WO2015050181A1

WO2015050181A1 - 注射ワクチン組成物

Info

Publication number: WO2015050181A1
Application number: PCT/JP2014/076351
Authority: WO
Inventors: 恭平松下; 昌弘深坂; 有道岡崎; 英司清遠; 大久保　勝之; 大介浅利; 光彦堀
Original assignee: Nitto Denko Corp
Current assignee: Nitto Denko Corp
Priority date: 2013-10-03
Filing date: 2014-10-02
Publication date: 2015-04-09
Anticipated expiration: 2016-04-03
Also published as: US20160287697A1; CA2923030A1; CN105530953A; EP3053591A1; RU2016109363A3; US9962439B2; RU2016109363A; EP3053591A4; KR20160067087A; JP2015091794A; TW201601750A

Abstract

本発明は、安全で、癌又は感染症の予防又は治療剤として有用で、安全で、効果的に全身性免疫応答を誘導させることのできる注射ワクチン組成物を提供することを目的とする。本発明は、ヒト又は動物に注射投与される注射ワクチン組成物であって、少なくとも一種類の抗原と、免疫賦活化剤として、Ｓｅｒｒａｔｉａ、Ｌｅｃｌｅｒｃｉａ、Ｒａｈｎｅｌｌａ、Ａｃｉｄｉｃａｌｄｕｓ、Ａｃｉｄｉｐｈｉｌｉｕｍ、Ａｃｉｄｉｓｐｈａｅｒａ、Ａｃｉｄｏｃｅｌｌａ、Ａｃｉｄｏｍｏｎａｓ、Ａｓａｉａ、Ｂｅｌｎａｐｉａ、Ｃｒａｕｒｏｃｏｃｃｕｓ、Ｇｌｕｃｏｎａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ、Ｇｌｕｃｏｎｏｂａｃｔｅｒ、Ｋｏｚａｋｉａ、Ｌｅａｈｉｂａｃｔｅｒ、Ｍｕｒｉｃｏｃｃｕｓ、Ｎｅｏａｓａｉａ、Ｏｌｅｏｍｏｎａｓ、Ｐａｒａｃｒａｕｒｏｃｏｃｃｕｓ、Ｒｈｏｄｏｐｉｌａ、Ｒｏｓｅｏｃｏｃｃｕｓ、Ｒｕｂｒｉｔｅｐｉｄａ、Ｓａｃｃｈａｒｉｂａｃｔｅｒ、Ｓｔｅｌｌａ、Ｓｗａｍｉｎａｔｈａｎｉａ、Ｔｅｉｃｈｏｃｏｃｃｕｓ、Ｚａｖａｒｚｉｎｉａ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ、Ａｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｍｅｔｈａｎｏｃｕｌｌｅｕｓ、Ｍｅｔｈａｎｏｓａｒｃｉｎａ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ、Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ、Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｐａｎｔｏｅａ、Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ、Ｚｙｍｏｍｏｎａｓ、Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ、及び、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒからなる群より選択される少なくとも１種のグラム陰性細菌由来のリポポリサッカライド又はその塩を含むことを特徴とする注射ワクチン組成物である。

Description

注射ワクチン組成物

本発明は、癌又は感染症の予防又は治療剤として有用な注射ワクチン組成物に関する。特に本発明は、特定のリポポリサッカライドをアジュバントとして、抗原とともに投与することで安全で、効果的に全身性免疫応答を誘導せしめることが可能な注射ワクチン組成物に関する。

ワクチン製剤の剤形としては、現在製品化されているもののほとんどは注射剤である。
現行のワクチン製剤、例えば、日本で用いられている一般的なインフルエンザワクチン製剤では、アジュバントは含有されておらず、その効果が充分ではないとされ、ワクチン製剤を接種したもののインフルエンザ感染後に重篤化してしまう例も存在している。
また、ヒトパピローマウイルスワクチンにおいて、モノホスホリルリピッドをアジュバントとして含有させた製品も存在する。しかしながら、このモノホスホリルリピッドは安全性を高めるためにサルモネラ菌由来リポポリサッカライドの糖鎖部分を除去したものであり、アジュバントとしての効果は弱められているのが実情であった。
そのため、比較的安全性の高い菌種由来のリポポリサッカライドを利用し、高い安全性及び免疫賦活化作用を両立できるアジュバントが切望されていた。

例えば、特許文献１には、パントエア菌由来リポポリサッカライド（ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ，ＬＰＳ）が提案され、従来のＬＰＳよりも安全性が高く、抗原と同時に投与した場合に免疫反応が増強されることが記載されている。
しかしながら、特許文献１には、獲得免疫への使用については明確な言及や例示がなく、また、最適なアジュバント／抗原の比率についての言及もなされていない。

また、例えば、特許文献２には、病原体の不活化抗原、並びに、免疫賦活化剤（アジュバント）として、Ｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）及びザイモザンの組み合わせを含むワクチンが提案され、アジュバントとして、パントエア・アグロメランス（Ｐａｎｔｏｅａ　ａｇｇｌｏｍｅｒａｎｓ）に由来するリポポリサッカライド（ＬＰＳ）を用い、病原体としてインフルエンザウイルスを用いた例が記載されている。
しかしながら、特許文献２に記載のパントエア・アグロメランス（Ｐａｎｔｏｅａ　ａｇｇｌｏｍｅｒａｎｓ）に由来するリポポリサッカライド（ＬＰＳ）使用ワクチンの例は、鼻粘膜に投与するものであり、注射投与については教示されていない。一般に、投与部位が異なれば効果的なアジュバントが異なることは技術常識である。よって、この特許文献２に記載のパントエア・アグロメランス（Ｐａｎｔｏｅａ　ａｇｇｌｏｍｅｒａｎｓ）に由来するリポポリサッカライド（ＬＰＳ）使用ワクチンの例から、注射投与でパントエア・アグロメランス（Ｐａｎｔｏｅａ　ａｇｇｌｏｍｅｒａｎｓ）に由来するリポポリサッカライド（ＬＰＳ）が効果を奏するか否かは不明であった。

特許第４０４３５３３号特開２００９－２４２３６７号公報

本発明は、上記現状に鑑み、安全で、癌又は感染症の予防又は治療剤として有用で、効果的に全身性免疫応答を誘導させることのできる注射ワクチン組成物を提供することを課題とする。

本発明者らは、上記課題を解決するため、鋭意検討した結果、Ｓｅｒｒａｔｉａ、Ｌｅｃｌｅｒｃｉａ、Ｒａｈｎｅｌｌａ、Ａｃｉｄｉｃａｌｄｕｓ、Ａｃｉｄｉｐｈｉｌｉｕｍ、Ａｃｉｄｉｓｐｈａｅｒａ、Ａｃｉｄｏｃｅｌｌａ、Ａｃｉｄｏｍｏｎａｓ、Ａｓａｉａ、Ｂｅｌｎａｐｉａ、Ｃｒａｕｒｏｃｏｃｃｕｓ、Ｇｌｕｃｏｎａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ、Ｇｌｕｃｏｎｏｂａｃｔｅｒ、Ｋｏｚａｋｉａ、Ｌｅａｈｉｂａｃｔｅｒ、Ｍｕｒｉｃｏｃｃｕｓ、Ｎｅｏａｓａｉａ、Ｏｌｅｏｍｏｎａｓ、Ｐａｒａｃｒａｕｒｏｃｏｃｃｕｓ、Ｒｈｏｄｏｐｉｌａ、Ｒｏｓｅｏｃｏｃｃｕｓ、Ｒｕｂｒｉｔｅｐｉｄａ、Ｓａｃｃｈａｒｉｂａｃｔｅｒ、Ｓｔｅｌｌａ、Ｓｗａｍｉｎａｔｈａｎｉａ、Ｔｅｉｃｈｏｃｏｃｃｕｓ、Ｚａｖａｒｚｉｎｉａ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ、Ａｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｍｅｔｈａｎｏｃｕｌｌｅｕｓ、Ｍｅｔｈａｎｏｓａｒｃｉｎａ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ、Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ、Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｐａｎｔｏｅａ、Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ、Ｚｙｍｏｍｏｎａｓ、Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ、及び、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒからなる群より選択される少なくとも１種のグラム陰性細菌由来のリポポリサッカライド又はその塩をアジュバントとして、抗原と共に注射投与することで、安全で、効果的に全身性免疫応答を誘導させることができることを見出し、本発明を完成するに至った。

