WO2018124742A1 - 세균 메타게놈 분석을 통한 전립선질환 진단 방법 - Google Patents

세균 메타게놈 분석을 통한 전립선질환 진단 방법 Download PDF

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    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/158—Expression markers

Definitions

  • the present invention relates to a method for diagnosing prostate diseases such as prostate cancer and prostatic hyperplasia through bacterial metagenomic analysis, and more specifically, by performing a bacterial metagenomic analysis using a sample derived from a subject,
  • the present invention relates to a method for diagnosing prostate disease by analyzing the increase or decrease in content.
  • the prostate gland part of the male reproductive system, is an organ that mixes with sperm and creates a fluid that makes semen.
  • Prostatic hyperplasia is a condition in which the urinary flow in the urethra is blocked or decreased due to enlargement of the prostate gland, and the urinary flow in the urethra is blocked or reduced.
  • BPH benign protstate hyperplasia
  • the prostate surrounds the tube (ureter) that carries urine out of the bladder. During puberty, the prostate expands evenly, and as you age, the prostate enlarges, focusing on the side of the urethra of the gland.
  • the cause of benign prostatic hyperplasia is not yet clear, but as with other chronic diseases, several factors are known to work. Since the prostate is a testosterone dependent organ, it requires a constant male hormone to maintain its growth and function.If male hormone is not produced due to castration, the prostate may contract, and genetic factors and family history may also be associated with prostatic hyperplasia. It is known that this is.
  • Prostate carcinoma is a malignant tumor of the prostate gland, most of which is adenocarcinoma (adenocarcinoma of the gland cell) occurring in prostate cells.
  • Risk factors for prostate cancer increase rapidly in old age (50 years and older).
  • Asians have the lowest incidence, genetic predisposition, family history, male hormones, diabetes, obesity, westernized diet (increase in animal fat intake), and infections.
  • blood pressure (serum) prostate-specific antigen (PSA) tests and rectal balance are reported annually for men 50 years of age and older who are generally expected to live longer than 10 years. It is recommended to have a test.
  • Microbiota refers to a microbial community including bacteria, archaea and eukarya that exist in a given settlement.Intestinal microbiota is an important role in human physiology. It is known to have a great effect on human health and disease through interaction with human cells.
  • the symbiotic bacteria secrete nanometer-sized vesicles to exchange information about genes and proteins in other cells.
  • the mucous membrane forms a physical protective film that particles larger than 200 nanometers (nm) in size can't pass through, so that the symbiotic bacteria cannot pass through the mucosa, but bacterial-derived vesicles are usually less than 100 nanometers in size. It freely speaks to the mucous membrane and is absorbed by our body.
  • Metagenomics also called environmental genomics, can be said to be an analysis of metagenomic data obtained from samples taken from the environment (Korean Patent Publication No. 2011-0073049). Recently, it has become possible to list the bacterial composition of the human microflora by a method based on 16s ribosomal RNA (16s rRNA) sequencing. Next generation sequencing of 16s rDNA sequencing gene of 16s ribosomal RNA is performed. , NGS) platform to analyze.
  • prostate diseases such as prostatic hyperplasia and prostate cancer
  • the present inventors In order to diagnose prostate disease based on the causes of prostatic hyperplasia and prostate cancer, the present inventors extracted a gene from a bacterial-derived extracellular vesicle in a sample-derived urine and performed a metagenome analysis on it. Bacterial-derived extracellular vesicles that can act as causative factors of prostate diseases such as cancer and prostatic hyperplasia have been identified, and thus the present invention has been completed.
  • an object of the present invention is to provide an information providing method for diagnosing prostate cancer through metagenomic analysis of bacterial extracellular vesicles.
  • an object of the present invention is to provide a method for providing information for diagnosing prostate cancer in patients with enlarged prostate through metagenomic analysis of bacterial extracellular vesicles.
  • an object of the present invention is to provide an information providing method for diagnosing prostatic hyperplasia through metagenomic analysis of bacterial extracellular vesicles.
  • the present invention provides a method for providing information for diagnosing prostate disease, comprising the following steps.
  • the present invention also provides a prostate disease diagnostic method comprising the following steps.
  • the present invention also provides a method for predicting the risk of developing a prostate disease, comprising the following steps.
  • At least one phylum bacteria-derived extracellular vesicle selected from the group consisting of Tenericutes, Euryarchaeota, Verrucomicrobia, Gemmatimonadetes, Acidobacteria, and Planctomycetes compared to the sample derived from the normal person in the step (c)
  • a phylum bacteria-derived extracellular vesicle selected from the group consisting of Tenericutes, Euryarchaeota, Verrucomicrobia, Gemmatimonadetes, Acidobacteria, and Planctomycetes compared to the sample derived from the normal person in the step (c)
  • Stramenopiles Alteromonadales, RF39, Rickettsiales, Neisseriales, Methanobacteriales, Verrucomicrobiales, Myxococcales, Acidimicrobiales, Chthoniobacterales, iii1-15, Acidobacteriales, Ellin3ales, and Pedospha It may be to diagnose prostate cancer by comparing the increase or decrease in the content of one or more order bacteria-derived extracellular vesicles selected from the group consisting of.
  • Peptococcaceae In another embodiment of the present invention, Peptococcaceae, Exiguobacteraceae, Actinomycetaceae, Cellulomonadaceae, mitochondria, Fusobacteriaceae, S24-7, Porphyromonadaceae, Flavobacteriaceae, Moraxellaceae, Neisseriaceae, Methanobacteriabiaceae, Verrucomicrobiaceae Prostate cancer may be diagnosed by comparing the increase or decrease in the content of one or more family bacteria-derived extracellular vesicles selected from the group consisting of Weeksellaceae, Streptomycetaceae, Helicobacteraceae, Chthoniobacteraceae, and Koribacteraceae.
  • prostate cancer may be diagnosed by comparing the increase or decrease in the content of Verrucomicrobia phylum bacteria-derived extracellular vesicles compared to the sample from the prostatic hyperplasia in step (c).
  • the content of at least one class bacteria-derived extracellular vesicles selected from the group consisting of Verrucomicrobiae, Acidimicrobiia, Saprospirae, and Pedosphaerae as compared to the prostatic hypertrophy-derived sample in step (c) It may be to diagnose prostate cancer by comparing the increase and decrease.
  • At least one order bacterial-derived extracellular vesicle selected from the group consisting of Verrucomicrobiales, Acidimicrobiales, Saprospirales, Pedosphaerales, and Ellin329 compared to the sample from the prostatic hyperplasia patient in step (c) By comparing the increase and decrease in the amount of prostate cancer may be to diagnose.
  • the amount of one or more genus bacteria-derived extracellular vesicles selected from the group consisting of Ruminococcus, Akkermansia, and Flexispira is increased compared to the sample from the prostatic hyperplasia in step (c). In comparison, it may be to diagnose prostate cancer.
  • prostate hyperplasia by comparing the increase or decrease of the content of one or more phylum bacteria-derived extracellular vesicles selected from the group consisting of Euryarchaeota, and Acidobacteria in comparison to the sample derived from normal in step (c) It may be to diagnose.
  • compared to the normal sample derived from the step (c) compared to increase or decrease the content of one or more class bacteria-derived extracellular vesicles selected from the group consisting of Methanobacteria, Acidobacteria, and Acidobacteriia It may be to diagnose an enlarged prostate.
  • comparing the increase and decrease of the content may be to diagnose prostatic hyperplasia.
  • At least one family bacteria selected from the group consisting of Exiguobacteraceae, Flavobacteriaceae, Actinomycetaceae, Moraxellaceae, Ruminococcaceae, Rikenellaceae, Methanobacteriaceae, and Koribacteraceae compared to a sample derived from a normal person in step (c). By comparing the increase or decrease in the content of the derived extracellular vesicles may be to diagnose prostatic hyperplasia.
  • Rhizobium, Proteus, Acinetobacter, SMB53, Halomonas, Ruminococcus, Faecalibacterium, Klebsiella, Roseburia, Leuconostoc, Bilophila, Chromohalobacter, and Methanobrevibacter By comparing the increase or decrease in the content of one or more genus bacteria-derived extracellular vesicles selected may be to diagnose prostatic hyperplasia.
  • the sample may be urine.
  • Extracellular vesicles secreted from the bacteria present in the environment may be absorbed directly into the body and directly affect cancer development, and prostatic hyperplasia and prostate cancer are difficult to diagnose early because symptoms are difficult, so effective treatment is difficult.
  • metastatic genome analysis predicts causative factors in patients diagnosed with prostatic hyperplasia or prostate cancer, thereby preventing prostate hypertrophy and prostate cancer, or preventing recurrence.
  • Figure 1 is for evaluating the distribution of bacteria-derived extracellular vesicles in the body
  • Figure 1a after the administration of oral intestinal bacteria (Bacteria) and bacteria-derived vesicles (EV) in the mouth hourly (0, 5min, 3h, 6h, and 12h) is a photograph taken of their distribution
  • Figure 1b is a 12 hours after oral administration of intestinal bacteria (Bacteria) and bacteria-derived extracellular vesicles (EV) to the urine and various organs (heart, Lung, liver, kidney, spleen, adipose tissue, and muscles), and the photographs of the distribution of the bacterial and extracellular vesicles.
  • Figure 2 shows the distribution of bacteria-derived vesicles (EVs) with significant diagnostic performance at the phylum level by separating the bacteria-derived vesicles in prostate cancer patients and normal urine.
  • EVs bacteria-derived vesicles
  • Figure 3 shows the distribution of bacteria-derived vesicles (EVs) with significant diagnostic performance at the class level by separating bacteria-derived vesicles from prostate cancer patients and normal urine, and performing a metagenome analysis.
  • EVs bacteria-derived vesicles
  • Figure 4 shows the distribution of bacteria-derived vesicles (EVs) with significant diagnostic performance at the order (order) level by separating the bacteria-derived vesicles in prostate cancer patients and normal urine.
  • EVs bacteria-derived vesicles
  • Figure 5 shows the distribution of bacteria-derived vesicles (EVs) with significant diagnostic performance at the family level by separating bacteria-derived vesicles from prostate cancer patients and normal urine, and performing a metagenome analysis.
  • EVs bacteria-derived vesicles
  • Figure 6 shows the distribution of bacteria-derived vesicles (EVs) with significant diagnostic performance at the genus level after the isolation of bacteria-derived vesicles in prostate cancer patients and normal urine.
