WO2012097575A1 - 一种制备提高免疫力的药物组合物的方法及其制得的药物组合物 - Google Patents

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    • A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine

Definitions

  • the invention relates to a pharmaceutical composition for preparing immunity and a preparation method thereof.
  • Immunity is the body's own defense mechanism. It is the body's ability to recognize and destroy any foreign body (virus, bacteria, etc.); to deal with aging, injury, death, degeneration of self-cells, and to identify and treat mutant cells and virus-infected cells in vivo. . Modern immunology believes that immunity is the physiological response of the human body to recognize and eliminate "dissidents.” It is the immune system that performs this function in the human body. For millions of years, human beings have lived in an environment that is both viable and dangerous, and human beings have survived and gained extraordinary immunity. So immunity is the product of biological evolution.
  • Ginseng The root of the ginseng (Ginseng) of Araliaceae. More than 30 ginseng ginseng, ginseng, ginseng, ginseng, ginseng, ginseng, ginseng, ginseng, ginseng, ginseng, ginseng, ginseng, ginseng, ginseng, ginseng, ginseng, ginseng, ginseng, ginseng, ginseng, ginseng, ginseng, ginseng, ginseng, ginseng, ginseng, ginseng, ginseng, ginseng Saponins are the material basis for the physiological activity of ginseng.
  • the fruit and vegetable transformant stock solution is a full-featured natural food extracted from more than 60 kinds of natural vegetable and fruit plant extracts and fermented into beneficial bacteria, which is rich in vitamins, minerals and amino acids. It can supply complete nutrients to cells, repair cells, and increase the efficiency of biochemical reactions of other beneficial components in cells.
  • the object of the present invention is to provide a ginseng enzyme composition for improving immunity and preparation thereof Method.
  • the method provided by the invention comprises the following steps:
  • the ginseng ethanol extract containing ginseng total saponin is mixed with the fruit and vegetable fermentation conversion liquid to obtain a mixture, that is, a pharmaceutical composition for improving immunity is obtained;
  • the ginseng ethanol extract containing ginseng total saponin is prepared according to the method comprising the following steps: refluxing the ginseng with an aqueous solution of ethanol to obtain an extract, thereby obtaining an ethanol extract of ginseng containing total ginsenoside;
  • the fruit and vegetable fermentation conversion liquid is prepared according to the method comprising the steps of: fruit and vegetable, Lactobacillus acidophilus, Bifidobactreium longum, Bacillus lentus, P. subsp. Lac tobacillus delbrueckiisubsp. bulgaricus)
  • the bacterial liquid, Streptococcus thermophilus, and water are mixed and fermented to obtain a fermentation product, that is, a fermentation product for fruit and vegetable is obtained.
  • each 1 L of the mixture is prepared as follows: the ginseng ethanol extract containing ginseng total saponin is mixed with the fruit and vegetable fermentation conversion liquid, and the fruit and vegetable fermentation conversion liquid is used to make up the volume, so that the ginseng total saponin is in the The concentration of the mixture is 1. 5 g / 1 -50 g / 1 ;
  • Each 1 L of the mixture is prepared according to the following method: mixing the ginseng ethanol extract containing ginseng total saponin with the fruit and vegetable fermentation conversion solution, supplementing the volume with the fruit and vegetable fermentation conversion solution, and making the ginseng total saponin in the mixture
  • the concentration is 1. 5 g / l, 15 g / 1 or 50 g / l.
  • each time the reflux extraction time is 2 h -5 h, and the time of each reflux extraction is specifically 2 h, 3 h or 5 h;
  • the concentration of the aqueous ethanol solution is 70% (volume percentage);
  • the fermentation temperature is 18 ° C - 37 ° C
  • the fermentation temperature is specifically 18 ° C, 23 ° C or 37 ° C
  • the fermentation time is 10 days - 180 days
  • the fermentation time is specifically For 10 days, 15 days or 180 days
  • the fermentation mode is fermentation while stirring.
  • the method further comprises the following steps:
  • the extract is removed from ethanol, concentrated and dried to obtain a dried product, which is In the method for preparing the fruit and vegetable fermentation conversion solution,
  • the method further comprises the steps of pulverizing the fruit and vegetable into a size of 40-50 mesh; after the fermentation, further comprising the steps of: filtering the fermentation product, collecting the filtrate, ultrafiltration, collecting the ultrafiltered liquid, It is a fermentation conversion solution for fruits and vegetables.
  • Ultrafiltration is to ultrafiltration of the filtrate by 100,000 molecular weight (injection pressure 1.3 kg, discharge pressure 0.5 kg)
  • the fruits and vegetables are a mixture of the following 54 fruits and vegetables:
  • Each of the fruits and vegetables has the same quality.
  • the ratio of the aqueous ethanol solution to the ginseng is (1-10) ml: lg ;
  • the ratio of the aqueous solution of ethanol and the ginseng is specifically (1, 5 or 10) ml: lg ; in the preparation method of the fermentation conversion liquid of the fruit and vegetable:
  • the Lactobacillus acidophilus bacterial solution is prepared as follows: Lactobacillus faecalis Lactobacillus acidophilus Sc ic ⁇ ⁇ ) bacterial liquid; the fermentation temperature is 20 ° C -4 rC, the fermentation temperature is specifically 20 ° C, 37 ° C or 41 ° C, the fermentation time is 15 h - 36 h, The fermentation time is specifically 15 h, 16 h or 36 h;
  • the Bifidobacterium longum iBifidobactreiim longum is prepared according to the following method: fermenting the Bifidobacterium longiflorum fiidobactreium longum) to obtain a fermentation product, which is a Bifidobacterium longibacterium fiidobactreium longum); the fermentation temperature is 20°. C-4rC, the fermentation temperature is specifically 20 ° C, 37 ° C or 41 ° C, the fermentation time is 15 h - 36 h, the fermentation time is specifically 15 h, 16 h or 36 h;
  • the Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus broth is prepared as follows: Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus is cultured to obtain a fermentation product, ie, For the Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus ⁇ the fermentation temperature is 20 ° C - 41 ° C, the fermentation temperature is specifically 20 ° C, 37 ° C or 41 ° C, the fermentation time is 15 H-36 h, the fermentation time is specifically 15 h, 16 h or 36 h;
  • the Streptococcus thermophilus lysate is prepared as follows: The rep ococras thermophilus is cultured to obtain a fermentation product, which is a thermophilic streptococci ( ⁇ rep ococras thermophilus huai)
  • the fermentation temperature is 20 ° C - 4 r C
  • the fermentation temperature is specifically 20 ° C, 37 ° C or 41 ° C
  • the fermentation time is 15 h - 36 h
  • the fermentation time is specifically 15 h, 16 h Or 36h.
  • the Lactobacillus acidophilus is Lactobacillus acidophilus CGMCC 1. 1854
  • the Bifidobactreium longum is Bifidobactreium longum CGMCC 1. 2186
  • the German milk Lactobacillus delbrueckiisubsp. bulgaricus is Lactobaci llus delbruecki i subsp. bulgaricus CGMCC 1. 1480
  • the Streptococcus thermophilus is a thermophilic chain. ⁇ Streptococcus thermophilus) CGMCC 1. 2471.
  • the culture medium of the fermentation culture is as follows: 10 g of peptone, 10 g of beef extract, 5 g Yeast extract, 20 g glucose, lg Tween-80, 2 gK 2 HP0 4 , lg Tween-80, 5 g NaAC, 2 g triammonium citrate, 0.2 g MgS0 4 , 0.05 g MnS0 4 mixed with water, made up to 1 L with water The resulting medium.
  • the immunogenic drug prepared by the method described is also within the scope of the present invention.
  • the experiment of the invention proves that the ginseng ethanol extract and the fruit and vegetable fermentation conversion liquid extracted by the method of the invention have short extraction time and large extraction amount, and the ginseng ethanol extract and the fruit and vegetable fermentation conversion liquid can be used as the main raw materials to prepare the medicine for improving immunity.
  • the flavoring agent of this product uses baisheng sugar, which reduces the use of sweeteners such as glucose and sucrose which are easy to cause blood sugar in oral liquid. Use amount to benefit more people.
  • Example 1 Obtaining an immunogenic ginseng enzyme composition
  • Ginseng purchased from Jilin Zixin Pharmaceutical Co., Ltd.
  • Quality monitoring is strictly carried out in accordance with the requirements of the company's standards before feeding.
