WO2009113902A1 - Пpoтивooпyxoлeвaя терпеноидная фармацевтическая композиция «aбиcилин» с ангиогенезингибирующим дeйcтвиeм - Google Patents

Пpoтивooпyxoлeвaя терпеноидная фармацевтическая композиция «aбиcилин» с ангиогенезингибирующим дeйcтвиeм Download PDF

Info

Publication number
WO2009113902A1
WO2009113902A1 PCT/RU2008/000147 RU2008000147W WO2009113902A1 WO 2009113902 A1 WO2009113902 A1 WO 2009113902A1 RU 2008000147 W RU2008000147 W RU 2008000147W WO 2009113902 A1 WO2009113902 A1 WO 2009113902A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
abisilin
drug
dose
angiogenesis
tumor
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Ceased
Application number
PCT/RU2008/000147
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Нина Максимовна ПИНИГИНА
Людмила Анатольевна ЛАЦЕРУС
Анатолий Юрьевич БАРЫШНИКОВ
Фания Иршатовна МАГАНОВА
Алексей Михайлович КОЗЛОВ
Зоя Сергеевна СМИРНОВА
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
OBSCHESTVO S OGRANICHENNOY OTVETSTVENNOSTYU "INITIUM-PHARM"
Original Assignee
OBSCHESTVO S OGRANICHENNOY OTVETSTVENNOSTYU "INITIUM-PHARM"
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority to PCT/RU2008/000147 priority Critical patent/WO2009113902A1/ru
Priority to EP08873343A priority patent/EP2275112A4/en
Priority to CA2727792A priority patent/CA2727792C/en
Priority to EA201001289A priority patent/EA017659B1/ru
Priority to CN2008801288610A priority patent/CN102036672A/zh
Priority to JP2010550631A priority patent/JP2011514354A/ja
Application filed by OBSCHESTVO S OGRANICHENNOY OTVETSTVENNOSTYU "INITIUM-PHARM" filed Critical OBSCHESTVO S OGRANICHENNOY OTVETSTVENNOSTYU "INITIUM-PHARM"
Priority to KR1020107022802A priority patent/KR20110015516A/ko
Priority to US12/922,338 priority patent/US20110165271A1/en
Publication of WO2009113902A1 publication Critical patent/WO2009113902A1/ru
Priority to IL208092A priority patent/IL208092A/en
Anticipated expiration legal-status Critical
Ceased legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/12—Ketones
    • A61K31/122—Ketones having the oxygen directly attached to a ring, e.g. quinones, vitamin K1, anthralin
    • A61K31/125—Camphor; Nuclear substituted derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/13—Coniferophyta (gymnosperms)
    • A61K36/15—Pinaceae (Pine family), e.g. pine or cedar
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/14—Vasoprotectives; Antihaemorrhoidals; Drugs for varicose therapy; Capillary stabilisers

