WO2012165843A2 - 생약 추출물 또는 이의 유산균 발효물을 포함하는 호흡기 질환의 예방 또는 치료용 조성물 - Google Patents

생약 추출물 또는 이의 유산균 발효물을 포함하는 호흡기 질환의 예방 또는 치료용 조성물 Download PDF

Info

Publication number
WO2012165843A2
WO2012165843A2 PCT/KR2012/004233 KR2012004233W WO2012165843A2 WO 2012165843 A2 WO2012165843 A2 WO 2012165843A2 KR 2012004233 W KR2012004233 W KR 2012004233W WO 2012165843 A2 WO2012165843 A2 WO 2012165843A2
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
weight
parts
lactic acid
herbal
acid bacteria
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Ceased
Application number
PCT/KR2012/004233
Other languages
English (en)
French (fr)
Other versions
WO2012165843A3 (ko
Inventor
마진열
김동선
양민철
윤종현
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Korea Institute of Oriental Medicine KIOM
Original Assignee
Korea Institute of Oriental Medicine KIOM
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Korea Institute of Oriental Medicine KIOM filed Critical Korea Institute of Oriental Medicine KIOM
Priority to EP12792329.0A priority Critical patent/EP2716295B1/en
Priority to US14/122,950 priority patent/US9125932B2/en
Publication of WO2012165843A2 publication Critical patent/WO2012165843A2/ko
Publication of WO2012165843A3 publication Critical patent/WO2012165843A3/ko
Anticipated expiration legal-status Critical
Ceased legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/72—Rhamnaceae (Buckthorn family), e.g. buckthorn, chewstick or umbrella-tree
    • A61K36/725—Ziziphus, e.g. jujube
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/74—Bacteria
    • A61K35/741—Probiotics
    • A61K35/744—Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/23—Apiaceae or Umbelliferae (Carrot family), e.g. dill, chervil, coriander or cumin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/23—Apiaceae or Umbelliferae (Carrot family), e.g. dill, chervil, coriander or cumin
    • A61K36/232—Angelica
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/25—Araliaceae (Ginseng family), e.g. ivy, aralia, schefflera or tetrapanax
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/28—Asteraceae or Compositae (Aster or Sunflower family), e.g. chamomile, feverfew, yarrow or echinacea
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/35—Caprifoliaceae (Honeysuckle family)
    • A61K36/355—Lonicera (honeysuckle)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/48—Fabaceae or Leguminosae (Pea or Legume family); Caesalpiniaceae; Mimosaceae; Papilionaceae
    • A61K36/484—Glycyrrhiza (licorice)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/48—Fabaceae or Leguminosae (Pea or Legume family); Caesalpiniaceae; Mimosaceae; Papilionaceae
    • A61K36/489—Sophora, e.g. necklacepod or mamani
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/63—Oleaceae (Olive family), e.g. jasmine, lilac or ash tree
    • A61K36/634—Forsythia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/70—Polygonaceae (Buckwheat family), e.g. spineflower or dock
    • A61K36/704—Polygonum, e.g. knotweed
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/78—Saururaceae (Lizard's-tail family)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
    • A61K2236/10—Preparation or pretreatment of starting material
    • A61K2236/19—Preparation or pretreatment of starting material involving fermentation using yeast, bacteria or both; enzymatic treatment

