WO2014206353A1 - 肿瘤标志物 - Google Patents

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崔大伟
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李米川
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Tsinghua University
Protgen Ltd
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YANTAI PROTGEN BIOTECHNOLOGY DEVELOPMENT Co Ltd
Tsinghua University
Protgen Ltd
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    • G01N2800/52—Predicting or monitoring the response to treatment, e.g. for selection of therapy based on assay results in personalised medicine; Prognosis

Definitions

  • the invention relates to diagnosis, condition monitoring and therapeutic evaluation of 16 kinds of tumors such as lung cancer, liver cancer, colorectal cancer and breast cancer. More specifically, the present invention relates to a method for monitoring tumors and performing disease monitoring and therapeutic evaluation by heat shock protein 90 (quantitative detection for diagnosis of lung cancer, liver cancer, colorectal cancer, breast cancer, etc.)
  • Heat shock protein 90a is a rich intracellular chaperone protein. Recent studies have shown that Hsp90a can be specifically secreted outside the cell by cancer cells and is closely related to the occurrence and development of cancer. The research team has found that Hsp90a secreted extracellularly can be conveniently detected in peripheral blood, and its content is related to tumor burden and malignancy, but there is no data to guide the indicator. The clinical application of tumors. Therefore, how to apply secreted Hsp90a to the clinical practice of tumor is an urgent problem to be solved. Summary of the invention
  • One aspect of the present invention provides a method of determining whether a subject has or is at risk of developing cancer, comprising detecting a concentration of Hsp90a in a blood sample of the subject, if the concentration reaches or exceeds a predetermined threshold, The subject is then determined to have or have a risk of developing cancer, wherein the threshold is selected from the range of 50 ng/ml to 120 ng/ml, for example, the threshold may be 50, 53, 56, 62, 63 , 64, 67, 72, 82, 85 or 117 ng/ml, and the values within the threshold ⁇ 15% are considered to have equivalent judgment meanings.
  • the concentration determination result due to the limitations of the detection method, it is quite difficult to make the concentration determination result completely accurate. According to the usual practice in the art, the upper and lower deviations within 15% can be considered as reasonable errors. For example, when the threshold is selected to be 50 ng/ml, if the subject's measured value is 43 ng/ml, the subject may also be judged to have cancer or have a higher risk of developing cancer.
  • the blood sample may be a plasma or serum sample.
  • a plasma sample is preferred with a higher measurement accuracy.
  • the threshold for Hsp90a can be 50, 53, 56, 62, 63, 64, 67, 72, 82, 85 or 117 ng/ml.
  • a particularly preferred threshold for lung cancer The value is 67.47 ng/ml (can be rounded to 67 ng/ml), the corresponding specificity is 85 ⁇ 1 ⁇ 2, and the sensitivity is 64 ⁇ 1 ⁇ 2.
  • a value within the above range of the threshold value ⁇ 15 ⁇ 1 ⁇ 2 can be regarded as an equivalent determination range.
  • a preferred threshold for lung cancer is 82 ng/ml, i.e., a concentration of Hsp90a of 0-82 ng/ml is considered to be a normal range; in a preferred embodiment of the invention, A particularly preferred threshold for lung cancer is 53 ng/ml, i.e., a concentration of Hsp90a of 0-53 ng/ml is considered to be a normal range.
  • values in the range of the above threshold value ⁇ 15 ⁇ 1 ⁇ 2 can be regarded as having equivalent judgment meanings.
  • the blood sample is preferably a plasma sample.
  • Another aspect of the present invention provides a method for condition monitoring and/or therapeutic evaluation of a cancer patient undergoing treatment or for evaluating a therapeutic effect of a candidate therapeutic drug, including detecting the test before and after the treatment.
  • the concentration of Hsp90a in the blood sample of the person if the percentage of the increase in the concentration of Hsp90a relative to the pre-treatment Hsp90c concentration reaches or exceeds a predetermined threshold after treatment, the subject is determined to have poor progression and/or efficacy, or
  • the candidate therapeutic agent is less effective, wherein the threshold is selected from the range of 10 ⁇ 1 ⁇ 2 to 50 ⁇ 1 ⁇ 2, for example, the threshold may be 34 ⁇ 1 ⁇ 2, and the threshold is 15. /. Values within the range are considered to have equivalent judgment meaning; preferably, the blood sample is a plasma sample.
  • treatment when treating a lung cancer patient, multiple treatment cycles may be involved, such as a total of eight treatment cycles. If the entire treatment process is viewed as a whole, the concentration of Hsp90c can be measured before the start of the first treatment cycle and after the end of the eighth treatment cycle, and the effect of the entire treatment process can be judged accordingly. Alternatively, each treatment cycle can be considered a “treatment” (for example, for the purpose of obtaining a more accurate assessment). For example, the concentration of Hsp90c can be measured before and after each treatment cycle, and the effect of a single treatment cycle can be judged accordingly. Alternatively, a more accurate assessment can be made.
  • each day can be regarded as a "treatment", and the concentration of Hsp90c is detected before the start of the treatment of the day and after the end of the treatment, thereby judging the day The therapeutic effect.
  • concentration of Hsp90c is detected before the start of the treatment of the day and after the end of the treatment, thereby judging the day The therapeutic effect.
  • Those skilled in the art can specify the time span of "treatment” according to different evaluation requirements.
  • the invention also provides a method of determining whether a subject has cancer or is at risk of developing cancer, comprising jointly detecting the concentration of Hsp90a in the blood sample of the subject and the concentration of at least one other tumor marker, if the concentration of Hsp90a And the concentration of the at least one other tumor marker reaches or exceeds a predetermined threshold, determining that the subject has cancer or is at risk of developing cancer, wherein the threshold of Hsp90a is selected from 50 ng/ml to 120 ng Within the range of /ml, for example, the threshold may be 50, 53, 56, 62, 63, 64, 67, 72, 82, 85 or 117 ng/ml, and the values within the threshold ⁇ 15% are considered to have equivalent judgment meanings.
  • the blood sample is a plasma sample
  • the at least one other tumor marker is preferably selected from the group consisting of carcinoembryonic antigen (CEA), cytokeratin 19 fragment antigen 21-1 (CYFRA21-1), AFP, CA19-9, CA125 Group consisting of CA15-3, PSA and CA72-4.
  • CEA carcinoembryonic antigen
  • CYFRA21-1 cytokeratin 19 fragment antigen 21-1
  • AFP AFP
  • CA19-9 CA125 Group consisting of CA15-3, PSA and CA72-4.
  • the concentration of Hsp90c in the method of the invention is preferably detected using EDTA-K2 as an anticoagulant.
  • the types of cancer to which the method of the present invention is applicable include: lung cancer, liver cancer, colorectal cancer, breast cancer, gastric cancer, pancreatic cancer, ovarian cancer, lymphoma, esophageal cancer, melanoma, renal cancer, uterine cancer, nasopharyngeal carcinoma, osteosarcoma , bladder cancer and prostate cancer.
  • the invention also provides a kit for determining whether a subject has cancer or has a risk of developing cancer, comprising: an optional human secretory Hsp90a, a human secretory Hsp90a monoclonal antibody, a detection reagent, and instructions, wherein The threshold value of the Hsp90a concentration in the blood sample of a healthy person is indicated in the specification, and if the concentration of Hsp90c in the blood sample of the subject reaches or exceeds the threshold, the subject is determined to have cancer or has a risk of developing cancer.
  • the threshold is selected from the range of 50 ng/ml to 120 ng/ml, for example, the threshold may be 50, 53, 56, 62, 63, 64, 67, 72, 82, 85 or 117 ng/ml, and Values within the threshold ⁇ 15 ⁇ 1 ⁇ 2 are considered to have equivalent judgment meaning; preferably, the blood sample is a plasma sample.
  • kits of the present invention may include human secretory Hsp90a or may not include human secretory Hsp90a.
  • human secretory Hsp90a can be packaged separately and used in conjunction with the body portion of the kit.
  • the human secretory type Hsp90a is included in the kit of the present invention for the purpose of convenient use, and is used as a standard at the time of detection. Particularly preferred is recombinant human secretory Hsp90a.
  • a container for collecting a blood sample may be included in the kit, and the container contains EDTA-K2.
  • the container for collecting a blood sample is a blood collection tube comprising EDTA-K2.
  • the concentration of Hs P 90a is detected using EDTA-K2 as an anticoagulant.
  • the cancer types applicable to the kit of the present invention include: lung cancer, liver cancer, colorectal cancer, breast cancer, gastric cancer, pancreatic cancer, ovarian cancer, lymphoma, esophageal cancer, melanoma, renal cancer, uterine cancer, nasopharyngeal cancer, flesh Tumor, bladder and prostate cancer.
  • the method for quantitatively detecting Hsp90a in cancer-assisted diagnosis and therapeutic effect monitoring is applied to various cancers, and the threshold range of Hsp90a concentration in cancer diagnosis is found for lung cancer, liver cancer, colorectal cancer and breast. Cancer and the like are equally applicable, and specific quantitative parameters for the quantitative detection of the tumor marker Hsp90a for the diagnosis of lung cancer, liver cancer, colorectal cancer and breast cancer are provided.
  • the corresponding ROC curve is drawn according to the data of different populations. Each ROC curve provides a series of thresholds and corresponding sensitivity and specificity, according to techniques well known in the art.
  • the cut-off value of the patient relative to the healthy person is 52.79 ng/ml
  • the sensitivity, specificity and coincidence rate are 93.7%, 85% and 94.5%, respectively, when the cut-off value is 62.20 ng.
  • the sensitivity, specificity, and coincidence rate were 91.4%, 90%, and 92.2%, respectively; sensitivity, specificity, and coincidence rate when the patient's cut-off value relative to non-cancer liver-related disease was 63.66 ng/ml 90.7%, 90% and 90.3%, respectively.
  • the cut-off value is 85.24 ng/ml
  • the sensitivity, specificity and coincidence rate are 80.7%, 95% and 88.6%, respectively.
  • the sensitivity, specificity, and coincidence rate were 89.9%, 85%, and 87 for patients with a cut-off value of 52.79 ng/ml for healthy and non-cancer colorectal-related diseases, respectively.
  • % when the cut-off value is 62.20 ng/ml, the sensitivity, specificity, and coincidence rate are 83.4%, 90%, and 87%, respectively.
  • the cut-off value of the patient relative to the healthy person is 52.66 ng/ml
  • the sensitivity, specificity and coincidence rate are 65.6%, 85% and 73.85%, respectively, when the cut-off value is 61.92.
  • sensitivity, specificity, and coincidence were 54.6%, 90%, and 69.68%, respectively.
  • the sensitivity, specificity, and compliance of patients with a cut-off value of 63.41 ng/ml relative to non-cancer breast-related disease groups were The rates were 52.4%, 84.9% and 68.29%, respectively.
  • the cut-off value was 72.21 ng/ml
  • the sensitivity, specificity and coincidence rate were 41.9%, 90.1% and 65.41%, respectively.
  • the selection of the cut-off value and the corresponding parameters such as sensitivity, specificity and coincidence rate may be different, but are included in the threshold defined by the present invention.
  • One skilled in the art can select an appropriate preferred threshold from within the ROC curve or threshold range disclosed herein, based on actual usage requirements, such as requirements for a particular tumor species, sensitivity, specificity, and the like.
  • the invention also verifies that the plasma Hsp90a content of patients with lung cancer, liver cancer, colorectal cancer and breast cancer is significantly lower than that before surgery, so the detection index can be used as a means for evaluating the effect of surgical treatment.
  • the clinically benefited (CR+PR+SD) patients who received medical treatment were significantly lower after treatment than before treatment, indicating that the indicator can be used for the evaluation of the medical treatment of the above cancer.
  • plasma Hsp90a is detected in various cancer patients such as gastric cancer, pancreatic cancer, ovarian cancer, lymphoma, esophageal cancer, melanoma, renal cancer, uterine cancer, nasopharyngeal cancer, osteosarcoma, bladder cancer, prostate cancer, and the like.
  • the content was found to be significantly higher (statistically significant) compared with healthy people, and the average reference value of plasma Hsp90a content in the above different cancer patients was provided.
  • the tumor marker Hsp90a can be used for gastric cancer, pancreatic cancer, ovarian cancer, lymphoma, esophageal cancer, melanoma, kidney cancer, uterine cancer, nasal Diagnosis of multiple cancers such as pharyngeal cancer, osteosarcoma, bladder cancer, and prostate cancer.
  • Figure 1 shows the ROC curve for Hsp90a test results (based on all subjects who tested Hsp90a).
  • Figure 2 shows the ROC curve of the Hsp90a test results AUC 95% CI (0.788, 0.829).
  • Figure 3 is the ROC curve of the Hsp90a test results AUC 95% CI (0.811, 0.854).
  • Figure 4 is the ROC curve of the Hsp90a test results AUC 95% CI (0.804, 0.850).
  • Figure 5 is the ROC curve of the Hsp90a test results AUC 95% CI (0.731, 0.777).
  • Figure 6 is a ROC curve for determining tumor enlargement based on the slope.
  • Figure 7 is a plot of the ROC of the PD based on the percentage change.
  • Fig. 8 is a graph showing the ROC curve of PD based on the change value.
