WO2013150253A1 - Nouveaux composés oligosaccharides et leur utilisation cosmétique - Google Patents

Nouveaux composés oligosaccharides et leur utilisation cosmétique Download PDF

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WO2013150253A1
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capillary
daltons
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Laurent Rios
Cédric DELATTRE
Laurent CHAISEMARTIN
Jean-Yves Berthon
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Greentech SA
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Definitions

  • the present invention relates to novel oligosaccharide compounds extracted from the green alga Ulva Lactuca, a cosmetic composition comprising one or more of these compounds and their pharmaceutically acceptable salts, and the use of these compounds or this composition to maintain the integrity and concentration of the constituent molecules of the extracellular matrix.
  • Ulva Lactuca or sea lettuce
  • Ulva Lactuca is a marine green, nitrophilous algae of the family Ulvaceae and the order of Ulvales.
  • the first family consists of a sulfated rhamnoglycuronan referred to as ulvan (Ray and Lahaye, 1995). It is soluble in water and differs from other polysaccharides contained in the wall of the seaweed by its content of rhamnose (30 to 50%), glucuronic acid (10 to 20%) and sulfate (16 to 19%) ).
  • the second family consists of? - (1,4) -D-xyloglucans and? - (1,4) -D-glucuronans.
  • the third family consists of amorphous cellulose.
  • the patent application WO-A-2008/1461 16 describes the use of Ulva Lactuca or extracts of this alga for the preparation of cosmetic compositions having a triple action on the dermis: stimulation of the proliferation of fibroblasts, stimulation of elastin production and stimulation of the synthesis of type I collagen. Nevertheless, no indication is provided in this patent application concerning the extraction process used to prepare the extract of Ulva Lactuca, so that it is impossible to determine the exact composition. On the other hand, the Ulva lactuca extract only acts on the proliferation of fibroblasts. No stimulation of collagen and hyaluronic acid synthesis is associated with the use of Ulva lactuca extract alone.
  • the skin is constantly subject to many intrinsic and / or extrinsic stresses such as UV, pollution, heat, cold, various pathologies, injuries, inflammation, aging or hormonal activity. .
  • the skin ends up being damaged by the succession of these aggressions, which results in particular in an alteration of the cutaneous architecture leading to an alteration of structures and cutaneous functions.
  • the main factors responsible for this disorganization of the extracellular matrix are thus the decrease of the biosynthesis and / or the increase of the degradation of these constituent molecules but also the bad disposition of these compounds within this matrix.
  • the oligosaccharides thus prepared make it possible to induce the biosynthesis and / or the organization of the constituent molecules of the extracellular matrix, and / or to reduce their degradation, thus allowing the introduction and maintaining the architecture of the extracellular matrix and thus preventing and / or treating the signs of intrinsic and / or extrinsic cutaneous and / or capillary aging, in particular the alteration of cutaneous and / or capillary structures and functions, alteration of tissue regeneration, tissue relaxation, alteration of cutaneous and / or capillary microcirculation, alteration of cutaneous detoxification, loss of uniformity, brightness and shine of hue (dermal) and / or capillary), the alteration of the cutaneous surface texture (appearance of wrinkles, puffiness, dry skin, etc.) and / or capillary (brittle hair), and the alteration of the cutaneous and / or capillary architecture (inducing in particular the hair loss).
  • the subject of the present invention is therefore an oligosaccharide of
  • R 1 to R 4 are independently selected from each other and independently for each rhamnose unit and / or glycuronic acid as hydroxy, alkyloxy, carboxy, alkoxycarbonyl, acyloxy, sulfate or phosphate; or an -OCH 2 R a group , wherein R a is hydroxy, alkyloxy, acyloxy, sulfate or phosphate;
  • n is an integer less than or equal to 50 and is chosen so that the molecular weight is greater than or equal to 5,000 Daltons and less than or equal to 100,000 Daltons;
  • the oligosaccharides according to the present invention have never been described before. These compounds make it possible to maintain the integrity and concentration of the constituent molecules of the extracellular matrix by promoting their synthesis and their organization, and by limiting their degradation. These compounds can therefore be used to induce the biosynthesis and / or the organization of the constituent molecules of the extracellular matrix, and / or to reduce their degradation, thus allowing the establishment and maintenance of the architecture of the extracellular matrix and thus to prevent and / or treat the signs of intrinsic and / or extrinsic cutaneous and / or capillary aging, in particular the alteration of cutaneous and / or capillary structures and functions, the alteration of the tissue regeneration, the tissue relaxation, alteration of cutaneous and / or capillary microcirculation, alteration of cutaneous detoxification, loss of uniformity, brightness and shine of the dye (cutaneous and / or capillary), alteration of the cutaneous surface texture (appearance of wrinkles, puffiness, dry skin, etc.) and / or capillary (brittle hair),
  • molecular weight refers indifferently to the molecule alone or to the mixture of molecules and then represents in this case a mean value
  • Glycuronic acid means glucuronic acid or iduronic acid (which is found in a small proportion);
  • pharmaceutically acceptable salt means any addition salt with a mineral or organic acid by the action of such an acid in an organic or aqueous solvent such as an alcohol, a ketone, an ether or a solvent chlorine, which is acceptable from a pharmaceutical point of view.
  • salts By way of example of such salts, mention may be made of the following salts: benzenesulphonate, hydrobromide, hydrochloride, citrate, ethanesulphonate, fumarate, gluconate, iodate, isethionate, maleate, methanesulphonate, methylene-bis-b-oxynaphthoate, nitrate, oxalate, palmoate, phosphate, salicylate, sulfate, tartrate, theophyllinacetate and p-toluenesulfonate;
  • an alkyl group is understood to mean a saturated, monovalent, linear or branched hydrocarbon-based chain containing from 1 to 6 carbon atoms, such as the following groups: methyl, ethyl, n-propyl, iso-propyl, n-butyl, sec-butyl, iso-butyl, tert-butyl, pentyl, hexyl;
  • alkyl retains the same definition when it includes the name of a group, for example in the alkyloxy group.
  • alkyloxy groups there may be mentioned methoxy, ethoxy, n-propoxy, iso-propoxy, n-butoxy, iso-butoxy, sec-butoxy, tert-butoxy, pentyloxy;
  • a "concentration under reduced pressure” step means a step for evaporating the water contained in an extract at a pressure of 50 to 100 mmHg and at a temperature ranging from 40 to 50 ° C.
  • the subject of the present invention is an oligosaccharide of general formula (I) as defined above in which the substituents R 1 to R 4 are chosen independently of each other and independently for each rhamnose unit and / or glycuronic acid as being a hydroxy, alkyloxy, acyloxy, sulfate or phosphate group; or a group -OCH 2 R a , R a being as defined above.
  • the subject of the present invention is an oligosaccharide of general formula (I) as defined above in which the substituents R 1 to R 4 are chosen independently of each other and independently for each rhamnose unit and or glycuronic acid as a hydroxy group or a sulfate group.
  • the oligosaccharides of general formula (I) as defined above have a molecular weight greater than or equal to 5,000 Daltons and less than or equal to 100,000 Daltons.
  • the subject of the present invention is an oligosaccharide of general formula (I) as defined above in which n is chosen so that the molecular weight is greater than or equal to 5,000 Daltons and less than or equal to 50,000 Daltons, preferably greater than or equal to 5,000 Daltons and less than or equal to 30,000 Daltons.
  • n is chosen so that the molecular weight is greater than or equal to 5,000 Daltons and less than or equal to 25,000 Daltons, preferably greater than or equal to 5,000 Daltons and less than or equal to 15,000 Daltons.
  • the oligosaccharides according to the present invention are prepared by radical degradation of polysaccharides extracted with Ulva Lactuca.
  • the subject of the present invention is therefore a process for preparing oligosaccharides as defined above, comprising the following steps:
  • the low molecular weight molecules can be purified by:
  • the degradation method according to the present invention makes it possible to obtain oligosaccharides of low molecular weight with a high production yield, of the order of 25% relative to the dry weight of Ulva Lactuca seaweed powder used.
  • Step a) of the degradation process according to the present invention consists of the dispersion of the Ulva lactuca seaweed powder in water.
  • the dissolution is carried out with stirring at a speed ranging from 500 to 2500 rpm, preferably from 1000 to 2000 rpm.
  • the dissolution is carried out at a temperature of from 20 ° C to 100 ° C, preferably at a temperature of from 40 ° C to 90 ° C, more preferably at a temperature of from 50 to 80 ° C.
  • the pH of the solution can vary from 4 to 8, preferably the pH of the solution varies from 5 to 7.5.
  • any means known to those skilled in the art can be used.
  • 5N sodium hydroxide or 5N potassium hydroxide will be added.
  • the concentration of polysaccharides in the water after dissolution may vary according to the needs of those skilled in the art and the equipment used.
  • the polysaccharide concentration may be from 1 to 1000 g / l, more preferably from 1 to 100 g / l, most preferably from 10 to 50 g / l.
  • Step b) of the degradation process according to the present invention consists of the gradual addition of hydrogen peroxide.
  • the weight ratio between the Ulva lactuca extract and the added hydrogen peroxide is 1/1.
  • the added hydrogen peroxide will preferably be selected as 35% H 2 0 2 .
  • the addition of hydrogen peroxide is done gradually.
  • the addition of hydrogen peroxide will be continuous over a period of from 30 minutes to 5 hours.
  • the addition of hydrogen peroxide is carried out at a temperature ranging from 20 ° C. to 100 ° C., preferably at a temperature ranging from 40 ° C. to 90 ° C., more preferably at a temperature ranging from 50 ° to 80 ° C. ° C.
  • the pH of the solution can vary from 4 to 8, preferably the pH of the solution varies from 5 to 7.5.
  • any means known to those skilled in the art can be used.
  • 5N sodium hydroxide or 5N potassium hydroxide will be added.
  • Step c) of the degradation process according to the present invention consists of stirring the mixture extracted from Ulva / actwca / hydrogen peroxide.
  • the agitation is carried out at a speed ranging from 100 to 2000 rpm, more preferably at a speed ranging from 300 to 1000 rpm.
