WO2012067447A2 - 스티락스리그놀리드 ａ 또는 이의 비당체를 유효성분으로 함유하는 천식의 예방 또는 치료용 조성물 - Google Patents

스티락스리그놀리드 ａ 또는 이의 비당체를 유효성분으로 함유하는 천식의 예방 또는 치료용 조성물 Download PDF

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    • A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs

Definitions

  • composition for the prevention or treatment of asthma containing Styrax lignolide A or its non-saccharide as an active ingredient
  • the present invention relates to a composition for the prevention or treatment of asthma, which contains Styrax lignolide A or its non-saccharide as an active ingredient.
  • Allergic diseases whose incidence is increasing worldwide include anaphyl axis, allergic rhinitis, and asthma, atopic dermatitis and urticaria (urt icar ia). Wuthrich B. Int. Arch. Allergy Appl. Iun unol., 90, pp 3-10, 1989).
  • asthma is estimated to be suffering from about 3 million people in Korea, and it is a chronic inflammatory respiratory disease characterized by wheezing wheezing, coughing, or stuffy chest. Increasing air pollution and westernization of diet have led to a sharp increase in patients. Asthma is the most common disease in developed countries of the United States and Britain. It is estimated that there are 20% to 303 ⁇ 4 of the population, 16% of elementary school children in Korea, 5% of adults, and more than 4 million patients. It is a disease common to all ages, from the elderly to the elderly. It is a common disease that affects 10% of the population.
  • asthma is recognized as a chronic inflammatory disease caused by the proliferation, differentiation, and activation of inflammatory cells by interleukin-4, 5, and 13 produced by TH2 type immune cells, invasion and invasion into airway and airway tissues (Elias JA).
  • inflammatory cells such as activated eosinophils, mast cells, and alveolar macrophages secrete various inflammatory mediators (cysteine leukotriene, prostaglandin, etc.) and a strong bronchial contraction plays an important role in the process (Maggi E., Iwmuno t). echno 1 ogy, 3, pp233-244, 1998; Pawankar R., Curr.Opin.Allergy Clin.Immunol., 1, pp3-6, 2001; Barnes PJ, et al., Pharmacol Rev., 50, pp515—596 , 1998).
  • cytokines and immunoglobulin E such as IL-4, IL-5 and IL-13, which are involved in inflammatory cell activation, and their action, the cysteine leukotriene biosynthesis secreted from inflammatory cells such as eosinophils is associated with inflammatory and allergic reactions.
  • IL-4, IL-5 and IL-13 which are involved in inflammatory cell activation, and their action, the cysteine leukotriene biosynthesis secreted from inflammatory cells such as eosinophils is associated with inflammatory and allergic reactions.
  • corticosteroids may increase collagen synthesis (Warshmana GS, et al., Am J Physiol 274, 499-507, 1998).
  • beta-2 agonists are not known to inhibit airway reconstitution (Jeffery PK, et al., Am Rev Respir Dis 145: 890-0, 1992), salmeterol and fort It has also been warned that long-acting beta-2 agonists, such as formeterol, can prevent asthma attacks and kill asthma patients.
  • the bark is dark brown, the leaves are alternate, egg-shaped or long oval, with a sharp tip.
  • the fruit is a nucleus, which is opened in September, elliptical in shape, and when it is ripe, its shell splits irregularly.
  • the components of the bamboo tree have about 10% of ego saponin in the fruit bark, the seeds contain various kinds of glycerides, fatty oils and egonoles, and the flowers contain saponin.
  • the bamboo medicinal plant is called maemae, japonica and medicinal. In oriental medicine, it is used for insect repellent, flesh layer, excitable expectorant, laryngitis, antiseptic, etc. It is known.
  • the present inventors have an interest in herbal medicines in consideration of in vivo side effects and safety, and among them, long-term use is possible, while research on the development of an asthma treatment agent that inhibits airway reconstitution, styraks isolated from the bamboo tree Lignolide (Styraxlignolide A) or its non-saccharide homomoegonol has superior airway hyperinflammation inhibitory effect, bronchial inflammatory cell invasion inhibitory effect, and airway remodeling in the asthma induction model than drugs currently widely used as an asthma treatment agent.
  • the present invention has been completed.
  • the present invention is to prevent the asthma containing a styrex lignolide A compound represented by the following formula (1), a non-saccharide thereof or a pharmaceutically acceptable salt thereof represented by the formula (2) as an active ingredient and Provided are therapeutic pharmaceutical compositions:
  • the present invention is for preventing and improving asthma containing Styraxlignolide A compound of Formula 1, a non-saccharide thereof, or a pharmaceutically acceptable salt thereof of Formula 2 as an active ingredient.
  • a composition for health food is provided.
  • the present invention discloses a novel effect on asthma of Styraxlignolide A compound or its non-saccharide homomoegonol, which is not known in the prior art, and according to the present invention, Styrax lignolide A of the present invention.
  • homoenol is superior to dexamethasone or montelukast, which is currently widely used as an asthma medication in asthma-induced models, to inhibit airway hyperresponsiveness, to inhibit endobronchial inflammatory cell infiltration, and to airway remodeling (bronchial epithelial cell thickening, mucus secretion cells).
  • Hyperproliferation, fibrosis progression has been shown to have an inhibitory effect of progression, styraks lignolide A or homoenol of the present invention is low toxicity and shows steroid resistance, when airway remodeling is progressed, or long-term asthma treatment Useful for the prevention or treatment of bronchial asthma, such as when use is required Can be used.
  • NC normal control group
  • CVA asthma induction group
  • OVA asthma induction group
  • Styraxl ignol ide This is a graph showing the weight measurement result for A) (hereinafter: #: when statistical significance was recognized as compared to the normal control group (NC) (p ⁇ 0.05), *: statistical significance compared to asthma induction group (OVA)). Admitted (p ⁇ 0.05)).
  • FIG. 2 is a graph showing Penh (enhanced pause) values of airway resistance for each experimental group.
  • Figure 3 is a graph showing the number of inflammatory cells in bronchoalveolar lavage fluid for each experimental group.
  • Figure 4 is a graph showing the concentration of egg white albumin specific IgE in serum or bronchoalveolar lavage fluid for each experimental group.
  • 5 is a graph showing the amount of free radicals generated in bronchoalveolar lavage fluid for each experimental group
  • FIG. 6 is a graph measuring the toxicity of the liver in each experimental group (hereinafter, **: when statistical significance was recognized as compared to dexamethasone administration group (DEXA) (p ⁇ 0.05)).
  • Figure 7 is a diagram showing the inflammatory cell infiltration and inflammation index in the airway mucosa for each experimental group.
  • FIG. 8 is a diagram showing the ratio of goblet cells for each experimental group.
  • FIG. 9 is a diagram showing the subbasement fibrosis site for each experimental group. 10 shows normal control group (SAL + SAL), asthma induction group (0VA + SAL), asthma induction group with dexamethasone (OVA + Dex), asthma induction group with montelukast (0VA + M) and 7.5 mg / kg Asthma induction group (0VA + hE7.5) administered with homomoegonol (0VA + hE7.5), asthma induction group (0VA + hE15) administered with 15 mg / kg of homoegonol and 30 mg / kg homoegonol administered It is a graph showing the weight measurement results for asthma induction group (OVA + hE30).
  • FIG. 11 is a graph showing Penh (enhanced pause) values of airway resistance for each experimental group.
  • Figure 13 is a graph showing the concentration of egg white albumin specific IgE in bronchoalveolar lavage fluid for each experimental group.
  • FIG. 15 is a graph showing the concentration of TGF ⁇ ⁇ in bronchoalveolar lavage fluid for each experimental group.
  • Figure 16 is a graph showing the concentration of IL-17 in bronchoalveolar lavage fluid for each experimental group.
  • 17 is a diagram showing inflammatory cell infiltration and inflammation index in the airway mucosa for each experimental group.
  • 18 is a diagram showing the rate of goblet cells for each experimental group.
  • Figure 19 is a diagram showing the subbasement fibrosis site for each experimental group.
  • 20 is a diagram illustrating a process for preparing homoenol.
  • extract has the meaning commonly used in the art as a crude extract, but broadly includes the following fractions.
  • fraction refers to an active fraction obtained by fractionating the activity desired in the present invention using a solvent different from the solvent used for extraction.
  • prevention means any action that inhibits asthma or delays progression by administration of a composition of the present invention.
  • treatment and “improvement” refer to all actions in which the symptoms of asthma are improved or beneficially altered by administration of a composition of the present invention.
  • administration means providing a subject with a composition of the present invention in any suitable manner.
  • the term "individual” means any animal, such as a human, monkey, dog, goat, pig, or rat, having a disease in which the symptoms of asthma may be improved by administering the composition of the present invention.
  • the invention is explained in detail.
  • the present invention provides a pharmaceutical composition for preventing and treating asthma containing Styraxlignolide A compound, a non-saccharide thereof, or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.
  • the styrex lignolide A compound is preferably represented by the following Chemical Formula 1, but is not limited thereto.
  • the styrex lignolide A compound is preferably used to be separated from the deadwood (5 ⁇ ' S / ca), but is not limited to this, can be used chemically synthesized.
  • the bamboo can be used for the outpost, it is more preferred to use the fungi and wood quality, but is not limited thereto.
  • the asthma is preferably asthma advanced airway remodeling is not limited thereto.
  • the present invention includes not only the compound represented by Formula 1, the compound represented by Formula 2, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, but also all possible solvates and hydrates that can be prepared therefrom.
  • the compound of the present invention may be used in the form of a pharmaceutically acceptable salt, and as the salt, an acid addition salt formed by a pharmaceutically acceptable free acid is useful.
  • Acid addition salts include inorganic acids such as hydrochloric acid, nitric acid, phosphoric acid, sulfuric acid, hydrobromic acid, hydroiodic acid, nitrous acid or phosphorous acid, aliphatic mono and dicarboxylates, phenyl-substituted alkanoates, hydroxy alkanoates and alkanes. Obtained from non-toxic organic acids such as dioates, aromatic acids, aliphatic and aromatic sulfonic acids.
  • These pharmaceutically toxic salts include sulfate, pyrosulfate, bisulfate, sulfite, bisulfite, nitrate, phosphate, monohydrogen phosphate, dihydrogen phosphate, metaphosphate, pyrophosphate chloride, bromide and iodide.
  • the acid addition salts according to the present invention are dissolved in conventional methods, for example, by dissolving the compound of the present invention in an excess of aqueous acid solution and dissolving the salt with a miscible organic solvent such as methanol, ethanol, acetone or acetonitrile. It can be prepared by precipitation using.
  • a miscible organic solvent such as methanol, ethanol, acetone or acetonitrile.
  • An acid or an alcohol in the compound and water represented by the same formula (1) or (2) is heated, and then the mixture is evaporated to dryness or precipitated salt. It may also be prepared by suction filtration.
  • Bases can also be used to make pharmaceutically acceptable metal salts.
  • Alkali metal or alkaline earth metal salts are obtained, for example, by dissolving the compound in an excess of alkali metal hydroxide or alkaline earth metal hydroxide solution, filtering the compound salt at no cost, and evaporating and drying the filtrate. At this time, it is pharmaceutically suitable to prepare sodium, potassium or calcium salt as the metal salt.
  • Corresponding silver salts are also obtained by reacting alkali or alkaline earth metal salts with a suitable negative salt (eg, silver nitrate).
  • the styrex lignolide A compound represented by Formula 1 is preferably separated by the following method, but is not limited thereto.
  • step 2) further extracting the extract of step 1) by adding nucleic acid and ethyl acetate in sequence;
  • 3) may be prepared by a method comprising the step of separating the ethyl acetate layer in step 2) and performing column chromatography on the remaining aqueous solution layer to obtain the compound represented by Chemical Formula 1, but is not limited thereto.
  • step 1) Is extracted with water, lower alcohol of d ⁇ C 2 or a mixed solvent thereof.
  • the dead wood can be used without limitation, such as cultivated, harvested or commercially available.
  • the deadwood is preferably one using a stem and a bark, but is not limited thereto.
  • the extraction solvent is preferably water, alcohol or a mixture thereof, preferably d-C 2 lower alcohol or a solvent selected from a mixture of these solvents, the lower alcohol More preferably, it is silver ethane or methane, and most preferably, but not limited to, methanol.
  • the amount of the extraction solvent is preferably 1 to 50 times the specific dry weight, but is not limited thereto.
  • the extraction method may be any conventional extraction method such as hot water extraction, immersion extraction, reflux angle extraction and ultrasonic extraction can be used, once to It can be extracted five times.
  • the temperature at the time of extraction is preferably 10 ° C to 100 o C and more preferably room temperature, but is not limited thereto.
  • the extraction time is preferably 1 day to 7 days, more preferably 3 days, but is not limited thereto.
  • the method for preparing the bamboo shoot extract is a method using an extraction device such as supercritical extraction, subcritical extraction, high temperature extraction, high pressure extraction or ultrasonic extraction or adsorption including XAD and HP-20
  • an extraction device such as supercritical extraction, subcritical extraction, high temperature extraction, high pressure extraction or ultrasonic extraction or adsorption including XAD and HP-20
  • extraction methods in the art such as a method using a resin may be used, it is preferable to be heated and extracted at reflux or phase silver, but is not limited thereto.
  • the extraction number is preferably 1 to 5 times, more preferably 4 times, but is not limited thereto.
  • the concentration of the obtained extract is preferably a vacuum rotary evaporator of reduced pressure, but is not limited thereto.
  • the drying is preferably dried under reduced pressure, vacuum drying, boiling drying, spray drying, room temperature drying or lyophilization.
  • step 2) is a step of obtaining a water fraction by adding an organic solvent from the extract obtained in step 1).
  • the organic solvent is preferably nucleic acid or ethyl acetate, but is not limited thereto.
  • the fraction is preferably any one of a nucleic acid fraction, ethyl acetate fraction, or water fraction obtained by suspending the bamboo shoots in water, followed by systematic fractionation with nucleic acid, ethyl acetate, and most preferably water fraction. It is not limited to this.
  • the fraction may be obtained by repeating the fractionation process from 1 to 5 times, preferably 3 times, from the deadwood extract, and preferably concentrated under reduced pressure after the fraction, but is not limited thereto.
  • step 3) is to separate the cetyl acetate layer in step 2) and sequentially perform Diaion HP-20 column chromatography and RP C-18 column chromatography on the remaining aqueous solution layer of the styrex lignolide of Formula 1 A compound is obtained.
  • the chromatography is preferably carried out using methane as a solvent, but is not limited thereto.
  • the therapeutically effective amount of the composition of the present invention may vary depending on several factors, for example, the method of administration, the target site, the condition of the patient, and the like. Therefore, when used in humans, the dosage should be determined in an appropriate amount in consideration of safety and efficiency. It is also possible to estimate the amount used in humans from an effective amount determined through animal testing. These considerations in determining the effective amounts are given in, for example, Hardman and Limbird, eds. , Goodman and Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics, 10th ed. (2001), Pergamon Press; And EW Martin ed. , Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th ed. (1990), Mack Publishing Co.
  • compositions of the present invention may also include carriers, diluent excipients or combinations of two or more commonly used in biological agents.
  • Pharmaceutically acceptable carriers are not particularly limited as long as they are suitable for in vivo delivery of the composition, for example, Merck Index, 13th ed., Merck & Co. Inc., saline solution, sterile water, Ringer's solution, saline solution, dextrose solution, maltodextrin solution, glycerol, ethanol and one or more of these components may be mixed and used. And other conventional additives may be added.
