WO2009136112A1 - Procede de diagnostic d'une hypertension arterielle pulmonaire - Google Patents

Procede de diagnostic d'une hypertension arterielle pulmonaire Download PDF

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WO2009136112A1
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Luc Mouthon
Marc Humbert
Mathieu Tamby
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    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/56—Staging of a disease; Further complications associated with the disease

Definitions

  • the invention relates to the diagnosis and monitoring of pulmonary arterial hypertension.
  • Pulmonary Arterial Hypertension is a rare condition that causes right heart decompensation that can lead to death.
  • PAH is defined by the demonstration by right catheterization of an average pulmonary arterial pressure greater than or equal to 25mmHg at rest or 30mmHg at exercise in the absence of elevation of pulmonary capillary pressure (Rubin, 1997). ).
  • the occurrence of PAH is the result of chronic obstruction of small pulmonary arteries secondary to the proliferation of endothelial cells, vascular smooth muscle cells and fibroblasts (Dorfmuller et al, 2003).
  • endothelial cells vascular smooth muscle cells and fibroblasts
  • PAH can occur in the development of pathologies with autoimmune component connectivities, in particular systemic scleroderma (Hachulla et al, 2005), Sharp syndrome and systemic lupus erythematosus. Moreover, during idiopathic PAH, stigmata of autoimmunity, ie anti-nuclear antibodies or anti-thyroglobulin antibodies, are found from time to time.
  • the invention now provides an in vitro method of detecting a PAH, or a risk of developing PAH, comprising determining the presence and / or amount of anti-Tenascin C (TN-C) antibodies. in a biological sample from a patient, the presence of anti-TN-C antibody is indicative of a PAH or a risk of developing a PAH.
  • TN-C anti-Tenascin C
  • the presence of anti-Tenascin C antibodies in the biological sample is compared with a control value, the presence of anti-Tenascin C antibodies in an amount greater than the control value being indicative of a PAH or a risk of developing a PAH.
  • Another subject of the invention is an in vitro method of prognosis or monitoring of a PAH, comprising determining the presence and / or amount of anti-TN-C antibodies in a biological sample from a at different times, the increase in the amount of anti-TN-C antibodies over time is indicative of worsening of PAH.
  • Another subject of the invention is an in vitro method for evaluating the efficacy of a treatment with a PAH, comprising determining the presence and / or amount of anti-TN-C antibodies in a sample. from a patient, at different times before, during or after treatment, the decrease in the amount of anti-TN-C antibodies over time is indicative of an improvement in PAH.
  • TN-C is expressed in and around the blood vessels in the fetal lung (Rettig et al, 1994), but is no longer expressed in normal adult pulmonary arteries (Jones et al, 1996).
  • the loss of signaling via BMPRII which causes a defect in regulatory T cells that may predispose to the occurrence of PAH (Nicolls et al, 2005)
  • BMPRII can also induce the expression of TN-C in vivo and on vascular cells in culture (Ihida-Stansbury et al, 2006).
  • the inventors have thus been able to demonstrate a correlation between the occurrence of PAH and the production of anti-TN-C antibodies. On this basis, they propose an in vitro method for diagnosing or prognosing a PAH, or a risk of developing PAH, including determining the presence and / or amount of anti-TNC antibodies. in a biological sample from a patient.
  • the anti-TN-C antibodies detected are preferably immunoglobulins G (IgG).
  • Tenascin C is a glycoprotein of the extracellular matrix. It is also known as hexabrachion or cytotactin. A sequence of human TN-C is reported in the appendix (SEQ ID No. 1).
  • the term "biological sample” refers to any biological sample from a patient. Sample samples include body fluids, tissue biopsies. Preferably, the sample may be blood, serum, saliva, urine, sperm. More preferably, the biological sample is a sample of blood or serum.
  • patient refers to any subject that can be tested. Preferably it is a human, but the term includes any other mammal, such as dogs, cats, rodents, cattle, horses, monkeys etc.
  • the patient can be tested regardless of gender or age.
  • the patient may be at risk, asymptomatic, or have early or advanced signs of PAH.
  • the patient may be a subject predisposed to developing PAH, particularly a subject carrying one or more mutations in the gene encoding BMPRII.
  • diagnosis means the identification of the pathology or the evaluation of the state of severity of the pathology.
  • prognosis means the assessment of the risk of aggravation and its consequences.
  • control value refers to a basal value corresponding to the average of the values obtained with the biological sample of healthy subjects, not affected by PAH. or an illness that could lead to PAH. It can be a reference statistical value.
  • an amount of anti-TN-C antibody "greater than the control value” generally means a statistically significant increase, for example at least two standard deviations above the average optical densities of IgG reactivities of all subjects. healthy.
  • capture antigen an antigen, preferably fixed on a solid phase, which is able to retain the anti-TN-C antibody present in a biological sample by affine binding.
  • the capture antigen can be labeled.
  • labeled refers both to direct labeling (via enzymes, radioisotopes, fluorochromes, luminescent compounds, etc.) to indirect labeling (for example, by means of antibodies themselves). same labeled directly or with reagents of a labeled "affinity pair", such as, but not limited to, the labeled avidin-biotin pair, etc.).
  • the biological sample is preferably a serum sample, diluted to l / 100th, or more, for example at l / 200th or l / 400th.
  • the amount of anti-TN-C antibody can be determined by an immunoassay.
  • the biological sample may be optionally treated in a previous step, or directly in the presence of at least one capture antigen.
