V/V) )。

[0140] マススぺクトノレ（CI, m/z)： 279,281 (M+ + 1)。

[0141] ¹H— NMRスペクトル（CDC1， 5 ppm)： 0.87-0.92(m,2H), 1.20-1.27(m,2H), 2.12-2.21(

3

m, lH),2.77(s,3H),7.67(d,J=8.8Hz, lH),8.15-8.18(m, lH),8.28(d,J=0.7Hz, lH)_o

[0142] (参考例 4)

5 _ブロモ _4—シクロプロピル _ 1H_インダゾール（参考化合物 4)の合成

[化 12]

[0143] 1—ァセチル— 5_ブロモ _4—シクロプロピル— 1H_インダゾール（参考化合物 3) 195g (700mmol)のメタノール Zテトラヒドロフラン混合溶液 700ml (1： 1 (V/V) ) に、 7N水酸化ナトリウム水溶液 1201111 (84011111101)を10でカ 20でで加ぇ、室温で 30分間撹拌した。

[0144] 反応終了後、反応溶液を 2N塩酸で中和し、水 1400mlを加え、室温で 30分間撹 拌した。生成した固体を濾取し、水 500mlで洗浄し、乾燥することにより標記の化合 物 161gを微橙色固体として得た (収率 97%)。

[0145] 融点： 149-151°C。

[0146] Rf値： 0.65 (n—へキサン：酢酸ェチル = 1： 1 (V/V) )。

[0147] マススぺクトノレ（CI, m/z)： 237,239 (M+ + 1)。

[0148] ¹H— NMRスペクトル（DMSO-d , δ ppm) : 0.96— 1.01(m,2H)，1.12— 1.19(m,2H)，2.19— 2

.28(m,lH),7.31-7.34(m,lH),7.46(d,J=8.5Hz,lH),8.11(dJ=1.0Hz,lH),13.23(brs,lH)

(参考例 5)

5—ブロモ一4—シクロプロピル一 1— (テトラヒドロピラン一 2—ィル）一1H—インダゾ ール (参考化合物 5)の合成

[化 13]

P 窒素気流下、 5_ブロモ _4—シクロプロピル _ 1H_インダゾール（参考化合物 4) 1 54g (0. 650mol)のァセトニトリル 1040ml溶液に、ピリジニゥム p—トルエンスルホ

[0158] 反応終了後、反応溶液に水 14ml、 10%クェン酸水溶液 350ml、セライト 14gをカロ え 10分間撹拌後濾過した。濾液を分液し、有機層に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液 350ml,セライト 14gをカ卩ぇ 10分間撹拌後濾過した。濾液を分液し、有機層を無水 硫酸マグネシウムで乾燥した後、減圧濃縮した。得られた残渣に n—ヘプタン 700ml を加え、セライトを通して濾過した後、濾液を減圧濃縮した。得られた残渣をシリカゲ ルカラムクロマトダラグラフィー（溶出溶媒; _n—へキサン:酢酸ェチル = 9： 1 (V/V) ) に付し、 目的物を含む画分を減圧濃縮することにより、標記の化合物 74gを淡黄色 油状物として得た（収率 92%)。

[0159] Rf値：0.43 (n—へキサン：酢酸ェチル =4： 1 (V/V) )。

[0160] マススぺクトノレ（CI, m/z)： 369 (M+ + 1)。

[0161] iH— NMRスぺクトノレ（CDC1， δ ppm)： 0.93—1.15(m，4H),1.37(s, 12H)，1.55—1.87(m，3

3

H),1.97-2.25(m,2H),2.45-2.65(m,lH),2.65-2.80(m,lH),3.65-3.80(m,lH),3.95-4.10( m,lH),5.65-5.75(m,lH),7.34(d,J=8.5Hz,lH),7.71(d,J=8.5Hz,lH),8.11(s,lH)₀

[0162] (参考例 7)

2 ブロモー 5—（5 シァノースピロ [2, 3]へキサー5 ィル）ピリジン（参考化合物 7 )の合成

[化 15]

