WO2009031918A1 - Композиции аполактоферрина и способы их применения в лечении вирусного гепатита с - Google Patents

Композиции аполактоферрина и способы их применения в лечении вирусного гепатита с Download PDF

Info

Publication number
WO2009031918A1
WO2009031918A1 PCT/RU2008/000109 RU2008000109W WO2009031918A1 WO 2009031918 A1 WO2009031918 A1 WO 2009031918A1 RU 2008000109 W RU2008000109 W RU 2008000109W WO 2009031918 A1 WO2009031918 A1 WO 2009031918A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
lactoferrin
treatment
hcv
human lactoferrin
apolactoferrin
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Ceased
Application number
PCT/RU2008/000109
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Nikolai Evgenievich Shatunovsky
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Individual
Original Assignee
Individual
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Individual filed Critical Individual
Priority to EP08741791.1A priority Critical patent/EP2196211B1/en
Priority to EA200900558A priority patent/EA013008B1/ru
Priority to CN200880114714A priority patent/CN101848727A/zh
Publication of WO2009031918A1 publication Critical patent/WO2009031918A1/ru
Anticipated expiration legal-status Critical
Ceased legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/40—Transferrins, e.g. lactoferrins, ovotransferrins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/21—Interferons [IFN]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/21—Interferons [IFN]
    • A61K38/212—IFN-alpha
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/12—Drugs for disorders of the metabolism for electrolyte homeostasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses

Definitions

  • the present invention relates to medicine, in particular to hepatology and virology, and for the use of lactoferrin for the treatment of chronic infection caused by hepatitis C virus (HCV). Even more specifically, the invention provides pharmaceutical compositions containing apolactoferrin and interferon, and methods for using the compositions in the treatment of chronic hepatitis C virus infection.
  • HCV hepatitis C virus
  • HCV belongs to the family of Flaviviridae RNA viruses and causes an infectious process in people, the most common complication of which is hepatitis, which develops into cirrhosis of the liver and hepatocarcinoma (Survillaps. Neratitis. CDC Rpert Nbbl; Yoshusssi Z, Kellmap J Canal Kaid of HCV ipfestiop apd mapagamept on health-relat qualitu of lif. Nerology. 2007 Mar; 45 (3): 806-16).
  • HCV infection has infected more than 170 million people on Earth, and the number of infected continues to increase. Worldwide, there are about 1.5 million cases of hepatocarcinoma caused by HCV infection. The losses associated with this disease in the United States alone are estimated at $ 200 million annually.
  • HCV has both a powerful ability to suppress the human immune system t and the ability to bypass it due to “adaptive” mutations.
  • Methods of treating HCV have been and remain based on the use of interferon, introduced in megadoses, in particular, genetically engineered interferon preparations (Scherrd J, Jopes J, Narutell D, Davidsop P, Rice A, Wugh N. Iperfépuldepredelfed apd ribavirip the fog treatmept ° F mild shropis heratitis C: a review sustematis apd esopomis evaluatiop Nealth Teshpol Assess 2007 Mar; ll (ll):..
  • a common current trend in the treatment of HCV is the use of complex therapy that adds a cocktail to the genetically engineered interferon containing both common antiviral drugs and one or two inhibitors of HCV reproduction (inhibitors of specific protease-helicase and / or RNA polymerase) (Topiuto P, Fabris C, Vito D, Formacy E, Raretti R, Pirisi M. Valoritibi dihydrochloride: and Sresifi prospective rolomecerase hepatitis ⁇ virus. ⁇ urr ⁇ ripe Ipheptesp. GaIe M Jr.
  • Lactoferrin is a natural iron-binding protein found in tear fluid, saliva, peripheral blood, in particular, in white blood cells, breast milk, colostrum, secrets of glandular epithelium, etc. Lactoferrin is able to bind two iron atoms per molecule. There is currently no consensus in the scientific and patent literature regarding the molecular weight of lactoferrin.
  • lactoferrin has a molecular weight of about 80,000 Da (see, for example, EP 0 253 395 B2).
  • the molecular weight of bovine lactoferrin is given in the literature as 76,000 Da (Farrell HM, Jr., et al. Nomepserton tothe Roteips sf Cows MiIk - Sihth Revisiop. J. Dairu Ssi. (2004) 87, p. 1641-1674), 86000 Yes (Kazutomo Imáb apd Tam ⁇ o Yamakawa, Ed., “Diopiopuo Biochemistu”, 2 nd ediopi, p.
  • Lactoferrin and its derivatives have pronounced antioxidant, antibacterial (J. Rediatr., 1979, v. 94, p. 1), immunomodulating and antitumor activities.
  • lactoferrin was proposed as an enhancer of the therapeutic effect of interferon in the treatment of chronic hepatitis C (patent application EP 1 352 657, 10/15/2003).
  • lactoferrin essentially free of bound iron ion (apelite, i.e. apolactoferrin)
  • apelite i.e. apolactoferrin
  • the present invention relates to a composition
  • a composition comprising human lactoferrin and interferon, wherein said lactoferrin is substantially free of iron, and wherein said composition is substantially free of non-human lactoferrin.
  • human lactoferrin has a degree of iron saturation of less than about 5%. In yet another embodiment of the composition of the present invention, human lactoferrin has an apparent molecular weight of about 80 kDa.
  • human lactoferrin is present in an amount of about 20 mg.
  • the composition of the present invention is useful for treating HCV infection.
  • the HCV infection is a chronic HCV infection.
  • the HCV belongs to genotype Ib.
  • composition of the present invention is capable of eliminating HCV from the patient’s body for a period of more than 3 months.
  • the present invention relates to a method for treating a patient infected with HCV, comprising administering to said patient: a. a composition comprising human lactoferrin, wherein said lactoferrin is substantially free of iron, and wherein said composition is substantially free of non-human lactoferrin; and b. interferon.
  • human lactoferrin has a degree of iron saturation of less than about 5%.
  • human lactoferrin has an apparent molecular weight of about 80 kDa.
  • human lactoferrin is present in the composition in an amount of about 20 mg.
  • the patient undergoing treatment is chronically infected with HCV.
  • the HCV method relates to the Ib genotype.
  • elimination of HCV from the patient’s body is achieved for a period of more than 3 months.
  • the present invention relates to a kit for treating HCV infection, comprising: a. a first container containing a therapeutically effective amount of human lactoferrin, wherein said lactoferrin is substantially free of iron; b. a second container containing a therapeutically effective amount of interferon.
  • the first container is substantially free of non-human lactoferrin.
  • human lactoferrin has a degree of iron saturation of less than about 5%.
  • human lactoferrin has an apparent molecular weight of about 80 kDa.
  • human lactoferrin is present in an amount of about 20 mg.
  • the kit is for treating a HCV infection, which is a chronic infection.
  • the kit is intended for the treatment of HCV infection caused by a virus having the Ib genotype.
  • the inventive group of inventions is aimed at solving a single problem - the creation of affordable drug with antiviral (hepatitis C) effect on the human body as a whole.
  • the drug is biocompatible with the human body and therapeutically highly effective in the treatment of chronic viral hepatitis C, combined with the use of interferons and chemotherapy.
  • drugs of the desired concentration can be made.
  • the drug is convenient in storage and transportation.
  • Medicines based on the drug can be administered intravenously into the human body.
  • the drug is affordable, its use in medical practice is economically justified. 6.
  • the use of the drug in combination with interferons and chemotherapy for chronic viral hepatitis C allows you to achieve a persistent antiviral effect in a significantly shorter period of time (10-20 times faster) than when using known treatment regimens for chronic viral hepatitis C.
  • the drug significantly enhances the effectiveness of the existing treatment regimen for chronic viral hepatitis C, reducing the time of complete cure to a 2-3 week course.
  • FIG. 1 presents the results of the purity analysis of various samples of human lactoferrin by polyacrylamide gel electrophoresis under denaturing conditions in the presence of DDS-Na.
  • Lane A is a molecular weight marker
  • lane B is a standard human lactoferrin preparation
  • lanes 1-3 are human lactoferrin samples (commercial Laprot drug)
  • lanes 4-13 are human lactoferrin apoproteins.
  • FIG. 2 presents the results of chromatographic analysis of a sample of human lactoferrin (commercial drug "Laprot”) by HPLC.
  • FIG. 3 presents the results of chromatographic analysis of a sample of human lactoferrin by HPLC.
  • substantially free of iron refers to a lactoferrin composition having an iron saturation level that is less than about 5%, however, the invention also provides higher iron saturation levels, including but not limited to 5% to 20%.
  • the expression “less than about 5%” refers to a lactoferrin composition having an iron content that does not exceed 6%, such as, for example, 5.9%.
  • the expression ((present in an amount of about mg / ⁇ g) refers to the amount of apolactoferrin that is effective for treating HCV. This amount includes (but is not limited to) an amount that is greater or less than that indicated in mg / ⁇ g by up to up to 15%.
  • the preparation of the present invention is preferably administered by being included in a pharmaceutical composition containing, as an active ingredient, a therapeutically effective amount of lactoferrin, essentially in the form of an apobel, with a molecular weight of about 80,000 daltons and a pharmaceutically acceptable carrier, excipient or excipient.
  • a pharmaceutically acceptable carrier excipient or excipient.
  • about 80,000 daltons refers to a mass that is less than or greater than 80,000 daltons by up to 15%.
  • pharmaceutically acceptable carrier, excipient or excipient is meant such a carrier, excipient or excipient that does not cause any undesirable side effects in the patient to whom it is administered.
  • Rharmaseutisal Formulatiop Develormept Rertides apd Rroteips ° F, and L. S.Frokjaer Novgaard, EDS, Taulor apd Fgapsis., 2000; and Napdbook of ⁇ harmase refurbishutivical ⁇ xciriepts , Z gd editiop, A. Kibbe, Ed., PHARMACEUTICAL PRESS, 2000).
  • Examples of pharmaceutically acceptable carriers, excipients or excipients include, but are not limited to, buffering agents, isotonicity agents, preservatives, surfactants (ionic and nonionic), excipients, stabilizers, etc.
  • the lactoferrin apoprotein may be incorporated into the pharmaceutical composition of the present invention by well-known methods. Suitable methods for incorporating into the composition are described, for example, in Remhtop's Pharmacutil Scieps, 17 th editop (Mask Publ. Co., Philadpelhia, PA, 1985).
  • the apolactoferrin compositions of the invention may be administered alone or in combination with one or more other therapeutic agents. These agents may be included in the same composition as apolactoferrin, or they may be present in a separate composition, such as, for example, in a kit.
  • the composition of the present invention comprises a therapeutically effective amount of apolactoferrin in combination with interferon.
  • Interferon suitable for use in the present invention may be in any form that provides a therapeutic effect when administered in accordance with, for example, the methods disclosed in the present invention.
  • the apolactoferrin compositions of the present invention may be formulated with or may be administered in combination with interferon alfa-2a.
  • the pharmaceutical composition of the present invention can be formulated in a variety of formulations, for example, as a solution, emulsion, lyophilized powder for dissolution of exter.
  • the pharmaceutical apolactoferrin composition of the present invention may be a lyophilized or stable dissolved form.
  • a lyophilized form can be prepared using a variety of techniques known in the art. This form, as is known to those skilled in the art, ensures the stability of the composition over an extended period of time.
  • the advantage of obtaining a liquid stabilized composition is the ease of use and, in case of emergency, in a faster action, which can potentially save the patient's life.
  • the liquid composition may also be frozen, which suggests its thawing immediately before administration to the patient.
  • a specialist in this field in particular, the attending physician will be able to prescribe additional drug or non-drug therapy, guided by the condition of the patient, the presence of concomitant diseases, clinical feasibility, taking into account known information about the compatibility of drugs.
  • compositions of the present invention can be administered by any of the routes that provides a therapeutic effect in the treatment of HCV infection, including chronic HCV infection.
  • compositions may administered parenterally, for example, intravenously, intraarterially, intraperitoneally, intramuscularly or through any combination of the above.
  • the pharmaceutical composition is administered intravenously.
  • Such an intravenous composition may be a solution, suspension, an oil-in-water, water-in-oil emulsion, or a liposome suspension.
  • solvents for the preparation of a solution for intravenous administration such well-known pharmaceutically acceptable solvents can be used as, for example, isotonic 0.9% saline solution (physiological solution), 5% glucose (dextrose) solution, mannitol solution, etc.
  • the solution may additionally contain auxiliary components, for example, stabilizers, surfactants, antimicrobial agents (preservatives), etc.
  • Methods for producing sterile pyrogen-free solutions for parenteral administration are well known to specialists in this field and include the use of sterile pyrogen-free water and sterilization of the resulting solution, for example by filtration through a sterilizing filter, for example, with a pore size of 0.4 ⁇ m.
  • human apolactoferrin is administered intravenously in the treatment of chronic HCV.
  • the composition is administered in a dose of 20 mg every 2 hours on the first and second days of the therapeutic regimen. From day 3 to day 7 of the scheme, the apolactoferrin composition is administered in a daily dose of 20 mg. From day 3 to day 7, interferon hyperdoses (for example, interferon alfa-2a) are also administered under the guise of extracorporeal detoxification methods.
  • the inventors associate the pronounced observed with the use of apolactoferrin in the treatment of viral hepatitis C repatoprotective effect with the fact that cells infected with hepatitis C virus, under the action of apolactoferrin, end their lives with apoptosis, rather than necrosis, which prevents the release of new and new portions of the virus into the systemic circulation.
  • the preferred route of administration of the apoprotein of lactoferrin - intravenous - provides fast and targeted delivery of apolactoferrin unchanged to the target organ (liver), which ensures maximum accumulation of the active principle in the liver.
  • the term "therapeutically effective amount” refers to the amount of a drug that will provide the desired effect in relation to the disease being treated.
  • a therapeutically effective amount should be able to prevent, reduce the severity or spread of the disease that is being treated.
  • the desired effect may consist in reducing the titer of viral particles in the patient’s blood or in the complete removal of the virus from the bloodstream, in hepatoprotective function, etc.
  • the most desirable result of treatment is the complete elimination of the causative agent of viral hepatitis C from the patient.
  • Therapeutically effective doses can be determined individually by a person skilled in the art taking into account such variables as the patient’s weight and age, general health, severity of the underlying disease, the presence of concomitant diseases, etc.
  • the administration schedule including the dosage of the drug therapy components of the present invention, the route of administration, the frequency of administration, the duration of the course of treatment can also be determined routinely by a person skilled in the art and, if necessary, can be adjusted during treatment, taking into account laboratory data, clinical observation, and dynamics of symptoms etc.
  • Human lactoferrin can be isolated from female colostrum, transitional milk or milk and other biological material of humans, as well as obtained by genetic engineering or transgenic methods. Lactoferrin can be obtained from human milk serum by salting out and cation exchange chromatography, as described in USSR patent N ° 1709606 03/01/1990. Also known is a method of producing lactoferrin from human milk by diafiltration-ultrafiltration (international publication of the application WO 89/11226, 11/30/1989). A method is described for a one-step purification of lactoferrin from breast milk by affinity chromatography on a column with immobilized monoclonal antibodies against human lactoferrin (patent JP60100019, 08.29.1985). All of these methods, as well as other methods, can be successfully used to provide native lactoferrin (in the form of holobelka containing bound iron).
  • lactoferrin expression of the gene encoding human lactoferrin is observed not only in the mammary gland, but also in other tissues.
  • a sequence of mRNA from seminal vesicles encoding lactoferrin (GepVapk Ace. No. AAN75578) is described.
  • the lactoferrin gene was cloned from the human bone marrow, which is an alternative splicing variant (HepBapk Ace. No. AARl 2276).
  • a number of nucleotide sequences of the human lactoferrin gene from the mammary gland and their corresponding amino acid sequences have also been published, which have some differences in individual amino acid residues (see, for example, GepVapk Ace. Nos.
  • human lactoferrin having at least 80%, more preferably at least 90%, even more preferably at least 95%, and most preferably at least 99% homology of the amino acid sequence with the human lactoferrin sequence represented, for example, by a sequence deposited in HepBapk under the access code Ace. No. AAA59511.
  • human lactoferrin Given the fact that it is difficult to obtain natural human lactoferrin on an industrial scale, recombinant human lactoferrin is useful in the practice of the present invention.
  • the sequence of the human lactoferrin gene is known, for example, from the international publication of application WO 92/21752 (12/10/1992), and also see the sequences deposited in HepBapk mentioned above. Describes the methods of expression of recombinant human lactoferrin and plasmid designs for these purposes (for example, patent US 6,277, 817, 08.21.2001).
  • the main significant difference between the claimed drug and all previously known drugs containing lactoferrin is that due to the high degree of purification of the lactoferrin, which is part of the drug, the maximum concentration of one isoform of apolactoferrin (with an apparent molecular weight of about 80 kDa), the most active in antiviral plan, which ensures the reliability and safety of its use in the treatment process.
  • the claimed concentration of lactoferrin in the preparation allows for a long time to maintain lactoferrin in the native state, that is, in a state of maximum physiological activity.
  • Example 1 Comparative analysis of various preparations of human lactoferrin.
  • the drug "Laprot” was obtained from the Moscow Scientific Research Cancer Institute. P.A. Spa.
  • the lactoferrin protein content in the Laprot preparation varied in the range from 2.7 to 3.3 mg per 10 mg of the lyophilized preparation.
  • Apolactoferrin protein (samples 4-13) was obtained from human milk serum by salting out with ammonium sulfate and cation exchange chromatography in accordance with the previously described method (USSR patent N ° 1709606 03/01/1990) with some modifications. Cation exchange chromatography was performed on a column with a diameter of 25 mm with a cation exchanger volume of 50 ml. Touorerl CM-650S (TosoHaas Part # 43253) was used as a cation exchanger. The flow rate is 30 ml / hour, the peristaltic pump Mis-re-treh (Pharmacia). Protein detection in the eluate was carried out using a Uviessord SII detector (Pharmacia), fractions were collected using a Multirak fraction collector (Pharmacia).
  • the apolactoferrin protein content in samples 4-13 ranged from 15.2 to 20.0 mg per ml of solution.
  • the iron content in lactoferrin preparations was determined spectrophotometrically by the ratio of A 465 ZA 280.
  • Table. 1 shows the degree of saturation with iron (%) for all investigated samples.
  • Table 1 The degree of iron saturation of human lactoferrin in various samples.
  • HPLC High Performance Liquid Chromatography
  • the human lactoferrin preparation was administered both in monotherapy and in combination with interferon, prolonged interferon, ribavirin and cytostatics in combination with extracorporeal detoxification methods.
  • a two-hour administration schedule of 20 mg was applied every 2 hours for 10 hours.
  • hepatitis C virus was eliminated.
  • it didn’t hepatitis B virus was detected, but after a week it again began to be detected at the previous level of viremia.
  • Hepatitis C virus was not detected during treatment with reaferon in the next three months, or after discontinuation of this treatment for the next 9, 18, 27 and 36 months, which is confirmed by control analyzes.
  • Hepatitis B treatment was carried out according to the standard scheme and was completed successfully only after a year.
  • the treatment was carried out according to the scheme with weekly cycles, moreover, during administration of apolactoferrin, reaferon was not administered in the first week, in the weekly interval between administration of apolactoferrin, reaferon was used twice in 3 million units. After 7-9 days from the start of treatment, an exacerbation of a catarrhal disease was observed. These catarrhal manifestations proceeded in an erased form and took place spontaneously, without interfering with the treatment of the underlying disease.
  • Elimination of the virus occurred in the third week of complex treatment (apolactoferrin, reaferon, HDF).
  • Laboratory information about the persistent absence of the virus in the blood of this patient was obtained during control analyzes 6, 16, 23 and 30 months after completion of treatment.
  • the treatment is inpatient, the drug lactoferrin apobelok human was administered according to a seven-day regimen in combination with reaferon and extracorporeal methods of detoxification. Since the beginning of treatment, biochemical disorders in the blood have not been detected, bilirubin and liver enzymes remained within normal limits. Elimination of the virus at the end of the third week of complex treatment. In control studies after 6, 12, 24 and 33 months, the absence of the virus in the blood was recorded.
  • the second stage of complex therapy was carried out according to the same scheme with a reduction in the doses of ribavirin and lamivudine. The elimination of the virus came at the end of the first week of the second stage of treatment. Control studies over the next 13 months do not indicate the presence of the virus in the blood. Biochemical parameters have also stabilized.
  • the treatment was outpatient.
  • the preparation of human lactoferrin apoprotein was administered daily at 40 mg for three days, then four days at 20 mg. Then there was a week-long pause in treatment, after which a second course of treatment with apolactoferrin was carried out daily at 40 mg.
  • This treatment regimen was chosen on the basis of the assumption that the drug has an immunosuppressive effect. Given that the developmental cycle of immune cells is approximately 7 days, there were a decision was made to alternate seven-day cycles of administration of the drug apolactoferrin without the use of interferons.
  • Apolactoferrin monotherapy led to a partial elimination of the virus: there was a decrease in viremia from high to average 3 * 10 4 IU / ml.
  • monotherapy with the apoprotein of human lactoferrin provided only a partial elimination of the hepatitis C virus.
  • the next stage of treatment of the patient after applying monotherapy with apolactoferrin was a complex treatment using interferon preparations.
  • the course of treatment was started with a pulse injection of 20 mg of apolactoferrin every 2 hours until a dose of 100 mg was reached. Further, the apolactoferrin preparation was administered daily at 40 mg without observing weekly cyclicity. Starting from the 5th day of administration of apolactoferrin, the preparation of interferon Alfa-2A (Reaferon) in doses of 3 million units was used in parallel. in one day. This decision was made due to the high initial level of AlAT (SGPT) and AcAT (SGOT) for hepatoprotection.
  • SGPT AlAT
  • SGOT AcAT
  • Viremia rose to an average level, accompanied by high fermentemia.
  • viremia was already 5 * 10 6 IU / ml, fermentemia was high, although half as much as the initial level.
  • complex therapy was carried out using apolactoferrin according to a two-hour schedule for two days in a row, then daily 20 mg in weekly cycles to prevent the possible occurrence of virus resistance to the drug.
  • Reaferon was replaced with Intron A at 5 million units every other day, and ribavirin at 1200 mg per day was added to the treatment.
  • apolactoferrin produces a "marking" of the virus by binding to its E2 epitope, thereby making it "visible” to the immune system, and also making it difficult for it to enter the hepatocyte.
  • a two-hour regimen of administration of apolactoferrin was administered in a dose of 20 mg every 2 hours until a dose of 100 mg was reached, then administration of apolactoferrin was continued at 20 mg daily.
  • Patient A.A.H. women, age 37.
  • the diagnosis is hepatitis C caused by the genotype IB virus.
  • Viremia high 100,000 IU / ml.
  • the disease duration was 2 years according to documented data.
  • the treatment was carried out on an outpatient basis.
  • the preparation of human lactoferrin apoprotein was administered daily at 40 mg for three days, then four days at 20 mg. Then there was a week-long pause in treatment, after which a second course of treatment with apolactoferrin was carried out daily at 40 mg.
  • This treatment regimen was chosen based on the assumption that the drug has immunosuppressive effect. Given that the development cycle of immune cells is approximately 7 days, it was decided to alternate the seven-day cycles of administration of the drug apolactoferrin.
  • the next stage of treatment of the patient after partial success with the use of apolactoferrin monotherapy was a comprehensive treatment using interferon preparations and extracorporeal detoxification methods.
  • the course of treatment was started with a pulse injection of 20 mg of apolactoferrin every 2 hours until a dose of 100 mg was reached. Further, the apolactoferrin preparation was administered daily at 40 mg without observing weekly cyclicity.
  • the preparation of interferon Alfa-2A (Reaferon) was used in doses of 3 million units. in one day.
  • the elimination of the virus was accompanied by a relative increase in the level of AlAT (SGPT) and AcAT (SGOT), which nevertheless remained within the normal range.
  • SGPT AlAT
  • SGOT AcAT
  • viremia increased to an average level.
  • a repeated course of administration of apolactoferrin at 20 mg daily was started, however, with a control study on the fourth day of treatment, high viremia was found.
  • a two-week break was taken in the use of apolactoferrin.
  • Ribavirin 1000 mg / day was added to the course of treatment, reaferon was replaced by interferon alfa-2B (Intron) at 5 million units every other day.
  • the introduction of apolactoferrin started with a proven two-hour regimen, then 20 mg daily without compliance with weekly cycles.
  • viremia was moderate.
  • the amount of antiviral immunoglobulin M was significant.
  • Intron was used from day 5 from the start of apolactoferrin administration.
  • the sixth day of treatment i.e.
  • the patient experienced an increase in viremia up to 430 thousand IU / ml, which correlates with biochemical parameters in blood tests. Preserved high levels of antiviral IgM.
  • the diagnosis is hepatitis C, genotype Ib. Long liver history of about 6 years, chronic pancreatitis.
  • the diagnosis of HCV was diagnosed in a laboratory during a routine examination. The duration of the disease is 1.5 years according to documentary data.
  • the initial viremia is 1 * 10 7 IU / ml.
  • the patient was treated inpatiently.
  • the initial biochemical parameters AJlT (SGPT), ACT (SGOT) are within normal limits, bilirubin is increased 2 times, ALP is increased 10 times.
  • viremia remained within 1.2 * 10 5 - 2.3 * 10 5 IU / ml.
  • a decrease in viremia less than 500 IU / ml was noted.
  • Pegacis interferon was used, applied once a week.
  • a control study revealed the persistence of viremia at a level of 600 IU / ml.
  • viremia increased to 3.5 * 10 5 IU / ml and remained at this level until the very end of the third stage. The patient was transferred to the scheme of long-term administration of prolonged interferon. Control studies after 6, 12 and 20 months show the presence of a viral load within l * 10 3 - l * 10 4 IU / ml.
  • viremia 500,000 IU / ml.
  • the treatment is stationary, complex with the use of the drug "Laprot" in three stages. Each stage consisted of a three-week cycle in a seven-day regime with a two-hour scheme. Biochemical parameters during all three stages, carried out with interruptions of two weeks, practically remained at the initial level within normal limits. By the end of the first stage, viremia decreased to 500 IU / ml. By the beginning of the second stage, the virus was not detected in the blood.
  • the duration of the disease is about 10 years according to authentically confirmed documents.
  • interferon therapy courses without a positive effect were repeatedly conducted.
  • the initial viremia is 2.1 * 10 7 IU / ml.
  • the course of complex therapy with the drug “Laprot” according to a two-hour regimen, seven-day cycles was carried out in two stages. By the same time, the biochemical parameters initially increased 1.5 times decreased. The antiviral effect of the treatment is practically not received.
  • the given clinical observations are typical for two groups of patients with the use of native human lactoferrin contained in the Laprot preparation in one group — 9 observations (in one of them the patient refused treatment in the first week of treatment, the reason is not established); in the other, human apolactoferrin obtained by the authors in the manner described above - 51 observations (refusal of treatment in one case, a patient with an unstable psyche due to a long narcotic history).
  • Monotherapy with apolactoferrin was carried out in 5 patients, but due to the lack of an antiviral effect, it passed into the phase of complex therapy using interferons, cytostatics and extracorporeal detoxification methods.
  • apolactoferrin is tropic to the hepatitis C virus, interacts with it, representing its immune system and preventing it from entering the hepatocyte. Prolonged, regular use of apolactoferrin leads to some immunosuppressive effects, which is indirectly characterized by an increase in viremia during monotherapy, as well as the appearance in all patients about a week after the start of treatment of catarrhal changes. However, no allergic reactions were noted in any case.
  • apolactoferrin according to the two-hour schedule has the most pronounced effect, 5-6 injections of 20 mg every 2 hours, after starting treatment with interferon preparations. It may be clinically justified to administer the drug fractionally, with an interval of 2-3 hours for a longer time, i.e. several days, maybe weeks.
  • the present invention relates to the use of apolactoferrin for the treatment of hepatitis C virus (HCV) infections, in particular chronic infections, and provides methods, compositions and kits that can be used in healthcare.
  • HCV hepatitis C virus

