WO2017078099A1 - 癌の治療及び／又は予防用医薬組成物 - Google Patents

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敦子 宮野
裕子 須藤
愛子 高山
大河 荒井
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Definitions

  • the present invention relates to a pharmaceutical composition for treating and / or preventing cancer comprising a polynucleotide derived from microRNA as an active ingredient.
  • Micro RNA is a 16-28 base protein non-translated RNA, and according to miRBase release 21 (http://www.mirbase.org/), it is known that there are currently 2590 types of humans. In recent years, miRNA has attracted attention as a molecule that suppresses the expression of various genes in vivo. There is a region of each miRNA gene on the genome, which is transcribed as a hairpin RNA precursor by RNA polymerase II and dsRNA cleaving enzyme having two RNase III cleavage activities called Drosha in the nucleus and Dicer in the cytoplasm. Cleaved to form mature miRNA. It is known that this mature miRNA is incorporated into a protein complex called RISC, interacts with mRNAs of a plurality of target genes having complementary sequences, and suppresses gene expression (Non-patent Document 1).
  • RISC protein complex
  • miRNAs have been suggested to be associated with human diseases including cancer.
  • many miRNAs such as hsa-miR-6893-5p, hsa-miR-4476, and hsa-miR-575 are used in cancer. It is known to be a pancreatic cancer-specific marker in blood (Non-patent Document 1).
  • An object of the present invention is to identify a miRNA having a therapeutic and / or prophylactic effect common to various cancer types from various miRNAs associated with cancer, and newly using a polynucleotide derived from the miRNA as an active ingredient. It is to provide a pharmaceutical composition for treating and / or preventing various cancers.
  • the present inventors have found a novel polynucleotide that suppresses the growth of cancer cells from miRNA whose expression is increased or decreased in the body fluid or tissue of cancer patients. It came to complete.
  • the present invention has the following features (1) to (14).
  • a pharmaceutical composition for treating and / or preventing cancer comprising a polynucleotide comprising the base sequence represented by SEQ ID NO: 1 or 2 as an active ingredient.
  • the polynucleotide comprises any one of (1) to (3), wherein the polynucleotide comprises the base sequence represented by any one of SEQ ID NOs: 7 to 10, 12, and 13
  • the pharmaceutical composition as described.
  • the cancer is a solid cancer.
  • the solid cancer is breast cancer, renal cancer, pancreatic cancer, colon cancer, lung cancer, brain tumor, stomach cancer, cervical cancer, ovarian cancer, prostate cancer, bladder cancer, esophageal cancer, liver cancer, fibrosarcoma, mastocytoma, The pharmaceutical composition according to (7), selected from the group consisting of melanoma.
  • the pharmaceutical composition according to any one of (1) to (6), wherein the cancer is blood cancer.
  • the pharmaceutical composition according to (9), wherein the blood cancer is leukemia.
  • the carrier wherein the polynucleotide is selected from the group consisting of a non-cationic polymer carrier, a liposome carrier, a dendritic carrier, a nanomaterial carrier, a microparticle carrier, a anatomical carrier, a micelle carrier, a polymer fine particle and a magnetic fine particle.
  • a pharmaceutical composition for treating and / or preventing cancer comprising the pharmaceutical composition according to any one of (1) to (12) and an antitumor agent as active ingredients.
  • a method of treating or preventing cancer in said subject is a pharmaceutical composition for treating and / or preventing cancer.
  • the pharmaceutical composition for the treatment and / or prevention of cancer of the present invention is useful for the treatment and prevention of cancer because it dramatically suppresses the growth of cancer cells of various cancer types.
  • This figure shows a synthetic RNA having the same base sequence as hsa-miR-6893-5p represented by SEQ ID NO: 7, a synthetic RNA having the same base sequence as hsa-miR-4476 represented by SEQ ID NO: 8,
  • the ratio of the cell survival number of ⁇ 1 to the cell survival number (100%) after introduction of the synthetic RNA of the negative control oligo is shown.
  • This figure shows a synthetic RNA having the same base sequence as hsa-miR-6893-5p represented by SEQ ID NO: 7, a synthetic RNA having the same base sequence as hsa-miR-4476 represented by SEQ ID NO: 8, A synthetic RNA having the same base sequence as hsa-miR-6808-5p represented by 9 and a breast cancer cell line MCF after introduction of a synthetic RNA having the same base sequence as hsa-miR-6876-5p represented by SEQ ID NO: 10
  • the ratio of the number of viable cells of ⁇ 7 to the number of viable cells after introduction of synthetic RNA of the negative control oligo (100%) is shown.
  • This figure shows a synthetic RNA having the same base sequence as hsa-miR-6893-5p represented by SEQ ID NO: 7, a synthetic RNA having the same base sequence as hsa-miR-4476 represented by SEQ ID NO: 8, A lung cancer cell line A549 after introduction of a synthetic RNA having the same base sequence as hsa-miR-6808-5p represented by 9 and a synthetic RNA having the same base sequence as hsa-miR-6876-5p represented by SEQ ID NO: 10 The ratio of the number of viable cells to the number of viable cells (100%) after introduction of the synthetic RNA of the negative control oligo is shown.
  • This figure shows a synthetic RNA having the same base sequence as hsa-miR-6893-5p represented by SEQ ID NO: 7, a synthetic RNA having the same base sequence as hsa-miR-4476 represented by SEQ ID NO: 8, A gastric cancer cell line NC1 after introduction of a synthetic RNA having the same base sequence as hsa-miR-6808-5p represented by 9 and a synthetic RNA having the same base sequence as hsa-miR-6876-5p represented by SEQ ID NO: 10 -Shows the ratio of the number of viable cells of N87 to the number of viable cells after introduction of synthetic RNA of the negative control oligo (100%).
  • This figure shows a synthetic RNA having the same base sequence as hsa-miR-6893-5p represented by SEQ ID NO: 7, a synthetic RNA having the same base sequence as hsa-miR-4476 represented by SEQ ID NO: 8, A synthetic RNA having the same base sequence as hsa-miR-6808-5p represented by 9 and a hepatoma cell line HepG2 after introduction of a synthetic RNA having the same base sequence as hsa-miR-676-5p represented by SEQ ID NO: 10 The ratio of the number of viable cells to the number of viable cells (100%) after introduction of the synthetic RNA of the negative control oligo is shown.
  • This figure shows the cell viability of the leukemia cell line Jurkat after introduction of synthetic RNA having the same base sequence as hsa-miR-4476 represented by SEQ ID NO: 8, and the cell viability after introduction of synthetic RNA of the negative control oligo ( 100%).
  • This figure shows a synthetic RNA having the same base sequence as hsa-miR-6893-5p represented by SEQ ID NO: 7, a synthetic RNA having the same base sequence as hsa-miR-4476 represented by SEQ ID NO: 8, A synthetic RNA having the same base sequence as hsa-miR-6808-5p represented by 9 and a colorectal cancer cell line after introduction of a synthetic RNA having the same base sequence as hsa-miR-6876-5p represented by SEQ ID NO: 10 The ratio of the number of viable HCT116 cells to the number of viable cells (100%) after introduction of the synthetic RNA of the negative control oligo is shown.
  • This figure shows a synthetic RNA having the same base sequence as hsa-miR-4476 represented by SEQ ID NO: 8 (the present invention), a synthetic RNA having the base sequence represented by SEQ ID NO: 12 (the present invention), SEQ ID NO: 13 And a synthetic RNA having the same base sequence as hsa-miR-4454 represented by SEQ ID NO: 11 (comparative example) and cell survival of colon cancer cell line HCT116 after introduction The ratio of the number of cells to the number of viable cells (100%) after introduction of the synthetic RNA of the negative control oligo is shown.
  • This figure shows a synthetic RNA having the same base sequence as hsa-miR-6893-5p represented by SEQ ID NO: 7 (the present invention), a synthesis having the same base sequence as hsa-miR-4476 represented by SEQ ID NO: 8.
  • RNA (invention) synthetic RNA having the same base sequence as hsa-miR-575 represented by SEQ ID NO: 14 (comparative example), and synthesis having the same base sequence as hsa-miR-1321 represented by SEQ ID NO: 15
  • the ratio of the cell viability of colon cancer cell line HCT116 after introduction of RNA (Comparative Example) to the cell viability (100%) after introduction of synthetic RNA of the negative control oligo is shown.
  • This figure shows a synthetic RNA having the same base sequence as hsa-miR-6893-5p represented by SEQ ID NO: 7 and a synthetic RNA having the same base sequence as hsa-miR-4476 represented by SEQ ID NO: 8 (each 3 nM ),
  • the ratio (C) to the number of viable cells (100%) after introduction of the synthetic RNA of oligo is shown.
  • This figure shows changes in tumor volume (B) and 13 days after administration of a synthetic RNA having the same base sequence as hsa-miR-4476 represented by SEQ ID NO: 8 and a synthetic RNA of a negative control oligo to tumor-bearing mice.
  • the tumor volume ratio (A) on day is shown.
  • the pharmaceutical composition for the treatment and / or prevention of cancer of the present invention comprises a polynucleotide containing a base sequence represented by CAGGCAGG (SEQ ID NO: 1) or CAGGAAGG (SEQ ID NO: 2) as an active ingredient.
  • a polynucleotide used as an active ingredient is demonstrated.
  • the base sequence represented by SEQ ID NO: 1 is a base sequence identified as a partial sequence on the 5 'end side of hsa-miR-6893-5p (miRBase Accession No. MIMAT0027686) which is a human miRNA.
  • the base sequence represented by SEQ ID NO: 2 is a base sequence identified as a partial sequence on the 5 'end side of hsa-miR-4476 (miRBase Accession No. MIMAT0019003) which is a human miRNA.
  • these miRNAs are known to be part of miRNAs that are specific markers for pancreatic cancer (Kojima M PLoS One.
  • the polynucleotide is not particularly limited as long as it contains the base sequence represented by SEQ ID NO: 1 or 2. That is, the polynucleotide itself of the base sequence represented by SEQ ID NO: 1 or 2 may be used, or another polynucleotide may be provided on the 5 ′ end side or 3 ′ end side of the base sequence represented by SEQ ID NO: 1 or 2. A base sequence may be added, but a polynucleotide in which another base sequence is added to the 3 ′ end side of the base sequence represented by SEQ ID NO: 1 or 2 is preferable. Further, the base length of the base sequence of the polynucleotide is preferably 8 to 60 bases, more preferably 16 to 28 bases.
  • the base sequence added to the 3 ′ end side of the base sequence represented by SEQ ID NO: 1 or 2 is preferably a base sequence containing the following (a) or (b) as a partial sequence, more preferably: Of (a) or (b) on the 5 ′ end side, more preferably a base sequence consisting of the following (a) or (b).
  • a base sequence in which one base is deleted, substituted, inserted and / or added.
  • Preferred specific examples of the polynucleotide in which another base sequence is added to the 3 ′ end of the base sequence represented by SEQ ID NO: 1 or 2 include those represented by any one of SEQ ID NOs: 7 to 10, 12, and 13. And a polynucleotide comprising a base sequence.
  • the polynucleotide comprising the base sequence represented by any of SEQ ID NOs: 7 to 10 is known as a miRNA that has already been identified in humans.
  • the name of these miRNAs and miRBBase Accession No. (Registration number) is as shown in Table 1.
  • Hsa-miR-6893-5p which is a miRNA having the nucleotide sequence represented by SEQ ID NO: 7, is represented by the nucleotide sequence represented by SEQ ID NO: 1 at the 8th position from the 5 'end, and SEQ ID NO: 3 after the ninth position. It consists of a base sequence. As described above, it is known to be a specific marker for pancreatic cancer, but there has been no report that a compound using a gene or a sequence of its transcription product can suppress tumor cells.
  • Hsa-miR-4476 which is a miRNA having the base sequence represented by SEQ ID NO: 8, has a base sequence represented by SEQ ID NO: 2 at the 8th base sequence from the 5 ′ end, and SEQ ID NO: 4 from the ninth position. It consists of the base sequence represented. Jim DD et al., 2010, Blood. , 116, p118-127.
  • hsa-miR-4476 is known as hsa-mir-4476 (miRBase Accession No. MI0016828), which has a hairpin-like structure as a precursor, but the gene or its transcription product sequence has been used so far. There are no known reports that the compounds can inhibit tumor cells.
  • Hsa-miR-6808-5p which is a miRNA having the base sequence represented by SEQ ID NO: 9, has a base sequence represented by SEQ ID NO: 1 from the 5 ′ end and a base sequence represented by SEQ ID NO: 1 after the ninth. It consists of a base sequence represented by 5.
  • hsa-miR-6808-5p is known as hsa-mir-6808-5p (miRBase Accession No. MI0022653), which has a hairpin-like structure as a precursor thereof.
  • hsa-mir-6808-5p miRBase Accession No. MI0022653
  • Hsa-miR-6876-5p which is a miRNA having the base sequence represented by SEQ ID NO: 10
  • hsa-miR-6876-5p is known as hsa-mir-6876p (miRBase Accession No. MI0022723), which has a hairpin-like structure as a precursor thereof.
  • hsa-mir-6876p miRBase Accession No. MI0022723
  • a polynucleotide containing the nucleotide sequence represented by SEQ ID NO: 12 is known as a cancer marker on the 3 ′ end side of the nucleotide sequence represented by SEQ ID NO: 2, but reports of suppressing tumor cells are known.
  • Hsa-miR-4454 Kojima M PLoS One.10 (2) (2015) “MicroRNA markers for the diagnostic of radicals” and miraces with the base sequence represented by SEQ ID NO: 11 Is an artificial polynucleotide obtained by fusing the 9th and subsequent base sequences (SEQ ID NO: 16) from the 5′-end side.
  • a polynucleotide comprising the base sequence represented by SEQ ID NO: 13 is 5 ′ of the above-mentioned hsa-miR-6893-5p (SEQ ID NO: 7) on the 3 ′ end side of the base sequence represented by SEQ ID NO: 2. It is an artificial polynucleotide in which the ninth and subsequent base sequences (SEQ ID NO: 3) are fused from the terminal side.
  • the polynucleotide may have any structure as long as it can exert a therapeutic and / or preventive effect on cancer.
  • the polynucleotide may have a single-stranded structure, a double-stranded structure, or a multiple structure of three or more, preferably Is a single-stranded or double-stranded structure, more preferably a single-stranded structure.
  • the polynucleotide may be RNA, DNA or RNA / DNA (chimera) as long as it can exert an effect of treating and / or preventing cancer (in addition, the polynucleotide is described in the sequence listing).
  • U uracil
  • T thymine
  • RNA Preferably RNA.
  • RNA from the viewpoint of gene control involved in tumor cell suppression, in addition to the aforementioned miRNA, mRNA, rRNA, non-coding RNA, siRNA, shRNA, snoRNA, snRNA, nkRNA (registered trademark) , PnkRNA (trademark) and the like, and miRNA is preferable.
  • miRNA includes synthetic miRNA called so-called mimic.
  • the polynucleotide that can be used in the present invention can include at least one modified nucleotide analog.
  • Nucleotide analogs can be located, for example, at the 5 'end, 3' end and / or within the RNA molecule. In particular, it can be stabilized by incorporating modified nucleotide analogues.
  • Preferred nucleotide analogues are sugar or backbone modified ribonucleotides, more preferably ribonucleotides modified with nucleobases, ie ribonucleotides containing non-naturally occurring nucleobases.
  • non-naturally occurring nucleobases include uridine modified at the 5-position, or cytidine, such as 5-methyluridine, 5- (2-amino) propyluridine, 5-methyl-2-thiouridine, or 5- Bromouridine, 6-azouridine, adenosine and guanosine modified at position 8, such as 8-bromoguanosine, deazanucleotide, 7-deazaadenosine; O- and N-alkylated nucleotides, N6-methyladenosine, universal base Etc.
