WO2009013839A1 - ネコタンパク尿診断薬 - Google Patents

ネコタンパク尿診断薬 Download PDF

Info

Publication number
WO2009013839A1
WO2009013839A1 PCT/JP2007/064724 JP2007064724W WO2009013839A1 WO 2009013839 A1 WO2009013839 A1 WO 2009013839A1 JP 2007064724 W JP2007064724 W JP 2007064724W WO 2009013839 A1 WO2009013839 A1 WO 2009013839A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
urine
cauxin
cat
protein
lectin
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Ceased
Application number
PCT/JP2007/064724
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Tetsuro Yamashita
Yasuyuki Suzuta
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Inc NATIONAL UNIVERSITY IWATE UNIVERSITY
Nippon Zenyaku Kogyo Co Ltd
Inc National Univ Iwate University
Original Assignee
Inc NATIONAL UNIVERSITY IWATE UNIVERSITY
Nippon Zenyaku Kogyo Co Ltd
Inc National Univ Iwate University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Inc NATIONAL UNIVERSITY IWATE UNIVERSITY, Nippon Zenyaku Kogyo Co Ltd, Inc National Univ Iwate University filed Critical Inc NATIONAL UNIVERSITY IWATE UNIVERSITY
Priority to EP07791418A priority Critical patent/EP2180318B1/en
Priority to US12/452,687 priority patent/US8268639B2/en
Priority to PCT/JP2007/064724 priority patent/WO2009013839A1/ja
Priority to JP2009524365A priority patent/JP5346289B2/ja
Publication of WO2009013839A1 publication Critical patent/WO2009013839A1/ja
Anticipated expiration legal-status Critical
Priority to US13/587,255 priority patent/US8415163B2/en
Ceased legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/46—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans from vertebrates
    • G01N2333/47—Assays involving proteins of known structure or function as defined in the subgroups
    • G01N2333/4701—Details
    • G01N2333/4724—Lectins
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
    • G01N2333/914—Hydrolases (3)
    • G01N2333/916—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1), e.g. phosphatases (3.1.3), phospholipases C or phospholipases D (3.1.4)
    • G01N2333/918—Carboxylic ester hydrolases (3.1.1)
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/34—Genitourinary disorders
    • G01N2800/347—Renal failures; Glomerular diseases; Tubulointerstitial diseases, e.g. nephritic syndrome, glomerulonephritis; Renovascular diseases, e.g. renal artery occlusion, nephropathy