  • the process according to the invention can be carried out according to various formats well known to those skilled in the art: in the solid phase or in the homogeneous phase; in a time or in two stages; in competitive method, by way of non-limiting examples.
  • the capture antigen is immobilized on a solid phase.
  • solid phase microplates, in particular polystyrene microplates, such as those sold by the company Nunc, Denmark, may be used. It is also possible to use solid particles or beads, paramagnetic beads, such as those supplied by Dynal or Merck-Eurolab (France) (under the trademark EstaporTM), or also test tubes made of polystyrene or polypropylene, etc.
  • ELISA assays can be used to reveal the presence of the antigen-antibody complexes formed.
  • the method of the invention comprises bringing a biological sample into contact with a protein comprising amino acid fragment 181 to 290 of the human TN-C sequence as represented in SEQ ID NO. : 1.
  • the capture antigen which may be a protein comprising amino acid fragment 181 to 290 of the human TN-C sequence, may be coupled to a glutathione S transferase (GST), before being deposited on a microplate.
  • GST glutathione S transferase
  • Serum samples to be tested previously diluted to 1 / 100th, are incubated on the microplate.
  • labeled human anti-Fc ⁇ antibodies for example with alkaline phosphatase
  • the complexes being revealed (for example by adding a phosphatase substrate whose cleavage can be detected by reading the absorbance ).
  • Targeted patients are those likely to develop PAH.
  • the patient may be a patient who has connectivity, such as systemic sclerosis, Sharp syndrome (which is mixed connectivity), systemic lupus erythematosus.
  • the patient may also have idiopathic or familial PAH.
  • any patient suffering from pulmonary vascular disease may be advantageously subjected to the method of detecting a PAH as defined in the invention.
  • the detected PAH may also be portopulmonary hypertension (that is to say a PAH associated with portal hypertension), or be associated with congenital heart disease, or with a virus infection.
  • human immunodeficiency (HIV) or post-embolic pulmonary hypertension, complicating the course of chronic obstructive bronchitis or cyanotic heart disease.
  • Other targeted patients are those exposed to certain appetite suppressants such as fenfluramine, the prescription of which may contribute to the occurrence of PAH.
  • Other people likely to benefit from this type of test are those carrying a mutation in the gene encoding BMPRII and which optionally do not have detectable PAH on ultrasound, so as to detect individuals likely to develop a PAH later. .
  • Another subject of the invention is an in vitro method for evaluating the efficacy of a treatment with a PAH, comprising determining the presence and / or amount of anti-TN-C antibodies in a sample. from a patient, at different times before, during or after treatment, the decrease in the amount of anti-TN-C antibodies over time is indicative of an improvement in PAH.
  • the current standard therapy for PAH combines symptomatic treatment with vasodilator therapy.
  • Symptomatic treatment combines anti-coagulants, oxygen therapy and diuretics.
  • the vasodilator treatment is based on the following molecules: calcium channel blockers, intravenously prescribed intravenous epoprostenol (prostacyclin), endothelin receptor inhibitors, selective or not, especially bosentan, sytaxentan and ambrysentan , phosphodiesterase type 5 inhibitors, in particular sildenafil, all of these drugs being administered orally, and inhaled iloprost, prostacyclin analogue administered by the inhaled route.
  • These treatments may possibly be combined.
  • a lung transplant or heart-lungs can be proposed.
  • the following figures and examples illustrate the invention without limiting its scope.
  • Figure 1 is a graph showing the detection of anti-TN-C antibodies by ELISA assay.
  • Serum IgG in patients with idiopathic PAH, patients with systemic scleroderma, and healthy subjects matched for sex and age were tested for a recombinant TNC fragment at a dilution of l / 100th.
  • the lower and upper limits of the dotted area represent the thresholds defined by two and three times the standard deviation above the average of the optical densities obtained in healthy subjects.
  • Significant differences between groups of patients and healthy subjects are estimated using a Mann Whitney rank test and are indicated by: *: p ⁇ 0.01 **: p ⁇ 0.001.
  • Figure 2 shows survival curves according to Kaplan and Meier as a function of the presence or absence of anti-TN-C antibodies. On the abscissa, time in months; on the ordinate, cumulative survival as a percentage.
  • PAH was detected by transthoracic echocardiographic ultrasound detection of systolic pulmonary arterial pressure greater than 40mmHg. In all cases, PAH was confirmed by performing a straight catheterization and the detection of an average pulmonary arterial pressure greater than or equal to 25 mmHg at rest and 30 mmHg during exercise. By convention, the PAH was qualified as idiopathic if the patient showed no associated pathology, PAH then being able to correspond to a PAH sporadic, familial or associated with exposure to fenfluramine.
  • TN-C Tenascin C
  • Abnova Corporation Abnova Corporation, Taipei City, Taiwan
  • the antigen used consisted of fragment 181 to 290 of TN-C (SEQ ID No. 1), coupled to a GST motif.
  • TN-C was diluted in bicarbonate buffer and plated on 96-well plates (Maxisorb, NalgeNunc Int Rochester, NY, USA) at a final concentration of 4 ⁇ g / mL at 4 ° C.
  • Sera from patients and healthy subjects were diluted to l / 100th in phosphate buffer (PBS) with 1% albumin and incubated one hour at 37 ° C.
  • PBS phosphate buffer
  • the IgG reactivities of patients with idiopathic PAH, patients with systemic scleroderma with or without PAH, and subjects with TN-C control were studied by ELISA. Using a threshold defined by two standard deviations above the average optical densities of IgG reactivities of all healthy subjects, 36/66 (54.5%) patients with idiopathic PAH and 2/25 (8% ) scleroderma patients had anti-TNC IgG. None of the healthy subjects had anti-TNC IgG ( Figure 1).