すなわち、本発明は、ヒト又は動物に注射投与される注射ワクチン組成物であって、少なくとも一種類の抗原と、免疫賦活化剤として、Ｓｅｒｒａｔｉａ、Ｌｅｃｌｅｒｃｉａ、Ｒａｈｎｅｌｌａ、Ａｃｉｄｉｃａｌｄｕｓ、Ａｃｉｄｉｐｈｉｌｉｕｍ、Ａｃｉｄｉｓｐｈａｅｒａ、Ａｃｉｄｏｃｅｌｌａ、Ａｃｉｄｏｍｏｎａｓ、Ａｓａｉａ、Ｂｅｌｎａｐｉａ、Ｃｒａｕｒｏｃｏｃｃｕｓ、Ｇｌｕｃｏｎａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ、Ｇｌｕｃｏｎｏｂａｃｔｅｒ、Ｋｏｚａｋｉａ、Ｌｅａｈｉｂａｃｔｅｒ、Ｍｕｒｉｃｏｃｃｕｓ、Ｎｅｏａｓａｉａ、Ｏｌｅｏｍｏｎａｓ、Ｐａｒａｃｒａｕｒｏｃｏｃｃｕｓ、Ｒｈｏｄｏｐｉｌａ、Ｒｏｓｅｏｃｏｃｃｕｓ、Ｒｕｂｒｉｔｅｐｉｄａ、Ｓａｃｃｈａｒｉｂａｃｔｅｒ、Ｓｔｅｌｌａ、Ｓｗａｍｉｎａｔｈａｎｉａ、Ｔｅｉｃｈｏｃｏｃｃｕｓ、Ｚａｖａｒｚｉｎｉａ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ、Ａｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｍｅｔｈａｎｏｃｕｌｌｅｕｓ、Ｍｅｔｈａｎｏｓａｒｃｉｎａ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ、Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ、Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｐａｎｔｏｅａ、Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ、Ｚｙｍｏｍｏｎａｓ、Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ、及び、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒからなる群より選択される少なくとも１種のグラム陰性細菌由来のリポポリサッカライド又はその塩を含むことを特徴とする注射ワクチン組成物である。

本発明の注射ワクチン組成物において、上記免疫賦活化剤と抗原との質量比（免疫賦活化剤の総質量／抗原の総質量）が、０．００２～５０であることが好ましい。
また、本発明の注射ワクチン組成物は、液性免疫を誘導するために用いられるものであることが好ましい。
また、本発明の注射ワクチン組成物において、抗原が、感染症由来抗原又は癌抗原であることが好ましい。
以下、本発明を詳細に説明する。

本発明の注射ワクチン組成物は、少なくとも一種類の抗原と免疫賦活化剤とを含有する。
本発明の注射ワクチン組成物において、上記免疫賦活化剤と上記抗原との質量比（免疫賦活化剤の総質量／抗原の総質量）が、０．００２～５０であることが好ましい。０．００２未満であると、充分な強さの免疫が誘導されないことがあり、５０を超えると、本発明の注射ワクチン組成物の安全性上の問題が生じることがある。上記免疫賦活化剤と上記抗原との質量比のより好ましい下限は０．０１、より好ましい上限は１０である。上記免疫賦活化剤と上記抗原との質量比がこの範囲にあることで、安全性を確保しつつ、充分な強さの免疫が誘導できる。
本明細書にいう「抗原の質量」は、特記する場合を除き、ワクチン中の抗原に含まれる抗原タンパク質あるいはペプチドの質量のことである。したがって、抗原が、ウイルス等生体由来物質である場合は、その抗原に含まれる全タンパク質の質量を意味する。

本発明で使用する抗原としては、感染症由来抗原であってよく、感染症由来抗原としては、感染性病原体及び感染性病原体由来の抗原であれば特に限定されない。
上記感染性病原体から罹る疾患としては特に限定されず、例えば、アデノウイルス、ヘルペスウイルス（例えば、ＨＳＶ－Ｉ、ＨＳＶ－ＩＩ、ＣＭＶ、又は、ＶＺＶ）、ポックスウイルス（例えば、痘瘡若しくはワクシニア、又は、伝染性軟属腫などのオルトポックスウイルス）、ピコルナウイルス（例えば、ライノウイルス又はエンテロウイルス）、オルソミクソウイルス（例えば、インフルエンザウイルス)、パラミクソウイルス（例えば、パラインフルエンザウイルス、おたふく風邪ウイルス、はしかウイルス、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ））、コロナウイルス（例えば、ＳＡＲＳ）、パポバウイルス（例えば、生殖器疣、尋常性胱贅、又は、足底疣費を引き起こすものなどのヒト乳頭腫（パピローマ）ウイルス）、ヘパドナウイルス（例えば、肝炎Ｂウイルス）、フラビウイルス（例えば、肝炎Ｃウイルス又はデングウイルス）、又は、レトロウイルス（例えば、ＨＩＶなどのレンチウイルス）などのウイルス感染から罹る疾患などのウイルス疾患、エシェリキア属、エンテロバクター、サルモネラ、ブドウ球菌、赤痢菌、リステリア、アエロバクター、ヘリコバクター、クレブシエラ、プロテウス、シュードモナス、連鎖球菌、クラミジア、マイコプラズマ、肺炎球菌、ナイセリア、クロストリジウム、バシラス、コリネバクテリウム、マイコバクテリウム、カンピロバクター、ビブリオ、セラチア、プロビデンシア、クロモバクテリウム、ブルセラ、エルシニア、ヘモフィルス、又は、ボルデテラなどの細菌感染から罹る疾患などの細菌疾患、クラミジア、カンジダ症、アスペルギルス症、ヒストプラスマ症、クリプトコックス髄膜炎をはじめとするがこれに限定されるものではない真菌疾患、マラリア、ニューモシスティスカリニ肺炎、レーシュマニア症、クリプトスポリジウム症、トキソプラズマ症、及び、トリパノソーマ感染等が挙げられる。

本発明において、上記感染症由来抗原は、インフルエンザウイルス由来抗原、ヒトパピローマウイルス由来抗原、及び、肺炎球菌由来抗原からなる群より選択される少なくとも１種類であることが好ましく、なかでも、インフルエンザウイルス由来抗原であることが好ましい。
ここで、上記インフルエンザウイルスとは、オルソミクソウイルス科に属する直径約１００ｎｍの粒子サイズを有するＲＮＡエンベロープウイルスであり、内部タンパクの抗原性に基づいて、Ａ、Ｂ及びＣ型に分けられる。上記インフルエンザウイルスは、脂質二重層構造を有するウイルスエンベロープに取り囲まれた内部ヌクレオキャプシド又は核タンパク質と会合したリボ核酸（ＲＮＡ）のコアと、外部糖タンパク質からなる。上記ウイルスエンベロープの内層は、主としてマトリックスタンパク質で構成され、外層は大部分が宿主由来脂質物質で構成される。また、上記インフルエンザウイルスのＲＮＡは、分節構造をとる。なお、世界中で大流行するインフルエンザは、Ａ型インフルエンザウイルスによるものであり、このＡ型インフルエンザウイルスは、ヘマグルチニン（ＨＡ）及びノイラミニダーゼ（ＮＡ）の２種類のエンベロープ糖タンパク質を有し、抗原性の違いによってＨＡでは１６種、ＮＡでは９種の亜型に区別されている。
本発明においては、上記感染症由来抗原としては、Ａ型及びＢ型インフルエンザウイルス由来抗原が好適に用いられる。なお、上述したＡ型及びＢ型インフルエンザウイルスの亜型としては特に限定されず、これまで単離された亜型であっても将来単離される亜型であってもよい。

本発明において、インフルエンザウイルス由来抗原としては、上記インフルエンザウイルスを構成する種々の成分の少なくとも一部であれば特に限定されるものではなく、精製ウイルス粒子を脂質エンベロープが可溶化されるように有機溶媒／界面活性剤若しくは他の試薬で分解されたサブビリオン、又は、ＨＡ及びＮＡを始めとするウイルスサブユニットでもよく、ウイルス全粒子でもよい。免疫原性の観点から、ＨＡ又はウイルス全粒子が好ましい。上記ウイルス全粒子は、ホルマリン等により不活化されたものがより好ましい。
上記インフルエンザウイルス抗原の調製方法は、特に限定されるものではなく、公知の方法が限定なく使用できる。例えば、インフルエンザ感染動物又はインフルエンザの患者から単離されたウイルス株をニワトリ卵等に感染させて常法により培養し、精製したウイルス原液から抗原を調製する方法が挙げられる。また、遺伝子工学的に培養細胞中で調製したウイルス由来の抗原を用いてもよい。