Definitions

  • Antipyretic terpenoid pharmaceutical composition “ Abisilin ”with angiogenesis-inhibiting action”
  • the invention relates to medicine and the pharmaceutical industry, in particular to the development of an antitumor drug for the treatment of oncological diseases of various origins, by inducing a cascade of anti-tumor processes: inhibiting angiogenesis, inducing an endogenous apoptosis system, inhibiting the proliferation of tumor cells, and activating the antirecurrent antimetosis when using a non-toxic polyactive agent that induces these processes - oral drug
  • this invention can be used in the treatment of a large number of diseases associated with impaired regulation of angiogenesis, especially diseases caused by neovascularization of the eyes - retinopathy or age-related macular degeneration, as well as in proliferative disorders of mesangial cells - in cases of chronic and acute kidney diseases (glomerulonephritis), with psoriasis, development of atheromas, arterial restenosis, diabetes, rheumatoid arthritis, chronic asthma, endometriosis, autoimmune diseases , Arterial real or posttransplatatsionnom atherosclerosis and many others.
  • diseases associated with impaired regulation of angiogenesis especially diseases caused by neovascularization of the eyes - retinopathy or age-related macular degeneration, as well as in proliferative disorders of mesangial cells - in cases of chronic and acute kidney diseases (glomerulonephritis), with psoriasis, development of atheromas, arterial restenosis, diabetes, r
  • Antiangiogenic drugs blocking the formation of blood vessels in a tumor, slow down or stop its growth and prevent the development of metastases.
  • Avastin is a monoclonal antibody from the pharmacological group with an anti-angiogenic mechanism that can reduce vascularization and inhibit tumor growth due to selective binding to biologically active vascular endothelial growth factor (VEGF) (US patent JVb 60542297; US certificate JN ° 6639055 )
  • VEGF biologically active vascular endothelial growth factor
  • angiogenesis inhibitors that block chemical signals that promote the growth of new blood vessels can be effective in any type of tumor, as these processes are common.
  • Anthranilic acid and thioanthranilic acid N-arylamides are known to inhibit the activity of the tyrosine kinase Fit-1 VEGF receptor associated with neoplastic diseases and angiogenesis. When using them, insignificant therapeutic efficacy is noted.
  • Paclitaxel which effectively suppresses the proliferation of endothelial cells, i.e. which is an inhibitor of angiogenesis (Klaubeg N. et al., Sapser Res., 57, 81-86, 1997).
  • Taxol was developed on the basis of complex structure diterpenoids - taxanes isolated in 1971 from the bark of the Pacific yew tree (Takhis brevifolia Nitl).
  • Currently known methods for the complete synthesis of Taxol and its analogues (USA Al, N 5488116, Jap. 1966, RU N 2196581 from 05/04/2000).
  • Taxol - docetaxel isolated from the raw materials of the European yew (Tahis bassat ⁇ ), as well as R-tetraol created using native terpenoid complexes using conifers of coniferous species Ripis sibiibsa and / or Ripis setba, and / or genus Abies, and / or genus Larich (RU 2051900 Cl, 10.01.96) based on which it is obtained by isolating the active ingredient from a natural product or in a semi-synthetic way (RU 2196581, C2, 04.05.2000) using a fraction of labdanoid-diterpene acids with the addition of camphor and exposing the resulting mixture to ⁇ -radiation until the formation of the R-tetraol structure.
  • an antiangiogenic agent include immunomodulatory, analgesic, antibacterial, anti-inflammatory and other types of activity;
  • Antiangiogenic agents that are capable of simultaneously exerting such a variety of polyactive effects in the development of tumor processes are unknown and not obvious from the prior art.
  • the aim of the present invention was the search and development of a tool that allows you to show selective inhibition or complete blocking of the neovascularization system using an antiangiogenic antitumor agent that is free of existing disadvantages of known agents, namely, it does not have toxic side effects with prolonged use, without contraindications that does not cause resistance (including apoptosis), as well as when used in combination with cytostatic drugs, does not not only increasing their effectiveness, but also helping to reduce their toxicity.
  • the proposed method should have several advantages over all known blockers of angiogenesis - have a direct antitumor effect, be able to induce an apoptosis system in cells, have an antirecurrent and antimetastatic effect, while also exhibiting immunomodulating, antibacterial, wound healing, anti-inflammatory, analgesic and other painkillers.
  • the polyactive active terpenoid pharmaceutical composition Abisilin which is an oral dosage form - 20% oil solution, with a new spectrum of pharmacological action and new possibilities for stopping pathological processes associated with impaired regulation of angiogenesis, in particular with the development of malignant neoplasms.
  • the polyactivity of the terpenoid pharmaceutical composition Abisilin is achieved due to the fact that it uses a natural complex chemical complex of terpenes containing a provoked (in terms of yield and synthesis) composition for bioprotection against stress factors in representatives of the Ripaseae family, enriched with identical monoterpene compounds.
  • the obtained antitumor oral polyactive drug Abisilin with an angiogenesis-inhibiting effect was investigated for the presence of a general toxic effect.
  • Abisilin is administered orally at a dose of 80-100 mg / kg body weight.
  • a preferred embodiment of the invention is also a method for inducing a selective cytotoxic effect on tumor cells and a method for inducing apoptosis death using an Abisilin dose of 1000 ⁇ g / ml, since the largest number of cells in the amount of positive AnV + Pl-, AnV + Pl + , AnV-Pl + , in relation to the Jukat cell line and amounted to 86.6%.
  • Example 2 Example 2
  • a preferred embodiment of the invention is a method for inducing the antitumor effect of the drug Abisilin when administered orally at a dose of 10-100 mg / kg body for 2-11 days, identified using the necessary set of transplantable solid tumors - melanoma B-16, Ca-755, LLC, PShM-5, Akatol and sarcoma MI. (Example 3)
  • the preferred option which is the treatment of tumor diseases of various origins, is the use of the pharmaceutical composition
  • Abisilin which may be in the form of a solution, tablets, gelatin capsules, dragees, syrups, suspensions, powders, emulsions, granules, microspheres or nanospheres, or other dosage forms, which allow for the controlled release of the active ingredients of the drug.
  • a preferred embodiment of the present invention is a method of shifting the natural balance between pro-angiogenic and anti-angiogenic mediators towards the dominance of the latter when using Abisilin in ip vitro and ip vivo experiments. (Example 4)
  • a preferred embodiment of the present invention is the use of Abisilin for the induction of antirecurrent and antimetastatic effects when administered orally in doses of 80-100 mg / kg body weight. (Example 5)
  • a subchronic experiment was conducted on nonlinear male and female rats with an average mass of 165 ⁇ 3 g and l63 ⁇ 3 g, respectively.
  • the studied drug was administered intragastrically daily once for 14 days at a dose of 100, 500 and 1000 mg / kg to males and at a dose of 100 and 1000 mg / kg to females.
  • Abisilin in the doses studied did not cause significant changes in the integral parameters in the experimental animals (weight gain, behavioral reactions, food, water consumption), the peripheral blood cell composition, excretory, absorption, protein synthesizing, carbohydrate function of the liver, level serum cholesterol content, the functional state of the cardiovascular, excretory and nervous systems.
  • T cell lymphoblastic leukemia - Jugkat B cell leukemia - Raji
  • chronic myelogenous leukemia - K562 myelogenous leukemia - K562, melanoma - MeI P
  • breast cancer - T 47 D ovarian cancer - SKOV-3
  • prostate cancer - PC-3 T cell lymphoblastic leukemia - Jugkat
  • B cell leukemia - Raji chronic myelogenous leukemia - K562
  • myelogenous leukemia - K562 myelogenous leukemia - K562, melanoma - MeI P
  • breast cancer - T 47 D ovarian cancer - SKOV-3
  • prostate cancer - PC-3 prostate cancer - PC-3.
  • Cell lines were grown in complete nutrient medium RPMI - 1640 containing 10% calf fetal serum, 2mM / ml glutamine, 0.1 mg / ml gentamicin, vitamins, sodium pyruvate, amino acids, at 37 ° C and in an atmosphere of 5% CCh .
  • the cytotoxic activity of Abisilin was determined by the colorimetric method using the MTT test. 5 x tumor cells
  • Identification of apoptotic cells was carried out by double intravital staining using annexin V-FITC in combination with a vital dye such as propedium iodide (PI).
  • a vital dye such as propedium iodide (PI).
  • Annexin-stained V-FITC and PI cells were evaluated according to the following criteria: living cells negative for Annexin V and PI (AnV " WG), early apoptotic cells positive for Annexin V and negative for PI (AnV + PI " ), late apoptotic or necrotic cells positive for Annexin V and PI (AnV + PI + ).
  • As a control we used tumor cells that were incubated under the same conditions, but in the absence of the drug, as well as tumor cells that were incubated under the same conditions, but a solution of 1% DMSO was added instead of the drug.
  • this aspect of the invention extends the scope of use of the well-known polyactive terpenoid substance Abisil and pharmaceutical compositions obtained on its basis, recommended for topical and external use, since it has established action spectra (antibacterial, immunomodulating, anti-inflammatory, wound healing, analgesic ) are added unexpectedly identified and having great therapeutic significance types of effects, namely: the ability to cause cytotoxic effects on some ny lines of tumor cells proceeding as apoptosis.
  • the study of the antitumor effect of the oral pharmaceutical composition Abisilin on transplantable tumors The antitumor effect of the drug Abisilin was studied on transplantable tumors of mice, which are among the mandatory models of animal tumors that are used in the selection of new antitumor substances: melanoma B-16, Lewis epidermoid lung carcinoma (LLC), breast adenocarcinoma Ca-755, and cervical cancer PI -5, AKATOJl colon adenocarcinoma, MI polymorphic cell sarcoma.
  • mice - first-generation hybrids BDF C BI / 6 x DBA / 2) and F (C Dl / 6 and CBA / 2)
  • Mice and rats were obtained from the department of laboratory animals GU RONTs im. NN Blokhina RAMS and kept on a normal diet.
  • the drug Abisilin was administered orally (re os) in the form of an oil solution at doses of 10, 100, 150, 500, 2500 mg / kg.
  • an oil solution As a solvent for the preparation, vegetable sunflower oil was used.
  • the drug Abisilin was administered to animals daily orally for 10 days, as well as in the regimes: on the 2nd and 6th days and 2nd and 11th days. Treatment was started 48 hours after transplantation of solid tumors (Ca-755, ACATOL, melanoma B-16,
  • the drug Abisilin was administered to mice daily orally for 10 days 48 hours after transplantation of the tumor at a dose of 50 mg / kg, and the anticancer drug Cisplatin was administered once intraperitoneally (iv) at a dose of 5 mg / kg. Observation of animals with the above tumors was carried out before their death. The antitumor effects of the drug were judged by the inhibition of tumor growth (TPO,%) in experimental animals compared with the control.
  • the toxicity of the drugs was evaluated by the early death of mice compared with the death of control animals and the state of their internal organs (spleen, liver, etc.), changes in body weight compared to the original.
  • the drug was not effective at doses of 500 mg / kg after 10 days of administration and at a dose of 2500 mg / kg when administered twice with an interval of 10 days.
  • the therapeutic dose of the drug Abisilin in experiments in the study of antitumor activity on transplanted tumors was 100 mg / kg with daily oral administration for 5 days.
  • the therapeutic dose of the drug Abisilin with daily oral administration to animals with transplantable solid tumors was 100 mg / kg.
  • the drug Abisilin did not cause toxic effects in a total dose of 5000 mg / kg, both when administered daily at a dose of 500 mg / kg for 10 days, and when administered twice at a dose of 2500 mg / kg with an interval of 4 and 9 days.
  • the solution of the drug Abisilin was prepared in a stock concentration of 10 mg / ml (10% DMSO / PBS) in the laboratory for the development of dosage forms of the Research Institute of EDITO RONTs im. NN Blokhina RAMS on the day of the experiment.
  • the drug to the concentration required in the study was diluted in 1% PBS.
  • the antiangiogenic properties of the drug Abisilin can be demonstrated in vitro and in vivo according to the following procedure.
  • the cytotoxic effect of Abisilin on endothelial cells was carried out during incubation of the drug for 24 hours with cells of the line SVEC-4-10, planted in high density.
  • Abisilin causes the death of endothelial cells in the concentration range from 1 mg / ml to 0.125 mg / ml (Fig. 2).
  • LD 5 o was 0.21 mg / ml.
  • the antiproliferative effect of Abisilin was evaluated by studying the effect of Abisilin on the proliferative activity of activated bFGF endothelial cells SVEC4-10, planted in low density.
  • Abisilin has been shown to block the proliferation of endothelial cells.
  • Abisilin's ability to block the formation of tube-like structures of endothelial cells was evaluated in the dose range of 0.125 mg / ml to 0.015 mg / ml.
  • the drug Abisilin has antiangiogenic properties in the experiment ip vivo and ip vitro.
  • the data obtained are of practical importance, consisting in the possibility of using Abisilin according to the indicated method as an agent capable of blocking the angiogenesis of malignant tumors, all the more so since methods for producing such polyactive non-toxic agents with simultaneous antitumor and antiangiogenic effects are not known and obvious.
  • mice and first-generation BDFl hybrids weighing 20-25 g with subcutaneous transplanted Lewis lung carcinoma were used. Mice were obtained from the department of the animal laboratory of the GU RONTs im. NN Blokhina RAMS and kept on a normal diet. All experimental procedures were carried out in accordance with international rules for working with animals.
  • the drug Abisilin was administered orally in the form of an oil solution in the dose range from 60 to 400 mg / kg. Sunflower oil was used as a solvent for the preparation. In the control and in the group receiving treatment, there were from 7 to 10 animals.
  • the proposed method of using the polyactive terpenoid drug Abisilin allows to achieve the desired result, namely: inhibit the process of artificial relapse of Lewis lung carcinoma and suppress the process of metastasis of recurrent tumors (by 25-46 % in different experiments).
  • the best effect was achieved with the oral administration of the drug for 7-10 subsequent days at a dose of 100-120 mg / kg.
  • a study of the activity of Abisilin in adjuvant therapy revealed its ability to inhibit the appearance and development of spontaneous relapse of Lewis lung carcinoma.
  • the proposed oral method of using the polyactive terpenoid drug Abisilin unexpectedly made it possible to block the process of angiogenesis during the development of malignant tumors, as well as: - have an antirecurrent and antimetastatic effect;
  • the proposed tool allows you to expand the scope of the well-known polyactive terpenoid substance Abisil and pharmaceutical compositions obtained on its basis, recommended for local and external use, as agents that can increase the effectiveness of surgical treatment of tumor diseases.
  • the high therapeutic effect of the drug Abisilin is also due to the known polyactivity of its substance Abisil, namely: immunomodulating, antibacterial, wound healing, anti-inflammatory, analgesic, and, moreover, capable of stimulating the synthesis of specific endogenous humoral mediators of the nerve endings of the cerebral cortex.
  • the proposed method for stopping the development of malignant neoplasms made it possible to achieve the goal - to identify and develop a tool that allows selective inhibition or complete blocking of the neovascularization system using the anti-angiogenic antitumor drug Abisilin, free of existing disadvantages of known drugs, namely, it does not have toxic side effects with prolonged use 1 , without contraindications, not resistant sti (including apoptosis), as well as with the combined use with cytostatic drugs, not only increasing their effectiveness, but also helping to reduce their toxicity.
  • the proposed tool has several advantages over all known means of inhibiting the angiogenesis system - it has.

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Alternative & Traditional Medicine (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

Изобретение относится к медицине и химико-фармацевтической промышленности и касается средства для лечения заболеваний, связанных с нарушением регуляции ангиогенеза, в частности, к способу лечения онкологических заболеваний различного генеза, путем индукции ингибирования ангиогенеза на фоне прямого противоопухолевого, антирецидивного и антиметастатического воздействий, а также сопутствующей активации эндогенной системы апоптоза. Изобретение реализуется при использовании новой пероральной лекарственной формы - Абисилин, содержащей ингредиенты, относящиеся к классу природных терпеновых соединений (изопреноидов), полученных из хвойных деревьев семейства Рinасеае, включающей: секвитерпеноиды (3 - 6%), нейтральные дитерпеноиды (11 - 15%), дитерпеновые кислоты (23 - 28%), тритерпеновые кислоты (8 - 16%), ненасы- щенные и насыщенные жирные кислоты (0,1 - 0,3%), фенольные соединения (0,1 - 0,2%) и монотерпеноиды остальное, с содержанием борнилацетата не менее 10,0% от общего состава терпенов. Предполагается, что применение новой пероральной лекарственной формы Абисилин, для субстанции которой известны иммуномодулирующие, антибактериальные, противовоспалительные, обезболивающие, ранозаживляющие и другие фармакологически значимые действия, а также отсутствие противопоказаний, токсических эффектов и возможность комплексного использования с различными агентами, реализует новый терапевтический подход и повысит эффективность лечения онкологических и многих других заболеваний, связанных с нарушением процессов ангиогенеза.