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Abstract

L'invention concerne un procédé in vitro de détection d'une hypertension artérielle pulmonaire (HTAP), ou d'un risque de développer une HTAP, comprenant la détermination de la présence et/ou de la quantité d'anticorps anti-Ténascine C dans un échantillon biologique provenant d'un patient.

Description

Procédé de diagnostic d'une hypertension artérielle pulmonaire
L'invention concerne le diagnostic et le suivi d'une hypertension artérielle pulmonaire.
Etat de la technique :
L'hypertension artérielle pulmonaire (HTAP) est une pathologie rare responsable de la survenue d'une décompensation cardiaque droite pouvant aboutir au décès. L'HTAP est définie par la mise en évidence par cathétérisme droit d'une pression artérielle pulmonaire moyenne supérieure ou égale à 25mmHg au repos ou à 30mmHg à l'effort en l'absence d'élévation de la pression capillaire pulmonaire (Rubin, 1997). La survenue d'une HTAP est la conséquence d'une obstruction chronique des petites artères pulmonaires secondaire à la prolifération de cellules endothéliales, de cellules musculaires lisses vasculaires et de fîbroblastes (Dorfmuller et al, 2003). En particulier, au cours de l'HTAP sévère, il se forme une couche de myofïbroblastes et de matrice extra-cellulaire qui se localise entre l'endothélium et la limitante élastique interne, appelée neo-intima, qui est caractéristique de cette affection.
L'HTAP peut survenir dans l'évolution de pathologies à composante auto-immune que sont les connectivités, en particulier la sclérodermie systémique (Hachulla et al, 2005), le syndrome de Sharp et le lupus érythémateux systémique. De plus, au cours de l'HTAP idiopathique, on trouve de temps à autres des stigmates d'auto-immunité, à savoir des anticorps anti-nucléaires ou des anticorps anti-thyroglobuline.
La présence d'anticorps anti-cellules endothéliales (Tamby et al, 2005) et d'anticorps anti- fîbroblastes (Tamby et al, 2006) a été rapportée au cours de l'HTAP idiopathique ou associée à la sclérodermie systémique. Cependant la valeur prédictive de ces anticorps dans la survenue de l'HTAP n'a pas été étudiée et le rôle potentiel des phénomènes auto- immuns dans la pathogénie de l'HTAP idiopathique reste incertain (Mouthon et al, 2005). Dans la plupart des cas, l'HTAP est dépistée lorsque le patient présente une dyspnée de stade III ou IV. Lorsque le patient est suivi pour une maladie chronique comme la sclérodermie systémique, l'HTAP est dépistée par une échographie cardiaque annuelle. Cependant, un test simple et fiable de dépistage d'une HTAP fait toujours défaut, et serait précieux pour un diagnostic le plus précoce possible, qui permettrait de mettre en place rapidement des stratégies thérapeutiques pour améliorer l'état du patient et ses chances de survie. Résumé de l'invention :
L'invention fournit maintenant un procédé in vitro de détection d'une HTAP, ou d'un risque de développer une HTAP, comprenant la détermination de la présence et/ou de la quantité d'anticorps anti-Ténascine C (TN-C) dans un échantillon biologique provenant d'un patient, la présence d'anticorps anti-TN-C étant indicatrice d'une HTAP ou d'un risque de développer une HTAP.
De préférence, la présence d'anticorps anti-Ténascine C dans l'échantillon biologique est comparée à une valeur contrôle, la présence d'anticorps anti-Ténascine C en une quantité supérieure à la valeur contrôle étant indicatrice d'une HTAP ou d'un risque de développer une HTAP.
Un autre objet de l'invention est un procédé in vitro de pronostic ou de suivi d'une HTAP, comprenant la détermination de la présence et/ou de la quantité d'anticorps anti-TN-C dans un échantillon biologique provenant d'un patient, à différents temps, l'augmentation de la quantité d'anticorps anti-TN-C au cours du temps étant indicatif d'une aggravation de l'HTAP.
Un autre objet de l'invention est un procédé in vitro d'évaluation de l'efficacité d'un traitement envers une HTAP, comprenant la détermination de la présence et/ou de la quantité d'anticorps anti-TN-C dans un échantillon biologique provenant d'un patient, à différents temps avant, au cours ou après le traitement, la diminution de la quantité d'anticorps anti-TN-C au cours du temps étant indicatif d'une amélioration de l'HTAP.
Description détaillée de l'invention :
La TN-C est exprimée à l'intérieur et autour des vaisseaux sanguins dans le poumon fœtal (Rettig et al, 1994), mais elle n'est plus exprimée ensuite dans les artères pulmonaires adultes normales (Jones et al, 1996). Par ailleurs, la perte de signalisation via BMPRII, à l'origine d'un défaut de cellules T régulatrices pouvant prédisposer à la survenue d'une HTAP (Nicolls et al, 2005), peut également induire l'expression de la TN-C in vivo et sur des cellules vasculaires en culture (Ihida-Stansbury et al, 2006). Sur cette base, les inventeurs ont émis l'hypothèse que des patients ayant une HTAP pourraient développer une réponse immune dirigée contre la TN-C. Aussi ont-ils décidé de rechercher des anticorps anti-TN-C dans le sérum de patients atteints d'HTAP.