[0163] 2 ブロモ 5 シァノメチルピリジン（国際公開 WO2003/050087パンフレット参 照） 4. 0g (20mmol)の N, N ジメチルホルムアミド 40ml溶液に、アルゴン気流下 撹拌しながら水素化ナトリウム (鉱物油 55%分散物） 2. Og (46mmol)を 0°Cで分割 添加した。次いで 1 , 1—ビス（ョードメチル)シクロプロパン（マイケル ィ一. ライト等 ジャーナル'ォブ 'オーガニック 'ケミストリー 58卷、 4122頁、 1993年発行 [Michae 1 E. Wright et al. J. Org. Chem" 58， 4122(1993)]参照） 6. 6g (21mmol)の N, N— ジメチルホルムアミド 20ml溶液を撹拌下 0°Cで滴下し、 2時間撹拌した。 [0164] 反応終了後、反応溶液を飽和塩化アンモニゥム水溶液にゆっくり注カ卩し、水を加え た後、トルエンで抽出した。有機層を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸 マグネシウムで乾燥した後、減圧濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマト ダラグラフィー（溶出溶媒; n—へキサン:酢酸ェチル =4 : 1 (VZV) )に付し、 目的物 を含む画分を減圧濃縮することにより、標記の化合物 2. 2gを無色油状物として得た (収率 41 %)。

[0165] Rf値： 0.51 (n—へキサン：酢酸ェチル =4 : 1 (V/V) )。

[0166] マススぺクトノレ（CI, m/z)： 263,265 (M+ + 1)。

[0167] H— NMRスぺクトノレ（CDC1 , δ卯 m)： 0.59_0.67(m,2H)，0.74— 0.81(m，2H),2.66— 2.73(

3

m,2H),3.03-3.10(m,2H),7.55(ddJl=8.4Hz,J2=0.7Hz,lH),7.73(ddJl=8.4Hz,J2=2.7H z, lH),8.62(dd,Jl=2.7Hz,J2=0.7Hz,lH)_o

[0168] (参考例 8)

5- (5 ァミノカルボ二ル一スピロ [2, 3]へキサ一 5 ィル） 2 ブロモピリジン（参 考化合物 8)の合成

[化 16]

[0169] 2 ブロモー 5—（5 シァノースピロ [2,3]へキサー5 ィル）ピリジン（参考化合物 7 ) 2. 0g (7. 6mmol)の n—ヘプタン 100ml溶 f夜 (こシリカゲノレ 10g (PSQ 60B 富士 シリシァ化学株式会社製）、二酸化マンガン 15gを加え 90°Cで 2時間撹拌した。

[0170] 反応終了後、反応溶液を室温まで冷却しセライト濾過した。残った固形物を酢酸ェ チル 300mlで 3回洗浄し、濾液と洗浄液を集め減圧濃縮した。得られた残渣に酢酸 ェチル 10ml、 n_ヘプタン 50mlを加え超音波処理を行った後、生成した固体を濾 取した。得られた固体を n—ヘプタンで洗浄することにより、標記の化合物 1. 6gを白 色粉末として得た (収率 75%)。

[0171] 融点： 174-175。C Rf値：0·19 (η へキサン：酢酸ェチル = 1 : 1 (V/V) )。

[0172] マススペクトル（CI, m/z)： 281,283 (M+ + l)。

[0173] — NMRスペクトル（CDC1 , δ ppm)： 0.40-0.65(m,4H),2.55-2.65(m,2H),2.90-3.00(

3

m,2H),5.35-5.80(m,2H),7.49(ddJl=8.3Hz,J2=1.0Hz,lH),7.55(ddJl=8.3Hz,J2=2.7H z, lH),8.40-8.45(m,lH)_o

[0174] (参考例 9)

2 _ブロモ _ 5 _ (5 -tert -ブトキシカルボニルアミノースピロ [2,3]へキサ _ 5—ィ ル)ピリジン (参考化合物 9)

[化 17]

[0175] 5- (5 ァミノカルボ二ル一スピロ [2, 3]へキサ一 5—ィル） 2 ブロモピリジン（ 参考化合物 8) 1. 6g (5. 7mmol)の tert ブタノール 16ml溶液に、アルゴン気流下 撹拌しながら [ビス（トリフルォロアセトキシ）ョード]ベンゼン 2· 7g (6. 3mmol)を室温 で添加し、 60°Cで 20分間加熱撹拌した。次いで、ピリジン 1. 0ml (12mmol)を加え 、 90°Cで 30分間加熱撹拌した。

