WO2014092529A1 - Biocontrol de nemátodos fitoparásitos mediante paecilomyces - Google Patents

Biocontrol de nemátodos fitoparásitos mediante paecilomyces Download PDF

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WO2014092529A1
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paecilomyces
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Gloria Luz Laura CARRIÓN VILLANOVO
Tania Isadora HERNÁNDEZ LEAL
José Daniel LÓPEZ LIMA
Ángel Enrique NÚÑEZ SÁNCHEZ
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    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
    • A01N63/30—Microbial fungi; Substances produced thereby or obtained therefrom
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
    • C12N1/145—Fungi isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/645—Fungi ; Processes using fungi
    • C12R2001/79—Paecilomyces

Definitions

  • the present invention relates to the use of Paecilomyces carneus for the prevention and / or control and / or eradication of phytoparasitic, migratory and sedentary endoparasites, semi-parasites and migratory and sedentary ectoparasites of the Anguinidae, Aphelenchidae, Aphelenchoididae families,
  • Heteroderidae Hoplolaimidae, Iotonchidae, Neotylenchidae, Pratylenchidae, Sphaerulariidae, Tilenchidae and
  • compositions and processes, product of the present invention are useful in the prevention and / or control, and / or eradication of phytoparasite nematodes that infect and / or infest the vast majority of crops for animal and human consumption, at the same time as they generate the optimal conditions in the soil to improve crop yield, with the alternative of obtaining organic products.
  • Pests are a biological factor that damages crops regardless of the region where they are found.
  • the damage caused by the pests in the crops reduces the quality of the product and the amount of production since they prevent the plants from having an optimal development and, depending on the plague and the level of infestation of these can cause the death of the host.
  • phytoparasitic nematodes which are microscopic and, depending on their life cycle, affect the plant in different ways.
  • Some of the damages that they cause in the crops are: wilting, chlorosis, dwarfism, rickets, defoliation, lack of vigor, necrosis of the affected parts resulting in a weak crop or the death of the same and, therefore, loss in the production.
  • microorganisms are used to control nematodes, among them are: Sphingobacterium strain spiritivorum C-926 and Corynobacterium paurometabolum C-924 (No. Pat. MX 250042) ' ; Pasteuria spp. (No. Pat. MX 193344); fungi of the genus Arthrobotrys (No. Pat. US 4,666,714); Bacillus thuringiensis (No. Pat. US 5,270,448); Streptomyces dicklowii ATCC 55274 (No. Pat. US 5,549,889); fungus
  • Pochonia chlamydosporia var. chlamydospor ⁇ a No. Pat. US2009169518
  • Verticillium chlamydosporium CC 334168 No. Pat. WO / 1991/001642
  • patent documents US 7,435,411 B2, CN101418264 and US 20050008619 describe the use of a composition containing Paecilomyces lilacinus for soil pest control; US 5,989,543, CN101422168, DE102005024783, CN101081982, CA2059642, US 5, 360,607, US 5, 989,543, CN101518265 describe the use of Paecilomyces lilacinus; Paecilomyces fumosoroseus, Paecilomyces lilacinus 251, Paecilomyces lilacinus 252, Paecilomyces lilacinus 253, and Paecilomyces lilacinus 254; and, Paecilomy
  • nematodes with the highest risk for crops are the binders of the genus Meloidogyne spp., among others; lesions and root borers that are migratory endoparasites among which are the nematodes of the genera Ditylenchus spp., Pratylenchus spp. and Radopholus spp., among others; and sedentary and migratory ectoparasites among which are the nematodes of the genera Helicotylenchus spp., Criconemoides spp. and X ⁇ phinema spp., among others.
  • Table 1 shows the main crops that are affected by these nematodes:
  • Cinnamo Cinnamon um zeylanicum Table 1 Crops affected by namatodes (Continued)
  • Vine vi is wine X X X X vinca from Madagascar Vinca rosea X
  • Sedentary endoparasitic nematodes are those that deform the roots of various cultures because they induce the overgrowth of cells at the feeding site within the root which causes gill formation ⁇ Mel idogyne spp.).
  • Endoparasitic migratory nematodes are completely introduced into the root of their host, moving into the cortex and feeding on the cytoplasm of the cells causing great destruction of tissues so they stunt the root system of plants (Ditylenchus spp., Pratylenchus spp. and Radopholus spp., among others).
  • the semi-parasitic nematodes are deeply fixed to the host plant, leaving part of the body exposed to the outside. Juveniles are released to the ground when hatching and subsequently fixed to the root of the plant (Heterodera spp. And Punctodera spp., Among others).
  • Sedentary ectoparasite nematodes introduce only the cephalic part of their body into the host plant and do not usually detach except for reproduction. Ovipositan directly on the ground (Helicotylenchus spp., Tylenchorhynchus spp. And Criconemoides spp., Among others).
  • Migratory ectoparasites feed on a site for a short time and only introduce the stylet into the root of the plant. Some induce syncytium formation; multinucleated cell with hyperplasia where the nematode is fed (Xiphinema spp., Longidorus spp. and Trichodorus spp., among others).
  • Agriculture is the most important productive sector in most of the countries, where it occupies an important place in the generation of jobs, the general increase in agricultural income is a necessary condition to stimulate the growth of the economy as a whole, including non-sectors farmers who sell ⁇ their products and services to the rural population.
  • Mexico has a national territory of 198 million hectares of which 145 million are dedicated to agricultural activity, which is why agriculture represents an important productive sector, with a 4% participation in the national Gross Domestic Product, is a fundamental activity in the rural environment, in which a highly significant part of the national population still lives.
  • the present invention relates to the use of the biologically pure strain of Paecilomyces carneus, RGM2140 deposited in the Chilean Collection of Microbial Genetic Resources, as well as the compositions, methods and use for the prevention and / or control and / or eradication of endoparasitic phytoparasite nematodes migratory and sedentary, semi-parasites and ectoparasites migratory and sedentary of the Anguinidae, Aphelenchidae Families,
  • Hemicycliophoridae Heteroder ⁇ dae, Hoplolaimidae, Iotonchidae, Neotylenchidae, Pratylenchidae, Sphaerulariidae, Tilenchidae and Tylenchulidae: Sub-order Tylenchina; Longidoridae: Dorylaimina sub-order;
  • Trichodoridae Sub-order Diphtherophorina, which infect and / or infest crops in order to obtain safe quality products for animal and human consumption.
  • FIGURE 1 Meloidogyne spp. parasitized by Paecilomyces carneus strain IE-431.
  • FIGURE Development of Paecilomyces carneus strain
  • FIGURE 3 Development of Paecilomyces carneus strain RGM2140 on Pratylenchus spp. at 120 hrs.
  • FIGURE 4 Pathogenicity chart of Paecilomyces carneus strain RGM2140 on Hoplolaimus spp.
  • FIGURE 5 Pathogenicity chart of Paecilomyces carneus strain RGM2140 on Criconemoides spp.
  • the present invention relates to the use and application of one or more Paecilomyces carneus cells for the control and / or prevention and / or eradication of phytoparasitic nematodes of the groups of: migratory endoparasites and / or sedentary endoparasites and / or semi-parasites and / or Migratory ectoparasites and / or sedentary ectoparasites of the Anguinidae, Aphelenchidae, Aphelenchoid ⁇ dae, Criconematidae, Dolichodoridae, Hemicycliophoridae families,
  • Paecilomyces carneus strains IE-412, I E-416, I E-418 (RGM2140), IE-419, IE-431, I E-451 and IE-452 are registered, conserved and stored in the fungal cepary from the Institute of Ecology AC (INECOL), the production and / or isolation and / or maintenance of said strains is carried out by reproduction in a solid culture medium consisting of at least one source of nitrogen and / or at least one source of carbon and / or by one or more mineral salts and / or at least one appropriate vehicle and / or at least one antibiotic agent and / or at least one growth potentiating agent.