Les inventeurs ont ainsi pu mettre en évidence une corrélation entre la survenue d'une HTAP et la production d'anticorps anti-TN-C. Sur cette base, ils proposent un procédé in vitro de diagnostic ou de pronostic d'une HTAP, ou d'un risque de développer une HTAP, comprenant la détermination de la présence et/ou de la quantité d'anticorps anti-TN-C dans un échantillon biologique provenant d'un patient. Les anticorps anti-TN-C détectés sont de préférence des immunoglobulines G (IgG).
Définitions
La Ténascine C (ou TN-C) est une glycoprotéine de la matrice extracellulaire. Elle est également connue sous le nom de hexabrachion ou cytotactine. Une séquence de la TN-C humaine est rapportée en annexe (SEQ ID n°l). Le terme "échantillon biologique" se réfère à tout échantillon biologique provenant d'un patient. Des exemples d'échantillons incluent des liquides biologiques, des biopsies tissulaires. De manière préférentielle, l'échantillon peut être du sang, du sérum, de la salive, de l'urine, du sperme. De manière davantage préférée, l'échantillon biologique est un échantillon de sang ou de sérum. Le terme "patient" se réfère à tout sujet susceptible d'être testé. De préférence il s'agit d'un humain, mais le terme inclut tout autre mammifère, tel que des chiens, chats, rongeurs, bétail, chevaux, singes etc. Le patient peut être testé quel que soit son sexe ou son âge. Le patient peut être un sujet à risque, être asymptomatique ou présenter des signes précoces ou avancés d'une HTAP. Par exemple le patient peut être un sujet prédisposé à développer une HTAP, en particulier un sujet portant une ou plusieurs mutations dans le gène codant pour BMPRII.
Le terme "diagnostic" signifie l'identification de la pathologie ou l'évaluation de l'état de sévérité de la pathologie. Le terme « pronostic» signifie l'évaluation du risque d'aggravation, et de ses conséquences.
Le terme « valeur contrôle » se réfère à une valeur basale correspondant à la moyenne des valeurs obtenues avec l'échantillon biologique de sujets sains, non affectés par une HTAP ou une maladie susceptible d'entraîner une HTAP. Il peut s'agir d'une valeur statistique de référence.
Pour évaluer l'évolution de la pathologie, il peut être utile de tester un patient et de contrôler l'effet d'un traitement ou l'évolution de la pathologie, en testant de nouveau le patient, par exemple à plusieurs mois d'intervalle. Dans ce cas, les résultats du second test sont comparés aux résultats du premier test, ainsi que souvent à la valeur dite « contrôle ». Une quantité d'anticorps anti-TN-C « supérieure à la valeur contrôle » signifie généralement une augmentation statistiquement significative, par exemple d'au moins deux déviations standards au dessus de la moyenne des densités optiques des réactivités IgG de l'ensemble des sujets sains.
Par "antigène de capture", on entend un antigène, de préférence fixé sur une phase solide, qui est capable de retenir l'anticorps anti-TN-C présent dans un échantillon biologique, par liaison affine. L'antigène de capture peut être marqué. Le terme "marqué" se réfère aussi bien à un marquage direct (par le biais d'enzymes, radioisotopes, fluorochromes, composés luminescents, etc ..) qu'à un marquage indirect (par exemple, par le biais d'anticorps eux-mêmes marqués de manière directe ou à l'aide de réactifs d'une "paire d'affinité " marquée, telle que, mais non exclusivement, la paire avidine marquée-biotine, etc.).
Dosage des anticorps :
L'échantillon biologique est de préférence un échantillon de sérum, dilué au l/100eme, ou plus, par exemple au l/200eme ou l/400eme.
De manière avantageuse, la quantité d'anticorps anti-TN-C peut être déterminée par un immunoessai.
L'échantillon biologique peut être éventuellement traité dans une étape préalable, ou mis directement en présence d'au moins un antigène de capture.
Le procédé selon l'invention peut être réalisé selon divers formats bien connus de l'homme du métier: en phase solide ou en phase homogène; en un temps ou en deux temps; en méthode compétitive, à titre d'exemples non limitatifs. Selon un mode de réalisation préféré, l'antigène de capture est immobilisé sur une phase solide. On peut utiliser, à titre d'exemples non limitatifs de phase solide, des microplaques, en particulier des microplaques de polystyrène, telles que celles commercialisées par la société Nunc, Danemark. On peut également utiliser des particules ou des billes solides, des billes paramagnétiques, telles que celles fournies par Dynal ou Merck-Eurolab (France) (sous la marque EstaporTM), ou encore des tubes à essai en polystyrène ou polypropylène, etc.
Un format d'immunoessai de détection des anticorps par compétition est également possible. D'autres modalités d'immunoessai sont encore envisageables et bien connues de l'homme du métier.
Dosages ELISA, radioimmunoessais, ou toute autre technique de détection peuvent être mis en oeuvre pour révéler la présence des complexes antigènes-anticorps formés.
Selon un mode de réalisation préféré, le procédé de l'invention comprend la mise en contact d'un échantillon biologique avec une protéine comprenant le fragment d'acides aminés 181 à 290 de la séquence TN-C humaine telle que représentée en SEQ ID NO : 1.