  • EVs bacteria-derived vesicles
  • FIG. 7 is a result showing the distribution of bacteria-derived vesicles (EVs) with significant diagnostic performance at the phylum level by separating the bacteria-derived vesicles in the urine of patients with prostate cancer and enlarged prostate gland .
  • EVs bacteria-derived vesicles
  • FIG. 8 is a result showing the distribution of bacteria-derived vesicles (EVs) with significant diagnostic performance at the class level by separating the bacteria-derived vesicles in the urine of patients with prostate cancer and enlarged prostate gland. .
  • EVs bacteria-derived vesicles
  • FIG. 9 is a result showing the distribution of bacteria-derived vesicles (EVs) of significant diagnostic performance at the order level by separating the bacteria-derived vesicles in the urine of patients with prostate cancer and enlarged prostate .
  • EVs bacteria-derived vesicles
  • EVs bacteria-derived vesicles
  • FIG. 11 is a result showing the distribution of bacteria-derived vesicles (EVs) with significant diagnostic performance at the genus level after separating the bacteria-derived vesicles in the urine of patients with prostate cancer and enlarged prostate gland .
  • EVs bacteria-derived vesicles
  • EVs bacteria-derived vesicles
  • FIG. 13 shows the distribution of bacteria-derived vesicles (EVs) with significant diagnostic performance at the class level after isolation of bacteria-derived vesicles from prostatic hyperplasia cancer patients and normal urine.
  • EVs bacteria-derived vesicles
  • FIG. 14 shows the distribution of bacteria-derived vesicles (EVs) with significant diagnostic performance at the neck level after isolation of bacteria-derived vesicles from prostatic hypertrophy cancer patients and normal urine.
  • EVs bacteria-derived vesicles
  • FIG. 15 shows the distribution of bacteria-derived vesicles (EVs) with significant diagnostic performance at the family level after isolation of bacteria-derived vesicles from prostatic hypertrophy cancer patients and normal urine.
  • EVs bacteria-derived vesicles
  • FIG. 16 shows the distribution of bacteria-derived vesicles (EVs) with significant diagnostic performance at the genus level after isolation of bacteria-derived vesicles from prostatic hypertrophy cancer patients and normal urine.
  • EVs bacteria-derived vesicles
  • the present invention relates to a method for diagnosing prostate diseases such as prostate hyperplasia and prostate cancer through bacterial metagenomic analysis, the present inventors extract a gene from a bacterial-derived extracellular vesicles using a sample derived from the subject and metagenomic analysis And extracellular vesicles derived from bacteria that can act as a causative agent of prostate disease.
  • the present invention comprises the steps of (a) extracting DNA from the extracellular vesicles isolated from the subject sample;
  • an information providing method for diagnosing prostate disease comprising the step of comparing the increase and decrease of the bacterial-derived extracellular vesicles in the sample derived from normal and prostatic hypertrophy patients by sequencing the PCR product.
  • the term "diagnosis of prostate cancer” means to determine whether a patient is likely to develop prostate cancer, a relatively high probability of developing prostate cancer, or whether prostate cancer has already occurred.
  • the method of the present invention can be used to prevent or delay the onset of the disease through special and appropriate management as a patient at high risk of developing prostate cancer for any particular patient.
  • the methods of the present invention can be used clinically to determine treatment by early diagnosis of prostate cancer and selection of the most appropriate treatment regimen.
  • the term "diagnosis of prostatic hyperplasia” means determining whether there is a possibility of developing prostatic hyperplasia, a relatively high probability of developing prostatic hyperplasia, or whether an enlarged prostate has already occurred.
  • the method of the present invention can be used to prevent or delay the onset of the disease through special and appropriate management as a patient at high risk of developing prostatic hyperplasia for any particular patient.
  • the methods of the present invention can be used clinically to determine treatment by early diagnosis of prostatic hyperplasia and selecting the most appropriate treatment regimen.
  • metagenome used in the present invention, also referred to as “metagenome”, refers to the total of the genome including all viruses, bacteria, fungi, etc. in an isolated area such as soil, animal intestine, It is mainly used as a concept of genome explaining the identification of many microorganisms at once using sequencer to analyze microorganisms which are not cultured.
  • metagenome does not refer to one species of genome or genome, but refers to a kind of mixed dielectric as the genome of all species of one environmental unit. This is a term from the point of view of defining a species in the course of the evolution of biology in terms of functional species as well as various species that interact with each other to create a complete species.
  • rapid sequencing is used to analyze all DNA and RNA, regardless of species, to identify all species in one environment, and to identify interactions and metabolism.
  • metagenome analysis was preferably performed using bacterial-derived extracellular vesicles isolated from serum.
  • metagenome analysis was performed on genes present in bacteria-derived extracellular vesicles in the urine of normal, prostatic hyperplasia, and prostate cancer patients. Analysis at the levels of), family, and genus, respectively, identified bacterial vesicles that could actually contribute to the development of prostate cancer and prostatic hyperplasia.
  • bacteria-derived metagenomes were analyzed at the gate level, and as a result, Tenericutes, Euryarchaeota, Verrucomicrobia, Gemmatimonadetes, Acidobacteria, and Planctomycetes ⁇ bacteria-derived vesicles were significantly different between prostate cancer patients and normal people. (See Example 4).
  • the bacterial-derived metagenome was analyzed at the neck level.
  • Stramenopiles, Alteromonadales, RF39, Rickettsiales, Neisseriales, Methanobacteriales, Verrucomicrobiales, Myxococcales, Acidimicrobiales, Chthoniobacterales, iii1-15, Acidobacteriales, Ellin329 Vesicle-derived vesicles derived from,, and Pedosphaerales were significantly different between prostate cancer patients and normal individuals (see Example 4).
  • the bacteria-derived metagenome was analyzed at an excessive level.
  • Rikenellaceae, Weeksellaceae, Streptomycetaceae, Helicobacteraceae, Chthoniobacteraceae, and Bacterial-derived vesicles were significantly different between prostate cancer patients and normal individuals (see Example 4).
  • the bacteria-derived metagenome at the genus level Rhizobium, Tetragenococcus, Proteus, Morganella, Exiguobacterium, Oribacterium, Porphyromonas, Actinomyces, Cellulomonas, Jeotgalicoccus, Acinetobacter, Fusobacterium, Enterobacter , Adlercreutzia, SMB53, Parabacteroides, Faecalibacterium, Catenibacterium, Roseburia, Akkermansia, Methanobrevibacter, Clostridium, Klebsiella, Chryseobacterium, Halomonas, Aggregatibacter, Rhodoplanes, Thermoanaerobacterium, and Candidatus Kosibacterium genus There was a difference (see Example 4).
  • metagenome analysis of extracellular vesicles derived from bacteria in the urine of prostatic hyperplasia and prostate cancer patients was carried out, and phylum, class, order, family ), And genus levels were analyzed to identify bacterial vesicles that could actually cause prostate cancer in patients with enlarged prostate.
  • the vesicles derived from Verrucomicrobiae, Acidimicrobiia, Saprospirae, and Pedosphaerae river bacteria showed a significant difference between patients with prostate cancer and hypertrophy. (See Example 5).
  • metagenome analysis was performed on bacteria-derived extracellular vesicles in the urine of normal and prostatic hypertrophy patients, including phylum, class, order, family, Analyzes at the genus and genus levels, respectively, identified bacterial vesicles that can actually cause prostate cancer in asthma patients.
  • the vesicles derived from Euryarchaeota, and Acidobacteria gate bacteria showed a significant difference between patients with prostatic hyperplasia and normal people (see Example 6).
  • the vesicles derived from Methanobacteria, Acidobacteria, and Acidobacteriia strong bacteria had a significant difference between patients with prostatic hyperplasia and normal people (Example 6 Reference).
  • the bacterial-derived metagenome was analyzed at the neck level.
  • stramenopiles, RF39, Saprospirales, Pseudomonadales, Methanobacteriales, and Acidobacteriales-derived vesicle-derived vesicles were significantly different between prostate hyperplasia and normal people (See Example 6).
  • the bacterial-derived metagenome is analyzed at an exaggerated level, and Exiguobacteraceae, Flavobacteriaceae, Actinomycetaceae, Moraxellaceae, Ruminococcaceae, Rikenellaceae, Methanobacteriaceae, and Koribacteraceae are bacteria-derived vesicles between the prostate hypertrophy and the normal There was a significant difference (see Example 6).
  • bacteria-derived metagenome was analyzed at the genus level, and Rhizobium, Proteus, Acinetobacter, SMB53, Halomonas, Ruminococcus, Faecalibacterium, Klebsiella, Roseburia, Leuconostoc, Bilophila, Chromohalobacter, and Methanobrevibacter Bacterial-derived vesicles were significantly different between prostate hypertrophy patients and normal subjects (see Example 6).
  • the bacterial-derived vesicles whose contents were significantly changed in prostate cancer patients compared to normal and prostatic hypertrophy patients by performing metagenomic analysis on bacterial-derived extracellular vesicles isolated from urine.
  • the metagenome analysis confirmed that prostate cancer can be diagnosed by analyzing the increase and decrease of the contents of the bacteria-derived vesicles at each level.
  • the present invention through the results of the above embodiment, by identifying the bacteria-derived extracellular vesicles isolated from urine by metagenomic analysis of bacteria-derived vesicles significantly changed in the content of prostate hypertrophy patients compared to normal people Meta-genomic analysis confirmed that prostatic hyperplasia can be diagnosed by analyzing the increase and decrease of the contents of the bacteria-derived vesicles at each level.
  • Example 1 Analysis of absorption, distribution, and excretion of intestinal bacteria and bacterial-derived vesicles
  • the fluorescently labeled 50 ⁇ g of bacteria and bacteria-derived vesicles were administered in the same manner as above 12 hours.
  • Blood, Heart, Lung, Liver, Kidney, Spleen, Adipose tissue, and Muscle were extracted from mice.
  • the intestinal bacteria (Bacteria) were not absorbed in each organ, whereas the intestinal bacteria-derived extracellular vesicles (EVs) were urine, heart, lung as shown in FIG. And distribution in liver, kidney, spleen, adipose tissue, and muscle.
  • the urine was first placed in a 10 ml tube and centrifuged (3,500 x g, 10 min, 4 ° C.) to settle the suspended solids to recover only the supernatant and then transferred to a new 10 ml tube. After removing the bacteria and foreign substances from the recovered supernatant using a 0.22 ⁇ m filter, transfer to centripreigugal filters (50 kD) and centrifuged at 1500 xg, 4 °C for 15 minutes to discard the material smaller than 50 kD and 10 ml Concentrated until.