  • the incubation temperature of the fungus in the culture medium is between 13 ° C and 37 ° C.
  • the propagation and / or reproduction of the fungus consists in the inoculation of cells in solid or liquid media compositions comprising one or more amino acids and / or one or more long chain carbohydrates and / or one or more mineral salts and / or one or more vehicles and / or one or more antibiotic agents and / or one or more pH regulating agents in sufficient amounts.
  • the culture is fixed or static and with uninterrupted oxygenation in a percentage between 40% and 90% of oxygen content to allow the optimal development of the Paecilomyces carneus fungus.
  • Paecilomyces carneus The mechanism of action of Paecilomyces carneus is characterized by the production of specific enzymes that allow it to degrade the cuticle and penetrate into the nematode in any of its stages (juvenile eggs and adults, among others) where it grows and reproduces until it causes the death of the different taxonomic groups of phytoparasitic nematodes.
  • the RGM2140 strain of Paecilomyces carneus is characterized by presenting the nucleotide sequence of coded DNA presented below:
  • the RG 2140 strain of Paecilomyces carneus has the following structural characteristics:
  • the width is 1.6 to 2.4 ⁇ .
  • the strain RGM2140 of Paeci ⁇ omyces carneus product of this invention, is characterized by the ability to infect and / or infest phytoparasitic nematodes of the groups of: migratory endoparasites and / or sedentary endoparasites and / or migratory endoparasites and / or ectoparasites and / or sedentary ectoparasites of the classification according to the molecular analysis proposed by De Ley P. and Blaxter. M.
  • strain IE-431 of Paeci ⁇ omyces carneus for control and / or prevention and / or eradication of migratory and sedentary endoparasite, semi-parasites and migratory and sedentary endoparasitic nematodes, it was determined that said strain even when it infects said nematodes, requires at least 15 days for uncontrolled infection and / or eradicate nematodes, except in the case of Meloidogyne spp.
  • strain RGM2140 of Paecilomyces carneus infests and / or infects phytoparasite nematodes in less than 72 hours, controlling and / or eradicating the families of nematodes mentioned above.
  • a first stage of evaluation of the effectiveness and efficacy of the RGM2140 strain of Paecilomyces carneus was carried out by placing cells (conidiospores and / or blastospores and the hyphae fragments) in suspension of Paecilomyces carneus RGM2140 in contact with migratory and sedentary endoparasitic nematodes, semi-parasites and Migratory and sedentary ectoparasites among which are: Meloidogyne spp., Pratylenchus spp., Radopholus spp., Helicotylenchus spp., Criconemoides spp .; Hoplolaimus spp .; Xiphinema spp. and, separately, the same nematodes were placed in contact with Paecilomyces carneus strain IE-431.
  • Helotial diseases such as Botrytis fabae (chocolate stain) and / or B. cinérea (gray rot) and / or diseases caused by Uredinales such as Uromyces spp. and / or Puccinia spp. and / or Tranzschelia spp. (rusts) that producers of various crops can no longer control with the chemicals sold in the market.
  • Lecanic ⁇ llium lecanii was used in early stages of plant development, applying it separately or in combination with Paec ⁇ lomyces carneus in the soil.
  • results were the significant reduction of thrips, white mosquito and aphid pests, and an almost total reduction of chocolate spots.
  • the crop is kept clean until the pod production and filling them in the case of the bean, that is, when the seed is ripe and ready to harvest.
  • Beauveria bassiana was applied to control Macrodactylus spp. In 2 or more days, this pest begins to die and significantly reduces its effects on crops. For best results, the Beauveria bassiana fungus is applied during tillage to affect the larval state before and thus decrease the population.
  • the results obtained were an increase in the yield of the bean plants in the plots treated with biological control, in comparison with the chemical control plots (50% less pods) and the control plot.
  • the RG 2140 strain of Paecilomyces carneus is characterized in that it reduces the population of nematodes from the first application with a total effectiveness reached in three to five days in nematodes of the Anguinidae and / or Aphelenchidae and / or Aphelenchoididae and / or Aphelenchoididae families and / or Criconematidae and / or Dolichodoridae and / or Hemicycliophoridae and / or Heteroderidae and / or Hoplolaimidae and / or Iotonchidae and / or Neotylenchidae and / or Pratylenchidae and / or Sphaerulariidae and / or Tilenchidae and / or Tylenchida T / n and Tylenchida order and / or Longidoridae: Sub
  • strain IE-431 fails to carry out its nematicidal action in most of the aforementioned phytoparasites, but is extremely effective and specific in endoparasitic and / or semi-parasitic nematodes of the Heteroderidae Family.
  • the present invention describes a method for the isolation and / or maintenance and / or mass reproduction of Paecilomyces carneus, as well as the use and / or application thereof for the control and / or prevention and / or eradication of nematodes that infect and / or infest the cultivation areas of chard, agave, avocado, garlic, alfalfa, cotton, custard apple, rubber tree, myrtle, rice, oats, baricoco, bamboo, begonia, eggplant, broccoli, peanut, coffee, cocoa, caimito, zucchini, squash, zucchini, capsulein, casuarina, camellia, sweet potato, cinnamon, sugar cane, carambola, apricot, safflower, barley, onion, cedar, citron or citron, plum, citrus, coconut, cabbage, cauliflower, carnation, chrysanthemum, cuajinicuil or jinicuilo, chicozapote, pea, chili, peach, e
  • compositions with Paecilomyces carneus cells can be developed for application in the form of a suspension, granules, powder, lyophilized, pellets, controlled release forms, ecological pump, gel, jellies, pastes, capsules, immobilized cells, emulsion, microemulsion , solution and / or combinations thereof.
  • a suspension, granules, powder, lyophilized, pellets, controlled release forms, ecological pump, gel, jellies, pastes, capsules, immobilized cells, emulsion, microemulsion , solution and / or combinations thereof Eg emplos
  • Example 1 Composition 1 of Paecilomyces carneus strain
  • Example 3 Composition 3 of Paecilomyces carneus strain RGM2140.
  • E employ 4: Composition 4 for maintenance isolation of Paecilomyces carneus strain RGM2140.
  • Example 5 Composition 5 for the maintenance isolation of Paecilomyces carneus strain RGM2140.
  • compositions of Paecilomyces carneus generally consists of:
  • One or more applications of the Paecilomyces carneus composition or compositions is made to the soil at least 10 days before sowing for disinfection thereof.
  • the number of applications is a function of the phytoparasite nematode species and its population density.
  • composition (s) are applied in the groove before depositing the seed and / or directly in the seed a little before sowing.
  • composition (s) is carried out after sowing and / or during crop development.
  • the application of the composition (s) to the soil is carried out to prevent new infestations and / or control and / or eradicate the population of remaining phytoparasite nematodes.
  • the soil is prepared for the next crop cycle.
  • one or more biological agents can be added for the control of nematodes selected from the following: Bacillus thuringiensis, Bacillus thuringiensis ATCC 55273, Bacillus firmus CNCMI-1582, Sph ⁇ ngobacterium strain spiritivorum, Corynobacteriu paurometabolum, Arthrobotrys spp.
  • Pasteuria penetrans 98-35 Streptomyces dicklowii, Stevia rebaudiana, Streptomyces rubrogriseus, Pochonia chlamydospor ⁇ a, Monacrospor ⁇ um ullum, Bacillus amyloliquefaciens, Verticillium chlamydosporium CC 334168, Bacillus subtillisNo. DSM17231 and / or Bacillus licheniformis DSM 17236, Verticillium chlamydosporium, Paecilomyces lilacinus, Paecilomyces fumosoroseus,
  • the present invention provides the following advantages:
  • the nematicidal compositions obtained are harmless to humans, plants and animals.