Description

«Пpoтивooпyxoлeвaя терпеноидная фармацевтическая композиция «Aбиcилин» с ангиогенезингибирующим дeйcтвиeм»
Область техники
Изобретение относится к медицине и химико-фармацевтической промышленности, в частности к разработке противоопухолевого лекарственного средства для лечения онкологических заболеваний различного генеза, путем индукции каскада противо- опухолевых процессов: ингибирования ангиогенеза, индуцирования эндогенной системы апоптоза, торможения пролиферации опухолевых клeтoк,aктивaции антирецидивного и антиметастатического действия, при использовании не токсичного полиактивного агента, индуцирующего эти процессы - пероральной лекарственной фармацевтической композиции «Aбиcилин», созданной на основе терпенов (изопреноидов) хвойных деревьев, включающей следующие компоненты: монотерпеноиды, сескви- терпеноиды, нейтральные дитерпеноиды, дитерпеновые кислоты, тритерпеновые кислоты, фенольные соединения, ненасыщенные и ненасыщенные жирные кислоты.
Кроме того, данное изобретение может быть использовано при лечении большого количества заболеваний, связанных с нарушением регуляции ангиогенеза, прежде всего, заболеваний, вызванных неоваскуляризацией глаз - ретинопатии или возрастных дегенерации желтого пятна, а также при пролиферативных нарушениях мезанги- альных клеток - в случаях хронических и острых заболеваний почек (гломерулоне- фрит), при псориазе, развитии атером, артериальном рестенозе, диабете, ревматоидном артрите, хронической астме, эндометриозе, аутоиммунных заболеваниях, артери- альном или посттрансплатационном атеросклерозе и многих других.
Предшествующий уровень техники.
Анализ результатов использования большинства противоопухолевых лекар- ственных препаратов, относящихся к химиотерапевтическим средствам, гормональным средствам или модификаторам биологического ответа, показал, что большинство из них способствует регрессии опухолевого узла, не оказывая влияния на процесс ме- тастазирования, что является наиболее частой причиной смерти онкологических больных. Возможность ингибировать рост не только первичной опухоли, но и ее метаста- зов, обнаружена у нового типа противоопухолевых средств — антиангиогенных препаратов, впервые предложенных в 197 Ir доктором Иудой Фолкменом (Fоlkmап J. Тumоr angiogenesis theraupeutic implication N Епgl.J Меd. 1971; 285: 1182-6). Антиан- гиогенные препараты обладают целым рядом преимуществ в сравнении с традицион- ными противоопухолевыми химиопрепаратами, а именно: избирательностью действия, снижением риска побочных эффектов, развитием лекарственной устойчивости, снижением уровня токсичности.
Антиангиогенные препараты, блокируя процесс формирования кровеносных сосудов в опухоли замедляют или останавливают ее рост и предотвращают развитие ме- тастазов.
Возможностей осуществить этот процесс существует множество, так как речь идет не о прямом поражении опухолевых клеток с особым регуляторным механизмом, а о регуляции жизнедеятельности обычных эндотелиальных клеток с большим количеством клеточных мишеней - ингибирование пролиферации и/или миграции, блокада процессов дифференциации клеток, нейтрализация ангиогенных факторов роста - ти- розинкиназного рецептора CHER-I, воздействие на сосудистый эндотелиальный фактор роста (VEGF) и на систему ангиопоэтин/рецептор TIF, ингибирование ангиогенных факторов роста VEGFR-2 и VEGFR-3 и их специфических рецепторов, а также матриксных металлопротеиназ. Нормальная функциональная реактивность эндотелиальных клеток делает ее легко уязвимой еще и потому, что ее функционирование определяется также другими клеточными системами организма.
Это множество мишеней позволило выдвинуть ряд потенциальных антиангиогенных блокаторов. Однако, для известных антиангиогенных средств, отмечаются только отдельные необходимые преимущества.
Так, например, известен наиболее перспективный противоопухолевый препарат
Авастин - из фармакологической группы антитела моноклональные, с механизмом ан- тиангиогенного действия, способный снижать процесс васкуляризации и угнетать рост опухоли за счет селективного связывания с биологически активным фактором ро- ста эндотелия сосудов (VEGF) (US patent JVb 60542297; US раtепt JN° 6639055).
Однако клиническая эффективность его применения - увеличение общего периода выживания с 15,6 до 20,3 месяцев у больных с метастазирующим колоректальным раком или с 13,6 до 17,7 месяцев по сравнению с назначением только химиотерапии, побуждает к поиску более результативных средств. Тем более, что при этом имеется внушительный список противопоказаний и побочных действий, характерных для активного вещества Авастина - бевацизумаба, использованного по таким комплексным способам лечения: перфорация желудочно-кишечного тракта, кровоизлияние, артери- альная тромбоэмболия и другие.
Логически предполагалось, что ингибиторы ангиогенеза, блокирующие химические сигналы, способствующие росту новых кровеносных сосудов, могут быть эффективны при любых видах опухолей, так как эти процессы являются общими.
Результаты клинических испытаний Авастина опровергают такие теоретические предпосылки.
Известны также комбинации и композиции, которые оказывают воздействие на функцию систем VЕGР/рецептор VEGF и ангиопоэтин/рецептор TIE, способные повышать ингибирование васкуляризации и могут быть использованы для лечения рака (RU 2292221, C2 от 20.06.2001) Эти множественные соединения оказывают воздей- ствие в многоступенчатом механизме антиангиогенного действия только на единичные аспекты этого процесса, что незначительно сказывается на повышении эффективности противоопухолевого агента. Исследования воздействий на систему ангиопоэтин/рецептор Tie2 показали, что они приводят лишь к замедлению роста экспериментальных опухолей (Siеmеistеr и др. Сапсеr Rеs. 59, 3185-3191, 1999). Известны N-ариламиды антраниловой кислоты и тиоантраниловой кислоты, ин- гибирующие активность тирозинкиназного Fit- 1 рецептора VEGF, связанные с неопластическими заболеваниями и ангиогенезом. При их использовании отмечается незначительная терапевтическая эффективность.
Наиболее близким к настоящему изобретению, по спектру биологического дей- ствия и источнику получения, является противоопухолевое средство Паклитаксел (Таксол), эффективно подавляющее пролиферацию эндотелиальных клеток, т.е. являющегося ингибитором ангиогенеза (Кlаubег N. и др., Сапсеr Rеs., 57, 81-86, 1997).
Впервые Таксол был разработан на основе дитерпеноидов сложного строения — таксанов, выделенных в 1971 г. из коры тихоокеанского тиссового дерева (Тахиs brеvifоliа Nиtl). В настоящее время известны способы полного синтеза Таксола и его аналогов (USA Al, N 5488116, Jап. 1966, RU N 2196581 от 04.05.2000). Получен полусинтетический аналог Таксола — доцетаксел (Таксотер), выделеный из сырья европейского тиса {Тахиs bассаtά), а также R-тетраол, созданный с использованием при- родных терпеноидных комплексов, с применением живиц хвойных пород видов Рiпиs sibiήса и/или Рiпиs сетbrа, и/или рода Аbiеs, и/или рода Lаriх (RU 2051900 Cl, 10.01.96) на основе которых его получают путем выделения активного ингредиента из натурального продукта или полусинтетическим путем (RU 2196581, C2, 04.05.2000) с использованием фракции лабданоидодитерпеновых кислот с добавлением камфоры и воздействием на полученную смесь γ-излучением до формирования структуры R-тетраола.
Недостатками этих соединений, полученных указанными способами, является отмечаемая для всех препаратов та или иная степень токсичности (нейтропения, фи- брильная нейтропения, инфекции, рвота, диарея, стоматит, астения, неврологические (моторные) и гематологические осложнения и т.д.), а также невысокая эффективность, что заставляет онкологов искать схемы комбинации таких блокаторов ангиогенеза с другими активными препаратами для осуществления более результативной терапии.
Эти недостатки, существующих антиангиогенных терпеноидных препаратов, мо- гут быть обусловлены представленными многостадийными схемами их получения, направленными на выделение в чистом виде отдельных действующих веществ, на основе частичного или полного синтеза, что способствует появлению различных видов токсических аспектов, а также лишает их необходимой полиактивности.
Таким образом, несмотря на наличие множества мишеней, для ингибирования системы ангиогенеза и ряда созданных средств, существует необходимость в разработке антиангиогенных фармацевтических композиций, способных иметь все приму- щества, но быть свободными от имеющихся существенных недостатков, характерных для известных средств:
- не оказывать токсического действия; - не иметь противопоказаний;
- при использовании (в случае необходимости) в комбинации с цитотоксически- ми противоопухолевыми препаратами снижать их токсичность и повышать эффективность;
- иметь прямую противоопухолевую активность; - оказывать антирецидивное и антиметастатическое действие;
- не вызывать резистентности в том числе к апоптозу;
- проявлять избирательность в ингибировании системы неоваскуляризации и полностью ее блокировать в опухолях; - желательно чтобы полиактивный спектр такого антиангиогенного агента включал иммуномодулирующую, обезболивающую, антибактериальную, противовоспалительную и другие виды активности;
- быть способным индуцировать апоптоз в клетках. Это далеко не полный перечень необходимых условий для достижения нужного результата, учитывающий многие имеющиеся недостатки существующих способов и средств.
Из уровня техники неизвестны и не очевидны антиангиогенные агенты, способные одновременно оказывать такие разнообразные полиактивные воздействия при развитии опухолевых процессов.
Сущность изобретения.
Целью настоящего изобретения явился поиск и разработка средства, позволяю- щего проявлять избирательное ингибирование или полное блокирование системы нео- васкуляризации с использованием антиангиогенного противоопухолевого агента, свободного от существующих недостатков известных средств, а именно: не оказывающего токсических побочных воздействий при длительном использовании, не имеющего противопоказаний, не вызывающего резистентности (в том числе к апоптозу), а также при комплексном использовании с цитостатическими препаратами не только повышающего их эффективность, но и способствующего снижению их токсичности. Кроме того, предлагаемый способ должен иметь ряд преимуществ перед всеми известными блокаторами ангиогенеза - обладать прямым противоопухолевым действием, быть способным индуцировать систему апоптоза в клетках, оказывать антирецидивное и антиметастатическое действие, одновременно проявляя иммуномодулирующее, антибактериальное, ранозаживляющее, противовоспалительное, обезболивающее и другие виды активности.
Теоретически можно было предположить, что быть свободным от существующих недостатков, характерных для известных способов блокирования системы ангио- генеза, а кроме того, иметь еще и ряд таких необходимых преимуществ, могут комплексы природных терпеноидов, так как они многокомпонетны и полиактивны.