  • Ginseng is weighed according to the formula amount, washed with water, drained, and extracted twice with 10 times (v/w) 70% ethanol aqueous solution, and extracted for 3 hours each time; filtered, the filtrate is combined, and ethanol is recovered under reduced pressure.
  • the filtrate is concentrated to a relative density of 1. 10-1. 15 (0. 07MPa, 70 ° C), spray drying (inlet temperature of 170 ° C, outlet temperature of 70 ° C, spray dried fine powder, that is, containing Ginseng ethanol extract of ginseng total saponin.
  • the test method for total saponins of ginseng is colorimetric detection, as follows:
  • a 10 ml syringe was used as a chromatography tube, and lg Amberl ite-XAD-2 macroporous resin was placed, and the upper layer was added with a neutral alumina having a height of 1 cm.
  • the ginseng total saponin was eluted with 25 ml of 70% ethanol, and the eluate was collected in an evaporating dish and evaporated in a water bath at 60 °C. This is used for color development.
  • X the total saponin of ginseng in the sample, g/100g ;
  • V sample dilution volume, ml
  • Table 1 shows 54 kinds of fruit and vegetable materials
  • Probiotic master seed preparation (main seed passage no more than 10 generations, this preparation is passed 4 generations)
  • CGMCC ⁇ Streptococcus thermophilus
  • MRS liquid medium 10g / l peptone, lOg / 1 beef extract, 5g / l yeast extract thereof, 20g / l glucose, lg / 1 Tween -80, 2g / lK 2 HP0 4 , lg / 1 Tween -80, 5g / lNaAC, 2g / l ammonium citrate, 0. 2g / lMgS0 4, 0 05g/lMnS0 4 , sterilized at 121 °C for 20 min), cultured at 37 ° C, 100-turn shaker for 16 h;
  • MRS solid medium (10g/l peptone, lOg/1 beef extract, 5g/l yeast extract, 20g/l glucose, lg/1 Tween-80, 2g) /lK 2 HP04, lg/1 Tween-80, 5g/l NaAC, 2g/l triammonium citrate, 0. 2g/lMgS0 4 , 0.05g/lMnS0 4 , 1. 5% agar, 121 °C sterilization 20 min), cultured in a 37 ° C incubator for 16 h;
  • CGMCC ⁇ Streptococcus thermophilus
  • the actual feed control is 2400kg; according to the ratio of fruit and vegetable to water 1:1, the fruit and vegetable feed is 1200 kg, and the water addition amount is 1200kg.
  • Lactobacillus acidophilus to the fermenter, CGMCC 1. 1854, Bifidobactreiim longum, CGMCC 1. 2186, Lactobacillus delbrueckiisubsp. bulgaricus CGMCC 1. 1480 bacterial liquid, Streptococcus thermophilus ( ⁇ rep ococras thermophilus) CGMCC 1. 2471 bacterial liquid each 5000ml, control fermenter temperature 23 ° C, stirring for 15d;
  • the filtrate is subjected to ultrafiltration with a molecular weight of 100,000 (injection pressure of 1.3 kg, outlet pressure of 0.5 kg), and 1200-1500 kg of clear liquid is obtained, sealed and transferred to 4 ° C for storage, thereby obtaining fermentation conversion of fruits and vegetables. liquid.
  • the main products of fruit and vegetable fermentation conversion liquid are lactic acid and acetic acid, so the acidity is identified as its characteristic component, as follows:
  • Fruit and vegetable fermentation conversion acidity refers to the titration of 100ml of fruit and vegetable fermentation conversion solution, the number of milliliters of 0.1N NaOH solution consumed, generally 10ml sample is used for inspection.
  • the product has an acidity of 42.
  • the ginseng ethanol extract obtained above and the fruit and vegetable fermentation conversion liquid are mixed according to the following formula: the ginseng ethanol extract containing ginseng total saponin is mixed with the fruit and vegetable fermentation conversion liquid, and the fruit and vegetable fermentation conversion liquid is added to 1 L to obtain a composition, ginseng The concentration of total saponin in the composition is
  • the extraction method is basically the same as the method 1. The difference is that the ginseng is extracted with 1 time (v/w) 70% ethanol aqueous solution for 3 h .
  • the detection method was the same as in the first method, and as a result, 100 g of ginseng ethanol extract contained 40 g of ginseng total saponin.
  • the extraction method is basically the same as the method 1. The difference is that Lactobacillus acidophilus CGMCC 1. 1854 bacterial solution, Bifidobactreium longum CGMCC 1. 2186 bacterial solution, Lactobacillus delbrueckii bulgaricus (Lactobaci) Llus delbruecki i subsp. bulgaricus ) CGMCC 1. 1480 bacterial liquid, Streptococcus thermophilus ( ⁇ rep ococci / s thermophilus) CGMCC 1. 2471 bacterial liquid each 2000ml, fruit and vegetable feed 1000 kg, water addition amount is 1000kg.
  • the fermentation temperature of the fruit and vegetable fermentation conversion solution was 18 ° C, and the fermentation time was 10 days.
  • the Lactobacillus acidophilus ⁇ ac o1 ⁇ 2c i/s acidophilus) trace, the Bifidobacterium longibacterium i Bifidobactreiuni longum), the Lactobacillus delbruecki i subsp. bulgaricus bacterium Fermentation temperature of the thermophilic treptococcus thermophilus) is 20 ° C, The fermentation time was 15 h.
  • the detection method is the same as the method one, and the result is not significantly different from the method one.
  • the method is basically the same as the method 1. The difference is that the ginseng ethanol extract containing the ginseng total saponin obtained in the second method is mixed with the fruit and vegetable fermentation conversion liquid, and the fruit and vegetable fermentation conversion solution is supplemented to 1 L to obtain a composition, and the composition is obtained. 5g/l ⁇ The ginseng total saponin content of 1. 5g / l.
  • the extraction method is basically the same as the method 1. The difference is that the ginseng is extracted by refluxing with 5 times (v/w) 70% ethanol aqueous solution for 5 h ;
  • the detection method was the same as in the first method, and as a result, 100 g of ginseng ethanol extract contained 50 g of ginseng total saponin.
  • the extraction method is basically the same as the method 1. The difference is that Lactobacillus acidophilus CGMCC 1. 1854 bacterial solution, Bifidobactreium longum CGMCC 1. 2186 bacterial solution, Lactobacillus delbrueckii bulgaricus (Lactobaci) Llus delbruecki i subsp. bulgaricus ) CGMCC 1. 1480 bacterial liquid, thermophilic streptococci ( ⁇ rep ococras thermophilus) CGMCC 1. 2471 bacterial liquid each 8000ml, fruit and vegetable feed 1500kg, water addition amount is 1500kg.
  • the fermentation temperature of the fruit and vegetable fermentation conversion solution was 37 ° C, and the fermentation time was 180 days.
  • the fermentation temperature in the preparation of the bacterial liquid was 41 °C, and the fermentation time was 36 h.
  • the detection method is the same as the method one, and the result is not significantly different from the method one.
  • the method is basically the same as the method 1, except that the ginseng ethanol extract containing the ginseng total saponin obtained in the third method is mixed with the fruit and vegetable fermentation conversion liquid, and the fruit and vegetable fermentation conversion solution is added to 1 L to obtain a composition, and the ginseng in the composition is obtained.
  • the total saponin content was 50 g/l.
  • composition obtained in the first method of Example 1 was mixed with a flavoring agent (specifically, white sugar, purchased from Changchun Eurasia) (10%, w/v), and then put into a liquid mixing tank and mixed for 30 minutes. Ensure uniform, instantaneous high heat sterilization, that is, get ginseng enzyme oral solution.
  • a flavoring agent specifically, white sugar, purchased from Changchun Eurasia
  • Gland Press the oral liquid bottle cap with an oral hydraulic cap machine to screen for unqualified products.
  • Leak detection Use a vacuum leak detector to check the oral liquid after the capping.
  • Inner packaging Take cardboard box, 10 bottles per box.
  • the outer packaging is made of corrugated cardboard boxes.
  • Example 3 Experimental study on the enhancement of immunity function of ginseng enzyme oral solution
  • the ginseng enzyme oral solution obtained in Example 2 was a brown liquid having a mass density of 1.05. Each dose concentration was prepared using distilled water.
  • mice 200 female mice were divided into 5, 40 mice each and randomly divided into four groups of 10 each.
  • the experimental doses were designed to be 20 ml/kg, 10.06 ml/kg, 5.
  • Oml/kg one solvent control group (the group was intragastrically equal volume distilled water), and three dose groups.