  • uridine modified at the 5-position or cytidine, such as 5-methyluridine, 5- (2-amino) propyluridine, 5-methyl-2-thiouridine, or 5- Bromouridine, 6-azouridine, adenosine and guanosine modified at position 8, such as 8-bromoguanosine, deazanucleotide, 7-deazaadenosine; O- and N-alkyl
  • Preferred sugar-modified ribonucleotides include a 2′OH group substituted with a group selected from the group consisting of H, OR, halo, SH, SR, NH 2 , NHR, NR 2 , CN, or 2′-O, 4 It may contain a '-C methylene bridge or an ethylene bridge (for example, LNA or ENA).
  • R is C1-C6 alkyl, alkenyl or alkynyl and halo is F, Cl, Br or I.
  • the sugar moiety may also be mannose, arabinose, glucopyranose, galactopyranose, 4′-thioribose and other sugars, heterocycles or carbocycles.
  • Preferable backbone chain-modified ribonucleotides include phosphoester groups that bind adjacent ribonucleotides, such as phosphothioate group modification groups, boranophosphates, 3 ′-(or 5 ′-) deoxy-3 ′-(or 5 '-) Substitution with aminophosphoramidates, hydrogen phosphonates, boranophosphates, phosphoramidates, alkyl or aryl phosphonates and phosphotriesters or phosphorus linkages. You may combine the modification mentioned above.
  • the pharmaceutical composition for the treatment and / or prevention of cancer of the present invention may contain a pharmaceutically acceptable carrier in addition to the polynucleotide.
  • a pharmaceutically acceptable carrier is a substance that facilitates the selective transport of the polynucleotide to a target cancer cell or cancer tissue, does not stimulate an organism, and the activity and properties of the polynucleotide. It is preferable that the antibody does not inhibit the antibody, and that it does not itself induce the production of antibodies harmful to the individual administered the composition.
  • the size of the carrier a size that does not permeate the normal blood vessel wall but can permeate the neovascular wall in the cancer tissue is preferable.
  • the diameter of the carrier can be preferably a nano size of, for example, about 1 nm or more and less than 1000 nm.
  • the carrier may include the polynucleotide or may be movably bound.
  • “Mobilly linked” refers to an electronic interaction between a carrier and one or more agents. Such interactions include, but are not limited to, forms of chemical bonds including covalent bonds, polar covalent bonds, ionic bonds, electrostatic bonds, coordinated covalent bonds, aromatic bonds, hydrogen bonds, dipoles or van der Waals interactions. You may take
  • the binding portion between the polynucleotide and the carrier is preferably on the 5 'end side or 3' end side, more preferably on the 5 'end side.
  • the carrier include a non-cationic polymer carrier, a liposome carrier, a dendritic carrier, a nanomaterial (nanomaterial) carrier, a microparticle carrier, a biological structure (biostructural) carrier, a micelle carrier, a polymer fine particle, and a magnetic material. Fine particles are mentioned.
  • the non-cationic polymer carrier can encapsulate one or more agents and / or can be movably linked, eg, an anionic (ie, negatively charged) polymer or electronically neutral flocculent Alternatively, it can be a branched polymer.
  • the form may be microparticles or nanoparticles, may be water-soluble or water-insoluble, and may be biodegradable or non-biodegradable. Suitable non-cationic polymer carriers are known to those skilled in the art.
  • poly-L-glutamic acid PGA
  • poly-( ⁇ -L-glutamylglutamine) PGGA
  • poly- ( ⁇ -L-aspartylglutamine) PGAA
  • poly- (lactic acid-co-glycolic acid) PLGA
  • PGA poly-L-glutamic acid
  • PGGA poly- ( ⁇ -L-glutamylglutamine)
  • PGAA poly- ( ⁇ -L-aspartylglutamine)
  • PLGA poly- (lactic acid-co-glycolic acid) or a mixture of at least two polymers.
  • Liposomal carriers contain lipids attached to polar hydrophilic groups that form a substantially closed structure that can encapsulate one or more agents and / or can be movably linked in an aqueous medium.
  • a lipid bilayer structure comprising, may comprise a single lipid bilayer (ie, unilamellar), or may comprise two or more concentric lipid bilayers (ie, multilamellar).
  • the liposome carrier may have a substantially spherical shape or a substantially elliptical shape.
  • Suitable liposome carriers are known to those skilled in the art and are selected based on various characteristics such as the rigidity of the lipid bilayer, the electronic charge of the lipid bilayer and / or the compatibility of one or both of the agents with the liposome carrier. can do.
  • natural phospholipids such as egg phosphatidylcholine, egg phosphatidylethanolamine, soybean phosphatidylcholine, lecithin and sphingomyelin, synthetic phosphatidylcholine, lysophosphatidylcholine, phosphatidylglycerol, phosphatidic acid, phosphatidylethanolamine, dioctadecylamidoglycylspermine, dioleoylphosphatidyl Ethanolamine, N- [1- (2,3-dioleyloxy) propyl] -N, N, N-trimethylammonium chloride, 2,3-dioreoxyoroxy-N- [2- (sperminecarboxamido) ethyl ] -N, N-dimethyl-1-propaneammonium trifluoroacetamide, phosphatidylserine and derivatives thereof, PEGylated phospholipid and the like.
  • the dendritic carrier can contain one or more agents and / or can be movably linked, for example, dendrimers, dendrons or derivatives thereof.
  • Dendrimers are macromolecules having a core and a plurality of branched shells extending from the core.
  • a dendron is a type of dendrimer with branches extending from the focal point.
  • Dendritic carriers are commercially available or can be synthesized by methods known to those skilled in the art. At least a portion of the dendritic carrier may be hydrophobic or hydrophilic.
  • the dendritic carrier may be cationic, electronically neutral or anionic.
  • alkyldiamines such as ethylenediamine, 1,4-diaminobutane, 1,6-diaminohexane and 1,12-diaminodecane
  • amines such as ammonia, cystamine, polyethyleneimine (PEI), etc.
  • PEI polyethyleneimine
  • chlorinated phosphorus molecules such as alkylimines, cyclotriphosphazenes and thiophosphoryls.
  • polyalkylimines such as polypropyleneimine (PPI) and DAB-Am-16
  • tertiary amines such as polyamidoamine (PAMAM)
  • polyamino acids such as polylysine
  • PMMH phenoxymethyl (methylhydrazono)
  • the nanomaterial carrier may be a material that has a longest dimension in the range of, for example, about 1 nm to about 100 nm, can enclose one or more agents, and / or can be movably bonded.
  • Suitable nanomaterial carriers are known to those skilled in the art and include nanoparticles, nanopowders, nanoclusters, nanocrystals, nanospheres, nanofibers, nanotubes, nanoclusters, nanocrystals, nanospheres, nanofibers, nanotubes, nanogels and nanorods May be included.
  • the materials constituting the nanomaterial carrier include poly- (lactic acid-co-glycolic acid) (PLGA), polyalkylcyanoacrylate (PACA), polyepsilon-caprolactone (PCL), polylactic acid (PLA), polyethylene glycol. (PEG), poly-N-vinylcaprolactam sodium acrylate, poly-N-iropropylacrylamide, polyvinyl acetate and the like.
  • the nanomaterial carrier may be fullerene, and may include spherical fullerene (for example, C60), carbon nanotube, and fullerene derivative.
  • the microparticle carrier can be, for example, particles having a longest dimension in the range of about 100 to about 1000 nm.
  • the microparticles may have any shape and any form.
  • Substances constituting the microparticle carrier include poly- (lactic acid-co-glycolic acid) (PLGA), polyalkylcyanoacrylate (PACA), polyepsilon-caprolactone (PCL), polylactic acid (PLA), PLGA, polyethylene glycol. (PEG) and the like are exemplified.
  • Biostructure carrier refers to a polymer or compound in which a large number of units of the biostructure carrier are amino acids and / or saccharides and can contain one or more agents and / or are movably linked.
  • Suitable anatomical carriers are known to those skilled in the art and include sugars, monosaccharides, oligosaccharides, polysaccharides, cyclic polysaccharides, acyclic polysaccharides, linear polysaccharides, branched polysaccharides, amino acids, proteins and peptides, and semi-syntheses thereof.
  • Derivatives may also be included, such as ⁇ -cyclodextrin, ⁇ -cyclodextrin, ⁇ -cyclodextrin, methyl ⁇ -cyclodextrin, dimethyl- ⁇ -cyclodextrin, carboxymethyl- ⁇ -cyclodextrin, hydroxypropyl- ⁇ -cyclo Dextrin, sulfobutyl ether- ⁇ -cyclodextrin, tri-O-methyl- ⁇ -cyclodextrin, glucosyl- ⁇ -cyclodextrin, ⁇ 1,3D glucan, ⁇ 1,6 glucan, C-reactive protein, conalbumin, lactalbumin, ovo Albumin, parvalbumin, serum Bumine, technetium TC99m aggregated albumin, human serum albumin (HSA), bovine serum albumin (BSA), recombinant human serum albumin (rHSA), glucose (dextrose), fructose, galactose, xylose,
  • the micelle carrier is a micelle structure in which lipids, arbitrary fat-soluble (ie, lipophilic) molecules, oils, waxes, sterols, monoglycerides, diglycerides, triglycerides, phospholipids, and the like have a micelle structure.
  • Polyalkylene glycols such as polyethylene glycol (PEG), polyamino acids such as polyaspartic acid and polyglutamic acid (PGA), poly- ( ⁇ -L-glutamylglutamine) (PGGA), polyphenylene oxide (PPO), poly ( ⁇ -caprolactone) ) (PCL), poly (lactic acid-co-glycolic acid) (PLGA), diblock copolymers, and the like.
  • the carrier may also be a conjugate, a nucleotide linker, non-nucleotide linker, or nucleotide / non-nucleotide composite linker, polyethylene glycol, human serum albumin or cellular uptake that links the sense and antisense regions of the nucleic acid. It may contain a ligand for a cellular receptor capable of inducing.
  • the nucleotide linker may be a linker having a length of 2 nucleotides or more, and may be a nucleic acid aptamer.
  • the polynucleotide may further contain at least one selected from a pharmaceutically acceptable excipient, a pharmaceutical carrier, and a diluent.
  • a diluent, a dispersant, a surfactant, a binder, and a lubricant may be additionally added to a parenteral dosage form such as an injection dosage form, a form suitable for oral, rectal, nasal, topical, subcutaneous, vaginal or parenteral administration, or a pill, capsule
  • the carrier is preferably sterilized and suitable for living organisms, and other usual additives such as an antioxidant, a buffer solution, and a bacteriostatic agent may be added.
  • Preferred are large, slowly metabolized macromolecules such as proteins, polysaccharides, polylactose, polyglycolic acid, polymeric amino acids, amino acid copolymers, lipid aggregates, hydrogels and inactive virus particles, collagens.
  • liquids such as water, saline, sterile water, Ringer's solution, buffered saline, albumin injection solution, dextrose solution, maltodextrin solution, glycerol and ethanol, wetting or emulsifying agents, pH buffering.
  • auxiliary substances such as substances may also be included.
  • Administration means introduction of a pharmaceutical composition for treating cancer containing the polynucleotide as an active ingredient into a patient by any appropriate method, and transportation of the polynucleotide by viral or non-viral techniques, or Transplantation of cells expressing the polynucleotide.
  • the administration route can be administered via various oral and parenteral routes as long as the target tissue can be reached.
  • it can be administered by oral, rectal, topical, intravenous, intraperitoneal, intramuscular, intraarterial, transdermal, intranasal, inhalation, intraocular or intradermal route.
  • the dose varies depending on the purpose of administration, the administration method, the type and size of the tumor, and the situation (gender, age, weight, etc.) of the administration subject (ie, subject). Typically, dosage is administered at a lower level and increased until the desired effect is achieved.
  • Suitable dosages of the polynucleotide may be, for example, in the range of 1 pmol to 100 nmol per kilogram body weight, in the range of 0.001 to 0.25 mg per kilogram body weight, and 0.01 to 20 ⁇ g per kg body weight. The range may be in the range of 0.10 to 5 ⁇ g / kg body weight, but is not limited thereto.
  • Such dose is preferably administered 1 to 10 times, more preferably 5 to 10 times.
  • the polynucleotide may be provided in a form introduced into a cell.
  • introducing into a cell is meant that an exogenous polynucleotide is caused to flow into a cell by transfection or transduction.
  • Plasma infections include, for example, calcium phosphate-DNA coprecipitation, DEAE-dextran-mediated transfection, polybrene-mediated transfection, electroporation, microinjection, liposome fusion, lipofectamine transfection, and Transfecting means a method of transfecting, etc.
  • Transduction means virus or virus vector particles (for example, vectors such as adenovirus, adeno-associated virus, Sendai virus, retrovirus (lentivirus, etc.)) by means of infection.
  • a plasmid vector is used to transfer a gene into other cells.
  • the vector can contain elements necessary for allowing expression of the polynucleotide in the present invention (for example, a promoter), and can be prepared by a known technique (for example, Sambrook and Russell, Molecular Cloning A Laboratory). Manual (4 th Ed., 2001), Cold Spring Harbor Laboratory Press, JP 2016-153403 A, JP 2016-025853 A, and the like).
  • a cell into which the polynucleotide is introduced by such a method can express the nucleotide sequence at a high level, a cell therapeutic agent that suppresses the growth of cancer by transplanting such a cell into a cancer tissue.
  • a cell therapeutic agent that suppresses the growth of cancer by transplanting such a cell into a cancer tissue.
  • tumor and cancer refer to malignant neoplasms and are used interchangeably.
  • the target cancer is not particularly limited, but specific examples of solid cancer include bladder, bone, bone marrow, brain, breast, colon / rectum, esophagus, digestive tract, gingiva, head, kidney, liver, lung, nasopharynx Cancer and cancer cells in the cervix, ovary, prostate, skin, stomach, testis, tongue, blood, or uterus.
  • breast cancer, renal cancer, pancreatic cancer, colon cancer, lung cancer, brain cancer, stomach cancer, cervical cancer, endometrial cancer, ovarian cancer, prostate cancer, bladder cancer, esophageal cancer, liver cancer, fibrosarcoma, mastocytoma and melanoma Is mentioned.
  • These specific cancers include, for example, breast cancer, composite breast cancer, malignant mixed breast tumor, intraductal papillary adenocarcinoma, lung adenocarcinoma, squamous cell carcinoma, small cell carcinoma, large cell carcinoma, neuroepithelium.
  • Glioma cerebral ependymoma, neuronal tumor, fetal neuroectodermal tumor, schwannoma, neurofibroma, meningioma, chronic lymphocytic leukemia, lymphoma, gastrointestinal tract Lymphoma, digestive lymphoma, small to medium cell lymphoma, cecal cancer, ascending colon cancer, descending colon cancer, transverse colon cancer, sigmoid colon cancer, rectal cancer, ovarian epithelial cancer, germ cell tumor, stromal cell tumor , Pancreatic duct cancer, invasive pancreatic duct cancer, pancreatic cancer adenocarcinoma, acinar cell carcinoma, adenosquamous cell carcinoma, giant cell tumor, intraductal papillary mucinous tumor, mucinous cystadenocarcinoma, pancreatic blastoma, serous cyst gland Cancer, solid papillary carcinoma, gastrinoma, glucagonoma, insulinoma, multiple
  • mammals for example, primates such as humans, domestic animals such as cows, pigs, sheep, and horses, pet animals such as dogs and cats, and breeds in zoos. Including mammals, etc., preferably humans.
  • a pharmaceutical composition comprising a combination of a pharmaceutical composition for treating and / or preventing cancer comprising the polynucleotide as an active ingredient and another antitumor agent (that is, a pharmaceutical composition comprising another antitumor agent).
  • Another antitumor agent that is, a pharmaceutical composition comprising another antitumor agent.
  • An anti-tumor effect can be increased by administering a “combination drug”) to the subject.
  • the pharmaceutical composition for treatment and / or prevention of cancer of the present invention and another antitumor agent that is, a pharmaceutical composition containing another antitumor agent
  • any pharmaceutical composition may be earlier or later, and the administration interval, dosage, administration route and frequency of administration can be appropriately selected by a specialist.
  • the pharmaceutical composition for treating and / or preventing cancer and another antitumor agent are mixed in a pharmaceutically acceptable carrier (or vehicle) and formulated.
