WO2010118699A1

WO2010118699A1 - 高纯度(2β,3α,5α,16β,17β)-2-(4-吗啉基)-16-(1-吡咯烷基)-雄甾烷-3,17-二醇或其组合物及其制备方法

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Publication number: WO2010118699A1
Application number: PCT/CN2010/071820
Authority: WO
Inventors: 谢峰; 邢乃果; 张伟; 龚恒源; 刘泽荣; 邓杰; 罗杰; 叶文润; 樊斌
Original assignee: Chongqing Pharmaceutical Research Institute Co Ltd
Current assignee: Chongqing Pharmaceutical Research Institute Co Ltd
Priority date: 2009-04-17
Filing date: 2010-04-16
Publication date: 2010-10-21
Anticipated expiration: 2011-10-17
Also published as: CN101863948B; CN101863948A

Description

高纯度 (2 β ,3 ,5 ，16 β，17 β )-2-(4-吗啉基 )-16-(1-吡咯烷基) -雄甾烷 -3,17-二醇或其组合物及其制备方法技术领域本发明涉及有机化学及药物化学技术领域，具体涉及高纯度 (2β, 3α, 5α, 16β, 17β) -2- (4-吗啉基） -16- (1-吡咯烷基）-雄甾烷 -3, 17-二醇或其高纯度组合物及其制备方法，以及在制备肌肉松弛药罗库溴铵中的应用。背景技术肌肉松弛药又称骨骼弛药（简称药），也叫做神经肌肉阻断剂，是选择性地作用于神经肌肉接点，暂时干扰神经肌肉间兴奋的传递而使骨酪肌松弛的一种药物。肌肉松弛药根据其作用机理的不同可分为非去极化和去极化肌肉松弛药。非去极化肌松药主要作用于神经肌肉接头的突触后膜上的乙酰胆碱受体，与乙酰胆碱竟争结合受体但不能产生极化，从而阻滞了神经肌肉的兴奋传递，其作用能被抗胆碱酯酶药新斯的明所拮抗。去极化肌肉松弛药是受体激动剂，与受体结合后可开放离子通道而去极化，但终板的持续去极化阻滞了正常的神经肌肉兴奋传递，从而产生肌松作用，且不被抗胆碱酯酶药所拮抗。其中非去极化肌松药从结构上又主要包括两类，一类是氨基甾类药，另一类是苄基异喹啉类药。目前甾类药已经成为肌肉松弛药的主要研究方向。罗库溴铵 ( Rocuronium Bromide ) 便是最近应用于临床的 ^甾类非去极化药，具有起效快、中时效和恢复迅速的特点，是目前最接近理想肌肉松弛药条件的肌松药，在临床中应用广泛。在美国、加拿大、大多数欧洲国家，罗库溴铵的处方量居于肌松药的第一位。 2005年，维也纳欧洲麻醉学年会上公布的数据，罗库溴铵在全球的使用患者超过 1亿人。罗库溴铵结构式如式（I )所示：

文献 US4, 894,369等公开了罗库溴铵的制备方法。其中化合物 (2β，3α，5α，16β，17β)-2-(4-吗啉基 )-16-(1-吡咯烷基) -雄甾烷 -3,17 二醇

(式 m化合物）是制备罗库溴铵的必经中间体，该中间体经 0-乙酰化、 N-季铵化反应得到产品罗库溴铵。由此可知，产品罗库溴铵碳骨架中的各基团位置和构型在该中间体中已全部确定，因此其质量对终产品罗库淡铵的质量和成本有着直接的影响。如该中间体的纯度不够高，其中的部分杂质会直接带入或进一步反应带入后面的反应产物，进而影响罗库淡铵的质量和收率；如果在后面步骤中通过纯化降低或除去这些杂质，势必会造成产品罗库淡铵成本的大幅增加。因此，提高中间体 (2β，3α，5α，16β，17β)-2-(4-吗啉基 )-16-(1-吡咯烷基) -雄甾烷

-3,17二醇（式 m化合物）的纯度，对于提高产品罗库淡铵的质量和控制成本有着重要的意义。目前，已有多篇文献资料报道了式 m化合物的制备或纯化方法。美国专利 US4, 894,369描述了式 m化合物的制备及其纯化方法，以及用式 m化合物制备罗库溴铵的方法，反应式如下:

该方法以式 II化合物为原料，与吗啉和 10%的水（v/v ) 回流反应 3天，蒸干反应液得到粗品，先用丙酮精制，再用曱醇精制，得到式 m化合物。该工艺反应时间过长，导致颜色深，杂质多；而且精制过程中因丙酮、曱醇不能全溶式 m化合物而导致纯化效果不明显，按其所给的条件进行操作， HPLC纯度仅为 96%左右，收率仅为 60% 左右。式 m化合物和 1.13摩尔比的乙酰氯发生乙酰化反应得到式 IV化合物，需要柱层析和重结晶纯化，所以式 IV化合物的收率很低，只有 47.8%。式 IV化合物在二氯曱烷中与烯丙基溴反应 22h，柱层析分离得到式 I化合物（罗库溴铵），该工艺产率低，且操作复杂，不适合工业化生产。 2007年， US 2007/0,117,975对 US4，894，369报道的制备方法进行了改进，由式 II化合物、吗啉、 10%的水（v/v )及至少一种酸性催化剂组成混悬液， 100°C至 110°C下搅拌该混悬液反应 40小时，然后用碱中和得混悬液，过滤，得到式 m化合物（ HPLC纯度： 94.12% )。该方法增加了酸性催化剂，加快了反应进程，但也导致了反应选择性降低，异构体杂质增加，而且不易被已报道的精制方法除掉。此外，按其所给的条件进行操作，不能得到该专利所说的收率（约 80% )，实际收率仅能达到约 60%。式 m化合物与乙酰化试剂在碱性催化剂下发生酰化反应，后经过两次重结晶得到式 IV化合物，但该工艺产率低，且操作复杂；式 IV化合物再和烯丙基溴成盐得式 I化合物 (罗库溴铵）。