  • DTH delayed type hypersensitivity
  • mice were intraperitoneally injected with 2% sheep red blood cells (SRBC, Beijing Dingguo Biotechnology Co., Ltd., v/v) 0.2ml/only for sensitization, and the left hind foot of each mouse on the 4th day after immunization
  • SRBC sheep red blood cells
  • the ankle was injected subcutaneously with 20% SRBC (20 1/only) for attack.
  • the thickness of the same part of the left hind paw was measured before and 24 hours after the attack. The difference between before and after the attack was calculated.
  • the results of each dose group were compared with the solvent control group for variance analysis.
  • mice in each group were aseptically taken from the spleen, and the spleen cell suspension was prepared.
  • the spleen cell concentration was adjusted to 3 X 107 ml with RPMI1640 complete culture solution (purchased from Beijing Dingguo Biotechnology Co., Ltd.), according to the procedure.
  • the lymphocyte proliferative reaction was carried out by MTT method, and finally the absorbance value (A) was measured at a wavelength of 570 nm, and the difference in absorbance values between ConA + and ConA-holes was calculated.
  • the results of each dose group were compared with the solvent control group for analysis of variance.
  • mice were intraperitoneally injected with 20% SRBC (0.2 ml/mouse) on the 25th day of intragastric administration.
  • the eyeballs were harvested on the 5th day after immunization, serum was separated and serum hemolysin was measured on a micro-hemagglutination plate: incubation at 37 °C 3h, the blood cell agglutination was counted, and the corresponding anti-volume number was calculated.
  • the results of each dose group were compared with the solvent control group for analysis of variance.
  • mice On the 25th day after intragastric administration, the mice were intraperitoneally injected with 20% SRBC (0.2 ml/mouse), and sacrificed on the 5th day after immunization.
  • the spleen cell suspension was prepared by dissecting the spleen, and the spleen cell concentration was adjusted to 5 ⁇ 107 ml with RPMI1640 complete medium.
  • mice Each group of mice was injected with Indian ink (4-fold dilution) 0. lml/10g in the tail vein. Each mouse was injected with 20 ⁇ l of blood within 2 min and 10 min after the injection of ink, and rapidly added to 2 ml of 0.1% sodium carbonate solution and shaken, and the absorbance (A) was measured at a wavelength of 600 nm by an ultraviolet-visible spectrophotometer. At the same time, the liver and spleen of the mice were weighed and the phagocytic index was calculated according to the formula. The results of each dose group were compared with the solvent control group.
  • mice in each group were intraperitoneally injected with 20% chicken red blood cell suspension 1 ml/mouse, and the mice were sacrificed at intervals of 30 min.
  • the rats were intraperitoneally injected with 2 ml of normal saline. After shaking for 1 min, the abdominal cavity washing liquid was taken. Incubate at °C for 30 min, rinse, fix and stain microscopy. The number of macrophages phagocytizing chicken red and the number of erythrocytes phagocytized by macrophages were counted, and the phagocytosis conversion value and phagocytic index of each dose group were compared with the solvent control group for variance analysis.
  • Solvent control 10 100X10 50.39 ⁇ 2.94 1.87 ⁇
  • Example 1 The composition obtained in the second and third methods of Example 1 was examined by the same method, and the results were not significantly different from those of the method obtained by the method.

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Description

一种制备提高免疫力的药物组合物的方法及其制得的药物组合物 技术领域
本发明涉及一种制备提高免疫力的药物组合物及其制备方法。
背景技术
免疫力是人体自身的防御机制， 是人体识别和消灭外来侵入的任何异 物 （病毒、 细菌等）； 处理衰老、 损伤、 死亡、 变性的自身细胞以及识别 和处理体内突变细胞和病毒感染细胞的能力。 现代免疫学认为， 免疫力是 人体识别和排除 "异己" 的生理反应。 人体内执行这一功能的是免疫系 统。 数百万年来， 人类生活在一个既适合生存又充满危险的环境， 人类 得以存续，也获得了非凡的免疫力。所以说免疫力是生物进化过程的产物。
人参： 五加科植物人参 （Ginseng ) 的根。 人参中可分离出 30余 禾中人参总阜武禾口假人参总阜武 (Pseudoginsenos ide saponin) Fl 1禾口 多糖等。 皂甙为人参生理活性的物质基础。