Definitions

  • the present invention relates to a feline urine test in veterinary clinics, and relates to a method for detecting feline proteinuria and diagnosing feline renal dysfunction and a diagnostic agent for feline renal dysfunction.
  • Cats bred as pets are very susceptible to kidney disease as they grow older, and account for the top cause of death. ing.
  • measuring the amount of protein excreted in the urine is used for early diagnosis of kidney disease.
  • Proteinuria is used as a diagnostic marker for early notification of kidney abnormalities.
  • the protein auxin (Cauxin) derived from the kidney is still present in the urine at a high concentration, so the physiological proteinuria (Cauxin urine) and pathological protein urine are commercially available on commercially available urine test papers. Cannot be identified.
  • a method for detecting feline kidney disease by measuring urinary coxin has been reported, but a special reagent is required (see Patent Document 1).
  • test paper for protein measurement that is generally used for urinalysis, and there is a demand for the development of a simple test method.
  • urinary coxin levels differed greatly in gender, and it was difficult to detect kidney disease by detecting cauxin.
  • Patent Document 1 Japanese Patent Application Laid-Open No. 2003-250575
  • the present invention provides a method for diagnosing feline kidney disease by detecting feline urine protein without being affected by coxin using a test paper for protein measurement generally used in urinalysis, and a diagnostic agent. With the goal.
  • Cauxin secreted in the urine of healthy cats is a sugar tamper with a molecular weight of about 70 kd. It is quality.
  • the present inventor analyzed the binding between a lectin, a plant seed-derived protein that specifically binds to a glycoprotein, and feline urine protein, and the lentil-derived lectin and cauxin specifically bound to each other. It was found that the binding of urinary protein is not so much. Therefore, a gel (lentil lectin sepharose) bound with lentil lectin was added to the cat urine sample, suspended, and then the supernatant protein was analyzed. As a result, only cauxin was adsorbed on the gel, and other urine proteins were recovered in the supernatant.
  • a method for detecting urinary protein derived from feline renal dysfunction comprising removing cauxin from feline urine and detecting the protein in the sample of urine from which the cauxin is removed.
  • Cauxin is removed from feline urine using a column packed with a lectin that specifically binds to cauxin or an anti-cauxin antibody. Detection of urinary protein derived from renal dysfunction in cats in [3] Method.
  • the lectin that specifically binds to cauxin is lentil lectin [2]
  • Sepharose is a carrier to which a lectin that specifically binds to cauxin is bound. (Registered trademark) or TOYOPEARL (registered trademark) [3; [1] The method for detecting urine protein derived from renal dysfunction in cats according to any one of [7].
  • [9] The method for detecting feline urine protein according to any one of [1:] to [8], comprising detecting feline urine protein and determining whether the cat has renal dysfunction.
  • a reagent for detecting urinary protein derived from cat renal dysfunction comprising a carrier conjugated with a lectin that specifically binds to cauxin or an anti-cauxin antibody and a urine test paper for detecting urine protein.
  • [1 1] A urine protein derived from feline kidney dysfunction according to [1 0], comprising a column packed with a carrier bound with a lectin that specifically binds to cauxin or an anti-cauxin antibody and a urine test paper for detecting urine protein Detection reagent.
  • [1 2] The reagent for detecting urine protein derived from renal dysfunction in cats according to [1 0] or [1 1], wherein the lectin that specifically binds to cauxin is lentil lectin.
  • Sepharose (registered trademark) or TOYOPEARL (registered trademark) is a carrier to which a lectin that specifically binds to cauxin is bound [1 0] to [12] derived from cat renal dysfunction Urine protein detection reagent.
  • a feline renal dysfunction diagnostic agent comprising the feline urine protein detection reagent.
  • FIG. 1 is a diagram showing an outline of a cat proteinuria diagnostic kit.
  • Fig. 2 is a diagram showing the reaction of various lectins with cauxin using a lectin plot.
  • FIG 3 shows the results of removal of cauxin from urine samples by LCA-cauxin.
  • FIG. 4 is a diagram showing a method for preparing and using a carrier column using a blue chip.
  • FIG. 5 is a diagram showing the results of SDS-PAGE of a urine sample passed through a carrier column.
  • Figure 6A shows a sample in a urine sample passed through a carrier column (LCA-Sepharose column).
  • FIG. 6B is a graph showing the amount of protein in the urine sample passed through the Sepharose CL-6B column used as a control.
  • FIG. 7 is a diagram showing the results of SDS-PAGE of a urine sample from which cauxin has been removed using Topearl carrier.
  • FIG. 8A shows the results of quantification of the amount of cauxin by Bradford quantification method using SDS-PAGE gel of urine sample from which coxin was removed using Toyopearl carrier.
  • FIG. 8B shows the results of quantification of the amount of cauxin by the densitometry constant volume method using SDS-PAGE gel of urine sample from which cauxin was removed using Toyopearl carrier.
  • FIG. 9 is a diagram showing the results of SDS-PAGE of a urine sample from which coxin has been removed using a crosslinked Topearl carrier. '
  • FIG. 10A shows the results of quantification of the amount of cauxin by the Bradford quantification method using SDS-PAGE gel of a urine sample from which cauxin was removed using a crosslinked Toyopearl carrier.
  • FIG. 10B shows the results of quantification of the amount of cauxin by densitometry quantification using SDS-PAGE gel of a urine sample from which cauxin was removed using a crosslinked Toyopearl carrier.
  • Fig. 11 shows the results of measuring urinary protein using urine test paper (Pretest, Wako Pure Chemical Industries) using urine samples from which cauxin was removed and untreated urine samples.
  • Fig. 12 is a diagram showing the results of SDS-PAGE of urine passed through the cat urine with serum added to the cross-linked Toyopearl carrier.
  • FIG. 13 is a diagram showing the results of quantification of the urine by adding feline urine added with serum to a cross-linked Toyopearl carrier and passing through it.
  • FIG. 14 is a diagram showing the results of SDS-PAGE of urine obtained by passing urine of a cat suffering from kidney disease through addition to a crosslinked Toyopearl carrier.
  • Figure 15 shows the urine of a cat suffering from kidney disease passed through a cross-linked Toyopearl carrier. ⁇ i / JP 2007/064724 It is a figure which shows the result of SDS-PAGE of urine. '
  • FIG. 16 is a diagram showing the results of SDS-PAGE of urine obtained by adding urine from a cat suffering from kidney disease to a cross-linked Toyopearl carrier.
  • feline kidney dysfunction is diagnosed by removing cauxin from cat urine and measuring the remaining protein in cat urine.