2007年， CN101381390也对 US4, 894,369报道的式 m化合物制备方法进行了改进，采用在压力釜中用 115-210 反应 36小时，曱醇精制，收率 75%。该专利未对式 m化合物的纯度进行说明。该方法使用了特殊设备-压力釜，在高于大气压的环境下反应，在生产中有泄露和爆炸的危险，而且设备成本较高，不适合工业化生产。因此，现有的式 m化合物制备技术中，存在产品纯度不高，缺乏对单个杂质特别是异构体杂质的控制等不足之处，从而造成了后续反应需要柱层析和重结晶纯化，不利于操作和收率的提高。针对现有技术中的不足，我们对化合物 (2β，3α，5α，16β，17β)-2-(4-吗啉基 )-16-(1-吡咯烷基) -雄甾烷 -3,17二醇（式 m化合物 )的纯化方法及产品中的杂质控制进行了研究，发现主要有 4种杂质对后继工艺有较大影响。进而发明了一种能有效控制该化合物纯度的纯化工艺，同时提供了一种高纯度的 (2β，3α，5α，16β，17β)-2-(4-吗啉基 )-16-(l-吡咯烷基) -雄甾烷 -3,17 二醇，并将其用于制备罗库淡铵。发明内容本发明的目的是提供一种高纯度的 (2β，3α，5α，16β，17β)-2-(4-吗啉基) -16-(1-吡咯烷基) -雄甾烷 -3,17-二醇（式 III化合物），其纯度大于或等于 98% HPLC百分面积。

本发明的另一目标是提供一种式 m化合物的高纯度组合物，其特征在于：式（ΠΙ )化合物的含量不小于 98% HPLC百分面积，任一单个杂质的含量不超过 0.5%HPLC百分面积。在上述的高纯度组合物中，所述的杂质包括但不限于式 m-a化合物、式 m-b化合物、式 m-c化合物或式 Π化合物。其中，这 4种杂质对后续工艺的纯化、终产品罗库溴铵的质量和成本的控制都有较大的影响，因此，有必要控制式（m )化合物的纯度和这 4种杂质的含量。这里所说的纯度和含量是以 HPLC百分面积来标识。

III-a

在一个具体实施方案中，所述的式 III化合物的高纯度组合物，其特征在于：式 III化合物含量不小于 98.0%HPLC百分面积，任一单个杂质的含量不超过 0.5%HPLC百分面积，其中所述的单个杂质包括式 m-a化合物、式 m-b化合物、式 m-c化合物或式 Π化合物。具体包括式 m-a化合物的 HPLC百分面积不超过 0.5%，式 ΠΙ-b化合物的 HPLC百分面积不超过 0.5%,式 m-c化合物的 HPLC百分面积不超过 0.5%以及式 II化合物的 HPLC百分面积不超过 0.5%。在上述实施方案中，对于所述的高纯度组合物，式 III化合物的

HPLC百分面积不小于 98.5%、 99.0%、 99.3%或 99.5%，单个杂质的 HPLC百分面积不大于 0.4%、 0.3%、 0.2%或 0.1%，其中主要的单个杂质为式 m-a化合物、式 m-b化合物、式 m-c化合物或式 Π化合物。本发明的式 III化合物的高纯度组合物，其旋光值 [a]_D ^2G为 + 84。至 +88° ( c=1.02 in CHC1₃ )。上述式 m化合物（2β，3α，5α，16β，17β)-2-(4-吗啉基 )-16-(1-吡咯烷基) -雄甾烷 -3,17-二醇的高纯度组合物包括：式 m化合物 HPLC百分面积不小于 98.0%，单个杂质 HPLC百分面积不大于 0.5%、 0.4%. 0.3%. 0.2%或 0.1%; 式 m化合物不小于 98.5%，单个杂质不大于 0.4%、 0.3%、 0.2% 或 0.1%; 式 m化合物不小于 99.0%，单个杂质不大于 0.3%、0.2%或 0.1%; 式 m化合物不小于 99.3%，单个杂质不大于 0.2%或 0.1%; 或式 m化合物不小于 99.5%，单个杂质不大于 0.1%。上述 "组合物" 是指式 m化合物与杂质的混合物， "杂质" 是指与式 m化合物结构相关的有机杂质，包括制备工艺中的原料、中间体、反应副产物、产品的降解产物等。该 "组合物" 包括式 m化合物的湿品、干品、水合物或溶剂合物等与杂质的混合物。上述 "HPLC 百分面积" 是指产物的纯度，是用高效液相色谱 (HPLC)面积归一法测定的，每个组份的检测限不低于 0.02%，定量限不低于 0.05%。含量或纯度的数值是经测量数据四舍五入所得。本发明所述的式 III化合物，其化学名为 (2β，3α，5α，16β，17β)-2-(4- 吗啉基 )-16-(1-吡咯烷基) -雄甾烷 -3,17二醇。在本发明所述的式 m化合物的高纯度组合物中，第一个主要杂质为：（2β，3α，5α，16β，17β)-2-(1-吡咯烷基) -16-(1-吡咯烷基) -雄甾烷 -3,17 二醇（式 m-a化合物）。

III-a 该杂质产生的过程为:

m-a 在本发明所述的式 m化合物的高纯度组合物中，第二个主要杂质为：（2α，3β，5α，16β，17β)-3-(4-吗啉基 )-16-(1-吡咯烷基) -雄甾烷 -2,17- 二醇（式 m-b化合物），该杂质是式 m化合物的异构体杂质，是因为反应的选择性差导致，该杂质的产生过程为：

在本发明所述的式 m化合物的高纯度组合物中，第三个主要杂质为：吗啉（式 111 化合物），是反应原料，在减压蒸馏吗啉时，被包裹在固体中，现有技术很难除去该杂质。

III-c

在本发明所述的式 m化合物的高纯度组合物中，第四个主要杂质为：（2α，3α，5α，16β，17β)-2，3-环氧 -16-(1-吡咯烷基) -雄甾烷 -17-醇（式 II 化合物），是反应起始原料，现有技术很难除去该杂质。

II

在本发明的高纯度式 III化合物或其高纯度组合物中，含杂质式 m-a化合物的量不超过 0.5%HPLC百分面积，含杂质式 ΠΙ-b化合物的量不超过 0.5% HPLC百分面积，含杂质式 m-c化合物的量不超过 0.5% HPLC百分面积，含杂质式 II化合物的量不超过 0.5% HPLC 百分面积。结合上述杂质，本发明提供一种式 m化合物的高纯度组合物，其中式 m化合物的 HPLC百分面积不小于 98.0%，杂质式 m-a化合物、式 m-b化合物、式 m-c化合物和式 Π化合物的 HPLC百分面积均不大于 0.5%、 0.4%. 0.3%. 0.2%或 0.1% 。该组合物进一步包括：式 m化合物的 HPLC 百分面积不小于