果蔬酵素 （发酵转化液）： 果蔬转化物原液是萃取自 60多种天然蔬 果植物精华， 再加以植入有益菌种发酵熟成的全机能性天然食品， 富含完 整的维生素、 矿物质、 氨基酸， 能供应细胞完整的营养素， 修复细胞， 增 加细胞反应其它有益成份的 (生化反应)效率。
果蔬酵素 （发酵转化液） 具有如下生理作用：
( 1 ) 整理人体内环境， 净化血液、 改善体质， 分解排除异物， 防止 慢性病、 退化性疾病；
( 2 ) 提高白细胞运送能力、 促进白细胞功能， 提高机体抗炎、 抗菌 能力和自愈能力；
( 3 ) 多因子参与食物分解、 消化， 使食物更易消化、 吸收， 促进体 力恢复；
(4 ) 促进细胞新陈代谢， 产生能量， 促进亚健康细胞再生；
( 5 ) 复活衰退的生殖细胞， 增进生殖功能；
( 6 ) 解酒、 防醉；
( 7 ) 补充营养及能量来源。
发明内容
本发明的目的是提供一种提高免疫能力的人参酵素组合物及其制备 方法。
本发明提供的方法， 包括如下步骤：
将含有人参总皂苷的人参乙醇提取物和果蔬发酵转化液混合， 得到混 合物， 即得到提高免疫力的药物组合物；
所述含有人参总皂苷的人参乙醇提取物按照包括如下步骤的方法制 备得到： 用乙醇水溶液对人参进行回流提取， 得到提取液， 即得到含有人 参总皂苷的人参乙醇提取物；
所述果蔬发酵转化液按照包括如下步骤的方法制备得到： 将果蔬、 嗜 乳 酸 杆 菌 Lactobacillus acidophilus) 菌 液 、 长 双 歧 杆 菌 ( Bifidobactreium longum ) 菌液、 德氏乳杆菌保力 P禾 U亚种 ( Lac tobacillus delbrueckiisubsp. bulgaricus ) 菌液、 嗜热链球菌 {Streptococcus thermophilus) 菌液和水混合， 发酵， 得到发酵产物， 即得到果蔬发酵转化液。
所述方法中， 每 1L混合物按照如下方法制备： 将所述含有人参总皂 苷的人参乙醇提取物和所述果蔬发酵转化液混合， 用所述果蔬发酵转化液 补足体积， 使人参总皂苷在所述混合物中的浓度为 1. 5 g/1 -50 g/1 ;
每 1L混合物具体按照如下方法制备： 将所述含有人参总皂苷的人参 乙醇提取物和所述果蔬发酵转化液混合， 用所述果蔬发酵转化液补足体 积， 使人参总皂苷在所述混合物中的浓度为 1. 5g/l、 15 g/1或 50 g/l。
所述含有人参总皂苷的人参乙醇提取物的制备方法中：
每次所述回流提取的时间为 2 h -5h， 每次所述回流提取的时间具体 为 2 h、 3 h或 5h;
所述乙醇水溶液的浓度为 70% (体积百分含量）；
所述果蔬发酵转化液的制备方法中：
所述发酵的温度为 18°C-37°C， 所述发酵的温度具体为 18°C、 23°C或 37°C， 所述发酵时间为 10天 -180天， 所述发酵时间具体为 10天、 15天 或 180天， 所述发酵方式为边搅拌边发酵。
所述含有人参总皂苷的人参乙醇提取物的制备方法中： 还包括如下步 骤：
将所述提取液去除乙醇、 再进行浓缩和干燥， 得到干燥产物， 即为含 所述果蔬发酵转化液的制备方法中，
在所述发酵之前， 还包括将果蔬粉碎成 40-50目大小的步骤； 在所述发酵之后，还包括如下步骤：将所述发酵产物过滤、收集滤液、 超滤、 收集超滤后液体， 即为果蔬发酵转化液。
超滤为将滤液经 10万分子量分超滤（进液压力 1.3 kg, 出液压力 0.5 kg
所述果蔬为如下 54种果蔬的混合物：
魔芋、 茄子、 笋、 菝菜、 豆芽、 花椰菜、 甘蓝、 萝卜、 黄瓜、 豌豆、 红椒、 芹菜、 葱、 蒜、 葡萄、 柚子、 西瓜、 桃、 橘、 蓝莓、 甜橙、 香蕉、 荔枝、 苦瓜、 韭菜、 石榴、 火龙果、 胡萝卜、 蕃茄、 白菜、 西芹、 甜椒、 莴苣、 梨、 姜、 芋头、 菜豆、 南瓜、 莲藕、 樱桃、 猕猴桃、 酸梅、 草莓、 无花果、 金桔、 芦柑、 南国梨、 香瓜、 哈密瓜、 木瓜、 洋葱、 桑椹、 甜菜 和柠檬。
所述果蔬中每种果蔬的质量相同。
所述含有人参总皂苷的人参乙醇提取物的制备方法中：
所述乙醇水溶液和所述人参的配比为 （1-10) ml: lg;
所述乙醇水溶液和所述人参的配比具体为 （1、 5或 10) ml: lg; 所述果蔬发酵转化液的制备方法中：
所述嗜乳酸杆菌 <ac o½c i/s acidophilusH 所述长双歧杆 菌 iBifidobactreiuni longum ) 菌液、 所述德氏乳杆菌保加利亚种
{Lactobacillus delbruecki i subsp. bulgaricus) 菌液禾口所述嗜热链球 菌 Streptococcus thermophilus) 菌液、 所述果蔬禾卩水的配比为
(2000-8000) ml: (2000-8000) ml: (2000-8000) ml: (2000-8000) ml:
(1000-1500) kg: (1000-1500) kg;
所述嗜乳酸杆菌 <ac o½c i/s acidophilusH 所述长双歧杆 菌 iBifidobactreiuni longum ) 菌液、 所述德氏乳杆菌保加利亚种
{Lactobacillus delbruecki i subsp. bulgaricus) 菌液禾口所述嗜热链球 (Streptococcus thermophilus) 菌液、 所述果蔬和水的配比为 （2000、 5000或 8000) ml: (2000、 5000或 8000) ml, (2000、 5000或 8000) ml:
(2000、 5000或 8000) ml: (1000、 1200或 1500) kg: (1000、 1200或 1500) kg; 所述嗜乳酸杆菌 Lactobacillus acidophilus)菌液按照如下方法制 备： 将嗜乳酸杆菌
Figure imgf000005_0001
发酵培养， 得到发酵产 物， 即为嗜乳酸杆菌
Figure imgf000005_0002
sc i c^ ^)菌液； 所述发酵温度 为 20°C-4rC， 所述发酵温度具体为 20°C、 37°C或 41 °C， 所述发酵时间为 15 h-36 h， 所述发酵时间具体为 15 h、 16 h或 36h;
所述长双歧杆菌 iBifidobactreiim longum ) 菌液按照如下方法制 备： 将长双歧杆菌 fidobactreium longum ) 发酵培养， 得到发酵产 物， 即为长双歧杆菌 fidobactreium longum ) 菌液； 所述发酵温度 为 20°C-4rC， 所述发酵温度具体为 20°C、 37°C或 41 °C， 所述发酵时间为 15 h-36 h， 所述发酵时间具体为 15 h、 16 h或 36h;
所 述 德 氏 乳 杆 菌 保 加 利 亚 种 （ Lactobacillus delbrueckiisubsp. bulgaricus) 菌液按照如下方法制备： 将德氏乳杆菌 保力口禾 II亚禾中 (Lactobacillus delbrueckiisubsp. bulgaricus) 发酉孝培养， 得到发酵产物， 即为德氏乳杆菌保加利亚种 （ Lactobacillus delbrueckiisubsp. bulgaricus ϋ 所述发酵温度为 20°C- 41 °C， 所述 发酵温度具体为 20°C、 37°C或 41 °C， 所述发酵时间为 15 h-36 h， 所述发 酵时间具体为 15 h、 16 h或 36h;
所述嗜热链球菌 Streptococcus thermophilus)菌液按照如下方法制 备： 将嗜热链球菌（^ rep ococras thermophil us)发 培养， 得到发酵产 物， 即为嗜热链球菌（^ rep ococras thermophilus 歡', 所述发酵温度 为 20°C-4rC， 所述发酵温度具体为 20°C、 37°C或 41 °C， 所述发酵时间为 15 h-36 h， 所述发酵时间具体为 15 h、 16 h或 36h。
所述嗜乳酸杆菌 Lactobacillus acidophilus)为嗜乳酸杆菌 {Lactobacillus acidophilus) CGMCC 1. 1854， 所述长双歧杆菌 {Bifidobactreium longum ) 为长双歧杆菌 (Bifidobactreium longum ) CGMCC 1. 2186， 所述德氏乳杆菌保加利亚种 （ Lactobacillus delbrueckiisubsp. bulgaricus ) 为 德 氏 乳 杆 菌 保 力口 禾 lj 亚 禾中 ( Lactobaci llus delbruecki i subsp. bulgaricus ) CGMCC 1. 1480， 所述 嗜热链球菌 {Streptococcus thermophilus)为嗜热链球菌 {Streptococcus thermophilus) CGMCC 1. 2471。
所述发酵培养的培养基配方均如下： 将 10g蛋白胨、 10g牛肉膏、 5g 酵母抽提物、 20g葡萄糖、 lg吐温 -80、 2gK2HP04、 lg吐温 -80、 5gNaAC、 2g 柠檬酸三铵、 0. 2gMgS04、 0. 05gMnS04和水混合，用水补至 1L得到的培养基。
由所述的方法制备的提高免疫能力的药物也是本发明保护的范围。 本发明的实验证明， 本发明方法提取的人参乙醇提取物、 果蔬发酵转 化液， 提取时间短， 提取量大， 且可以用人参乙醇提取物、 果蔬发酵转化 液作为主要原料制备提高免疫力的药品， 而且针对我国免疫力低下人群亚 健康比例较大并同时可能伴有高血糖症状， 本品的调味剂采用百胜糖， 降 低了口服液中葡萄糖、 蔗糖等易引起血糖增高的甜味剂的使用使用量， 以 使更多的人群受益。
