WO2016006548A1 - ＰＰＡＲγ活性化剤 - Google Patents

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芝英 安
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裕輔 山下
清佑 原田
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    • A23V2200/332—Promoters of weight control and weight loss

Definitions

  • the present invention relates to a lipid metabolism activator, an antidiabetic agent, or a PPAR ⁇ activator that can be used for prevention / amelioration of obesity and lifestyle-related diseases.
  • ⁇ ⁇ ( ⁇ ⁇ ) is a fermented food produced mainly by fermenting glutinous rice and aging for a long time, and has been used as a vinegar seasoning in China for a long time.
  • Kaoru has a higher content of organic compounds such as amino acids than rice vinegar, which is a vinegar commonly used in Japan, and in recent years it is also gaining popularity in Japan as a health food useful for maintaining and promoting health.
  • Patent Document 1 a peroxisome proliferator-responsive receptor ⁇ -activator and ⁇ -activator that contain a lower alkanol extract of perfume as an active ingredient.
  • PPAR peroxisome proliferator-activated receptor
  • the PPAR activator disclosed in Patent Document 1 is an extract obtained by extracting perfume with a lower alkanol, and the confirmation of the effect of this extract on the PPAR ⁇ activation action is generally in vivo.
  • the PPAR ⁇ activation is carried out when the lower alkanol extract of perfume is added to the cell culture medium at a high rate of 1.0% (ie, 10000 ppm). It has been confirmed that the effect is seen. Therefore, when using this lower alkanol extract of fragrance as a PPAR ⁇ activator, it is necessary to add or ingest a large amount thereof.
  • the lower alkanol extract of perfume disclosed in Patent Document 1 is a mixture containing a plurality of components, and it is not shown what the active ingredient is specifically as a PPAR activator.
  • an object of the present invention is to specify an active ingredient having an excellent PPAR activating action contained in a koji, and to provide a PPAR activator containing the active ingredient.
  • the present inventors performed various fractionation treatments on incense, and as a result of examining the obtained fractions, discovered a butenolide compound having an excellent PPAR activation action. That is, the PPAR ⁇ activator of the present invention contains a butenolide compound represented by the formula (1) or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
  • R 1 is a hydrogen atom, a phosphate group, a fatty acid group, an optionally substituted alkyl group having 1 to 4 carbon atoms or a sugar residue optionally having a substituent.
  • R 2 is phenyl, methylphenyl, dimethylphenyl, ethylphenyl, benzyl, methylbenzyl, dimethylbenzyl, ethylbenzyl, phenethyl, methylphenethyl, dimethylphenethyl or ethylphenethyl. Indicates. ]
  • This butenolide compound has PPAR ⁇ ligand activity and has an action of activating PPAR ⁇ .
  • this butenolide compound has an action of converting white fat cells into brown fat cells and activating lipid metabolism.
  • this butenolide compound is involved in PPAR ⁇ such as diabetes, insulin resistance, hyperlipidemia, hypertension, arteriosclerosis, visceral fat obesity, subcutaneous fat accumulation, weight gain, leptin resistance, fatty liver or lifestyle-related diseases It is effective for prevention, improvement or treatment of a disease state, symptom or disease.
  • R 1 is a hydrogen residue, a phosphate group or a sugar residue which may have a substituent
  • R 2 is a phenyl group
  • a 4-methylphenyl group, a benzyl group or a 4-methylbenzyl group is preferred.
  • the medicament of the present invention is selected from the group consisting of diabetes, insulin resistance, obesity, weight gain, visceral fat accumulation, subcutaneous fat accumulation, leptin resistance, lipid metabolism abnormality, hyperlipidemia, arteriosclerosis and metabolic syndrome.
  • the suitable use of the PPAR (gamma) activator which consists of a butenolide compound mentioned above is selected.
  • the supplement of the present invention is from the group consisting of diabetes, insulin resistance, obesity, weight gain, visceral fat accumulation, subcutaneous fat accumulation, leptin resistance, lipid metabolism abnormality, hyperlipidemia, arteriosclerosis and metabolic syndrome.
  • the suitable use of the PPAR (gamma) activator which consists of a butenolide compound mentioned above is selected.
  • composition for treatment, prevention, suppression or amelioration of a disease state, symptom or disease involving PPAR ⁇ of the present invention contains a butenolide compound represented by formula (2) or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient. To do.
  • R 1 is a hydrogen atom, a phosphate group, a fatty acid group, an optionally substituted alkyl group having 1 to 4 carbon atoms, or a sugar residue optionally having a substituent.
  • R 2 is phenyl, methylphenyl, dimethylphenyl, ethylphenyl, benzyl, methylbenzyl, dimethylbenzyl, ethylbenzyl, phenethyl, methylphenethyl, dimethylphenethyl or ethylphenethyl. Indicates. ]
  • PPAR ⁇ is a factor mainly involved in sugar / lipid metabolism, metabolic syndrome, metabolic disease, weight gain, visceral fat accumulation, subcutaneous fat accumulation, obesity, diabetes, insulin resistance, hypertension, arteriosclerosis, hyperlipidemia Involved in proliferative diseases such as inflammatory diseases, inflammatory diseases and malignant tumors.
  • the above-mentioned butenolide compound has PPAR ⁇ ligand activity and has an action of activating PPAR ⁇ , and therefore is effectively used for prevention, improvement, suppression or treatment of a disease state, symptom or disease involving PPAR ⁇ .
  • the pathological condition, symptom or disease related to PPAR ⁇ includes diabetes, insulin resistance, obesity, weight gain, visceral fat accumulation, subcutaneous fat accumulation, leptin resistance, lipid metabolism abnormality, hyperlipidemia, arteriosclerosis and It is preferably one or more disease states, symptoms or diseases selected from the group consisting of metabolic syndrome. Thereby, the especially suitable use of the butenolide compound mentioned above is selected.
  • This butenolide compound transforms white adipocytes into brown adipocytes, promotes heat production using lipids and activates lipid metabolism, suppresses weight gain, suppresses visceral fat accumulation, and accumulates subcutaneous fat It has an inhibitory action, an adiponectin enhancing action, an insulin secretion inhibitory action, a leptin secretion inhibitory action, and the like. Therefore, it is possible to treat, prevent, suppress or ameliorate the pathological condition, symptom or disease associated with these PPAR ⁇ .
  • a butenolide compound having a high PPAR ⁇ activation action can be obtained.
  • This butenolide compound has the effect of activating lipid metabolism by converting white adipocytes into brown adipocytes, as well as weight gain inhibitory action, visceral fat accumulation inhibitory action, adiponectin enhancing action, insulin secretion inhibitory action and leptin secretion inhibitory action Etc. Therefore, pathological conditions, symptoms or diseases involving PPAR ⁇ such as insulin resistance, diabetes, weight gain, obesity, hyperlipidemia, hypertension, arteriosclerosis, visceral fat accumulation, subcutaneous fat accumulation, fatty liver or metabolic syndrome Can be used to treat, prevent, suppress or ameliorate. In this way, a butenolide compound that is useful for prevention or improvement of the above-mentioned pathological conditions and can be widely applied to foods, supplements, drugs, and the like can be obtained.
  • FIG. 2 is a flowchart schematically illustrating a method for adjusting a normal phase column fraction from incense in Example 1.
  • FIG. 2 is a graph showing PPAR ⁇ ligand activity of normal phase column fractions in Example 1.
  • FIG. 4 is a flowchart schematically illustrating a method for preparing a reverse phase column fraction in Example 2.
  • a chromatogram showing the results of HPLC analysis of the reverse-phase column fraction (fr. 1 to 5) obtained in Example 2 and the normal-phase column fraction obtained in Example 1 (fr. 1 before fractionation).
  • the horizontal axis indicates the retention time (minutes).
  • 2 is a graph showing the PPAR ⁇ ligand activity of the reverse phase column fraction in Example 2.
  • FIG. 6 is a graph showing the PPAR ⁇ ligand activity of the peak fraction in Example 3. It is a chromatogram which shows the result of the HPLC analysis of the peak 5 among the peak fractions obtained in Example 3.
  • the vertical axis represents the detection intensity, and the horizontal axis represents the retention time (minutes).
  • FIG. 3 is a graph showing the PPAR ⁇ ligand activity of fraction 5 of the peak 5 fraction and the reverse phase column fraction obtained in Example 2 in Example 3.
  • FIG. 4 is a chart showing LC / MS results of a fraction with a peak 5 in Example 4.
  • the vertical axis represents the detected intensity, and the horizontal axis represents the m / z value.
  • 6 is a graph showing the results of UCP-1 gene expression levels in Example 5.
  • 6 is a graph showing PPAR ⁇ ligand activity of a 5-hydroxy-4-phenylbutenolide synthesized product in Example 7.
  • 6 is a graph showing PPAR ⁇ ligand activity of a butenolide compound in Example 8.
  • 6 is a graph showing the effect of inhibiting body weight gain of mice by administration of 5-hydroxy-4-phenylbutenolide in Example 9.
  • 10 is a graph showing the amount of adiponectin contained in mouse blood in Example 10.
  • 10 is a graph showing the amount of insulin contained in mouse blood in Example 11.
  • 10 is a graph showing the amount of leptin contained in mouse blood in Example 12.
  • 10 is a graph showing the effect of inhibiting the accumulation of subcutaneous fat and visceral fat in mice by administration of 5-hydroxy-4-phenylbutenolide in Example 13.
  • the PPAR ⁇ activator of the present invention contains a butenolide compound represented by the above formula (1) as an active ingredient.
  • the atom represented by R 1 is preferably a hydrogen atom, and the molecule is a phosphate group, a fatty acid group, an optionally substituted alkyl group having 1 to 4 carbon atoms or a substituted group. Examples thereof include sugar residues that may have a group.
  • the fatty acid group include lauric acid, myristic acid, palmitic acid, margaric acid, and stearic acid.
  • alkyl group having 1 to 4 carbon atoms examples include a methyl group, an ethyl group, various propyl groups, and various butyl groups.
  • glycosides based on phosphate groups and sugar residues are preferable from the viewpoint of stability outside the body and absorbability in the body, and the sugar is not particularly limited, but various glucose, various galactose, various mannose, and the like In particular, glucose is used as a sugar forming a suitable glycoside.
  • R 2 is phenyl, methylphenyl, dimethylphenyl, ethylphenyl, benzyl, methylbenzyl, dimethylbenzyl, ethylbenzyl, phenethyl, methylphenethyl, dimethylphenethyl or ethylphenethyl.
  • a phenyl group, a 4-methylphenyl group, a benzyl group, or a 4-methylbenzyl group is preferably used.
  • particularly preferable compounds from the viewpoint of pharmacological activity include 5-hydroxy-4-phenylbutenolide represented by the following formula (3) and 5-hydroxy represented by the following formula (4).
  • 5-hydroxy-4- (4-methylphenyl) butenolide 5-hydroxy-4- (4-methylbenzyl) butenolide and 5-hydroxy-4-benzylbutenolide can be mentioned.
  • PPAR ⁇ Particularly preferred as activator is 5-hydroxy-4-phenylbutenolide or 5-hydroxy-4- (4-methylphenyl) butenolide, which has been found in incense.
  • the butenolide compound represented by the formula (3) can be obtained by extraction from a perfume that is a fermented food.
  • a method for obtaining this butenolide compound from incense it is not particularly limited.
  • incense (step for preparing) S0 and a lipid component contained in incense A degreasing treatment step S1 to be removed, a solvent extraction treatment step S2 for extracting a target component using a solvent, a fractionation step S3 by normal phase chromatography, and a fractionation step S4 by reverse phase chromatography.
  • This incense S0 is obtained by adding rice bran to fermented rice and subjecting it to alcohol fermentation, adding rice husk and acetic acid fermentation, extracting by adding water, and aging the extract for a certain period.
  • the degreasing treatment S1 shown in FIG. 1 is performed for the purpose of removing excess lipid components contained in the incense S0. Since the extra lipid component contained in the fragrance is removed by performing the degreasing process of the fragrance S0, the solvent extraction process S2 and the fractionation steps S3 and S4 to be performed later are represented by the formula (3). This makes it possible to effectively extract the butenolide compound. Specifically, although not particularly limited, after adding an organic solvent to the fragrance S0 and stirring well, the excess lipid component is transferred to the organic solvent phase, and then the aqueous phase and the organic solvent phase are used using a centrifuge or the like. And the aqueous phase can be recovered. This operation is preferably performed a plurality of times.
  • Any organic solvent may be used as long as it has a degreasing effect.
  • petroleum organic solvents and alcohols are preferably used, and n-hexane is particularly preferably used.
  • the amount of the organic solvent to be used is preferably about 10% to 1000% by weight of the fragrance, and most preferably about half to twice the amount of the fragrance.
  • a solvent is added to the degreased fragrance and the target butenolide compound is moved to the added solvent.
  • an organic solvent is preferably used, and is not particularly limited, but alkanol such as n-butanol or ethanol, ethyl acetate, butylene glycol, chloroform and the like can be used.
  • These solvent extraction processes S2 are not limited to a single process, and the extraction process with the same solvent can be performed a plurality of times, or a plurality of types of solvent extraction processes can be combined.
  • the extraction process when chloroform is used as the organic solvent will be described.
  • chloroform is added to the defatted fragrance, and the butenolide compound as the target component is efficiently transferred to the chloroform phase.
  • the cocoon and chloroform are distributed using a separatory funnel, and the chloroform phase is recovered. In this case, the distribution is preferably performed a plurality of times.