本発明で使用する抗原としては、癌抗原であってよい。癌抗原としては、下記に挙げる遺伝子に基づいた産物であれば癌抗原ペプチド、癌抗原タンパク、癌細胞ライセートや抽出物等があり、特に限定されない。ここでいう癌とは、癌遺伝子の異常な発現、例えば過剰発現を伴う癌、例えば造血器腫瘍や固形癌を意味する。
上記癌遺伝子としては、例えば、サバイビン遺伝子、ＧＰＣ３遺伝子、ＨＥＲ２／ｎｅｕ遺伝子、ＭＡＧＥ３遺伝子、ＭＡＧＥ　Ａ１遺伝子、ＭＡＧＥ　Ａ３／Ａ６遺伝子、ＭＡＧＥ　Ａ４遺伝子、ＭＡＧＥ１２遺伝子、プロテイナーゼ－３遺伝子、ＡＦＰ遺伝子、ＣＡ－１２５遺伝子、ＣＤ４４遺伝子、ＣＥＡ遺伝子、ｃ－Ｋｉｔ遺伝子、ｃ－ｍｅｔ遺伝子、ｃ－ｍｙｃ遺伝子、Ｌ－ｍｙｃ遺伝子、ＣＯＸ２遺伝子、ＣｙｃｌｉｎＤ１遺伝子、Ｃｙｔｏｋｅｒａｔｉｎ－７遺伝子、Ｃｙｔｏｋｅｒａｔｉｎ－１９遺伝子、Ｃｙｔｏｋｅｒａｔｉｎ－２０遺伝子、Ｅ２Ｆ１遺伝子、Ｅ２Ｆ３遺伝子、ＥＧＦＲ遺伝子、Ｇｌｉ１遺伝子、ｈＣＧβ遺伝子、ＨＩＦ－１α遺伝子、ＨｎＲＮＰ　Ａ２／Ｂ１遺伝子、ｈＴＥＲＴ遺伝子、ＭＤＭ遺伝子、ＭＤＲ－１遺伝子、ＭＭＰ－２遺伝子、ＭＭＰ－９遺伝子、Ｍｕｃ－１遺伝子、Ｍｕｃ－４遺伝子、Ｍｕｃ－７遺伝子、ＮＳＥ遺伝子、ＰｒｏＧＲＰ遺伝子、ＰＳＡ遺伝子、ＲＣＡＳ１遺伝子、ＳＣＣ遺伝子、サイモグロブリン遺伝子、ＶＥＧＦ－Ａ遺伝子、ＶＥＧＦ－Ａ遺伝子等が挙げられる。サバイビン遺伝子の異常な発現を伴う癌には、悪性リンパ腫、膀胱癌、肺癌、大腸癌等が含まれるが、これらに限定されない。ＧＰＣ３遺伝子の異常な発現を伴う癌には、肝癌、胆管癌、胃癌等が含まれるが、これらに限定されない。ＨＥＲ２／ｎｅｕ遺伝子の異常な発現を伴う癌には、乳癌、胃癌、卵巣癌、子宮癌、膀胱癌、非小細胞肺癌、前立腺癌等が含まれるが、これらに限定されない。ＭＡＧＥ３遺伝子の異常な発現を伴う癌には、メラノーマ、肺癌、頭頚部癌、膀胱癌、胃癌、食道癌、肝臓癌が含まれるが、これらに限定されない。プロテイナーゼ－３遺伝子の異常な発現を伴う癌には、急性骨髄性白血病、膵臓癌が含まれるが、これらに限定されない。またウイルスが原因となって引き起こされる癌については、そのウイルス由来の遺伝子をがん遺伝子としてみなす。例えばＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）タンパク質由来のペプチドＩＰＥＰ８７ペプチド、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）タンパク質由来のペプチドであるＨＢＶｅｎｖペプチドなどが挙げられるがこれらに限定されない。

本発明において、上記癌抗原は、サバイビン２Ｂペプチド及び／又は改変サバイビン２Ｂペプチド、ＩＰＥＰ８７ペプチド及び／又は改変ＩＰＥＰ８７ペプチド、ＨＢＶｅｎｖペプチド及び／又は改変ＨＢＶｅｎｖペプチド、ＨＥＲ２／ｎｅｕ＿Ｅ７５ペプチド及び／又は改変ＨＥＲ２／ｎｅｕ＿Ｅ７５ペプチド、ＧＰＣ３ペプチド及び／又は改変ＧＰＣ３ペプチド、ＨＥＲ２／ｎｅｕ＿Ａ２４ペプチド及び／又は改変ＨＥＲ２／ｎｅｕ＿Ａ２４ペプチド、ＭＡＧＥ３＿Ａ２４ペプチド及び／又は改変ＭＡＧＥ３＿Ａ２４ペプチド、ＰＲ１ペプチド及び／又は改変ＰＲ１ペプチド、ＨＥＲ２／ｎｅｕ＿Ａ０２ペプチド及び／又は改変ＨＥＲ２／ｎｅｕ＿Ａ０２ペプチド、ＭＡＧＥ３＿Ａ０２ペプチド及び／又は改変ＭＡＧＥ３＿Ａ０２ペプチド、並びに、ＭＵＣ１ペプチド及び／又は改変ＭＵＣ１ペプチドからなる群より選択される、内因性又は合成の癌抗原ペプチドであることが好ましい。ここでいう「改変ＸＸペプチド」（ＸＸは任意のペプチドの名称）とは、ＸＸペプチドの全部又は一部のアミノ酸が置換や修飾等により改変されたペプチドを意味する。
上記改変ＸＸペプチドには、例えば、
（ａ）ＸＸペプチドのアミノ酸配列において、１個から数個、例えば１個、２個、３個、４個又は５個のアミノ酸が置換、欠失又は付加されたアミノ酸配列からなるペプチド；及び
（ｂ）ＸＸペプチドのアミノ酸配列において、全部又は一部のアミノ酸、例えば１個又は複数個、例えば１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個又は１０個のアミノ酸が修飾されたアミノ酸配列からなるペプチド
が含まれる。
上記改変ＸＸペプチドが有し得るアミノ酸の「修飾」としては、これらに限定されないが、例えば、アセチル化、メチル化などのアルキル化、グリコシル化、ヒドロキシル化、カルボキシル化、アルデヒド化、リン酸化、スルホニル化、ホルミル化、ミリストイル化やパルミトイル化やステアロイル化のような脂肪鎖付加修飾、オクタノイル化、エステル化、アミド化、脱アミド化、シスチン修飾やグルタチオン修飾やチオグリコール酸修飾のようなジスルフィド結合形成修飾、糖化、ユビキチン化、スクシンイミド形成、グルタミル化、プレニル化等が挙げられる。
上記改変ＸＸペプチドは、１個以上のアミノ酸の置換、欠失又は付加と、１個以上のアミノ酸の修飾とを組み合わせて含むものであってもよい。

本明細書において使用するとき、用語「サバイビン２Ｂペプチド」は、配列Ａｌａ　Ｔｙｒ　Ａｌａ　Ｃｙｓ　Ａｓｎ　Ｔｈｒ　Ｓｅｒ　Ｔｈｒ　Ｌｅｕ（配列番号１）からなる、癌遺伝子産物サバイビン由来のペプチドを意味する。

本明細書において使用するとき、用語「ＧＰＣ３ペプチド」は、配列Ｇｌｕ　Ｔｙｒ　Ｉｌｅ　Ｌｅｕ　Ｓｅｒ　Ｌｅｕ　Ｇｌｕ　Ｇｌｕ　Ｌｅｕ（配列番号２）からなる、癌遺伝子産物ＧＰＣ３由来のペプチドを意味する。

本明細書において使用するとき、用語「ＨＥＲ２／ｎｅｕ＿Ａ２４ペプチド」は、配列Ｔｈｒ　Ｔｙｒ　Ｌｅｕ　Ｐｒｏ　Ｔｈｒ　Ａｓｎ　Ａｌａ　Ｓｅｒ　Ｌｅｕ（配列番号３）からなる、癌遺伝子産物ＨＥＲ２／ｎｅｕ由来のＨＬＡ－Ａ２４拘束性ペプチドを意味する。

本明細書において使用するとき、用語「ＭＡＧＥ３＿Ａ２４ペプチド」は、配列Ｉｌｅ　Ｍｅｔ　Ｐｒｏ　Ｌｙｓ　Ａｌａ　Ｇｌｙ　Ｌｅｕ　Ｌｅｕ　Ｉｌｅ（配列番号４）からなる、癌遺伝子産物ＭＡＧＥ３由来のＨＬＡ－Ａ２４拘束性ペプチドを意味する。

