WO2014104757A1 - Btk 키나아제 억제제로서의 2,3-디하이드로-이소인돌-1-온 유도체 및 이를 함유하는 약학적 조성물 - Google Patents

Btk 키나아제 억제제로서의 2,3-디하이드로-이소인돌-1-온 유도체 및 이를 함유하는 약학적 조성물 Download PDF

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Definitions

  • the compound represented by the following formula (1) pharmaceutically acceptable salts thereof, esters, prodrugs, hydrates, solvates, and isomers thereof, and a protein kinase containing the same as an active ingredient Or to pharmaceutical compositions for the treatment, alleviation or prevention of diseases associated with deregulated activity.
  • Bruton's tyrosine kinase (BTK) enzyme is known as the non-receptor tyrosine kinase belonging to the Tec family and consists of 650 amino acid residues, the pleckstrin homology domain (PH-domain), and zinc finger. It has a zinc-finger region, an SH3 domain (SH3 domain), an SH2 domain (SH2 domain), and a kinase domain (domain). Among these, the kinase region is a trend of increasing interest as a medical target.
  • BTK kinase is distributed in B-cells or hematopoietic cells, except for some T-cells, natural killer cells, and plasma cells, and through the transmission of B cell membrane receptor (BCR) signals caused by various inflammatory reactions or cancer.
  • BCR B cell membrane receptor
  • Activated BTK activates downstream signaling systems such as Phospholipase C gamma 2 (PLC y 2) to secrete NF- ⁇ and cytokines such as TNF- ⁇ and IL-6. Plays a key role in promoting
  • BTK mediates reactions of membrane receptors such as B-cell antigen receptors, CD40, TLR-4 and Fcg, which capture signals of pro-inflammatory agents in B-cells. It is known to block the IgE signaling by inhibiting this enzyme because it has an important effect on the signaling mechanism of inflammation caused by the activation of mast cells, B-cells and macrophage. In addition, it can suppress the progress of the disease.
  • This signal transduction mechanism is a complex signal transduction process of secretion of immune substances, and this process is carried out through various steps of phosphorylation and dephosphorylation of proteins, among which BTK is a SYK (spleen tyrosine kinase) in the inflammatory mechanism signal transduction system.
  • BTK is one of the higher levels and is more effective in preventing the activation of elements that cause immune reactions than other kinase targets.
  • BCRs B cell membrane receptors
  • It can be effective in treating the same cancer.
  • Pharmacyclics Ibrutinib (PCI-32765) has recently been approved as an anticancer drug for chronic lymphocytic leukemia (CLL), followed by Avila's AVL-292 compound (small lymphocytic leukemia, SIX).
  • CLL chronic lymphocytic leukemia
  • SIX small lymphocytic leukemia
  • phase 3 clinical trials for CLL These compounds have relatively strong strengths for rare SLL and CLL while the patients do not have much effect on diffuse large B-cell lymphoma (DLBCL). The need continues to be demanded.
  • An object of the present invention consists of a compound represented by the following formula (1), a pharmaceutically acceptable salt thereof, an ester, a prodrug, a hydrate, a solvate, and an isomer thereof To provide a compound selected from the group.
  • the present invention provides a pharmaceutical composition for treating, alleviating or preventing a disease associated with abnormal or deregulated activity of a protein kinase containing the compound as an active ingredient.
  • Ri and 3 ⁇ 4 are each independently hydrogen or d- 3 alkyl
  • R 3 to R 7 are each independently halogen, cyano, nitro or d- 3 haloalkyl.
  • the present invention also provides a pharmaceutical composition for treating, alleviating or preventing a disease associated with abnormal or deregulated activity of protein kinase, comprising the compound as an active ingredient. DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION Hereinafter, the present invention will be described in more detail.
  • the present invention provides a compound selected from the group consisting of a compound represented by the following formula (1), a pharmaceutically acceptable salt thereof, an ester, a prodrug, a hydrate, a solvate, and isomers thereof:
  • l and 3 ⁇ 4 are each independently hydrogen or d- 3 alkyl
  • 3 ⁇ 4 to R 7 are each independently hydrogen or an electron withdrawing substituent, and the electron withdrawing substituent is, for example, halogen, cyano, nitro or d- 3 haloalkyl.
  • to R 7 may be each independently hydrogen, fluoro, chloro, bromo, iodo, cyano, nitro, difluoromethyl or trifluoromethyl.
  • Ri and R 2 are each independently hydrogen or methyl;
  • R 3 to R 7 are each independently hydrogen, fluoro, chloro, cyano or trifluoromethyl
  • R 8 may be hydrogen or fluoro.
  • halo or halogen means fluorine, chlorine, bromide or iodine unless stated otherwise.
  • alkyl refers to a straight or branched hydrocarbon moiety unless stated otherwise.
  • the compounds of the formula (I) according to the present invention can be used in the form of pharmaceutically acceptable salts derived from inorganic or organic acids, which include non-toxic acid addition salts containing pharmaceutically acceptable silver silver.
  • Acids for example hydrochloric acid, sulfuric acid, nitric acid, phosphoric acid, hydrobromic acid, inorganic acids such as hydroiodic iodide, tartaric acid, formic acid, citric acid, acetic acid, trichloroacetic acid, trifluoroacetic acid, gluconic acid, benzoic acid, lactic acid
  • Acid addition salts formed by organic carbon acids such as maleic acid, fumaric acid, methanesulfonic acid, bansulfonic acid, sulfonic acids such as P-luenesulfonic acid or naphthalenesulfonic acid, and the like, particularly preferably sulfuric acid, methanesulfonic acid, or hydrofluoric acid.
  • the 'pharmaceutically acceptable salt' of the compound of Formula 1 may be prepared and used from the compound of Formula 1 using conventional methods.
  • the pharmaceutically acceptable salt according to the present invention may be prepared by dissolving the compound of Formula 1 in a water-soluble organic solvent such as acetone, methanol, ethanol, or acetonitrile and adding an excess of an organic acid or an aqueous acid solution of an inorganic acid. After addition, it can be prepared by precipitation or crystallization. This mixture can then be evaporated and dried to evaporate the solvent or excess acid to obtain additional salts or to precipitate prepared salts by suction filtration.
  • n is 0 or 1 selected from the group consisting of cycloalkyl, aryl, heteroaryl (bonded with an oxygen atom via a ring carbon) and heterocyclocyclic (bonded via a ring carbon) It refers to a chemical moiety with COOR '.
  • the term 'prodrug' refers to a drug that is transformed into a parent drug in vivo. They are often useful because prodrugs may be easier to administer than the parent drug in some situations. For example, they are biologically available by oral administration but the parent drug is not biologically available. The prodrug may also have improved solubility in pharmaceutical compositions for the parent drug.
  • the water solubility of the drug adversely affects mobility to the cell membrane
  • it may be administered as an ester form prodrug to promote drug delivery through the cell membrane, and the ester form prodrug may be metabolically metabolized in the cell. And it can be hydrolyzed to the active entity (active entity).
  • the compound of formula 1 according to the present invention may include hydrates and solvates that may be prepared therefrom.
  • the compounds of formula 1 according to the present invention may have an asymmetric carbon center, and therefore may include isomers, the isomers may be enantiomers, diastereomers or racemic mixtures, all of these isomers and mixtures It is included in the scope of the invention.
  • Specific examples of the compound represented by Formula 1 of the present invention are as follows.
  • Compounds represented by the formula (1), pharmaceutically acceptable salts thereof, esters, prodrugs, hydrates, solvates, and isomers thereof are selected from the group consisting of ABL Abelson tyrosine kinase (ACL), AC (Activated cdc42-associated kinase) ), AXL, Aurora, B lymphoid tyrosine kinase (BLK), Bon marrow X— linked kinase (BMX), Bruton's tyrosine kinase (BTK), Cycl in-dependent kinase (BTK), C_Src kinase (CSK), DDR ( Di scoidin domain receptor (EPHA), Ephrin type A receptor kinase (EPHA), Fer (fps / fes related) tyrosine kinase (FER), Fel ine sarcoma oncogene (FES), Fibroblast growth factor receptor (FG
  • the present invention is an abnormal or deregulated protein kinase of a compound selected from the group consisting of a compound represented by the formula (1), a pharmaceutically acceptable salt, ester, prodrug, hydrate, solvate and isomer thereof It provides a use for the treatment, alleviation or prevention of a disease associated with the activated activity and for the manufacture of a pharmaceutical preparation therefor.
  • the present invention is a mammal in need of an effective amount of a compound selected from the group consisting of the compound represented by the formula (1), pharmaceutically acceptable salts, esters, prodrugs, hydrates, solvates and isomers thereof
  • the present invention is a protein kinase comprising a compound selected from the group consisting of a compound represented by the formula (1), pharmaceutically acceptable salts, esters, prodrugs, hydrates, solvates and isomers thereof as an active ingredient It provides a pharmaceutical composition for the treatment, alleviation or prevention of diseases associated with abnormal or deregulated activity of.
  • Diseases associated with kinase activity include any disease associated with abnormal or deregulated activity of protein kinases, and specifically include inflammation, asthma, allergies, atopic dermatitis or psoriasis related to cancer, rheumatoid arthritis and osteoarthritis. However, it is not limited thereto.
  • the cancer may include lymphoma, leukemia, hematologic cancer, stomach cancer, non-small cell lung cancer, liver cancer, colon cancer, small intestine cancer, pancreatic cancer, brain cancer, bone cancer, melanoma, breast cancer, sclerotic adenocarcinoma, uterine cancer, cervical cancer, ovarian cancer and head and neck cancer.
  • Esophageal cancer, thyroid cancer, parathyroid cancer, kidney cancer, sarcoma, prostate cancer, urethral cancer, bladder cancer, fibroadenoma, or glioblastoma but is not limited thereto.
  • the pharmaceutical composition may further include one or more selected from the group consisting of antibiotics, alkylating agents, anti-metabolic agents, hormones, immunological agents, interferon agents and anticancer agents.
  • the pharmaceutical composition of the present invention may comprise directly or together with a suitable carrier or excipient well known in the art.
  • the method of treatment, alleviation, or prevention using the pharmaceutical composition may be, for example, in an amount effective for a subject having or at risk for anemia due to chronic renal failure, diabetes, cancer, AIDS, radiation therapy, chemotherapy, kidney dialysis, or surgery. It may include a method for administering a pharmaceutical composition comprising a compound of.
  • the subject can be a mammal, and in the most preferred embodiment the subject can be a human.
  • an effective amount of the pharmaceutical composition of the present invention can be easily determined by routine experimentation to be the most effective and convenient route and the most suitable formulation.
  • suitable routes of administration include intramuscular, subcutaneous, intramedullary injections, including intradural, direct intraventricular, intravenous, intraperitoneal, intranasal, or intraocular injections; Or intestinal administration and parenteral delivery (see Gennaro, AR, ed. (1995) Remington's Pharmaceutical Sciences).
  • the agent or composition may be administered topically rather than systemically.
  • a suitable agent can be delivered by injection or through a targeted drug delivery system such as a storage or sustained release formulation.
  • compositions of the present invention may be prepared by any of the well known methods, such as conventional mixing, dissolving, granulating, dragging, powdering, emulsifying, encapsulating, encapsulating, or lyophilizing processes.
  • composition of the present invention One or more physiologically acceptable carriers for the preparation of the processing of the active molecule for pharmaceutical use, such as excipients and auxiliaries, may be included.
  • compositions may be formulated with physiologically compatible buffers such as aqueous solutions, preferably Hanks' solutions, Ringer's solutions, or physiological saline buffers.
  • physiologically compatible buffers such as aqueous solutions, preferably Hanks' solutions, Ringer's solutions, or physiological saline buffers.
  • penetrants suitable for penetration into the mucosa may be used in the formulation. Such penetrants are generally known in the art.
  • the compounds of the invention can be prepared in a formulation for oral administration.
  • the compounds of the present invention can be readily formulated by combining with pharmaceutically acceptable carriers known in the art.
  • the compound of the present invention may be formulated into tablets, pills, dragees, capsules, liquids, gels, syrups, slurries, suspensions, and the like to enable oral ingestion by the subject.
  • the compounds may also be formulated in rectal compositions such as suppositories or retention enemas, eg, containing conventional suppository bases such as cocoa butter or other glycerides.
  • compositions for oral use can be prepared as solid excipients, if desired, after the addition of suitable auxiliaries to obtain tablets or dragee cores, optionally grinding the resulting mixture and processing the particulate mixture.
  • suitable excipients include, in particular, fillers such as sugars, including lactose, sucrose, manny, or sorbitan; Salose and / or polyvinylpides such as corn starch, wheat starch, rice starch, potato starch, gelatin, tragacanth gum, methyl cellulose, hydroxypropylmethyl-cellulose, sodium carboxymethyl cellulose Lollidon (PVP) formulations are mentioned.
  • disintegrants such as cross-linked polyvinyl pyridone, agar, or salts thereof such as alginic acid or sodium alginate can be added.
  • wetting agents such as sodium dodecyl sulfate may be included.
  • Dragee cores are provided with suitable coatings.
  • suitable coatings For this purpose, concentrated sugar solutions can be used, which optionally contain gum arabic, talc, polyvinyl pyridone, carbopol gel, polyethylene glycol, and / or titanium dioxide, lacquer Solutions, and suitable organic solvents or solvent mixtures.
  • Dyestuffs or pigments may be added to the tablets or dragee coatings for identification or to characterize other combinations of active compound doses.
  • compositions for oral administration include soft, sealed capsules made of gelatin and pushpin fit (push) capsules made of gelatin, including plasticizers such as glycerol or sorbide.
  • Push-fit capsules are compatible with fillers such as lactose, binders such as starch, and / or lubricants such as talc or magnesium stearate, and optionally stabilizers and may contain the active ingredient.
  • the active compounds may be dissolved or suspended in suitable liquids such as fatty oils, liquid paraffin, or liquid polyethylene glycols, and stabilizers may also be added. All formulations for oral administration should be in dosages suitable for such administration.
  • the compounds of the present invention may be administered transdermally or topically, such as through a skin patch.
  • Such transdermal or topical formulations may additionally include one or multiple infiltration enhancers or other effectors comprising agents that enhance the transport of the delivered compound.
  • Transdermal or topical administration may be preferably used, for example in situations where location specific delivery is desired.
  • the compounds according to the invention are pressurized packs comprising suitable propellants, such as dichlorodifluoromethane, trichlorofluoromethane, dichlorotetrafluoroethane, carbon dioxide, or another suitable gas, or It can conveniently be delivered from the nebulizer in the form of an aerosol spray.
  • a suitable dosage unit can be determined by providing a valve for delivering a metered amount.
  • capsules and cartridges of gelatin may be formulated for use in an inhaler or blower. These may typically contain a powder mix of the compound and a suitable powder base such as lactose or starch.
  • compositions formulated for parenteral administration by injection or continuous infusion can be presented in unit dose form, eg, in ampoules or in multi-dose containers, with an added preservative.
  • the composition may be in the form of a suspension, solution, or emulsion in an oily or aqueous medium. And may contain chemicals such as suspending, stabilizing and / or dispersing agents.
  • Formulations for parenteral administration include aqueous compositions or other compositions in water-soluble form. Suspensions of the active compounds can also be prepared as appropriate oily injection suspensions.
  • Suitable lipophilic solvents or vehicles include fatty oils such as sesame oil and synthetic fatty acid esters such as ethyl oleate or triglycerides, or liposomes.
  • Aqueous injection suspensions may contain substances which increase the viscosity of the suspension, such as sodium carboxymethyl cellulose, sorbide, or dextran.
  • the suspension may also contain further suitable stabilizers or agents that increase the solubility of the compound to enable the preparation of highly concentrated solutions.
  • the active ingredient may also be in powder form, which may constitute the formulation with a suitable vehicle (eg, sterile water).
  • compositions of the present invention may also be formulated as a reservoir formulation.
  • Such long acting agents can be administered by implantation (eg subcutaneously or intramuscularly) or by intramuscular injection.
  • the compounds of the present invention can be formulated, for example, as suitable polymers or hydrophobic materials (eg as an emulsion of acceptable oil thickening) or ion exchange resins, or as derivatives such as salts which are only slightly soluble.
  • Dosages effective for the treatment of the pharmaceutical compositions used in the methods of treatment of the invention can be estimated initially using various techniques well known in the art.
  • the dosage can be formulated through a range of circulating concentrations including IC 50 determined using animal models in cell culture assays.
  • Appropriate dose ranges for humans can be determined, for example, using data obtained from cell culture assays and other animal studies.