Авторами настоящего изобретения, в процессе проведения научных исследований, неожиданно было обнаружено, что терпеноидная субстанция Абисил, описанная в патентах (RU JTa 2054945 от 28.06.1995; RU Jfe 2198653 от 29.03.2002), обладающая, иммуномодулирующим, противовоспалительным, ранозаживляющим, обезболивающим и антибактериальным действием, а также способная осуществлять активацию специфических гуморальных медиаторов нервных окончаний коры головного мозга при патологических состояниях (таких, как рак например) с нарушением синтеза ней- ромедиатров (RU N° 2244928 от 19.02.2003) является эффективным ингибитором ан- гиогенеза, проявляя при этом цитотоксическую активность, а также апоптоз индуцированное, антирецидивное, антиметастатическое и противоопухолевое действие.
На основе терпеноидной субстанции Абисил, разработано новое средство - поли- активная терпеноидная фармацевтическая композиция Абисилин, представляющая собой пероральную лекарственную форму - 20% масляный раствор, с новым спектром фармакологического действия и новыми возможностями купирования патологических процессов, связанных с нарушением регуляции ангиогенеза, в частности, при развитии злокачественных новообразований. Полиактивность терпеноидной фармацевтической композиции Абисилин достигается благодаря тому, что в ней используется естественный сложный химический комплекс терпенов, содержащий спровоцированный (по выходу и синтезу) состав для биозащиты от стрессовых факторов у представителей семейства Рiпасеае, обогащенный идентичными монотерпеновыми соединениями. При этом было установлено, что использованный прием обогащения естественного комплекса терпенов отдельными наиболее эффективными агентами (путем прямого получения их из исходного сырья или нативной искусственной активации) не вызывает возникновения токсических эффектов у конечного продукта, как это характерно при использовании вышеперечисленных существующих средств. Высокий терапевтический эффект обусловлен не только превосходящей степенью того или иного вида активности, но синергизмом действия всех действующих веществ фармацевтической композиции Абисилин, а именно: терпенами (изопреноидами) хвойных деревьев семейства Рiпасеае, включающими:
- секвитерпеноиды (3 - 6%); - нейтральные дитерпеноиды (1 1 - 15%);
- дитерпеновые кислоты (23 - 28%);
- тритерпеновые кислоты (8 - 16%);
- ненасыщенные и насыщенные жирные кислоты (0,1 - 0,3%); - фенольные соединения (0,1 - 0,2%);
- монотерпеноиды (остальное), с содержанием борнилацетата не менее 10,0% от общего состава терпенов, растворенных в подсолнечном масле.
Кроме того, при разработке противоопухолевой терпеноидной фармацевтиче- ской композиции Абисилин с ангиогенезингибирующим действием, заложена принципиально новая предполагаемая стратегия - «зaпycк» выработки структурами мозга собственных эндогенных средств, способных блокировать возникающий дисбаланс в регуляции нормальных физиологических процессов в организме человека и животных, путем использования эндогенных терпеноидных соединений хвойных растений, синтезированных ими для самозащиты в условиях стресса.
Полученный противоопухолевый пероральный полиактивный препарат Абисилин с ангиогенезингибирующим действием исследовался на наличие общетоксического действия.
В предпочтительном варианте изобретения, исходя из полученных данных по изучению общетоксического действия, Абисилин вводят перорально в дозе 80-100 мг/ кг веса тела. (Пример 1)
Предпочтительным вариантом изобретения также является способ индукции избирательного цитотоксического действия на опухолевые клетки и способа вызывать их гибель по типу апоптоза при использовании дозы Абисилина 1000 мкг/мл, так как при этом было выявлено наибольшее количество клеток в сумме положительных по AnV+Pl-, AnV+Pl+ , AnV-Pl+, по отношению к клеточной линии Jukаt и составило 86,6%. (Пример 2)
Предпочтительным вариантом изобретения является способ индукции противоопухолевого действия препарата Абисилин при его пероральном применении в дозе 10 - 100 мг/кг тела в течение 2 - 11 дней, выявленный с использованием необходимого набора перевиваемых солидных опухолей - меланомы В- 16, Ca-755, LLC, PШM-5, Акатол и саркомы M-I. (Пример 3)
Предпочтительным вариантом, представляющим собой лечение опухолевых заболеваний различного генеза, является использование фармацевтической композиции Абисилин, которая может быть в форме раствора, таблеток, желатиновых капсул, драже, сиропов, суспензий, порошков, эмульсий, гранулятов, микросфер или наносфер, или других лекарственных форм, которые позволяют осуществлять контролируемое высвобождение активных ингредиентов препарата. Введение Абисилина совместно с известным противоопухолевым средством - Цисплатином, изученным на перевиваемых опухолях АКАТОЛ, Ca-755 и меланоме - В- 16, показало не только возможность синергичного действия при использования Абисилина, но и повышение терапевтической значимости обоих средств. Предпочтительным вариантом осуществления настоящего изобретения является способ смещения естественного баланса между проангиогенным и антиангиогенными медиаторами в сторону доминирования последних при использовании Абисилина в опытах iп vitrо и iп vivо. (Пример 4)
Кроме того, предпочтительным вариантом осуществления настоящего изобрете- ния является использование средства Абисилин для индукции антирецидивного и антиметастатического действия при его пероральном использовании в дозах 80 - 100 мг/ кг массы тела. (Пример 5)
Приведенные ниже примеры 1 - 5 демонстрируют предпочтительные варианты воплощения описанного изобретения, но не ограничивают объем изобретения.
Пример 1.
При определении острой токсичности в максимально возможной дозе 10000 мг/кг не наблюдали гибели животных, что позволяет отнести его к IV классу опасно- ста в соответствии с ГОСТ-ом 12.1.007-76.
Субхронический эксперимент проведен на нелинейных крысах-самцах и самках со средней массой 165 ± 3г и l63 ± 3г соответственно. Исследуемый препарат вводили внутри-желудочно ежедневно однократно в течение 14 дней в дозе 100, 500 и 1000 мг/ кг самцам и в дозе 100 и 1000 мг/кг самкам. По результатам проведенного эксперимента Абисилин в изученных дозах не вызвал достоверных изменений в интегральных показателях у подопытных животных (прирост массы тела, поведенческие реакции, потребление пищи, воды), клеточном составе периферической крови, выделительной, поглотительной, белоксинтезирую- щей, углеводной функции печени, уровне содержания холестерина в сыворотке крови, функциональном состоянии сердечно-сосудистой, выделительной и нервной системы. Использование Абисилина в дозе 1000 мг/кг, т.е. в 10 раз превышающую рекомендуемую терапевтическую, вызывает слабое местное раздражающее действие на слизистую желудочно-кишечного тракта только у части животных. Таким образом, проведенное изучение общетоксического действия Абисилина в исследованных дозах показало, что его использование не вызывает структурных нарушений в органах и тканях.
Пример 2.
Цитотоксическая и апоптозиндуцирующая активность Абисилина в отношении опухолевых клеток.
Исследования проводили в опытах iп vitrо на опухолевых клеточных линиях: T клеточный лимфобластозный лейкоз - Juгkаt, В клеточный лейкоз - Rаji, хронический миелогенный лейкоз - K562, миелолейкоз - U937, меланома - MeI P, рак молочной железы - T 47 D, рак яичников - SKOV-3, рак предстательной железы - PC-3.
Клеточные линии выращивали в полной питательной среде RPMI - 1640, содержащей 10% телячьей эмбриональной сыворотки, 2mM/мл глютамина, 0,1 мг/мл гента- мицина, витамины, пируват натрия, аминокислоты, при 370C и в атмосфере 5% CCh.
Для исследования использовали следующие концентрации препарата Абисилин: 300 мкг/мл, 500 мкг/мл, 800 мкг/мл, 1000 мкг/мл. При разведении препарата применяли 1% раствор ДМСО (диметилсульфоксида).
Определение цитотоксической активности Абисилина проводили колометриче- ским методом с использованием МТТ-теста. Опухолевые клетки в концентрации 5 х
104 клеток/мл засевали в 96-лyнoчныe плоскодонные планшеты (Sаrshtеd), добавляли по 20 мкл препарата в исследуемых концентрациях и инкубировали 72 ч в стандартных условиях (каждую концентрацию препарата исследовали в триплетах). В качестве контролей использовали триплет лунок без препарата и триплет лунок с добавлением 20 мкл 1% ДМСО. За 5 ч до окончания инкубации в каждую лунку вносили по 20 мкл раствора MTT (Sigmа, Сhеmiсаl Со, США). После окончания инкубации клетки осаждали центрифугированием планшетов при 1000 об/мин в течение 2-3 мин. Суперна- тант аккуратно отбирали и в каждую лунку добавляли по 200мкл ДМСО (ICN Вiоmеdiсаls, Iпс) - растворитель кристалов формазана. Клетки ресуспензировали и ин- кубировали 10 мин при 370C, после чего измеряли оптическую плотность (ОП) раствора на анализаторе иммуноферментных реакций "Униплан" AИФP-01 (Россия) при длине волны 540 нм. MTT метаболизируется жизнеспособными клетками, превращаясь в нерастворимый в воде формазан, тем самым, изменяя оптическую плотность раствора пропорционально количеству выживших клеток, Опухолевые клетки считали чувствительными к исследуемому препарату, если количество погибших клеток в культуре составляло не менее 50%. Каждый эксперимент повторяли 3 раза. Процент выживаемости определяли по формуле (среднее значение ОП в опыте/среднее значе- ние ОП в контроле) х 100%.
Выявление апоптических клеток проводилось методом двойного прижизненного окрашивания с использованием Аннексина V- FITC в комбинации с таким витальным красителем, как пропедиум иодид (PI).
Окрашенные по Аннексину V-FITC и PI клетки оценивали по следующим крите- риям: живые клетки отрицательные по Аннексину V и PI (AnV" РГ), ранние апоптиче- ские клетки положительные по Аннексину V и отрицательные по PI (AnV+PI"), поздние апоптические или некротические клетки положительные по Аннексину V и по PI (AnV+ PI+). В качестве контроля использовали опухолевые клетки, которые инку- бировали в тех же условиях, но в отсутствии препарата, а также опухолевые клетки, которые инкубировали в тех же условиях, но вместо препарата добавляли раствор 1% ДМСО.
Статистический анализ полученных данных проводили с использованием программы Stаtistiса 6.0. При сопоставлении средних величин использовали критерий значимости Стьюдента (различия считали статистически значимыми при р < 0,05).
Проведенные исследования показали, что инкубация опухолевых клеток с препаратом Абисилин выявляет его цитотоксическое действие в отношении клеточных линий Jurkаt, Rаji и PC-3. Кривые выживаемости опухолевых клеток под воздействием препарата представлены на Фиг. 1. Наиболее выраженное цитотоксическое действие препарат Абисилин проявил по отношению клеточной линии Jurkаt и составил 41,8% при использовании концентрации препарата в 1000 мг/мл. С увеличением концентрации Абисилина уменьшался процент живых опухолевых клеток и наоборот.
При исследовании препарата Абисилин в отношении опухолевых клеток U937, K562, T 47 D, SKOV-3, MeI P цитотоксического эффекта выявлено не было.
Определение апоптоза индуцированного действием препарата Абисилин с использованием метода прижизненного двойного окрашивания Ашiехiп V/РI было проведено на опухолевых клетках линий Jurkаt, Rаji, PC-3, U937 в концентрации препа- рата 300 мкг и 1000 мкг.
Установлено, что Абисилин вызывает гибель опухолевых клеток исследованных линий по типу апоптоза (Таблица 1).