  • centripreigugal filters 50 kD
  • PCR was performed using the 16S rDNA primer shown in Table 1 to amplify the gene and perform sequencing (Illumina MiSeq sequencer). Output the result as a Standard Flowgram Format (SFF) file, convert the SFF file into a sequence file (.fasta) and a nucleotide quality score file using GS FLX software (v2.9), check the credit rating of the lead, and window (20 bps) The part with the average base call accuracy of less than 99% (Phred score ⁇ 20) was removed.
  • SFF Standard Flowgram Format
  • the Operational Taxonomy Unit performed UCLUST and USEARCH for clustering according to sequence similarity. Specifically, the clustering is based on 94% genus, 90% family, 85% order, 80% class, and 75% sequence similarity. OTU's door, river, neck, family and genus level classifications were performed, and bacteria with greater than 97% sequence similarity were analyzed using BLASTN and GreenGenes' 16S DNA sequence database (108,453 sequences) (QIIME).
  • Example 3 By the method of Example 3, vesicles were isolated from urine of 53 prostate cancer patients and 159 normal humans whose age and sex were matched, followed by metagenome sequencing. In the development of the diagnostic model, the strains whose p-value between the two groups is 0.05 or less and more than two times different between the two groups are selected in the t-test. under curve), sensitivity, and specificity.
  • Rhizobium Tetragenococcus, Proteus, Morganella, Exiguobacterium, Oribacterium, Porphyromonas, Actinomyces, Cellulomonas, Jeotgalicoccus, Acinetobacter, Fusobacterium, Enterobacter, Neissezi, Adissemb, Diagnosis and development of one or more biomarkers for the development of one or more biomarkers for Faecalibacterium, Catenibacterium, Roseburia, Akkermansia, Methanobrevibacter, Clostridium, Klebsiella, Chryseobacterium, Halomonas, Aggregatibacter, Rhodoplanes, Thermoanaerobacterium, Candidatus Koribacter, and Flexispira genus Performance was significant (see Table 6 and FIG. 6).
  • Example 3 By the method of Example 3, the vesicles were isolated from the urine of 53 patients with prostate cancer and 55 patients with enlarged prostate gland, and metagenome sequencing was performed. In the development of the diagnostic model, the strains whose p-value between the two groups is 0.05 or less and more than two times different between the two groups are selected in the t-test. under curve), sensitivity, and specificity.
  • the diagnostic performance of prostate cancer was significant when developing a diagnostic model with Verrucomicrobia cultivars as a biomarker (see Table 7 and FIG. 7).
  • the diagnostic performance of prostate cancer was significant when developing a diagnostic model with one or more biomarkers in Verrucomicrobiales, Acidimicrobiales, Saprospirales, Pedosphaerales, and Ellin329 throat bacteria. (See Table 9 and FIG. 9).
  • Example 3 By the method of Example 3, the vesicles were isolated from the urine of 55 prostate cancer patients and 159 normal people, and then metagenome sequencing was performed. In the development of the diagnostic model, the strains whose p-value between the two groups is 0.05 or less and more than two times different between the two groups are selected in the t-test. under curve), sensitivity, and specificity.
  • Predicting the risk of developing prostate cancer and prostatic hyperplasia through metagenomic analysis on genes present in bacteria-derived extracellular vesicles using a human-derived sample according to the present invention by early diagnosis and prediction of risk groups of prostate disease, appropriate management It can delay the onset or prevent the onset of the disease, and can be diagnosed early after the enlargement of the prostate or prostate cancer, thereby reducing the incidence of prostate disease and improving the treatment effect.

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Abstract

본 발명은 세균 메타게놈 분석을 통해 전립선암 및 전립선비대증 등의 전립선질환을 진단하는 방법에 관한 것으로서, 보다 구체적으로는 피검체 유래 샘플을 이용해 세균 메타게놈 분석을 수행하여 특정 세균 유래 세포밖 소포의 함량 증감을 분석함으로써 전립선암 및 전립선비대증을 진단하는 방법에 관한 것이다. 환경에 존재하는 세균에서 분비되는 세포밖 소포는 체내에 흡수되어 염증 및 암 발생에 직접적인 영향을 미칠 수 있으며, 전립선암 및 전립선비대증 등의 전립선질환은 증상이 나타나기 전 조기진단이 어려워 효율적인 치료가 어려운 실정이므로, 본 발명에 따른 인체 유래 샘플을 이용한 세균 유래 세포밖　소포에 존재하는 유전자에 대하여 메타게놈 분석을 통해 전립선암 및 전립선비대증 발병의 위험도를 미리 예측함으로써 전립선질환의 위험군을 조기에 진단 및 예측하여 적절한 관리를 통해 발병 시기를 늦추거나 발병을 예방할 수 있으며, 전립선비대증 혹은 전립선암 발병 후에도 조기진단 할 수 있어 전립선질환의 발병률을 낮추고 치료효과를 높일 수 있다.

Description

세균 메타게놈 분석을 통한 전립선질환 진단 방법
본 발명은 세균 메타게놈 분석을 통해 전립선암 및 전립선비대증 등의 전립선질환을 진단하는 방법에 관한 것으로서, 보다 구체적으로는 피검체 유래 샘플을 이용해 세균 메타게놈 분석을 수행하여 특정 세균 유래 세포밖 소포의 함량 증감을 분석함으로써 전립선질환을 진단하는 방법에 관한 것이다.
남성 생식기관의 일부인 전립선은 정자와 섞여 정액을 만드는 액체를 만드는 장기이다. 전립선비대증은 전립선이 비대해지면서 방광 하부의 소변이 나오는 길을 막아 요도의 소변 흐름이 막히거나 감소된 상태이고, 양성전립선비대증(benign protstate hyperplasia, BPH)은 남성 배뇨장애로 전립선의 크기가 증가하여 배뇨를 힘들게 하는 질환이다. 전립선은 소변을 방광에서 이동시키는 관(요관)을 둘러싸고 있고, 사춘기 동안에 전립선은 균등하게 팽창되고, 나이가 들수록 샘의 요도 옆 부위에 집중하여 전립선비대가 진행된다. 양성전립선비대증의 원인은 아직 명확하게 밝혀지지 않았으나, 다른 만성질환과 마찬가지로 여러 가지 요인이 작용하는 것으로 알려져 있다. 전립선은 남성 호르몬 의존 기관이므로 성장과 기능을 유지하기 위해서는 지속적인 남성호르몬이 필요하며, 거세로 인해 남성호르몬이 생성되지 않으면 전립선은 위축된다는 등의 원인이 있으며, 유전적 요인과 가족력 등도 전립선비대증과 연관이 있다고 알려져 있다.
전립선암(prostate carcinoma)은 전립선에 발생하는 악성 종양으로서, 대부분은 전립선 세포에서 발생하는 선암(腺癌, 샘세포의 암)이다. 전립선암의 위험요인은 고령 (50세 이상)에서 급격히 증가한다. 인종에 따라선 동양인의 발생률이 가장 낮고, 유전적 소인, 가족력, 남성호르몬, 당뇨병, 비만, 서구화한 식생활 (동물성 지방 섭취의 증가), 감염 등이 위험요인으로 알려져 있다. 조기 검진에 의해 전립선암으로 인한 사망을 예방할 수 있다는 명확한 증거는 없으나, 일반적으로 수명이 10년 넘게 남아 있다고 예상되는 50세 이상 남자들에게는 매년 혈중(혈청) 전립선특이항원 (PSA) 측정 검사와 직장수지검사를 받을 것을 권고하고 있다. 그러나, 현대 서양의학의 많은 발전에도 불국하고, 아직까지 비침습적인 방법으로 전립선암을 예측하는 방법은 전무하고, 기존 진단방법으로는 전립선암 등의 고형암이 진행된 경우에 발견되는 경우가 많기 때문에, 전립선암으로 인한 의료비용과 사망을 예방하기 위해선 전립선암 발생 및 원인인자를 미리 예측하여, 고위험군에서 전립선암 발생을 예방하는 방법을 제공하는 것이 효율적인 방법이다.
한편, 인체에 공생하는 미생물은 100조에 이르러 인간 세포보다 10배 많으며, 미생물의 유전자수는 인간 유전자수의 100배가 넘는 것으로 알려지고 있다. 미생물총(microbiota 혹은 microbiome)은 주어진 거주지에 존재하는 세균(bacteria), 고세균(archaea), 진핵생물(eukarya)을 포함한 미생물 군집(microbial community)을 말하고, 장내 미생물총은 사람의 생리현상에 중요한 역할을 하며, 인체 세포와 상호작용을 통해 인간의 건강과 질병에 큰 영향을 미치는 것으로 알려져 있다. 우리 몸에 공생하는 세균은 다른 세포로의 유전자, 단백질 등의 정보를 교환하기 위하여 나노미터 크기의 소포(vesicle)를 분비한다. 점막은 200 나노미터(nm) 크기 이상의 입자는 통과할 수 없는 물리적인 방어막을 형성하여 점막에 공생하는 세균인 경우에는 점막을 통과하지 못하지만, 세균 유래 소포는 크기가 대개 100 나노미터 크기 이하라서 비교적 자유롭게 점막을 통화하여 우리 몸에 흡수된다.
환경 유전체학이라고도 불리는 메타게놈학은 환경에서 채취한 샘플에서 얻은 메타게놈 자료에 대한 분석학이라고 할 수 있다(국내 공개특허 제2011-0073049호). 최근 16s 리보솜 RNA(16s rRNA) 염기서열을 기반으로 한 방법으로 인간의 미생물총의 세균 구성을 목록화하는 것이 가능해졌으며, 16s 리보솜 RNA의 유전자인 16s rDNA 염기서열을 차세대 염기서열분석 (next generation sequencing, NGS) platform을 이용하여 분석한다. 그러나 전립선비대증 및 전립선암 등의 전립선질환 발병에 있어서, 소변 등의 인체 유래물에서 세균 유래 소포에 존재하는 메타게놈 분석을 통해 전립선질환의 원인인자를 동정하고 전립선질환 발병 위험도를 진단하는 방법에 대해서는 보고된 바가 없다.
본 발명자들은 전립선비대증 및 전립선암의 원인인자를 기반으로 전립선질환을 진단하기 위하여, 피검체 유래 샘플인 소변에서 세균 유래 세포밖 소포로부터 유전자를 추출하고 이에 대하여 메타게놈 분석을 수행하였으며, 그 결과 전립선암 및 전립선비대증 등의 전립선질환의 원인인자로 작용할 수 있는 세균 유래 세포밖 소포를 동정하였는바, 이에 기초하여 본 발명을 완성하였다.