本明細書において使用するとき、用語「ＩＰＥＰ８７ペプチド」は、配列Ａｓｐ　Ｌｅｕ　Ｍｅｔ　Ｇｌｙ　Ｔｙｒ　Ｉｌｅ　Ｐｒｏ　Ａｌａ　Ｖａｌ（配列番号５）からなる、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）タンパク質由来のペプチドを意味する。

本明細書において使用するとき、用語「ＰＲ１ペプチド」は、配列Ｖａｌ　Ｌｅｕ　Ｇｌｎ　Ｇｌｕ　Ｌｅｕ　Ａｓｎ　Ｖａｌ　Ｔｈｒ　Ｖａｌ（配列番号６）からなる、癌遺伝子産物プロテイナーゼ‐３由来のペプチドを意味する。

本明細書において使用するとき、用語「ＨＥＲ２／ｎｅｕ＿Ａ０２ペプチド」は、配列Ｌｙｓ　Ｖａｌ　Ｐｈｅ　Ｇｌｙ　Ｓｅｒ　Ｌｅｕ　Ａｌａ　Ｐｈｅ　Ｖａｌ（配列番号７）からなる、癌遺伝子産物ＨＥＲ２／ｎｅｕ由来のＨＬＡ－Ａ０２拘束性ペプチドを意味する。

本明細書において使用するとき、用語「ＭＡＧＥ３＿Ａ０２ペプチド」は、配列Ｌｙｓ　Ｖａｌ　Ａｌａ　Ｇｌｕ　Ｉｌｅ　Ｖａｌ　Ｈｉｓ　Ｐｈｅ　Ｌｅｕ（配列番号８）からなる、癌遺伝子産物ＭＡＧＥ３由来のＨＬＡ－Ａ０２拘束性ペプチドを意味する。

本明細書において使用するとき、用語「ＨＢＶｅｎｖペプチド」は、配列Ｔｒｐ　Ｌｅｕ　Ｓｅｒ　Ｌｅｕ　Ｌｅｕ　Ｖａｌ　Ｐｒｏ　Ｐｈｅ　Ｖａｌ（配列番号９）からなる、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）タンパク質由来のペプチドを意味する。

本明細書において使用するとき、用語「ＨＥＲ２／ｎｅｕ　Ｅ７５ペプチド」は、配列Ｌｙｓ　Ｉｌｅ　Ｐｈｅ　Ｇｌｙ　Ｓｅｒ　Ｌｅｕ　Ａｌａ　Ｐｈｅ　Ｌｅｕ（配列番号１０）からなる、癌遺伝子ＨＥＲ２／ｎｅｕの産物（ＨＥＲ２タンパク質）に由来するペプチドを意味する。

本明細書において使用するとき、用語「ＭＵＣ１ペプチド」は、配列Ｓｅｒ　Ｔｈｒ　Ａｌａ　Ｐｒｏ　Ｐｒｏ　Ｖａｌ　Ｈｉｓ　Ａｓｎ　Ｖａｌ（配列番号１１）からなり、多くの癌細胞上に高発現する糖タンパクであるＭＵＣ１タンパクに由来するペプチドを意味する。

本発明の注射ワクチン組成物において、上記抗原は有効量含有されていればよいが、例えば、本発明の注射ワクチン組成物中、１回投与量当たり、０．０１～１００００μｇの範囲で含有されていることが好ましい。０．０１μｇ未満であると、癌又は感染症の予防又は治療剤としての機能が不充分となることがあり、１００００μｇを超えると、安全性に関して問題となることがある。上記抗原含有量のより好ましい下限は０．１μｇ、より好ましい上限は５０００μｇである。

本発明の注射ワクチン組成物は、免疫賦活化剤を含有する。
上記免疫賦活化剤としては、トール様受容体４（ＴＬＲ４）アゴニストが挙げられ、本発明では、該トール様受容体４（ＴＬＲ４）アゴニストとして、特定のリポポリサッカライド又はその誘導体若しくは塩が用いられる。
なお、本明細書にいう「リポポリサッカライド」は、リポポリサッカライドそれ自体のほか、その性質を有する限りその誘導体であることができる。本明細書にいう塩とは、任意の有機酸または無機酸であってよいが、好ましくは薬学的に許容される塩である。

ここで、リポポリサッカライド（ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ、以下、ＬＰＳと記載することがある）について説明する。
上記ＬＰＳは、大腸菌、サルモネラ菌、百日咳菌等のグラム陰性細菌細胞壁のペプチドグリカンを囲む外膜に存在している脂質及び糖からなる複合化合物であり、Ｏ抗原及びエンドトキシンの活性成分として知られている［ジェー・エム・ギューセン及びアール・ハッケンベック（Ｊ．Ｍ．Ｇｈｕｙｓｅｎ　ａｎｄ　Ｒ．Ｈａｋｅｎｂｅｃｋ）編、「ニュー・コンプリヘンシブ・バイオケミストリー（Ｎｅｗ　Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）」、第２７巻、バクテリアル・セル・ウオール（Ｂａｃｔｅｒｉａｌ　Ｃｅｌｌ　Ｗａｌｌ）、第１８ページ、エルセヴィア（Ｅｌｓｅｖｅａ）、１９９４年］。
上記ＬＰＳの基本構造は、特異な脂質を有するリピドＡ、それに共有結合したＲコアと呼ばれるオリゴ糖、さらにＯ特異多糖の３成分よりなっている（「日経バイオテクノロジー最新用語辞典」、第４３１ページ、日経マグロウヒル社、１９８５年）。

上記Ｏ特異多糖の構造は、構成成分の中で最も多様であり、菌種に特異的であって、いわゆるＯ抗原としての活性を示す。一般に数種の単糖からなるオリゴ糖の繰返し構造を特徴とするが、同一単糖からなるもの、または繰返し構造でないものも知られている。

本発明の注射ワクチン組成物は、上記免疫賦活化剤として、特定のグラム陰性細菌由来のリポポリサッカライド又はその塩を含む。これらは、多くの食品、漢方薬に含まれ、生体への安全性が担保されており、これらの菌由来の抽出物又はその改変体をそのまま用いることも可能である。