Definitions

  • the present invention relates to a composition for the prevention or treatment of respiratory diseases, more specifically, ginseng, licorice, gold silver, donkey, venom, mokyang, windproof, sanjoin, eoseongcho, yeonkyo, allies, yinyanggwa, ginseng, geunjagi, fat milk, Cheongung
  • the present invention relates to a composition containing an extract of a herbal medicine mixture including hyeonsam and ephedra root or a lactic acid bacteria fermentation thereof as an active ingredient, which can be usefully used for the prevention and / or treatment of respiratory diseases.
  • Allergic diseases are most often caused by mast cells in tissues activated by antigen-antibody reactions and basophils in blood and eosinophils (primarily histamine, leukotrienes, TNF- ⁇ , cytokines, etc.). Since the use of allergy therapeutic drugs currently used remains symptomatic, there is an urgent need for the development of more fundamental therapeutic drugs.
  • Asthma is a reversible obstructive airway disease that has inflammatory changes as a histological characteristic. It is a disease that causes seizure dyspnea, cough, and sputum due to reversible airway contraction. It is caused by edema of mucous membranes and increased mucus secretion, and bronchial smooth muscle contraction is the main mechanism of development. The most prominent theory known to cause airway contraction is that airway hyperreaction is caused by hypersensitivity of airway by inhalation and ingestion of antigen.
  • Drugs used to treat asthma include bronchodilators, anti-inflammatory agents and anti-allergic agents.
  • bronchodilators have been used to promote beta2 adrenergic receptors, starting with adrenaline.
  • Beta2 adrenergic-antidiarrheal drug is a typical airway muscle relaxant and is used for asthma and chronic asthma symptoms in asthma patients. It activates the beta2 adrenergic receptor to raise intracellular c-AMP and airway smooth muscle. By relaxing, bronchial dilatation is shown.
  • the beta2 adrenergic-antigens include salmeterol and pomoterol, and these drugs have a long-lasting effect of 12 hours in a single dose, and are widely used as corticosteroids and complex prescription drugs in addition to single administration. It is used. These drugs, which have a high market share worldwide, have excellent efficacy, but many patients complain of side effects such as palpitations, muscle cramps, and anxiety, and deaths from increased immune responses in African Americans who have sustained long-term administration. Prescription restrictions have been defined and are reported. Therefore, there is a need for the development of new drugs that have better efficacy and fewer side effects than existing beta2 adrenergic-antigens.
  • the present inventors have studied the herbal extracts that can be usefully used to improve symptoms of respiratory diseases such as asthma, red ginseng, licorice, gold and silver, Angelica, venom, Mokhyang, windproof, sanjoin, eoseongcho, yeonkyo, allies, yin and yang , Herbal extracts of ginseng, root, oil, cheongung, hyeonsam and ephedra root were prepared, and the herbal extract or its lactic acid bacteria fermented product showed that it showed an excellent preventive or therapeutic effect of asthma, which has not been reported before. The invention has been completed.
  • An object of the present invention is to provide a composition for the prevention or treatment of respiratory diseases containing herbal extracts or lactic acid bacteria fermented products thereof as an active ingredient.
  • the present invention is a herbal extract of ginseng, licorice, gold silver, Angelica, venom, cedar, windproof, Sanjoin, Eoseongcho, Yeongyo, alligator, Yinyanggwa, ginseng, geunjagi, Jiyu, Cheongung, Hyunsam and Hojanggeun mixture Or it provides a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of respiratory diseases containing the lactic acid bacteria fermented product thereof as an active ingredient.
  • the present invention ginseng, licorice, gold and silver, Angelica, venom, Mokyang, windproof, Sanjoin, Eoseongcho, Yeongyo, allies, Yin Yang Gwak, ginseng, roots, Jiyu, Cheongung, Hyunsam and Hojang-geun mixture extract or fermented lactic acid bacteria It provides a health food for the prevention or treatment of respiratory diseases containing as an active ingredient.
  • the present invention is an active ingredient extract or fermented lactic acid bacteria fermented product of red ginseng, licorice, gold and silver guinea pig, poisonous bowel, mokyang, windproof, Sanjoin, Eoseongcho, Yeongyo, alley, Eumyangkwa, Ginseng, Ja-geun, Jiyu, Cheongung, Hyunsam and Hojang-geun mixture It provides a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of respiratory diseases containing.
  • respiratory disease is used to include any disease occurring in the respiratory organs such as bronchus and lung, regardless of the direct or indirect cause of the occurrence.
  • respiratory disease as an example of a respiratory disease, asthma, bronchiectasis, chronic obstructive pulmonary disease (COPD) or chronic cough, but the scope of the respiratory disease is not limited thereto.
  • COPD chronic obstructive pulmonary disease
  • the herbal extract is 2 to 8 parts by weight licorice, 2 to 8 parts by weight, donkey 2 to 8 parts by weight, poisonous 2 to 8 parts by weight, 2 to 8 parts by weight, 2-8 parts by weight, windproof 2 to 8 parts by weight based on 10 parts by weight of red ginseng Parts, Sanjoin 2 to 8 parts by weight, Eoseongcho 5 to 15 parts by weight, Yeongyo 2 to 8 parts by weight, allies 5 to 15 parts by weight, Yinyanggok 2 to 8 parts by weight, ginseng 5 to 15 parts by weight, root root 2 to 8 parts by weight It is preferable to prepare and extract the herbal mixture in the ratio of 2 to 8 parts by weight of fat milk, 2 to 8 parts by weight of cheongung, 5 to 15 parts by weight of Hyunsam, and 2 to 8 parts by weight of rye root.
  • organic solvents may be used in addition to water as necessary.
  • Organic solvents that may be used include, but are not limited to, C 1 to C 4 lower alcohols, acetone, or aqueous solutions thereof.
  • the "herbal extract” is used as a meaning including not only the extraction of the medicinal mixture using water but also extracted using other organic solvents other than water.
  • a lactic acid bacteria fermented product of the herbal extract of the present invention (hereinafter, also abbreviated as "herbal fermented product” or “fermented product of herbal extract”)
  • the herbal mixture as described above 2-15 times the amount of water was added to the hot water extracted from 70 to 130 °C to prepare a water extract.
  • the lactic acid bacteria were inoculated at 0.5 to 5% by weight, preferably 1% by weight of the sample weight, and fermented at 20 to 40 ° C, preferably at 37 ° C for 24 to 52 hours, preferably 48 hours.
  • fermentation of the herbal extract of the present invention is prepared.
  • lactic acid bacteria various strains or commercially available lactic acid bacteria can be used without limitation.
  • the microorganisms of the genus Lactobacillus, Bifidobacterium, Streptococcus, Lukonostok, Pediococcus and Lactococcus may be used without limitation, and among them, it is preferable to use microorganisms of the genus Lactobacillus.
  • Lactobacillus ashophilus Lactobacillus acidophilus
  • Lactobacillus casei L. casei
  • Lactobacillus plantarum L. plantarum
  • Lactobacillus fermentum L.
  • the herbal fermentation product of the present invention was prepared using lactic acid bacteria (see Example 2).
  • the lactic acid bacteria that can be used are not limited to the lactic acid bacteria exemplified above, and the lactic acid bacteria culture medium may also be selected from MRS (Man-Rogosa-Sharpe), lactose, M17 and APT medium (Asparagine Enrichment Broth) for each lactic acid bacteria. But it is not limited thereto.
  • the herbal extract or herbal fermentation product according to the present invention can be administered orally or parenterally during clinical administration and can be used in the form of a general pharmaceutical preparation. That is, the herbal extract of the present invention or the fermented product thereof may be administered in various oral and parenteral dosage forms in actual clinical administration, and when formulated, the commonly used fillers, extenders, binders, wetting agents, disintegrants, surfactants It is prepared using diluents or excipients.
  • Solid preparations for oral administration include tablets, pills, powders, granules, capsules and the like, which solid preparations contain at least one excipient such as starch, calcium carbonate, sucrose or lactose in the herbal extract or herbal fermentation product. Mixed with gelatin.
  • Liquid preparations for oral administration include suspensions, solutions, emulsions, and syrups, and may include various excipients, such as wetting agents, sweeteners, fragrances, and preservatives, in addition to commonly used simple diluents such as water and liquid paraffin. have.
  • Formulations for parenteral administration include sterile aqueous solutions, non-aqueous solvents, suspensions, emulsions, lyophilized preparations, suppositories.
  • non-aqueous solvent and the suspension solvent propylene glycol, polyethylene glycol, vegetable oil such as olive oil, injectable ester such as ethyl oleate, and the like can be used.
  • uthepsol, macrogol, tween 61, cacao butter, laurin butter, glycerol, gelatin and the like can be used as the base of the suppository.
  • Dosage units may, for example, contain 1, 2, 3 or 4 times the individual dose, or 1/2, 1/3 or 1/4 times.
  • Individual dosages contain amounts in which the effective drug is administered at one time, which usually corresponds to all, 1/2, 1/3 or 1/4 times the daily dose.
  • the human dose of the herbal extract or herbal fermentation product of the present invention is appropriately selected according to the absorbency, inactivation rate and excretion rate of the active ingredient in the body, the age, sex, condition, degree of disease, etc. Mg / kg, preferably 20-100 mg / kg, and may be administered in divided portions 1 to 6 times a day.
  • the airway resistance (Penh) level by methacholine was used as the negative control group and the comparative invention group when the herbal fermented product was administered It is significantly inhibited compared to licorice extract administration group (see FIG. 2).
  • both the herbal extract of the present invention and the lactic acid bacteria fermented product of the herbal extract can inhibit airway resistance by methacholine, but especially when the lactic acid bacteria fermented product of the herbal extract is used (see Table 3). .
  • the number of leukocytes, neutrophils, lymphocytes (lymphocytes), eosinophils and basophils is normal and Decrease to a similar level (see FIGS. 3-5).
  • the specific (-) anti-OVA IgE level tends to increase more than 200 times compared to the normal group in the negative control group, the specific drug in the herbal extract or herbal fermented product administration group -OVA IgE level is reduced by about half compared to negative control.
  • the BALF levels of the Th2 cytokines IL-4, IL-13 and the Th17 cytokine IL-17 were measured in the lung wash solution.
  • the levels of IL-4, IL-13 and IL-17 cytokines in the The level of the negative control group was increased more than two times compared to the normal group, but in the herbal extract or herbal fermented product administration group, the levels of IL-4, IL-13 and IL-17 were not only negative controls but also ginseng used as the comparative invention group. It is also significantly reduced compared to gold and silver leaf extract, licorice and licorice extract (see FIGS. 6 to 9).
  • the IFN- ⁇ level in the splenocytes is increased in the herbal extract or herbal fermentation administration group compared to the negative control group (see Fig. 10), IL-4, IL-13, IL-17
  • the level of cytokine was significantly increased in the negative control group compared to the normal group, but in the herbal extract or herbal fermenter administration group, the IL-4, IL-13, and IL-17 cytokines were all reduced by about 50% or more than the negative control group. do.
  • the airway resistance level or lung tissue damage was suppressed in the group treated with the herbal extract or herbal fermented product as compared to the negative control group, Infiltration of inflammatory cells and eosinophil cells was reduced around AHR, and damage to collagen and alveolar and alveolar around AHR were also suppressed compared to negative control group, and goblet cells around AHR were significantly suppressed compared to negative control group (Fig. 14).
  • the present invention ginseng, licorice, gold and silver, Angelica, venom, Mokyang, windproof, Sanjoin, Eoseongcho, Yeongyo, allies, Yin Yang Gwak, ginseng, roots, Jiyu, Cheongung, Hyunsam and Hojang-geun mixture extract or fermented lactic acid bacteria It provides a health food for the prevention or alleviation of respiratory diseases containing as an active ingredient.
  • the herbal extract of the present invention or the lactic acid bacteria fermented product of the herbal extract may be added to a health food for the purpose of preventing and treating respiratory diseases such as asthma, when using the herbal extract or herbal fermented product as a food additive, It may be used together with other foods or food ingredients, and may be appropriately used according to conventional methods.
  • the mixed amount of the active ingredient may be suitably determined depending on the purpose of use (prevention, health or therapeutic treatment).
  • the herbal extract or the herbal fermented product is added in an amount of 30 wt% or less, preferably 10 wt% or less with respect to the raw material.
  • the amount may be below the above range, and the active ingredient may be used in an amount above the above range because there is no problem in terms of safety. .
  • Examples of the food to which the substance may be added include meat, sausages, bread, chocolate, candy, snacks, confectionery, pizza, ramen, other noodles, gums, dairy products including ice cream, various soups, beverages, teas, drinks, Alcoholic beverages and vitamin complexes, and the like and include all of the health foods in the conventional sense.
  • the health beverage composition of the present invention may contain various flavors or natural carbohydrates, etc. as additional components, as in the general beverage.
  • Natural carbohydrates described above include glucose, monosaccharides such as fructose, disaccharides such as maltose and sucrose, and polysaccharides such as dextrin and cyclodextrin, sugar alcohols such as xylitol, sorbitol, and erythritol.
  • sweetening agent natural sweetening agents such as tautin and stevia extract, synthetic sweetening agents such as saccharin and aspartame, and the like can be used.
  • the ratio of the natural carbohydrate is generally about 0.01 to 0.04 g, preferably about 0.02 to 0.03 g per 100 ml of herbal extract or herbal fermentation.
  • the herbal extract or herbal fermented product is various nutrients, vitamins, electrolytes, flavors, coloring agents, pectic acid and salts thereof, alginic acid and salts thereof, organic acids, protective colloidal thickeners, pH regulators, stabilizers, preservatives, glycerin, Alcohols, carbonating agents used in carbonated drinks, and the like.
  • the herbal extract or herbal fermented product may contain flesh for the production of natural fruit juice, fruit juice beverage and vegetable beverage. These components can be used independently or in combination.
  • the ratio of such additives is not critical, but is generally selected in the range of 0.01 to 0.1 parts by weight per 100 parts by weight of the herbal extract or herbal fermentation product.
  • the herbal extract or herbal fermentation significantly inhibits airway resistance levels, reduces the number of leukocytes, neutrophils, lymphocytes, eosinophils and basophils to levels similar to those of normal groups, and around AHR in lung tissue. Since there is an effect such as reducing the infiltration of inflammatory cells and eosinophil cells, it can be useful for the prevention and / or treatment of respiratory diseases such as asthma.
  • Figure 1 shows the chromatogram of the herbal extract (A) and lactic acid bacteria fermented product (B) of the herbal extract.
  • Figure 2 is a graph showing the effect of lactic acid bacteria fermented product of the herbal extract, the positive control cyclosporin A (CsA, Cyclosporin A) and extracts of ginseng, gold silver, poison and licorice on methacholine induced AHR.
  • CsA positive control cyclosporin A
  • CsA Cyclosporin A
  • 3 to 5 are graphs showing the number of leukocytes, neutrophils and lymphocytes and eosinophils and basophils in blood, respectively.