  • the amount of chloroform to be added is preferably about 10% to 1000% by weight of the aqueous phase (scent), and most preferably about half to twice the amount of the aqueous phase. From the recovered chloroform phase, the solvent can be easily removed by vacuum concentration treatment or the like, and a chloroform extract of solid or concentrated fragrance can be obtained.
  • fractionation step S3 by normal phase chromatography shown in FIG. 1 The purpose of this fractionation step S3 is to purify and separate the butenolide compound of the target component contained in the solvent extract obtained in step S2.
  • the fractionation process by normal phase silica gel column chromatography will be described. Specifically, although not particularly limited, it is carried out by placing silica gel on which a solvent extract is adsorbed on a chromatographic tube filled with silica gel, and flowing and eluting a predetermined mobile phase from the top.
  • the mobile phase is not particularly limited, but benzene-acetone is preferably used.
  • the mobile phase is preferably separated by eluting with a mobile phase having a benzene: acetone ratio of 40: 1 to 0: 1. Is possible.
  • a mobile phase having a benzene: acetone ratio of 40: 1 to 0: 1. Is possible.
  • the PPAR ⁇ activation test described below and the expression level of genes (UCP-1 gene etc.) involved in PPAR ⁇ The test etc. which measure can be performed.
  • fractionation step S4 by reverse phase chromatography shown in FIG. 1 The purpose of this fractionation step S4 is to further purify and isolate the butenolide compound of the target component contained in the normal phase column fraction obtained in step S3 and to substantially isolate it.
  • the fractionation process by reverse phase silica gel column chromatography will be described. Specifically, although not particularly limited, the column is filled with silica gel modified with an octadecylsilyl group (C 18 ), the fraction obtained in Step S3 is added to the column, and then a predetermined mobile phase is allowed to flow. By eluting.
  • the mobile phase is not particularly limited, but methanol-water is preferably used.
  • fractionation processes S3 and S4 described above are not limited to a single process, and the fractionation process with the same filler or different fillers is performed a plurality of times, or the fractionation process with the same mobile phase or different mobile phases. It is also possible to carry out in combination.
  • the butenolide compound represented by the formula (3) can be produced by a known synthesis method in addition to a method obtained by extraction and separation from fragrance.
  • phenylacetaldehyde and glyoxylic acid ester are subjected to aldol condensation to obtain 3-phenyl-4-oxo-2-hydroxy-butanoic acid ester, and then an acid is allowed to act in the presence of water (Japanese Patent Laid-Open No. 6-2111825).
  • the butenolide compound of the present invention can be produced by reacting phenylacetaldehyde and glyoxylic acid ester in the presence of morpholine hydrochloride (Japanese Patent Laid-Open No. 11-152280).
  • butenolide compounds represented by the formula (4) and the formula (1) can also be synthesized by a known synthesis method (J. Org. Chem., 1981, Vol. 46, pp. 4889-4894 and Tetrahedron Letters, 2013, Vol. 54, pp. 5322-5324, etc.).
  • the pharmacologically acceptable salt of the above butenolide compound is not particularly limited as long as it is a salt formed with an acid or a base.
  • the butenolide compound or a salt thereof may be an organic solvate such as a hydrate or alcohol, or may be an anhydride.
  • various isomers, racemates, or mixtures thereof are also included.
  • the butenolide compound or a salt thereof may be a prodrug that exhibits an effect due to a metabolic action of a living body, such as a functional group included in the molecular structure being modified.
  • the butenolide compound represented by the formula (1) has an action of activating PPAR ⁇ .
  • the PPAR ⁇ activator refers to a substance that can activate PPAR ⁇ by binding to PPAR ⁇ and adjust the expression of a target gene.
  • target genes for PPAR ⁇ include adiponectin, UCP-1, fatty acid binding protein, aP2 and the like.
  • PPAR ⁇ ligand activity and PPAR ⁇ agonist activity are synonymous.
  • the PPAR ⁇ activator of the present invention can be used for the treatment, prevention, suppression or improvement of a disease state, symptom or disease involving PPAR ⁇ .
  • the treatment and improvement of the disease state here include prevention and prognosis treatment for these diseases and disease states.
  • Diseases involving PPAR ⁇ widely include those involved in adipocyte differentiation and metabolism, particularly insulin resistance, diabetes, hyperlipidemia, hypertension, visceral fat type obesity, visceral fat accumulation, subcutaneous fat accumulation, fat Liver, weight gain, obesity, leptin resistance, arteriosclerosis, inflammatory diseases, malignant tumors or metabolic syndrome or diseases related thereto.
  • the PPAR ⁇ activator of the present invention is used for treatment or improvement for one or more of these diseases, suppression or prevention of symptoms or disease states, and the like.
  • the butenolide compound of the present invention has an action of converting white fat cells that accumulate fat into brown fat cells that burn fat, and therefore can be used as a lipid metabolism activator.
  • the mechanism of action as a lipid metabolism activator is not limited to the above-described conversion of white adipocytes into brown adipocytes.
  • the compound of the present invention has a PPAR ⁇ activation action and transcription of a target gene of PPAR ⁇ . It is also related to the increase of.
  • the butenolide compound represented by the formula (1) has a PPAR ⁇ activation action, it is an antidiabetic agent, an insulin resistance therapeutic agent, an antiobesity agent, a weight gain inhibitor, a visceral fat accumulation inhibitor, a subcutaneous agent It can be used as a fat accumulation inhibitor, a leptin-resistant therapeutic agent, a lipid metabolism disorder therapeutic agent, an antihyperlipidemic agent, an arteriosclerosis therapeutic agent and a metabolic syndrome inhibitor.
  • the PPAR ⁇ activator or the like of the present invention contains the butenolide compound represented by the above formula (1) as an active ingredient, and can be used as pharmaceuticals, quasi drugs and foods for humans or animals.
  • the food includes supplements, health foods, functional foods, foods for specified health use, and the like.
  • the PPAR ⁇ activator of the present invention When used as a medicine or quasi drug, it can be prepared in various forms by conventionally used methods.
  • pharmacologically acceptable carriers and excipients for normal formulations lubricants, dispersants, disintegrants, buffers, solvents, extenders, preservatives, fragrances, stabilizers, etc. It can be formulated using an additive that is acceptable as an additive.
  • a drug delivery system including a preparation technology such as microcapsule, liposome preparation, micropowder formation or inclusion using cyclodextrin or the like. it can.
  • the PPAR ⁇ activator of the present invention when used as a preparation for oral administration, it can be used in the form of tablets, granules, capsules or liquids for internal use, but it is used in a form suitable for absorption from the digestive tract. It is preferable.
  • the conventional formulation technique can also be used when providing a formulation in a desired form for reasons such as distribution and storage.
  • a parenteral agent such as an external preparation
  • it can be in the form of a transdermal agent such as an injection, a suppository, a tape, and a poultice.
  • the solid preparation can be used after being dissolved in an appropriate solvent at the time of use for reasons such as distribution and storage, and can be provided in the form of a liquid or a semi-solid preparation by conventional preparation techniques.
  • the PPAR ⁇ activator of the present invention when used as a food, supplement forms such as tablets, capsules, granules, syrups, soups, strawberries, beverages, noodles, jelly, cereals, breads, dairy products, Examples include seasonings, edible oils, and confectionery. It can also be used as animal food (feed, pet food; dry type, wet type, animal supplement, animal beverage, etc.). When used as a food, it is also possible to add various ingredients such as extracts derived from incense, and nutrients such as vitamins, minerals or amino acids.
  • the dose or effective intake of the PPAR ⁇ activator of the present invention varies depending on the target therapeutic effect, administration method, administration subject and dosage form, but is not particularly limited.
  • the active ingredient is about 0.01 ⁇ g / 60 kg body weight to about 300 mg / 60 kg body weight, preferably 0.05 ⁇ g / 60 kg body weight to about 100 mg / 60 kg body weight, which is administered in 1 to 3 divided doses. Is preferred.
  • the daily parenteral dose is about 0.01 ⁇ g / 60 kg body weight to 100 mg / 60 kg body weight as an active ingredient, preferably about 0.03 ⁇ g / 60 kg body weight to 50 mg / 60 kg body weight.
  • the measuring method of the PPAR activation test in the following examples is as follows.
  • (1) PPAR ⁇ activation test (1-1) Preparation A plasmid pM-PPAR ⁇ expressing a chimeric protein comprising a human-derived PPAR ⁇ ligand-binding domain and a yeast-derived GAL4 transcription factor DNA-binding domain, and expression by this chimeric protein P4 ⁇ UASg-tk-luc, a plasmid in which a luciferase structural gene derived from a sea firefly was ligated downstream of a GAL4 responsive element, designed so that is controlled.
  • a Renilla-derived luciferase expression plasmid pRL-CMV having a viral expression promoter that is constitutively expressed in cells was prepared.
  • a medium for CV-1 cells derived from African green monkey kidney
  • 10% FBS / DMEM was used, and CV-1 cells were seeded to a size of 4.5 ⁇ 10 5 cells in a 100 mm petri dish at 37 ° C., 5% Cultivation was performed in an incubator in a CO 2 environment.
  • luciferase activity was measured using Dual-Luciferase (registered trademark) Reporter Assay System (Promega). The culture solution was removed from the 96-well plate, the cells were washed with PBS ( ⁇ ), and water was removed with a paper towel. 30 mL of cell lysate (Passive Lysis Buffer) was added, and the 96-well plate was shaken for 15 minutes. 10 mL of the cell extract was transferred to a 96-well lumino plate. 70 mL of luminescent substrate solution was added, and the luminescence intensity by luciferase was measured using a luminometer (Micro Lumat Plus, manufactured by Bertoled Japan Co., Ltd.) at a measurement time of 10 seconds.
  • a luminometer Micro Lumat Plus, manufactured by Bertoled Japan Co., Ltd.
  • the PPAR ⁇ activation action of the test sample was evaluated by the ratio (%) to the control.
  • a value (A / B) obtained by dividing the measured Renilla luciferase activity value (A) by the measured Renilla luciferase activity value (B) was obtained.
  • the average value of the A / B values of the control group was calculated, and this average value was taken as 100.
  • the A / B value of the test sample was calculated, and the ratio (%) to the average value of the control was defined as the PPAR ⁇ activation ability of the test sample.
  • Example 1 Preparation of normal phase column fraction and activity measurement
  • seven normal phase column fractions were prepared from Kogo.
  • each process of the fractionation flow will be described in detail.
  • acetone 20: 1, 10: 1, 5: 1, 3: 1, 2: 1, 1: 1 and 100% acetone, and the fractions eluted for each solvent. And collected as normal phase column fractions (fractions 1-7). Each collected fraction was concentrated under reduced pressure to remove the solvent, and the solid weight of the obtained fraction was measured. A part of the obtained fraction was dissolved in an appropriate amount of dimethyl sulfoxide (DMSO, manufactured by Nacalai Tesque, Inc.) so that the final concentration in the PPAR ⁇ ligand activity measurement was 1000 times or more.
  • DMSO dimethyl sulfoxide
  • Example 2 Preparation and activity measurement of reversed-phase column fraction
  • Reversed phase ODS column treatment As shown in the fractionation flow of FIG. 4, the normal phase column fraction of fraction 1 in which the PPAR ⁇ activation action obtained in Example 1 was observed was further subjected to reverse phase chromatography. Five reverse phase column fractions were prepared. Reverse phase chromatography was performed as follows. 50 g of ODS silica gel (YMC * GEL ODS-A 6 nm S-150 ⁇ m; product of YMC Co.) was suspended in methanol as a filler in a glass chromatograph tube (chromat tube length 40 cm, diameter 2.2 cm, capacity 152 mL). Filled.
  • ODS silica gel YMC * GEL ODS-A 6 nm S-150 ⁇ m; product of YMC Co.
  • the obtained reverse phase column fraction was concentrated under reduced pressure to remove the solvent, and a part of the obtained fraction was dissolved in an appropriate amount of dimethyl sulfoxide.
  • the collected fraction was subjected to high performance liquid chromatography (column used: YMC-Pack ODS-A 250 ⁇ 4.6 mm ID S-5 ⁇ m 30 nm, mobile phase: methanol 20% aqueous solution-methanol 70% aqueous solution, flow rate: 1 mL. / Min, column temperature: 40 ° C., detection condition UV: 280 nm), and the separation state was confirmed.
  • the HPLC results of each fraction are shown in FIG.
  • the horizontal axis in FIG. 5 indicates the retention time (minutes).
  • Example 2 Activity measurement of reversed-phase column fractions
  • the reversed-phase column fractions obtained in Example 2 fractions 1 to 5 and the normal-phase column fraction obtained in Example 1 were collected as test samples.
  • a PPAR ⁇ activation test was performed, and the PPAR ⁇ ligand activity of each fraction was evaluated.
  • the final concentration of each fraction was 100 ⁇ g / mL.
  • a PPAR ⁇ activation test was also conducted for troglitazone (Tro), which is a PPAR ⁇ agonist.
  • the final concentration of troglitazone was 1 ⁇ M.
  • PPAR ⁇ ligand activity is shown in FIG.
  • shaft of these figures is a ratio of the activity of the fraction with respect to the activity of a control substance (DMSO).
  • DMSO control substance
  • Fractions were obtained by reversed-phase high performance liquid chromatography (column used: YMC-Pack ODS-A 250 ⁇ 4.6 mm ID S-5 ⁇ m 30 nm, mobile phase: methanol 20% aqueous solution-methanol 70% aqueous solution, flow rate: 1 mL / Minute, column temperature: 40 ° C., detection condition UV: 280 nm).