上記免疫賦活化剤に用いられるリポポリサッカライドの由来細菌としては、Ｓｅｒｒａｔｉａ（Ｐａｎｔｏｅａ菌近種／パン、肉類、牛乳、常在細菌の一種）、Ｌｅｃｌｅｒｃｉａ（Ｐａｎｔｏｅａ菌近種／食品全般（土壌菌））、Ｒａｈｎｅｌｌａ（Ｐａｎｔｏｅａ菌近種／常在細菌の一種）、Ａｃｉｄｉｃａｌｄｕｓ（酢酸菌類／発酵食品製造）、Ａｃｉｄｉｐｈｉｌｉｕｍ（酢酸菌類／発酵食品製造）、Ａｃｉｄｉｓｐｈａｅｒａ（酢酸菌類／発酵食品製造）、Ａｃｉｄｏｃｅｌｌａ（酢酸菌類／発酵食品製造）、Ａｃｉｄｏｍｏｎａｓ（酢酸菌類／発酵食品製造）、Ａｓａｉａ（酢酸菌類／発酵食品製造）、Ｂｅｌｎａｐｉａ（酢酸菌類／発酵食品製造）、Ｃｒａｕｒｏｃｏｃｃｕｓ（酢酸菌類／発酵食品製造）、Ｇｌｕｃｏｎａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ（酢酸菌類／発酵食品製造）、Ｇｌｕｃｏｎｏｂａｃｔｅｒ（酢酸菌類／発酵食品製造）、Ｋｏｚａｋｉａ（酢酸菌類／発酵食品製造）、Ｌｅａｈｉｂａｃｔｅｒ（酢酸菌類／発酵食品製造）、Ｍｕｒｉｃｏｃｃｕｓ（酢酸菌類／発酵食品製造）、Ｎｅｏａｓａｉａ（酢酸菌類／発酵食品製造）、Ｏｌｅｏｍｏｎａｓ（酢酸菌類／発酵食品製造）、Ｐａｒａｃｒａｕｒｏｃｏｃｃｕｓ（酢酸菌類／発酵食品製造）、Ｒｈｏｄｏｐｉｌａ（酢酸菌類／発酵食品製造）、Ｒｏｓｅｏｃｏｃｃｕｓ（酢酸菌類／発酵食品製造）、Ｒｕｂｒｉｔｅｐｉｄａ（酢酸菌類／発酵食品製造）、Ｓａｃｃｈａｒｉｂａｃｔｅｒ（酢酸菌類／発酵食品製造）、Ｓｔｅｌｌａ（酢酸菌類／発酵食品製造）、Ｓｗａｍｉｎａｔｈａｎｉａ（酢酸菌類／発酵食品製造）、Ｔｅｉｃｈｏｃｏｃｃｕｓ（酢酸菌類／発酵食品製造）、Ｚａｖａｒｚｉｎｉａ（酢酸菌類／発酵食品製造）、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ（シュードモナス菌類／牛肉、卵、肉類、魚介類、野菜）、Ａｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒ（アクロモバクター菌類／魚介類、肉類）、Ｂａｃｉｌｌｕｓ（バシラス菌類／米、野菜）、Ｍｅｔｈａｎｏｃｕｌｌｅｕｓ（メタン産生菌類／動物の腸に寄生するメタン産生菌）、Ｍｅｔｈａｎｏｓａｒｃｉｎａ（メタン産生菌類／動物の腸に寄生するメタン産生菌）、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ（クロストリジウム菌類／肉類、牛乳、野菜、缶詰）、Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ（放射菌類／肉類、魚介類）、Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ（バクロイデス菌類／食品の腐敗菌）、Ｐａｎｔｏｅａ、Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ、Ｚｙｍｏｍｏｎａｓ、Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ、及び、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒが挙げられる。これらは、多くの食品に含まれるものであるか、食品の製造工程で用いられるものであるため、生体への安全性が担保されている。
なかでも、Ｓｅｒｒａｔｉａ、Ｌｅｃｌｅｒｃｉａ、Ｒａｈｎｅｌｌａ、Ａｃｉｄｉｃａｌｄｕｓ、Ａｃｉｄｉｐｈｉｌｉｕｍ、Ａｃｉｄｉｓｐｈａｅｒａ、Ａｃｉｄｏｃｅｌｌａ、Ａｃｉｄｏｍｏｎａｓ、Ａｓａｉａ、Ｂｅｌｎａｐｉａ、Ｃｒａｕｒｏｃｏｃｃｕｓ、Ｇｌｕｃｏｎａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ、Ｇｌｕｃｏｎｏｂａｃｔｅｒ、Ｋｏｚａｋｉａ、Ｌｅａｈｉｂａｃｔｅｒ、Ｍｕｒｉｃｏｃｃｕｓ、Ｎｅｏａｓａｉａ、Ｏｌｅｏｍｏｎａｓ、Ｐａｒａｃｒａｕｒｏｃｏｃｃｕｓ、Ｒｈｏｄｏｐｉｌａ、Ｒｏｓｅｏｃｏｃｃｕｓ、Ｒｕｂｒｉｔｅｐｉｄａ、Ｓａｃｃｈａｒｉｂａｃｔｅｒ、Ｓｔｅｌｌａ、Ｓｗａｍｉｎａｔｈａｎｉａ、Ｔｅｉｃｈｏｃｏｃｃｕｓ、Ｚａｖａｒｚｉｎｉａ、Ｐａｎｔｏｅａ、Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ、Ｚｙｍｏｍｏｎａｓ、Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ、及び、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒからなる群より選択される少なくとも１種が好ましい。
より好ましくは、上記グラム陰性菌としては、Ｐａｎｔｏｅａ、Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ、Ｚｙｍｏｍｏｎａｓ、Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ、及び、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒからなる群より選択される少なくとも１種である。特にＰａｎｔｏｅａ由来リポポリサッカライドは、現在健康食品として用いられており、特に経口的に投与する際により有効であるといえる。これらの菌由来の抽出物又はその改変体をそのまま用いることも可能である。

また、上記グラム陰性細菌由来のリポポリサッカライド又はその塩を用いる場合には、一般的には生体への安全性を加味する必要があり、これらを解毒化するための改変体として用いることもできる。

また、上記トール様受容体４（ＴＬＲ４）アゴニストとしては、上記特定のリポポリサッカライドの誘導体、例えば、多糖部分を除去したリピドＡ又はモノホスホリルリピッドＡ、３－脱－アシル化ＭＰＬ等が挙げられ、若しくは塩であってもよい。
上記リポポリサッカライドの多糖部分を除去したリピドＡとしては、上記特定のグラム陰性菌由来の単離物であればよく、あるいはこれらのグラム陰性菌由来の単離物と同じ構造になるように合成した物を用いてもよい。
また、上記リピドＡの改変体としては、脱リン酸化を行ったモノホスホリルリピッド（ＭＰＬ）又は塩も好適に用いられる。なお、本明細書にいうモノホスホリルリピッドは、モノホスホリルリピッドそれ自体のほか、その性質を有する限りその誘導体であることができる。特に既に医療用途で免疫賦活化剤として実績がある３－脱－アシル化物モノホスホリルリピッド（３Ｄ－ＭＰＬ）、又は、米国特許出願公開第２０１０／０３１０６０２号明細書で提案されている脱アシル化されていない合成Ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ　ｌｉｐｉｄが生体への安全性の観点から好ましい。
また、上記モノホスホリルリピッドとしては、安全性及び使用前例のあるサルモネラ菌由来のものも好適に用いられる。

本発明では、パントエア・アグロメランス（Ｐａｎｔｏｅａ　ａｇｇｌｏｍｅｒａｎｓ）由来ＬＰＳがさらに好ましく用いられる。なかでも、パントエア・アグロメランス由来ＬＰＳは、タンパク質マーカーを用いてＳＤＳ－ＰＡＧＥ法で測定した分子量が、５０００±３０００、好ましくは、５０００±２０００であるパントエア・アグロメランス由来ＬＰＳが好ましい。ここにいう分子量は、タンパク質マーカーを用いたＳＤＳ－ＰＡＧＥ法による染色帯の位置により測定され、詳細は後述する。
本発明でも好ましく用いられるパントエア・アグロメランス由来ＬＰＳは、Ｏ－抗原部分がラムノースとグルコースとの繰返し構造であることを特徴とするリポポリサッカライドである。

上記パントエア・アグロメランス由来ＬＰＳは、パントエア・アグロメランス（Ｐａｎｔｏｅａ　ａｇｇｌｏｍｅｒａｎｓ）を、常法により培養し、培地から菌体を集め、集めた菌体から公知の方法により精製して製造できる。

なお、上記パントエア・アグロメランス由来ＬＰＳの分子量は、以下の方法で測定できる。
すなわち、配合物として用意したパントエア・アグロメランス由来ＬＰＳ、あるいはワクチン組成物から適当な方法で抽出精製したパントエア・アグロメランス由来ＬＰＳについて、以下の方法で分子量を測定できる。
パントエア・アグロメランス由来ＬＰＳを蒸留水に溶解して１ｍｇ／ｍＬの濃度の溶液を調製し、その溶液と、Ｓａｍｐｌｅ　ｂｕｆｆｅｒ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ　２ＭＥ＋（ＷＡＫＯ社製）を等量混合し、５分間沸騰水浴中に浸し、その後直ちに氷水中に浸して急冷する。
ランニングバッファー（アトー社製）をスラブゲル電気泳動槽（マリソル社製）に満たし、２０％ポリアクリルアミドゲルを泳動槽に固定し、サンプル溝に１０μＬずつ検体を入れ、電圧を１００Ｖにて少なくとも１時間、色素がゲルより溶出するまで泳動を継続する。泳動終了後に、銀染色キット１６１－０４４３（バイオラッド社製）により室温で銀染色を行い、挙動を確認する。

本発明の注射ワクチン組成物において、上述した免疫賦活化剤の質量の、ワクチン抗原の質量に対する比率（免疫賦活化剤の総質量／ワクチン抗原の総質量）は、例えば０．００２～５０の範囲で含有されていることが好ましい。０．００２未満であると、充分な癌又は感染症の予防又は治療剤としての機能が得られないことがあり、５０を超えると、安全性に関して問題となることがある。上記比率のより好ましい下限は０．０１、より好ましい上限は１０である。

また、本発明の注射ワクチン組成物は、上述した免疫賦活化剤として、特定のグラム陰性細菌由来のリポポリサッカライド又はその塩を含有するものであれば、これらと他の従来公知の免疫賦活化剤を組み合わせて用いてもよい。

本発明の注射ワクチン組成物は、上述した抗原及び免疫賦活化剤に、必要に応じて他の成分（例えば、リン酸緩衝溶液等）を加え、公知の方法で攪拌混合することで、及び必要に応じて公知の方法で、さらに加熱、冷却、又は非加熱乾燥することで調製することができる。
また、本発明の注射ワクチン組成物を用いて、液剤、エマルジョン剤、又は、液体を添加して溶解、乳化、あるいは懸濁させて使用する半固形製剤若しくは固形製剤を調製することが可能であり、上述した材料以外に、所望により、防腐剤、抗酸化剤、安定化剤、界面活性剤等を適宜使用してもよい。
これらの材料としては特に限定されず、従来公知のものが使用できる。