  • a pharmaceutically acceptable carrier or vehicle
  • the pharmaceutical composition also referred to as “mixed medicine” obtained in this way is also included.
  • antitumor agent examples include the following antitumor agents known in the literature.
  • Alkylating agents such as thiotepa and cyclosphamide, alkyl sulfonates such as busulfan, improsulfan and piperosulfan (ie, “such as”); aziridines such as benzodopa, carbocon, metresorpa, and ureedopa; Ethyleneimines such as amines, triethyleneamine, triethylenephosphoramide, triethylenethiophosphoramide and trimethylolamine; acetogenins such as bratacin and bratacinone; camptothecin; bryostatin; calistatin; cryptophysin 1, cryptophysin 8; Dolastatin; duocarmycin; erosrobin; panclastatin; sarcodictin; spongestatin; chlorambucil, chlornafazine, colophosphamide, et Nitrogen mustard such as tramustine; ifosfamide, mechlorethamine, mechloreth
  • Anticancer antibiotics include calicheamicin, dynemycin, clodronate, esperamycin, aclacinomycin, actinomycin, ausramycin, azaserine, bleomycin, cactinomycin, carabicin, carminomycin, cardinophilin, chromomycin, Dactinomycin, daunorubicin, detorubicin, 6-diazo-5-oxo-L-norleucine, adriamycin (doxorubicin), bleomycin, aclarubicin, amrubicin, epirubicin, esorubicin, idarubicin, merceromycin, mitomycin C, mycophenolic acid, nogaramicin, Orivomycin, Pepromycin, Potophylomycin, Puromycin, Keramycin, Rodolubicin, Streptonigrin, Strept Putozoshin, tubercidin, ubenimex, zinostatin
  • Antimetabolites such as folic acid analogs such as denopterin, pteropterin, methotrexate, trimetrexate, pemetrexed; purine analogs such as fludarabine, 6-mercaptopurine, thiapurine, thioguanine, cladribine, clofarabine; ancitabine, azacitidine, 6 -Pyrimidine analogues such as azauridine, carmofur, cytarabine, dideoxyuridine, doxyfluridine, enocitabine, furoxyuridine, trifluridine, capecitabine, 5-FU, gemcitabine, S-1, tegafur; hydroxycarbamide, nelarabine and the like.
  • folic acid analogs such as denopterin, pteropterin, methotrexate, trimetrexate, pemetrexed
  • purine analogs such as fludarabine, 6-mercaptopurine, thiapurine, thiogu
  • hormone preparations include anastrozole, bicalutamide, degarelix, estramustine, exemestane, flutamide, fulvestrant, goserelin, letrozole, leuprin, medroxyprogesterone, mepithiostane, octreotide, tamoxifen, toremifene, such as carsterone, propione Androgenic preparations such as acid drostanolone, epithiostanol, mepithiostane, test lactone, enzalutamide; anti-adrenal preparations such as aminoglutethimide, mitotan, trilostane; floric acid, acegraton, aldophosphamide glycoside, aminolevulinic acid, enyl Uracil, amsacrine, best love sill, bisantrene, edatralxate, defofamine, demecorsin, diazi ON, Erformit
  • anticancer agents such as plants include docetaxel, etoposide, teniposide, irinotecan, nogiteccan, paclitaxel, cabazitaxel, vinblastine, vincristine, vindesine, vinorelbine, carboplatin, cisplatin, dacarbazine, eribulin, L-asparamitocin, thromplatin, miriplatin, Examples include nedaplatin, oxaliplatin, pentostatin, procarbazine, arsenic trioxide, sobuzoxane, tamovarotene, mitoxantrone, novantron, edatrexate, ibandronate, topoisomerase inhibitor, difluoromethylolnitine (DMFO), retinoic acid and the like.
  • DMFO difluoromethylolnitine
  • molecular target drugs examples include afatinib, axitinib, alectinib, bevacizumab, cetuximab, crizotinib, erlotinib, everolimus, gefitinib, lapatinib, lamuscilmab, panitumumab, pazopanib, pertuzumab, nivolumab, periuzumab, As well as their pharmaceutically acceptable salts or derivatives.
  • the radioisotope is preferably effective for tumor treatment and diagnosis, and such a radioisotope may also be included in the pharmaceutical composition for treating and / or preventing cancer in the present invention.
  • the present invention suffers from cancer with the pharmaceutical composition for the treatment and / or prevention of cancer of the present invention, or a combination pharmaceutical comprising the pharmaceutical composition and the another antitumor agent ( Also provided is a method of treating and / or preventing cancer in a subject comprising administering to the subject (or having suffered from cancer).
  • prevention includes prevention of cancer recurrence to reduce the risk of recurrence after cancer treatment in cancer therapy such as surgery, chemotherapy, radiation therapy, immunotherapy and the like.
  • RNA having the same base sequence as hsa-miR-6893-5p represented by SEQ ID NO: 7, same as hsa-miR-4476 represented by SEQ ID NO: 8 A synthetic RNA having a base sequence, a synthetic RNA having the same base sequence as hsa-miR-6808-5p represented by SEQ ID NO: 9, and a base sequence the same as hsa-miR-6676-5p represented by SEQ ID NO: 10
  • the effectiveness of each of the synthetic RNAs possessed on pancreatic cancer cells was evaluated.
  • Panc-1 cell line was cultured as a pancreatic cancer cell in DMEM medium (Nacalai Tesque, Japan) containing 10% FBS under conditions of 37 ° C. and 5% CO 2 .
  • An RNA synthetic product (Thermo Fisher Scientific Co., Ltd.) having a base sequence represented by SEQ ID NOs: 7, 8, 9 and 10 at a concentration of 30 nM, seeding 6 ⁇ 10 3 cells per well in a 96-well plate , MirVana TM miRNA Mimics) or negative control oligos (Thermo Fisher Scientific, mirVana TM miRNA Mimic, Negative Control) were transfected using Lipofectamine RNAiMAX (Thermo Fisher Scientific).
  • the culture medium was changed, and the number of cells was counted for 5 days.
  • the number of cells was determined by measuring the ATP activity using a Celter-glo (Promega) reagent and determining the number of viable cells.
  • n 3, and the graph shows the mean ⁇ standard deviation.
  • pancreatic cancer cells into which each of the RNA synthetic products having the nucleotide sequences represented by SEQ ID NOs: 7, 8, 9 and 10 were introduced had a cell survival ratio of 50 compared to the pancreatic cancer cells into which the negative control oligo had been introduced. %, 51%, 39% and 50%. The results are shown in FIG.
  • RNA having the same base sequence as hsa-miR-6893-5p represented by SEQ ID NO: 7, same as hsa-miR-4476 represented by SEQ ID NO: 8 A synthetic RNA having a base sequence, a synthetic RNA having the same base sequence as hsa-miR-6808-5p represented by SEQ ID NO: 9, and a base sequence the same as hsa-miR-6676-5p represented by SEQ ID NO: 10
  • the effectiveness of each of the synthetic RNAs possessed on breast cancer cells was evaluated.
  • MCF-7 cell line (ATCC) was cultured as a breast cancer cell in RPMI medium (Nacalai Tesque, Japan) containing 10% FBS under conditions of 37 ° C. and 5% CO 2 .
  • An RNA synthetic product (Thermo Fisher Scientific Co., Ltd.) having a base sequence represented by SEQ ID NOs: 7, 8, 9 and 10 at a concentration of 30 nM, seeding 6 ⁇ 10 3 cells per well in a 96-well plate , MirVana TM miRNA Mimics) or negative control oligos (Thermo Fisher Scientific, mirVana TM miRNA Mimic, Negative Control) were transfected using Lipofectamine RNAiMAX (Thermo Fisher Scientific).
  • the culture medium was changed, and the number of cells was counted for 5 days.
  • the number of cells was determined by measuring the ATP activity using a Celter-glo (Promega) reagent and determining the number of viable cells.
  • n 3, and the graph shows the mean ⁇ standard deviation.
  • the cell survival ratio was 52 compared to the breast cancer cells into which the negative control oligo was introduced. %, 52%, 39% and 64%. The results are shown in FIG.
  • RNA having the same base sequence as hsa-miR-6893-5p represented by SEQ ID NO: 7, same as hsa-miR-4476 represented by SEQ ID NO: 8 A synthetic RNA having a base sequence, a synthetic RNA having the same base sequence as hsa-miR-6808-5p represented by SEQ ID NO: 9, and a base sequence the same as hsa-miR-6676-5p represented by SEQ ID NO: 10
  • the effectiveness of each of the synthetic RNAs possessed on lung cancer cells was evaluated.
  • the A549 cell line (ATCC) as lung cancer cells was cultured in RPMI medium (Nacalai Tesque, Japan) containing 10% FBS under conditions of 37 ° C. and 5% CO 2 .
  • An RNA synthetic product (Thermo Fisher Scientific Co., Ltd.) having a base sequence represented by SEQ ID NOs: 7, 8, 9 and 10 at a concentration of 30 nM in a 96-well plate with 3 ⁇ 10 3 cells per well.
  • MirVana TM miRNA Mimics or negative control oligos (Thermo Fisher Scientific, mirVana TM miRNA Mimic, Negative Control) were transfected using Lipofectamine RNAiMAX (Thermo Fisher Scientific).
  • the culture medium was changed, and the number of cells was counted for 5 days.
  • the number of cells was determined by measuring the ATP activity using a Celter-glo (Promega) reagent and determining the number of viable cells.
  • n 3, and the graph shows the mean ⁇ standard deviation.
  • the cell survival ratio was 44 in comparison with the lung cancer cells into which the negative control oligo was introduced. %, 9%, 23% and 22%. The results are shown in FIG.
  • RNA having the same base sequence as hsa-miR-6893-5p represented by SEQ ID NO: 7, same as hsa-miR-4476 represented by SEQ ID NO: 8 A synthetic RNA having a base sequence, a synthetic RNA having the same base sequence as hsa-miR-6808-5p represented by SEQ ID NO: 9, and a base sequence the same as hsa-miR-6676-5p represented by SEQ ID NO: 10
  • the efficacy of the synthetic RNA possessed on gastric cancer cells was evaluated.
  • NC1-N87 cell line (ATCC) as a gastric cancer cell was seeded in RPMI medium (Nacalai Tesque) containing 10% FBS and cultured under conditions of 37 ° C. and 5% CO 2 .
  • An RNA synthetic product (Thermo Fisher Scientific Co., Ltd.) having a base sequence represented by SEQ ID NOs: 7, 8, 9 and 10 at a concentration of 30 nM in a 96-well plate with 3 ⁇ 10 3 cells per well.
  • MirVana TM miRNA Mimics or negative control oligos
  • Thermo Fisher Scientific, mirVana TM miRNA Mimic, Negative Control were transfected using Lipofectamine RNAiMAX (Thermo Fisher Scientific).
  • the culture medium was changed, and the number of cells was counted for 5 days.
  • the number of cells was determined by measuring the ATP activity using a Celter-glo (Promega) reagent and determining the number of viable cells.
  • n 3, and the graph shows the mean ⁇ standard deviation.
  • RNA having the same base sequence as hsa-miR-6893-5p represented by SEQ ID NO: 7, same as hsa-miR-4476 represented by SEQ ID NO: 8 A synthetic RNA having a base sequence, a synthetic RNA having the same base sequence as hsa-miR-6808-5p represented by SEQ ID NO: 9, and a base sequence the same as hsa-miR-6676-5p represented by SEQ ID NO: 10
  • the effectiveness of the synthetic RNA possessed on hepatoma cells was evaluated.
  • HEPG2 cell line As a hepatoma cell, HEPG2 cell line (ATCC) was seeded in RPMI medium (Nacalai Tesque) containing 10% FBS, and cultured under conditions of 37 ° C. and 5% CO 2 .
  • An RNA synthetic product (Thermo Fisher Scientific Co., Ltd.) having a base sequence represented by SEQ ID NOs: 7, 8, 9 and 10 at a concentration of 30 nM, seeding 6 ⁇ 10 3 cells per well in a 96-well plate , MirVana TM miRNA Mimics) or negative control oligos (Thermo Fisher Scientific, mirVana TM miRNA Mimic, Negative Control) were transfected using Lipofectamine RNAiMAX (Thermo Fisher Scientific).
  • the culture medium was changed, and the number of cells was counted for 5 days.
  • the number of cells was determined by measuring the ATP activity using a Celter-glo (Promega) reagent and determining the number of viable cells.
  • n 3, and the graph shows the mean ⁇ standard deviation.
  • the cell survival ratios of the liver cancer cells into which the RNA synthetic products having the nucleotide sequences represented by SEQ ID NOs: 7, 8, 9 and 10 were respectively introduced were 75%, 42%, 52% and 25%, respectively. It was. The results are shown in FIG.
  • HCT116 cell line As colon cancer cells, HCT116 cell line (ATCC) was plated on McCoy's medium (Nacalai Tesque) containing 10% FBS and cultured at 37 ° C. under 5% CO 2 conditions.
  • McCoy's medium Nacalai Tesque
  • An RNA synthetic product (Thermo Fisher Scientific Co., Ltd.) having a base sequence represented by SEQ ID NOs: 7, 8, 9 and 10 at a concentration of 30 nM, seeding 6 ⁇ 10 3 cells per well in a 96-well plate , MirVana TM miRNA Mimics) or negative control oligos (Thermo Fisher Scientific, mirVana TM miRNA Mimic, Negative Control) were transfected using Lipofectamine RNAiMAX (Thermo Fisher Scientific).
  • the culture medium was changed, and the number of cells was counted for 5 days.
  • the number of cells was determined by measuring the ATP activity using a Celter-glo (Promega) reagent and determining the number of viable cells.
  • n 3, and the graph shows the mean ⁇ standard deviation.
  • RNA having the same base sequence as hsa-miR-4454 represented by SEQ ID NO: 11, which is known as a cancer marker a base sequence represented by SEQ ID NO: 12 (3 ′ end side of SEQ ID NO: 2, ie, SEQ ID NO: 8 A base sequence obtained by adding the 9-20th base sequence (SEQ ID NO: 16) from the 5 ′ end of hsa-miR-4454 represented by SEQ ID NO: 11 to the 1-8th base sequence from the 5 ′ end side of ) And a nucleotide sequence represented by SEQ ID NO: 13 (base 9 to 21 from the 5 ′ end of SEQ ID NO: 7, ie, 5 ′ end of SEQ ID NO: 7, added to the 3 ′ end of SEQ ID NO: 2)
  • the efficacy of synthetic RNA having a sequence) (Thermo Fisher Scientific, mirVana TM miRNA Mimics) for colore
  • Synthetic RNA having the same base sequence as hsa-miR-575 represented by SEQ ID NO: 14, which is known as a cancer marker, may be involved in blood cancer treatment
  • the same nucleotide sequence as the known hsa-miR-1321 represented by SEQ ID NO: 15 (the same as the nucleotide sequence represented by SEQ ID NOS: 1 and 2 and the nucleotide sequences 1 to 8 from the 5 ′ end side)
  • the efficacy of synthetic RNA (Thermo Fisher Scientific, mirVana TM miRNA Mimics) having a sexiness of 87.5% for colorectal cancer was evaluated.
  • 184B5 As mammary epithelial cells, 184B5 (ATCC) was seeded in MEBM medium (Lonza) containing BPE, hydrocortisone, hEGF, and insulin and cultured at 37 ° C. and 5% CO 2 . 6 ⁇ 10 3 cells per well are seeded in a 96-well plate, and RNA synthesized products having the nucleotide sequences represented by SEQ ID NO: 7 and SEQ ID NO: 8 at a concentration of 3 nM or negative control oligo (Thermo Fisher Scientific) Fick, mirVana TM miRNA Mimic, Negative Control) was transfected using Lipofectamine RNAiMAX (Thermo Fisher Scientific).
  • the culture medium was changed, and the number of cells was counted for 5 days.
  • the number of cells was determined by measuring the ATP activity using a Celter-glo (Promega) reagent and determining the number of viable cells.
  • n 3, and the graph shows the mean ⁇ standard deviation.