  • agitation will be maintained for a period of from 30 minutes to 5 hours, more preferably for a period of from 30 minutes to 3 hours, most preferably for a period of from 1 hour to 2 hours.
  • the stirring is carried out at a temperature of from 20 ° C to 100 ° C, preferably at a temperature of from 40 ° C to 90 ° C, more preferably at a temperature of from 50 to 80 ° C.
  • the pH of the solution can vary from 4 to 8, preferably the pH of the solution varies from 5 to 7.5.
  • any means known to those skilled in the art can be used.
  • 5N sodium hydroxide or 5N potassium hydroxide will be added.
  • Step d) of the degradation process according to the present invention consists of a filtration or centrifugation step to remove the insoluble particles from the solution.
  • the filtration of the medium will be carried out on diatom by frontal filtration.
  • the medium will be centrifuged for 10 minutes at 10,000 g and at room temperature.
  • Step e) of the degradation process according to the present invention consists of a step of concentration of the medium by evaporation of the water present in the extract. To carry out this concentration, any means known to those skilled in the art can be used. Preferably, this step will proceed under a pressure ranging from 50 and 100 mmHg, and at a temperature ranging from 40 to 50 ° C.
  • Step f) of the degradation process according to the present invention consists of the purification of oligosaccharides of low molecular weight by:
  • the degradation method according to the present invention can be conducted in the absence or in the presence of a catalyst.
  • the method of degradation according to the present invention may be conducted in the presence of a catalyst selected from divalent cations such as for example Cu 2+ or Fe 2+ .
  • the catalyst may be added in step b), c) or d) of the process according to the invention.
  • the degradation method according to the present invention makes it possible to obtain low molecular weight molecules with a high production yield, of the order of 20 to 25% relative to the dry weight of Ulva lactuca powder used.
  • the oligosaccharides according to the present invention can therefore be used in cosmetics to induce the biosynthesis and / or the organization of the constituent molecules of the extracellular matrix, and / or to reduce their degradation, thus enabling the establishment and maintenance of the architecture of the extracellular matrix and thus to prevent and / or treat the signs of intrinsic and / or extrinsic cutaneous and / or capillary aging, in particular the alteration of the structures and cutaneous and / or capillary functions, the alteration of the regeneration tissue, tissue relaxation, alteration of cutaneous and / or capillary microcirculation, alteration of cutaneous detoxification, loss of uniformity, brightness and shine of dye (cutaneous and / or capillary).
  • the alteration of the cutaneous surface texture (appearance of wrinkles, puffiness, dry skin, etc.) and / or capillary (brittle hair), and the alteration n cutaneous and / or capillary architecture (inducing in particular hair loss).
  • the subject of the present invention is therefore also the cosmetic use of one or more oligosaccharides according to the present invention as an agent for the prevention and / or treatment of the intrinsic and / or extrinsic signs of skin and / or capillary aging, in particular the alteration of cutaneous and / or capillary structures and functions, alteration of tissue regeneration, tissue loosening, alteration of cutaneous and / or capillary microcirculation, alteration of cutaneous detoxification, loss of uniformity , brightness and shine of the hue (cutaneous and / or capillary), the alteration of the cutaneous surface texture (appearance of wrinkles, puffiness, dry skin, etc.) and / or capillary (brittle hair ), and the alteration of the cutaneous and / or capillary architecture (inducing in particular the hair loss).
  • the present invention also relates to a cosmetic composition
  • a cosmetic composition comprising, as active principle, one or more oligosaccharides of low molecular weight as described above.
  • the compositions according to the present invention may be formulated in any dosage form suitable for their administration.
  • the compositions according to the present invention can thus be formulated in the form of cream, gel, lotion, milk, oil-in-water emulsion or water-in-oil, solution, ointment, spray, body oil, aftershave, soap, lip protection stick. , stick and pencil for makeup.
  • compositions according to the present invention contain one or more oligosaccharides according to the present invention at contents ranging from 0.005% to 75% by total weight of the composition, preferably from 0.01% to 25%, preferentially still from 0.1% to 5%.
  • one or more low molecular weight oligosaccharides according to the present invention or one or more of their pharmaceutically acceptable salts are mixed with the excipients conventionally used in the cosmetics field.
  • compositions according to the present invention may take the form of a cream in which one or more low molecular weight oligosaccharides according to the present invention or one or more of their pharmaceutically acceptable salts are associated with excipients commonly used in cosmetology.
  • compositions according to the present invention may take the form of gels in suitable excipients such as cellulose esters or other gelling agents, such as carbopol, sepinov (polyacrylate), guar gum, and the like.
  • suitable excipients such as cellulose esters or other gelling agents, such as carbopol, sepinov (polyacrylate), guar gum, and the like.
  • compositions according to the present invention may also take the form of a lotion or solution in which one or more low molecular weight oligosaccharides according to the present invention or one or more of their pharmaceutically acceptable salts are in encapsulated form.
  • the microspheres according to the invention may for example consist of fatty substance, agar and water.
  • One or more low molecular weight oligosaccharides according to the present invention or one or more of their pharmaceutically acceptable salts may be incorporated in liposomes, glycospheres, cyclodextrins, in chylomicrons, macro-, micro-nano-particles and as macro-, micro- and nanocapsules and also be absorbed on powdery organic polymers, talcs, bentonites and other mineral carriers.
  • These emulsions have good stability and can be stored for the time necessary for use at temperatures between 0 and 50 ° C without sedimentation of the constituents or phase separation.
  • compositions according to the present invention may also contain additives or adjuvants customary in cosmetologies, such as, for example, antimicrobial agents or perfumes, but also extraction or synthetic lipids, gelling and viscosifying polymers, surfactants and emulsifiers, hydro- or liposoluble active ingredients, plant extracts, tissue extracts, marine extracts, synthetic actives.
  • additives or adjuvants customary in cosmetologies such as, for example, antimicrobial agents or perfumes, but also extraction or synthetic lipids, gelling and viscosifying polymers, surfactants and emulsifiers, hydro- or liposoluble active ingredients, plant extracts, tissue extracts, marine extracts, synthetic actives.
  • compositions according to the present invention may also comprise other complementary active ingredients chosen for their action, for example for the slimming effect, the anti-cellulite effect, the firming effect, the moisturizing effect, the anti-cellulite effect, age, antimicrobial activity, antioxidant activity, anti-radical activity, healing effect, tensor effect, anti-wrinkle effect, chelating activity, complexing and sequestering activity, the soothing effect, the concealer effect, the anti-redness effect, the emollient activity, the hair conditioner effect, the anti-dandruff activity, the stimulating effect of the regrowth of the hair, the effect inhibiting hair loss, capillary gaining effect, depilatory activity, hair regrowth limiting activity, activity participating in cell renewal, activity modulating the inflammatory response, activity involved in maintaining the hair, oval of the face, but also the sun protection, has anti-irritant activity, cellular nutrition, cellular respiration, anti-seborrheic treatments, skin tone, hair protection.
  • other complementary active ingredients chosen for their action,
  • compositions according to the present invention contain complementary active ingredients, these are generally present in the composition at a sufficiently high concentration so that they can exercise their activity.
  • compositions according to the present invention are preferably used daily and applied one or more times per day.
  • compositions according to the present invention are very well tolerated, they exhibit no toxicity and their application to the skin for prolonged periods of time does not imply any systematic effect.
  • the compositions according to the present invention can therefore be used to induce the biosynthesis and / or the organization of the constituent molecules of the matrix. extracellular, and / or to reduce their degradation, thus enabling the establishment and maintenance of the architecture of the extracellular matrix and thus prevent and / or treat intrinsic and / or extrinsic signs of skin and / or capillary aging.
  • alteration of cutaneous and / or capillary structures and functions including alteration of tissue regeneration, tissue relaxation, alteration of cutaneous and / or capillary microcirculation, alteration of cutaneous detoxification, loss of uniformity, brightness and shine of the dye (cutaneous and / or capillary), the alteration of the cutaneous surface texture (appearance of wrinkles, puffiness, dry skin, etc.) and / or capillary (brittle hair), and the alteration of the cutaneous and / or capillary architecture (inducing in particular the hair loss).
  • the extraction of the polysaccharides is carried out by dispersing 50 grams of Ulva lactuca seaweed powder in 1 liter of water at 95 ° C. with vigorous stirring (1000 rpm) for 2 hours. The mixture is then diatom-filtered (50 g) on a sintered glass 1. (Removal of the algae can also be carried out by centrifugation (10000 g, 30 minutes, 22 ° C.)). The Ulva lactuca extract is then precipitated in 3 volumes of 96 ° ethanol (at 4 ° C.) with stirring (500 rpm) for 2 hours.
  • the precipitate is recovered on a filter cloth (porosity 500 ⁇ ) then washed with 100 ml of ethanol 96 °, drained and dried (at 40 ° C for 15 hours). Finally, the precipitate is ground and sieved over 500 ⁇ in order to obtain a fine powder of polysaccharides extracted from Ulva Lactuca.
  • the temperature of the medium is allowed to return to 25 ° C and then filtered through diatomaceous earth (or centrifuged at 10,000g, 30 minutes, 25 ° C) to remove the insolubles.
  • the filtrate is then concentrated under reduced pressure at 40 ° C. to a volume corresponding to 1/4 of the initial volume.
  • the concentrate is then precipitated in 5 volumes of ethanol 96 ° at 4 ° C with stirring (500 rpm) for 2 hours.
  • the precipitate is recovered by filtration on sintered glass 3 (porosity ⁇ 100 microns), triturated and then washed with 50 ml of ethanol for 30 minutes and then filtered on Sintered glass 3. Finally, the precipitate is dried in an oven (40.degree. 15 hours) and then ground into fine powder.
  • the production yield of oligosaccharides of low molecular weight is 80%.
  • the hydrolysis of the oligosaccharides is carried out with TF A 2N.