Таблица 1 Результаты исследования абисилин-индуцированного апоптоза
Figure imgf000013_0001
Примечание: * p< 0,05 - достоверность различия между опытом и контролем.
Причем выявлено, что с увеличением концентрации Абисилина число апоптиче- ских клеток значительно увеличивалось. Наибольшее количество клеток в сумме положительных по AnV+ РГ, AnV+PI+, AnV+PI" был выявлено по отношению к клеточной линии Jurkаt и составило 86,6% при использовании дозы Абисилина 1000 мкг/мл. Таким образом, полученные данные свидетельствует о способности препарата Абисилин оказывать избирательное цитотоксическое действие на опухолевые клетки и вызывать их гибель по типу апоптоза, что значительно повышает возможности противоопухолевой терапии с использованием антиангиогенных препаратов.
Кроме того, данный аспект изобретения расширяет сферу использования известной полиактивной терпеноидной субстанции Абисил и фармацевтических компози- ций, полученных на ее основе, рекомендованных для местного и наружного применения, так как к установленным спектрам действия (антибактериальное, иммуномодули- рующее, противовоспалительное, ранозаживляющее, обезболивающее) добавляются неожиданно выявленные и имеющие большую терапевтическую значимость виды воздействий, а именно: способность вызывать цитотоксические эффекты на некоторых линиях опухолевых клеток, протекающих по типу апоптоза.
Это позволяет рекомендовать известную фармацевтическую композицию Абисил и предлагаемую Абисилин, в качестве агентов, способных повысить эффективность хирургического лечения опухолевых заболеваний. Пример 3.
Изучение противоопухолевого действия пероральной фармацевтической композиции Абисилин на перевиваемых опухолях. Противоопухолевое действие препарата Абисилин изучали на перевиваемых опухолях мышей, входящих в число обязательных моделей опухолей животных, которые используются при отборе новых противоопухолевых веществ: меланоме В- 16, эпидермоидной карциноме легкого Льюис (LLC), аденокарциноме молочной железы Ca-755, раке шейки матки PIЫM-5, аденокарциноме толстой кишки AKATOJl, поли- морфноклеточной саркоме M-I.
Работа выполнена на мышах - гибридах первого поколения BDF (С BI/6 х DBA/2) и F (С Dl/6 и CBA/2), мышах линий CBA/2, ВАLВ/с, DBA/2 самках и самцах массой 20-25 г., а также на самках беспородных крыс массой 200-250 г. Мышей и крыс получали из отдела лабораторных животных ГУ РОНЦ им. Н.Н.Блохина РАМН и содержали на обычном рационе питания.
Препарат Абисилин применяли перорально (реr оs) в виде масляного раствора в дозах 10, 100, 150, 500, 2500 мг/кг. В качестве растворителя препарата использовалось растительное подсолнечное масло.
Изучалась также возможность комбинированного применения терпеноидного препарата Абисилин и противоопухолевого средства, принадлежащего к группе алки- лирующих химиотерапевтических агентов широкого спектра. Для опытов использовался Цисплатин, полученный от Вristоl Меуеrs-Squibbs.
Препарат Абисилин вводили животным ежедневно перорально в течение 10 дней, а также в режимах: на 2-ой и 6-ой дни и 2-ой и 11-ый дни. Лечение начинали че- рез 48 часов после перевивки солидных опухолей (Ca-755, АКАТОЛ, меланома B-16,
LLC, PШM-5, M-I). При сочетанном лечении препарат Абисилин вводили мышам ежедневно перорально в течение 10 дней через 48 часов после перевивки опухоли в дозе 50 мг/кг, а противоопухолевый препарат Цисплатин - однократно внутрибрю- шинно (в/бр) в дозе 5 мг/кг. Наблюдение за животными с перечисленными выше опу- холями проводили до их гибели. О противоопухолевых эффектах препарата судили по торможению роста опухоли (TPO, %) подопытных животных по сравнению с контрольными.
Токсичность препаратов оценивалась по ранней гибели мышей по сравнению с гибелью контрольных животных и состоянию их внутренних органов (селезенка, печень и др.), изменению массы тела по сравнению с исходной.
Статистическую значимость противоопухолевого эффекта по отношению к не леченному контролю определялась по методу Фишера-Стьюдента. Различия между сравниваемыми группами считались статистически достоверными при р < 0,05.
Результаты проведенных исследований по изучению противоопухолевой активности препарата Абисилин на перевиваемых солидных опухолях представлены в Ta- блицe.2.
Таблица 2
Изучение противоопухолевой активности препарата Абисилин при пероральном введении на перевиваемых опухолях
Figure imgf000015_0001
Примечание: знак "±'Oзначает TPO,% при р > 0,05 по отношению к контролю, н/с - исследование не проводилось
Исследования показали, что на перевиваемой меланоме В- 16 препарат Абисилин проявил кратковременный умеренный противоопухолевый эффект только в дозах 10 и 100 мг/кг при его введении в течение 10 дней - TPO = 66% (на 13 день опыта) и 63% (на 7 день опыта, р < 0,05) соответственно, а также в дозе 2500 мг/кг при двукратном введении с интервалом в 5 дней (TPO = 62%) на 7 день опыта. В то же время препарат был не эффективен в доз 500 мг/кг при 10-ти дневном введении и в дозе 2500 мг/ кг при двукратном введении с интервалом в 10 дней.
На аденокарциноме молочной железы Ca-755 статистически значимый эффект был выявлен в дозе 10 мг/кг (TPO составило 59 % на 7 день опыта) и в дозе 100 мг/кг (TPO = 62 % на 7 день и 65 % на 10 день). В последующие дни противоопухолевая активность постепенно снижалась. На эпидермоидной карциноме легкого Льюис (LLC) противоопухолевый эффект препарата зарегистрирован в дозе 100 мг/кг и 150 мг/кг при пероральном введении на 7 день после перевивки опухоли: TPO = 56% и 57%, соответственно (р < 0,05). На этой же опухоли выявлен умеренный противоопухолевый эффект Абисилина в дозе 2500 мг/кг - TPO = 60% на 13 день опыта при двукратном введении с 10-ти дневным перерывом.
Максимальное торможение роста опухоли на ранних сроках лечения рака шейки матки (PШM-5) у мышей отмечено на 7-ые сутки опыта в дозе 150 мг/кг (TPO = 61%), т.е. после 5-ти кратного перорального введения препарата. На аденокарциноме толстой кишки мышей AKATOJI препарат Абисилин был не эффективен в дозах 50 мг/кг и ЮОмг/кг в режиме 10-ти дневного введения. Однако препарат проявлял слабый противоопухолевый эффект на 7-й день от начала лечения в дозе 500 мг/кг при 10-ти дневном введении (TPO = 26%) и на 28-й день от начала лечения в дозе 2500 мг/кг в режиме двукратного введения с 5-ти дневным интервалом (TPO = 26%).
На перевиваемой саркоме M-I крыс препарат Абисилин проявлял умеренную противоопухолевую эффективность непосредственно после пяти введений в дозе ЮОмг/кг на 7 день опыта: TPO = 54%, (р < 0,05). Наблюдался также противоопухолевый эффект препарата при двукратном введении (на 2-ой и 11 дни после перевивки опухоли) в дозе 2500 мг/кг на 7-ой и 16-й дни от начала лечения (TPO = 68% и 53%, соответственно).
В изученных дозах, у всех взятых в опыты животных с перевиваемыми опухолями, проявлений токсичности препарата Абисилин не выявлено. Терапевтическая доза препарата Абисилин в опытах при изучении противоопухолевой активности на пере- виваемых опухолях составила 100 мг/кг при ежедневном пероральном введении в течение 5-ти дней.
Противоопухолевая активность препарата Абисилин изучена также в сочетании с известным противоопухолевым препаратом Цисплатин на перевиваемой аденокарциноме толстой кишки AKATOJI, аденокарциноме молочной железы Ca-755 и мелано- ме В- 16 мышей при использовании их в дозе равной 1A терапевтической при монотерапии (Таблица 3). Таблица 3
Противоопухолевая активность препарата Абисилин в сочетании с Цисплатином на перевиваемых опухолях AKATOJI, Ca-755 и меланоме В- 16
Figure imgf000017_0001
Примечание: * - р <0,05 по отношению к Цисплатину.
Из данных Таблицы 3 видно, что аденокарцинома толстой кишки АКАТОЛ не чувствительна к препаратам Абисилин и Цисплатину при использовании их в монотерапии. В тоже время при сочетанном применении этих препаратов наблюдался терапевтический эффект в течении 21 дня (TPO = 38% - 62%). На перевиваемой аденокарциноме молочной железы Ca-755 в результате соче- танного применения препаратов Абисилин и Цисплатин получен суммированный противоопухолевый эффект в течение 15-ти дней: TPO = 91 % против 86% через 7 дней, 83% против 62% через 1 1 дней, 66% против 52% через 14 дней, 54% против 43% через 18 дней и 49% против 39% через 22 дня. Кроме того, выявлено, что сочетанное применение препаратов увеличивало продолжительность жизни животных до 20%.
Сочетанное применение препаратов Абисилин и Цисплатин на перевиваемой меланоме В- 16 мышей не показало преимущества противоопухолевого действия на этой опухоли по сравнению с использованием Цисплатина в монотерапии.
Умеренный противоопухолевый эффект препарата Абисилин, установленный на 5-ти из 6-ти взятых в исследование перевиваемых солидных опухолей, а также повышение чувствительности некоторых опухолей (АКАТОЛ, Ca-755) при совместном использовании с Цисплатином, дает основание предполагать применение Абисилина для лечения злокачественных опухолей в комбинированной химиотерапии при сочетании с другими противоопухолевыми препаратами. Таким образом, проведенные исследования показали, что полиактивный терпено- идный препарат Абисилин, при пероральном введении, обладает умеренной противоопухолевой активностью в отношении перевиваемых солидных опухолей (Ca-755, ме- ланома В- 16, LLC, PШM-5, саркома M-I).
Кроме того, установлено, что сочетанное применение препаратов Абисилин и Цисплатин в Vг терапевтической дозе повышает противоопухолевый эффект в опытах на животных с перевиваемыми опухолями.
Терапевтическая доза препарата Абисилин при ежедневном пероральном введении животным с перевиваемыми солидными опухолями составила 100 мг/кг.
Препарат Абисилин не вызывал токсических проявлений в суммарной дозе 5000 мг/кг, как при ежедневном введении в дозе 500 мг/кг в течение 10 дней, так и при двукратном введении в дозе 2500 мг/кг с интервалом в 4 и 9 дней.
Пример 4.
Антиангиогенные свойства Абисилина в опытах iп vitrо и iп vivо.
При изучении антиангиогенных свойств препарата Абисилин были использованы культуры эндотелиальных клеток мыши SVEC-4-10, трансформированная вирусом SV40 [Wаltеr-Yоhгliпg J., еt аl. CHn Сапсеr Rеs 2004;10:2179-2189].
Раствор препарата Абисилин готовился в стоковой концентрации 10 мг/мл (10% ДМСО/РВS) в лаборатории разработки лекарственных форм НИИ ЭДиТО РОНЦ им. Н.Н.Блохина РАМН в день постановки экспериментов. Препарат до необходимой в исследовании концентрации, разводили в 1% PBS.
Все эксперименты были повторены не менее 4 раз.
Антиангиогенные свойства препарата Абисилин могут быть продемонстрирован- но iп vitrо и iп vivо по следующей методике.
1. Цитотоксическое действие Абисилина на эндотелиальные клетки проведено при инкубации препарата в течение 24 часов с клетками линии SVEC-4-10, высаженных в высокой плотности.
По нашим данным Абисилин вызывает гибель эндотелиальных клеток в диапазо- не концентраций от 1 мг/мл до 0,125 мг/мл (Фиг. 2). ЛД5o составило 0,21 мг/мл.
2. Антипролиферативное действие Абисилина оценено при изучении влияния Абисилина на пролиферативную активность активированных bFGF эндотелиальных клеток SVEC4-10, высаженных в низкой плотности.