具体实施方式
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明， 均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、 试剂等， 如无特殊说明， 均可从商业途径 得到。
实施例 1、 提高免疫能力的人参酵素组合物的获得
方法一：
一、 人参乙醇提取物的制备
1、 原料的准备： 人参 （购自吉林紫鑫药业股份有限公司） 符合 《中 华人民共和国药典》 的规定。 投料前严格按照企业标准要求进行质量的监 控。
2、 按配方量称取人参， 经过水洗、 沥干， 用 10倍量 （v/w) 70%乙醇 水溶液回流提取 2次， 每次提取 3h; 过滤， 合并滤液， 减压回收乙醇。
3、 滤液浓缩至相对密度 1. 10-1. 15 时 （0. 07MPa， 70°C )， 喷雾干燥 (入口温度为 170°C， 出口温度 70°C， 得喷雾干燥细粉， 即为含有人参总 皂甙的人参乙醇提取物。
4、 经按企业标准检验合格后入库。
人参总皂甙的检验方法为比色法检测， 具体如下：
4. 1试剂与仪器：
Amberl ite-XAD-2大孔树脂，美国 Sigma化学公司； 正丁醇、 乙醇，分 析纯；中性氧化铝，层析用， 100-200目； 人参皂甙 Re，购自中国药品生物制 品检定所； 香草醛溶液，称取 5g香草醛，加冰乙酸溶解并定容至 100ml ; 高 氯酸、 冰乙酸，分析纯； 人参皂甙 Re标准溶液，精确称取人参皂甙 Re标准 品 0. 020g,用甲醇溶解并定容至 10. 0ml,即每 ml含人参皂甙 Re2. Orng; 比 色计， UV-4802H型，优尼科公司生产；层析管， 10ml注射器。
4. 2实验步骤
4. 2. 1试样处理
称取 1. 0g左右的试样，置于 100ml容量瓶中，加少量水，超声 30min， 再用水定容至 100ml,摇匀，放置 15min，吸取上清液 1. 0ml进行柱层析。
4. 2. 2柱层析
用 10ml注射器作层析管，内装 lg Amberl ite-XAD-2大孔树脂，上层加 lcm高的中性氧化铝。 先用 25ml70%乙醇洗柱，再用 25ml水洗柱，弃去洗脱 液，精确加入 1. 0ml已处理好的试样溶液，先用 25ml水洗柱，以洗去糖分等 水溶性杂质，再用 25ml70%乙醇洗脱人参总皂甙，收集洗脱液于蒸发皿中， 于 60°C水浴挥干。 以此作显色用。
4. 2. 3显色
在上述已挥干的蒸发皿中准确加入 0. 2ml5%香草醛冰乙酸溶液，转动 蒸发皿，使残渣都溶解，再加 0. 8ml高氯酸，混匀后移入 5ml带塞刻度离心 管中，60°C水浴上加热 lOmin，取出， 冰浴冷却后，准确加入冰乙酸 5. 0ml， 摇匀后，以 lcm比色池于 560nm波长处与标准管一起进行比色测定。
4. 2. 4校正曲线
吸取人参皂甙 Re标准溶液（2. 0mg/ml) 100 放蒸发皿中， 放在水浴 挥干（低于 60°C )， 或热风吹干（勿使过热）， 与试样相同。测定吸光度值。
5.计算：
式中： X= ( A1 X C X V X 100 X 1) / A2 X mX 1000 X 1000
X—样品中人参总皂甙， g/100g;
^一标准液的吸光度值；
A2—标准液的吸光度值；
C一标准管总皂甙的量， μ§
V—样品稀释体积， ml ;
m—样品质量， g;
计算结果保留二位有效数字。 结果为 100g样品中人参总皂甙含量为
30g。
二、 果蔬发酵转化液的制备 1、 选用的以下 54种果蔬材料
表 1为 54种果蔬材料
Figure imgf000008_0001
2、 果蔬发酵转化
1 ) 菌种选择与购买 益生菌种购于中科院微生物所， 益生菌分别为嗜乳酸杆菌
(Lactobacillus acidophilus) CGMCC 1. 1854、 长双歧杆菌
{Bifidobactreium longum ) CGMCC 1. 2186、 德氏乳杆菌保加利亚种 (Lactobaci llus delbruecki i subsp. bulgaricus ) CGMCC 1. 1480、 嗜热 链球菌（^ rep ococras thermophilus) CGMCC 1. 2471 , 所有菌种结尾砂土 管保存菌种， 作为出发菌株；
2 ) 主种子制备
益生菌主种子制备 （主种子传代不超过 10代， 本制备传 4代）
①用无菌不锈钢匙分别取嗜乳酸杆菌 (ZsC o½C ^
acidophilus) CGMCC 1. 1854、 长双歧杆菌 {Bifidobactreium longum ) CGMCC 1. 2186、 德氏乳杆菌保加利亚种 Uactobacillus
delbrueckiisubsp. bulgaricus ) CGMCC 1. 1480、 嗜热链球菌
{Streptococcus thermophilus) CGMCC 1. 2471砂土管 1/10量， 其余冻存， 分别接在 50ml (250三角瓶) MRS液体培养基 ( 10g/l蛋白胨、 lOg/1牛肉膏、 5g/l酵母抽提物、 20g/l葡萄糖、 lg/1吐温 -80、 2g/lK2HP04、 lg/1吐温 -80、 5g/lNaAC、2g/l柠檬酸三铵、 0. 2g/lMgS04、0. 05g/lMnS04， 121 °C灭菌 20min ) 中， 37°C、 100转摇床培养 16h;
②各挑取一环， 分别划线接种在 MRS固体培养基（10g/l蛋白胨、 lOg/1 牛肉膏、 5g/l酵母抽提物、 20g/l葡萄糖、 lg/1吐温 -80、 2g/lK2HP04、 lg/1 吐温- 80、 5g/lNaAC、 2g/l柠檬酸三铵、 0. 2g/lMgS04、 0. 05g/lMnS04、 1. 5% 琼脂， 121 °C灭菌 20min) 上， 37°C培养箱培养 16h;
③分别挑取长势最旺的一个菌落， 各自接在 50ml MRS液体培养基中， 30°C、 180转摇床培养 16h;
④各自接在 500ml MRS液体培养基中， 37°C、 100转摇床培养 16h， 加入甘油至 20%， 摇匀， 以 lml分装入冻存管， 分别作为益生菌嗜乳酸杆 菌、 长双歧杆菌、 短双歧杆菌、 嗜热链球菌主种子， -4CTC以下温度保藏；
3、 工作种子的制备
益生菌工作种子制备 （工作种子传代不超过 5代， 本制备传 4代）
①用无菌接种环分别取嗜乳酸杆菌 (ZSC 0½C
acidophilus) CGMCC 1. 1854、 长双歧杆菌 {Bifidobactreium longum ) CGMCC 1. 2186、 德氏乳杆菌保加利亚种 Uactobacillus delbrueckiisubsp. bulgaricus ) CGMCC 1. 1480、 嗜热链球菌
{Streptococcus thermophilus) CGMCC 1. 2471主种子， 分别划线接种在 MRS固体培养基上， 37 °C培养箱培养 16h;
②分别挑取长势最旺的一个菌落， 各自接在 50mlMRS液体培养基中， 37°C、 100转摇床培养 16h;
③各自接在 500mlMRS液体培养基中， 37°C、 100转摇床培养 16h，；
④各自再转接至 5000mlMRS液体培养基中， 37°C、 100转搅拌， 培养 16h; 即得嗜乳酸杆菌 Lactobacillus acidophilus) CGMCC 1. 1854菌液、 长双歧杆菌 Bifidobactreiim longum ) CGMCC 1· 2186菌液、 德氏乳杆 菌保力口利亚禾中 (Lactobaci llus delbruecki i subsp. bulgaricus ) CGMCC 1. 1480菌液、 嗜热链球菌（S rep ococci/s thermophilus) CGMCC 1. 2471 菌液。 以上菌液均为发酵容器中所有发酵产物。
4、 果蔬处理
1 ) 取上述材料称重；
2 ) 洗净去杂， 控干水分， 称重；
3 ) 粉碎成 40-50目， 投入发酵罐；
对于 3吨的发酵罐 （有效使用溶剂 =3吨 χθ. 8=2. 4吨） 实际投料控制 在 2400kg; 按果蔬与水 1 : 1的比例， 果蔬投料 1200公斤， 水加入量为 1200kg。
5、 果蔬快速酶解物发酵转化
再向发酵罐中加入嗜乳酸杆菌 Lactobacillus acidophilus) CGMCC 1. 1854菌液、 长双歧杆菌 iBifidobactreiim longum ) CGMCC 1. 2186菌 液、 德氏乳杆菌保力口禾 U亚种 (Lactobacillus delbrueckiisubsp. bulgaricus ) CGMCC 1. 1480 菌液、 嗜热链球菌（^ rep ococras thermophilus) CGMCC 1. 2471菌液各 5000ml， 控制发酵罐温度 23°C， 搅拌 15d;
3 ) 200目滤布过滤， 弃果蔬渣， 取滤液；
4) 滤液经 10万分子量分超滤 （进液压力 1. 3 kg, 出液压力 0. 5 kg)、 得到 1200-1500 kg澄清液体， 密封、 转入 4 °C贮藏， 即得到果蔬发酵转 化液。
6、 检测 果蔬发酵转化液主要产物是乳酸、 乙酸， 因此将酸度作为其特征成分 进行鉴定， 具体如下：