Dans un exemple particulier, l'antigène de capture, qui peut être une protéine comprenant le fragment d'acides aminés 181 à 290 de la séquence TN-C humaine, peut être couplé à une glutathion S transférase (GST), avant d'être déposé sur une microplaque. Des échantillons de sérum à tester, préalablement dilués au l/100ème, sont mis à incuber sur la microplaque. Après lavage, des anticorps anti-Fc γ humain marqués (par exemple avec une phosphatase alcaline) sont ajoutés, les complexes étant révélés (par exemple par ajout d'un substrat de la phosphatase dont le clivage peut être détecté par lecture de l'absorbance).
Patients visés : Les patients visés sont ceux susceptibles de développer une HTAP.
Il peut s'agir d'un patient qui souffre d'une connectivité, telle qu'une sclérodermie systémique, d'un syndrome de Sharp (qui est une connectivité mixte), d'un lupus érythémateux systémique. Le patient peut également souffrir d'une HTAP idiopathique ou familiale. Plus généralement, tout patient atteint d'une maladie vasculaire pulmonaire peut être avantageusement soumis au procédé de détection d'une HTAP tel que défini dans l'invention. Par ailleurs, l'HTAP détectée peut être aussi une hypertension porto -pulmonaire (c'est-à- dire une HTAP associée à une hypertension portale), ou être associée à une cardiopathie congénitale, ou à une infection par le virus de l'immunodéficience humaine (VIH), ou encore être une hypertension pulmonaire post-embolique, compliquant l'évolution d'une bronchite chronique obstructive ou d'une cardiopathie cyanogène. D'autres patients visés sont ceux exposés à certains médicaments coupe-faim comme la fenfluramine dont la prescription peut contribuer à la survenue d'une HTAP. D'autres personnes susceptibles de bénéficier de ce type de test sont celles porteuses d'une mutation dans le gène codant pour BMPRII et qui éventuellement ne présentent pas HTAP détectable à l'échographie, de façon à dépister les individus susceptibles de développer ultérieurement une HTAP.
Evaluation de l'efficacité d'un traitement
Un autre objet de l'invention est un procédé in vitro d'évaluation de l'efficacité d'un traitement envers une HTAP, comprenant la détermination de la présence et/ou de la quantité d'anticorps anti-TN-C dans un échantillon biologique provenant d'un patient, à différents temps avant, au cours ou après le traitement, la diminution de la quantité d'anticorps anti-TN-C au cours du temps étant indicatif d'une amélioration de l'HTAP. Le traitement classique actuel de l'HTAP associe un traitement symptomatique et un traitement vasodilatateur. Le traitement symptomatique associe des anti-coagulants, une oxygénothérapie et des diurétiques. Le traitement vasodilatateur repose sur les molécules suivantes : bloqueurs de canaux calcium, époprosténol (prostacycline) prescrit par voie intraveineuse en perfusion continue, les inhibiteurs des récepteurs de l'endothéline, sélectifs ou non, en particulier le bosentan, le sytaxentan et l'ambrysentan, les inhibiteurs des phosphodiestérases de type 5 en particulier le sildénafïl, l'ensemble de ces médicaments étant administrés par voie orale, et l'iloprost inhalé, analogue de la prostacycline administré par voie inhalée. Ces traitements peuvent être éventuellement combinés. En cas d'échec de ces thérapeutiques, une transplantation pulmonaire ou cœur- poumons peut être proposée. Les figures et exemples suivants illustrent l'invention sans en limiter la portée.
Légende des figures :
La figure 1 est un graphe montrant la détection des anticorps anti-TN-C par dosage ELISA. Les IgG sériques des patients atteints d'HTAP idiopathique, des patients atteints de sclérodermie systémique et des sujets sains appariés pour le sexe et l'âge, ont été testées vis à vis d'un fragment de TN-C recombinante, à une dilution de l/100ème. Les limites inférieure et supérieure de la zone en pointillé représentent les seuils définis par deux et trois fois l'écart-type au dessus de la moyenne des densités optiques obtenues chez les sujets sains. Les différences significatives entre les groupes de malades et les sujets sains sont estimées à l'aide d'un test de rang de Mann Whitney et sont indiquées par : *: p <0,01 ** : p<0,001.
La figure 2 représente des courbes de survie selon Kaplan et Meier en fonction de la présence ou de l'absence d'anticorps anti-TN-C. En abscisse, le temps en mois ; en ordonnée, la survie cumulée en pourcentage.
Exemple : Détection d'anticorps anti-Ténascine C chez des patients atteints d'hypertension artérielle pulmonaire.
Matériels et méthodes :
Patients
L 'HTAP a été dépistée par la mise en évidence par échographie cardiaque trans-thoracique d'une pression artérielle pulmonaire systolique supérieure à 40mmHg. Dans tous les cas, l'HTAP a été confirmée par la réalisation d'un cathétérisme droit et la mise en évidence d'une pression artérielle pulmonaire moyenne supérieure ou égale à 25 mmHg au repos et à 30 mmHg à l'effort. Par convention, l'HTAP était qualifiée d' idiopathique si le patient ne montrait aucune pathologie associée, l'HTAP pouvant alors correspondre à une HTAP sporadique, familiale ou associée à une exposition à la fenfluramine. 91 patients ont été inclus dans l'étude comprenant 66 (72,5%) patients ayant une HTAP idiopathique (IPAH) et 25 patients ayant une sclérodermie systémique répondant aux critères de l' American Collège of Rheumatology (ACR) et/ou aux critères de LeRoy et Medsger (Masi et al, 1980 ; LeRoy et al, 2001).