  • a PPAR ⁇ activation test was performed on the fraction of peak 5 obtained in Example 3, fraction 5 of the reverse phase column fraction obtained in Example 2 and troglitazone, and the PPAR ⁇ ligand activity of each fraction was measured. evaluated.
  • the final concentration of the fraction in peak 5 is low; 50 ⁇ g / mL, and high; 100 ⁇ g / mL, and the final concentration of fraction 5 in the reverse phase column fraction is 25 ⁇ g / mL and 50 ⁇ g / mL, the final concentration of troglitazone The concentration was 10 ⁇ M.
  • FIG. 9 the PPAR ⁇ ligand activity of the fraction of peak 5 was observed to increase in a concentration-dependent manner.
  • Example 4 Structure determination of peak fraction
  • Structural analysis was performed on the fraction of peak 5 obtained in Example 3.
  • LC / MS, 1 H-NMR, 13 C-NMR, HMBC and HSQC were performed.
  • the results of LC / MS are shown in FIG.
  • the horizontal axis in FIG. 10 indicates the m / z value, and the vertical axis indicates the detection intensity. From FIG. 10, it was suggested that the fraction of peak 5 has a molecular weight of 176.1687 and the characteristic formula is C 10 H 8 O 3 .
  • the component contained in peak 5 is 5-hydroxy-4-phenylbutenolide (hereinafter referred to as “5H4PB”). Became clear.
  • 5H4PB 5-hydroxy-4-phenylbutenolide
  • Mitochondrial uncoupling protein has a function of uncoupling oxidative phosphorylation in the inner mitochondrial membrane and consuming energy as heat. Among them, UCP-1 is specifically expressed in brown adipocytes that produce heat by burning fat. Recently, it has been reported that a specific PPAR ⁇ synthetic agonist changes white fat cells that store fat like brown fat cells that burn fat (H. Ohno et al, Cell metabolism, 2012, Vol. 15, pp.395-404).
  • the test was conducted as follows.
  • the mesenchymal cell line 10T1 / 2 was seeded on a 12-well plate at 1 ⁇ 10 4 cells / mL. After culturing until the cells were confluent, the peak 5 fraction (5H4PB) was added to a final concentration of 100 ⁇ g / mL. Further, DMSO was used as the control substance. 24 hours after the sample addition, mRNA was recovered from the cells and the amount of mRNA was quantified. mRNA quantification was performed using a light cycler (registered trademark, Roche Applied Science). The results are shown in FIG. The vertical axis of the figure is the ratio of the UCP-1 expression level of the fraction of peak 5 to the UCP-1 expression level of the control substance (DMSO).
  • the peak 5 fraction was found to have an action of increasing the expression level of UCP-1.
  • An increase in the expression level of UCP-1 represents an increase in heat production from lipids. From this result, it was found that the fraction of peak 5, that is, 5H4PB, contributes to the improvement and promotion of lipid metabolism through the activation of UCP-1.
  • 5H4PB was synthesized.
  • the synthesis was performed as follows. 100 mg of glyoxylic acid monohydrate and 150 mg of morpholine were dispersed in 450 ⁇ L of 1,4-dioxane, and 55 ⁇ L of water was added dropwise. After adding 140 mg of phenylacetaldehyde and allowing to stand at room temperature for 1 hour, the mixture was heated to reflux for 24 hours. The product was concentrated under reduced pressure and extracted with 2.5 mL of diethyl ether.
  • the extracted diethyl ether layer was dried over anhydrous magnesium sulfate and then concentrated again under reduced pressure.
  • the concentrate was dissolved in an acetone / chloroform mixed solution, and 140 mg of 5H4PB was obtained by recrystallization.
  • the obtained synthetic 5H4PB was subjected to liquid chromatography / mass spectrometry (LC / MS), and confirmed to be the same as 5H4PB obtained by extraction from incense (fraction of peak 5 obtained in Example 3). did.
  • Example 7 Activity measurement of synthetic product
  • a PPAR ⁇ activation test was conducted using the 5H4PB synthetic product obtained in Example 6 as a test sample.
  • the final concentration of synthetic 5H4PB was 3.5 ⁇ M.
  • the results are shown in FIG.
  • the vertical axis of these figures represents the ratio of the activity of the synthesized product to the activity of the control substance (DMSO).
  • DMSO control substance
  • Example 8 Synthesis of various butenolide compounds and measurement of activity of each synthesized product Various butenolide compounds including 5H4PB were chemically synthesized, and PPAR ⁇ ligand activity at various concentrations was measured.
  • 5H4PB and various butenolides were synthesized as follows. First, for 5H4PB represented by the above formula (3), 53 mL (0.6 mol) of morpholine and 120 mL of 1,4-dioxane were sequentially added to a 1 L 4-neck flask, and 62 mL of 50% aqueous glyoxylic acid solution was added while ice bathing.
  • the organic layer obtained was washed with saturated aqueous sodium hydrogen carbonate, dried over sodium sulfate, filtered and concentrated to obtain 101 g of a partially oily yellow solid.
  • 200 mL of ethyl acetate was added and dissolved, and alumina (basic) was added and stirred to perform batch processing. After removing the alumina by filtration, the filtrate was concentrated to obtain 96 g of a yellow solid (partially oil). This was dissolved in 0.5 volume of ethyl acetate, 1 volume of hexane was added and stirred, the precipitated solid was collected by filtration, and 30.2 g of milky white solid 5H4PB (yield 40%, GC purity 98). .6%).
  • subjected with * in Table 1 showed the activity of 2 times or more compared with control, and was p ⁇ 0.05 (there is a significant difference).
  • 5H4PB (R 2 : phenyl group) and 5-hydroxy-4- (4-methylphenyl) butenolide (R 2 : methylphenyl group) showed high activity in the range of 0.8 to 10 ⁇ g / mL
  • 5-hydroxy-4-benzylbutenolide (R 2 : benzyl group) shows high activity in the range of 2 to 4 ⁇ g / mL
  • Group) was found to exhibit high activity in the range of 4 to 20 ⁇ g / mL.
  • 5H4PB and 5-hydroxy-4- (4-methylphenyl) butenolide have high activity in a low concentration range, and in particular, 5-hydroxy-4- (4-methylphenyl) butenolide has the highest activity. Became clear.
  • Example 9 Verification of anti-obesity effect on diet-induced obesity model mice
  • 5H4PB obtained in Example 6 was administered to a mouse fed with a high fat diet, and its anti-obesity effect was verified.
  • 5-week-old male C57BL / 6J mice (source: Charles River Japan Co., Ltd.) in an environment with a temperature of 20-26 ° C, humidity of 35-75%, and illumination for 12 hours (7: 00-19: 00) A single animal was kept per cage under the conditions. After acclimatization for about one week, 6 to 8 animals were divided into 6 groups as shown in Table 2 below. Among the test groups, the normal group is fed with the normal solid feed CRF1 (Oriental Yeast Co., Ltd.
  • Solid feed D12492 (Research Diet product, 5.24 kcal / g) was fed. The feed was freely consumed, and the drinking water was also freely consumed from the water bottle.
  • the prescribed dose shown in Table 2 is 5H4PB (manufactured in Example 6) as the test substance or rosiglitazone (product of Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) as the positive control substance for the mice in each drug administration group.
  • rosiglitazone is a selective PPAR ⁇ ligand, and is a substance that binds to PPAR ⁇ and has an action of reducing the blood concentration of glucose, fatty acid, and insulin.
  • the body weight was measured once a week, and the dose to each individual was calculated.
  • 5H4PB and rosiglitazone are each suspended in a 0.5 w / v% aqueous solution of methylcellulose, diluted with the same aqueous solution, and adjusted so that the administration volume becomes 10 mL / kg. It was forcibly administered into the stomach. In addition, only 0.5 w / v% methylcellulose aqueous solution was administered to a normal group and a control group of mice at a dose of 10 mL / kg once a day for 12 weeks.
  • the body weight of each individual was measured at a frequency of once a week from the start of the test (administration), and the average value for each test group was determined. The results are shown in FIG.
  • the vertical axis in the figure represents the body weight (g) of the mouse, and the horizontal axis represents the number of days (day) from the start of the test.
  • the control group showed a significant increase in body weight compared to the normal group after 21 days from the start of the test.
  • the group which administered 5H4PB it was shown that the body weight increase by a high-calorie diet is suppressed compared with the control group.
  • 5H4PB is 0.037 ⁇ g / kg / kg of the weight gain of the control group (the value obtained by subtracting the weight of the normal group from the weight of the control group) at the end of the test (day 84).
  • the increase in body weight was suppressed by 25.8%
  • the test group administered with 0.01 mg / kg / day of 5H4PB the increase in body weight was suppressed by 27.8%.
  • 5H4PB was found to have a high anti-obesity effect.
  • the low-dose test group administered with rosiglitazone 0.037 ⁇ g / kg / day gained weight compared to the control group, and no anti-obesity effect was observed. It was.
  • the high-dose test group administered with 10 mg / kg / day of rosiglitazone had a lower body weight gain inhibition rate than the test group administered with 5H4PB at 0.037 ⁇ g / kg / day. From these, it was found that 5H4PB has an anti-obesity effect even when administered at a low dose.
  • Adiponectin is a secreted protein associated with metabolic disorders such as insulin resistance, diabetes and arteriosclerosis. Adiponectin-deficient mice are more likely to develop insulin resistance and more susceptible to arteriosclerosis than wild-type mice, and even in humans there are decreased adiponectin levels and metabolic syndromes such as diabetes and arteriosclerosis. Is known to be related. Therefore, a test for measuring the amount of adiponectin in blood was performed on the diet-induced obesity model mouse in Example 9.
  • the vertical axis of the figure is the concentration of adiponectin in mouse plasma (ng / mL), and each bar of the bar graph is from the left side, normal group, control group, 5H4PB 0.037 ⁇ g / kg / day administration group, 5H4PB 0.01 mg / kg / Day administration group, rosiglitazone 0.037 ⁇ g / kg / day administration group and rosiglitazone 10 mg / kg / day administration group. According to this result, it was recognized that the adiponectin concentration increased in the group administered with 5H4PB compared to the control group.
  • Example 11 Measurement of blood insulin in diet-induced obesity model mice
  • the amount of mouse insulin contained in mouse plasma obtained from each individual was measured using a commercially available ELISA kit, and the average value for each test group was determined.
  • the results are shown in FIG.
  • the vertical axis in the figure represents the insulin concentration (ng / mL) in the mouse plasma, and the test group indicated by each bar in the bar graph is the same as in FIG. 15 described above. According to this result, it was confirmed that the increase in insulin concentration was suppressed in the group administered with 5H4PB, particularly in the low-dose group, compared to the control group in which hyperinsulinemia due to obesity was observed. From these results, it was found that administration of 5H4PB can provide an effect of preventing or improving insulin resistance and diabetes.
  • Example 12 Measurement of blood leptin in diet-induced obesity model mice
  • Leptin is a protein hormone that regulates appetite and metabolism. It is known that obesity increases blood leptin concentration and causes leptin resistance.
  • Example 10 the amount of mouse leptin contained in mouse plasma obtained from each individual was measured using a commercially available ELISA kit, and the average value for each test group was determined. The results are shown in FIG. The vertical axis in the figure represents the leptin concentration (pg / mL) in the mouse plasma, and the test group indicated by each bar in the bar graph is the same as in FIGS. 15 and 16 described above.
  • Example 13 Measurement of subcutaneous fat mass and visceral fat mass in dietary obesity model mice.
  • Each individual of male C57BL / 6J mice that had passed 85 days from the start of the test in Example 9 was euthanized after blood collection under 2% isoflurane anesthesia.
  • the groin subcutaneous fat, testicular fat, perirenal fat and mesenteric fat were collected from each individual, the weight of each fat was measured, and the average value for each test group was determined.
  • Results are shown in FIGS. 18 (A) to (D).
  • the vertical axis represents the weight (g) of each adipose tissue measured
  • each bar of the bar graph indicates the normal group, control group, 5H4PB 0.037 ⁇ g / kg / day administration group, 5H4PBP0.01 mg / kg / day from the left side.
  • a daily administration group, a rosiglitazone 0.037 ⁇ g / kg / day administration group and a rosiglitazone 10 mg / kg / day administration group are shown.
  • 5H4PB is 0.037 ⁇ g / kg / day with respect to the increase amount of each adipose tissue in the control group by high-calorie diet (a value obtained by subtracting the adipose tissue weight of the normal group from the adipose tissue weight of the control group).
  • the groin subcutaneous fat was about 35%
  • the testicular fat was about 18%
  • the perirenal fat was about 13%
  • the mesenteric fat was about 16%.
  • the inguinal subcutaneous fat was about 34%
  • the testicular fat was about 15%
  • the perirenal fat was about 13%
  • the mesenteric fat amount was about 40%.
  • the increase in adipose tissue was suppressed.
  • 5H4PB has an effect of suppressing the accumulation of subcutaneous fat and visceral fat at a low dose.
  • the visceral fat amount increased in the test group administered with rosiglitazone at a low dose (0.037 ⁇ g / kg / day) as compared with the control group. No accumulation inhibitory effect was observed. From these results, it was found that 5H4PB can suppress the accumulation of subcutaneous fat and visceral fat even when administered at a low dose.
  • Example 14 Examination of influence on liver tissue by administration of 5H4PB]
  • Example 13 when collecting adipose tissue from each individual, the liver was collected and histopathological examination was performed. Histopathological findings were as follows.
  • the present invention provides a PPAR ⁇ activator that prevents or ameliorates lifestyle-related diseases and other pathological conditions in which PPAR ⁇ is involved, and therefore, in the medical and food fields (including supplements, health foods, functional foods, foods for specified health use, etc.) Widely useful in industry.