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

Изобретение относится к медицине, в частности к гепатологии и вирусологии, и может быть использовано для лечения, в том числе для полного излечения больных вирусным гепатитом С, включая хроническую форму. Настоящее изобретение обеспечивает средство для лечения вирусного гепатита С, представляющее собой апобелок лактоферрина в мономерной форме. Настоящее изобретение также относится к фармацевтической композиции для лечения вирусного гепатита С, содержащей терапевтически эффективное количество апобелка лактоферрина в мономерной форме и фармацевтически приемлемый носитель, наполнитель или эксципиент. Настоящее изобретение также относится к способу лечения вирусного гепатита С, включающему введение апобелка лактоферрина в мономерной форме, и к применению апобелка лактоферрина в мономерной форме для изготовления лекарственного средства для лечения вирусного гепатита С. Способ лечения настоящего изобретения позволяет полностью предотвратить виремию в результате двух - трех недельного курса лечения, предотвратить разрушение пораженных вирусом гепатита С гепатоцитов с выбросом дополнительного количества вирусов в кровеносное русло и завершить существование пораженных вирусом гепатоцитов апоптозом, предотвратить таким образом развитие гепатоза, цирроза и онкологического поражения печени, являющихся терминальной стадией развития основного заболевания.

Description

Композиции аполактоферрина и способы их применения в лечении вирусного гепатита С
Область техники
Настоящее изобретение относится к области медицины, в частности к гепатологии и вирусологии, и касается применения лактоферрина для лечения хронической инфекции, вызванной вирусом гепатита С (ВГС). Еще более конкретно изобретение обеспечивает фармацевтические композиции, содержащие аполактоферрин и интерферон, и способы применения композиций в лечении хронической инфекции, вызванной вирусом гепатита С.
Предшествующий уровень техники
ВГС относится к семейству РНК-содержащих вирусов Flаviviridае и вызывает у людей инфекционный процесс, наиболее часто встречаемым осложнением которого является гепатит, перерастающий в цирроз печени и гепатокарциному (Survеillапсе. Нераtitis. CDC Rероrt Nbбl; Yошюssi Z, Каllmап J, Kincaid J. Тhе еffесts оf HCV iпfесtiоп апd mапаgеmепt on hеаlth-rеlаtеd quаlitу оf lifе. Нераtоlоgу. 2007 Mar;45(3):806-16). Инфекция ВГС поразила более чем 170 миллионов человек на Земле, и число инфицированных продолжает увеличиваться. По всему миру насчитывается порядка 1,5 млн. случаев гепатокарциномы, вызванной инфекцией ВГС. Потери, связанные с этим заболеванием только в Соединенных Штатах, оцениваются в 200 миллионов долларов ежегодно.
В большинстве случаев инфицированные ВГС не испытывают серьезных проблем со здоровьем или у них очень слабые симптомы. Однако при длительном развитии инфекции часто возникает гепатит, характеризующийся болями и нарушением функций печени. У людей, которые были инфицированы, появляются анти-ВГС антитела, а спустя некоторое время и вирусная РНК в крови. В значительном проценте случаев вирусная РНК в крови не определяется.
ВГС обладает как мощной способностью подавления иммунной системы человека t так и способностью её обхода за счёт «aдaптивныx» мутаций. В настоящее время не существует ни одной коммерчески доступной вакцины против заражения ВГС. Способы лечения ВГС были и остаются основанными на применении интерферона, вводимого в мегадозах, в частности препаратов генно-инженерного интерферона (Shерhеrd J, Jопеs J, Наrtwеll D, Dаvidsоп P, Рriсе А, Wаugh N. Iпtеrfеrоп аlfа (реgуlаtеd апd поп-реgуlаtеd) апd ribаviriп fог thе trеаtmепt оf mild сhrопiс hераtitis С: а sуstеmаtiс rеviеw апd есопоmiс еvаluаtiоп. Неаlth Тесhпоl Аssеss. 2007 Mar;l l(l l):l-224; Yоuпоssi Z, Каllmап J, Кiпсаid J. Thе еffесts оf HCV iпfесtiоп апd mапаgеmепt оп hеаlth-геlаtеd quаlitу оf lifе. Нераtоlоgу. 2007 Mar;45(3):806-16). Однако подходы К лечению, основанные на генно-инженерных интерферонах, имеют сравнительно низкую эффективность, которая по разным данным составляет 8-25%. Длительность лечения может достигать нескольких лет, а частота рецидивирования составляет 70-80%. Кроме того, применение генно-инженерных интерферонов имеет тяжёлые побочные эффекты, включающие нарушения кроветворения, желудочно- кишечные расстройства, выпадение волос, депрессию и бессонницу.
Распространённой современной тенденцией в лечении ВГС является применение комплексной терапии, добавляющей к генно-инженерному интерферону коктейль, содержащий как общие противовирусные препараты, так и один или два ингибитора размножения ВГС (ингибиторы специфической протеазы-геликазы и/или РНК-полимеразы) (Топiuttо P, Fаbris С, Вitеttо D, Fоmаsiеге E, Rареtti R, Рirisi M. Vаlорiсitаbiпе dihуdrосhlоridе: а sресifiс роlуmеrаsе iпhibitоr оf hераtitis С virus. Сurr Орiп Iпvеstig Drugs. 2007 Feb;8(2): 150-8; Jоhпsоп CL, Оwеп DM, GaIe M Jr. Fuпсtiопаl апd thеrареutiс апаlуsis оf hераtitis С virus NS3.4A рrоtеаsе сопtrоl оf апtivirаl immuпе dеfепsе. J Вiоl Сhеm. 2007 Арr; 282(14): 10792-803). Подобные коктейли повышают процент излечения, однако неминуемо ведут к селекции адаптивных мутантов ВГС, устойчивых к данным ингибиторам. Подобные клинические проблемы ярко проявились в ходе борьбы с вирусом иммунодефицита человека, и всё указывает на то, что они будут как минимум столь же актуальны для ВГС.
В связи с недостатками терапии, основанной на рекомбинантных интерферонах и ингибиторах вирусных ферментов, поиск препаратов, эффективно действующих против ВГС, был и продолжает оставаться важной задачей. Перспективной в этом отношении представляется разработка новых комбинированных способов терапии на основе интерферонов в сочетании с иными противовирусными препаратами. Лактоферрин представляет собой природный железо-связывающий белок, содержащийся в слезной жидкости, слюне, периферической крови, в частности, в лейкоцитах, материнском молоке, молозиве, секретах железистого эпителия и т.д. Лактоферрин способен связывать два атома железа на молекулу. В научной и патентной литературе в настоящее время нет единого мнения относительно величины молекулярной массы лактоферрина. Так, считается, что лактоферрин имеет молекулярную массу около 80000 Да (см., например EP 0 253 395 B2). В то же время в литературе приводятся такие значения молекулярной массы бычьего лактоферрина, как 76000 Да (Fаrrеll H.M., Jr., еt аl. Nоmепсlаturе оf thе Рrоtеiпs оf Соws' MiIk - Siхth Rеvisiоп. J. Dаirу Sсi. (2004), v. 87, р. 1641-1674), 86000 Да (Каzutоmо Imаbоri апd Таmiо Yаmаkаwа, Еds., "Diсtiопаrу оf Вiосhеmistгу", 2nd еditiоп, р. 1390, Тоkуо Каgаku Dоjiп Со., 1990) и даже 93000 Да (Wеiпеr R.Е. апd Szuсhеt S. Thе mоlесulаr wеight оf bоviпе lасtоfеrriп. Вiосhim. Вiорhуs. Асtа (1975), v. 393(1), р. 143-147). Для белка из женского молока приводятся такие значения молекулярной массы, как, например, 76000 Да (Моguilеvskу N., еt аl. Соmрагisоп оf humап lасtоfеrriпs from milk апd пеutrорhiliс lеuсосуtеs. Вiосhеm. J. (1985), v. 229, р. 353-359) и 88000 Да (Каzutоmо Imаbоri апd Таmiо Yаmаkаwа, Еds., "Diсtiопаrу оf Вiосhеmistгу", 2пd еditiоп, р. 1390, Тоkуо Каgаku Dоjiп Со., 1990). Вариации в приводимых значениях молекулярной массы, по-видимому, обусловлены использованием различных способов анализа, а также, возможно, различной степенью и/или профилем гликозилирования белка.
Лактоферрин и его производные обладают выраженной антиоксидантной, антибактериальной (J. Реdiаtr., 1979, v. 94, р. 1), иммуномодулирующей и противоопухолевой активностями.
Известны способы лечения вирусных заболеваний, в частности вызываемых вирусом гриппа, вирусом иммунодефицита человека, вирусом гепатита С и другими, с использованием лактоферрина или его фрагментов. Лактоферрин был предложен в качестве усилителя терапевтического эффекта интерферона при лечении хронического гепатита С (патентная заявка EP 1 352 657, 15.10.2003). Несмотря на то, что в данном документе содержится широкое обобщение, позволяющее думать, что для усиления терапевтического эффекта интерферона и, следовательно, для успешного осуществления заявленного способа лечения хронического гепатита С может быть использован лактоферрин в любой форме, в том числе не насыщенный металлом лактоферрин, насыщенный различными металлами лактоферрин и собственно аполактоферрин, и что введение может осуществляться перорально или в виде инъекций, данный документ содержит экспериментальные сведения, подтверждающие возможность применения исключительно природного лактоферрина, вводимого только пероральным способом. В данном документе продемонстрировано, что пероральное введение высоких доз лактоферрина (по меньшей мере, из расчета 1 мг на кг веса в сутки, в частности 1,8 г в день в течение 6 месяцев) совместно с введением интерферона приводит к благоприятному терапевтическому эффекту. Однако достигаемый результат нельзя признать полностью удовлетворительным в связи с тем, что только в 33,3 % случаев по истечении 6 месяцев с момента окончания терапевтического курса наблюдалась полная элиминация вируса и нормализация функции печени; тогда как в остальных 66,7 % случаев лечение либо вообще было неэффективным, либо вирус вновь появлялся в крови по истечении 6 месяцев с момента окончания терапевтического курса даже несмотря на наблюдавшуюся нормализацию функции печени.
Таким образом, в данной области существует острая потребность в разработке новых лекарственных средств для лечения вирусного гепатита С, а также фармацевтических композиций и способов лечения на их основе, которые бы сочетали в себе высокую эффективность, в частности, возможность полной элиминации вируса и предупреждения рецидива заболевания, низкую стоимость, стабильность при хранении, и возможность достижения терапевтического эффекта в более короткие сроки, чем при применении существующих способов и схем лечения.
Раскрытие изобретения
Настоящее изобретение стало возможным в результате неожиданного обнаружения изобретателем того факта, что применение лактоферрина, по существу не содержащего связанного иона железа (апобелок, т.е. аполактоферрин), является чрезвычайно эффективным при лечении вирусного гепатита С.
Таким образом, в своем первом аспекте настоящее изобретение относится к композиции, включающей лактоферрин человека и интерферон, где указанный лактоферрин по существу не содержит железа, и где указанная композиция по существу не содержит нечеловеческого лактоферрина.
В одном из воплощений композиции настоящего изобретения лактоферрин человека имеет степень насыщения железом менее чем приблизительно 5%. В еще одном из воплощений композиции согласно настоящему изобретению лактоферрин человека имеет кажущуюся молекулярную массу около 80 кДа.
В одном из воплощений композиции лактоферрин человека присутствует в количестве около 20 мг.
В еще одном воплощении композиция настоящего изобретения пригодна для лечения инфекции ВГС. В одном из воплощений инфекция ВГС представляет собой хроническую инфекцию ВГС. В следующем воплощении ВГС относится к генотипу Ib.
В еще одном из воплощений композиция настоящего изобретения способна элиминировать ВГС из организма пациента на срок более, чем 3 месяца.
В своем следующем аспекте настоящее изобретение относится к способу лечения пациента, инфицированного ВГС, включающему введение указанному пациенту: a. композиции, включающей лактоферрин человека, где указанный лактоферрин по существу не содержит железа, и где указанная композиция по существу не содержит нечеловеческого лактоферрина; и b. интерферона.
В одном из воплощений способа настоящего изобретения лактоферрин человека имеет степень насыщения железом менее, чем приблизительно 5%.
В еще одном из воплощений способа настоящего изобретения лактоферрин человека имеет кажущуюся молекулярную массу около 80 кДа.
В следующем воплощении способа лактоферрин человека присутствует в композиции в количестве около 20 мг.
В еще одном из воплощений способа настоящего изобретения предусматривается, что пациент, подвергающийся лечению, хронически инфицирован ВГС. В еще одном из воплощений способа ВГС относится к генотипу Ib.
В следующем воплощении способа настоящего изобретения достигается элиминация ВГС из организма пациента на срок более, чем 3 месяца.
В своем следующем аспекте настоящее изобретение относится к набору для лечения инфекции ВГС, включающему: a. первый контейнер, содержащий терапевтически эффективное количество лактоферрина человека, где указанный лактоферрин по существу не содержит железа; b. второй контейнер, содержащий терапевтически эффективное количество интерферона.
В одном из воплощений набора согласно настоящему изобретению первый контейнер по существу не содержит нечеловеческого лактоферрина.
В еще одном из воплощений набора лактоферрин человека имеет степень насыщения железом менее, чем приблизительно 5%.
В следующем воплощении набора лактоферрин человека имеет кажущуюся молекулярную массу около 80 кДа.
В одном из воплощений набора согласно настоящему изобретению лактоферрин человека присутствует в количестве около 20 мг.
В следующем воплощении набор предназначен для лечения инфекции ВГС, представляющей собой хроническую инфекцию.
В следующем воплощении набор предназначен для лечения инфекции ВГС, вызванной вирусом, имеющим генотип Ib.
Заявляемая группа изобретений направлена на решение единой задачи - создание доступного по стоимости препарата, обладающего антивирусным (гепатит С) действием на организм человека в целом.
Клиническое использование в фармацевтической практике заявляемого средства и способа его применения обеспечивает ряд технических, лечебных и экономических результатов:
1. Препарат биосовместим с организмом человека и терапевтически высоко эффективен в лечении хронического вирусного гепатита С, сочетаем с применением интерферонов и химиотерапии.