Tous les patients ayant une sclérodermie systémique diffuse sans HTAP avaient une atteinte interstitielle pulmonaire mise en évidence par un scanner thoracique haute résolution et une capacité vitale inférieure à 80% de la valeur prédite et/ou un coefficient de transfert du monoxyde de carbone (DLCO) inférieure à 75% de la valeur prédite. Aucun des patients ne recevait des corticoïdes ou d'immunosuppresseurs au moment des prélèvements, aucun d'entre eux n'avait de tumeur solide ou une autre connectivité associée. 46 sujets sains appariés pour le sexe et l'âge ont été utilisés comme contrôles.
Dosage ELISA La Ténascine C (TN-C) a été obtenue auprès de la société Abnova (Abnova Corporation, Taipei city, Taïwan). L'antigène utilisé était constitué du fragment 181 à 290 de la TN-C (SEQ ID n°l), couplé à un motif GST. La TN-C a été diluée dans un tampon de bicarbonate et déposée sur des plaques 96 puits (Maxisorb, NalgeNunc Int. Rochester, NY, USA) à une concentration finale de 4μg/mL à 4°C. Les sérums de patients et de sujets sains ont été dilués au l/100eme dans un tampon phosphate (PBS) à 1% d'albumine et incubés une heure à 37°C. Après un lavage, des anticorps de lapin anti-Fcγ humain conjugués à de la phosphatase alcaline (Dakocytomation, Golstrup, Denmark), ont été ajoutés et incubés pendant une heure à température ambiante. Les réactivités ont été révélées par ajout de /?-nitrophenylphosphate à 0,05M dans un tampon de carbonate de magnésium (pH 9,8) et l'absorbance à 405nm a été déterminée en utilisant un lecteur de plaques ELISA (Fusion, Packard BioScience, Meriden, CT, USA). Afin de tenir compte de la variabilité entre les puits, la densité optique d'un sérum de référence était arbitrairement définie comme 100% de l'activité anti-TN C. Les résultats des échantillons testés ont été calculés à partir de la moyenne de l'absorbance de puits dupliqués et exprimée comme un pourcentage de cette valeur de référence. Tous les échantillons ont été testés en double. Analyses statistiques
Toutes les analyses statistiques ont été effectuées en utilisant le logiciel Systat (version 11.0 Systat Software Inc, Point Richmond, CA, USA). Un test de Mann-Whitney a été utilisé pour comparer les densités optiques relatives des différents groupes. Des valeurs de P inférieures à 0,05 étaient considérées comme statistiquement significatives. La survie a été calculée par la méthode de Kaplan et Meier (Kaplan and Meier, 1958).
Résultats :
Les réactivités des IgG des patients atteints d'HTAP idiopathique, des patients atteints de sclérodermie systémique avec ou sans HTAP et des sujets contrôles vis à vis de la TN-C ont été étudiés par ELISA. En utilisant un seuil défini par deux déviations standard au- dessus de la moyenne des densités optiques des réactivités IgG de l'ensemble des sujets sains, 36/66 (54,5%) patients ayant une HTAP idiopathique et 2/25 (8%) des patients sclérodermiques avaient des IgG anti-TN-C. Aucun des sujets sains n'avait d'IgG anti-TN- C (Figure 1). Lorsque le seuil était déplacé à trois déviations standard au dessus de la moyenne des réactivités IgG des individus sains, 12/66 (18,1%) des patients ayant une HTAP idiopathique avait des IgG anti-TN C et aucun patient sclérodermique n'avait d'IgG anti-TN C. Les réactivités des IgG sériques des anticorps anti-TN C de patients ayant une HTAP idiopathique étaient signifîcativement plus élevées que celles des patients sclérodermiques (p<0,001), et que celles des sujets sains (p<0,001). De la même façon, les réactivités des IgG sériques des anticorps anti-TN C de patients sclérodermiques étaient signifîcativement plus élevées que celles des individus sains (p=0,021) (Figure 1). Il n'a pas été mis en évidence de différence significative dans la présentation clinique et les données de l'échographie cardiaque, du cathétérisme droit et du test de marche de 6 minutes entre les deux groupes de patients. La survie était diminuée dans le groupe des malades ayant des anticorps anti-TNC comparativement aux malades qui n'avaient pas d'anticorps anti-TN C sans toutefois que cette différence ne soit ici significative (p=0,17).
L'apparition d'une réponse immune dirigée contre la TN C pourrait résulter des mêmes mécanismes que ceux conduisant à l'induction de l'expression de la TN C et à la prolifération des cellules musculaires lisses. La présence d'anticorps anti-TN C serait donc corrélée à l'apparition d'un remodelage vasculaire, constituant un marqueur de la survenue d'une HTAP. Références bibliographiques
- Dorfinuller et al, 2003, Eur Respir J, 22(2) :358-63 - Hachulla et al, 2005, Arthritis Rheum 52(12) :3792-3800
- Ihida-Stansbury et al, 2006, Am J Physiol Lung CeIl Mol Physiol 291(4):L694-702
- Jones et al, 1996, Cire Res 79(6) : 1131 -42
- Kaplan and Meier, 1958, J Am Stat Assoc 53:457-81
- LeRoy et al, 2001, J Rheumatol 28(7):1573-76 - Masi et al, 1980, Arthr Rheum 23 :581-90
- Mouthon et al, 2005, Eur Respir J 26(6) :986-8
- Nicolls et al, 2005, Eur Respir J 26(6) : 1110-8
- Rettig et al, 1994, J CeIl Sci;107 ( Pt 2):487-97
- Rubin, 1997, N Engl J Med, 336(2) : 111-7 - Tamby et al, 2005, Thorax 60(9):765-72
- Tamby et al, 2006, Eur Respir J 28(4):799-807