Показано, что Абисилин блокирует пролиферацию эндотелиальных клеток SVEC4-10 в диапазоне концентраций от 1 мг/мл до 0,125 мг/мл (ИK5o=O,O9 мг/мл).
В двух нецитотоксических концентрациях (0,0625 мг/мл и 0,031 мг/мл) наблюдается блокирование пролиферации эндотелиальных клеток на 20% (Фиг. 3).
3. Антимиграционное действие Абисилина была оценена при использовании ме- то да ингибирования миграции культуры эндотелиальных клеток мыши SVEC-4-10
(метод «paнeвoй поверхности))) на диапазоне доз препарата от 0,25 мг/мл до 0,031 мг/ мл (Фиг. 4 и 5).
Наблюдалось блокирование миграции эндотелиальных клеток «в paнy» на 89% при концентрации Абисилина 0,25 мг/мл. Абисилин не блокирует миграцию эндоте- лиальных клеток «в paнy» в нецитотоксических концентрациях (0,0625 мг/ мл и 0,031 мг/мл).
4. Действие Абисилина на трубочно-подобные структуры
Способность Абисилина блокировать образование трубочко-подобные структуры эндотелиальных клеток, была оценена в диапазоне доз препарата от 0,125 мг/мл до 0,015 мг/мл.
Исследование показало, что Абисилин частично блокирует образование трубоч- ко-подобных структур в концентрации 0,125 мг/мл. Наблюдаемые трубочки являются короткими, незамкнутыми и не ограничены контактами с другими трубочками. При концентрации Абисилина 0,0625, 0,031 и 0,015 мг/мл блокирования образования тру- бочко-подобных структур не наблюдалось (рис. 6).
5. Действие Абисилина на ангиогенез в имплантанте Матригеля Исследование антиангиогенного действия Абисилина iп vivо проводилось по способности ингибировать ангиогенез в имплантанте Матригеля с введенным стимулятором ангиогенеза bFGF. Абисилин вводился перорально каждый день в течение 7 дней в концентрациях 2, 1 и 0,2 мг/мл.
Исследование показало, что Абисилин в изученных концентрациях дозозависимо блокирует образование сосудов в Матригеле (Фиг. 7). Максимальное блокирование наблюдалось при концентрациях Абисилина 2 и 1 мг/мл, при концентрации 0,2 мг/мл наблюдалось частичное блокирование образования новых сосудов в имплантанте Матригеля. На гистологических срезах имплантанта Матригеля, окрашенных гематоксилином и эозином, наблюдается дозозависимое снижение количества эндотелиальных клеток и стромальных элементов при кормлении мышей Абисилином.
Таким образом показано, что препарат Абисилин обладает антиангиогенными свойствами в эксперименте iп vivо и iп vitrо. Полученные данные представляют практическую значимость, заключающуюся в возможности использования Абисилина по указанному способу в качестве агента, способного блокировать ангиогенез злокачественных опухолей, тем более, что к настоящему времени не известны и неочевидны способы получения таких полиактивных нетоксичных средств с одновременным противоопухолевым и антиангиогенным действием.
Пример 5.
Антирецидивное и антиметастатическое действие Абисилина.
При экспериментальной разработке способа ингибирования процессов метаста- зирования и развития рецидивов злокачественных новообразований использовали мышей линии C57BL6 и гибридов первого поколения BDFl, массой 20-25 г. с подкожно трансплантированной карциномой легкого Льюис. Мышей получали из отдела лабора- тории животных ГУ РОНЦ им. Н.Н.Блохина РАМН и содержали на обычном рационе питания. Все экспериментальные процедуры проводили в соответствии с международными правилами работы с животными.
Препарат Абисилин применяли перорально в виде масляного раствора в диапазоне доз от 60 до 400 мг/кг. В качестве растворителя препарата использовалось подсол- нечное масло. В контрольной и в группе, получавшей лечение было от 7 до 10 животных.
Оценку противоопухолевой, антирецидивной и антиметастатической активности препарата Абисилин проводили в соответствии с методическими рекомендациями, изложенными в "Руководстве по экспериментальному (доклиническому) изучению но- вых фармакологических веществ", 2005 г.
Статистическую обработку полученных результатов проводили по критериям Стьюдента.
Изучение влияния препарата Абисилин на частоту и сроки появления экспериментальных опухолей и динамику их развития проводилось после индукции искус - ственных рецидивов путем трансплантации I xIO5 клеток карциномы легкого Льюис под шов, наложенный на предварительно произведенный разрез кожного покрова мыши.
Пероральное применение Абисилина в дозах ЮОмг/кг и 400 мг/кг в течение 10- ти дней оказывало выраженное антирецидивное действие. Так в группе животных, по- лучавших Абисилин, после трансплантации опухолевых клеток, в дозе 400 мг/кг у 2-х из 7 животных рецидивы появились только спустя 14 дней, а в группе животных получавших Абисилин в дозе 100 мг/кг рецидивы появились только у 3 из 7 животных к 12 суткам опыта. Более того, у оставшейся части животных искусственные рецидивы не были обнаружены в течение более 90 дней наблюдения.
При изучении влияния перорального применения Абисилина (в течение 10 дней в дозах 60, 120 и 360 мг/кг) на рост и метастазирование искусственных рецидивов выявлено, что применение Абисилина не только ингибировало динамику появления и рост искусственных карциномы легкого Льюис, но и снижало в дозе 120 мг/кг процесс метастазирования рецидивных опухолей на 46% (Таблица 4).Пpи этом несмотря на то, что метастазы при забое на 33 сутки были выявлены у всех леченных и контрольных животных, средняя масса легких, пораженных метастазами была равна 241,0±36,0 мг по сравнению с 449,7± 146,1 мг у контрольных животных.
Влияние Абисилина (в дозе 60, 100 или 120 мг/кг, перорально, пятикратно, до- после-, или до-и-после хирургического удаления первичного опухолевого узла) на процесс спонтанного рецидивирования и метастазирования карциномы легких Льюис зависело от режима его применения (Таблица 5).
В случае применения препарата в дозе 60 мг/кг наилучший эффект получен в режиме послеоперационной терапии (режим адъювантной терапии). К 27 суткам опыта рецидивы возникли у 3/7 мышей данной группы, по сравнению 6/7 контрольной группы. Применение предоперационного, а также комбинированного (пред- и послеоперационного) режима было менее эффективным. В то же время, применение Абисилина в дозе 120 мг/кг оказалось наиболее эффективным в предоперационном режиме. При забое животных на 35 сутки опыта для оценки влияния проведенной терапии на процесс метастазирования карциномы Льюис, получены данные, свидетельствующие о том, что при использовании Абисилина в дозе 60 мг/кг также наиболее эффективен режим послеоперационной терапии (режим адъювантной терапии). У животных, получавших Абисилин в соответствии с этим режимом (перорально, в дозе бОмг/кг, в течение 5 дней после удаления первичной опухоли), отмечено торможение процесса метастазирования на 45% (средняя масса легких, пораженная метастазами у леченных животных - 393,3 ±160,0 мг, по сравнению с 709,4±237,3 мг у контрольных).
Figure imgf000022_0001
Таблица 4
Влияние Абисилина на динамику появления рост и метастазирование искусственных рецидивов карциномы легких Льюис у мышей C57B1/6
о
Figure imgf000022_0002
Примечание: * - соотношение числа животных с рецидивами к общему числу животных в группе; + - меньше 10, ++ - от 10 до 30, +++ - больше 30 метастазов.
о СЛ о сл Ol
Таблица 5
ЬJ
Figure imgf000023_0001
Примечание: * - соотношение числа животных с рецидивами к общему числу животных в группе. + - меньше 10, ++ - от 10 до 30 и +++ - больше 30 метастазов
Как следует из полученных данных, предложенный способ использования полиактивного терпеноидного препарата Абисилин, при заданном режиме и пероральной лекарственной форме, позволяет достичь нужного результата, а именно: ингибировать процесс искусственного рецидивирования карциномы легкого Льюис и подавлять про- цесс метастазирования рецидивных опухолей (на 25-46% в разных экспериментах). Наилучший эффект достигался при пероральном применении препарата в течение 7-10 последующих дней в дозе 100-120 мг/кг. Изучение активности Абисилина в режиме адьювантной терапии (на фоне хирургического удаления первичной опухоли) выявило его способность ингибировать появление и развитие спонтанных рецидивов карциномы легкого Льюис, Наиболее эффективным оказалось применение препарата в дозе 60 мг/кг в течение 5-ти дней после хирургического удаления первичной опухоли. Применение препарата в дозе 120 мг/кг более эффективным было в предоперационном режиме. Послеоперационное пятикратное применение Абисилина на 45% ингибировало процесс метастазирования карциномы легкого Льюис на фоне хирурги- ческого удаления первичного опухолевого узла.
Таким образом, предложенный пероральный способ использования полиактивного терпеноидного препарата Абисилин, по заданным схемам и режимам, неожиданно позволил получить возможность блокировать процесс ангиогенеза при развитии злокачественных образований, а также: - оказывать антирецидивное и антиметастатическое действие;
- не иметь противопоказаний;
- проявлять цитотоксическое и апоптоз индуцированное действие;
- иметь противоопухолевую активность на необходимых штаммах перевиваемых опухолей мышей; - при использовании в комбинации с цитотоксическими противоопухолевыми препаратами (цисплатина) снижать их токсичность и повышать терапевтическую эффективность;
- не вызывать резистентности;
- проявлять избирательность в ингибировании системы неоваскуляризации; - не оказывать токсического действия при пероральном использовании препарата в дозах, превышающих терапевтическую в десятки раз.
Кроме того, предлагаемое средство позволяет расширить сферу использования известной полиактивной терпеноидной субстанции Абисил и фармацевтических композиций, полученных на ее основе, рекомендованных для местного и наружного применения, в качестве агентов, способных повысить эффективность хирургического лечения опухолевых заболеваний.
Высокий терапевтический эффект препарата Абисилин обусловлен также из- вестной полиактивностью его субстанции Абисил, а именно: иммуномодулирующей, антибактериальной, ранозаживляющей, противовоспалительной, обезболивающей, кроме того, способной осуществлять стимуляцию синтеза специфических эндогенных гуморальных медиаторов нервных окончаний коры главного мозга.
Предлагаемый метод купирования развития злокачественных новообразований дал возможность осуществить поставленную цель - выявить и разработать средство, позволяющее проявлять избирательное ингибирование или полное блокирование системы неоваскуляризации с использованием антиангиогенного противоопухолевого препарата Абисилин, свободного от существующих недостатков известных средств, а именно: не оказывающего токсических побочных воздействий при длительном ис1 пользовании, не имеющего противопоказаний, не вызывающего резистентности (в том числе к апоптозу), а также при комплексном использовании с цитостатическими препаратами не только повышающего их эффективность, но и способствующего снижению их токсичности. Кроме того, предлагаемое средство имеет ряд преимуществ перед всеми известными средствами ингибирования системы ангиогенеза - обладает. прямым противоопухолевым действием, способен индуцировать систему апоптоза в клетках, оказывать антирецидивное и антиметастатическое действие, одновременно, при этом, проявляя иммуномодулирующее, антибактериальное, ранозаживляющее, противовоспалительное, обезболивающее и другие виды воздействия.