2. На основе препарата могут быть изготовлены лекарственные средства требуемой концентрации.
3. Препарат удобен в хранении и транспортировке.
4. Лекарственные средства, изготовленные на основе препарата, могут быть введены в организм человека внутривенно.
5. Препарат доступен по цене, его применение в лечебной практике экономически оправданно. 6. Применение препарата в сочетании с интерферонами и химиотерапией при хроническом вирусном гепатите С позволяет достичь стойкого противовирусного эффекта за значительно меньший промежуток времени (в 10-20 раз быстрее), чем при применении известных схем лечения хронического вирусного гепатита С.
7. Препарат значительно усиливает эффективность существующей схемы лечения хронического вирусного гепатита С, сокращая сроки полного излечения до 2-3 недельного курса.
Краткое описание чертежей
Фиг. 1 представляет результаты анализа чистоты различных образцов человеческого лактоферрина методом электрофореза в полиакриламидном геле в денатурирующих условиях в присутствии ДДС-Nа. Дорожка А - маркер молекулярной массы, дорожка Б - стандартный препарат лактоферрина человека, дорожки 1-3 - образцы человеческого лактоферрина (коммерческий препарат «Лaпpoт»), дорожки 4-13 - образцы апобелка лактоферрина человека.
Фиг. 2 представляет результаты хроматографического анализа образца человеческого лактоферрина (коммерческий препарат «Лaпpoт») методом ВЭЖХ.
Фиг. 3 представляет результаты хроматографического анализа образца человеческого лактоферрина методом ВЭЖХ.
Варианты осуществление изобретения
Далее изобретение будет подробно описано со ссылкой на его наиболее предпочтительные воплощения. Хотя описаны предпочтительные воплощения, однако должно быть ясно, что изобретение ими не ограничивается. Напротив, предполагается, что изобретение охватывает альтернативы, модификации и эквиваленты, которые могут быть включены в него с учетом сущности и рамок данного изобретения, которые определяются формулой изобретения.
Определения
Выражение «пo существу не содержащий жeлeзa» относится к композиции лактоферрина, имеющей уровень насыщения железом, который меньше, чем приблизительно 5%, однако изобретение также предусматривает более высокие уровни насыщения железом, включая диапазон от 5% до 20%, но не ограничиваясь ими.
Выражение «мeнынe, чем приблизительно 5%» относится к композиции лактоферрина, имеющей содержание железа, которое не превышает 6%, такое как, например, 5,9%.
Выражение ((присутствует в количестве около мг/мкг» относится к количеству аполактоферрина, которое является эффективным для лечения ВГС. Это количество включает (но не ограничивается им) количество, которое больше или меньше, чем, указанное в мг/мкг, на величину вплоть до 15%.
Препарат настоящего изобретения предпочтительно вводится, будучи включенным в фармацевтическую композицию, содержащую в качестве активного ингредиента терапевтически эффективное количество лактоферрина по существу в форме апобелка с молекулярной массой около 80000 дальтон и фармацевтически приемлемый носитель, наполнитель или эксципиент. Как используется в настоящем описании, выражение «oкoлo 80000 дaльтoн» относится к массе, которая меньше или больше 80000 дальтон на вплоть до 15%. Под ((фармацевтически приемлемым носителем, наполнителем или экcципиeнтoм» понимается такой носитель, наполнитель или эксципиент, который не вызывает никаких нежелательных побочных эффектов у пациента, которому он вводится. Такие фармацевтически приемлемые носители, наполнители или эксципиенты хорошо известны в данной области (см., например, Rеmiпgtоп's Рhаrmасеutiсаl Sсiепсеs, 18th еditiоп, А.R.Gешiаrо, Ed., Масk Рublishiпg Соmрапу, 1990; Рhаrmасеutiсаl Fоrmulаtiоп Dеvеlорmепt оf Рерtidеs апd Рrоtеiпs, S.Frоkjаеr and L. Ноvgааrd, Еds., Тауlоr апd Fгапсis, 2000; и Напdbооk оf Рhаrmасеutiсаl Ехсiрiепts, Згd еditiоп, А. Кibbе, Ed., Рhаrmасеutiсаl Рrеss, 2000).
Примеры фармацевтически приемлемых носителей, наполнителей или эксципиентов включают (но не ограничиваются ими) буферные агенты, агенты для поддержания изотоничности, консерванты, поверхностно-активные вещества (ионные и неионные), наполнители, стабилизаторы и т.д.
Апобелок лактоферрина может быть заключен в фармацевтическую композицию настоящего изобретения хорошо известными способами. Подходящие способы заключения в композицию описаны, например, в Rеmiпgtоп's Рhаrmасеutiсаl Sсiепсеs, 17th еditiоп (Масk Рubl. Со., Рhilаdеlрhiа, PA, 1985). Композиции аполактоферрина изобретения могут вводиться сами по себе или в сочетании с одним или более другими терапевтическими средствами. Эти средства могут быть включены в ту же композицию, что и аполактоферрин, или они могут присутствовать в отдельной композиции, как, например, в наборе.
В некоторых воплощениях композиция настоящего изобретения включает терапевтически эффективное количество аполактоферрина в комбинации с интерфероном. Интерферон, пригодный для использования в настоящем изобретении, может находиться в любой форме, которая обеспечивает терапевтический эффект при введении в соответствии, например, со способами, раскрытыми в настоящем изобретении. В одном неограничивающем воплощении настоящего изобретения композиции аполактоферрина настоящего изобретения могут быть составлены вместе с или могут вводиться в сочетании с интерфероном aльфa-2a.
Фармацевтическая композиция настоящего изобретения может быть составлена в виде множества готовых форм, например в виде раствора, эмульсии, лиофилизированного порошка для растворения ех tеmроrе. В частности, фармацевтическая композиция аполактоферрина настоящего изобретения может представлять собой лиофилизированную или стабилизированную растворенную форму. Лиофилизированная форма может быть приготовлена путем использования множества методик, известных в данной области. Такая форма, как известно специалистам, обеспечивает стабильность композиции в течение продолжительного периода времени. Преимущество получения жидкой стабилизированной композиции состоит в простоте применения и, в случае экстренной ситуации, в более быстром действии, что потенциально может сохранить жизнь больному. Жидкая композиция может также находиться в замороженном виде, что предполагает ее оттаивание непосредственно перед введением пациенту.
Специалист в данной области, в частности лечащий врач сможет назначить дополнительную лекарственную или немедикаментозную терапию, руководствуясь состоянием больного, наличием сопутствующих заболеваний, клинической целесообразностью, с учетом известных сведений о совместимости лекарственных препаратов.
Композиции аполактоферрина настоящего изобретения могут вводиться любым из путей, который обеспечивает терапевтический эффект при лечении инфекции ВГС, включая хроническую инфекцию ВГС. Например, композиции могут вводиться парентерально, например внутривенно, внутриартериально, внутриперитонеально, внутримышечно или посредством любых комбинаций вышеперечисленного. В предпочтительных воплощениях фармацевтическую композицию вводят внутривенно. Такая композиция для внутривенного введения может представлять собой раствор, суспензию, эмульсию типа масло-в-воде, вода-в- масле, или липосомную суспензию. В качестве растворителей для приготовления раствора для внутривенного введения могут быть использованы такие известные фармацевтически приемлемые растворители, как, например, изотонический 0,9% солевой раствор (физиологический раствор), раствор 5% глюкозы (декстрозы), раствор маннита и т.д. При необходимости раствор может дополнительно содержать вспомогательные компоненты, например стабилизаторы, поверхностно-активные вещества, противомикробные агенты (консерванты) и т.д.
Способы получения стерильных апирогенных растворов для парентерального введения хорошо известны специалистам в данной области и предусматривают использование стерильной апирогенной воды и стерилизацию полученного раствора, например путем фильтрования через стерилизующий фильтр, например с размером пор 0,4 мкм.
В одном из неограничивающих примеров изобретения аполактоферрин человека вводят внутривенно при лечении хронического ВГС. Композицию вводят в дозе 20 мг каждые 2 часа в первые и вторые сутки терапевтической схемы. Со дня 3 по день 7 схемы композицию аполактоферрина вводят в суточной дозе 20 мг. Со дня 3 по день 7 также вводят гипердозы интерферона (например, интерферон aльфa-2a) под прикрытием экстракорпоральных методов детоксикации.
Экспериментальные и клинические данные указывают на существование предельных доз лактоферрина человека (как разовых, так и курсовых), ниже которых препараты на его основе неэффективны, а выше - могут вызвать серьезные побочные реакции. Заявлены разовые и курсовые дозы лекарственного средства для внутривенного введения, изготовленного на основе препарата, содержащего аполактоферрин человека, которые целесообразно применять при лечении хронического вирусного гепатита С.
Без намерения быть ограниченными какими-либо научными теориями или доктринами, изобретатели связывают наблюдаемый при применении аполактоферрина при лечении вирусного гепатита С выраженный rепатопротекторный эффект с тем, что клетки, инфицированные вирусом гепатита С, под действием аполактоферрина заканчивают свою жизнь апоптозом, а не некрозом, что препятствует выбросу новых и новых порций вируса в системный кровоток.
Предпочтительный путь введения апобелка лактоферрина - внутривенный - обеспечивает быструю и целенаправленную доставку аполактоферрина в неизмененном виде к органу-мишени (печени), что обеспечивает максимальное накопление в печени активного начала.
В контексте данного описания термин "терапевтически эффективное количество" обозначает количество лекарственного средства, которое будет обеспечивать желательный эффект по отношению к заболеванию, которое подвергается лечению. В частности, терапевтически эффективное количество должно быть способно предупреждать, уменьшать тяжесть или распространение болезни, которая подвергается лечению. Желательный эффект может состоять в снижении титра вирусных частиц в крови пациента или в полном удалении вируса из кровотока, в гепатопротекторной функции и т.д. Наиболее желательным результатом лечения является полная элиминация возбудителя вирусного гепатита С из организма пациента.
Терапевтически эффективные дозы могут быть определены специалистом в данной области индивидуально с учетом таких переменных, как вес и возраст пациента, общее состояние здоровья, тяжесть основного заболевания, наличие сопутствующих заболеваний и т.д. Схема введения, включая дозировку компонентов лекарственной терапии настоящего изобретения, способ введения, кратность приема, продолжительность курса лечения также могут быть определены специалистом в данной области рутинным образом и при необходимости могут быть скорректированы в ходе лечения с учетом данных лабораторных исследований, клинического наблюдения, динамики симптомов и т.д.
Лактоферрин человека может быть выделен из женского молозива, переходного молока или молока и другого биологического материала человека, а также получен генно-инженерным или трансгенным способами. Лактоферрин может быть получен из сыворотки женского молока путем высаливания и катионнообменной хроматографии, как описано в патенте СССР N° 1709606 01.03.1990. Также известен способ получения лактоферрина из человеческого молока путем диафильтрации-ультрафильтрации (международная публикация заявки WO 89/11226, 30.11.1989). Описан способ одностадийной очистки лактоферрина из женского молока путем аффинной хроматографии на колонке с иммобилизованными моноклональными антителами против человеческого лактоферрина (патент JP60100019, 29.08.1985). Все из перечисленных способов, а также другие способы могут быть с успехом использованы для обеспечения нативного лактоферрина (в форме холобелка, содержащего связанное железо).
Экспрессия гена, кодирующего лактоферрин человека, наблюдается не только в молочной железе, но и в других тканях. Так, например, описана последовательность мРНК из семенных пузырьков, кодирующая лактоферрин (GепВапk Асе. No. AAN75578). Из костного мозга человека был клонирован ген лактоферрина, представляющий собой вариант альтернативного сплайсинга (GепВапk Асе. No. AARl 2276). Также опубликован целый ряд нуклеотидных последовательностей гена лактоферрина человека из молочной железы и соответствующих им аминокислотных последовательностей, которые обладают некоторыми различиями по отдельным аминокислотным остаткам (см., например, GепВапk Асе. Nоs. AAA59511, AAB60324, AAG48753). Кроме того, описан ряд полиморфизмов, например точковый нуклеотидный полиморфизм в экзоне 1 гена лактоферрина человека, приводящий к полиморфизму Lуs/Аrg в положении 29 N- концевого участка лактоферрина (см. Velliyagounder K., еt аl. Iпfесt. Immuп., 2003, 71(11):6141 -6147). Таким образом, полезным в рамках настоящего изобретения является лактоферрин человека, обладающий, по меньшей мере, 80%, более предпочтительно, по меньшей мере, 90%, еще более предпочтительно, по меньшей мере, 95%, и наиболее предпочтительно, по меньшей мере, 99% гомологии аминокислотной последовательности с последовательностью лактоферрина человека, представленной, например, последовательностью, депонированной в GепВапk под кодом доступа Асе. No. AAA59511.