  • the specificity is due to the production of specific enzymes that attack phytoparasite nematodes without affecting the free-living nematodes beneficial to the agroecosystem.

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Abstract

La presente invención se refiere al uso de Paecilomyces carneus para la prevención y/o control y/o erradicación de nemátodos fitoparásitos, endoparásitos migratorios y sedentarios, semiendoparásitos y ectoparásitos migratorios y sedentarios de las familias Anguinidae, Aphelenchidae, Aphelenchoididae, Criconematidae, Dolichodoridae, Hemicycliophoridae, Heteroderidae, Hoplolaimidae, Iotonchidae, Neotylenchidae, Pratylenchidae, Sphaerulariidae, Tilenchidae y Tylenchulidae: Sub-orden Tylenchina; Longidoridae: Sub-orden Dorylaimina; Trichodoridae: Sub-orden Diphtherophorina. Las composiciones y procesos, producto de la presente invención son útiles en la prevención y/o control y/o erradicación de nemátodos fitoparásitos que infectan y/o infestan a la gran mayoría de cultivos para consumo animal y humano, al mismo tiempo que se generan las condiciones óptimas en el suelo para mejorar el rendimiento del cultivo, con la alternativa de obtener productos orgánicos.

Description

BIOCONTROL DE NEMÁTODOS FITOPARÁSITOS MEDIANTE PAECILOMYCES
Campo de la Invención
La presente invención se refiere al uso de Paecilomyces carneus para la prevención y/o control y/o erradicación de nemátodos fitoparásitos , endoparásitos migratorios y sedentarios, semiendoparásitos y ectoparásitos migratorios y sedentarios de las familias Anguinidae, Aphelenchidae, Aphelenchoididae,
Criconematidae , Dolichodoridae , Hemicycliophoridae,
Heteroderidae , Hoplolaimidae, Iotonchidae, Neotylenchidae, Pratylenchidae , Sphaerulariidae, Tilenchidae y
Tylenchul idae : Sub-orden Tylenchina; Longidoridae: Suborden Dorylaimina ; Trichodoridae: Sub-orden Diphtherophorina. Las composiciones y procesos, producto de la presente invención son útiles en la prevención y/o control, y/o erradicación de nemátodos fitoparásitos que infectan y/o infestan a la gran mayoría de cultivos para consumo animal y humano, al mismo tiempo que se generan las condiciones óptimas en el suelo para mejorar el rendimiento del cultivo, con la alternativa de obtener productos orgánicos .
Antecedentes de la Invención
Las plagas, son un factor biológico que daña a los cultivos sin importar la región donde se encuentren. El daño causado por las plagas en los cultivos reduce la calidad del producto y la cantidad de producción ya que le impiden a las plantas tener un óptimo desarrollo y, dependiendo de la plaga y el nivel de infestación de éstas pueden llegar a causar la muerte del hospedero.
Dentro de las plagas que afectan a los cultivos de manera significativa, tanto en calidad, como en cantidad, son los nemátodos fitoparásitos , los cuales son microscópicos y dependiendo de su ciclo de vida afectan a la planta en diferentes formas. Algunos de los daños que provocan en los cultivos son: marchitez, clorosis, enanismo, raquitismo, defoliación, falta de vigor, necrosis de las partes afectadas resultando en un cultivo débil o la muerte del mismo y, por lo tanto pérdida en la producción. En el esfuerzo para controlar las plagas que atacan a los cultivos, los agricultores se ven en la necesidad de utilizar plaguicidas químicos, algunas de las desventajas que presentan éstos es el alto riesgo que representan al momento de su aplicación; la presencia de éstos en los productos alimenticios puede resultar en daños a la salud de los consumidores; asimismo la modificación del pH y contenido de minerales en cantidades fitotóxicas como consecuencia de la aplicación excesiva de plaguicidas químicos deriva en la pérdida de la fertilidad del suelo; también pueden tener un efecto en la calidad del producto; así como la generación de resistencia de las plagas a los agentes químicos lo que resulta en la necesidad de aplicar mayor cantidad de los mismos.
En el estado de la técnica, se describen diferentes métodos para el control de nemátodos, entre ellos se encuentran métodos químicos como pueden ser: uso de 2R, 5R- dihidroximetil-3R, 4R-dihidroxipirrolidina (No. Pat.
WO/1999/ 059414); un agente químico con la fórmula condensada C27H30O9 (No. Pat.' WO/1993/002083 ) ; al uso de Fluopiram para el control de nemátodos (No. Pat. WO/2012/038476) ; composición de fertilizante a base de 1 a 70% de hipofosfito de potasio y fosfito de amonio, 1-30% de fertilizante bórico (No. Pat. CN101 92323 ) , entre otras.
Por otra parte, existen métodos biológicos donde se emplean microorganismos para el control de nemátodos, entre éstos se encuentran: Sphingobacterium cepa spiritivorum C- 926 y Corynobacterium paurometabolum C-924 (No. Pat. MX 250042)'; Pasteuria spp. (No. Pat. MX 193344); hongos del género Arthrobotrys (No. Pat. US 4,666,714); Bacillus thuringiensis (No. Pat. US 5,270,448); Streptomyces dicklowii ATCC 55274 (No. Pat. US 5,549,889); hongo
Pochonia chlamydosporia var. chlamydosporía (No. Pat. US2009169518) ; Verticillium chlamydosporium CC 334168 (No. Pat. WO/1991/001642) , entre otras.
Otra opción es la combinación de compuestos químicos con agentes biológicos como pueden ser: Buprofezina y Paecilomyces sp. (No. Pat. US 5,885,598); Silafluofen y/o Etofenprox con Paecilomyces sp. (No. Pat. US 5,888,989), entre otras. Por último, se encuentran los métodos que implican la modificación genética para generar cultivos resistentes a los nemátodos tal y como los descritos en los siguientes documentos de patente: GEP20002245, US 6,294,712, US 7,576,261, CN1903014, WO/ 2003/ 080838 , entre otros .
Las desventajas que se han observado en los métodos químicos son los descritos anteriormente por la aplicación de nematicidas; en cuanto a la combinación de agentes químicos con agentes biológicos, aún cuando en ocasiones se logra disminuir la cantidad del agente químico, las desventajas no desaparecen; la modificación genética de los cultivos para crear cultivos resistentes, es una opción que, además de un costo elevado, presenta el riesgo a largo plazo para los consumidores ya que no se puede tener la seguridad de la implicación que tendrá el consumo de dichos productos a largo plazo.
En la actualidad, los métodos biológicos son de los más aceptados y convenientes ya que se utilizan microorganismos que son inocuos para el consumidor final y ayudan a conservar la calidad de los suelos, de los cultivos y por lo tanto del producto final.
En la actualidad, el hongo del género Paecilomyces spp. se emplea como nematicida ya que ataca a los nemátodos de una manera efectiva y sin dañar los cultivos, los documentos de patente US 7,435,411 B2, CN101418264 y US 20050008619 describen el uso de una composición que contiene Paecilomyces lilacinus para el control de plagas en suelo; los documentos de patente US 5,989,543, CN101422168, DE102005024783, CN101081982, CA2059642, US 5, 360,607, US 5, 989,543, CN101518265 describen el uso de Paecilomyces lilacinus; Paecilomyces fumosoroseus , Paecilomyces lilacinus 251, Paecilomyces lilacinus 252, Paecilomyces lilacinus 253, y Paecilomyces lilacinus 254; y, Paecilomyces cicadae para el control de nemátodos y, finalmente, en la solicitud de patente MX/a/2011/004510 se describe el uso de Paecilomyces carneus cepa IE-431 para la prevención y/o control y/o erradicación de nemátodos formadores de quistes en cultivos de Solanáceas.