  • Figure 9 shows a comparison of the EDTA-K2 blood collection tube sample and the EDTA-K3 blood collection tube sample.
  • Figure 10 is a ROC curve of a liver cancer patient versus a healthy person.
  • Figure 11 is a ROC curve of a liver cancer patient versus a non-cancer liver related disease population.
  • Figure 12 is a ROC curve of colorectal cancer patients versus healthy subjects and non-cancerous colorectal-related diseases.
  • Figure 13 is a ROC curve of breast cancer patients versus healthy subjects.
  • Figure 14 is a ROC curve of breast cancer patients versus non-cancerous breast-related disease populations.
  • Figure 15 is a summary of the results of plasma Hsp90a levels in a variety of cancer patients.
  • ROC Curve for Model indicates the R0C curve for the model
  • rea under the Curve indicates the area under the curve
  • Specificity indicates the specificity
  • Sensitivity indicates the sensitivity.
  • blood sample refers to a sample obtained from the blood of a subject.
  • the blood sample is preferably a plasma or serum sample, or may be a sample diluted by plasma or serum. It will be understood by those skilled in the art that the concentration of Hsp90c may be slightly different when the test is performed separately from the plasma sample and serum sample of the subject due to differences in composition. Plasma samples are preferred in the present invention for the purpose of facilitating quantification and comparison.
  • Specificity refers to the proportion of cases diagnosed as “non-cancer” that are negative by the kit.
  • sensitivity refers to the proportion of cases diagnosed as “cancer” by pathology and tested positive by the kit.
  • “Accuracy” refers to the ratio of the sum of true positive samples to true negative samples to the total sample size, reflecting the extent to which the kit's test results are consistent with the subject's actual condition of cancer.
  • cut-off value means the criteria used to determine the test result, ie the critical value, which is higher than cut-off. Values are considered positive and below the cut-off value are considered negative.
  • the term "clinical benefit” refers to a condition in which a condition is stabilized or alleviated by a treatment in which CR, PR, and SD have exactly the same meaning as the corresponding term in the solid tumor efficacy evaluation standard (RECIST standard), ie, CR. (Complete response) Complete tumor remission, partial (PRI) partial tumor remission, and stable (SD) disease.
  • RECIST standard solid tumor efficacy evaluation standard
  • CR. Complete response
  • PRI partial tumor remission
  • SD stable disease.
  • the three indicators CR, PR, and SD are defined as clinically beneficial populations, and the opposite is PD (Progressive disease).
  • non-cancer-related disease refers to a patient diagnosed as having no cancer but having a benign-related disease by pathological diagnosis, such as a patient who is diagnosed as not having lung cancer but suffering from a benign lung-related disease such as pneumonia or tuberculosis in a lung cancer test.
  • a benign lung-related disease such as pneumonia or tuberculosis in a lung cancer test.
  • the liver cancer test it is diagnosed as a patient who is not a liver cancer but has a benign liver-related disease such as hepatitis and cirrhosis.
  • colorectal cancer test it is diagnosed as a colorectal cancer but has inflammation, colorectal polyps and other colorectal benign correlations.
  • Patients with disease, in the breast cancer test are diagnosed as patients with lung- or breast cancer but with benign breast-related diseases such as mastitis and breast hyperplasia.
  • CA19-9 carbohydrate antigen CA19-9
  • CA15-3 cancer antigen CA15-3
  • CA72-4 sugar chain antigen CA72-4
  • Hsp90a heat shock protein Hsp90a
  • the clinical use range and clinical performance of the Hsp90c quantitative test kit were evaluated by the following three aspects.
  • the range of subjects selected was hospitalized and outpatients.
  • the number of selected subjects is not less than 1100 plasma samples and not less than 150 dynamically monitored plasma samples, and the proportion of high-value samples and low-value samples is selected to meet statistical requirements.
  • Control group A group confirmed to be non-lung cancer by clinical biochemistry, imaging or pathology.
  • the control group should include samples of healthy individuals who have no apparent disease symptoms, samples that are free of lung cancer but have other lung lesions (eg, tuberculosis, pneumonia), benign lung tumors, and other malignant tumors.
  • Patients with pulmonary lesions Patients diagnosed with lung disease by clinical biochemistry, imaging, and pathology, and the lesion is not cancer.
  • Plasma sample The collection time point is:
  • Heat shock protein 90 quantitative assay kit (ELISA)
  • CEA carcinoembryonic antigen
  • CYFRA21-1 cytokeratin 19 fragment antigen 21-1
  • the area under the ROC curve for Hsp90a diagnosis of lung cancer was 0.8149.
  • the best cut-off value was determined to be >56.33 ng/ml by the maximum youden index, the corresponding sensitivity was 72.18%, and the 95% confidence interval was (69.46%, 74.90%). The degree was 78.7%, and the 95% confidence interval was (76.10%, 81.30%).
  • the sensitivity and other diagnostic performance indicators for specificity of 80%, 85%, 90%, and 95% are also described separately, as shown in Figure 1 and Table 8.1.1.1.2.2-8.1.1.1.2.3.
  • Hsp90a for lung adenocarcinoma, lung squamous cell carcinoma and small cell lung cancer was similar to that of lung cancer.
  • Hsp90c Hsp90c
  • CEA CEA cut-off value
  • Hsp90a and CYFRA21-1 test results were not missing were evaluated.
  • the cut-off value of Hsp90a is >56.33, and the cut-off value of CYFRA21-1 is >5. If any one is positive, it is judged to be positive for joint diagnosis evaluation, and the diagnostic sensitivity is further improved.
  • a total of 284 effective statistical units were obtained in the segmental evaluation, including 69 cases of tumor shrinkage group, 161 cases of tumor invariant group, and 54 cases of tumor enlargement group.
  • the median value of Hsp90c detection value relative to baseline change in the second cycle of treatment was -48.64ng/ml, -8.51 ng/mK 74.66 ng/ml, the difference between the three groups was statistically significant (P ⁇ 0.0001). There was statistical significance before and after treatment in the group. The numbers are -41.09%, -9.46%, 65.26%, respectively.
  • the Hsp90a detection value for tumor size increase is 0.7719 under the R0C curve.
  • the best cut-off point is determined by the Youden index to be >34.17% relative to the baseline, the corresponding sensitivity is 70.37%, and the 95% confidence interval is (58.19%, 82.55). % ), specificity is 80%, 95% confidence interval is (74.83%, 85.17%), see Table 8.3.2.3.2.
  • a total of 275 effective cases were obtained by case evaluation, including 95 cases in the PR group, 118 cases in the SD group, and 62 cases in the PD group.
  • the median value of the Hsp90c test value relative to the baseline change in the three groups was -90.98 ng/mK -32.91, respectively. Ng/ml, 80.32 ng/ml, the difference between the three groups was statistically significant (P ⁇ 0.0001), and there was statistical significance before and after treatment.
  • the median percentage change was -48.16%. -22.23%, 71.40%.
  • the area under the PD R0C curve for the detection of Hsp90a was 0.8406.
  • the best cut-off point was determined by the Youden index to be >34.17% relative to the baseline, the corresponding sensitivity was 72.58%, and the 95% confidence interval was (61.48%, 83.68%).
  • the specificity was 85.45%, and the 95% confidence interval was (80.71%, 90.18%). See Table 8.3.3.2.2 for details.
  • Table 8.1.1.1 Enrolled subjects and analytical data sets Results of the project All subjects 2036 [100.00%) Eliminated cases 0 [0.00%] Effective cases 2036 [100.00%) Lung cancer patients 1046 [ 51.38%] Other malignant tumors 37 [ 1.82%) Non-cancerous lung lesions 344 [ 16.90%) benign lung tumors 17 [ 0.83%) healthy population 592 [ 29.08%) Table 8.1.1.2 Non-dynamic subject case distribution
  • Adenocarcinoma 537 [ 52.54%) Squamous cell carcinoma 218 [ 21.33%] Small cell carcinoma 136 [ 13.31%) Large cell carcinoma 4 [ 0.39%) Untyped 25 [ 2.45%) Other 30 [ 2.94%)
  • Figure 1 is a ROC curve of Hsp90a detection results (based on all subjects who detected Hsp90a).
  • Table 8.1.1.1.2.2 Four-grid table determined from the cut-off value of the Hsp90a test result
  • Figure 2 is the ROC curve AUC 95% CI [0.788, 0.829] of the Hsp90oc test results.
  • Figure 3 is the ROC curve of Hsp90oc test results AUC 95% CI (; 0.811, 0.854).
  • Figure 4 is the ROC curve of Hsp90a test results AUC 95% CI [0.804, 0.850].
  • Figure 5 is the ROC curve of the Hsp90oc test AUC 95% CI (0.731, 0.777). Table 8.1 ⁇ 1.6.28 Diagnostic results based on cut-off values of 90 ⁇ test results
  • Adenocarcinoma 348 [ 50.36%) Squamous cell carcinoma 131 [ 18.96%] Small cell carcinoma 116 [ 16.79%) Large cell carcinoma 1 [ 0.14%) Untyped 20 [ 2.89%) Others 16 [ 2.32%)
  • the Hsp90a cut-off value is 56.33, and the CEA cut-off value is 5.
  • Hsp90a has a cut-off value of 56.33 and a CEA cut-off value of 4.74.
  • TP true positive
  • TN true negative
  • FP false positive
  • FN false negative
  • PPV positive predictive value
  • NPV negative predictive Value
  • LR+ positive likelihood ratio
  • LR - negative likelihood ratio
  • DOR diagnostic accuracy odds ratio
  • Adenocarcinoma 317 [ 49.53%) Squamous cell carcinoma 125 [ 19.53%] Small cell carcinoma 110 [ 17.19%) Large cell carcinoma 1 [ 0.16%) Untyped 20 [ 3.13% ) Others 13 [ 2.03%)
  • TP true positive
  • TN true negative
  • FP false positive
  • FN false negative
  • PPV positive predictive value
  • NPV negative predictive Value
  • LR+ positive likelihood ratio
  • LR - negative likelihood ratio
  • DOR diagnostic accuracy odds ratio
  • Adenocarcinoma 101 ( 59.76%) Squamous cell carcinoma 46 ( 27.22%) Small cell carcinoma 11 ( 6.51%) Large cell carcinoma 1 ( 0.59% ) Untyped 2 ( 1.18% ) Other 7 ( 4.14%)
  • NK 1 ( 0.59%) total 169 small cell carcinoma staging
  • Figure 6 is a ROC curve for determining tumor enlargement based on the slope.
  • TP true positive
  • TN true negative
  • FP false positive
  • FN false negative
  • PPV positive predictive value
  • NPV negative predictive value
  • LR+ positive likelihood ratio
  • LR- negative likelihood ratio
  • DOR diagnostic accuracy odds ratio
  • the baseline of PR and SD is the pre-treatment test value
  • the baseline of PD is the test value when the lesion size is the smallest.
  • the ROC curve of the PD is determined based on the percentage change.
  • Hsp90a kit EDTA-K2 blood collection tube (plasma tube), EDTA-K3 blood collection tube (plasma tube), serum tube
  • Figure 9 is a comparison of EDTA-K3 blood collection samples with EDTA-K2 blood collection samples.
  • the EDTA-K3 tube sample was 4.37% lower than the EDTA-K2 tube sample; in cancer patients, the EDTA-K3 tube sample was 26.95% lower than the EDTA-K2 tube sample. Therefore, if the sample is collected using the EDTA-K3 tube, the Hsp90c value of the positive specimen will be reduced.
  • Hsp90a quantitative detection kit in the diagnosis of liver cancer was evaluated by non-dynamic monitoring, which is a method of comparing single test results with pathological diagnosis and clinical diagnosis results. Dynamic monitoring of patients, that is, by tracking the changes of plasma Hsp90a content in the treatment of liver cancer patients, the effectiveness of Hsp90a quantitative detection kit in the evaluation of liver cancer efficacy was evaluated.
  • the study adopts the blind method, that is, when the information such as the group is unknown, the Hsp90a content is detected by the Hsp90a quantitative detection kit, and the results are compared and analyzed, and the test results and pathology, clinical diagnosis results, and patient efficacy are calculated.
  • the statistical indicators of the degree of conformity or difference were evaluated, and the clinical application performance of the Hsp90a quantitative detection kit was evaluated based on these indicators.
  • the samples are divided into non-dynamic monitoring samples and dynamic monitoring samples.
  • the non-dynamic monitoring sample is the remaining plasma sample after the clinical routine examination;
  • the dynamic monitoring sample is the plasma sample collected periodically by the enrolled patient or the remaining samples of the regular routine test.
  • Hsp90a Quantitative Test Kit Collect venous blood, collect blood samples in EDTA-K2 anticoagulation tubes, and invert 8-10 times. The plasma was separated by centrifugation (800-1000 g, 10 minutes), and the plasma was dispensed into an EP tube (not less than 250 ⁇ each) and quickly placed at -18 ° C for cryopreservation.
  • liver cancer group and non-hepatoma group.
  • liver cancer group A sample diagnosed as a liver cancer patient by pathological diagnosis, including different types and different stages of liver cancer.