Учитывая то обстоятельство, что получение природного человеческого лактоферрина в промышленном масштабе затруднительно, при осуществлении данного изобретения полезным является рекомбинантный человеческий лактоферрин. Последовательность гена лактоферрина человека известна, например из международной публикации заявки WO 92/21752 (10.12.1992), а также см. депонированные в GепВапk последовательности, упомянутые выше. Описаны способы экспрессии рекомбинантного человеческого лактоферрина и плазмидные конструкции для этих целей (например, патент US 6,277, 817, 21.08.2001). Чрезвычайно привлекательными способами получения рекомбинантного человеческого лактоферрина являются способы экспресии в культуре клеток растений (заявка US 2004040062) или в клетках метилотрофных дрожжей Рiсhiа раstоris (международная публикация заявки WO 01/32895, 10.05.2001). Также в рамках настоящего изобретения предусматривается использование человеческого лактоферрина, полученного из молока трансгенных животных, например молочных коров. Описан высокоэффективный способ получения человеческого лактоферрина путем экспрессии в молочной железе коз, которым интрадуктально инъецировали рекомбинантный дефектный по репликации аденовирус (Нал Z.S., еt аl. Нigh-lеvеl ехрrеssiоп оf humап lасtоfеrriп iп thе milk оf gоаts bу usiпg rерliсаtiоп-dеfесtivе аdепоvirаl vесtоrs. Рrоtеiп Ехрr. Рuгif. (2007), v. 53(1), р. 225-231).
Основным существенным отличием заявляемого препарата от всех ранее известных лекарственных средств, содержащих лактоферрин, является то, что за счет высокой степени очистки лактоферрина, входящего в состав препарата, достигается максимальная концентрация одной изоформы аполактоферрина (с кажущейся молекулярной массой около 80 кДа), наиболее активной в противовирусном плане, что обеспечивает надежность и безопасность его применения в лечебном процессе.
Заявляемая концентрация лактоферрина в препарате позволяет длительно сохранять лактоферрин в нативном состоянии, то есть в состоянии максимальной физиологической активности.
Следующие далее примеры раскрывают наиболее предпочтительные воплощения данного изобретения и приведены исключительно с целью лучшего пояснения его сущности. Специалисту в данной области будет понятно, что можно осуществить множество модификаций как в отношении используемых материалов, так и в отношении используемых способов без отступления за рамки изобретения.
Пример 1. Сравнительный анализ различных препаратов лактоферрина человека.
Каждый образец оценивали по следующим параметрам: 1). Содержание белка лактоферрина человека 2). Степень насыщения лактоферрина железом 3). Способность лактоферрина связывать железо 4). Чистота лактоферрина человека оценивалась при помощи денатурирующего электрофореза в полиакриламидном геле в присутствии додецилсульфата натрия (ДДС-Nа)
5). Чистота лактоферрина человека оценивалась при помощи высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ).
Образцы:
Figure imgf000016_0001
Содержание белка лактоферрина в образцах
Препарат «Лaпpoт» был получен из Московского научно-исследовательского онкологического института им. П.А. Герцена. Содержание белка лактоферрина в препарате «Лaпpoт» (образцы 1-3) варьировало в диапазоне от 2,7 до 3,3 мг на 10 мг лиофилизированного препарата.
Белок аполактоферрина (образцы 4-13) был получен из сыворотки женского молока путем высаливания сернокислым аммонием и катионообменной хроматографии в соответствии с описанным ранее способом (патент СССР N° 1709606 01.03.1990) с некоторыми модификациями. Катионообменную хроматографию проводили на колонке диаметром 25 мм при объеме катионообменника 50 мл. В качестве катионообменника использовали Тоуореrl CM- 650S (ТоsоНааs Part#43253). Скорость протока 30 мл/час, перистальтический насос Мiсrореrрех (Рhаrmасiа). Детекцию белка в элюате проводили при помощи детектора Uviсоrd SII (Рhаrmасiа), фракции собирали при помощи коллектора фракций Мultirаk (Рhаrmасiа).
Определение концентрации лактоферрина в растворах проводили с помощью набора реагентов для иммуноферментного определения лактоферрина в сыворотке крови «Лaктoфeppин-ИФA-Бecт» Д-4156 (ЗАО «Beктop-Бecт») по инструкции, прилагаемой к набору. Обсчет результатов проводили по программе Ехсеl, используя полиномиальную аппроксимацию второй степени. Кроме того, концентрацию лактоферрина оценивали спектрофотометрически на спектрофотометре Ultrоsрес 11 кювете с длиной оптического пути 1 см. Концентрацию лактоферрина в препаратах определяли по формуле A2g0/l,27 = концентрация мг/мл, как описано в EP 0 253 395 B2.
Содержание белка аполактоферрина в образцах 4-13 варьировало в диапазоне от 15,2 до 20,0 мг на мл раствора.
Степень насыщения лактоферрина человека железом
Содержание железа в препаратах лактоферрина определяли спектрофотометрическим методом по соотношению A465ZA280. В Табл. 1 приведена степень насыщения железом (%) для всех исследованных образцов.
Таблица 1. Степень насыщения железом лактоферрина человека в различных образцах.
Figure imgf000017_0001
Таким образом, в коммерческом препарате «Лaпpoт» (образцы 1-3) степень насыщения лактоферрина железом варьировала в широком диапазоне от 25 до 39%. Такой уровень насыщения железом соответствует среднему уровню насыщения природного лактоферрина человека. Напротив, препарат аполактоферрина человека показал, что степень насыщения железом варьировала от 3,4 до 5,1%.
Сродство лактоферрина человека к железу
При добавлении ионов железа в виде концентрированного раствора сульфата аммония-железа все образцы, содержавшие лактоферрин человека в разных количествах, демонстрировали 100% насыщение лактоферрина ионами железа.
Оценка чистоты препаратов лактоферрина человека способом денатурирующего электрофореза в полиакриламидном геле (ПААГ)
Анализ образцов проводили путем электрофореза в ПААГ в присутствии додецилсульфата натрия (ДДС-Nа) в системе, описанной Lаеmmli U.К. (Сlеаvаgе оf thе stшсturаl рrоtеiпs duriпg thе аssеmblу оf thе hеаd оf thе bасtеriорhаgе T4. Nаturе (1970), v. 227, р. 680-685). Для проведения анализа на дорожку наносили 20 мкr лактоферрина человека из образцов ЖNb 1-3 («Лaпpoт») и 10 мкr лактоферрина человека из образцов ЖNЬ 4-13.
Большие количества лактоферрина человека, используемые для проведения анализа, были необходимы для оценки предполагаемых продуктов распада лактоферрина человека, главным образом для лиофилизированных образцов, в которых была показана гораздо меньшая концентрация лактоферрина человека, чем предполагалось.
Полученные данные представлены на Фиг. 1. Все образцы имели четко выраженную мажорную полосу, соответствующую кажущемуся молекулярному весу около 80000 Да. В частности, для всех образцов N°N°4-13 было показано наличие белка с кажущимся молекулярным весом около 80000 Да, а также незначительное количество других белков, по всей видимости являющихся продуктами распада лактоферрина человека.
С другой стороны, в образцах N°N° 1-3 (коммерческий препарат «Лaпpoт») было показано наличие одной мажорной полосы, соответствующей кажущемуся молекулярному весу около 80000 Да, а также наличие еще двух минорных полос, соответствующих приблизительно 75000 и 70000 Да. Одна из этих двух полос также присутствовала в лактоферрине, используемом в качестве стандартного образца.
Оценка чистоты препаратов лактоферрина человека способом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) Для определения чистоты белков, а также для выявления возможных примесей 50 микрограмм лактоферрина человека из каждого образца анализировали при помощи высокоэффективной жидкостной хроматографии.
Для всех образцов NuNb 1-3 наблюдали аналогичные хроматограммы. Типичная хроматограмма, полученная для образца N° 1, показана на Фиг. 2.
Для всех образцов N°N° 4-13 в виде растворов наблюдали аналогичные хроматограммы. Типичная хроматограмма, полученная для образца 13, показана на Фиг. 3.
По результатам анализа образцов методом высокоэффективной жидкостной хроматографии продукты распада лактоферрина человека обнаружены не были ни в одном из образцов ЖN° 1-13.
Пример 2. Клинический опыт внутривенного применения препарата человеческого лактоферрина
Препарат лактоферрина человека вводили как в режиме монотерапии, так и в комбинации с интерфероном, пролонгированным интерфероном, рибавирином и цитостатиками в сочетании с экстракорпоральными методами детоксикации
Клинический случай 1
Больной Г.A.Л., муж, возраст 30 лет. Диагноз - смешанный гепатит В+С (генотип 1 b). По данным ПЦР исходная виремия HCV высокая (> 100000 МЕ/мл). Длительность заболевания составляла 5 лет по документально подтвержденным данным. Однако по данным анамнеза можно предположить, что реальная длительность заболевания была около 14 лет.
Больной лечился в условиях стационара. Проводились попытки введения пульсовых доз по 500 мг аполактоферрина на фоне лечения реафероном по 3 млн. ЕД. через день. При таком способе введения не было отмечено изменений ни в уровне виремии, ни в биохимических показателях. Через 7-9 дней от начала лечения наблюдалось обострение простудного заболевания. Эти катаральные проявления протекали в стертой форме и проходили самопроизвольно, не мешая процессу лечения основного заболевания.
В дальнейшем была применена двухчасовая схема введения по 20 мг каждые 2 часа в течение 10 часов. В результате проведения такой методики в течение двух дней подряд, на фоне предварительного длительного лечения реафероном, произошла элиминация вируса гепатита С. Одновременно с этим однократно не определился вирус гепатита В, однако уже через неделю он снова стал определяться на прежнем уровне виремии. Вирус гепатита С не определялся ни на фоне лечения реафероном в последующие три месяца, ни после прекращения этого лечения на протяжении последующих 9, 18, 27 и 36 месяцев, что подтверждено контрольными анализами. Лечение гепатита В проводилось по стандартной схеме и завершилось успешно только по истечении года.
Клинический случай 2
Больной К.В.А, муж, возраст 21 Диагноз - гепатит С с генотипом вируса IB. По данным ПЦР исходная виремия высокая (> 100000 МЕ/мл). Длительность заболевания составляла 3 года по документально подтвержденным данным. Однако по данным анамнеза можно предположить, что реальная длительность заболевания была в 2 раза больше.
Лечение проводилось по схеме с недельной цикличностью, причем во время введения аполактоферрина на первой неделе не вводился реаферон, в недельный промежуток между введением аполактоферрина реаферон применялся дважды по 3 млн. ЕД. Через 7-9 дней от начала лечения наблюдалось обострение простудного заболевания. Эти катаральные проявления протекали в стертой форме и проходили самопроизвольно, не мешая процессу лечения основного заболевания.
Элиминация вируса произошла на третьей неделе комплексного лечения (аполактоферрин, реаферон, ГДФ). Лабораторные сведения о стойком отсутствии вируса в крови этого пациента получены при контрольных анализах через 6, 16, 23 и 30 месяцев после завершения лечения.
Клинический случай 3
Больной ПI.А.А, муж, возраст 29 лет. Диагноз гепатит С, генотип 2а, обнаружен случайно при профилактическом обследовании в титре 3*104 МЕ/мл. Длительность заболевания по документально подтвержденным данным составила 2 месяца, однако, анамнез с клиническими проявлениями гепатита около 2 лет.
Лечение стационарное, препарат апобелка лактоферрина человека вводился по семидневной схеме в сочетании с реафероном и экстракорпоральными методами детоксикации. С момента начала лечения биохимических нарушений в крови не выявлено, билирубин и печеночные ферменты оставались в пределах нормы. Элиминация вируса в конце третьей недели комплексного лечения. При контрольных исследованиях через 6, 12, 24 и 33 месяца было зафиксировано отсутствие вируса в крови.
Клинический случай 4
Больной C.Л.Ж., муж, возраст 37 лет. Диагноз гепатит С, генотип Ib обнаружен в титре 428000 МЕ/мл при профилактическом обследовании. Длительность заболевания составила 1 год. Клинических признаков гепатита нет. Жалоб не предъявлял. Биохимические анализы в норме. Комплексное лечение человеческим аполактоферрином в сочетании с реафероном, рибавирином, ламивудином и экстракорпоральными методами детоксикации по семидневной схеме проводилось в два этапа. По завершении третий недели первого этапа отмечено снижение титра HCV до 500 МЕ/мл. При этом значительно повысились выше нормы печеночные ферменты и билирубин в крови, появились признаки иммуносупрессии. В этой связи после недельного перерыва лечения проведен второй этап комплексной терапии по той же схеме со снижением доз рибавирина и ламивудина. Элиминация вируса наступила уже к концу первой недели второго этапа лечения. Контрольные исследования на протяжении последующих 13 месяцев не указывают на наличие вируса в крови. Биохимические показатели также стабилизировались.
Клинический случай 5
Больной CCB, муж, возраст 47. Диагноз - гепатит С, вызванный вирусом генотипа 2 А. Виремия высокая 2,2* 105 МЕ/мл. Было отмечено десятикратное увеличение ферментов в биохимических анализах крови при умеренном повышении билирубина до верхних границ нормы. Длительность заболевания составляла 0,5 года по документально подтвержденным данным. Однако по данным анамнеза можно предположить, что реальная длительность заболевания была намного больше, около трех лет.
Лечение проходило амбулаторно. Препарат апобелка лактоферрина человека вводился ежедневно по 40 мг в течение трех дней, потом четыре дня по 20 мг. Далее проводилась недельная пауза в лечении, после чего проводился второй курс лечения аполактоферрином ежедневно по 40 мг. Такая схема лечения была выбрана, исходя из предположения о том, что препарат оказывает иммуносупрессивное действие. Учитывая то, что цикл развития иммунных клеток составляет примерно 7 дней, было принято решение о чередовании семидневных циклов введения препарата аполактоферрина без использования интерферонов.
Монотерапия аполактоферрином привела к частичной элиминации вируса: произошло снижение виремии с высокой до средней 3*104 МЕ/мл. Монотерапия апобелком лактоферрина человека в данном случае обеспечила лишь частичную элиминацию вируса гепатита С.