Entre los nemátodos de mayor riesgo para los cultivos se encuentran los agalladores del género Meloidogyne spp., entre otros; los lesionadores y barrenadores de raíz que son endoparásitos migratorios entre los que se encuentran los nemátodos de los géneros Ditylenchus spp., Pratylenchus spp. y Radopholus spp., entre otros; y ectoparásitos sedentarios y migratorios entre los que se encuentran los nemátodos de los géneros Helicotylenchus spp., Criconemoides spp. y Xíphinema spp., entre otros. En la Tabla 1 se muestran los principales cultivos que son afectados por dichos nemátodos:
Tabla 1. Cultivos afectados por nemátodos
Figure imgf000007_0001
Agave Agave atrovirens X X
Aguacate Persea americana X X
Ajo Allium sativum X
Alfalfa Medicago sativa X X
Algodón Gossypium hirsutu X X
Anonas Anona spp.
Árbol del caucho Hevea brasíliensís
Arroz Oryza sativa X
Avena Avena sativa X
Bambú Bambusa spp.
Begonia Begonia spp. X
Berenj ena Solanum melongena X
Cacahuate Arachis hypogea X
Café Coffea arábica X
Cacao Theobroma cacao X
Calabazita Cucúrbita pepo X
Casuarina Casuarina spp.
Camelia Camelia spp. X
Camote Ipomea batatas X
Canela Cinnamo um zeylanicum Tabla 1. Cultivos afectados por namatodos (Continuación)
Figure imgf000008_0001
Cártamo Carthamus tinctoríus X X
Cebolla blanca Allium cepa X X X
Cedro Chamaecyparis spp. X
Cítricos Citrus spp. X X X X X X X
Cocotero Cocos nucífera X
Coliflor Brassica olerácea var. Botrytis X X X X X
Clavel Dianthus caryophyllus X X X X
Crysantemo Chrysantemum morifolium X
Chayóte Sechium edule X X
Chile Capsicum annum X X X X
Durazno Prunus p rsica X X X X X
Epazote Chenopodium ambrisioides X
Espinaca Spinacea olerácea X
Estrop'aj o Lufa cylindrica X
Fresa Fragaria spp. X X X X X X
Fresno blanco Fraxinus americana X
Frijol Phaseolus vulgaris X X X X X
Gardenia Gardenia jasminoides X X
Garbanzo Cicer arietium X X
Gladiola Gladiolus spp. X
Guayaba Psidiu guajava spp. X
Haba Vicia faba X
Higo Ficus carica X
Jicama Pachirizus angulatus X
Lechuga Lactuca sativa X X X
Limón Citrus limón X
Maíz Zea mays X X X X X X
Manzano Malus spp. X X X X X
Mango Manguitera índica X X X X
Margarita Aster spp. X
Margariton Chrysantemum máximum X X
Melón Cucu is eló X X X X X
Menta Mentha piperita X X X X
Ñame Dioscorea spp. X
Nogal Juglans regia X X X X X
Nopal Opuntia spp. X X Tabla 1. Cultivos afectados por netoatodos (Continuación)
Figure imgf000009_0001
Papaya Carica papaya X X X
Papa Solanum tuberosum X X X X X X
Pasto Ec inocloa spp. X X X X X X
Pepino Cucumis sativus X X
Plátano Musa spp. X X X X X X
Pimienta gorda Pimenta dioica X
Pino Pinus spp X X
Pino de México Pinus hartwegii X
Piña X X X X X
Pomelo Citrus máxima X
Sandía Citrullus lanatus X X X
Sauce blanco Salix alba X
Sorgo Sorghum vulgare X X X
Soya Glycine max X X X
Tabaco Nicotiana tabacum X X X X
Tomate Lycopersicon esculentum X X X X
Tomate de cascara P ysalis spp. X X
Trigo harinero Triticum aestivu X X
Trigo Fagopyrum escullen vm X
Vid vi is vinífera X X X X vinca de Madagascar Vinca rosea X
Violeta africana Saint paulina spp. X
Zanahoria Daucus carota X
Los nemátodos endoparásitos sedentarios son aquellos que deforman las raíces de diversos cultivos debido a que inducen el crecimiento excesivo de las células en el sitio de alimentación dentro de la raíz lo cual ocasiona la formación de agallas {Mel idogyne spp.) .
Los nemátodos endoparásitos migratorios se introducen completamente en la raíz de su hospedero, desplazándose en el córtex y alimentándose del citoplasma de las células causando gran destrucción de tejidos por lo que atrofian el sistema radicular de las plantas (Ditylenchus spp., Pratylenchus spp. y Radopholus spp., entre otros) .
Los nemátodos semiendoparásitos se fijan profundamente a la planta hospedera, dejando parte del cuerpo expuesto al exterior. Los juveniles se liberan al suelo al eclosionar para posteriormente fijarse a la raíz de la planta (Heterodera spp. y Punctodera spp., entre otros) .
Los nemátodos ectoparásitos sedentarios introducen solo la parte cefálica de su cuerpo en la planta hospedera y no suelen desprenderse salvo para la reproducción. Ovipositan directamente en el suelo (Helicotylenchus spp., Tylenchorhynchus spp. y Criconemoides spp., entre otros) .
Los ectoparásitos migratorios se alimentan en un sitio durante un tiempo corto y únicamente introducen el estilete en la raíz de la planta. Algunos inducen la formación de sincitios; célula multinucleada con hiperplasia donde se alimenta el nemátodo (Xiphinema spp., Longidorus spp. y Trichodorus spp., entre otros).
La agricultura constituye el sector productivo más importante en la mayoría de los países, donde ocupa un lugar importante en la generación de empleos, el aumento general de los ingresos agrícolas es condición necesaria para estimular el crecimiento del conjunto de la economía, incluidos los sectores no agrícolas que venden ■ sus productos y servicios a la población rural.
México cuenta con un territorio nacional de 198 millones de hectáreas de las cuales 145 millones se dedican a la actividad agropecuaria, es por esto que la agricultura representa un sector productivo importante, con una participación del 4% en el Producto Interno Bruto nacional, es una actividad fundamental en el medio rural, en el cual habita todavía una parte altamente significativa de la población nacional.
Las diferencias climáticas entre las diferentes regiones del mundo e inclusive, entre las regiones de cada país son significativas en cuanto a clima y ecosistema, por lo que el control de plagas en los cultivos de dichas regiones es de vital importancia para que los agricultores sean competitivos a nivel nacional e internacional.
Por lo anterior, es necesario contar con un método de control de plagas tal que funcione en diferentes condiciones del suelo y del ambiente, que además no afecte la calidad del producto ni la salud de los productores y/o consumidores, en la presente invención se describe el uso de un hongo para el control de nemátodos que presenta una eficacia y eficiencia sobresalientes y de bajo costo.
Objeto de la Invención
La presente invención se refiere al uso de la cepa biológicamente pura de Paecilomyces carneus, RGM2140 depositada en la Colección Chilena de Recursos Genéticos Microbianos, así como las composiciones, métodos y uso para la prevención y/o control y/o erradicación de nemátodos fitoparásitos endoparásitos migratorios y sedentarios, semiendoparásitos y ectoparásitos migratorios y sedentarios de las Familias Anguinidae, Aphelenchidae,
Aphelenchoididae, Criconematidae, Dolichodoridae,
Hemicycliophoridae, Heteroderídae, Hoplolaimidae, Iotonchidae, Neotylenchidae, Pratylenchidae, Sphaerulariidae, Tilenchidae y Tylenchulidae : Sub-orden Tylenchina; Longidoridae : Sub-orden Dorylaimina;
Trichodoridae : Sub-orden Diphtherophorina, que infectan y/o infestan cultivos con la finalidad de obtener productos inocuos de calidad para consumo animal y humano.
Breve Descripción de las Figuras de la Invención
FIGURA 1. Meloidogyne spp. parasitada por Paecilomyces carneus cepa IE-431.