이에, 본 발명은 세균 유래 세포밖 소포에 대한 메타게놈 분석을 통해 전립선암을 진단하기 위한 정보제공방법을 제공하는 것을 목적으로 한다. 또한, 본 발명은 세균 유래 세포밖 소포에 대한 메타게놈 분석을 통해 전립선비대증환자에서 전립선암을 진단하기 위한 정보제공방법을 제공하는 것을 목적으로 한다. 또한, 본 발명은 세균 유래 세포밖 소포에 대한 메타게놈 분석을 통해 전립선비대증을 진단하기 위한 정보제공방법을 제공하는 것을 목적으로 한다.
그러나 본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는 이상에서 언급한 과제에 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 과제들은 아래의 기재로부터 당업자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.
상기와 같은 본 발명의 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 하기의 단계를 포함하는, 전립선질환 진단을 위한 정보제공방법을 제공한다.
(a) 피검체 샘플에서 분리한 세포밖 소포로부터 DNA를 추출하는 단계;
(b) 상기 추출한 DNA에 대하여 서열번호 1 및 서열번호 2의 프라이머 쌍을 이용하여 PCR을 수행하는 단계; 및
(c) 상기 PCR 산물의 서열분석을 통하여 정상인과 전립선암환자 유래 샘플에서 세균 유래 세포밖 소포의 함량 증감을 비교하는 단계; 또는
상기 PCR 산물의 서열분석을 통하여 전립선비대증환자와 전립선암환자 유래 샘플에서 세균 유래 세포밖 소포의 함량 증감을 비교하는 단계; 또는
상기 PCR 산물의 서열분석을 통하여 정상인과 전립선비대증환자 유래 샘플에서 세균 유래 세포밖 소포의 함량 증감을 비교하는 단계.
또한, 본 발명은 하기의 단계를 포함하는, 전립선질환 진단방법을 제공한다.
(a) 피검체 샘플에서 분리한 세포밖 소포로부터 DNA를 추출하는 단계;
(b) 상기 추출한 DNA에 대하여 서열번호 1 및 서열번호 2의 프라이머 쌍을 이용하여 PCR을 수행하는 단계; 및
(c) 상기 PCR 산물의 서열분석을 통하여 정상인과 전립선암환자 유래 샘플에서 세균 유래 세포밖 소포의 함량 증감을 비교하는 단계; 또는
상기 PCR 산물의 서열분석을 통하여 전립선비대증환자와 전립선암환자 유래 샘플에서 세균 유래 세포밖 소포의 함량 증감을 비교하는 단계; 또는
상기 PCR 산물의 서열분석을 통하여 정상인과 전립선비대증환자 유래 샘플에서 세균 유래 세포밖 소포의 함량 증감을 비교하는 단계.
또한, 본 발명은 하기의 단계를 포함하는, 전립선질환의 발병 위험도 예측방법을 제공한다.
(a) 피검체 샘플에서 분리한 세포밖 소포로부터 DNA를 추출하는 단계;
(b) 상기 추출한 DNA에 대하여 서열번호 1 및 서열번호 2의 프라이머 쌍을 이용하여 PCR을 수행하는 단계; 및
(c) 상기 PCR 산물의 서열분석을 통하여 정상인과 전립선암환자 유래 샘플에서 세균 유래 세포밖 소포의 함량 증감을 비교하는 단계; 또는
상기 PCR 산물의 서열분석을 통하여 전립선비대증환자와 전립선암환자 유래 샘플에서 세균 유래 세포밖 소포의 함량 증감을 비교하는 단계; 또는
상기 PCR 산물의 서열분석을 통하여 정상인과 전립선비대증환자 유래 샘플에서 세균 유래 세포밖 소포의 함량 증감을 비교하는 단계.
본 발명의 일구현예로, 상기 (c) 단계에서 정상인 유래 샘플과 비교하여 Tenericutes, Euryarchaeota, Verrucomicrobia, Gemmatimonadetes, Acidobacteria, 및 Planctomycetes로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 문(phylum) 세균 유래 세포밖 소포의 함량 증감을 비교하여 전립선암을 진단하는 것일 수 있다.
본 발명의 일구현예로, 상기 (c) 단계에서 정상인 유래 샘플과 비교하여 Mollicutes, Methanobacteria, Verrucomicrobiae, Acidimicrobiia, Spartobacteria, Acidobacteria-6, Gemmatimonadetes, Acidobacteriia, 및 Pedosphaerae로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 강(class) 세균 유래 세포밖 소포의 함량 증감을 비교하여 전립선암을 진단하는 것일 수 있다.
본 발명의 일구현예로, 상기 (c) 단계에서 정상인 유래 샘플과 비교하여 Stramenopiles, Alteromonadales, RF39, Rickettsiales, Neisseriales, Methanobacteriales, Verrucomicrobiales, Myxococcales, Acidimicrobiales, Chthoniobacterales, iii1-15, Acidobacteriales, Ellin329, 및 Pedosphaerales로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 목(order) 세균 유래 세포밖 소포의 함량 증감을 비교하여 전립선암을 진단하는 것일 수 있다.
본 발명의 다른 구현예로, 상기 (c) 단계에서 정상인 유래 샘플과 비교하여 Peptococcaceae, Exiguobacteraceae, Actinomycetaceae, Cellulomonadaceae, mitochondria, Fusobacteriaceae, S24-7, Porphyromonadaceae, Flavobacteriaceae, Moraxellaceae, Neisseriaceae, Methanobacteriaceae, Verrucomicrobiaceae, Rikenellaceae, Weeksellaceae, Streptomycetaceae, Helicobacteraceae, Chthoniobacteraceae, 및 Koribacteraceae로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 과(family) 세균 유래 세포밖 소포의 함량 증감을 비교하여 전립선암을 진단하는 것일 수 있다.
본 발명의 다른 구현예로, 상기 (c) 단계에서 정상인 유래 샘플과 비교하여 Rhizobium, Tetragenococcus, Proteus, Morganella, Exiguobacterium, Oribacterium, Porphyromonas, Actinomyces, Cellulomonas, Jeotgalicoccus, Acinetobacter, Fusobacterium, Enterobacter, Neisseria, Adlercreutzia, SMB53, Parabacteroides, Faecalibacterium, Catenibacterium, Roseburia, Akkermansia, Methanobrevibacter, Clostridium, Klebsiella, Chryseobacterium, Halomonas, Aggregatibacter, Rhodoplanes, Thermoanaerobacterium, Candidatus Koribacter, 및 Flexispira로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 속(genus) 세균 유래 세포밖 소포의 함량 증감을 비교하여 전립선암을 진단하는 것일 수 있다.
본 발명의 다른 구현예로, 상기 (c) 단계에서 전립선비대증환자 유래 샘플과 비교하여 Verrucomicrobia 문(phylum) 세균 유래 세포밖 소포의 함량 증감을 비교하여 전립선암을 진단하는 것일 수 있다.
본 발명의 다른 구현예로, 상기 (c) 단계에서 전립선비대증환자 유래 샘플과 비교하여 Verrucomicrobiae, Acidimicrobiia, Saprospirae, 및 Pedosphaerae로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 강(class) 세균 유래 세포밖 소포의 함량 증감을 비교하여 전립선암을 진단하는 것일 수 있다.
본 발명의 다른 구현예로, 상기 (c) 단계에서 전립선비대증환자 유래 샘플과 비교하여 Verrucomicrobiales, Acidimicrobiales, Saprospirales, Pedosphaerales, 및 Ellin329로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 목(order) 세균 유래 세포밖 소포의 함량 증감을 비교하여 전립선암을 진단하는 것일 수 있다.
본 발명의 다른 구현예로, 상기 (c) 단계에서 전립선비대증환자 유래 샘플과 비교하여 Verrucomicrobiaceae, Chitinophagaceae, 및 Helicobacteraceae로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 과(family) 세균 유래 세포밖 소포의 함량 증감을 비교하여 전립선암을 진단하는 것일 수 있다.
본 발명의 다른 구현예로, 상기 (c) 단계에서 전립선비대증환자 유래 샘플과 비교하여 Ruminococcus, Akkermansia, 및 Flexispira로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 속(genus) 세균 유래 세포밖 소포의 함량 증감을 비교하여 전립선암을 진단하는 것일 수 있다.
본 발명의 다른 구현예로, 상기 (c) 단계에서 정상인 유래 샘플과 비교하여 Euryarchaeota, 및 Acidobacteria로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 문(phylum) 세균 유래 세포밖 소포의 함량 증감을 비교하여 전립선비대증을 진단하는 것일 수 있다.
본 발명의 다른 구현예로, 상기 (c) 단계에서 정상인 유래 샘플과 비교하여 Methanobacteria, Acidobacteria, 및 Acidobacteriia로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 강(class) 세균 유래 세포밖 소포의 함량 증감을 비교하여 전립선비대증을 진단하는 것일 수 있다.
본 발명의 다른 구현예로, 상기 (c) 단계에서 정상인 유래 샘플과 비교하여 Stramenopiles, RF39, Saprospirales, Pseudomonadales, Methanobacteriales, 및 Acidobacteriales로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 목(order) 세균 유래 세포밖 소포의 함량 증감을 비교하여 전립선비대증을 진단하는 것일 수 있다.
본 발명의 다른 구현예로, 상기 (c) 단계에서 정상인 유래 샘플과 비교하여 Exiguobacteraceae, Flavobacteriaceae, Actinomycetaceae, Moraxellaceae, Ruminococcaceae, Rikenellaceae, Methanobacteriaceae, 및 Koribacteraceae로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 과(family) 세균 유래 세포밖 소포의 함량 증감을 비교하여 전립선비대증을 진단하는 것일 수 있다.
본 발명의 다른 구현예로, 상기 (c) 단계에서 정상인 유래 샘플과 비교하여 Rhizobium, Proteus, Acinetobacter, SMB53, Halomonas, Ruminococcus, Faecalibacterium, Klebsiella, Roseburia, Leuconostoc, Bilophila, Chromohalobacter, 및 Methanobrevibacter로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 속(genus) 세균 유래 세포밖 소포의 함량 증감을 비교하여 전립선비대증을 진단하는 것일 수 있다.
본 발명의 또 다른 구현예로, 상기 샘플은 소변일 수 있다.