  • the constituent sugars are analyzed by ion chromatography (HPAEC) with reference to monosaccharide databases (glucuronic acid, Rhamnose) for identification. Determination of molecular weight
  • the determination of the sulfate level was carried out according to the turbidimetric barium / gelatin method of Dodgson and Price (1962). % relative Molecular weight (majority)
  • the polysaccharide extract of Ulva lactuca is stirred vigorously (1000 rpm) at 80 ° C. and pH 7-7.5.
  • To the medium is added 60 ml of a 35% H 2 O 2 solution for 1 hour at a flow rate of 1 ml / min at 60 ° C and maintaining at pH 7-7.5 by addition of NaOH (5M).
  • the filtrate is then concentrated under reduced pressure at 40 ° C. to a volume corresponding to 1/5 of the initial volume.
  • the concentrate is then precipitated in 5 volumes of ethanol 96 ° at 4 ° C with stirring (500 rpm) for 1 hour.
  • the precipitate obtained is recovered by filtration on sintered glass 3 (porosity ⁇ 100 microns), triturated and then washed with 50 ml of ethanol 96 ° for 30 minutes and then filtered on sintered glass 3.
  • the precipitate is dried in an oven (40 ° C., 15 hours) and then ground to a fine powder.
  • the production yield of low molecular weight oligosaccharides is 80%.
  • the hydrolysis of the oligosaccharides is carried out with 2N TFA.
  • the constituent sugars are analyzed by ion chromatography (HPAEC) with reference to monosaccharide databases (glucuronic acid, Rhamnose) for identification.
  • HPAEC ion chromatography
  • the determination of the sulfate level is carried out according to the turbidimetric barium / gelatin method of Dodgson and Price (1962).
  • EXAMPLE 3 Production of oligosaccharides according to the invention continuously and purification by Ultra Tangential Filtration 50 g of powder of algae of Ulva lactuca are dispersed in 1 liter of water at 90 ° C. with vigorous stirring (1000 rpm) during 2 hours. Then 60 ml of 35% H 2 O 2 solution was added to the medium for 1 hour at a flow rate of 1 ml / min at 80 ° C and maintained at pH 5-8 by addition of NaOH (5M). After complete addition of H2O2 (in 1 hour), stirring is maintained for 3 hours (500 rpm) at 80 ° C and pH 5-8. The mixture is then heat-filtered on diatom (50 g) on sintered glass 1. The elimination of the insoluble particles can also be carried out by centrifugation (10000 g, 15 minutes, 22 ° C.).
  • the filtrate is then concentrated by tangential ultrafiltration on a membrane of 5 kilodaltons until a concentrated extract with 10% dry matter is obtained.
  • the concentrate is finally atomized into a fine powder of oligosaccharides of low molecular weight.
  • a transcriptomic study was carried out on human fibroblasts cultured in vitro in the absence or in the presence of oligosaccharides prepared according to Examples 1 to 3 at a concentration of 0.05% by weight (ie 0.05 g of oligosaccharides per 100 g of cell culture medium).
  • both fibroblast cell cultures When both fibroblast cell cultures have reached confluence, their respective total ANs are extracted and then reverse transcribed into respective differentially labeled mono-stranded complementary (cDNA) DNAs (the cDNAs derived from the RNAs extracted from the fibroblasts grown in the control condition are labeled Cy3 cyanine and the cDNAs derived from the RNAs extracted from the fibroblasts cultured in the test condition are labeled with cyanine Cy5).
  • cDNA mono-stranded complementary
  • Both types of cDNA are pooled and hybridized on a DNA chip containing the 44,000 sequences of the human genome.
  • the reading of the chip makes it possible to determine the overexpression (Cy5 labeling greater than the Cy3 labeling for the hybridized genetic sequence concerned) and the subexpression (Cy5 labeling less than the Cy3 labeling for the hybridized genetic sequence concerned) of the genes induced by the treatment of the genes.
  • fibroblasts with oligosaccharides according to the present invention.
  • the oligosaccharides used in particular cause the overexpression of the FGF1, CCNA2 and RHAMM genes and the under-expression of the ADAMTS, TMEM27 and ITH5 genes. All these genes encode the proteins bearing the same names and involved in the metabolism and the establishment of the constituent molecules of the extracellular matrix.
  • the FGF1 and CCNA2 proteins allow the mobilization of fibroblasts and induce the stimulation of the biosynthesis, by these cells, of the two main types of constituent molecules of the extracellular matrix (collagens and hyaluronic acid).
  • the RHAMM protein the latter coupled to the hyaluronic acid receptor participates in the fixation and organization of the latter thus allowing the establishment and maintenance of the architecture of the extracellular matrix.
  • ADAMTS and TMEM27 genes induces the decrease in catabolism (degradation) of collagen molecules by inhibiting the activity of Matrix Metalloproteinases (MMPs).
  • MMPs Matrix Metalloproteinases
  • the subexpression of the ITH5 gene induces the inhibition of catabolism of hyaluronic acid.
  • the transcriptomic study has made it possible to demonstrate that the compounds of the present invention allow the establishment and maintenance of the integrity of the extracellular matrix i) by inducing the biosynthesis of the collagen molecules and the hyaluronic acid (thanks to the overexpression of the FGF1 and CCNA2 genes), ii) by inhibiting the degradation of these constituent molecules (thanks to the under-expression of the ADAMTS, TMEM27 and ITH5 genes), iii) by promoting the fixation and the organization of the hyaluronic acid molecules (thanks to the overexpression of the RHAMM gene).
  • the fibroblast cultures are established from skin of human foreskins harvested during circumcisions and are amplified in RPMI 1640 culture medium supplemented with fetal calf serum, L-glutamine and gentamicin. The tests are performed on fibroblasts, between the 2 nd and 4 th passage, in order to ensure reproducibility between different experiments.
  • the fibroblasts are seeded in 25 cm 2 dishes at a rate of 10 6 cells per milliliter. They were then incubated for 24 hours in the absence (control condition) or in the presence of three concentrations of oligosaccharides of the present invention (conditions treated). • Bachelor Apr 24 hour incubation, fibroblasts were recovered by centrifugation and t are measured:
  • the results obtained show that the oligosaccharides of the present invention induce an increase in the biosynthesis of the main constituent molecules of the extracellular matrix, namely collagens and hyaluronic acid. Also, these results demonstrate that these oligosaccharides of the present invention induce a decrease in the production of Matrix Metalloproteinases (MMP1 and MMP3) responsible for the degradation of collagen molecules.
  • MMP1 and MMP3 Matrix Metalloproteinases
  • oligosaccharides thus cause biosynthesis and prevent the degradation of the main constituent molecules of the extracellular matrix.
  • the compounds of the present invention can therefore be used to induce the biosynthesis and / or organization of the constituent molecules of the extracellular matrix, and / or to reduce their degradation, thus enabling the establishment and maintenance of the the extracellular matrix and therefore to prevent and / or treat the signs of intrinsic and / or extrinsic cutaneous and / or capillary aging, in particular the alteration of cutaneous and / or capillary structures and functions, of the alteration of the tissue regeneration, tissue laxity, alteration of cutaneous and / or capillary microcirculation, alteration of cutaneous detoxification, loss of uniformity, brightness and shine of dye (cutaneous and / or capillary), the alteration of the cutaneous surface texture (appearance of wrinkles, puffiness, dry skin, etc.) and / or capillary (brittle hair), the alteration of the arch cutaneous and / or capillary itecture (inducing in particular hair loss).
  • Example 6 Clinical Study on Human Volunteers A double-blind clinical study was carried out on 18 human volunteers (18 Caucasian women aged 56 ⁇ 6 years) in order to estimate, at the level of the face, the effects remodeling and re-sculting oligosaccharides according to the present invention.
  • each volunteer applied, on one of its hemispheres, a cosmetic formulation containing 2% by weight of oligosaccharides according to the present invention (ie 2 g of oligosaccharides according to the present invention per 100 g of formulation) ; on its other hemi-face a placebo cosmetic formulation (formulation of identical composition but not containing oligosaccharides according to the present invention).
  • the distribution of the hemispaces was performed in a randomized manner.
  • the remodeling and re-sculting effects in the face were evaluated by two complementary techniques:
  • the projection of fringes allows a direct and immediate acquisition of the morphology of the face in three dimensions and thus to evaluate its volume.
  • This technique allows an evaluation of the reduction of the relaxation of the oval of the face (remodeling effect, re-scultant).
  • the three-dimensional information is calculated by the deformation of the fringes projected on the surface of the face and recorded by a digital camera.
  • the analysis consists of a superposition of images taken at different measurement times. Thus, a region of interest is defined at the level of sagging skin. This zone is located in the same place for all measurement times in the same subject. It makes it possible to calculate a volume between this zone of interest and its projection on a reference plane.
  • the parameter analyzed is the relative volume of the jowls, expressed in mm 3 . A decrease in this parameter is synonymous with a remodeling effect of the tested product.
  • the second technique used, ballistometry is based on the use of a mass impacting the surface of the skin.
  • the biomechanical properties of the skin are then measured through skin-mass interactions.
  • a vibrational motion is imposed on the skin and is recorded for 3 seconds then translated into electrical signals, then quantified and finally evaluated in terms of amplitude.
  • the measurements therefore make it possible to evaluate skin firmness and elasticity.
  • the measured parameters are:
  • the indentation (in mm) corresponding to the peak recording height of penetration of the tip of the probe into the skin during the first impact.
  • the indentation shows the resistance of the skin during the penetration of the probe, and thus allows an estimate of the firmness of the skin. The lower the indentation, the firmer the skin. Thus, a decrease in indentation reveals a firming effect;
  • alpha (without unit) measures the damping energy.
  • the alpha describes the rebound energy of the probe and therefore the density of the skin. More energy is strong, the more the skin is dense. Thus, an increase in alpha shows a denser skin;
  • the area represents the bounces of the probe and therefore the softness (the flaccid aspect) of the skin: its relaxation.
  • a decrease in the area reveals a reduction in relaxation (increased firmness).
  • a resuscitating effect inducing a firming effect (decrease of the indentation parameter, measured by ballistometry), by improving the cutaneous density (increase of the alpha parameter, measured by ballistometry) and by decreasing the cutaneous relaxation (decrease of the parameter area, measured by ballistometry).