FIGURA 2. Desarrollo de Paecilomyces carneus cepa
RGM2140 sobre Pratylenchus spp. a las 72 hrs
FIGURA 3. Desarrollo de Paecilomyces carneus cepa RGM2140 sobre Pratylenchus spp. a las 120 hrs.
FIGURA 4. Gráfica de Patogenicidad de Paecilomyces carneus cepa RGM2140 sobre Hoplolaimus spp.
FIGURA 5. Gráfica de Patogenicidad de Paecilomyces carneus cepa RGM2140 sobre Criconemoides spp.
Descripción Detallada de la Invención
La presente invención se relaciona al uso y aplicación de una o más células de Paecilomyces carneus para el control y/o prevención y/o erradicación de nemátodos fitoparásitos de los grupos de: endoparásitos migratorios y/o endoparásitos sedentarios y/o semiendoparásitos y/o ectoparásitos migratorios y/o ectoparásitos sedentarios de las Familias Anguinidae, Aphelenchidae , Aphelenchoidídae, Criconematidae , Dolichodoridae, Hemicycliophoridae,
Heteroderidae, Hoplola imidae , Iotonchidae , Neotylenchidae, Pra tylenchidae , Sphaerulariidae , Tilenchidae y Tylenchulidae: Sub-orden Tylenchina; Longidoridae: Sub- orden Dorylaimina ; Trichodoridae: Sub-orden
Diphtherophorina que infectan y/o infestan los suelos de cultivos .
Las cepas de Paecilomyces carneus IE-412, I E-416, I E- 418 (RGM2140), IE-419, IE-431, I E-451 y IE-452 se encuentran registradas, conservadas y almacenadas en el cepario de hongos del Instituto de Ecología A.C. (INECOL) , la producción y/o aislamiento y/o mantenimiento de dichas cepas se lleva a cabo mediante su reproducción en un medio de cultivo sólido constituido por al menos una fuente de nitrógeno y/o al menos una fuente de carbono y/o por una o más sales minerales y/o al menos un vehículo apropiado y/o al menos un agente antibiótico y/o al menos un agente potencíador del crecimiento. La temperatura de incubación del hongo en el medio de cultivo se encuentra entre 13°C y 37°C.
La propagación y/o reproducción del hongo consiste en la inoculación de células en composiciones de medios sólidos o líquidos que comprenden uno o más aminoácidos y/o uno o más carbohidratos de cadena larga y/o una o más sales minerales y/o uno o más vehículos y/o uno o más agentes antibióticos y/o uno o más agentes reguladores de pH en cantidades suficientes. El cultivo es fijo o estático y con oxigenación ininterrumpida en un porcentaje entre el 40% y 90% de contenido de oxígeno para permitir el desarrollo óptimo del hongo Paecilomyces carneus.
El mecanismo de acción de Paecilomyces carneus se caracteriza por la producción de enzimas específicas que le permiten degradar la cutícula y penetrar al interior del nemátodo en cualquiera de sus estadios (huevos juveniles y adultos, entre otros) donde crece y se reproduce hasta provocar la muerte de los diferentes grupos taxonómicos de nemátodos fitoparásitos .
La cepa RGM2140de Paecilomyces carneus se caracteriza por presentar la secuencia de nucleótidos de DNA codificado que se presenta a continuación:
GGGATCATTACCGAGTTTACAACTCCCAAACCCCCTGTGAACTTATACCATTTA CTGTTGCTTCGGCGGGTCACGGCCCCGGGGAAGGACAGCGGTCGCCGTCAGGCCTCAGC TGCCCGCCCCCGGAAACAGGCGCCCGCCGGGGAACTCAAACTCTTCTGTATTTCTTTAT CTAATATATACTGTCTGAGTAAAAACTAAAATGAATCAAAACTTTCAACAACGGATCTC TTGGTTCTGGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAAGTAATGTGAATTGCAGAA TTCAGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACATTGCGCCCGCCAGTATTCTGGCGGGCAT GCCTGTTCGAGCGTCATTTCAACCCTCAAGTCCCCTGTGGACTCGGTGTTGGGGACCGG CGAGACAGCCGCGGATCTTCTTCCGCAGCGAGTCGCCGCCCCCCAAATGACTTGGCGGC CTCGTCGCGGCCCTCCTCTGCGTAGTATAGCACACCTCGCAACAGGAGCCCGGCGAATG GCCACTGCCGTAAAACCCCCCAACTTTTTCAGAGTTGACCTCGAATCAGGTAGGAATAC CCGCTGAACTTAAGCATATCA
La cepa RG 2140 de Paecilomyces carneus presenta las siguientes características estructurales:
Micelio con crecimiento radial, conidióforos erectos, en PDA crece 12 mm en 10 días, micelio blanco velloso polvoso, en EMA crece de 9 a 11 mm en diez días. En ambos medios tíñe el reverso de la placa de medio de cultivo de color verde oscuro 29F8 de acuerdo a la carta de colores Farver y Farver de anscher y Kornerup de 1961. Micelio blanco, textura filamentosa polvosa. En agar avena (AA) crece 18 a 20 mm en diez días. Micelio con textura polvosa debido a la esporulación, la cual se torna de blanca a ligeramente rosácea 7A2 en AA en un tiempo mayor a 55 días después de inoculados. Tiñe ligeramente el medio de cultivo en el reverso de la caja de amarillo grisáceo 3C3 ó 3C4 de manera irregular después de 35 días, y en las partes más viejas de color verde olivo 3E7. Células conidiógenas en forma de botella, adelgazándose hacia la punta en un cuello muy delgado, monofialidicas , o en verticilios bien definidos de 2 a 5 células, aunque predominan los grupos de 3 a 4 células, con una longitud mínima de: 7.2 a 8.8μπι; la longitud más frecuente es de: 9.6 a 10.4μιτι y la mayor longitud está entre: 11 a 14.4 μπι. El ancho es de 1.6 a 2.4μηι. Conidios subglobosos, elipsoidales a esféricos, equinulados, dispuestos en cadenas. Las esporas miden de 2.4 a 4. Ομιτι de longitud y de ancho 1.6 a 2.4μιη. En discos de 5mm, la esporulación es de 25 x 106 esporas.
La cepa RGM2140, de Paeciíomyces carneus producto de esta invención, se caracteriza por contar con la capacidad de infectar y/o infestar nemátodos fitoparásitos de los grupos de: endoparásitos migratorios y/o endoparásitos sedentarios y/o semiendoparásitos y/o ectoparásitos migratorios y/o ectoparásitos sedentarios de la clasificación de acuerdo con el análisis molecular propuesto por De Ley P. y Blaxter. M. en el 2004, de las siguientes familias: Anguinidae y/o Aphelenchídae y/o Aphelenchoididae y/o Críconema tidae y/o Dolichodoridae y/o Hemicycliophoridae y/o Heteroderidae y/o Hoplolaimidae y/o Iotonchidae y/o Neotylenchidae y/o Pratylenchidae y/o Sphaerulariidae y/o Tilenchidae y/o Tylenchulidae: Suborden Tylenchína ; y/o Longidoridae: Sub-orden Dorylaimina; y/o Trichodoridae: Sub-orden Diphtherophorina .
Durante la investigación del uso y la aplicación de la cepa IE-431 de Paeciíomyces carneus para el control y/o prevención y/o erradicación de nemátodos fitoparásitos endoparásitos migratorios y sedentarios, semiendoparásitos y ectoparásitos migratorios y sedentarios, se determinó que dicha cepa aún cuando infecta a dichos nemátodos, requiere de mínimo 15 días para la infección sin controlar y/o erradicar los nemátodos, excepto en el caso de Meloidogyne spp. De manera sorprendente y no esperada se determinó que la cepa RGM2140 de Paecilomyces carneus infesta y/o infecta a los nemátodos fitoparásitos en un tiempo menor a 72 horas, controlando y/o erradicando a las familias de nemátodos antes mencionadas.