  • a cat in the present invention refers to an animal belonging to the family Cat., An animal belonging to the cat subfamily such as domestic cat, puma, wild cat, etc., an animal belonging to the subfamily such as leopard, lion, tiger, jaguar, etc. Includes animals belonging to the Cheetah subfamily.
  • Cauxin can be removed from feline urine using a substance that specifically binds to cauxin.
  • a substance that specifically binds to cauxin is a substance that binds to cauxin contained in feline urine, but other proteins in cat urine, especially cats suffer from renal dysfunction, A substance that does not bind to proteins present in urine at high concentrations.
  • proteins other than cauxin present in cat urine include albumin, globulin,] 32 microglobulin, and the like.
  • substances that specifically bind to euxin include lectins and anti-cauxin antibodies. As a lectin that specifically binds to cauxin,
  • Con A Lentil lectin
  • LCA Lentil lectin
  • PNA Peanut lectin
  • RCA kidney bean lectin
  • PHA kidney bean lectin
  • WGA wheat germ lectin
  • PSA endumer lectin
  • VFA broad bean lectin
  • LCA lentil lectin
  • compounds that specifically bind to coxin such as a cauxin substrate or an analog thereof can be exemplified.
  • Anti-cauxin antibodies can be easily obtained as polyclonal antibodies or monoclonal antibodies by purifying cauxin from cat urine and immunizing animals.
  • the cat urine is contacted with a substance that specifically binds to cauxin, and the complex of cauxin and a substance that specifically binds to cauxin may be removed.
  • a substance that specifically binds to coxin is bound to an appropriate carrier, and the bound carrier is bound to a column.
  • feline urine from which coxin has been removed can be obtained by passing feline urine through the column and collecting the passed urine.
  • a carrier bound with a substance that specifically binds to cauxin may be added to cat urine and reacted for a certain period of time, and then the complex of the carrier and cauxin may be removed by centrifugation or filtration.
  • the complex of the substance that specifically binds to cauxin and cauxin may be removed by centrifugation.
  • Sepharose registered trademark
  • Sephadex registered trademark
  • Cel lulofine registered trademark
  • AFC type affinity chromatography
  • T0Y0PERAL registered trademark
  • T0Y0PEARL AF-Tresy To 650 T0Y0PEARL AF-Carboxy-650, T0Y0PEARL AF-Formy To 650, T0Y0PEARL AF-Amino-650, T0Y0PEARL AF-Epoxy-650 (Tosoh Corporation) can be used.
  • Carriers to which various lectins are bound are commercially available, and these commercially available lectin-binding carriers may be used. Examples of commercially available products include LCA-Sepharose (Amersham) and lentil lectin-agarose (Seikagaku Corporation).
  • the method of separating proteins that bind to lectins using lectins is known as affinity mouthmatography using a lectin column. Determination of the lectin to be used, binding of the lectin to the carrier, creation of the column, For the determination of conditions for binding to proteins, see, for example, “Seminar in Experimental Chemistry 3 Carbohydrate I Glycoprotein (above) P. 3-P. 29 Issued on May 21, 1990, Tokyo Chemical Dojin” Can be done.
  • the capacity of the mini column is, for example, 100 1 to 2000 ⁇
  • the tip of a commercially available micropipette tip (blue tip or yellow tip) made of a resin such as polypropylene is packed with absorbent cotton, filter paper, etc., and a carrier to which a substance that specifically binds to cauxin is bound, Make a colixin removal column and add cat urine to the mini column to collect the urine By doing so, feline urine from which coxin has been removed can be obtained.
  • a buffer such as Tris buffer or phosphate buffer may be used for column equilibration and elution of protein adsorbed on the column.
  • the amount ratio of the feline urine and the substance that specifically binds to cauxin is not limited, but it may be contacted at an amount ratio that removes all the cauxin in cat urine.
  • Cauxin is present in about 0.9 mg / ml in the urine of healthy cats, and about 0.1 mg / ml or less in the urine of cats suffering from renal dysfunction.
  • the treatment is carried out so as to remove 90% or more, preferably 95% or more of cauxin present in the urine of healthy cats.
  • the protein in cat urine from which cauxin has been removed may be measured. Examples of proteins that can serve as markers for renal dysfunction include albumin, lysozyme, haptoglobin, and the like.
  • Urine protein can be measured using test paper for urine protein measurement.
  • test paper for measuring urine protein As a test paper for measuring urine protein, a known commercially available one may be used. Examples of commercially available test papers include pretested products from Wako Pure Chemical Industries.
  • the test paper is a test paper impregnated with a pH indicator such as bromophenol blue or tetrabromophenol blue and a pH buffer such as citrate buffer, and the protein is detected by the protein error of the pH indicator.
  • kidney disease In the case of cats, it is possible to diagnose whether or not they have kidney disease based on the urinary protein concentration from which cauxin has been removed. Cat urine protein concentration, approximately 100 to several hundred / ig / ml, preferably in the case of about 100 to about 200 ⁇ ⁇ / ⁇ 1 more likely you are suffering from kidney disease. Eventually, a veterinarian's comprehensive judgment will diagnose whether or not he has kidney disease.
  • a protein derived from renal dysfunction in cat urine can be dusted out, and feline renal dysfunction can be diagnosed.
  • the present invention relates to a renal dysfunction cause comprising a carrier bound with a substance that specifically binds to cauxin or a column packed with the carrier, and a urine protein detection test paper.
  • a renal dysfunction cause comprising a carrier bound with a substance that specifically binds to cauxin or a column packed with the carrier, and a urine protein detection test paper.
  • reagents or kits to detect native feline urine protein includes a diagnostic agent or diagnostic kit for feline renal dysfunction containing the reagent.
  • Lectins are proteins that have the activity of recognizing and specifically binding to sugar chains of glycoproteins. As a result of examining the binding activity of various lectins to the sugar chain of cauxin, it is clear that lentil lectin (lens cul inaris lectin: LCA) has high affinity and specifically binds to urinary cauxin. ( Figure 2).
  • Example 2 Reaction of lectin carrier and urine using blue chip for micropipette
  • 200 / zl of LCA-Sepharose was filled into a benolet chip, equilibrated with TBS, and then urine 300 1 was applied.
  • One drop of urine that passed through the column (approximately 50 ⁇ 1) was collected.
  • the collected urine was subjected to SDS-PAGE at 10 / l under non-reducing conditions, then the gel was stained with CBB (Fig. 5), and the protein was quantified by the Bradford method (Fig. 6).
  • Example 3 Removal of Cauxin Using Toyopearl Carrier
  • T0Y0PEARL AF-Tresyl 650M T0HS0H, hereinafter abbreviated as “Toyopearl”
  • Toyopearl T0Y0PEARL AF-Tresyl 650M
  • Fig. 9 shows the results of SDS-PAGE
  • Fig. 10A shows the results of Bradford Passey
  • Fig. 10B shows the results of quantification using densitometry.
  • Example 5 Measurement using the urine of a cat suffering from kidney disease