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Description

NOUVEAUX COMPOSÉS OLIGOSACCHARIDES ET LEUR UTILISATION COSMÉTIQUE
La présente invention a pour objet de nouveaux composés oligosaccharides extraits de l'algue verte Ulva Lactuca, une composition cosmétique comprenant un ou plusieurs de ces composés ainsi que leurs sels pharmaceutiquement acceptables, et l'utilisation de ces composés ou de cette composition pour maintenir l'intégrité et la concentration des molécules constituantes de la matrice extracellulaire. Ulva Lactuca (ou laitue de mer) est une algue verte marine, nitrophile, de la famille des Ulvaceae et de l'ordre des Ulvales.
Trois familles polysaccharidiques composent la paroi de cette algue verte. La première famille, majoritaire, est constituée d'un rhamnoglycuronane sulfaté désigné par le terme ulvane (Ray et Lahaye, 1995). Il est soluble dans l'eau et se distingue des autres polysaccharides contenus dans la paroi de l'algue par sa teneur en rhamnose (30 à 50 %), en acide glucuronique (10 à 20 %) et en sulfate (16 à 19 %). La seconde famille est constituée de ?-(l,4)-D-xyloglucanes et de ?-(l,4)-D-glucuronanes. Enfin, la troisième famille est constituée de cellulose amorphe.
Divers procédés d'extraction menés sur Ulva Lactuca ont été décrits dans l'art antérieur. De manière générale, les polysaccharides contenus dans cette algue sont obtenus par extraction aqueuse à des températures allant de 50 à 100°C, suivie d'une précipitation alcoolique. C'est le cas par exemple du procédé décrit dans Paradossi et al., « A physico-chemical study on the polysaccharide ulvan from hot water extraction of the macroalga Ulva », Int J Biol Macromol, 1999, 25(4):309-15. Cependant, ce procédé ne permet pas l'obtention d'oligosaccharides puisqu'aucune hydrolyse n'est réalisée. Qi et al. décrivent quant à eux dans « Antioxidant activity of différent molecular weight sulfated polysaccharides from Ulva pertusa Kjellm (Chlorophyta) », Journal of Applied Phycology (2005) 17 : 527-534, un procédé d'extraction mené sur Ulva pertusa permettant d'obtenir des hétéropolysaccharides sulfatés de poids moléculaires égaux à 28,2 kDa, 58 kDa, 64,5 kDa et 151 ,7 kDa. Cependant, contrairement aux composés de l'invention, les polysaccharides obtenues sont constitués non seulement d'unités rhamnoses et acide glucuroniques, mais également des unités xyloses, manoses, arabinoses et galactoses. D'autre part, les polysaccharides ainsi préparées sont décrits comme possédant une activité antioxydante, mais rien n'est dit quant à une éventuelle activité permettant un maintien de l'intégrité et de la concentration des molécules constituantes de la matrice extracellulaire en favorisant leur synthèse et leur organisation, et en limitant leur dégradation
La demande de brevet WO-A-2008/1461 16 décrit l'utilisation d'Ulva Lactuca ou d'extraits de cette algue pour la préparation de compositions cosmétiques ayant une triple action sur le derme : stimulation de la prolifération des fïbroblastes, stimulation de la production d'élastine et stimulation de la synthèse de collagène de type I. Néanmoins, aucune indication n'est fournie dans cette demande de brevet concernant le procédé d'extraction utilisé pour préparer l'extrait d'Ulva Lactuca, si bien qu'il est impossible d'en déterminer la composition exacte. D'autre part, l'extrait à'Ulva lactuca agit uniquement sur la prolifération des fïbroblastes. Aucune stimulation de la synthèse du collagène et de l'acide hyaluronique n'est associée à l'utilisation de l'extrait d'Ulva lactuca seul.
Or, la peau est soumise en permanence à de nombreux stress intrinsèques et/ou extrinsèques tels que les UV, la pollution, la chaleur, le froid, les différentes pathologies, les blessures, l'inflammation, le vieillissement ou encore l'activité hormonale. Malgré la présence de différents systèmes de protection intrinsèques, la peau finit par être abîmée par la succession de ces agressions, ce qui se traduit notamment par une altération de l'architecture cutanée conduisant à une altération des structures et des fonctions cutanées.
Ces changements structuraux peuvent être principalement attribués à une désorganisation de la matrice extracellulaire, elle-même induite par une diminution et/ou une modification des molécules constituantes telles que les collagènes, l'acide hyaluronique, l'élastine ou encore la fïbronectine.
Les principaux facteurs responsables de cette désorganisation de la matrice extracellulaire sont donc la diminution de la biosynthèse et/ou l'augmentation de la dégradation de ces molécules constituantes mais aussi la mauvaise disposition de ces composés au sein de cette matrice.
Tout cela se traduit notamment par un relâchement tissulaire et par une perte d'élasticité, de fermeté, de tonicité, d'uniformité de la teinte et/ou de la texture de surface cutanée et/ou capillaire. Par voie de conséquence, dans le cadre du développement de nouveaux actifs cosmétiques utiles pour induire la biosynthèse et/ou l'organisation des molécules constituantes de la matrice extracellulaire, et/ou pour diminuer leur dégradation, permettant ainsi la mise en place et le maintien de l'architecture de la matrice extracellulaire et donc de prévenir et/ou de traiter les signes de vieillissement cutané et/ou capillaire intrinsèques et/ou extrinsèques, notamment l'altération des structures et des fonctions cutanées et/ou capillaires, l'altération de la régénération tissulaire, le relâchement tissulaire, l'altération de la microcirculation cutanée et/ou capillaire, l'altération de la détoxification cutanée, la perte de l'uniformité, de l'éclat et de la brillance de la teinte (cutanée et/ou capillaire), l'altération de la texture de surface cutanée (apparition de rides, de poches, sécheresse cutanée, etc.) et/ou capillaire (cheveux cassant), et l'altération de l'architecture cutanée et/ou capillaire (induisant notamment la chute des cheveux). Or, il a maintenant été trouvé de façon tout à fait surprenante que la dégradation radicalaire des polysaccharides extraits de V Ulva Lactuca permettait d'obtenir des oligosaccharides de faible poids moléculaire, c'est-à-dire inférieur ou égal à 100.000 Daltons, permettant un maintien de l'intégrité et de la concentration des molécules constituantes de la matrice extracellulaire en favorisant leur synthèse et leur organisation, et en limitant leur dégradation. Il a ainsi été trouvé de façon totalement inattendue que les oligosaccharides ainsi préparés permettent d'induire la biosynthèse et/ou l'organisation des molécules constituantes de la matrice extracellulaire, et/ou de diminuer leur dégradation, permettant ainsi la mise en place et le maintien de l'architecture de la matrice extracellulaire et donc de prévenir et/ou de traiter les signes de vieillissement cutané et/ou capillaire intrinsèques et/ou extrinsèques, notamment l'altération des structures et des fonctions cutanées et/ou capillaires, l'altération de la régénération tissulaire, le relâchement tissulaire, l'altération de la microcirculation cutanée et/ou capillaire, l'altération de la détoxification cutanée, la perte de l'uniformité, de l' éclat et de la brillance de la teinte (cutanée et/ou capillaire), l'altération de la texture de surface cutanée (apparition de rides, de poches, sécheresse cutanée, etc.) et/ou capillaire (cheveux cassant), et l'altération de l'architecture cutanée et/ou capillaire (induisant notamment la chute des cheveux). La présente invention a donc pour objet un oligosaccharide de formule générale (I)
Figure imgf000005_0001
(I) dans laquelle :
R1 à R4 sont choisis indépendamment les uns des autres et indépendamment pour chaque unité rhamnose et/ou acide glycuronique comme étant un groupe hydroxy, alkyloxy, carboxy, alkoxycarbonyl, acyloxy, sulfate ou phosphate; ou un groupement -OCH2Ra, dans lequel Ra représente un groupe hydroxy, alkyloxy, acyloxy, sulfate ou phosphate;
- n est un entier inférieur ou égal à 50 et est choisi de manière à ce que le poids moléculaire soit supérieur ou égal à 5.000 Daltons et inférieur ou égal à 100.000 Daltons ;
ainsi que son sel pharmaceutiquement acceptable.
Les oligosaccharides selon la présente invention n'ont jamais été décrits auparavant. Ces composés permettent un maintien de l'intégrité et de la concentration des molécules constituantes de la matrice extracellulaire en favorisant leur synthèse et leur organisation, et en limitant leur dégradation. Ces composés peuvent donc être utilisés pour induire la biosynthèse et/ou l'organisation des molécules constituantes de la matrice extracellulaire, et/ou pour diminuer leur dégradation, permettant ainsi la mise en place et le maintien de l'architecture de la matrice extracellulaire et donc de prévenir et/ou de traiter les signes de vieillissement cutané et/ou capillaire intrinsèques et/ou extrinsèques, notamment l'altération des structures et des fonctions cutanées et/ou capillaires, l'altération de la régénération tissulaire, le relâchement tissulaire, l'altération de la microcirculation cutanée et/ou capillaire, l ' altération de la détoxifïcation cutanée, la perte de l'uniformité, de l'éclat et de la brillance de la teinte (cutanée et/ou capillaire), l'altération de la texture de surface cutanée (apparition de rides, de poches, sécheresse cutanée, etc ..) et/ou capillaire (cheveux cassant), et l'altération de l'architecture cutanée et/ou capillaire (induisant notamment la chute des cheveux). Dans le cadre de la présente invention :
- l'expression « poids moléculaire » se réfère indifféremment à la molécule seule ou au mélange de molécules et représente alors dans ce cas une valeur moyenne ;
- « acide glycuronique » désigne l'acide glucuronique ou l'acide iduronique (que l'on retrouve en faible proportion) ;
- on entend par « sel pharmaceutiquement acceptable » tout sel d'addition avec un acide minéral ou organique par action d'un tel acide au sein d'un solvant organique ou aqueux tel qu'un alcool, une cétone, un éther ou un solvant chloré, et qui soit acceptable d'un point de vue pharmaceutique. A titre d'exemple de tels sels, on peut citer les sels suivants : benzènesulfonate, bromhydrate, chlorhydrate, citrate, éthanesulfonate, fumarate, gluconate, iodate, iséthionate, maléate, méthanesulfonate, méthylène-bis-b-oxynaphtoate, nitrate, oxalate, palmoate, phosphate, salicylate, sulfate, tartrate, théophyllinacétate et p-toluènesulfonate ;
- on entend par un groupe alkyle, une chaîne hydrocarbonée saturée, monovalente, linéaire ou ramifiée, comportant de 1 à 6 atomes de carbone, tels que les groupes suivants : méthyle, éthyle, n-propyle, iso-propyle, n-butyle, sec-butyle, iso-butyle, tert- butyle, pentyle, hexyle ;
- le terme « alkyle » tel que défini ci-dessus conserve la même définition quand il intègre le nom d'un groupe, par exemple dans le groupe alkyloxy. Ainsi, parmi les groupes alkyloxy, on peut citer les groupes méthoxy, éthoxy, n-propoxy, iso-propoxy, n-butoxy, iso-butoxy, sec-butoxy, tert-butoxy, pentyloxy ;
- une étape de « concentration sous pression réduite » désigne une étape visant à évaporer l'eau contenue dans un extrait à une pression de 50 à 100 mm de Hg et à une température allant de 40 à 50°C.