Una primera etapa de evaluación de la efectividad y eficacia de la cepa RGM2140 de Paecilomyces carneus, se realizó colocando células (conidiosporas y/o blastosporas yl fragmentos de hifas) en suspensión de Paecilomyces carneus RGM2140 en contacto con nemátodos endoparásitos migratorios y sedentarios, semiendoparásitos y ectoparásitos migratorios y sedentarios entre los que se encuentran: Meloidogyne spp., Pratylenchus spp., Radopholus spp., Helicotylenchus spp., Criconemoides spp.; Hoplolaimus spp.; Xiphinema spp. y, de manera separada, se colocaron los mismos nemátodos en contacto con Paecilomyces carneus cepa IE-431.
Los resultados de esta primera etapa, para la cepa de Paecilomyces carneus IE-431 fueron los siguientes:
1. Se reduce la viabilidad de las masas, de huevos, juveniles y adultos de nemátodos del género Meloidogyne spp.
2. A las 24 horas de haber sido puestos en contacto, el hongo germinó y penetró al hospedero. 3. A las 72 horas el micelio se encontró en desarrollo tanto en el interior como en el exterior de las masas de huevos y hembras de Meloidogyne spp.
4. Ά las 120 horas el hongo invadió completamente el total de la masa de huevos y el interior de las hembras de
Meloidogyne spp. (Figura 1) .
Los resultados de esta primera etapa, para la cepa IE- 431 de Paecilomyces carneus con Pratylenchus spp., Hoplolaimus spp. y Criconemoides spp. fueron los siguientes :
1. A las 120 horas de haber sido puestos en contacto, se visualizó algunas esporas del hongo germinando sobre la cutícula del nemátodo.
2. A los 15 días, el micelio se encontró con un incipiente desarrollo en el exterior del nemátodo, por lo que no es posible el control y/o erradicación del mismo.
Los resultados de esta primera etapa, para la cepa de Paecilomyces carneus RGM2140 con Pratylenchus spp. fueron los siguientes:
1. A las 48 horas de haber sido puestos en contacto, el hongo germinó y penetró al nemátodo.
2. De 72 (Figura 2) a 120 horas (Figura 3) el micelio se encontró en desarrollo tanto en el interior como en el exterior del nemátodo, lo que indica el potencial de control y/o erradicación del mismo.
En una segunda etapa, se realizó la evaluación de la patogenicidad expresada como % de mortalidad con la cepa RGM2140 de Paecilomyces carneus en contacto con nemátodos ectoparásitos (Figura 4) :
1. Se obtuvo el 26% de mortalidad en los individuos de Hoplolaimus spp. a las 24 horas de exposición a Paecilomyces carneus RGM2140.
2. A las 72 h de exposición . al hongo se encontró un 68% de mortalidad en Hoplolaimus spp.
3. A las 120 h de exposición al hongo se encontró un
78% de mortalidad de los individuos de Hoplolaimus spp.
4. Por el contrario en el tratamiento Testigo únicamente se encontró el 26% de individuos de Hoplolaimus spp. muertos a las 120 h después del inicio del experimento.
En la evaluación de la patogenicidad expresada como % de mortalidad con la cepa RGM2140 de Paecilomyces carneus en contacto con Criconemoides spp. (Figura 5):
1. Se obtuvo el 46% de mortalidad de individuos de Criconemoides spp. a las 24 h de exposición a la cepa
RG 2140de Paecilomyces carneus.
2. A las 72 h de exposición a la cepa RG 2140 de Paecilomyces carneus se encontró más del 80% de individuos de Criconemoides spp. parasitados por el hongo.
3. Finalmente a las 120 h de haber infectado a los nemátodos Criconemoides spp. con la cepa RGM2140 de Paecilomyces carneus se encontró el 96% de los individuos muertos y con esporulacion visible.
4. Por el contrario en el tratamiento Testigo, a las 120 h no se observó evidencia de micelio y únicamente se encontró un porcentaje de mortalidad del 16.6%.
En una tercera etapa, se realizó el uso combinado del procedimiento de aplicación de Paecilomyces carneus con la rotación de cultivos y aplicación de Beauveria bassiana y Lecanicillium lecanii para el combate en paralelo con otras plagas existentes en los cultivos como pueden ser: thrips (Orden Thysanoptera) , mosquita blanca (Orden Hemiptera) , pulgón Aphis spp. (Orden Hemiptera) (las cuales pueden afectar a la planta desde sus etapas tempranas, por lo cual afectan significativamente a la producción) y el tache o frailecillo, Macrodactylus spp. (orden Coleóptera) , que es un insecto omnívoro y, puede acabar con un cultivo en pocos días; y, enfermedades causadas por Helotiales como Botrytis fabae (mancha chocolate) y/o B. cinérea (podredumbre gris) y/o enfermedades causadas por Uredinales como Uromyces spp. y/o Puccinia spp. y/o Tranzschelia spp. (royas) que los productores de diversos cultivos ya no pueden controlar con los productos químicos que se venden en el mercado.
Para la prevención y/o control y/o erradicación de nemátodos y además de dichas plagas y enfermedades, se utilizó Lecanicíllium lecanii en etapas tempranas del desarrollo de las plantas, aplicándolo por separado o en combinación con Paecílomyces carneus en el suelo.
Los resultados sorprendentemente obtenidos fueron la reducción significativa de las plagas de thrips, mosquita blanca y pulgón, y una reducción casi total de las manchas chocolate. En cuanto a la roya, el cultivo se mantiene limpio hasta la producción de vaina y llenado de las mismas en el caso del haba, es decir, cuando la semilla está madura y lista para cosechar.
De manera adicional, se aplicó Beauveria bassiana para el control de Macrodactylus spp. En 2 o más días dicha plaga empieza a morir y disminuye significativamente su afectación a los cultivos. Para obtener mejores resultados, se aplica el hongo Beauveria bassiana durante la labranza para afectar desde antes el estado larvario y asi disminuir la población.
Los resultados obtenidos, fueron un incremento en el rendimiento de las plantas de haba en las parcelas tratadas con control biológico, en comparación con las parcelas de control químico (50% menos vainas) y la parcela testigo.
Por lo tanto, la cepa RG 2140 de Paecilomyces carneus se caracteriza porque reduce la población de nemátodos desde la primera aplicación con una efectividad total alcanzada en tres a cinco días en nemátodos de las Familias Anguinidae y/o Aphelenchidae y/o Aphelenchoididae y/o Criconematidae y/o Dolichodoridae y/o Hemicycliophoridae y/o Heteroderidae y/o Hoplolaimidae y/o Iotonchidae y/o Neotylenchidae y/o Pratylenchidae y/o Sphaerulariidae y/o Tilenchidae y/o Tylenchulidae : Sub-orden Tylenchina; y/o Longidoridae : Sub-orden Dorylaimina ; y/o Trichodoridae : Sub-orden Diphtherophorina . En cambio, la cepa IE-431 no logra llevar a cabo su acción nematicida en la mayoría de los fitoparásitos antes mencionados, pero resulta extremadamente efectiva y especifica en nemátodos endoparásitos y/o semiendoparásitos de la Familia Heteroderidae.