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Abstract

コーキシンの影響を受けることなくネコの尿タンパクを検出し、ネコの腎臓病を診断する方法および診断薬の提供。　ネコ尿をコーキシンに特異的に結合するレクチンまたは抗コーキシン抗体と接触させることにより、ネコ尿からコーキシンを除去する請求項１記載のネコの腎機能障害由来の尿タンパクの検出方法。

Description

. .. 明 細 書 ネコタンパク尿診断薬
技術分野
本発明は獣医臨床におけるネコの尿検査に関し、 ネコのタンパク尿を検出し、 ネコの腎機能障害を診断する方法およびネコの腎機能障害の診断薬に関する。 背景技術
ぺットとして飼育されているネコは、高齢になると腎臓病に非常に罹りやすく、 その死因の上位を占めており、 ネコの腎臓病の早期診断が獣医小動物臨床の現場 で重要な課題となっている。 人の場合は、 尿中に排泄されるタンパク質量を測定 することが腎臓病の初期診断に用いられている。 タンパク尿は、 腎臓の異常を早 期に知らせてくれる診断マーカーとして利用されている。しかしネコにおいては、 健常時にも腎臓由来のタンパク質コーキシン （Cauxin) が尿中に高濃度存在して いるため、 市販の尿試験紙では生理的なタンパク尿 （Cauxin尿） と病的なタンパ ク尿との識別を行うことができない。 尿中コーキシンを測定することにより、 ネ コの腎疾患を検出する方法が報告されているが、 特別の試薬を必要とする （特許 文献 1参照）。そのため一般に尿検査に用いられているタンパク質測定用の試験紙 を用いることはできず、 簡便な検査法の開発が要望されている。 また、 尿中コー キシン量には大きな性差があり、 この点でもコーキシンの検出により腎疾患を検 出するのは困難であった。
特許文献 1 特開 2003-250575号公報
発明の開示
本発明は、 尿検査に一般に用いられているタンパク質測定用試験紙を用いてコ ーキシンの影響を受けることなくネコの尿タンパクを検出し、 ネコの腎臓病を診 断する方法および診断薬の提供を目的とする。
健常なネコの尿中に分泌されているコーキシンは、 分子量約 70 k dの糖タンパ ク質である。 本発明者は、 糖タンパク質と特異的に結合する植物種子由来のタン パク質であるレクチンとネコ尿タンパク質との結合性を解析し、 レンズ豆由来レ クチンとコーキシンが特異的に結合し、 他の尿タンパク質との結合があまり見ら れないことを見出した。 そこで、 レンチルレクチンを結合させたゲル （レンチル レクチンセファロース） をネコ尿サンプルに加え、 けん濁した後、 上清液のタン パク質の分析を行った。 その結果、 コーキシンのみがゲルに吸着し、 その他の尿 タンパク質は上清液に回収された。 この方法を利用することにより、 ネコの尿か らコーキシンのみを特異的に除去することが可能となり、 腎機能の障害に由来す る尿タンパク質の検出が容易になることを見出し、本発明を完成させるに至った。 すなわち、 本発明の態様は以下の通りである。
[1 ] ネコ尿からコーキシンを除去し、 コーキシン除去ネコ尿検体中のタンパク 質を検出することを含む、 ネコの腎機能障害由来の尿タンパクの検出方法。
[2] ネコ尿をコーキシンに特異的に結合するレクチンまたは抗コーキシン抗体 と接触させることにより、 ネコ尿からコーキシンを除去する [ 1]のネコの腎機能 障害由来の尿タンパクの検出方法。
[3] コーキシンに特異的に結合するレクチンまたは抗コーキシン抗体を結合さ せた担体を用いてネコ尿からコーキシンを除去する、 [ 2 ]のネコの腎機能障害由 来の尿タンパクの検出方法。
[4] コーキシンに特異的に結合するレクチンまたは抗コーキシン抗体を結合さ せた担体を充填したカラムを用いてネコ尿からコーキシンを除去する [3]のネコ の腎機能障害由来の尿タンパクの検出方法。
[5] レクチンがレンズマメレクチンである [2]〜[4]のいずれかのネコの腎機 能障害由来の尿タンパクの検出方法。
[6] コーキシン除去ネコ尿中のタンパク質の検出が、 尿タンパク検出用の尿試 験紙を用いて行われる [ 1 ]〜[ 5]のいずれかのネコの腎機能障害由来の尿タンパ クの検出方法。
[7] コーキシンに特異的に結合するレクチンがレンズマメレクチンである [2]
〜[ 6]のいずれかのネコの腎機能障害由来の尿タンパクの検出方法。
[8] コーキシンに特異的に結合するレクチンを結合させた担体が Sepharose (登録商標） または TOYOPEARL (登録商標） である [3；！〜 [7]のいずれかのネコ の腎機能障害由来の尿タンパクの検出方法。
[9] [1：]〜 [8]のいずれかのネコの尿タンパクの検出方法により、 ネコの尿タ ンパクを検出し、 ネコが腎機能障害を有しているかどうか判定することを含む、 ネコの腎機能障害の診断方法。
[1 0] コーキシンに特異的に結合するレクチンまたは抗コーキシン抗体を結合 させた担体および尿タンパク検出用尿試験紙を含む、 ネコの腎機能障害由来の尿 タンパク検出試薬。
[1 1] コーキシンに特異的に結合するレクチンまたは抗コーキシン抗体を結合 させた担体を充填したカラムおよび尿タンパク検出用尿試験紙を含む、 [1 0]の ネコの腎機能障害由来の尿タンパク検出試薬。
[ 1 2] コーキシンに特異的に結合するレクチンがレンズマメレクチンである [1 0]または [1 1]のネコの腎機能障害由来の尿タンパク検出試薬。
[1 3] コーキシンに特異的に結合するレクチンを結合させた担体が Sepharose (登録商標） または TOYOPEARL (登録商標） である [1 0]〜[1 2]のいずれかの ネコの腎機能障害由来の尿タンパク検出試薬。
[1 4] [1 1：！〜 [1 3]のいずれかのネコの尿タンパク検出試薬を含むネコの腎 機能障害診断薬。 図面の簡単な説明
図 1は、 ネコのタンパク尿診断キッ トの概略を示す図である。
図 2は、 レクチンプロットによる各種レクチンとコーキシンとの反応を示す図 である。
図 3は、 LCA-コーキシンによる尿サンプルからコーキシンの除去の結果を示す 図である。
図 4は、 ブルーチップを利用した担体カラムの作製法および使用法を示す図で ある。
図 5は、担体カラムを通過させた尿サンプルの SDS- PAGEの結果を示す図である。 図 6Aは、 担体カラム （LCA- Sepharoseカラム） を通過させた尿サンプル中のタ ンパク質量を示す図である。
図 6 Bは、 コントロールとして用いた SepharoseCL- 6Bカラムを通過させた尿サ ンプル中のタンパク質量を示す図である。
図 7は、 トョパール担体を用いてコーキシンを除去した尿サンプルの SDS-PAGE の結果を示す図である。
図 8 A は、 トヨパール担体を用いてコ一キシンを除去した尿サンプルの SDS-PAGE ゲルを用いてブラッドフォード定量法によりコーキシン量を定量した 結果を示す図である。
図 8 B は、 トヨパール担体を用いてコーキシンを除去した尿サンプルの SDS-PAGE ゲルを用いてデンシトメ トリ一定量法によりコーキシン量を定量した 結果を示す図である。
図 9は、 架橋トョパール担体を用いてコ一キシンを除去した尿サンプルの SDS- PAGEの結果を示す図である。 '
図 1 0 A は、 架橋トヨパール担体を用いてコーキシンを除去した尿サンプルの SDS-PAGE ゲルを用いてブラッドフォード定量法によりコーキシン量を定量した 結果を示す図である。
図 1 0 B は、 架橋トヨパール担体を用いてコーキシンを除去した尿サンプルの SDS-PAGE ゲルを用いてデンシトメ トリー定量法によりコーキシン量を定量した 結果を示す図である。
図 1 1は、コーキシンを除去処理した尿検体および処理しない尿検体を用いて、 尿試験紙 （プレテス ト、 和光純薬） を用いて尿中タンパク量を測定した結果を示 す図である。