  • breast cancer cells MCF-7 into which RNA synthetic products (3 nM each) having the nucleotide sequences represented by SEQ ID NO: 7 and SEQ ID NO: 8 were introduced had cell survival ratios of 71% and 64%, respectively (FIG. 10A).
  • the cell viability ratios of mammary epithelial cells were 99% and 105%, respectively, and no effect on normal cells was observed (FIG. 10B).
  • the cell survival ratios of the lung microvascular endothelial cells were 91% and 109%, respectively, and no influence on normal cells was observed (FIG. 10C).
  • RNA for tumor-bearing mouse model Using a tumor-bearing mouse transplanted with a human cancer cell line, a synthesis having the same base sequence as hsa-miR-4476 represented by SEQ ID NO: 8 The antitumor effect of RNA was examined.
  • HCT116 cell line (ATCC) was transplanted subcutaneously on the back of 6 Balb / c nude mice (made by Charles River Japan), and the tumor was about 5 mm in diameter. Grown to size.
  • FIG. 11A shows changes in tumor volume for 13 days after administration of synthetic RNA to tumor-bearing mice. From the result, it was shown that the synthetic RNA having the same base sequence as SEQ ID NO: 8 exhibits an antitumor effect in vivo against colon cancer cells.
  • the pharmaceutical composition for cancer treatment of the present invention is useful for the treatment and / or prevention of cancer.

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Abstract

この出願は、癌と関連するｍｉＲＮＡを由来とするポリヌクレオチドを有効成分として含む癌の治療及び／又は予防用医薬組成物、この医薬組成物と別の抗腫瘍剤との組み合わせ医薬品、並びに、これらの医薬組成物又は組み合わせ医薬品を用いて癌をもつ被験体を治療又は予防する方法を提供する。

Description

癌の治療及び／又は予防用医薬組成物
　本発明はマイクロＲＮＡ由来のポリヌクレオチドを有効成分とする、癌の治療及び／又は予防用医薬組成物に関する。
　マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）は１６～２８塩基のタンパク質非翻訳ＲＮＡであり、ｍｉＲＢａｓｅ　ｒｅｌｅａｓｅ　２１（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｍｉｒｂａｓｅ．ｏｒｇ／）によるとヒトには現在２５９０種類存在することが知られている。近年、ｍｉＲＮＡは生体内でさまざまな遺伝子の発現抑制を行う分子として注目されている。ゲノム上には各ｍｉＲＮＡ遺伝子の領域が存在し、ＲＮＡポリメラーゼＩＩによりヘアピン構造のＲＮＡ前駆体として転写され、核内でＤｒｏｓｈａ、細胞質内でＤｉｃｅｒと呼ばれる２種類のＲＮａｓｅＩＩＩ切断活性を有するｄｓＲＮＡ切断酵素により切断され、成熟ｍｉＲＮＡが形成される。この成熟ｍｉＲＮＡはＲＩＳＣと称するタンパク質複合体に取り込まれ、相補的配列をもつ複数のターゲット遺伝子のｍＲＮＡと相互作用し、遺伝子の発現を抑制することが知られている（非特許文献１）。
　ある種のｍｉＲＮＡは、癌を含めたヒト疾患との関連が示唆されており、特に癌では、例えばｈｓａ－ｍｉＲ－６８９３－５ｐ、ｈｓａ－ｍｉＲ－４４７６、ｈｓａ－ｍｉＲ－５７５など多くのｍｉＲＮＡが血液中の膵臓癌特異的マーカーとなることが知られている（非特許文献１）。
　また、癌細胞の増殖に関与するｍｉＲＮＡだけでなく、癌細胞を抑制する方向に働くｍｉＲＮＡの存在が報告されており、ｍｉＲＮＡの発現パターンを利用した癌の治療法が示唆されている。具体例として、ｈｓａ－Ｌｅｔ－７ａなど１５３個のｍｉＲＮＡを含む活性化血清を投与してｍｉＲＮＡを上方調節することにより癌などの疾患を治療する方法（特許文献１）、ｈｓａ－Ｌｅｔ－７ａなど多くのｍｉＲＮＡを含む体液を用いて肺癌を治療する方法（特許文献２）、体内の循環エキソソームに含まれるｍｉＲ－１３２１など多くのｍｉＲＮＡのアンチセンスオリゴヌクレオチドを投与して血液癌を治療する方法（特許文献３）が知られている。
特表２０１３－５０４５４２号公報 国際公開ＷＯ２０１４／０７２４６８ 国際公開ＷＯ２０１４／０７１２０５
　本発明の目的は、癌と関連する様々なｍｉＲＮＡから、様々な癌種に共通して治療及び／又は予防効果を奏するｍｉＲＮＡを同定し、該ｍｉＲＮＡを由来とするポリヌクレオチドを有効成分とする新たな癌の治療及び／又は予防用医薬組成物を提供することである。
　本発明者らは上記課題を解決すべく鋭意検討の結果、癌患者の体液もしくは組織中で発現が上昇又は減少しているｍｉＲＮＡより癌細胞の増殖を抑制する新規のポリヌクレオチドを見出し、本発明を完成するに至った。
　すなわち、本発明は以下の（１）～（１４）の特徴を有する。
（１）配列番号１又は２で表される塩基配列を含むポリヌクレオチドを有効成分として含む、癌の治療及び／又は予防用医薬組成物。
（２）前記ポリヌクレオチドの塩基長が８～６０塩基である、（１）に記載の医薬組成物。
（３）前記ポリヌクレオチドが、前記配列番号１又は２で表される塩基配列の３’末端側に下記の（ａ）又は（ｂ）の塩基配列を含む、（１）又は（２）に記載の医薬組成物。
（ａ）配列番号３～６、１６のいずれかで表される塩基配列
（ｂ）配列番号３～６、１６のいずれかで表される塩基配列において、１～５個の塩基が欠失、置換、挿入及び／又は付加された塩基配列
（４）前記ポリヌクレオチドが配列番号７～１０、１２、１３のいずれかで表される塩基配列を含む、（１）～（３）のいずれかに記載の医薬組成物。
（５）前記ポリヌクレオチドが一本鎖又は二本鎖である、（１）～（４）のいずれかに記載の医薬組成物。
（６）前記ポリヌクレオチドがＲＮＡである、（１）～（５）のいずれかに記載の医薬組成物。
（７）前記癌が固形癌である、（１）～（６）のいずれかに記載の医薬組成物。
（８）前記固形癌が、乳癌、腎癌、膵臓癌、大腸癌、肺癌、脳腫瘍、胃癌、子宮頸癌、卵巣癌、前立腺癌、膀胱癌、食道癌、肝癌、線維肉腫、肥満細胞腫、メラノーマからなる群から選択される、（７）に記載の医薬組成物。
（９）前記癌が血液癌である、（１）～（６）のいずれかに記載の医薬組成物。
（１０）前記血液癌が白血病である、（９）に記載の医薬組成物。
（１１）前記ポリヌクレオチドが、ＤＮＡの形態でベクターに発現可能に挿入されている、（１）～（１０）のいずれかに記載の医薬組成物。
（１２）前記ポリヌクレオチドが、非カチオン性ポリマー担体、リポソーム担体、樹枝状担体、ナノ材料担体、ミクロ粒子担体、生体構造担体、ミセル担体、高分子微粒子及び磁気微粒子からなる群から選択される担体中に内包されている、あるいは、該担体に結合されている、（１）～（１１）のいずれかに記載の医薬組成物。
（１３）（１）～（１２）のいずれかに記載の医薬組成物、並びに抗腫瘍剤を有効成分として含む、癌の治療及び／又は予防のための組み合わせ医薬品。
（１４）（１）～（１２）のいずれかに記載の医薬組成物、又は（１３）に記載の組み合わせ医薬品を、癌に罹患した、又は癌に罹患したことのある被験体に投与することを含む、前記被験体において癌を治療又は予防する方法。
　本発明の癌の治療及び／又は予防用医薬組成物は、種々の癌種の癌細胞の増殖を劇的に抑制することから、癌の治療や予防に有用である。
　本明細書は、本願の優先権の基礎となる日本国特許出願番号２０１５－２１８３５８号の開示内容を包含する。
この図は、配列番号７で表されるｈｓａ－ｍｉＲ－６８９３－５ｐと同じ塩基配列を有する合成ＲＮＡ、配列番号８で表されるｈｓａ－ｍｉＲ－４４７６と同じ塩基配列を有する合成ＲＮＡ、配列番号９で表されるｈｓａ－ｍｉＲ－６８０８－５ｐと同じ塩基配列を有する合成ＲＮＡ及び配列番号１０で表されるｈｓａ－ｍｉＲ－６８７６－５ｐと同じ塩基配列を有する合成ＲＮＡ導入後の膵癌細胞株Ｐａｎｃ－１の細胞生存数の、ネガティブコントロールオリゴの合成ＲＮＡ導入後の細胞生存数（１００％）に対する割合を示す。 この図は、配列番号７で表されるｈｓａ－ｍｉＲ－６８９３－５ｐと同じ塩基配列を有する合成ＲＮＡ、配列番号８で表されるｈｓａ－ｍｉＲ－４４７６と同じ塩基配列を有する合成ＲＮＡ、配列番号９で表されるｈｓａ－ｍｉＲ－６８０８－５ｐと同じ塩基配列を有する合成ＲＮＡ、配列番号１０で表されるｈｓａ－ｍｉＲ－６８７６－５ｐと同じ塩基配列を有する合成ＲＮＡ導入後の乳癌細胞株ＭＣＦ－７の細胞生存数の、ネガティブコントロールオリゴの合成ＲＮＡ導入後の細胞生存数（１００％）に対する割合を示す。 この図は、配列番号７で表されるｈｓａ－ｍｉＲ－６８９３－５ｐと同じ塩基配列を有する合成ＲＮＡ、配列番号８で表されるｈｓａ－ｍｉＲ－４４７６と同じ塩基配列を有する合成ＲＮＡ、配列番号９で表されるｈｓａ－ｍｉＲ－６８０８－５ｐと同じ塩基配列を有する合成ＲＮＡ及び配列番号１０で表されるｈｓａ－ｍｉＲ－６８７６－５ｐと同じ塩基配列を有する合成ＲＮＡ導入後の肺癌細胞株Ａ５４９の細胞生存数の、ネガティブコントロールオリゴの合成ＲＮＡ導入後の細胞生存数（１００％）に対する割合を示す。 この図は、配列番号７で表されるｈｓａ－ｍｉＲ－６８９３－５ｐと同じ塩基配列を有する合成ＲＮＡ、配列番号８で表されるｈｓａ－ｍｉＲ－４４７６と同じ塩基配列を有する合成ＲＮＡ、配列番号９で表されるｈｓａ－ｍｉＲ－６８０８－５ｐと同じ塩基配列を有する合成ＲＮＡ及び配列番号１０で表されるｈｓａ－ｍｉＲ－６８７６－５ｐと同じ塩基配列を有する合成ＲＮＡ導入後の胃癌細胞株ＮＣ１－Ｎ８７の細胞生存数の、ネガティブコントロールオリゴの合成ＲＮＡ導入後の細胞生存数（１００％）に対する割合を示す。 この図は、配列番号７で表されるｈｓａ－ｍｉＲ－６８９３－５ｐと同じ塩基配列を有する合成ＲＮＡ、配列番号８で表されるｈｓａ－ｍｉＲ－４４７６と同じ塩基配列を有する合成ＲＮＡ、配列番号９で表されるｈｓａ－ｍｉＲ－６８０８－５ｐと同じ塩基配列を有する合成ＲＮＡ及び配列番号１０で表されるｈｓａ－ｍｉＲ－６８７６－５ｐと同じ塩基配列を有する合成ＲＮＡ導入後の肝癌細胞株ＨｅｐＧ２の細胞生存数の、ネガティブコントロールオリゴの合成ＲＮＡ導入後の細胞生存数（１００％）に対する割合を示す。 この図は、配列番号８で表されるｈｓａ－ｍｉＲ－４４７６と同じ塩基配列を有する合成ＲＮＡ導入後の白血病細胞株Ｊｕｒｋａｔの細胞生存数の、ネガティブコントロールオリゴの合成ＲＮＡ導入後の細胞生存数（１００％）に対する割合を示す。 この図は、配列番号７で表されるｈｓａ－ｍｉＲ－６８９３－５ｐと同じ塩基配列を有する合成ＲＮＡ、配列番号８で表されるｈｓａ－ｍｉＲ－４４７６と同じ塩基配列を有する合成ＲＮＡ、配列番号９で表されるｈｓａ－ｍｉＲ－６８０８－５ｐと同じ塩基配列を有する合成ＲＮＡ及び配列番号１０で表されるｈｓａ－ｍｉＲ－６８７６－５ｐと同じ塩基配列を有する合成ＲＮＡ導入後の大腸癌細胞株ＨＣＴ１１６の細胞生存数の、ネガティブコントロールオリゴの合成ＲＮＡ導入後の細胞生存数（１００％）に対する割合を示す。 この図は、配列番号８で表されるｈｓａ－ｍｉＲ－４４７６と同じ塩基配列を有する合成ＲＮＡ（本発明）、配列番号１２で表される塩基配列を有する合成ＲＮＡ（本発明）、配列番号１３で表される塩基配列を有する合成ＲＮＡ（本発明）、配列番号１１で表されるｈｓａ－ｍｉＲ－４４５４と同じ塩基配列を有する合成ＲＮＡ（比較例）導入後の大腸癌細胞株ＨＣＴ１１６の細胞生存数の、ネガティブコントロールオリゴの合成ＲＮＡ導入後の細胞生存数（１００％）に対する割合を示す。 この図は、配列番号７で表されるｈｓａ－ｍｉＲ－６８９３－５ｐと同じ塩基配列を有する合成ＲＮＡ（本発明）、配列番号８で表されるｈｓａ－ｍｉＲ－４４７６と同じ塩基配列を有する合成ＲＮＡ（本発明）、配列番号１４で表されるｈｓａ－ｍｉＲ－５７５と同じ塩基配列を有する合成ＲＮＡ（比較例）及び配列番号１５で表されるｈｓａ－ｍｉＲ－１３２１と同じ塩基配列を有する合成ＲＮＡ（比較例）導入後の大腸癌細胞株ＨＣＴ１１６の細胞生存数の、ネガティブコントロールオリゴの合成ＲＮＡ導入後の細胞生存数（１００％）に対する割合を示す。 この図は、配列番号７で表されるｈｓａ－ｍｉＲ－６８９３－５ｐと同じ塩基配列を有する合成ＲＮＡ及び配列番号８で表されるｈｓａ－ｍｉＲ－４４７６と同じ塩基配列を有する合成ＲＮＡ（各３ｎＭ）を導入後の、乳癌細胞株ＭＣＦ－７の細胞生存数の、ネガティブコントロールオリゴの合成ＲＮＡ導入後の細胞生存数（１００％）に対する割合（Ａ）と、正常細胞である乳腺上皮細胞株１８４Ｂ５の細胞生存数の、ネガティブコントロールオリゴの合成ＲＮＡ導入後の細胞生存数（１００％）に対する割合（Ｂ）、及び正常細胞である肺微小血管内皮細胞株ＨＭＶＥＣ－Ｌの細胞生存数の、ネガティブコントロールオリゴの合成ＲＮＡ導入後の細胞生存数（１００％）に対する割合（Ｃ）を示す。 この図は、配列番号８で表されるｈｓａ－ｍｉＲ－４４７６と同じ塩基配列を有する合成ＲＮＡ及びネガティブコントロールオリゴの合成ＲＮＡを担癌マウスに投与後１３日間の腫瘍体積の変化（Ｂ）と１３日目の腫瘍体積比率（Ａ）を示す。
　本発明をさらに詳細に説明する。
　＜有効成分となるポリヌクレオチド＞
　本発明の癌の治療及び／又は予防用医薬組成物は、ＣＡＧＧＣＡＧＧ（配列番号１）又はＣＡＧＧＡＡＧＧ（配列番号２）で表される塩基配列を含むポリヌクレオチドを有効成分とすることを特徴とする。以下、有効成分となるポリヌクレオチドについて説明する。