  • Non-hepatocarcinoma group People who have not confirmed liver cancer by clinical biochemistry, imaging or pathology, This includes identifying healthy individuals with no obvious disease symptoms and samples identifying people without liver cancer but with other benign related diseases in the liver (eg hepatitis, cirrhosis, etc.).
  • Healthy person definition There are no known benign or malignant diseases, normal appearance, no visible disease symptoms, and normal clinical biochemical test results.
  • the collection time points of plasma samples are:
  • Plasma samples are collected once before treatment begins. After the start of treatment, samples are collected once at the end of each treatment period, and blood samples are collected at least until the patient completes the first evaluation. .
  • the mean ⁇ standard deviation is used for description; for the count data, the number of cases and the percentage are used to describe.
  • the clinical sample Hsp90a concentration was determined by SPSS software statistical product, and the correlation between Hsp90a and disease and linear regression analysis (ROC curve) were obtained.
  • Non-cancer liver related diseases group 151 Non-cancer liver related diseases group 151
  • the area under the curve is 0.958 0.958
  • the area under the curve is 0.958 0.958
  • the effectiveness of the Hsp90a quantitative test kit in the diagnosis of colorectal cancer was evaluated by comparison with pathological diagnosis and clinical diagnosis.
  • the effectiveness of Hsp90a quantitative detection kit in evaluating the efficacy of colorectal cancer was evaluated by tracking changes in plasma Hsp90a content during treatment.
  • the area under the curve is 0.936 0.936
  • the effectiveness of the Hsp90a quantitative test kit in the diagnosis of breast cancer was evaluated by comparison with pathological diagnosis and clinical diagnosis.
  • the effectiveness of Hsp90a quantitative detection kit in the evaluation of breast cancer efficacy was evaluated by tracking changes in plasma Hsp90a content during treatment.
  • Example 5 the overall design of the trial program: The same as the case of Example 5, the indications changed to breast cancer, non-cancerous breast related diseases including mastitis, breast hyperplasia and so on.
  • the effectiveness of the Hsp90a quantitative test kit in the diagnosis of various cancers was evaluated by comparison with pathological diagnosis and clinical diagnosis results.
  • the results showed that compared with healthy people, gastric cancer, pancreatic cancer, ovarian cancer, lymphoma, esophageal cancer, melanoma, kidney cancer, uterine cancer, nasopharyngeal cancer, osteosarcoma, bladder cancer, prostate cancer and other cancer patients
  • the Hsp90a content was significantly increased (see Figure 15), and the results were statistically significant. According to statistics, the average values of each tumor are shown in Table 12.1:

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Abstract

一种确定受试者是否患有癌症或者具有罹患癌症风险的方法，包括检测该受试者的血液样本中Hsp90a的浓度，如果该浓度达到或超过预先设定的阈值，则判定该受试者患有癌症或者具有罹患癌症的风险，其中所述阈值选自50ng/ml到120ng/ml的范围内，例如所述阈值可以为50、53、56、62、63、64、67、72、82、85或117ng/ml，且所述阈值±15%范围内的数值均被视为具有等同判定意义。

Description

肿瘤标志物
技术领域
本发明涉及肺癌、 肝癌、 结直肠癌、 乳腺癌等 16种肿瘤的诊断、 病情监测 和疗效评价等。 更具体地说， 本发明涉及通过热休克蛋白 90( 定量检测辅助诊 断肺癌、 肝癌、 结直肠癌、 乳腺癌等肿瘤和进行病情监测和疗效评价的方法。 背景技术
热休克蛋白 90a (Hsp90a)是一个含量丰富的细胞内伴侣蛋白。近年来研究 显示， Hsp90a可以被癌细胞特异性的分泌到细胞外， 且与癌症的发生和发展密 切相关。 本研究组已发现， 分泌到胞外的 Hsp90a可以在外周血中很方便的被定 量检测，其含量与肿瘤的负荷和恶性程度呈现一定的相关性，但并没有任何数据 能够指导该项指标在肿瘤临床中的应用。 因此， 如何将分泌型 Hsp90a应用于肿 瘤临床实践是亟待解决的问题。 发明内容
本发明一方面提供了一种确定受试者是否患有癌症或者具有罹患癌症风险 的方法， 包括检测该受试者的血液样本中 Hsp90a的浓度， 如果该浓度达到或超 过预先设定的阈值，则判定该受试者患有癌症或者具有罹患癌症的风险，其中所 述阈值选自 50 ng/ml到 120 ng/ml的范围内，例如所述阈值可以为 50、 53、 56、 62、 63、 64、 67、 72、 82、 85或 117 ng/ml， 且所述阈值 ± 15%范围内的数值 均被视为具有等同判定意义。
本领域技术人员可以理解， 由于检测方法的局限性，要做到浓度测定结果完 全准确是相当困难的。 根据本领域的惯常做法， 上下偏差 15%以内可以被认为 是合理误差。 例如当所述阈值选定为 50 ng/ml时， 如果受试者的测量值为 43 ng/ml, 也可以判定该受试者患有癌症， 或者具有较高的罹患癌症的风险。
在本发明中，所述血液样本可以为血浆或血清样本。在本发明的优选实施方 案中， 血浆样本是优选的， 其测量精度更高。
所述 Hsp90a的阈值可以为 50、 53、 56、 62、 63、 64、 67、 72、 82、 85 或 117 ng/ml。 例如， 在本发明一个具体实施方案中， 针对肺癌的特别优选的阈 值是 67.47 ng/ml (可以四舍五入取 67 ng/ml)， 此时对应的特异度为 85<½， 灵 敏度为 64<½。 在上述阈值 ± 15<½的范围内的数值均可视为等同的判定范围。
在本发明一个具体实施方案中， 针对肺癌的一个优选的阈值是 82 ng/ml, 即 Hsp90a的浓度为 0-82 ng/ml时被认为是正常值范围； 在本发明一个优选实 施方案中， 针对肺癌的一个特别优选的阈值是 53 ng/ml, 即 Hsp90a的浓度为 0-53 ng/ml时被认为是正常值范围。 同样的， 在上述阈值 ± 15<½的范围内的数 值均可视为具有等同判定意义。 所述血液样本优选为血浆样本。
本发明另一方面提供了一种用于对正在接受治疗的癌症患者进行病情监测 和 /或疗效评价或者用于对候选治疗药物进行疗效评价的方法， 包括在治疗前及 治疗后分别检测受试者的血液样本中 Hsp90a的浓度， 如果治疗后 Hsp90a的浓 度相对于治疗前 Hsp90c 浓度增加的百分比达到或超过预先设定的阈值，则判定 该受试者病情进展和 /或疗效较差， 或者判定所述候选治疗药物疗效较差， 其中 所述阈值选自 10<½到 50<½的范围内， 例如所述阈值可以为 34<½， 且所述阈值士 15。/。范围内的数值均被视为具有等同判定意义； 优选地，所述血液样本为血浆样 本。
此处所用的术语"治疗"应当做广义的理解。 例如， 在对肺癌患者进行治疗 时， 可能涉及多个治疗周期， 例如总共 8个治疗周期。如果将整个治疗过程作为 一个整体来看， 可以在第 1个治疗周期开始前和第 8个治疗周期结束后， 分别 对 Hsp90c 的浓度进行检测， 并据此判断整个治疗过程的效果。 或者， 也可以将 每个治疗周期视为一次 "治疗"（例如出于获得更精确评估结果的目的）。 例如， 可以在每个治疗周期开始前和结束后， 均对 Hsp90c 的浓度进行检测， 并据此判 断单个治疗周期的效果。 或者， 还可以进行更精确的评估。 例如， 在单个治疗周 期包括总共 20 天治疗的情况下， 可以将每一天视为一次 "治疗"， 在当天的治 疗开始前和当天的治疗结束后， 分别对 Hsp90c 的浓度进行检测， 从而判断当天 的治疗效果。本领域技术人员可以根据不同的评估要求， 具体设定"治疗"的时 间跨度。
本发明还提供了确定受试者是否患有癌症或者具有罹患癌症风险的方法，包 括联合检测该受试者的血液样本中 Hsp90a 的浓度以及至少一种其他肿瘤标志 物的浓度，如果 Hsp90a的浓度和所述至少一种其他肿瘤标志物的浓度达到或超 过预先设定的阈值， 则判定该受试者患有癌症或者具有罹患癌症的风险， 其中 Hsp90a的阈值选自 50 ng/ml到 120 ng/ml的范围内，例如所述阈值可以为 50、 53、 56、 62、 63、 64、 67、 72、 82、 85或 117 ng/ml， 且所述阈值 ± 15%范围 内的数值均被视为具有等同判定意义。所述血液样本优选为血浆样本，所述至少 一种其他肿瘤标志物优选选自由癌胚抗原（CEA)、细胞角蛋白 19片段抗原 21-1 ( CYFRA21-1)、 AFP、 CA19-9、 CA125、 CA15-3、 PSA和 CA72-4构成的组。
根据本发明的优选实施方案， 本发明方法中 Hsp90c 的浓度优选地采用 EDTA-K2作为抗凝剂进行检测。
本发明的方法适用的癌症种类包括： 肺癌、肝癌、结直肠癌、乳腺癌、 胃癌、 胰腺癌、 卵巢癌、 淋巴瘤、 食管癌、 黑色素瘤、 肾癌、 子宫癌、 鼻咽癌、 骨肉瘤、 膀胱癌和前列腺癌。
本发明还提供了用于确定受试者是否患有癌症或者具有罹患癌症风险的试 剂盒， 包括： 任选的人分泌型 Hsp90a、 人分泌型 Hsp90a单克隆抗体、 检测试 剂以及说明书， 其中所述说明书中标明了健康人血液样本中 Hsp90a浓度的阈 值， 如果受试者的血液样本中 Hsp90c 的浓度达到或超过所述阈值， 则判定该受 试者患有癌症或者具有罹患癌症的风险， 其中所述阈值选自 50 ng/ml 到 120 ng/ml的范围， 例如所述阈值可以为 50、 53、 56、 62、 63、 64、 67、 72、 82、 85或 117 ng/ml， 且所述阈值 ± 15<½范围内的数值均被视为具有等同判定意义； 优选地， 所述血液样本为血浆样本。
此处所用的术语 "任选的"表示可以有， 也可以没有。 例如， "任选的人分 泌型 Hsp90a"， 是指本发明的试剂盒可以包括人分泌型 Hsp90a， 也可以不包括 人分泌型 Hsp90a。 例如， 可以将人分泌型 Hsp90a单独包装， 并与试剂盒的主 体部分联合使用。优选地， 出于方便使用的目的， 本发明的试剂盒中包括人分泌 型 Hsp90a， 用作检测时的标准品。 特别优选的是重组人分泌型 Hsp90a。