[0176] 反応終了後、反応溶液を減圧濃縮した。得られた残渣にトルエン 100mlをカ卩え、水 50mlで 3回洗浄し、次いで飽和炭酸水素ナトリウム水溶液 50mlで洗浄し、無水硫酸 マグネシウムで乾燥した後、減圧濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマト ダラグラフィー（溶出溶媒; n—へキサン:酢酸ェチル =4 : 1 (VZV) )に付し、 目的物 を含む画分を減圧濃縮した。得られた残渣に n ヘプタンを加え生成した固体を濾 取し、 n_ヘプタンで洗浄することにより、標記の化合物 1. Ogを白色粉末として得た（ 収率 50%)。

[0177] 融点： 122-123°C

Rf値： 0.40 (n—へキサン：酢酸ェチル =4： 1 (V/V) )。

[0178] マススぺクトノレ（CI, m/z)： 353,355 (M⁺ + l)。 [0179] H— NMRスぺクトノレ（CDC1 , δ ppm) : 0.50-0.70(m,4H),1.40(brs,9H),2.45-2.75(m,4

3

H),5.26(brs,lH),7.45(dd,Jl=8.3Hz,J2=0.5Hz,lH),7.65-7.80(m,lH),8.46-8.60(m, lH) [0180] (実施例 1)

5- { 5- (5-tert-ブトキシカルボニルアミノ一スピロ [2, 3]へキサ一 5_ィル）ピリ ジン一 2_ィル） } _4_シクロプロピル _ 1—(テトラヒドロピラン _ 2_ィル）一1H—ィ ンダゾール (実施例化合物 1)の合成

[化 18]

P

[0181] 4—シクロプロピノレ一 1—(テトラヒドロピラン一 2—ィル）_ 5_ (4, 4, 5, 5—テトラメ チル [1 , 3， 2]ジォキサボ口ラエル） _ 1H_インダゾール（参考化合物 6) 1. 0g (2. 7mmol)のトルエン 6ml溶液に、アルゴン気流下エタノール 1. 2ml、水 1 · 2ml、リン 酸カリウム 2水和物 2· lg (8. 5mmol)、 2—ブロモ—5— (5— tert—ブトキシカルボ ニルアミノースピロ [2, 3]へキサー5—ィル）ピリジン（参考化合物 9) 1 · 0g (2. 8mmo 1)を加え、アルゴンガスで 10分間バブリングした。次いで、アルゴン気流下 20重量⁰ /₀ トリシクロへキシルホスフィン/トルエン溶液 0· 090ml (0. 057mmol)、酢酸パラジ クム 6. 4mg (0. 029mmol)をカロ免、 90°Cで 5時間カロ熱携持した。

[0182] 反応終了後、反応溶液にトルエン 10ml、水 5mlを加え分液し、有機層を無水硫酸 マグネシウムで乾燥した後、減圧濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマト グラフィー（溶出溶媒: n—へキサン:酢酸ェチル = 2 : 1 (V/V) )に付し、 目的物を含 む画分を減圧濃縮した。得られた残渣に酢酸ェチル 10ml、 n—ヘプタン 20mlをカロ え生成した固体を濾取することにより、標記の化合物 700mgを白色粉末として得た（ 収率 48%)。 [0183] 融点： 199-202°C。

[0184] Rf値：0.33 (n—へキサン：酢酸ェチル = 1： 1 (V/V) )。

[0185] マススぺクトノレ（CI, m/z) : 515 (M" + 1)。

[0186] ^H— NMRスぺクトノレ（CDCl， δ ppm)： 0.45-0.70(m,6H),0.80-0.95(m,2H),1.41(brs, 9

3

H),1.60-1.90(m,3H),2.00-2.24(m,2H),2.27-2.40(m,lH),2.50-2.80(m,5H),3.70-3.82( m,lH),4.00-4.10(m,lH),5.28(brs, lH),5.70-5.78(m,lH),7.49(d,J=8.6Hz,lH),7.52-7.6 3(m，2H),7.80-7.95(m, lH)，8.22(s,lH)，8.85— 8.95(m，lH)。

[0187] (実施例 2)

5- { 5- (5_アミノ一スピロ [2， 3]へキサ一 5 _ィル）ピリジン _ 2—ィル } } _4—シ クロプロピノレー 1H—インダゾール 2塩酸塩（実施例化合物 2)の合成

[化 19]