果蔬发酵转化液酸度： 指滴定 100ml果蔬发酵转化液， 消耗的 0. 1N NaOH溶液的毫升数， 检验时一般采用 10ml样品。
测定步骤： 取 10ml果蔬发酵转化液 +20ml水 +0. 5%酚酞指示剂 0. 5ml ， 用 0. 1N NaOH标液滴定到微红色 30秒不褪色。 计算： 酸度 =消耗 的 0. IN NaOH标液体积 X 10
结果：该产品酸度为 42。
三、 组合物的制备
将上述得到的人参乙醇提取物与果蔬发酵转化液按如下配方混合： 将含有人参总皂甙的人参乙醇提取物和果蔬发酵转化液混合， 用果蔬 发酵转化液补至 1L， 即得到组合物， 人参总皂苷在所述组合物中的浓度为
15g/l。
方法二、
一、 人参乙醇提取物的制备：
提取方法与方法一基本相同， 不同的是将人参用 1倍量 （v/w) 70%乙 醇水溶液回流提取 3 h;
检测方法与方法一相同， 结果为 100g人参乙醇提取物中含有 40g人 参总皂甙。
二、 果蔬发酵转化液的制备
提取方法与方法一基本相同， 不同的是加入嗜乳酸杆菌 (Lactobacillus acidophilus) CGMCC 1. 1854 菌液、 长双歧杆菌 {Bifidobactreium longum ) CGMCC 1. 2186菌液、 德氏乳杆菌保加利亚 禾中 (Lactobaci llus delbruecki i subsp. bulgaricus ) CGMCC 1. 1480菌液、 嗜热链球菌（^ rep ococci/s thermophilus) CGMCC 1. 2471菌液各 2000ml， 果蔬投料 1000公斤， 水加入量为 1000kg。
果蔬发酵转化液的发酵的温度为 18°C， 发酵时间为 10天。
所述嗜乳酸杆菌 <ac o½c i/s acidophilus) 痕、 所述长双歧杆 菌 i Bifidobactreiuni longum ) 菌液、 所述德氏乳杆菌保加利亚种 { Lactobacillus delbruecki i subsp. bulgaricus) 菌液禾口所述嗜热链球 treptococcus thermophilus) 菌液的制备中的发酵温度均为 20°C， 发酵时间均为 15 h。
检测方法与方法一相同， 结果与方法一无显著差异。
三、 组合物的制备
与方法一基本相同， 不同的是将方法二得到的含有人参总皂甙的人参 乙醇提取物与果蔬发酵转化液混合， 用果蔬发酵转化液补至 1L， 即得到组 合物， 所述组合物中人人参总皂苷的含量为 1. 5g/l。
方法三、
一、 人参乙醇提取物的制备：
提取方法与方法一基本相同， 不同的是将人参用 5倍量 （v/w) 70%乙 醇水溶液回流提取 5 h;
检测方法与方法一相同， 结果为 100g人参乙醇提取物中含有 50g人 参总皂甙。
二、 果蔬发酵转化液的制备
提取方法与方法一基本相同， 不同的是加入嗜乳酸杆菌 (Lactobacillus acidophilus) CGMCC 1. 1854 菌液、 长双歧杆菌 {Bifidobactreium longum ) CGMCC 1. 2186菌液、 德氏乳杆菌保加利亚 禾中 (Lactobaci llus delbruecki i subsp. bulgaricus ) CGMCC 1. 1480菌液、 嗜热链球菌（^ rep ococras thermophilus) CGMCC 1. 2471菌液各 8000ml， 果蔬投料 1500公斤， 水加入量为 1500kg。
果蔬发酵转化液的发酵的温度为 37°C， 发酵时间为 180天。
所述嗜乳酸杆菌 <ac o½c i/s acidophilus) 痕、 所述长双歧杆 菌 i Bifidobactreiuni longum ) 菌液、 所述德氏乳杆菌保加利亚种 { Lactobacillus delbruecki i subsp. bulgaricus) 菌液禾口所述嗜热链球 ^Streptococcus thermophilus) 菌液的制备中的发酵温度均为 41 °C， 发酵时间均为 36 h。
检测方法与方法一相同， 结果与方法一无显著差异。
三、 组合物的制备
与方法一基本相同， 不同的是将方法三得到的含有人参总皂甙的人参 乙醇提取物与果蔬发酵转化液混合， 用果蔬发酵转化液补至 1L， 即得到组 合物， 所述组合物中人参总皂苷的含量为 50g/l。
实施例 2、 人参酵素口服液的制备 生产条件： 生产环境空气洁净度 10万级
具体生产方法：
1、 将实施例 1方法一得到的组合物与调味剂 （具体为白砂糖， 购自 长春欧亚商都） （10%， w/v) 混合配料后， 投入配液罐内， 混合 30 min, 确保均匀， 瞬时高热灭菌， 即得到人参酵素口服液。
2、 灌装口服液瓶： 用口服液灌装机灌装口服液瓶， 每瓶灌装 10ml， 填充期间应注意监测产品装量差异， 控制在差异范围内。
3、 压盖： 用口服液压盖机对口服液瓶压盖， 筛选去不合格品。
4、 检漏： 采用真空检漏仪对压盖后的口服液检漏。
5、 内包装： 采用纸板盒， 每盒 10瓶。
6、 外包装： 外包装采用瓦楞纸箱。
7、 检验： 按照企业标准进行检验，。
8、 入库： 产品经检验合格后方可入库。
实施例 3、 人参酵素口服液增强免疫力功能实验研究
1、 材料和方法
1. 1 受试物
由实施例 2得到的人参酵素口服液为棕色液体， 质量密度 1. 05。 用蒸 馏水配制各剂量浓度。
1. 2 实验动物
由吉林大学实验动物中心提供健康昆明种雌性小白鼠 200只， 体重 18-22kg o 饲料、 垫料来源同上。
1. 3 动物室环境
温度 20°C- 22°C ， 湿度 45%- 50%。
1. 4 剂量选择
将 200只雌性小鼠分为 5份， 每份 40只小鼠并随机分为四小组， 每小组 10只。 各项实验剂量设计均为 20ml/kg、 10. 06ml/kg、 5. Oml/kg, 一个溶 剂对照组 （该组灌胃等容量蒸馏水） 、 三个剂量组。
1. 5 实验方法
按剂量各组每天灌胃一次 （灌胃容量均为 0. 2ml/10g， 溶剂对照组组 灌等容量蒸馏水） ， 连续 30d后分别对动物进行各项免疫指标测定。 实验 方法如下。 1.5.1 小鼠迟发型变态反应 (DTH)测定：
于灌胃第 26天， 给小鼠腹腔注射 2%绵羊红细胞 (SRBC, 北京鼎国生物 科技有限公司， v/v) 0.2ml/只进行致敏，于免疫后第 4天每鼠左后足跖部 皮下注射 20%SRBC(20 1/只）进行攻击。 并于攻击前和攻击后 24h测量每鼠 左后足肠同一部位厚度， 计算攻击前、 后的差值， 各剂量组结果与溶剂对 照组比较进行方差分析。
结果如表 2所示，
表 2 人参酵素口服液小鼠 DTH测定结果 (24h) 组别 动物数 足拓厚度差值 (mm) p值
(ml/kg ) (只）
10 10 0.947±0.432 0.00
6.6 10 0.951±0.414 0.00
3.3 10 0.743±0.133 0.00
溶剂对照 10 0.619 ±0.071
从上表可以看出， 各剂量组用 SRBC攻击后（间隔 24h)小鼠足趾厚度差 值均较溶剂对照组增高，其差异均有统计学意义 (P<0.01)。
1.5.2 ConA诱导小鼠脾淋巴细胞转化实验 （MTT法） ：
于灌胃第 26天对各组小鼠无菌取脾， 制脾细胞悬液， 用 RPMI1640完 全培养液（购自北京鼎国生物科技有限公司）调整脾细胞浓度为 3 X 107ml， 按照程序中 MTT法进行淋巴细胞增殖反应， 最后在波长 570nm处测其吸光 度值 (A)，计算 ConA+与 ConA—各孔的吸光度值差。 各剂量组结果与溶剂对照 组比较进行方差分析。
结果如表 3所示，
表 3 人参酵素口服液小鼠脾淋巴细胞转化测定结果 组别 动物数 ConA+与 ConA—差值 p值
ml/kg (只） 10 0.161±0· 098 0.00
6.6 0.154±0· 086 0.00
3.3 0.125±0· 074 0.00
溶剂对照 0.113±0· 039
从上表可以看出， 各剂量组 ConA+与 ConA—各孔的吸光度值差均较溶剂 对照组增高，其差异均有统计学意义 (P<0.01)。
1.5.3 血清溶血素测定：
于灌胃第 25天给小鼠腹腔注射 20%SRBC(0.2ml/只），于免疫后第 5天摘 眼球采血，分离血清并在微量血凝板上进行血清溶血素测定：37°C 孵育 3h， 统计血球凝集度，计算相应抗体积数。 各剂量组结果与溶剂对照组比较进 行方差分析。
结果由表 4可见， 各剂量组小鼠抗体积数均较溶剂对照组升高且差异 均有统计学意义 (P<0.01)。
表 4 人参酵素口服液小鼠血清溶血素测定结果 组别 动物数 抗体积数 P值 ml/kg (只）
10 10 182.23±18.72 0.001
6.6 10 178.81±16.87 0.004
3.3 10 181.75±18.65 0.001
溶剂对照 10 153.42 ±8.79
1.5.4 抗体生成细胞 (PFC)检测：
于灌胃第 25天给小鼠腹腔注射 20%SRBC(0.2ml/只），于免疫后第 5天处 死， 解剖取脾制备脾细胞悬液， 用 RPMI1640完全培养液调整脾细胞浓度 为为 5X107ml，按程序方法制备琼脂糖玻片， 在 C02培养箱 （37°C、 5%C02) 中温育 1.5h后加补体， 再温育 1.5h，计数每张琼脂薄层玻片上形成的溶血 空斑数。 各剂量组结果与溶剂对照组比较进行方差分析。