98.5%, 杂质式 m-a化合物、式 m-b化合物、式 m-c化合物、式 π化合物的 HPLC百分面积均不大于 0.4%、 0.3%、 0.2%、 0.1%；式 m化合物的 HPLC百分面积不小于 99.0%，杂质式 m-a化合物、式 m-b化合物、式 m-c化合物、式 Π化合物的 HPLC百分面积均不大于 0.3%、 0.2%或 0.1%; 式 m化合物的 HPLC百分面积不小于 99.3%，杂质式 m-a化合物、式 m-b化合物、式 m-c化合物、式 Π化合物的 HPLC百分面积均不大于 0.2%或 0.1%; 或式 m化合物的 HPLC百分面积不小于 99.5%，杂质式 m-a化合物、式 m-b化合物、式 m-c化合物、式 Π化合物的 HPLC百分面积均不大于 0.1%。可以理解的是，上述组合物也可以不含式 m-a化合物、式 m-b 化合物、式 m-c化合物、式 Π化合物，即上述组合物中式 m-a化合物、式 m-b化合物、式 m-c化合物和式 Π化合物的量均小于检测极限。本发明中涉及的含量或纯度是用高效液相色谱 (HPLC)面积归一法测定的，检测方法包括：用硅胶为填充剂，以 0.025mol L氢氧化四曱基铵溶液 -乙腈（10: 90 )为流动相，检测波长为 210nm，柱温 30 。注射量为 10ul，记录色谱图至主峰保留时间的 3倍。本发明的另一目的是提供一种制备该高纯度 (2β，3α，5α，16β，17β)-2-(4-吗啉基 )-16-(1-吡咯烷基) -雄甾烷 -3,17 二醇 (式 III化合物）或其高纯度组合物的方法。上述四个杂质以现有的纯化方法，无法有效的除去。因此，本发明还提供一种制备上述式 m化合物高纯度组合物的纯化方法，也是制备高纯度式 m化合物的方法，该方法包括： ( 1 ) 由式 m化合物粗品和至少一种有机溶剂组成第一混悬液；

(2)升温至固体全溶；

(3)加入至少一种抗溶性有机溶剂，获得第二混悬液；

(4)冷却第二混悬液使固体沉淀，从第二混悬液中滤出固体，干燥所得固体，获得高纯度的式 m化合物。实现上述制备方法的具体实施方案如下：按文献 US4, 894,369或 US 2007/0,117,975提供的方法得到的式 m 化合物粗品，经 HPLC检测所含杂质式 m-a化合物不超过 2%、杂质式 m-b化合物不超过 ιο%、杂质式 m-c化合物不超过 2%、杂质式 II化合物不超过 2 %，将该粗品悬浮于至少一种有机溶剂中得到第一混悬液，升温至固体全溶，再加入至少一种抗溶性有机溶剂，获得第二混悬液；冷却第二混悬液使固体沉淀；从第二混悬液中滤出固体；干燥所得固体，获得高纯度的式 m化合物。在一个具体实施方案中，本发明所述的制备高纯度式 III化合物或式 III化合物的高纯度组合物的方法，包括以下步骤：

( 1 ) 由式 m化合物粗品和至少一种有机溶剂组成第一混悬液；

(2)升温至固体全溶；

(3)加入至少一种抗溶性有机溶剂，获得第二混悬液；

(4)冷却第二混悬液使固体沉淀，从第二混悬液中滤出固体，干燥所得固体，获得高纯度的 (2β，3α，5α，16β，17β)-2-(4-吗啉基 )-16-(1- 吡咯烷基) -雄甾烷 -3,17-二醇（式 m化合物）。步骤（l )所述式 m化合物粗品所含杂质式 m-a化合物的量不超过 2 % HPLC百分面积；步骤（1 )所述式 m化合物粗品所含杂质式 m-b化合物的量不超过 10 % HPLC百分面积；步骤（ 1 )所述式 m化合物粗品所含杂质式 m-c化合物的量不超过 2 % HPLC百分面积；步骤（1 )所述式 m化合物粗品所含杂质式 Π化合物的量不超过

2 % HPLC百分面积；步骤（1 )所述有机溶剂为卤代烃类 (如二氯乙烷、二氯曱烷、三氯曱烷等)、酰胺类 (N，N-二曱基曱酰胺（DMF )， N，N-二曱基乙酰胺 ( DMA )等)、二曱基亚砜 ( DMSO ) 以及相似的溶剂或者它们的混合物。其中优选二氯曱烷、三氯曱烷、 DMF、 DMA. DMSO; 它们的用量对应于每克粗品 (式 m化合物)一般为 1 ~ 50ml，优选 3 ~ 20ml。该纯化方法步骤（2 ) 中全溶温度一般在 0°C至溶液沸点，优选 20。C ~ 80。C。步骤（3 )所述抗溶性有机溶剂为醇类、酮类、环醚类、酯类、烃类有机溶剂、含腈基的有机溶剂、水或者它们的混合物。所述醇类有机溶剂为曱醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丁醇及其混合物，其中优选曱醇。所述酮类有机溶剂为丙酮或曱基异丁基酮，其中优选丙酮。所述环醚类有机溶剂为四氢呋喃。所述的酯类有机溶剂为乙酸曱酯、乙酸乙酯或乙酸异丁酯，其中优选乙酸乙酯。所述含腈基的有机溶剂为乙腈、丙腈、丁腈、异丁腈、戊腈或己腈，其中优选乙腈。所述经类有机溶剂为戊烷、正己烷、正庚烷、异辛烷、环戊烷和环己烷，其中优选正己烷。步骤（3 )所述抗溶性有机溶剂优选为曱醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、乙酸曱酯、四氢呋喃、乙腈、正己烷或环己烷，更优选曱醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、四氢呋喃、乙腈、正己烷。本发明还提供了杂质式 m-a化合物、式 m-b化合物、式 Π化合物的制备方法。杂质式 m-a化合物的制备方法包括以式 Π化合物为原料，与吡咯烷、 10%的水（v/v ) 回流反应 3天，蒸干反应液得到粗品，再用曱醇精制，得到式 m-a化合物。杂质式 m-b化合物的制备方法是通过浓缩式 m化合物重结晶母液，冷却析晶得到粗品，再用丙酮精制，得到式 m-b化合物。杂质式 II化合物的制备方法是以 2(¾，301:1601，170[-二环氧-17卩-乙酰氧基 -5α-雄甾烷为起始原料，在含氢氧化钠的曱醇中回流 15分钟，然后加入吡咯烷回流 15分钟，再于以下用硼氢化钠还原，丙酮精制，得到式 Π化合物。