　配列番号１で表される塩基配列は、ヒトのｍｉＲＮＡであるｈｓａ－ｍｉＲ－６８９３－５ｐ（ｍｉＲＢａｓｅ　Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．ＭＩＭＡＴ００２７６８６）の５’末端側の部分配列として同定された塩基配列である。また、配列番号２で表される塩基配列は、ヒトのｍｉＲＮＡであるｈｓａ－ｍｉＲ－４４７６（ｍｉＲＢａｓｅ　Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．ＭＩＭＡＴ００１９００３）の５’末端側の部分配列として同定された塩基配列である。これらｍｉＲＮＡは膵臓癌の特異的マーカーとなるｍｉＲＮＡの一部であることが知られているが（Ｋｏｊｉｍａ　Ｍ　ＰＬｏＳ　Ｏｎｅ．１０（２）（２０１５）“ＭｉｃｒｏＲＮＡ　ｍａｒｋｅｒｓ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｄｉａｇｎｏｓｉｓ　ｏｆ　ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ　ａｎｄ　ｂｉｌｉａｒｙ－ｔｒａｃｔ　ｃａｎｃｅｒｓ”）、膵臓癌やそれ以外の癌細胞の増殖を抑制すること、これらｍｉＲＮＡの部分配列である配列番号１又は２で表される塩基配列のポリヌクレオチドが癌細胞の増殖抑制に重要な役割を果たしていることについては本発明者が新規に見出した知見である。
　従って、前記ポリヌクレオチドは、配列番号１又は２で表される塩基配列を含んでいれば特に制限はない。すなわち、配列番号１又は２で表される塩基配列のポリヌクレオチドそのものであってもよいし、あるいは、配列番号１又は２で表される塩基配列の５’末端側又は３’末端側に別の塩基配列が付加されていてもよいが、好ましくは、配列番号１又は２で表される塩基配列の３’末端側に別の塩基配列が付加されているポリヌクレオチドである。また、ポリヌクレオチドの塩基配列の塩基長は、好ましくは８～６０塩基であり、より好ましくは１６～２８塩基である。
　配列番号１又は２で表される塩基配列の３’末端側に付加される塩基配列としては、好ましくは以下の（ａ）又は（ｂ）を部分配列として含む塩基配列であり、より好ましくは以下の（ａ）又は（ｂ）を５’末端側に含む塩基配列であり、さらに好ましくは以下の（ａ）又は（ｂ）からなる塩基配列である。
（ａ）配列番号３～６、１６のいずれかで表される塩基配列。
（ｂ）配列番号３～６、１６のいずれかで表される塩基配列において、１～５個、好ましくは１～４個、より好ましくは１～３個、さらに好ましくは１～２個、特に好ましくは１個の塩基が欠失、置換、挿入及び／又は付加された塩基配列。
　前記配列番号１又は２で表される塩基配列の３’末端側に別の塩基配列が付加されているポリヌクレオチドの好ましい具体例としては、配列番号７～１０、１２、１３のいずれかで表される塩基配列からなるポリヌクレオチドが挙げられる。なお、これら６種のポリヌクレオチドのうち、配列番号７～１０のいずれかで表される塩基配列を含むポリヌクレオチドに関しては、既にヒトで同定されているｍｉＲＮＡとして知られている。これらｍｉＲＮＡの名称とｍｉＲＢａｓｅ　Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．（登録番号）は表１に記載の通りである。
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　配列番号７で表される塩基配列を有するｍｉＲＮＡであるｈｓａ－ｍｉＲ－６８９３－５ｐは、５’末端から８番目が配列番号１で表される塩基配列と、９番目以降が配列番号３で表される塩基配列で構成される。前述の通り、膵臓癌の特異的マーカーであると知られているが、これまでに遺伝子又はその転写産物の配列を用いた化合物が腫瘍細胞を抑制しうるという報告は知られていない。
　配列番号８で表される塩基配列を有するｍｉＲＮＡであるｈｓａ－ｍｉＲ－４４７６は、５’末端から８番目の塩基配列が配列番号２で表される塩基配列と、９番目以降が配列番号４で表される塩基配列で構成される。Ｊｉｍａ　ＤＤら、２０１０年、Ｂｌｏｏｄ．，１１６号、ｐ１１８－１２７に記載される方法によって同定されたものである。また、ｈｓａ－ｍｉＲ－４４７６は、その前駆体としてヘアピン様構造をとるｈｓａ－ｍｉｒ－４４７６（ｍｉＲＢａｓｅ　Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．ＭＩ００１６８２８）が知られているが、これまでに遺伝子又はその転写産物の配列を用いた化合物が腫瘍細胞を抑制しうるという報告は知られていない。
　配列番号９で表される塩基配列を有するｍｉＲＮＡであるｈｓａ－ｍｉＲ－６８０８－５ｐは、５’末端から８番目の塩基配列が配列番号１で表される塩基配列と、９番目以降が配列番号５で表される塩基配列で構成される。Ｌａｄｅｗｉｇ　Ｅら、２０１２年、Ｇｅｎｏｍｅ　Ｒｅｓ．、２２号、ｐ１６３４－１６４５に記載される方法によって同定されたものである。また、ｈｓａ－ｍｉＲ－６８０８－５ｐは、その前駆体としてヘアピン様構造をとるｈｓａ－ｍｉｒ－６８０８－５ｐ（ｍｉＲＢａｓｅ　Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．ＭＩ００２２６５３）が知られているが、これまでに遺伝子又はその転写産物の配列を用いた化合物が腫瘍細胞を抑制しうるという報告は知られていない。
　配列番号１０で表される塩基配列を有するｍｉＲＮＡであるｈｓａ－ｍｉＲ－６８７６－５ｐは、５’末端から８番目の塩基配列が配列番号２で表される塩基配列と、９番目以降が配列番号６で表される塩基配列で構成される。Ｌａｄｅｗｉｇ　Ｅら、２０１２年、Ｇｅｎｏｍｅ　Ｒｅｓ．、２２号、ｐ１６３４－１６４５に記載される方法によって同定されたものである。また、ｈｓａ－ｍｉＲ－６８７６－５ｐは、その前駆体としてヘアピン様構造をとるｈｓａ－ｍｉｒ－６８７６－５ｐ（ｍｉＲＢａｓｅ　Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．ＭＩ００２２７２３）が知られているが、これまでに遺伝子又はその転写産物の配列を用いた化合物が腫瘍細胞を抑制しうるという報告は知られていない。
　一方、配列番号１２で表される塩基配列を含むポリヌクレオチドは、配列番号２で表される塩基配列の３’末端側に、癌マーカーとして公知ではあるが腫瘍細胞を抑制することの報告は知られていない配列番号１１で表される塩基配列を有するｍｉＲＮＡであるｈｓａ－ｍｉＲ－４４５４（Ｋｏｊｉｍａ　Ｍ　ＰＬｏＳ　Ｏｎｅ．１０（２）（２０１５）“ＭｉｃｒｏＲＮＡ　ｍａｒｋｅｒｓ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｄｉａｇｎｏｓｉｓ　ｏｆ　ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ　ａｎｄ　ｂｉｌｉａｒｙ－ｔｒａｃｔ　ｃａｎｃｅｒｓ”）の５’末端側から９番目以降の塩基配列（配列番号１６）をフュージョン（融合）させた人工ポリヌクレオチドである。同様に、配列番号１３で表される塩基配列を含むポリヌクレオチドは、配列番号２で表される塩基配列の３’末端側に、前記ｈｓａ－ｍｉＲ－６８９３－５ｐ（配列番号７）の５’末端側から９番目以降の塩基配列（配列番号３）をフュージョンさせた人工ポリヌクレオチドである。
　前記ポリヌクレオチドは、癌の治療及び／又は予防の効果を発揮しうる限りにおいてはいかなる構造をとってもよく、例えば、一本鎖、二本鎖、又は三本以上の多重構造をとってもよいが、好ましくは一本鎖又は二本鎖構造であり、より好ましくは一本鎖構造である。
　前記ポリヌクレオチドは、癌の治療及び／又は予防の効果を発揮しうる限りにおいては、ＲＮＡ、ＤＮＡあるいはＲＮＡ／ＤＮＡ（キメラ）であってもよいが（なお、前記ポリヌクレオチドについて、配列表に記載の塩基配列に該当する塩基配列の全部又は一部がＤＮＡに相当する場合、配列表のＵ（ウラシル）はＴ（チミン）に読み替えるものとする。）、好ましくはＲＮＡである。ＲＮＡである場合の形態としては、腫瘍細胞の抑制に関与する遺伝子制御の観点から、前述のｍｉＲＮＡの他、ｍＲＮＡ、ｒＲＮＡ、ｎｏｎ－ｃｏｄｉｎｇ　ＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｓｎｏＲＮＡ、ｓｎＲＮＡ、ｎｋＲＮＡ（登録商標）、ＰｎｋＲＮＡ（商標）等の形態が挙げられるが、好ましくはｍｉＲＮＡである。なお、ｍｉＲＮＡには天然由来のｍｉＲＮＡの他、いわゆるミミックと呼ばれる合成ｍｉＲＮＡも包含される。
　本発明で使用可能なポリヌクレオチドは、少なくとも１つの修飾ヌクレオチド類似体を含むことができる。ヌクレオチド類似体は、例えば、ＲＮＡ分子の５’末端、３’末端及び／又は分子内部に配置することができる。特に、修飾ヌクレオチド類似体を組み込むことにより、安定化させることができる。
　好ましいヌクレオチド類似体としては、糖又は骨格鎖修飾リボヌクレオチドであり、さらに好ましくは核酸塩基が修飾されたリボヌクレオチド、すなわち、天然に存在しない核酸塩基を含むリボヌクレオチドである。すなわち、天然に存在しない核酸塩基としては、５位で修飾されたウリジン、又はシチジン、例えば、５－メチルウリジン、５－（２－アミノ）プロピルウリジン、５－メチル－２－チオウリジン、あるいは５－ブロモウリジン、６－アゾウリジン、８位で修飾されたアデノシン及びグアノシン、例えば、８－ブロモグアノシン、デアザヌクレオチド、７－デアザーアデノシン；Ｏ－及びＮ－アルキル化ヌクレオチド、Ｎ６－メチルアデノシン、ユニバーサル塩基などである。
　好ましい糖修飾リボヌクレオチドとしては、Ｈ、ＯＲ、ハロ、ＳＨ、ＳＲ、ＮＨ２、ＮＨＲ、ＮＲ２、ＣＮからなる群より選択される基で２’ＯＨ基を置換、あるいは２’－Ｏ、４’－Ｃメチレン架橋やエチレン架橋を含有（例えば、ＬＮＡやＥＮＡなど）してもよい。ここで、Ｒは、Ｃ１～Ｃ６アルキル、アルケニル又はアルキニルであり、ハロは、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ又はＩである。また糖部分は、マンノース、アラビノース、グルコピラノース、ガラクトピラノース、４’－チオリボース及び他の糖、ヘテロ環又は炭素環であってもよい。
　好ましい骨格鎖修飾リボヌクレオチドとしては、隣接するリボヌクレオチドを結合するホスホエステル基を、例えば、ホスホチオエート基の修飾基やボラノホスフェート、３’－（又は５’ －）デオキシ－３’－（又は５’ －）アミノホスホルアミデート、水素ホスホネート、ボラノリン酸エステル、ホスホルアミデート、アルキル又はアリールホスホネート及びホスホトリエステル又はリン結合で置換する。前述した修飾を組み合わせてもよい。
　＜有効成分であるポリヌクレオチドに付加する担体＞
　本発明の癌の治療及び／又は予防用医薬組成物は、前記ポリヌクレオチドに加えて薬学的に許容しうる担体を含んでいてもよい。薬学的に許容しうる担体とは、標的癌細胞又は癌組織への前記ポリヌクレオチドの選択的輸送を容易にする物質であって、生物体を刺激せず、また、前記ポリヌクレオチドの活性及び特性を阻害しないものが好ましく、また、それ自体が組成物を投与された個体に有害な抗体の生産を誘導することがないことが好ましい。担体のサイズについて、正常な血管壁を透過しないが、癌組織内の新生血管壁を透過することができるサイズが好ましい。担体が略球状体であるとした場合、好ましくは、担体の直径を例えば約１ｎｍ以上１０００ｎｍ未満のナノサイズとしうる。
　前記担体は、前記ポリヌクレオチドを内包していてもよく、可動的に結合していてもよい。「可動的に結合している」とは、担体と１又は２以上の剤との間の電子的相互作用を指す。かかる相互作用は、限定されずに、共有結合、極性共有結合、イオン結合、静電結合、配位共有結合、芳香族結合、水素結合、双極子又はファンデルワールス相互作用を含む化学結合の形をとってもよい。
　前記ポリヌクレオチドと担体の結合部分としては、好ましくは５’末端側又は３’末端側であり、より好ましくは５’末端側である。
　前記担体の具体例としては、非カチオン性ポリマー担体、リポソーム担体、樹枝状担体、ナノ材料（ナノマテリアル）担体、ミクロ粒子担体、生体構造（バイオストラクチュアル）担体、ミセル担体、高分子微粒子及び磁気微粒子が挙げられる。
　非カチオン性ポリマー担体は、１又は２以上の剤を内包し得る、及び／又は可動的に結合し得る、例えば、アニオン性（すなわち、負に荷電した）ポリマー又は電子的に中性の綿状あるいは分枝したポリマーとしうる。形態はミクロ粒子であってもナノ粒子であってもよく、水溶性あるいは水不溶性であってもよく、生分解性あるいは非生分解性であってもよい。好適な非カチオン性ポリマー担体は当業者に知られている。例えば、ポリ－Ｌ－グルタミン酸（ＰＧＡ）、ポリ－（γ－Ｌ－グルタミルグルタミン）（ＰＧＧＡ）、ポリ－（γ－Ｌ－アスパルチルグルタミン）（ＰＧＡＡ）、ポリ－（乳酸－コ－グリコール酸）（ＰＬＧＡ）を含んでもよく、少なくとも２種のポリマーの混合物を含んでもよい。
　リポソーム担体は、水性媒体中で、１又は２以上の剤を内包し得る、及び／又は可動的に結合し得る実質的に閉鎖された構造を形成する、極性の親水性基に付着した脂質を含む、脂質二重層構造を表し、単一の脂質二重層（すなわちユニラメラ）を含んでもよく、あるいは、２層又は３層以上の同心の脂質二重層（すなわち、マルチラメラ）を含んでもよい。リポソーム担体は、略球状又は略楕円状の形状であってもよい。好適なリポソーム担体は当業者に知られており、種々の特性、例えば脂質二重層の剛性、脂質二重層の電子電荷及び／又は剤の一方もしくは両方とリポソーム担体との適合性などに基づいて選択することができる。例えば、天然リン脂質、例えば卵ホスファチジルコリン、卵ホスファチジルエタノールアミン、大豆ホスファチジルコリン、レシチン及びスフィンゴミエリン、合成ホスファチジルコリン、リゾホスファチジルコリン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジン酸、ホスファチジルエタノールアミン、ジオクタデシルアミドグリシルスペルミン、ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン、Ｎ－[１－(２，３－ジオレイルオキシ)プロピル]－Ｎ，Ｎ，Ｎ－トリメチルアンモニウムクロライド、２，３－ジオレキシオロキシ－Ｎ－[２－(スペルミンカルボキシアミド)エチル] －Ｎ，Ｎ－ジメチル－１－プロパンアンモニウムトリフルオロアセトアミド、ホスファチジルセリン及びこれらの誘導体、ＰＥＧ化リン脂質などである。