[0188] 5— 一（5_tert_ブトキシカルボニルアミノースピロ [2, 3]へキサ一 5_ィル）ピリ ジン一 2_イノレ} } _4—シクロプロピル _ 1—(テトラヒドロピラン _ 2_ィル）一1H—ィ ンダゾール（実施例化合物 l) 700mg (l . 4mmol)にエタノール 2ml、水 0. 1ml及び 36重量％塩化水素/エタノール溶液 5mlを加え、アルゴン気流下、室温で 3時間、 3 5°Cで 2時間撹拌した。

[0189] 反応終了後、反応溶液を室温まで冷却した後、エタノールを lml加え濾過し、エタ ノールで洗浄した。得られた固体に、 80°Cでエタノール 1. 5ml、水 0. 3mlを加え、 1 5分間加熱撹拌して、溶解した。

[0190] 溶解液を 0°Cに冷却しエタノール 1. 5mlを加え、生成した固体を濾取し、エタノー ル洗浄することにより、標記の化合物 300mgを白色粉末として得た（収率 55%)。

[0191] 融点： >300°C (分解）。 ^

^m ^ ^ °( ^ ¾0)^¾0)丄«)2 ¾¾、^ ^^—仁<¾ ^^目 、っ¾

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S'8=f'P) 0'8'(H2'ui)S9 - S ' ' (ΗΖ'^ζΗ6·εΐ=Γ'Ρ) 6 ' (Η2'^ζΗ6·£ΐ=ΓΡ) ·2'(ΗΓ ) ·

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[ 610]

° (t + ₊w) τεε： (^z/ra 'ιο) | ム [εβΐο]

((Λ/Λ/Λ)Χ0 '0:1:3 =氺 -士べ ⁰ /₀8S

[2610]

86ST90/.00Zdf/X3d ε ひ動 OAV [0198] 3)点眼剤

処方 3 100ml中

本発明化合物 lOOmg

塩化ナトリウム 900mg

ポリソノレべ一卜 80 200mg

水酸化ナトリウム 適量

塩酸 適量

滅菌精製水 適量

本発明化合物並びに添加物の種類及び量を適宜変更することにより、所望の点眼 剤を得ることができる。

[0199] [薬理試験]

A. Rhoキナーゼ阻害活性評価試験

本発明化合物の Rhoキナーゼ阻害剤としての有用性を調べるため、ジャーナル'ォ ブ.バイオロジカル.ケミストリー， 274卷， 32418頁， 1999年発行 [J.Biol.Chem.，274, 32418(1999)]に記載の方法及び市販の活性型 ROCKII [アップステイツ ·バイオテクノ ロジ一，カタログ 番号 14— 338, (5ユニット /50マイクロリットル） upstate biotechnolo gy, Catalog No.l4_338,(5Unit/50 /i 1)]付属の説明書記載の方法に準じて、本発明化 合物の Rhoキナーゼ阻害活性を評価検討した。被験化合物としては、実施例化合物 2を使用した。

[0200] (試薬の調製）

1)緩衝液の調製

50mMトリスヒドロキシメチルァミノメタン（Tris) (pH7. 5)、 2mMエチレングリコー ノレビス（ 一アミノエチルエーテル） _N， N， N，， N'—四酢酸（EGTA)、 ImMェ チレンジァミン四酢酸（EDTA)、 5mM塩化マグネシウム（MgCl )、 5mM β—グリ セロールホスフェイト及び 2mMジチオスレィトール（DTT)となるよう、これらの成分 を蒸留水に加え、緩衝液を調製した。

[0201] 2) [ y一³² P] ATP溶液の調製

10mM ATP水溶液と市販の [ γ _³²P] ATP溶液 [ΝΕΝ社 Code No.NEG_002A] の混合液を緩衝液で希釈して、 300 μ Μの [ γ— P]ATP溶液を調製した。

[0202] 3) ROCKII溶液の調製

市販の活性型 ROCKII [upstate biotechnology, Catalog No.14-338， (5Unit/50 μ 1) ] を緩衝液で 1 Ζ 100希釈して、 ROCKII溶液を調製した。

[0203] 4) ImM基質溶液の調製

S6キナーゼ基質ペプチド (S6 Kinase Substrare Peptide) [アップステイツ バイオテ クノロジー，カタログ 番号 12— 124， （2ミリグラム） upstate biotechnology,Catalog No .12-124，(2mg)]を蒸留水に溶解して ImM基質溶液を調製した。