  • An effective dosage for the treatment of an agent refers to the amount of agent that results in alleviation of symptoms or prolongation of survival in the subject. Toxicity and therapeutic efficacy of such molecules can be determined in standard pharmaceutical procedures by determining, for example, LD 50 (the dose at which 50% of the subject can be killed) and ED 50 (the dose effective at 50% of the subject for treatment) in cell culture or experimental animals. of It can be determined through.
  • the dose ratio of toxicity to treatment is the therapeutic index, which
  • LD 50 / ED 50 can be expressed. Agents that exhibit high therapeutic indices are preferred.
  • the dose is preferably in the range of circulating concentrations comprising ED 50 which is little or no toxic.
  • the dosage may vary within this range depending upon the dosage form employed and the route of administration utilized.
  • the exact formulation, route of administration and dose can be selected according to methods known in the art, given the condition and characteristics of the subject.
  • the human dose of the active ingredient such as the compound according to the present invention may vary depending on the age, weight, sex, dosage form, health condition and degree of disease of the patient, the severity of pain, mode of administration, and the prescribing doctor It may depend on various factors, including the determination of.
  • the manufacturing method of the compound which concerns on this invention is demonstrated.
  • starting materials for synthesizing the compounds of the present invention various synthesis methods are known, and if the starting materials are commercially available, they can be purchased from a supplier. Reagent suppliers include Aldrich, Sigma, TCI, Wako, Kanto, Fluorchem, Acros, Abocado, Alfa, Fluka, etc., but are not limited thereto.
  • the compound of Formula 1 according to the present invention may be prepared by the method of Scheme 2 or 3 by synthesizing Compound D, which is a basic intermediate, according to the synthesis method shown in the following reaction formula 1 have. At this time, the synthesis method of Compound D is not limited to the method described below.
  • Example 1 (2, 6-dichloro-phenyl) -3- ⁇ 3-fluoro-4- [7- (5-methyl-1H-imidazol-2-yl) -1-oxo-2, 3-dihydro-1H-isoindol-4-yl] -phenyl ⁇ -urea
  • the dried compound was dispersed in DMF (3 ml), 2, 6-dichloroaniline (0.34 g, 2.08 mmol) was added thereto, and then stirred for 20 minutes in a microwave (250 W, 250 psi, 150 ° C). Ethyl acetate containing 53 ⁇ 4 methane was added to the reaction solution, and the mixture was diluted well.
  • 2,4,6_trifluorobenzoic acid (0.08 g, 0.45 ⁇ ol) was dispersed in diethyl ether (5.7 ml), and then phosphorus pentachloride (PC1 5 , 0.11 g, 0.52 ⁇ ol) was added slowly, Stir for 1 hour.
  • the organic solvent was concentrated under reduced pressure at room temperature or lower, and then acetone (3.8 ml) was added to the reaction mixture and diluted.
  • sodium azide NaN 3 , 0.035 g, 0.545 dl ol
  • water 0.28 ml
  • 2,5-difluorobenzoic acid (0.05 g, 0.32 mmol) was dispersed in THF (4 ml), followed by tri ethylamine (0.088 ml, 0.63 ⁇ l) and diphenylphosphorazate (DPPA, 0.08 ml, 0.36 Pa ol) was added and stirred at room temperature for 2 hours. After confirming that 2, 5-difluorobenzoylazide was formed, Compound D (0.051 g, 0.16 ⁇ L) was added and stirred for 9 hours at 9 C. 5% methanol was added to the reaction mixture when reaction was completed.
  • 2,4-difluorobenzoic acid (0.04 g, 0.248 mmol) was dispersed in THF (3 ml), followed by triethylamine (0.069 ml, 0.496 mmol) and diphenylphosphorazide (DPPA, 0.075 g, 0.273 mmol) was added and stirred at room temperature for 2 hours.
  • DPPA diphenylphosphorazide
  • test Example 1 BT activity inhibition assay (ELISA method)
  • BTK Bactega
  • a 40 I biotin-Sl substrate peptide, 50 M ATP reacted with 0.4 nM BTK enzyme and 50 M ATP in reaction buffer (15 mM Tris-HCl, pH 7.5), 20 niM MgCl 2 , 2 mM MnCl 2 , 2 mM Enzyme reaction in DTT, O.lmg / ml BSA).
  • reaction buffer 15 mM Tris-HCl, pH 7.5
  • 20 niM MgCl 2 , 2 mM MnCl 2 , 2 mM Enzyme reaction in DTT, O.lmg / ml BSA The compound of the concentration to be tested was treated and reacted at 30 ° C. for 20 minutes. After the reaction, the activity was measured using the ELISA method.
  • Absorbance values of the untreated samples were 100% control, and the activity of the BTK inhibitor was evaluated as ⁇ 3 ⁇ 4 of the residual activity of the BTK enzyme in the sample treated with the compound of the concentration to be tested. After measuring the BTK enzyme activity remaining in the treatment of various concentrations of the compound, the concentration of the compound 50% BTK enzyme activity inhibition occurs compared to the control was determined as the IC 50 value of the BTK inhibitor.
  • RBL-2H3 cells obtained from the Korean Cell Line Bank were incubated in DMEM medium with 10% (v / v) FBS in 5% C0 2 , 37 ° C for 72 hours and then 10,000 cells per well in 96 well plates. Aliquots were incubated for 24 hours in a 5% CO 2 , 37 ° C. incubator.
  • the medium of the reaction plate was transferred to a new plate at 100 ⁇ for each 3 ⁇ 4, and 25 ⁇ acetylation buffer and 25 acetylat ion reagent were added and mixed thoroughly.
  • 50 / ⁇ of the acetylated samples prepared as described above were transferred to the antibody-coated plate, mixed with 200 ⁇ histamine alkaline phosphatase conjugate (conjugate) and then reacted at 4 ° C for 18 hours. After removing all the samples from the reaction plate, wash 3 times by adding 200 ⁇ wash buffer, and then add 200 ⁇ the substrate for 30 minutes at room temperature to stop solution. After the reaction was completed by adding ⁇ , the absorbance was measured at 406 nm using a Benchmark plus (Biorad) instrument. Based on the absorbance of untreated control cells The degree of histamine release was calculated. EC 50 (yM) values were calculated using an Excel graphic program to determine the concentration of each compound that inhibits histamine release by 50%.
  • Test Example 3 Assay by cell-based anti-proliferation assay (MTS assay)
  • MTS assay was performed to confirm the effect of the compound prepared above on inhibiting cancer cell proliferation through inhibition of extracellular signal-regulated kinase activity (Barltrop, JA et al (1991) 5- (3-c ar boxyme t hoxypheny l)- 2- (4,5-dimethylthiazoly) -3- (4- sulfophenyl) tetrazol ium, inner salt (MTS) and related analog of 3— (4,5— dimethyl thiazolyl) -2,5, -diphenyltetrazol ium bromide (MTT) reducing to purple water soluble formazans as cell ⁇ viabi 1 ity indicators. Bioorg. Med. Chem. Lett 1, 611-4; Cory, AH et al (1991) Use of an aqueous soluble tertrazol ium / formazan assay for cell growth assays in culture. Cancer Comm. 3 207-12.).
  • Jeko-1, Mino, H9, SR, MV4-11, Molm-13, and Ku812 cells were collected in 96-well plates containing RPMI1640 medium (GIBC0, invitrogen) containing 10% FBS at a concentration of 10,000 cells / well each. After aliquoting, the cells were incubated at 5% CO 2 and 37 ° C. for 24 hours. Each well was then treated with compounds of the above examples at concentrations of 0.2, 1, 5, 25 and 100 ⁇ , respectively, and treated with dimethyl sulfoxide (DMS0) at 0.08 weight 3 ⁇ 4> as the percentage used for compound treatment as a control. It was. Each cell was then incubated for 48 hours.
  • RPMI1640 medium GIBC0, invitrogen
  • DMS0 dimethyl sulfoxide
  • MTS (3- (4,5-dimethylcysi) provided in CellTiter 96® aqueous non-radioactive cell proliferation assay kit KPromega was added to each cultured cell medium.
  • Azole-2-yl) _5- (3-carboxymethyphenyl) -2- (4-sulfophenyl) -2H-tetrazolium, inner salt) and PMS (phenazine mesosulfate) mixture 20 ⁇ was further incubated for 2 hours at 37 ° C conditions. Thereafter, absorbance was measured at 490 ran.
  • the degree of cell proliferation inhibition was calculated according to the treatment concentration of each compound based on the absorbance of the control cells not treated with the compound, and the concentration of each compound that inhibits the proliferation of cancer cells by 50% was calculated as ⁇ (: 50 ( ⁇ ). Calculated.
  • proliferation inhibition tests were performed on four lymphoma cells of Jeko-l, Mino, H9 and SR and their EC 50 values are summarized in Table 4 below.

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Abstract

본 발명은 화학식 1로 표시되는 화합물, 그의 약학적으로 허용 가능한 염, 에스테르, 프로드러그, 수화물, 용매화물 및 이들의 이성체로 이루어진 군으로부터 선택되는 화합물; 상기 화합물의 단백질 키나아제의 이상 또는 탈조절된 활성과 관련된 질병의 치료, 완화 또는 예방용 용도 및 이를 위한 약학 제제의 제조를 위한 용도; 상기 화합물을 유효성분으로 포함하는 약학 조성물; 상기 화합물을 이용한 치료, 완화 또는 예방 방법에 관한 것으로, 본원발명의 화합물은 단백질 키나아제의 이상 또는 탈조절된 활성과 관련된 질병의 치료, 완화 또는 예방에 유용하게 사용될 수 있다.

Description

BTK키나아제 억제제로서의 2,3-디하이드로-이소인돌 -1-온유도체 및 이를 함유하는 약학적 조성물
발명의 분야 하기 화학식 1로 표시되는 화합물， 그의 약학적으로 허용 가능한 염， 에스테르， 프로드러그， 수화물， 용매화물 및 이들의 이성체로 이루어진 군으로부터 선택되는 화합물 및 이를 유효성분으로 함유하는 단백질 키나아제의 이상 또는 탈조절된 활성과 관련된 질병의 치료， 완화 또는 예방용 약학적 조성물에 관한 것이다. 배경기술
BTK(Bruton' s tyrosine kinase) 효소는 Tec계 (Tec family)에 속한 비 수용체 티로신 키나아제로 알려져 있고 650개의 아미노산 잔기로 구성되어 있으며 프렉스트린 상동영역 (pleckstrin homology domain) (PH-domain) , 징크핑거 영역 (zinc-finger region), SH3 영역 (SH3 domain), SH2 영역 (SH2 domain), 키나아제 영역 (domain)을 가지고 있다. 이 중 키나아제 영역은 의약 표적으로서의 관심이 널리 증가되고 있는 추세이다.
BTK 키나아제는 일부 T-세포， 자연살해세포 (natural killer cell), 혈장세포 등을 제외한 B-세포나 조혈 세포에 분포되어 있으며， 다양한 염증반응이나 암에 의한 B 세포막 수용체 (BCR) 신호 전달을 통해 활성화된 BTK는 포스포리파아제 C 감마 2 (Phospho lipase C gamma 2) (PLC y 2) 등과 같은 하부 신호전달체계를 활성화시켜 TNF-α, IL-6와 같은 싸이토카인 (cytokine) 등과 NF-κΒ의 분비를 촉진 시키는 데 핵심적인 역할을 수행한다.
염증 치료에 있어서 BTK는 B-세포에서 염증 유발 물질의 신호를 포착하는 B- 세포 항원 수용체， CD40, TLR-4, Fcg 등의 막 수용체의 반웅을 매개해 주는 것으로 알려져 있으며， 비만세포 (mast cell), B-cell 그리고 대식세포 (macrophage)의 활성화로 인하여 발생되는 염증의 신호전달 기작에도 중요한 영향을 미치므로 이 효소를 저해함으로써 염증 신호체계 (IgE signaling)의 차단과 아울러 질병의 진행을 억제할 수 있다. 이러한 신호 전달 기작은 면역 물질 분비의 복잡한一 신호전달 과정이며， 이 과정은 여러 단계에 걸친 단백질의 인산화， 탈인산화 과정을 거쳐 진행 되는데 이 중에서 BTK는 염증 기작 신호 전달 체계에서 SYK(spleen tyrosine kinase)와 더불어 상위 단계 중 하나이므로 다른 키나아제 표적에 비해 면역 반웅들을 초래하는 요소의 활성화를 막는데 좀 더 효과적이다. 또한 항암 치료에 있어서 BTK는 B세포막 수용체 (BCR)와 B세포 표면의 단백질을 변형시켜 세포사멸을 억제하는 신호 (antisuicide signal)를 보낸다는 것이 알려져 있으므로 이 효소를 저해함으로써 BCR 신호 전달과 관련된 림프종과 같은 암 치료에 효과를 가질 수 있다. 실제적으로 Pharmacyclics사의 Ibrutinib(PCI-32765)이 만성 림프구성 백혈병 (chronic lymphocytic leukemia, CLL)의 항암치료제로서 최근에 승인 되었으며 그 다음으로 Avila사의 AVL-292 화합물이 소 림프구성 백혈병 (small lymphocytic leukemia, SIX) 및 CLL을 대상으로 하는 임상 3상 단계에 있다. 이들 화합물은 상대적으로 환자군이 희소한 SLL, CLL에 대한 강점을 보이는 반면 환자군이 가장 많은 미만성 대세포형 B세포 림프종 (Diffuse large B-cell lymphoma, DLBCL) 등에는 그리 큰 효과를 보지 못하고 있으므로 새로운 약제의 필요성은 계속 요구되고 있다.
BTK 키나아제 저해제가 항염증 및 항암 치료제로서의 두 가지 역할을 할 수 있는 작용기작에 대한 배경은 문헌 Chemical Biology 7, (2011)， 4]에 잘 설명되어 있다. 발명의 요약 본 발명의 목적은 하기 화학식 1로 표시되는 화합물， 그의 약학적으로 허용 가능한 염， 에스테르， 프로드러그， 수화물， 용매화물 및 이들의 이성체로 이루어진 군으로부터 선택되는 화합물을 제공하는데 있다.
본 발명의 또 다른 목적은 상기 화합물을 유효성분으로 함유하는 단백질 키나아제의 이상 또는 탈조절된 활성과 관련된 질병의 치료， 완화 또는 예방용 약학적 조성물을 제공하는데 있다. 상기 목적을 달성하기 위해， 본 발명은
하기 화학식 1로 표시되는 화합물， 그의 약학적으로 허용 가능한 염， 에스테르， 프로드러그， 수화물， 용매화물 및 이들의 이성체로 이루어진 군으로부터 선택되는 화합물을 제공한다:
Figure imgf000004_0001
3알킬이고，
Ri 및 ¾는 각각 독립적으로 수소 또는 d-3알킬이며 ,
R3 내지 R7은 각각 독립적으로 할로겐， 시아노， 니트로 또는 d— 3할로알킬이다. 또한， 본 발명은 상기 화합물을 유효성분으로 포함하는， 단백질 키나아제의 이상 또는 탈조절된 활성과 관련된 질병의 치료， 완화 또는 예방용 약학적 조성물을 제공한다. 발명의 상세한설명 이하， 본 발명을 더욱 상세히 설명한다. 본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 화합물， 그의 약학적으로 허용 가능한 염， 에스테르， 프로드러그， 수화물， 용매화물 및 이들의 이성체로 이루어진 군으로부터 선택되는 화합물을 제공한다:
Figure imgf000005_0001
3알킬이고，
l 및 ¾는 각각 독립적으로 수소 또는 d-3알킬이며，
¾ 내지 R7은 각각 독립적으로 수소， 또는 전자 끌기 치환기이며， 상기 전자 끌기 치환기는， 예컨대 할로겐 , 시아노， 니트로 또는 d-3할로알킬이다. 본 발명의 하나의 구체예에서， 상기 내지 R7은 각각 독립적으로 수소， 플루오로， 클로로, 브로모， 요오도， 시아노， 니트로， 디플루오로메틸 또는 트리플루오로메틸일 수 있다. 본 발명의 다른 구체예에서， 상기 Ri 및 R2는 각각 독립적으로 수소 또는 메틸이고;
R3 내지 R7은 각각 독립적으로 수소， 플루오로, 클로로， 시아노 또는 트리플루오로메틸이며；
R8은 수소 또는 플루오로일 수 있다. 본 명세서에 사용되는 용어 '할로' 또는 '할로겐'은 다른 언급이 없으면， 불소， 염소， 브름 또는 요오드를 의미한다.
본 명세서에 사용되는 용어 '알킬 '은 다른 언급이 없으면， 직쇄형 또는 분지형의 탄화수소 잔기를 의미한다.