根据本发明的优选实施方式，所述试剂盒中可以包括用于采集血液样本的容 器， 并且该容器中包含 EDTA-K2。 在本发明的优选实施方案中， 所述用于采集 血液样本的容器为包含 EDTA-K2的采血管。
根据在本发明的具体实施方案， HsP90a的浓度采用 EDTA-K2作为抗凝剂 进行检测是优选的。
本发明的试剂盒适用的癌症种类包括： 肺癌、 肝癌、 结直肠癌、 乳腺癌、 胃 癌、 胰腺癌、 卵巢癌、 淋巴瘤、 食管癌、 黑色素瘤、 肾癌、 子宫癌、 鼻咽癌、 骨 肉瘤、 膀胱癌和前列腺癌。
本发明的实施例中还将 Hsp90a定量检测在癌症辅助诊断和疗效监测中的有 效性研究方法应用于多种癌症， 发现 Hsp90a浓度在癌症诊断中的阈值范围对肺 癌、 肝癌、 结直肠癌和乳腺癌等同样适用， 并提供了肿瘤标志物 Hsp90a定量检 测用于肺癌、 肝癌、 结直肠癌和乳腺癌诊断的具体统计学参数。 本发明的实施例中根据不同人群的数据绘制相应的 ROC曲线。 根据本领域 公知技术， 每一条 ROC曲线都提供了一系列阈值及与之相对应的灵敏度和特异 度。 因此， 使用这些 ROC曲线， 本领域技术人员能很容易地査出选取任意阈值 (即 cut-off 值） 时该项检测对疾病的识别能力， 即诊断相应癌种的灵敏度、 特 异度和符合率。 例如：
当适应症为肝癌时， 患者相对于健康人的 cut-off值是 52.79 ng/ml时， 灵敏 度、 特异度和符合率分别是 93.7%， 85%和 94.5%， 当 cut-off值是 62.20 ng/ml 时， 灵敏度、 特异度和符合率分别是 91.4%， 90%和 92.2%; 患者相对于非癌症 肝部相关疾病的 cut-off 值是 63.66 ng/ml 时， 灵敏度、 特异度和符合率分别是 90.7%， 90%和 90.3%， 当 cut-off值是 85.24 ng/ml时， 灵敏度、 特异度和符合率 分别是 80.7%， 95%和 88.6%
当适应症是结直肠癌时， 患者相对于健康人及非癌症结直肠相关疾病组的 cut-off值是 52.79 ng/ml时，灵敏度、特异度和符合率分别是 89.9%， 85%和 87%， 当 cut-off值是 62.20 ng/ml时， 灵敏度、 特异度和符合率分别是 83.4%， 90%和 87%。
当适应症为乳腺癌时， 患者相对于健康人的 cut-off值是 52.66 ng/ml时， 灵 敏度、特异度和符合率分别是 65.6%， 85%和 73.85%， 当 cut-off值是 61.92 ng/ml 时， 灵敏度、 特异度和符合率分别是 54.6%， 90%和 69.68%; 患者相对于非癌症 乳腺相关疾病组的 cut-off值是 63.41 ng/ml时， 灵敏度、 特异度和符合率分别是 52.4%, 84.9%和 68.29%, 当 cut-off值是 72.21 ng/ml时， 灵敏度、特异度和符合 率分别是 41.9%， 90.1%和 65.41%。
本领域技术人员可以理解， 由于受试人群和瘤种的不同， cut-off值的选取及 其对应的灵敏度、特异度和符合率等参数会有所差别，但均包含在本发明限定的 阈值范围内。 本领域技术人员可以根据实际使用需求， 如对特定瘤种、 灵敏度、 特异度等的要求，从本发明公开的 R0C曲线或阈值范围内选取适当的优选阈值。
本发明还验证了肺癌、 肝癌、 结直肠癌、 乳腺癌患者手术后血浆 Hsp90a含 量比手术前显著降低， 因此该项检测指标可以作为手术治疗效果评价的手段。同 时， 临床获益的（CR+PR+SD)接受内科治疗的患者， 在治疗后的检测值显著低 于治疗前， 说明该项指标可以用于上述癌症的内科治疗疗效评价。
本发明的实施例中检测了胃癌、 胰腺癌、 卵巢癌、 淋巴瘤、 食管癌、 黑色素 瘤、 肾癌、 子宫癌、 鼻咽癌、 骨肉瘤、 膀胱癌、 前列腺癌等多种癌症患者血浆 Hsp90a含量， 发现与健康人相比均显著升高 （具有统计显著性） ， 并分别提供 了上述不同癌种患者血浆 Hsp90a含量的平均参考值。这说明肿瘤标志物 Hsp90a 可用于胃癌、 胰腺癌、 卵巢癌、 淋巴瘤、 食管癌、 黑色素瘤、 肾癌、 子宫癌、 鼻 咽癌、 骨肉瘤、 膀胱癌、 前列腺癌等多癌症的诊断。 附图说明
图 1 是 Hsp90a检测结果的 ROC曲线 （基于所有检测 Hsp90a的受试者）。 图 2 是 Hsp90a 检测结果的 ROC 曲线 AUC 95%CI (0.788, 0.829)。
图 3是 Hsp90a 检测结果的 ROC 曲线 AUC 95%CI (0.811, 0.854)。
图 4是 Hsp90a 检测结果的 ROC 曲线 AUC 95%CI (0.804, 0.850)。
图 5是 Hsp90a 检测结果的 ROC 曲线 AUC 95%CI (0.731, 0.777)。
图 6是根据斜率判定肿瘤增大的 ROC曲线。
图 7是根据变化百分比判定 PD的 ROC曲线。
图 8是根据变化值判定 PD的 ROC曲线。
图 9显示了 EDTA-K2采血管样本和 EDTA-K3采血管样本的对比。
图 10是肝癌患者相对于健康人的 ROC 曲线。
图 11是肝癌患者相对于非癌肝部相关疾病人群的 ROC 曲线。
图 12是结直肠癌患者相对于健康人及非癌结直肠相关疾病的 ROC 曲线。 图 13是乳腺癌患者相对于健康人的 ROC 曲线。
图 14是乳腺癌患者相对于非癌乳腺相关疾病人群的 ROC 曲线。
图 15是多种癌症患者血浆 Hsp90a含量检测结果汇总。
图中， "ROC Curve for Model"表示针对模型的 R0C曲线， "Area under the Curve"表示曲线下面积， "Specificity"表示特异度， "Sensitivity"表示灵敏度。 具体实施方式
本文所用的术语 "血液样本"是指由受试者的血液获得的样本。考虑到细胞 内 Hsp90a对检测的干扰， 血液样本优选为血浆或血清样本， 也可以是由血浆或 血清稀释后的样本。本领域技术人员可以理解， 由于在成分上的区别， 当采用受 试者的血浆样本和血清样本分别进行检测时， Hsp90c 的浓度可能会略有不同。 出于便于定量和比较的目的， 在本发明中血浆样本是优选的。
本文所用的术语 "特异度"、 "灵敏度"、 "符合率"均与相对应的医学统 计学术语具有相同的含义。
"特异度" (specificity)是指诊断为 "非癌症" 的病例中经试剂盒检测为阴性 的比例。 "灵敏度"（sensitivity)是指病理学诊断为"癌症"的病例中， 经试剂盒检测 为阳性的比例。
"符合率"（accuracy)是指真阳性样本量与真阴性样本量之和占总样本量的 比例， 反映试剂盒检测结果与受试者是否罹患癌症的真实情况相符合的程度。
本文所用的术语 "cut-off值" 、 "界值" "参考值"和 "阈值"可以互换 使用， 指的是用来判断检测结果的标准， 即临界值， 检测结果高于 cut-off值即视 为阳性， 低于 cut-off值即视为阴性。
本文所用的术语"临床获益"，指经过某种治疗达到病情稳定或缓解的情况， 其中 CR、 PR和 SD具有与实体瘤疗效评价标准 （RECIST标准） 中相应术语完全相 同的含义， 即 CR ( Complete response) 肿瘤完全缓解、 PR ( Partial response) 肿瘤部分缓解和 SD ( Stable disease) 疾病稳定。 CR、 PR和 SD这三项指标作为临 床获益人群的界定， 与此相反的是 PD ( Progressive disease) 即疾病进展。
本文所用术语 "非癌相关疾病"指经病理学诊断确诊为不是癌症但患有良 性相关疾病的患者，如在肺癌试验中指确诊为不是肺癌但患有肺炎、肺结核等肺 部良性相关疾病的患者，在肝癌试验中指确诊为不是肝癌但患有肝炎、肝硬化等 肝部良性相关疾病的患者， 在结直肠癌试验中指确诊为不是结直肠癌但患有炎 症、结直肠息肉等结直肠良性相关疾病的患者，在乳腺癌试验中指确诊为不是肺、 乳腺癌癌但患有乳腺炎、 乳腺增生等乳腺良性相关疾病的患者。
本文中所用的部分缩写及统计术语含义如下表所示：
CEA 癌胚抗原
DOR 诊断准确性比值比（diagnostic accuracy odds ratio)
CYFRA21-1 细胞角蛋白 19片段抗原 21-1
AFP 甲胎蛋白
CA125 肿瘤相关抗原 CA125
CA19-9 糖类抗原 CA19-9
CA15-3 癌抗原 CA15-3
PSA 前列腺特异性抗原
CA72-4 糖链抗原 CA72-4
SD 标准差 （Standard Deviation)
Hsp90a 热休克蛋白 Hsp90a
Mean 均数
Md 中位数
Min 最小值
Max 最大值
CI 置信区间 （Confidence Interval)
Q1 四分之一分位数
Q3 四分之三分位数
R0C 接受者工作特征曲线 （Receiver Operator
Characteristic)
95%CI 95%置信区间 实施例 1
研究目的
通过以下三个方面的试验内容，评价 Hsp90c 定量检测试剂盒的临床使用范 围和临床性能。
1、 对健康人群、 肺癌患者、 肺部非癌病变患者和其他恶性肿瘤患者的血浆 中的 Hsp90c 含量进行测定， 检验 Hsp90c 试剂盒检测的临床准确性、 特异性和 灵敏度， 并利用 ROC曲线确定合适的阳性参考值 （cut-off值）；
2、 对治疗期间的肺癌患者血浆中 Hsp90c 的含量进行动态监测， 检验其浓 度变化与患者病情变化的相关性， 即疗效监测的临床有效性；
3、 分别对比 Hsp90c 与癌胚抗原 （CEA)、 细胞角蛋白 19片段抗原 21-1 ( CYFRA21-1) 检测结果， 作为临床试验的次要目的。
1.1 样本的来源
选择对象范围为住院和门诊患者。选择对象的数量为不少于 1100例血浆样 本和不少于 150例的动态监测血浆样本， 选择高值样本和低值样本所占比例符 合统计学要求。
1.1.1 非动态监测样本的选择
研究对象包括： 病例组和对照组， 男女不限。
( 1) 病例组： 病理学诊断方法新确诊为荷瘤的肺癌患者的样本， 病例组血 浆样本应包括肺癌的不同类型和不同分期。
( 2 ) 对照组： 经临床生化、 影像或病理学方法证实为非肺癌的人群。 对照 组应包括确定无明显疾病症状的健康人样本、确定无肺癌但有肺部其他病变的样 本 （如肺结核、 肺炎）、 肺部良性肿瘤样本和其他恶性肿瘤样本。
健康人群定义： 无任何已知的良性或恶性疾病、 外表正常、无任何可见疾病 症状的人。
肺部病变患者：通过临床生化、影像以及病理等手段确诊患有肺部病变且该 病变不是癌症的患者。
1.1.2 动态监测样本的选择
对至少 150例规范的内科治疗方案和手术方案治疗的肺癌患者的随访监测 研究， 以检验血浆中 Hsp90c 浓度的变化与患者病情变化的相关性。血浆样本的 收集时间点为：
( 1)对 12例肺癌手术患者采用多时间点监测， 以检测 Hsp90a在血浆中的 代谢情况。 分别在治疗前， 治疗后第 1、 3、 7、 14、 21天收集患者血浆样本。
( 2 )对不少于 38例手术治疗的肺癌患者进行动态监测： 手术治疗前 3 天 内收集血浆样本 1次， 手术后 3-7天内收集血浆样本 1次、 临床疗效评价（影像 学检査日期） 前后 3天内取样 1次， 共计至少 3次。
( 3 )对不少于 100例内科治疗的肺癌患者进行动态监测： 治疗开始前收集 血浆样本 1次， 治疗开始后， 在每个治疗周期结束后收集样本 1次， 收集至 4 个治疗周期结束。如果在结束某个治疗周期后对患者例行临床疗效评价（影像学 检査）， 则此时收集样本的时间为临床疗效评价（影像学检査日期）前后 3天内。
符合动态监测收集方案的既往血样也可以用于本试验研究。
1.1.3 样本剔除标准
( 1) 肺内肿瘤病灶正在进行放疗的患者的样本；
( 2 ) 动态监测中， 妊娠、 哺乳期或有生育能力但在试验期间未采取避孕措 施者的样本；
( 3 ) 动态监测中， 治疗前血浆 Hsp90a含量初始值低于 cut-off的样本；
(4) 患有其他癌症的患者。
1.2 检测试剂盒仪器
研究产品：
热休克蛋白 90( 定量检测试剂盒 （酶联免疫法），
规格： 96人份 /盒。 来源： 烟台普罗吉生物科技发展公司，
批号： 20111018、 20120109、 20120505, 有效期： 6 个月， 保存条件： 2-8°C。
对比产品：
因国内外尚无同类型产品注册上市，故只采用肺癌的病理学诊断和临床诊断 作为评价和验证考核方法。
本次试验中， 设立癌胚抗原 （CEA )、 细胞角蛋白 19 片段抗原 21-1 ( CYFRA21-1) 为本产品的参比试剂， 侧面考察试剂盒的临床性能。 实施例 2 2. 主要结果概要
2.1 非动态监测组
本研究非动态监测组共入组 2036例〔肺癌患者组 :1046 例、 其他恶性肿瘤 组: 37例、 肺部非癌性病变组 :344例、 肺部良性肿瘤组 :17例、 健康人群组 :592 例；)， 其中符合方案的病例有 2036例， 无剔除受试者。 详细情况参见表 8.1.1.1- 表 8.1.1.2。 各中心病例分布见详表 8.1.1.3。
Hsp90a诊断性能评价
为评价 Hsp90c 诊断肺癌与非癌症性能， 剔除患有恶性肿瘤的受试者， 共计 1999例纳入分析， 其中肺癌组 1046例， 非癌症组 953例。 两组受试者的人口 学信息及肺癌组基本诊断分类情况详见表 8.1.1丄1.1-表 8.1.1.1.1.2。
两组 Hsp90a 的检测结果组间差异有统计学意义 （P<0.0001 )， 详见表 8.1.1.1.2.1。
Hsp90a诊断肺癌的 ROC曲线下面积为 0.8149， 通过最大 youden指数确定 最佳 cut-off值为 >56.33ng/ml，对应灵敏度为 72.18%， 95%可信区间为（69.46%, 74.90%), 特异度为 78.7%， 95%可信区间为 （76.10%, 81.30%)。 另外还分别 描述特异度为 80%、 85%、 90%及 95%时对应的灵敏度及其他诊断性能指标， 详见图 1禾口表 8.1.1.1.2.2-8.1.1.1.2.3。