Claims

Revendications
1. Procédé in vitro de détection d'une hypertension artérielle pulmonaire (HTAP), ou d'un risque de développer une HTAP, comprenant la détermination de la présence et/ou de la quantité d'anticorps anti-Ténascine C dans un échantillon biologique provenant d'un patient, la présence d'anticorps anti-Ténascine C étant indicatrice d'une HTAP ou d'un risque de développer une HTAP.
2. Procédé selon la revendication 1, dans lequel l'échantillon biologique est un échantillon de sang ou de sérum.
3. Procédé selon la revendication 1 ou 2, dans lequel la présence d'anticorps anti- Ténascine C dans l'échantillon biologique est comparée à une valeur contrôle, la présence d'anticorps anti-Ténascine C en une quantité supérieure à la valeur contrôle étant indicatrice d'une HTAP ou d'un risque de développer une HTAP.
4. Procédé selon l'une des revendications 1 à 3, dans lequel la quantité d'anticorps anti-Ténascine C est déterminée par un immunoessai.
5. Procédé selon la revendication 4, dans lequel l'immunoessai est un dosage ELISA.
6. Procédé selon la revendication 4 ou 5, comprenant la mise en contact d'un échantillon biologique avec une protéine comprenant le fragment d'acides aminés 181 à 290 de la séquence Ténascine C humaine telle que représentée en SEQ ID
NO :1.
7. Procédé selon l'une des revendications 1 à 6, dans lequel le patient est un humain.
8. Procédé selon l'une des revendications 1 à 7, dans lequel le patient souffre d'une sclérodermie systémique.
9. Procédé selon l'une des revendications 1 à 7, dans lequel le patient souffre d'un syndrome de Sharp.
10. Procédé selon l'une des revendications 1 à 7, dans lequel le patient souffre d'un lupus érythémateux systémique.
11. Procédé selon l'une des revendications 1 à 7, dans lequel le patient souffre d'une HTAP idiopathique.
12. Procédé selon l'une des revendications 1 à 7, dans lequel l'HTAP est associée à une hypertension portale, à une cardiopathie congénitale, ou à une infection par le virus de l'immunodéficience humaine (VIH), ou est une hypertension pulmonaire post-embolique.
13. Procédé selon l'une des revendications 1 à 7, dans lequel le patient est un sujet prédisposé à développer une HTAP.
14. Procédé selon la revendication 13, dans lequel le sujet est porteur d'une ou plusieurs mutation(s) dans le gène codant pour BMPRII.
15. Procédé in vitro de pronostic ou de suivi d'une HTAP, comprenant la détermination de la présence et/ou de la quantité d'anticorps anti-Ténascine C dans un échantillon biologique provenant d'un patient, à différents temps, l'augmentation de la quantité d'anticorps anti-Ténascine C au cours du temps étant indicatif d'une aggravation de l'HTAP.
16. Procédé in vitro d'évaluation de l'efficacité d'un traitement envers une HTAP, comprenant la détermination de la présence et/ou de la quantité d'anticorps anti- Ténascine C dans un échantillon biologique provenant d'un patient, à différents temps avant, au cours ou après le traitement, la diminution de la quantité d'anticorps anti-Ténascine C au cours du temps étant indicatif d'une amélioration de l'HTAP.