図 1 2は、 血清を加えたネコ尿を架橋トヨパール担体に添加し通過した尿の SDS-PAGEの結果を示す図である。
図 1 3は、 血清を加えたネコ尿を架橋トヨパール担体に添加し通過した尿の Bradford法による定量の結果を示す図である。
図 1 4は、 腎臓病に罹患したネコの尿を架橋トヨパール担体に添加し通過した 尿の SDS- PAGEの結果を示す図である。
図 1 5は、 腎臓病に罹患したネコの尿を架橋トヨパール担体に添加し通過した ^ i/JP 2007/064724 尿の SDS- PAGEの結果を示す図である。 '
図 1 6は、 腎臓病に罹患したネコの尿を架橋トヨパール担体に添加し通過した 尿の SDS- PAGEの結果を示す図である。
発明を実施するための最良の形態
本発明の方法においては、 ネコ尿からコーキシンを除去し、 ネコ尿中の残った タンパク質を測定することにより、 ネコの腎機能障害を診断する。
本発明におけるネコとは、 ネコ科に属する動物をいい、 .イエネコ、 ピューマ、 ャマネコ等のネコ亜科に属する動物、 ヒヨウ、 ライオン、 トラ、 ジャガー等のヒ ヨウ亜科に属する動物、 チータ等のチータ亜科に属する動物を含む。
ネコ尿からのコーキシンの除去は、 コーキシンに特異的に結合する物質を用い て行うことができる。 ここで、 コーキシンに特異的に結合する物質とは、 ネコ尿 中に含まれるコーキシンには結合するが、 ネコ尿中に存在するコーキシン以外の タンパク質、 特にネコが腎機能障害に罹患した場合に、 高濃度で尿中に存在する タンパク質には結合しない物質をいう。 ネコ尿中に存在するコーキシン以外のタ ンパク質としては、 アルブミン、 グロブリン、 ]3 2 ミクログロブリン等が挙げら れる。 ユーキシンに特異的に結合する物質として、 レクチン、 抗コーキシン抗体 が挙げられる。 コーキシンに特異的に結合するレクチンとして、 コンカナパリン
A (Con A) , レンズマメ レクチン （LCA)、 ピーナツレクチン （PNA)、 ヒマレクチン
(RCA)、 インゲンマメ レクチン （PHA)、 コムギ胚芽レクチン （WGA)、 エンドゥマ メレクチン （PSA)、 ソラマメレクチン （VFA)等が挙げられる。 この中でも、 コー キシンとの結合親和性の高い、 レンズマメレクチン （LCA)が好ましい。 また、 そ の他にコーキシンの基質またはそのアナログ等のコ一キシンに特異的に結合する 化合物を挙げることができる。
抗コーキシン抗体は、 ネコ尿からコーキシンを精製し動物に免疫することによ り、 ポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体として容易に入手することが できる。
除去は、 ネコ尿をコーキシンに特異的に結合する物質と接触させ、 コーキシン とコーキシンに特異的に結合する物質との複合体を除去すればよい。 例えば、 コ ーキシンに特異的に結合する物質を適当な担体に結合させ、 該結合担体をカラム につめ、 ネコ尿を該カラムに通過させ、 通過した尿を回収することにより、 コー キシンを除去したネコ尿を得ることができる。 また、 コーキシンに特異的に結合 する物質を結合させた担体をネコ尿に添加し、 一定時間反応させた後に、 遠心分 離または濾過により、 担体とコーキシンの複合体を除去してもよい。 さらに、 尿 中にコーキシンに特異的に結合する物質を遊離の状態で添加し、 一定時間反応さ せた後に、 コーキシンとコーキシンに特異的に結合する物質の複合体を遠心分離 により除去してもよい。 コーキシンに特異的に結合する物質を結合させる担体と しては、 Sepharose (登録商標）、 Sephadex (登録商標）、 Cel lulofine (登録商標）、 ァフィ二ティークロマトグラフィー用 （AFCタイプ） T0Y0PERAL (登録商標） 等の セルロース、 ァガロース、 デキス トラン、 シリカ、 ビニルポリマー、 合成ポリマ 一等の樹脂を用いることができ、公知の方法で結合させることができる。例えば、 T0Y0PEARL AF-Tresyト 650、 T0Y0PEARL AF- Carboxy- 650、 T0Y0PEARL AF- Formyト 650、 T0Y0PEARL AF- Amino- 650、 T0Y0PEARL AF-Epoxy- 650、 （東ソ一社） を用いることが できる。 また各種レクチンを結合させた担体は市販されており、 これらの市販の レクチン結合担体を用いてもよい。 市販のものとして、 例えば LCA-Sepharose (Amersham 社）、 レンズマメレクチン-ァガロース （生化学工業社） 等が挙げられ る。 レクチンを利用してレクチンに結合するタンパク質を分離する方法はレクチ ンカラムを用いたァフィ二ティーク口マトグラフィ一として知られ、 用いるレク チンの決定、 レクチンと担体との結合、 カラムの作製、 レクチンカラムとタンパ ク質との結合条件の決定等は、 例えば、 「新生化学実験講座 3 糖質 I 糖蛋白 質 （上） P. 3-P. 29 東京化学同人 1990年 5月 2 1 日発行」 の記載に従って行 うことができる。
また、 コーキシンに特異的に結合する物質を結合させた担体を含むカラムを用 いる場合、 少量のネコ尿を用いた場合でも尿タンパク質の検出が可能なように、 ミニカラムを用いるのが望ましい。 ミニカラムの容量は、 例えば 100 1〜2000 μ
1 である。 例えば、 ポリプロピレン等の樹脂でできた市販のマイクロピペット用 チップ （ブルーチップまたはイェローチップ） の先端に脱脂綿、 濾紙等を詰めさ らにコーキシンに特異的に結合する物質を結合させた担体を詰め、 コーキシン除 去用ミ二カラムを作製し、 該ミニカラムにネコ尿を添加して通過した尿を回収す ることにより、 コーキシンを除去したネコ尿を得ることができる。 この際、 カラ ムの平衡化、 カラムに吸着したタンパク質の溶出には、 トリスバッファー、 リン 酸バッファ一等の緩衝液を用いればよい。
この際、 ネコ尿とコーキシンに特異的に結合する物質の量比に限定はないが、 ネコ尿中のコーキシンがすべて除去される量比で接触させればよい。 コーキシン は健常ネコの尿中において、 約 0. 9mg/ml、 腎機能障害に罹患したネコの尿中にお いて、 約 0. lmg/ml以下存在しており、 本発明の方法においては、 健常ネコの尿中 に存在するコーキシンを 90%以上、好ましくは 95%以上除去するように処理する。 ネコの腎機能障害の検出のためにはコーキシンを除去したネコ尿中のタンパク 質を測定すればよい。 腎機能障害のマーカーとなり得るタンパク質として、 例え ばアルブミン、 リゾチーム、 ハプトグロビン等が挙げられる。
尿中タンパク質の測定は、 尿タンパク質測定用の試験紙を用いて行うことがで さる。
尿タンパク質測定用の試験紙は、 公知の市販のものを用いればよい。 市販の試 験紙としては和光純薬工業のプレテスド等がある。 該試験紙はブロムフエノール ブルー、 テトラブロモフエノールブル一等の pH指示薬とクェン酸緩衝液等の pH 緩衝液を染み込ませてある試験紙であり、 pH指示薬のタンパク誤差によりタンパ ク質を検出する。
また、 ブラッドフォード法、 BCA タンパク質定量法、 スルホサリチル酸法等に より行うことができる。
ネコの場合、 コーキシンを除去した尿中タンパク質濃度により、 腎疾患に罹患 しているか否かを診断することができる。 ネコ尿中タンパク質濃度が、 約 100〜 数百/ i g/ml、 好ましくは約 100〜約 200 μ §/ιη1以上の場合、 腎疾患に罹患してい る可能性が高い。 最終的には、 獣医師の総合的な判断により、 腎疾患に罹患して いるか否かが診断される。
本発明の方法により、 ネコ尿中の腎機能障害に由来するタンパク質を挨出する ことができ、 ネコの腎機能障害を診断することができる。