  • diluents such as aqueous solutions, suspensions, emulsions, pill capsules, granules or tablets. Further in the field . Using a method disclosed in an appropriate way or Remington's Pharmaceutical Science (Mack Publishing Company , Easton PA, 18th, 1990) can be preferably formulated according to ⁇ or components for each disease.
  • composition of the present invention may further contain one or more active ingredients exhibiting the same or similar functions.
  • the composition of the present invention may comprise 0.0001 to 10% by weight of the compound, preferably 0.001 to 1% by weight, based on the total weight of the composition.
  • compositions of the present invention can be administered parenterally (eg, intravenously, subcutaneously, intraperitoneally or topically) or orally, depending on the desired method, and the dosage is based on the patient's weight, age, sex, health status, The range varies depending on the diet, the time of administration, the method of administration, the rate of excretion and the severity of the disease.
  • the daily dosage of the composition according to the present invention is 0.0001 to 10 mg / me, preferably 0.0001 to 5 mg / m, and more preferably, administered once or several times a day.
  • the bamboo tree C? .Ya / 3 ⁇ 4M / c Sieb the bamboo tree C? .Ya / 3 ⁇ 4M / c Sieb.
  • methanol extract Stem and bark of Et were extracted with 100% methanol to prepare methanol extract. This was further suspended in water, followed by nucleic acid to separate the nucleic acid layer, ethyl acetate was added to the remaining water layer to separate the ethyl acetate layer, and the remaining water layer was eluted with an active fraction using column chromatography. Lignolide A was isolated. Then, homomoeol, a non-saccharide (aglycone) from which saccharides were removed from the styrex lignolide A, was prepared (see FIG. 20).
  • the inventors of the present invention in order to determine the weight loss inhibitory effect of the isolated styrex lignolide A or homoenol in the asthma-induced mice, the asthma treatment drug administration group of the normal control group, asthma induction group, asthma induction group (Texametason Or montelukast), and the weight change of the styrex lignolide A or homoenol administration group.
  • an asthma induction group 21.04 ⁇ 0.34 g orally administered Styrax lignolide A
  • an asthma induction group 22.10 ⁇ 0.13 g (7.5 mg / kg), orally administered homoenol, 21.23 ⁇ 0 43 g (15 mg / kg), and 21.98 ⁇ 0.47 g (30 mg / kg) ⁇
  • DEXA dexamethasone
  • styraks lignolide A or homoenol effectively inhibits weight loss by asthma (Figs. 1 and 10). Reference).
  • the present inventors measured the airway resistance PenMenhanced pause (PenMenhanced pause) value to determine whether airway hypersensitivity due to asthma in response to the administration of styraks liglide A or homoenol.
  • PenMenhanced pause airway resistance
  • the moderate Pehn level was increased with increasing methacholine concentration
  • the asthma induction group showed a significantly increased Pehn level
  • the dexamethasone and montelukast groups were significantly higher than the asthma induction group.
  • the styraks lignolide A or homoenol-administered group showed significantly lower pehn levels than the comparative drug group in all concentrations of methacholine (FIG. 2, Table 1). And FIG. 11).
  • the present inventors analyzed the number of inflammatory cells in the bronchoalveolar lavage fluid following administration of Styrax Ligliolide A or Homoenol. The number of eosinophils was significantly decreased in the drug-treated group compared to the asthma-induced group, It was confirmed that the lead A or homoenol administration group most strongly inhibits eosinophil infiltration.
  • the total number of inflammatory cells was significantly decreased in the drug-administered group compared to the asthma inducing group (see FIGS. 3, 4 and 14).
  • serum total IgE concentration was significantly decreased in the homoenol-administered group compared to the asthma-induced group (see Table 2 and FIG. 12).
  • the egg white albumin-specific IgE concentration in the alveolar lavage was significantly decreased in the styraks lignolide A or homoenol administration group compared to the asthma induction group (see FIG. 4, Table 3 and FIG. 13).
  • TGF- ⁇ and IL-17 in bronchoalveolar lavage fluid were also significantly inhibited in the homoenol administration group (see Table 5, Figures 15 and 16).
  • the present inventors measured the amount of free radicals generated from the bronchoalveolar lavage fluid, and the free radicals generated in the Styrax lignolide A-administered group decreased by 27.90% compared to the asthma-induced group, which was significantly superior to the dexamethasone or montelukast-administered group. It showed an oxygen production inhibitory effect (see FIG. 5). '
  • the present inventors measured alanine aminotransferase (ALT) and aspartate aminotransferase (AST) in serum to evaluate the toxicity of the styrex lignolide A to the liver.
  • ALT alanine aminotransferase
  • AST aspartate aminotransferase
  • styraks lignolide A or homoenol showed better anti-respiratory reactions than dexamethasone, which is currently widely used as an asthma treatment agent in egg white albumin-induced asthma-induced animal models, and invasion of bronchial inflammatory cells. And significantly inhibited the progression of airway remodeling (bronchoepithelial cell thickening, mucosecreting cell hyperproliferation and fibrosis), but the toxicity to the liver is much lower than that of dexamethasone, so that the styrex lignolide A compound, its non-saccharide homoego Known or a pharmaceutically acceptable salt thereof may be usefully used as an active ingredient of a pharmaceutical composition for preventing and treating asthma.
  • the present invention provides a method of treating asthma comprising administering to a subject a pharmaceutical composition comprising a pharmaceutically effective amount of a styrex lignolide A compound, a non-saccharide thereof, or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.
  • a pharmaceutical composition comprising a pharmaceutically effective amount of a styrex lignolide A compound, a non-saccharide thereof, or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.
  • the present invention comprises administering to a subject with asthma a pharmaceutical composition comprising a pharmaceutically effective amount of Styrax Lignolide A compound, a non-saccharide thereof, or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.
  • a pharmaceutical composition comprising a pharmaceutically effective amount of Styrax Lignolide A compound, a non-saccharide thereof, or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.
  • the pharmaceutically effective amount is 0.00001 to 10 mg / kg, preferably
  • Dosage may vary depending on the weight, age, sex, health condition, diet, duration of administration, rate of administration, elimination rate, and severity of the particular patient.
  • the subject is a vertebrate and preferably a mammal, more preferably an experimental animal such as a rat, rabbit, guinea peak, hamster, dog or cat, and most preferably an ape-like animal such as a chimpanzee or gorilla.
  • an experimental animal such as a rat, rabbit, guinea peak, hamster, dog or cat
  • an ape-like animal such as a chimpanzee or gorilla.
  • the method of administration may be administered orally or parenterally, and parenteral administration, intraperitoneal injection, rectal injection, subcutaneous injection, intravenous injection, intramuscular injection, intrauterine dural injection, cerebrovascular ( ⁇ ⁇ ⁇ ( 51 ⁇ 1131 " ) injection or intrathoracic injection.
  • the asthma is preferably, but not limited to, asthma with advanced airway remodeling. Do not.
  • Styrax Ligliolide A or its non-saccharide homoenol reduces the weight loss and airway hypersensitivity in the asthma-induced mouse model, inhibits the production of free radicals in the airways and the infiltration of inflammatory cells in the bronchus, and inflammation in the mucosa. While showing the effect of inhibiting cell invasion, goblet cell ratio and subbasement fibrosis (subepithelialfibrosis), it was confirmed that the toxicity to the liver is significantly lower than the conventional asthma treatment, it can be useful for the prevention or treatment of asthma.
  • the present invention provides a composition for preventing and improving asthma containing styrex lignolide A compound, a non-saccharide thereof or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.
  • the styrex lignolide A compound is preferably represented by the following Chemical Formula 1, but is not limited thereto.
  • the non-saccharide of the styrex lignolide A compound is preferably described by the following Chemical Formula 2, but is not limited thereto.
  • the styrex lignolide A compound is preferably used as the one which is isolated from the bamboo tree (5yr ⁇ , but is not limited thereto, and chemically synthesized may be used.
  • the bamboo can be used for the outpost, it is more preferred to use the fungi and wood quality, but is not limited thereto.
  • the asthma is preferably asthma advanced airway remodeling is not limited thereto.
  • the styrex lignolide A compound of the present invention or its non-saccharide can be added as it is or used with other food or food ingredients, and can be suitably used according to a conventional method. '
  • composition for health food of the present invention includes ingredients that are commonly added during food production, and include, for example, proteins, carbohydrates, fats, nutrients and seasonings.
  • styraks lignolide A compound or its non-saccharides include dairy, including meat, sausage, bread, chocolate, candy, snacks, confectionary, pizza, ramen, other noodles, gums and ice cream.
  • dairy including meat, sausage, bread, chocolate, candy, snacks, confectionary, pizza, ramen, other noodles, gums and ice cream.
  • Products various soups, beverages, tea, drinks, alcoholic beverages and vitamin complexes, and includes all health foods in the usual sense.
  • the composition for health drinks of the present invention may contain various flavors or natural carbohydrates, etc. as additional ingredients, as in general beverages.
  • the above-mentioned natural carbohydrates are sugars such as glucose, monosaccharide maltose such as fructose, disaccharide such as sucrose, and polysaccharides such as dextrin and cyclodextrin, xylly, sorbitol and erythritol.
  • a sweetener such as taumartin, stevia extract
  • Natural sweeteners synthetic sweeteners such as saccharin and aspartame can be used.
  • the proportion of the natural carbohydrate is generally about 0.01 to 0.04 g, preferably about 0.02 to 0.03 g per 100 ⁇ of the composition of the present invention.
  • styrex lignolide A compound of the present invention or a non-saccharide thereof may be used in various nutrients, vitamins, electrolytes, flavors, colorants, pectic acid and salts thereof, alginic acid and salts thereof, organic acids, protective colloidal thickeners, pH adjusting agents. And stabilizers, preservatives, glycerin, alcohols, carbonation agents used in carbonated drinks, and the like.
  • the styrex lignolide A compound of the present invention or a non-saccharide thereof may contain a flesh for preparing natural fruit juice, fruit juice beverage and vegetable beverage. These components can be used independently or in combination. The proportion of such additives is not critical, but is usually selected in the range of 0.01 to 0.1 parts by weight per 100 parts by weight of the composition of the present invention.
  • Styrax Ligliolide A or its non-saccharide homoenol of the present invention reduces weight loss and airway hypersensitivity in the asthma-induced mouse model, inhibits the production of free radicals in the airways and invasion of inflammatory cells in the bronchus, and inflammation in the mucosa Inhibition of cell invasion, goblet cell ratio, and subbasement fibrosis (subepithelialfibrosis) was shown to be significantly lower than that of conventional asthma treatments. Therefore, as an active ingredient of a health food composition for the prevention or improvement of asthma. It can be usefully used.
  • the present invention also provides a styrex lignolide A compound, a non-saccharide thereof, or a pharmaceutically acceptable salt thereof for use in a pharmaceutical composition for preventing and treating asthma.
  • the present invention provides a styrex lignolide A compound, a non-saccharide thereof, or a pharmaceutically acceptable salt thereof for use in a composition for preventing and improving asthma. .
  • the styrex lignolide A compound is preferably represented by the following Chemical Formula 1, but is not limited thereto.
  • Styrax Ligliolide A or its non-saccharide homoenol of the present invention reduces weight loss and airway hypersensitivity in the asthma-induced mouse model, inhibits the production of free radicals in the airways and invasion of inflammatory cells in the bronchus, and inflammation in the mucosa Inhibition of cell invasion, goblet cell ratio, and subbasement fibrosis (subepithelialfibrosis) was shown to be significantly lower than that of conventional asthma treatments. Therefore, as an active ingredient of a health food composition for the prevention or improvement of asthma. It can be usefully used.
  • the present invention will be described in more detail with reference to the following Examples and Preparation Examples. However, the following Examples and Preparation Examples are merely illustrative of the contents of the present invention and the scope of the invention is not limited by the Examples and Preparation Examples.
  • step 3 Chinese Chemical Letters 18, 2007, 380-382), but through a synthetic route that adds a new step (step 3).
  • step 3 First, intermediate 4 was synthesized in step 1, and intermediates 4 and 8 were condensed in step 2, thereby preparing compound 10 which is a trimethoxy egonol precursor. Finally in step 3 the carboxylic acid ester of intermediate 10 was reduced to alcohol to give the desired final compound 11 (homoenol) (FIG. 20).
  • mice In order to confirm the effect of Styrax lignolide A on weight loss of asthma-induced mice, body weights of the mice prepared in Example 2 were measured. The statistical analysis of all the measured values below calculates the mean and standard error (mean ⁇ S.E.) for various variables, and compares each group using SPSS 10.0.
  • the normal control group weighed 21.22 ⁇ 0 ⁇ 3 1 g, but the asthma induction group (0VA) showed a significant weight loss of 19.59 ⁇ 0.27 g, whereas the dexamethasone-administered comparison group l (DEXA) was measured at 20.49 ⁇ 0.29 g, montelukast-administered group 2 (Monte) was 21.04 ⁇ 0.30 g, and styraks lignolide A-administered group was 21.04 ⁇ 0.34 g. This confirmed the weight recovery effect is similar to the anti-drug administration group for asthma (Fig. 1) ⁇
  • the bronchoalveolar lavage fluid was recovered from the subjects of each experimental group of ⁇ Example 2>, and immediately recovered and stained with trypan blue to calculate the total cell numbers excluding dead cells using a hemocytometer. Next, after staining with Cytospin ⁇ , Diff-Quick staining (Sysmex, Switzerland) was performed to differentially calculate eosinophils and other inflammatory cells.
  • the number of eosinophils was 0 ⁇ 0 in the normal control group (NC), 622.55 ⁇ 74.18 in the asthma induction group (OVA), 41.88 ⁇ 9.08 in the comparative group l (DEXA), comparison group 2 ( Monte) was 60.67 ⁇ 6.58, and 20.77 ⁇ 2.34 in the styraks lignolide A group, which significantly reduced all eosinophil counts in the drug-treated group compared to the asthma-induced group. It has been shown to strongly inhibit eosinophil infiltration.
  • the total number of inflammatory cells was 10.15 ⁇ 2.05 in the normal control group, 1238.65 ⁇ 101.01 in the asthma induction group, 153.48 ⁇ 19.69 in the comparison group 1, 193.29 ⁇ 19.99 in the comparison group 2, and styraks lignolide A In the administration group
  • the immunoenzyme method was used to measure the concentration of egg albumin specific IgE in serum and bronchoalveolar lavage fluid by administration of Styrax lignolide A.
  • Egg white albumin was dissolved in a 0.1 M NAHCOs complete solution of pH 8.3 at a concentration of 20 / g / / and placed in a 96-well flat bottom EL ISA plate and coated overnight at 4 0 C, followed by 13 ⁇ 4 bovine serum albumin ( PBS containing bovine serum albumin) was used to inhibit nonspecific reactions and serum samples were reacted at 1: 400 for 2 hours at room temperature. Then, after washing it well, anti-mouse IgE monoclonal antibody was 300 times Diluted and reacted for 2 hours.
  • HRP-conjugated goat ant i-rat IgG polyclonal antibody conjugated with peroxidase was diluted 4000-fold and reacted at room temperature for 1 hour, followed by washing. .
  • the color reaction was repeated with 3,3 ', 5,5'_tetramethylbenzidine (3,3', 5,5'-tetramethylbezidine) substrate and the spectral absorbance was measured at 650 nm.