  • FIG. 6 to 9 are graphs showing the effect of lactobacillus fermentation of the herbal extracts on the amount of various cytokines in the lung washing liquid, respectively, OVA IgE (FIG. 6), IL-4 (FIG. 7), IL in the lung washing liquid, respectively. Concentrations of ⁇ 13 (FIG. 8) and IL-17 (FIG. 9) are shown.
  • FIG. 10 to 13 are graphs showing the effect of the fermented lactic acid bacteria fermentation of the herbal extract on the amount of various cytokines in splenocytes, OVA IgE (FIG. 10), IL-4 (FIG. 11), IL in the splenocytes, respectively Concentrations of ⁇ 13 (FIG. 12) and IL-17 (FIG. 13) are shown.
  • Figure 14 is a photograph showing the histopathology test results in lung tissue, normal group, negative control group, positive control group (CsA administration group), H & E, MT for lactic acid bacteria fermentation administration group and extract of ginseng, gold silver, poison and licorice of herbal extracts And PAS stained pictures.
  • the herbal extract is a herbal preparation prepared by extracting ginseng, licorice, gold and silver, Angelica, venom, Mokhyang, windproof, Sanjoin, Eoseongcho, Yeongyo, Woojinja, Eumyanggok, Ginseng, Jagi, Jiyu, Cheongung, Hyunsam and Hojanggeun 160 g, licorice 80 g, gold and silver coin 80 g, Angelica 80 g, poisonous 80 g, Mokko 80 g, windproof 80 g, Sanjoin 80 g, Eoseongcho 160 g, pontoon bridge 80 g, alley 160 g, Yin Yang 80 g, ginseng 160 g After preparing a herbal mixture in the ratio of 80 g of root, 80 g of fat, 80 g of cheongung, 160 g of Hyunsam and 80 g of jangjanggeun, and then immersed for 1 hour in 18.4 L of distilled water, 10 times
  • the lactic acid bacteria used to prepare the lactic acid bacterium fermentation product of the herbal extract of the present invention are as follows: Lactobacillus ashdophyllus (KFRI # 128), Lactobacillus casei (KFRI # 127), Lactobacillus plantarum (KFRI # 144, KFRI # 402), Lactobacillus Fermentum (KFRI # 164), Lactobacillus Bulgaricus (KFRI # 344), Lactobacillus delbrueki subspecies Lactis (KFRI # 442), Lactobacillus gasteria (KFRI # 658, KCTC 3163 ) And Bifidobacterium breve (KFRI # 744).
  • the strains were used in the experiment by passage in the slope medium and liquid medium. Lactobacillus is inoculated on a slope medium and cultured for 24 hours in a 37 °C incubator, and when colonies are formed, oxygen is blocked with a paraffin film to be stored in a refrigerator room, and stored for 2 to 3 weeks to prevent the activity of bacteria or contamination of various bacteria. Once each was implanted into a new agar medium. Inoculated in a liquid medium and incubated for 24 hours in a 37 °C incubator.
  • Seed cultures contained MRS medium (10 g / l Peptone, 10 g / l Beef extract, 5 g / l Yeast extract, 20 g / l Glucose, 1 ml / l Tween 80, 2 g / l K 2 HPO 4 , 5 g). / l Sodium acetate, 2 g / l Triammonium citrate, 0.2 g / l MgSO 4 ⁇ 7H 2 O, 0.2 g / L MnSO 4 ⁇ 4H 2 O, pH 6.2-6.6).
  • the pH of the herbal extract prepared in Example 1 was adjusted to 8.0 using 1 M NaOH, and autoclaved at 121 ° C. and 1.5 atm for 15 minutes to cool to room temperature. As a result, the pH of the control group before fermentation was lowered from 8.0 to 6.3, which means that the dietary fiber components present in the herbal extracts are decomposed into some organic acids under high temperature and high pressure conditions sterilized at 121 ° C. and 1.5 atm for 15 minutes, thereby lowering the pH. It is assumed that this is because.
  • the lactic acid bacteria (1-5 ⁇ 10 8 CFU / mL) of 1% volume (v / v) was added to the herbal extracts, and cultured for 48 hours at 37 ° C. for liquid fermentation, followed by filtration through the standard test sieve. Lactic acid bacteria fermented product was prepared. Changes in pH and dry water content of the lactic acid bacteria fermentation are shown in Table 1 below.
  • the acid production capacity such as the pH of the herbal extracts down to 4.0 by the lactic acid bacteria fermentation. Thereafter, the lactic acid bacteria fermented product of the present invention was stored at 4 ° C. until use after freeze-drying.
  • the lactic acid bacteria liquid fermentation product of the herbal extract of the present invention prepared above was removed using a centrifugal separator, filtered using a 0.45 ⁇ m filter, and then analyzed by HPLC according to the conditions of Table 2 below.
  • the herbal extracts fermented by Lactobacillus ashidophyllus increased the 4.3-fold peak at 4.5 minutes compared to the unfermented herbal extracts, while the peaks at 10.1 and 14.9 minutes were fermented. With 68% and 79% reduction, respectively.
  • glycyrrhizin (27.5 minutes) which is one of the main indicators of the herbal extract of the present invention, was detected in all samples before and after fermentation by lactic acid bacteria (FIG. 1).
  • the following experimental examples were performed using the herbal fermented product fermented by the Lactobacillus ashidophyllus (KFRI # 128).
  • OVA chicken egg ovalbumin; Grade IV
  • Alum aluminum potassium sulfate
  • mice were anesthetized on the 4th and 14th day after the first (day 0) OVA / Alum intraperitoneally, and 100 ⁇ l of 2% OVA was administered (it), and at 3 weeks using the nebulizer 1
  • the final OVA asthma mice were selected by inhaling the% OVA solution into the nasal and airways three times a week for 30 minutes per day, and then bleeding blood from the eye by ocular sampling to determine anti-OVA antibody levels.
  • lactic acid bacterium fermentation products of the herbal extract prepared in Example 1 and the herbal extract prepared in Example 2 were each used for 300 mpk, and airway resistance values of methacholine were measured by the same method as described above.
  • inhalation of 3.125, 6.25, 12.5, 25, 50 mg / ml of MCH in an anesthetized experimental animal was placed in a body chamber, and the methacholine airway resistance was measured by a flow transducer. Measured.
  • the lactobacillus fermented product of the herbal extract, the positive control CsA and ginseng, gold silver, poison and licorice extract was used in suspension in distilled water, the results obtained from various experiments are recorded as the average ⁇ standard deviation The significance test was determined using Student's T-test analysis.
  • methacholine airway resistance was about 5.547 ⁇ 0.64, which was significantly increased compared to normal group (0.517 ⁇ 0.03, wide type).
  • the airway resistance level of methacholine was 2.480 ⁇ 0.377 at 50 mg / ml of MCH, which was about 55.3% lower than that of the negative control group (p ⁇ 0.001).
  • 400 mgk and 200 mpk of the lactic acid bacterium fermented product of the herbal extract of the present invention showed airway resistance values of 3.236 ⁇ 0.44 and 3.633 ⁇ 0.56 by methacholine, respectively, 41.7% and 34.5%, respectively, compared to the negative control group. It showed an airway resistance inhibitory effect (p ⁇ 0.01, p ⁇ 0.05).
  • 400 mg of ginseng, sterling silver, poisonous and licorice extracts showed methacholine airway resistance levels of 4.48 ⁇ 1.02, 4.211 ⁇ 0.50, 4.56 ⁇ 0.50 and 5.173 ⁇ 0.67, respectively.
  • the ratio of leukocytes was more than doubled in the negative control group after the end of the experiment, and in the CsA-administered group, the positive control group, the ratio of leukocytes was close to the normal group compared with the negative control group (p ⁇ 0.001).
  • Lactic acid bacteria fermented product of the herbal extracts and ginseng, gold silver, poison and licorice extract administration group was also reduced compared to the negative control group (Fig. 3).
  • the ratio of neutrophils was increased in the negative control group compared to the normal group, and the ratio of neutrophils in the CsA-administered group, which was the positive control group, was closer to the normal group than the negative control group (p ⁇ 0.001).
  • the ratio of neutrophils in the group treated with, silver, silver, and licorice extract also decreased compared to the negative control.
  • the proportion of lymphocytes was decreased in the negative control group compared to the normal group, and the proportion of lymphocytes in the CsA-administered group, which was positive control group, increased closer to the normal group than the negative control group (p ⁇ 0.001).
  • Lymphocyte ratios in ginseng, sterling, toxin and licorice extract were also increased compared to the negative control group (FIG. 4).
  • the proportion of eosinophils was increased in the negative control group compared to the normal group, and the ratio of eosinophils in the positive control group, CsA-treated group, was decreased closer to the normal group than the negative control group (p ⁇ 0.005).
  • the ratio of eosinophils in ginseng, sterling, toxin and licorice extracts was also reduced compared to the negative control.
  • the ratio of basophils was significantly increased in the negative control group compared to the normal group, and the ratio of basophils in the CsA-administered group, which was the positive control group, was close to the normal group compared to the negative control group (p ⁇ 0.05).
  • the ratio of basophils in the lactobacillus fermented administration group and ginseng, sterling silver, toxin and licorice extract was also reduced compared to the negative control group (FIG. 5).
  • ELISA enzyme-linked immuno-sorbent assay, Shibayagi, Japan
  • each antibody was diluted in a coating buffer, coated on microwells and left overnight at 4 ° C. After washing each well with three wash buffers, 100 ⁇ l of serum (10-fold dilution) was dispensed and left at room temperature for 1 hour before washing with two wash buffers. Thereafter, 100 ⁇ l of the antibody avidin-HRP conjugate was treated and left for 1 hour at room temperature, followed by washing again. 100 ⁇ l of TMB substrate was aliquoted, left in the dark for 30 minutes, and then treated with 50 ⁇ l of stop solution, and the absorbance was measured at 450 nm with an ELISA reader.
  • the specific anti-OVA IgE level of the normal group was 0.10 ⁇ 0.091 (ng / ml), but the negative control group sprayed with OVA aerosol for 4 weeks was 23.7 ⁇ 1.89 (ng / ml), more than 200 times higher than the normal group.
  • the positive control group CsA 10 mpk
  • the specific anti-OVA IgE level was decreased by about 4 times more than the negative control group (p ⁇ 0.01).
  • the specific anti-OVA IgE level of the lactic acid bacteria fermented product of the 400 mpk herbal extract decreased about 49.1% compared to the negative control group (p ⁇ 0.001). Indicated.
  • the lactic acid bacterium fermentation group of 400 mpk herbal extract reduced about 35% in both IL-4 (p ⁇ 0.05) and IL-13 (p ⁇ 0.01) cytokine levels compared to the negative control group. Lactobacillus fermentation group also decreased compared to the negative control group. In addition, IL-17 levels in the lactic acid bacterium fermentation group of the herbal extracts also decreased compared to the negative control group.
  • the cells were incubated for 48 hours in a well coated with a 96-well plate of OVA peptide 24 hours before, and in the culture supernatant, Th1 cytokine IFN- ⁇ , Th2 cytokine IL-4, Levels in the splenocyte cultures of IL-13 and the Th17 cytokine IL-17 were measured.
  • the OVA peptide was not coated in the normal group, and the OVA peptide coating was performed in the negative control group, the positive control group, the lactobacillus fermentation administration group, and the ginseng, gold silver, poison and licorice extract administration group.
  • IFN- ⁇ levels were similar in the CsA-administered group of normal, negative control, and positive control groups, but IFN- ⁇ levels were increased in the lactobacillus fermented group and the ginseng, gold silver, toxin and licorice extract group of the herbal extracts ( 10).
  • the levels of IL-4, IL-13, and IL-17 cytokines were significantly increased in the negative control group compared to the normal group, and in the positive control group, CsA 10 mpk, the IL-4, IL-13 ( Cytokine levels decreased by more than about 50% in both the p ⁇ 0.01) and IL-17 (p ⁇ 0.001) cytokines.
  • the lactic acid bacterium fermentation group of the 400 mpk herbal extract was also reduced compared to the negative control group in the IL-4 (p ⁇ 0.05), IL-13, and IL-17 (p ⁇ 0.01) cytokines compared to the negative control group.
  • IL-7 cytokine showed a decrease compared to the negative control group (P ⁇ 0.01).
  • the levels of IL-4, IL-13 and IL-17 cytokines showed a tendency to decrease, but compared to the lactic acid bacteria fermented product administration group of the present invention. The degree was weak (FIGS. 11-13).
  • H & E staining and MT staining the structure (tracheole) and alveolar (alveolar), the inflammation of the cell part and the degree of infiltration of blood cells were confirmed, and the degree of collagen deposition was analyzed in the PAS staining for goblet cells. It was.
  • the trachea and alveoli were severely damaged in the lung tissue of the negative control group, severely infiltrated immune inflammatory cells, eosinophils, and blood around the AHR (Airway hyperresponsiveness), and neovascularization was formed.
  • collagen deposition was increased around the AHR, the thickness of the AHR was also significantly increased compared to the normal group, and the AHR was almost blocked.
  • PAS Periodic Acid-Schiff
  • the CsA 10 mpk-administered group which is a positive control group, significantly inhibited inflammatory cell infiltration around AHR, damage of bronchial and alveolar AHR, collagen deposition and goblet cell infiltration around AHR.
  • airway resistance and lung tissue damage were suppressed in the Lactobacillus fermented group of herbal extracts compared with the negative control group, and the infiltration of inflammatory cells and eosinophil cells in the lung tissue was reduced, and the bronchial and alveolar tissues around the AHR were reduced.
  • Injury and collagen deposition were also inhibited compared to the negative control, and goblet cells around the AHR were also significantly inhibited compared to the negative control.
  • Syrup containing the herbal extract or fermented product of the herbal extract as an active ingredient 2% was prepared by the following method. First, the fermented powder, saccharin and sugar of the herbal extract or herbal extract prepared in Example 1 or Example 2 were dissolved in 80 g of warm water. After the solution was cooled, a solution consisting of glycerin, saccharin, spices, ethanol, sorbic acid and distilled water was prepared and mixed thereto. Water was added to this mixture to 100 ml.
  • the components of the syrup are as follows.
  • Herbal medicine extract or fermented product of herbal medicine extract ... 2 g
  • a tablet containing 15 mg of active ingredient was prepared by the following method.
  • Example 2 250 g of the herbal extract or the fermented product of the herbal extract prepared in Example 1 or 2 was mixed with 175.9 g of lactose, 180 g of potato starch, and 32 g of colloidal silicic acid. 10% gelatin solution was added to the mixture, which was then ground and passed through a 14 mesh sieve. It was dried and the mixture obtained by adding 160 g of potato starch, 50 g of talc and 5 g of magnesium stearate was made into a tablet.
  • Foods containing the herbal extracts prepared in Example 1 or Example 2 or fermented products of the herbal extracts were prepared as follows.
  • a health promotion cooking seasoning was prepared from 20 to 95% by weight of the herbal extract or fermented product of the herbal extract.
  • Health promotion tomato ketchup or sauce was prepared by adding 0.2-1.0 wt% of the herbal extract or fermented product of the herbal extract to tomato ketchup or sauce.
  • Brown rice, barley, glutinous rice, and yulmu were alphad by a known method, and then dried and roasted to prepare a powder having a particle size of 60 mesh using a grinder.
  • Black beans, black sesame seeds, and perilla were also steamed and dried by a known method, and then ground to a powder having a particle size of 60 mesh.
  • the herbal extract or the fermented product of the herbal extract was reduced and concentrated in a vacuum concentrator, and the dried product obtained by drying with a spray and a hot air dryer was pulverized with a particle size of 60 mesh to obtain a dry powder. It was prepared by combining the dry powder of the grains, seeds and herbal extracts or fermented products of the herbal extracts prepared in the following ratio.
  • Seeds (7% by weight perilla, 8% by weight black beans, 7% by weight black sesame),
  • Dry powder (3% by weight) of the herbal extract or fermented product of the herbal extract
  • Health supplement vegetable juice was prepared by adding 5 g of the herbal extract or fermented product of the herbal extract to 1,000 ml of tomato or carrot juice.
  • Health supplement fruit juice was prepared by adding 1 g of the herbal extract or fermented product of the herbal extract to 1,000 ml of apple or grape juice.