환경에 존재하는 세균에서 분비되는 세포밖 소포는 체내에 흡수되어 암 발생에 직접적인 영향을 미칠 수 있으며, 전립선비대증 및 전립선암은 증상이 나타나기 전 조기진단이 어려워 효율적인 치료가 어려운 실정이므로, 본 발명에 따른 인체 유래 샘플을 이용한 세균 또는 세균 유래 세포밖　소포의 메타게놈 분석을 통해 전립성비대증 및 전립선암 등의 전립선질환 발병의 위험도를 미리 예측함으로써 전립선질환의 위험군을 조기에 진단 및 예측하여 적절한 관리를 통해 발병 시기를 늦추거나 발병을 예방할 수 있으며, 발병 후에도 조기진단 할 수 있어 전립선질환의 발병률을 낮추고 치료효과를 높일 수 있다. 또한, 전립선비대증 혹은 전립선암으로 진단받은 환자에서 메타게놈 분석을 통해 원인인자를 예측하여, 원인인자에 대한 노출을 피함으로써 전립선비대증 및 전립선암의 경과를 좋게 하거나, 재발을 막을 수 있다.
도 1은 체내에서 세균 유래 세포밖 소포의 분포양상을 평가하기 위한 것으로, 도 1a는 마우스에 장내 세균(Bacteria) 및 세균 유래 소포(EV)를 구강으로 투여한 후 시간별(0, 5min, 3h, 6h, 및 12h)로 이들의 분포양상을 촬영한 사진이고, 도 1b는 마우스에 장내 세균(Bacteria) 및 세균 유래 세포밖 소포(EV)를 구강으로 투여하고 12시간 후 소변 및 다양한 장기(심장, 폐, 간, 신장, 비장, 지방조직, 및 근육)를 적출하여 상기 세균 및 세포밖 소포의 분포양상을 촬영한 사진이다.
도 2는 전립선암환자 및 정상인 소변에서 세균 유래 소포를 분리한 후, 메타게놈 분석을 수행하여 문(phylum) 수준에서 진단적 성능이 유의한 세균 유래 소포(EVs)의 분포를 나타낸 결과이다.
도 3은 전립선암환자 및 정상인 소변에서 세균 유래 소포를 분리한 후, 메타게놈 분석을 수행하여 강(class) 수준에서 진단적 성능이 유의한 세균 유래 소포(EVs)의 분포를 나타낸 결과이다.
도 4는 전립선암환자 및 정상인 소변에서 세균 유래 소포를 분리한 후, 메타게놈 분석을 수행하여 목(order) 수준에서 진단적 성능이 유의한 세균 유래 소포(EVs)의 분포를 나타낸 결과이다.
도 5는 전립선암환자 및 정상인 소변에서 세균 유래 소포를 분리한 후, 메타게놈 분석을 수행하여 과(family) 수준에서 진단적 성능이 유의한 세균 유래 소포(EVs)의 분포를 나타낸 결과이다.
도 6은 전립선암환자 및 정상인 소변에서 세균 유래 소포를 분리한 후, 메타게놈 분석을 수행하여 속(genus) 수준에서 진단적 성능이 유의한 세균 유래 소포(EVs)의 분포를 나타낸 결과이다.
도 7은 전립선암환자 및 전립선비대증환자 소변에서 세균 유래 소포를 분리한 후, 메타게놈 분석을 수행하여 문(phylum) 수준에서 진단적 성능이 유의한 세균 유래 소포(EVs)의 분포를 나타낸 결과이다.
도 8은 전립선암환자 및 전립선비대증환자 소변에서 세균 유래 소포를 분리한 후, 메타게놈 분석을 수행하여 강(class) 수준에서 진단적 성능이 유의한 세균 유래 소포(EVs)의 분포를 나타낸 결과이다.
도 9는 전립선암환자 및 전립선비대증환자 소변에서 세균 유래 소포를 분리한 후, 메타게놈 분석을 수행하여 목(order) 수준에서 진단적 성능이 유의한 세균 유래 소포(EVs)의 분포를 나타낸 결과이다.
도 10은 전립선암환자 및 전립선비대증환자 소변에서 세균 유래 소포를 분리한 후, 메타게놈 분석을 수행하여 과(family) 수준에서 진단적 성능이 유의한 세균 유래 소포(EVs)의 분포를 나타낸 결과이다.
도 11은 전립선암환자 및 전립선비대증환자 소변에서 세균 유래 소포를 분리한 후, 메타게놈 분석을 수행하여 속(genus) 수준에서 진단적 성능이 유의한 세균 유래 소포(EVs)의 분포를 나타낸 결과이다.
도 12는 전립선비대증암환자 및 정상인 소변에서 세균 유래 소포를 분리한 후, 메타게놈 분석을 수행하여 문(phylum) 수준에서 진단적 성능이 유의한 세균 유래 소포(EVs)의 분포를 나타낸 결과이다.
도 13은 전립선비대증암환자 및 정상인 소변에서 세균 유래 소포를 분리한 후, 메타게놈 분석을 수행하여 강(class) 수준에서 진단적 성능이 유의한 세균 유래 소포(EVs)의 분포를 나타낸 결과이다.
도 14는 전립선비대증암환자 및 정상인 소변에서 세균 유래 소포를 분리한 후, 메타게놈 분석을 수행하여 목(order) 수준에서 진단적 성능이 유의한 세균 유래 소포(EVs)의 분포를 나타낸 결과이다.
도 15는 전립선비대증암환자 및 정상인 소변에서 세균 유래 소포를 분리한 후, 메타게놈 분석을 수행하여 과(family) 수준에서 진단적 성능이 유의한 세균 유래 소포(EVs)의 분포를 나타낸 결과이다.
도 16은 전립선비대증암환자 및 정상인 소변에서 세균 유래 소포를 분리한 후, 메타게놈 분석을 수행하여 속(genus) 수준에서 진단적 성능이 유의한 세균 유래 소포(EVs)의 분포를 나타낸 결과이다.
본 발명은 세균 메타게놈 분석을 통해 전립선비대증 및 전립선암 등의 전립선질환을 진단하는 방법에 관한 것으로서, 본 발명자들은 피검체 유래 샘플을 이용해 세균 유래 세포밖 소포로부터 유전자를 추출하고 이에 대하여 메타게놈 분석을 수행하였으며, 전립선질환의 원인인자로 작용할 수 있는 세균 유래 세포밖 소포를 동정하였다.
이에, 본 발명은 (a) 피검체 샘플에서 분리한 세포밖 소포로부터 DNA를 추출하는 단계;
(b) 상기 추출한 DNA에 대하여 서열번호 1 및 서열번호 2의 프라이머 쌍을 이용하여 PCR을 수행하는 단계; 및
(c) 상기 PCR 산물의 서열분석을 통하여 정상인과 전립선암환자 유래 샘플에서 세균 유래 세포밖 소포의 함량 증감을 비교하는 단계; 또는
상기 PCR 산물의 서열분석을 통하여 전립선비대증환자와 전립선암환자 유래 샘플에서 세균 유래 세포밖 소포의 함량 증감을 비교하는 단계; 또는
상기 PCR 산물의 서열분석을 통하여 정상인과 전립선비대증환자 유래 샘플에서 세균 유래 세포밖 소포의 함량 증감을 비교하는 단계를 포함하는 전립선질환 진단을 위한 정보제공방법을 제공한다.
본 발명에서 사용되는 용어, "전립선암 진단" 이란 환자에 대하여 전립선암이 발병할 가능성이 있는지, 전립선암이 발병할 가능성이 상대적으로 높은지, 또는 전립선암이 이미 발병하였는지 여부를 판별하는 것을 의미한다. 본 발명의 방법은 임의의 특정 환자에 대한 전립선암 발병 위험도가 높은 환자로써 특별하고 적절한 관리를 통하여 발병 시기를 늦추거나 발병하지 않도록 하는데 사용할 수 있다. 또한, 본 발명의 방법은 전립선암을 조기에 진단하여 가장 적절한 치료방식을 선택함으로써 치료를 결정하기 위해 임상적으로 사용될 수 있다.
본 발명에서 사용되는 용어, "전립선비대증 진단" 이란 환자에 대하여 전립선비대증이 발병할 가능성이 있는지, 전립선비대증이 발병할 가능성이 상대적으로 높은지, 또는 전립선비대증이 이미 발병하였는지 여부를 판별하는 것을 의미한다. 본 발명의 방법은 임의의 특정 환자에 대한 전립선비대증 발병 위험도가 높은 환자로써 특별하고 적절한 관리를 통하여 발병 시기를 늦추거나 발병하지 않도록 하는데 사용할 수 있다. 또한, 본 발명의 방법은 전립선비대증을 조기에 진단하여 가장 적절한 치료방식을 선택함으로써 치료를 결정하기 위해 임상적으로 사용될 수 있다.
본 발명에서 사용되는 용어, "메타게놈(metagenome)"이란 "군유전체"라고도 하며, 흙, 동물의 장 등 고립된 지역 내의 모든 바이러스, 세균, 곰팡이 등을 포함하는 유전체의 총합을 의미하는 것으로, 주로 배양이 되지 않는 미생물을 분석하기 위해서 서열분석기를 사용하여 한꺼번에 많은 미생물을 동정하는 것을 설명하는 유전체의 개념으로 쓰인다. 특히, 메타게놈은 한 종의 게놈 또는 유전체를 말하는 것이 아니라, 한 환경단위의 모든 종의 유전체로서 일종의 혼합유전체를 말한다. 이는 오믹스적으로 생물학이 발전하는 과정에서 한 종을 정의할 때 기능적으로 기존의 한 종뿐만 아니라, 다양한 종이 서로 상호작용하여 완전한 종을 만든다는 관점에서 나온 용어이다. 기술적으로는 빠른 서열분석법을 이용해서, 종에 관계없이 모든 DNA, RNA를 분석하여, 한 환경 내에서의 모든 종을 동정하고, 상호작용, 대사작용을 규명하는 기법의 대상이다. 본 발명에서는 바람직하게 혈청에서 분리한 세균 유래 세포밖　소포를 이용하여 메타게놈 분석을 실시하였다.
본 발명의 실시예에서는 정상인, 전립선비대증환자, 및 전립선암환자의 소변 내 세균 유래 세포밖 소포에 존재하는 유전자에 대한 메타게놈 분석을 실시하였으며, 문(phylum), 강(class), 목(order), 과(family), 및 속(genus) 수준에서 각각 분석하여 실제로 전립선암 및 전립선비대증 발생의 원인으로 작용할 수 있는 세균 유래 소포를 동정하였다.
보다 구체적으로 본 발명의 일실시예에서는, 세균 유래 메타게놈을 문 수준에서 분석한 결과, Tenericutes, Euryarchaeota, Verrucomicrobia, Gemmatimonadetes, Acidobacteria, 및 Planctomycetes 믄 세균 유래 소포가 전립선암환자와 정상인 사이에 유의한 차이가 있었다(실시예 4 참조).