本发明还提供了高纯度的式 m化合物或其组合物在制备罗库溴铵中的应用。本发明提供了以上述高纯度式 m化合物或其高纯度组合物制备罗库溴铵（式 I化合物）的方法。该方法包括以下过程：

I

(1)在至少一种有机溶剂中，用至少一种酰化试剂在至少一种催化剂的作用下，选择性地乙酰化式 m化合物，得到含式 IV化合物；

(2)在至少一种含腈基的有机溶剂中，式 IV化合物与过量的烯丙基溴反应；

(3)从步骤（2) 的反应混和物中得到罗库溴铵粗品；

( 4 )将步骤（ 3 )得到罗库溴铵粗品溶解在一种极性有机溶剂中形成溶液；

(5)将一种脱色剂加入步骤（4)得到的溶液中形成混悬液；

(6)将步骤（5)得到的混悬液过滤；

(7)将步骤（6)得到的滤液滴入至少一种抗溶性有机溶剂中，获得另一混悬液； (8)从步骤（7)得到的混悬液中滤出固体；干燥得到的固体，得到高纯度的罗库淡铵 (式 I化合物）。步骤（1 ) 中所用有机溶剂为丙酮、乙腈以及相似的溶剂或者它们的混合物；所用酰化试剂为乙酰氯或乙酸酐；所用催化剂为三乙胺、吡啶、 4-二曱氨基吡啶、碳酸钠、碳酸氢钠或者它们的混合物。步骤（2 ) 中所用含腈基的有机溶剂为乙腈、丙腈以及相似的溶剂或者它们的混合物。步骤（3 ) 中从反应混和物中得到罗库溴铵粗品的方法可以是将反应混和物减压蒸干得到；也可以是加入烷烃类有机溶剂（如戊烷、正己烷等）萃洗得到。步骤（4 )中所用极性有机溶剂为代烃类 (如二氯乙烷、二氯曱烷、三氯曱烷等)、酰胺类 (如 N，N-二曱基曱酰胺（DMF )、 N，N-二曱基乙酰胺 ( DMA )等)、醇类（如曱醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丁醇等）、酮类（如丙酮、曱基异丁基酮等）、环醚类（如四氢呋喃等）、含腈基类（如乙腈、丙腈、丁腈、异丁腈、戊腈、己腈等）、 DMSO 以及相似的溶剂或者它们的混合物。其中优选二氯曱烷、三氯曱烷、 DMF、 DMA, 异丙醇、丙酮、乙腈、 DMSO。步骤（5 ) 中所用脱色剂为活性炭、硅胶、氧化铝以及与其相似的脱色剂或者它们的混合物。步骤（7 ) 中所用抗溶性有机溶剂为乙酸曱酯、乙酸乙酯、曱基叔丁基醚、曱醚、乙醚、正戊烷、正己烷、石油醚或它们的混和物，其中优选乙醚、曱基叔丁基醚、乙酸乙酯、乙酸曱酯。上述本发明的方法的技术方案为：在至少一种有机溶剂中，用至少一种酰化试剂在至少一种催化剂的作用下，使乙酰化试剂选择性地酰化式 III化合物的 17位羟基，式 III化合物优选为根据本发明的高纯度式 III化合物或其高纯度的组合物。根据本发明的上述方法的优点包括：后处理简便，一次重结晶即可得到高纯度式 IV化合物，不但提高了式 IV化合物的收率，而且也大大提高了罗库溴铵的收率。在一个具体实施方案中，上述制备罗库淡铵的方法，包括以下步骤：

(1)在至少一种有机溶剂中，用至少一种酰化试剂在至少一种催化剂的作用下，选择性地乙酰化高纯度的式 m化合物或其组合物，得到含式 IV化合物的溶液； (2)冷却步骤（ 1 )得到的溶液，析出式 IV化合物，过滤得到式