[0204] 5)リン酸溶液の調製

市販のリン酸を蒸留水で各濃度に調製した。

[0205] 6)被験化合物溶液の調製

被験化合物は 10%ジメチルスルホキシド（DMSO)水溶液に溶解した。

[0206] (評価方法）

1)マイクロチューブに被験化合物溶液 5 μ 1および [ γ ³² P] ATP溶液 5 μ 1を加えた 後、 4°Cに冷却する。

[0207] 2)次いで、マイクロチューブに ROCKII溶液 10 μ 1、 ImM基質溶液 2. 5 μ 1及び緩 衝液 37. 5 / lをカ卩えて反応混液を作成し、 4°Cに冷却する。

[0208] 3)マイクロチューブをウォーターバス（30°C)中で 15分間インキュベートする。

[0209] 4) 4°Cに冷却した後、マイクロチューブに 250mMリン酸溶液（5 μ 1)を加えて反応を 停止する。

[0210] 5)反応混液 30 /i lを濾紙（ワットマン P81) (商品名）にスポットする。

[0211] 6)未反応の [ γ _³²P]ATPを洗浄するために 75mMリン酸溶液の入ったビーカー に濾紙を移し、 5分間振盪する。さらに 4回このリン酸溶液で洗浄する。

[0212] 7)濾紙をエタノールに浸漬した後に乾燥し、液体シンチレーシヨンカウンタ一によりリ ン酸化された基質の量を測定する。

[0213] (IC の算出）

50

ROCKII溶液の代わりに緩衝液を入れたバックグラウンドマイクロチューブ中のリン 酸化基質量と、被験化合物溶液の代わりに 10%DMSO水溶液を入れたコントロー ルマイクロチューブ中のリン酸化基質量の差を 100%とする。被験化合物溶液を入 れたマイクロチューブ中のリン酸化基質量を内挿し、被験化合物溶液添加時のリン 酸化基質量を相対値として算出する。複数濃度の被験化合物溶液添加時のリン酸 化基質量から酵素活性を 50%阻害する被験化合物溶液濃度を IC として算出する

50

[0214] (Ki値の算出）

以下の計算式に従って、 Ki値を算出する。 Sは反応液中に含まれる ATP濃度を、 Kmはミハエリス一メンテン [Michaelis-Menten]定数を表す。

[0215] Ki=IC / (1 + S/Km)

50

(結果及び考察）

被験化合物として、実施例化合物 2を使用した時の結果を表 1に示す。

[表 1] 表 1

[0216] 表 1に示したとおり、被験化合物は、優れた Rhoキナーゼ阻害作用を示した。こ の結果から、本発明化合物は Rhoキナーゼが関与する疾患の治療剤として非常に 有用であることがわかった。

[0217] B.眼圧下降作用測定試験

本発明化合物の緑内障治療剤としての有用性を調べるため、力二クイザル (性別： 雄性、一群 4〜5匹）に本発明化合物を投与した場合の眼圧下降効果を評価検討し た。被験化合物としては実施例化合物 2 (以下、被験化合物とする）を使用した。

[0218] (被験化合物溶液の調製）

被験化合物を 2. 6%グリセリン液に溶解後、水酸化ナトリウムをカ卩えて pHを調整し

(pH6. 0〜7. 0)、濃度 0. 1%の被験化合物溶液を調製した。

[0219] (眼圧下降評価試験方法）

1) 0. 4。/₀塩酸ォキシブプロ力イン点眼液を力二クイザルの両眼に一滴点眼し局所麻 酔をした。 [0220] 2)被験化合物溶液投与直前に眼圧を測定し初期眼圧とした。

[0221] 3)被験化合物溶液を実験動物の片眼に点眼した (対側眼は無処置)。

[0222] 4)被験化合物溶液点眼の 2時間、 4時間及び 6時間後に 0. 4%塩酸ォキシブプロ力 イン点眼液を一滴両眼に点眼し局所麻酔後、眼圧を測定した。各時間の眼圧は 3回 測定し、その平均値を算出した。