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Alternative & Traditional Medicine (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)

Abstract

본 발명은 호흡기 질환의 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 고삼, 감초, 금은화, 당귀, 독활, 목향, 방풍, 산조인, 어성초, 연교, 우방자, 음양곽, 인삼, 자근, 지유, 천궁, 현삼 및 호장근을 포함하는 생약 혼합물의 추출물 또는 이의 유산균 발효물을 유효성분으로 함유하는 호흡기 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 및 건강식품에 관한 것이다. 상기 생약 추출물 또는 이의 유산균 발효물은 기도저항 수치를 현저하게 억제하고, 백혈구, 호중구, 림프구, 호산구 및 호염기성구의 수를 정상군과 유사한 수준으로 감소시키며, 폐조직상에서 AHR 주변에 염증세포와 호산구 세포의 침윤을 감소시키는 등의 효과가 있으므로, 천식과 같은 호흡기 질환의 예방 및/또는 치료용으로 유용하게 사용될 수 있다.

Description

생약 추출물 또는 이의 유산균 발효물을 포함하는 호흡기 질환의 예방 또는 치료용 조성물
본 발명은 호흡기 질환의 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 고삼, 감초, 금은화, 당귀, 독활, 목향, 방풍, 산조인, 어성초, 연교, 우방자, 음양곽, 인삼, 자근, 지유, 천궁, 현삼 및 호장근을 포함하는 생약 혼합물의 추출물 또는 이의 유산균 발효물을 유효성분으로 함유하며, 호흡기 질환의 예방 및/또는 치료에 유용하게 사용될 수 있는 조성물에 관한 것이다.
알러지성 질환은 대부분이 항원-항체 반응에 의해 활성화된 조직의 비만세포 및 혈액의 호염기성 세포 및 호산구에서 유리되는 매개체들(주로 histamine, leukotrienes, TNF-α, cytokines 등)에 의해서 야기된다. 현재 사용되는 알러지 치료 약물들의 용도는 증상완화에 머무르고 있기 때문에 보다 근본적인 치료 약물의 개발이 절실히 요구된다.
폐질환 중 천식은 염증성 변화를 조직학적 특성으로 하는 가역적 폐색성 기도질환으로서 가역적인 기도수축에 의해 발작적 호흡곤란, 기침, 객담 등을 나타내는 질환으로, 그 발생 기전은 기관지 평활근의 수축이나 경련, 기관지점막의 부종과 점액 분비 증가에 의해서 일어나며 이 중에서도 기관지 평활근 수축이 주된 발생 기전이다. 기도 수축을 일으키는 원인으로 지금까지 알려진 가장 유력한 학설은 항원의 흡입, 섭취로 인해 기도의 과민반응이 유발되어 기도가 광범위하게 수축된다는 것이다. 그 외 호흡기의 감염, SO2, 중금속, 석면, 분진 등으로 오염된 공기나 자극성 기체의 흡입, 기후의 급격한 변화, 심리적 자극, 내분비계의 이상, 자율신경계의 이상, 신체운동, β- 수용체 차단설 등을 들 수 있다. 상기 질환으로 알려진 만성 천식 및 알레르기성 천식은 재발이 잘되는 질환으로 알려져 있으며, 이 질환들은 면역세포의 사이토카인에 의한 재발 위험과 자가면역에 의한 요인에 기인한 발병 기전이 알려져 있다.
천식 치료에 사용되는 약물로는 크게 기관지 확장제, 항염증제, 항알레르기제가 있는데, 이 중 기관지 확장제는 아드레날린으로부터 시작하여 베타2 아드레날린 수용체를 촉진하는 물질이 사용되어 왔다. 베타2 아드레날린-항진제는 대표적인 기도 근육 이완제이며, 천식환자에 대해 응급상황은 물론, 만성적인 천식증상에도 이용되고 있는 약물로서, 베타2 아드레날린 수용체를 활성화시킴으로써 세포내 c-AMP를 상승시키고, 기도 평활근을 이완시킴으로써 기관지 확장효과를 보인다.
상기 베타2 아드레날린-항진제는 살메테롤(salmeterol), 폴모테롤(formoterol) 등이 있으며, 이 약물들은 1회 투여시 12시간의 지속효과를 지님으로써 단독 투여 이외에 부신피질 호르몬과 복합처방제로서도 널리 이용되고 있다. 세계적으로 시장 점유율이 높은 이 약물들은 효능 또한 우수하나, 심계항진, 근육경련, 불안 등과 같은 부작용으로 불쾌감을 호소하는 환자들이 많으며, 장기적인 투여가 지속된 아프리카계 미국인의 경우 면역반응의 증가로 사망한 사례가 보고되어 처방에 따른 제한사항이 규정된 상태이다. 따라서, 기존의 베타2 아드레날린-항진제보다 효능이 우수하고, 부작용이 적은 새로운 약물의 개발이 요구되고 있다.
이에, 본 발명자들은 천식과 같은 호흡기 질환 증상의 개선에 유용하게 사용될 수 있는 생약 추출물에 대해 연구한 결과, 고삼, 감초, 금은화, 당귀, 독활, 목향, 방풍, 산조인, 어성초, 연교, 우방자, 음양곽, 인삼, 자근, 지유, 천궁, 현삼 및 호장근 혼합물의 생약 추출물을 제조하였으며, 상기 생약 추출물 또는 이의 유산균 발효물이 종래 보고된 바 없는 뛰어난 천식의 예방 또는 치료 효과를 보인다는 사실을 밝힘으로써 본 발명을 완성하였다.
본 발명은 생약 추출물 또는 이의 유산균 발효물을 유효성분으로 함유하는 호흡기 질환의 예방 또는 치료용 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 고삼, 감초, 금은화, 당귀, 독활, 목향, 방풍, 산조인, 어성초, 연교, 우방자, 음양곽, 인삼, 자근, 지유, 천궁, 현삼 및 호장근 혼합물의 생약 추출물 또는 이의 유산균 발효물을 유효성분으로 함유하는 호흡기 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 고삼, 감초, 금은화, 당귀, 독활, 목향, 방풍, 산조인, 어성초, 연교, 우방자, 음양곽, 인삼, 자근, 지유, 천궁, 현삼 및 호장근 혼합물의 생약 추출물 또는 이의 유산균 발효물을 유효성분으로 함유하는 호흡기 질환의 예방 또는 치료용 건강식품을 제공한다.
본 발명은 고삼, 감초, 금은화 당귀, 독활, 목향, 방풍, 산조인, 어성초, 연교, 우방자, 음양곽, 인삼, 자근, 지유, 천궁, 현삼 및 호장근 혼합물의 생약 추출물 또는 이의 유산균 발효물을 유효성분으로 함유하는 호흡기 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명에 있어서, "호흡기 질환"은 그 발생의 직·간접적인 원인을 불문하고 기관지, 폐와 같은 호흡기에 발생되는 임의의 질환을 포함하는 의미로 사용된다. 본 발명의 한 구현예에서는 호흡기 질환의 예로서 천식, 기관지 확장증, 만성 폐쇄성 폐질환(COPD, chronic obstructive pulmonary disease) 또는 만성기침을 들고 있으나, 호흡기 질환의 범위가 이에 한정되는 것은 아니다.
상기 생약 추출물은 고삼 10 중량부에 대하여 감초 2 내지 8 중량부, 금은화 2 내지 8 중량부, 당귀 2 내지 8 중량부, 독활 2 내지 8 중량부, 목향 2 내지 8 중량부, 방풍 2 내지 8 중량부, 산조인 2 내지 8 중량부, 어성초 5 내지 15 중량부, 연교 2 내지 8 중량부, 우방자 5 내지 15 중량부, 음양곽 2 내지 8 중량부, 인삼 5 내지 15 중량부, 자근 2 내지 8 중량부, 지유 2 내지 8 중량부, 천궁 2 내지 8 중량부, 현삼 5 내지 15 중량부 및 호장근 2 내지 8 중량부의 비율로 생약 혼합물을 제조한 후 추출하는 것이 바람직하다. 추출용매로는 물을 사용하는 것이 일반적이지만, 필요에 따라 물 이외에 다른 유기용매를 사용해도 무방하다. 사용될 수 있는 유기용매로는 C1 내지 C4의 저급 알코올, 아세톤, 또는 이의 수용액 등을 들 수 있지만 이에 한정되는 것은 아니다. 본 발명에 있어서, 상기 "생약 추출물"은 상기 약재 혼합물을 물을 이용하여 추출한 것뿐만 아니라 물 이외의 다른 유기용매를 이용하여 추출한 것을 모두 포함하는 의미로 사용된다.
본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명의 생약 추출물의 유산균 발효물(이하, "생약 발효물" 또는 "생약 추출물의 발효물"이라 약칭하기도 함)을 제조하기 위해서는, 먼저 상기와 같은 생약 혼합물에 2∼15배량의 물을 가한 후 70 내지 130℃에서 열수 추출한 수추출물을 제조한다. 상기 수추출물을 냉각한 뒤 유산균을 시료 중량의 0.5 내지 5 중량%, 바람직하게는 1 중량%로 접종하고, 20 내지 40℃, 바람직하게는 37℃에서 24 내지 52시간, 바람직하게는 48시간 발효시킴으로써 본 발명의 생약 추출물의 발효물이 제조된다. 추출용매로 물 이외의 다른 유기용매를 이용하여 제조된 생약 추출물로 생약 추출물의 발효물을 제조할 경우에는, 먼저 상기 추출물을 건조한 후 물에 희석시키고, 여기에 유산균을 접종한 후 발효시키는 것이 바람직하다.
상기에서, 유산균으로는 분리균주 또는 시판중인 다양한 유산균을 제한없이 사용할 수 있다. 구체적으로, 락토바실러스, 비피도박테리움, 스트렙토코커스, 루코노스톡, 페디오코커스 및 락토코커스 속의 미생물이 제한없이 사용될 수 있고, 이중에서 락토바실러스 속의 미생물을 사용하는 것이 바람직하다. 본 발명의 바람직한 구현예에서는 락토바실러스 애시도필루스(Lactobacillus acidophilus), 락토바실러스 카세이(L. casei), 락토바실러스 플란타룸(L. plantarum), 락토바실러스 퍼멘텀(L. fermentum), 락토바실러스 불가리쿠스(L. bulgaricus), 락토바실러스 델브루에키 아종 락티스(L. delbruekii subsp. lactis), 락토바실러스 가세리(L. gasseri) 및 비피도박테리움 브레베(Bifidobacterium breve)와 같은 다양한 종류의 유산균을 사용하여 본 발명의 생약 발효물을 제조하였다(실시예 2 참조). 그러나, 사용될 수 있는 유산균이 상기 예시된 유산균에 한정되는 것은 아니며, 유산균 배양 배지 역시 각각의 유산균에 맞게 MRS (Man-Rogosa-Sharpe), 락토오스, M17 및 APT 배지(Asparagine Enrichment Broth)로 부터 선택될 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명에 따른 생약 추출물 또는 생약 발효물은 임상 투여시에 경구 또는 비경구로 투여가 가능하며 일반적인 의약품 제제의 형태로 사용될 수 있다. 즉, 본 발명의 생약 추출물 또는 이의 발효물은 실제 임상 투여시에 경구 및 비경구의 여러 가지 제형으로 투여될 수 있는데, 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구 투여를 위한 고형 제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형 제제는 생약 추출물 또는 생약 발효물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 수크로스 또는 락토오스, 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한, 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구 투여를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁용제로는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔, 마크로골, 트윈 61, 카카오지, 라우린지, 글리세롤, 젤라틴 등이 사용될 수 있다.
투약 단위는, 예를 들면 개별 투약량의 1, 2, 3 또는 4배로, 또는 1/2, 1/3 또는 1/4배로 함유할 수 있다. 개별 투약량은 유효 약물이 1회에 투여되는 양을 함유하며, 이는 통상 1일 투여량의 전부, 1/2, 1/3 또는 1/4배에 해당한다.
본 발명의 생약 추출물 또는 생약 발효물의 인체 투여량은 체내에서의 활성성분의 흡수도, 불활성화율 및 배설속도, 환자의 연령, 성별, 상태, 질병의 정도 등에 따라 적절히 선택되며, 성인에게 10∼300 ㎎/㎏이고, 바람직하기로는 20∼100 ㎎/㎏이며, 하루 1 내지 6회 나누어 투여될 수 있다.
본 발명의 한 구현예에 따르면, 기관지 천식 생쥐 모델에서, 상기 생약 발효물을 투여할 경우 메타콜린에 의한 기도저항성(Penh) 수치가 음성대조군과 비교대상 발명군으로 사용된 인삼, 금은화, 독활 및 감초 추출물 투여군에 비해 현저하게 억제된다(도 2 참조). 또한, 본 발명의 생약 추출물과 생약 추출물의 유산균 발효물 모두 메타콜린에 의한 기도저항성을 억제할 수 있으나, 특히 생약 추출물의 유산균 발효물을 이용할 경우에 그 효과가 보다 현저하게 나타난다(표 3 참조).
또한, 본 발명의 다른 구현예에 따르면, 상기 생약 추출물 또는 생약 발효물을 투여할 경우 백혈구, 호중구(neutrophil), 림프구(lymphocyte), 호산구(eosinophil) 및 호염기성구(basophil)의 수가 정상군과 유사한 수준으로 감소한다(도 3 내지 도 5 참조).
또한, 본 발명의 다른 구현예에 따르면, 특정(specific) 항-OVA IgE 수준은 음성대조군의 경우 정상군에 비해 200배 이상 증가하는 경향을 나타내나, 상기 생약 추출물 또는 생약 발효물 투여군에서는 특정 항-OVA IgE 수준이 음성대조군에 비해 약 절반 정도로 감소한다. 또한, 폐세척액 내 Th2 사이토카인인 IL-4, IL-13과 Th17 사이토카인인 IL-17의 BALF 내 수준을 측정한 결과, 폐세척액 내 IL-4, IL-13, IL-17 사이토카인의 수준은 정상군에 비해 음성대조군이 2배 이상 증가하였으나, 상기 생약 추출물 또는 생약 발효물 투여군에서는 IL-4, IL-13 및 IL-17 수준 모두 음성대조군뿐만 아니라 비교대상 발명군으로 사용된 인삼, 금은화, 독활 및 감초 추출물에 비해서도 현저하게 감소한다(도 6 내지 도 9 참조).
또한, 본 발명의 다른 구현예에 따르면, 비장세포 내 IFN-γ 수준은 음성대조군에 비해 생약 추출물 또는 생약 발효물 투여군에서 증가하며(도 10 참조), IL-4, IL-13, IL-17 사이토카인의 수준은 정상군에 비해 음성대조군이 현저하게 증가하였으나, 상기 생약 추출물 또는 생약 발효물 투여군에서는 IL-4, IL-13, IL-17 사이토카인 모두에서 음성대조군에 비해 약 50% 이상 감소한다. 한편, 비교대상 발명군으로 사용된 인삼, 금은화, 독활 및 감초 추출물을 투여한 경우에도 IL-4, IL-13 및 IL-17 사이토카인의 수준이 감소하는 경향을 나타내지만, 본 발명의 유산균 발효물 투여군에 비해서는 상대적으로 미약한 정도이다(도 11 내지 도 13 참조).
또한, 본 발명의 다른 구현예에 따르면, 기관지 천식 생쥐 모델의 폐 조직병리 검사 결과, 상기 생약 추출물 또는 생약 발효물 투여군에서는 기도저항 수치나 폐조직 손상 정도가 음성대조군에 비해 억제되었는데, 폐조직상에서 AHR 주변에 염증세포와 호산구 세포의 침윤이 감소되었고, AHR 주변의 기관세지와 폐포의 손상 및 콜라겐 침착도 음성대조군에 비해 억제되었으며, AHR 주변에 고블릿 세포도 음성대조군에 비해 현저하게 억제되었다(도 14 참조).
또한, 본 발명은 고삼, 감초, 금은화, 당귀, 독활, 목향, 방풍, 산조인, 어성초, 연교, 우방자, 음양곽, 인삼, 자근, 지유, 천궁, 현삼 및 호장근 혼합물의 생약 추출물 또는 이의 유산균 발효물을 유효성분으로 함유하는 호흡기 질환의 예방 또는 완화용 건강식품을 제공한다.