　樹枝状担体は、１種又は２種以上の剤を内包し得る、及び／又は可動的に結合し得る、例えば、デンドリマー、デンドロン又はこれらの誘導体としうる。デンドリマーは、コアを有し、かつ、コアから広がる分枝構造の複数のシェルを有する巨大分子である。デンドロンは、焦点から広がる分枝を有するタイプのデンドリマーである。樹枝状担体は商業的に入手可能であるか、又は当業者に既知の方法によって合成することができる。樹枝状担体の少なくとも一部分は疎水性であってもよく、親水性であってもよい。樹枝状担体はカチオン性であってもよく、電子的に中性であってもアニオン性であってもよい。コア分子を含んでもよく、例えば、エチレンジアミン、１，４－ジアミノブタン、１，６－ジアミノヘキサン及び１，１２－ジアミノデカンなどのアルキルジアミン、アンモニアなどのアミン、シスタミン、ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）などのアルキルイミン、シクロトリホスファゼン及びチオホスホリルなどの塩素化リン分子を含んでもよい。また、ポリプロピレンイミン（ＰＰＩ）、ＤＡＢ－Ａｍ－１６などのポリアルキルイミン、ポリアミドアミン（ＰＡＭＡＭ）などの第三級アミン、ポリリジンなどのポリアミノ酸、及びフェノキシメチル（メチルヒドラゾノ）（ＰＭＭＨ）を含んでもよい。
　ナノ材料担体は、例えば約１ｎｍ～約１００ｎｍの範囲の最長寸法を有し、１又は２以上の剤を内包し得る、及び／又は可動的に結合し得る材料としうる。好適なナノ材料担体は、当業者に知られており、ナノ粒子、ナノパウダー、ナノクラスター、ナノ結晶、ナノスフェア、ナノファイバー、ナノチューブ、ナノクラスター、ナノ結晶、ナノスフェア、ナノファイバー、ナノチューブ、ナノゲル及びナノロッドを含んでもよい。また、ナノ材料担体を構成する物質としては、ポリ－（乳酸－コ－グリコール酸）（ＰＬＧＡ）、ポリアルキルシアノアクリレート（ＰＡＣＡ）、ポリイプシロン－カプロラクトン（ＰＣＬ）、ポリ乳酸（ＰＬＡ）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリ－Ｎ－ビニルカプロラクタムアクリル酸ナトリウム、ポリ－Ｎ－イロプロピルアクリルアミド、ポリ酢酸ビニルなどが例示される。また、一部の態様においてナノ材料担体はフラーレンであってもよく、球状フラーレン（例えばＣ６０）、カーボンナノチューブ、フラーレン誘導体を含んでもよい。
　ミクロ粒子担体は、例えば約１００～約１０００ｎｍの範囲の最長寸法を有する粒子としうる。ミクロ粒子は、あらゆる形状及びあらゆる形態を有してもよい。ミクロ粒子担体を構成する物質としては、ポリ－（乳酸－コ－グリコール酸）（ＰＬＧＡ）、ポリアルキルシアノアクリレート（ＰＡＣＡ）、ポリイプシロン－カプロラクトン（ＰＣＬ）、ポリ乳酸（ＰＬＡ）、ＰＬＧＡ、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などが例示される。
　生体構造担体は、生体構造担体の多数の単位がアミノ酸及び／又はサッカリドであり、かつ、１又は２以上の剤を内包し得る、及び／又は可動的に結合しているポリマー又は化合物を指す。好適な生体構造担体は当業者に知られており、糖、単糖、オリゴ糖、多糖、環状多糖、非環状多糖、線状多糖、分枝多糖、アミノ酸、タンパク質及びペプチド、ならびにこれらの半合成誘導体を含んでもよく、例えば、α－シクロデキストリン、β－シクロデキストリン、γ－シクロデキストリン、メチルβ－シクロデキストリン、ジメチル－β－シクロデキストリン、カルボキシメチル－β－シクロデキストリン、ヒドロキシプロピル－β－シクロデキストリン、スルホブチルエーテル－β－シクロデキストリン、トリ－Ｏ－メチル－β－シクロデキストリン、グルコシル－β－シクロデキストリン、β１，３Ｄグルカン、β１，６グルカン、Ｃ反応性タンパク質、コンアルブミン、ラクトアルブミン、オボアルブミン、パルブアルブミン、血清アルブミン、テクネチウムＴＣ９９ｍ凝集アルブミン、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、組換えヒト血清アルブミン（ｒＨＳＡ）、グルコース（デキストロース）、フルクトース、ガラクトース、キシロース、リボース、スクロース、セルロース、シクロデキストリン、デンプンなどを含んでいてもよい。
　ミセル担体は、脂質、任意の脂溶性（すなわち、親油性）分子、油、ワックス、ステロール、モノグリセリド、ジグリセリド、トリグリセリド、リン脂質等がミセル構造をとったものである。ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などのポリアルキレングリコール、ポリアスパラギン酸及びポリグルタミン酸（ＰＧＡ）などのポリアミノ酸、ポリ－（γ－Ｌ－グルタミルグルタミン）（ＰＧＧＡ）、ポリフェニレンオキシド（ＰＰＯ）、ポリ（ε－カプロラクトン）（ＰＣＬ）、ポリ（乳酸－コ－グリコール酸）（ＰＬＧＡ）、ジブロックコポリマーなどを含んでもよい。
　また、担体は、コンジュゲートであってもよく、核酸のセンス領域とアンチセンス領域とを連結する、ヌクレオチドリンカー、非ヌクレオチドリンカー、又はヌクレオチド／非ヌクレオチド複合リンカー、ポリエチレングリコール、ヒト血清アルブミン又は細胞取り込みを誘導することができる細胞レセプターに対するリガンドなどを含んでもよい。また、ヌクレオチドリンカーは、長さが２ヌクレオチド以上のリンカーであってもよく、核酸アプタマーであってもよい。
　前記ポリヌクレオチドは、薬学的に許容し得る賦形剤、医薬担体及び希釈剤から選択される少なくとも１つをさらに含んでいてもよく、希釈剤、分散剤、界面活性剤、結合剤、潤滑剤、あるいは、それらの混合物を付加的に添加して注射用剤形などの非経口用剤型、口腔、直腸、鼻腔、局所、皮下、膣又は非経口投与に適した形態、又は、丸薬、カプセル、顆粒又は錠剤などの経口用剤型に、又は吸入若しくは注入による投与に適した形態を含む剤形で製剤化することができる。
　前記ポリヌクレオチドを液状製剤として使用する場合、担体は滅菌及び生体に適したものが好ましく、抗酸化剤、緩衝液、静菌剤などの他の通常の添加剤を添加してもよい。好ましくは、大きく、ゆっくりと代謝される巨大分子、例えばタンパク質、多糖、ポリ乳糖、ポリグリコール酸、ポリマー状アミノ酸、アミノ酸コポリマー、脂質凝集体、ハイドロジェル及び不活性ウイルス粒子、コラーゲン類である。また、水、食塩水、滅菌水、リンガー液、緩衝食塩水、アルブミン注射溶液、デキストロース溶液、マルトデキストリン溶液、グリセロール及びエタノールのような液体を含んでいてもよく、湿潤剤又は乳化剤、ｐＨ緩衝化物質等の補助物質も含んでいてもよい。
　投与とは、いずれの適切な方法で患者に前記ポリヌクレオチドを有効成分とする癌治療用医薬組成物を導入することを意味し、前記ポリヌクレオチドのウイルス性又は非ウイルス性技術による運搬、あるいは前記ポリヌクレオチドを発現する細胞の移植を含む。
　投与経路は、目的組織に到達することができる限り、経口又は非経口の多様な経路を介して投与できる。例えば、経口、直腸内、局所、静脈内、腹腔内、筋肉内、動脈内、経皮、鼻腔内、吸入、眼球内又は皮内経路によって投与できる。
　投与量は、投与の目的、投与方法、腫瘍の種類、大きさ、投与対象者（すなわち、被験体）の状況（性別、年齢、体重など）によって異なる。典型的には、投薬量はより低いレベルで投与され、所望の効果が達成されるまで増量する。前記ポリヌクレオチドの好適な投与量は、例えば、体重１キログラムにつき１ｐｍｏｌから１００ｎｍｏｌの範囲にあってもよく、体重１キログラムにつき０．００１から０．２５ｍｇの範囲、体重１ｋｇにつき０．０１から２０μｇの範囲、体重１ｋｇにつき０．１０から５μｇの範囲にあってもよいが、これらに限定されない。かかる投与量は、１～１０回、より好ましくは５～１０回投与することが好ましい。
　＜ポリヌクレオチドによる癌の抑制＞
　前記ポリヌクレオチドは細胞に導入された形態で提供してもよい。「細胞に導入させる」とは、形質感染（ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ）又は形質導入（ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ）によって外来のポリヌクレオチドを細胞に流入させることを意味する。形質感染は、例えば、リン酸カルシウム－ＤＮＡ共沈法、ＤＥＡＥ－デキストラン－媒介形質感染法、ポリブレン媒介形質感染法、エレクトロポレーション法、微細注射法、リポソーム融合法、リポフェクタミントランスフェクション、及び原形質体融合法などを意味し、また、形質導入は、感染（ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ）を手段としてウイルス又はウイルスベクター粒子（例えばアデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、センダイウイルス、レトロウイルス（レンチウイルスなど）などのベクター）を用いて、あるいはプラスミドベクターを用いて、他の細胞内に遺伝子を伝達させることを意味する。ベクターは、本発明における前記ポリヌクレオチドを発現可能とするために必要な要素（例えばプロモーターなど）を含むことができるし、公知の手法で作製可能である（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ　ａｎｄ　Ｒｕｓｓｅｌｌ，　Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｃｌｏｎｉｎｇ　Ａ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｍａｎｕａｌ　（４ｔｈ　Ｅｄ．，　２００１），　Ｃｏｌｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｐｒｅｓｓ、特開２０１６－１５３４０３号公報、特開２０１６－０２５８５３号公報など）。このような方法によって前記ポリヌクレオチドを導入された細胞は、該塩基配列を高い水準に発現することができるため、このような細胞を癌組織に移植することにより癌の増殖を抑制させる細胞治療剤として利用することができる。
　＜癌の種類＞
　本発明において腫瘍及び癌は、悪性新生物を意味し、互換的に使用される。対象となる癌としては特に制限はないが、固形癌の具体例として膀胱、骨、骨髄、脳、乳房、結腸・直腸、食道、消化管、歯肉、頭部、腎臓、肝臓、肺、鼻咽頭、頚部、卵巣、前立腺、皮膚、胃、精巣、舌、血液、又は子宮における癌及び癌細胞を含む。好ましくは、乳癌、腎癌、膵臓癌、大腸癌、肺癌、脳腫瘍、胃癌、子宮頸癌、子宮体癌、卵巣癌、前立腺癌、膀胱癌、食道癌、肝癌、線維肉腫、肥満細胞腫及びメラノーマが挙げられる。なお、これらの特定の癌には、例えば、乳腺癌、複合型乳腺癌、乳腺悪性混合腫瘍、乳管内乳頭状腺癌、肺腺癌、扁平上皮癌、小細胞癌、大細胞癌、神経上皮組織性腫瘍である神経膠腫、脳質上衣腫、神経細胞性腫瘍、胎児型神経外胚葉性腫瘍、神経鞘腫、神経線維腫、髄膜腫、慢性型リンパ球性白血病、リンパ腫、消化管型リンパ腫、消化器型リンパ腫、小～中細胞型リンパ腫、盲腸癌、上行結腸癌、下行結腸癌、横行結腸癌、Ｓ状結腸癌、直腸癌、卵巣上皮癌、胚細胞腫瘍、間質細胞腫瘍、膵管癌、浸潤性膵管癌、膵臓癌の腺癌、腺房細胞癌、腺扁平上皮癌、巨細胞腫、膵管内乳頭粘液性腫瘍、粘液性嚢胞腺癌、膵芽腫、漿液性嚢胞腺癌、固体乳頭状癌、ガストリノーマ、グルカゴノーマ、インスリノーマ、多発性内分泌腺腫症、非機能性島細胞腫、ソマトスタチノーマ、ＶＩＰ産生腫瘍が包含されるが、これらに限定されない。また、血液癌の具体例として白血病が挙げられる。
　また、本発明において対象となる好ましい被験体は、哺乳動物であり、例えばヒトなどの霊長類、牛、豚、羊、馬などの家畜類、犬、猫などのペット動物、動物園で飼育される哺乳動物などを含み、好ましくはヒトである。
　＜抗腫瘍剤の種類＞
　本発明において、前記ポリヌクレオチドを有効成分とする癌の治療及び／又は予防用医薬組成物と、別の抗腫瘍剤（すなわち、別の抗腫瘍剤を含む医薬組成物）とを組み合わせた医薬品（「組み合わせ医薬品」という）を被験体に併用投与して抗腫瘍効果を増大させることができる。本発明の癌の治療及び／又は予防用医薬組成物と別の抗腫瘍剤（すなわち、別の抗腫瘍剤を含む医薬組成物）は、同時に、又は、別々に被験者に投与されうる。別々に投与する場合には、いずれの医薬組成物が先であっても又は後であってもよく、それらの投与間隔、投与量、投与経路及び投与回数は専門医によって適宜選択されうる。同時に投与する別の医薬剤型には、例えば、前記癌の治療及び／又は予防用医薬組成物と別の抗腫瘍剤を、薬学的に許容される担体（又は媒体）中で混合し製剤化して得られる医薬組成物（「混合医薬品」ともいう）も包含されるものとする。
　抗腫瘍剤とは、文献等で公知の下記の抗腫瘍剤が挙げられる。
　チオテパやシクロスファミドのようなアルキル化剤として、ブスルファン、インプロスルファン及びピポスルファンのような（すなわち、「などの」）アルキルスルホネート；ベンゾドーパ、カルボコン、メツレドーパ、及びウレドーパのようなアジリジン；アルトレタアミン、トリエチレンアミン、トリエチレンホスホルアミド、トリエチレンチオホスホルアミド及びトリメチロールアミン等のエチレンイミン；ブラタシン及びブラタシノンのようなアセトゲニン；カンプトテシン；ブリオスタチン；カリスタチン；クリプトフィシン１、クリプトフィシン８；ドラスタチン；ドゥオカルマイシン；エロイスロビン；パンクラチスタチン；サルコジクチン；スポンジスタチン；クロラムブシル、クロルナファジン、コロホスファミド、エストラムスチンのようなナイトロジェンマスタード；イホスファミド、メクロルエタミン、塩酸メクロレタミンオキシド、メルファラン、テモゾロミド、ノベンビシン；フェネステリン、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタード；ベンダムスチン、カルムスチン、クロロゾトシン、ストレプトゾシン、ホテムスチン、ロムスチン、ニムスチン及びラニンヌスチンのようなニトロソウレア類などが挙げられる。
　抗癌性抗生物質として、カリケアマイシン、ダイネマイシン、クロドロネート、エスペラマイシン、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、オースラマイシン、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カラビシン、カルミノマイシン、カルジノフィリン、クロモマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６－ジアゾ－５－オキソ－Ｌ－ノルロイシン、アドリアマイシン（ドキソルビシン）、ブレオマイシン、アクラルビシン、アムルビシン、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マーセロマイシン、マイトマイシンＣ、マイコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン、ピューロマイシン、ケラマイシン、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシンなどが挙げられる。
　代謝拮抗物質として例えば、デノプテリン、プテロプテリン、メソトレキサート、トリメトレキセート、ペメトレキセドのような葉酸類似体；フルダラビン、６－メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニン、クラドリビン、クロファラビンのようなプリン類似体；アンシタビン、アザシチジン、６－アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロキシウリジン、トリフルリジン、カペシタビン、５－ＦＵ、ゲムシタビン、Ｓ－１、テガフールのようなピリミジン類似体；ヒドロキシカルバミド、ネララビンなどが挙げられる。