Обращает на себя внимание, что на 2 и 3 неделе монотерапии произошло нарастание ферментемии при сохранении среднего уровня виремии. Отмечено, что у больного через 7-9 дней от начала лечения наблюдалось обострение простудных заболеваний. Эти катаральные проявления протекали в стертой форме и проходили самопроизвольно, не мешая процессу лечения основного заболевания.
Следующим этапом лечения больного после применения монотерапии аполактоферрином было комплексное лечение с использованием препаратов интерферона. Курс лечения был начат с проведения пульсового введения по 20 мг аполактоферрина каждые 2 часа до достижения дозы 100 мг. Далее препарат аполактоферрина вводили ежедневно по 40 мг без соблюдения недельной цикличности. Начиная с 5 дня введения аполактоферрина, параллельно применялся препарат интерферона Альфа 2A (Реаферон) по 3 млн ЕД. через день. Такое решение было принято из-за высокого исходного уровня АлАТ (SGPT) и AcAT (SGOT) для осуществления гепатопротекции. У этого больного в течение суток после проведения двухчасовой схемы введения аполактоферрина произошло более чем трехкратное падение уровня ферментов АлАТ (SGPT) и AcAT (SGOT) при сохранении средней виремии. Значительно снизился уровень билирубина, что говорит о выраженном гепатопротективном действии двухчасовой схемы. Спустя неделю после начала введения реаферона произошла элиминация вируса, после чего введение аполактоферрина было прекращено, а лечение реафероном продолжено в прежнем объеме. В дальнейшем были получены еще два отрицательных анализа ПЦР в течение двух недель, после чего введение реаферона было прекращено.
Через месяц после прекращения лечения произошёл рецидив. Виремия поднялась до среднего уровня, сопровождаясь высокой ферментемией. К началу лечения виремия уже составляла 5*106 МЕ/мл, ферментемия была высокой, хотя вдвое ниже исходного уровня. Далее проводилась комплексная терапия с применением аполактоферрина по двухчасовой схеме два дня подряд, затем ежедневно по 20 мг с соблюдением недельной цикличности для профилактики возможного возникновения устойчивости вируса к препарату. Реаферон заменен на Интрон А по 5 млн. ЕД через день, к лечению добавлен рибавирин по 1200 мг в день.
Этот этап лечения было решено начать с введения Интрона, предполагая, что аполактоферрин производит «мapкиpoвкy» вируса, связываясь с его эпитопом E2, тем самым делая его «видимым» для иммунной системы, а также затрудняя его проникновение в гепатоцит. В последующем в течение двух дней после первой инъекции Интрона была проведена двухчасовая схема введения аполактоферрина по 20 мг каждые 2 часа до достижения дозы 100 мг, далее введение аполактоферрина было продолжено по 20 мг ежедневно.
По результатам анализов после двух дней введения аполактоферрина было выявлено снижение уровня виремии с 5 000 000 до 400 000 МЕ/мл, а также двукратное снижение уровня ферментов. Обращал на себя внимание низкий уровень антивирусного IgM, не соответствующий выраженности процесса. После начала лечения его уровень немного возрос, однако трудно сказать в результате действия Интрона или аполактоферрина. К концу первой недели комплексного лечения уровень виремии снизился до низкого, а к концу второй недели курса, т.е. без введения аполактоферрина, до минимального (630 МЕ/мл при пороге чувствительности 600 МЕ/мл). Все изменения уровня виремии коррелировали со снижением уровня ферментемии, в первую очередь АлАТ (SGPT) и AcAT(SGOT). К концу третьей недели курса лечения вирус в крови не определялся, биохимические анализы в пределах нормы. Больной переведен на противорецидивный курс лечения препаратом Пегасис по 135 мкг в неделю. Динамическое наблюдение 4, 13 и 24 месяца. Рецидива нет.
Клинический случай 6
Больная A.A.H., жен, возраст 37. Диагноз - гепатит С, вызванный вирусом генотипа IB. Виремия высокая 100000 МЕ/мл. Длительность заболевания составляла 2 года по документально подтвержденным данным.
Лечение проводилось амбулаторно. Препарат апобелка лактоферрина человека вводился ежедневно по 40 мг в течение трех дней, потом четыре дня по 20 мг. Далее проводилась недельная пауза в лечении, после чего проводился второй курс лечения аполактоферрином ежедневно по 40 мг. Такая схема лечения была выбрана, исходя из предположения о том, что препарат оказывает иммуносупрессивное действие. Учитывая то, что цикл развития иммунных клеток составляет примерно 7 дней, было принято решение о чередовании семидневных циклов введения препарата аполактоферрина.
Монотерапия аполактоферрином привела к частичной элиминации вируса: произошло снижение виремии с высокой до низкой 2*103 МЕ/мл.
Отмечалось повышение уровня ферментов, хотя все значения их лежали в пределах нормы. Через 7-9 дней от начала лечения наблюдалось обострение простудного заболевания. Катаральные проявления протекали в стертой форме и проходили самопроизвольно, не мешая процессу лечения основного заболевания.
Следующим этапом лечения больной после частичного успеха с применением монотерапии аполактоферрином было комплексное лечение с использованием препаратов интерферона и экстракорпоральных методов детоксикации. Курс лечения был начат с проведения пульсового введения по 20 мг аполактоферрина каждые 2 часа до достижения дозы 100 мг. Далее препарат аполактоферрина вводили ежедневно по 40 мг без соблюдения недельной цикличности. Параллельно с введением аполактоферрина применялся препарат интерферона Альфа 2A (Реаферон) по 3 млн. ЕД. через день.
Первое введение реаферона предшествовало проведению двухчасовой схемы введения аполактоферрина. Элиминация вируса произошла через пять дней от начала лечения аполактоферрином. Реаферон вводился в такой же дозе 3 млн. ЕД. через день. Следует отметить, что элиминация вируса сопровождалась относительным подъемом уровня AлAT(SGPT) и AcAT(SGOT), тем не менее остающихся в пределах нормы. Виремия до и после проведения двухчасовой схемы осталась на среднем уровне. Учитывая IB генотип вируса, введение аполактоферрина было продолжено до 8 дней, терапия реафероном продолжалась в прежнем объеме. Однако через неделю после прекращения введения аполактоферрина произошло увеличение виремии до среднего уровня. Был начат повторный курс введения аполактоферрина по 20 мг ежедневно, однако при контрольном исследовании на четвертый день лечения была обнаружена высокая виремия. В применении аполактоферрина был сделан двухнедельный перерыв.
К курсу лечения добавлен рибавирин по 1000 мг/день, реаферон заменен на интерферон aльфa-2B (Интрон) по 5 млн. ЕД через день. Введение аполактоферрина начато с зарекомендовавшей себя двухчасовой схемы, далее по 20 мг ежедневно без соблюдения недельной цикличности. На момент начала лечения виремия была средней. Количество антивирусного иммуноглобулина M было значительным. Интрон применялся с 5 дня от начала введения аполактоферрина. К шестому дню лечения, т.е. к началу применения Интрона, у больной произошло нарастание виремии до 430 тыс. МЕ/мл, коррелирующее с биохимическими показателями в анализах крови. Сохранился высокий уровень антивирусного IgM. После начала введения Интрона произошло быстрое, в течение пяти дней, снижение уровня виремии до низкого, и далее в течение двух недель произошла элиминация вируса. После этого введение аполактоферрина было прекращено, введение Интрона продолжено в прежнем объеме. При контрольных анализах через 5, 12, 19 и 25 месяцев после прекращения введения аполактоферрина виремии не обнаружено.
Клинический случай 7
Больная M.T.И., жен, 47 лет. Диагноз - гепатит С, генотип Ib. Длительный печеночный анамнез около 6 лет, хронический панкреатит. Диагноз ВГС выявлен лабораторно при профилактическом обследовании. Длительность заболевания 1,5 года по документальным данным. Исходная виремия 1*107 МЕ/мл.
Больная лечилась стационарно. Исходные биохимические показатели AJlT (SGPT), ACT (SGOT) в пределах нормы, билирубин увеличен в 2 раза, в 10 раз увеличена ALP.
В комплексной терапии в семидневном режиме с использованием двухчасовой схемы применялся нативный лактоферрин (препарат «Лaпpoт»), реаферон, ламивудин, рибавирин и экстракорпоральные методы детоксикации. В качестве разовой дозы использовалось 50 мг лиофилизированного препарата «Лaпpoт». К концу третьей недели комплексного лечения отмечено повышение печеночных ферментов почти в 2 раза и уменьшение ALP до нормы. Виремия снизилась до 6,7*105 МЕ/мл. После двухнедельного перерыва проведен второй этап комплексной терапии с применением препарата «Лaпpoт». На протяжении всего второго этапа виремия оставалась в пределах 1,2*105 - 2,3*105 МЕ/мл. В конце 3 недели 2 этапа отмечено снижение виремии меньше 500 МЕ/мл. Учитывая признаки иммуносупрессии, был сделан двухнедельный перерыв комплексной терапии. В течение этих 2 недель использовался только пролонгированный интерферон «Пeгacиc», применяемый 1 раз в неделю. Контрольное исследование выявило сохранение виремии на уровне 600 МЕ/мл. В начале третьего этапа лечения по схеме виремия возросла до 3,5*105 МЕ/мл и сохранялась на этом уровне до самого конца третьего этапа. Больная переведена на схему длительного приема пролонгированного интерферона. Контрольные исследования спустя 6, 12 и 20 месяцев показывают наличие вирусной нагрузки в пределах l*103 - l*104 МЕ/мл.
Клинический случай 8
Больной З.A.A., муж, возраст 18 лет, Диагноз гепатит С, генотип Ib, Длительность заболевания около 5 лет. Исходная виремия 500000 МЕ/мл. Лечение стационарное, комплексное с применением препарата «Лaпpoт» в три этапа. Каждый этап состоял из трехнедельного цикла в семидневном режиме с двухчасовой схемой. Биохимические показатели на протяжении всех трех этапов, проводимые с перерывами в две недели, практически оставались на исходном уровне в пределах нормы. К концу первого этапа виремия снизилась до 500 МЕ/мл. К началу второго этапа вирус в крови обнаружен не был. Однако уже в середине первой семидневки второго этапа он снова проявился при 2,2*104 МЕ/мл. Весь третий этап лечения, т.е. ещё 21 день сопровождался стойкими показателями виремии в пределах 1*103 - 1,6*103 МЕ/мл. С учетом возраста больного и значительный иммуносупрессии к концу 3 этапа решено перевести больного на длительный курс пролонгированного интерферона «Пeгacиc». Контрольные исследования через 6, 13, 21 и 29 месяцев показывают сохранение виремии практически на исходном уровне.
Клинический случай 9
Больной H.A.B., муж, 33 года. Диагноз гепатит С, генотип Ib. Длительность заболевания около 10 лет по достоверно подтвержденным документам. В анамназе неоднократно проводились курсы интерферонотерапии без положительного эффекта. Исходная виремия 2,1* 107 МЕ/мл. Курс комплексной терапии с препаратом «Лaпpoт» по двухчасовой схеме, семидневными циклами проводился в два этапа. К этому же времени снизились исходно повышенные в 1,5 раза биохимические показатели. Антивирусный эффект от проводимого лечения практически не получен.
Заключение
Приведенные клинические наблюдения типичны для двух групп больных с применением в одной группе нативного человеческого лактоферрина, содержащегося в препарате «Лaпpoт» - 9 наблюдений (в одном из них имел место отказ больного от лечения на первой неделе лечения, причина не установлена); в другой - человеческого аполактоферрина, полученного авторами вышеописанным способом - 51 наблюдение (отказ от лечения в одном случае, больной с нестабильной психикой из-за длительного наркотического анамнеза).
Монотерапия аполактоферрином проводилась 5 больным, но из-за отсутствия противовирусного эффекта переходила в фазу комплексной терапии с применением интерферонов, цитостатиков и методов экстракорпоральной детоксикации.
Не желая быть связанными какой-либо научной теорией, изобретатели предполагают, что парентерально введенный аполактоферрин тропен вирусу гепатита С, вступает с ним во взаимодействие, представляя его иммунной системе и препятствуя его проникновению в гепатоцит. Длительное, регулярное применение аполактоферрина приводит к некоторым иммуносупрессивным эффектам, что косвенно характеризуется нарастанием виремии при монотерапии, а также появлением у всех больных примерно через неделю от начала лечения катаральных изменений. Однако аллергических реакций отмечено не было ни в одном случае.
Наиболее выраженным эффектом обладает применение аполактоферрина по двухчасовой схеме, 5-6 введений по 20 мг через каждые 2 часа, предварительно начав лечение препаратами интерферона. Возможно, клинически оправданным будет введение препарата дробно, с интервалом 2-3 часа в течение более длительного времени, т.е. нескольких суток, возможно и недель.
Промышленная применимость
Настоящее изобретение касается применения аполактоферрина для лечения инфекций, вызванных вирусом гепатита С (ВГС), в частности хронических инфекций, и обеспечивает способы, композиции и наборы, которые могут быть использованы в здравоохранении.
Все патентные документы, публикации, научные статьи, и другие документы и материалы, цитируемые или упоминаемые здесь, включены в настоящее описание путем отсылки в такой степени, как если бы каждый из этих документов был включен путем отсылки индивидуально или приведен здесь в его полном виде.
Конкретные применения, способы и схемы терапии, фармацевтические композиции, описанные здесь, относятся к предпочтительным вариантам осуществления, приведены в качестве примеров и не предназначены для ограничения объема данного изобретения. При изучении этого описания другие объекты, аспекты и воплощения будут приходить в голову специалистам в данной области, и они охватываются рамками данного изобретения. Специалистам в данной области будет понятно, что различные замены и модификации могут быть произведены в отношении описанного здесь изобретения без отклонения от объема и рамок данного изобретения, определяемых прилагаемой формулой изобретения.