[0223] 尚、コントロールには被験化合物溶液に代えて、基剤（2. 6%グリセリン液）のみを 投与して、他は上記の:!〜 4)と同じ方法で試験した。

[0224] (結果及び考察）

被験化合物を使用した時の結果を図 1に示す。また、眼圧は初期眼圧からの変化 値を示す。

[0225] 図 1に示したとおり、被験化合物は、優れた眼圧下降作用を示した。この結果から 本発明化合物は緑内障治療剤として特に有用であることが分かつた。

産業上の利用可能性

[0226] 本発明に係るインダゾール誘導体は、 Rhoキナーゼ阻害作用を有し、 Rhoキナー ゼが関与する疾患、例えば、緑内障等の眼疾患治療剤として有用である。

図面の簡単な説明

[0227] [図 1]各投与群の眼圧の経時変化を示すグラフである。目艮圧は初期眼圧からの変化 値で示す。口は被験化合物投与群を、〇はコントロール群を示す。

Claims

請求の範囲

下記一般式 [I]で表される化合物又はその塩。

[式中、環 Xはベンゼン環、又はピリジン環を示し；

R¹と R²は同一又は異なって、ハロゲン原子、水素原子、ヒドロキシ基、置換若しくは無 置換アルコキシ基、置換若しくは無置換アルケニルォキシ基、置換若しくは無置換ァ ルキニルォキシ基、置換若しくは無置換シクロアルキルォキシ基、置換若しくは無置 換シクロアルケニルォキシ基、置換若しくは無置換ァリールォキシ基、置換若しくは 無置換アルキル基、置換若しくは無置換アルケニル基、置換若しくは無置換アルキ ニル基、置換若しくは無置換シクロアルキル基、置換若しくは無置換シクロアルケ二 ル基、置換若しくは無置換ァリール基、カルボキシ基又はそのエステル若しくはその アミド、ヒドロカルボニル基、置換若しくは無置換アルキルカルボニル基、置換若しく は無置換ァリールカルボニル基、アミノ基、置換若しくは無置換アルキルアミノ基、置 換若しくは無置換ァリールアミノ基、メルカプト基、置換若しくは無置換アルキルチオ 基、置換若しくは無置換ァリールチオ基、スルフィン酸基又はそのエステル若しくは そのアミド、ヒドロスルフィニル基、置換若しくは無置換アルキルスルフィニル基、置換 若しくは無置換ァリールスルフィニル基、スルホン酸基又はそのエステル若しくはそ のアミド、ヒドロスルホニル基、置換若しくは無置換アルキルスルホニル基、置換若し くは無置換ァリールスルホニル基、ニトロ基、シァノ基、及び置換若しくは無置換単環 式複素環からなる群より選択される 1又は複数の基を示し；

R³はハロゲン原子、水素原子、ヒドロキシ基、置換若しくは無置換アルコキシ基、置 換若しくは無置換ァリールォキシ基、置換若しくは無置換アルキル基、及び置換若し くは無置換ァリール基からなる群より選択される 1又は複数の基を示し；

R⁴と R⁵は同一又は異なって、ハロゲン原子、水素原子、及び置換又は無置換アルキ ル基からなる群より選択される 1又は複数の基を示し；

R⁶と R⁷は同一又は異なって、水素原子、置換又は無置換アルキル基、及び置換又 は無置換ァリール基からなる群より選択される基を示し；

R⁶と R⁷は一緒になつて単環式複素環を形成してもよく；

m、 n、 p及び qは、同一又は異なって 0〜3の整数を示す、但し、 mと nの合計が 1以 上の整数であり、かつ、 pと qの合計が 1以上の整数である。 ]

[2] 置換アルコキシ基、置換アルキル基、置換アルケニル基、又は置換ァリール基がハ ロゲン原子、ヒドロキシ基、無置換アルコキシ基、無置換ァリール基、ヒドロキシィミノ 基、及び無置換アルコキシィミノ基からなる群より選択される 1又は複数の基で置換さ れたアルコキシ基、アルキル基、アルケニル基、又はァリール基を示す請求項 1記載 の化合物又はその塩。

[3] 一般式 [I]において、

環 Xがベンゼン環、又はピリジン環を示し；

R¹が水素原子、置換アルキル基、無置換アルケニル基、カルボキシ基又はそのエス テル若しくはそのアミド、アミノ基、又はシァノ基を示し；

R²が水素原子、ヒドロキシ基、置換若しくは無置換アルコキシ基、無置換アルケニル ォキシ基、無置換シクロアルキルォキシ基、置換若しくは無置換アルキル基、無置換 アルケニル基、無置換シクロアルキル基、アミノ基、無置換アルキルアミノ基、ニトロ基 、シァノ基、又は単環式複素環基を示し；