本発明の注射ワクチン組成物は、なかでも、液剤、エマルジョン剤、又は、液体を添加して溶解あるいは懸濁させて使用する半固形製剤又は固形製剤であることが好ましい。後述のように、本発明の注射ワクチン組成物が液剤、エマルジョン剤、又は、液体を添加して溶解、乳化、あるいは懸濁させて使用する上記固形製剤であることで、ヒト又は動物に注射により好適に投与することができる。

本発明の注射ワクチン組成物は、ヒト又は動物（哺乳類、鳥類等）に注射投与されるものである。
本発明の注射ワクチン組成物の投与方法としては特に限定されないが、皮内注射、皮下注射、筋肉注射のいずれかの方法により投与されることが好ましい。

本発明の注射ワクチン組成物は、少なくとも一種類の抗原とともに、上述した特定の免疫賦活化剤を併用するため、注射投与により、効果的に全身性免疫応答、例えば、液性免疫、細胞性免疫を誘導させることができる。

実施例１～４、比較例１～４のマウス血清中インフルエンザＨＡ（Ｂ型）特異的ＩｇＧ力価の結果を示すグラフである。実施例５～８、比較例５～７のマウス血清中インフルエンザＨＡ（Ｈ１Ｎ１）特異的ＩｇＧ力価の結果を示すグラフである。実施例９、比較例８～１０のマウス血清中肺炎球菌特異的ＩｇＧ力価の結果を示すグラフである。実施例１０、比較例１１～１３のマウス血清中ＨＰＶ１６組み換えタンパク質特異的ＩｇＧ力価の結果を示すグラフである。実施例５３、比較例２８～２９のＨＥＲ２／ｎｅｕ＿Ｅ７５特異的マウス脾臓細胞中ＩＮＦγ産生細胞数の結果を示すグラフである。実施例５４、比較例３０のサバイビン２Ｂ特異的マウス脾臓細胞中ＩＮＦγ産生細胞数の結果を示すグラフである。実施例５５、比較例３１のＧＰＣ３特異的マウス脾臓細胞中ＩＮＦγ産生細胞数の結果を示すグラフである。実施例５６、比較例３２のＨＥＲ２／ｎｅｕ＿Ａ２４特異的マウス脾臓細胞中ＩＮＦγ産生細胞数の結果を示すグラフである。実施例５７、比較例３３のＭＡＧＥ３＿Ａ２４特異的マウス脾臓細胞中ＩＮＦγ産生細胞数の結果を示すグラフである。実施例５８、比較例３４のＩＰＥＰ８７特異的マウス脾臓細胞中ＩＮＦγ産生細胞数の結果を示すグラフである。実施例５９、比較例３５のＰＲ１特異的マウス脾臓細胞中ＩＮＦγ産生細胞数の結果を示すグラフである。実施例６０、比較例３６のＨＥＲ２／ｎｅｕ＿Ａ０２特異的マウス脾臓細胞中ＩＮＦγ産生細胞数の結果を示すグラフである。実施例６１、比較例３７のＭＡＧＥ３＿Ａ０２特異的マウス脾臓細胞中ＩＮＦγ産生細胞数の結果を示すグラフである。実施例６２、比較例３８のＨＢＶｅｎｖ特異的マウス脾臓細胞中ＩＮＦγ産生細胞数の結果を示すグラフである。実施例６３、比較例３９のＭＵＣ１特異的マウス脾臓細胞中ＩＮＦγ産生細胞数の結果を示すグラフである。

以下の実施例により本発明を具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。

（実施例１～４、比較例１～４）
各投与群は１０匹分として調製した。
インフルエンザワクチン抗原含有溶液（Ｂ／Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ／１／２０１０、阪大微生物病研究会製）（４４５μｇ／ｍＬ）と、Ｐａｎｔｏｅａ　ａｇｇｌｏｍｅｒａｎｓ由来リポポリサッカライド（自然免疫応用技研社製）溶液（５ｍｇ／ｍＬ）を、表１の各群の投与量となるように調製し、リン酸緩衝液（ナカライテスク社製）を加えて１０００μＬのワクチン組成物を調製した。例えば、実施例１ではインフルエンザワクチン抗原含有溶液を２２．５μＬ加え、Ｐａｎｔｏｅａ　ａｇｇｌｏｍｅｒａｎｓ由来リポポリサッカライド溶液を２０μＬ加えたのちにリン酸緩衝液を加えて総量１０００μＬとした。その他の実施例、比較例も適宜希釈し投与量に相当する含量となるように調製し、比較例４ではワクチン抗原やアジュバントを加えずに、リン酸緩衝液（ナカライテスク社製）のみをマウスに投与した。
マウス（メス８週齢ＢＡＬＢ／Ｃマウス、日本エスエルシー社）６匹に麻酔後、それぞれのマウスの皮下に調製したワクチン組成物を１００μＬ注射投与した。当該投与から１週間後、再度マウスに麻酔をかけ、それぞれのマウスに調製したワクチン組成物を１００μＬ皮下投与した。２度目の投与から更に１週間後に、マウスの血清を採取し、血清中インフルエンザＨＡ（Ｂ型）特異的ＩｇＧ力価をＥＬＩＳＡ法により測定を行った。なお、詳細な測定方法は後述する。
ここで、アジュバント量１００μｇの投与（比較例１）は、一回目の投与２４時間後にマウスの毛並の悪化、体重減少が見られ、安楽死処分したため、後の抗体価の測定は行っていない。アジュバントは、免疫を賦活させる物質であり、添加量が多いほど免疫が得られやすいことは明白であるが、過剰量を投与することは安全上の問題があり、マウスにおける１００μｇの投与は比較例１以降行っていない。
なお、詳細な測定方法は後述する。

（実施例５～８、比較例５～７）
インフルエンザワクチン抗原含有溶液をＢ／Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ／１／２０１０からＡ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／０７／２００９（Ｈ１Ｎ１、阪大微生物病研究会製）（８０１μｇ／ｍＬ）に変更した以外は基本的に実施例１～４、比較例１～４に準ずる操作で表２に相当するワクチン組成物を調製した。例えば実施例５ではインフルエンザワクチン抗原含有溶液を１２．５μＬとＰａｎｔｏｅａ　ａｇｇｌｏｍｅｒａｎｓ由来リポポリサッカライド溶液を２０μＬ加えたのちにリン酸緩衝液を加えて総量１０００μＬとした。
マウス（メス８週齢ＢＡＬＢ／Ｃマウス、日本エスエルシー社）６匹に麻酔後、それぞれのマウスに調製したワクチン組成物を１００μＬ皮下投与した。当該投与から１週間後、再度マウスに麻酔をかけ、それぞれのマウスに調製したワクチン組成物を１００μＬ皮下投与した。２度目の投与から更に１週間後に、マウスの血清を採取し、血清中インフルエンザＨＡ（Ｈ１Ｎ１）特異的ＩｇＧ力価をＥＬＩＳＡ法により測定を行った。なお、詳細な測定方法は後述する。

（実施例９、比較例８～１０）
肺炎球菌莢膜ポリサッカライド含有溶液（Ｐｎｅｕｍｏｖａｘ　ＮＰ、ＭＳＤ株式会社製）（１１５０μｇ／ｍＬ）と、実施例９ではＰａｎｔｏｅａ　ａｇｇｌｏｍｅｒａｎｓ由来リポポリサッカライド（自然免疫応用技研社製）溶液（５ｍｇ／ｍＬ）を、比較例８ではグルコピラノシルリピッド（ＭＰＬＡｓ、ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ社製）を用い、表３の各群の投与量となるように調製し、リン酸緩衝液（ナカライテスク社製）を加えて１０００μＬのワクチン組成物を調製した。例えば、実施例９では肺炎球菌莢膜ポリサッカライド含有溶液を８．７μＬとＰａｎｔｏｅａ　ａｇｇｌｏｍｅｒａｎｓ由来リポポリサッカライド溶液を２μＬ加えたのちにリン酸緩衝液を加えて総量１０００μＬとした。比較例９では肺炎球菌莢膜ポリサッカライド含有溶液のみを、比較例１０ではリン酸緩衝液（ナカライテスク社製）のみをマウスに投与した。
マウス（メス８週齢ＢＡＬＢ／Ｃマウス、日本エスエルシー社）６匹に麻酔後、それぞれのマウスに調製したワクチン組成物を１００μＬ皮下投与した。当該投与から１週間後、再度マウスに麻酔をかけ、それぞれのマウスに調製したワクチン組成物を１００μＬ皮下投与した。２度目の投与から更に１週間後に、マウスの血清を採取し、血清中肺炎球菌特異的ＩｇＧ力価をＥＬＩＳＡ法により測定を行った。なお、詳細な測定方法は後述する。