Claims

Формула изобретения
1. Композиция, включающая лактоферрин человека и интерферон, где указанный лактоферрин по существу не содержит железа, и где указанная композиция по существу не содержит нечеловеческого лактоферрина.
2. Композиция по п. 1, в которой указанный лактоферрин человека имеет степень насыщения железом менее чем приблизительно 5%.
3. Композиция по п. 2, где указанный лактоферрин человека имеет кажущуюся молекулярную массу около 80 кДа.
4. Композиция по п. 2, в которой указанный лактоферрин человека присутствует в количестве около 20 мг.
5. Композиция по п. 1 , пригодная для лечения инфекции ВГС.
6. Композиция по п. 5, где указанная инфекция ВГС представляет собой хроническую инфекцию ВГС.
7. Композиция по п. 5, где указанный ВГС представляет собой ВГС генотипа Ib.
8. Композиция по п. 5, способная элиминировать указанный ВГС из организма пациента на срок более, чем 3 месяца.
9. Способ лечения пациента, инфицированного ВГС, включающий введение указанному пациенту: a. композиции, включающей лактоферрин человека, где указанный лактоферрин по существу не содержит железа, и где указанная композиция по существу не содержит нечеловеческого лактоферрина; и b. интерферона.
10. Способ по п. 9, в котором указанный лактоферрин человека имеет степень насыщения железом менее, чем приблизительно 5%.
11. Способ по п. 10, где указанный лактоферрин человека имеет кажущуюся молекулярную массу около 80 кДа.
12. Способ по п. 10, где указанный лактоферрин человека присутствует в количестве около 20 мг.
13. Способ по п. 10, где указанный пациент хронически инфицирован ВГС.
14. Способ по п. 10, где указанный ВГС представляет собой ВГС генотипа Ib.
15. Способ по п. 13, где указанное введение элиминирует ВГС из организма указанного пациента на срок более, чем 3 месяца.
16. Набор для лечения инфекции ВГС, включающий: a. первый контейнер, содержащий терапевтически эффективное количество лактоферрина человека, где указанный лактоферрин по существу не содержит железа; b. второй контейнер, содержащий терапевтически эффективное количество интерферона.
17. Набор по п. 16, в котором указанный первый контейнер по существу не содержит нечеловеческого лактоферрина.
18. Набор по п. 17, в котором указанный лактоферрин человека имеет степень насыщения железом менее, чем приблизительно 5%.
19. Набор по п. 18, в котором указанный лактоферрин человека имеет кажущуюся молекулярную массу около 80 кДа.
20. Набор по п. 18, в котором указанный лактоферрин человека присутствует в количестве около 20 мг.
21. Набор по п. 16, где указанная инфекция ВГС представляет собой хроническую инфекцию ВГС.
22. Набор по п. 16, где указанный ВГС представляет собой ВГС генотипа Ib.
PCT/RU2008/000109 2007-09-05 2008-02-27 Композиции аполактоферрина и способы их применения в лечении вирусного гепатита с Ceased WO2009031918A1 (ru)