본 발명의 생약 추출물 또는 상기 생약 추출물의 유산균 발효물은 천식과 같은 호흡기 질환의 예방 및 치료 목적으로 건강식품에 첨가될 수 있으며, 생약 추출물 또는 생약 발효물을 식품 첨가물로 사용할 경우, 이를 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효 성분의 혼합양은 사용 목적(예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 식품 또는 음료의 제조시에는 생약 추출물 또는 생약 발효물이 원료에 대하여 30 중량% 이하, 바람직하게는 10 중량% 이하의 양으로 첨가된다. 그러나, 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다.
상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 물질을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소세지, 빵, 초콜릿, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알콜 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강식품을 모두 포함한다.
본 발명의 건강음료 조성물은 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물에는 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드, 말토스, 수크로스와 같은 디사카라이드, 및 덱스트린, 사이클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드, 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이 있다. 감미제로서는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제나, 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 생약 추출물 또는 생약 발효물 100 ㎖당 일반적으로 약 0.01∼0.04 g, 바람직하게는 약 0.02∼0.03 g 이다.
상기 외에도 상기 생약 추출물 또는 생약 발효물은 여러가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 밖에 생약 추출물 또는 생약 발효물은 천연 과일주스, 과일주스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 크게 중요하진 않지만 생약 추출물 또는 생약 발효물 100 중량부 당 0.01∼0.1 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.
상기에서 살펴본 바와 같이, 상기 생약 추출물 또는 생약 발효물은 기도저항 수치를 현저하게 억제하고, 백혈구, 호중구, 림프구, 호산구 및 호염기성구의 수를 정상군과 유사한 수준으로 감소시키며, 폐조직상에서 AHR 주변에 염증세포와 호산구 세포의 침윤을 감소시키는 등의 효과가 있으므로, 천식과 같은 호흡기 질환의 예방 및/또는 치료용으로 유용하게 사용될 수 있다.
도 1은 상기 생약 추출물(A) 및 생약 추출물의 유산균 발효물(B)의 크로마토그램을 나타낸 것이다.
도 2는 상기 생약 추출물의 유산균 발효물, 양성대조군인 시클로스포린 A(CsA, Cyclosporin A) 및 인삼, 금은화, 독활 및 감초의 추출물이 메타콜린 유도성 AHR에 미치는 영향을 보여주는 그래프이다.
*p<0.05, **p<0.01, ***p<0.001
도 3 내지 도 5는 각각 혈액 내 백혈구, 호중구 및 림프구 및 호산구 및 호염기성구의 수를 보여주는 그래프이다.
*p<0.05, **p<0.01, ***p<0.001
도 6 내지 도 9는 폐 세척액에서 상기 생약 추출물의 유산균 발효물이 다양한 사이토카인의 양에 미치는 영향을 보여주는 그래프로서, 각각 폐 세척액 내의 OVA IgE(도 6), IL-4(도 7), IL-13(도 8) 및 IL-17(도 9)의 농도를 나타낸다.
*p<0.05, **p<0.01, ***p<0.001
도 10 내지 도 13은 비장세포에서 상기 생약 추출물의 유산균 발효물이 다양한 사이토카인의 양에 미치는 영향을 보여주는 그래프로서, 각각 비장세포 내의 OVA IgE(도 10), IL-4(도 11), IL-13(도 12) 및 IL-17(도 13)의 농도를 나타낸다.
*p<0.05, **p<0.01, ***p<0.001
도 14는 폐 조직내 조직병리 검사 결과를 보여주는 사진으로서, 정상군, 음성대조군, 양성대조군(CsA 투여군), 생약 추출물의 유산균 발효물 투여군 및 인삼, 금은화, 독활 및 감초의 추출물에 대한 H&E, M-T 및 PAS 염색 사진을 나타낸다.
이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명한다.
단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐, 본 발명의 범위가 하기 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.
실시예 1: 생약 추출물의 제조
상기 생약 추출물은 고삼, 감초, 금은화, 당귀, 독활, 목향, 방풍, 산조인, 어성초, 연교, 우방자, 음양곽, 인삼, 자근, 지유, 천궁, 현삼 및 호장근을 추출하여 제조되는 한방 제제로서, 고삼 160 g, 감초 80 g, 금은화 80 g, 당귀 80 g, 독활 80 g, 목향 80 g, 방풍 80 g, 산조인 80 g, 어성초 160 g, 연교 80 g, 우방자 160 g, 음양곽 80 g, 인삼 160 g, 자근 80 g, 지유 80 g, 천궁 80 g, 현삼 160 g 및 호장근 80 g의 비율로 생약 혼합물을 제조한 후, 상기 생약 혼합물 1,840 g의 10배량인 18.4 ℓ의 증류수에 넣어 1시간 동안 침지시킨 후 115℃에서 3시간 동안 초고속 진공저온 추출기(한국, 경서추출기 cosmos-600), 표준 시험용 체(standard testing sieve, Aperture 500 ㎛와 150 ㎛)를 이용하여 탕제를 여과하여 본 발명의 생약 추출물을 제조하였다.
실시예 2: 생약 추출물의 유산균 발효물 제조
<2-1> 유산균의 종균 배양
본 발명의 생약 추출물의 유산균 발효물의 제조에 사용된 유산균은 다음과 같다: 락토바실러스 애시도필루스(KFRI #128), 락토바실러스 카세이(KFRI #127), 락토바실러스 플란타룸(KFRI #144, KFRI #402), 락토바실러스 퍼멘텀(KFRI #164), 락토바실러스 불가리쿠스(KFRI #344), 락토바실러스 델브루에키 아종 락티스(KFRI #442), 락토바실러스 가세리(KFRI #658, KCTC 3163) 및 비피도박테리움 브레베(KFRI #744). 상기 균주들은 사면배지와 액체배지에서 계대하여 실험에 이용하였다. 유산균을 사면배지에 접종하여 37℃ 배양기에서 24시간 배양하여 균의 콜로니가 형성되면 파라핀 필름으로 산소를 차단하여 냉장실에서 보존하고, 균의 활성이 떨어지거나 잡균의 오염이 방지하기 위하여 2∼3주에 한 번씩 새로운 사면한천배지에 이식시켰다. 액체배지에 접종하여 37℃ 배양기에서 24시간 배양하였다. 종균배양에는 MRS 배지(10 g/ℓ Peptone, 10 g/ℓ Beef extract, 5 g/ℓ Yeast extract, 20 g/ℓ Glucose, 1 ㎖/ℓ Tween 80, 2 g/ℓ K2HPO4, 5 g/ℓ Sodium acetate, 2 g/ℓ Triammonium citrate, 0.2 g/ℓ MgSO4·7H2O, 0.2 g/ℓ MnSO4·4H2O, pH 6.2-6.6)를 사용하였다.
<2-2> 유산균을 이용한 생약 추출물의 발효
1 M NaOH를 이용하여 실시예 1에서 제조한 생약 추출물의 pH를 8.0으로 조정하고, 121℃, 1.5 기압에서 15분간 가압멸균하여 상온까지 냉각시켰다. 그 결과, 발효 전 대조군의 pH가 8.0에서 6.3까지 낮아졌는데, 이는 121℃, 1.5 기압에서 15분간 멸균되는 고온·고압 조건에서 생약 추출물에 존재하는 식이 섬유 성분들이 일부 유기산으로 분해되어 pH가 저하하기 때문인 것으로 추정된다. 생약 추출물에 1% 볼륨(v/v)의 상기 유산균(1-5×108 CFU/㎖)을 첨가하고 37℃에서 48시간 동안 통기배양하여 액체 발효시킨 뒤 상기 표준 시험용 체로 여과하여 생약 추출물의 유산균 발효물을 제조하였다. 상기 유산균 발효물의 pH 및 건조 물량 변화는 하기 표 1과 같다.
표 1
pH 건조물량(%)
대조군 6.19±0.00 2.97±0.02
KFRI 127 4.42±0.01 3.02±0.01
KFRI 128 4.00±0.01 2.97±0.03
KFRI 144 4.26±0.00 2.97±0.02
KFRI 164 4.52±0.00 3.04±0.00
KFRI 344 4.36±0.01 3.06±0.01
KFRI 402 4.34±0.01 3.02±0.02
KFRI 442 4.03±0.01 3.02±0.00
KFRI 658 4.65±0.01 2.88±0.04
KFRI 744 3.84±0.01 2.88±0.00
KCTC 3163 4.25±0.01 3.00±0.02
상기 결과로부터, 유산균 발효에 의해 생약 추출물의 pH가 4.0까지 내려가는 등의 활발한 산 생산능력을 나타내는 것을 확인할 수 있었다. 이후, 본 발명의 유산균 발효물은 동결 건조한 후 사용하기 전까지 4℃에 보관하였다.
<2-3> 생약 발효물의 분석
상기에서 제조된 본 발명의 생약 추출물의 유산균 액체 발효물을 원심분리기를 이용하여 잔사를 제거하고, 0.45 ㎛ 여과기를 이용하여 여과한 후 하기 표 2의 조건에 따라 HPLC 분석을 수행하였다.
표 2
칼럼 역상 칼럼(C18, 250×4.6 ㎜, 5 ㎛)
검출기 UV 254 ㎚
용매 A 2% 아세트산
B 아세토니트릴
런닝 타임 65분
주입 부피 20 ㎕
유속 1.0 ㎖/분
농도구배 표
시간 A / B
0 80 / 20
5 80 / 20
50 20 / 80
55 80 / 20
65 80 / 20
그 결과, 락토바실러스 애시도필루스(KFRI #128)에 의해 발효된 생약 추출물의 경우 발효되지 않은 생약 추출물에 비해 4.5분 위치의 피크가 4.3배 증가한 반면, 10.1분 및 14.9분 위치의 피크는 발효와 함께 각각 68% 및 79% 감소하였다. 또한, 본 발명의 생약 추출물의 주요 지표물질 중의 하나인 글리시리진(glycyrrhizin)(27.5분)은 유산균에 의한 발효전 및 발효후의 모든 시료에서 검출되었다(도 1). 이하, 상기 락토바실러스 애시도필루스(KFRI #128)에 의해 발효된 생약 발효물을 이용하여 하기 실험예들을 수행하였다.
비교예 1: 인삼, 금은화, 독활 및 감초 추출물의 제조
인삼, 금은화, 독활 및 감초 각각 1 ㎏에 각각 10 ℓ의 증류수를 넣고 1시간 동안 침지시킨 후 115℃에서 3시간 동안 초고속 진공저온 추출기(한국, 경서추출기 cosmos-600), 표준 시험용 체(standard testing sieve, Aperture 500 ㎛와 150 ㎛)를 이용하여 탕제를 여과하여 상기 4가지 생약 성분의 추출물을 제조하였다.
실험예 1. 기관지 천식 생쥐 모델 확립
500 ㎍/㎖의 난알부민(OVA, chicken egg ovalbumin; Grade Ⅳ)과 10% Alum(aluminum potassium sulfate; Sigma)(w/v)을 PBS에 용해한 후 혼합하였다. 이 혼합물을 10 N NaOH을 이용하여 pH를 6.5로 조정하였고, 이를 상온에서 1시간 동안 방치한 후 750×g에서 5분 동안 원심분리하였다. 상기 OVA/Alum 침전물(pellet)에 증류수를 가하여 원래의 양으로 용해한 후, 100 ㎍ OVA/Alum를 0.2 ㎖로 조정하여 0일과 7일째 복강내로 주사하여 전신감작시켰다. 또한, 첫 번째(0일) OVA/Alum을 복강주사한 후 4일째와 14일째에 생쥐를 마취하고 2% OVA 100 ㎕를 기도 투여(i.t)하였고, 3주째에 분무기(Nebulizer)를 이용하여 1% OVA 용액을 하루에 30분씩 일주일에 3회씩 비강 및 기도내로 흡입시킨 후, 안구채혈법으로 눈에서 혈액을 채혈하여 항-OVA 항체 수준을 측정함으로써 최종 OVA 천식 생쥐를 선별하였다.
실험예 2. 메타콜린에 의한 기도저항성 수치(Pehn) 측정
실험예 1의 전신감작 후 4주째부터 3주간은 1% OVA 용액을, 그리고 1주간은 2% OVA 용액을 하루에 30분, 일주일에 3회씩 흡입시켰다. 4주째부터 실시예 2에서 제조한 생약 추출물의 유산균 발효물 400 mpk 또는 200 mpk와 비교예 1에서 제조한 인삼, 금은화, 독활 및 감초 추출물 400 mpk를 4주간 투여와 흡입을 동시에 실시하였으며, 최종 1주일간 2% OVA 용액 분무 후 메타콜린(MCH, methacholine)에 의한 기도저항성 수치를 측정하였다. 또한, 실시예 1에서 제조한 생약 추출물과 실시예 2에서 제조한 생약 추출물의 유산균 발효물 각각 300 mpk 씩을 이용하여 상기와 동일한 방법에 의해 메타콜린에 의한 기도저항성 수치를 측정하였다. 이를 위하여, 마취되지 않은 실험동물을 전신 챔버에 넣어놓은 상태에서 3.125, 6.25, 12.5, 25, 50 ㎎/㎖의 MCH를 흡입시킨 후, 플로우 트랜스듀서(flow transducer)에 의해 메타콜린 기도저항 수치를 측정하였다. 본 발명의 실험예에 있어서, 상기 생약 추출물의 유산균 발효물, 양성대조물질인 CsA 및 인삼, 금은화, 독활 및 감초 추출물은 증류수에 현탁하여 사용하였으며, 다양한 실험으로부터 얻은 결과는 평균±표준편차로 기록하였고, 유의성 검증은 Student's T-test 분석 방법을 이용하여 결정하였다.
그 결과, OVA만을 투여한 음성대조군의 50 ㎎/㎖ MCH에서 메타콜린에 의한 기도저항성 수치는 약 5.547±0.64로 정상군(0.517±0.03, wide type)의 메타콜린에 의한 기도저항성 수치에 비해 현저하게 증가하였고, 양성대조군인 CsA 10 mpk를 투여한 군은 50 ㎎/㎖의 MCH에서 메타콜린에 의한 기도저항성 수치가 2.480±0.377로 음성대조군에 비해 약 55.3% 억제되었다(p<0.001). 또한, 본 발명의 생약 추출물의 유산균 발효물을 400 mpk와 200 mpk 투여한 군은 메타콜린에 의한 기도저항성 수치가 각각 3.236±0.44과 3.633±0.56으로 나타나, 음성대조군에 비해 각각 41.7%와 34.5%의 기도저항성 억제 효과를 나타내었다(p<0.01, p<0.05). 이와 대조적으로, 인삼, 금은화, 독활 및 감초 추출물을 400 mpk 투여한 군의 경우에는 메타콜린에 의한 기도저항성 수치가 각각 4.48±1.02, 4.211±0.50, 4.56±0.50 및 5.173±0.67로 나타나, 음성대조군에 비해서는 다소 기도저항성이 억제 효과를 나타내었으나, 본 발명의 생약 추출물의 유산균 발효물을 사용한 경우에 비해서는 현저히 낮은 효과를 보여주었다(도 2). 또한, 실시예 1에서 제조한 생약 추출물과 실시예 2에서 제조한 생약 추출물의 유산균 발효물을 각각 300 mpk씩 투여한 경우의 메타콜린에 의한 기도저항성을 비교해본 결과, 본 발명의 생약 추출물과 생약 추출물의 유산균 발효물 모두 음성대조군에 비해 메타콜린에 의한 기도저항성이 억제되었으며, 특히 생약 추출물의 유산균 발효물을 이용할 경우에 그 효과가 보다 현저한 것으로 나타났다(표 3).
표 3
PBS 메타콜린 흡입량(단위; ㎎/㎖)
6.25 12.5 25 50
정상군 0.474±0.02 0.633±0.07 1.241±0.15 2.164±0.11 2.120±0.23
음성대조군 0.500±0.03 1.453±0.24 3.378±0.33 4.253±0.39 5.978±0.46
양성대조군 (CsA 10 mpk) 0.470±0.04 0.844±0.07 1.519±0.30 2.016±0.29 2.947±0.05