また、 本発明はコーキシンと特異的に結合する物質を結合させた担体もしくは 該担体を充填したカラム、 ならびに尿タンパク検出用試験紙を含む腎機能障害由 来のネコ尿タンパクを検出する試薬またはキットを含む。 さらに、 該試薬を含む ネコの腎機能障害診断薬または診断キットを含む。
本発明を以下の実施例によって具体的に説明するが、 本発明はこれらの実施例 によって限定されるものではない。
実施例 1
レクチンは糖タンパク質の糖鎖を認識して特異的に結合する活性を持つタンパ ク質である。 コーキシンの糖鎖に対する各種レクチンの結合活性を調べた結果、 レンズマメレクチン （lens cul inaris lectin :以下 LCAと略す） の親和性が高く、 尿中のコーキシンに特異的に結合していることが明らかになった （図 2 )。
LCAを結合させた親和性担体である LCA- Sepharose (Amersham)にネコ尿を加え る こ と によ り 尿中のコーキシンを除去する実験を行った。 100 μ ΐ の LCA- Sepharoseに尿サンプルを 50 / l加え、転倒混和し、氷上で 5分間置いた後、 遠心し、 上清を回収した。 コントロールとして、 LCAを結合していない Sepharose 担体を用いて、 同様の実験を行った。 各サンプルを非還元条件下で SDS— PAGEを 行い、 CBB染色し、 タンパク質を検出した （図 3 )。
その結果、 コーキシン以外の尿タンパク質 （アルブミン） の量はほとんど変化 しないが、 コーキシンは LCA- Sepharose担体に特異的に吸着し、 サンプル中から 除去されることが明らかになった。
実施例 2 マイクロピぺット用ブルーチップ利用したレクチン担体と尿との反応 図 4のようにブノレーチップに 200 /z lの LCA -セファロースを充填し TBSで平衡 ィ匕した後、 尿 300 1をアプライしカラムを通過した尿を一滴.（約 50 μ 1) ずつ回 収した。 回収した尿は 10 / l を非還元条件下で SDS-PAGE に供した後ゲルを CBB 染色し （図 5 )、 ブラッドフォード法でタンパク質の定量を行った （図 6 )。
コントロールでは、 3〜4滴目の段階で平衡化バッファーが全て尿と置き換わ つている。 200 /z 1の LCAセファロースを詰めたチップには、 3滴目の画分におい て 90%以上のタンパク質が吸着していることが明らかになった。 このようなミニ カラムに尿を添加し、 数滴後のサンプルを回収することによりコ一キシンがほと んど除去された画分を得ることが可能になると考えられる。
実施例 3 トヨパール担体を用いたコーキシンの除去 LCAを結合させるァフィ二ティー担体として T0Y0PEARL AF - Tresyl 650M (T0HS0H、 以下トヨパールと略す） を用いて実施例 2と同様の実験を行った。 トヨパールを 0. lg (約 400 / 1) 計量し、 LCAを 15mg/ml (担体） になるように 0. 1M リン酸ナト リウムバッファー （pH 7. 4) 2 mlに溶解したものを加え、 4 °Cでー晚転倒混和し て反応させた。 その後 5倍量の 1 M NaClで担体を洗浄し、 0. 1 M Tris-HCl + 0. 5 NaCl にて室温で 1時間ブロッキングした。 回収した尿サンプルを SDS-PAGEに供 し、 CBB染色したゲルのイメージ画像（図 7 )より、画像解析プログラム（BI0-RAD、 Molecular Analyst) を用いてコーキシンのバンドの定量を行った（図 8 A および 図 8 B)。 図 8 Aがブラッドフォード定量法による結果、図 8 Bがデンシトメ トリー 定量法による結果を示す。 その結果、 コントロールの担体 （LCA を加えずにプロ ッキング処理だけ行ったもの） と比較して、 2滴目から 8滴目にかけて、 90〜95% のコーキシンが除去された尿サンプルが得られた。 また、 担体通過後の尿の全タ ンパク質濃度を色素結合法 （BIO- RAD Quick Start Bradford Dye Reagent) によ つて測定したところ、 タンパク質濃度がカラム通過前の 25〜30%まで低下してい た。 この操作により一般的な尿試験紙 （プレテスト ：和光純薬） において判定が 2段階変化する。 この結果から、 LCA カラムを用いる手法はネコ尿中のコーキシ ンの除去に有効であると考えられる。
同様の実験を 2回行った。 2回目の実験において、 上記担体 200 μ 1を、 先端を 5ram カツ トし先端に脱脂綿を詰めたブルーチップに充填し TBS (Tris- Buffered Sal ine)で平衡化した。 このカラムに尿 500 μ 1をアプライし、 カラムを通過した 尿を 2滴 （約 60 1) ずつ 8画分回収した。 回収した画分はそれぞれ Bradford法 でタンパク質の定量を行い、 10 μ 1を非還元条件下で SDS- PAGE (12%アクリルァ ミ ドゲル） に供した後ゲルを CBB染色した。 脱染後、 コーキシンのバンドをデン シトメ トリーで定量した。 コントロールと して、 レクチンを加えずに 0. 2M Tris-HCl (pH 7. 4) で反応基をブロックした担体を同じチップに同量充填したも のを用いた。
図 9に SDS- PAGEの結果、図 1 O Aに Bradfordァッセィの結果、図 1 0 Bにデン シトメ トリーを用いた定量の結果を示す。 Bradford法によるタンパク質定量では、
TBSが全て尿と置き換わった 5画分目において、 Totalタンパク質の約 88%、 デン シトメ トリーによるコーキシンのバンドの定量では約 96%のコーキシンが担体に 吸着されており、 ネコ尿から除去できることが確認できた。
上記の方法によりコーキシンを除去処理した尿検体および処理しない尿検体を 用いて、尿試験紙（プレテスト、和光純薬） を用いて尿中タンパク量を測定した。 結果を図 1 1に示す。 図 1 1に示すようにコーキシンを除去した尿検体では、 発 色の程度は低下していた。
上記の T0Y0PEARL AF-Tresyl 650Mの代わりに T0Y0PEARL AF-Formyl 650Mを用 いて同様の検討を行ったところ、 同様の結果が得られた。
実施例 4 血清タンパク質の影響
実施例 3で調製したカラムを用いて、 コーキシン除去における血清タンパク質 の影響を解析した。健常なォス猫の尿 490 μ 1に猫の血清を 10 // 1加えたものを担 体力ラムに添加し、 上述の方法で、 カラムを通過した尿のタンパク質の分析を行 つた。 図 1 2に各画分の SDS-PAGEの結果を、 図 1 3に各画分の Bradford法によ り測定したタンパク質濃度を示す。 図に示すように、 高濃度の血清タンパク質が 存在していても、コーキシンのみが選択的にカラムに吸着されることが判明した。 実施例 5 腎臓病に罹患したネコの尿を用いた測定
ほとんどコーキシンを尿中に出していない 3頭の腎臓病の猫の尿 500 μ 1 を用 いて実施例 3および 4と同様の実験を行い、 第 5から第 6溶出画分までの各画分 の SDS- PAGE〖こより、 タンパク質の溶出パターンをコントロールと比較した。 図 1 4〜図 1 6にそれぞれのネコの尿の SDS- PAGEの結果を示す。 図に示すように、 3 頭の尿で、 それぞれ尿タンパク質のパターンは異なっているが、 腎臓病の猫の尿 中に見られるコーキシン以外のタンパク質の LCAカラムへの結合はほとんど見ら れないことが分かった。
産業上の利用可能性
通常の尿検査に使われているタンパク試験紙を用いたネコの尿検査では、 健常 尿に大量に存在するコーキシンと腎疾患 （腎機能障害） 由来の尿タンパク質の区 別が困難であるが、 本技術を用いた測定法では、 後者のタンパク質のみを選択的 に検出することが可能である。
本明細書で引用した全ての刊行物、 特許および特許出願をそのまま参考として
- 11 -