  • the serum egg white albumin-specific IgE concentration was reduced in the styraks lignolide A administration group (382 ⁇ 60.60 ng / m £) compared to the asthma induction group (462 ⁇ 79.82 ng /), but significant Although not, the egg white albumin-specific concentrations in the bronchoalveolar lavage fluid were significantly decreased in the styrene-lignolide A-administered group (15.4 ⁇ 2.18 ng / m «compared to 26.5 ⁇ 2.96 ng / mO (FIG. 4).
  • the amount of active oxygen generated in the styraks lignolide A-administered group was 27.90% lower than that of the asthma-induced group, and showed an effect of inhibiting the amount of active oxygen generated better than the texamemethasone comparison groups 1 and 2 ( 5).
  • ALT alanine aminotranf erase
  • AST aspartate in serum Aspartate aminotransferase
  • serum ALT and AST concentrations were asthmatic induction group (ALT: 132 ⁇ 19.25 IU / ⁇ , AST: 235.33 ⁇ 22.40 IU / f, comparison group 1 (DEXA) (ALT: 274.67 ⁇ 12.12
  • Inflammation index 0 is when no inflammatory cells are found around the bronchus.
  • Inflammation index 1 is when intermittent inflammatory cells are observed.
  • Inflammation index 2 is when one or two or three thin layers of inflammation are observed around the bronchus.
  • Inflammation index 3 was evaluated when five or fewer layers of inflammatory cells were observed in two or three layers around most bronchus.
  • Inflammation index 4 was evaluated when five or more thick inflammatory cell layers were observed around most bronchus.
  • the asthma induction group had a 4.00 ⁇ 0.00 inflammatory index around the bronchioles, while the comparative group l (DEXA) was 1.46 ⁇ 0.26, 2 (Monte) was 2.00 ⁇ 0.23, and styraks lignolide A-administered group was 1.17 ⁇ 0.2, which was significantly reduced compared to the asthma-induced group. It could be confirmed (Fig. 7). ⁇ 7-2> Goblet Cell Inhibition
  • the lungs extracted from each individual were permanently fragmented at 4 i ⁇ thickness through normal formalin fixation and paraffin embedding, followed by periodic acid Schiff (PAS) staining to identify goblet cells. ) was evaluated in the degree of goblet cell proliferation by measuring the proportion of) in bronchial epithelial cells.
  • the lungs extracted from each individual were subjected to Masson's trichrome staining by performing permanent formalin fixation and paraffin embedding to prepare permanent tissue sections of 4 thickness, and then staining the basement membrane. After measuring the area of the extracellular matrix, the area of the fibrotic dyeing sites per 100 lengths around the basement membrane was calculated. All measurements were performed using a computerized image analyzer program.
  • the weight of the normal control group was 21.96 ⁇ 0.25 g, but the asthma induction group showed a significant weight loss of 18.52 ⁇ 0.45 g, whereas comparison group 1 (DEXA) (19.98 ⁇ 0.39 g), comparison Group 2 (21.08 ⁇ 0.57 g), 7.5 mg / kg orally administered homoenol (22.10 ⁇ 0.13 g), 15 mg / kg orally administered group (21.23 ⁇ 0.43 g), 30 mg / kg Orally administered group (21.98 ⁇ 0.47 g), except for the comparison group l (DEXA) drug administration group was able to confirm the weight recovery close to the normal control group (Fig. 10).
  • Experimental Example 9 Inhibitory Effect of Homoenol on Airway Hypersensitivity by Asthma
  • IgE in serum and bronchial alveolar lavage fluid was measured according to the method of Experimental Example 4 to determine the IgE concentration correlated with the severity of asthma.
  • the serum IgE antibody concentration was compared to the asthma induction group (0VA) (11.85 ⁇ 2.6994 yg /).
  • the concentration of homoenol was measured in 19.22 ⁇ 4.9287 ⁇ g / mi (hE7.5), 10.74 ⁇ 3.4612 ⁇ g / mi (hE15), and 8.14 ⁇ 5.9682 ug / m £ (hE30) in the enogon group.
  • the concentration of IgE antibody in the bronchoalveolar lavage fluid was 65.5957 ⁇ 11.6656 ng / mi (hE7. 1) in the group receiving homoenol compared to the asthma induction group (146.5745 ⁇ 18.7560 ng /). 5), 48.4894 ⁇ 4.1926 ng / i (hE15), and 23.8085 ⁇ 3.3515 ng / mi (hE30), indicating that IgE antibody in bronchial alveolar lavage fluid significantly decreased with homoenol concentration.
  • Asthma induction group (OVA) 146.5745 ⁇ 18/7560
  • the total number of inflammatory cells was 6.68 ⁇ 0.7626 in the normal control group, 225.00 ⁇ 23.6323 in the asthma induction group, 20.04 ⁇ 4.7744 in the comparison group l (DEXA), comparison group 2 ( Monte) at 67.96 ⁇ 15.0532, homoenol-administered groups at 42.80 ⁇ 7.2060 (hE7.5), 39.72 ⁇ 4.4400 (hE15) and 33.88 ⁇ 8.1589 (hE30), respectively. Cells decreased significantly.
  • the number of eosinophils that infiltrate tissues and are mainly involved in cellular mediated immunity, spread throughout the cells, spleen and respiratory organs, and contain inflammatory proteins, and are known to play an important role in the development of asthma are found in normal controls. 0.00 ⁇ 0.00, 108.88 ⁇ 14.09 in asthma induction group, 1.32 ⁇ 0.49 in comparison group 1, 19.12 ⁇ 9.17 in comparison group 2, 12.80 ⁇ 2.50 (hE7.5) and 6.32 ⁇ 0.86 (hE15), respectively And 5.48 ⁇ 2.02 (hE30), both in the homoenol administered group compared to the asthma induced group. Significantly decreased.
  • TGF— 31 and IL-17 production
  • the homoenol-administered group significantly inhibited TGF— [31 and IL-17 in the bronchoalveolar lavage fluid compared with the asthma-induced group.
  • the inflammation index around the blood vessels was 32.81 ⁇ 0 ' .0976 in the asthma induction group, but 0.41 ⁇ 0.1571 for the comparison group l (DEXA), 2.20 ⁇ 0.1897 for the comparison group 2 (Monte), and homo-enol administration group Were 1.89 ⁇ 0.1791 (hE7.5), 1.70 ⁇ 0.1449 (hE15), and 1.30 ⁇ 0.2025 (hE30), all of which were significantly decreased compared to the asthma induction group.
  • the ratio of emergency cells to bronchiolary epithelial cells in the normal control group was 2.7741 ⁇ 0.7381%, but increased to 55.5196 ⁇ 1.3706% in the asthma induction group, which was compared with the comparative group l (DEXA). 18.78 2 8 ⁇ 5.93973 ⁇ 4), decreased to 34.6476 ⁇ 11.5492% in Monte 2, compared to 36.5600 ⁇ 11.5613% (hE7.5), 32.4109 ⁇ 10.8037% (hE15), and 25.0956 ⁇ 3.4033 % (hE30) all showed a significant decrease compared to the asthma induction group.
  • the area of the fiber and the dyeing site per 100 um of the basement membrane was 195.95 ⁇ 19.0464 U m 2 in the normal control group, and 1907.34 ⁇ 85.3287 ⁇ 2 in the asthma induction group. It increased about 10 times.
  • Fibrosis was 308.77 ⁇ 49.0266 ⁇ 2 in comparison group l (DEXA), 537.98 ⁇ 72.4581 lin in comparison group 2 (Monte), and 527.25 ⁇ 71.3953 ⁇ 2 (hE7.5) and 425.64 ⁇ 64.6798 ⁇ 2 (5. hE15), and 320.99 ⁇ 46.2236 ⁇ 2 (hE7.5) all showed a significant decrease in fibrosis compared to the asthma induction group.
  • tablets were prepared by tableting according to a conventional method for producing tablets.
  • the capsule preparation was prepared by gelatin filling according to a conventional method for preparing capsules.
  • styrex lignolide A compound of the present invention was added to soups and gravy to prepare health products, noodle soup and gravy.
  • styrex lignolide A compound of the present invention was added to milk, and various dairy products such as butter and ice cream were prepared using the milk.
  • Brown rice, barley glutinous rice, and yulmu were alphad by a known method, and then dried and roasted to prepare a powder having a particle size of 60 mesh.
  • Black beans, black sesame seeds, and sesame seeds were also steamed and dried by a known method, and then ground to a powder having a particle size of 60 mesh.
  • the styrex lignolide A compound of the present invention was concentrated under reduced pressure in a vacuum concentrator, and the dried product obtained by spraying and drying with a hot air dryer was pulverized with a particle size of 60 mesh to obtain a dry powder.
  • the grains, seeds and styrex lignolide A compound prepared above were combined and prepared in the following ratio.
  • Cereals (30 parts by weight brown rice, 15 parts by weight of radish, 20 parts by weight of barley),
  • Seeds (7 parts by weight perilla, 8 parts by weight black beans, 7 parts by weight black sesame seeds), Styrex lignolide A compound (3 parts by weight),
  • Vegetable juice was prepared by adding 5 mg of the homoenol compound of the present invention to 1,000 ⁇ of tomato or carrot juice.
  • the homoenol compound 1 rag of the present invention was added to 1,000 mi of apple or grape juice to prepare a fruit juice. '

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Abstract

본 발명은 스티락스리그놀리드(Styraxlignolide) A 또는 이의 비당체(aglycone)를 유효성분으로 함유하는 천식의 예방 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 것으로, 구체적으로 상기 스티락스리그놀리드 A 화합물은 때죽나무(Styrax japonica)의 줄기 및 껍질에서 분리한 것으로서, 상기 스티락스리그놀리드 A, 또는 이의 비당체로서 안전성을 증가시킨 호모에고놀(homoegonol)은 천식 유도 마우스 모델에서 체중 감소 및 기도과민성을 경감시키고, 기도내 활성 산소 발생량을 억제시키며, 혈청 및 기관지폐포 세척액내 IgE, TGF-β1 및 IL-17 생성을 억제시킬 뿐만 아니라, 기관지내 염증세포 침윤을 억제하고, 점액마개(mucous plug) 및 기저막하부 섬유화(subepithelial fibrosis)를 억제시키는 효과를 나타내므로, 상기 스티락스리그놀리드 또는 호모에고놀은 기도개형이 진행된 기관지 천식의 예방 또는 치료를 위한 약학적 조성물의 유효성분으로서 유용하게 이용될 수 있다.

Description

【명세서】
【발명의 명칭】
스티락스리그놀리드 A 또는 이의 비당체를 유효성분으로 함유하는 천식의 예방또는 치료용 조성물
【기술분야】
본 발명은 스티락스리그놀리드 A 또는 이의 비당체를 유효성분으로 함유하는 천식의 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다. 【배경기술】
전 세계적으로 그 발병률이 증가하고 있는 알러지성 질환에는 과민증 (anaphyl axis), 알러지성 비염 (allergic rhinitis), 및 천식 (asthma), 아토피성 피부염 (atopic dermatitis) 및 두드러기 (urt icar ia)가 있다 (Wuthrich B. Int. Arch. Allergy Appl. I隱 unol., 90， pp3-10, 1989).