보다 구체적으로 본 발명의 일실시예에서는, 세균 유래 메타게놈을 강 수준에서 분석한 결과, Mollicutes, Methanobacteria, Verrucomicrobiae, Acidimicrobiia, Spartobacteria, Acidobacteria-6, Gemmatimonadetes, Acidobacteriia, 및 Pedosphaerae 강 세균 유래 소포가 전립선암환자와 정상인 사이에 유의한 차이가 있었다(실시예 4 참조).
보다 구체적으로 본 발명의 일실시예에서는, 세균 유래 메타게놈을 목 수준에서 분석한 결과, Stramenopiles, Alteromonadales, RF39, Rickettsiales, Neisseriales, Methanobacteriales, Verrucomicrobiales, Myxococcales, Acidimicrobiales, Chthoniobacterales, iii1-15, Acidobacteriales, Ellin329, 및 Pedosphaerales 목 세균 유래 소포가 전립선암환자와 정상인 사이에 유의한 차이가 있었다(실시예 4 참조).
보다 구체적으로 본 발명의 일실시예에서는, 세균 유래 메타게놈을 과 수준에서 분석한 결과, Peptococcaceae, Exiguobacteraceae, Actinomycetaceae, Cellulomonadaceae, mitochondria, Fusobacteriaceae, S24-7, Porphyromonadaceae, Flavobacteriaceae, Moraxellaceae, Neisseriaceae, Methanobacteriaceae, Verrucomicrobiaceae, Rikenellaceae, Weeksellaceae, Streptomycetaceae, Helicobacteraceae, Chthoniobacteraceae, 및 Koribacteraceae 과 세균 유래 소포가 전립선암환자와 정상인 사이에 유의한 차이가 있었다(실시예 4 참조).
보다 구체적으로 본 발명의 일실시예에서는, 세균 유래 메타게놈을 속 수준에서 분석한 결과, Rhizobium, Tetragenococcus, Proteus, Morganella, Exiguobacterium, Oribacterium, Porphyromonas, Actinomyces, Cellulomonas, Jeotgalicoccus, Acinetobacter, Fusobacterium, Enterobacter, Neisseria, Adlercreutzia, SMB53, Parabacteroides, Faecalibacterium, Catenibacterium, Roseburia, Akkermansia, Methanobrevibacter, Clostridium, Klebsiella, Chryseobacterium, Halomonas, Aggregatibacter, Rhodoplanes, Thermoanaerobacterium, Candidatus Koribacter, 및 Flexispira 속 세균 유래 소포가 전립선암환자와 정상인 사이에 유의한 차이가 있었다(실시예 4 참조).
본 발명의 또 다른 실시예에서는 전립선비대증환자와 전립선암환자의 소변 내 세균 유래 세포밖 소포에 대한 메타게놈 분석을 실시하였으며, 문(phylum), 강(class), 목(order), 과(family), 및 속(genus) 수준에서 각각 분석하여 실제로 전립선비대증환자에서 전립선암 발생의 원인으로 작용할 수 있는 세균 유래 소포를 동정하였다.
보다 구체적으로 본 발명의 일실시예에서는, 세균 유래 메타게놈을 속 수준에서 분석한 결과, Verrucomicrobia 문 세균 유래 소포가 전립선암환자와 전립선비대증환자 사이에 유의한 차이가 있었다(실시예 5 참조).
보다 구체적으로 본 발명의 일실시예에서는, 세균 유래 메타게놈을 강 수준에서 분석한 결과, Verrucomicrobiae, Acidimicrobiia, Saprospirae, 및 Pedosphaerae 강 세균 유래 소포가 전립선암환자와 전립선비대증환자 사이에 유의한 차이가 있었다(실시예 5 참조).
보다 구체적으로 본 발명의 일실시예에서는, 세균 유래 메타게놈을 목 수준에서 분석한 결과, Verrucomicrobiales, Acidimicrobiales, Saprospirales, Pedosphaerales, 및 Ellin329 목 세균 유래 소포가 전립선암환자와 전립선비대증환자 사이에 유의한 차이가 있었다(실시예 5 참조).
보다 구체적으로 본 발명의 일실시예에서는, 세균 유래 메타게놈을 과 수준에서 분석한 결과, Verrucomicrobiaceae, Chitinophagaceae, Helicobacteraceae 과 세균 유래 소포가 전립선암환자와 전립선비대증환자 사이에 유의한 차이가 있었다(실시예 5 참조).
보다 구체적으로 본 발명의 일실시예에서는, 세균 유래 메타게놈을 과 수준에서 분석한 결과, Ruminococcus, Akkermansia, Flexispira 속 세균 유래 소포가 전립선암환자와 전립선비대증환자 사이에 유의한 차이가 있었다(실시예 5 참조).
본 발명의 또 다른 실시예에서는 정상인과 전립선비대증환자의 소변 내 세균 유래 세포밖 소포에 대한 메타게놈 분석을 실시하였으며, 문(phylum), 강(class), 목(order), 과(family), 및 속(genus) 수준에서 각각 분석하여 실제로 천식환자에서 전립선암 발생의 원인으로 작용할 수 있는 세균 유래 소포를 동정하였다.
보다 구체적으로 본 발명의 일실시예에서는, 세균 유래 메타게놈을 문 수준에서 분석한 결과, Euryarchaeota, 및 Acidobacteria 문 세균 유래 소포가 전립선비대증환자와 정상인 사이에 유의한 차이가 있었다(실시예 6 참조).
보다 구체적으로 본 발명의 일실시예에서는, 세균 유래 메타게놈을 강 수준에서 분석한 결과, Methanobacteria, Acidobacteria, 및 Acidobacteriia 강 세균 유래 소포가 전립선비대증환자와 정상인 사이에 유의한 차이가 있었다(실시예 6 참조).
보다 구체적으로 본 발명의 일실시예에서는, 세균 유래 메타게놈을 목 수준에서 분석한 결과, Stramenopiles, RF39, Saprospirales, Pseudomonadales, Methanobacteriales, 및 Acidobacteriales 목 세균 유래 소포가 전립선비대증환자와 정상인 사이에 유의한 차이가 있었다(실시예 6 참조).
보다 구체적으로 본 발명의 일실시예에서는, 세균 유래 메타게놈을 과 수준에서 분석한 결과, Exiguobacteraceae, Flavobacteriaceae, Actinomycetaceae, Moraxellaceae, Ruminococcaceae, Rikenellaceae, Methanobacteriaceae, 및 Koribacteraceae 과 세균 유래 소포가 전립선비대증환자와 정상인 사이에 유의한 차이가 있었다(실시예 6 참조).
보다 구체적으로 본 발명의 일실시예에서는, 세균 유래 메타게놈을 속 수준에서 분석한 결과, Rhizobium, Proteus, Acinetobacter, SMB53, Halomonas, Ruminococcus, Faecalibacterium, Klebsiella, Roseburia, Leuconostoc, Bilophila, Chromohalobacter, 및 Methanobrevibacter 속 세균 유래 소포가 전립선비대증환자와 정상인 사이에 유의한 차이가 있었다(실시예 6 참조).
본 발명은 상기와 같은 실시예 결과를 통해, 소변으로부터 분리한 세균 유래 세포밖 소포에 대하여 메타게놈 분석을 실시함으로써 정상인 및 전립선비대증환자와 비교하여 전립선암환자에서 함량이 유의하게 변화한 세균 유래 소포들을 동정하였으며, 메타게놈 분석을 통해 상기 각 수준에서 세균 유래 소포들의 함량 증감을 분석함으로써 전립선암을 진단할 수 있음을 확인하였다.
또한, 본 발명은 상기와 같은 실시예 결과를 통해, 소변으로부터 분리한 세균 유래 세포밖 소포에 대하여 메타게놈 분석을 실시함으로써 정상인과 비교하여 전립선비대증환자에서 함량이 유의하게 변화한 세균 유래 소포들을 동정하였으며, 메타게놈 분석을 통해 상기 각 수준에서 세균 유래 소포들의 함량 증감을 분석함으로써 전립선비대증을 진단할 수 있음을 확인하였다.
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 하기 실시예에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.
[ 실시예 ]
실시예 1. 장내 세균 및 세균 유래 소포의 체내 흡수, 분포, 및 배설 양상 분석
장내 세균과 세균 유래 소포가 위장관을 통해 전신적으로 흡수되는 지를 평가하기 위하여 다음과 같은 방법으로 실험을 수행하였다. 마우스의 위장에 형광으로 표지한 장내세균과 장내 세균 유래 소포를 각각 50 μg의 용량으로 위장관으로 투여하고 0분, 5분, 3시간, 6시간, 12시간 후에 형광을 측정하였다. 마우스 전체 이미지를 관찰한 결과, 도 1a에 나타낸 바와 같이, 상기 세균(Bacteria)인 경우에는 전신적으로 흡수되지 않았지만, 세균 유래 소포(EV)인 경우에는, 투여 후 5분에 전신적으로 흡수되었고, 투여 3시간 후에는 방광에 형광이 진하게 관찰되어, 소포가 비뇨기계로 배설됨을 알 수 있었다. 또한, 소포는 투여 12시간까지 체내에 존재함을 알 수 있었다.
장내세균과 장내 세균유래 소포가 전신적으로 흡수된 후, 여러 장기로 침윤된 양상을 평가하기 위하여, 형광으로 표지한 50 μg의 세균과 세균유래 소포를 상기의 방법과 같이 투여한 다음 12시간째에 마우스로부터 소변(Blood), 심장(Heart), 폐(Lung), 간(Liver), 신장(Kidney), 비장(Spleen), 지방조직(Adipose tissue), 및 근육(Muscle)을 적출하였다. 상기 적출한 조직들에서 형광을 관찰한 결과, 도1b에 나타낸 바와 같이, 상기 장내 세균(Bacteria)은 각 장기에 흡수되지 않은 반면, 상기 장내 세균 유래 세포밖 소포(EV)는 소변, 심장, 폐, 간, 신장, 비장, 지방조직, 및 근육에 분포하는 것을 확인하였다.