Claims

I WO 2009/013839 PCT/JP2007/064724 請求の範囲
1 . ネコ尿からコーキシンを除去し、 コーキシン除去ネコ尿検体中のタンパ ク質を検出することを含む、 ネコの腎機能障害由来の尿タンパクの検出方法。
2 . ネコ尿をコーキシンに特異的に結合するレクチンまたは抗コーキシン抗 体と接触させることにより、 ネコ尿からコーキシンを除去する請求項 1記載のネ コの腎機能障害由来の尿タンパクの検出方法。
3 . コーキシンに特異的に結合するレクチンまたは抗コーキシン抗体を結合 させた担体を用レ、てネコ尿からコーキシンを除去する、 請求項 2記載のネコの腎 機能障害由来の尿タンパクの検出方法。
4 . コーキシンに特異的に結合するレクチンまたは抗コーキシン抗体を結合 させた担体を充填したカラムを用いてネコ尿からコーキシンを除去する請求項 3 記載のネコの腎機能障害由来の尿タンパクの検出方法。
5 . レクチンがレンズマメレクチンである請求項 2〜4のいずれか 1項に記 載のネコの腎機能障害由来の尿タンパクの検出方法。
6 . コーキシン除去ネコ尿中のタンパク質の検出が、 尿タンパク検出用の尿 試験紙を用いて行われる請求項 1〜 5のいずれか 1項に記載のネコの腎機能障害 由来の尿タンパクの検出方法。
7 . コーキシンに特異的に結合するレクチンがレンズマメレクチンである請 求項 2〜 6のいずれか 1項に記載のネコの腎機能障害由来の尿タンパクの検出方 法。
8 . コーキシンに特異的に結合するレクチンを結合させた担体が Sepharose (登録商標） または T0Y0PEARL (登録商標） である請求項 3〜 7のいずれか 1項 に記載のネコの腎機能障害由来の尿タンパクの検出方法。
9 . 請求項 1〜 8のいずれか 1項に記載のネコの尿タンパクの検出方法によ り、 ネコの尿タンパクを検出し、 ネコが腎機能障害を有しているかどうか判定す ることを含む、 ネコの腎機能障害の診断方法。
1 0 . コーキシンに特異的に結合するレクチンまたは抗コーキシン抗体を結 合させた担体および尿タンパク検出用尿試験紙を含む、 ネコの腎機能障害由来の 尿タンパク検出試薬。
1 1 . コーキシンに特異的に結合するレクチンまたは抗コーキシン抗体を結 合させた担体を充填したカラムおよび尿タンパク検出用尿試験紙を含む、 請求項
1 0記載のネコの腎機能障害由来の尿タンパク検出試薬。
1 2 . コ一キシンに特異的に結合するレクチンがレンズマメレクチンである 請求項 1 0または 1 1に記載のネコの腎機能障害由来の尿タンパク検出試薬。
1 3 . コーキシンに特異的に結合するレクチンを結合させた担体が Sepharose (登録商標） または T0Y0PEARL (登録商標） である請求項 1 0〜 1 2の いずれか 1項に記載のネコの腎機能障害由来の尿タンパク検出試薬。
1 4 . 請求項 1 1〜1 3のいずれか 1項に記載のネコの尿タンパク検出試薬 を含むネコの腎機能障害診断薬。
PCT/JP2007/064724 2007-07-20 2007-07-20 ネコタンパク尿診断薬 Ceased WO2009013839A1 (ja)

Priority Applications (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP07791418A EP2180318B1 (en) 2007-07-20 2007-07-20 Diagnostic agent for urinary protein of cat
US12/452,687 US8268639B2 (en) 2007-07-20 2007-07-20 Diagnostic kit for detecting urinary protein of a cat after cauxin removal
PCT/JP2007/064724 WO2009013839A1 (ja) 2007-07-20 2007-07-20 ネコタンパク尿診断薬
JP2009524365A JP5346289B2 (ja) 2007-07-20 2007-07-20 ネコタンパク尿診断薬
US13/587,255 US8415163B2 (en) 2007-07-20 2012-08-16 Method of diagnosing renal dysfunction in a cat based on non-cauxin protein levels

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PCT/JP2007/064724 WO2009013839A1 (ja) 2007-07-20 2007-07-20 ネコタンパク尿診断薬

Related Child Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
US12/452,687 A-371-Of-International US8268639B2 (en) 2007-07-20 2007-07-20 Diagnostic kit for detecting urinary protein of a cat after cauxin removal
US13/587,255 Division US8415163B2 (en) 2007-07-20 2012-08-16 Method of diagnosing renal dysfunction in a cat based on non-cauxin protein levels

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2009013839A1 true WO2009013839A1 (ja) 2009-01-29

Family

ID=40281102

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/JP2007/064724 Ceased WO2009013839A1 (ja) 2007-07-20 2007-07-20 ネコタンパク尿診断薬

Country Status (4)

Country Link
US (2) US8268639B2 (ja)
EP (1) EP2180318B1 (ja)
JP (1) JP5346289B2 (ja)
WO (1) WO2009013839A1 (ja)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2011102540A1 (ja) * 2010-02-17 2011-08-25 国立大学法人千葉大学 ネコ尿中コーキシン除去材料
JP2012189504A (ja) * 2011-03-11 2012-10-04 Kitasato Institute ネコ由来β２ミクログロブリンの測定方法および測定キット、ならびに、そのための抗体および抗体産生細胞株
JP2012189503A (ja) * 2011-03-11 2012-10-04 Kitasato Institute ネコ由来α１ミクログロブリンの測定方法および測定キット、ならびに、そのための抗体および抗体産生細胞株