생약 추출물 0.502±0.03 0.844±0.05 1.802±0.24 3.817±0.28 4.059±0.37
유산균 발효물 0.653±0.04 0.756±0.16 0.967±0.05 2.519±0.50 3.432±0.40
실험예 3. 혈액분석(Hematology)
실험 종료 후 헤파린(20 i.U) 처리된 튜브형 주사기로 심장 혈액 0.5 ㎖를 채혈하였으며, 채혈된 혈액을 바이오톡스텍(주)(청주, 충청북도)에 의뢰하여 백혈구, 호중구, 림프구, 호산구 및 호염기성구의 총 세포수를 측정하였다. 백혈구 수는 자동혈구측정기(MS9-5, MELET SCHLOESING, France)로 피니오법(Fonio, A. (1912). Dtsch. Z. Chir., 117, 176.)에 준하여 Minos-ST로 측정하였다.
그 결과, 실험종료 후 백혈구 세포의 비율은 정상군에 비해 음성대조군이 2배 이상 증가하였고, 양성대조군인 CsA 투여군에서는 백혈구 세포의 비율이 음성대조군에 비해 정상군에 가깝게 감소하였으며(p<0.001), 생약 추출물의 유산균 발효물과 인삼, 금은화, 독활 및 감초 추출물 투여군에서의 백혈구 비율도 음성대조군에 비해 감소하였다(도 3). 또한, 호중구의 비율은 정상군에 비해 음성대조군이 증가하였고, 양성대조군인 CsA 투여군에서는 호중구의 비율이 음성대조군에 비해 정상군에 가깝게 감소하였으며(p<0.001), 생약 추출물의 유산균 발효물과 인삼, 금은화, 독활 및 감초 추출물 투여군에서의 호중구 비율 또한 음성대조군에 비해 감소하였다. 또한, 림프구의 비율은 정상군에 비해 음성대조군이 감소하였고, 양성대조군인 CsA 투여군에서는 림프구의 비율이 음성대조군에 비해 정상군에 가깝게 증가하였으며(p<0.001), 생약 추출물의 유산균 발효물 투여군과 인삼, 금은화, 독활 및 감초 추출물에서의 림프구 비율 또한 음성대조군에 비해 증가하였다(도 4). 또한, 호산구의 비율은 정상군에 비해 음성대조군이 증가하였고, 양성대조군인 CsA 투여군에서의 호산구 비율은 음성대조군에 비해 정상군에 가깝게 감소하였으며(p<0.005), 생약 추출물의 유산균 발효물 투여군과 인삼, 금은화, 독활 및 감초 추출물에서의 호산구 비율 또한 음성대조군에 비해 감소하였다. 또한, 호염기성구의 비율은 정상군에 비해 음성대조군이 현저하게 증가하였고, 양성대조군인 CsA 투여군에서의 호염기성구의 비율은 음성대조군에 비해 정상군에 가깝게 감소하였으며(p<0.05), 생약 추출물의 유산균 발효물 투여군과 인삼, 금은화, 독활 및 감초 추출물에서의 호염기성구의 비율도 음성대조군에 비해 감소하였다(도 5).
실험예 4. ELISA 측정
천식 생쥐에서 분리한 혈청, BALF, 비장세포 배양액에서 항-OVA IgE, IFN-γ, IL-4, IL-13, IL-17 수준을 측정하기 위하여 ELISA(enzyme-linked immuno-sorbent assay, Shibayagi, Japan) 분석을 수행하였다. 이를 위하여, 각 항체를 코팅 완충용액에 희석하여 마이크로웰에 코팅한 후 4℃에서 밤새 방치하였다. 각 웰을 3회 세척 완충용액으로 세척한 후, 혈청(10배 희석)을 100 ㎕씩 분주하였고, 1시간 동안 실온에서 방치한 후 2회 세척 완충용액으로 세척하였다. 이후, 항체 아비딘-HRP 접합체 100 ㎕를 처리하고 1시간 실온에서 방치한 후 다시 세척하였다. TMB 기질을 100 ㎕씩 분주하여 암소에서 30분간 방치한 후 50 ㎕의 스톱 용액을 처리하였고, ELISA 판독기로 450 ㎚ 파장에서 흡광도를 측정하였다.
그 결과, 정상군의 특정 항-OVA IgE 수준은 0.10±0.091(ng/㎖)이었으나, OVA 에어로졸을 4주간 분무한 음성대조군은 23.7±1.89(ng/㎖)로 정상군에 비해 200배 이상 증가하였고, 양성대조군인 CsA 10 mpk 투여군에서는 음성대조군에 비해 약 4배 이상 혈청내 특정 항-OVA IgE 수준이 감소하였다(p<0.01). 또한, 400 mpk 생약 추출물의 유산균 발효물 투여군에서는 음성대조군에 비해 특정 항-OVA IgE 수준이 약 49.1% 정도로 감소하였고(p<0.001), 200 mpk 생약 추출물의 유산균 발효물 투여군에서도 음성대조군에 비해 감소를 나타내었다. 한편, 인삼, 금은화, 독활 및 감초 추출물을 투여한 경우에도 특정 항-OVA IgE 수준이 감소하는 경향을 나타내었으나, 본 발명의 유산균 발효물 투여군에 비해서는 상대적으로 그 정도가 미약하였다(도 6). 폐세척액(BALF)을 분리하여 Th2 사이토카인인 IL-4, IL-13과 Th17 사이토카인인 IL-17의 BALF 내 수준을 측정한 결과, BALF 내 IL-4, IL-13, IL-17 사이토카인의 수준은 정상군에 비해 음성대조군이 2배 이상 증가하였고, 양성대조군인 CsA 10 mpk 투여군에서는 음성대조군에 비해 IL-4, IL-13, IL-17 사이토카인 모두에서 약 50% 이상 감소하였다(p<0.001, p<0.05). 또한, 400 mpk 생약 추출물의 유산균 발효물 투여군에서는 음성대조군에 비해 IL-4(p<0.05)와 IL-13(p<0.01) 사이토카인 수준 모두에서 약 35% 이상 감소하였고, 200 mpk 생약 추출물의 유산균 발효물 투여군에서도 음성대조군에 비해 감소하였다. 또한, 생약 추출물의 유산균 발효물 투여군에서의 IL-17 수준도 음성대조군에 비해 감소하였다. 한편, 인삼, 금은화, 독활 및 감초 추출물을 투여한 경우에도 BALF 내 IL-4, IL-13 및 IL-17 사이토카인의 수준이 감소하는 경향을 나타내었으나, 본 발명의 유산균 발효물 투여군에 비해서는 상대적으로 그 정도가 미약하였다(도 7 내지 도 9).
다음으로, 비장세포를 분리한 후, 24시간 전에 OVA 펩티드를 96-웰 플레이트에 코팅한 웰에서 48시간 배양하였고, 배양 상층액에서 Th1 사이토카인인 IFN-γ, Th2 사이토카인인 IL-4, IL-13과 Th17 사이토카인인 IL-17의 비장세포 배양액 내 수준을 측정하였다. 이때, 정상군의 경우에는 OVA 펩티드를 코팅하지 않았고, 음성대조군, 양성대조군, 유산균 발효물 투여군 및 인삼, 금은화, 독활 및 감초 추출물 투여군의 경우에는 OVA 펩티드 코팅을 수행하였다.
그 결과, IFN-γ 수준은 정상군, 음성대조군, 양성대조군인 CsA 투여군에서 모두 비슷하였으나, 생약 추출물의 유산균 발효물 투여군과 인삼, 금은화, 독활 및 감초 추출물 투여군에서는 IFN-γ 수준이 증가하였다(도 10). 또한, IL-4, IL-13, IL-17 사이토카인의 수준은 정상군에 비해 음성대조군이 현저하게 증가하였고, 양성대조군인 CsA 10 mpk 투여군에서는 음성대조군에 비해 IL-4, IL-13(p<0.01), IL-17(p<0.001) 사이토카인 모두에서 약 50% 이상 사이토카인 수준이 감소하였다. 또한, 400 mpk 생약 추출물의 유산균 발효물 투여군도 음성대조군에 비해 IL-4(p<0.05), IL-13, IL-17(p<0.01) 사이토카인 모두에서 약 50% 이상음성대조군에 비해 감소를 나타내었고, 200 mpk 생약 추출물의 유산균 발효물 투여군에서도 IL-7 사이토카인에서 음성대조군에 비해 감소를 나타내었다(P<0.01). 한편, 인삼, 금은화, 독활 및 감초 추출물을 투여한 경우에도 IL-4, IL-13 및 IL-17 사이토카인의 수준이 감소하는 경향을 나타내었으나, 본 발명의 유산균 발효물 투여군에 비해서는 상대적으로 그 정도가 미약하였다(도 11 내지 도 13).
실험예 5. 조직병리 검사
폐를 떼어낸 즉시 10% 포름알데히드 용액에 고정하였고, 세절하여 흐르는 물에 8시간 수세한 후, 에폭시에 포매하였다. 이것을 박편제작기(microtome)로 절편을 만든 후, 표준방법에 의해 헤마톡실린 및 에오신(H&E, Hematoxylin & Eosin) 염색, M-T 염색 및 고블릿(goblet) 세포 염색인 PAS 염색을 수행하였다. 상기 H&E 염색과 M-T 염색에서는 구조(structure) 부분의 기관세지(tracheole)와 폐포(alveolar), 세포 부분의 염증과 혈액 세포의 침윤 정도를 확인하였고, 고블릿 세포에 대한 PAS 염색에서는 콜라겐 침착 정도를 분석하였다.
그 결과, 음성대조군의 폐 조직에서는 기관세지와 폐포가 심하게 손상되었고, AHR(Airway hyperresponsiveness) 주변에 면역염증세포나 호산구세포, 혈액 등이 심하게 침윤되었으며, 신생혈관이 형성되어 있었다. 또한, AHR 주변에 콜라겐 침착이 증가되어 있었고, AHR의 두께도 정상군에 비해 크게 증가되어 AHR이 거의 막혀 있었으며, PAS(Periodic Acid-Schiff) 염색에서는 AHR 주변에 고블릿 세포(진한 핑크색)가 많이 형성되어 있었다. 또한, 양성대조군인 CsA 10 mpk 투여군에서는 음성대조군에 비해 AHR 주변에 염증세포의 침윤, AHR의 기관세지와 폐포의 손상, AHR 주변의 콜라겐 침착 및 고블릿 세포 침윤 등이 현저하게 억제되었다. 아울러, 생약 추출물의 유산균 발효물 투여군에서는 기도저항 수치나 폐조직 손상 정도가음성대조군에 비해 억제되었는데, 폐조직상에서 AHR 주변에 염증세포와 호산구 세포의 침윤이 감소되었고, AHR 주변의 기관세지와 폐포의 손상 및 콜라겐 침착도 음성대조군에 비해 억제되었으며, AHR 주변에 고블릿 세포도 음성대조군에 비해 현저하게 억제되었다. 한편, 인삼, 금은화, 독활 및 감초 추출물을 투여한 경우에는 음성대조군에 비하여 폐조직에서 기관세지와 폐포의 손상이 약간 감소되었고, AHR 주변에 면역염증세포나 호산구세포, 혈액 등이 침윤이 음성대조군과 차이가 없었으며, 신생혈관형성, M-T 염색에서 콜라겐 침착, 및 AHR 주변의 고블릿 세포도 음성대조군에 비하여 약간 감소하였다 (도 14).
제조예 1: 생약 추출물 또는 생약 추출물의 발효물을 포함하는 약학적 조성물의 제조
<1-1> 시럽제의 제조
생약 추출물 또는 생약 추출물의 발효물을 유효성분 2%(중량/부피)로 함유하는 시럽은 다음과 같은 방법으로 제조하였다. 먼저, 실시예 1 또는 실시예 2에서 제조한 생약 추출물 또는 생약 추출물의 발효물 분말, 사카린, 당을 온수 80 g에 용해시켰다. 상기 용액을 냉각시킨 후, 여기에 글리세린, 사카린, 향미료, 에탄올, 소르브산 및 증류수로 이루어진 용액을 제조하여 혼합하였다. 이 혼합물에 물을 첨가하여 100 ㎖가 되게 하였다.
상기 시럽제의 구성 성분은 다음과 같다.
생약 추출물 또는 생약 추출물의 발효물············ 2 g
사카린 ·························· 0.8 g
당···························· 25.4 g
글리세린 ························· 8.0 g
향미료·························· 0.04 g
에탄올 ·························· 4.0 g
소르브산 ························· 0.4 g
증류수··························· 정량
<1-2> 정제의 제조
유효성분 15 ㎎이 함유된 정제를 다음과 같은 방법으로 제조하였다.
실시예 1 또는 실시예 2에서 제조한 생약 추출물 또는 생약 추출물의 발효물 250 g을 락토오스 175.9 g, 감자전분 180 g 및 콜로이드성 규산 32 g과 혼합하였다. 상기 혼합물에 10% 젤라틴 용액을 첨가시킨 후, 분쇄해서 14 메쉬체를 통과시켰다. 이것을 건조시키고 여기에 감자전분 160 g, 활석 50 g 및 스테아린산 마그네슘 5 g을 첨가해서 얻은 혼합물을 정제로 만들었다.
생약 추출물 또는 생약 추출물의 발효물··········· 250 g
락토오스 ························ 175.9 g
감자전분 ························· 180 g
콜로이드성 규산 ······················ 32 g
10% 젤라틴 용액
감자전분 ························· 160 g
활석···························· 50 g
스테아르산 마그네슘····················· 5 g
제조예 2: 생약 추출물 또는 생약 추출물의 발효물을 함유하는 건강식품의 제조
<2-1> 식품의 제조
실시예 1 또는 실시예 2에서 제조한 생약 추출물 또는 생약 추출물의 발효물을 포함하는 식품들을 다음과 같이 제조하였다.
1. 조리용 양념의 제조
생약 추출물 또는 생약 추출물의 발효물 20∼95 중량%로 건강 증진용 조리용 양념을 제조하였다.
2. 토마토 케찹 및 소스의 제조
생약 추출물 또는 생약 추출물의 발효물 0.2∼1.0 중량%를 토마토 케찹 또는 소스에 첨가하여 건강 증진용 토마토 케찹 또는 소스를 제조하였다.
3. 밀가루 식품의 제조
생약 추출물 또는 생약 추출물의 발효물 0.5∼5.0 중량%를 밀가루에 첨가하고, 이 혼합물을 이용하여 빵, 케이크, 쿠키, 크래커 및 면류를 제조하여 건강 증진용 식품을 제조하였다.
4. 스프 및 육즙(gravies)의 제조
생약 추출물 또는 생약 추출물의 발효물 0.1∼5.0 중량%를 스프 및 육즙에 첨가하여 건강 증진용 육가공 제품, 면류의 수프 및 육즙을 제조하였다.
5. 그라운드 비프(ground beef)의 제조
생약 추출물 또는 생약 추출물의 발효물 10 중량%를 그라운드 비프에 첨가하여 건강 증진용 그라운드 비프를 제조하였다.
6. 유제품(dairy products)의 제조
생약 추출물 또는 생약 추출물의 발효물 5∼10 중량%를 우유에 첨가하고, 상기 우유를 이용하여 버터 및 아이스크림과 같은 다양한 유제품을 제조하였다.
7. 선식의 제조
현미, 보리, 찹쌀, 율무를 공지의 방법으로 알파화시켜 건조시킨 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60메쉬의 분말로 제조하였다. 검정콩, 검정깨, 들깨도 공지의 방법으로 쪄서 건조시킨 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60메쉬의 분말로 제조하였다. 생약 추출물 또는 생약 추출물의 발효물을 진공 농축기에서 감압·농축하고, 분무, 열풍건조기로 건조하여 얻은 건조물을 분쇄기로 입도 60메쉬로 분쇄하여 건조분말을 얻었다. 상기에서 제조한 곡물류, 종실류 및 생약 추출물 또는 생약 추출물의 발효물의 건조분말을 다음의 비율로 배합하여 제조하였다.
곡물류(현미 30 중량%, 율무 15 중량%, 보리 20 중량%),
종실류(들깨 7 중량%, 검정콩 8 중량%, 검정깨 7 중량%),
생약 추출물 또는 생약 추출물의 발효물의 건조분말(3 중량%),
영지(0.5 중량%),
지황(0.5 중량%)
<2-2> 음료의 제조
1. 탄산음료의 제조
설탕 5∼10%, 구연산 0.05∼0.3%, 카라멜 0.005∼0.02%, 비타민 C 0.1∼1%의 첨가물을 혼합하고, 여기에 79∼94%의 정제수를 섞어서 시럽을 만들고, 상기 시럽을 85∼98℃에서 20∼180초간 살균하여 냉각수와 1:4의 비율로 혼합한 다음 탄산가스를 0.5∼0.82%를 주입하여 생약 추출물 또는 생약 추출물의 발효물을 함유하는 탄산음료를 제조하였다.
2. 건강음료의 제조
액상과당(0.5%), 올리고당(2%), 설탕(2%), 식염(0.5%), 물(75%)과 같은 부재료와 생약 추출물 또는 생약 추출물의 발효물을 균질하게 배합하여 순간 살균을 한 후 이를 유리병, 페트병 등 소포장 용기에 포장하여 건강음료를 제조하였다.
3. 야채주스의 제조
생약 추출물 또는 생약 추출물의 발효물 5 g을 토마토 또는 당근주스 1,000 ㎖에 가하여 건강 증진용 야채주스를 제조하였다.
4. 과일주스의 제조
생약 추출물 또는 생약 추출물의 발효물 1 g을 사과 또는 포도주스 1,000 ㎖에 가하여 건강 증진용 과일주스를 제조하였다.