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Abstract

式（１）で表わされるブテノライド化合物又はその薬学的に許容される塩を含有することを特徴とするＰＰＡＲγ活性化剤。［式（１）中、Ｒ１は水素原子、リン酸基、脂肪酸基、置換基を有していてもよい炭素数１～４のアルキル基又は置換基を有していてもよい糖残基を示し、Ｒ２はフェニル基、メチルフェニル基、ジメチルフェニル基、エチルフェニル基、ベンジル基、メチルベンジル基、ジメチルベンジル基、エチルベンジル基、フェネチル基、メチルフェネチル基、ジメチルフェネチル基又はエチルフェネチル基を示す。］

Description

ＰＰＡＲγ活性化剤
　本発明は、脂質代謝活性化剤、抗糖尿病剤又は肥満症や生活習慣病などの予防・改善等に用いることのできるＰＰＡＲγ活性化剤に関する。
　香醋（香酢）は、主に糯米を発酵させ、長期間熟成させて製造される発酵食品であり、中国では古くから酢調味料として用いられている。香醋は、日本で一般的に用いられる酢である米酢よりもアミノ酸等の有機化合物の含有率が高く、近年は日本でも健康の保持増進に役立つ健康食品として人気が高まっている。
　例えば、本発明者らは特許文献１において、香醋の低級アルカノール抽出物を有効成分として含有するペルオキシソーム増殖剤応答性受容体α活性化剤及びγ活性化剤を開示している。これによれば、香醋の低級アルカノール抽出物に、脂肪酸酸化の刺激及び血清脂質の仲介作用に関与し糖代謝を改善するペルオキシソーム増殖剤応答性受容体（ＰＰＡＲ）αの活性化作用、並びに脂肪細胞の分化に関与し血糖値及び血中脂質の低下等をもたらすＰＰＡＲγの活性化作用が認められることが記載されている。
特開２００９－２４９３２２号公報
　しかしながら、特許文献１で開示されたＰＰＡＲ活性化剤は、香醋を低級アルカノールで抽出することにより得られた抽出物であるところ、この抽出物のＰＰＡＲγ活性化作用に関する効果確認は、一般に生体内に比べて反応条件が整えられた実験系で行われており、香醋の低級アルカノール抽出物を１．０％（すなわち、１００００ｐｐｍ）という高い割合で細胞培養液に添加した場合において、ＰＰＡＲγ活性化作用がみられることが確認されている。よって、この香醋の低級アルカノール抽出物をＰＰＡＲγ活性化剤として使用するにあたっては、これを多量に添加又は摂取する必要がある。
　また、特許文献１で開示された香醋の低級アルカノール抽出物は、複数の成分が含まれる混合物であり、ＰＰＡＲ活性化剤としての有効成分が具体的に何であるのかは示されていない。
　従って、本発明の目的は、香醋中に含まれる優れたＰＰＡＲ活性化作用を有する有効成分を特定し、その有効成分を含むＰＰＡＲ活性化剤を提供することにある。
　上記課題を解決するため、本発明者らは、香醋に種々の分画処理を施し、得られた分画物を検討した結果、優れたＰＰＡＲ活性化作用を有するブテノライド化合物を発見した。すなわち、本発明のＰＰＡＲγ活性化剤は、式（１）で表わされるブテノライド化合物又はその薬学的に許容される塩を含有する。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000003
［式（１）中、Ｒ１は水素原子、リン酸基、脂肪酸基、置換基を有していてもよい炭素数１～４のアルキル基又は置換基を有していてもよい糖残基を示し、Ｒ２はフェニル基、メチルフェニル基、ジメチルフェニル基、エチルフェニル基、ベンジル基、メチルベンジル基、ジメチルベンジル基、エチルベンジル基、フェネチル基、メチルフェネチル基、ジメチルフェネチル基又はエチルフェネチル基を示す。］
　このブテノライド化合物は、ＰＰＡＲγリガンド活性を有し、ＰＰＡＲγを活性化させる作用を有している。また、このブテノライド化合物は白色脂肪細胞を褐色脂肪細胞化し、脂質代謝を活性化させる作用を特に有している。さらに、このブテノライド化合物は、糖尿病、インスリン抵抗性、高脂血症、高血圧、動脈硬化、内臓脂肪型肥満、皮下脂肪蓄積、体重増加、レプチン抵抗性、脂肪肝又は生活習慣病などのＰＰＡＲγが関与する病態、症状又は疾患の予防、改善又は治療等に有効である。
　また、本発明のＰＰＡＲγ活性化剤は、前述した式（１）において、Ｒ１が水素原子、リン酸基又は置換基を有していてもよい糖残基であり、Ｒ２がフェニル基、４－メチルフェニル基、ベンジル基又は４－メチルベンジル基であることが好ましい。これにより、水溶性の性質を有し、ＰＰＡＲγ活性化剤として好適なブテノライド化合物が選択される。
　また、本発明の医薬は、糖尿病、インスリン抵抗性、肥満症、体重増加、内臓脂肪蓄積、皮下脂肪蓄積、レプチン抵抗性、脂質代謝異常、高脂血症、動脈硬化及びメタボリックシンドロームからなる群から選択される少なくとも一つの疾病の予防若しくは治療のための医薬であって、上述のＰＰＡＲγ活性化剤を含有する。これにより、上述したブテノライド化合物からなるＰＰＡＲγ活性化剤の好適な用途が選択される。
　また、本発明のサプリメントは、糖尿病、インスリン抵抗性、肥満症、体重増加、内臓脂肪蓄積、皮下脂肪蓄積、レプチン抵抗性、脂質代謝異常、高脂血症、動脈硬化及びメタボリックシンドロームからなる群から選択される少なくとも一つの疾病の予防若しくは改善のためのサプリメントであって、上述のＰＰＡＲγ活性化剤を含んでいる。これにより、上述したブテノライド化合物からなるＰＰＡＲγ活性化剤の好適な用途が選択される。
　また、本発明のＰＰＡＲγが関与する病態、症状又は疾患の治療、予防、抑制又は改善用組成物は、式（２）で表わされるブテノライド化合物又はその薬学的に許容される塩を有効成分として含有する。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000004
　［式（２）中、Ｒ１は水素原子、リン酸基、脂肪酸基、置換基を有していてもよい炭素数１～４のアルキル基又は置換基を有していてもよい糖残基を示し、Ｒ２はフェニル基、メチルフェニル基、ジメチルフェニル基、エチルフェニル基、ベンジル基、メチルベンジル基、ジメチルベンジル基、エチルベンジル基、フェネチル基、メチルフェネチル基、ジメチルフェネチル基又はエチルフェネチル基を示す。］
　ＰＰＡＲγは、主に糖・脂質代謝に関与する因子であり、メタボリックシンドローム、代謝性疾患、体重増加、内臓脂肪蓄積、皮下脂肪蓄積、肥満、糖尿病、インスリン抵抗性、高血圧、動脈硬化、高脂血症、炎症性疾患及び悪性腫瘍などの増殖性疾患に関与している。上述したブテノライド化合物は、ＰＰＡＲγリガンド活性を有し、ＰＰＡＲγを活性化させる作用を有しているため、ＰＰＡＲγが関与する病態、症状又は疾患の予防、改善、抑制又は治療に有効に用いられる。
　また、ＰＰＡＲγが関与する病態、症状又は疾患としては、糖尿病、インスリン抵抗性、肥満症、体重増加、内臓脂肪蓄積、皮下脂肪蓄積、レプチン抵抗性、脂質代謝異常、高脂血症、動脈硬化及びメタボリックシンドロームからなる群から選択される１種以上の病態、症状又は疾患であることが好ましい。これにより、上述したブテノライド化合物の特に好適な用途が選択される。このブテノライド化合物は、白色脂肪細胞を褐色脂肪細胞化させ、脂質を利用した熱産生を促進し、脂質代謝を活性化させる作用を有するほか、体重増加抑制作用、内臓脂肪蓄積抑制作用、皮下脂肪蓄積抑制作用、アディポネクチン増強作用、インスリン分泌抑制作用及びレプチン分泌抑制作用等を有している。それゆえ、これらのＰＰＡＲγが関与する病態、症状又は疾患を治療、予防、抑制又は改善することができる。
　本発明によれば、高いＰＰＡＲγ活性化作用を有するブテノライド化合物が得られる。このブテノライド化合物は、白色脂肪細胞を褐色脂肪細胞化させて脂質代謝を活性化する作用を有するほか、体重増加抑制作用、内臓脂肪蓄積抑制作用、アディポネクチン増強作用、インスリン分泌抑制作用及びレプチン分泌抑制作用等を有している。それゆえ、インスリン抵抗性、糖尿病、体重増加、肥満症、高脂血症、高血圧、動脈硬化、内臓脂肪蓄積、皮下脂肪蓄積、脂肪肝又はメタボリックシンドロームなどのＰＰＡＲγが関与する病態、症状又は疾患を治療、予防、抑制又は改善するために使用することができる。このように、上述のような病態等の予防又は改善に役立ち、食品やサプリメント、薬剤等に広く応用可能なブテノライド化合物が得られる。
本発明のＰＰＡＲγ活性化剤の有効成分であるブテノライド化合物を香醋から製造する方法を概略的に説明するフローチャートである。 実施例１における、香醋から順相カラム分画物を調整する方法を概略的に説明するフローチャートである。 実施例１における、順相カラム分画物のＰＰＡＲγリガンド活性を示すグラフである。 実施例２における、逆相カラム分画物を調整する方法を概略的に説明するフローチャートである。 実施例２で得られた逆相カラム分画物（ｆｒ．１～５）と実施例１で得られた順相カラム分画物（分画前ｆｒ．１）のＨＰＬＣ分析の結果を示すクロマトグラムである。横軸は保持時間（分）を示す。 実施例２における、逆相カラム分画物のＰＰＡＲγリガンド活性を示すグラフである。 実施例３における、ピーク分画物のＰＰＡＲγリガンド活性を示すグラフである。 実施例３で得られたピーク分画物のうち、ピーク５のＨＰＬＣ分析の結果を示すクロマトグラムである。縦軸は検出強度を、横軸は保持時間（分）を示す。 実施例３における、ピーク５の分画物及び実施例２で得た逆相カラム分画物のフラクション５のＰＰＡＲγリガンド活性を示すグラフである。 実施例４における、ピーク５の分画物のＬＣ／ＭＳの結果を示すチャートである。縦軸は検出強度を、横軸はｍ／ｚ値を示す。 実施例５における、ＵＣＰ－１遺伝子の発現量の結果を示すグラフである。 実施例７における、５－ヒドロキシ－４－フェニルブテノライド合成品のＰＰＡＲγリガンド活性を示すグラフである。 実施例８におけるブテノライド化合物のＰＰＡＲγリガンド活性を示すグラフである。 実施例９における、５－ヒドロキシ－４－フェニルブテノライド投与によるマウスの体重増加抑制効果を示すグラフである。 実施例１０における、マウス血液中に含まれるアディポネクチンの量を示すグラフである。 実施例１１における、マウス血液中に含まれるインスリンの量を示すグラフである。 実施例１２における、マウス血液中に含まれるレプチンの量を示すグラフである。 実施例１３における、５－ヒドロキシ－４－フェニルブテノライド投与によるマウスの皮下脂肪及び内臓脂肪の蓄積抑制効果を示すグラフである。
　以下、本発明を詳細に説明する。本発明のＰＰＡＲγ活性化剤には有効成分として上述の式（１）で表されるブテノライド化合物が含まれる。この式（１）中、Ｒ１で示される原子としては水素原子が好ましく、分子としては、リン酸基、脂肪酸基、置換基を有していてもよい炭素数１～４のアルキル基又は置換基を有していてもよい糖残基が挙げられる。脂肪酸基としては、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、マルガリン酸又はステアリン酸等が挙げられる。炭素数１～４のアルキル基としては、メチル基、エチル基、各種プロピル基又は各種ブチル基が挙げられる。また、リン酸基、糖残基による配糖体は、体外での安定性及び体内での吸収性の観点から好ましく、糖としては、特に限定されないが、各種グルコース、各種ガラクトース又は各種マンノース等が用いられ、特にグルコースが好適な配糖体を形成する糖として用いられる。
　また、Ｒ２はフェニル基、メチルフェニル基、ジメチルフェニル基、エチルフェニル基、ベンジル基、メチルベンジル基、ジメチルベンジル基、エチルベンジル基、フェネチル基、メチルフェネチル基、ジメチルフェネチル基又はエチルフェネチル基が好ましく、特に、作用効果の観点から、フェニル基、４－メチルフェニル基、ベンジル基又は４－メチルベンジル基が好適に用いられる。
　この式（１）で表わされる化合物のうち、特に薬理活性の点から好ましい化合物としては、以下式（３）に示す５－ヒドロキシ－４－フェニルブテノライドや以下式（４）に示す５－ヒドロキシ－４－（４－メチルフェニル）ブテノライドのほか、５－ヒドロキシ－４－（４－メチルベンジル）ブテノライドや５－ヒドロキシ－４－ベンジルブテノライドを挙げることができ、後述するように、ＰＰＡＲγ活性化剤として香醋中から発見された５－ヒドロキシ－４－フェニルブテノライド又は５－ヒドロキシ－４－（４－メチルフェニル）ブテノライドが特に好ましい。
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　式（３）に示すブテノライド化合物、すなわち、５－ヒドロキシ－４－フェニルブテノライドは、発酵食品である香醋から抽出して得ることができる。香醋からこのブテノライド化合物を得る方法としては、特に限定されないが、一例として、図１のフローチャートに示すように、香醋（を準備する工程）Ｓ０と、香醋に含まれている脂質成分を除去する脱脂処理工程Ｓ１と、溶媒を用いて目的の成分を抽出する溶媒抽出処理工程Ｓ２と、順相クロマトグラフィーによる分画工程Ｓ３と、逆相クロマトグラフィーによる分画工程Ｓ４とから概略構成される。
　この香醋Ｓ０とは、糯米に麹を添加してアルコール発酵させ、籾殻を添加して酢酸発酵させ、水を添加して抽出し、その抽出液を一定期間熟成させたものである。
　図１に示す脱脂処理Ｓ１は、香醋Ｓ０に含まれている余分な脂質成分を除去する目的で行われる。香醋Ｓ０の脱脂処理を行うことにより、香醋に含まれている余分な脂質成分が除去されるため、後に行われる溶媒抽出処理Ｓ２や分画工程Ｓ３及びＳ４において、式（３）で表わされるブテノライド化合物を有効に抽出することが可能となる。具体的には、特に限定されないが、香醋Ｓ０に有機溶媒を加えてよく撹拌し、有機溶媒相に余分な脂質成分を移動させた後、遠心分離機などを用いて水相と有機溶媒相とに分離し、水相を回収することにより行うことができる。この操作は複数回行われることが好ましい。有機溶媒としては、脱脂効果を有するものであればよく、たとえば、石油系有機溶媒やアルコール類などが好適に用いられ、特にｎ－ヘキサンが好適に用いられる。用いる有機溶媒の量としては、香醋の１０重量％から１０００重量％程度が好ましく、香醋の量の半分から２倍程度が最も好ましい。