본 발명에 따른 화학식 (I)의 화합물은 무기산 또는 유기산으로부터 유도된 약학적으로 허용 가능한 염 형태로 사용될 수 있으며， 이러한 약학적으로 허용 가능한 염에는 약제학적으로 허용되는 음이은을 함유하는 무독성 산부가염을 형성하는 산， 예를 들면 염산, 황산， 질산， 인산， 브롬화수소산， 요오드화수소산 둥과 같은 무기산, 타타르산， 포름산， 시트르산， 아세트산, 트리클로로아세트산， 트리플루오로아세트산, 글루콘산， 벤조산, 락트산， 푸마르산 말레인산 등과 같은 유기 카본산, 메탄설폰산， 밴젠설폰산， P-를루엔설폰산 또는 나프탈렌설폰산 등과 같은 설폰산 등에 의해 형성된 산부가염ᅤ 특히 바람직하게는 황산， 메탄설폰산 또는 할로겐화수소산 등에 의해 형성된 산부가염을 들 수 있다.
상기 화학식 1의 화합물의 '약학적으로 허용 가능한 염'은 통상적인 방법들을 사용하여 화학식 1의 화합물로부터 제조하여 사용할 수 있다. 구체적으로는 본 발명에 따른 약제학적으로 허용 가능한 염은， 화학식 1의 화합물을 수흔화성 유기 용매， 예를 들면 아세톤， 메탄올， 에탄올， 또는 아세토니트릴 등에 녹이고 과량의 유기산을 가하거나 무기산의 산 수용액을 가한 후 침전시키거나 결정화시켜서 제조할 수 있다. 이어서 이 흔합물에서 용매나 과량의 산을 증발시킨 후 건조시켜서 부가염을 얻거나 또는 석출된 염을 흡인 여과시켜 제조할 수 있다.
본 명세서에 사용되는 용어 '에스테르'는 R 및 R'가 서로 독립적으로 알킬， 4
사이클로알킬， 아릴， 헤테로아릴 (고리 탄소를 통해 산소 원자와 결합됨) 및 해테로지환족 (고리 탄소를 통해 결합됨)으로 이루어진 군으로부터 선택되고 n이 0 또는 1인 화학식 -(R)n-COOR'을 갖는 화학 소량체 (chemical moiety)를 지칭한다. 본 명세서에 사용되는 용어 '프로드러그 '는 생체내 (in vivo)에서 모약물 (parent drug)로 변형되는 약제를 지칭한다. 프로드러그들은 몇몇 상황에서는 상기 모약물을 투여하는 것보다 용이하게 투여할 수 있으므로 이들은 종종 유용하다. 예컨대, 이들은 경구 투여에 의해 생물학적으로 이용 가능하지만 상기 모약물은 생물학적으로 이용할 수 없다. 상기 프로드러그는 또한 모약물에 대해 약학 조성물들에서 개선된 용해도를 가질 수 있다. 예컨대， 약물의 수용성은 세포막에 대한 이동성에 악영향을 미치기 때문에 세포막을 통한 약물 전달을 촉진시키기 위해 에스테르 형태의 프로드러그로 투여될 수 있고， 상기 에스테르 형태의 프로드러그는 세포내에서 물질대사적으로 카복실산 및 활성본체 (active entity)로 가수분해 될 수 있다.
본 발명에 따른 화학식 1의 화합물은 이로부터 제조될 수 있는 수화물 및 용매화물을 포함할 수 있다.
또한， 본 발명에 따른 화학식 1의 화합물들은 비대칭 탄소중심을 가질 수 있으므로 이성체를 포함할 수 있으며， 상기 이성체는 거울상 이성질체， 부분입체 이성질체 또는 라세믹 흔합물일 수 있고， 이들 모든 이성체 및 흔합물은 본 발명의 범위에 포함된다. 본 발명의 상기 화학식 1로 표시되는 화합물의 구체예는 다음과 같다.
1) 1_(2 ,6-디클로로-페닐 )-3-{3-플루오로 -4-[7-(5-메틸 -1H-이미다졸 -2-일 ) - 1-옥소 -2 ,3ᅳ디히드로 -1H-이소인돌ᅳ4ᅳ일] -페닐 } -우레아；
2) 1-{3-폴루오로 -4-[7-(5-메틸 -1H-이미다졸 -2-일 )— 1ᅳ옥소 -2， 3-디히드로 -1H- 이소인돌 -4-일] -페닐 }-3-(2-트리플루오로메틸-페닐) -우레아;
3) 1-(2，6ᅳ디플루오로―페닐 )-3-{3-플루오로 -4-[7-(5-메틸 -1H-이미다졸 -2- 일 )ᅳ1-옥소ᅳ 2,3-디히드로-111-이소인돌-4-일]-페닐}-우레아； 4) l-(2-클로로 -6-플루오로-페닐) -3-{3ᅳ플루오로 -4- [그 (5—메틸 -1Hᅳ이미다졸- 2-일 )-1-옥소-2，3-디히드로 -1H-이소인돌 -4-일] -페닐 } -우레아；
5) 1-(2 ,6-비스-트리플루오로메틸-페닐 )-3-{3-플루오로 -4- [그 (5-메틸 -1H- 이미다졸 -2-일 )-1—옥소 -2 ,3-디히드로 -1H-이소인돌 -4-일] -페닐 }-우레아；
6) 1ᅳ{3-플루오로 -4-[7-(5-메틸 -1H-이미다졸 -2-일) -1-옥소 -2，3-디히드로-lH- 이소인돌-4-일]-페닐}ᅳ3-(2-플루오로ᅳ6ᅳ트리플루오로메틸-페닐)ᅳ우레아;
7) 1-{3-폴루오로 -4ᅳ[7-(5-메틸 -1H—이미다졸 -2-일 )-1-옥소 -2， 3-디히드로 -1H- 이소인돌— 4-일] -페닐 }-3- (2， 4， 6-트리플루오로-페닐) -우레아；
8) 1— (2， 6-디플루오로-페닐 )-3-{3-플루오로 -4- [7-(5-메틸 -1Hᅳ이미다졸 -2- 일 )-1-옥소 -2 , 3-디히드로 -1H-이소인돌 -4-일 ] -페닐 }— 1-메틸 -우레아；
9) 1-{3-플루오로 -4-[7-(5-메틸 -1H-이미다졸 -2-일) -1-옥소 -2,3-디히드로 -1H- 이소인돌— 4-일] -페닐 }ᅳ3-펜타플루오로페닐-우레아；
10) 1-(2, 5-디플루오로페닐 )-3-(3ᅳ플루오로ᅳ4-(7_(5-메틸 -1Hᅳ이미다졸ᅳ 2- 일 )-1-옥소이소인돌린 -4-일 )페닐)우레아；
11) 1-(2,4-디플루오로-페닐) -3-{3-플루오로ᅳ 4-[7-(5-메틸 -1Hᅳ이미다졸ᅳ 2- 일 )-1-옥소 -2， 3-디히드로 -1H-이소인돌 -4-일] -페닐 } -우레아；
12) 1-{ 3-플루오로 -4- [ 7- ( 5-메틸 -1H-이미다졸 -2-일) - 1ᅳ옥소 2， 3ᅳ디히드로ᅳ 1H-이소인돌ᅳ 4-일] -페닐 }-3-(2， 3， 6-트리플루오로-페닐) -우레아；
13) 1-(3， 5-디플루오로-페닐) -3-{3-플루오로ᅳ 4-[7-(5-메틸 -1H-이미다졸 -2ᅳ 일 )-1-옥소 -2 , 3-디히드로 -1H-이소인돌 -4-일 ] -페닐 } -우레아；
14) 1-(3， 4-디플루오로-페닐 )-3-{3-플루오로ᅳ 4-[7-(5-메틸 -1H—이미다졸ᅳ 2- 일 )-1-옥소 -2， 3-디히드로— 1H-이소인돌 -4-일] -페닐 } -우레아；
15) 1-(4-시아노 -3-폴루오로페닐 )-3-(3ᅳ플루오로 -4- (그 (5-메틸 -1Hᅳ이미다졸- -일) -1-옥소이소인돌린 -4-일)페닐)우레아;
16) 1-(4-클로로 -3- (트리플루오로메틸)페닐 )ᅳ3-(3-플루오로 -4-(7-(5-메틸-
1H-이미다졸ᅳ 2-일) -1-옥소이소인돌린 -4ᅳ일)페닐)우레아;
17) 1-(3-클로로 -2 ,6-디플루오로페닐) -3-(3-플루오로 -4— (그 (5-메틸 -1H- 이미다졸 -2-일) - 1-옥소이소인돌린 -4-일)페닐)우레아；
18) 1-(2ᅳ클로로ᅳ3 , 6-디플루오로페닐 )-3-(3-플루오로 -4- (그 (5-메틸 -1H- 이미다졸 -2-일) -1-옥소이소인돌린 -4-일)페닐)우레아;
19) 1-(4-클로로 -2 , 6-디플루오로-페닐 )-3-{3-플루오로 -4— [7-(5-메틸 -1H- 이미다졸 -2-일) -1-옥소 -2,3-디히드로 -1H-이소인돌 -4-일]ᅳ페닐 } -우레아; 및
20) 1-{3-플루오로 -4-[7-(5-메틸 -1H-이미다졸 -2-일 )-1ᅳ옥소 -2， 3ᅳ디히드로ᅳ 1H-이소인돌 -4-일] -페닐 }-3-(2，3，5，6ᅳ테트라플루오로-페닐) -우레아. . 상기 화학식 1로 표시되는 화합물， 그의 약학적으로 허용 가능한 염， 에스테르， 프로드러그， 수화물， 용매화물 및 이들의 이성체로 이루어진 군으로부터 선택되는 화합물은 ABL Abelson tyrosine kinase), AC (Activated cdc42- associated kinase) , AXL, Aurora, BLK(B lymphoid tyrosine kinase) , BMX(Bone marrow X— linked kinase) , BTK(Bruton' s tyrosine kinase) , CDK(Cycl in-dependent kinase) , CSK(C_Src kinase) , DDR(Di scoidin domain receptor) , EPHA(Ephrin type A receptor kinase) , FER(Fer (fps/ fes related) tyrosine kinase) , FES(Fel ine sarcoma oncogene) , FGFR(Fibroblast growth factor receptor) , FGR, FLT(Fms— like tyrosine kinase) , FRK(Fyn一 related kinase) , FYN, HCK(Hemopoiet ic cell kinase) , IRR( Insulinᅳ receptorᅳ related一 receptor )， ITK(Interleukin 2ᅳ inducible T cell kinase) , JAK(Janus kinase) , KDR(Kinase insert domain receptor) , KIT, LCKCLymphocyt e-spec i f i c protein tyrosine kinase) , LYN, MAPK (Mitogen activated protein kinase) , MER(cᅳ Mer proto-oncogene tyrosine kinase) , MET, MINK(Misshapen— like kinase), M K(MAPK— interact ing kinase) , MST(Mairanal ian sterile 20-1 ike kinase) , MUSK Muscle一 specif ic kinase) , PDGFR(P1 ate let-derived growth factor receptor) , PLK(Polo-l ike kinase) , RET(Rearranged during transfect ion) , RON, SRC( Steroid receptor coact ivator) , SRM (Spermidine synthase) , TIE(Tyrosine kinase with immunoglobulin and EGF repeats) , SYK(S leen tyrosine kinase) , TNKKTyrosine kinase, non-receptor , 1)， TRK(Tropomyosin一 receptorᅳ kinase) 또는 TNIK(TRAF2 and NCK interacting kinase) 등의 단백질 키나아제의 이상 또는 탈초절된 활성과 관련된 질병의 치료， 완화 또는 예방을 위해 사용될 수 있다.
이에 따라， 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 화합물, 그의 약학적으로 허용 가능한 염， 에스테르, 프로드러그， 수화물， 용매화물 및 이들의 이성체로 이루어진 군으로부터 선택되는 화합물의 단백질 키나아제의 이상 또는 탈조절된 활성과 관련된 질병의 치료， 완화 또는 예방용 용도 및 이를 위한 약학 제제의 제조를 위한 용도를 제공한다.
또한， 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 화합물， 그의 약학적으로 허용 가능한 염， 에스테르， 프로드러그， 수화물， 용매화물 및 이들의 이성체로 이루어진 군으로부터 선택되는 화합물의 유효량을 이를 필요로 하는 포유동물에게 투여하는 것을 포함하는, 단백질 키나아제의 이상 또는 탈조절된 활성과 관련된 질병의 치료, 완화 또는 예방 방법을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 화합물， 그의 약학적으로 허용 가능한 염, 에스테르, 프로드러그， 수화물， 용매화물 및 이들의 이성체로 이루어진 군으로부터 선택되는 화합물을 유효성분으로 포함하는, 단백질 키나아제의 이상 또는 탈조절된 활성과 관련된 질병의 치료, 완화 또는 예방용 약학적 조성물을 제공한다.
상기 키나아제 활성과 관련된 질병은 단백질 키나아제의 이상 또는 탈조절된 활성과 관련된 모든 질병을 포함하며， 구체적으로는 암， 류마티스성 관절염 및 골 관절염에 관한 염증， 천식, 알러지， 아토피 피부염 또는 건선을 들 수 있으나， 이에 한정되는 것은 아니다.
상기 암으로는 림프종， 백혈병, 혈액암, 위암， 비-소세포 폐암， 간암, 대장암, 소장암, 췌장암, 뇌암, 뼈암, 흑색종， 유방암， 경화성선종， 자궁암, 자궁경부암, 난소암， 두경부암， 식도암, 갑상선암, 부갑상선암， 신장암， 육종， 전립선암, 요도암, 방광암， 섬유선종, 또는 교모세포종을 들 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다. 상기 약학적 조성물은 항생제， 알킬화제， 항대사제， 호르몬제, 면역학적 제제， 인터페론 제제 및 항암제로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상을 추가로 포함할 수 있다. 본 발명의 약학적 조성물은 직접적으로 또는 당업계에 잘 알려진 적합한 담체 또는 부형제를 함께 포함할 수 있다.
상기 약학적 조성물을 이용한 치료， 완화 또는 예방 방법은 예컨대， 만성 신부전， 당뇨병, 암， AIDS, 방사선 요법, 화학요법， 신장 투석， 또는 수술로 인한 빈혈증이 있거나 위험에 있는 대상에게 효과적인 양의 본 발명의 화합물을 포함하는 약학적 조성물을 투여하는 방법을 포함할 수 있다. 바람직한 구체예에서， 피험 대상은 포유동물일 수 있고， 가장 바람직한 구체예에서， 피험 대상은 사람일 수 있다.
효과적인 양의 본 발명의 약학적 조성물은 가장 효과적이고 편리한 경로 및 가장 적당한 제법이 될 수 있도록 일상적인 실험에 의해 쉽게 결정될 수 있다. 다양한 제제와 약물 송달 시스템은 당업계에서 이용되는 방법이라면 제한 없이 이용가능하다. 예컨대, 상기 적합한 투여의 경로는 경막내， 직접 심실내, 정맥내， 복막내， 비강내, 또는 안내 주사를 비롯하여， 근육내， 피하， 골수내 주사를 포함하며， 경구， 직장， 점막을 통해 비강 또는 창자에의 투여 및 비경구 송달을 포함할 수 있다 (Gennaro, A. R. , ed. (1995) Remington' s Pharmaceutical Sciences 참조). 작용제 또는 조성물은 전신보다는 국소로 투여될 수 있다. 예컨대， 적합한 작용제는 주사를 통해서, 또는 저장 또는 지속 방출제제과 같은 표적화 약물 송달 시스템을 통해서 송달될 수 있다. 본 발명의 제약 조성물은 잘 알려진 방법 중 종래의 흔합， 용해， 과립화, 당의정ᅳ제조， 가루화， 유화， 캡슐화, 포착화， 또는 동결건조 프로세스와 같은 어떤 것에 의해 제조될 수 있다. 상기에서 언급한 바와 같이， 본 발명의 조성물은 부형제 및 보조제와 같이 활성 분자의 프로세싱을 제약 용도로 제조하기 위한 하나 이상의 생리적으로 허용 가능한 담체를 포함할 수 있다.