结果由表 5可见， 高剂量组溶血空斑数与溶剂对照组间差异有统计学 意义 (p<0.05)， 中、 低剂量组溶血空斑数与溶剂对照组间差异均无统计学 意义（p>0.05)。
表 5人参酵素口服液小鼠抗体生成细胞测定结果 组别 动物数 溶血空斑数 /106脾细胞 p值
ml/kg (只）
10 10 911±365 0.04
6.6 10 821±187 0.095
3.3 10 815±179 0.112 溶剂对照 10 653±151
1.5.5 小鼠碳廓清实验：
按顺序给各组小鼠尾静脉注射印度墨汁 (4倍稀释） 0. lml/10g。 每鼠 均于注射墨汁后 2min及 lOmin分别准时内毗采血 20μ 1，并迅速加人到 2ml 0.1%碳酸钠溶液中并摇匀， 以紫外可见分光光度计 600nm波长处测吸光度 值 (A)。 同时取小鼠肝、 脾称重， 按公式计算吞噬指数。 各剂量组结果与 溶剂对照组比
较进行方差分析。
结果由表 6可见， 高剂量组小鼠碳廓清吞噬指数与溶剂对照组之间比 较差异有统计学意义 (P<0.05); 中、 低剂量组小鼠碳廓清吞噬指数与溶剂 对照组间差异均无统计学意义 (P>0.05)。
表 6 人参酵素口服液小鼠碳廓清实验测定结果 组别 动物数 吞噬指数 P值
ml/kg (只）
10 10 4.612±0.381 0.028
6.6 10 3.981±0.413 0.784
3.3 10 3.785±0.397 0.995
溶剂对照 10 3.746 1.5.6 小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验：
于末次给予受试物后各组小鼠腹腔注射 20%鸡红细胞悬液 lml/只， 间 隔 30min处死小鼠，腹腔注人生理盐水 2ml/只， 振摇 lmin后取腹腔洗液制 片， 37°C温育 30min，漂洗、 固定后染色镜检。 计数吞噬鸡红的巨噬细胞数 和巨噬细胞吞噬鸡红细胞数，以各剂量组吞噬率转换值和吞噬指数与溶剂 对照组比较进行方差分析。
结果由表 7可见， 各剂量组小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞吞噬转换值均 较溶剂对照组升高，且高、 中剂量组与溶剂对照组间差异均有统计学意义 (p<0.05)； 低剂量组与溶剂对照组间差异无统计学意义 (p>0.05)。
表 7 人参酵素口服液小鼠巨噬细胞吞噬测定结果
组别 动物数 巨噬细胞数 吞噬率转换值 吞噬指数 ml/kg (只）
10 10 100X10 65.71±5.47 2.94士
1.15
6.6 10 100X10 64.27±4.19 2.89士
1.04
3.3 10 100X10 62.84±3.63 2.43 +
0.96
溶剂对照 10 100X10 50.39±2.94 1.87士
1.09
经动物实验证明：该口服液对小鼠细胞免疫功能、 体液免疫功能及单 核 -巨噬细胞功能测定三项结果均为阳性。 初步证明， 该口服液可以增强 免疫力功能。
采用同样的方法检测实施例 1中方法二、 三得到的组合物， 结果与方 法一得到的组合物无显著差异。

Claims

1、 一种制备提高免疫力的药物组合物的方法， 包括如下步骤： 将含有人参总皂苷的人参乙醇提取物和果蔬发酵转化液混合， 得到混 合物， 即得到提高免疫力的药物组合物；
所述含有人参总皂苷的人参乙醇提取物按照包括如下步骤的方法制 备得到： 用乙醇水溶液对人参进行回流提取， 得到提取液， 即得到含有人 参总皂苷的人参乙醇提取物；
所述果蔬发酵转化液按照包括如下步骤的方法制备得到： 将果蔬、 嗜 乳 酸 杆 菌 Lactobacillus acidophilus) 菌 液 、 长 双 歧 杆 菌 ( Bifidobactreium longum ) 菌液、 德氏乳杆菌保力 B禾 U亚禾中 ( Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus) 菌液、 嗜热链球菌
(Streptococcus thermophilus) 菌液和水混合， 发酵， 得到发酵产物， 即得到果蔬发酵转化液。
2、 根据权利要求 1所述的方法， 其特征在于：
所述方法中， 每 1L混合物按照如下方法制备： 将所述含有人参总皂 苷的人参乙醇提取物和所述果蔬发酵转化液混合， 用所述果蔬发酵转化液 补足体积， 使所述人参总皂苷在所述混合物中的浓度为 1. 5 g/1 -50 g/1; 每 1L混合物具体按照如下方法制备： 将所述含有人参总皂苷的人参 乙醇提取物和所述果蔬发酵转化液混合， 用所述果蔬发酵转化液补足体 积，使所述人参总皂苷在所述混合物中的浓度为 1. 5g/l、 15 g/1或 50 g/l o
3、 根据权利要求 1或 2所述的方法， 其特征在于：
所述含有人参总皂苷的人参乙醇提取物的制备方法中：
每次所述回流提取的时间为 2 h -5h， 每次所述回流提取的时间具体 为 2 h、 3 h或 5h;
所述乙醇水溶液的浓度为 70% (体积百分含量）；
所述果蔬发酵转化液的制备方法中：
所述发酵的温度为 18°C-37°C， 所述发酵的温度具体为 18°C、 23°C或 37°C， 所述发酵时间为 10天 -180天， 所述发酵时间具体为 10天、 15天 或 180天， 所述发酵方式为边搅拌边发酵。
4、 根据权利要求 1-3中任一所述的方法， 其特征在于：
所述含有人参总皂苷的人参乙醇提取物的制备方法中： 还包括如下步 骤： 将所述提取液去除乙醇、 再进行浓缩和干燥， 得到干燥产物， 即为人 参乙醇提取物；
所述果蔬发酵转化液的制备方法中，
在所述发酵之前， 还包括将果蔬粉碎成 40-50目大小的步骤； 在所述发酵之后，还包括如下步骤：将所述发酵产物过滤、收集滤液、 超滤、 收集超滤后液体， 即为果蔬发酵转化液。
5、 根据权利要求 1-4中任一所述的方法， 其特征在于：
所述果蔬为如下 54种果蔬的混合物：
魔芋、 茄子、 笋、 菝菜、 豆芽、 花椰菜、 甘蓝、 萝卜、 黄瓜、 豌豆、 红椒、 芹菜、 葱、 蒜、 葡萄、 柚子、 西瓜、 桃、 橘、 蓝莓、 甜橙、 香蕉、 荔枝、 苦瓜、 韭菜、 石榴、 火龙果、 胡萝卜、 蕃茄、 白菜、 西芹、 甜椒、 莴苣、 梨、 姜、 芋头、 菜豆、 南瓜、 莲藕、 樱桃、 猕猴桃、 酸梅、 草莓、 无花果、 金桔、 芦柑、 南国梨、 香瓜、 哈密瓜、 木瓜、 洋葱、 桑椹、 甜菜 和柠檬。
6、 根据权利要求 1-5中任一所述的方法， 其特征在于：
所述果蔬中每种果蔬的质量相同。
7、 根据权利要求 1-6中任一所述方法， 其特征在于：
所述含有人参总皂苷的人参乙醇提取物的制备方法中：
所述乙醇水溶液和所述人参的配比为 （1-10) ml: lg;
所述乙醇水溶液和所述人参的配比具体为 （1、 5或 10) ml: lg; 所述果蔬发酵转化液的制备方法中：
所述嗜乳酸杆菌 sc o½c i/s acidophilus) 痕、 所述长双歧杆 菌 Bifidobactreiuni longum ) 菌液、 所述德氏乳杆菌保加利亚种
{Lactobacillus delbruecki i subsp. bulgaricus) 菌液禾口所述嗜热链球 菌（5^re/^ococ«/s thermophilus) 菌液、 所述果蔬和所述水的配比为
(2000-8000) ml: (2000-8000) ml: (2000-8000) ml: (2000-8000) ml:
(1000-1500) kg: (1000-1500) kg;
所述嗜乳酸杆菌 sc o½c i/s acidophilus) 痕、 所述长双歧杆 菌 Bifidobactreiuni longum ) 菌液、 所述德氏乳杆菌保加利亚种
{Lactobacillus delbruecki i subsp. bulgaricus") 菌液禾口所述嗜热链球 菌（5^re/^ococ«/s thermophilus) 菌液、 所述果蔬和所述水的配比为 (2000、 5000或 8000) ml: (2000, 5000或 8000) ml, (2000, 5000或 8000) ml: (2000、 5000或 8000) ml: (1000、 1200或 1500) kg: (1000、 1200或 1500) kg;
所述嗜乳酸杆菌 Lactobacillus acidophilus)菌液按照如下方法制 备： 将嗜乳酸杆菌 (Zsc o½«7 ^ s«Wo^ ^) 发酵培养， 得到发酵产 物， 即为嗜乳酸杆菌（Zsc o½c i/s sc ic> ^)菌液； 所述发酵温度 为 20°C-4rC， 所述发酵温度具体为 20°C、 37°C或 41°C， 所述发酵时间为 15 h-36 h， 所述发酵时间具体为 15 h、 16 h或 36h;
所述长双歧杆菌 iBifidobactreiim longum ) 菌液按照如下方法制 备： 将长双歧杆菌 fidobactreium longum ) 发酵培养， 得到发酵产 物， 即为长双歧杆菌 fidobactreium longum ) 菌液； 所述发酵温度 为 20°C-4rC， 所述发酵温度具体为 20°C、 37°C或 41°C， 所述发酵时间为 15 h-36 h， 所述发酵时间具体为 15 h、 16 h或 36h;