Claims (16)

  1. 고삼, 감초, 금은화, 당귀, 독활, 목향, 방풍, 산조인, 어성초, 연교, 우방자, 음양곽, 인삼, 자근, 지유, 천궁, 현삼 및 호장근을 포함하는 생약 혼합물에 물 또는 유기용매를 가한 후 추출하여 제조되는 생약 추출물 또는 이의 유산균 발효물을 유효성분으로 함유하는 호흡기 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  2. 청구항 1에 있어서,
    상기 생약 추출물은 고삼 10 중량부에 대하여 감초 2 내지 8 중량부, 금은화 2 내지 8 중량부, 당귀 2 내지 8 중량부, 독활 2 내지 8 중량부, 목향 2 내지 8 중량부, 방풍 2 내지 8 중량부, 산조인 2 내지 8 중량부, 어성초 5 내지 15 중량부, 연교 2 내지 8 중량부, 우방자 5 내지 15 중량부, 음양곽 2 내지 8 중량부, 인삼 5 내지 15 중량부, 자근 2 내지 8 중량부, 지유 2 내지 8 중량부, 천궁 2 내지 8 중량부, 현삼 5 내지 15 중량부 및 호장근 2 내지 8 중량부를 포함하는 생약 혼합물에 물을 가한 후 열수 추출하여 제조되는 약학적 조성물.
  3. 청구항 1에 있어서,
    상기 유기용매는 C1 내지 C4의 알코올, 아세톤 및 이의 수용액으로 구성된 군으로부터 선택되는 약학적 조성물.
  4. 청구항 1에 있어서,
    상기 유산균은 락토바실러스, 비피도박테리움, 스트렙토코커스, 루코노스톡, 페디오코카스 및 락토코커스 속의 미생물로 구성된 군으로부터 선택되는 약학적 조성물.
  5. 청구항 4에 있어서,
    상기 유산균은 락토바실러스 애시도필루스 종의 미생물인 약학적 조성물.
  6. 청구항 1에 있어서,
    상기 유산균은 시료 중량의 0.5 내지 5 중량%의 양으로 접종하는 약학적 조성물.
  7. 청구항 1에 있어서,
    상기 유산균은 20 내지 40℃의 온도에서 24 내지 52시간 동안 발효시키는 약학적 조성물.
  8. 청구항 1 내지 청구항 7 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 호흡기 질환은 천식, 기관지 확장증, 만성 폐쇄성 폐질환 및 만성기침으로 구성된 군으로부터 선택되는 약학적 조성물.
  9. 고삼, 감초, 금은화, 당귀, 독활, 목향, 방풍, 산조인, 어성초, 연교, 우방자, 음양곽, 인삼, 자근, 지유, 천궁, 현삼 및 호장근을 포함하는 생약 혼합물에 물 또는 유기용매를 가한 후 추출하여 제조되는 생약 추출물 또는 이의 유산균 발효물을 유효성분으로 함유하는 호흡기 질환의 예방 또는 개선용 건강식품.
  10. 청구항 9에 있어서,
    상기 생약 추출물은 고삼 10 중량부에 대하여 감초 2 내지 8 중량부, 금은화 2 내지 8 중량부, 당귀 2 내지 8 중량부, 독활 2 내지 8 중량부, 목향 2 내지 8 중량부, 방풍 2 내지 8 중량부, 산조인 2 내지 8 중량부, 어성초 5 내지 15 중량부, 연교 2 내지 8 중량부, 우방자 5 내지 15 중량부, 음양곽 2 내지 8 중량부, 인삼 5 내지 15 중량부, 자근 2 내지 8 중량부, 지유 2 내지 8 중량부, 천궁 2 내지 8 중량부, 현삼 5 내지 15 중량부 및 호장근 2 내지 8 중량부를 포함하는 생약 혼합물에 물을 가한 후 열수 추출하여 제조되는 건강식품.
  11. 청구항 9에 있어서,
    상기 유기용매는 C1 내지 C4의 알코올, 아세톤 및 이의 수용액으로 구성된 군으로부터 선택되는 건강식품.
  12. 청구항 9에 있어서,
    상기 유산균은 락토바실러스, 비피도박테리움, 스트렙토코커스, 루코노스톡, 페디오코카스 및 락토코커스 속의 미생물로 구성된 군으로부터 선택되는 건강식품.
  13. 청구항 12에 있어서,
    상기 유산균은 락토바실러스 애시도필루스 종의 미생물인 건강식품.
  14. 청구항 9에 있어서,
    상기 유산균은 시료 중량의 0.5 내지 5 중량%의 양으로 접종하는 건강식품.
  15. 청구항 9에 있어서,
    상기 유산균은 20 내지 40℃의 온도에서 24 내지 52시간 동안 발효시키는 건강식품.
  16. 청구항 9 내지 청구항 15 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 호흡기 질환은 천식, 기관지 확장증, 만성 폐쇄성 폐질환 및 만성기침으로 구성된 군으로부터 선택되는 건강식품.
PCT/KR2012/004233 2011-05-30 2012-05-30 생약 추출물 또는 이의 유산균 발효물을 포함하는 호흡기 질환의 예방 또는 치료용 조성물 Ceased WO2012165843A2 (ko)

Priority Applications (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP12792329.0A EP2716295B1 (en) 2011-05-30 2012-05-30 Composition comprising herbal extracts or fermented products thereof having lactic acid bacteria for preventing or treating respiratory diseases
US14/122,950 US9125932B2 (en) 2011-05-30 2012-05-30 Composition comprising herbal extracts or fermented products thereof having lactic acid bacteria for preventing or treating respiratory diseases

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR20110051653A KR20120133133A (ko) 2011-05-30 2011-05-30 생약 추출물 또는 이의 유산균 발효물을 포함하는 호흡기 질환의 예방 또는 치료용 조성물
KR10-2011-0051653 2011-05-30

Publications (2)

Publication Number Publication Date
WO2012165843A2 true WO2012165843A2 (ko) 2012-12-06
WO2012165843A3 WO2012165843A3 (ko) 2013-03-28

Family

ID=47260066

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/KR2012/004233 Ceased WO2012165843A2 (ko) 2011-05-30 2012-05-30 생약 추출물 또는 이의 유산균 발효물을 포함하는 호흡기 질환의 예방 또는 치료용 조성물

Country Status (4)

Country Link
US (1) US9125932B2 (ko)
EP (1) EP2716295B1 (ko)
KR (1) KR20120133133A (ko)
WO (1) WO2012165843A2 (ko)

Cited By (26)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103239532A (zh) * 2013-04-24 2013-08-14 王永红 一种治疗慢性咽炎的药物及其制备方法
CN107349303A (zh) * 2017-09-01 2017-11-17 上海中医药大学附属岳阳中西医结合医院 一种治疗慢性胸痛的中药组合物及其应用
US10322151B2 (en) 2015-06-15 2019-06-18 4D Pharma Research Limited Compositions comprising bacterial strains
US10391128B2 (en) 2015-11-23 2019-08-27 4D Pharma Research Limited Compositions comprising bacterial strains
US10391130B2 (en) 2015-06-15 2019-08-27 4D Pharma Research Limited Compositions comprising bacterial strains
US10456444B2 (en) 2014-12-23 2019-10-29 4D Pharma Research Limited Pirin polypeptide and immune modulation
US10471108B2 (en) 2015-11-20 2019-11-12 4D Pharma Research Limited Compositions comprising bacterial strains
US10485830B2 (en) 2016-12-12 2019-11-26 4D Pharma Plc Compositions comprising bacterial strains
US10493112B2 (en) 2015-06-15 2019-12-03 4D Pharma Research Limited Compositions comprising bacterial strains
US10500237B2 (en) 2015-06-15 2019-12-10 4D Pharma Research Limited Compositions comprising bacterial strains
US10583158B2 (en) 2016-03-04 2020-03-10 4D Pharma Plc Compositions comprising bacterial strains
US10610548B2 (en) 2016-07-13 2020-04-07 4D Pharma Plc Compositions comprising bacterial strains
US10610550B2 (en) 2015-11-20 2020-04-07 4D Pharma Research Limited Compositions comprising bacterial strains
US10736926B2 (en) 2015-06-15 2020-08-11 4D Pharma Research Limited Compositions comprising bacterial strains
US10744166B2 (en) 2015-11-23 2020-08-18 4D Pharma Research Limited Compositions comprising bacterial strains
US10851137B2 (en) 2013-04-10 2020-12-01 4D Pharma Research Limited Polypeptide and immune modulation
US10987387B2 (en) 2017-05-24 2021-04-27 4D Pharma Research Limited Compositions comprising bacterial strain
US11007233B2 (en) 2017-06-14 2021-05-18 4D Pharma Research Limited Compositions comprising a bacterial strain of the genus Megasphera and uses thereof
US11013773B2 (en) 2011-07-14 2021-05-25 4D Pharma Research Limited Lactic acid bacterial strains
US11123379B2 (en) 2017-06-14 2021-09-21 4D Pharma Research Limited Compositions comprising bacterial strains
US11123378B2 (en) 2017-05-22 2021-09-21 4D Pharma Research Limited Compositions comprising bacterial strains
WO2021236023A1 (en) * 2020-05-18 2021-11-25 Rincome Udom Fermented - concentrated extraction method of houttuynia cordata for medical using
US11224620B2 (en) 2016-07-13 2022-01-18 4D Pharma Plc Compositions comprising bacterial strains
US11266698B2 (en) 2011-10-07 2022-03-08 4D Pharma Research Limited Bacterium for use as a probiotic for nutritional and medical applications
US11723933B2 (en) 2014-12-23 2023-08-15 Cj Bioscience, Inc. Composition of bacteroides thetaiotaomicron for immune modulation
US12048720B2 (en) 2017-06-14 2024-07-30 Cj Bioscience, Inc. Compositions comprising bacterial strains

Families Citing this family (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103070928B (zh) * 2013-01-05 2014-10-08 山西农业大学 兽用清热解毒中药巴布剂及其制备方法
KR101662222B1 (ko) 2014-12-04 2016-10-04 최철원 한약재를 이용한 호흡기 질환 개선용 조성물
CN105920138B8 (zh) * 2016-05-28 2024-06-28 楚雄彝族自治州彝族医药研究所 一种辅助治疗艾滋病的药物及其制备方法
RU2634570C1 (ru) * 2016-07-19 2017-10-31 Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт общей и экспериментальной биологии Сибирского отделения Российской академии наук Способ получения лекарственного средства, обладающего противовоспалительным действием
KR101874595B1 (ko) * 2016-12-09 2018-07-05 한국한의학연구원 유산균 발효 복합생약추출물을 유효성분으로 하는 항알레르기 조성물
KR20200116094A (ko) * 2017-12-28 2020-10-08 파비안 하바스 오염과 관련된 손상의 치료 및 예방을 위한 토목향(Inula helenium) 추출물
CN108126099A (zh) * 2018-01-30 2018-06-08 绵阳师范学院 含麦冬的原料药发酵组合物及其制备方法和用途
KR102058618B1 (ko) * 2018-08-24 2019-12-23 주식회사 성균바이오텍 식물 추출물을 유효성분으로 하는 미세먼지에 의해 유도된 호흡기질환 예방 또는 치료용 조성물
CN110079556B (zh) * 2019-04-24 2023-01-06 上海交通大学 一种黑大麦发酵物在减轻肺损伤及肠道菌群紊乱中的应用
KR102485608B1 (ko) * 2019-06-28 2023-01-09 주식회사 엘지생활건강 노다케닌 또는 노다케네틴을 포함한 인플루엔자 바이러스 억제용 조성물
KR102135879B1 (ko) * 2020-02-13 2020-07-21 주식회사 케이티앤지 신규 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum) KC3 균주를 이용한 면역장애, 호흡기 염증 질환, 알레르기 및 천식의 예방 또는 치료용 조성물 및 이의 용도
KR102442455B1 (ko) * 2020-03-12 2022-09-27 천지인초 주식회사 천연물을 이용한 호흡기 질환 개선용 식품 조성물 및 그 제조방법
CN111728223A (zh) * 2020-07-07 2020-10-02 西安因子元素科技有限公司 一种发酵生产复合细胞因子元素的方法
KR102223717B1 (ko) * 2021-01-08 2021-03-08 (주)오성내츄럴바이오 만성폐쇄성 페질환 완화 또는 치료용 생약 조성물, 이를 포함하는 한방 약침액 및 이를 포함하는 주사제
CN115088834B (zh) * 2022-06-06 2024-04-26 广东金骏康生物技术有限公司 一种改善睡眠的槐米粉及其制备方法与应用
CN117959374B (zh) * 2024-03-26 2024-07-19 广州中医药大学(广州中医药研究院) 一种药食同源中药保健灸熏组合物的制备方法及其应用