Préférentiellement, la présente invention a pour objet un oligosaccharide de formule générale (I) telle que définie ci-dessus dans laquelle les substituants R1 à R4 sont choisis indépendamment les uns des autres et indépendamment pour chaque unité rhamnose et/ou acide glycuronique comme étant un groupe hydroxy, alkyloxy, acyloxy, sulfate ou phosphate; ou un groupement -OCH2Ra, Ra étant tel que défini précédemment. De façon tout à fait préférée, la présente invention a pour objet un oligosaccharide de formule générale (I) telle que définie ci-dessus dans laquelle les substituants R1 à R4 sont choisis indépendamment les uns des autres et indépendamment pour chaque unité rhamnose et/ou acide glycuronique comme étant un groupe hydroxy ou un groupe sulfate. Les oligosaccharides de formule générale (I) tels que définis précédemment ont un poids moléculaire supérieur ou égal à 5.000 Daltons et inférieur ou égal à 100.000 Daltons. Préférentiellement, la présente invention a pour objet un oligosaccharide de formule générale (I) tel que défini précédemment dans laquelle n est choisi de manière à ce que le poids moléculaire soit supérieur ou égal à 5.000 Daltons et inférieur ou égal à 50.000 Daltons, de préférence supérieur ou égal à 5.000 Daltons et inférieur ou égal à 30.000 Daltons. De façon toute à fait préférée, n est choisi de manière à ce que le poids moléculaire soit supérieur ou égal à 5.000 Daltons et inférieur ou égal à 25.000 Daltons, de préférence supérieur ou égal à 5.000 Daltons et inférieur ou égal à 15.000 Daltons.
Les oligosaccharides selon la présente invention sont préparés par dégradation radicalaire de polysaccharides extraits à' Ulva Lactuca. La présente invention a donc pour objet un procédé de préparation d'oligosaccharides tels que définis précédemment comprenant les étapes suivantes :
a) dispersion de la poudre d'algue Ulva Lactuca dans l'eau à une température allant de 20°C à 100°C, le pH de la solution allant de 4 à 8 ;
b) ajout progressif de peroxyde d'hydrogène (H202), la température de la solution allant de 20°C à 100°C, le pH de la solution allant de 4 à 8 ;
c) maintien sous agitation, la température de la solution allant de 20°C à 100°C, le pH de la solution allant de 4 à 8 ;
d) fïltration ou centrifugation à température ambiante ;
e) concentration sous pression réduite ;
f) les molécules de faible poids moléculaire peuvent être purifiées par :
- ultrafiltration tangentielle puis atomisation en fine poudre;
- précipitation alcoolique, fïltratio n , l av a g e et s é c h a g e d e s oligosaccharides obtenus.
Le procédé de dégradation selon la présente invention permet l ' obtention oligosaccharides de faible poids moléculaire avec un rendement de production élevé, de l'ordre de 25% par rapport à la masse sèche de poudre d'algue Ulva Lactuca utilisée.
L'étape a) du procédé de dégradation selon la présente invention consiste en la dispersion de la poudre d'algue Ulva lactuca dans l'eau. De préférence la dissolution s'effectue sous agitation à une vitesse allant de 500 à 2500 tours/minute, de préférence allant de 1000 à 2000 tours/minute. La dissolution s'effectue à une température allant de 20°C à 100°C, de préférence à une température allant de 40°C à 90°C, de préférence encore à une température allant de 50 à 80°C.
Durant la dissolution, le pH de la solution peut varier de 4 à 8, de préférence le pH de la solution varie de 5 à 7,5. Pour maintenir le pH de la solution à ces valeurs, tout moyen connu de l'homme du métier peut être utilisé. Préférentiellement, on ajoutera de la soude 5N ou de la potasse 5N.
La concentration en polysaccharides dans l'eau après dissolution pourra varier en fonction des besoins de l'homme du métier et du matériel utilisé. Préférentiellement, la concentration en polysaccharides pourra être de 1 à 1000 g/1, de préférence encore de 1 à 100 g/1, de façon toute à fait préférée de 10 à 50 g/1.
L'étape b) du procédé de dégradation selon la présente invention consiste en l'ajout progressif de peroxyde d'hydrogène. De préférence, le rapport massique entre l'extrait d'Ulva lactuca et le peroxyde d'hydrogène ajouté est de 1/1. Le peroxyde d'hydrogène ajouté sera préférentiellement choisi comme étant du H202 à 35%.
L'ajout de peroxyde d'hydrogène s'effectue de façon progressive. De préférence, l'ajout de peroxyde d'hydrogène se fera de façon continue sur une période allant de 30 minutes à 5 heures.
L'ajout de peroxyde d'hydrogène s'effectue à une température allant de 20°C et 100°C, de préférence à une température allant de 40°C à 90°C, de préférence encore à une température allant de 50 à 80°C.
Durant l'ajout de peroxyde d'hydrogène, le pH de la solution peut varier de 4 à 8, de préférence le pH de la solution varie de 5 à 7,5. Pour maintenir le pH de la solution à ces valeurs , tout moyen connu de l ' homme du métier peut être utilisé . Préférentiellement, on ajoutera de la soude 5N ou de la potasse 5N.
L'étape c) du procédé de dégradation selon la présente invention consiste en l'agitation du mélange extrait d'Ulva /actwca/peroxyde d'hydrogène.
De préférence l'agitation s'effectue à une vitesse allant de 100 à 2000 tours/minute, de préférence encore à une vitesse allant de 300 à 1000 tours/minute.
De préférence, l'agitation sera maintenue pendant une période allant de 30 minutes à 5 heures, de préférence encore pendant une période allant de 30 minutes à 3 heures, de façon tout à fait préférée pendant une période allant de 1 heure à 2 heures. L'agitation s'effectue à une température allant de 20°C à 100°C, de préférence à une température allant de 40°C à 90°C, de préférence encore à une température allant de 50 à 80°C.
Durant l'agitation, le pH de la solution peut varier de 4 à 8, de préférence le pH de la solution varie de 5 à 7,5. Pour maintenir le pH de la solution à ces valeurs, tout moyen connu de l'homme du métier peut être utilisé. Préférentiellement, on ajoutera de la soude 5N ou de la potasse 5N.
L'étape d) du procédé de dégradation selon la présente invention consiste en une étape de filtration ou de centrifugation visant à éliminer les particules insolubles de la solution.
Pour procéder à la filtration, tout moyen connu de l'homme du métier peut être utilisé. Préférentiellement, la filtration du milieu sera réalisée sur diatomée par filtration frontale.
Pour procéder à la centrifugation, tout moyen connu de l'homme du métier peut être utilisé. Préférentiellement, le milieu sera centrifugé pendant 10 minutes à 10 000 g et à température ambiante.
L'étape e) du procédé de dégradation selon la présente invention consiste en une étape de concentration du milieu par évaporation de l'eau présente dans l'extrait. Pour procéder à cette concentration, tout moyen connu de l'homme du métier peut être utilisé. Préférentiellement, cette étape se déroulera sous une pression allant de 50 et 100 mm de Hg, et à une température allant de 40 à 50°C. L'étape f) du procédé de dégradation selon la présente invention consiste en la purification des oligosaccharides de faibles poids moléculaire par :
Dans le cas d'une ultrafîltration tangentielle, celle-ci sera préférentiellement effectuée sur des membranes de 5, 10 ou 30 kDa.
Dans le cas d'une précipitation alcoolique suivie d'une filtration, d'un lavage et d'un séchage, tout moyen connu de l'homme du métier peut être utilisé. Préférentiellement, la précipitation sera effectuée à l'aide d'un alcool qui pourra par exemple être choisi comme étant l'isopropanol ou l'éthanol. Préférentiellement, le précipitât obtenu pourra être filtré sur fritté ou sur toile. D'autre part, le procédé de dégradation selon la présente invention peut être conduit en l'absence ou en présence d'un catalyseur. Ainsi, de façon optionnelle, le procédé de dégradation selon la présente invention peut être conduit en présence d'un catalyseur choisi parmi les cations divalents tels que par exemple Cu2+ ou Fe2+. Le catalyseur pourra être ajouté à l'étape b), c) ou d) du procédé selon l'invention. Le procédé de dégradation selon la présente invention permet l'obtention de molécules de faible poids moléculaire avec un rendement de production élevé, de l'ordre de 20 à 25% par rapport à la masse sèche de poudre d'Ulva lactuca utilisée.