　ホルモン製剤として例えば、アナストロゾール、ビカルタミド、デガレリクス、エストラムスチン、エキセメスタン、フルタミド、フルベストラント、ゴセレリン、レトロゾール、リュープリン、メドロキシプロゲステロン、メピチオスタン、オクトレオチド、タモキシフェン、トレミフェンがあり、例えばカルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトン、エンザルタミドのようなアンドロゲン製剤；アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタンのような抗副腎性製剤；フロリン酸、アセグラトン、アルドホスファミドグリコシド、アミノレブリン酸、エニルウラシル、アムサクリン、ベストラブシル、ビサントレン、エダトラキセート、デフォファミン、デメコルシン、ジアジクオン、エルフォルミチン 、酢酸エリプチニウム、エポチロン、エトグルシド、レンチナン、ロニダミン、メイタンシン、アンサミトシン、アビラテロン、ミトグアゾン、ミトキサントロン、モピダンモール、ニトラエリン、ペントスタチン、フェナメット、ピラルビシン、ロソキサントロン、ポドフィリン酸、２－エチルヒドラジド、プロカルバジン、ラゾキサン、リゾキシン、シゾフィラン、スピロゲルマニウム、テニュアゾン酸、トリアジコン、ロリジンＡ、アングイジン、ウレタン、ビンデシン、ダカーバジン、マンノムスチン、ミトブロニトール、ミトラクトール、ピポブロマン、ガシトシン、アラビノシド、ＢＣＧ、クレスチン、ピシバニールなどが挙げられる。
　植物由来などその他の抗癌剤として、例えばドセタキセル、エトポシド、テニポシド、イリノテカン、ノギテカン、パクリタキセル、カバジタキセル、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビノレルビン、カルボプラチン、シスプラチン、ダカルバジン、エリブリン、Ｌ－アスパラキナーゼ、ミリプラチン、ミトキサントロン、ネダプラチン、オキサリプラチン、ペントスタチン、プロカルバジン、三酸化ヒ素、ソブゾキサン、タミバロテン、マイトキサントロン、ノバントロン、エダトレキセート、イバンドロナート、トポイソメラーゼインヒビター、ジフルオロメチロールニチン（ＤＭＦＯ）、レチノイン酸などが挙げられる。
　分子標的薬として、例えば、アファチニブ、アキシチニブ、アレクチニブ、ベバシズマブ、セツキシマブ、クリゾチニブ、エルロチニブ、エベロリムス、ゲフィチニブ、ラパチニブ、ラムシルマブ、パニツムマブ、パゾパニブ、ペルツズマブ、ニボルマブ、レゴラフェニブ、レンバチニブ、ソラフェニブ、スニチニブ、テミシロリムス、トラスツズマブなど、並びにそれらの薬学的に許容可能な塩又は誘導体が挙げられる。
　さらには、文献等で公知の、２１１Ａｔ、１３１Ｉ、１２５Ｉ、９０Ｙ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１５３Ｓｍ、２１２Ｂｉ、３２Ｐ、１７５Ｌｕ、１７６Ｌｕ、８９Ｓｒ、２２３Ｒａ、１６１Ｔｂ、などの放射性同位体であってもよい。なお、放射性同位体は、腫瘍の治療や診断のために有効なものが好ましく、このような放射性同位体も、本発明における癌の治療及び／又は予防用医薬組成物に含まれてもよい。
＜治療及び予防法＞
　さらにまた本発明は、前記の本発明の癌の治療及び／又は予防用医薬組成物、あるいは、前記の医薬組成物と前記の別の抗腫瘍剤とを含む組み合わせ医薬品を、癌に罹患した（又は癌に罹患したことのある）被験体に投与することを含む、被験体において癌を治療及び／又は予防する方法も提供する。
　本明細書における「予防」なる用語は、外科手術、化学療法、放射線療法、免疫療法などの癌療法における癌処置後の再発のリスクを低減するための癌再発の予防を含む。
　上記の医薬組成物、組み合わせ医薬品、有効成分であるポリヌクレオチド、用量、用法、製剤形態、対象となる癌の種類などについては、上で説明した内容をこの節でも同様に適用する。
　本発明を以下の実施例によってさらに具体的に説明する。しかし、本発明の範囲は、この実施例によって制限されないものとする。
　＜実施例１＞合成ＲＮＡの膵癌細胞に対する有効性
　配列番号７で表されるｈｓａ－ｍｉＲ－６８９３－５ｐと同じ塩基配列を有する合成ＲＮＡ、配列番号８で表されるｈｓａ－ｍｉＲ－４４７６と同じ塩基配列を有する合成ＲＮＡ、配列番号９で表されるｈｓａ－ｍｉＲ－６８０８－５ｐと同じ塩基配列を有する合成ＲＮＡ、及び配列番号１０で表されるｈｓａ－ｍｉＲ－６８７６－５ｐと同じ塩基配列を有する合成ＲＮＡのそれぞれの、膵癌細胞に対する有効性を評価した。
　膵癌細胞としてＰａｎｃ－１細胞株（ＡＴＣＣ）を、１０％ＦＢＳを含んだＤＭＥＭ培地（ナカライテスク社、日本）に蒔いて３７℃、５％ＣＯ２条件下で培養を行った。９６ウェルプレートに１ウェルあたり６×１０３個の細胞を蒔いて、それぞれ３０ｎＭの濃度で配列番号７、８、９及び１０で表される塩基配列を有するＲＮＡ合成品（サーモフィッシャーサイエンティフィック社、ｍｉｒＶａｎａＴＭ　ｍｉＲＮＡ　Ｍｉｍｉｃｓ）あるいはネガティブコントロールオリゴ（サーモフィッシャーサイエンティフィック社、ｍｉｒＶａｎａＴＭ　ｍｉＲＮＡ　Ｍｉｍｉｃ，Ｎｅｇａｔｉｖｅ　Ｃｏｎｔｒｏｌ）をリポフェクタミンＲＮＡｉＭＡＸ（サーモフィッシャーサイエンティフィック社）を用いて遺伝子導入した。２４時間後に培養液を交換し、細胞数を５日間カウントした。細胞数の測定は、Ｃｅｌｔｉｔｅｒ－ｇｌｏ（プロメガ社）試薬を用いてＡＴＰ活性を測定し生存細胞数とした。ｎ＝３で行い、グラフには平均±標準偏差で示す。
　その結果、配列番号７、８、９及び１０で表される塩基配列を有するＲＮＡ合成品のそれぞれを遺伝子導入した膵癌細胞では、ネガティブコントロールオリゴを導入した膵癌細胞に比べて細胞生存比率はそれぞれ５０％、５１％、３９％及び５０％であった。結果を図１に示す。
　＜実施例２＞合成ＲＮＡの乳癌細胞に対する有効性
　配列番号７で表されるｈｓａ－ｍｉＲ－６８９３－５ｐと同じ塩基配列を有する合成ＲＮＡ、配列番号８で表されるｈｓａ－ｍｉＲ－４４７６と同じ塩基配列を有する合成ＲＮＡ、配列番号９で表されるｈｓａ－ｍｉＲ－６８０８－５ｐと同じ塩基配列を有する合成ＲＮＡ、及び配列番号１０で表されるｈｓａ－ｍｉＲ－６８７６－５ｐと同じ塩基配列を有する合成ＲＮＡのそれぞれの、乳癌細胞に対する有効性を評価した。
　乳癌細胞としてＭＣＦ－７細胞株（ＡＴＣＣ）を、１０％ＦＢＳを含んだＲＰＭＩ培地（ナカライテスク社、日本）に蒔いて３７℃、５％ＣＯ２条件下で培養を行った。９６ウェルプレートに１ウェルあたり６×１０３個の細胞を蒔いて、それぞれ３０ｎＭの濃度で配列番号７、８、９及び１０で表される塩基配列を有するＲＮＡ合成品（サーモフィッシャーサイエンティフィック社、ｍｉｒＶａｎａＴＭ　ｍｉＲＮＡ　Ｍｉｍｉｃｓ）あるいはネガティブコントロールオリゴ（サーモフィッシャーサイエンティフィック社、ｍｉｒＶａｎａＴＭ　ｍｉＲＮＡ　Ｍｉｍｉｃ，Ｎｅｇａｔｉｖｅ　Ｃｏｎｔｒｏｌ）をリポフェクタミンＲＮＡｉＭＡＸ（サーモフィッシャーサイエンティフィック社）を用いて遺伝子導入した。２４時間後に培養液を交換し、細胞数を５日間カウントした。細胞数の測定は、Ｃｅｌｔｉｔｅｒ－ｇｌｏ（プロメガ社）試薬を用いてＡＴＰ活性を測定し生存細胞数とした。ｎ＝３で行い、グラフには平均±標準偏差で示す。
　その結果、配列番号７、８、９及び１０で表される塩基配列を有するＲＮＡ合成品のそれぞれを遺伝子導入した乳癌細胞では、ネガティブコントロールオリゴを導入した乳癌細胞に比べて細胞生存比率はそれぞれ５２％、５２％、３９％及び６４％であった。結果を図２に示す。
　＜実施例３＞合成ＲＮＡの肺癌細胞に対する有効性
　配列番号７で表されるｈｓａ－ｍｉＲ－６８９３－５ｐと同じ塩基配列を有する合成ＲＮＡ、配列番号８で表されるｈｓａ－ｍｉＲ－４４７６と同じ塩基配列を有する合成ＲＮＡ、配列番号９で表されるｈｓａ－ｍｉＲ－６８０８－５ｐと同じ塩基配列を有する合成ＲＮＡ、及び配列番号１０で表されるｈｓａ－ｍｉＲ－６８７６－５ｐと同じ塩基配列を有する合成ＲＮＡのそれぞれの、肺癌細胞に対する有効性を評価した。
　肺癌細胞としてＡ５４９細胞株（ＡＴＣＣ）を、１０％ＦＢＳを含んだＲＰＭＩ培地（ナカライテスク社、日本）に蒔いて３７℃、５％ＣＯ２条件下で培養を行った。９６ウェルプレートに１ウェルあたり３×１０３個の細胞を蒔いて、それぞれ３０ｎＭの濃度で配列番号７、８、９及び１０で表される塩基配列を有するＲＮＡ合成品（サーモフィッシャーサイエンティフィック社、ｍｉｒＶａｎａＴＭ　ｍｉＲＮＡ　Ｍｉｍｉｃｓ）あるいはネガティブコントロールオリゴ（サーモフィッシャーサイエンティフィック社、ｍｉｒＶａｎａＴＭ　ｍｉＲＮＡ　Ｍｉｍｉｃ，Ｎｅｇａｔｉｖｅ　Ｃｏｎｔｒｏｌ）をリポフェクタミンＲＮＡｉＭＡＸ（サーモフィッシャーサイエンティフィック社）を用いて遺伝子導入した。２４時間後に培養液を交換し、細胞数を５日間カウントした。細胞数の測定は、Ｃｅｌｔｉｔｅｒ－ｇｌｏ（プロメガ社）試薬を用いてＡＴＰ活性を測定し生存細胞数とした。ｎ＝３で行い、グラフには平均±標準偏差で示す。
　その結果、配列番号７、８、９及び１０で表される塩基配列を有するＲＮＡ合成品のそれぞれを遺伝子導入した肺癌細胞では、ネガティブコントロールオリゴを導入した肺癌細胞に比べて細胞生存比率はそれぞれ４４％、９％、２３％及び２２％であった。結果を図３に示す。
　＜実施例４＞合成ＲＮＡの胃癌細胞に対する有効性
　配列番号７で表されるｈｓａ－ｍｉＲ－６８９３－５ｐと同じ塩基配列を有する合成ＲＮＡ、配列番号８で表されるｈｓａ－ｍｉＲ－４４７６と同じ塩基配列を有する合成ＲＮＡ、配列番号９で表されるｈｓａ－ｍｉＲ－６８０８－５ｐと同じ塩基配列を有する合成ＲＮＡ、及び配列番号１０で表されるｈｓａ－ｍｉＲ－６８７６－５ｐと同じ塩基配列を有する合成ＲＮＡの胃癌細胞に対する有効性を評価した。
　胃癌細胞としてＮＣ１－Ｎ８７細胞株（ＡＴＣＣ）を、１０％ＦＢＳを含んだＲＰＭＩ培地（ナカライテスク社）に蒔いて３７℃、５％ＣＯ２条件下で培養を行った。９６ウェルプレートに１ウェルあたり３×１０３個の細胞を蒔いて、それぞれ３０ｎＭの濃度で配列番号７、８、９及び１０で表される塩基配列を有するＲＮＡ合成品（サーモフィッシャーサイエンティフィック社、ｍｉｒＶａｎａＴＭ　ｍｉＲＮＡ　Ｍｉｍｉｃｓ）あるいはネガティブコントロールオリゴ（サーモフィッシャーサイエンティフィック社、ｍｉｒＶａｎａＴＭ　ｍｉＲＮＡ　Ｍｉｍｉｃ，Ｎｅｇａｔｉｖｅ　Ｃｏｎｔｒｏｌ）をリポフェクタミンＲＮＡｉＭＡＸ（サーモフィッシャーサイエンティフィック社）を用いて遺伝子導入した。２４時間後に培養液を交換し、細胞数を５日間カウントした。細胞数の測定は、Ｃｅｌｔｉｔｅｒ－ｇｌｏ（プロメガ社）試薬を用いてＡＴＰ活性を測定し生存細胞数とした。ｎ＝３で行い、グラフには平均±標準偏差で示す。
　その結果、配列番号７、８、９及び１０で表される塩基配列を有するＲＮＡ合成品をそれぞれ遺伝子導入した胃癌細胞の細胞生存比率は、それぞれ３８％、３６％、３４％及び４２％であった。結果を図４に示す。
　＜実施例５＞合成ＲＮＡの肝癌細胞に対する有効性
　配列番号７で表されるｈｓａ－ｍｉＲ－６８９３－５ｐと同じ塩基配列を有する合成ＲＮＡ、配列番号８で表されるｈｓａ－ｍｉＲ－４４７６と同じ塩基配列を有する合成ＲＮＡ、配列番号９で表されるｈｓａ－ｍｉＲ－６８０８－５ｐと同じ塩基配列を有する合成ＲＮＡ、及び配列番号１０で表されるｈｓａ－ｍｉＲ－６８７６－５ｐと同じ塩基配列を有する合成ＲＮＡの肝癌細胞への有効性を評価した。
　肝癌細胞としてＨＥＰＧ２細胞株（ＡＴＣＣ）を、１０％ＦＢＳを含んだＲＰＭＩ培地（ナカライテスク社）に蒔いて３７℃、５％ＣＯ２条件下で培養を行った。９６ウェルプレートに１ウェルあたり６×１０３個の細胞を蒔いて、それぞれ３０ｎＭの濃度で配列番号７、８、９及び１０で表される塩基配列を有するＲＮＡ合成品（サーモフィッシャーサイエンティフィック社、ｍｉｒＶａｎａＴＭ　ｍｉＲＮＡ　Ｍｉｍｉｃｓ）あるいはネガティブコントロールオリゴ（サーモフィッシャーサイエンティフィック社、ｍｉｒＶａｎａＴＭ　ｍｉＲＮＡ　Ｍｉｍｉｃ，Ｎｅｇａｔｉｖｅ　Ｃｏｎｔｒｏｌ）をリポフェクタミンＲＮＡｉＭＡＸ（サーモフィッシャーサイエンティフィック社）を用いて遺伝子導入した。２４時間後に培養液を交換し、細胞数を５日間カウントした。細胞数の測定は、Ｃｅｌｔｉｔｅｒ－ｇｌｏ（プロメガ社）試薬を用いてＡＴＰ活性を測定し生存細胞数とした。ｎ＝３で行い、グラフには平均±標準偏差で示す。
　その結果、配列番号７、８、９及び１０で表される塩基配列を有するＲＮＡ合成品をそれぞれ遺伝子導入した肝癌細胞の細胞生存比率は、それぞれ７５％、４２％、５２％及び２５％であった。結果を図５に示す。
　＜実施例６＞合成ＲＮＡの白血病細胞に対する有効性
　配列番号８で表されるｈｓａ－ｍｉＲ－４４７６と同じ塩基配列を有する合成ＲＮＡの白血病細胞に対する有効性を評価した。
　白血病細胞としてＪＵＲＫＡＴ細胞株（ＡＴＣＣ）を、１０％ＦＢＳを含んだＲＰＭＩ培地（ナカライテスク社）に蒔いて３７℃、５％ＣＯ２条件下で培養を行った。９６ウェルプレートに１ウェルあたり４×１０４個の細胞を蒔いて、３０ｎＭの濃度で、アンチセンスＲＮＡ（サーモフィッシャーサイエンティフィック社、ｍｉｒＶａｎａＴＭ　ｍｉＲＮＡ　Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ）あるいはネガティブコントロールオリゴ（サーモフィッシャーサイエンティフィック社、ｍｉｒＶａｎａＴＭ　ｍｉＲＮＡ　Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ，Ｎｅｇａｔｉｖｅ　Ｃｏｎｔｒｏｌ）をヴァイロマー（Ｌｉｐｏｃａｌｙｘ社）を用いて遺伝子導入した。細胞数を５日間カウントした。細胞数の測定は、Ｃｅｌｔｉｔｅｒ－ｇｌｏ（プロメガ社）試薬を用いてＡＴＰ活性を測定し生存細胞数とした。ｎ＝３で行い、グラフには平均±標準偏差で示す。
　その結果、配列番号８で表される合成ＲＮＡを遺伝子導入した白血病細胞の細胞生存比率は４５％であった。結果を図６に示す。
　＜実施例７＞合成ＲＮＡの大腸癌細胞に対する有効性（１）
　配列番号７で表されるｈｓａ－ｍｉＲ－６８９３－５ｐと同じ塩基配列を有する合成ＲＮＡ、配列番号８で表されるｈｓａ－ｍｉＲ－４４７６と同じ塩基配列を有する合成ＲＮＡ、配列番号９で表されるｈｓａ－ｍｉＲ－６８０８－５ｐと同じ塩基配列を有する合成ＲＮＡ、及び配列番号１０で表されるｈｓａ－ｍｉＲ－６８７６－５ｐと同じ塩基配列を有する合成ＲＮＡのそれぞれの、大腸癌細胞に対する有効性を評価した。