Family Cites Families (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1820538A4 (en) * 2004-09-07 2012-06-20 Hakuto Kk COSMETICS AND MANUFACTURING METHOD THEREFOR
KR100825432B1 (ko) 2005-06-14 2008-04-25 영남대학교 산학협력단 독활 추출물을 포함하는 염증 및 알러지 질환의 예방 또는치료용 조성물
US20070036873A1 (en) 2005-07-27 2007-02-15 Shibnath Ghosal Method of treatment or management of stress
AR060847A1 (es) 2007-05-03 2008-07-16 Spannagel Lucia Antonia Formulacion a base de calendula, aloe y centella.
KR100962587B1 (ko) 2007-10-02 2010-06-11 동국대학교 산학협력단 천연 식물소재 및 한약재의 발효방법, 상기 방법에 의해서제조된 발효물 및 이를 함유하는 약학 조성물, 화장품조성물 및 식품 조성물
KR100880915B1 (ko) * 2007-11-16 2009-02-04 대한민국(관리부서:농촌진흥청) 기능성 조성물의 제조방법 및 이를 포함하는 사료 첨가제
KR101483440B1 (ko) * 2008-05-02 2015-01-19 (주)아모레퍼시픽 포제를 활용한 약용식물 추출물 및 이를 함유하는 피부외용제 조성물
KR101103393B1 (ko) * 2008-11-17 2012-01-05 안국약품 주식회사 생약 추출물을 함유하는 호흡기질환 예방 및 치료용 조성물
AU2009322474A1 (en) * 2008-12-01 2011-07-21 Lifespan Extension Llc Methods and compositions for altering health, wellbeing, and lifespan
KR101032066B1 (ko) 2009-10-08 2011-05-02 한국생명공학연구원 호장근 추출물, 이의 분획물 또는 스틸벤계 화합물을 포함하는 감기의 예방 및 치료용 약학 조성물
KR101226758B1 (ko) * 2010-09-28 2013-01-25 한국 한의학 연구원 생약 추출물 또는 이의 유산균 발효물을 포함하는 아토피 피부염의 예방 또는 치료용 조성물

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
FONIO, A., DTSCH. Z. CHIR., 1912, pages 117,176

Cited By (47)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US11013773B2 (en) 2011-07-14 2021-05-25 4D Pharma Research Limited Lactic acid bacterial strains
US11266698B2 (en) 2011-10-07 2022-03-08 4D Pharma Research Limited Bacterium for use as a probiotic for nutritional and medical applications
US11414463B2 (en) 2013-04-10 2022-08-16 4D Pharma Research Limited Polypeptide and immune modulation
US10851137B2 (en) 2013-04-10 2020-12-01 4D Pharma Research Limited Polypeptide and immune modulation
CN103239532A (zh) * 2013-04-24 2013-08-14 王永红 一种治疗慢性咽炎的药物及其制备方法
US11723933B2 (en) 2014-12-23 2023-08-15 Cj Bioscience, Inc. Composition of bacteroides thetaiotaomicron for immune modulation
US10973872B2 (en) 2014-12-23 2021-04-13 4D Pharma Research Limited Pirin polypeptide and immune modulation
US10456444B2 (en) 2014-12-23 2019-10-29 4D Pharma Research Limited Pirin polypeptide and immune modulation
US10736926B2 (en) 2015-06-15 2020-08-11 4D Pharma Research Limited Compositions comprising bacterial strains
US10864236B2 (en) 2015-06-15 2020-12-15 4D Pharma Research Limited Compositions comprising bacterial strains
US10493112B2 (en) 2015-06-15 2019-12-03 4D Pharma Research Limited Compositions comprising bacterial strains
US11331352B2 (en) 2015-06-15 2022-05-17 4D Pharma Research Limited Compositions comprising bacterial strains
US10322151B2 (en) 2015-06-15 2019-06-18 4D Pharma Research Limited Compositions comprising bacterial strains
US11273185B2 (en) 2015-06-15 2022-03-15 4D Pharma Research Limited Compositions comprising bacterial strains
US10500237B2 (en) 2015-06-15 2019-12-10 4D Pharma Research Limited Compositions comprising bacterial strains
US11389493B2 (en) 2015-06-15 2022-07-19 4D Pharma Research Limited Compositions comprising bacterial strains
US10391130B2 (en) 2015-06-15 2019-08-27 4D Pharma Research Limited Compositions comprising bacterial strains
US11040075B2 (en) 2015-06-15 2021-06-22 4D Pharma Research Limited Compositions comprising bacterial strains
US10744167B2 (en) 2015-06-15 2020-08-18 4D Pharma Research Limited Compositions comprising bacterial strains
US10780134B2 (en) 2015-06-15 2020-09-22 4D Pharma Research Limited Compositions comprising bacterial strains
US11433106B2 (en) 2015-06-15 2022-09-06 4D Pharma Research Limited Compositions comprising bacterial strains
US10610550B2 (en) 2015-11-20 2020-04-07 4D Pharma Research Limited Compositions comprising bacterial strains
US10471108B2 (en) 2015-11-20 2019-11-12 4D Pharma Research Limited Compositions comprising bacterial strains
US11058732B2 (en) 2015-11-20 2021-07-13 4D Pharma Research Limited Compositions comprising bacterial strains
US10744166B2 (en) 2015-11-23 2020-08-18 4D Pharma Research Limited Compositions comprising bacterial strains
US10391128B2 (en) 2015-11-23 2019-08-27 4D Pharma Research Limited Compositions comprising bacterial strains
US10583158B2 (en) 2016-03-04 2020-03-10 4D Pharma Plc Compositions comprising bacterial strains
US10610549B2 (en) 2016-07-13 2020-04-07 4D Pharma Plc Composition comprising bacterial strains
US10967010B2 (en) 2016-07-13 2021-04-06 4D Pharma Plc Compositions comprising bacterial strains
US10960031B2 (en) 2016-07-13 2021-03-30 4D Pharma Plc Compositions comprising bacterial strains
US11224620B2 (en) 2016-07-13 2022-01-18 4D Pharma Plc Compositions comprising bacterial strains
US10610548B2 (en) 2016-07-13 2020-04-07 4D Pharma Plc Compositions comprising bacterial strains
US10898526B2 (en) 2016-12-12 2021-01-26 4D Pharma Plc Compositions comprising bacterial strains
US10543238B2 (en) 2016-12-12 2020-01-28 4D Pharma Plc Compositions comprising bacterial strains
US10485830B2 (en) 2016-12-12 2019-11-26 4D Pharma Plc Compositions comprising bacterial strains
US11382936B2 (en) 2017-05-22 2022-07-12 4D Pharma Research Limited Compositions comprising bacterial strains
US11376284B2 (en) 2017-05-22 2022-07-05 4D Pharma Research Limited Compositions comprising bacterial strains
US11123378B2 (en) 2017-05-22 2021-09-21 4D Pharma Research Limited Compositions comprising bacterial strains
US10987387B2 (en) 2017-05-24 2021-04-27 4D Pharma Research Limited Compositions comprising bacterial strain
US11007233B2 (en) 2017-06-14 2021-05-18 4D Pharma Research Limited Compositions comprising a bacterial strain of the genus Megasphera and uses thereof
US11123379B2 (en) 2017-06-14 2021-09-21 4D Pharma Research Limited Compositions comprising bacterial strains
US11660319B2 (en) 2017-06-14 2023-05-30 4D Pharma Research Limited Compositions comprising bacterial strains
US11779613B2 (en) 2017-06-14 2023-10-10 Cj Bioscience, Inc. Compositions comprising a bacterial strain of the genus Megasphera and uses thereof
US12048720B2 (en) 2017-06-14 2024-07-30 Cj Bioscience, Inc. Compositions comprising bacterial strains
CN107349303B (zh) * 2017-09-01 2020-05-05 上海中医药大学附属岳阳中西医结合医院 一种治疗慢性胸痛的中药组合物及其应用
CN107349303A (zh) * 2017-09-01 2017-11-17 上海中医药大学附属岳阳中西医结合医院 一种治疗慢性胸痛的中药组合物及其应用
WO2021236023A1 (en) * 2020-05-18 2021-11-25 Rincome Udom Fermented - concentrated extraction method of houttuynia cordata for medical using

Also Published As

Publication number Publication date
US9125932B2 (en) 2015-09-08
EP2716295A2 (en) 2014-04-09
EP2716295B1 (en) 2018-01-10
EP2716295A4 (en) 2015-03-04
US20140140984A1 (en) 2014-05-22
WO2012165843A3 (ko) 2013-03-28
KR20120133133A (ko) 2012-12-10

Similar Documents

Publication Publication Date Title
WO2012165843A2 (ko) 생약 추출물 또는 이의 유산균 발효물을 포함하는 호흡기 질환의 예방 또는 치료용 조성물
KR101226758B1 (ko) 생약 추출물 또는 이의 유산균 발효물을 포함하는 아토피 피부염의 예방 또는 치료용 조성물
KR20160114811A (ko) 상백피, 오미자, 및 천문동으로 구성된 군으로부터 선택된 2개 이상의 조합 추출물을 유효성분으로 함유하는 염증, 알레르기 및 천식 질환의 예방 및 치료용 조성물
KR101756020B1 (ko) 물오리나무 발효추출물을 포함하는 아토피피부염 예방, 개선, 또는 치료용 조성물
WO2024167307A1 (ko) 비피도박테리움 롱검을 유효성분으로 포함하는 알레르기 질환의 예방 또는 치료용 조성물
WO2019124863A1 (ko) 오미자 잎 추출물을 유효성분으로 포함하는 아토피 피부염의 예방, 개선 또는 치료용 조성물
WO2018105926A1 (ko) 유산균 발효 복합생약추출물을 유효성분으로 하는 항알레르기 조성물
KR101770766B1 (ko) 익모초 특정 추출물을 유효성분으로 포함하는 호흡기염증 질환의 예방 또는 치료용 조성물
WO2022131639A1 (ko) 노다케닌 또는 노다케네틴을 포함하는 식물의 추출물의 발효물, 또는 이들의 분획물을 포함하는 인플루엔자 바이러스 억제용 조성물
KR20190043996A (ko) 국화 추출물 및 황금 추출물을 유효성분으로 함유하는 호흡기 질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물
KR100860080B1 (ko) 항염, 항알레르기 및 항천식 활성을 갖는 꼬리풀속 식물추출물을 함유하는 약학조성물
WO2020262799A1 (ko) 노다케닌 및/또는 노다케네틴을 포함한 인플루엔자 바이러스 억제용 조성물
KR101624293B1 (ko) 동과자 추출물 또는 동과자 발효 추출물을 유효성분으로 포함하는 면역증강용 조성물
KR101081460B1 (ko) 항알러지, 항염증 또는 항천식 활성을 가진 류코노스톡 메센테로이드 ｅ―１을 함유하는 조성물
KR20160021038A (ko) 측백엽 특정 추출물 또는 이로부터 분리된 화합물을 유효성분으로 포함하는 호흡기염증 질환의 예방 또는 치료용 조성물
KR102487701B1 (ko) 기관지염 또는 호흡기 질환 개선효능을 갖는 병풀 추출물 및 이를 유효성분으로 포함하는 조성물 및 이의 용도
KR100685285B1 (ko) 항알러지, 항염증 및 항천식 활성을 갖는 캐피어 분말또는 그 추출물을 함유하는 조성물
WO2024122660A1 (ko) 혼합 생약 추출물을 유효성분으로 함유하는 면역 증강용 조성물
KR102361793B1 (ko) 블루베리 및 흑미 추출물의 발효물을 포함하는 염증성 장질환의 예방 또는 치료용 조성물
KR101470347B1 (ko) 황금엑스 발효물을 함유한 간손상 보호용 조성물
WO2022154448A1 (ko) 천연 복합 추출물을 유효성분으로 포함하는 면역조절 또는 면역증강용 조성물
WO2021235637A1 (ko) 호흡기 질환의 예방, 개선 또는 치료용 조성물
WO2020027574A1 (ko) 나한과 추출물을 유효성분으로 함유하는 호흡기 질환의 예방, 개선 또는 치료용 조성물
KR102757482B1 (ko) 락토바실러스 브레비스 ku15151 균주를 포함하는 천식 예방 또는 치료용 조성물
KR102382067B1 (ko) 형개와 익지인의 복합 추출물을 유효성분으로 함유하는 아토피성 피부염 치료용 조성물

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 12792329

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A2

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 14122950

Country of ref document: US