所 述 德 氏 乳 杆 菌 保 加 利 亚 种 （ Lactobacillus delbrueckiisubsp. bulgaricus) 菌液按照如下方法制备： 将德氏乳杆菌 保力口禾 II亚禾中 iUictobacillus delbrueckiisubsp. bulgaricus) 发酉孝培养， 得到发酵产物， 即为德氏乳杆菌保加利亚种 （ Lactobacillus delbrueckiisubsp. bulgaricus ϋ 所述发酵温度为 20°C- 41°C， 所述 发酵温度具体为 20°C、 37°C或 41°C， 所述发酵时间为 15 h-36 h， 所述发 酵时间具体为 15 h、 16 h或 36h;
所述嗜热链球菌 Streptococcus thermophilus)菌液按照如下方法制 备： 将嗜热链球菌（^ rep ococras thennophi lus")发曹培养， 得到发酵产 物， 即为嗜热链球菌（5^re/^ococc"s thermophilus)管狼 所述发酵温度 为 20°C-4rC， 所述发酵温度具体为 20°C、 37°C或 41°C， 所述发酵时间为 15 h-36 h， 所述发酵时间具体为 15 h、 16 h或 36h。
8、 根据权利要求 1-7中任一所述的方法， 其特征在于：
所述嗜乳酸杆菌 Lactobacillus acidophilus)为嗜乳酸杆菌 {Lactobacillus acidophilus) CGMCC 1.1854， 所述长双歧杆菌 {Bifidobactreium longum ) 为长双歧杆菌 (Bifidobactreium longum ) CGMCC 1.2186， 所述德氏乳杆菌保加利亚种 （ Lactobacillus delbrueckiisubsp. bulgaricus ) 为 德 氏 乳 杆 菌 保 力口 禾 lj 亚 禾中 ( Lactobacillus delbrueckiisubsp. bulgaricus ) CGMCC 1.1480， 所述 嗜热链球菌 (Streptococcus thermophilus)为嗜热链球菌 (Streptococcus thermophilus) CGMCC 1.2471。
9、 由权利要求 1-8中任一所述的方法制备的提高免疫能力的药物。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111366549A (zh) * 2020-03-24 2020-07-03 广西壮族自治区人民医院 红心猕猴桃总皂苷含量的测定方法

Families Citing this family (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102078354B (zh) * 2011-01-21 2012-08-22 吉林紫鑫药物研究有限公司 一种提高免疫力的药物组合物及其制备方法
CN102172278B (zh) * 2011-01-21 2015-08-12 吉林紫鑫药物研究有限公司 一种制备果蔬发酵转化液的方法
CN102526160B (zh) * 2012-01-31 2015-08-12 王玉石 外用于人体皮肤的组合物及其用途
WO2015048511A1 (en) * 2013-09-30 2015-04-02 Elc Management Llc Watery lotion skin care compositions and methods
CN103555598B (zh) * 2013-11-04 2016-01-20 西藏月王生物技术有限公司 一种食用酵素复合菌剂及其制备方法
CN104473285A (zh) * 2015-01-09 2015-04-01 杜斌 中药酵素的制作方法
CN104757241B (zh) * 2015-04-09 2018-05-08 吉林大学 一种新型人参蜜片的制备方法
CN104770725B (zh) * 2015-04-28 2017-04-12 内蒙古中兴华冠生物工程股份有限公司 一种肉苁蓉生物发酵酵素及其制备方法
CN105192798B (zh) * 2015-09-09 2018-01-12 安徽管仲宫神生物科技有限公司 复合酵素饮料及其制备方法
CN105166933A (zh) * 2015-10-28 2015-12-23 青海尤尼克生物技术有限公司 一种含有枸杞和水果酵素的组合物及其制备方法
JP7129682B2 (ja) * 2017-03-31 2022-09-02 株式会社東洋新薬 食品組成物
CN110326685A (zh) * 2019-06-05 2019-10-15 陈东阳 一种含有人参精华的茶叶及其制备方法
CN110787205B (zh) * 2019-12-16 2021-06-04 福建贝迪药业有限公司 一种提高畜禽机体免疫力的太子参根须颗粒剂的制备方法
CN112790295B (zh) * 2020-12-31 2023-05-09 内江师范学院 饲料防霉剂天然组合物及在鱼饲料中的应用
CN113122473B (zh) * 2021-04-10 2022-08-02 江南大学 增强记忆能力的乳酸杆菌bb1及其应用
KR102364464B1 (ko) * 2021-05-25 2022-02-18 전윤자 면역기능성 천연물 환 및 그 제조방법
CN117050208B (zh) * 2023-09-14 2024-03-22 成都大学 一种猕猴桃幼果多糖提取物及其制备方法和用途

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1054073C (zh) * 1997-07-03 2000-07-05 济南三株药业有限公司 一种保健口服液
CN1194638C (zh) * 2002-08-13 2005-03-30 张红梅 双歧果蔬饮料
CN102078354A (zh) * 2011-01-21 2011-06-01 吉林紫鑫药物研究有限公司 一种制备提高免疫力的药物组合物及其制备方法

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2003202159A1 (en) * 2002-04-08 2003-10-27 Ginseng Science Inc. Extract of processed panax genus plant, the preparation method thereof, and compositions containing the same
KR100479803B1 (ko) * 2002-04-08 2005-03-30 홍림통산(주) 약효가 증가된 특수가공처리 인삼 추출물을 함유하는뇌졸증의 예방 및 치료를 위한 조성물
US6953574B2 (en) * 2002-06-21 2005-10-11 Technology Commercialization, Inc. Method for producing a fermented hydrolyzed medium containing microorganisms
KR20060000488A (ko) * 2004-06-29 2006-01-06 홍림통산(주) 인삼 또는 홍삼 추출물, 그의 유산균 발효물 및 그의장내세균 발효물로 이루어진 군으로부터 선택된 1종이상의 인삼 추출물 소양증 예방 및 치료제 조성물
CN101524385A (zh) * 2008-03-07 2009-09-09 湖南泰尔制药股份有限公司 人参提取物的制备工艺

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1054073C (zh) * 1997-07-03 2000-07-05 济南三株药业有限公司 一种保健口服液
CN1194638C (zh) * 2002-08-13 2005-03-30 张红梅 双歧果蔬饮料
CN102078354A (zh) * 2011-01-21 2011-06-01 吉林紫鑫药物研究有限公司 一种制备提高免疫力的药物组合物及其制备方法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
GUAN, XIAORAN ET AL.: "Effect of Bifidobacterium fermented mixed fruit and vegetable juice on immunological function of mice", CHINESE JOURNAL OF MICROECOLOGY, vol. 22, no. 2, February 2010 (2010-02-01), pages 110 - 113, XP009178223 *
See also references of EP2676671A4 *
SONG YAHUI ET AL.: "Study on extraction process of ginsenosides", HEILONGJIANG SCIENCE AND TECHNOLOGY INFORMATION, 2009, pages 240, XP009178148 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111366549A (zh) * 2020-03-24 2020-07-03 广西壮族自治区人民医院 红心猕猴桃总皂苷含量的测定方法

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