적절한 제제는 선택된 투여의 경로에 의존한다. 예컨대， 주사를 위해 조성물은 수성 용액, 바람직하게는 Hanks 용액， Ringer 용액， 또는 생리적 식염수 완충액과 같은 생리적으로 호환 가능한 완충액으로 조제화될 수 있다. 점막을 통한 투여 또는 비강을 통한 투여를 위해， 점막으로 침투하기에 적당한 침투제가 제제에 사용될 수 있다. 상기 침투제는 일반적으로 당업계에 알려져 있다. 본 발명의 바람직한 구체예에서, 본 발명의 화합물은 경구 투여를 위한 제제로 제조될 수 있다. 경구 투여를 위해， 본 발명의 화합물을 당업계에 공지된 약학적으로 허용 가능한 담체와 조합시킴으로써 쉽게 제제화시킬 수 있다. 상기 담체를 통하여, 본 발명의 화합물을 대상에 의한 경구 섭취가 가능하도록 정제， 알약， 당의정， 캡슐， 액체， 겔， 시럽， 슬러리， 현탁액 등으로 제제화시킬 수 있다. 상기 화합물은 예컨대， 코코아 버터 또는 다른 글리세리드와 같은 종래의 좌약 베이스를 함유하는 좌약 또는 정체 관장액과 같은 직장 조성물로 제제화될 수도 있다.
경구 용도를 위한 제약 제제는 필요에 따라， 정제 또는 당의정 코어를 얻기 위해 적합한 보조제를 첨가한 후에， 결과의 흔합물을 선택적으로 그라인딩하고， 미립의 흔합물을 가공하여， 고체 부형제로서 제조할 수 있다. 적합한 부형제로는 특히， 유당， 수크로스， 만니를， 또는 소르비를을 포함하는 당과 같은 충전재; 옥수수 전분， 밀 전분， 쌀 전분, 감자 전분， 젤라틴， 트라가칸트 고무， 메틸 셀를로오스， 히드록시프로필메틸-셀를로오스， 나트륨 카르복시메틸셀를로오스와 같은 샐를로오스 및 /또는 폴리비닐피를리돈 (PVP) 제제를 들 수 있다. 또한， 가교- 결합된 폴리비닐 피를리돈， 한천, 또는 알긴산 또는 나트륨 알기네이트 등의 그의 염과 같은 붕해제가 첨가될 수 있다. 또한， 나트륨 도데실술페이트와 같은 습윤제가 포함될 수 있다.
당의정 코어는 적합한 코팅이 제공된다. 이러한 목적을 위해서， 농축 당 용액이 사용될 수 있고， 이것은 선택적으로 아라비아 고무， 활석， 폴리비닐 피를리돈， 카르보폴 겔， 폴리에틸렌 글리콜， 및 /또는 타이타늄 디옥사이드， 래커 용액， 및 적합한 유기 용매 또는 용매 흔합물을 함유할 수 있다. 염료 또는 안료는 동정을 위해 또는 다른 조합의 활성 화합물 복용량을 특징짓기 위해 정제 또는 당의정 코팅에 첨가될 수 있다.
경구 투여를 위한 제약 제제는 젤라틴으로 만들어진 부드러운， 밀봉의 캡슐 및 글리세를 또는 소르비를과 같은 가소제를 비롯하여 젤라틴으로 만들어진 푸시ᅳ 핏 (밀어맞추기) 캡슬을 포함한다. 푸시-핏 캡슐은 유당과 같은 충전재， 전분과 같은 결합제， 및 /또는 활석 또는 마그네슴 스테아레이트과 같은 윤활제， 및 선택적으로 안정화제와 흔합되며 활성 성분을 함유할 수 있다. 연질 캡슬에서, 활성 화합물은 지방오일， 액체 파라핀, 또는 액체 폴리에틸렌 글리콜과 같은 적합한 액체에 용해되거나 또는 현탁될 수 있으며， 또한 안정화제가 첨가될 수 있다. 경구 투여를 위한 모든 제제는 그러한 투여에 적합한 용량이 되어야 한다. 하나의 구체예에서， 본 발명의 화합물은 피부 패치를 통해서와 같이 경피로， 또는 국소로 투여될 수 있다. 상기 경피 또는 국소 제제는 추가적으로 하나 또는 다중 침투 인핸서 또는 송달된 화합물의 이동을 강화하는 작용제를 포함하는 다른 작동체를 포함할 수 있다. 경피 또는 국소 투여는， 예컨대 위치 특이적 송달이 바람직한 상황에서 바람직하게 사용될 수 있다.
흡입에 의한 투여를 위해， 본 발명에 따른 화합물은 적합한 분사제， 예컨대 디클로로디폴루오로메탄， 트리클로로플루오로 메탄， 디클로로테트라플루오로에탄， 탄소 디옥사이드, 또는 또 다른 적합한 가스를 포함하는 가압 팩 또는 분무기로부터 에어로졸 스프레이의 형태로 편리하게 전달될 수 있다. 가압 에어로졸의 경우에， 적당한 용량 유닛은 계량된 양을 전달하기 위한 밸브를 제공함으로써 결정될 수 있다. 예컨대， 흡입기 또는 취입기에서 사용하기 위한 젤라틴의 캡슐과 카트리지가 제제화될 수 있다. 이들은 전형적으로 화합물과 유당 또는 전분과 같은 적합한 분말 베이스의 분말 믹스를 함유할 수 있다. 주사 또는 연속 주입에 의한 비경구 투여를 위해 조제된 조성물은， 첨가된 보존제와 함께， 예컨대 앰플 또는 다중-복용량 용기에 단위 용량 형태로 제시될 수 있다. 조성물은 유성 또는 수성 매개체중의 현탁액, 용액， 또는 에멀견과 같은 형태를 취할 수 있고 현탁제, 안정화제 및 /또는 분산제와 같은 화학제를 함유할 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제는 수성 용액 또는 수용성 형태의 다른 조성물을 포함한다 활성 화합물의 현탁액은 또한 적당한 유성 주사 현탁액으로 제조될 수 있다. 적합한 친유성 용매 또는 매개체는 참깨 오일과 같은 지방 오일 및 에틸 올레에이트 또는 트리글리세리드， 또는 리포솜와 같은 합성 지방산 에스테르를 포함한다. 수성 주사 현탁액은 나트륨 카르복시메틸 셀를로오스， 소르비를， 또는 덱스트란과 같은 현탁액의 점도를 증가시키는 물질을 함유할 수 있다. 상기 현탁액은 또한 고 농축 용액의 제조를 가능하게 하기 위해 추가로 적합한 안정화제 또는 화합물의 용해도를 증가시키는 작용제를 함유할 수 있다. 또한， 활성 성분은 적합한 매개체 (예컨대， 멸균수)와 함께 제제를 구성할 수 있는 분말 형태일 수 있다.
전술한 바와 같이, 본 발명의 조성물은 또한 저장 (reservoir) 제제로서 조제될 수 있다. 그러한 장기 작용 제제는 이식 (예컨대， 피하로 또는 근육내로)에 의해 또는 근육 내 주사에 의해 투여될 수 있다. 따라서, 본 발명의 화합물은 예컨대 적합한 폴리머 또는 소수성 물질 (예컨대， 허용 가능한 오일 증의 에멀젼으로서) 또는 이온 교환 수지로， 또는 아주 약간 가용성인 염 등의 유도체로서 조제될 수 있다.
본 발명의 치료 방법에 사용된 약학적 조성물의 치료에 효과적인 복용량은 초기에 당업계에 잘 알려진 다양한 기술을 사용하여 추정될 수 있다. 예컨대， 상기 복용량은 세포 배양 분석법에서 동물 모델을 이용하여 결정된 IC50를 포함하는 순환 농도 범위를 통하여 공식화될 수 있다. 사람을 대상으로 하는 적절한 용량 범위는， 예컨대 세포 배양 분석법 및 다른 동물 연구로부터 얻어진 데이터를 사용하여 결정될 수 있다.
약제의 치료에 효과적인 복용량은 대상에서 증상의 완화 또는 생존의 연장을 가져오는 약제의 양을 말한다. 그러한 분자의 독성 및 치료 효능은 세포 배양 또는 실험 동물에서， 예컨대 LD50(개체의 50%가 치사될 수 있는 복용량) 및 ED50(개체의 50%에서 치료에 효과적인 복용량)을 결정함으로써 표준 제약 과정을 통하여 결정될 수 있다. 치료에 대한 독성의 복용량 비는 치료 지수이며， 이는
LD50/ED50로 표현될 수 있다. 높은 치료 지수를 나타내는 약제가 바람직하다.
용량은 바람직하게는 거의 또는 전혀 독성이 없는 ED50를 포함하는 순환하는 농도의 범위 내에 있다. 용량은 채택된 용량 형태와 이용된 투여의 경로에 따라 이 범위 내에서 변할 수 있다. 정확한 조제물， 투여의 경로 및 용량은 대상의 상태 및 특징을 고려하여， 당업계에 공지된 방법에 따라 선택될 수 있다.
또한， 본 발명에 따른 화합물 등의 유효성분의 인체 투여량은 환자의 나이， 몸무게， 성별， 투여 형태， 건강 상태 및 질환 정도에 따라 달라질 수 있으며， 고통의 심각성， 투여의 방식， 및 처방하는 의사의 판단을 포함하는 다양한 인자에 따라 달라질 수 있다. 이하， 본 발명에 따른 화합물의 제조방법에 대하여 설명한다. 본 발명의 화합물을 합성하기 위한 출발 물질의 경우 다양한 합성법이 알려져 있으며， 상기 출발 물질이 시판되고 있는 경우는 공급처로부터 구매하여 사용할 수 있다. 시약 공급처로는 Aldrich, Sigma, TCI, Wako, Kanto, Fluorchem, Acros, Abocado, Alfa, Fluka등의 회사가 있으나， 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 화합물은 하기의 일반적인 방법 및 과정을 사용하여 쉽게 이용 가능한 출발 물질로부터 제조될 수 있다. 전형적인 또는 바람직한 공정 조건 (즉， 반웅 온도， 시간， 반웅물의 몰 비， 용매， 압력) 등으로는 달리 언급한지 않는 한， 다른 공정 조건도 사용될 수 있다. 최적의 반웅 상태는 사용된 특정 반웅물 또는 용매에 따라 변할 수 있지만， 그러한 상태는 통상적인 최적화 과정에 의해 본 기술분야의 숙련자에 의해 결정될 수 있다.
아을러， 본 기술분야의 숙련자에게 있어서 자명한 바와 같이， 특정한 작용기가 원하지 않는 반웅을 겪지 않도록 방지하기 위하여 통상의 보호기가 필요할 수 있다. 특정한 작용기를 보호 및 /또는 탈보호하기 위해 적합한 조건뿐만 아니라 다양한 작용기에 대해 적합한 보호기는 본 기술분야에 잘 알려져 있다. 예를 들어， 수많은 보호기는 T.W. Greene 및 G.M. Wuts, Protecting Groups in Organic Synthesis, Second edition, Wiley, New York, 1991, 및 상기 문헌에 인용된 참고문헌에 기술되어 있다. 하나의 구체적인 실시양태로서, 본 발명에 따른 화학식 1의 화합물은， 하기 반웅식 1에 나타낸 합성 방법에 따라 기초 중간체인 화합물 D를 합성한 후， 이를 이용하여 반응식 2 또는 3의 방법으로 제조될 수 있다. 이때， 상기 화합물 D의 합성 방법은 하기 반웅식 1의 방법에 한정되는 것은 아니다.
Figure imgf000016_0001
상기 반응식 1의 출발물질인 "화합물 A"는 국제특허 W02012/014017에 그 합성 방법이 구체적으로 서술되어 있으며 개시된 "화합물 D"는 하기 단계에 따라 합성한다.
<!-!>화합물 B의 합성
화합물 A(40 g, 168 誦 ol)를 아세트산 (400 ml)에 분산시킨 후， 물 (400 ml) 및 피리딘 (800 ml)을 넣고 10°C로 넁각시킨다. 게 1인산나트륨 1수화물 (sodium phosphate monobasic monohydrate, 280 g, 2.01 mol)을 첨가하고 라니 ^ ¾(raney Ni)(101 g)을 물 (70 ml)을 이용해 첨가한다. 반웅액의 온도를 50°C로 을리고， 2시간 동안 반웅시킨 후 냉각하고 여과한다. 에틸아세테이트 (EA, 2.5 £ )로 세척하고 여과액에 물 (800 ml)을 가해 분액한 후 분리된 유기층을 감압 하에서 농축한다. 여기에 냉각된 물 (800 ml)을 넣고 생성된 고체를 여과한 후 건조하여 목적 화합물 B를 얻는다 (26.7 g, 수율 66%). ¾-匿 Spectrum (300 MHz, DMS0-o¾)： 11.10(s, 1H), 9.15 (s, 1H) , 7.95(d, J^.lHz, 1H), 7.78 (d, J^.lHz, 1H)， 4.41(s, 2H)
LCMS [M+l]： 241.1 <l-2>화합물 C의 합성
화합물 B(26.7 g, 111麵 d)를 에탄을 (800 ml)에 분산시킨 후 메틸 글리옥살 48% 수용액 (67 ml) 및 암모니아 28% 수용액 (75 ml)을 첨가한다. 반웅액의 은도를 90°C로 을리고 3시간 동안 교반한다. 반웅이 완료되면 감압 하에서 농축하여 반웅액의 부피를 200 ml 정도로 즐이고 생성된 고체를 여과한다. 에탄을 (50 ml) 로 세척한 후 여과된 고체를 건조하여 목적 화합물 C를 얻는다 (17.2 g, 수율 53%).
-NMR Spectrum(300 MHz, DMSOcfe): 14.21-14.12(m, 1H), 9.48(s, 1H), 8.27(d, J=8.4Hz, 1H) , 7.83(d, 8.4Ηζ, 1H), 7.07-6.82(m, 1H) , 4.39(s, 2H) , 2.27-2.18(m, 3H)
LCMS [M+l]： 293.1
<l-3>화합물 D의 합성
화합물 C(17.2 g, 58.9 mmol), 3—플루오로 _4-(4，4，5，5ᅳ테트라메틸- [1，3，2]디옥사보롤란-2-일)-페닐아민(19.5 g, 82 mmol), LiCl(6.9 g, 165 mmol) 및 Pd(PPh3)4(6.8 g, 5.9 mmd)를 를루엔 (589 ml)과 에탄을 (589 ml)에 분산시킨 후， 1 N Na2C03 수용액 (117 ml)을 첨가하고 85°C에서 12시간 동안 반웅시킨다ᅳ 반웅이 완결되면 반웅액을 감압 하에서 완전히 농축시킨다. 여기에 아세톤 (1.2 )과 아세토니트릴 (1.2 의 혼합 용액을 넣은 후 80°C에서 2시간 동안 교반시킨 후 냉각하여 여과한 다음, 아세토니트릴 (0.5 £ )로 세척한다. 여과된 용액을 아세토니트릴이 약 150 ml 정도 될 때까지 감압하여 농축한 후, 여과한다. 여과하여 얻어진 고체를 감압 하에서 차례대로 아세토니트릴 (60 ml)과 n-핵산 (100 ml), 그리고 물 (100 ml)로 세척한 후， 건조하여 목적 화합물 D(4-(4-아미노 -2- 플루오로페닐 )-7-(5-메틸 -IH-이미다졸 -2-일)이소인돌린 -1-온)를 얻는다 (13.31 g, 수율 70%) .
-赚 Spectrum(300 MHz, DMSO-cfe): 14.44- 14.34 (m, IH) , 9.36(s, IH) , 8.36(d, J=8.4Hz, IH), 7.51(d, J=7.8Hz, IH), 7.16(t, J=8.7Hz, IH) , 7.04-6.79(m IH), 6.49-6.42(m, 2H), 5.65(s, 2H), 4.36(s, 2H), 2.28-2.18(m, 3H)
LCMS [M+l]： 323.3 본 발명의 화학식 1로 표시되는 다양한 화합물들을 합성하기 위하여 , 얻어진 기초 중간체인 "화합물 D1'를 이용한 구체적인 합성 방법을 하기 반웅식 2와 반웅식 3에 자세히 기술한다. 그러나 이러한 예들은 기초 중간체인 "화합물 D1'로부터 원하는 화학식 1의 화합물을 합성하기 위한 방법 중 대표적인 것으로， 이에 한정되는 것은 아니다.
Figure imgf000018_0001
상기 반웅식 2에 개시된 "화합물 E"는 하기 과정에 따라 합성하였다.