이러한 알러지성 질환 중 천식 (asthma)은 우리나라 인구 중 약 300만명이 고통받고 있다고 추정되고， 기침과 함께 숨소리가 쌕쌕거리는 천명， 숨이 차거나 가슴이 답답한 증상을 특징으로 하는 만성 염증성 호흡기 질환으로 최근들어 대기오염의 심화와 식생활의 서구화로 환자가 급증세를 보이고 있다. 천식은 미국， 영국 증의 선진국에서는 제일 흔한 질환으로 전 인구의 20~30¾>， 우리나라에서는 초등학교 학동기 아동의 16%， 성인의 경우 약 5%， 전체 400만 명 이상의 환자가 있다고 추정되고 있으며, 유소아부터 노인까지 전연령층에서 볼 수 있는 질병으로 전체 인구의 10%가 앓고 있을 정도로 흔한 질병이다. 그 원인으로는， 가족 내 알레르기 성향을 유발하는 아토피 체질이 기본적으로 작용함이 밝혀졌고， 기도 과민성과 기도의 호산구염증， 및 Th2 면역반웅의 항진이 천식을 일으키는 기본적 요인으로 보고되었다. 천식으로 인하여 숨쉬기가 힘들고， 심한 기침과 더불어 천명음 (숨쉴 때 쌕쌕거리는 소리가 들림 )이 나타나며 , 2000년도 WHO의 특별보고서에 따르면 전세계적으로 1억 5천만명의 환자가 천식으로 고통받고 있으며 1년에 18만명이 기관지 천식으로 목숨을 잃는다고 한다. 아을러， 질환의 유병율과 중증도가 계속 증가 추세에 있고， 천식으로 인한 의료， 사회적 비용은 폐결핵과 에이즈의 비용을 합한 것 보다 더욱 크다고 WHO의 특별보고서는 언급하고 있다. 우리나라의 경우에도 80년대 초에 3〜 에 불과하던 소아천식의 유병율이 2배이상 증가하였다. 지난 1998년 발표된 'ISAAC (International Study of Asthma and Allergy in Childhood)' 연구에 따르면 우리나라 소아천식 유병율은 6~7세는 13.3%, 13~14세는 7.7%로 나타났다. 소아 전체로 보면 100명 중 10명이 천식을 앓고 있으며 이 중 50%인 5명은 평생 천식을 앓는다. 더욱 큰 문제는 질환의 유병율뿐만 아니라 질환의 심한 정도도 더욱 증가하고 있다는 데에 문제의 심각성이 있다. 일반적으로 천식은 TH2 타입 면역세포가 생성하는 인터루킨 -4， 5, 13에 의해 염증세포가 증식， 분화 및 활성화되어 기도 및 기도주변 조직으로 이동， 침윤하여 나타나는 만성 염증질환으로 인식되고 있다 (Elias JA, et al. , J. Clin. Invest., Ill, pP291-297, 2003). 이 경우 활성화된 호산구， 비만세포, 폐포 대식세포 등의 염증세포가 다양한 염증매개인자들 (시스테인 류코트리엔， 프로스타글란딘 등)을 분비하면서 강력한 기관지 수축작용이 과정에서 중요한 역할을 한다 (Maggi E., Iwmuno t echno 1 ogy, 3, pp233-244 , 1998； Pawankar R. , Curr. Opin. Allergy Clin. Immunol. , 1， pp3-6, 2001； Barnes PJ , et al . , Pharmacol Rev. , 50， pp515— 596, 1998). 따라서 염증세포 활성화에 관여하는 IL-4, IL-5, IL-13 등 사이토카인 및 면역글로불린 E의 생산과 이들의 작용으로 호산구 등 염증세포에서 분비되는 시스테인 류코트리엔 생합성 등은 염증 및 알러지 반응과 이로 인한 천식을 유발하는 주요 원인이므로 이들의 생산을 억제하기 위한 약물을 개발하고자 많은 연구가 진행되고 있다. 현재 다양한 치료제가 상용되고 있으나 상당수의 치료제들은 못지 않은 부작용으로 사용시 주의를 요하고 있다. 흡입형 코르티코스테로이드 (corticosteroid) 제재가 아직도 제일 중요한 치료제이며 뛰어난 효과를 나타내지만 장기적으로 사용할 경우 용량과 사용시간에 비례하여 부신 억제， 골밀도 감소， 성장 장애， 눈과 피부의 합병증 등을 유발하는 것으로 알려져 있다. 또한， 코르티코스테로이드는 오히려 콜라겐의 합성을 증가시킬 수 있다는 보고도 있다 (Warshmana GS, et al., Am J Physiol 274, 499-507, 1998). 따라서 , 만성 지속성 천식환자에 대한 수년간의 코르티코스테로이드 치료에도 불구하고 기도과민성이 정상화되는 천식환자는 드물다. 베타— 2 작용물질 (agonist)의 장기간 투여도 기도재구성을 억제하지 못하는 것으로 알려져 있으며 (Jeffery PK, et al . , Am Rev Respir Dis 145： 890-0, 1992), 살메테를 (salmeterol ) 및 포르메테를 (formeterol)과 같은 지속성 베타 -2 작용물질은 천식발작을 예방하면서 오히려 천식환자를 사망케 할 수 있다는 사실도 경고된 바 있다. 이와 같은 다양한 부작용들이 보고되고 있으나 천식 증상을 완화하는 효과가 부작용 위험보다 크다는 판단 아래 계속 처방되고 있다. 그러나, 부작용에 민감한 어린이 천식환자의 성장율을 측정한 결과， 경구용 류코트리엔 길항제 (leukotriene antagonist, montelukast )를 복용한 어린이 천식환자의 성장율이 흡입용 코르티코스테로이드제를 사용한 경우보다 1년에 최고 1 cm까지 우수한 것으로 나타났다 (Garcia Garcia ML, et al. , Pediatrics 116(2)： 360-9, 2005) . 성장기에 천식이 조절되지 않으면 폐는 물론 신체 전반의 성장이 저해될 수 있으므로 꾸준한 치료로 정상적인 폐기능을 유지하는 것이 성장에 필수적이긴 하지만 지속적인 치료에 안전한 약물을 이용, 기도의 염증을 잘 관리하는 것이 무엇보다 중요하다는 것이 밝혀짐으로써 치료제 선택에 있어 천식완화 효과와 더불어 부작용에 대한 신중한 고려가 필요하다. 그러나, 류코트리엔 길항제는 부작용의 빈도가 낮다고 알려져 천식의 예방 및 지속적인 치료에 새로이 사용되고 있지만 천식완화 효과가 다른 약물에 비해 약하고 환자의 삼분의 일에서만 현저한 효과를 보이고 있다. 따라서， 독성이 없고 안전하며 약물 내성을 방지할 수 있는 신규한 천식 치료제의 개발이 요구된다. 때죽나무 (5yra / /w/^/ca)는 진달래목 때죽나무과의 나무로서 . 한국， 중국， 일본아 원산이며 갈잎 큰키나무이다. 10~15 m쯤 자라며 추위와 공해에 매우 강하다. 나무껍질은 어두운 갈색이고, 잎은 어긋나고 달걀 모양이거나 긴 타원 모양이며 끝이 쁘족하다. 열매는 핵과인데 9월에 여물며 타원 모양이고 익으면 껍질이 불규칙하게 갈라진다. 때죽나무의 성분은 열매껍질에 약 10%의 에고사포닌이 있고， 종자에는 여러 종류의 글리세리드와 지방유， 에고놀이 들어있으며， 꽃에는 사포닌 성분이 함유되어 있다. 때죽나무는 매마등， 제돈과라 하며 약용하고, 한방에서는 구충， 살층， 흥분성거담， 후두염， 방부제 등에 사용하며, 청화, 거풍제습의 효능이 있어 후통， 아통， 치통， 풍습과절염， 사지통 등을 치료한다고 알려져 있다. 이에， 본 발명자들은 생체 내 부작용 및 안전성 등을 고려하여 생약에 대한 관심을 가지고, 그 중에서도 장기적인 사용이 가능하면서 기도재구성 억제 효과가 있는 천식 치료제 개발에 연구를 진행하던 중 때죽나무로부터 분리한 스티락스리그놀리드 (Styraxlignolide) A 또는 이의 비당체인 호모에고놀 (homoegonol)이 천식 유도 모델에 있어서 현재 천식 치료제로 널리 사용되는 약물보다 뛰어난 기도과민반웅 억제 효과， 기관지내 염증세포 침윤억제 효과 및 기도개형 (기관지 상피세포 비후， 점액 분비세포의 과증식 섬유화진행) 진행의 억제 효과를 가짐을 확인하여, 상기 스티락스리그놀리드 A 또는 호모에고놀은 천식 예방 또는 치료용 조성물의 유효성분으로 이용할 수 있음을 밝힘으로써 본 발명을 완성하였다.
【발명의 상세한 설명】
【기술적 과제】
본 발명의 목적은 스티락스리그놀리드 A, 이의 비당체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 천식의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하기 위한 것이다.
【기술적 해결방법】
상기 목적을 달성하기 위하여， 본 발명은 하기 화학식 1로 기재되는 스티락스리그놀리드 A 화합물, 하기 화학식 2로 기재되는 이의 비당체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 천식 예방 및 치료용 약학적 조성물을 제공한다:
【화학식 1]
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【화학식 2】
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아울러， 본 발명은 상기 화학식 1로 기재되는 스티락스리그놀리드 (Styraxlignolide) A 화합물， 상기 화학식 2로 기재되는 이의 비당체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 천식 예방 및 개선용 건강식품용 조성물을 제공한다.
【유리한 효과】
본 발명은 종래의 기술에서 밝혀지지 않은 스티락스리그놀리드 (Styraxlignolide) A 화합물 또는 이의 비당체인 호모에고놀 (homoegonol)의 천식에서의 신규한 효과를 밝힌 것으로서， 본 발명의 스티락스리그놀리드 A 또는 호모에고놀은 천식 유도 모델에 있어서 현재 천식 치료제로 널리 사용되는 약물인 덱사메타손 또는 몬테루카스트 보다 뛰어난 기도과민 반웅 억제 효과， 기관지내 염증세포 침윤 억제 효과 및 기도개형 (기관지 상피세포 비후, 점액분비 세포의 과증식, 섬유화진행) 진행의 억제 효과를 가짐을 확인하였으므로， 본 발명의 스티락스리그놀리드 A 또는 호모에고놀은 독성이 낮아 스테로이드에 내성을 보이는 경우， 기도개형이 진행된 경우， 또는 장기적인 천식치료제의 사용이 요구되는 경우와 같은 기관지 천식의 예방 또는 치료에 유용하게 이용될 수 있다.
【도면의 간단한 설명】
도 1은 정상 대조군 (NC), 천식 유도군 (0VA), 덱사메타손이 투여된 천식 유도군 (DEXA), 몬테루카스트가 투여된 천식 유도군 (Monte) 및 스티락스리그놀리드 (Styraxlignolide) A가 투여된 천식 유도군 (Styraxl ignol ide A)에 대한 체중 측정 결과를 나타낸 그래프이다 (이하ᅳ #： 정상 대조군 (NC)과 비교하여 통계적 유의성이 인정된 경우 (p<0.05), *: 천식 유도군 (OVA)과 비교하여 통계적 유의성이 인정된 경우 (p<0.05)).
도 2는 각각의 실험군에 대한 기도과민성 여부를 기도 저항 정도인 Penh (enhanced pause) 수치로 나타낸 그래프이다.
도 3은 각각의 실험군에 대한 기관지 폐포 세척액 내 염증세포의 수를 나타낸 그래프이다.
도 4는 각각의 실험군에 대한 혈청 내 또는 기관지 폐포 세척액 내 난백알부민 특이 IgE의 농도를 나타낸 그래프이다.
도 5는 각각의 실험군에 대한 기관지 폐포 세척액 내 활성산소 발생량을 나타낸 그래프이다
도 6은 각각의 실험군에 있어서， 간에 대한 독성을 측정한 그래프이다 (이하， **： 덱사메타손 투여군 (DEXA)과 비교하여 통계적 유의성이 인정된 경우 (p<0.05)). 도 7은 각각의 실험군에 대한 기도점막내 염증세포 침윤 및 염증지수를 나타낸 그림이다.
도 8은 각각의 실험군에 대한 배상세포 (goblet cell) 비율을 나타낸 그림이다.
도 9는 각각의 실험군에 대한 기저막하부 섬유화 부위를 나타낸 그림이다. 도 10은 정상 대조군 (SAL+SAL), 천식 유도군 (0VA+SAL), 덱사메타손이 투여된 천식 유도군 (OVA+Dex), 몬테루카스트가 투여된 천식 유도군 (0VA+M) 및 7.5 mg/kg의 호모에고놀 (homoegonol)이 투여된 천식 유도군 (0VA+hE7.5)， 15 mg/kg의 호모에고놀이 투여된 천식 유도군 (0VA+hE15) 및 30 mg/kg의 호모에고놀이 투여된 천식 유도군 (OVA+hE30)에 대한 체중 측정 결과를 나타낸 그래프이다.
도 11은 각각의 실험군에 대한 기도과민성 여부를 기도 저항 정도인 Penh (enhanced pause) 수치로 나타낸 그래프이다.
도 12는 각각의 실험군에 대한 혈청 내 난백알부민 특이 IgE의 농도를 나타낸 그래프이다.
도 13은 각각의 실험군에 대한 기관지 폐포 세척액 내 난백알부민 특이 IgE의 농도를 나타낸 그래프이다.
도 14는 각각의 실험군에 대한 기관지 폐포 세척액 내 염증세포의 수를 나타낸 그래프이다. ·
도 15는 각각의 실험군에 대한 기관지 폐포 세척액 내 TGFᅳ βΐ의 농도를 나타낸 그래프이다ᅳ
도 16은 각각의 실험군에 대한 기관지 폐포 세척액 내 IL-17의 농도를 나타낸 그래프이다.
도 17은 각각의 실험군에 대한 기도점막내 염증세포 침윤 및 염증지수를 나타낸 그림이다.
도 18은 각각의 실험군에 대한 배상세포 비율을 나타낸 그림이다.
도 19는 각각의 실험군에 대한 기저막하부 섬유화 부위를 나타낸 그림이다. 도 20은 호모에고놀의 제조 과정을 나타낸 그림이다.
【발명의 실시를 위한 최선의 형태】
본 발명에서 사용되는 용어를 설명한다. 본 발명에서 사용되는 용어 "추출물"은 당업계에서 조추출물 (crude extract)로 통용되는 의미를 갖지만， 광의적으로는 하기 분획물도 포함한다.
본 발명에서 사용되는 용어 "분획물"은 추출 시 이용한 용매와 다른 용매를 이용하여 본 발명에서 목적으로 하는 활성을 분획하여 얻은 활성 분획물 (fraction)을 의미한다.
본 발명에서 사용되는 용어 "예방 "은 본 발명의 조성물의 투여로 천식을 억제시키거나 진행을 지연시키는 모든 행위를 의미한다.
본 발명에서 사용되는 용어 "치료" 및 "개선 "은 본 발명의 조성물의 투여로 천식의 증상이 호전 또는 이롭게 변경되는 모든 행위를 의미한다.
본 발명에서 사용되는 용어 "투여''는 임의의 적절한 방법으로 개체에 소정의 본 발명의 조성물을 제공하는 것을 의미한다.
본 발명에서 사용되는 용어 "개체''는 본 발명의 조성물을 투여하여 천식의 증상이 호전될 수 있는 질환을 가진 인간， 원숭이， 개, 염소， 돼지 또는 쥐 등 모든 동물을 의미한다. 이하, 본 발명을 상세히 설명한다. 본 발명은 스티락스리그놀리드 (Styraxlignolide) A 화합물， 이의 비당체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 천식 예방 및 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
상기 스티락스리그놀리드 A 화합물은 하기 화학식 1로 기재되는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다:
1]
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상기 스티락스리그놀리드 A 화합물은 때죽나무 (5 ^ 'S /ca)로부터 분리한 것을 사용하는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않으며， 화학적으로 합성한 것을 사용할 수 있다.
상기 때죽나무는 전초를 사용할 수 있고， 즐기 및 나무 ¾질을 사용하는 것이 더욱 바람직하나 이에 한정되지 않는다.
상기 천식은 기도개형이 진행된 천식인 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다. 본 발명은 상기 화학식 1로 기재되는 화합물, 상기 화학식 2로 기재되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염뿐만 아니라， 이로부터 제조될 수 있는 가능한 용매화물， 수화물을 모두 포함한다.
본 발명의 상기 화합물은 약학적으로 허용 가능한 염의 형태로 사용할 수 있으며, 염으로는 약학적으로 허용 가능한 유리산 (free acid)에 의해 형성된 산 부가염이 유용하다. 산 부가염은 염산， 질산, 인산, 황산, 브롬화수소산， 요드화수소산， 아질산 또는 아인산과 같은 무기산류와 지방족 모노 및 디카르복실레이트， 페닐-치환된 알카노에이트， 하이드록시 알카노에이트 및 알칸디오에이트， 방향족 산류, 지방족 및 방향족 설폰산류와 같은 무독성 유기산으로부터 얻는다. 이러한 약학적으로 무독한 염류로는 설페이트， 피로설페이트， 바이설페이트， 설파이트， 바이설파이트， 니트레이트， 포스페이트， 모노하이드로겐 포스페이트， 디하이드로겐 포스페이트， 메타포스페이트， 피로포스페이트 클로라이드， 브로마이드， 아이오다이드， 플루오라이드， 아세테이트， 프로피오네이트; 데카노에이트， 카프릴레이트， 아크릴레이트， 포메이트， 이소부티레이트，카프레이트，헵타노에이트，프로피을레이트，옥살레이트, 말로네이트 석시네이트，수베레이트，세바케이트，푸마레이트， 말리에이트,부틴 -1,4-디오에이트， 핵산 -1， 6-디오에이트， 벤조에이트， 클로로벤조에이트， 메틸벤조에이트， 디니트로 벤조에이트， 하이드록시벤조에이트， 메록시벤조에이트， 프탈레이트, 테레프탈레이트， 벤젠설포네이트， 를루엔설포네이트， 클로로벤젠설포네이트, 크실렌설포네이트， 페닐아세테이트, 페닐프로피오네이트， 페닐부티레이트， 시트레이트, 락테이트， β-하이드록시부티레이트， 글리콜레이트， 말레이트， 타트레이트， 메탄설포네이트， 프로판설포네이트， 나프탈렌 -1-설포네이트， 나프탈렌 -2-설포네이트 또는 만델레이트를 포함한다.
본 발명에 따른 산 부가염은 통상의 방법， 예를 들면， 본 발명의 상기 화합물을 과량의 산 수용액 증에 용해시키고， 이 염을 수흔화성 유기 용매, 예를 들면 메탄올， 에탄올， 아세톤 또는 아세토니트릴을 사용하여 침전시켜서 제조할 수 있다.
동량의 화학식 1 또는 2로 표시되는 상기 화합물 및 물 중의 산 또는 알코올을 가열하고， 이어서 이 흔합물을 증발시켜서 건조시키거나 또는 석출된 염을 흡입 여과시켜 제조할 수도 있다.
또한, 염기를 사용하여 약학적으로 허용 가능한 금속염을 만들 수 있다. 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 염은 예를 들면 화합물을 과량의 알칼리 금속 수산화물 또는 알칼리 토금속 수산화물 용액 중에 용해하고， 비용해 화합물 염을 여과하고， 여액을 증발， 건조시켜 얻는다. 이때， 금속염으로는 나트륨， 칼륨 또는 칼슘염을 제조하는 것이 제약상 적합하다. 또한， 이에 대응하는 은 염은 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 염을 적당한 음염 (예 , 질산은)과 반응시켜 얻는다.