IV化合物；

( 3 )将步骤（ 2 )得到的式 IV化合物用至少一种有机溶剂重结晶，得到高纯度的式 IV化合物；

(4)在至少一种含腈基的有机溶剂中，式 IV化合物与过量的烯丙基溴反应；

(5)从步骤（4) 的反应混和物中得到罗库溴铵粗品；

( 6 )将步骤（ 5 )得到罗库溴铵粗品溶解在一种极性有机溶剂中形成溶液；

(7)将一种脱色剂加入步骤（6)得到的溶液中形成混悬液； (8)将步骤（ 7 )得到的混悬液过滤；

(9)将步骤（8)得到的滤液滴入至少一种抗溶性有机溶剂中，获得另一混悬液；

( 10 )从步骤（9 )得到的混悬液中滤出固体；干燥得到的固体，得到高纯度的罗库淡铵 (式 I化合物）。其中，步骤（1 ) 中所述的有机溶剂为酮类、含腈基的有机溶剂或者其混合物；其中所述酮类为丙酮或曱基异丁基酮，优选丙酮；所述含腈基的有机溶剂为乙腈、丙腈、丁腈、异丁腈、戊腈或己腈，优选乙腈。步骤（1 ) 中所述乙酰化试剂为乙酰氯、乙酸酐或其混合物。步骤（1 ) 中所述催化剂为选自脂肪胺、芳胺、无机碱或者其混合物；其中脂肪胺为三乙胺、二乙基异丙胺或三正丙基胺；芳胺为吡啶或 4-二曱氨基吡啶；无机碱为碳酸钠或碳酸氢钠。所述催化剂优选为三乙胺。所述步骤（1 ) 中，式 m化合物与乙酰化试剂的摩尔比为 1: 1.1 至 1: 1.8，较好的是 1: 1.5至 1: 1.7，最好的是 1: 1.6；式 m化合物与催化剂的摩尔比为 1: 3至 1: 8，较好的是 1: 5至 1: 7，最好的是 1: 6。步骤（ 1 )中所述选择性酰化反应是在 40°C至 120°C，优选 50°C 至 85°C下进行。步骤（1 ) 中所述选择性乙酰化反应的时间是 3小时至 12小时，较好的是 4小时至 6小时，最好是 5小时。步骤（3 ) 中所述重结晶溶剂为酮类、含腈基的有机溶剂或者其混合物；其中所述酮类为丙酮或曱基异丁基酮，优选丙酮；所述含腈基的有机溶剂为乙腈、丙腈、丁腈、异丁腈、戊腈或己腈，优选乙腈。步骤（4 ) 中所述反应所用含腈基的有机溶剂为乙腈、丙腈或其混合物，优选乙腈。步骤（4 ) 中所述反应是在 20°C至 50°C中进行，较好的是 20°C 至 40°C，优选是 25至 35°C。步骤（4 ) 中所述的反应时间是 3小时至 30小时。步骤（5 ) 中从反应混和物中得到罗库溴铵粗品的方法可以是将反应混和物减压蒸干得到；也可以是加入烷烃类有机溶剂（如戊烷、正己烷等）萃洗得到。步骤（6 )中所用极性有机溶剂为卤代烃类 (如二氯乙烷、二氯曱烷、三氯曱烷等)、酰胺类 (如 N，N-二曱基曱酰胺（DMF )、 N，N-二曱基乙酰胺 ( DMA )等)、醇类（如曱醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丁醇等）、酮类（如丙酮、曱基异丁基酮等）、环醚类（如四氢呋喃等）、含腈基类（如乙腈、丙腈、丁腈、异丁腈、戊腈、己腈等）、 DMSO 以及相似的溶剂或者它们的混合物。其中优选二氯曱烷、三氯曱烷、 DMF、 DMA, 异丙醇、丙酮、乙腈、 DMSO; 步骤（7 ) 中所用脱色剂为活性炭、硅胶、氧化铝以及与其相似的脱色剂或者它们的混合物；步骤（9 ) 中所用抗溶性有机溶剂为乙酸曱酯、乙酸乙酯、曱基叔丁基醚、曱醚、乙醚、正戊烷、正己烷、石油醚或它们的混和物，其中优选乙醚、曱基叔丁基醚、乙酸乙酯、乙酸曱酯。本发明提供了以上述式 m化合物组合物制备高纯度式 iv化合物的方法。这里所谓的高纯度式 IV化合物一般指式 IV化合物的纯度不低于 99.5%，不低于 99.6%，不低于 99.7%，不低于 99.8%，或不低于 99.9%。高纯度式 IV化合物所含杂质包括式 m化合物、式 IV-a化合物、式 IV-b化合物、式 IV-c化合物或其混合物，其中高纯度式 IV化合物所含杂质式 m化合物不超过 0.2%，较好的是不超过 0.15%，较好的是不超过 0.10%，较好的是不超过 0.05%，最好的是不超过 0.03%; 其中高纯度式 IV化合物所含杂质式 IV-a化合物不超过 0.2%，较好的是不超过 0.15%，较好的是不超过 0.10%，较好的是不超过 0.05%，最好的是不超过 0.03%; 其中高纯度式 IV化合物所含杂质式 IV-b化合物不超过 0.2%，较好的是不超过 0.15%，较好的是不超过 0.10%，较好的是不超过 0.05%，最好的是不超过 0.03%; 其中高纯度式 IV化合物所含式 IV-c化合物不超过 0.2%，较好的是不超过 0.15%，较好的是不超过 0.10%，较好的是不超过 0.05%，最好的是不超过 0.03%。

IV-b

按本发明的方法可以得到高收率制备高纯度式 IV化合物。所述高收率是高于 75 %，较好的是高于 76 %，较好的是高于 77 %，较好的是高于 78 %，较好的是高于 79 %，最好的是高于 80 %。本发明提供的制备高纯度式 IV化合物的方法，更加简便、成本更低、更适合工业化生产。本发明提供了以上述高纯度式 IV化合物制备高纯度罗库溴铵（式 I化合物）的方法。其中高纯度罗库溴铵一般指纯度不低于 99.5%，不低于 99.6%，不低于 99.7%，不低于 99.8%，或不低于 99.9%。高纯度罗库淡铵所含杂质包括杂质 A和杂质 F，其中高纯度罗库淡铵所含杂质 A不超过 0.1%; 其中高纯度式罗库淡铵所含杂质 F不超过 0.1%，其他欧洲药典规定的已知杂质未检出。

impurity A impurity 本发明提供了以高收率制备高纯度罗库溴铵的方法。该方法是以式 IV化合物为起始原料与烯丙基溴反应而得，所述高收率是高于 90% ,较好的是高于 91%，较好的是高于 92%，较好的是高于 93%，较好的是高于 94%，最好的是高于 95%。由于采用高纯度的式 IV 化合物为原料，使得工艺后处理简化，产品质量提高。在具体实施方案中，上述本发明以高收率制备高纯度罗库溴铵的方法，其过程包括：