<2-1> 반웅식 2에 따른 화합물 E의 합성
4-(4-아미노 -2-플루오로페닐 )ᅳ7-(5-메틸 -1H-이미다졸 -2-일 )이소인돌린 -1- 온 (화합물 D, 1 당량)을 DMF/THF(1:4의 비율)에 분산시킨 후 (0.08 몰랄농도) 피리딘 (1.15 당량) 및 4-나이트로페닐 카르보노클로리데이트 (1.15 당량)를 첨가하고 4시간 동안 교반한다. TLC로 반웅이 완료된 것을 확인한 후， n- 핵산 (반웅 용액인 THF와 동일한 부피)을 넣고 30분 동안 교반하고， 생성된 고체를 n-핵산 ： THF = 1 ： 1 (반웅 용액인 THF 부피의 4배)의 용매로 세척하면서 여과한 후 건조한다. 건조된 화합물을 DMF에 분산시킨 후 (0.1 몰랄농도)， 치환된 페닐아민 (6 내지 15 당량)을 넣은 후 마이크로웨이브 (250W, 250psi, 150°C)에서 20분간 교반한다. 반웅액에 5% 메탄올을 함유한 에틸아세테이트를 넣어 층분히 회석한 후， 포화 NaHC03 수용액과 물로 세척한다. 유기층을 무수 마그네슘설페이트 (MgS04)로 탈수한 후， 실리카겔 컬럼크로마토그래피 (메틸렌 클로라이드 ： 메탄을 = 20 ： 1)로 전개하여 목적 화합물 E를 순수하게 얻는다. 상기 반웅식 2에서 합성한 "화합물 E"는 하기 반웅식 3에 따른 합성 방법을 통해서도 얻을 수 있다.
Figure imgf000019_0001
<3-l> 반웅식 3에 따른 화합물 E의 합성 (A)
치환된 밴조산 (2 당량)을 디에틸에테르 (diethyl ether)에 분산시킨 후 (0.08 몰랄농도)， 포스포러스펜타클로라이드 (PC15, 2.2 당량)를 첨가하고 2시간 동안 교반한다. 반응이 완료되면 유기 용매를 실내은도 이하에서 감압하여 농축한 후， 아세톤을 반웅물에 넣어 희석한다 (0.08 몰랄농도). 이어서 반웅물에 물 (아세톤 부피의 1/12)에 녹인 소듐아지드 (NaN3, 2.4 당량)를 0°C에서 천천히 적가한다. 실온에서 2시간 동안 교반한 후, 반응물올 에틸아세테이트로 희석한 후, 물로 세척한다. 유기층을 무수 마그네슴설페이트 (MgS04)로 탈수한 후， THF에 분산시키고 (0.04 몰랄농도) 4ᅳ(4-아미노 -2-플루오로페닐 )-7-(5-메틸 -1H-이미다졸ᅳ 2-일)이소인돌린 -1-온 (화합물 D, 1 당량)을 첨가하여 90°C에서 4시간 동안 교반한다. 반웅이 완료되면 감압 하에 용매를 농축시키고, 실리카겔 컬럼에서 메틸렌 클로라이드 ： 메탄을 = 20 ： 1로 전개하여 목적 화합물 E를 순수하게 얻는다. 상기 반웅식 2에서 합성한 "화합물 E"는 상기 반응식 3에 따른 또 다른 합성 방법을 통해서도 얻을 수 있다.
<3-2> 반웅식 3에 따른 화합물 E의 합성 (B)
치환된 벤조산 (2 당량)을 THF에 분산시킨 후 (0.05 몰랄농도)， 트리에틸아민 (4 당량) 및 디페닐포스포르아지데이트 (diphenylphosphorazidate, DPPA, 2.3 당량)을 넣고， 실온에서 2시간 동안 교반한다. 반웅물에 4-(4-아미노ᅳ 2-플루오로페닐) -7-(5ᅳ메틸 -1H-이미다졸 -2-일 )이소인돌린 -1-온 (화합물 D , 1 당량)을 첨가하고， 90°C에서 4시간 동안 교반한다. 이어서 5% 메탄올을 함유한 에틸아세테이트에 층분히 희석한 후， 물과 포화 NaHC03 수용액으로 세척한다. 이어서 유기층을 무수마그네슘설페이트 (MgS04)로 탈수한 후， 감압하여 농축한다. 농축된 반응 흔합물을 실리카겔 컬럼크로마토그래피 (메틸렌클로라이드 ： 메탄올 = 20 ： 1)로 전개하여 분리 한 후， 농축하여， 순수한 목적 화합물 E를 얻는다. 이하， 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명한다. 단， 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐， 본 발명의 내용이 하기 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다. 실시예 1： 1-(2, 6-디클로로-페닐 )-3-{3-플루오로 -4-[7-(5-메틸 -1H-이미다졸- 2-일 )-1-옥소 -2, 3-디히드로 -1H-이소인돌 -4-일] -페닐 } -우레아의 제조
4-(4-아미노 -2-풀루오로페닐 )-7-(5-메틸 -1H-이미다졸 -2-일 )이소인돌린 -1- 온 (화합물 D, 0.1 g, 0.31 睡 ol)을 DMF(0.8 ml), THF(3.4 ml)에 분산시킨 후 피리딘 (0.03 ml) 및 4-나이트로페닐 카르보노클로리데이트 (0.07 g, 0.36 麵 ol)를 첨가하고 4시간 동안 교반하였다. TLC로 반웅이 완료된 것을 확인한 후 n-핵산 (3 ml)을 넣고 30분 동안 교반하고, 생성된 고체를 n-핵산 ： THF = 1 ： 1 (12 ml)의 용매로 세척하면서 여과한 후 건조하였다. 건조된 화합물을 DMF(3 ml)에 분산시킨 후 2， 6ᅳ디클로로아닐린 (0.34 g, 2.08 mmol)을 넣은 후 마이크로 웨이브 (250 W, 250 psi, 150°C)에서 20분간 교반하였다. 반응액에 5¾ 메탄을을 함유한 에틸아세테이트를 넣고 층분히 희석한 다음， 포화 NaHC03 수용액을 넣고 세척한 후， 물로 다시 한번 세척해 준다. 유기층을 무수 마그네슘설페이트 (MgS04)로 탈수한 후, 농축하여 실리카겔 컬럼크로마토그래피 (메틸렌 클로라이드 ： 메탄을 = 20 ： 1)로 전개하여 표제 화합물을 순수하게 얻었다 (0.03 g, 수율 19%).
-赚 Spectrum(300 MHz, DMS0_ )： 9.54(s, 1H) , 9.36(s, 1H), 8.58(s, 1H), 8.43(d, J=8.1Hz, 1H), 7.59(m, 3H), 7.47(t, J=8.4Hz, 1H), 7.32(m, 2H), 7.08(s, 1H), 4.41(s, 2H), 2.25 (m, 3H)
LCMS [M+l]: 511 실시예 2: l-{3-플루오로 -4-[7-(5-메틸 -IH-이미다졸 -2-일) -1-옥소 -2,3- 디히드로 -1H-이소인돌 -4-일] -페닐 }-3-(2-트리플루오로메틸-페닐) -우레아의 제조
4-(4-아미노 -2-플루오로페닐) -7-(5—메틸 -1H-이미다졸 -2-일 )이소인돌린 -1- 온 (화합물 D, 0.1 g, 0.31 隱 ol)을 DMF 0.8 ml), THF(3.4 ml)에 분산시킨 후 피리딘 (0.03 ml) 및 4-나이트로페닐 카르보노클로리데이트 (0.07 g, 0.36 麵 ol)를 첨가하고 4시간 동안 교반하였다. 이어서 n-핵산 (3 ml)을 넣고 30분 동안 교반하고, 생성된 고체를 n-핵산 ： THF = 1 ： 1 (12 ml)의 용매로 세척하면서 여과한 후 건조하였다. 건조된 화합물을 DMF(2 nil)에 분산시킨 후 2ᅳ 트리플루오로메틸 아닐린 (0.74 g, 4.65 讓 ol)을 넣은 후 실온에서 3시간 교반하였다. 반웅액에 메탄올 (6 ml)을 넣은 후 포화 NaHC03 수용액 (6 ml)을 넣고 30분간 교반하고 생성된 고체를 여과하고 물로 세척하였다. 세척한 화합물을 건조시킨 후， 실리카겔 컬럼크로마토그래피 (메틸렌 클로라이드 ： 메탄올 = 20 ： 1)로 전개하여 표제 화합물을 얻었다 (0.07 g, 수율 44%).
-赚 Spec triun( 300 顧 z, DMSO-flfe): 9.54(s, 1H), 9.36(s, 1H) , 8.58(s, 1H), 8.43(d, J=8.1Hz, 1H), 7.59(m, 3H), 7.47(t, J=8.4Hz, 1H)， 7.32(m, 2H), 7.08(s, 1H), 4.41(s, 2H), 2.25 (m, 3H)
LCMS [M+l]： 510.0 실시예 3: l-(2,6-디플루오로-페닐) -3-{3-플루오로 -4-[7-(5-메틸 -1H- 이미다졸 -2-일 )-1-옥소 -2， 3-디히드로 -1H-이소인돌 -4-일 ] -페닐 } -우레아의 제조
2,6-디플루오로-벤조산 (0.04 g, 0.248 mmol)을 디에틸에테르 (diethyl ether, 3 ml)에 분산시킨 후， 포스포러스 펜타클로라이드 (PC15, 0.057 g, 0.273 mmol)를 천천히 첨가하고 1시간 동안 교반하였다. 반웅이 완료된 후， 유기 용매를 실내온도 이하에서 감압하여 농축한 다음， 아세톤 (2 ml)을 반웅물에 넣어 회석하였다. 이어서 반응물에 물 (0.2 ml)에 녹인 소듐아지드 (NaN3, 0.019 g, 0.298 瞧 ol)를 0°C에서 천천히 적가하였다. 실온에서 2시간 동안 교반한 후， 반응이 완료되어 2 ,6-디플루오로-벤조일아지드가 생성되면， 에틸아세테이트로 희석한 후， 물로 세척하였다. 유기층을 무수 마그네슘설페이트 (MgS04)로 탈수한 후， THF(1 ml)에 분산시키고， 4ᅳ (4-아미노 -2-플루오로페닐 )-7-(5-메틸 -1H-이미다졸 -2- 일)이소인돌린ᅳ 1-온 (화합물 D, 0.04 g, 0.124 mmol)이 들어있는 THF(4 ml)에 첨가하여 90°C에서 4시간 동안 교반하였다. 반웅이 완료되면 감압 하에 용매를 농축시키고， 실리카겔 컬럼크로마토그래피 (메틸렌클로라이드 ： 메탄을 = 20 ： 1)로 전개하여 표제 화합물을 얻었다 (0.025 g, 수율 42%) .
^-NMR Spectrum(300 MHz, DMSO-^)： 14.45-14.36(m, 1H), 9.40-9.36(m, 2H) 8.42(d, J=8.1Hz, 1H)， 8.33(s, 1H) , 7.62-7.57(m, 2H) , 7.48(t, J=8.4Hz, 1H), 7.37-7.26(m, 2H), 7.20-6.82 (m, 3H), 4.40(s, 2H), 2.29-2.19 (in, 3H)
LCMS [M+l]： 478.4 실시예 4: l-(2-클로로 -6-플루오로-페닐) -3-{3-플루오로 -4-[7-(5-메틸 이미다졸 -2-일) -1-옥소 -2, 3-디히드로 -1H-이소인돌 -4-일] -페닐 } -우레아의 제조
2-클로로 -6-폴루오로벤조산 (0.054 g, 0.31 匪 ol)을 디에틸에테르 (3 ml)에 분산시킨 후， 포스포러스 펜타클로라이드 (PC15, 0.074 g, 0.357 隱 ol)를 천천히 첨가하고 1시간 동안 교반하였다. 반웅이 완료된 후 유기 용매를 실내온도 이하에서 감압하여 농축한 다음， 아세톤 (2 ml)을 반웅물에 넣어 희석하였다. 이어서 반웅물에 물 (0.2 ml)에 녹인 소듐아지드 (NaN3, 0.024 g, 0.372 瞧 ol)를 0°C에서 천천히 적가하였다. 실은에서 2시간 동안 교반한 후, 에틸아세테이트로 희석하고 물로 세척하였다. 유기층을 무수 마그네슘설페이트 (MgS04)로 탈수한 후， THFC1 ml)에 분산시키고， 4ᅳ (4-아미노 -2-플루오로페닐 )-7-(5-메틸 -1H-이미다졸 -2- 일)이소인돌린 -1-온 (화합물 D, 0.05 g, 0.155 mmol)이 들어있는 THF(4 ml)에 첨가하여 90°C에서 3시간 동안 교반하였다. 반웅이 완료되면 감압 하에 용매를 농축시키고， 실리카겔 컬럼크로마토그래피 (메틸렌클로라이드 ： 메탄올 = 20 ： 1)로 전개하여 표제 화합물을 얻었다 (0.029 g, 수율 42%).
-赚 Spectrum(300 MHz, DMS0-c )： 14.45-14.35(m, 1H) , 9.40-9.35(m, 2H), 8.42(d, J=8.1Hz, 1H), 8.33(s, 1H), 7.63-7.58 (m, 2H), 7.47(t, 7=8.4Hz, 1H), 7.41-7.26(m, 4H), 7.07-6.82(m, 1H), 4.40(s, 2H) , 2.30-2.20(m, 3H)
LCMS [M+l]： 494.4 실시예 5: 1-(2，6-비스-트리플루오로메틸-페닐) -3-{3-플루오로 -4-[7-(5-메틸- 1H-이미다졸 -2-일 )-1-옥소 -2 ,3-디히드로 -1H-이소인돌 -4-일] -페닐 } -우레아의 제조
2，6-비스 -트리플루오로메틸벤조산 (0.088 g, 0.31 mmol)을 디에틸에테르 (3 ml)에 분산시킨 후， 포스포러스 펜타클로라이드 (PC15, 0.068 g, 0.326 瞧 ol)를 천천히 첨가하고 1시간 동안 교반하였다. 반웅이 완료된 후 유기 용매를 실내온도 이하에서 감압하여 농축한 다음， 아세톤 (2 ml)을 반응물에 넣어 희석하였다. 이어서 반웅물에 물 (0.2 ml)에 녹인 소듐아지드 (NaN3, 0.024 g, 0.372 醒 ol)를 0°C에서 천천히 적가하였다. 실온에서 2시간 동안 교반한 후， 반웅이 완료되어 2, 6-비스-트리플루오로메틸벤조일아지드가 생성되면， 에틸아세테이트로 희석한 후， 물로 세척하였다. 유기층을 무수 마그네슴설페이트 (MgS04)로 탈수한 후， THF(1 ml)에 분산시키고 4-(4-아미노 -2-플루오로페닐 )-7-(5-메틸 -1H-이미다졸 -2- 일)이소인돌린 -1-온 (화합물 D, 0.05 g, 0.155 隱 ol)을 THF(4 ml)로 회석한 플라스크에 첨가하여 90°C에서 3시간 동안 교반하였다. 반웅이 완료되면 감압 하에 용매를 농축시키고， 실리카겔 컬럼크로마토그래피 (메틸렌클로라이드 ： 메탄을 = 20 ： 1)로 전개하여 표제 화합물을 얻었다 (0.018 g, 수율 20%).