Les oligosaccharides selon la présente invention peuvent donc être utilisés en cosmétique pour induire la biosynthèse et/ou l'organisation des molécules constituantes de la matrice extracellulaire, et/ou pour diminuer leur dégradation, permettant ainsi la mise en place et le maintien de l'architecture de la matrice extracellulaire et donc de prévenir et/ou de traiter les signes de vieillissement cutané et/ou capillaire intrinsèques et/ou extrinsèques, notamment l'altération des structures et des fonctions cutanées et/ou capillaires, l'altération de la régénération tissulaire, le relâchement tissulaire, l' altération de la microcirculation cutanée et/ou capillaire, l' altération de la détoxification cutanée, la perte de l'uniformité, de l'éclat et de la brillance de la teinte (cutanée et/ou capillaire), l'altération de la texture de surface cutanée (apparition de rides, de poches, sécheresse cutanée, etc.) et/ou capillaire (cheveux cassant), et l'altération de l'architecture cutanée et/ou capillaire (induisant notamment la chute des cheveux).
La présente invention a donc également pour objet l'utilisation cosmétique d'un ou plusieurs oligosaccharides selon la présente invention comme agent pour la prévention et/ou le traitement des signes de vieillissement cutané et/ou capillaire intrinsèques et/ou extrinsèques, notamment l'altération des structures et des fonctions cutanées et/ou capillaires, l'altération de la régénération tissulaire, le relâchement tissulaire, l'altération de la microcirculation cutanée et/ou capillaire, l' altération de la détoxification cutanée, la perte de l'uniformité, de l'éclat et de la brillance de la teinte (cutanée et/ou capillaire), l'altération de la texture de surface cutanée (apparition de rides, de poches, sécheresse cutanée, etc.) et/ou capillaire (cheveux cassant), et l'altération de l'architecture cutanée et/ou capillaire (induisant notamment la chute des cheveux).
La présente invention a également pour objet une composition cosmétique comprenant, à titre de principe actif, un ou plusieurs oligosaccharides de faible poids moléculaires tels que décrits précédemment. Les compositions selon la présente invention peuvent être formulées sous toute forme galénique appropriée à leur administration. Les compositions selon la présente invention peuvent ainsi être formulées sous forme de crème, gel, lotion, lait, émulsion huile dans eau ou eau dans huile, solution, onguent, pulvérisateur, huile corporelle, lotion après-rasage, savon, bâton protecteur des lèvres, bâton et crayon pour maquillage.
Les compositions selon la présente invention contiennent un ou plusieurs oligosaccharides selon la présente invention à des teneurs allant de 0,005% à 75% en poids total de la composition, préférentiellement de 0,01% à 25%, préférentiellement encore de 0,1 % à 5%.
Pour la préparation de ces compositions, un ou plusieurs oligosaccharides de faible poids moléculaires selon la présente invention ou un ou plusieurs de leurs sels pharmaceutiquement acceptables sont mélangés aux excipients classiquement utilisés dans le domaine cosmétique.
Les compositions selon la présente invention peuvent prendre la forme d'une crème dans laquelle un ou plusieurs oligosaccharides de faible poids moléculaires selon la présente invention ou un ou plusieurs de leurs sels pharmaceutiquement acceptables sont associés aux excipients couramment utilisés en cosmétologie.
Les compositions selon la présente invention peuvent prendre la forme de gels dans les excipients appropriés tels que les esters de cellulose ou d'autres agents gélifiants, tels que le carbopol, le sepinov (polyacrylate), la gomme guar, etc.
Les compositions selon la présente invention peuvent aussi prendre la forme d'une lotion ou d'une solution dans lesquelles un ou plusieurs oligosaccharides de faible poids moléculaires selon la présente invention ou un ou plusieurs de leurs sels pharmaceutiquement acceptables sont sous forme encapsulée.
Les microsphères suivant l'invention peuvent par exemple être constituées de corps gras, d'agar et d'eau. Un ou plusieurs oligosaccharides de faible poids moléculaires selon la présente invention ou un ou plusieurs de leurs sels pharmaceutiquement acceptables peuvent être incorporés dans des vecteurs de type liposomes, glycosphères, cyclodextrines, dans des chylomicrons, des macro-, micro-, nano-particules ainsi que les macro-, micro- et nanocapsules et aussi être absorbés sur des polymères organiques poudreux, les talcs, bentonites et autres supports minéraux. Ces émulsions jouissent d'une bonne stabilité et peuvent être conservées pendant le temps nécessaire pour l'utilisation à des températures comprises entre 0 et 50°C sans qu'il y ait sédimentation des constituants ou séparation des phases.
Les compositions selon la présente invention peuvent aussi contenir des additifs ou des adjuvants usuels en cosmétologies, comme par exemple des agents antimicrobiens ou des parfums mais aussi des lipides d'extraction ou de synthèse, des polymères gélifiants et viscosifiants, des tensio-actifs et des émulsifiants, des principes actifs hydro- ou liposolubles, des extraits de plantes, des extraits tissulaires, des extraits marins, des actifs de synthèse.
Les compositions selon la présente invention peuvent aussi comprendre d'autres principes actifs complémentaires choisis pour leur action, par exemple pour l'effet amincissant, l'effet anti-cellulite, l'effet raffermissant, l'effet hydratant, l'effet anti-âge, l'activité antimicrobienne, l'activité anti-oxydante, l'activité anti-radicalaire, l'effet cicatrisant, l'effet tenseur, l'effet anti-ride, l'activité chélatante, l'activité complexante et séquestrante, l'effet apaisant, l'effet anti-cernes, l'effet anti-rougeurs, l'activité émolliente, l'effet démêlant capillaire, l'activité anti-pelliculaire, l'effet stimulant de la repousse du cheveu, l'effet inhibant la chute du cheveu, l'effet gainant capillaire, l'activité épilatoire, l'activité limitant la repousse du poil, l'activité participant au renouvellement cellulaire, l'activité modulant la réponse inflammatoire, l'activité participant au maintien de l'ovale du visage, mais également la protection solaire, l'activité anti- irritante, la nutrition cellulaire, la respiration cellulaire, les traitements anti-séborrhéiques, la tonicité cutanée, la protection du cheveu.
Lorsque les compositions selon la présente invention contiennent des principes actifs complémentaires, ceux-ci sont généralement présents dans la composition à une concentration suffisamment élevée pour qu'ils puissent exercer leur activité.
Les compositions selon la présente invention sont de préférence utilisées quotidiennement et appliquées une ou plusieurs fois par jour.
Les compositions selon la présente invention sont très bien tolérées, elles ne présentent aucune toxicité et leur application sur la peau, pour des périodes de temps prolongées, n'implique aucun effet systématique. Les compositions selon la présente invention peuvent donc être utilisées pour induire la biosynthèse et/ou l 'organisation des molécules constituantes de la matrice extracellulaire, et/ou pour diminuer leur dégradation, permettant ainsi la mise en place et le maintien de l'architecture de la matrice extracellulaire et donc de prévenir et/ou de traiter les signes de vieillissement cutané et/ou capillaire intrinsèques et/ou extrinsèques, notamment l'altération des structures et des fonctions cutanées et/ou capillaires, l'altération de la régénération tissulaire, le relâchement tissulaire, l' altération de la microcirculation cutanée et/ou capillaire, l' altération de la détoxification cutanée, la perte de l'uniformité, de l'éclat et de la brillance de la teinte (cutanée et/ou capillaire), l'altération de la texture de surface cutanée (apparition de rides, de poches, sécheresse cutanée, etc.) et/ou capillaire (cheveux cassant), et l'altération de l'architecture cutanée et/ou capillaire (induisant notamment la chute des cheveux).
La présente invention est illustrée de manière non limitative par les exemples suivants. Exemple 1 - Préparation d'oligosaccharides selon l'invention
Extraction
L'extraction des polysaccharides est réalisée en dispersant 50 grammes de poudre d'algue Ulva lactuca dans 1 litre d'eau à 95 °C sous vive agitation (1000 tr/min) pendant 2 heures. Le mélange est ensuite filtré à chaud sur diatomée (50 g) sur un verre fritté 1. (L'élimination des algues peut être également réalisée par centrifugation (10000g, 30 minutes, 22°C)). L'extrait à' Ulva lactuca est ensuite précipité dans 3 volumes d'éthanol 96° (à 4°C) sous agitation (500 tr/min) pendant 2 heures. Le précipitât est récupéré sur filtre toile (porosité 500 μιη) puis lavé avec 100 ml d'éthanol 96°, essoré puis séché (à 40 °C pendant 15 heures). Finalement, le précipitât est broyé puis tamisé sur 500 μιη afin d'obtenir une fine poudre de polysaccharides extraits de Ulva Lactuca.
Production d'oligosaccharides de faibles poids moléculaires
50 g de polysaccharides (extraits à' Ulva lactuca) ainsi obtenus sont dissous dans 1 litre d'eau (80 °C, pH 7-7.5) sous vive agitation (1500 tr/min). On ajoute 150 ml d'une solution d' H2O2 à 35% pendant 1 heure à un débit de 2.5 ml/min à 80°C et en maintenant à pH 7-7.5 par ajout continu de NaOH (5M). Après aj out complet de Γ Η2Ο2, l ' agitation est maintenue durant 2 heures supplémentaires (500 tr/min) à 80°C en maintenant le pH entre 7-7.5 par ajout de NaOH (5M).
On laisse la température du milieu revenir à 25 °C puis on filtre sur diatomée (ou centrifuger à 10 000g, 30 minutes, 25°C) pour éliminer les insolubles.
Le filtrat est ensuite concentré sous pression réduite à 40°C jusqu'à un volume correspondant à 1/4 du volume initial.
Le concentrât est alors précipité dans 5 volumes d'éthanol 96° à 4°C sous agitation (500 tr/min) pendant 2 heures.
Le précipitât est récupéré par fïltration sur verre Fritté 3 (porosité <100microns), trituré puis lavé avec 50 ml d'éthanol pendant 30 minutes puis filtré sur verre Fritté 3. Finalement, le précipitât est séché à l'étuve (40°C, 15 heures) puis broyé en fine poudre.
Le rendement de production des oligosaccharides de faibles poids moléculaires est de 80%.