실시예 2. 소변으로부터 소포 분리 및 DNA 추출
소변으로부터 소포를 분리하고 DNA를 추출하기 위해, 먼저 10 ㎖ 튜브에 소변을 넣고 원심분리(3,500 x g, 10min, 4℃)를 실시하여 부유물을 가라앉혀 상등액만을 회수한 후 새로운 10 ㎖ 튜브에 옮겼다. 0.22 ㎛ 필터를 사용하여 상기 회수한 상등액으로부터 세균 및 이물질을 제거한 후, 센트리프랩튜브(centripreigugal filters 50 kD)에 옮기고 1500 x g, 4℃에서 15분간 원심분리하여 50 kD 보다 작은 물질은 버리고 10 ㎖까지 농축 시켰다. 다시 한 번 0.22 ㎛ 필터를 사용하여 박테리아 및 이물질을 제거한 후, Type 90ti 로터로 150,000 x g, 4℃에서 3시간 동안 초고속원심분리방법을 사용하여 상등액을 버리고 덩어리진 pellet을 생리식염수(PBS)로 녹여 소포를 수득하였다.
상기 방법에 따라 소변으로부터 분리한 소포 100 ㎕를 100℃에서 끓여서 내부의 DNA를 지질 밖으로 나오게 한 후 얼음에 5분 동안 식혔다. 다음으로 남은 부유물을 제거하기 위하여 10,000 x g, 4℃에서 30분간 원심분리하고 상등액 만을 모은 후 Nanodrop을 이용하여 DNA 양을 정량하였다. 이후 상기 추출된 DNA에 세균 유래 DNA가 존재하는지 확인하기 위하여 하기 표 1에 나타낸 16s rDNA primer로 PCR을 수행하여 상기 추출된 유전자에 세균 유래 유전자가 존재하는 것을 확인하였다.
primer 서열 서열번호
16S rDNA 16S_V3_F 5'-TCGTCGGCAGCGTCAGATGTGTATAAGAGACAGCCTACGGGNGGCWGCAG-3' 1
16S_V4_R 5'-GTCTCGTGGGCTCGGAGATGTGTATAAGAGACAGGACTACHVGGGTATCTAATCC-3 2
실시예 3. 소변 내 소포에서 추출한 DNA를 이용한 메타게놈 분석
상기 실시예 2의 방법으로 유전자를 추출한 후, 상기 표1에 나타낸 16S rDNA 프라이머를 사용하여 PCR을 실시하여 유전자를 증폭시키고 시퀀싱(Illumina MiSeq sequencer)을 수행하였다. 결과를 Standard Flowgram Format(SFF) 파일로 출력하고 GS FLX software(v2.9)를 이용하여 SFF 파일을 sequence 파일(.fasta)과 nucleotide quality score 파일로 변환한 다음 리드의 신용도 평가를 확인하고, window(20 bps) 평균 base call accuracy가 99% 미만(Phred score <20)인 부분을 제거하였다. 질이 낮은 부분을 제거한 후, 리드의 길이가 300 bps 이상인 것만 이용하였으며(Sickle version 1.33), 결과 분석을 위해 Operational Taxonomy Unit(OTU)은 UCLUST와 USEARCH를 이용하여 시퀀스 유사도에 따라 클러스터링을 수행하였다. 구체적으로 속(genus)은 94%, 과(family)는 90%, 목(order)은 85%, 강(class)은 80%, 문(phylum)은 75% 시퀀스 유사도를 기준으로 클러스터링을 하고 각 OTU의 문, 강, 목, 과, 속 레벨의 분류를 수행하고, BLASTN와 GreenGenes의 16S DNA 시퀀스 데이터베이스(108,453 시퀀스)를 이용하여 97% 이상의 시퀀스 유사도 갖는 박테리아를 분석하였다(QIIME).
실시예 4. 정상인과 전립선암환자 소변에서 분리한 세균유래 소포 메타게놈 분석 기반 전립선암 진단모형
상기 실시예 3의 방법으로, 전립선암환자 53명과 나이와 성별을 매칭한 정상인 159명의 소변에서 소포를 분리한 후 메타게놈 시퀀싱을 수행하였다. 진단모형 개발은 먼저 t-test에서 두 군 사이의 p값이 0.05 이하이고, 두 군 사이에 2배 이상 차이가 나는 균주를 선정하고 난 후, logistic regression analysis 방법으로 진단적 성능 지표인 AUC(area under curve), 민감도, 및 특이도를 산출하였다.
소변 내 세균유래 소포를 문(phylum) 수준에서 분석한 결과, Tenericutes, Euryarchaeota, Verrucomicrobia, Gemmatimonadetes, Acidobacteria, 및 Planctomycetes 문 세균에서 하나 이상의 바이오마커로 진단모형을 개발하였을 때, 전립선암에 대한 진단적 성능이 유의하게 나타났다 (표 2 및 도 2 참조).
　 정상인 전립선암 t-test
Taxon Mean SD Mean SD p-value Ratio AUC sensitivity specificity
p__Tenericutes 0.0023 0.0068 0.0008 0.0016 0.0096 0.35 0.88 0.93 0.58
p__Euryarchaeota 0.0006 0.0013 0.0014 0.0017 0.0032 2.38 0.87 0.91 0.55
p__Verrucomicrobia 0.0208 0.0283 0.0588 0.0564 0.0000 2.83 0.91 0.94 0.60
p__Gemmatimonadetes 0.0002 0.0007 0.0014 0.0021 0.0001 6.73 0.90 0.92 0.58
p__Acidobacteria 0.0005 0.0017 0.0036 0.0037 0.0000 7.19 0.91 0.92 0.58
p__Planctomycetes 0.0002 0.0010 0.0020 0.0046 0.0088 9.34 0.88 0.92 0.49
소변 내 세균유래 소포를 강(class) 수준에서 분석한 결과, Mollicutes, Methanobacteria, Verrucomicrobiae, Acidimicrobiia, Spartobacteria, Acidobacteria-6, Gemmatimonadetes, Acidobacteriia, 및 Pedosphaerae 강 세균에서 하나 이상의 바이오마커로 진단모형을 개발하였을 때, 전립선암에 대한 진단적 성능이 유의하게 나타났다 (표 3 및 도 3 참조).
　 정상인 전립선암 t-test
Taxon Mean SD Mean SD p-value Ratio AUC sensitivity specificity
c__Mollicutes 0.0023 0.0068 0.0008 0.0015 0.0066 0.32 0.88 0.93 0.58
c__Methanobacteria 0.0006 0.0012 0.0014 0.0017 0.0028 2.45 0.87 0.91 0.55
c__Verrucomicrobiae 0.0206 0.0281 0.0570 0.0551 0.0000 2.76 0.91 0.94 0.60
c__Acidimicrobiia 0.0002 0.0010 0.0009 0.0017 0.0043 5.00 0.85 0.91 0.43
c__[Spartobacteria] 0.0001 0.0004 0.0005 0.0008 0.0002 9.75 0.89 0.92 0.57
c__Acidobacteria-6 0.0001 0.0003 0.0009 0.0017 0.0013 16.28 0.89 0.92 0.53
c__Gemmatimonadetes 0.0000 0.0002 0.0005 0.0011 0.0023 16.65 0.87 0.93 0.51
c__Acidobacteriia 0.0000 0.0002 0.0014 0.0018 0.0000 33.12 0.92 0.93 0.60
c__[Pedosphaerae] 0.0000 0.0000 0.0010 0.0017 0.0001 2689.17 0.93 0.95 0.68
소변 내 세균유래 소포를 목(order) 수준에서 분석한 결과, Stramenopiles, Alteromonadales, RF39, Rickettsiales, Neisseriales, Methanobacteriales, Verrucomicrobiales, Myxococcales, Acidimicrobiales, Chthoniobacterales, iii1-15, Acidobacteriales, Ellin329, 및 Pedosphaerales 목 세균에서 하나 이상의 바이오마커로 진단모형을 개발하였을 때, 전립선암에 대한 진단적 성능이 유의하게 나타났다 (표 4 및 도 4 참조).
　 정상인 전립선암 t-test
Taxon Mean SD Mean SD p-value Ratio AUC sensitivity specificity
o__Stramenopiles 0.0026 0.0059 0.0000 0.0000 0.0000 0.00 0.87 0.86 0.49
o__Alteromonadales 0.0008 0.0020 0.0002 0.0008 0.0015 0.28 0.85 0.90 0.40
o__RF39 0.0023 0.0068 0.0007 0.0015 0.0077 0.32 0.88 0.93 0.58
o__Rickettsiales 0.0012 0.0027 0.0004 0.0008 0.0042 0.38 0.84 0.91 0.40
o__Neisseriales 0.0040 0.0066 0.0020 0.0025 0.0011 0.49 0.86 0.88 0.43
o__Methanobacteriales 0.0006 0.0012 0.0014 0.0017 0.0028 2.45 0.87 0.91 0.55
o__Verrucomicrobiales 0.0206 0.0281 0.0570 0.0551 0.0000 2.76 0.91 0.94 0.60
o__Myxococcales 0.0002 0.0008 0.0007 0.0010 0.0044 2.87 0.85 0.89 0.49
o__Acidimicrobiales 0.0002 0.0010 0.0009 0.0017 0.0043 5.00 0.85 0.91 0.43
o__[Chthoniobacterales] 0.0001 0.0004 0.0005 0.0008 0.0002 9.75 0.89 0.92 0.57
o__iii1-15 0.0000 0.0003 0.0008 0.0017 0.0014 18.60 0.89 0.92 0.53
o__Acidobacteriales 0.0000 0.0002 0.0014 0.0018 0.0000 33.12 0.92 0.93 0.60
o__Ellin329 0.0000 0.0000 0.0012 0.0018 0.0000 365.18 0.91 0.96 0.58
o__[Pedosphaerales] 0.0000 0.0000 0.0010 0.0017 0.0001 2689.17 0.93 0.95 0.68
소변 내 세균유래 소포를 과(family) 수준에서 분석한 결과, Peptococcaceae, Exiguobacteraceae, Actinomycetaceae, Cellulomonadaceae, mitochondria, Fusobacteriaceae, S24-7, Porphyromonadaceae, Flavobacteriaceae, Moraxellaceae, Neisseriaceae, Methanobacteriaceae, Verrucomicrobiaceae, Rikenellaceae, Weeksellaceae, Streptomycetaceae, Helicobacteraceae, Chthoniobacteraceae, 및 Koribacteraceae 과 세균에서 하나 이상의 바이오마커로 진단모형을 개발하였을 때, 전립선암에 대한 진단적 성능이 유의하게 나타났다 (표 5 및 도 5 참조).