Priority Applications (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP08741791.1A EP2196211B1 (en) 2007-09-05 2008-02-27 Apolactoferrin compositions for use in treating viral hepatitis c
EA200900558A EA013008B1 (ru) 2007-09-05 2008-02-27 Композиции аполактоферрина и способы их применения в лечении вирусного гепатита с
CN200880114714A CN101848727A (zh) 2007-09-05 2008-02-27 脱铁乳铁蛋白组合物及其用于治疗病毒性丙型肝炎的方法

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US97015907P 2007-09-05 2007-09-05
US60/970,159 2007-09-05

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2009031918A1 true WO2009031918A1 (ru) 2009-03-12

Family

ID=40429094

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/RU2008/000109 Ceased WO2009031918A1 (ru) 2007-09-05 2008-02-27 Композиции аполактоферрина и способы их применения в лечении вирусного гепатита с

Country Status (5)

Country Link
US (1) US20090142298A1 (ru)
EP (1) EP2196211B1 (ru)
CN (2) CN101848727A (ru)
EA (1) EA013008B1 (ru)
WO (1) WO2009031918A1 (ru)

Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US12594285B2 (en) 2016-02-25 2026-04-07 Applied Biological Laboratories, Inc. Compositions and methods for protecting against airborne pathogens and irritants
US12447166B2 (en) 2016-02-25 2025-10-21 Applied Biological Laboratories, Inc. Compositions and methods for protecting against airborne pathogens and irritants
EP3419629A4 (en) 2016-02-25 2019-10-30 Applied Biological Laboratories, Inc. COMPOSITIONS AND PROCEDURES FOR PROTECTION AGAINST AIRBORNE PATHOGENES AND IRRITATES
NL2025294B1 (en) * 2020-04-07 2021-10-25 Cbmr Scient Nanoscience B V Antimicrobial peptide for treatment and controlling virus infections
US20230149515A1 (en) * 2020-04-29 2023-05-18 The Regents Of The University Of Michigan Inhibition of sars-cov-2 viral entry through oral administration of lactoferrin and uses thereof
CN112121148A (zh) * 2020-09-24 2020-12-25 南京鼓楼医院 母乳及其活性成分人乳清蛋白、人乳铁蛋白作为乙型肝炎病毒抑制剂的用途

Citations (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS60100019A (ja) 1983-11-05 1985-06-03 Anritsu Corp 計量装置
WO1989011226A1 (fr) 1988-05-27 1989-11-30 Institut National De La Recherche Agronomique (Inr PROCEDE DE FRACTIONNEMENT DES PROTEINES DU LAIT HUMAIN, CONDUISANT A LA PRODUCTION NOTAMMENT DE LACTOFERRINE ET D'alpha-LACTALBUMINE, ET PRODUITS OBTENUS
EP0253395B1 (en) 1986-07-17 1991-10-30 Morinaga Milk Industry Co., Ltd. A process for producing bovine lactoferrin in high purity
WO1992021752A1 (en) 1991-05-31 1992-12-10 The United States Of America Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Human lactoferrin
WO2001032895A1 (en) 1999-10-19 2001-05-10 Easy Bio System, Inc. Recombinant yeast strain for expressing human lactoferrin, n-lobe lactoferrin, c-lobe lactoferrin and process for preparation recombinant human lactoferrin, n-lobe lactoferrin, c-lobe lactoferrin using the same
US6277817B1 (en) 1990-03-08 2001-08-21 Ferro Dynamics Inc. Human lactoferrin
EP1352657A1 (en) 2000-11-29 2003-10-15 Morinaga Milk Industry Co., Ltd. Interferon therapeutic effect-potentiating agents
US20040040062A1 (en) 2002-04-23 2004-02-26 Haeng-Soon Lee Method for producing human lactoferrin in plant cell culture
WO2005016370A1 (en) * 2003-08-13 2005-02-24 Howard J. Smith & Associates Pty Ltd Method of treating viral infections

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH07188052A (ja) * 1993-12-27 1995-07-25 Sanwa Kagaku Kenkyusho Co Ltd インターフェロン用作用効果増強剤及び該増強剤とインターフェロンとを含有する抗ウイルス活性増強組成物
CN1195544C (zh) * 1998-07-30 2005-04-06 森永乳业株式会社 用于慢性肝炎的肝功能改善剂

Patent Citations (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS60100019A (ja) 1983-11-05 1985-06-03 Anritsu Corp 計量装置
EP0253395B1 (en) 1986-07-17 1991-10-30 Morinaga Milk Industry Co., Ltd. A process for producing bovine lactoferrin in high purity
WO1989011226A1 (fr) 1988-05-27 1989-11-30 Institut National De La Recherche Agronomique (Inr PROCEDE DE FRACTIONNEMENT DES PROTEINES DU LAIT HUMAIN, CONDUISANT A LA PRODUCTION NOTAMMENT DE LACTOFERRINE ET D'alpha-LACTALBUMINE, ET PRODUITS OBTENUS
US6277817B1 (en) 1990-03-08 2001-08-21 Ferro Dynamics Inc. Human lactoferrin
WO1992021752A1 (en) 1991-05-31 1992-12-10 The United States Of America Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Human lactoferrin
WO2001032895A1 (en) 1999-10-19 2001-05-10 Easy Bio System, Inc. Recombinant yeast strain for expressing human lactoferrin, n-lobe lactoferrin, c-lobe lactoferrin and process for preparation recombinant human lactoferrin, n-lobe lactoferrin, c-lobe lactoferrin using the same
EP1352657A1 (en) 2000-11-29 2003-10-15 Morinaga Milk Industry Co., Ltd. Interferon therapeutic effect-potentiating agents
US20040040062A1 (en) 2002-04-23 2004-02-26 Haeng-Soon Lee Method for producing human lactoferrin in plant cell culture
WO2005016370A1 (en) * 2003-08-13 2005-02-24 Howard J. Smith & Associates Pty Ltd Method of treating viral infections

Non-Patent Citations (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
"Cleavage of the structural proteins during the assembly of the head of the bacteriophage T4", NATURE, vol. 227, 1970, pages 680 - 685
"Dictionary of Biochemistry", 1990, TOKYO KAGAKU DOJIN CO., pages: 1390
"Remington's Pharmaceutical Sciences", 1985, MACK PUBL. CO.
BAKER EN ET AL.: "Molecular structure,bindmg properties and dynamics of lactoferrin", CELL MOL.LIFE SCI., vol. 62, no. 22, November 2005 (2005-11-01), pages 2531 - 2539, XP019200886 *
FARRELL H.M., JR. ET AL.: "Nomenclature of Proteins of Cows", MILK - SIXTH REVISION. J. DAIRY SCI., vol. 87, 2004, pages 1641 - 1674, XP026974647
HAN Z.S. ET AL.: "High-level expression of human lactoferrin in the milk of goats by using replication-defective adenoviral vectors", PROTEIN EXPR. PURIF., vol. 53, no. 1, 2007, pages 225 - 231, XP005899744, DOI: doi:10.1016/j.pep.2006.11.019
ISHIBASHI Y.ET AL.: "Randomized placebo-controlled trial of interferon aplha-2b plus riba-virin with and without lactoferrim for chronic hepatitis C", HEPATOL.RES., vol. 32, no. 4, August 2005 (2005-08-01), pages 218 - 223, XP005042311 *
J. PEDIATR., vol. 94, 1979, pages 1
JOHNSON CL; OWEN DM; GALE M JR.: "Functional and therapeutic analysis of hepatitis C virus NS3.4A protease control of antiviral immune defense", J BIOL CHEM., vol. 282, no. 14, April 2007 (2007-04-01), pages 10792 - 803, XP055196885, DOI: doi:10.1074/jbc.M610361200
MOGUILEVSKY N. ET AL.: "Comparison of human lactoferrins from milk and neutrophilic leucocytes", BIOCHEM. J., vol. 229, 1985, pages 353 - 359
See also references of EP2196211A4 *
SHEPHERD J; JONES J; HARTWELL D; DAVIDSON P; PRICE A; WAUGH N.: "Interferon alfa (pegylated and non-pegylated) and ribavirin for the treatment of mild chronic hepatitis C: a systematic review and economic evaluation", HEALTH TECHNOL ASSESS., vol. 11, no. 11, March 2007 (2007-03-01), pages I-224
TONIUTTO P; FABRIS C; BITETTO D; FOMASIERE E; RAPETTI R; PIRISI M.: "Valopicitabine dihydrochloride:a specific polymerase inhibitor of hepatitis C virus", CURR OPIN INVESTIG DRUGS., vol. 8, no. 2, February 2007 (2007-02-01), pages 150 - 8
VELLIYAGOUNDER K. ET AL., INFECT. IMMUN., vol. 71, no. 11, 2003, pages 6141 - 6147
WEINER R.E.; SZUCHET S.: "The molecular weight of bovine lactoferrin", BIOCHIM. BIOPHYS. ACTA, vol. 393, no. 1, 1975, pages 143 - 147, XP023386778, DOI: doi:10.1016/0005-2795(75)90224-X
Y OUNOSSI Z; KALLMAN J; KINCAID J.: "The effects of HCV infection and management on health-related quality of life", HEPATOLOGY, vol. 45, no. 3, March 2007 (2007-03-01), pages 806 - 16
YOUNOSSI Z; KALLMAN J; KINCAID. J.: "The effects of HCV infection and management on health-related quality of life", HEPATOLOGY, vol. 45, no. 3, March 2007 (2007-03-01), pages 806 - 16

Also Published As

Publication number Publication date
EA200900558A1 (ru) 2009-10-30
EP2196211A1 (en) 2010-06-16
CN105521485A (zh) 2016-04-27
US20090142298A1 (en) 2009-06-04
EA013008B1 (ru) 2010-02-26
EP2196211B1 (en) 2014-04-02
EP2196211A4 (en) 2011-08-03
CN101848727A (zh) 2010-09-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2145235C1 (ru) Терапевтическая комбинация, содержащая человеческий интерферон, фармацевтический препарат на основе интерферона (варианты)
CN108368165A (zh) 用于治疗颅内出血相关症状的方法和组合物
JP2011530599A5 (ru)
WO2009031918A1 (ru) Композиции аполактоферрина и способы их применения в лечении вирусного гепатита с
JP2016537416A (ja) 脳マラリアを治療するためのアンギオポエチンに基づいた介入
WO1997048411A1 (en) Medicinal compositions for treating liver diseases
US20110064691A1 (en) Method to enhance hematopoiesis
US11517611B2 (en) Methods of treating viral infection with a composition comprising IL-18 and IL-22
AU2019202876B2 (en) Administration of Recombinant Collagen 7 for the Treatment of Age Related Disorders
US20090035273A1 (en) Combination treatment method with interferon-tau
CA2511562A1 (en) Hcv combination therapy
JP2014509628A (ja) Ｃ型肝炎ウイルス感染症を治療するためのアリスポリビル
EP1471974B1 (en) Tumor necrosis factor combined with interferon in demyelinating diseases
RU2024111536A (ru) Лекарственное средство для лечения жировой инфильтрации печени и неалкогольного стеатогепатита
JP2007070367A (ja) Ｃｍｌ治療
RU2020124953A (ru) Фармацевтическая композиция, содержащая пептид apl-типа
US20110318303A1 (en) Il-10 and methods of treating ocular and other diseases
NZ620689B2 (en) Hcv immunotherapy
WO2013134666A1 (en) Use of thymosin alpha for treatment of purulent rhinosinusitis

Legal Events

Date Code Title Description
WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 200880114714.8

Country of ref document: CN

121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 08741791

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 200900558

Country of ref document: EA

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2008741791

Country of ref document: EP