（実施例１０、比較例１１～１３）
ＨＰＶ１６組み換えタンパク質含有溶液（ＨＰＶ１６、ＰＲＯＳＰＥＣ社製）（８２０μｇ／ｍＬ）と、実施例１０ではＰａｎｔｏｅａ　ａｇｇｌｏｍｅｒａｎｓ由来リポポリサッカライド（自然免疫応用技研社製）溶液（５ｍｇ／ｍＬ）を、比較例１１ではグルコピラノシルリピッド（ＭＰＬＡｓ、ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ社製）を用い、表４の各群の投与量となるように調製し、リン酸緩衝液（ナカライテスク社製）を加えて１０００μＬのワクチン組成物を調製した。例えば実施例１０ではＨＰＶ１６組み換えタンパク質含有溶液を１２．２μＬとＰａｎｔｏｅａ　ａｇｇｌｏｍｅｒａｎｓ由来リポポリサッカライド溶液を２μＬ加えたのちにリン酸緩衝液を加えて総量１０００μＬとした。比較例１２ではＨＰＶ１６組み換えタンパク質含有溶液のみを、比較例１３ではリン酸緩衝液（ナカライテスク社製）のみをマウスに投与した。
マウス（メス８週齢ＢＡＬＢ／Ｃマウス、日本エスエルシー社）６匹に麻酔後、それぞれのマウスに調製したワクチン組成物を１００μＬ皮下投与した。当該投与から１週間後、再度マウスに麻酔をかけ、それぞれのマウスに調製したワクチン組成物を１００μＬ皮下投与した。２度目の投与から更に１週間後に、マウスの血清を採取し、血清中ＨＰＶ１６組み換えタンパク質特異的ＩｇＧ力価をＥＬＩＳＡ法により測定を行った。なお、詳細な測定方法は後述する。

（実施例１１～１３、比較例１４）
弱毒生ロタウイルス含有溶液（ロタテック内用液、ＭＳＤ社製）２００μＬと、Ｐａｎｔｏｅａ　ａｇｇｌｏｍｅｒａｎｓ由来リポポリサッカライド（ナカライテスク社製）溶液を実施例１１では５０μＬ（２ｍｇ／ｍＬ）、実施例１２では５μＬ、実施例１３では０．５μＬ、比較例１４ではグルコピラノシルリピッド（ＭＰＬＡｓ、ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ社製）溶液（２ｍｇ／ｍＬ）を５μＬ添加し、リン酸緩衝液（ナカライテスク社製）を加えて１０００μＬのワクチン組成物を調製した。
マウス（メス８週齢ＢＡＬＢ／Ｃマウス、日本エスエルシー社）６匹に麻酔後、それぞれのマウスの皮下に調製したワクチン組成物を１００μＬ投与する。当該投与から１週間後、再度マウスに麻酔をかけ、それぞれのマウスの皮下に調製したワクチン組成物１００μＬを投与する。２度目の投与から更に１週間後に、マウスの血清を採取し、血清中抗原特異的ＩｇＧ力価の測定をＥＬＩＳＡ法により行う。

（実施例１４～５２、比較例１５～２７）
実施例１４～１６、比較例１５では不活化ポリオウイルス含有溶液（イモバックスポリオ皮下注、サノフィ社製）、実施例１７～１９、比較例１６では不活化Ａ型肝炎ウイルス含有溶液（エイムゲン、化学及血清療法研究所社製）、実施例２０～２２、比較例１７では不活化日本脳炎ウイルス含有溶液（エンセバック皮下注用、化学及血清療法研究所社製）、実施例２３～２５、比較例１８では弱毒生ムンプスウイルス含有溶液（おたふくかぜ生ワクチン、北里第一三共ワクチン社製）、実施例２６～２８、比較例１９では弱毒生麻疹ウイルス含有溶液（はしか生ワクチン、北里第一三共ワクチン社製）、実施例２９～３１、比較例２０では弱毒生風疹ウイルス含有溶液（乾燥弱毒生風しんワクチン、北里第一三共ワクチン社製）、実施例３２～３４、比較例２１では破傷風トキソイド結合インフルエンザ菌ｂ型多糖含有溶液（アクトヒブ、サノフィ社製）、実施例３５～３７、比較例２２では組換えＨＢｓ抗原タンパク質含有溶液（ビームゲン、化学及血清療法研究所社製）、実施例３８～４０、比較例２３では弱毒生黄熱ウイルス含有溶液（黄熱ワクチン、サノフィ社製）、実施例４１～４３、比較例２４では破傷風トキソイド含有溶液（破傷風トキソイド、デンカ生研社製）、実施例４４～４６、比較例２５では弱毒生水痘ウイルス含有溶液（乾燥弱毒生水痘ワクチン、阪大微生物病研究会社製）を用い、実施例４７～４９、比較例２６では生ＢＣＧ含有溶液（乾燥ＢＣＧワクチン、日本ビーシージー製造社製）を用い、実施例５０～５２、比較例２７では不活化狂犬病ウイルス含有溶液（組織培養不活化狂犬病ワクチン、化学及血清療法研究所社製）を用い、表５の各群の投与量となるようにした以外は、実施例１１～１３、比較例１４と同様にワクチン組成物を調製した。また実施例１１～１３、比較例１４と同様の手法で免疫実験を行う。

（マウス免疫実験）
８週齢、メス、ＢＡＬＢ／ｃマウスについて２回、一週間間隔にて投与を行った。最終投与より一週間後、マウス血液及び鼻腔洗浄液を採取した。血液は４℃下３０００Ｇで１０分間遠心し、上清２０μＬにリン酸緩衝液（ナカライテスク社製）３００μＬを加えて血清サンプルとした。
マウス血清中の抗原特異的ＩｇＧ力価等を測定することにより、全身性免疫応答を評価した。評価法に関しては次に示す。
また、それぞれの評価結果を図１～４に示した。

（マウス血清中抗原特異的ＩｇＧ力価測定方法（ＥＬＩＳＡ法））
ＥＬＩＳＡ用９６ウェルプレートに炭酸緩衝液にて希釈した各抗原（例えば肺炎球菌莢膜ポリサッカライド特異的ＩｇＧ抗体価を測定する時には肺炎球菌莢膜ポリサッカライド抗原溶液）（２．５μｇ／ｍＬ）を１００μＬずつ添加し、一晩放置した。
予め準備したＴｗｅｅｎ２０含有ＰＢＳ（以下洗浄液）で３回ウェルを洗浄し、ブロッキング剤（Ｂｌｏｃｋ　Ａｃｅ、ＤＳファーマバイオメディカル社製）を精製水で４ｇ／４００ｍＬに希釈したブロッキング溶液を２００μＬずつ添加し、２時間室温で放置した。その後、洗浄液で３回ウェルを洗浄した。
ブロッキング剤（Ｂｌｏｃｋ　Ａｃｅ、ＤＳファーマバイオメディカル社製）をリン酸緩衝液（ナカライテスク社製）で０．４ｇ／１００ｍＬに希釈した溶液（以下試薬希釈液）を用いて、前述の血清サンプルを１／２倍ずつ１５回段階希釈し、その溶液をそれぞれ５０μＬずつ添加し、２時間室温で放置した。
その後、洗浄液で３回ウェルを洗浄し、試薬希釈液でＨＲＰ標識抗マウスＩｇＧ抗体（Ｇｏａｔ－ａｎｔｉ－ｍｏｕｓｅ　ＩｇＧ　Ｆｃ　ＨＲＰ、ＢＥＴＨＹＬ社製）を１００００倍に希釈したものを、１００μＬずつ添加し、１時間室温で放置した。
その後、洗浄液で３回ウェルを洗浄し、ＴＭＢ溶液（ＥＬＩＳＡ　ＰＯＤ　ＴＭＢキット、ナカライテスク社製）を１００μＬずつ加えた。ここに１Ｍ硫酸溶液を１００μＬずつ加え、当該９６ウェルプレートをマイクロプレートリーダー（１６８－１１１３５ＣＡＭ、バイオラッド社製）で４５０ｎｍの吸光度を測定した。段階希釈時の吸光度を基に、その吸光度が０．１を切らない最大の希釈倍率をマウス血清中ＩｇＧ力価とし、その値をＬｏｇ２の値で求めた。