상기 화학식 1로 기재되는 스티락스리그놀리드 A 화합물은 하기와 같은 방법으로 분리되는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다:
1) 때죽나무 (5 Τ ΛΓ japonica)^ 물， d-C2의 저급 알코올 또는 이들의 혼합용매로 추출하는 단계;
2) 상기 단계 1)의 추출물을 추가로 핵산 및 에틸아세테이트를 차례로 가하여 계통분획하는 단계; 및
3) 상기 단계 2)에서 에틸아세테이트 층을 분리하고 남은 수용액 층에 컬럼 크로마토그래피를 수행하여 상기 화학식 1로 기재되는 화합물을 수득하는 단계를 포함하는 방법으로 제조될 수 있으나 이에 한정되지 않는다.
이하， 본 발명의 상기 제조방법을 단계별로 설명한다.
먼저 , 단계 1)은
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를 물, dᅳ C2의 저급 알코을 또는 이들의 흔합용매로 추출하는 단계이다.
본 발명에 따른 제조방법에 있어서, 상기 때죽나무는 재배한 것， 채취한 것 또는 시판되는 것 등을 제한 없이 사용할 수 있다. 상기 때죽나무는 줄기 및 나무껍질을 이용하는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다.
본 발명에 따른 제조방법에 있어서， 상기 추출 용매는 물， 알코올 또는 이들의 흔합물， 바람직하게는 d 내지 C2의 저급 알코을 또는 이들의 흔합 용매로부터 선택된 용매를 사용하는 것이 바람직하며， 상기 저급 알코을은 에탄을 또는 메탄을인 것이 더욱 바람직하고， 메탄올인 것이 가장 바람직하나 이에 한정되지 않는다.
상기 추출 용매의 양은 비 건조 중량의 1내지 50배인 것이 바람직하나， 이에 한정되지 않는다. 상기 추출 방법은 열수추출， 침지추출, 환류 넁각 추출 및 초음파 추출 등 당업계의 통상적인 추출방법은 모두 사용될 수 있으며， 1회 내지 5회 추출될 수 있다. 추출시 온도는 10°C 내지 100oC 인 것이 바람직하며 상온인 것이 더욱 바람직하나 이에 한정되지 않는다. 상기 추출 시간은 1일 내지 7일인 것이 바람직하고, 3일인 것이 더욱 바람직하나 이에 한정되지 않는다.
본 발명에 따른 제조방법에 있어서， 상기 때죽나무 추출물을 제조하는 방법은 초임계추출， 아임계추출, 고온추출， 고압추출 또는 초음파추출법 등의 추출장치를 이용한 방법 또는 XAD 및 HP-20을 포함한 흡착 수지를 이용하는 방법 등 당업계의 통상적인 추출방법을 사용할 수 있으며， 가온하며 환류 추출 또는 상은에서 추출하는 것이 바람직하나， 이에 한정되지 않는다. 상기 추출 회수는 1 내지 5회인 것이 바람직하며 , 4회 반복 추출하는 것이 더욱 바람직하나 이에 한정되지 않는다. 본 발명에 따른 제조방법에 있어서， 수득한 추출액의 농축은 감압농축의 진공회전증발기를 이용하는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다. 또한， 건조는 감압건조， 진공건조, 비등건조， 분무건조， 상온건조 또는 동결건조하는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다.
다음으로， 단계 2)는 단계 1)에서 수득한 추출물로부터 유기용매를 가하여 물 분획물을 수득하는 단계이다.
본 발명에 따른 제조방법에 있어서， 상기 유기용매는 핵산 또는 에틸아세테이트인 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다. 상기 분획물은 때죽나무 추출물을 물에 현탁시킨 후， 핵산， 에틸아세테이트로 순차적으로 계통 분획하여 수득한 핵산 분획물， 에틸아세테이트 분획물, 또는 물 분획물 중 어느 하나인 것이 바람직하며， 물 분획물인 것이 가장 바람직하나, 이에 한정되지 않는다. 상기 분획물은 상기 때죽나무 추출물로부터 분획 과정을 1 내지 5회， 바람직하게는 3회 반복하여 수득할 수 있고， 분획 후 감압 농축하는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다.
다음으로, 단계 3)은 단계 2)에서 쎄틸아세테이트 층을 분리하고 남은 수용액 층에 Diaion HP— 20 컬럼 크로마토그래피 및 RP C-18 컬럼 크로마토그래피를 순차적으로 수행하여 상기 화학식 1의 스티락스리그놀리드 A 화합물을 수득하는 단계이다.
본 발명에 따른 제조방법에 있어서， 상기 크로마트그래피는 메탄을 용매를 사용하여 수행되며 수행되는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다. 본 발명의 조성물의 치료적으로 유효한 양은 여러 요소, 예를 들면 투여방법， 목적부위， 환자의 상태 등에 따라 달라질 수 있다. 따라서， 인체에 사용 시 투여량은 안전성 및 효율성을 함께 고려하여 적정량으로 결정되어야 한다. 동물실험을 통해 결정한 유효량으로부터 인간에 사용되는 양을 추정하는 것도 가능하다. 유효한 양의 결정시 고려할 이러한 사항은， 예를 들면 Hardman and Limbird, eds. , Goodman and Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics, 10th ed. (2001) , Pergamon Press; 및 E.W. Martin ed. , Remington' s Pharmaceutical Sciences, 18th ed.(1990), Mack Publishing Co.에 기술되어있다.
본 발명의 조성물은 또한 생물학적 제제에 통상적으로 사용되는 담체, 희석제 부형제 또는 둘 이상의 이들의 조합을 포함할 수 있다. 약제학적으로 허용 가능한 담체는 조성물을 생체내 전달에 적합한 것이면 특별히 제한되지 않으며， 예를 들면， Merck Index, 13th ed., Merck & Co. Inc.에 기재된 화합물， 식염수, 멸균수， 링거액 완층 식염수， 덱스트로스 용액， 말토 덱스트린 용액， 글리세를， 에탄올 및 이들 성분 중 1 성분 이상을 흔합하여 이용할 수 있으며， 필요에 따라 항산화제， 완충액， 정균제 등 다른 통상의 첨가제를 첨가할 수 있다. 또한, 희석제， 분산제, 계면활성제, 결합제 및 윤활제를 부가적으로 첨가하여 수용액， 현탁액, 유탁액 등과 같은 주이용 제형, 환약 캡슐, 과립 또는 정제로 제제화할 수 있다. 더 나아가 당 분야의.적정한 방법으로 또는 Remington's Pharmaceutical Science (Mack Publishing Company, Easton PA, 18th, 1990)에 개시되어 있는 방법을 이용하여 각 질환에 따라 ■또는 성분에 따라 바람직하게 제제화할 수 있다.
본 발명의 조성물에 추가로 동일 또는 유사한 기능을 나타내는 유효성분을 1종 이상 함유할 수 있다. 본 발명의 조성물은， 조성물 총 중량에 대하여 상기 화합물을 0.0001 내지 10 중량 %로， 바람직하게는 0.001 내지 1 중량 %를 포함할 수 있다.
본 발명의 조성물은 목적하는 방법에 따라 비경구 투여 (예를 들어 정맥 내 , 피하， 복강 내 또는 국소에 적용)하거나 경구 투여할 수 있으며, 투여량은 환자의 체중， 연령， 성별, 건강상태， 식이， 투여시간， 투여방법， 배설율 및 질환의 중증도 등에 따라 그 범위가 다양하다. 본 발명에 따른 조성물의 일일 투여량은 0.0001 ~ 10 mg/m.e이며, 바람직하게는 0.0001 - 5 mg/m이며 하루 일 회 내지 수회에 나누어 투여하는 것이 더욱 바람직하다. 본 발명에서는 때죽나무 C?.ya/¾M/c Sieb. Et 의 줄기 및 나무껍질 부위를 100% 메탄올로 추출하여 때죽나무 메탄올 추출물을 제조하였다. 이를 추가적으로 물에 현탁한 후 핵산을 가하여 핵산층을 분리하였고， 남은 물층에 다시 에틸아세테이트를 가하여 에틸아세테이트 층을 분획하였으며， 남은 물층을 컬럼크로마토그래피를 이용하여 활성분획을 용출하여 본 발명의 스티락스리그놀리드 A를 분리하였다. 그런 다음， 상기 스티락스리그놀리드 A로부터 당류가 제거된 비당체 (aglycone)인 호모에고놀 (homoegonol)을 제조하였다 (도 20 참조).
본 발명자들은 상기 분리한 스티락스리그놀리드 A 또는 호모에고놀의 천식 유도 마우스에 대한 체중 감소 억제 효과를 확인하기 위하여, 정상 대조군， 천식 유도군, 천식 유도군의 천식 치료 약물 투여군 (텍사메타손 또는 몬테루카스트), 및 스티락스리그놀리드 A또는 호모에고놀 투여군의 체중 변화를 측정하였다. 그 결과, 스티락스리그놀리드 A를 경구투여한 천식 유도군 (21.04±0.34 g), 및 호모에고놀을 경구투여한 천식 유도군 {22.10 ±0.13 g(7.5 mg/kg) , 21.23±0·43 g(15 mg/kg) , 및 21.98±0.47g(30mg/kg)}의 경우, 천식이나 기관지 염증 치료에 주로 사용되는 합성 스테로이드제인 덱사메타손 (dexamethasone; DEXA) 투여군 및 기존에 천식치료제로 흔히 사용되고 있는 몬테루카스트 (montelukast; Monte) 투여군과 유사하게 정상 대조군에 가까운 체중 회복 효과를 나타냄으로써， 스티락스리그놀리드 A 또는 호모에고놀은 천식에 의한 체중감소를 효과적으로 억제함을 확인하였다 (도 1 및 10 참조).
본 발명자들은 스티락스리그놀리드 A 또는 호모에고놀 투여에 따른 천식 발생에 의한 기도과민성 여부를 확인하기 위하여， 기도 저항 정도인 PenMenhanced pause) 수치를 측정하였다. 그 결과， 정상 대조군에서는 메타콜린 농도 증가에 따른 완만한 Pehn 수치 증가를 확인할 수 있었는데 반해， 천식 유도군에서는 유의적으로 급격히 증가한 Pehn 수치를 확인하였고， 덱사메타손 투여군과 몬테루카스트 투여군에서는 천식 유도군에 비해 유의적으로 감소된 pehn 수치가 나타났으나， 스티락스리그놀리드 A 또는 호모에고놀 투여군에서는 모든 농도의 메타콜린 처리에 있어서 상기 비교 약물군보다 현저히 감소된 pehn 수치를 확인할 수 있었다 (도 2, 표 1 및 도 11 참조). 본 발명자들은 스티락스리그놀리드 A 또는 호모에고놀 투여에 따른 기관지 폐포 세척액 내의 염증세포수를 분석한 결과， 호산구의 수는 천식 유도군에 비해 약물 투여군에서 모두 유의성있게 감소하였으나, 스티락스리그놀리드 A 또는 호모에고놀 투여군에서 가장 강력하게 호산구 침윤을 억제하는 것을 확인하였다. 그 외의 염증세포 수를 포함한 총 염증세포의 수도 천식 유도군에 비해 약물 투여군에서 모두 유의성있게 감소하였다 (도 3， 표 4 및 도 14 참조). 또한， 혈청 또는 기관지 폐포 세척액 내 난백알부민 특이 IgE의 농도를 측정한 결과， 혈청 내 총 IgE 농도는 천식 유도군에 비해 호모에고놀 투여군에서 유의적으로 감소하였고 (표 2 및 도 12 참조), 기관지 폐포 세척액 내 난백알부민 특이 IgE 농도는 천식 유도군에 비해 스티락스리그놀리드 A 또는 호모에고놀 투여군에서 유의성 있게 감소하였다 (도 4， 표 3 및 도 13 참조). 기관지 폐포 세척액 내 TGF-βΙ 및 IL— 17의 생성 역시 호모에고놀 투여군에서 유의적으로 억제되었다 (표 5， 도 15 및 16 참조). 아을러， 본 발명자들은 기관지 폐포 세척액으로부터 활성 산소의 발생량을 측정한 결과， 스티락스리그놀리드 A 투여군에서의 활성 산소 발생량은 천식 유도군보다 27.90% 감소하였고， 이는 덱사메타손 또는 몬테루카스트 투여군보다 현저히 우수한 활성 산소 생성 억제 효과를 나타내는 것이었다 (도 5 참조). '
본 발명자들은 상기 스티락스리그놀리드 A의 간에 대한 독성을 평가하기 위해， 혈청내 알라닌 아미노트랜스퍼라제 (Alanine aminotransferase, ALT) 및 아스파테이트 아미노트랜스퍼라제 (aspartate aminotransferase, AST)를 측정하였다. 그 결과， 혈청 ALT 및 AST의 농도는 천식 유도군에서 보다 텍사메타손 투여군에서 현저하게 증가하였고， 스티락스리그놀리드 A 투여군에서는 덱사메타손 투여군보다 현저히 낮은 농도를 나타냈다 (도 6 참조).
본 발명자들은 기도개형이 진행된 천식에 대한 스티락스리그놀리드 A 또는 호모에고놀의 효과를 알아보기 위하여， H&E 염색 및 조직 절편의 염증지수를 측정하여 점막내 염증세포 침윤， 배상 세포 (goblet cell), 기저막하부 섬유화를 확인하였다. 그 결과, 스티락스리그놀리드 A 또는 호모에고놀 투여군에서 가장 강력하게 염증 세포 침윤을 억제하는 것을 확인하였고 (도 7, 표 6 및 도 17 참조), 배상 세포의 비율이 가장 큰 폭으로 감소하는 것으로 나타남으로써 스티락스리그놀리드 A또는 호모에고놀은 가장 강력하게 점액 분비를 억제하는 것을 알 수 있었다 (도 8, 표 7 및 도 18 참조). 또한， 스티락스리그놀리드 A 또는 호모에고놀 투여군에서 가장 현저하게 기저막하부 섬유화가 감소하여 강력하게 기도재구성을 억제하는 것을 알 수 있었다 (도 9, 표 8 및 도 19 참조).
따라서， 스티락스리그놀리드 A 또는 호모에고놀은 난백알부민에 의한 천식 유도 동물 모델에서 현재 천식 치료제로서 널리 사용되는 덱사메타손 (dexamethasone) 보다 뛰어난 기도과민 반웅 억제 효과를 나타냈고， 기관지내 염증세포의 침윤을 억제하며， 기도개형 (기관지 상피세포 비후， 점액분비 세포의 과증식 및 섬유화)의 진행을 현저하게 억제하였으나 간에 미치는 독성은 덱사메타손 보다 훨씬 낮으므로, 스티락스리그놀리드 A 화합물, 이의 비당체인 호모에고놀 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 천식 예방 및 치료용 약학적 조성물의 유효성분으로서 유용하게 이용할 수 있다. 또한， 본 발명은 약학적으로 유효한 양의 스티락스리그놀리드 A 화합물， 이의 비당체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 약학적 조성물을 개체에 투여하는 단계를 포함하는 천식의 예방 방법을 제공한다.
또한， 본 발명은 약학적으로 유효한 양의 스티락스리그놀리드 A화합물， 이의 비당체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 약학적 조성물을 천식에 걸린 개체에 투여하는 단계를 포함하는 천식의 치료 방법을 제공한다.