　次に図１に示す溶媒抽出処理Ｓ２では、脱脂処理した香醋に溶媒を加え、加えた溶媒に目的となるブテノライド化合物を移動させることが行われる。用いられる溶媒としては、有機溶媒が好適に用いられ、特に限定されないが、ｎ－ブタノール又はエタノールなどのアルカノール、酢酸エチル、ブチレングリコール及びクロロホルム等を用いることができる。これらの溶媒抽出処理Ｓ２は、単一の処理に限られず、同じ溶媒での抽出処理を複数回行うことや、複数種類の溶媒抽出処理を組み合わせて行うことも可能である。
　上述した溶媒抽出処理Ｓ２の一例として、有機溶媒としてクロロホルムを用いた際の抽出処理について説明する。このクロロホルム抽出処理では、脱脂した香醋にクロロホルムを加え、クロロホルム相に目的成分であるブテノライド化合物を効率よく移動させることが行われる。具体的には、たとえば香醋とクロロホルムとを分液漏斗を用いて分配し、クロロホルム相を回収することにより行われる。この場合、分配は複数回行われることが好ましい。クロロホルムの添加量としては、水相（香醋）の１０重量％から１０００重量％程度が好ましく、水相の量の半分から２倍程度が最も好ましい。回収されたクロロホルム相は、減圧濃縮処理等により溶媒を簡単に除去することができ、固形又は濃縮された香醋のクロロホルム抽出物を得ることができる。
　次に、図１に示す順相クロマトグラフィーによる分画工程Ｓ３について説明する。この分画工程Ｓ３では、工程Ｓ２で得られた溶媒抽出物に含まれている目的成分のブテノライド化合物を精製分離することを目的としている。一例として、順相シリカゲルカラムクロマトグラフィーによる分画処理について説明する。具体的には、特に限定されないが、シリカゲルが充填されたクロマト管の上に溶媒抽出物を吸着させたシリカゲルをのせ、その上から所定の移動相を流して溶出させることにより行われる。移動相としては、特に限定されないが、ベンゼン－アセトンが好適に用いられ、例えば、ベンゼン：アセトンの比を４０：１から０：１までの勾配とした移動相で溶出することにより、好適に分離することが可能である。得られた分画物のうち、どの分画物に目的物質が含まれているかを確認するにあたっては、後述するＰＰＡＲγ活性化試験や、ＰＰＡＲγが関与する遺伝子（ＵＣＰ－１遺伝子等）の発現量を測定する試験等を行うことができる。
　次に、図１に示す逆相クロマトグラフィーによる分画工程Ｓ４について説明する。この分画工程Ｓ４では、工程Ｓ３で得られた順相カラム分画物に含まれている目的成分のブテノライド化合物をさらに精製分離し、略単離することを目的としている。一例として、逆相シリカゲルカラムクロマトグラフィーによる分画処理について説明する。具体的には、特に限定されないが、オクタデシルシリル基（Ｃ１８）で修飾されたシリカゲルをカラムに充填し、工程Ｓ３で得られた分画物をカラムに添加した後、所定の移動相を流して溶出させることにより行われる。移動相としては、特に限定されないが、メタノール－水が好適に用いられ、例えば、メタノール：水の比を１：９から１：０までの勾配とした移動相で溶出することにより、好適に単離することが可能である。得られた分画物のうち、どの分画物に目的物質のブテノライド化合物が含まれているかを確認するにあたっては、後述するＰＰＡＲγ活性化試験や、ＰＰＡＲγが関与する遺伝子（ＵＣＰ－１遺伝子等）の発現量の測定試験等を行うことができる。また、得られた分画物についてＨＰＬＣ分析を行い、クロマトグラムを確認して、単一ピークが得られているかを確認することによりブテノライド化合物を単離できたか否かの確認を行うことができる。
　なお、上述した分画処理Ｓ３、Ｓ４は、単一の処理に限られず、同じ充填材又は異なる充填材による分画処理を複数回行うことや、同じ移動相又は異なる移動相による分画処理を組み合わせて行うことも可能である。
　また、式（３）で表されるブテノライド化合物は、香醋から抽出分離して得る方法の他に、公知の合成方法で製造することも可能である。例えば、フェニルアセトアルデヒドとグリオキシル酸エステルとをアルドール縮合させ、３－フェニル－４－オキソ－２－ヒドロキシ－ブタン酸エステルを得たのち、水の存在下で酸を作用させること（特開平６－２１１８２５号公報）、フェニルアセトアルデヒドとグリオキシル酸エステルとをモルホリン塩酸塩存在下で反応させること（特開平１１－１５２２８０号公報）等により本発明のブテノライド化合物を製造することができる。同様に、式（４）及び式（１）で表わされるその他のブテノライド化合物についても、公知の合成方法（Ｊ．　Ｏｒｇ．　Ｃｈｅｍ．、１９８１年、第４６巻、ｐｐ．４８８９－４８９４及びＴｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　Ｌｅｔｔｅｒｓ、２０１３年、第５４巻、ｐｐ．５３２２－５３２４等参照）にて製造することが可能である。
　上述したブテノライド化合物の薬理学的に許容される塩としては、酸又は塩基と形成される塩であればよく、特に限定されない。また、このブテノライド化合物又はその塩は、水和物やアルコール等の有機溶媒和物などであってもよく、無水物であってもよい。また、各種異性体やラセミ体、又はこれらの混合物なども含まれる。さらに、このブテノライド化合物又はその塩は、分子構造中に含まれる官能基が修飾される等した、生体の代謝作用により効果を示すようになるプロドラッグであってもよい。
　式（１）で表されるブテノライド化合物はＰＰＡＲγを活性化させる作用を有する。なお、本発明において、ＰＰＡＲγ活性化剤とは、ＰＰＡＲγに結合する等してＰＰＡＲγを活性化させ、標的遺伝子の発現を調整できる物質のことをいう。ＰＰＡＲγの標的遺伝子としては、例えば、アディポネクチン、ＵＣＰ－１、脂肪酸結合タンパク質又はａＰ２等が挙げられる。また、本明細書において、ＰＰＡＲγリガンド活性とＰＰＡＲγアゴニスト活性とは同義である。
　本発明のＰＰＡＲγ活性化剤はＰＰＡＲγが関与する病態、症状又は疾患の治療、予防、抑制又は改善に用いることができる。ここでの治療や病態の改善には、これらの疾患や病態に対する予防や予後の処置も含まれる。ＰＰＡＲγが関与する疾病には、脂肪細胞の分化や代謝に関与するものが広く含まれ、特にインスリン抵抗性、糖尿病、高脂血、高血圧、内臓脂肪型肥満、内臓脂肪蓄積、皮下脂肪蓄積、脂肪肝、体重増加、肥満、レプチン抵抗性、動脈硬化、炎症性疾患、悪性腫瘍若しくはメタボリックシンドローム又はこれらに関連する疾患が含まれる。本発明のＰＰＡＲγ活性化剤は、これらの疾患の一つ又は複数に対する治療や改善、症状や病態の抑制や予防等に用いられる。
　また、本発明のブテノライド化合物は、脂肪を蓄積させる白色脂肪細胞を、脂肪を燃焼させる褐色脂肪細胞に変換させる作用を有していることから、脂質代謝活性化剤として用いることができる。なお、脂質代謝活性化剤としての作用機序は上述した白色脂肪細胞を褐色脂肪細胞化させることのみに限定されず、本発明の化合物がＰＰＡＲγ活性化作用を有し、ＰＰＡＲγの標的遺伝子の転写が亢進することも関係する。
　さらに、式（１）で表されるブテノライド化合物は、ＰＰＡＲγ活性化作用を有することから、抗糖尿病剤、インスリン抵抗性治療剤、抗肥満症剤、体重増加抑制剤、内臓脂肪蓄積抑制剤、皮下脂肪蓄積抑制剤、レプチン抵抗性治療剤、脂質代謝異常治療剤、抗高脂血症剤、動脈硬化治療剤及びメタボリックシンドローム抑制剤として用いることができる。
　本発明のＰＰＡＲγ活性化剤等は、上述した式（１）で表されるブテノライド化合物を有効成分として含むものであり、ヒト又は動物のための医薬品、医薬部外品及び食品として用いることができる。食品には、サプリメント、健康食品、機能性食品、特定保健用食品等も含まれる。
　本発明のＰＰＡＲγ活性化剤等を医薬品又は医薬部外品として用いる場合には、従来慣用されている方法により種々の形態に調製することができる。この場合、通常製剤用の薬理学的に許容される担体や賦形剤、滑沢剤、分散剤、崩壊剤、緩衝剤、溶剤、増量剤、保存剤、香料又は安定化剤など、医薬品の添加剤として許容されている添加剤を用いて製剤化することができる。さらに、このブテノライド化合物のバイオアベイラビリティーや安定性を向上させるために、マイクロカプセル、リポソーム製剤、微粉末化又はシクロデキストリン等を用いた包接化などの製剤技術を含むドラッグデリバリーシステムを用いることもできる。
　本発明のＰＰＡＲγ活性化剤等を経口投与製剤として用いる場合には、錠剤、顆粒剤、カプセル剤又は内服用液剤等の形態で用いることができるが、消化管からの吸収に適した形態で用いることが好ましい。また、流通性、保存性などの理由により所望される形態での製剤を提供する場合にも従来の製剤技術を用いることができる。また、外用剤等の非経口投与剤として用いる場合には、注射剤、坐剤およびテープ剤、パップ剤などの経皮吸収剤等の形態とすることができる。また、流通性や保存性などの理由から固形製剤を使用時に適当な溶剤で溶解してから用いることもでき、液剤および半固形剤の形態で提供することも従来の製剤技術により可能である。
　また、本発明のＰＰＡＲγ活性化剤等を食品として用いる場合には、錠剤やカプセル剤、顆粒剤、シロップ剤などのサプリメント形態、スープ、粥、飲料、麺類、ゼリー、シリアル、パン、乳製品、調味料、食用油、菓子等の形態が挙げられる。また、動物用食品（飼料、ペットフード；ドライタイプ、ウェットタイプ、動物用サプリメント、動物用飲料等）として用いることも可能である。食品として用いる際には、香醋に由来するエキス等の成分や、ビタミン、ミネラル若しくはアミノ酸等の栄養素等を種々添加することも可能である。
　本発明のＰＰＡＲγ活性化剤等の投与量又は有効摂取量は、目標とする治療効果、投与方法、投与対象及び剤形によって変化するため、特に限定されないが、一日の経口投与量としては、有効成分として約０．０１μｇ／６０ｋｇ体重～約３００ｍｇ／６０ｋｇ体重であり、好ましくは、０．０５μｇ／６０ｋｇ体重～約１００ｍｇ／６０ｋｇ体重であり、これを１～３回に分割して投与することが好ましい。また、一日の非経口的な投与量としては、有効成分として約０．０１μｇ／６０ｋｇ体重～１００ｍｇ／６０ｋｇ体重であり、好ましくは約０．０３μｇ／６０ｋｇ体重～５０ｍｇ／６０ｋｇ体重が好ましい。
　次に、本発明を実施例によりさらに詳細に説明するが、本発明は、これらの実施例によってなんら限定されるものではない。
　以下の実施例におけるＰＰＡＲ活性化試験の測定方法は、下記の通りである。
（１）ＰＰＡＲγ活性化試験
（１－１）準備
　ヒト由来のＰＰＡＲγリガンド結合ドメインと酵母由来のＧＡＬ４転写因子のＤＮＡ結合ドメインからなるキメラタンパク質を発現するプラスミドのｐＭ－ＰＰＡＲγと、このキメラタンパク質によって発現が制御されるようにデザインされた、ＧＡＬ４応答配列の下流にウミホタル由来のルシフェラーゼ構造遺伝子を連結したプラスミドのｐ４×ＵＡＳｇ－ｔｋ－ｌｕｃを準備した。また、トランスフェクション効率補正用プラスミドとして、細胞内で恒常的に発現するウイルス性発現プロモーターを持ったウミシイタケ由来のルシフェラーゼ発現プラスミドのｐＲＬ－ＣＭＶを準備した。他方、ＣＶ－１細胞（アフリカミドリザル腎臓由来）の培地として、１０％ＦＢＳ／ＤＭＥＭを用い、１００ｍｍシャーレにＣＶ－１細胞を４．５×１０５ｃｅｌｌｓとなるように播き、３７℃、５％ＣＯ２環境下でインキュベーターにて培養を行った。
（１－２）ＣＶ－１細胞の形質転換
　２４時間培養後のＣＶ－１細胞に、２．０μｇのｐＭ－ＰＰＡＲγ、４．０μｇのｐ４×ＵＡＳｇ－ｔｋ－ｌｕｃ、及び０．０４μｇのｐＲＬ－ＣＭＶをコトランスフェクトし、ＣＶ－１細胞の形質転換を行った。形質転換はリポソーム法で行い、LipofectAMINE（登録商標）Reagent（インビトロジェン社製品）を使用した。形質転換操作後、３７℃、５％ＣＯ２環境下で３．５時間培養を行った。
（１－３）被検試料の添加
　インキュベート後、トリプシン処理によりＣＶ－１細胞を回収し、９６ｗｅｌｌプレートに１×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍＬの濃度になるように５０ｍＬ播種した。被検試料を４％ＦＢＳ／ＤＭＥＭで希釈して最終濃度の２倍の濃度となるように調整し、上述した９６ｗｅｌｌプレートに５０ｍＬ添加した。なお、コントロール物質としては、ＤＭＳＯを用いた。被検試料及びコントロール物質（ＤＭＳＯ）を添加した後、３７℃、５％ＣＯ２環境下で２４時間インキュベートを行った。
（１－４）ルシフェラーゼ活性の測定
　ルシフェラーゼ活性の測定は、Dual-Luciferase（登録商標）Reporter Assay System（プロメガ社製品）を用いて行った。９６ｗｅｌｌプレートから培養液を除き、細胞をＰＢＳ（－）で洗浄し、ペーパータオルで水分を除去した。細胞溶解液（Passive Lysis Buffer）を３０ｍＬ加え、９６ｗｅｌｌプレートを１５分振とうした。細胞抽出液を１０ｍＬずつ９６ｗｅｌｌルミノプレートに移した。発光基質液７０ｍＬを添加し、測定時間１０秒の設定でルシフェラーゼによる発光強度をルミノメーター（Micro Lumat Plus、ベルトールドジャパン社製品）を用いて測定した。
　被検試料のＰＰＡＲγ活性化作用は、コントロールに対する割合（％）で評価した。トランスフェクション効率を補正するために、測定したウミホタル・ルシフェラーゼ活性値（Ａ）を測定したウミシイタケ・ルシフェラーゼ活性値（Ｂ）で除した値（Ａ／Ｂ）を求めた。コントロール群のＡ／Ｂ値の平均値を算出し、この平均値を１００とした。被検試料のＡ／Ｂ値を算出し、コントロールの平均値に対する割合（％）を被検試料のＰＰＡＲγ活性化能とした。
　［実施例１　順相カラム分画物の調整及び活性測定］
　図２に示す分画フローにより、香醋より７つの順相カラム分画物を調整した。以下、分画フローの各処理について詳述する。
　（１）ヘキサン脱脂処理