ᅳ讓 Spectrum(300 MHz, DMS0- )： 8.40(d, J=8.4Hz, 1H)， 8.09-8.06(m, 2H), 7.76(t, J=8.1Hz, 1H), 7.63(d, J=8.1Hz, 1H)， 7.54(d, J=12.9Hz, 1H) , 7.38(t, J=8.4Hz, 1H), 7.24(d/d, J=8.4Hz, 1H), 6.94(s, 1H) , 4.43(s, 2H), 2.33(s, 3H)
LCMS [M+l]： 578.4 실시예 6: l-{3-플루오로 -4-[7-(5-메틸 -1H-이미다졸 -2-일 )-1-옥소 -2 , 3- 디히드로 -1H—이소인돌- 4-일] -페닐 }-3-(2-플루오로 -6-트리플루오로메틸-페닐 ) - 우레아의 제조 2-플루오로 -6-트리플루오로메틸벤조산 (0.058 g, 0.279 mmoO을 디에틸에테르 (3 ml)에 분산시킨 후， 포스포러스 펜타클로라이드 (PC15, 0.064 g, 0.307 瞧 ol)를 천천히 첨가하고 1시간 동안 교반하였다. 반옹이 완료되면 유기 용매를 실내온도 이하에서 감압하여 농축한 후， 아세톤 (2 ml)을 반응물에 넣어 희석한다. 이어서 반웅물에 물 (0.2 ml)에 녹인 소듬 4지드 (NaN3, 0.024 g, 0.363 mmol)를 0°C에서 천천히 적가하였다. 실온에서 2시간 동안 교반한 후， 에틸아세테이트로 희석하여， 물로 세척하였다. 유기층을 무수 마그네슴설페이트 (MgS04)로 탈수한 후， THF(1 ml)에 분산시키고, 4-(4-아미노 -2-플루오로페닐 )-7-(5-메틸 -1Hᅳ이미다졸ᅳ 2- 일)이소인돌린 -1-온 (화합물 1)， 0.045 g, 0.14 mmol)을 THF(4 ml)로 희석한 플라스크에 첨가하여 90°C에서 4시간 동안 교반하였다. 반웅이 완료되면 감압 하에 용매를 농축시키고， 실리카겔 컬럼크로마토그래피 (메틸렌클로라이드 ： 메탄올 = 20 ： 1)로 전개하여 표제 화합물을 얻었다 (0.023 g, 수율 32%) ·
¾-NM Spectrum (300 顧 z, DMS0-i¾)： 8.41-8.39(m, IH), 7.64-7.50(m, 5H), 7.39(t, J=8.4Hz, IH), 7.25(m, 8.4Hz, IH), 6.94(s, IH), 4.43(s, 2H)， 2.33(sT 3H)
LCMS [M+l]： 528.4 실시예 7: l-{3-플루오로 -4-[7-(5-메틸 -IH-이미다졸 -2-일) -1-옥소 -2,3- 디히드로 -1H-이소인돌 -4-일 ] -페닐 }-3-(2， 4， 6-트리플루오로-페닐 ) -우레아의 제조
2，4，6_트리플루오로벤조산 (0.08 g, 0.45 隱 ol)을 디에틸에테르 (5.7 ml)에 분산시킨 후， 포스포러스 펜타클로라이드 (PC15, 0.11 g, 0.52 隱 ol)를 천천히 첨가하고 1시간 동안 교반하였다. 반웅이 완료되면 유기 용매를 실내온도 이하에서 감압하여 농축한 후, 아세톤 (3.8 ml)을 반웅물에 넣어 희석하였다. 이어서 반웅물에 물 (0.28 ml)에 녹인 소듐아지드 (NaN3, 0.035 g, 0.545 腿 ol)를 0°C에서 천천히 적가하였다. 실온에서 2시간 동안 교반한 후， 반웅이 완료되어 2，4，6-트리플루오로벤조일아지드가 생성되면， 에틸아세테이트로 희석한 후， 물로 세척하였다. 유기층을 무수 마그네슘설페이트 (MgS04)로 탈수한 후, THF(2 ml)에 분산시키고， 4ᅳ(4-아미노 -2-플루오로페닐) -7-(5-메틸 -1H-이미다졸ᅳ 2- 일)이소인돌린 -1-온 (화합물 D, 0.073 g, 0.23 薩 ol)가 들어있는 THF(7.5 ml)에 첨가하여 90°C에서 3시간 동안 교반하였다. 반웅이 완료되면 감압 하에 용매를 농축시키고， 실리카겔 컬럼크로마토그래피 (메틸렌클로라이드 ： 메탄올 = 20 ： 1)로 전개하여 표제 화합물을 얻었다 (0.026 g, 수율 23%).
-NMR Spectrum(300 MHz, DM50- (¾)： 14.46-14.37 (m 1H), 9.47-9.45 (br m, 1H), 9.37 (s, 1H), 8.45 (d, J=1.8Hz, 1H) , 8.30-8.27 (br m, 1H)， 7.63-7.46(m, 3H), 7.31-7.26 (m, 3H) , 7.09-6.84 (m, 1H) , 4.42 (s, 2H), 2.31-2.21 (m, 3H) LCMS [M+l]： 496.3 실시예 8: l-(2,6-디플루오로-페닐) -3-{3-플루오로 -4-[7-(5-메틸 -1H- 이미다졸 -2-일 )-1-욱소— 2， 3-디히드로 -1H-이소인돌 -4-일] -페닐 }-1-메틸 -우레아의 제조
4-(4-아미노 -2-플루오로페닐 )ᅳ7-(5-메틸 -1H-이미다졸 -2-일)이소인돌린 -1- 온 (화합물 D, 0.1 g, 0.31 醒 ol)을 DMF 0.8 ml), THF(4 ml)에 분산시킨 후 피리딘 (0.05 ml) 및 4-나이트로페닐 카르보노클로리데이트 (0.07 g, 0.36 瞧 ol)를 첨가하고 4시간 동안 교반하였다. 반응이 완료된 후, n-핵산 (3 ml)을 넣고 30분 동안 교반하고， 생성된 고체를 n-핵산 ： THF = 1 ： 1 (12 ml)의 용매로 세척하면서 여과한 후 건조하였다. 건조된 화합물을 DMF(4 ml)에 분산시킨 후 2，6ᅳ 디플루오로 -메틸아닐린 (0.294 g, 2.05 麵 ol)을 넣고 100°C에서 12시간 교반하였다. 실온으로 넁각한 후에 반웅액에 5¾ 메탄을을 함유한 에틸아세테이트를 넣어 충분히 희석한 후， 포화 NaHC03 수용액과 물을 넣어 세척하였다. 유기층을 무수 마그네슘설페이트 (MgS04)로 탈수한 후 여과하여 농축하였다. 실리카겔 컬럼크로마토그래피 (메틸렌 클로라이드 ： 메탄올 = 20 ： 1)로 전개하여 표제 화합물을 얻었다 (0.018 g, 수율 18%) · Ή-NMR Spectrum(300 MHz, DMS0-o¾)： 14.45-14.36 (m, 1H) , 9.36(s, 1H) , 8.91(s, 1H), 8.42(d, J=8.1Hz, 1H), 7.61-7.34(m, 5H), 7.26-7.21(m, 2H), 7.07- 6.82(m, 1H), 4.40(s, 2H), 3.20(s, 3H), 2.30-2.20(m, 3H)
LCMS [M+l]: 492.4 실시예 9: l-{3-플루오로 -4-[7-(5-메틸 -1H-이미다졸 -2-일) -1-옥소 -2,3- 디히드로 -1H-이소인돌 -4-일] -페닐 }-3-펜타플루오로페닐 -우레아의 제조 펜타플루오로 벤조산 (0.066 g, 0.31 mmol)을 디에틸에테르 (3 ml)에 분산시킨 후， 포스포러스 펜타클로라이드 (PC15, 0.071 g, 0.341 mmol)를 천천히 첨가하고 40분간 교반하였다. 반웅이 완료되면 유기 용매를 실내온도 이하에서 감압하여 농축한 후， 아세톤 (3 ml)을 반응물에 넣어 희석하였다. 이어서 반웅물에 물 (0.2 ml)에 녹인 소듐아지드 (NaN3, 0.026 g, 0.403 隱 ol)를 0°C에서 천천히 적가하였다. 실온에서 1시간 동안 교반한 후, 에틸아세테이트로 희석한 다음 물로 세척하였다. 유기층을 무수 마그네슘설페이트 (MgS04)로 탈수한 후, THF(1 ml)에 분산시키고， 4- (4-아미노 -2ᅳ플루오로페닐) -그 (5-메틸 -1H-이미다졸 -2-일 )이소인돌린 -1-온 (화합물 D 0.050 g, 0.155 瞧 ol)을 THF(3 ml)로 희석한 플라스크에 첨가하여 90°C에서 3시간 동안 교반하였다. 반응이 완료되면 감압 하에 용매를 농축시키고, 실리카겔 컬럼크로마토그래피 (메틸렌클로라이드 ： 메탄을 = 20 ： 1)로 전개하여 표제 화합물을 얻었다 (0.023 g, 수율 28%).
-赚 Spectrum(300 MHz, DMSO-^)： 14.45-14.36(m, 1H), 9.60(s, 1H) , 9.36(s, 1H), 8.83(br s, 1H)， 8.43(d, 8.1Hz, 1H), 7.62-7.57(m, 2H), 7.50(t, J=8.4Hz, 1H), 7.30(d, J=8.4Hz, 1H), 7.08-6.83(m, 1H)， 4.40(s, 2H), 2.30- 2.20(m, 3H)
LCMS [M+l]: 532.4 실시예 10: l-(2,5-디플루오로페닐) -3-(3-플루오로 -4-(7-(5-메틸 -1H- 이미다졸 -2-일) -1-옥소이소인돌린 -4-일)페닐)우레아의 제조
2,5-디플루오로벤조산 (0.05 g, 0.32 mmol)을 THF(4 ml)에 분산시킨 후, 트리 에틸아민 (0.088 ml, 0.63 議 ol) 및 디페닐포스포르아지데이트 (DPPA, 0.08 ml, 0.36 麵 ol)를 넣고， 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 2, 5-디플루오로벤조일아지드가 생성되었음을 확인한 후， 화합물 D(0.051 g, 0.16麵 ol)를 첨가하고， 9( C에서 4시 간 동안 교반하였다. 반웅이 완료되면 반웅액에 5% 메탄올을 함유한 에틸아세테이 트를 넣고 충분히 회석한 후, 포화 NaHC03 수용액으로 세척하였다. 이어서 유기층 을 무수마그네슘설페이트 (MgS04)로 탈수한 후， 감압하여 농축하였다. 농축된 반웅 흔합물을 실리카겔 컬럼크로마토그래피 (메틸렌클로라이드: 메탄올 = 20 ： 1)에서 전개하여 분리한 후 농축하여， 표제 화합물을 얻었다 (0.026 g( 수을 34%).
-霞 Spectrum(300 MHz, DMS0-i¾)： 14.47-14.37 (m, 1H), 9.58 (s, 1H), 9.37 (s, 1H), 8.96 (s, 1H), 8.45 (d, J=8.4Hz, 1H), 8.06-7.99 (m, 1H), 7.67- 7.49 (m, 3H), 7.36-7.09 (m, 2H)， 6.89-6.84 (m, 1H), 4.43 (s, 2H)， 2.31—2.22 (m, 3H)
LCMS [M+l]： 478.4 실시예 11: l-(2,4-디플루오로-페닐) -3-{3-플루오로 -4-[7-(5-메틸 -1H- 이미다졸 -2-일) -1-옥소 -2, 3-디히드로 -1H-이소인돌 -4-일] -페닐 } -우레아의 제조
2 ,4-디플루오로벤조산 (0.04 g, 0.248 mmol)를 THF(3 ml)에 분산시킨 후， 트리에틸아민 (0.069 ml, 0.496 瞧 ol) 및 디페닐포스포르아지데이트 (DPPA, 0.075 g, 0.273 mmol)을 넣고， 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반웅물에 4-(4-아미노 -2- 플루오로페닐) -그 (5-메틸 -1H-이미다졸 -2-일)이소인돌린 -1-온 (화합물 D, 0.040 g, 0.124 mmol)을 첨가하고， 90°C에서 4시간 동안 교반하였다. 반웅이 완료되면 반웅액에 5% 메탄을을 함유한 에틸아세테이트를 넣고 충분히 희석한 후， 물과 포화 NaHCOs 수용액으로 세척하였다. 이어서 유기층을 무수마그네슘설페이트 (MgS04)로 탈수한 후， 감압하여 농축하였다. 농축된 반웅 흔합물을 실리카겔 컬럼크로마토그래피 (메틸렌클로라이드 ： 메탄올 = 20 ： 1)에서 전개하여 분리한 후， 농축하여， 표제 화합물을 얻었다 (0.024 g, 수율 42%).
-匿 Spectrum(300 顧 z, DMSOofe): 14.45-14.36 (m, 1H), 9.39-9.35(m,
2H), 8.64(s, 1H), 8.43(d, J=8.1Hz, 1H) , 8.09-8.00(m, 1H), 7.65-7.59(m, 2H), 7.49(t, 7=8.4Hz, 1H), 7.35-7.21 m, 2H), 7.08-6.83(m, 2H), 4.41(s, 2H), 2.30- 2.20(m, 3H)
LCMS [M+l]： 478.4 실시예 12： 1-{3-플루오로 -4-[7-(5-메틸 -1H-이미다졸 -2-일 )-1-옥소 -2 , 3- 디히드로 -1H-이소인돌 -4-일] -페닐 }-3-(2，3ᅳ6-트리플루오로-페닐) -우레아의 제조
2, 3,6-트리플루오로 벤조산 (0.044 g, 0.248 議 ol)올 디에틸에테르 (4 ml)에 분산시킨 후, 포스포러스 펜타클로라이드 (PC15, 0.057 g, 0.273 画 ol)를 천천히 첨가하고 40분간 교반하였다. 반웅이 완료되면 유기 용매를 실내온도 이하에서 감압하여 농축한 후， 아세톤 (3 ml)을 반웅물에 넣어 회석한다. 이어서 반웅물에 물 (0.2 ml)에 녹인 소듐아지드 (NaN3, 0.021 g, 0.322 画 ol)를 0°C에서 천천히 적가하였다. 실온에서 1시간 동안 교반한 후， 에틸아세테이트로 희석한 후， 물로 세척하였다. 유기층을 무수 마그네슘설페이트 (MgS04)로 탈수한 후， THF(1 ml)에 분산시키고， 4-(4-아미노 -2-플루오로페닐) -7-(5-메틸 -1H-이미다졸ᅳ 2- 일)이소인돌린 -1-온 (화합물 D, 0.040 g, 0.124 讓 ol)을 THF(3 ml)로 희석한 플라스크에 첨가하여 90°C에서 6시간 동안 교반하였다. 반웅이 완료되면 감압 하에 용매를 농축시기고, 실리카겔 컬럼크로마토그래피 (메틸렌클로라이드 ： 메탄을 = 20 ： 1)로 전개하여 표제 화합물을 얻었다 (0.022 g, 수율 36%).
¾-賺 Spectrum(300 MHz, DMSO-^)： 14.45-14.35(m, 1H), 9.51(br s, 1H), 9.35(s, 1H), 8.62(br s, 1H), 8.43(d, J=8.1Hz, 1H)' 7.62-7.57(m, 2H), 7.48(t, 8.4Hz, 1H), 7.44-7.34(m, 1H), 7.31-7.20(m, 2H), 7.07-6.83(m, 1H), 4.40(s,
2H), 2.30-2.20(m, 3H)
LCMS [M+l]： 496.4 실시예 13: l-(3,5-디플루오로-페닐) -3-{3-플루오로 -4- [그 (5-메틸 -1H- 이미다졸 -2-일 )-1-옥소 -2， 3-디히드로 -1H-이소인돌 -4-일] -페닐 } -우레아의 제조
3, 5-디플루오로벤조산 (0.04 g, 0.248 mmol)를 THF(4 ml)에 분산시킨 후， 트리에틸아민 (0.069 ml , 0.496 mmol) 및 디페닐포스포르아지데이트 (DPPA, 0.075 g,
0.273 腿 όΐ)을 넣고， 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응물에 4— (4-아미노 -2ᅳ
플루오로페닐 )-7-(5-메틸 -1Η-이미다졸 -2—일)이소인돌린 -1-온 (화합물 D, 0.040 g,
0.124 隱 ol)을 첨가하고， 90°C에서 4시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각한 후
에틸아세테이트로 희석한 다음， 물과 포화 NaHC03 수용액으로 세척하였다.
유기층을 무수마그네슴설페이트 (MgS04)로 탈수한 후， 감압하여 농축하였다. 농축된
반웅 흔합물을 실리카겔 컬럼크로마토그래피 (메틸렌클로라이드 ： 메탄을 = 20 ：
1)로 전개하여 분리한 후， 농축하여 표제 화합물을 얻었다 (0.032 g, 수율 55%) . ¬ᅳ賺 Spectrum (300 MHz, MS0-d6) - 14.45-14.36(m, 1H) , 9.50(s, 2H), 9.36(s, 1H), 8.43(d, J=8.1Hz, 1H)， 7.64-7.60 (m, 2H), 7.50(t, J=8.4Hz, 1H),
7.30-7.20 (m, 3H), 7.08-6.77(m, 2H), 4.41(s, 2H)， 2.30-2.20(m, 3H)
LCMS [M+l]： 478.3 실시예 14: l-(3,4—디플루오로-페닐) -3-{3-플루오로 -4-[7-(5-메틸 -1H- 이미다졸 -2-일) -1-옥소 -2， 3-디히드로 -1H-이소인돌 -4-일] -페닐 } -우레아의 제조 3,4-디플루오로벤조산 (0.05 g, 0.32 mmol)을 THF(4 ml)에 분산시킨 후, 트리에틸아민 (0.088 ml, 0.63 mmol) 및 디페닐포스포르아지데이트 (DPPA, 0.08 ml,
0.36 讓 ol)를 넣고， 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 3，4ᅳ 디플루오로벤조일아지드가 생성되었음을 확인한 후， 4-(4-아미노 -2-플루오로페닐)ᅳ 7-(5ᅳ메틸 -1H-이미다졸 -2-일)이소인돌린 -1-온 (화합물 D, 0.051 g, 0.16 麵 ol)을 첨가하고， 90°C에서 4시간 동안 교반하였다. 반웅이 완료되면 5% 메탄을을 함유한 에틸아세테이트로 층분히 회석한 후， 포화 NaHC03수용액으로 세척하였다. 이어서 유기층을 무수마그네슘설페이트 (MgS04)로 탈수한 후， 감압하여 농축하였다. 농축된 반응 흔합물을 실리카겔 컬럼크로마토그래피 (메틸렌클로라이드 ： 메탄올 = 20 ： 1)에서 전개하여 분리한 후， 농축하여， 표제 화합물을 얻었다 (0.035 g, 수율 46%) .