R³がハロゲン原子、又は水素原子を示し；

R⁴及び R⁵が水素原子を示し；

R⁶及び R⁷が水素原子を示し；

m、 n、 p及び qが、同一又は異なって 0〜2の整数を示す、但し、 mと nの合計が 1以 上の整数であり、かつ、 pと qの合計が 1以上の整数である、請求項 1又は 2記載の化 合物又はその塩。

[4] 置換アルコキシ基がハロゲン原子で置換されたアルコキシ基を示し、置換アルキル 基がヒドロキシ基、及びヒドロキシィミノ基からなる群より選択される 1又は複数の基で 置換されたアルキル基を示す請求項 3記載の化合物又はその塩。

[5] 一般式 [I]において、

環 Xがベンゼン環、又はピリジン環を示し；

R¹が水素原子、ヒドロキシメチル基、ヒドロキシィミノメチル基、 1—メチルビニル基、力 ノレボキシ基、メトキシカルボニル基、ァミノカルボニル基、アミノ基、又はシァノ基を示 し；

R²が水素原子、ヒドロキシ基、メトキシ基、エトキシ基、 n—プロピルォキシ基、 n—ブ チルォキシ基、イソプロピルォキシ基、ジフルォロメトキシ基、 2 _フルォロエトキシ基 、 2、 2、 2 _トリフルォロエトキシ基、ァリルォキシ基、シクロプロピルォキシ基、シクロ プロピルメチルォキシ基、ェチル基、ビュル基、ヒドロキシメチル基、 1—ヒドロキシェ チノレ基、 2—ヒドロキシェチル基、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル 基、シクロへキシル基、アミノ基、メチルアミノ基、ジメチルァミノ基、ジェチルァミノ基、 ニトロ基、シァノ基、ピロリジン環、ピロール環、ピラゾール環、ォキサゾール環、イソォ キサゾール環、ピぺリジン環、ピリジン環、又はモルホリン環を示し；

R³が塩素原子、又は水素原子を示し；

R⁴及び R⁵が水素原子を示し；

R⁶及び R⁷が水素原子を示し；

m及び nが 1を示し；

p及び qのどちらか一方が 0を、他方が 1を示す請求項:!〜 4のいずれか 1記載の化合 物又はその塩。

[6] 一般式 [I]において、環 Xがインダゾール環の 5位に置換された請求項 1〜5のいず れカ、 1記載の化合物又はその塩。

[7] · 5— 一（1—アミノースピロ [2， 2]ペンタ一 1—ィノレ）ピリジン一 2_イノレ} _4_シク 口プロピノレ一 1H—インダゾーノレ、

· 5- { 5- (1—アミノ一スピロ [2， 3]へキサ一 1 _ィル）ピリジン _ 2—ィル } _4_シ クロプロピノレ一 1H—インダゾーノレ、 •5- { 5- (5—アミノ一スピロ [2, 3]へキサ一 5—ィル）ピリジン一 2—ィル }— 4—シ クロプロピノレー 1H—インダゾーノレ、

•5— {4— (5—アミノースピロ [2, 3]へキサ一 5—ィル）フエ二ル}— 4—シクロプロピ ノレ一1H—インダゾール、及び

•5- { 5- (2—アミノ一スピロ [3， 3]ヘプタ _ 2_ィル）ピリジン _ 2—ィル } _4_シク 口プロピノレ一 1H—インダゾーノレ

力 なる群より選択される化合物又はその塩。

[8] 請求項 1〜7のいずれ力 4記載の化合物又はその塩を含有する医薬組成物。

[9] 請求項 1〜7のいずれ力 4記載の化合物又はその塩を有効成分として含有する Rho キナーゼ阻害剤。

[10] 請求項 1〜7のいずれ力 4記載の化合物又はその塩を有効成分として含有する緑内 障治療剤。

[11] 患者に請求項 1〜7のいずれ力 1記載の化合物又はその塩の有効な量を投与するこ とからなる Rhoキナーゼの阻害方法。

[12] 患者に請求項 1〜7のいずれ力 1記載の化合物又はその塩の有効な量を投与するこ とからなる緑内障の治療方法。