　大腸癌細胞としてＨＣＴ１１６細胞株（ＡＴＣＣ）を、１０％ＦＢＳを含んだＭｃＣｏｙ’ｓ培地（ナカライテスク社）に蒔いて３７℃、５％ＣＯ２条件下で培養を行った。９６ウェルプレートに１ウェルあたり６×１０３個の細胞を蒔いて、それぞれ３０ｎＭの濃度で配列番号７、８、９及び１０で表される塩基配列を有するＲＮＡ合成品（サーモフィッシャーサイエンティフィック社、ｍｉｒＶａｎａＴＭ　ｍｉＲＮＡ　Ｍｉｍｉｃｓ）あるいはネガティブコントロールオリゴ（サーモフィッシャーサイエンティフィック社、ｍｉｒＶａｎａＴＭ　ｍｉＲＮＡ　Ｍｉｍｉｃ，Ｎｅｇａｔｉｖｅ　Ｃｏｎｔｒｏｌ）をリポフェクタミンＲＮＡｉＭＡＸ（サーモフィッシャーサイエンティフィック社）を用いて遺伝子導入した。２４時間後に培養液を交換し、細胞数を５日間カウントした。細胞数の測定は、Ｃｅｌｔｉｔｅｒ－ｇｌｏ（プロメガ社）試薬を用いてＡＴＰ活性を測定し生存細胞数とした。ｎ＝３で行い、グラフには平均±標準偏差で示す。
　その結果、配列番号７、８、９及び１０で表される塩基配列を有するＲＮＡ合成品のそれぞれを遺伝子導入した大腸癌細胞では、ネガティブコントロールオリゴを導入した大腸癌細胞に比べて細胞生存比率は、それぞれ４％、８％、２％及び１２％であった。結果を図７に示す。
　＜実施例８＞合成ＲＮＡの大腸癌細胞に対する有効性（２）
　癌マーカーとして公知である配列番号１１で表されるｈｓａ－ｍｉＲ－４４５４と同じ塩基配列を有する合成ＲＮＡ、配列番号１２で表される塩基配列（配列番号２の３’末端側、すなわち配列番号８の５’末端側から１～８番目の塩基配列に、配列番号１１で表されるｈｓａ－ｍｉＲ－４４５４の５’末端側から９～２０番目の塩基配列（配列番号１６）を付加した塩基配列）を有する合成ＲＮＡ及び配列番号１３で表される塩基配列（配列番号２の３’末端側に、配列番号３すなわち配列番号７の５’末端側から９～２１番目の塩基配列を付加した塩基配列）を有する合成ＲＮＡ（サーモフィッシャーサイエンティフィック社、ｍｉｒＶａｎａＴＭ　ｍｉＲＮＡ　Ｍｉｍｉｃｓ）の大腸癌への有効性を実施例７に記載の方法に準じて評価した。
　その結果、配列番号８、１２及び１３で表される塩基配列を有するＲＮＡ合成品をそれぞれ遺伝子導入した大腸癌細胞では、細胞生存比率は１０％以下であったのに対して、配列番号１１で表される塩基配列を有するＲＮＡ合成品を遺伝子導入した大腸癌細胞の細胞生存比率は１０３％であり、ほとんど有効でなかった。結果を図８に示す。
　＜比較例１＞合成ＲＮＡの大腸癌細胞に対する有効性
　癌マーカーとして公知である配列番号１４で表されるｈｓａ－ｍｉＲ－５７５と同じ塩基配列を有する合成ＲＮＡ、及び血液癌治療に関与することが知られている配列番号１５で表されるｈｓａ－ｍｉＲ－１３２１と同じ塩基配列（５’末端側から１～８番目の塩基配列と、配列番号１及び２で表される塩基配列との配列同一性が８７．５％である）を有する合成ＲＮＡ（サーモフィッシャーサイエンティフィック社、ｍｉｒＶａｎａＴＭ　ｍｉＲＮＡ　Ｍｉｍｉｃｓ）の大腸癌に対する有効性を実施例７に記載の方法に準じて評価した。
　その結果、配列番号７及び８で表される塩基配列を有するＲＮＡ合成品をそれぞれ遺伝子導入した大腸癌細胞では、細胞生存比率は１０％以下であったのに対して、配列番号１４及び１５で表される塩基配列を有するＲＮＡ合成品をそれぞれ遺伝子導入した大腸癌細胞の細胞生存比率は、それぞれ９６％及び９３％であり、ほとんど有効でなかった。結果を図９に示す。
　＜比較例２＞合成ＲＮＡの正常細胞に対する有効性
　配列番号７及び配列番号８で表される塩基配列を有する合成ＲＮＡ（サーモフィッシャーサイエンティフィック社、ｍｉｒＶａｎａＴＭ　ｍｉＲＮＡ　Ｍｉｍｉｃｓ）の、正常細胞である乳腺上皮細胞及び肺微小血管内皮細胞に対する有効性を評価した。
　乳腺上皮細胞として１８４Ｂ５（ＡＴＣＣ）を、ＢＰＥ、ｈｙｄｒｏｃｏｒｔｉｓｏｎｅ、ｈＥＧＦ、ｉｎｓｕｌｉｎを含んだＭＥＢＭ培地（ロンザ社）に蒔いて３７℃、５％ＣＯ２条件下で培養を行った。９６ウェルプレートに１ウェルあたり６×１０３個の細胞を蒔いて、それぞれ３ｎＭの濃度で配列番号７及び配列番号８で表される塩基配列を有するＲＮＡ合成品あるいはネガティブコントロールオリゴ（サーモフィッシャーサイエンティフィック社、ｍｉｒＶａｎａＴＭ　ｍｉＲＮＡ　Ｍｉｍｉｃ，Ｎｅｇａｔｉｖｅ　Ｃｏｎｔｒｏｌ）をリポフェクタミンＲＮＡｉＭＡＸ（サーモフィッシャーサイエンティフィック社）を用いて遺伝子導入した。２４時間後に培養液を交換し、細胞数を５日間カウントした。細胞数の測定は、Ｃｅｌｔｉｔｅｒ－ｇｌｏ（プロメガ社）試薬を用いてＡＴＰ活性を測定し生存細胞数とした。ｎ＝３で行い、グラフには平均±標準偏差で示す。
　その結果、配列番号７及び配列番号８で表される塩基配列を有するＲＮＡ合成品（それぞれ３ｎＭ）を遺伝子導入した乳癌細胞ＭＣＦ－７では、細胞生存比率がそれぞれ７１％、６４％（図１０Ａ）であったのに対して、乳腺上皮細胞の細胞生存比率はそれぞれ９９％、１０５％であり、正常細胞に対する影響は認められなかった（図１０Ｂ）。
　また、肺微小血管内皮細胞としてＨＭＶＥＣ－Ｌ（ＡＴＣＣ）を、ＥＧＭ－２ＭＶ　ＳｉｎｇｌｅＱｕｏｔｓ（ロンザ社）を含んだＥＧＭ－２倍地（ロンザ社）に蒔いて３７℃、５％ＣＯ２条件下で培養を行った。９６ウェルプレートに１ウェルあたり６×１０３個の細胞を蒔いて、それぞれ３ｎＭの濃度で配列番号７及び配列番号８で表される塩基配列を有するＲＮＡ合成品あるいはネガティブコントロールオリゴをリポフェクタミンＲＮＡｉＭＡＸを用いて遺伝子導入した。２４時間後に培養液を交換し、細胞数を５日間カウントした。細胞数の測定は、Ｃｅｌｔｉｔｅｒ－ｇｌｏ試薬を用いてＡＴＰ活性を測定し生存細胞数とした。ｎ＝３で行い、グラフには平均±標準偏差で示す。
　その結果、肺微小血管内皮細胞の細胞生存比率はそれぞれ９１％、１０９％であり、正常細胞に対する影響は認められなかった（図１０Ｃ）。
　＜実施例９＞合成ＲＮＡの担癌マウスモデルに対する有効性
　ヒト由来の癌細胞株を移植した担癌マウスを用いて、配列番号８で表されるｈｓａ－ｍｉＲ－４４７６と同じ塩基配列を有する合成ＲＮＡの抗腫瘍効果を検討した。
　６匹のＢａｌｂ／ｃヌードマウス（日本チャールスリバー社製）の背部皮下に、１匹あたり５×１０６個のヒト大腸癌細胞株ＨＣＴ１１６細胞株（ＡＴＣＣ）を移植し、腫瘍が直径５ｍｍ程度の大きさになるまで成長させた。前記担癌マウス各６匹に配列番号８と同じ塩基配列を有する合成ＲＮＡ及びネガティブコントロールを１匹あたり２ｎｍｏｌと０．５％アテロコラーゲン５０μｌ（高研社）の混合溶液を、腫瘍周辺の皮下に投与した。その後、２日おきに計３回、各合成ＲＮＡと０．５％アテロコラーゲン混合溶液を同量ずつ各担癌マウスの腫瘍周辺の皮下に投与し、腫瘍の大きさを２日に１回計測した。なお、腫瘍の大きさは、０．５×（長径×短径×短径）の計算式を用いて体積を算出した。
　その結果、最初の投与から１３日後の配列番号８と同じ塩基配列を有する合成ＲＮＡを投与した検討群の腫瘍体積比率は、コントロール群を１００％としたとき４０％であった（図１１Ａ）。また、合成ＲＮＡを担癌マウスに投与後１３日間の腫瘍体積の変化を図１１Ｂに示した。その結果から、配列番号８と同じ塩基配列を有する合成ＲＮＡは、大腸癌細胞に対して、生体内で抗腫瘍効果を発揮することが示された。
　本発明の癌治療用医薬組成物は、癌の治療及び／又は予防のため有用である。
　本明細書で引用した全ての刊行物、特許及び特許出願はそのまま引用により本明細書に組み入れられるものとする。

Claims (14)

  1. 　配列番号１又は２で表される塩基配列を含むポリヌクレオチドを有効成分として含む、癌の治療及び／又は予防用医薬組成物。
  2. 　前記ポリヌクレオチドの塩基長が８～６０塩基である、請求項１に記載の医薬組成物。
  3. 　前記ポリヌクレオチドが、前記配列番号１又は２で表される塩基配列の３’末端側に下記の（ａ）又は（ｂ）の塩基配列を含む、請求項１又は２に記載の医薬組成物。
    （ａ）配列番号３～６、１６のいずれかで表される塩基配列
    （ｂ）配列番号３～６、１６のいずれかで表される塩基配列において、１～５個の塩基が欠失、置換、挿入及び／又は付加された塩基配列
  4. 　前記ポリヌクレオチドが配列番号７～１０、１２、１３のいずれかで表される塩基配列を含む、請求項１～３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  5. 　前記ポリヌクレオチドが一本鎖又は二本鎖である、請求項１～４のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  6. 　前記ポリヌクレオチドがＲＮＡである、請求項１～５のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  7. 　前記癌が固形癌である、請求項１～６のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  8. 　前記固形癌が、乳癌、腎癌、膵臓癌、大腸癌、肺癌、脳腫瘍、胃癌、子宮頸癌、卵巣癌、前立腺癌、膀胱癌、食道癌、肝癌、線維肉腫、肥満細胞腫及びメラノーマからなる群から選択される、請求項７に記載の医薬組成物。
  9. 　前記癌が血液癌である、請求項１～６のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  10. 　前記血液癌が白血病である、請求項９に記載の医薬組成物。
  11. 　前記ポリヌクレオチドが、ＤＮＡの形態でベクターに発現可能に挿入されている、請求項１～１０のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  12. 　前記ポリヌクレオチドが、非カチオン性ポリマー担体、リポソーム担体、樹枝状担体、ナノ材料担体、ミクロ粒子担体、生体構造担体、ミセル担体、高分子微粒子及び磁気微粒子からなる群から選択される担体中に内包されている、あるいは、該担体に結合されている、請求項１～１１のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  13. 　請求項１～１２のいずれか１項に記載の医薬組成物、並びに抗腫瘍剤を有効成分として含む、癌の治療及び／又は予防のための組み合わせ医薬品。
  14. 　請求項１～１２のいずれか１項に記載の医薬組成物、又は請求項１３に記載の組み合わせ医薬品を、癌に罹患した、又は癌に罹患したことのある被験体に投与することを含む、前記被験体において癌を治療又は予防する方法。
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Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111989087A (zh) * 2018-03-27 2020-11-24 新泰福托特股份有限公司 用于治疗癌症的聚(氰基丙烯酸烷基酯)纳米颗粒
US12433846B2 (en) * 2019-03-27 2025-10-07 Sintef Tto As Drug delivery system for treatment of cancer

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2015133522A1 (ja) * 2014-03-04 2015-09-11 国立大学法人大阪大学 大腸癌の治療剤、及び大腸癌患者の予後の予測方法

Family Cites Families (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2174354C (en) * 1993-10-27 2011-03-29 Paul B. Fisher Compositions of melanoma differentiation associated gene-7 (mda-7) in cancer diagnosis and treatment
DK1592793T3 (da) * 2003-02-10 2009-10-26 Santaris Pharma As Oligomeriske forbindelser for modulation af Survivin ekspression
AU2010294197C9 (en) 2009-09-10 2018-09-13 Velin-Pharma A/S Method for the preparation of micro-RNA and its therapeutic application
JPWO2012063894A1 (ja) 2010-11-12 2014-05-12 国立大学法人愛媛大学 マイクロｒｎａのアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む組成物
CN103562215B (zh) * 2011-04-01 2017-04-26 埃西斯药品公司 信号转导及转录激活蛋白3(stat3)表达的调节
WO2014071205A1 (en) 2012-11-02 2014-05-08 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Compositions and methods for diagnosis, prognosis and treatment of hematological malignancies
EP2916853B1 (en) 2012-11-09 2020-05-06 Velin-Pharma A/S Compositions for pulmonary delivery
US9416369B2 (en) * 2012-12-18 2016-08-16 University Of Washington Through Its Center For Commercialization Methods and compositions to modulate RNA processing
WO2014199377A1 (en) * 2013-06-10 2014-12-18 Yeda Research And Development Co. Ltd. Compositions and methods for treating a hematological malignancy associated with an altered runx1 activity or expression

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2015133522A1 (ja) * 2014-03-04 2015-09-11 国立大学法人大阪大学 大腸癌の治療剤、及び大腸癌患者の予後の予測方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
MOTOHIRO KOJIMA ET AL.: "MicroRNA markers for the diagnosis of pancreatic and biliary-tract cancers", PLOS ONE, vol. 10, no. 2, 23 February 2015 (2015-02-23), pages 1 - 22, XP055382030 *
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