(1)在至少一种含腈基的有机溶剂中，式 IV化合物与过量的烯丙基溴反应； (2)从步骤（ 1 ) 的反应混和物中得到罗库溴铵粗品；

( 3 )将步骤（ 2 )得到罗库溴铵粗品溶解在一种极性有机溶剂中形成溶液；

(4)将一种脱色剂加入步骤（3)得到的溶液中形成混悬液；

(5)将步骤（4)得到的混悬液过滤； (6)将步骤（ 5 )得到的滤液滴入至少一种抗溶性有机溶剂中，获得另一混悬液；

(7)从步骤（6)得到的混悬液中滤出固体；干燥得到的固体，得到高纯度的罗库淡铵 (式 I化合物）。其中，步骤（1) 中所述反应所用含腈基的有机溶剂为乙腈、丙腈或其混合物，其中优选乙腈。步骤（ 1 ) 中所述反应是在 20°C至 50°C中进行，较好的是 20°C 至 40°C，优选是 25至 35°C。步骤（1) 中所述的反应时间是 3小时至 30小时。步骤（2) 中从反应混和物中得到罗库溴铵粗品的方法可以是将反应混和物减压蒸干得到；也可以是加入烷烃类有机溶剂（如戊烷、正己烷等）萃洗得到。步骤（3 )中所用极性有机溶剂为代烃类 (如二氯乙烷、二氯曱烷、三氯曱烷等)、酰胺类 (如 N，N-二曱基曱酰胺（DMF )、 N，N-二曱基乙酰胺 ( DMA )等)、醇类（如曱醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丁醇等）、酮类（如丙酮、曱基异丁基酮等）、环醚类（如四氢呋喃等）、含腈基类（如乙腈、丙腈、丁腈、异丁腈、戊腈、己腈等）、 DMSO 以及相似的溶剂或者它们的混合物。其中优选二氯曱烷、三氯曱烷、 DMF、 DMA, 异丙醇、丙酮、乙腈、 DMSO; 步骤（4 ) 中所用脱色剂为活性炭、硅胶、氧化铝以及与其相似的脱色剂或者它们的混合物；步骤（6 ) 中所用抗溶性有机溶剂为乙酸曱酯、乙酸乙酯、曱基叔丁基醚、曱醚、乙醚、正戊烷、正己烷、石油醚或它们的混和物，其中优选乙醚、曱基叔丁基醚、乙酸乙酯、乙酸曱酯。本发明提供的制备高纯度罗库溴铵的方法，更加简便、成本更低、更适合工业化生产。本发明涉及的含量或纯度是用高效液相色谱 (HPLC)面积归一法测定的，每个组份的检测限不低于 0.02%，定量限不低于 0.05%。含量或纯度的数值是经测量数据四舍五入所得。总的来说，本发明提供了一种高纯度式 m化合物组合物，其纯度不小于 98.0%，单个杂质不大于 0.5%，满足后续反应的要求；同时提供了式 m化合物和式 IV化合物中主要杂质的结构，有利于产品安全性和质量的控制；本发明提供的制备该高纯度式 m化合物的方法简单易行，可控性强，适用于工业化放大。因此本发明有效解决了现有技术中的式 m化合物纯度不高，缺乏对单个杂质特别是异构体杂质的控制等不足之处。提供用本发明的式 m化合物组合物，即高纯度式 m化合物在制备朋药罗库溴铵中的应用是本发明的另一目的。具体实施方式下面的实施例仅仅展示实施本发明的优点，而不是对本发明范围的限制。实施例 1 实施例 la: 式 m化合物的 HPLC分析方法取本品适量，加 0.2%三氟乙酸的乙腈溶液制成每 1ml 中约含 7.0m 的溶液，作为供试品溶液，照高效液相色谱法（中国药典 2005 年版二部附录 VD )测定。用硅胶为填充剂，以 0.025mol L氢氧化四曱基铵溶液（取氢氧化四曱基铵五水合物 4.53g,加水 900ml使溶解，用磷酸调节 pH值为 7.4，用水稀释至 1000ml,摇匀，即得） -乙腈（ 10: 90 )为流动相，检测波长为 210nm，柱温 30 。理论板数按式 m化合物峰计算应不低于 2000。精密量取供试品溶液 10ul，注入液相色谱仪，记录色谱图至主峰保留时间的 3倍。实施例 lb: 式 IV化合物的 HPLC分析方法取本品适量，加 90:10 (乙腈-水）制成每 1ml中约含 3.0mg的溶液，作为供试品溶液，照高效液相色谱法（中国药典 2005年版二部附录 VD )测定。用硅胶为填充剂，以 0.025mol L氢氧化四曱基铵溶液（取氢氧化四曱基铵五水合物 4.53g，加水 900ml使溶解，用磷酸调节 pH值为 7.4，用水稀释至 1000ml, 摇匀，即得） -乙腈（25: 75 ) 为流动相，检测波长为 210nm，柱温 30 。理论板数按式 IV化合物峰计算应不低于 2000。精密量取供试品溶液 10ul，注入液相色谱仪，记录色谱图至主峰保留时间的 3倍。罗库溴铵（式 I化合物 ) 的 HPLC检测是按照欧洲药典 EP5.4 ( pp. 4013-4014 )上方法操作。实施例 2: 式 m化合物的制备将 120g式 m化合物粗品悬浮于 600ml三氯曱烷中，升温至回流，搅拌至固体全溶，加入 480ml丙酮，获得混悬液， 1个小时内冷至 0 至搅拌 1小时，过滤，滤饼用丙酮 100ml洗涤 1次， 50°C真空干燥 14小时，得到 115.2g式 m化合物。收率： 96%， m.p.220°C 至 222 °C， [a]_D ²⁰ + 86.8° ( c = 1.02 in CHC1₃ )。 HPLC纯度为： 99.2 %的式 m化合物， o.i5 %的杂质式 m-a化合物， 0.10 %杂质式 m-b化合物， 0.05 %的杂质式 m-c化合物， 0.08 %的杂质式 II化合物。质谱 [ESI-MS, m/z]中 MH+峰为 447。用 KBr压片法测得红外光谱主要吸收峰为 3427 cm ¹.2948 cm ¹. 2910 cm ¹, 2796 cm ¹, 1121 cm 1033 cm 1³C NMR(400MHz, CDC1₃) δ (ppm): 79.024, 67.446, 65.080,

63.712, 63.224, 55.979， 52.950， 48.993, 48.400, 43.536, 38.483, 38.392, 35.887, 34.631 , 34.324, 32.565, 31.713, 29.299， 28.161 , 23.276, 20.952, 16.723, 12.891；

^!H NMR(400MHz, CDC1₃) δ (ppm)： 4.099 (1H， s)， 3.837-3.895 (lH，m)， 3.648-3.747 (4H, m), 3.419 (IH, s), 3.365-3.388 (IH, d), 2.868-2.960 (IH, q), 2.588-2.744 (4H， m)， 2.412-2.564 (4H, m)， 1.865-1.926 (IH, m)， 1.798-1.847 (2H, m)， 1.711-1.761 (4H, m)， 1.652-1.692 (IH, m)， 1.490-1.586 (3H, m)， 1.409-1.468 (3H, m)， 1.218-1.392 (3H, m)， 1.076-1.209 (2H, m)， 0.871 (3H, s)， 0.730-0.851 (2H，m)， 0.697 (3H，s)。如实施例 2所述方法，选择不同的溶剂和抗溶性有机溶剂得到式 m化合物，结果详见下表 1:

表抗溶性有旋光式 m化合物式 m-a化合物式 m-b化合编号溶剂

机溶剂值 HPLC纯度含量物含量实施例 3 DMF 乙酸乙酯 +87.0° 99.5 % 0.10 % 0.10 % 实施例 4 DMA 曱醇 +86.3° 99.0 % 0.25 % 0.19 % 实施例 5 DMSO 乙腈 +87.0° 99.1 % 0.15 % 0.12 % 实施例 6 二氯曱烷四氢呋喃 +86.5° 99.3 % 0.12 % 0.14 % 实施例 7 二氯乙坑正己烷 +85.4° 98.5 % 0.26 % 0.20 %