　香醋（製品名；８年熟成恒順香醋、日本恒順株式会社製品）１Ｌに対して、等量のｎ－ヘキサンを加えてよく撹拌したのち、５０００ｒｐｍで１０分間遠心分離を行い、水層を回収した。この分配操作を３回行い、香醋に含まれる余分な脂質成分を除去した。
　（２）クロロホルム抽出処理
　次に、回収した水層に等量のクロロホルムを加え、分液ロートを用いて３回分配操作を行い、クロロホルム層を回収した。回収したクロロホルム層の減圧下濃縮を行って溶媒を除去し、３９７０ｍｇのクロロホルム抽出物を得た。
　（３）順相シリカゲルカラム処理
　クロロホルム抽出により得た抽出物３９７０ｍｇを少量のアセトンに溶かし、１３０ｇのシリカゲル（シリカゲル６０、０．０４０－０．０６３ｍｍ　カラムクロマトグラフィー用；メルクミリポア社製品）に吸着させた。次に、ガラスクロマト管（クロマト管の長さ６０ｃｍ、直径２．７ｃｍ、容量３４３ｍＬ）にシリカゲルを１３０ｇ充填し、その上に香醋のクロロホルム抽出物を吸着させたシリカゲルをのせた。ベンゼン：アセトン＝２０：１、１０：１、５：１、３：１、２：１、１：１及びアセトン１００％の溶媒の順に５５０ｍＬずつ各溶媒を流し、溶媒毎に溶出した分画物を分け、順相カラム分画物（フラクション１～７）として回収した。回収した分画物をそれぞれ減圧下濃縮して溶媒を除去し、得られた分画物の固形重量を測定した。ＰＰＡＲγリガンド活性測定における最終濃度の１０００倍以上の濃度となるように、得られた分画物の一部を適量のジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ、ナカライテスク株式会社製品）に溶解させた。
　（４）順相カラム分画物の活性測定
　実施例１で得た７つの順相カラム分画物を被検試料として、ＰＰＡＲγ活性化試験を行い、各分画物のＰＰＡＲγリガンド活性を評価した。各分画物の最終濃度は１００μｇ／ｍＬ及び５０μｇ／ｍＬとした。各分画物のＰＰＡＲγリガンド活性を図３に示す。これらの図の縦軸はコントロール物質（ＤＭＳＯ）の活性に対する分画物の活性の割合である。図３に示すように、フラクション１の分画物（溶出溶媒がベンゼン：アセトン＝２０：１）について、濃度依存的なＰＰＡＲγリガンド活性が認められた。
　［実施例２　逆相カラム分画物の調整及び活性測定］
　（１）逆相ＯＤＳカラム処理
　図４の分画フローに示すように、実施例１で得たＰＰＡＲγ活性化作用が認められるフラクション１の順相カラム分画物について、さらに逆相クロマトグラフィーを行い、５つの逆相カラム分画物を調整した。逆相クロマトグラフィーは以下のように行った。ガラスクロマト管（クロマト管の長さ４０ｃｍ、直径２．２ｃｍ、容量１５２ｍＬ）に充填材として、ＯＤＳシリカゲル（ＹＭＣ＊ＧＥＬ　ＯＤＳ－Ａ　６ｎｍ　Ｓ－１５０μｍ；ワイエムシィ社製品）５０ｇをメタノールで懸濁させて充填した。脱気したメタノール１００％を、気泡を作らないようにこの充填材に１００ｍＬ注いで流した。次に、充填材の１０倍量（７６０ｍＬ）の脱気したメタノール１０％水溶液で充填材を平衡化した。実施例１で得たフラクション１の分画物１１７ｍｇをメタノールに溶かし、その溶液を充填材の上から添加した。そして、メタノール濃度が１０％、２０％、３０％、４０％及び１００％の脱気したメタノール水溶液を、この濃度の順に充填材の上から１８０ｍＬずつ流し、溶媒毎に溶出した分画物を分け、逆相カラム分画物（フラクション１～５）として回収した。得られた逆相カラム分画物は減圧下濃縮して溶媒を除去し、得られた分画物の一部を適量のジメチルスルホキシドに溶解させた。回収した分画物について、高速液体クロマトグラフィー（使用カラム：ＹＭＣ－Ｐａｃｋ　ＯＤＳ－Ａ　２５０×４．６ｍｍＩ．Ｄ.　Ｓ－５μｍ　３０ｎｍ、移動相：メタノール２０％水溶液－メタノール７０％水溶液、流速：１ｍＬ/分、カラム温度：４０℃、検出条件ＵＶ：２８０ｎｍ）を用いて分離状況の確認を行った。各分画物のＨＰＬＣの結果を図５に示す。図５の横軸は保持時間（分）を示す。
　（２）逆相カラム分画物の活性測定
　実施例２で得た逆相カラム分画物（フラクション１～５）及び実施例１で得た順相カラム分画物のフラクション１を被検試料として、ＰＰＡＲγ活性化試験を行い、各分画物のＰＰＡＲγリガンド活性を評価した。各分画物の最終濃度は１００μｇ／ｍＬとした。また、ＰＰＡＲγアゴニストであるトログリタゾン（Ｔｒｏ）についてもＰＰＡＲγ活性化試験を行った。トログリタゾンの最終濃度は１μＭとした。ＰＰＡＲγリガンド活性を図６に示す。これらの図の縦軸はコントロール物質（ＤＭＳＯ）の活性に対する分画物の活性の割合である。図６に示すように、逆相カラム分画物のフラクション４（溶出溶媒が水：メタノール＝６０：４０）及びフラクション５（溶出溶媒がメタノール１００％）について、ＰＰＡＲγリガンド活性が認められた。
　［実施例３　ピーク分画物の調整及び活性測定］
　（１）高速液体クロマトグラフィーによる分画
　図５に示す逆相カラム分画物のＨＰＬＣクロマトグラムをみると、ＰＰＡＲγ活性化作用が認められるフラクション４及び５には、複数の特異的なピークが認められる。そこで、フラクション４及び５について特異的なピークを示す物質の分画を行い、活性物質を精製することを試みた。分画は、逆相高速液体クロマトグラフィー（使用カラム：ＹＭＣ－Ｐａｃｋ　ＯＤＳ－Ａ　２５０×４．６ｍｍＩ．Ｄ.　Ｓ－５μｍ　３０ｎｍ、移動相：メタノール２０％水溶液－メタノール７０％水溶液、流速：１ｍＬ/分、カラム温度：４０℃、検出条件ＵＶ：２８０ｎｍ）を用いて行った。
　（２）ピーク分画物の活性測定
　実施例３で得たピーク分画物及びトログリタゾン（Ｔｒｏ）を被検試料として、ＰＰＡＲγ活性化試験を行い、各分画物のＰＰＡＲγリガンド活性を評価した。各分画物の最終濃度は１００μｇ／ｍＬ、トログリタゾンの最終濃度は１μＭとした。結果を図７に示す。図７に示すように、フラクション４のピーク５の分画物に明確なＰＰＡＲγリガンド活性が認められた。なお、このピーク５の分画物をＨＰＬＣ分析したところ、シングルピークとして検出され（図８参照）、単一成分として単離できたことがわかった。
　さらに、実施例３で得たピーク５の分画物、実施例２で得た逆相カラム分画物のフラクション５及びトログリタゾンについて、ＰＰＡＲγ活性化試験を行い、各分画物のＰＰＡＲγリガンド活性を評価した。ピーク５の分画物の最終濃度は低濃度；５０μｇ／ｍＬ、及び高濃度；１００μｇ／ｍＬとし、逆相カラム分画物のフラクション５の最終濃度は２５μｇ／ｍＬ及び５０μｇ／ｍＬ、トログリタゾンの最終濃度は１０μＭとした。結果を図９に示す。図９に示すように、ピーク５の分画物のＰＰＡＲγリガンド活性は、濃度依存的に上昇することが認められた。
　［実施例４　ピーク分画物の構造決定］
　実施例３で得たピーク５の分画物について構造解析を行った。構造解析は、ＬＣ／ＭＳ、１Ｈ－ＮＭＲ、１３Ｃ－ＮＭＲ、ＨＭＢＣ及びＨＳＱＣを行った。ＬＣ／ＭＳの結果を図１０に示す。図１０の横軸はｍ／ｚ値を、縦軸は検出強度を示す。図１０よりピーク５の分画物は分子量１７６．１６８７、示性式はＣ１０Ｈ８Ｏ３であることが示唆された。また、１Ｈ－ＮＭＲ、１３Ｃ－ＮＭＲ、ＨＭＢＣ及びＨＳＱＣの結果より、ピーク５に含まれている成分は、５－ヒドロキシ－４－フェニルブテノライド（以下、「５Ｈ４ＰＢ」という）であることが明らかとなった。
　［実施例５　ＵＣＰ－１遺伝子発現量の測定］
　ミトコンドリア脱共役型タンパク質（Uncoupling Protein；ＵＣＰ）はミトコンドリア内膜での酸化的リン酸化反応を脱共役させ、エネルギーを熱として消費する機能を有している。そのうち、ＵＣＰ－１は脂肪燃焼による熱産生を行う褐色脂肪細胞に特異的に発現している。近年、特定のＰＰＡＲγ合成アゴニストが脂肪を貯蔵する白色脂肪細胞を脂肪燃焼させる褐色脂肪細胞のように変化させることが報告されている（H. Ohno et al、Cell metabolism、2012年、Vol.15、pp.395-404）。そこで、ＰＰＡＲγリガンド活性が認められたピーク５の分画物、すなわち、５Ｈ４ＰＢが白色脂肪細胞を褐色脂肪細胞化させる作用を有するか確認するため、ＵＣＰ－１遺伝子の発現量を測定する試験を行った。
　試験は次のように行った。間葉系細胞株１０Ｔ１／２を１２ｗｅｌｌプレートに１×１０４ｃｅｌｌｓ／ｍＬとなるように播種した。細胞がコンフルエントになるまで培養した後、ピーク５の分画物（５Ｈ４ＰＢ）を最終濃度が１００μｇ／ｍＬとなるように添加した。また、コントール物質としてはＤＭＳＯを用いた。サンプル添加から２４時間後、細胞からｍＲＮＡを回収し、ｍＲＮＡ量を定量した。ｍＲＮＡ定量は、ライトサイクラー（登録商標、ロシュ・アプライド・サイエンス社）を用いて行った。結果を図１１に示す。図の縦軸はコントロール物質（ＤＭＳＯ）のＵＣＰ－１発現量に対するピーク５の分画物のＵＣＰ－１発現量の比である。図１１に示すように、ピーク５の分画物はＵＣＰ－１の発現レベルを上昇させる作用を有することがわかった。ＵＣＰ－１の発現量の増加は脂質からの熱産生の亢進を表わす。この結果より、ピーク５の分画物、すなわち、５Ｈ４ＰＢはＵＣＰ－１の活性化を介して脂質代謝の改善、促進に寄与することがわかった。
　［実施例６　５Ｈ４ＰＢの合成］
　化学合成により得た５Ｈ４ＰＢが香醋から抽出して得た５Ｈ４ＰＢと同様のＰＰＡＲγ活性化作用を有するか確認するため、５Ｈ４ＰＢを合成した。合成は次のようにして行った。グリオキシル酸一水和物１００ｍｇとモルホリン１５０ｍｇを１，４－ジオキサン４５０μＬに分散させて、水５５μＬを一滴ずつ加えた。フェニルアセトアルデヒド１４０ｍｇを加え、室温で１時間静置した後、２４時間加熱還流した。生成物を減圧濃縮し、ジエチルエーテル２．５ｍＬで抽出した。抽出したジエチルエーテル層に無水硫酸マグネシウムを加えて脱水乾燥させた後、再び減圧濃縮した。濃縮物をアセトン／クロロホルム混合溶液に溶かし、再結晶により５Ｈ４ＰＢを１４０ｍｇ得た。得られた合成５Ｈ４ＰＢについて、液体クロマトグラフ質量分析（ＬＣ／ＭＳ）を行い、香醋から抽出して得た５Ｈ４ＰＢ（実施例３で得たピーク５の分画物）と同一であることを確認した。
　［実施例７　合成品の活性測定］
　実施例６で得た５Ｈ４ＰＢ合成品を被検試料として、ＰＰＡＲγ活性化試験を行った。合成５Ｈ４ＰＢの最終濃度は３．５μＭとした。結果を図１２に示す。これらの図の縦軸はコントロール物質（ＤＭＳＯ）の活性に対する合成品の活性の割合である。図１２に示すように、化学合成により得られた５Ｈ４ＰＢについても、香醋由来物と同様に高いＰＰＡＲγリガンド活性が認められた。
　［実施例８　各種ブテノライド化合物の合成及び各合成品の活性測定］
　５Ｈ４ＰＢをはじめとする各種ブテノライド化合物を化学合成し、種々濃度におけるＰＰＡＲγリガンド活性を測定した。本実施例において、５Ｈ４ＰＢ及び各種ブテノライドの合成は以下のようにして行った。まず、上記式（３）で表わされる５Ｈ４ＰＢについては、１Ｌ容量の４口フラスコにモルホリン５３ｍＬ（０．６ｍｏｌ）と１，４－ジオキサン１２０ｍＬを順次加え、氷浴しながら５０％グリオキシル酸水溶液を６２ｍＬ（０．６ｍｏｌ、１．５当量）及び濃塩酸５０ｍＬを順次滴下して加えた。この混合物を内温８７℃まで加熱し、フェニルアセトアルデヒド（４８％フタル酸ジエチル溶液、０．４ｍｏｌ）を１，４－ジオキサンで３倍希釈したものをゆっくり滴下し、この混合液を終夜還流させた。薄層クロマトグラフィーを用いて還流後の反応液中にアルデヒドが含まれないことを確認し、反応液を室温まで放冷した。反応液を濃縮して２００ｍＬの酢酸エチルを加えた。飽和重曹水で洗浄し、得られた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過及び濃縮して一部オイル状の黄色固体１０１ｇを得た。この黄色固体に２００ｍＬの酢酸エチルを加えて溶解させ、アルミナ（塩基性）を加えて撹拌しバッチ処理した。アルミナをろ過して除いた後、ろ液を濃縮して黄色固体（一部オイル）９６ｇを得た。これを０．５倍量の酢酸エチルに溶解させ、１倍量のヘキサンを加えて撹拌し、析出した固体をろ取して乳白色固体の５Ｈ４ＰＢを３０．２ｇ（収率４０％、ＧＣ純度９８．６％）を得た。
　また、上記式（４）で表わされる５－ヒドロキシ－４－（４－メチルフェニル）ブテノライド（式（１）におけるＲ２：メチルフェニル基）の化学合成については、フェニルアセトアルデヒドの代わりに４－メチルフェニルアセトアルデヒド（４８％フタル酸ジエチル溶液、０．４ｍｏｌ）を用い、このアルデヒドの滴下温度を混合物の内温６０℃とし、滴下終了後に内温８７℃にまで加熱したほかは、本実施例の５Ｈ４ＰＢの合成方法（各試薬のモル比、反応時間等）と同様に行った。得られた化合物の収率は３０％、ＧＣ純度は９７．６％であった。
　また、以下式（５）に示す５－ヒドロキシ－４－（４－メチルベンジル）ブテノライド（式（１）におけるＲ２：メチルベンジル基）の化学合成については、フェニルアセトアルデヒドの代わりに３－（４－メチルフェニル）プロピオンアルデヒド（４８％フタル酸ジエチル溶液、０．４ｍｏｌ）を用いたほかは、上述の５Ｈ４ＰＢの合成方法と同様にして混合液を終夜還流させて反応させた。薄層クロマトグラフィーを用いて還流後の反応液中にアルデヒドが含まれないことを確認し、反応液を室温まで放冷した。反応液を濃縮して２倍量の酢酸エチルを加えた。この溶液を希塩酸と飽和重曹水で洗浄し、カラムで分けにくい成分を除去した。得られた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過及び濃縮して粗製固体を得た。この固体を１０倍量のヘキサン／酢酸エチル＝１の混合溶媒に溶解させ、シリカゲル（ＰＱＳ１００Ｂ）３倍量でバッチ処理した。得られた濃縮液にヘキサンを加え、析出した固体をろ取して無色固体の５－ヒドロキシ－４－（４－メチルベンジル）ブテノライドを収率２４％、ＧＣ純度９９．２％で得た。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000007