此外， Hsp90a分别诊断肺腺癌、 肺鳞癌、 小细胞肺癌的 R0C曲线与肺癌总 体的 R0C曲线相似； 单独对比肺癌与相关疾病， 两组 Hsp90a的检测结果组间 差异有统计学意义 （P<0.0001)。
Hsp90a与 CEA诊断性能及联合诊断评价
为评价两者诊断性能， 采用 Hsp90c 与 CEA检测结果均不为缺失的受试者 为评价人群， 共计 1056例纳入分析， 其中肺癌组 713例， 非癌症组 343例。 以 Hsp90a cut-off值为 >56.33， CEA cut-off值为 >5， 任意一个为阳性即判断为阳性 进行联合诊断评价， 进一步提高了诊断灵敏度。
Hsp90a与 CYFRA21-1诊断性能及联合诊断评价
为评价两者诊断性能， 采用 Hsp90a与 CYFRA21-1检测结果均不为缺失的 受试者为评价人群， 共计 910例纳入分析， 其中肺癌组 660例， 非癌症组 250 例。 以 Hsp90a cut-off值为 >56.33， CYFRA21-1 cut-off值为 >5， 任意一个为阳性 即判断为阳性进行联合诊断评价， 进一步提高了诊断灵敏度。
2.2 行外科手术组 共 106例受试者入选本次评价， 其中不低于 cut-off值的有效受试者 79例， 手术前后 Hsp90a检测结果差异有统计学意义 （P=0.0062<0.01)， 详见表 8.2.2。
2.3 内科动态组
本次评价共入选肺癌受试者 202例， 其中有效受试者 169例。 人口学及基 本资料详见表 8.3.1.2。
分段评价
分段评价共获得 284个有效统计单元， 其中肿瘤缩小组 69例， 肿瘤不变组 161例， 肿瘤增大组 54例， 三组治疗第二周期 Hsp90c 检测值相对基线变化值 中位数分别为 -48.64ng/ml、 -8.51 ng/mK 74.66 ng/ml， 三组间变化值经秩和检 验差异有统计学意义 （P<0.0001)， 组内治疗前后均有统计学意义， 变化百分比 中位数分别为 -41.09%、 -9.46%、 65.26%
Hsp90a检测值诊断肿瘤大小增大 R0C曲线下面积为 0.7719， 根据 youden 指数确定最佳 cut-off点为相对基线变化 >34.17%， 对应灵敏度为 70.37%， 95% 可信区间为 （58.19%, 82.55% )， 特异度为 80%， 95%可信区间为 （74.83%, 85.17%), 详见表 8.3.2.3.2。
按病例评价
按病例评价共获得 275个有效病例， 其中 PR组 95例， SD组 118例， PD 组 62 例， 三组获得评价时 Hsp90c 检测值相对基线变化值中位数分别为 -90.98ng/mK -32.91ng/ml、 80.32 ng/ml， 三组间变化值经秩和检验差异有统计 学意义 （P<0.0001)， 组内治疗前后均有统计学意义， 变化百分比中位数分别为 -48.16%、 -22.23%、 71.40%。
Hsp90a检测值诊断 PD R0C曲线下面积为 0.8406， 根据 youden指数确定 最佳 cut-off点为相对基线变化 >34.17%， 对应灵敏度为 72.58%， 95%可信区间 为（61.48%, 83.68%)， 特异度为 85.45%， 95%可信区间为 ( 80.71%, 90.18%), 详见表 8.3.3.2.2。 实施例 3
3. 统计分析结果
3.1 非动态检测组
表 8.1.1.1 入组受试者及分析数据集 项目 结果 所有受试者 2036[100.00%) 剔除例数 0〔 0.00%) 有效例数 2036[100.00%) 肺癌患者 1046[ 51.38%) 其他恶性肿瘤 37〔 1.82%) 肺部非癌性病变 344[ 16.90%) 肺部良性肿瘤 17[ 0.83%) 健康人群 592 [ 29.08%) 表 8.1.1.2 非动态受试者病例分布
中心 入选受试者 有效受试者
1 141 141
2 857 857
3 137 137
4 15 15
5 118 118
7 60 60
8 480 480
9 228 228
T 2036 2036
3.1.1 肺癌组与非癌症组
3.1.1.1 Hsp90a诊断性能评价
3.1.1.1.1 受试者特征
表 8.1.1.1.1.1 所有受试者人口学信息
指标 肺癌组 非癌症组 合计 年龄〔岁：）
N (Missing) 1043(3) 869(84) 1912 (87)
Mean (SD) 59.76(10.79) 47.74(17.93) 54.30(15.67)
Min, Max 24,100 10,98 10,100
Md (Q3-Q1) 60.00(13.00) 46.00(24.00) 55.00(22.00) 性别
男 711( 68.23%) 468( 49.95%) 1179( 59.58%) 女 331( 31.77%) 469( 50.05%) 800( 40.42%) 合计 1042 937 1979
Missing 4 16 20 表 8.1.1.1.1.2 肺癌受试者诊断情况
指标 结果 肺癌种类
腺癌 537[ 52.54%) 鳞癌 218[ 21.33%) 小细胞癌 136〔 13.31%) 大细胞癌 4[ 0.39%) 未分型 25[ 2.45%) 其他 30[ 2.94%)
NK 72〔 7.05%) 合计 1022
Missing 24 小细胞癌分期
弥漫期 10[ 11.49%) 局限期 18[ 20.69%)
NK 59 [ 67.82%) 合计 87
Missing 959 肺癌分化程度
低分化 122 [ 17.43%) 中低分化 16〔 2.29%) 中分化 60〔 8.57%) 高分化 9[ 1.29%)
NK 493〔 70.43%) 合计 700
Missing 346
3.1.1.1.2 Hsp90a诊断性能评价 （肺癌组与非癌症组)
表 8.1.1.1.2.1 两组受试者 Hsp90a检测结果
项目 肺癌组 非癌症组 检验统计量 P值
Hsp90a (ng/ml) 15.08[t值;） 0001
N (Missing) 1046[0) 953[0)
Mean [SD) 220.46[351.55) 48.00[34.82)
Min, Max 7.07,7400 0.95,371.37
Md [Q3-Q1) 95.54[199.97) 38.07[24.41)
图 1是 Hsp90a检测结果的 ROC曲线 （基于所有检测 Hsp90a的受试者）。 表 8.1.1.1.2.2 根据 Hsp90a检测结果的 cut-off值判定的四格表
疾病诊断
J^J^JJJ日 K日 K日 K日 K日 K^^ 8 J 561 .
性性计性性计性性计性性计性性计 71„: Hsp90a判定 阳性 阴性 小计
755(72.18%) 203(21.30%) 958(47.92%) 291(27.82%) 750〔 78.70%) 1041〔 52.08%) 1046 953 1999
735(70.27%) 191(20.04%) 926(46.32%) 311(29.73%) 762(79.96%) 1073〔 53.68%) 1046 953 1999
674( 64.44%) 143(15.01%) 817(40.87%) 372(35.56%) 810(84.99%) 1182(59.13%) 1046 953 1999
600(57.36%) 95( 9.97%) 695(34.77%) 446 ( 42.64%) 858( 90.03%) 1304( 65.23%) 1046 953 1999
444(42.45%) 48〔 5.04%) 492(24.61%) 602(57.55%) 905( 94.96%) 1507( 75.39%) 1046 953 1999 表 8.1.1.1.2.3 根据 Hsp90cx检测结果的 cut-off值判定的诊断结果
灵敏度 特异度
符合率
指标 TP TN FP FN % %95 CI % %95 CI (%) PPV(%) NPV(%) LR+ LR- DOR
Hsp90a
检测值
>56.33 755 750 203 291 72.18 69.46, 74.90 78.7 76.10,81.30 75.29 78.81 72.05 3.39 0.35 9.69
>58.17 735 762 191 311 70.27 67.50, 73.04 79.96 77.42,82.50 74.89 79.37 71.02 3.51 0.37 9.49
>67.47 674 810 143 372 64.44 61.53, 67.34 84.99 82.73,87.26 74.24 82.5 68.53 4.29 0.42 10.21
>80.99 600 858 95 446 57.36 54.36, 60.36 90.03 88.13,91.93 72.94 86.33 65.8 5.75 0.47 12.23
>117.36 444 905 48 602 42.45 39.45, 45.44 94.96 93.57,96.35 67.48 90.24 60.05 8.42 0.61 13.8 注： TP, 真阳性； TN， 真阴性; FP， 假阳性； FN， 假阴性； PPV， 阳性预 测值； NPV， 阴性预测值； LR+， 阳性似然比； LR -， 阴性似然比； DOR, diagnostic accuracy odds ratio; 表 8.1丄 1.2.4 I、 II 期肺癌组与 III、 IV期肺癌组之间 Hsp90cx值的差异
项目 I、 II肺癌组 III、 IV肺癌组 检验统计量 P值
Hsp90a ( ng/ml ) -4.19(秩和） <0001
N (Missing) 93(0) 720(0)
Mean (SD) 111.50(130.82) 251.38(300.69)
Min, Max 7.07,1043.7 11.18,2398
Md (Q3-Q1) 82.24(55.65) 117.33(311.16)
.1.3 Hsp90cx诊断性能评价 （腺癌组与非癌症组) 图 2是 Hsp90oc检测结果的 ROC 曲线 AUC 95%CI〔0.788, 0.829〕。
3.1.1.1.4 Hsp90cx诊断性能评价 （鳞癌组与非癌症组） 图 3 是 Hsp90oc检测结果的 ROC 曲线 AUC 95%CI (；0.811, 0.854〕。
3.1.1.1.5 Hsp90a诊断性能评价 （小细胞癌组与非癌症组） 图 4 是 Hsp90a检测结果的 ROC 曲线 AUC 95%CI〔0.804, 0.850〕。
3.1.1.1.6 Hsp90a诊断性能评价 （肺癌组与肺部相关疾病组）
表 8.1丄 1.6.1 两组受试者 Hsp90a检测结果
项目 肺癌组 相关疾病组 检验统计量 P值
Hsp90a (ng/ml) -14.20(秩和） < 0001
N (Missing) 1046(0) 344(0)
Mean (SD) 220.46(351.55) 58.58(39.43)
Min, Max 7.07,7400 11.61,315.57
Md (Q3-Q1) 95.54(199.97) 48.48(31.85)
图 5 是 Hsp90oc 检测结果的 ROC 曲线 AUC 95%CI (0.731, 0.777)。 表 8.1丄 1.6.28 根据 90α检测结果的 cut-off 值判定的诊断结果
灵敏度 特异度
符合率
指标 TP TN FP FN % %95 CI % %95 CI (%) PPV(%) NPV(%) LR+ LR- DOR
Hsp90a
检测值
>74.18 639 275 69 407 61.09 58.14, 64.04 79.94 75.71, 84.17 65.76 90.25 40.32 3.05 0.49 6.22
>83.39 586 292 52 460 56.02 53.01, 59.03 84.88 81.10, 88.67 63.17 91.85 38.83 3.71 0.52 7.13
3.1.1.2 Hsp90a与 CEA诊断性能
3.1.1.2.1 受试者特征
表 8.1.1.2.1.1 所有受试者人口学信息 指标 肺癌组 非癌症组 合计 年龄 (岁；）
N [Missing] 710(3〕 293(50〕 1003[53]
Mean [SD] 60.21[10.62] 47.63[20.41] 56.53[15.29]
Min, Max 29,100 12,98 12,100
Md [Q3-Q1] 60.00[14.00] 46.00[34.00] 58.00[19.00] 性别
男 493[ 69.44%] 191[ 56.51%] 684[ 65.27%] 女 217( 30.56%〕 147[ 43.49%] 364〔 34.73%] 合计 710 338 1048
Missing 3 5 8 表 8.1.1.2.1.2 肺癌受试者诊断情况
指标 结果 肺癌种类
腺癌 348[ 50.36%) 鳞癌 131 [ 18.96%) 小细胞癌 116[ 16.79%) 大细胞癌 1〔 0.14%) 未分型 20〔 2.89%) 其他 16〔 2.32%)
NK 59〔 8.54%) 合计 691
Missing 22 小细胞癌分期
弥漫期 8[ 11.59%) 局限期 16[ 23.19%)
NK 45[ 65.22%) 合计 69
Missing 644 肺癌分化程度
低分化 90[ 22.22%) 中低分化 3[ 0.74%) 中分化 9[ 2.22%) 高分化 1〔 0.25%)
NK 302〔74.57%) 合计 405
Missing 308
3.1.1.2.2 Hsp90a与 CEA诊断性能评价 （肺癌组与非癌症组）
表 8.1.1.2.2.1 两组受试者 Hsp90a与 CEA的检测结果 项目 肺癌组 非癌症组 检验统计量 P值
Hsp90a (ng/ml) 8.71(t值） <.0001