实施例 8: 式 IV化合物的制备将 80g( 0.179mol )式 m化合物悬浮于 800ml丙酮中，加入 149ml 三乙胺（ 1.074mol )和 27ml乙酸酐（0.286mol )，加热至回流，回流搅拌反应 5小时。将反应液冷至至搅拌 2小时，过滤，用 100ml 丙酮洗涤，所得湿的粗品用 800ml乙腈于回流（80°C左右）下溶解，将反应液冷却至至搅拌 2小时，过滤，用 100ml乙腈洗涤，产品于减压干燥 24小时以上得到 70.4g白色粉末状固体式 IV化合物。熔点： 153.9 至 155.4 ， [a]_D ²⁰ + 54.6° ( c = 1.03 in CHC1₃ )，收率： 80.5%， HPLC纯度为： 99.9 %的式 IV化合物，杂质式 m化合物未检测到， 0.02 %的杂质式 IV-a化合物，杂质式 IV-b化合物未检测到， 0.01 %的杂质式 IV-c化合物。质谱 [ESI-MS, m/z]中 MH+峰为 489。用 KBr压片法测得红外光谱主要吸收峰为 3452 cm ¹.2933 cm ¹. 2848 cm ¹, 2802 cm ¹, 1736 cm ¹, 1292 cm ¹, 1241 cm 1116 cm ¹, 1057 cm ¹, 1024 cm ¹。

¹³C NMR(400MHz, CDC1₃) δ (ppm): 170.637, 81.432, 67.250,

64.996, 64.284, 63.656, 55.561 , 52.978, 49.091 , 48.002, 43.648,

38.399, 37.883, 35.768, 34.184, 33.982, 32.363, 31.372, 30.108, 27.924, 23.422, 21.112， 20.533, 16.199, 13.575； !H NMR(400MHz, CDC1₃) δ (ppm): 4.807-4.830 (1H， d)，

3.829-3.885 (IH, m), 3.635-3.732 (4H，m)， 3.000 (IH, s), 2.529-2.639 (7H, m), 2.403-2.483 (3H, m), 2.119 (3H, s), 1.645-1.900 (8H, m), 1.398-1.579 (8H, m)， 1.082-1.381 (3H, m)， 0.907-1.006 (1H, m)， 0.884 (3H，s)， 0.853 (3H, s) , 0·701~0·791 (1H， m)。实施例 9: 式 IV化合物的制备如实施例 8 所述方法，用乙酰氯作为乙酰化试剂得到式 IV化合物，熔点： 152.5 至 154.0 C [a]_D ²⁰ + 55.2° ( c = 1.03 in CHC1₃ )，收率： 78.2%， HPLC纯度为： 99.9 %的式 IV化合物，杂质式 m化合物未检测到， 0.03 %的杂质式 IV-a化合物，杂质式 IV-b化合物未检测到， 0.01 %的杂质式 IV-c化合物。实施例 10: 式 IV化合物的制备如实施例 8所述方法，用吡啶作为催化剂得到式 IV化合物，熔点：

153.0 至 154.3 C [a]_D ²⁰ + 55.6° ( c = 1.03 in CHC1₃ )，收率： 76.2% , HPLC纯度为： 99.9 %的式 IV化合物，杂质式 m化合物未检测到， 0.04 %的杂质式 IV-a化合物，杂质式 IV-b化合物未检测到， 0.02 %的杂质式 IV-c化合物。实施例 11: 式 IV化合物的制备如实施例 8所述方法，用 4-二曱氨基吡啶作为催化剂得到式 IV化合物，熔点： 154.0 至 155.6 ， [a]_D ²⁰ + 53.8° ( c = 1.03 in CHC1₃ )，收率： 77.8%， HPLC纯度为： 99.9 %的式 IV化合物， 0.02 %的杂质式 m化合物， 0.01 %的杂质式 IV-a化合物，杂质式 IV-b化合物未检测到， 0.02 %的杂质式 IV-c化合物。实施例 12: 式 IV化合物的制备如实施例 8所述方法，用乙腈作为反应溶剂得到式 IV化合物，熔点： 154.2 至 155.5 C [a]_D ²。 + 53.4° ( c = 1.03 in CHC1₃ )，收率： 76%, HPLC纯度为： 99.9 %的式 IV化合物， 0.03 %的杂质式 m化合物， 0.03 %的杂质式 IV-a化合物，杂质式 IV-b化合物未检测到， 0.01 %的杂质式 IV-c化合物。实施例 13: 罗库溴铵（式 I化合物 )的制备将 30g ( 0.0614mol )式 IV化合物溶于 300ml乙腈中，加入 21.3ml ( 0.2456mol )烯丙基溴，搅拌反应 30小时，加入 300ml戊烷萃洗，分出戊烷层，再加入 300ml 戊烷萃洗，分出戊烷层，乙腈层搅拌下滴入 2250ml无水乙醚中，所得混悬液搅拌 15分钟，过滤，所得固体于减压干燥至少 55小时，得到 35.7g白色粉末状固体罗库溴铵。 [a]_D ²° + 31.4° ，收率： 95.4%， HPLC纯度为： 99.8 %的罗库淡铵， 0.08 %的杂质 A， 0.03 %的杂质 F。质谱 [ESI-MS, m/z] ： [M+1-Br]+为 529.3 用 KBr压片法测得红外光谱主要吸收峰为 3415«11人 2927 cm ¹.

2853 cm ¹, 1748 cm ¹, 1632 cm ¹, 1451 cm ¹, 1375 cm ¹, 1222cm ¹、 1119 cm ¹, 1065 cm ¹, 1024 cm ¹。

¹³C NMR(400MHz, CDC1₃) δ (ppm): 168.6, 128.5， 126.1, 78.1, 67.3, 65.3, 65.2， 63.9, 55.1， 49.5， 47.0, 45.4， 38.5, 37.8, 36.0, 34.0, 33.8, 32.5, 31.4, 28.4, 27.8, 24.4, 24.1, 21.1, 20.8, 15.9, 13.6 。

^!H NMR(400MHz, CDC1₃) δ (ppm): 6.16 (1H， s， =CH)， 5.73 (2H， d，=CH₂)， 5.26 (1H， m, 17 -H), 4.58 (1H， m, 16 -H), 4.37-4.16 (2H，