　さらに、以下式（６）に示す５－ヒドロキシ－４－ベンジルブテノライド（式（１）におけるＲ２：ベンジル基）の化学合成については、フェニルアセトアルデヒドの代わりに３－フェニルプロピオンアルデヒド（４８％フタル酸ジエチル溶液、０．４ｍｏｌ）を用いたほかは、上述の５Ｈ４ＰＢの合成方法と同様にして混合液を終夜還流させて反応させた。薄層クロマトグラフィーを用いて還流後の反応液中にアルデヒドが含まれないことを確認し、反応液を室温まで放冷した。反応液を濃縮して２倍量の酢酸エチルを加えた。飽和重曹水で洗浄し、得られた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過及び濃縮して粗製固体を得た。この粗製固体をシリカゲル（ＰＱＳ１００Ｂ、展開溶媒：ヘキサン／酢酸エチル＝４→２．３）で精製した。得られた濃縮液にヘキサンを加え、析出した固体をろ取して無色固体の５－ヒドロキシ－４－ベンジルブテノライドを収率６０％、ＧＣ純度９９．６％で得た。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000008
　上述のようにして合成した４種のブテノライド化合物、すなわち、５Ｈ４ＰＢ（式（１）におけるＲ２：フェニル基）、５－ヒドロキシ－４－（４－メチルフェニル）ブテノライド（式（１）におけるＲ２：メチルフェニル基）、５－ヒドロキシ－４－ベンジルブテノライド（式（１）におけるＲ２：ベンジル基）及び５－ヒドロキシ－４－（４－メチルベンジル）ブテノライド（式（１）におけるＲ２：メチルベンジル基）について、以下表１に示す被検試料濃度における試験を行った。ＰＰＡＲγリガンド活性の測定は、被検試料添加後のインキュベート時間を４８時間とした以外は、実施例７と同様にして行った。結果を以下表１及び図１３に示す。以下表に示す値及び図の縦軸はコントロール物質（ＤＭＳＯ）の活性に対する各合成品の活性の割合（％）である。表１及び図１３では被検試料である各種ブテノライド化合物を式（１）におけるＲ２の官能基で表わしている。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000009
　表１及び図１３に示すように、４種の被検試料いずれもＰＰＡＲγリガンド活性を有することがわかった。このうち、表１において＊が付された数値の試験区はコントロールに比べて２倍以上の活性を示し、ｐ＜０．０５（有意差有り）であった。この結果より、５Ｈ４ＰＢ（Ｒ２：フェニル基）及び５－ヒドロキシ－４－（４－メチルフェニル）ブテノライド（Ｒ２：メチルフェニル基）は０．８～１０μｇ／ｍＬの範囲で高い活性を示し、５－ヒドロキシ－４－ベンジルブテノライド（Ｒ２：ベンジル基）は２～４μｇ／ｍＬの範囲で高い活性を示し、５－ヒドロキシ－４－（４－メチルベンジル）ブテノライド（Ｒ２：メチルベンジル基）は４～２０μｇ／ｍＬの範囲で高い活性を示すことが分かった。このうち、５Ｈ４ＰＢ及び５－ヒドロキシ－４－（４－メチルフェニル）ブテノライドは低濃度範囲において高い活性を有し、特に５－ヒドロキシ－４－（４－メチルフェニル）ブテノライドは最も高い活性を有することが明らかとなった。
　［実施例９　食餌性肥満モデルマウスに対する抗肥満作用の検証］
　実施例６で得た５Ｈ４ＰＢを、高脂肪食を給餌したマウスに投与し、その抗肥満作用を検証した。５週齢の雄性Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウス（供給源：日本チャールス・リバー株式会社）を温度が２０～２６℃、湿度が３５～７５％、照明が１２時間（７：００～１９：００）の環境条件下にて、１ケージあたり１匹ずつ単飼した。１週間程度馴化させた後、以下表２に示すように、６～８匹ずつ６群に分けた。試験群のうち、ノーマル群には、試験期間中、通常固形飼料ＣＲＦ１（オリエンタル酵母株式会社製品、３．５７ｋｃａｌ／ｇ）を給餌し、コントロール群及び薬剤投与群には、試験期間中、高カロリー固形飼料Ｄ１２４９２（リサーチダイエット社製品、５．２４ｋｃａｌ／ｇ）を給餌した。飼料は自由摂取とし、飲水も給水瓶からの自由飲水とした。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000010
　各薬剤投与群のマウスに対し、被検物質である５Ｈ４ＰＢ（実施例６にて製造）又は陽性対照物質であるロシグリタゾン（和光純薬工業株式会社製品）を、表２に示す所定の投与量で１日１回１２週間に亘り投与した。なお、ロシグリタゾンは選択的ＰＰＡＲγリガンドであり、ＰＰＡＲγと結合してグルコース、脂肪酸、インスリンの血中濃度を低下させる作用を有する物質である。投与にあたっては、週に１回体重測定を行い、各個体への投与量を算出した。５Ｈ４ＰＢ及びロシグリタゾンはそれぞれ０．５ｗ／ｖ％メチルセルロース水溶液に懸濁させ、同水溶液にて希釈して、投与容量が１０ｍＬ／ｋｇとなるように調整したのち、注射筒及びフレキシブル胃ゾンデを用いて胃内に強制投与した。なお、ノーマル群及びコントロール群のマウスに対しては、０．５ｗ／ｖ％メチルセルロース水溶液のみを１０ｍＬ／ｋｇの投与容量で１日１回１２週間に亘り投与した。
　試験（投与）開始から週１回の頻度で各個体の体重を測定し、試験群ごとの平均値を求めた。結果を図１４に示す。図の縦軸はマウスの体重（ｇ）であり、横軸は試験開始からの日数（日）を示している。図１４に示すように、コントロール群は、試験開始２１日以降、ノーマル群と比較して体重の有意な増加が認められた。また、５Ｈ４ＰＢを投与した群では、コントロール群と比べて、高カロリー食による体重増加が抑制されることが示された。具体的には、試験終了時点（８４日目）における高カロリー食によるコントロール群の体重増加量（コントロール群の体重からノーマル群の体重を減じた値）に対し、５Ｈ４ＰＢを０．０３７μｇ／ｋｇ／日投与した試験群は体重増加が２５．８％抑制され、５Ｈ４ＰＢを０．０１ｍｇ／ｋｇ／日投与した試験群は体重増加が２７．８％抑制された。このように、５Ｈ４ＰＢは高い抗肥満効果があることが認められた。一方、ＰＰＡＲγリガンド活性を有するロシグリタゾンの投与結果によれば、ロシグリタゾンを０．０３７μｇ／ｋｇ／日投与した低用量の試験群ではコントロール群よりも体重が増加し、抗肥満効果は観察されなかった。また、ロシグリタゾンを１０ｍｇ／ｋｇ／日投与した高用量の試験群については５Ｈ４ＰＢを０．０３７μｇ／ｋｇ／日投与した試験群と比較しても体重増加抑制率は低かった。これらより、５Ｈ４ＰＢは低用量の投与であっても抗肥満効果が得られることがわかった。
　［実施例１０　食餌性肥満モデルマウスにおける血中アディポネクチンの測定］
　アディポネクチンは、インスリン抵抗性や糖尿病、動脈硬化等の代謝異常症候群と関係する分泌蛋白である。アディポネクチン欠損マウスは、野生型マウスと比べてインスリン抵抗性を発症しやすく、動脈硬化に罹患しやすい性質を有しており、ヒトにおいてもアディポネクチン濃度の低下と糖尿病及び動脈硬化等の代謝異常症候群とが関連することが知られている。そこで、実施例９における食餌性肥満モデルマウスについて、血中アディポネクチン量を測定する試験を行った。
　実施例９の試験開始から８５日経過した雄性Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスの各個体について、２％イソフルラン麻酔下にてヘパリン添加した注射筒を用いて腹部大静脈より採血を行った。採血量は約０．８ｍＬとした。採取した血液は遠心分離するまで氷冷下で保存し、遠心分離（条件：４℃、約１８００×ｇ、１０分間）した後、上層を回収して血漿を得た。血漿はサンプリングチューブに分注し、測定を行うまで冷凍保存した。各個体から得たマウス血漿中に含まれるマウスアディポネクチン濃度を市販のＥＬＩＳＡキットを用いて測定し、試験群ごとの平均値を求めた。結果を図１５に示す。
　図の縦軸はマウス血漿中のアディポネクチンの濃度（ｎｇ／ｍＬ）であり、棒グラフの各バーは、左側からノーマル群、コントロール群、５Ｈ４ＰＢ０．０３７μｇ／ｋｇ／日投与群、５Ｈ４ＰＢ ０．０１ｍｇ／ｋｇ／日投与群、ロシグリタゾン０．０３７μｇ／ｋｇ／日投与群及びロシグリタゾン１０ｍｇ／ｋｇ／日投与群を示している。この結果によれば、コントロール群と比べて、５Ｈ４ＰＢを投与した群では、アディポネクチン濃度が上昇することが認められた。また、ｔ検定の結果、特に０．０１ｍｇ／ｋｇ／日の投与群において、有意なアディポネクチン濃度の上昇が確認された。これらのことから、５Ｈ４ＰＢの投与により、アディポネクチンが作用するインスリン抵抗性や糖尿病、高脂血症、動脈硬化等の予防・改善効果が得られることがわかった。
　［実施例１１　食餌性肥満モデルマウスにおける血中インスリンの測定］
　実施例１０において、各個体から得たマウス血漿中に含まれるマウスインスリン量を市販のＥＬＩＳＡキットを用いて測定し、試験群ごとの平均値を求めた。結果を図１６に示す。図の縦軸はマウス血漿中のインスリン濃度（ｎｇ／ｍＬ）であり、棒グラフの各バーが示す試験群は上述した図１５と同様である。この結果によれば、肥満による高インスリン血症が認められるコントロール群と比べて、５Ｈ４ＰＢを投与した群では、特に低用量の群において、インスリン濃度の上昇が抑制されていることが確認された。これらのことから、５Ｈ４ＰＢの投与により、インスリン抵抗性や糖尿病の予防・改善効果が得られることがわかった。
　［実施例１２　食餌性肥満モデルマウスにおける血中レプチンの測定］
　レプチンは、食欲と代謝の調節を行うタンパク質ホルモンであるが、肥満により血中レプチン濃度が上昇し、レプチン抵抗性が生じることが知られている。実施例１０において、各個体から得たマウス血漿中に含まれるマウスレプチン量を市販のＥＬＩＳＡキットを用いて測定し、試験群ごとの平均値を求めた。結果を図１７に示す。図の縦軸はマウス血漿中のレプチン濃度（ｐｇ／ｍＬ）であり、棒グラフの各バーが示す試験群は上述した図１５及び図１６と同様である。この結果によれば、肥満による高レプチン血症が認められるコントロール群と比べて、５Ｈ４ＰＢを投与した群では、用量依存的にレプチン濃度の上昇が抑制されていることが確認された。これらのことから、５Ｈ４ＰＢの投与により、レプチン抵抗性や肥満の予防・改善効果が得られることがわかった。
　［実施例１３　食餌性肥満モデルマウスにおける皮下脂肪量及び内臓脂肪量の測定］
　実施例９の試験開始から８５日経過した雄性Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスの各個体について、２％イソフルラン麻酔下にて採血後、安楽死させた。各個体から鼠径部皮下脂肪、精巣周囲脂肪、腎臓周囲脂肪及び腸間膜脂肪を採取して各脂肪の重量を測定し、試験群ごとの平均値を求めた。
　結果を図１８（Ａ）～（Ｄ）に示す。各図の縦軸は測定した各脂肪組織の重量（ｇ）であり、棒グラフの各バーは、左側からノーマル群、コントロール群、５Ｈ４ＰＢ０．０３７μｇ／ｋｇ／日投与群、５Ｈ４ＰＢ ０．０１ｍｇ／ｋｇ／日投与群、ロシグリタゾン０．０３７μｇ／ｋｇ／日投与群及びロシグリタゾン１０ｍｇ／ｋｇ／日投与群を示している。図１８に示すように、この結果によれば、コントロール群と比べて、５Ｈ４ＰＢを投与した群では、高カロリー食による皮下脂肪及び内臓脂肪の蓄積が抑制されることが示された。具体的には、高カロリー食によるコントロール群の各脂肪組織の増加量（コントロール群の脂肪組織重量からノーマル群の脂肪組織重量を減じた値）に対して、５Ｈ４ＰＢを０．０３７μｇ／ｋｇ／日投与した試験群では、鼠径部皮下脂肪は約３５％、精巣周囲脂肪は約１８％、腎臓周囲脂肪は約１３％及び腸間膜脂肪は約１６％、それぞれ脂肪組織の増加が抑制され、５Ｈ４ＰＢを０．０１ｍｇ／ｋｇ／日投与した試験群では、鼠径部皮下脂肪は約３４％、精巣周囲脂肪は約１５％、腎臓周囲脂肪は約１３％及び腸間膜脂肪量は約４０％、それぞれ脂肪組織の増加が抑制された。このように、５Ｈ４ＰＢは低用量の投与において皮下脂肪及び内臓脂肪の蓄積抑制効果があることが認められた。また、ＰＰＡＲγリガンド活性を有するロシグリタゾンの投与結果によれば、ロシグリタゾンを低用量（０．０３７μｇ／ｋｇ／日）で投与した試験群ではコントロール群よりも内臓脂肪量が増加し、内臓脂肪の蓄積抑制効果は観察されなかった。これらより、５Ｈ４ＰＢは低用量の投与であっても皮下脂肪及び内臓脂肪の蓄積抑制効果が得られることがわかった。
　［実施例１４　５Ｈ４ＰＢの投与による肝臓組織への影響の検討］
　実施例１３において、各個体から脂肪組織を採取する際に、肝臓を採取して病理組織検査を行った。病理組織検査所見は以下の通りであった。
　ノーマル群の個体については、肝細胞内に脂肪滴の沈着は認められず、ごく軽度の炎症性細胞の浸潤のみが認められた。他方、コントロール群の個体については、８個体のうち７個体に肝細胞内に小型～大型脂肪滴の沈着がごく軽度～軽度に認められ、ノーマル群と同様に炎症性細胞の浸潤がごく軽度に認められた。５Ｈ４ＰＢを０．０３７μｇ／ｋｇ／日投与した試験群及び０．０１ｍｇ／ｋｇ／日投与した試験群については、肝細胞内の脂肪滴の沈着が全く無いかあるいは弱い沈着に留まった。ロシグリタゾン０．０３７μｇ／ｋｇ／日投与群では、肝細胞内に微細・小型・大型脂肪滴が混在してごく軽度～軽度の沈着が認められ、ロシグリタゾン１０ｍｇ／ｋｇ／日投与群では、これら脂肪滴は増加し、中程度の沈着が認められると共に肝細胞は軽度の肥大を呈していた。
　これらの病理組織検査所見によれば、ロシグリタゾン投与群やコントロール群と比較して、５Ｈ４ＰＢによる肝障害は認められなかった。これにより、５Ｈ４ＰＢが安全性の高い成分であることが確認された。
　以上述べた実施例は全て本発明を例示的に示すものであって限定的に示すものではなく、本発明は他の種々の変形態様及び変更態様で実施することができる。従って本発明の範囲は特許請求の範囲及びその均等範囲によってのみ規定されるものである。
　本発明はＰＰＡＲγが関与する生活習慣病やその他病態を予防又は改善するＰＰＡＲγ活性化剤を提供するため、医療や食品分野（サプリメント、健康食品、機能性食品、特定保健用食品等も含む）の産業において幅広く役立つものである。