상기 약학적으로 유효한 양이란 0.00001 내지 10 mg/kg이고, 바람직하게는
0.0001내지 1 rag/kg이나 이에 한정하지 않는다. 투여량은 특정 환자의 체중， 연령， 성별， 건강상태, 식이，투여기간， 투여방법， 제거율， 질환의 중증도 등에 따라 변화될 수 있다.
상기 개체는 척추동물이고 바람직하게는 포유동물이며， 그보다 바람직하게는 쥐， 토끼， 기니아피크, 햄스터, 개， 고양이와 같은 실험동물이고， 가장 바람직하게는 침팬지， 고릴라와 같은 유인원류 동물이다.
상기 투여 방법은 경구 또는 비경구 투여할 수 있으며, 비경구 투여시 복강내주사， 직장내주사， 피하주사， 정맥주사， 근육내 주사, 자궁내 경막 주사， 뇌혈관내(^ ^^^ ^(51 ^ 1131") 주사 또는 흉부내 주사에 의해 투여될 수 있다. 상기 천식은 기도개형이 진행된 천식인 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다.
본 발명의 스티락스리그놀리드 A또는 이의 비당체인 호모에고놀은 천식 유도 마우스 모델에서 체중감소 및 기도과민성을 경감시고， 기도내 활성산소 발생량 및 기관지내 염증세포의 침윤올 억제시키며， 점막내 염증세포 침윤， 배상세포 비율 및 기저막하부 섬유화 (subepithelialfibrosis)를 억제시키는 효과를 나타내는 반면에 간에 대한 독성은 기존의 천식치료제보다 현저히 낮음을 확인하였으므로, 천식의 예방 또는 치료에 유용하게 이용할 수 있다. 아을러， 본 발명은 스티락스리그놀리드 A 화합물, 이의 비당체 또는 이의 약학적오로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 천식 예방 및 개선용 건강식품용 조성물을 제공한다.
상기 스티락스리그놀리드 A 화합물은 하기 화학식 1로 기재되는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다:
Figure imgf000018_0001
상기 스티락스리그놀리드 A 화합물의 비당체는 하기 화학식 2로 기재되는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다:
[화학식 2]
Figure imgf000019_0001
상기 스티락스리그놀리드 A 화합물은 때죽나무 (5yr^ 로부터 분리한 것을 사용하는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않으며， 화학적으로 합성한 것을 사용할 수 있다.
상기 때죽나무는 전초를 사용할 수 있고， 즐기 및 나무 ¾질을 사용하는 것이 더욱 바람직하나 이에 한정되지 않는다.
상기 천식은 기도개형이 진행된 천식인 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다.
본 발명의 스티락스리그놀리드 A 화합물 또는 이의 비당체를 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고， 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다.'
본 발명의 건강식품용 조성물은 식품 제조 시에 통상적으로 첨가되는 성분을 포함하며， 예를 들어， 단백질， 탄수화물， 지방， 영양소 및 조미제를 포함한다.
상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 스티락스리그놀리드 A 화합물， 또는 이의 비당체를 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류， 소시지， 빵， 초콜릿， 캔디류， 스넥류， 과자류， 피자， 라면， 기타 면류， 껌류， 아이스크림류를 포함한 낙농제품， 각종 스프， 음료수， 차， 드링크제, 알코을음료 및 비타민 복합제 등이 있으며， 통상적인 의미에서의 건강식품을 모두 포함한다.
본 발명의 건강음료용 조성물은 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드 말토스, 슈크로스와 같은 디사카라이드, 및 덱스트린， 사이클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드, 자일리를, 소르비를， 에리트리를 등의 당알콜이다. 감미제로서는 타우마틴， 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제나， 사카린， 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 ^당 일반적으로 약 0.01 ~ 0.04 g, 바람직하게는 약 0.02 ~ 0.03 g 이다.
상기 외에 본 발명의 스티락스리그놀리드 A 화합물 또는 이의 비당체는 여러 가지 영양제， 비타민 , 전해질, 풍미제， 착색제， 펙트산 및 그의 염， 알긴산 및 그의 염，유기산，보호성 콜로이드 증점제， pH조절제， 안정화제， 방부제，글리세린， 알코올 , 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 밖에 본 발명의 스티락스리그놀리드 A화합물 또는 이의 비당체는 천연 과일주스， 과일주스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 흔합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 크게 중요하진 않지만 본 발명의 조성물 100 중량부당 0.01 ~ 0.1 증량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다ᅳ
본 발명의 스티락스리그놀리드 A또는 이의 비당체인 호모에고놀은 천식 유도 마우스 모델에서 체중감소 및 기도과민성을 경감시고， 기도내 활성산소 발생량 및 기관지내 염증세포의 침윤을 억제시키며， 점막내 염증세포 침윤, 배상세포 비율 및 기저막하부 섬유화 (subepithelialfibrosis)를 억제시키는 효과를 나타내는 반면 간에 대한 독성은 기존의 천식치료제보다 현저히 낮음을 확인하였으므로， 천식의 예방 또는 개선을 위한 건강식품용 조성물의 유효성분으로서 유용하게 이용할 수 있다. 또한， 본 발명은 천식 예방 및 치료용 약학적 조성물에 사용하기 위한 스티락스리그놀리드 A 화합물， 이의 비당체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 제공한다.
아울러， 본 발명은 천식 예방 및 개선용 건강식품용 조성물에 사용하기 위한 스티락스리그놀리드 A 화합물， 이의 비당체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 제공한다. .
상기 스티락스리그놀리드 A 화합물은 하기 화학식 1로 기재되는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다:
[화학식 1]
Figure imgf000021_0001
Figure imgf000021_0002
본 발명의 스티락스리그놀리드 A또는 이의 비당체인 호모에고놀은 천식 유도 마우스 모델에서 체중감소 및 기도과민성을 경감시고， 기도내 활성산소 발생량 및 기관지내 염증세포의 침윤을 억제시키며， 점막내 염증세포 침윤, 배상세포 비율 및 기저막하부 섬유화 (subepithelialfibrosis)를 억제시키는 효과를 나타내는 반면 간에 대한 독성은 기존의 천식치료제보다 현저히 낮음을 확인하였으므로， 천식의 예방 또는 개선을 위한 건강식품용 조성물의 유효성분으로서 유용하게 이용할 수 있다. 이하, 본 발명을 하기의 실시예 및 제조예에 의해 보다 상세하게 설명한다. 단， 하기 실시예 및 제조예는 본 발명의 내용을 예시하는 것일 뿐 발명의 범위가 실시예 및 제조예에 의해 한정되는 것은 아니다.
〈실시예 i>스티락스리그놀리드 (Styraxlignoid) A의 제조
때죽나무 (5. ' /7/ra 5/ . Et Zucc. , Styracaceae)줄기 및 나무껍질 120 kg을 채취하여 (제주， 대한민국)， 5 f의 메탄올 (MeOH)로 4회 추출하였다. 추출액을 수득하여 증류수로 현탁한 뒤 다시 핵산 (hexane)을 가하여 핵산층을 분리하였고, 남은 물층에 다시 에틸아세테이트 (EtOAc)를 가하여 에틸아세테이트 을 분리하여, 남은 물층을 Diaion HP-20 컬럼에 통과시켜 증류수 8 I, 50% MeOH 및 10OT MeOH에 녹여서 분리하였다. 수득한 메탄올 용해 분획물 (MeOH-soluble fraction)은 RP C-18 컬럼 크로마토그래피를 거쳐 50% MeOH, 25% MeOH, 100% MeOH로 녹여서 스티락스리그놀리드 (Styraxlignoid) A를 분리하였다.
<실시예 2>스티락스리그놀리드 (Styraxlignoid) A로부터 호모에고놀의 제조 호모에고놀의 합성은 기존에 보고된 방법 (Xue Fei Yang and Ling Yi Kong,
Chinese Chemical Letters 18， 2007, 380-382 참조)을 활용하되 신규한 단계 (단계 3)를 추가하는 합성 경로를 통해 제조하였다. 먼저 단계 1에서 중간체 4를 합성하였고， 단계 2에서 중간체 4와 8을 축합한 후, 트리메특시 에고놀 (trimethoxy egonol) 전구체인 화합물 10을 제조하였다. 마지막으로 단계 3에서 중간체 10의 카르복시산 에스터 (carboxylic acid ester)를 알코을로 환원하여 원하는 최종화합물 11(호모에고놀)을 수득하였다 (도 20).
<실시예 3>기관지 천식 유도 실험동물의 제작 및 화합물의 처리
기관지 천식 유도 실험동물을 제작하기 위하여， 평균 체중 20 g 내외의 6주령 Balb/c 암컷 생쥐를 사용하였다. 1주간의 적웅기간을 가진 후에 기본적인 신체검사상에서 이상이 관찰되지 않은 개체를 대상으로 하였다. 2주 간격으로 수산화알루미늄 (A8222, Sigma, St. Louis, M0) 2 mg 및 난백알부민 20 /zg(A5503, Sigma St. Louis, M0)을 현탁한 인산완충식염수 (phosphate buffered saline, PBS)(pH 7.4) 200 i 를 복강에 주입하여 감작시켰다. 첫 번째 난백알부민 복강투여 후 28일부터 30까지 1%난백알부민을 초음파분무기를 이용하여 30분간 흡입시켰다. 마지막 항원 투여 후 24시간 뒤에 기도과민성을 측정하였고， 48시간 뒤에 치사량의 펜토바비탈 (엔토발 한림제약주식회사)을 투여한 뒤 체중을 측정하고 기관지 절개를 실시하여 총 1.2 의 생리식염수로 기관지 폐포세척을 실시한 뒤 검체를 수거하였다. 정상 대조군 (NC)으로는 난백알부민을 투여 및 흡입하지 않은 군， 천식 유도군 (OVA)으로는 난백알부민을 투여 및 흡입하여 기관지 천식을 유도한 군， 비교군 l(DEXA)로는 난백알부민 흡입 1시간 전에 텍사메타손 (dexamethasone)(3 rag/kg, PO:D4902, Sigma, St. Louis, MO)을 경구투여한 군， 비교군 2(Monte)로는 난백알부민 흡입 1시간 전에 몬테루카스트 (montelukast)(30 mg/kg, P0)를 경구투여한 군， 스티락스리그놀리드 A에 대한 실험군으로는 난백알부민 흡입 1시간 전에 스티락스리그노이드 (Styraxlignoid) A(30 g/mi, P0)를 경구투여한 군으로 실험을 진행하였으며 각 군당 8 마리의 흰쥐를 사용하였고， 호모에고놀에 대한 실험군으로는 난백알부민 흡입 1시간 전에 호모에고놀을 7.5 mg/kg 경구투여한 군 (hE7.5), 15 rag/kg 경구투여한 군 (hE15), 30 mg/kg 경구투여한 군 (hE30)으로 실험을 진행하였으며 각 군당 5 마리의 흰쥐를 사용하였다.
<실험예 1>스티락스리그놀리드 A의 천식 유도 마우스에 대한 체중 감소 억제 효과
스티락스리그놀리드 A의 천식 유도 마우스 체중 감소에 미치는 효과를 확인하기 위하여， 상기 <실시예 2>에서 제작한 각각의 마우스에 대한 체중을 측정하였다. 이하 모든 측정값의 통계 분석은 여러 변수에 따른 평균값과 표준오차 (mean士 S.E.)를 계산하였고， 각 집단 간의 비교는 SPSS 10.0을 이용하여
Mann-whitney U검정을 수행하여 분석하였다. 통계적으로 p값이 0.05미만인 경우에 유의적 차이가 있다고 판정하였다.
그 결과， 도 1에 나타낸 바와 같이， 정상 대조군 (NC)의 체중은 21.22±0·3 1 g이었으나 천식 유도군 (0VA)은 19.59±0.27 g으로 현저한 체중감소를 보이는데 반해 덱사메타손 투여군인 비교군 l(DEXA)은 20.49±0.29 g, 몬테루카스트 투여군인 비교군 2(Monte)는 21.04±0.30 g, 스티락스리그놀리드 A투여군은 21.04±0.34 g으로 측정되어， 스티락스리그놀리드 A 투여군은 기존의 항천식용 약물 투여군과 유사한 체중회복 효과를 확인할 수 있었다 (도 1)··
<실험예 2> 스티락스리그놀리드 A의 천식 발생에 의한 기도과민성의 억제 스티락스리그놀리드 A에 의한 천식 발생에 의한 기도과민성 여부는 단일 챔버 체적변동 측정기 (one chamber lethysmography, All Medicus, 서을)를 사용한 기도 저항을 측정으로 확인하였으며， 기도 저항의 정도는 Pen enhanced pause) 수치를 측정하여 평가하였다. Penh 수치의 측정은 정상 호흡 상태에서 기저값을 측정한 후 PBS를 초음파분무기를 이용하여 3분간 흡입시킨 후 3분간 측정하였다. 이후， 기관지 천식올 진단하는 일반적인 방법에서 사용되는 히스타민제 메타콜린 (A2251, Sigma, St. Louis, M0)을 12， 25， 50 m / 의 농도로 점차 증가시키면서 흡입시킨 후 Pehn 수치를 측정하였고， Penh 결과 수치는 하기 수학식 1에 나타내었고， 결과 수치는 각 농도의 메타콜린 흡입 후 Penh의 증가 백분율로 표현하고， 기저 Penh (saline challenge)은 100%로 표시하였다.
【수학식 1】
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Te ： 호기 시간 (expiratory time) (초)
흡기에서 다음 흡기까지
RT ： 이완 시간 (relaxation time)
호기 동안호기양이 일회호흡양의 30%가 남을 때까지 걸리는 시간
PEF ： 최대 호기률 (Peak expiration flow)
PIF ： 최대 흡기률 (Peak inspiration flow) 그 결과， 도 2에 나타낸 바와 같이， 정상 대조군 (NC)에서는 메타콜린 농도 증가에 따른 완만한 Pehn 수치 증가를 나타냈으나， 천식 유도군 (OVA)에서는 유의적으로 급격히 증가하는 Pehn 수치를 확인할 수 있었다. 비교군 l(DEXA) 및 비교군 2(Monte)에서도 천식 유도군에 비해서 유의성적으로 감소된 pehn 수치를 확인하였으나， 스티락스리그놀리드 A 투여군에서는 메타콜린 12.5, 25 또는 50 nig/m의 농도에서 모두 비교군 보다 감소된 pehn수치를 확인할 수 있었다 (도 2). <실험예 3> 스티락스리그놀리드 A의 기관지 폐포 세척액 내 염증세포 억제 효과
상기 <실시예 2>의 각 실험군의 개체로부터 기관지 폐포 세척액을 회수하고， 회수된 즉시 트립판 블루 (Trypan blue)로 염색하여 사멸 세포를 제외한 총 세포수를 혈구계수기 (hemocytometer)를 사용하여 계산한 다음， 사이토스핀 (Cytospin) Π로 표본 도말 후 Diff-Quick 염색 (Sysmex, Switzerland)을 실시하여 호산구와 그 외의 염증세포를 감별 계산하였다.