（実施例５３、比較例２８～２９）
下記表６の投与量となるようにエマルジョン注射剤を配合、調製した。すなわち、必要量のＨＥＲ２／ｎｅｕ＿Ｅ７５ペプチド（化学合成品）を秤量した後、必要量のＰａｎｔｏｅａ　ａｇｇｌｏｍｅｒａｎｓ由来リポポリサッカライド（自然免疫応用技研社製）溶液（２ｍｇ／ｍＬ）を加え、さらに生理食塩水（大塚製薬）とＭｏｎｔａｎｉｄｅ　ＩＳＡ５１ＶＧ（フロイント産業）を１：１の液量比で加えた後、ホモジナイザーにて混和してエマルジョン注射剤を調製した。各投与群は１０匹分として、１０００μＬ分を調製した。
例えば、実施例５３ではＨＥＲ２／ｎｅｕ＿Ｅ７５ペプチドを１ｍｇ秤量し、Ｐａｎｔｏｅａ　ａｇｇｌｏｍｅｒａｎｓ由来リポポリサッカライド溶液（２ｍｇ／ｍＬ）を５０μＬ加えたのちに生理食塩水（大塚製薬）４７５μＬとＭｏｎｔａｎｉｄｅ　ＩＳＡ５１ＶＧ（フロイント産業）４７５μＬを加え、ホモジナイザーにて混和してエマルジョン注射剤を調製した。比較例２８ではＨＥＲ２／ｎｅｕ＿Ｅ７５ペプチドを１ｍｇ秤量し、生理食塩水（大塚製薬）５００μＬとＭｏｎｔａｎｉｄｅ　ＩＳＡ５１ＶＧ（フロイント産業）５００μＬを加え、ホモジナイザーにて混和してエマルジョン注射剤を調製した。比較例２９では生理食塩水（大塚製薬）５００μＬとＭｏｎｔａｎｉｄｅ　ＩＳＡ５１ＶＧ（フロイント産業）５００μＬを加え、ホモジナイザーにて混和してエマルジョン注射剤を調製した。
これら投与サンプルをマウス（ＨＬＡ－Ａ^＊０２０１型ＭＨＣ拘束性ペプチドによる細胞性免疫誘導を評価可能な遺伝子改変マウス）に投与した。マウス６匹に麻酔後、それぞれのマウスの皮下に調製したエマルジョン注射剤を１００μＬ注射投与した、投与回数は１回である。抗原特異的な細胞性免疫の誘導レベルをＥＬＩＳＰＯＴ法にて評価した。具体的な実験操作はＥＬＩＳＰＯＴキット（Ｒ＆Ｄシステムズ社）の操作手順書に準ずるが、詳細には、投与から６日間経過後に脾臓を摘出し脾細胞懸濁液を調製した。抗マウスＩＦＮ－γ抗体を固定化したＥＬＩＳＰＯＴプレートのウェルに、脾細胞(３×１０^６ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌ)と抗原ペプチド（１００μＭ）とを培養液とともに入れ、３７℃、５％ＣＯ_２の培養条件にて２０時間、共培養し、ＩＦＮ－γ産生細胞スポット数を評価した。

（実施例５４～６３、比較例３０～３９）
実施例５４、比較例３０ではサバイビン２Ｂ（免疫評価用マウス：ＢＡＬＢ／ｃマウス）、実施例５５、比較例３１ではＧＰＣ３（免疫評価用マウス：ＢＡＬＢ／ｃマウス）、実施例５６、比較例３２ではＨＥＲ２／ｎｅｕ＿Ａ２４（免疫評価用マウス：ＢＡＬＢ／ｃマウス）、実施例５７、比較例３３ではＭＡＧＥ３＿Ａ２４（免疫評価用マウス：ＢＡＬＢ／ｃマウス）、実施例５８、比較例３４ではＩＰＥＰ８７（免疫評価用マウス：ＨＬＡ－Ａ^＊０２０１型ＭＨＣ拘束性ペプチドによる細胞性免疫誘導を評価可能な遺伝子改変マウス）、実施例５９、比較例３５ではＰＲ１（免疫評価用マウス：ＨＬＡ－Ａ^＊０２０１型ＭＨＣ拘束性ペプチドによる細胞性免疫誘導を評価可能な遺伝子改変マウス）、実施例６０、比較例３６ではＨＥＲ２／ｎｅｕ＿Ａ０２（免疫評価用マウス：ＨＬＡ－Ａ^＊０２０１型ＭＨＣ拘束性ペプチドによる細胞性免疫誘導を評価可能な遺伝子改変マウス）、実施例６１、比較例３７ではＭＡＧＥ３＿Ａ０２（免疫評価用マウス：ＨＬＡ－Ａ^＊０２０１型ＭＨＣ拘束性ペプチドによる細胞性免疫誘導を評価可能な遺伝子改変マウス）、実施例６２、比較例３８ではＨＢＶｅｎｖ（免疫評価用マウス：ＨＬＡ－Ａ^＊０２０１型ＭＨＣ拘束性ペプチドによる細胞性免疫誘導を評価可能な遺伝子改変マウス）、実施例６３、比較例３９ではＭＵＣ１（免疫評価用マウス：ＨＬＡ－Ａ^＊０２０１型ＭＨＣ拘束性ペプチドによる細胞性免疫誘導を評価可能な遺伝子改変マウス）を用いた。実施例５３及び比較例２８、２９と同様の実験操作により、表７の投与量となるように配合、調製し、免疫実験を行った。すなわち各エマルジョン注射剤を皮下投与し、投与６日後にＥＬＩＳＰＯＴ法により免疫を確認した。

図１～４に示したように、実施例では、液性免疫であるインフルエンザＨＡ特異的ＩｇＧが高レベルで産生していた。これに対し、比較例では、インフルエンザＨＡ特異的ＩｇＧの産生量が低かった。また図５～１５に示したように、実施例では抗原ペプチド特異的な免疫応答が上昇しており、細胞性免疫が効率よく誘導されていることがわかる。比較例では免疫の応答はあまり起こらなかった。
これらの結果から、抗原と免疫賦活化剤としての特定のグラム陰性細菌由来のリポポリサッカライド又はその塩との併用が、安全で、効果的な全身免疫誘導に有効であることが見出された。

本発明の注射ワクチン組成物は、少なくとも一種類の抗原とともに、上述した特定の免疫賦活化剤を併用するため、効果的に全身性免疫応答を誘導することができる。

Claims

ヒト又は動物に注射投与される注射ワクチン組成物であって、
少なくとも一種類の抗原と、免疫賦活化剤として、Ｓｅｒｒａｔｉａ、Ｌｅｃｌｅｒｃｉａ、Ｒａｈｎｅｌｌａ、Ａｃｉｄｉｃａｌｄｕｓ、Ａｃｉｄｉｐｈｉｌｉｕｍ、Ａｃｉｄｉｓｐｈａｅｒａ、Ａｃｉｄｏｃｅｌｌａ、Ａｃｉｄｏｍｏｎａｓ、Ａｓａｉａ、Ｂｅｌｎａｐｉａ、Ｃｒａｕｒｏｃｏｃｃｕｓ、Ｇｌｕｃｏｎａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ、Ｇｌｕｃｏｎｏｂａｃｔｅｒ、Ｋｏｚａｋｉａ、Ｌｅａｈｉｂａｃｔｅｒ、Ｍｕｒｉｃｏｃｃｕｓ、Ｎｅｏａｓａｉａ、Ｏｌｅｏｍｏｎａｓ、Ｐａｒａｃｒａｕｒｏｃｏｃｃｕｓ、Ｒｈｏｄｏｐｉｌａ、Ｒｏｓｅｏｃｏｃｃｕｓ、Ｒｕｂｒｉｔｅｐｉｄａ、Ｓａｃｃｈａｒｉｂａｃｔｅｒ、Ｓｔｅｌｌａ、Ｓｗａｍｉｎａｔｈａｎｉａ、Ｔｅｉｃｈｏｃｏｃｃｕｓ、Ｚａｖａｒｚｉｎｉａ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ、Ａｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｍｅｔｈａｎｏｃｕｌｌｅｕｓ、Ｍｅｔｈａｎｏｓａｒｃｉｎａ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ、Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ、Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｐａｎｔｏｅａ、Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ、Ｚｙｍｏｍｏｎａｓ、Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ、及び、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒからなる群より選択される少なくとも１種のグラム陰性細菌由来のリポポリサッカライド又はその塩を含む
ことを特徴とする注射ワクチン組成物。
免疫賦活化剤と抗原との質量比（免疫賦活化剤の総質量／抗原の総質量）が、０．００２～５０である請求項１記載の注射ワクチン組成物。
液性免疫を誘導するために用いられる請求項1又は２記載の注射ワクチン組成物。
抗原が、感染症由来抗原又は癌抗原である請求項１、２又は３記載の注射ワクチン組成物。