Claims (6)

  1. 　式（１）で表わされるブテノライド化合物又はその薬学的に許容される塩を含有することを特徴とするＰＰＡＲγ活性化剤。
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000001
     ［式（１）中、Ｒ１は水素原子、リン酸基、脂肪酸基、置換基を有していてもよい炭素数１～４のアルキル基又は置換基を有していてもよい糖残基を示し、Ｒ２はフェニル基、メチルフェニル基、ジメチルフェニル基、エチルフェニル基、ベンジル基、メチルベンジル基、ジメチルベンジル基、エチルベンジル基、フェネチル基、メチルフェネチル基、ジメチルフェネチル基又はエチルフェネチル基を示す。］
  2. 　前記Ｒ１が水素原子、リン酸基又は置換基を有していてもよい糖残基であり、前記Ｒ２がフェニル基、４－メチルフェニル基、ベンジル基又は４－メチルベンジル基であることを特徴とする請求項１に記載のＰＰＡＲγ活性化剤。
  3. 　糖尿病、インスリン抵抗性、肥満症、体重増加、内臓脂肪蓄積、皮下脂肪蓄積、レプチン抵抗性、脂質代謝異常、高脂血症、動脈硬化及びメタボリックシンドロームからなる群から選択される少なくとも一つの疾病の予防若しくは治療のための医薬であって、請求項１又は２に記載のＰＰＡＲγ活性化剤を含む医薬。
  4. 　糖尿病、インスリン抵抗性、肥満症、体重増加、内臓脂肪蓄積、皮下脂肪蓄積、レプチン抵抗性、脂質代謝異常、高脂血症、動脈硬化及びメタボリックシンドロームからなる群から選択される少なくとも一つの疾病の予防若しくは改善のためのサプリメントであって、請求項１又は２に記載のＰＰＡＲγ活性化剤を含むサプリメント。
  5. 　式（２）で表わされるブテノライド化合物又はその薬学的に許容される塩を有効成分として含有することを特徴とするＰＰＡＲγが関与する病態、症状又は疾患の治療、予防、抑制又は改善用組成物。
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000002
     ［式（２）中、Ｒ１は水素原子、リン酸基、脂肪酸基、置換基を有していてもよい炭素数１～４のアルキル基又は置換基を有していてもよい糖残基を示し、Ｒ２はフェニル基、メチルフェニル基、ジメチルフェニル基、エチルフェニル基、ベンジル基、メチルベンジル基、ジメチルベンジル基、エチルベンジル基、フェネチル基、メチルフェネチル基、ジメチルフェネチル基又はエチルフェネチル基を示す。］
  6. 　前記ＰＰＡＲγが関与する病態、症状又は疾患が、糖尿病、インスリン抵抗性、肥満症、体重増加、内臓脂肪蓄積、皮下脂肪蓄積、レプチン抵抗性、脂質代謝異常、高脂血症、動脈硬化及びメタボリックシンドロームからなる群から選択される１種以上の病態、症状又は疾患であることを特徴とする請求項５に記載の組成物。
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Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP6162312B1 (ja) * 2016-12-13 2017-07-12 日本恒順株式会社 抗酸化剤及び抗酸化用組成物
JP2020050602A (ja) * 2018-09-26 2020-04-02 アサヒグループホールディングス株式会社 脂肪蓄積抑制剤および血中脂質改善剤
WO2022181438A1 (ja) 2021-02-26 2022-09-01 国立大学法人神戸大学 被験試料の皮膚における異物応答反応の惹起性の評価方法、皮膚における異物応答反応の抑制性を有する物質の探索方法、及び、皮膚における異物応答反応を抑制する剤

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR102111048B1 (ko) 2018-07-24 2020-05-14 부산대학교 산학협력단 신규한 디플루오로아세트산 유도체 화합물 및 이를 포함한 조성물

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2005168387A (ja) * 2003-12-10 2005-06-30 Ot Enterprise:Kk 香酢食品とその製造法
JP2009249322A (ja) * 2008-04-04 2009-10-29 Kojun Japan Co Ltd ペルオキシソーム増殖剤応答性受容体αおよびγ活性化剤
JP2011051952A (ja) * 2009-09-04 2011-03-17 Kojun Japan Co Ltd 皮膚角質層水分量の増加用組成物およびその経口摂取用製剤
WO2013187381A1 (ja) * 2012-06-11 2013-12-19 日本恒順株式会社 Ｐｐａｒ活性化剤の製造方法及びｐｐａｒ活性化剤

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP3043118B2 (ja) * 1991-02-22 2000-05-22 株式会社クラレ 共役γ−ヒドロキシブテノライド化合物およびこれを有効成分とする制ガン剤

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2005168387A (ja) * 2003-12-10 2005-06-30 Ot Enterprise:Kk 香酢食品とその製造法
JP2009249322A (ja) * 2008-04-04 2009-10-29 Kojun Japan Co Ltd ペルオキシソーム増殖剤応答性受容体αおよびγ活性化剤
JP2011051952A (ja) * 2009-09-04 2011-03-17 Kojun Japan Co Ltd 皮膚角質層水分量の増加用組成物およびその経口摂取用製剤
WO2013187381A1 (ja) * 2012-06-11 2013-12-19 日本恒順株式会社 Ｐｐａｒ活性化剤の製造方法及びｐｐａｒ活性化剤

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
See also references of EP3167883A4 *
SIMONE, R.D. ET AL.: "Toward the Discovery of New Agents Able to Inhibit the Expression of Microsomal Prostaglandin E Synthase-1 Enzyme as Promising Tools in Drug Development", CHEM. BIOL. DRUG DES., vol. 76, no. 1, 2010, pages 17 - 24, XP055191543, ISSN: 1747-0277 *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP6162312B1 (ja) * 2016-12-13 2017-07-12 日本恒順株式会社 抗酸化剤及び抗酸化用組成物
JP2020050602A (ja) * 2018-09-26 2020-04-02 アサヒグループホールディングス株式会社 脂肪蓄積抑制剤および血中脂質改善剤
WO2022181438A1 (ja) 2021-02-26 2022-09-01 国立大学法人神戸大学 被験試料の皮膚における異物応答反応の惹起性の評価方法、皮膚における異物応答反応の抑制性を有する物質の探索方法、及び、皮膚における異物応答反応を抑制する剤

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