La presente invención describe un método para el aislamiento y/o mantenimiento y/o reproducción masiva de Paecilomyces carneus, así como el uso y/o aplicación de la misma para el control y/o prevención y/o erradicación de nemátodos que infectan y/o infestan las áreas de cultivo de acelga, agave, aguacate, ajo, alfalfa, algodón, anonas, árbol del caucho, arrayán, arroz, avena, baricoco, bambú, begonia, berenjena, brócoli, cacahuate, café, cacao, caimito, calabacita, calabaza, calabacín, capulín, casuarina, camelia, camote, canela, caña de azúcar, carambola, chabacano, cártamo, cebada, cebolla, cedro, cidra o citro, ciruela, cítricos, cocotero, col, coliflor, clavel, crisantemo, cuajinicuil o jinicuilo, chicozapote, chícharo, chile, durazno, epazote, espinaca, estropajo, frambuesa, fresa, fresno, frijol, gardenia, garbanzo, gladiola, granada, guayaba, haba, higo, jicama, lechuga, lima, limón, maíz, mamey, mandarina, manzano, mango, margarita, margariton, melón, membrillo, menta, mora, ñame, naranja, nectarina, nogal, nopal, okra, papaya, papa, pastos, pepino, pera, plátano, pimienta, pino, piña, pitahaya, pomelo, sandía, sauce blanco, satsumas o tangerinas, sorgo, soya, tabaco, tomate, tomate de cáscara, toronja, trigo, vid, vinca de Madagascar, violeta africana, zanahoria, jobo, chapóte amarillo, chirimoya, guanábana, icaco, marañon, melón, níspero, pepino cohombro, persimón, pomarrosa, sandia, zapote amarillo, zapote blanco, zapote negro, zaramuyo o saramuya, entre otras cultivos donde se propagan este tipo de parásitos.
Para la preparación de composiciones con células de Paecilomyces carneus pueden desarrollarse para su aplicación en forma de suspensión, gránulos, polvo, liofilizados, pellets, formas de liberación controlada, bomba ecológica, gel, jaleas, pastas, cápsulas, células inmovilizadas, emulsión, microemulsión, solución y/o combinaciones de las mismas. Ej emplos
A continuación se presentan de manera descriptiva no limitativa, composiciones nematicidas de Paecilomyces carneus obtenidas:
Ejemplo 1: Composición 1 de Paecilomyces carneus cepa
RGM2140.
Figure imgf000022_0001
Ej emplo 2 : Composición 2 de Paecilomyces carneus cepa RGM2140.
COMPONENTE CANTIDAD
Células de Paecilomyces
0.5 x 107 células/mL carneus
Avena 20-50 g/L
Levadura 0.1-5.0 g/L
Cloranfenicol 1000 mg
Agua c.b.p. 1000 mL Ejemplo 3: Composición 3 de Paecilomyces carneus cepa RGM2140.
Figure imgf000023_0001
E emplo 4 : Composición 4 para el aislamiento mantenimiento de Paecilomyces carneus cepa RGM2140.
Figure imgf000023_0002
Ejemplo 5: Composición 5 para el aislamiento mantenimiento de Paecilomyces carneus cepa RGM2140.
Figure imgf000023_0003
método de aplicación de una o más composiciones de Paecilomyces carneus consiste de manera general en:
Una o más aplicaciones de la o las composiciones de Paecilomyces carneus se realiza al suelo al menos 10 días antes de la siembra para la desinfección del mismo. El número de aplicaciones está en función de la especie del nemátodo fitoparásito y su densidad de población.
En el caso de cultivos cuya siembra se realiza a partir de: tubérculos, bulbos, rizomas, cormos, entre otros, consiste en sumergirlos en la o las composiciones por al menos una hora antes de la siembra.
Para el ■ trasplante de cultivos arbustivos y/o arbóreos, la aplicación se realiza de manera directa a la raíz de la planta y/o al suelo donde se sembrará.
Cuando se trate de cultivos sembrados a partir de semillas, la o las composiciones se aplican en el surco antes de depositar la semilla y/o directamente en la semilla un poco antes de la siembra.
De manera opcional y no limitativa, la aplicación de la o las composiciones se realiza después de la siembra y/o durante el desarrollo del cultivo.
Durante y/o después de la cosecha y/o durante el periodo de rotación de cultivo y/o descanso del suelo, se lleva a cabo la aplicación de la o las composiciones al suelo para prevenir nuevas infestaciones y/o controlar y/o erradicar la población de nemátodos fitoparásitos remanentes. Con esta práctica se prepara al suelo para el siguiente ciclo de cultivo.
De manera complementaria, a dicha composición puede adicionarse uno o más agentes biológicos para el control de nemátodos seleccionados de los siguientes: Bacillus thuringiensis , Bacillus thuringiensis ATCC 55273, Bacillus firmus CNCMI-1582 , Sphíngobacterium cepa spiritivorum, Corynobacteriu paurometabolum, Arthrobotrys spp. , Pasteuria penetrans 98-35, Streptomyces dicklowii , Stevia rebaudiana , Streptomyces rubrogriseus , Pochonia chlamydosporía , Monacrosporíum ullum, Bacillus amyloliquefaciens, Verticillium chlamydosporium CC 334168, Bacillus subtillisNo. DSM17231 y/o Bacillus licheniformis DSM 17236, Verticillium chlamydosporium, Paecilomyces lilacinus , Paecilomyces fumosoroseus,
Paecilomyces lilacinus 251, Paecilomyces lilacinus 252, Paecilomyces lilacinus 253, y Paecilomyces lilacinus 254, Rhizoctonia solani AG-4, Fusarium oxysporum, Pythium sp., Phytophthora nicotiana , Verticillium dahliae, Paecilomyces cicadae, Sphingobacterium spíitivorum C-926 y/o Corynebacterium paurometabolum C-924 Paecilomyces carneus cepa IE-431 y/o Beauveria bassiana y/o Lecanicillium lecanii y/o Calcarisporium spp. y/o combinaciones de las mismas .
De manera integral, la presente invención proporciona las siguientes ventajas:
1. Método biológico para el manejo racional de nemátodos plaga en cultivos.
2. Mejoramiento de la calidad del suelo de cultivos.
3. Recuperación de suelos dañados por uso de agentes químicos como plaguicidas .
4. Obtención de productos agrícolas y recursos forestales de calidad.
5. Mejoramiento en el rendimiento de los cultivos y/o recursos forestales. 6. Favorece la disposición de macroelementos como el fósforo en el suelo a la planta y mejora la fertilidad del suelo. Su eficiencia de solubilización de fosfatos es comparable a la que presentan Penicillium spp. y Aspergillus spp.
7. La erradicación de los nemátodos fitoparásitos se observa desde la primera aplicación en menor · tiempo comparado con otros tipos de control.
8. Las composiciones nematicidas obtenidas son inocuas para el ser humano, las plantas y los animales.
9. Permite la combinación con otros métodos de control como la rotación de cultivo, descanso del suelo entre otros.
10. Es un método sustentable de prevención y/o control y/o erradicación de nemátodos fitoparásitos , de fácil manejo y/o aplicación.
11. Es un método económico y rentable a corto, mediano y largo plazo.
12. La especificidad obedece a la producción de enzimas especificas que atacan a los nemátodos fitoparásitos sin afectar a los nemátodos de vida libre benéficos al agroecosistema .

Claims

I 25 REIVINDICACIONES
1. Uso del hongo Paecilomyces carneus para el control y/o prevención y/o erradicación de nematodos fitoparásitos .
2. Uso del hongo Paecilomyces carneus de conformidad con la reivindicación 1, para el control y/o prevención y/o erradicación de nemátodos fitoparásitos en donde dichos nemátodos fitoparásitos se seleccionan del grupo consistente en: endoparásitos migratorios y/o endoparásitos sedentarios y/o semiendoparásitos y/o ectoparásitos migratorios y/o ectoparásitos sedentarios o combinaciones de los mismos.
3. Uso del hongo Paecilomyces carneus de conformidad con las reivindicaciones 1 y 2, en donde los nemátodos fitoparásitos pertenecen a las Familias: Anguinidae,
Aphelenchidae, Aphelenchoididae, Criconematidae,
Dolichodoridae, Hemicycliphoridae Heteroderidae,
Hoplolaimidae, Iotonchidae, Neotylenchidae , Pratylenchidae,
Sphaerulariidae, Tilenchidae y Tylenchulidae : Sub-orden
Tylenchina; Longidoridae : Sub-orden Dorylaimina;
Trichodoridae : Sub-orden Diphtherophorina y/o combinaciones de las mismas.