N (Missing) 713(0) 343(0)
Mean (SD) 229.21(383.65) 48.49(32.80)
Min, Max 19.77,7400 0.95,315.57
Md (Q3-Q1) 96.44(249.27) 40.20(24.52)
CEA (ng/ml) 5.24(t i ) <.0001
N (Missing) 713(0) 343(0)
Mean (SD) 40.22(119.66) 4.77(53.92)
Min, Max 0.05,1000 0.03,1000
Md (Q3-Q1) 4.80(17.05) 1.48(1.67)
3.1.1.2.2.1 Hsp90c 与 CEA联合诊断性能评价 （肺癌组与非癌症组）
表 8.1.1.2.2.3.1 Hsp90c 与 CEA联合诊断 （任意阳性即判定为阳性） 的四格 临床诊断
联合诊断 阳性 阴性 小计
Hsp90 +CEA*
阳性 600[ 84.15%) 83 [ 24.20%) 683[ 64.68%) 阴性 113 [ 15.85%) 260[ 75.80%) 373[ 35.32%) 小计 713 343 1056
Hsp90 +CEA**
阳性 603 [ 84.57%) 86[ 25.07%) 689[ 65.25%) 阴性 110[ 15.43%) 257[ 74.93%) 367[ 34.75%) 小计 713 343 1056
Hsp90a cut-off值为 56.33， CEA cut-off值为 5。
*Hsp90a cut-off值为 56.33， CEA cut-off值为 4.74。 表 8.1.1.2.2.3.2 Hsp90a与 CEA联合诊断判定的诊断结果
灵敏度 特异度
符合率
指标 TP TN FP FN % %95 CI % %95 CI (o/o) PPV(%) NPV(%) LR+ LR- DOR 联合 600 260 83 113 84.15 81.47, 86.83 75.8 71.27, 80.33 81.44 87.85 69.71 3.48 0.21 16.57 诊断
603 257 86 110 84.57 81.92, 87.22 74.93 70.34, 79.51 81.44 87.52 70.03 3.37 0.21 16.05 注： TP， 真阳性； TN， 真阴性; FP， 假阳性; FN， 假阴性； PPV， 阳性预 测值； NPV， 阴性预测值； LR+， 阳性似然比； LR -， 阴性似然比； DOR, diagnostic accuracy odds ratio;
3.1.1.3 Hsp90a与 CYFRA21-1 诊断性能
3.1.1.3.1 受试者特征
表 8.1.1.3.1.1 所有受试者人口学信息 指标 肺癌组 非癌症组 合计 年龄〔岁；）
N (Missing) 659 (1) 199(51) 858(52)
Mean (SD) 60.25(10.35) 43.65(18.83) 56.40(14.60)
Min, Max 30,89 12,98 12,98
Md (Q3-Q1) 60.00(14.00) 42.00(32.00) 58.00(19.00) 性别
男 461( 70.06%) 141( 57.32%) 602 ( 66.59%) 女 197( 29.94%) 105( 42.68%) 302 ( 33.41%) 合计 658 246 904
Missing 2 4 6 表 8.1.1.3.1.2 肺癌受试者诊断情况
指标 结果 肺癌种类
腺癌 317[ 49.53%) 鳞癌 125[ 19.53%) 小细胞癌 110[ 17.19%) 大细胞癌 1[ 0.16%) 未分型 20[ 3.13%) 其他 13[ 2.03%)
NK 54[ 8.44%) 合计 640
Missing 20 小细胞癌分期
弥漫期 8[ 12.50%) 局限期 15[ 23.44%)
NK 41[ 64.06%) 合计 64
Missing 596 肺癌分化程度
低分化 88[ 22.56%) 中低分化 2 [ 0.51%) 中分化 8[ 2.05%) 高分化 1[ 0.26%)
NK 291[ 74.62%) 合计 390
Missing 270
3.1.1.3.2 Hsp90a与 CYFRA21-1诊断性能评价 （肺癌组与非癌症组） 表 8.1.1.3.2.1.1 两组受试者 Hsp90a与 CYFRA21-1的检测结果 项目 肺癌组 非癌症组 检验统计量 P值
Hsp90a ( ng/ml ) 7.59 [t值） <.0001
N [Missing) 660[0) 250[0)
Mean [SD) 238.59 [396.14) 48.19 [35.30)
Min, Max 19.77,7400 0.95,315.57
Md [Q3-Q1) 98.18[280.04) 38.40[23.91)
CYFRA21-1 ( ng/ml) 4.75 [t值） <.0001
N [Missing) 660[0) 250[0)
Mean [SD) 9.82 [25.26) 2.17[5.09)
Min, Max 0.26,266.3 0.23,74.44
Md [Q3-Q1) 3.36[5.39) 1.59[1.11)
3.1.1.3.2.1 Hsp90a与 CYFRA21-1联合诊断性能评价 （肺癌组与非癌症组） 表 8.1.1.3.2.3.1 Hsp90a与 CYFRA21-1联合诊断 （任意阳性即判定为阳性） 的四格表
患病诊断
联合诊断 阳性 阴性 小计
Hsp90a+CYFRA21-1*
阳性 532 ( 80.61%) 51( 20.40%) 583( 64.07%) 阴性 128( 19.39%) 199( 79.60%) 327( 35.93%) 小计 660 250 910
Hsp90a+CYFRA21-1**
阳性 574( 86.97%) 62 ( 24.80%) 636( 69.89%) 阴性 86( 13.03%) 188( 75.20%) 274( 30.11%) 小计 660 250 910 注： *Hsp90a cut-off值为 56.33 ng/ml， CYFRA21-lcut-off值为 5。
**Hsp90a cut-off值为 56.33 ng/ml, CYFRA21-lcut-off值为 3.1。 表 8.1.1.3.2.3.2 Hsp90a与 CYFRA21-1联合诊断判定的诊断结果
灵敏度 特异度
符合率
指标 TP TN FP FN % %95 CI % %95 CI (ο/ο) PPV(%) NPV(%) LR+ LR- DOR 联合 532 199 51 128 80.61 77.59, 83.62 79.6 74.60, 84.60 80.33 91.25 60.86 3.95 0.24 16.46 诊断
574 188 62 86 86.97 84.40, 89.54 75.2 69.85, 80.55 83.74 90.25 68.61 3.51 0.17 20.65 注： TP， 真阳性； TN， 真阴性； FP， 假阳性; FN， 假阴性； PPV， 阳性预 测值； NPV， 阴性预测值； LR+， 阳性似然比； LR -， 阴性似然比； DOR, diagnostic accuracy odds ratio;
3.2 行外科手术组
表 8.2.1 手术受试者分布 中心 入选受试者 有效受试者
3 96 76
5 13 3 合计 109 79
表 8.2.2 行外科手术的受试者治疗前后 Hsp90c 的变化情况
项目 结果 术前
N (Missing) 79(0)
Mean〔SD) 134.33(97.40)
Min, Max 56.39,597.98
Md (Q3-Q1) 96.97(81.84) 术后
N (Missing) 79(0)
Mean〔SD) 99.81(49.72)
Min, Max 19.3,328.23
Md (Q3-Q1) 95.40(56.95) 术前-术后
N (Missing) 79(0)
Mean〔SD) 34.52(109.04)
Min, Max -248.92,472.15
Md (Q3-Q1) 20.79(77.44) 配对 t检验〔P) 2.81(0.0062)
3.3 内科动态
3.3.1 受试者特征
表 8.3.1.1 受试者基本信息情况
指标 结果 年龄 [岁；）
N (Missing) 166(3)
Mean (SD) 54.57(10.53)
Min, Max 26,78
Md (Q3-Q1) 56.00(14.00) 性别
男 113( 67.26%) 女 55( 32.74%) 合计 168
Missing 1 肺癌种类
腺癌 101( 59.76%) 鳞癌 46( 27.22%) 小细胞癌 11( 6.51%) 大细胞癌 1( 0.59%) 未分型 2( 1.18%) 其他 7( 4.14%)
NK 1( 0.59%) 合计 169 小细胞癌分期
弥漫期 2( 40.00%) 局限期 3( 60.00%)
NK 0( 0.00%) 合计 5
3.3.2 分段评价
表 8.3.2.1 不同组间各次访视热休克蛋白检测值
项目 第 1周期 第 2周期 肿瘤缩小组
N [Missing] 69 [0] 69 [0] 69 [0]
Mean [SD 338.02 [385.23 177.59[208.86 167.36[154.62
Min, Max 23.3,1527 25.07,1093.9 13.61,761.9
Md [Q3-Q1 152.65[315.18 106.87[147.44 94.00[166.27 肿瘤不变组
N [Missing] 161[0 161[0 161[0
Mean [SD] 250.49[284.15 229.90[249.42 209.70[227.12
Min, Max 6.53,2217.1 10.71,1882.5 11.71,1782.9
Md [Q3-Q1 153.17[246.57 154.34[227.54 137.99 [190.90 肿瘤增大组
N [Missing] 54[0 54[0 54[0
Mean [SD] 227.23[352.02 248.72 [299.59 378.83 [557.28
Min, Max 18.6,1877.1 23.68,1433.4 24.4,3625
Md [Q3-Q1 114.22 [156.79 125.76[238.81 198.91 [273.14 肿瘤缩小组 +肿瘤不变组
N [Missing] 230[0 230[0 230[0
Mean [SD] 276.75[319.53 214.21〔238.74〕 197.00[208.61
Min, Max 6.53,2217.1 10.71,1882.5 11.71,1782.9
Md [Q3-Q1 152.91[263.59 134.79[210.91 129.07[194.61 肿瘤增大组 +肿瘤不变组
N [Missing] 215[0 215[0 215[0
Mean [SD] 244.65[301.93 234.63[262.31 252.18[347.69
表 8.3.2.2 不同组间各次访视热休克蛋白检测值比较
项目 肿瘤缩小组 肿瘤不变组 肿瘤增大组 检验统计量 P值 基线 3.62〔秩和） 0.1636
N (Missing) 69(0) 161(0) 54(0)
Mean (SD) 338.02 (385.23) 250.49 (284.15) 227.23 (352.02)
Min, Max 23.3,1527 6.53,2217.1 18.6,1877.1
Md (Q3-Q1) 152.65 (315.18) 153.17(246.57) 114.22 (156.79)
第 2周期 11.79〔秩和） 0.0027
N (Missing) 69(0) 161(0) 54(0)
Mean (SD) 167.36(154.62) 209.70(227.12) 378.83 (557.28)
Min, Max 13.61,761.9 11.71,1782.9 24.4,3625
Md (Q3-Q1) 94.00(166.27) 137.99 (190.90) 198.91 (273.14)
第 2周期 -基线 42.91 (秩禾口) <.0001
N (Missing) 69(0) 161(0) 54(0)
Mean (SD) -170.7(306.58) -40.80(187.55) 151.61 (524.36)
Min, Max -1204.68,399.77 -875.62,645.21 -854.79,3370.22
Md (Q3-Q1) -48.64(225.17) -8.51(102.35) 74.66(159.12)
符号秩和^5；) -811.5 (<.0001) -1352 (0.0220) 427.50(<.0001)
第 2周期相对基线百
分比
N (Missing) 69(0) 161(0) 54(0)
Mean (SD) -24.61 (53.07) 21.97(148.88) 174.62 (422.28)
Min, Max -90.51,227.56 -92.25,1241.98 -81.86,2656.07
Md (Q3-Q1) -41.09 (59.22) -9.46(75.72) 65.26(157.56) 图 6 是根据斜率判定肿瘤增大的 ROC曲线。
8.3.2.3.1 根据相对基线变化百分比判定肿瘤增大四格表
疗效评价
疗效评价 肿瘤增大 肿瘤縮小 +肿瘤不变 小计
>o
肿瘤增大 40[ 74.07%) 86[ 37.39%) 126[ 44.37%) 肿瘤缩小 肿瘤不变 14[ 25.93%) 144[ 62.61%) 158[ 55.63%) 小计 54 230 284
>10
肿瘤增大 39[ 72.22%) 72 [ 31.30%) 111[ 39.08%) 肿瘤缩小 肿瘤不变 15[ 27.78%) 158[ 68.70%) 173[ 60.92%) 小计 54 230 284