-匿 Spectrum(300 MHz, DMSO-ofe)： 14.40 (br s, 1H), 9.37 (s, 1H)， 9.13-9.03 (m, 2H), 8.44 (d, 7=8.1Hz, 1H), 7.71-7.47 (m, 4H), 7.41-7.27 (m, 3H), 7.18-7.16 (m, 1H)， 7.00 (s, 1H), 4.43 (s, 2H), 2.26 (s, 3H)
LCMS [M+l]： 478.4 실시예 15: 1— (4-시아노 -3-플루오로페닐 )-3-(3-플루오로 -4-(7-(5-메틸 -1H- 이미다졸 -2-일 )-1-옥소이소인돌린 -4-일)페닐)우레아의 제조
4-시아노 -3-폴루오로벤조산 (0.08 g, 0.48 隱 ol)을 THF(6.1 ml)에 분산시킨 후， 트리에틸아민 (0.14 ml , 0.97 隱 ol) 및 디페닐포스포르아지데이트 (DPPA, 0.12 ml, 0.56 腿 ol)를 넣고， 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 4ᅳ시아노ᅳ3ᅳ 플루오로벤조일아지드가 생성되면， 4-(4-아미노 -2-플루오로페닐) -그 (5-메틸 -1H- 이미다졸 -2-일)이소인돌린 -1-온 (화합물 D, 0.078 g, 0.24 mmol)을 첨가하고， 90°C에서 4시간 동안 교반하였다. 반웅이 완료되면 5% 메탄올을 함유한 에틸아세테이트로 충분히 희석한 후， 포화 NaHC03 수용액으로 세척하였다. 이어서 유기층을 무수마그네슘설페이트 (MgS04)로 탈수한 후, 감압하여 농축한다. 농축된 반웅 흔합물을 실리카겔 컬럼크로마토그래피 (메틸렌클로라이드 ： 메탄올 = 20 ： 1)에서 전개하여 분리한 후， 농축하여， 표제 화합물을 얻었다 (0.012 g, 수율 1OT). ¾-NMR Spectrum(300 丽 z, DMS0-i¾)： 14.40 (br s, 1H) , 9.89 (s, 1H) , 9.64 (s, 1H), 9.37 (s, 1H), 8.44 (d, J=8.7Hz, 1H), 7.94-7.15 (tn, 7H), 7.01-6.99 (m 1H), 4.43 (s, 2H), 2.26 (s, 3H)
LCMS [M+l]: 485.4 실시예 16: l-(4-클로로 -3- (트리플루오로메틸)페닐) -3-(3-플루오로 -4-(7-(5- 메틸 -1H-이미다졸 -2-일 )-1-옥소이소인돌린 -4-일)페닐)우레아의 제조
4-클로로 -3-트리플루오로메틸벤조산 (0.08 g, 0.35 顯 ol)을 THF(4.5 ml)에 분 산시킨 후， 트리에틸아민 (0.1 ml, 0.71 隱 ol) 및 디페닐포스포르아지데이트 (DPPA, 0.09 ml, 0.41 瞧 ol)을 넣고， 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 4-클로로 -3-트리 플루오로메틸벤조일아지드가 생성되었음을 확인한 후， 4— (4-아미노—2-플루오로페 닐) -그 (5-메틸 -1H-이미다졸 -2ᅳ일)이소인돌린 -1-온 (화합물 D, 0.057 g, 0.18 画 ol) 을 첨가하고， 90°C에서 4시간 동안 교반하였다. 반웅이 완료되면 5 > 메탄올을 함유 한 에틸아세테이트로 충분히 회석한 후， 포화 NaHC 수용액으로 세척하였다. 이어 서 유기층을 무수마그네슴설페이트 (MgS04)로 탈수한 후, 감압하여 농축하였다. 농 축된 반웅 흔합물을 실리카겔 컬럼크로마토그래피 (메틸렌클로라이드 ： 메탄올 = 20 ： 1)에서 전개하여 분리한 후， 농축하여， 표제 화합물을 얻었다 (0.012 g, 수율 12%) .
-賺 Spectrum(300 MHz, DMS0-c¾)： 14.47-14.37 (m, 1H), 9.36-9.32 (m,
2H), 9.25 (s, 1H), 8.45 (d, J=8.1Hz, 1H) , 8.12-8.05 (m, 1H), 7.71-7.61 (m, 4H), 7.54-7.48 (m, 1H), 7.33-7.29 (m, 1H), 7.09-6.85 (m, 1H), 4.42 (s, 2H), 2.32-2.22 (m, 3H)
LCMS [M+l]： 544.3 실시예 17: l-(3-클로로 -2，6-디플루오로페닐) -3-(3-플루오로 -4-(7-(5-메틸- 1H-이미다졸 -2-일 )-1-옥소이소인돌린 -4-일)페닐)우레아의 제조 3-클로로 -2，6-디플루오로벤조산 (0.08 g, 0.41 醒 ol)을 디에틸에테르 (5.2 ml)에 분산시킨 후， 포스포러스 펜타클로라이드 (PC15, 0.099 g, 0.48 mmol)를 천천히 첨가하고 1시간 동안 교반하였다. 반응이 완료되면 유기 용매를 실내온도 이하에서 감압하여 농축한 후, 아세톤 (3.5 ml)을 반웅물에 넣어 희석하였다. 이어서 반웅물에 물 (0.25 ml)에 녹인 소듐아지드 (NaN3, 0.032 g, 0.50 mmol)를 0°C에서 천천히 적가하였다. 실온에서 2시간 동안 교반한 후， 반응이 완료되어 3- 클로로ᅳ2， 6-디플루오로벤조일아지드가 생성되면， 에틸아세테이트로 희석한 후， 물로 세척하였다. 유기층을 무수 마그네슘설페이트 (MgS04)로 탈수한 후， TH 1.6 ml)에 분산시키고, 4-(4-아미노 -2-플루오로페닐 )-7-(5-메틸 -1H-이미다졸ᅳ 2- 일)이소인돌린 -1-온 (화합물 D, 0.067 g, 0.21 誦 ol)이 들어있는 THF(7 ml)에 첨가하여 90°C에서 3시간 동안 교반하였다. 반웅이 완료되면 감압 하에 용매를 농축시키고， 실리카겔 컬럼크로마토그래피 (메틸렌클로라이드 ： 메탄올 = 20 ： 1)로 전개하여 표제 화합물을 얻었다 (0.017 g, 수율 16%).
^-NMR Spectrum(300 MHz, DMS0-¾)： 14.47-14.38 (m, 1H) , 9.49-9.39 (m,
2H), 8.53 (s, 1H), 8.44 (d, J=8.1Hz, 1H), 7.63-7.47 (m, 4H), 7.31-7.24 (mr 2H), 7.09-6.84 (m, 1H), 4.42 (s, 2H), 2.31-2.21 (m, 3H)
LCMS [M+l]： 512.3 실시예 18: l-(2-클로로 -3,6-디플루오로페닐)-3-(3-플루오로-4-(7-(5-메틸- lH-이미다졸 -2-일 )-1-옥소이소인돌린 -4-일)페닐)우레아의 제조
2-클로로 -3 ,6-디플루오로벤조산 (0.08 g, 0.41 醒 ol)을 디에틸에테르 (5.2 ml)에 분산시킨 후， 포스포러스 펜타클로라이드 (PC15, 0.099 g, 0.48 mmol)를 천천히 첨가하고 1시간 동안 교반하였다. 반웅이 완료되면 유기 용매를 실내온도 이하에서 감압하여 농축한 후， 아세톤 (3.5 ml)을 반웅물에 넣어 희석하였다. 이어서 반웅물에 물 (0.25 ml)에 녹인 소듐아지드 (NaN3, 0.032 g, 0.50 誦 ol)를 0°C에서 천천히 적가하였다. 실온에서 2시간 동안 교반한 후, 반응이 완료되어 2- 클로로ᅳ3， 6-디플루오로벤조일아지드가 생성되면, 에틸아세테이트로 희석한 후， 물로 세척하였다. 유기층을 무수 마그네슘설페이트 (MgS04)로 탈수한 후， THF(1.6 ml)에 분산시키고， 4-(4-아미노 -2-플루오로페닐 )-7-(5-메틸 -1H-이미다졸 -2ᅳ 일)이소인돌린ᅳ 1-온 (화합물 D, 0.067 g, 0.21 mmol)이 들어있는 THF(7 ml)에 첨가하여 90°C에서 3시간 동안 교반하였다. 반웅이 완료되면 감압 하에 용매를 농축시키고， 실리카겔 컬럼크로마토그래피 (메틸렌클로라이드 ： 메탄올 = 20 ： 1)로 전개하여 표제 화합물을 얻었다 (0.038 g, 수율 36%).
-賺 Spectrum(300 MHz, DMS0-i¾)： 14.46-14.37 (m, 1H) , 9.51 (s, 1H), 9.37 (s, 1H), 8.58 (s, 1H), 8.44 (d, J=8.1Hz, 1H), 7.63-7.59 (m, 2H), 7.52- 7.29 (m, 4H), 7.09-6.84 (m, 1H), 4.42 (s, 2H), 2.31-2.21 (m, 3H)
LCMS [M+l]： 512.3 실시예 19: l-(4-클로로 -2,6-디플루오로-페닐) -3-{3-플루오로 -4-[7-(5-메틸- 1H-이미다졸 -2-일) -1-옥소 -2,3-디히드로 -1H-이소인돌 -4-일] -페닐 } -우레아의 제조
4-클로로 -2,6—디플루오로벤조산 (0.060 g, 0.31 顏 ol)을 디에틸에테르 (4 ml) 에 분산시킨 후， 포스포러스 펜타클로라이드 (PC15, 0.071 g, 0.341 mmol)를 천천히 첨가하고 40분간 교반한다. 반웅이 완료되면 유기 용매를 실내은도 이하에서 감압 하여 농축한 후， 아세톤 (3 ml)을 반웅물에 넣어 회석한다. 이어서 반웅물에 물 (0.2 ml)에 녹인 소듐아지드 (NaN3, 0.026 g, 0.403 麵 ol)를 0°C에서 천천히 적가한 다. 실온에서 1시간 동안 교반한 후， 에틸아세테이트로 희석한 후， 물로 세척한다. 유기층을 무수 마그네슘설페이트 (MgS04)로 탈수한 후， THF l ml)에 분산시키고， 4- (4-아미노 -2ᅳ플루오로페닐；卜그 (5-메틸 -1H-이미다졸 -2-일 )이소인돌린 -1-온 (화합물 D , 0.050 g, 0.155 mmol)을 THF(3 ml)로 희석한 플라스크에 첨가하여 90°C에서 4시간 동안 교반한다. 반웅이 완료되면 감압 하에 용매를 농축시키고， 실리카겔 컬럼크 로마토그래피 (메틸렌클로라이드 ： 메탄을 = 20 ： 1)로 전개하여 표제 화합물을 얻 었다 (0.024 g, 수율 30%) .
^-NMR Spectrum(300 MHz, DMSO-cfe): 14.46-14.37 (m, IH)， 9.86(s, IH), 9.38 (s, IH), 8.82 (s, IH)， 8.41 (d, J=8.1Hz, IH), 7.63-7.59 (m, 2H), 7.52- 7.29 (m, 4H), 6.97(s, IH), 4.42 (s, 2H), 2.21 (s, 3H)
LCMS [M+l]： 512.3 실시예 20: l-{3-플루오로 -4- [그 (5-메틸 -IH-이미다졸 -2-일) -1-옥소 -2,3- 디히드로 -1H-이소인돌 -4-일] -페닐 }-3-(2,3,5,6-테트라플루오로-페닐) -우레아의 제조
2，3，5，6-테트라플루오로벤조산 (0.08 g, 0.41 賺 ol)을 디에틸에테르 (5.2 ml)에 분산시킨 후， 포스포러스 펜타클로라이드 (PC15, 0.099 g, 0.48 mmol)를 천천히 첨가하고 1시간 동안 교반하였다. 반웅이 완료되면 유기 용매를 실내온도 이하에서 감압하여 농축한 후， 아세톤 (3.4 ml)을 반웅물에 넣어 회석'하였다. 이어서 반웅물에 물 (0.25 ml)에 녹인 소듐아지드 (NaN3, 0.032 g, 0.50 mmol)를 0°C에서 천천히 적가하였다. 실온에서 2시간 동안 교반한 후， 반웅이 완료되어 2，3，5，6_테트라플루오로벤조일아지드가 생성되면， 에틸아세테이트로 희석한 후， 물로 세척하였다. 유기층을 무수 마그네슘설페이트 (MgS04)로 탈수한 후， THF(1.6 ml)에 분산시키고， 4-(4-아미노 -2-플루오로페닐) -그 (5—메틸 -1H-이미다졸 -2- 일)이소인돌린ᅳ 1-온 (화합물 D, 0.066 g, 0.21 瞧 ol)이 들어있는 THF(7 ml)에 첨가하여 90°C에서 3시간 동안 교반하였다. 반웅이 완료되면 감압 하에 용매를 농축시키고， 실리카겔 컬럼크로마토그래피 (메틸렌클로라이드 ： 메탄올 = 20 ： 1)로 전개하여 표제 화합물을 얻었다 .(0.014 g, 수율 13%)
-賺 Spectrum(300 MHz, DMS0-i¾)： 8.45 (d, J=8.1Hz, IH), 7.69-7.61 (m, 2H), 7.48-7.33 (m, 3H)， 7.00 (s, 1H)' 4.48 (s, 2H), 2.38 (s, 3H)
LCMS [M+l]： 514.3 상기 실시예 1 내지 20에서 얻어진 화합물들의 구조식을 하기 나타내었다.
[표 1]
Figure imgf000036_0001
Figure imgf000037_0001
Figure imgf000038_0001
Figure imgf000039_0001
상기 실시예에서 제조된 화합물들에 대하여 다음과 같이 생물검정 시험을 실시하였다. 본 발명의 화합물의 생물학적 활성은 종래부터 공지된 어떠한 방법을 사용하여 평가될 수 있다. 적합한 검정 방법은 당업계에 잘 공지되어 있다. 다음의 검정법은 다양한 키나아제들의 분석법의 일례로서 이로 제한하려는 의도는 아니다. 본 발명의 화합물은 하기 검정법 중 적어도 하나에서 활성을 나타낸다. 시험예 1: BT 활성 억제 분석 (ELISA method)
본 발명의 화합물의 BTK 억제제로서의 활성을 평가하기 위하여 시판되는 BTK (promega)를 사용하였다. 구체적으로， 0.4 nM의 BTK 효소와 기질로 작용하는 40 I biotin-Sl 기질 펩티드， 50 M ATP를 반웅 버퍼 (15 mM Tris-HCl (pH 7.5)， 20 niM MgCl2, 2 mM MnCl2, 2 mM DTT, O.lmg/ml BSA) 내에서 효소 반옹을 수행하였다. 시험하고자 하는 농도의 화합물을 처리하여 30°C에서 20분간 반응시켰다. 반응이 끝난 후， ELISA 방법을 이용하여 활성 여부를 측정하였다. 화합물을 처리하지 않은 시료의 흡광도 값을 100% 대조군으로 하고， 시험하고자 하는 농도의 화합물을 처리한 시료에서 BTK 효소의 잔류 활성의 <¾로서 BTK 억제제의 활성을 평가하였다. 다양한 농도의 화합물 처리시 남아 있는 BTK 효소 활성을 측정한 후， 대조군 대비 50% BTK 효소 활성 억제가 일어나는 화합물의 농도를 BTK 억제제의 IC50 값으로 결정하였다.
전술한 본 발명의 범위에 속하는 화합물 중， 임의의 몇 개의 화합물들에 대해서 BTK 키나아제 활성 억제 효과를 측정하여 다음 표 2에 요약 하였다.