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Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2964314B1 (fr) * 2010-09-02 2013-06-28 Assist Publ Hopitaux De Paris Score predictif du risque de survenue d'hypertension arterielle pulmonaire chez des patients atteints de sclerodermie systemique.
BR112014014295A2 (pt) * 2011-12-12 2017-06-13 Isis Innovation método para determinar um estado de artrite reumatoide, kit para a determinação o estado de artrite reumatoide erosiva de um indivíduo, usos de tenancina-c, e de uma determinação do nível de tenascina-c, e, métodos para tratar uma condição inflamatória, e uma artrite reumatoide
WO2014067965A1 (fr) * 2012-10-29 2014-05-08 Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) Procédés de prédiction ou de diagnostic d'une hypertension artérielle pulmonaire
US9603890B2 (en) 2012-12-03 2017-03-28 Vascular Biosciences Methods for increasing the selective efficacy of gene therapy using CAR peptide and heparan-sulfate mediated macropinocytosis
JP6116938B2 (ja) * 2013-02-28 2017-04-19 学校法人順天堂 新規な肺高血圧症のマーカー

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1999043308A2 (fr) * 1998-02-27 1999-09-02 Marlene Rabinovitch Traitement de l'hypertension arterielle pulmonaire par suppression de la tenascine et inhibition de l'elastase
WO2005009366A2 (fr) * 2003-07-24 2005-02-03 Cornell Research Foundation, Inc. Restauration d'une fonction vasculaire

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4880750A (en) * 1987-07-09 1989-11-14 Miragen, Inc. Individual-specific antibody identification methods
DE19939575C1 (de) * 1999-08-20 2001-08-02 Orgentec Diagnostika Gmbh Verfahren zur Diagnose von Sjögren-Syndrom
JP3646159B2 (ja) * 2001-02-08 2005-05-11 国立大学法人三重大学 抗テネイシンｃモノクローナル抗体及び当該抗体を産生するハイブリドーマ
US6989276B2 (en) * 2001-05-10 2006-01-24 Battelle Energy Alliance, Llc Rapid classification of biological components
ATE480564T1 (de) * 2002-02-26 2010-09-15 Sigma Tau Ind Farmaceuti Monoklonaler anti-mensch-tenascin-antikörper
WO2007123976A2 (fr) * 2006-04-18 2007-11-01 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Établissement de profils d'anticorps pour la détermination de la sensibilité des patients à un traitement
WO2009123730A1 (fr) * 2008-04-02 2009-10-08 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Procédés pour diagnostiquer et pronostiquer une hypertension pulmonaire

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1999043308A2 (fr) * 1998-02-27 1999-09-02 Marlene Rabinovitch Traitement de l'hypertension arterielle pulmonaire par suppression de la tenascine et inhibition de l'elastase
WO2005009366A2 (fr) * 2003-07-24 2005-02-03 Cornell Research Foundation, Inc. Restauration d'une fonction vasculaire

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
IHIDA-STANSBURY KAORI ET AL: "Tenascin-C is induced by mutated BMP type II receptors in familial forms of pulmonary arterial hypertension", AMERICAN JOURNAL OF PHYSIOLOGY - LUNG CELLULAR AND MOLECULAR PHYSIOLOGY, vol. 291, no. 4, October 2006 (2006-10-01), pages L694 - L702, XP002502458, ISSN: 1040-0605 *
JEFFERY ET AL: "Molecular and cellular basis of pulmonary vascular remodeling in pulmonary hypertension", PROGRESS IN CARDIOVASCULAR DISEASES, SAUNDERS, PHILADELPHIA, PA, US, vol. 45, no. 3, 1 November 2002 (2002-11-01), pages 173 - 202, XP005128803, ISSN: 0033-0620 *

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