>20
肿瘤增大 38[ 70.37%) 61[ 26.52%) 99[ 34.86%) 肿瘤缩小 肿瘤不变 16[ 29.63%) 169[ 73.48%) 185[ 65.14%) 小计 54 230 284
>34.17
肿瘤增大 38[ 70.37%) 46[ 20.00%) 84[ 29.58%) 肿瘤缩小 肿瘤不变 16[ 29.63%) 184[ 80.00%) 200[ 70.42%) 小计 54 230 284
>40
肿瘤增大 33[ 61.11%) 43[ 18.70%) 76[ 26.76%) 肿瘤缩小 肿瘤不变 21[ 38.89%) 187[ 81.30%) 208[ 73.24%) 小计 54 230 284 表 8.3.2.3.2 基于不同相对基线变化百分比界值下肿瘤增大诊断结果
灵敏度 特异度
热休克蛋白相对基线变 符合率
化百分比 %95 %95
肿瘤增大组一肿瘤缩小
组 +肿瘤不变组
；
；
； 注： TP, 真阳性； TN， 真阴性； FP， 假阳性； FN, 假阴性； PPV, 阳性预 测值； NPV， 阴性预测值； LR+， 阳性似然比； LR -， 阴性似然比； DOR, diagnostic accuracy odds ratio;
3.3.3 受试者评价
表 8.3.3.1 不同疗效判定间各次访视热休克蛋白检测值比较 项目 PR SD PD 检验统计量 P值
16.96〔秩和:) 0.0002
N [Missing) 95〔0〕 118〔0〕 62 CO)
Mean [SD] 401.55 C422.99) 313.87C292.21) 216.07C368.54)
Min, Max 56.68,1527 57.93,1527 18.598,2217.1
Md CQ3-Q1) 174.94C574.25) 194.03 C281.54) 111.56C160.47)
评价时 12.82〔秩和：) 0.0016
N [Missing) 95〔0〕 118〔0〕 62 CO)
Mean [SD] 178.90C171.81) 237.27C294.39) 367.67C525.70)
Min, Max 13.61,944.15 11.71,2217.1 24.402,3625
Md CQ3-Q1) 121.91 C179.25) 154.43 C199.76) 198.91C276.86)
评价时 -基线 65.40〔秩和:) c.OOOl
N [Missing) 95〔0〕 118〔0〕 62 CO)
Mean [SD] -222.6C317.98) -76.60C325.24) 151.60C502.96)
Min, Max -1204.68,153.61 1010.94,1821.5 1288.99,3370.2
2 2
Md CQ3-Q1) -90.98C369.94) -32.91 C244.66) 80.32 C169.60)
符号秩和〔P;I -1814〔<.0001〕 -1424〔<.0001〕 647.50C<.0001)
评价时相对基线变化百
分比
N [Missing] 95〔0〕 118〔0〕 62 CO)
Mean [SD] -33.84C49.60) 3.61C113.41) 177.58C388.03)
Min, Max -88.76,151.52 -92.25,676.18 -64.44,2656.4
Md CQ3-Q1) -48.16C51.23) -22.23C79.38) 71.40C171.36) 注： PR、 SD的基线是治疗前的检测值， PD的基线是病灶大小最小时的检领 值 图 7是根据变化百分比判定 PD的 R0C曲线。
表 8.3.3.2.1 根据变化百分比判定 PD四格表
疗效评价 疗效评价 PD PR+SD 小计
>25
PD 45[ 72.58%] 37[ 17.37%] 82 [ 29.82%]
PR+SD 17[ 27.42%] 176[ 82.63%] 193[ 70.18%] 小计 62 213 275
>30
PD 45[ 72.58%] 35[ 16.43%] 80[ 29.09%]
PR+SD 17[ 27.42%] 178[ 83.57%] 195[ 70.91%] 小计 62 213 275
>34.17
PD 45[ 72.58%] 31[ 14.55%] 76 [ 27.64%]
PR+SD 17[ 27.42%] 182 [ 85.45%] 199[ 72.36%] 小计 62 213 275
>40
PD 39[ 62.90%] 28[ 13.15%] 67[ 24.36%]
PR+SD 23[ 37.10%] 185[ 86.85%] 208[ 75.64%] 小计 62 213 275
>45
PD 37[ 59.68%] 28[ 13.15%] 65[ 23.64%]
PR+SD 25[ 40.32%] 185[ 86.85%] 210[ 76.36%] 小计 62 213 275 表 8.3.3.2.2 基于检测值变化百分比的疾病进展诊断结果
灵敏度 特异度
变化百分 符合率
比 TP TN FP FN % %95 CI % %95 CI [%) PPV[%) NPV[%) LR+ LR- DOR
PD— PR+
SD
>25 45 176 37 17 72.58 61.48, 83.68 82.63 '7.54, 8 7.72 80.36 54.88 91.19 4.18 0.33 12.67
>30 45 178 35 17 72.58 61.48, 83.68 83.57 '8.59, 8 8.54 81.09 56.25 91.28 4.42 0.33 13.39
>34.17 45 182 31 17 72.58 61.48, 83.68 85.45 £ !0.71, 9 0.18 82.55 59.21 91.46 4.99 0.32 15.59
>40 39 185 28 23 62.9 50.88, 74.93 86.85 £ !2.32, 9 1.39 81.45 58.21 88.94 4.78 0.43 11.12
>45 37 185 28 25 59.68 47.47. 71.89 86.85 £ !2.32.9 1.39 80.73 56.92 88.1 4.54 0.46 9.87 注： TP, 真阳性； TN， 真阴性； FP, 假阳性； FN, 假阴性； PPV， 阳性预 测值； NPV， 阴性预测值； LR+， 阳性似然比； LR -， 阴性似然比； DOR, diagnostic accuracy odds ratio; 图 8 是根据变化值判定 PD的 ROC曲线。 表 8.3.3.3.1 根据变化值判定 PD四格表 疗效评价
疗效评价 PD PR+SD 小计
>1
PD 50[ 80.65%) 59[ 27.70%) 109[ 39.64%)
PR+SD 12 [ 19.35%) 154[ 72.30%) 166[ 60.36%) 小计 62 213 275
>5
PD 50[ 80.65%) 55[ 25.82%) 105[ 38.18%)
PR+SD 12 [ 19.35%) 158[ 74.18%) 170[ 61.82%) 小计 62 213 275
>7.84
PD 49[ 79.03%) 51[ 23.94%) 100[ 36.36%)
PR+SD 13[ 20.97%) 162 [ 76.06%) 175[ 63.64%) 小计 62 213 275
>10
PD 47[ 75.81%) 49[ 23.00%) 96[ 34.91%)
PR+SD 15[ 24.19%) 164[ 77.00%) 179[ 65.09%) 小计 62 213 275
>15
PD 45[ 72.58%) 46[ 21.60%) 91[ 33.09%)
PR+SD 17[ 27.42%) 167[ 78.40%) 184[ 66.91%) 小计 62 213 275
表 8.3.3.3.2 基于不同阈值的变化趋势， 所对应的疾病进展诊断结果
灵敏度 特异度
符合率
变化值 TP TN FP FN % %95 CI % %95 CI (%) PPV(%) NPV(%) LR+ LR- DOR
PD— PR+
SD
>1 50 154 59 12 80.65 70.81, 90.48 72.3 66.29, 78.31 74.18 45.87 92.77 2.91 0.27 10.78 >5 50 158 55 12 80.65 70.81, 90.48 74.18 68.30, 80.06 75.64 47.62 92.94 3.12 0.26 12 >7.84 49 162 51 13 79.03 68.90, 89.17 76.06 70.33, 81.79 76.73 49 92.57 3.3 0.28 11.79 >10 47 164 49 15 75.81 65.15, 86.47 77 71.34, 82.65 76.73 48.96 91.62 3.3 0.31 10.65 >15 45 167 46 17 72.58 61.48.83.68 78.4 72.88.83.93 77.09 49.45 90.76 3.36 0.35 9.6 注： TP, 真阳性； TN， 真阴性； FP, 假阳性； FN, 假阴性； PPV， 阳性预 测值； NPV， 阴性预测值； LR+， 阳性似然比； LR -， 阴性似然比； DOR, diagnostic accuracy odds ratio 实施例 4
一、 抗凝剂干扰评估资料 （证明 EDTA-K2对检测无影响）
实验样本
Hsp90a试剂盒， EDTA-K2, 校准品 1套
实验方法
配置 EDTA-K2溶液 300 mg/mL， 向 Hsp90a浓度分别为 400 ng/mL、 200 ng/mL的溶液 （各 ImL) 中加入 4 n h EDTA-K2溶液， 最后抗凝剂终浓度为 3 mg/mL。 同时平行配制一组不加抗凝剂的、对应浓度的 Hsp90a蛋白溶液。平行 检测加抗凝剂与不加抗凝剂蛋白溶液浓度， 每个浓度重复 6次， 平均值见下表。
实验结果
Figure imgf000027_0001
结论： 由结果可看出， 抗凝剂不影响本试剂盒检测结果。 二. 不同采血管干扰评估资料
实验样本
Hsp90a试剂盒， EDTA-K2采血管 （血浆管）， EDTA-K3采血管 （血浆管）， 血清管
实验方法
同时使用不同采血管收集同一人的血样，使用试剂盒同时检测不同采血管收 集的样本， 每个样本重复检测 2次。 计算不同采血管的检测值差异。
实验结果
1、 EDTA-K2采血管， EDTA-K3采血管对比
健康人 5例和肿瘤病人 4例， 图 9 是 EDTA-K3采血管样本与 EDTA-K2采血管样本的对比。
结果：在正常人中， EDTA-K3管样本比 EDTA-K2管样本检测值平均低 4.37%; 在癌症患者中， EDTA-K3管样本比 EDTA-K2管样本检测值平均低 26.95%。因此 如果选用 EDTA-K3管收集样本， 那么会导致阳性标本的 Hsp90c 值减低。
2、 血浆管与血清管对比
非恶性肿瘤的一般性疾病共 148例
Figure imgf000027_0002
结论： 通过 148个不同的非恶性肿瘤的一般性疾病的对比， 血清 Hsp90 a比血 浆中 Hsp90 a含量高低 27.8。/。。如果使用血清作为样本，会导致阳性阈值的降低。
3、 EDTA-K2采血管与肝素采血管对比
非恶性肿瘤的一般性疾病共 30例 EDTA-K2管 肝素管平均值
样本例数 差异 （％) 平均值 （ng/mL) (ng/mL)
30例 36.07 43.26 19.9 结论： 通过 30个不同的非恶性肿瘤一般性疾病的对比， 肝素采血管样本检 测值比 EDTA-K2采血管样本检测值高 19.9。/。。 如果使用肝素采血管收集样本， 会导致阳性阈值的升高。 实施例 5
采用非动态监测，即将单次检测结果与病理学诊断和临床诊断结果比对的方 法， 对 Hsp90a定量检测试剂盒在肝癌诊断中的有效性进行评价。 对于患者进行 动态监测， 即通过跟踪检测肝癌患者在治疗过程中的血浆 Hsp90a含量变化， 对 Hsp90a定量检测试剂盒在肝癌疗效评价中的有效性进行评价。
一、试验方案总体设计
1、 试验要求
研究采用盲法， 即在组别等信息未知的情况下， 用 Hsp90a定量检测试剂盒 对标本进行 Hsp90a含量的检测， 并对结果进行比较分析， 计算检测结果与病理 学、 临床诊断结果、 患者疗效评价符合或差异程度的统计学指标， 再根据这些指 标对 Hsp90a定量检测试剂盒的临床应用性能进行评价。
2、 样本采集、 保存、 运输方法
样本分为非动态监测样本和动态监测样本。 非动态监测样本为临床常规检 验后剩余的血浆样本；动态监测样本为入组患者定期采集的血浆样本或定期常规 检验的剩余样本。
所有血浆样本的采集和保存都必须符合 Hsp90a定量检测试剂盒使用说明书 的规定： 采集静脉血， 收集血样装在 EDTA-K2抗凝管中， 颠倒 8-10次。 离心分 离血浆 （800-1000 g， 10分钟） ， 将血浆分装至 EP管中 （每份不少于 250 μί)， 迅速放置于 -18°C以下冷冻保存。
3、 样本选择标准
3.1非动态监测样本的选择
研究对象包括： 肝癌组和非肝癌组。
( 1 ) 肝癌组： 经病理学诊断确诊为肝癌患者的样本， 包括肝癌的不同类型 和不同分期。
(2) 非肝癌组： 经临床生化、 影像或病理学方法证实未患肝癌的人群， 包 括确定无明显疾病症状的健康人和确定无肝癌但有肝部其他良性相关疾病人群 的样本 （如肝炎、 肝硬化等） 。
健康人定义： 无任何已知的良性或恶性疾病、 外表正常、无任何可见疾病症 状、 临床生化检测结果正常的人。
对于相关疾病患者，如需要做影像学或病理学进行确诊的，应由影像学或病 理学确诊为非癌症病变。
3.2动态监测样本的选择
对规范的手术治疗或内科治疗的肝癌患者进行随访监测， 检验血浆中 Hsp90a浓度的变化与患者病情变化的相关性。
血浆样本的收集时间点为：