[표 2] 대표적인 화합물들의 BTK 키나아제들의 활성 억제 결과
Figure imgf000040_0001
시험예 2: 히스타민 유리 실험 (histamine release assay)
비만세포에서 BTK 활성이 저해 되면 히스타민과 같은 매개체 (mediator), 지질 매개체 (lipid mediator)의 생산 또는 사이토카인 (cytokine)의 분비 (secretion)가 줄어 든다 (문헌 [J Immunol. 2000 Aug 1； 165(3)： 1210- 9. Redundant and opposing functions of two tyrosine kinases, Btk and Lyn, in mast cell activation. Kawakami Y, Kitaura J, Satterthwaite AB, Kato RM, Asai K, Hart man SE, Maeda-Yamamoto M, Lowell CA, Raw lings DJ , Witte ON, Kawakami T]).
히스타민 유리 실험은 문헌 [FEBS Lett. 2002 Sep 11 ;527(1-3) :274-8. Silencing of Brut on ' s tyrosine kinase (Btk) using short interfering RNA duplexes (siR A). Heinonen JE, Smith CI, Nore BF]의 방법을 토대로 실시 하였으며， 히스타민의 양은 효소 면역측정법 (enzyme immunoassay)을 이용하여 실시 하였다.
RBL-2H3 세포 (한국세포주 은행으로부터 입수)를 10%(v/v) FBS가 첨가된 DMEM 배지에서 5% C02, 37°C, 72시간 배양한 후 96 웰 플레이트에 각 웰당 10,000개 세포를 분주하여 5% C02, 37 °C 인큐베이터에서 24시간 동안 배양하였다.
위에서 배양된 세포에 단일클론 안티 -DNP monoclonal ant i-DNP)(sigma) 500 ng/ml과 100%(v/v) 디메틸설폭사이드 (DMS0)에 녹인 화합물을 각각 0.001， 0.01, 0.1, 1.0， 10 μΜ농도로 함께 처리하였으며， 대조군으로 100% (ν/ν) 디메틸설폭사이드를 사용하였다. 그 후 C02 ) 37 °C 인큐베이터에서 24시간 동안 배양하였다. 이 후 EIA 히스타민 키트 (I隱 unotech) 실험 방법에 따라， 배양이 끝난 플레이트에 50 ≠ 히스타민 유리 버퍼 (histamine release buffer)를 각 웰 당 50 ^씩 처리한 후 37°C에서 30분 동안 반웅시킨 후 반웅이 끝난 플레이트의 배지를 각 ¾ 당 100 ^씩 새로운 플레이트에 옮기고 25 βί 아세틸화 버퍼 (acetylation buffer) 및 25 아세틸화 시약 (acetylat ion reagent)을 넣어 층분히 섞어 주었다. 상기와 같이 만들어진 아세틸화 시료 중 50 /^를 항체가 코팅된 플레이트에 옮기고 200 μί 히스타민 알칼라인 포스파타제 컨쥬게이트 (conjugate)를 넣어 섞어준 후 4°C에서 18시간 동안 반웅 시켰다. 반웅이 끝난 플레이트의 시료를 모두 제거한 후 세척 버퍼 (wash buffer)를 200 ≠ 첨가하여 3번 세척한 후 기질 (substrate)을 200 ≠ 첨가하여 상온에서 30분 동안 반웅시킨 후 정지액 (stop solution) 50 μΐ를 첨가하여 반웅을 종료한 후 Benchmark plus (Biorad) 장비를 사용하여 406 nm에서 흡광도를 측정 하였다. 화합물을 처리하지 않은 대조군 세포의 흡광도를 기준으로 각 화합물들의 처리 농도에 따른 히스타민 유리 정도를 산출하였다. EC50(yM) 값은 히스타민 유리를 50% 억제하는 각 화합물의 농도를 액셀 그래픽 프로그램 (Excel graphic program)을 이용하여 산출하였다.
전술한 본 발명의 범위에 속하는 화합물 중， 임의의 몇 개의 화합물들에 대해서 항염증 치료제의 가능성을 확인하기 위하여 히스타민 유리 시험을 수행하여 그 EC50값을 다음 표 3에 요약하였고 그 효과가 아주 우수하게 나타났다.
[표 3] 대표적인 화합물들의 히스타민 유리 시험 결과
Figure imgf000042_0001
시험예 3: 세포기반 증식 억제 시험 (anti-proliferation assay)에 의한 검정법 (MTS assay)
상기에서 제조된 화합물이 세포외 신호조절 키나아제 활성 억제를 통하여 암세포 증식 억제 효과를 확인하기 위하여 MTS 에세이를 수행하였다 (Barltrop, J. A. et al (1991) 5- ( 3-c ar boxyme t hoxypheny l)-2-(4,5-dimethylthiazoly)-3-(4- sulfophenyl ) tetrazol ium, inner salt (MTS) and related analog of 3— (4,5— dimethyl thiazolyl )-2,5,-diphenyltetrazol ium bromide (MTT) reducing to purple water soluble formazans as cellᅳ viabi 1 ity indicators. Bioorg. Med. Chem. Lett 1， 611-4； Cory, A.H. et al (1991) Use of an aqueous soluble tertrazol ium/ formazan assay for cell growth assays in culture. Cancer Comm. 3 207-12.).
인간 림프종 세포주인 Jeko-l(ATCC), Mino(ATCC), H9(한국세포주 은행) 및 SR(ATCC)과 인간 백혈병 세포주인 MV4-11(ATCC), Molm-13(DSMZ) , Ku812(ATCC)들을 대상으로 하여 아래와 같은 분석을 수행하였다.
Jeko-1, Mino, H9, SR, MV4-11, Molm-13 및 Ku812 세포들은 10% FBS를 포함하는 RPMI1640 배지 (GIBC0, invitrogen)가 들어있는 96웰 플레이트에， 각각 10,000 세포수 /웰의 농도로 분주한 후， 5% C02 및 37°C조건에서 24시간 동안 배양하였다. 그 후， 각 웰에 상기 실시예의 화합물들을 각각 0.2， 1， 5， 25 및 100 μ Μ 농도로 처리하였으며， 대조군으로 디메틸설폭사이드 (DMS0)를 화합물 처리시 사용한 퍼센트와 같은 0.08 중량 ¾>로 처리하였다. 그 후， 각 세포를 48시간 동안 배양하였다.
세포의 생존 능력을 확인하기 위해서 상기 각 배양된 세포의 배지에 CellTiter 96® 수계 비방사성 세포 증식 실험 키트 (aqueous Non-radioactive cell proliferation assay kitKPromega)에서 제공되는 MTS(3-(4,5-디메틸싸이아졸 -2- 일) _5-(3-카복시메특시페닐) -2-(4-설포페닐) -2H-테트라졸륨, 분자내 염 (inner salt))와 PMS (페나진 메쏘설페이트) 흔합액 20 ^를 첨가하여 37°C 조건에서 2시간 동안 더 배양하였다. 그 후 490 ran에서 흡광도를 측정하였다. 화합물을 처리하지 않은 대조군 세포의 흡광도를 기준으로 각 화합물들의 처리 농도에 따른 세포증식 저해 정도를 산출하였으며， 이때 암세포의 증식을 50% 억제하는 각 화합물의 농도를 Ε(:50( μΜ) 값으로 산출하였다. 항염증 치료제로서의 가능성뿐 아니라 림프종 같은 항암 치료제로서의 가능성을 확인하기 위하여 Jeko-l, Mino, H9 그리고 SR의 네가지 림프종 세포들에 대하여 증식 억제 시험을 수행하였고 그 EC50값을 다음 표 4에 요약하였다
[표 4] 대표적인 화합물들의 림프종 세포들에 대한 증식 억제 시험 결과
Figure imgf000044_0001
또한， 림프종 세포에서 활성이 좋았던 임의의 화합물에 대하여 림프종 이외에 백혈병 세포들에 대하여도 증식 억제 시험을 수행하였고 높은 항암 효과를 확인 하였다. 그 효과에 대한 EC50값을 다음 표 5에 요약하였다. [표 5] 대표적인 화합물들의 백혈병 세포들에 대한 증식 억제 시험 결과
Figure imgf000045_0001

Claims

특허청구의 범위
1. 하기 화학식 1로 표시되는 화합물， 그의 약학적으로 허용 가능한 염， 에스테르， 프로드러그， 수화물， 용매화물 및 이들의 이성체로 이루어진 군으로부터 선택되는 화합물:
Figure imgf000046_0001
3알킬이고，
Ri 및 ¾는 각각 독립적으로 수소 또는 ( 3알킬이며，
R3 내지 R7은 각각 독립적으로 수소， 할로겐， 시아노， 니트로 또는 d- 3할로알킬이다.
2. 제 1 항에 있어서， 내지 R7이 각각 독립적으로 수소， 플루오로， 클로로， 브로모, 요오도, 시아노， 니트로， 디플루오로메틸 또는 트리플루오로메틸인 화합물.
3. 제 1 항에 있어서， 및 R2가 각각 독립적으로 수소 또는 메틸이고; R3 내지
R7이 각각 독립적으로 수소， 플루오로， 클로로， 시아노， 트리플루오로메틸이며; ¾이 수소 또는 플루오로인 화합물.
4. 제 1 항에 있어서， 상기 화학식 1의 화합물이 하기 화합물들로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 화합물:
1) 1-(2， 6-디클로로-페닐 )-3-{3-플루오로 -4-[7-(5-메틸 -1H-이미다졸 -2-일 )-1-옥소- 2 ,3-디히드로 -1H-이소인돌 -4-일] -페닐 }-우레아；
2) 1— {3-플루오로 -4-[7-(5-메틸 -1H-이미다졸 -2-일) -1-옥소 -2，3-디히드로-lH- 이소인돌-4-일]-페닐}-3-(2-트리플루오로메틸-페닐)-우레아;
3) 1-(2， 6-디플루오로-페닐) -3-{3-플루오로 -4- [7-(5-메틸 -1H-이미다졸 -2-일 )-1- 옥소 -2，3-디히드로 -1H-이소인돌— 4-일] -페닐 } -우레아;
4) 1-(2-클로로 -6-플루오로-페닐 )-3-{3-플루오로 -4-[7-(5-메틸 -1H-이미다졸 -2-일 )_
1—옥소 -2， 3-디히드로 -1H-이소인돌 -4—일 ] -페닐 } -우레아；
5) 1-(2, 6-비스-트리플루오로메틸-페닐) -3-{3-플루오로 -4-[7-(5-메틸 -1H-이미다졸-
2-일 )-1-옥소 -2，3-디히드로 -1H-이소인돌 -4-일] -페닐 } -우레아；
6) 1-{3-플루오로 -4-[7-(5-메틸 -1H-이미다졸 -2-일) -1-옥소 -2,3-디히드로— 1H- 이소인돌 -4-일] -페닐 }-3-(2-플루오로 -6-트리플루오로메틸-페닐)—우레아;
7) 1— {3-플루오로 -4- [그 (5-메틸 -1H-이미다졸 -2-일 )-1-옥소 -2， 3-디히드로 -1H- 이소인돌 -4-일] -페닐 }-3-(2，4，6-트리플루오로-페닐) -우레아;
8) 1-(2， 6-디플루오로-페닐 )-3-{3-플루오로 -4-[7-(5-메틸 -1H-이미다졸 -2-일 )-1- 옥소 -2， 3-디히드로 -1H-이소인돌 -4-일 ] -페닐 }-1-메틸 -우레아；
9) 1— {3-플루오로 -4-[7-(5-메틸 -1H-이미다졸 -2-일) -1-옥소 -2， 3-디히드로 -1H- 이소인돌 -4-일] -페닐 }-3-펜타플루오로페닐 -우레아；
10) 1-(2， 5-디플루오로페닐 )-3-(3-플루오로 -4-(7-(5-메틸 -1H-이미다졸 -2-일 )-1— 옥소이소인돌린 -4-일)페닐)우레아;
11) 1_(2，4-디플루오로-페닐 )-3-{3-플루오로 -4-[7-(5-메틸 -1H-이미다졸 -2-일 )-1- 옥소 -2， 3—디히드로 -1H-이소인돌 -4-일 ] -페닐 } -우레아；
12) 1_{3-플루오로— 4-[7-(5-메틸 -1H—이미다졸 -2-일) -1-옥소 -2，3-디히드로-lH— 이소인돌-4-일]-페닐}-3-(2，3,6-트리플루오로-페닐)-우레아;
13) 1-(3， 5-디플루오로-페닐) -3-{3-플루오로 -4-[7-(5-메틸 -1H-이미다졸 -2—일 )-1- 옥소 -2 ,3-디히드로 -1H-이소인돌 -4-일] -페닐 } -우레아;
14) 1-(3 , 4-디플루오로-페닐) -3-{3-플루오로 -4-[7-(5-메틸 -1H-이미다졸 -2-일 )-1- 옥소— 2,3-디히드로 -1H-이소인돌 -4-일] -페닐 } -우레아;
15) 1-(4—시아노 -3-플루오로페닐 )-3-(3-플루오로 -4-(7-(5-메틸 -1H-이미다졸 -2-일 ) -
1-옥소이소인돌린 -4-일)페닐)우레아;
16) 1-(4-클로로 -3— (트리플루오로메틸)페닐) -3-(3-플루오로 -4— (7-(5—메틸 -1H- 이미다졸 -2-일) -1-옥소이소인돌린 -4-일)페닐)우레아;
17) 1-(3-클로로 -2， 6-디플루오로페닐 )-3-(3-플루오로 -4-(7-(5ᅳ메틸 -1H-이미다졸 -2- 일) -1-옥소이소인돌린 -4-일)페닐)우레아;
18) 1-(2-클로로 -3， 6-디플루오로페닐 )-3-(3-플루오로 -4-(7-(5-메틸 -1H-이미다졸 -2- 일) -1-옥소이소인돌린 -4-일)페닐)우레아;
19) 1-(4-클로로 -2， 6-디플루오로-페닐 )-3-{3-플루오로 -4-[7-(5-메틸 -1H-이미다졸-
2-일) -1-옥소 -2,3-디히드로 -1H-이소인돌 -4-일]—페닐 } -우레아; 및
20) 1-{3-플루오로 -4- [7-(5—메틸 -1H-이미다졸 -2-일 )— 1-옥소 -2， 3-디히드로 -1H- 이소인돌— 4-일] -페닐 }-3-(2， 3,5, 6-테트라플루오로-페닐) -우레아 ·
5. 제 1 항에 있어서， 상기 이성질체가 거울상 이성질체， 부분입체 이성질체 또는 라세믹 흔합물인 화합물.
6. 제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항에 따른 화합물을 유효성분으로 포함하는， 단백질 키나아제의 이상 또는 탈조절된 활성과 관련된 질병의 치료， 완화 또는 예방용 약학적 조성물.
7. 제 6 항에 있어서， 상기 단백질 키나아제가 ABL, ACK, AXL, Aurora, BLK, BMX, BTK, CDK, CSK, DDR, EPHA, FER, FES, FGFR, FGR, FLT, FRK, FYN, HCK, IRR, ITK, JAK, KDR, KIT, LCK, LYN, MAPK, MER, MET, MINK, MNK, MST, MUSK, PDGFR, PLK, RET, RON, SRC, SRM, TIE, SYK, TNK1, TRK또는 TNIK인 약학적 조성물.
8. 제 6 항에 있어서, 상기 키나아제 활성과 관련된 질병이 암， 류마티스성 관절염 및 골 관절염에 관한 염증， 천식， 알러지, 아토피 피부염 또는 건선인 약학적 조성물.
9. 제 8 항에 있어서， 상기 암이 림프종， 백혈병， 혈액암， 위암， 비-소세포 폐암， 간암， 대장암， 소장암， 췌장암， 뇌암， 뼈암， 혹색종， 유방암， 경화성선종， 자궁암， 자궁경부암， 난소암， 두경부암， 식도암， 갑상선암， 부갑상선암， 신장암, 육종, 전립선암, 요도암， 방광암， 섬유선종， 또는 교모세포종인 약학적 조성물.
10. 제 6 항에 있어서, 항생제， 알킬화제, 항대사제， 호르몬제, 면역학적 제제， 인터페론 제제 및 항암제로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상을 추가로 포함하는 약학적 조성물.
11. 제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항에 따른 화합물을 포유동물에게 투여하는 것을 포함하는 단백질 키나아제의 이상 또는 탈조절된 활성과 관련된 질병의 치료， 완화 또는 예방 방법.
12. 제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항에 따른 화합물을 이용한 단백질 키나아제의 이상 또는 탈조절된 활성과 관련된 질병의 치료， 완화 또는 예방을 위한 약학 제제의 제조를 위한 용도.
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