Claims

Формула изобретения.
1. Средство для лечения, а также предупреждения опухолевых и других заболеваний при которых ингибирование системы анrиогенеза является эффективным терапевтическим действием, с использованием полиактивной фармацевтической композиции Абисилин, активные ингредиенты которой являются терпенами (изопре- ноидами) хвойных деревьев, семейства Рiпасеае, включающими следующие компоненты в массовой доле %, а именно:
- секвитерпеноиды (3 - 6%); - нейтральные дитерпеноиды (1 1 - 15%);
- дитерпеновые кислоты (23 - 28%);
- тритерпеновые кислоты (8 - 16%);
- ненасыщенные и насыщенные жирные кислоты (0,1 - 0,3%);
- фенольные соединения (0,1 - 0,2%); - монотерпеноиды (остальное), с содержанием борнилацетата не менее 10,0% от общего состава терпенов, взятых в определенных соотношениях и фармацевтически приемлемый носитель и/или разбавитель, отличающийся тем, что композицию вводят млекопитающим, в том числе человеку, пероральным путем в эффективном количестве.
2. Средство по п.l, предназначенные для лечения опухолевых заболеваний различного генеза, представленное фармацевтической композицией Абисилин, которая может находиться в форме раствора, таблеток, желатиновых капсул, драже, сиропов, суспензий, порошков, эмульсий, гранулятов, микросфер или наносфер, или других лекарственных форм, которые позволяют осуществлять контролируемое высвобождение активных ингредиентов препарата.
3. Средство по п.l, 2, в котором для индукции процессов ингибирования системы анrиогенеза, а также прямого противоопухолевого, антирецидивного и антиметастатических воздействий и с сопутствующей активацией эндогенной системы апоптоза, при развитии опухолевых заболеваний млекопитающих, в том числе человека, фармацев- тическую композицию вводят ежесуточно перорально в дозе 80 - 100 мг/кг массы тела.
4. Средство по п.l, 2, 3 в котором фармацевтическую композицию Абисилин используют с другими фармацевтически активными соединениями (антибиотиками, ци- тостатиками и т.д.)
PCT/RU2008/000147 2008-03-14 2008-03-14 Пpoтивooпyxoлeвaя терпеноидная фармацевтическая композиция «aбиcилин» с ангиогенезингибирующим дeйcтвиeм Ceased WO2009113902A1 (ru)

Priority Applications (9)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP08873343A EP2275112A4 (en) 2008-03-14 2008-03-14 PHARMACEUTICAL ANTITUMOROUS TERPENOID COMPOSITION ABISILINI WITH ANGIOGENIC INHIBITORY EFFECT
CA2727792A CA2727792C (en) 2008-03-14 2008-03-14 Antitumoral terpenoid pharmaceutical composition abisilin exhibiting angiogenesis-inhibiting action
EA201001289A EA017659B1 (ru) 2008-03-14 2008-03-14 Противоопухолевая терпеноидная фармацевтическая композиция с ангиогенезингибирующим действием
CN2008801288610A CN102036672A (zh) 2008-03-14 2008-03-14 呈现血管发生抑制作用的抗肿瘤类萜烯药物组合物abisilin
JP2010550631A JP2011514354A (ja) 2008-03-14 2008-03-14 血管新生阻害作用を示す抗腫瘍テルペノイド医薬組成物アビシリン
PCT/RU2008/000147 WO2009113902A1 (ru) 2008-03-14 2008-03-14 Пpoтивooпyxoлeвaя терпеноидная фармацевтическая композиция «aбиcилин» с ангиогенезингибирующим дeйcтвиeм
KR1020107022802A KR20110015516A (ko) 2008-03-14 2008-03-14 혈관신생­억제 작용을 갖는 항종양 테르페노이드 약학적 조성물 ‘아비실린’
US12/922,338 US20110165271A1 (en) 2008-03-14 2008-03-14 Antitumoral terpenoid pharmaceutical composition 'abisilin' exhibiting angiogenesis-inhibiting action
IL208092A IL208092A (en) 2008-03-14 2010-09-12 Pharmacist's preparation ready for extraction of conifers that are enriched with the stress-rich monotransmitter

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PCT/RU2008/000147 WO2009113902A1 (ru) 2008-03-14 2008-03-14 Пpoтивooпyxoлeвaя терпеноидная фармацевтическая композиция «aбиcилин» с ангиогенезингибирующим дeйcтвиeм

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2009113902A1 true WO2009113902A1 (ru) 2009-09-17

Family

ID=41065440

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/RU2008/000147 Ceased WO2009113902A1 (ru) 2008-03-14 2008-03-14 Пpoтивooпyxoлeвaя терпеноидная фармацевтическая композиция «aбиcилин» с ангиогенезингибирующим дeйcтвиeм

Country Status (9)

Country Link
US (1) US20110165271A1 (ru)
EP (1) EP2275112A4 (ru)
JP (1) JP2011514354A (ru)
KR (1) KR20110015516A (ru)
CN (1) CN102036672A (ru)
CA (1) CA2727792C (ru)
EA (1) EA017659B1 (ru)
IL (1) IL208092A (ru)
WO (1) WO2009113902A1 (ru)

Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102657660A (zh) * 2012-04-28 2012-09-12 上海交通大学医学院 三萜类化合物在制备抑制血管生成药物中的应用
WO2013176564A1 (ru) * 2012-05-25 2013-11-28 Общество С Ограниченной Ответственностью "Инитиум-Фарм" Терпеноидное средство для профилактики и лечения атеросклероза и коррекции метаболического синдрома
RU2634253C1 (ru) * 2016-12-22 2017-10-24 Федеральное государственное бюджетное учреждение "Российский онкологический научный центр имени Н.Н. Блохина" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ "РОНЦ им. Н.Н. Блохина" Минздрава России) Антиангиогенное лекарственное средство
RU2747147C1 (ru) * 2020-06-22 2021-04-28 Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр онкологии имени Н.Н. Блохина" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ "НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина" Минздрава России) Фармацевтическая композиция, проявляющая цитотоксичность в отношении клеток карциномы толстой кишки человека
RU2765414C1 (ru) * 2020-09-30 2022-01-31 Ооо "Инитиум-Фарм" Способ стимуляции митофагии и аутофагии в клетках, способ стимуляции аутофагии или митофагии для лечения состояния, ассоциированного с митохондриальной дисфункцией

Citations (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2051900C1 (ru) 1991-02-15 1996-01-10 Санкио Компани Лимитед 5-амино-1-гидроксиметилциклопентан-1,2,3,4-тетраол, 2-амино-4-гидроксиметил-3a,5,6,6a-тетрагидро-4н-циклопент-[d]-оксазол-4,5,6-триол, их фармацевтически приемлемые соли и способы их получения
US5488116A (en) 1992-03-30 1996-01-30 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Total synthesis of taxol and analogues thereof
RU2054945C1 (ru) 1995-06-28 1996-02-27 Нина Максимовна Пинигина Средство "абисил-1", обладающее противовоспалительной, антибактериальной и ранозаживляющей активностью
US6054297A (en) 1991-06-14 2000-04-25 Genentech, Inc. Humanized antibodies and methods for making them
RU2196581C2 (ru) 2000-05-04 2003-01-20 Колесников Андрей Григорьевич Способ получения r-тетраола, обладающего противоопухолевой активностью
RU2198653C1 (ru) 2002-03-29 2003-02-20 Пинигина Нина Максимовна Полиактивные ректальные или вагинальные суппозитории на основе природных терпенов, обогащенных монотерпеноидами, для лечения и/или профилактики урологических, проктологических или гинекологических заболеваний
US6639055B1 (en) 1991-06-14 2003-10-28 Genentech, Inc. Method for making humanized antibodies
RU2244928C2 (ru) 2003-02-19 2005-01-20 Пинигина Нина Максимовна Эндогенная фармацевтическая композиция, полученная на основе целенаправленной активации гуморальных медиаторов нервных окончаний коры головного мозга
RU2292221C2 (ru) 2000-06-23 2007-01-27 Шеринг Акциенгезельшафт Комбинации и композиции, которые оказывают воздействие на функцию систем vegf/ рецептор vegf и ангиопоэтин/рецептор tie (ii), и их применение
RU2338547C1 (ru) * 2007-02-16 2008-11-20 Людмила Анатольевна Лацерус Полиактивная терпеноидная субстанция абисил-2, фармацевтическая композиция на ее основе и способы ее применения

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20060228426A1 (en) * 2002-08-30 2006-10-12 Benoit Cyr Plant extracts for treatment of angiogenesis and metastasis

Patent Citations (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2051900C1 (ru) 1991-02-15 1996-01-10 Санкио Компани Лимитед 5-амино-1-гидроксиметилциклопентан-1,2,3,4-тетраол, 2-амино-4-гидроксиметил-3a,5,6,6a-тетрагидро-4н-циклопент-[d]-оксазол-4,5,6-триол, их фармацевтически приемлемые соли и способы их получения
US6054297A (en) 1991-06-14 2000-04-25 Genentech, Inc. Humanized antibodies and methods for making them
US6639055B1 (en) 1991-06-14 2003-10-28 Genentech, Inc. Method for making humanized antibodies
US5488116A (en) 1992-03-30 1996-01-30 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Total synthesis of taxol and analogues thereof
RU2054945C1 (ru) 1995-06-28 1996-02-27 Нина Максимовна Пинигина Средство "абисил-1", обладающее противовоспалительной, антибактериальной и ранозаживляющей активностью
RU2196581C2 (ru) 2000-05-04 2003-01-20 Колесников Андрей Григорьевич Способ получения r-тетраола, обладающего противоопухолевой активностью
RU2292221C2 (ru) 2000-06-23 2007-01-27 Шеринг Акциенгезельшафт Комбинации и композиции, которые оказывают воздействие на функцию систем vegf/ рецептор vegf и ангиопоэтин/рецептор tie (ii), и их применение
RU2198653C1 (ru) 2002-03-29 2003-02-20 Пинигина Нина Максимовна Полиактивные ректальные или вагинальные суппозитории на основе природных терпенов, обогащенных монотерпеноидами, для лечения и/или профилактики урологических, проктологических или гинекологических заболеваний
RU2244928C2 (ru) 2003-02-19 2005-01-20 Пинигина Нина Максимовна Эндогенная фармацевтическая композиция, полученная на основе целенаправленной активации гуморальных медиаторов нервных окончаний коры головного мозга
RU2338547C1 (ru) * 2007-02-16 2008-11-20 Людмила Анатольевна Лацерус Полиактивная терпеноидная субстанция абисил-2, фармацевтическая композиция на ее основе и способы ее применения

Non-Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
"Dosage Forms Laboratory of the Institute for Experimental Tumor Diagnostics and Therapy, Russian Oncologic Center", RUSSIAN ACADEMY OF MEDICAL SCIENCES
"Manual for Experimental (Preclinical) Study of Novel Pharmacological Substances", 2005
FOLKMAN, J.: "N. Engl. J. Med.", vol. 285, 1971, article "Tumor Angiogenesis Therapeutic Implication", pages: 1182 - 6
KLAUBER, N. ET AL., CANCER RES., vol. 57, 1997, pages 81 - 86
SHI YP ET AL.: "New terpenoid constituents from Eunicea pinta.", J NAT PROD., vol. 65, no. 9, September 2002 (2002-09-01), pages 1232 - 1241, XP008144021, Retrieved from the Internet <URL:http://www.Entrez-PubMed> [retrieved on 20081117] *
SIEMEISTER ET AL., CANCER RES., vol. 59, 1999, pages 3185 - 3191
WALTER-YOHRLING, J. ET AL., CLIN. CANCER RES., vol. 10, 2004, pages 2179 - 2189

Also Published As

Publication number Publication date
EP2275112A1 (en) 2011-01-19
EP2275112A4 (en) 2011-10-12
IL208092A (en) 2015-07-30
IL208092A0 (en) 2010-12-30
CA2727792A1 (en) 2009-09-17
CN102036672A (zh) 2011-04-27
CA2727792C (en) 2017-07-25
KR20110015516A (ko) 2011-02-16
EA201001289A1 (ru) 2011-04-29
US20110165271A1 (en) 2011-07-07
JP2011514354A (ja) 2011-05-06
EA017659B1 (ru) 2013-02-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2126679C1 (ru) Способ ингибирования и профилактики возникновения сосудистых явлений бета-каротином и витамином е, фармацевтическая композиция, состоящая из бета-каротина и витамина е, фармацевтическая композиция, состоящая из бета-каротина и аспирина
Zhang et al. Toosendanin and isotoosendanin suppress triple-negative breast cancer growth via inducing necrosis, apoptosis and autophagy
US20090047371A1 (en) Pharmaceutical composition comprising curcumin and resveratrol and uses thereof in medical field
WO2009113902A1 (ru) Пpoтивooпyxoлeвaя терпеноидная фармацевтическая композиция «aбиcилин» с ангиогенезингибирующим дeйcтвиeм
US8092845B2 (en) Anti-inflammatory extract and agent and method for the production thereof
US20050288378A1 (en) Cancer chemotherapy
JP6234553B2 (ja) 抗癌剤および副作用軽減剤
US20040006048A1 (en) Combination of lecithin with ascorbic acid
WO2024198506A1 (zh) 一种增加带内氧桥药物药效的方法及其应用
AU2020255063B2 (en) Combined use of A-nor-5α androstane compound drug and anticancer drug
JP2002527472A (ja) 消化不良の処置
Papakotsi et al. Alaska’s Flora as a Treatment for Cancer
Rowntree et al. Neoplasms in albino rats resulting from the feeding of crude wheat germ oil made by ether-extraction
Gol’dberg et al. Effects of extracts from medicinal plants on the development of metastatic process
KR102867054B1 (ko) 으름 추출물을 포함하는 만성통증 완화 또는 치료용 조성물
JP2014224148A (ja) 血管新生阻害作用を示す抗腫瘍テルペノイド医薬組成物アビシリン
US20060110467A1 (en) Cancer chemotherapy
US20240216319A1 (en) Tumor suppressant and pain relief composition for oral administration
RU2328282C1 (ru) Фармацевтическая композиция для профилактики образования метастазов и повышения чувствительности (сенсибилизации) опухолей к химиотерапевтическим препаратам
Alhawiti Cytotoxicity, Toxicity and Anticancer Activity of Manuka Honey, Saudi's Honey and Peganum harmala Plant Against Cancer Cells
EP3427740B1 (fr) Nouveau traitement du cancer par une combinaison d&#39;un dérivé phosphorique d&#39;inositol et de chlorure de magnésium
KR101742023B1 (ko) 보르테조밉을 유효성분으로 함유하는 담석증의 예방 또는 치료용 약학적 조성물
TW202005664A (zh) 含蓮蓬萃取物之組合物及其用於治療頭頸癌症之用途
KR20070058449A (ko) 상어 고기 추출물 및 버섯 추출물을 함유하는 항암 조성물
CN1980675A (zh) 一种治疗癌症的制剂

Legal Events

Date Code Title Description
WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 200880128861.0

Country of ref document: CN

121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 08873343

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 201001289

Country of ref document: EA

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2010550631

Country of ref document: JP

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2008873343

Country of ref document: EP

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 20107022802

Country of ref document: KR

Kind code of ref document: A

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2727792

Country of ref document: CA