( 1 ) 行手术治疗肝癌患者的动态监测： 手术前 3天内收集血浆样本 1次， 手术后 14天内收集血浆样本 1次。
(2) 行内科治疗肝癌患者的动态监测： 治疗开始前收集血浆样本 1次， 治 疗开始后，在每个治疗周期结束后收集样本 1次，血样的收集至少持续到患者完 成第一次疗效评价。
3.3 样本剔除标准
( 1 ) 动态监测中， 妊娠、 哺乳期或有生育能力但在试验期间未采取避孕措 施者的样本；
(2) 术后进行辅助治疗的患者的样本；
(3 ) 处于放射治疗期的患者的样本；
(4) 患有其他癌症的患者。
二、 临床评价标准
1、 在非动态监测中， 参照病理学金标准评价本检测的灵敏度、 特异度和符 合率；
2、 在动态监测中， 参照 CT结果评价本检测的灵敏度、 特异度和符合率， 即考察血浆中 Hsp90a含量的变化与治疗效果的对应性。
三、 统计处理方法
对计量资料， 采用均数±标准差等描述； 对计数资料， 采用例数和百分比来 描述。
根据数据类型， 分别选择适当的统计分析方法， 如 t检验 /秩和检验 /卡方检 验 /精确概率等方法。 将灵敏度和特异度分别作为坐标轴绘制 ROC 曲线， 并计算 ROC曲线下面 积和 95%CI， 以评价辅助诊断的价值。
进行一致性比较， 计算阳 /阴性一致百分比。
通过 SPSS软件统计产品测定临床样本 Hsp90a浓度值，得出 Hsp90a与疾病 的相关性和直线回归分析 （ROC曲线）。
四、 临床研宄结果及分析
1、 非动态监测样本数据统计结果
( 1 ) 非动态样本数据集构成， 见表 9.1
表 9.1 非动态样本数据集构成
样本组成 样本数量 （个）
肝癌患者 602
非癌肝部相关疾病组 151
健康人群 592
合计 1345
(2) ROC曲线 （肝癌组相对于健康人组）， 见图 10。
(3 ) 诊断评价指标 （肝癌组相对于健康人组）， 见表 9.2:
表 9.2: 肝癌组相对于健康人组 ROC曲 的诊断评价指标
Figure imgf000030_0001
Cut-off 52.79 ng/ml 62.20 ng/ml
曲线下面积 0.958 0.958
灵敏度 93.7 % 91.4 %
特异度 85 % 90 %
符合率 94.5 % 92.2 %
(4) ROC曲线 （肝癌相对于非癌肝部相关疾病组）， 见图 11。
( 5 ) 诊断评价指标 （肝癌组相对于非癌肝部相关疾病组）， 见表 9.3 :
表 9.3 : 肝癌组相对于非癌肝部相关疾病组 ROC曲线提示的诊断评价指标
变 数值
Cut-off 63.66 ng/ml 85.24 ng/ml
曲线下面积 0.958 0.958
灵敏度 90.7 % 80.7 %
特异度 90 % 95 % 符合率 90.3 % 88.6 %
(6) 行外科手术组动态监测数据统计结果 （69例）， 见表 9.4
表 9.4 手术前后检测值变化分析
项目 结果 术前
N 69
Mean 183.59
Min, Max 26.54,506.00 术后
N 69
Mean 118.56
Min, Max 20.00,233.00 术前 -术后
N 69
Mean 65.04 配对 t检验〔PJ 5.03(<0.001) 结果表明，术后血浆中 Hsp90a含量比术前显著降低，结果具有显著统计学意义。 (7) 肝癌介入治疗患者病情监测和疗效评价结果 （9例）
接受介入治疗的 9例患者中， 4例临床获益的患者 （患者编号 001-004) 治 疗后检测值降低， 5例疾病进展的患者治疗后检测值升高， 体现了检测值与患者 病情之间有良好的对应性， 见表 9.5:
表 9.5肝癌介入治疗疗效评价结果
Figure imgf000031_0001
008 31 66
009 99 108
实施例 6
采用与病理学诊断和临床诊断结果比对的方法， 对 Hsp90a定量检测试剂盒 在结直肠癌诊断中的有效性进行评价。对于患者进行动态监测，通过跟踪治疗过 程中的血浆 Hsp90a含量变化， 对 Hsp90a定量检测试剂盒在结直肠癌疗效评价 中的有效性进行评价。
一、试验方案总体设计： 同实施例 5相关内容， 适应症改为结直肠癌， 非癌 结直肠相关疾病包括结直肠息肉、 炎症等。
二、 临床评价标准： 同实施例 5相关内容
三、 统计处理方法： 同实施例 5相关内容。
四、 临床研宄结果及分析
1、 非动态监测样本数据统计结果
( 1 ) 非动态样本数据集构成， 见表 10.1
表 10.1 非动态样本数据集构成
样本组成 样本数量 （个）
结直肠癌患者 475
健康人及非癌结直肠相关疾病 592
合计 1067
(2) ROC曲线（结直肠癌组相对于健康人及非癌结直肠相关疾病组）， 见图 12。
(3 )诊断评价指标（结直肠癌组相对于健康人及非癌结直肠相关疾病组）， 见表 10.2。
表 10.2: 结直肠癌组相对于健康人及非癌结直肠相关疾病组 ROC曲线提示的诊 断评价指标
» 数值
Cut-off 52.79ng/ml 62.20ng/ml
曲线下面积 0.936 0.936
灵敏度 89.9% 83.4% 特异度 85% 90%
符合率 87% 87%
(4) 行外科手术组动态监测数据统计结果 （101例）， 见表 10.3。
表 10.3 手术前后检测值变化分析
项目 结"^
术前
N 101
Mean 145.84
Min, Max 50.72, 554.40 术后
N 101
Mean 94.08
Min, Max 66.19, 105.63 术前 -术后
N 101
Mean 51.76
配对 t检验 (； P〕 5.85(<0.001) 结果表明， 术后血浆中 Hsp90a含量比术前显著降低， 结果具有统计学意义。
( 5 ) 行内科治疗获益 （CR+PR+SD) 的结直肠癌患者疗效评价结果 （10 例）， 其中 9例检测值均降低， 检测值与疗效相关性良好， 见表 10.4。
表 10.4经内科治疗获益的结直肠癌患者检测结果 患者编号 化疗前检测值 (ng/ml) 化疗后检测值 (ng/ml)
001 221 112
002 41 36
003 49 20
004 171 69
005 46 29
006 125 66
007 37 40
008 24 20 009 106 26
010 32 31
实施例 7
采用与病理学诊断和临床诊断结果比对的方法， 对 Hsp90a定量检测试剂盒 在乳腺癌诊断中的有效性进行评价。对于患者进行动态监测，通过跟踪治疗过程 中的血浆 Hsp90a含量变化， 对 Hsp90a定量检测试剂盒在乳腺癌疗效评价中的 有效性进行评价。
一、试验方案总体设计： 同实施例 5相关内容， 适应症改为乳腺癌， 非癌乳腺相 关疾病包括乳腺炎、 乳腺增生等。
二、 临床评价标准： 同实施例 5相关内容
三、 统计处理方法： 同实施例 5相关内容。
四、 临床研宄结果及分析
1、 非动态监测样本数据统计结果
( 1 ) 非动态样本数据集构成， 见表 11.1
表 11.1 非动态样本数据集构成
样本组成 样本数量 （个）
乳腺癌患者 800
乳腺非癌相关疾病 172
健康人群 592
合计 1564
(2) ROC曲线 （乳腺癌组相对于健康人组）， 见图 13。
(3 ) 诊断评价指标 （乳腺癌组相对于健康人组）， 见表 11.2。
表 11.2乳腺癌组相对于健康人组 ROC曲 示的诊断评价指标
Figure imgf000034_0001
Cut-off 52.66 ng/ml 61.92 ng/ml
曲线下面积 0.817 0.817
灵敏度 65.6% 54.6%
特异度 85% 90%
符合率 73.85% 69.68% (4) ROC曲线 （乳腺癌相对于非癌乳腺相关疾病组）， 见图 14。
( 5 ) 诊断评价指标 （乳腺癌组相对于非癌乳腺相关疾病组）， 见表 11.3。
表 11.3乳腺癌组相对于非癌乳腺相关疾病组 ROC曲线提示的诊断评价指标
Figure imgf000035_0001
Cut-off 63.41ng/ml 72.21ng/ml
曲线下面积 0.769 0.769
灵敏度 52.4% 41.9%
特异度 84.9% 90.1%
符合率 68.29% 65.41%
(6) 行外科手术组动态监测数据统计结果 （26例）， 见表 11.4。
表 11.4 手术前后检测值变化分析
项目 结果
术前
N 26 ean 75.19
Min, Max 39.50,168.14 术后
N 26
Mean 45.33
Min, Max 20.00,188.54 术前 -术后
N 26
Mean 29.86 配对 t检验〔PJ 4.065(<0.001)
( 7 ) 行内科化疗临床获益 （CR+PR+SD ) 的乳腺癌患者化疗前和化疗后血浆 Hsp90a动态监测数据统计结果（18例）显示， 获得临床受益的患者检测值下降， 结果具有显著统计学意义， 见表 11.5。
表 11.5 经内科治疗获益的乳腺癌患者检测结果
变量 值
化疗前
Mean 103
( ng/ml )
化疗后
Mean 81
( ng/ml )
八=化疗前一化疗后 Mean 22 (ng/ml ) 配对 t值 2.338
P值 0.03
实施例 8
采用与病理学诊断和临床诊断结果比对的方法， 对 Hsp90a定量检测试剂盒 在多种癌症诊断中的有效性进行评价。结果显示，与健康人相比， 胃癌、胰腺癌、 卵巢癌、 淋巴瘤、 食管癌、 黑色素瘤、 肾癌、 子宫癌、 鼻咽癌、 骨肉瘤、 膀胱癌、 前列腺癌等多种癌症患者血浆 Hsp90a含量均显著升高（见图 15 ) ， 并且结果具 有显著统计学意义。 经统计， 各瘤种平均值分别如表 12.1所示：
表 12.1 其他癌症血浆 Hsp90a含量平均值
中类 样本数 均值 （ng/ml )
冃） ES 55 199. 70 胰腺癌 5 199. 73 卵巢癌 10 180. 47 淋巴瘤 42 161. 30 食管癌 20 239. 13 黑色素瘤 10 190. 11
R _ 14 242. 00 子宫癌 15 209. 77 鼻烟癌 8 168. 65 骨肉瘤 8 188. 68 膀胱癌 4 206. 56 前列腺癌 117 69. 12

Claims

权利要求
1、 确定受试者是否患有癌症或者具有罹患癌症风险的方法， 包括检测该受 试者的血液样本中 Hsp90a的浓度， 如果该浓度达到或超过预先设定的阈值， 则 判定该受试者患有癌症或者具有罹患癌症的风险， 其中所述阈值选自 50 ng/ml 到 120 ng/ml的范围内， 例如所述阈值可以为 50、 53、 56、 62、 63、 64、 67、 72、 82、 85或 117 ng/ml, 且所述阈值 ± 15%范围内的数值均被视为具有等同 判定意义； 优选地， 所述血液样本为血浆样本。
2、用于对正在接受治疗的癌症患者进行病情监测和 /或疗效评价或者用于对 候选治疗药物进行疗效评价的方法，包括在治疗前及治疗后分别检测受试者的血 液样本中 Hsp90a的浓度， 如果治疗后 Hsp90a的浓度相对于治疗前 Hsp90a浓 度增加的百分比达到或超过预先设定的阈值， 则判定该受试者病情进展和 /或疗 效较差， 或者判定所述候选治疗药物疗效较差， 其中所述阈值选自 10%到 50% 的范围内， 例如所述阈值可以为 34<½， 且所述阈值 ± 15<½范围内的数值均被视 为具有等同判定意义； 优选地， 所述血液样本为血浆样本。
3、 确定受试者是否患有癌症或者具有罹患癌症风险的方法， 包括联合检测 该受试者的血液样本中 Hsp90a的浓度以及至少一种其他肿瘤标志物的浓度，如 果 Hsp90a 的浓度和所述至少一种其他肿瘤标志物的浓度达到或超过预先设定 的阈值， 则判定该受试者患有癌症或者具有罹患癌症的风险， 其中 Hsp90c 的阈 值选自 50 ng/ml到 120 ng/ml的范围内， 例如所述阈值可以为 50、 53、 56、 62、 63、 64、 67、 72、 82、 85或 117 ng/ml， 且所述阈值 ± 15%范围内的数值 均被视为具有等同判定意义； 优选地， 所述血液样本为血浆样本。
4、 权利要求 1-3之任一项的方法， 其中所述癌症选自由肺癌、 肝癌、 结直 肠癌、 乳腺癌、 胃癌、 胰腺癌、 卵巢癌、 淋巴瘤、 食管癌、 黑色素瘤、 肾癌、 子 宫癌、 鼻咽癌、 骨肉瘤、 膀胱癌和前列腺癌构成的组。
5、 权利要求 3-4之任一项的方法， 其中所述至少一种其他肿瘤标志物选自 由 CEA、 CYFRA21-1、 AFP、 CA19-9、 CA125、 CA15-3、 PSA和 CA72-4构成的 组。
6、 权利要求 1-5之任一项的方法， 其中所述 Hsp90a的浓度采用 EDTA-K2 作为抗凝剂进行检测。
7、 用于确定受试者是否患有癌症或者具有罹患癌症风险的试剂盒， 包括： 任选的人分泌型 Hsp90a、人分泌型 Hsp90a单克隆抗体、检测试剂以及说明书， 其中所述说明书中标明了健康人血液样本中 Hsp90c 浓度的阈值，如果受试者的 血液样本中 Hsp90c 的浓度达到或超过所述阈值，则判定该受试者患有癌症或者 具有罹患癌症的风险， 其中所述阈值选自 50 ng/ml到 120 ng/ml的范围， 例如 所述阈值可以为 50、 53、 56、 62、 63、 64、 67、 72、 82、 85或 117 ng/ml， 且所述阈值 ± 15<½范围内的数值均被视为具有等同判定意义； 优选地，所述血液 样本为血浆样本。
8、 权利要求 7的试剂盒， 其中所述癌症选自由肺癌、 肝癌、 结直肠癌、 乳 腺癌、 胃癌、 胰腺癌、 卵巢癌、 淋巴瘤、 食管癌、 黑色素瘤、 肾癌、 子宫癌、 鼻 咽癌、 骨肉瘤、 膀胱癌和前列腺癌构成的组。
9、 权利要求 7-8之任一项的试剂盒， 其中所述试剂盒中包括用于采集血液 样本的容器， 并且该容器中包含 EDTA-K2、 EDTA-K3或肝素； 优选地， 所述容 器为包含 EDTA-K2的采血管。
10、权利要求 7-9之任一项的试剂盒，其中所述 Hsp90a的浓度采用 EDTA-K2 作为抗凝剂进行检测。
11、 EDTA-K2作为抗凝剂在收集用于 Hsp90a肿瘤标志物检测的血液样本中 的用途。
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