Analyse
Analyse des sucres constitutifs
L'hydrolyse des oligosaccharides est réalisée au TF A 2N. L' analyse des sucres constitutifs est effectuée par chromatographie ionique (HPAEC) en se référant à des bases de données monosaccharides (Acide glucuronique, Rhamnose) pour l'identification. Détermination du poids moléculaire
Analyse par chromatographie d'exclusion stérique (SEC MALLS) avec l'utilisation de 2 colonnes de chromatographie OHPAK SB 804 et 806 HQ (Shodex).
Dosage des groupements sulfates
Le dosage du taux de sulfate a été réalisé selon la méthode turbidimétrique Baryum/gélatine de Dodgson et Price (1962). % relatif Poids moléculaires (majoritaires)
Rhamnose Acide Sulfate
Glucuronique
¾10 kDa
Oligosaccharides 60 25 15
Exemple 2 : Production d'oligosaccharides selon l'invention en continu
Préparation
On disperse 50g de poudre d'Ulva lactuca dans 1 litre d'eau à 90 °C sous vive agitation (1000 tr/min) pendant 2 heures. Le mélange est filtré à chaud sur diatomée (50g) sur verre fritté 1. L'élimination des particules insolubles peut être également réalisée par centrifugation (10000g, 15 minutes, 22° C).
L'extrait de polysaccharides de Ulva lactuca est maintenu sous vive agitation (1000 tr/min) à 80 °C et pH 7-7.5. On ajoute au milieu 60 ml d'une solution d' H202 à 35% pendant 1 heure à un débit de 1 ml/min à 60°C et en maintenant à pH 7-7.5 par ajout de NaOH (5M).
Après ajout complet de H2O2 (en 1 heure environ), l'agitation est maintenue durant 2 heures (500 tr/min) à 80°C et pH 7-7.5.
Le filtrat est ensuite concentré sous pression réduite à 40 °C jusqu'à un volume correspondant à 1/5 du volume initial.
Le concentrât est alors précipité dans 5 volumes d'éthanol 96° à 4°C sous agitation (500 tr/min) pendant 1 heure. Le précipitât obtenu est récupéré par filtration sur verre Fritté 3 (porosité <100 microns), trituré puis lavé avec 50 ml d'éthanol 96° pendant 30 minutes puis filtré sur verre Fritté 3.
Finalement, le précipitât est séché à l'étuve (40°C, 15 heures) puis broyé en fine poudre.
Le rendement de production des oligosaccharides de faibles poids moléculaires est de 80%.
Analyse Analyse des sucres constitutifs
L'hydrolyse des oligosaccharides est réalisée au TFA 2N. L'analyse des sucres constitutifs est effectuée par chromatographie ionique (HPAEC) en se référant à des bases de données monosaccharides (Acide glucuronique, Rhamnose) pour l'identification.
Détermination du poids moléculaire
Analyse par chromatographie d'exclusion stérique (SEC MALLS) avec l'utilisation de 2 colonnes de chromatographie OHPAK SB 804 et 806 HQ (Shodex). Dosage des groupements sulfates
Le dosage du taux de sulfate est réalisé selon la méthode turbidimétrique Baryum/gélatine de Dodgson et Price (1962).
Figure imgf000016_0001
Exemple 3 : Production d'oligosaccharides selon l'invention en continu et purification par Ultra Filtration Tangentielle On disperse 50g de poudre d'algue d'Ulva lactuca dans 1 litre d'eau à 90 °C sous vive agitation (1000 tr/min) pendant 2 heures. On ajoute ensuite au milieu 60 ml d'une solution d' H202 à 35% pendant 1 heure à un débit de 1 ml/min à 80°C et en maintenant à pH 5-8 par ajout de NaOH (5M). Après ajout complet de H2O2 (en 1 heure environ), l'agitation est maintenue durant 3 heures (500 tr/min) à 80°C et pH 5-8. Le mélange est ensuite filtré à chaud sur diatomée (50g) sur verre iritté 1. L'élimination des particules insolubles peut être également réalisé par centrifugation (10000g, 15 minutes, 22°C).
Le filtrat est alors concentré par ultrafiltration tangentielle sur membrane de 5 kilodaltons jusqu'à l'obtention d'un extrait concentré à 10% en matière sèche. Le concentrât est finalement atomisé en fine poudre d'oligosaccharides de faibles poids moléculaires.
Exemple 4 : Étude transcriptomique réalisée sur des fibroblastes humains cultivés in-vitro
Une étude transcriptomique a été réalisée sur des fibroblastes humains cultivés in-vitro en absence ou en présence d'oligosaccharides préparés selon les exemples 1 à 3 à la concentration de 0,05% en poids (soit 0,05g d'oligosaccharides pour 100g de milieu de culture cellulaire).
Lorsque les deux cultures cellulaires de fibroblastes sont arrivées à confluence, leurs A N totaux respectifs sont extraits puis reverse transcrits en ADN complémentaires mono brin (ADNc) respectifs marqués de façon différentielle (les ADNc issus des ARN extraits des fibroblastes cultivés dans la condition témoin sont marqués à la cyanine Cy3 et les ADNc issus des ARN extraits des fibroblastes cultivés dans la condition test sont marqués à la cyanine Cy5).
Ces deux types d'ADNc sont poolés et hybridés sur une puce à ADN contenant les 44.000 séquences du génome humain.
La lecture de la puce permet de déterminer la surexpression (marquage Cy5 supérieur au marquage Cy3 pour la séquence génétique hybridée concernée) et la sous-expression (marquage Cy5 inférieur au marquage Cy3 pour la séquence génétique hybridée concernée) des gènes induites par le traitement des fibroblastes avec les oligosaccharides selon la présente invention.
Lors de cette étude, il a été mis en évidence que les oligosaccharides utilisés entraînent notamment la surexpression des gènes FGF 1 , CCNA2 et RHAMM et la sous- expression des gènes ADAMTS, TMEM27 et ITH5. Tous ces gènes codent pour les protéines portant les mêmes noms et impliquées dans le métabolisme et la mise en place des molécules constituantes de la matrice extracellulaire. En effet, les protéines FGF1 et CCNA2 permettent la mobilisation des fîbroblastes et induisent la stimulation de la biosynthèse, par ces cellules, des deux principaux types de molécules constituantes de la matrice extracellulaire (collagènes et acide hyaluronique). Quant à la protéine RHAMM, celle-ci couplée au récepteur de l'acide hyaluronique participe à la fixation et à l'organisation de ce dernier permettant ainsi la mise en place et le maintien de l'architecture de la matrice extracellulaire.
De plus, la sous-expression des gènes ADAMTS et TMEM27 induit la diminution du catabolisme (dégradation) des molécules de collagènes en inhibant l'activité des des Matrix Metalloproteinases (MMP). Aussi, la sous-expression du gène ITH5 induit l'inhibition du catabolisme de l'acide hyaluronique.
En conclusion, l'étude transcriptomique a permis de mettre en évidence que les composés de la présente invention permettent la mise en place et le maintien de l'intégrité de la matrice extracellulaire i) en induisant la biosynthèse des molécules de collagènes et de l'acide hyaluronique (grâce à la surexpression des gènes FGF 1 et CCNA2), ii) en inhibant la dégradation de ces molécules constituantes (grâce à la sous- expression des gènes ADAMTS, TMEM27 et ITH5), iii) en favorisant la fixation et l'organisation des molécules d'acide hyaluronique (grâce à la surexpression du gène RHAMM).
Exemple 5 : étude in-vitro réalisée sur des fîbroblastes humains en culture
Une seconde étude in-vitro réalisée sur des fîbroblastes humains en culture en absence d'oligosaccharides selon la présente invention (condition témoin) ou en présence de trois concentrations de ces molécules 0,01 % - 0,02% et 0,05 % en poids (soit respectivement 0,01g - 0,02g et 0,05g - d'oligosaccharides pour 100g de milieu de culture) (conditions traitées).
Les cultures de fîbroblastes sont établies à partir de peau de prépuces humains récoltés lors de circoncisions et sont amplifiées en milieu de culture RPMI 1640 supplémenté par du sérum de veau fœtal, de la L-glutamine et de la gentamicine. Les essais sont réalisés sur des fîbroblastes, entre le 2eme et le 4eme passage, afin d'assurer une reproductibilité entre les différentes expérimentations. Les fîbroblastes sont ensemencés dans des boîtes de 25 cm2 à raison de 106 cellules par millilitre. Ils ont ensuite été incubés pendant 24 heures en absence (condition témoin) ou en présence de trois concentrations d'oligosaccharides de la présente invention (conditions traitées). Apr•ès 24 heures d'incubation, les fibroblastes sont récupérés par centrifugation puis sont t dosés :
les Matrix Metalloproteinases MMP1 et M M P 3 par analyse immunohistochimique en utilisant la technique ELISA,
l'acide hyaluronique par analyse immunohistochimique en utilisant la technique ELISA,
les collagènes totaux par dosage chromatographique. En effet, une fois centrifugés, les culots contenant les fibroblastes sont digérés par les collagénases (lmg/culot cellulaire) dans l'acide acétique 0,5 ml/1 pendant 24 heures à 4°C. Après centrifugation à 10000g, les collagènes sont précipités par le chlorure de sodium à 1M, le précipité est resuspendu puis dialysé. Les acides aminés primaires sont dérivés par l'acide ophtaldéhyde (OPA) éliminant ainsi leur interférence. L'hydroxyproline et la proline sont alors dérivées par le NBD- Cl par couplage des groupements aminés au NBD-C1. Le NBD-Hyp est séparé et identifié par HPLC en phase inverse. Pour la mise au point de la séparation des dérivés d'acides aminés, un couplage au NBD-C1 d'un standard contenant l'hydroxyproline est d'abord réalisé. L'hydroxyproline est dosée par mesure de la fluorescence après séparation par HPLC en phase inverse.
Tous les essais sont réalisés en triplicate et les résultats sont présentés dans le tableau ci-dessous. Les résultats présentés dans ce tableau sont calculés en comparaison avec la condition témoin (non traité).