3.90 (4H， m, 2，，5，）， 3.89 (IH, m, 3 β -H)， 3.70 (4H， m, 2"， 6，，）， 2.46-2.61 (4H， m, 3，，，5，，）， 2.55 (1H， m, 2 -H), 2.28 (4H， m, 3，，4，）， 2.25 (2H， s，15 o )， 2.23 (3H, S,17 β -CH₃)， 0.87 (3H, s，19-CH₃)， 0.83 (3H, s，18-CH₃)。实施例 14: 罗库淡铵 (式 I化合物）的制备将 30g ( 0.0614mol ) 式 IV化合物溶于 150ml 乙腈中，加入 90ml ( 1.0400mol )烯丙基溴，搅拌反应 4小时，减压蒸干，得到罗库溴铵粗品，将粗品用二氯曱烷溶解，再加入 60g氧化铝，室温搅拌 2h，过滤，搅拌下，将滤液滴入 2250ml曱基叔丁基醚中，所得混悬液搅拌 15分钟，过滤，所得固体于减压干燥至少 55小时，得到 34.5g白色粉末状固体罗库溴铵。 [a]_D ^2G + 31.0° ，收率： 92.3%， HPLC纯度为：99.8 %的罗库溴铵， 0.05 %的杂质 A， 0.04 %的杂质 F。实施例 15: 罗库溴铵（式 I化合物 )的制备如实施例 14所述方法，用丙腈作为反应溶剂，粗品用乙腈溶解，用硅胶作为脱色剂得到罗库溴铵。 [a]_D ^2G + 29.7° ，收率： 91.2%， HPLC纯度为： 99.7 %的罗库淡铵， 0.1 %的杂质 A， 0.09 %的杂质 F。实施例 16: 罗库溴铵（式 I化合物）的制备如实施例 14所述方法，粗品用丙酮溶解，用活性炭作为脱色剂得到罗库淡铵。 [a]_D ²° + 30.9° ，收率： 91.3%, HPLC纯度为： 99.7 %的罗库淡铵， 0.09 %的杂质 A， 0.06 %的杂质 F。

Claims

权利要求

1、一种高纯度的（2β，3α，5α，16β，17β)-2-(4-吗啉基 )-16-(1-吡咯烷基) -雄甾烷 -3,17-二醇（式 III化合物），其纯度大于或等于 98%。

2、一种式（ m )化合物的高纯度组合物，其中式（ m )化合物的含量不小于 98%，并且任何一个单个杂质的含量不超过 0.5%HPLC百分面积。

3、如权利要求 2所述的高纯度组合物，所述的杂质包括式 m -a化合物、式 m-b化合物、式 m-c化合物和 /或式 Π化合物

4、如权利要求 3所述的高纯度组合物，其中任何一个所述杂质的含量不超过 0.3%HPLC百分面积。

5、一种制备高纯度式 m化合物或其高纯度组合物的方法，包括：

(2) 升温至固体全溶；

(3)加入至少一种抗溶性有机溶剂，获得第二混悬液； (4) 冷却第二混悬液使固体沉淀，从第二混悬液中滤出固体，干燥所得固体，获得高纯度的式 m化合物。

6、如权利要求 5所述的方法，其中在步骤（ 1 )的式 m化合物粗品中，式 m-a化合物的量不超过 2%HPLC百分面积，式 m-b化合物的量不超过 10%HPLC百分面积，式 m-c化合物的量不超过 2% HPLC百分面积，式 II化合物的量不超过 2% HPLC百分面积。

7、如权利要求 5所述的方法，其中步骤（ 1 )的有机溶剂为二氯乙烷、二氯曱烷、三氯曱烷、 DMF、 DMA. DMSO以及与其相似的溶剂或者它们的混合物。

8、如权利要求 5所述的方法，其中步骤（2)的全溶温度一般为 0°C至溶液沸点，优选为 20°C ~80°C。

9、如权利要求 5所述的方法，其中步骤（3)的抗溶性有机溶剂为曱醇、丙酮、四氢呋喃、乙酸乙酯、正己烷、乙腈以及与其相似的溶剂或者它们的混合物。

10、根据权利要求 1 的高纯度的式 m化合物或根据权利要求 2-4中任意一项的式（ m )化合物的高纯度组合物在制备罗库溴铵中的应用。

11、一种以根据权利要求 1 的高纯度的式 m化合物或根据权利要求 2-4中任意一项的式（ m )化合物的高纯度组合物为起始原料制备罗库淡铵的方法，包括：

I

(1) 在至少一种有机溶剂中，用至少一种酰化试剂在至少一种催化剂的作用下，选择性的乙酰化式 m化合物，得到含式 IV化合物；

(2) 在至少一种含腈基的有机溶剂中，式 IV化合物与过量的烯丙基溴反应；

( 3 ) 从步骤（ 2 ) 的反应混和物中得到罗库淡铵粗品；

( 4 ) 将步骤（ 3 )得到罗库淡铵粗品溶解在一种极性有机溶剂中形成溶液；

(5) 将一种脱色剂加入步骤（4)得到的溶液中形成混悬液；

(6) 将步骤（5)得到的混悬液过滤；

( 7 ) 将步骤（ 6 )得到的滤液滴入至少一种抗溶性有机溶剂中，获得另一混悬液； ( 8 ) 从步骤（7 )得到的混悬液中滤出固体；干燥得到的固体，得到高纯度的罗库溴铵（式 I化合物）。

12、如权利要求 11所述的方法，其中步骤（ 1 )的有机溶剂为丙酮、乙腈以及与其相似的溶剂或者它们的混合物。

13、如权利要求 11所述的方法，其中步骤（ 1 )的乙酰化试剂为乙酰氯或乙酸酐。

14、如权利要求 11所述的方法，其中步骤（ 1 )的催化剂为三乙胺、吡啶、 4-二曱氨基吡啶、碳酸钠、碳酸氢钠或者它们的混合物。

15、如权利要求 11所述的方法，其中步骤（2 )的含腈基的有机溶剂为乙腈、丙腈以及与其相似的溶剂或者它们的混合物。

16、如权利要求 11所述的方法，其中步骤（4 )的极性有机溶剂为二氯曱烷、三氯曱烷、 DMF、 DMA. 异丙醇、丙酮、乙腈、 DMSO以及与其相似的溶剂或者它们的混合物。

17、如权利要求 11所述的方法，其中步骤（5 )的脱色剂为活性炭、硅胶和氧化铝以及与其相似的脱色剂或者它们的混合物。

18、如权利要求 11所述的方法，其中步骤（7 )的抗溶性有机溶剂为乙酸曱酯、乙酸乙酯、曱基叔丁基醚、曱醚、乙醚、正戊烷、正己烷、石油醚或它们的混和物。