그 결과， 도 3에 나타낸 바와 같이 , 호산구의 수는 정상 대조군 (NC)에서 0±0， 천식 유도군 (OVA)에서 622.55±74.18， 비교군 l(DEXA)에서 41.88±9.08， 비교군 2(Monte)에서 60.67±6.58，스티락스리그놀리드 A투여군에서 20.77±2.34로 측정되어 천식 유도군에 비해 약물 투여군에서 호산구 수는 모두 유의적으로 감소하였으나， 특히, 스티락스리그놀리드 A 투여군에서 가장 강력하게 호산구 침윤을 억제하는 것으로 나타났다. 그 외의 염증세포 수를 포함한 총 염증세포의 수는 정상 대조군에서 10.15±2.05， 천식 유도군에서 1238.65± 101.01， 비교군 1에서 153.48±19.69， 비교군 2에서 193.29±19.99， 스티락스리그놀리드 A 투여군에서
147.83±12.61로 측정되어, 천식 유도군에 비해 약물 투여군에서 모두 유의적으로 감소하였다 (도 3).
<실험예 4〉 스티락스리그놀리드 A의 기관지 폐포 세척액 내 난백알부민 특이 IgE 억제 효과
스티락스리그놀리드 A 투여에 의한 혈청 및 기관지 폐포 세척액의 난알부민 특이 IgE의 농도를 측정하기 위하여 면역효소법을 이용하였다. 난백알부민을 20 /g/ /의 농도로 pH 8.3의 0.1 M NAHCOs 완층액에 녹여 이를 96—웰 플랫 보텀 (flat bottom) EL ISA 플레이트에 넣어 40C에서 밤새 코팅시킨 후， 1¾소혈청알부민 (bovine serum albumin)이 함유된 PBS로 비특이 반응을 억제시키고， 혈청 검체를 1:400으로 회석하여 실온에서 2시간 동안 반웅시켰다. 그런 다음， 이를 잘 세척한 후， 항-마우스 IgE 단일클론 항체 (anti-mouse IgE monoclonal antibody)를 300배 희석하여 2시간 반웅시켰다. 그러고 나서 퍼록시다제 (peroxidase)가 결합된 HRP-결합된 염소 항 -랫드 IgG 다클론 항체 (HRP-conjugated goat ant i -rat IgG polyclonal antibody)를 4000배 희석하여 실온에서 1시간 반웅시킨 후 세척하였다. 발색은 3，3'，5,5'_테트라메틸벤지딘(3，3' ,5,5'-tetramethylbezidine) 기질로 반웅시킨 후 650 nm에서 분광 흡광도를 측정하였다.
그 결과, 도 4에 나타낸 바와 같이， 혈청내 난백알부민 특이 IgE농도는 천식 유도군 (462±79.82 ng/ )에 비해 스티락스리그놀리드 A 투여군 (382±60.60 ng/m£)에서 감소하였지만 유의적이지는 않았으나， 기관지 폐포 세척액 내 난백알부민 특이 농도는 천식 유도군 (26.5±2.96 ng/mO에 비해 스티락스리그놀리드 A투여군 (15.4±2.18 ng/m«에서 유의성 있게 감소하였다 (도 4).
<실험예 5>스티락스리그놀리드 A의 활성산소 발생량 억제 효과
스티락스리그놀리드 A의 투여에 의한 반응성 산소 생성량 ((Reactive oxygen species)을 측정하기 위하여， 상기 <실시예 2>의 각 개체의 일부 기관지 폐포 세척액을 PBS로 세척한 뒤， 10 μΜ 2， 7-디클로로플루오레세인 디아세테이트(2，그 (±10 ): 1110 ^11 ^^^^6)(35845， Sigma, ， St. Louis, M0)를 첨가하여 10 분간 상온 암실에서 방치한 후, spectroflurometer로 측정하였다 (Ex=480 nm, Em=522醒).
그 결과， 도 5에 나타낸 바와 같이 , 스티락스리그놀리드 A투여군에서의 활성 산소 발생량은 천식 유도군 보다 27.90% 감소하였으며， 텍사메타손 비교군 1 및 2 보다 뛰어난 활성 산소 발생량 억제 효과를 나타냈다 (도 5).
<실험예 6>스티락스리그놀리드 A의 간에 대한 독성 평가
스티락스리그놀리드 A의 간 독성을 확인하기 위하여， 시판용 ELISA 키트 (BECKMAN Coulter, Inc. , Fullerton, CA, USA)를 사용하여， 혈청 내 알라닌 아미노트랜스퍼라제 (Alanine aminotranf erase, ALT) 및 아스파테이트 아미노트랜스퍼라제 (aspartate aminotransferase, AST)를 측정하였다.
그 결과， 도 6에 나타낸 바와 같이， 혈청 ALT및 AST농도는 천식 유도군 (ALT: 132±19.25 IU/ί, AST: 235.33±22.40 IU/f) 보다 비교군 1(DEXA) (ALT: 274.67±12.12
IU/i, AST: 369.33±31.27 IU/D에서 현저하게 증가하였다 . 반면에， 비교군
2(Monte) (ALT: 122.50±14.94 IU/ί, AST: 205.00±27.17 IU/ 및 스티 락스리그놀리드
A 투여군 (ALT: 168.67±15.56 IU/ί, AST: 245.33±12.87 IU/ )에서는 비교군 1 보다 유의 적으로 낮은 농도 수치를 확인할 수 있었다 (도 6) ·
<실험 예 7> 스티락스리그놀리드 A의 기도개형 억제 효과
<7-1> 기도점막 내 염증세포 침윤 억제
각각의 개체로부터 적출된 폐장은 통상적 인 포르말린 고정과 파라핀 포매를 거 쳐 4 卿 두께로 영구조직 절편을 제작하여 헤마톡실린과 에 이오신 (H&E) 염 색을 실시 하였다 . H&E 염 색 후 각 개체의 조직 절편당 무작위로 5개 부위의 염증지수를 측정하여 평균을 내었다 . 염증지수 0 은 기관지 주변에 염증세포가 발견되지 않은 경우， 염증지수 1 은 간헐적으로 염증 세포가 관찰되는 경우 염증지수 2는 대부분의 기관지 주변에 한층에서 두세층 사이 의 얇은 염증세포층이 관찰되는 경우ᅳ 염증지수 3은 대부분의 기관지 주변에 두세층에서 다섯층 이하의 염증세포층이 관찰되는 경우， 염증지수 4 는 대부분의 기관지 주변에 다섯층 이상의 두꺼운 염증세포층이 관찰되는 경우로 평가하였다 .
그 결과， 도 7에 나타낸 바와 같이， 천식 유도군에서는 세기관지 주변에 호산구를 비롯한 많은 염증세포가 침윤되 어 있었으며 과다 증식된 상피 세포와 비후된 기관지 평 활근도 확인할 수 있었다 . 반면에 약물을 투여한 군에서는 염증세포의 침윤이 현저하게 감소되어 있었으며 이를 수치화하였을 때 천식 유도군은 세기관지 주변의 염증 지수가 4.00±0.00이 었으나 비교군 l(DEXA)은 1.46±0.26 , 비교군 2(Monte)는 2.00±0.23， 스티 락스리그놀리드 A 투여군은 1.17±0.2로 모두 천식 유도군에 비해 유의 적으로 감소하였으나，스티 락스리그놀리드 A 투여군에서 가장 강력하게 염증 세포 침윤을 억제하는 것을 확인할 수 있었다 (도 7) . <7-2>배상세포 (goblet cell) 억제
각각의 개체로부터 적출된 폐장은 통상적인 포르말린 고정과 파라핀 포매를 거쳐 4 i \두께로 영구조직 절편을 제작하여 과요오드산쉬프 (Per iodic acid Schiff , PAS) 염색을 통해 감별된 배상세포 (goblet cell)가 기관지 상피세포에서 차지하는 비율을 측정하여 배상세포 증식 정도를 평가하였다.
그 결과， 도 8에 나타낸 바와 같이, 정상 대조군에 있어서， 배상세포는 세기관지 상피세포에서 차지하는 비율이 0.65±0.91%이었으나， 천식 유도군에서는 57.52±6.19%로 증가하였으며 이는 비교군 1(DEXA)(34.96±6.86%), 비교군
2(Monte)(37.05±7.19%),스티락스리그놀리드 A투여군 (29.52±8.02%)에서 유의적으로 감소하였으나， 스티락스리그놀리드 A 투여군에서 가장 큰 감소폭을 보여 강력하게 점액분비를 억제하는 것을 확인할 수 있었다 (도 8).
<7-3> 기관지 하부와섬유화 억제
기관지 하부의 섬유화 정도를 측정하기 위하여 , 각각의 개체로부터 적출된 폐장은 통상적인 포르말린 고정과 파라핀 포매를 거쳐 4 두께로 영구조직 절편을 제작하여 Masson's trichrome 염색을 실시하여 기저막 하부에 염색되는 세포외기질 (extracellular matrix) 부위의 면적을 측정한 뒤， 기저막 둘레의 길이 100 당 섬유화 염색부위의 면적을 계산하였다. 모든 측정은 computerized image analyzer 프로그램을 이용하였다.
그 결과， 도 9에 나타낸 바와 같이， 기저막 둘레의 길이 100 im 당 섬유화 염색부위의 면적은 정상 대조군에서 371.25±100.39 i/m2이었고， 천식 유도군에서는 2173.88±275.27 2로 정상의 7배 가량 증가하였다. 섬유화는 비교군 1(DEXA)(639.59±106.96 2) , 비교군 2(Monte)(991.75±108.35 /m2), 스티락스리그놀리드 Α투여군 (495.69±98.62 2)에서 모두 유의적으로 감소하였으나 스티락스리그놀리드 A 투여군에서 가장 많이 감소하여 강력하게 기도재구성을 억제하는 것을 확인할 수 있었다 (도 9). · <실험예 8>호모에고놀의 천식 유도 마우스에 대한 체중 감소 억제 효과 호모에고놀의 천식 유도 마우스 체중 감소에 미치는 효과를 확인하기 위하여 상기 <실시예 2>에서 제작한 각각의 마우스에 대한 체중을 측정하였다. 이하 모든 측정값의 통계 분석은 여러 변수에 따른 평균값과 표준오차 (mean±S.E.)를 계산하였고, 각 집단 간의 비교는 SPSS 10.0올 이용하여 Mann— whitney U 검정을 수행하여 분석하였다. 통계적으로 p값이 0.05 미만인 경우에 유의적 차이가 있다고 판정하였다.
그 결과， 도 10에 나타낸 바와 같이， 정상 대조군의 체중은 21.96±0.25 g 이었으나 천식 유도군은 18.52土 0.45 g으로 현저한 체중감소를 보이는데 반해， 비교군 1(DEXA)(19.98±0.39 g), 비교군 2(Monte)(21.08±0.57 g)， 호모에고놀을 7.5 mg/kg경구투여한 군 (22.10±0.13 g), 15 mg/kg경구투여한 군 (21.23±0.43 g), 30 mg/kg경구투여한 군 (21.98±0.47 g), 비교군 l(DEXA)을 제외한 약물 투여군은 모두 정상 대조군에 가까운 체중회복을 확인할 수 있었다 (도 10). <실험예 9>호모에고놀의 천식 발생에 의한 기도과민성의 억제 효과
호모에고놀의 천식 발생에 의한 기도과민성 여부를 확인하기 위하여， 상기 <실험예 2>의 방법에 Penh 값을 측정하였다.
그 결과, 표 1 및 도 11에 나타낸 바와 같이， 정상 대조군에서는 메타콜린 농도 증가에 따른 완만한 penh 수치 증가를 확인하였으나， 천식 유도군에서는 유의성 있게 급격한 penh수치의 증가를 확인할 수 있었다. 반면， 비교군 l(DEXA), 비교군 2(Monte)및 호모에고놀 투여군 (hE7.5, hE15및 hE30)에서는 메타콜린 농도에 상관없이 천식 유도군 보다 유의하게 감소되었으며, 호모에고놀의 처리 농도가 증가함에 따라 더욱 감소하는 양상을 확인할 수 있었다. 또한， 이러한 차이는 저농도의 메타콜린 보다는 고농도의 메타콜린을 흡입시켰을 때 더욱 뚜렷한 차이를 나타내었다.
【표 1】
Penh수치
구분
0 mg/ i 12.5 mg/ml 25 mg/ ml 50 mg/ hE7.5 0.6003 ±0.0500 1.1399 ±0.1279 1.4067±0·1279 1.4317 ±0.2094 hE15 ().4538 ±0.0376 0.7989 ±0.0736 1.0243 ±0.1881 1.0918 ±0.1914 hE30 0.4736 ±0.0420 0.6516 ±0.0914 0.9515 ±0.1268 1.0576 ±0.1582 정상 대조군 (NC) 0.3231 ±0.0351 0.3897 ±0.0501 0.5210 ±().0710 0.6763 ±0.0678 천식 유도군 (OVA) ().9621 ±0.1292 4.5805 ±0.4980 그 2499 ±0.5919 8.8944 ±으 9386 비교군 l(DEXA) 0.4407 ±0.0422 0.7768 ±0.1475 0.8900 ±0.1619 1.1036 ±0.4048 비교군 2 (Monte) 0.6071 ±0.0618 1.2979 ±().1537 1.4748 ±0.1639 2.3069 ±0.4225
<실험예 10>호모에고놀의 혈청 및 기관지 폐포 세척액 내의 IgE측정
호모에고놀의 천식에 대한 효과를 알아보기 위하여， 천식의 중증도와 상관관계가 있는 IgE농도를 측정하기 위해 상기 <실험예 4〉의 방법에 따라 혈청 및 기관지 폐포 세척액 내 IgE를 측정하였다.
그 결과， 하기 표 2 및 도 12에 나타낸 바와 같이， 혈청 내의 IgE 항체의 농도를 측정한 결과, 혈청 내 IgE 항체 농도는 천식 유도군 (0VA)(11.85±2.6994 yg/ )에 비해 본 발명의 호모에고놀을 투여한 군에서는 19.22±4.9287 μ g/mi (hE7.5), 10.74±3.4612 μ g/mi (hE15), 및 8.14±5.9682 ug/m£ (hE30)로측정되어 호모에고놀의 농도에 따라 유의성 있게 혈청 내 IgE 항체가 감소하는 것으로 나타났다. 또한，하기 표 3및 도 13에 나타낸 바와 같이 , 기관지 폐포 세척액 내의 IgE 항체 농도는 천식 유도군 (146.5745 ±18.7560 ng/ )에 비해 호모에고놀을 투여한 군에서는 65.5957 ±11.6656 ng/mi (hE7.5), 48.4894 ±4.1926 ng/ i (hE15), 및 23.8085 ±3.3515 ng/mi (hE30)로 측정되어 호모에고놀 농도에 따라 기관지 폐포 세척액 내 IgE 항체가 유의성 있게 감소하는 것으로 나타났다.
【표 2】
혈청 내의 총 IgE 농도
(ug/mi)
hE7.5 10.34±6.0548
hE15 9.94±5.0656
hE30 8.62±2.4844 정상 대조군 (NC) 5.98±0·4775
천식 유도군 (OVA) 20.58±3.3923
비교군 l(DEXA) 9.14±2.0591
비교군 2 (Monte) 16.22±2.6329
【표 3】
기관지 폐포 세척액 내의 총 IgE 농도
(ng/ )
hE7.5 65.5957 ±11.6656
hE15 48.4894 ±4.1926
hE30 23.8085 ±3.3515
정상 대조군 (NC) 7.2979 ±2.6622
천식 유도군 (OVA) 146.5745 ±18/7560
비교군 l(DEXA) 24.3617 ±4.8149
비교군 2(Monte) , 104.7447±9·7295
<실험예 11>호모에고놀의 기관지 폐포 세척액 내 염증세포 억제 효과 호모에고놀의 천식에 대한 효과를 알아보기 위하여, 상기 <실험예 3>의 방법에 따라 천식과 관련이 있는 염증세포 수의 증감을 측정하였다.