4. Uso del hongo Paecilomyces carneus de conformidad con la reivindicaciones 1 a 3, en donde los nemátodos fitoparásitos pertenecen a los géneros: Aphelenchus spp.
y/o Aphelencoides spp. y/o Meloidogyne spp. y/o
Pratylenchus spp. y/o Radopholus spp. y/o Helicotylenchus spp. y/o Criconema spp. y/o Cactodera spp. y/o Tylenchulus spp. y/o Punctodera spp. y/o Nacobbus spp. y/o Rotylenchus spp. y/o Rotylenchulus spp. y/o Tylenchus spp. y/o Ditylenchus spp. y/o Belonolaimus spp. y/o Criconeflioides spp. y/o Hoplolaimus spp. y/o Xiphinema spp. y/o Heterodera spp. y/o Longidorus spp. y/o Trichodorus spp. y/o Discocriconemella spp. y/o Hemicycliophora spp-, Para tylenchus spp. y/o Tylenchorhínchus spp. y/o combinaciones de los mismos.
5. Uso del hongo Paecilomyces carneus de conformidad con la reivindicaciones 1 a 4, aplicado junto con Lecanicillium lecanii y/o Beauveria bassiana para el control y/o prevención y/o erradicación de insectos plaga en donde dichos insectos plaga se seleccionan del Orden de: Thysanoptera y/o Hemiptera y/o Hemiptera y/o Coleóptera o combinaciones de los mismos.
6. Uso del hongo Paecilomyces carneus de conformidad con la reivindicaciones 1 a 5, aplicado junto con Lecanicillium lecanii y/o Calcarisporium arbuscula y/o Calcarisporium ovalisporum para el control y/o prevención y/o erradicación de enfermedades causadas por hongos en donde dichos hongos se seleccionan del grupo consistente en: Helotiales como Botrytis fabae y/o B. cinérea y/o Uredinales (royas) como Uromyces spp. y/o Puccinia spp. y/o Tranzschelia spp. y/o enfermedades de la raíz de varios cultivos como Rhizoctonia spp. y/o Fusarium spp. y/o combinaciones de los mismos.
7. Un cultivo biológicamente puro de Paecilomyces carneus cepa RGM2140 depositada en el Banco de Recursos Genéticos Microbianos de la Colección Chilena de Recursos Genéticos Microbianos (CChRGM) en Chile, correspondiente a la (cepa IE418 depositada en el cepario del Instituto de Ecología, A.C. de Xalapa, Veracruz), caracterizada porque presenta la secuencia genética:
gggatcatta ccgagtttac aactcccaaa ccccctgtga acttatacca tttactgttg 60 cttcggcggg tcacggcccc ggggaaggac agcggtcgcc gtcaggcctc agctgcccgc 120 ccccggaaac aggcgcccgc cggggaactc aaactcttct gtatttcttt atctaatata 180 tactgtctga gtaaaaacta aaatgaatca aaactttcaa caacggatct cttggttctg 240 gcatcgatga agaacgcagc gaaatgcgat aagtaatgtg aattgcagaa ttcagtgaat 300 catcgaatct ttgaacgcac attgcgcccg ccagtattct ggcgggcatg cctgttcgag 360 cgtcatttca accctcaagt cccctgtgga ctcggtgttg gggaccggcg agacagccgc 420 ggatcttctt ccgcagcgag tcgccgcccc ccaaatgact tggcggcctc gtcgcggccc 480 tcctctgcgt agtatagcac acctcgcaac aggagcccgg cgaatggcca ctgccgtaaa 540 accccccaac tttttcagag ttgacctcga atcaggtagg aatacccgct gaacttaagc 600 atatca 606 8. Composición nematicida que comprende el hongo de conformidad con las reivindicaciones 1 a 7, caracterizada porque comprende a) una o más células de Paecilomyces carneus y/o b) al menos un agente propagador de Paecilomyces carneus y/o c) al menos un agente antibiótico y/o d) al menos un acarreador de células y/o e) al menos un agente regulador de pH y/o f) al menos un aditivo y/'o g) al menos un dispositivo para la aplicación de la composición nematicida .
9. Composición de conformidad con la reivindicación 8, caracterizada porque el agente propagador de Paecilomyces carneus consiste en: una o más fuentes de carbohidratos obtenidos de: zanahoria, papa, avena, centeno, malta, camote, cebada, maíz, arroz, trigo, yuca, sorgo y/o combinaciones de los mismos.
10. Composición de conformidad con las reivindicaciones 8 y 9 caracterizada porque contiene como agente nematicida, células de Paecilomyces carneus solas o en combinación con uno o más agentes de control biológico seleccionados de Bacillus thuringiensis, Bacillus thuringiensis ATCC 55273, Bacillus firmus CNC I-1582, Sphingobacterium spiritivorum, Corynobacterium paurometabolum, Arthrobotrys spp., Pasteuria penetrans 98- 35, Streptomyces dicklowii , Stevia rebaudiana , Streptomyces rubrogriseus, Pochonia chlamydosporia , Monacrosporium ullum, Bacillus amyloliquefacíens, Verticillium chlamydosporium CC 334168, Bacillus subtillis No. DSM17231 y/o Bacillus licheniformis DSM 17236, Verticillium chlamydosporium, Paecilomyces lilacinus, Paecilomyces fumosoroseus, Paecilomyces lilacinus 251, Paecilomyces lilacinus 252, Paecilomyces lilacinus
253, Paecilomyces lilacinus 254, Rhizoctonia solani AG-4, Fusarium oxysporu , Pythium sp . , Phytophthora nicotiana, Verticillium dahliae, Paecilomyces cicadae,
Sphingobacterium spiitivorum C-926 y/o Corynebacterium paurometabolum C-924, Paecilomyces carneus cepa IE-431, Lecanicillium lecanii, Beauveria bassiana , Calcarisporium arbuscula , Calcarisporium ovalisporum y/o extractos vegetales utilizados para el control de plagas y/o combinaciones de las mismas.
11. El procedimiento para la prevención y/o control y/o erradicación de nemátodos fitoparásitos caracterizado porque comprende los pasos de: 1) desinfección del suelo mediante la aplicación de Paecilomyces carneus al suelo al menos 10 días antes de la siembra y/o desinfección de tubérculos y/o bulbos y/o rizomas y/o cormos y/o raices y/o suelo y/o semillas mediante la aplicación directa de Paecilomyces carneus al menos una hora antes de la siembra y/o 2) controlar de la densidad de población de nemátodos fitoparásitos mediante la aplicación de Paecilomyces carneus al suelo después de la siembra y/o durante el desarrollo del cultivo y/o 3) erradicar los nemátodos fitoparásitos mediante la aplicación de Paecilomyces carneus al suelo durante y/o después de la cosecha y/o durante el periodo de rotación de cultivo y/o descanso del suelo .
12. Uso del hongo Paecilomyces carneus de conformidad con las reivindicaciones 1 a 11 para el control y/o prevención y/o erradicación de una o más especies de nemátodos agalladores de la raiz del cafeto.
13. Uso del hongo Paecilomyces carneus de conformidad con las reivindicaciones 1 a 12 en combinación con Lecanicillium lecanii y/o Calcarisporium arbuscula y/o Calcarisporium ovalisporum para el control y/o prevención y/o erradicación de la corchosis provocada por uno o más nemátodos agalladores de la raiz y/o uno o más hongos fitoparásitos del cafeto.
14. Uso del hongo Paecilomyces carneus de conformidad con las reivindicaciones 1 a 11 en combinación con Lecanicillium lecanii y/o Calcarisporium arbuscula y/o Calcarisporium ovalisporum para el control y/o prevención y/o erradicación de la costra negra de la papa provocada por el hongo Rhizoctonia solani .
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