Figure imgf000019_0001
Les résultats obtenus montrent que les oligosaccharides de la présente invention induisent une augmentation de la biosynthèse des principales molécules constituantes de la matrice extracellulaire, à savoir les collagènes et l'acide hyaluronique. Aussi, ces résultats mettent en évidence que ces oligosaccharides de la présente invention induisent une diminution de la production de Matrix Metalloproteinases (MMP1 et MMP3) responsables de la dégradation des molécules de collagènes.
Ces oligosaccharides entraînent donc la biosynthèse et empêchent la dégradation des principales molécules constituantes de la matrice extracellulaire.
Les composés de la présente invention peuvent donc être utilisés pour induire la biosynthèse et/ou l 'organisation des molécules constituantes de la matrice extracellulaire, et/ou pour diminuer leur dégradation, permettant ainsi la mise en place et le maintien de l'architecture de la matrice extracellulaire et donc pour prévenir et/ou traiter les signes de vieillissement cutané et/ou capillaire intrinsèques et/ou extrinsèques, notamment l'altération des structures et des fonctions cutanées et/ou capillaires, de l'altération de la régénération tissulaire, de relâchement tissulaire, de l'altération de la microcirculation cutanée et/ou capillaire, de l' altération de la détoxification cutanée, de la perte de l'uniformité, de l'éclat et de la brillance de la teinte (cutanée et/ou capillaire), de l'altération de la texture de surface cutanée (apparition de rides, de poches, sécheresse cutanée, etc.) et/ou capillaire (cheveux cassant), de l'altération de l'architecture cutanée et/ou capillaire (induisant notamment la chute des cheveux).
Exemple 6 : étude clinique réalisée sur des volontaires humains Une étude clinique a été réalisée en double aveugle sur 18 volontaires humains (18 femmes de type caucasien âgées de 56 ± 6 ans) afin d'estimer, au niveau du visage, les effets remodelant et re-scultant des oligosaccharides selon la présente invention. Durant 56 jours, chaque volontaire a appliqué, sur l'un de ses hémi-visages une formulation cosmétique contenant 2%, en poids, d'oligosaccharides selon la présente invention (soit 2g d'oligosaccharides selon la présente invention pour 100g de formulation) ; sur son autre hémi-visage une formulation cosmétique placébo (formulation de composition identique mais ne contenant pas d'oligosaccharides selon la présente invention). La répartition des hémi- visages a été réalisée de façon randomisée. Les effets remodelant et re-scultant, au niveau du visage, ont été évalués par deux techniques complémentaires :
la projection de franges permettant d'étudier la réduction du relâchement cutané au niveau des bajoues
et la ballistométrie permettant d'analyser la fermeté et l'élasticité cutanées.
La projection de franges permet une acquisition directe et immédiate de la morphologie du visage en trois dimensions et d'évaluer ainsi son volume. Cette technique permet une évaluation de la réduction du relâchement de l'ovale du visage (effet remodelant, re-scultant). Les informations tridimensionnelles sont calculées par la déformation des franges projetées à la surface du visage et enregistrées par une caméra digitale. L'analyse consiste en une superposition des images prises à différents temps de mesures. Ainsi, une région d'intérêt est définie au niveau du relâchement cutané. Cette zone est située au même endroit pour tous les temps de mesure chez un même sujet. Elle permet de calculer un volume entre cette zone d'intérêt et sa projection sur un plan de référence. Le paramètre analysé est le volume relatif des bajoues, exprimé en mm3. Une diminution de ce paramètre est synonyme d'un effet remodelant du produit testé.
La seconde technique utilisée, la ballistométrie, est basée sur l'utilisation d'une masse impactant la surface de la peau. Les propriétés biomécaniques de la peau sont alors mesurées grâce aux interactions peau-masse. En d'autres termes, un mouvement vibrationnel est imposé à la peau et est enregistré sur 3 secondes puis traduit en signaux électriques, puis quantifié et enfin évalués en termes d'amplitude. Les mesures permettent donc d'évaluer la fermeté et l'élasticité cutanées.
Ces mesures sont réalisées à l'aide d'un gabarit permettant des repositionnements précis de l'appareil de mesure pour tous les temps de mesures. Les paramètres mesurés sont :
l'indentation (en mm) correspondant à la hauteur du pic d'enregistrement de la pénétration de la pointe de la sonde dans la peau lors du premier impact. L'indentation montre la résistance de la peau lors de la pénétration de la sonde, et permet donc une estimation de la fermeté de la peau. Plus l'indentation est faible, plus la peau est ferme. Ainsi, une diminution de l'indentation révèle un effet raffermissant ;
l'alpha (sans unité) mesure l'énergie d'amortissement. L'alpha décrit l'énergie des rebonds de la sonde et donc la densité de la peau. Plus l'énergie est forte, plus la peau est dense. Ainsi, une augmentation de l'alpha démontre une peau plus dense ;
l'aire (en mm2), correspondant à l'aire sous la courbe, c'est-à-dire l'aire entre le profile des rebonds et l'axe des abscisses. L'aire représente les rebonds de la sonde et donc la mollesse (l'aspect flasque) de la peau : son relâchement. Plus l'aire est faible, plus la peau est ferme. Ainsi, une diminution de l'aire révèle une réduction du relâchement (augmentation de la fermeté).
Tous les résultats obtenus sont présentés dans le tableau ci-dessous. Les résultats présentés dans ce tableau sont calculés en comparaison avec les mesures enregistrées au démarrage de l'étude (tO), avant toute application de formulations cosmétiques.
Figure imgf000022_0001
Les résultats obtenus montrent que les oligosaccharides de la présente invention induisent :
un effet remodelant (diminution du volume de relâchement des bas-joues, mesuré par la technique de projection de franges),
un effet rescultant, en induisant un effet raffermissant (diminution du paramètre de l'indentation, mesurée par ballistométrie), en améliorant la densité cutanée (augmentation du paramètre alpha, mesurée par ballistométrie) et en diminuant le relâchement cutané (diminution du paramètre aire, mesurée par ballistométrie).

Claims

REVENDICATIONS
1. Oligosaccharide de formule générale (I)
Figure imgf000023_0001
dans laquelle :
R1 à R4 sont choisis indépendamment les uns des autres et indépendamment pour chaque unité rhamnose et/ou acide glycuronique comme étant un groupe hydroxy, alkyloxy, carboxy, alkoxycarbonyl, acyloxy, sulfate ou phosphate; ou un groupement -OCH2Ra, dans lequel Ra représente un groupe hydroxy, alkyloxy, acyloxy, sulfate ou phosphate;
- n est un entier inférieur ou égal à 50 et est choisi de manière à ce que le poids moléculaire soit supérieur ou égal à 5.000 Daltons et inférieur ou égal à 100.000 Daltons ;
ainsi que son sel pharmaceutiquement acceptable.
2. Oligosaccharide selon la revendication 1 , caractérisé en ce que les substituants R1 à R4 sont choisis indépendamment les uns des autres et indépendamment pour chaque unité rhamnose et/ou acide glycuronique comme étant hydroxy, alkyloxy, acyloxy, sulfate ou phosphate; ou un groupement -OCH2Ra.
3. Oligosaccharide selon la revendication 2, caractérisé en ce que les substituants R1 à R4 sont choisis indépendamment les uns des autres et indépendamment pour chaque unité rhamnose et/ou acide glycuronique comme étant un groupe hydroxy ou un groupe sulphate.
4. Oligosaccharide selon l'une des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que n est choisi de manière à ce que le poids moléculaire soit supérieur ou égal à 5.000 Daltons et inférieur ou égal à 50.000 Daltons.
5. Oligosaccharide selon la revendication 4, caractérisé en ce que n est choisi de manière à ce que le poids moléculaire soit supérieur ou égal à 5.000 Daltons et inférieur ou égal à 30.000 Daltons.
6. Oligosaccharide selon la revendication 4, caractérisé en ce que n est choisi de manière à ce que le poids moléculaire soit supérieur ou égal à 5.000 Daltons et inférieur ou égal à 25.000 Daltons.
7. Procédé de préparation d'un oligosaccharide selon l'une des revendications 1 à 6 comprenant les étapes suivantes :
a) dispersion de la poudre d'algue Ulva Lactuca dans l'eau à une température allant de 20°C à 100°C, le pH de la solution allant de 4 à 8 ;
b) ajout progressif de peroxyde d'hydrogène (H202), la température de la solution allant de 20°C à 100°C, le pH de la solution allant de 4 à 8 ;
c) maintien sous agitation, la température de la solution allant de 20°C à 100°C, le pH de la solution allant de 4 à 8 ;
d) fïltration ou centrifugation à température ambiante ;
e) concentration sous pression réduite ;
f) les molécules de faible poids moléculaire peuvent être purifié par :
ultrafiltration tangentielle puis atomisation en fine poudre;
- précipitation alcoo lique , fïltration, lavage et séchage des oligosaccharides obtenus.
8. Utilisation cosmétique d'un ou plusieurs oligosaccharides selon l'une quelconque des revendications 1 à 6 pour induire la biosynthèse et/ou l'organisation des molécules constituantes de la matrice extracellulaire, et/ou pour diminuer leur dégradation.
9. Utilisation cosmétique selon la revendication 8 pour la prévention et/ou le traitement des signes de vieillissement cutané et/ou capillaire intrinsèques et/ou extrinsèques, notamment l'altération des structures et des fonctions cutanées et/ou capillaires, l'altération de la régénération tissulaire, le relâchement tissulaire, l'altération de la micro circulation cutanée et/ou capillaire, l'altération de la détoxifïcation cutanée, la perte de l'uniformité, de l'éclat et de la brillance de la teinte cutanée et/ou capillaire, l'altération de la texture de surface cutanée, notamment l'apparition de rides, de poches et la sécheresse cutanée,, l'altération de la texture capillaire, notamment les cheveux cassant, et l'altération de l'architecture cutanée et/ou capillaire induisant notamment la chute des cheveux.
10. Composition cosmétique comprenant, à titre de principe actif, un ou plusieurs oligosaccharides selon l'une des revendications 1 à 6.
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