그 결과， 하기 표 4 및 도 14에 나타낸 바와 같이, 총 염증세포의 수는 정상 대조군에서 6.68±0.7626， 천식 유도군에서 225.00 ± 23.6323， 비교군 l(DEXA)에서 20.04 ±4.7744， 비교군 2(Monte)에서 67.96 ± 15.0532， 호모에고놀 투여군에서 각각 42.80 ±7.2060 (hE7.5), 39.72 ±4.4400 (hE15) 및 33.88 ±8.1589 (hE30)로 측정되어 천식 유도군에 비해 호모에고놀 투여군에서 모두 염증세포가 유의성 있게 감소하였다. 특히， 조직에 침투하여 세포성 매개 면역에 주로 관여하는 세포로서, 세포, 비장 및 호흡기 등에 걸쳐 퍼져있고， 염증성 단백질을 함유하고 있어， 천식 발병에 중요한 역할올 하는 것으로 알려진 호산구의 수는 정상 대조군에서 0.00±0.00， 천식 유도군에서 108.88±14.09, 비교군 1에서 1.32±0.49， 비교군 2는 19.12±9.17， 호모에고놀 투여군에서 각각 12.80±2.50 (hE7.5), 6.32±0.86 (hE15) , 및 5.48 ±2.02 (hE30)로 측정되어, 천식 유도군에 비해 호모에고놀 투여군에서 모두 유의성 있게 감소하였다.
【표 4]
Figure imgf000032_0001
<실험예 12> 호모에고놀의 기관지 폐포 세척액 내 TGF-(31 및 ILᅳ 17 억제 효과
호모에고놀의 기도개형에 대한 효과를 알아보기 위하여 기관지 폐포 세척액내 TGF— (31 및 IL-17 생성을 측정하였다.
그 결과, 하기 표 5， 도 15 및 도 16에 나타낸 바와 같이， 호모에고놀 투여군은 천식 유도군에 비해 기관지 폐포 세척액 내의 TGF— [31 및 IL-17를 유의성 있게 억제하였다.
【표 5]
기관지 폐포 세척액 내의 기관지 폐포 세척액 내의 TGF-βΙ농도 IL-17농도
(pg/mi) (pg/uO
hE7.5 216.1875 ±13.5904 70.3409 ±14.2912 hE15 190.4375 ±13.0702 43.5682 ±2.9102 hE30 186.8125 ±6.4551 27.3863 ±5.7881 정상 대조군 (NC) 50.6875 ±44.8720 3.8863 ±1.2613 천식 유도군 (OVA) 376.8125 ±24.2240 97·5682±18.1885 비교군 l(DEXA) 159.2813 ±12.9548 48.8409 ±4.3738 비교군 2 (Monte) 215.9375 ±13.4334 15.8409 ±2.5686
<실험예 12>호모에고놀 투여에 의한조직병리학적 분석
호모에고놀의 천식에 대한 효과를 알아보기 위하여， 기관지 폐포 세척을 수행하지 않은 폐를 분리하여 상기 실험예 <7-1>의 방법에 따라 조직병리학적 검사를 수행하였다. 이때， 항원이 야기된 기관지에서는 호산구， 호중구 및 대식세포로 이루어진 염증성 세포의 침윤이 관찰되므로， 이를 검출하고자 하였다. 그 결과, 천식 유도군에서는 세기관지 주변에 호산구를 비롯한 많은 염증세포가 침윤되어 있었으며 과다 증식된 상피세포와 비후된 기관지 평활근도 확인되었다. 반면， 표 6， 및 도 17에 나타낸 바와 같이， 약물을 투여한 군에서는 염증세포의 침윤이 현저하게 감소되어 이를 수치화하였을 때 천식 유도군은 세기관지 주변의 염증 지수가 2.75± 0.1083이었으나， 비교군 l(DEXA)은 0.78±0.1315, 비교군 2(Monte)는 1.70±0.2470， 및 호모에고놀 투여군은 각각 1.67±0.1491 (hE7.5), 1·40±0.1549 (hE15), 및 1.00±0.2449 (hE30)로 모두 천식 유도군에 비해 유의성 있게 감소하는 것으로 나타났다. 또한， 혈관 주변의 염증 지수는 천식 유도군에서 32.81 ±0'.0976로 나타났으나， 비교군 l(DEXA)은 0.44±0.1571, 비교군 2(Monte)는 2.20±0.1897， 및 호모에고놀 투여군은 1.89±0.1791 (hE7.5), 1.70±0.1449 (hE15) , 및 1.30±0·2025 (hE30)로 모두 천식 유도군에 비해 유의성 있게 감소하는 것으로 나타났다. 【표 6】
세기관지 주위 혈관 주위 hE7.5 1.67±0.1491 1.89±0.1791 hE15 1.40±0.1549 1.70±0.1449 hE30 1.00±0.2449 1.30±0.2025 정상 대조군 (NC) 0.10±0.0949 0.00±0.00 천식 유도군 (OVA) 2.75±0.1083 2·81±0·0976 비교군 l(DEXA) 0.78±0.1315 0.44±0.1571 비교군 2 (Monte) 1.70±0.2470 2.20±0.1897
<실험예 13> 호모에고놀의 비상세포 억제 효과
상시 실험예 <7-2>의 방법에 따라， 과요오드산쉬프 (Per iodic acid Schiff) 염색을 통해 감별된 비상세포 (gob let cell)가 기관지 상피세포에서 차지하는 비율을 측정하여 비상세포 증식 정도를 평가하였다.
그 결과， 표 7 및 도 18에 나타낸 바와 같이 정상 대조군에서 비상세포가 세기관지 상피세포에서 차지하는 비율은 2.7741 ±0.7381% 이었지만 천식 유도군에서는 55.5196 ±1.3706%로 증가하였으며， 이는 비교군 l(DEXA)에서는 18.7828±5.9397¾)， 비교군 2(Monte)에서는 34.6476 ± 11.5492%로 감소하였으며, 호모에고놀 투여군은 36.5600 ±11.5613% (hE7.5), 32.4109 ± 10.8037% (hE15) , 및 25.0956 ±3.4033% (hE30)로 모두 천식 유도군에 비해 유의성 있게 감소하는 것으로 나타났다.
【표 7]
Figure imgf000034_0001
<실험예 14>호모에고놀의 기저막하부의 섬유화 억제 효과
상기 실험예 <7-3>의 방법에 따라, 기저막하부의 섬유화 정도를 측정하기 위하여 Masson's tri chrome 염색을 시행하여 기저막하부에 염색되는 세포외 기질 (extracellular matrix) 부위의 면적을 측정한 뒤， 기저막 둘레의 길이 100 μιη 당 섬유화 염색부위의 면적을 계산하였다.
그 결과， 표 8 및 도 19에 나타낸 바와 같이， 기저막 둘레의 길이 100 um 당 섬유와 염색부위의 면적은 정상 대조군에서 195.95 ±19.0464 Um2 였고， 천식 유도군에서는 1907.34 ±85.3287 μιιι2로 정상의 10 배 가량 증가하였다. 섬유화는 비교군 l(DEXA)에서 308.77 ±49.0266 μιη2, 비교군 2(Monte)에서 537.98 ±72.4581 lin ， 호모에고놀 투여군은 각각 527.25 ±71.3953 μηι2 (hE7.5), 425.64 ±64.6798 μιτι2 (hE15), 및 320.99 ± 46.2236 μηι2 (hE7.5)로 측정되어 모두 천식 유도군에 비해 섬유화가 유의성 있게 감소하는 것으로 나타났다.
【표 8]
Figure imgf000035_0001
<제조예 1> 약학적 제제의 제조
<1-1>산제의 제조
본 발명의 스티락스리그놀리드 Α 화합물 2 mg
O
당 1 g
상기의 성분을 흔합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조하였다.
<1-2> 정제의 제조
본 발명의 스티락스리그놀리드 A 화합물 100 mg
옥수수전분 100 rag
유 당 . 100 mg 스테아린산마그네슘 2 rag
상기의 성분을 흔합한후， 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다.
<1-3> 캡슐제의 제조
본 발명의 호모에고놀 화합물
옥수수전분
ᄋ
ΤΓ 당 100 mg
스테아린산 마그네슘 2 nig
상기의 성분을 혼합한 후， 통상의 캡슐제의 제조방법에 따라서 젤라틴 충전하여 캡술제를 제조하였다.
<1-4>환의 제조
본 발명의 호모에고놀 화합물 1 mg
ᄋ
당 1.5 g
글리세린 · 1 g
자일리를 0.5 g
상기의 성분을 흔합한 후， 통상의 방법에 따라 1 환 당 4 g이 되도록 제조하였다.
<1-5>과립의 제조 - 본 발명의 호모에고놀 화합물 150 mg
대두 추출물 50 rag
포도당 200 rag
전분 600 rag
상기의 성분을 흔합한 후， 30% 에탄올 100 rag을 첨가하여 섭씨 60oC에서 건조하여 과립을 형성한후 포에 충진하였다.
<제조예 2>식품의 제조 본 발명의 스티락스리그놀리드 A 화합물을 포함하는 식품들을 다음과 같이 제조하였다.
<2-1> 밀가루 식품의 제조
본 발명의 스티락스리그놀리드 A 화합물 0.5~5.0 중량부를 밀가루에 첨가하고 이 흔합물을 이용하여 빵, 케이크， 쿠키, 크래커 및 면류를 제조하였다.
<2-2>스프 및 육즙 (gravies)의 제조
본 발명의 스티락스리그놀리드 A 화합물 0.1-5.0 중량부를 스프 및 육즙에 첨가하여 건강 증진용 육가공 제품， 면류의 수프 및 육즙을 제조하였다.
<2-3>그라운드 비프 (ground beef)의 제조
본 발명의 스티락스리그놀리드 A 화합물 10 중량부를 그라운드 비프에 첨가하여 건강 증진용 그라운드 비프를 제조하였다. <2-4>유제품 (dairy products)의 제조
본 발명의 스티락스리그놀리드 A화합물 5~10중량부를 우유에 첨가하고,상기 우유를 이용하여 버터 및 아이스크림과 같은 다양한 유제품을 제조하였다.
<2-5>선식의 제조
현미， 보리 찹쌀, 율무를 공지의 방법으로 알파화시켜 건조시킨 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60 메쉬의 분말로 제조하였다.
검정콩, 검정깨， 들깨도 공지의 방법으로 찌서 건조시킨 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60 메쉬의 분말로 제조하였다.
본 발명의 스티락스리그놀리드 A 화합물을 진공 농축기에서 감압농축하고， 분무, 열풍건조기로 건조하여 얻은 건조물을 분쇄기로 입도 60 메쉬로 분쇄하여 건조분말을 얻었다.
상기에서 제조한 곡물류， 종실류 및 스티락스리그놀리드 A 화합물을 다음의 비율로 배합하여 제조하였다.
곡물류 (현미 30 중량부， 율무 15 중량부， 보리 20 중량부),
종실류 (들깨 7 중량부， 검정콩 8 중량부， 검정깨 7 중량부)， 스티락스리그놀리드 A화합물 (3 중량부),
영지 (0.5 중량부)，
지황 (0.5 중량부)
<제조예 3>음료의 제조
<3-1>건강음료의 제조
액상과당 (0.5%), 올리고당 (2%), 설탕 (2%), 식염 (0.5 ))， 물 (75%)과 같은 부재료와 본 발명의 호모에고놀 5 rag을 균질하게 배합하여 순간 살균을 한 후 이를 유리병, 패트병 등 소포장 용기에 포장하여 제조하였다.
<3-2> 야채 주스의 제조
본 발명의 호모에고놀 화합물 5 mg을 토마토 또는 당근 주스 1,000 ^에 가하여 야채 주스를 제조하였다.
<3-3>과일 주스의 제조
본 발명의 호모에고놀 화합물 1 rag을 사과 또는 포도 주스 1,000 mi 에 가하여 과일 주스를 제조하였다. '

Claims

【청구의 범위】
【청구항 1】
스티락스리그놀리드 (Styraxlignolide) A 화합물， 이의 비당체 (aglycone) 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 천식 예방 및 치료용 약학적 조성물.
【청구항 2】
제 1항에 있어서, 상기 스티락스리그놀리드 A 화합물은 하기 화학식 1로 기재되는 것을 특징으로 하는 천식 예방 및 치료용 약학적 조성물:
[화학식 1]
Figure imgf000039_0001
【청구항 3]
제 1항에 있어서， 상기 비당체는
호모에고놀 (homoegonol)인 것을 특징으로 하는
조성물:
[화학식 2]
Figure imgf000039_0002
【청구항 4】 제 1항에 있어서， 상기 스티락스리그놀리드 A 화합물은 때죽나무 C y ^ ' /ca)로부터 분리되는 것을 특징으로 하는 천식 예방 및 치료용 약학적 조성물.
【청구항 5】
.제 1항에 있어서， 상기 천식은 기도개형이 진행된 천식인 것을 특징으로 하는 천식 예방 및 치료용 약학적 조성물.
【청구항 6】
스티락스리그놀리드 (Styraxlignolide) A 화합물， 이의 비당체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 천식 예방 및 개선용 건강식품용 조성물.
【청구항 7】
제 6항에 있어서， 상기 스티락스리그놀리드 A 화합물은 하기 화학식 1로 기재되는 것을 특징으로 하는 천식 예방 및 개선용 건강식품용 조성물:
Figure imgf000040_0001
【청구항 8】
제 6항에 있어서, 상기 비당체는 하기 화학식 2로 기재되는 호모에고놀인 것을 특징으로 하는 천식 예방 및 개선용 건강식품용 조성물:
[화학식 2] .
Figure imgf000041_0001
【청구항 9]
제 6항에 있어서， 상기 스티락스리그놀리드 A 화합물은 때죽나무 (5yrar 로부터 분리되는 것을 특징으로 하는 천식 예방 및 개선용 건강식품용 조성물.
【청구항 10】
제 6항에 있어서， 상기 천식은 기도개형이 진행된 천식인 것을 특징으로 하는 천식 예방 및 개선용 건강식품용 조성물. ,
【청구항 11】
약학적으로 유효한 양의 스티락스리그놀리드 A 화합물， 이의 비당체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 약학적 조성물을 개체에 투여하는 단계를 포함하는 천식의 예방 방법 .
【청구항 12]
약학적으로 유효한 양의 스티락스리그놀리드 A 화합물, 이의 비당체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 약학적 조성물을 개체에 투여하는 단계를 포함하는 천식의 치료 방법 .
【청구항 13】
천식 예방 및 치료용 약학적 조성물에 사용하기 위한 스티락스리그놀리드 A 화합물， 이의 비당체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염 . 【청구항 14]
천식 예방 및 개선용 건강식품용 조성물에 사용하기 위한 스티락스리그놀리드 A 화합물， 이의 비당체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염 .
PCT/KR2011/008805 2010-11-17 2011-11-17 스티락스리그놀리드 ａ 또는 이의 비당체를 유효성분으로 함유하는 천식의 예방 또는 치료용 조성물 Ceased WO2012067447A2 (ko)

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