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8268639B2 (en) 2007-07-20 2012-09-18 Incorporated National University Iwate University Diagnostic kit for detecting urinary protein of a cat after cauxin removal
US20110023156A1 (en) * 2008-12-04 2011-01-27 Sigma-Aldrich Co. Feline genome editing with zinc finger nucleases
US8956859B1 (en) 2010-08-13 2015-02-17 Aviex Technologies Llc Compositions and methods for determining successful immunization by one or more vaccines

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2003250575A (ja) 2002-03-04 2003-09-09 Tohoku Techno Arch Co Ltd ネコ腎臓病診断マーカー
US20060270051A1 (en) 2005-05-31 2006-11-30 Jenkins Dennis B Protein detection system

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IT1227293B (it) * 1988-10-06 1991-04-05 Boehringer Biochemia Srl Dispositivo e metodo per la diagnosi di gravidanza
EP0535485B1 (en) * 1991-10-03 1997-07-16 Bayer Corporation Device and method of separating and assaying whole blood
US7691645B2 (en) * 2001-01-09 2010-04-06 Agilent Technologies, Inc. Immunosubtraction method
US8268639B2 (en) 2007-07-20 2012-09-18 Incorporated National University Iwate University Diagnostic kit for detecting urinary protein of a cat after cauxin removal

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2003250575A (ja) 2002-03-04 2003-09-09 Tohoku Techno Arch Co Ltd ネコ腎臓病診断マーカー
US20040214171A1 (en) 2002-03-04 2004-10-28 Tohoku Techno Arch Co., Ltd. Cat kidney disease marker
US20060270051A1 (en) 2005-05-31 2006-11-30 Jenkins Dennis B Protein detection system

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
MIYAZAKI M. ET AL: "Tubulointerstitial nephritis causes decreased renal expression and urinary excretion of cauxin, a major urinary protein of the domestic cat", RESEARCH IN VETERINARY SCIENCE, vol. 82, no. 1, February 2007 (2007-02-01), pages 76 - 79, XP005724402 *
See also references of EP2180318A4 *
SUZUKI Y. ET AL.: "Structural characterization of N-glycans of cauxin by MALDI-TOF mass spectrometry and nano LC-ESI-mass spectrometry", BIOSCI. BIOTECHNOL. BIOCHEM., vol. 71, no. 3, 7 March 2007 (2007-03-07), pages 811 - 816, XP003024650 *

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2011102540A1 (ja) * 2010-02-17 2011-08-25 国立大学法人千葉大学 ネコ尿中コーキシン除去材料
US8962705B2 (en) 2010-02-17 2015-02-24 National University Corporation Chiba University Material for removing cauxin in cat urine
JP5920888B2 (ja) * 2010-02-17 2016-05-18 国立大学法人 千葉大学 ネコ尿中コーキシン除去材料
JP2012189504A (ja) * 2011-03-11 2012-10-04 Kitasato Institute ネコ由来β２ミクログロブリンの測定方法および測定キット、ならびに、そのための抗体および抗体産生細胞株
JP2012189503A (ja) * 2011-03-11 2012-10-04 Kitasato Institute ネコ由来α１ミクログロブリンの測定方法および測定キット、ならびに、そのための抗体および抗体産生細胞株

Also Published As

Publication number Publication date
JPWO2009013839A1 (ja) 2010-09-30
US20100190262A1 (en) 2010-07-29
EP2180318A4 (en) 2010-07-14
EP2180318B1 (en) 2012-08-29
JP5346289B2 (ja) 2013-11-20
EP2180318A1 (en) 2010-04-28
US8415163B2 (en) 2013-04-09
US8268639B2 (en) 2012-09-18
US20120309110A1 (en) 2012-12-06

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Wang et al. A simple affinity spin tube filter method for removing high‐abundant common proteins or enriching low‐abundant biomarkers for serum proteomic analysis
JP7741067B2 (ja) 複数の分析物を用いた糞便抗原検査
AU2014311258B2 (en) Method of identifying biomarkers of neurological diseases and diagnosis of neurological diseases
DK2863223T3 (en) Method for detecting specific substances in milk
US8415163B2 (en) Method of diagnosing renal dysfunction in a cat based on non-cauxin protein levels
Comper et al. Detection of urinary albumin
US20040018576A1 (en) Bence Jones protein testing cassette
JP2019535015A5 (ja)
Nabity et al. Urinary biomarkers of kidney disease in dogs and cats
JP2015105951A (ja) 血液由来の癌診断用ペプチドマーカー及びそれを用いた癌診断方法
EP2883061A1 (en) Kidney disease biomarker
Rydell et al. Development of an automated ImmunoCAP research assay for eosinophil derived neurotoxin and its use in asthma diagnosis in children
WO2005116651A2 (en) Method and device for testing for bence-jones protein
WO2017194779A1 (en) Use of anti-cd26 antibody levels as autoimmune and/or inflammatory disease biomarkers
WO2020016571A1 (en) Ferritin analysis via lateral flow immunoassay
KR20140148345A (ko) 류마티스 관절염 활성도 평가용 바이오마커
HU206157B (en) Method for detecting hemoglobin
JP4438455B2 (ja) 遊離ヒトイムノグロブリン軽鎖の測定法及びキット
Vacek et al. Electrocatalytic artificial carbonylation assay for observation of human serum albumin inter-individual properties
US20240426840A1 (en) Compositions and methods for detecting and treatment of membranoproliferative glomerulonephritis
JP7594755B2 (ja) Ａｂｏ血液型不適合腎移植を行う被験動物における抗体関連型拒絶反応の可能性を試験する方法
US20230096313A1 (en) Method of biomarker detection in companion animals
Chen et al. B-259 RNase L Deficiency Enhances Renal Self-Repair Following Nephrotoxin-induced Acute Kidney Injury via EGFR/AKT Activation and Apoptosis Inhibition
CN118897083A (zh) 尿液mt蛋白及其多肽片段在痛风中的应用
JP2018066631A (ja) Ｎａｓｈやｎａｆｌｄの進展度の検査方法及び炎症疾患や癌の検査方法

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 07791418

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2009524365

Country of ref document: JP

Kind code of ref document: A

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 12452687

Country of ref document: US

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2007791418

Country of ref document: EP

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 12452687

Country of ref document: US