　 정상인 전립선암 t-test
Taxon Mean SD Mean SD p-value Ratio AUC Accuracy sensitivity specificity
f__Peptococcaceae 0.0005 0.0018 0.0000 0.0000 0.0002 0.03 0.88 0.80 0.91 0.49
f__[Exiguobacteraceae] 0.0019 0.0065 0.0003 0.0008 0.0027 0.14 0.84 0.77 0.90 0.38
f__Actinomycetaceae 0.0043 0.0102 0.0010 0.0015 0.0001 0.23 0.89 0.80 0.87 0.58
f__Cellulomonadaceae 0.0008 0.0021 0.0002 0.0005 0.0011 0.25 0.86 0.77 0.89 0.40
f__mitochondria 0.0011 0.0027 0.0003 0.0007 0.0016 0.31 0.84 0.78 0.92 0.38
f__Fusobacteriaceae 0.0032 0.0095 0.0011 0.0018 0.0070 0.33 0.85 0.77 0.91 0.38
f__S24-7 0.0104 0.0319 0.0036 0.0042 0.0098 0.35 0.83 0.78 0.92 0.38
f__Porphyromonadaceae 0.0142 0.0158 0.0053 0.0045 0.0000 0.37 0.85 0.77 0.88 0.45
f__Flavobacteriaceae 0.0019 0.0030 0.0009 0.0016 0.0035 0.48 0.85 0.76 0.89 0.38
f__Moraxellaceae 0.0532 0.0884 0.0260 0.0275 0.0008 0.49 0.89 0.81 0.91 0.51
f__Neisseriaceae 0.0040 0.0066 0.0020 0.0025 0.0011 0.49 0.86 0.77 0.88 0.43
f__Methanobacteriaceae 0.0006 0.0012 0.0014 0.0017 0.0028 2.45 0.87 0.82 0.91 0.55
f__Verrucomicrobiaceae 0.0206 0.0281 0.0570 0.0551 0.0000 2.76 0.91 0.85 0.94 0.60
f__Rikenellaceae 0.0016 0.0026 0.0046 0.0043 0.0000 2.98 0.89 0.81 0.90 0.53
f__[Weeksellaceae] 0.0013 0.0022 0.0040 0.0049 0.0003 3.06 0.88 0.83 0.92 0.53
f__Streptomycetaceae 0.0002 0.0008 0.0011 0.0022 0.0075 5.21 0.85 0.77 0.89 0.42
f__Helicobacteraceae 0.0002 0.0011 0.0009 0.0020 0.0092 6.08 0.86 0.81 0.92 0.47
f__[Chthoniobacteraceae] 0.0001 0.0004 0.0005 0.0008 0.0002 9.75 0.89 0.83 0.92 0.57
f__Koribacteraceae 0.0000 0.0002 0.0014 0.0018 0.0000 43.84 0.92 0.85 0.94 0.60
소변 내 세균유래 소포를 속(genus) 수준에서 분석한 결과, Rhizobium, Tetragenococcus, Proteus, Morganella, Exiguobacterium, Oribacterium, Porphyromonas, Actinomyces, Cellulomonas, Jeotgalicoccus, Acinetobacter, Fusobacterium, Enterobacter, Neisseria, Adlercreutzia, SMB53, Parabacteroides, Faecalibacterium, Catenibacterium, Roseburia, Akkermansia, Methanobrevibacter, Clostridium, Klebsiella, Chryseobacterium, Halomonas, Aggregatibacter, Rhodoplanes, Thermoanaerobacterium, Candidatus Koribacter, 및 Flexispira 속 세균에서 하나 이상의 바이오마커로 진단모형을 개발하였을 때, 전립선암에 대한 진단적 성능이 유의하게 나타났다 (표 6 및 도 6 참조).
　 정상인 전립선암 t-test
Taxon Mean SD Mean SD p-value Ratio AUC sensitivity specificity
g__Rhizobium 0.0032 0.0050 0.0000 0.0000 0.0000 0.00 0.98 0.98 0.94
g__Tetragenococcus 0.0007 0.0020 0.0000 0.0000 0.0000 0.01 0.86 0.90 0.42
g__Proteus 0.0115 0.0202 0.0009 0.0013 0.0000 0.07 0.92 0.90 0.68
g__Morganella 0.0042 0.0169 0.0004 0.0010 0.0050 0.09 0.85 0.91 0.38
g__Exiguobacterium 0.0019 0.0065 0.0002 0.0008 0.0026 0.13 0.84 0.90 0.38
g__Oribacterium 0.0005 0.0014 0.0001 0.0004 0.0016 0.13 0.85 0.91 0.42
g__Porphyromonas 0.0022 0.0062 0.0004 0.0010 0.0005 0.18 0.86 0.89 0.43
g__Actinomyces 0.0041 0.0099 0.0009 0.0015 0.0001 0.21 0.89 0.87 0.58
g__Cellulomonas 0.0006 0.0017 0.0002 0.0005 0.0045 0.27 0.86 0.89 0.38
g__Jeotgalicoccus 0.0009 0.0020 0.0003 0.0007 0.0007 0.30 0.85 0.91 0.36
g__Acinetobacter 0.0431 0.0871 0.0136 0.0185 0.0001 0.32 0.89 0.90 0.64
g__Fusobacterium 0.0032 0.0095 0.0011 0.0018 0.0073 0.33 0.85 0.91 0.38
g__Enterobacter 0.0005 0.0013 0.0002 0.0004 0.0050 0.37 0.83 0.92 0.38
g__Neisseria 0.0023 0.0044 0.0009 0.0013 0.0003 0.37 0.86 0.88 0.43
g__Adlercreutzia 0.0041 0.0076 0.0016 0.0021 0.0004 0.40 0.84 0.92 0.38
g__SMB53 0.0018 0.0029 0.0007 0.0007 0.0000 0.41 0.90 0.94 0.55
g__Parabacteroides 0.0118 0.0148 0.0049 0.0044 0.0000 0.41 0.84 0.90 0.42
g__Faecalibacterium 0.0269 0.0355 0.0544 0.0408 0.0000 2.02 0.90 0.91 0.58
g__Catenibacterium 0.0017 0.0032 0.0034 0.0038 0.0013 2.05 0.84 0.89 0.43
g__Roseburia 0.0021 0.0040 0.0049 0.0059 0.0027 2.30 0.87 0.91 0.57
g__Akkermansia 0.0205 0.0280 0.0566 0.0550 0.0000 2.76 0.91 0.94 0.62
g__Methanobrevibacter 0.0004 0.0009 0.0013 0.0017 0.0003 3.59 0.88 0.91 0.55
g__Clostridium 0.0016 0.0039 0.0065 0.0064 0.0000 4.08 0.90 0.91 0.60
g__Klebsiella 0.0024 0.0046 0.0103 0.0123 0.0000 4.30 0.94 0.91 0.72
g__Chryseobacterium 0.0006 0.0016 0.0026 0.0031 0.0000 4.33 0.88 0.91 0.53
g__Halomonas 0.0003 0.0007 0.0015 0.0031 0.0097 4.41 0.87 0.92 0.51
g__Aggregatibacter 0.0001 0.0004 0.0011 0.0025 0.0067 8.42 0.85 0.92 0.47
g__Rhodoplanes 0.0000 0.0002 0.0006 0.0014 0.0075 18.08 0.87 0.92 0.49
g__Thermoanaerobacterium 0.0002 0.0011 0.0033 0.0050 0.0000 20.92 0.91 0.95 0.57
g__Candidatus Koribacter 0.0000 0.0001 0.0007 0.0012 0.0002 45.87 0.90 0.94 0.55
g__Flexispira 0.0000 0.0000 0.0008 0.0019 0.0000 0.91 0.96 0.60
실시예 5. 전립선비대증환자와 전립선암환자 소변에서 분리한 세균유래 소포 메타게놈 분석 기반 전립선암 진단모형
상기 실시예 3의 방법으로, 전립선암환자 53명과 전립선비대증환자 55명의 소변에서 소포를 분리한 후 메타게놈 시퀀싱을 수행하였다. 진단모형 개발은 먼저 t-test에서 두 군 사이의 p값이 0.05 이하이고, 두 군 사이에 2배 이상 차이가 나는 균주를 선정하고 난 후, logistic regression analysis 방법으로 진단적 성능 지표인 AUC(area under curve), 민감도, 및 특이도를 산출하였다.
소변 내 세균유래 소포를 문(phylum) 수준에서 분석한 결과, Verrucomicrobia 문 세균을 바이오마커로 진단모형을 개발하였을 때, 전립선암에 대한 진단적 성능이 유의하게 나타났다 (표 7 및 도 7 참조).
　 전립선비대증 전립선암 t-test
Taxon Mean SD Mean SD p-value Ratio AUC sensitivity specificity
p__Verrucomicrobia 0.0286 0.0414 0.0588 0.0573 0.0023 2.06 0.85 0.84 0.83
소변 내 세균유래 소포를 강(class) 수준에서 분석한 결과, Verrucomicrobiae, Acidimicrobiia, Saprospirae, 및 Pedosphaerae 강 세균에서 하나 이상의 바이오마커로 진단모형을 개발하였을 때, 전립선암에 대한 진단적 성능이 유의하게 나타났다 (표 8 및 도 8 참조).
　 전립선비대증 전립선암 t-test
Taxon Mean SD Mean SD p-value Ratio AUC sensitivity specificity
c__Verrucomicrobiae 0.0281 0.0405 0.0570 0.0561 0.0028 2.03 0.85 0.82 0.83
c__Acidimicrobiia 0.0002 0.0007 0.0009 0.0017 0.0086 3.97 0.84 0.75 0.77
c__[Saprospirae] 0.0002 0.0005 0.0008 0.0011 0.0006 5.00 0.84 0.76 0.79
c__[Pedosphaerae] 0.0002 0.0005 0.0010 0.0017 0.0009 6.03 0.85 0.78 0.81
소변 내 세균유래 소포를 목(order) 수준에서 분석한 결과, Verrucomicrobiales, Acidimicrobiales, Saprospirales, Pedosphaerales, 및 Ellin329 목 세균에서 하나 이상의 바이오마커로 진단모형을 개발하였을 때, 전립선암에 대한 진단적 성능이 유의하게 나타났다 (표 9 및 도 9 참조).
　 전립선비대증 전립선암 t-test
Taxon Mean SD Mean SD p-value Ratio AUC sensitivity specificity
o__Verrucomicrobiales 0.0281 0.0405 0.0570 0.0561 0.0028 2.03 0.85 0.82 0.83
o__Acidimicrobiales 0.0002 0.0007 0.0009 0.0017 0.0086 3.97 0.84 0.75 0.77
o__[Saprospirales] 0.0002 0.0005 0.0008 0.0011 0.0006 5.00 0.84 0.76 0.79
o__[Pedosphaerales] 0.0002 0.0005 0.0010 0.0017 0.0009 6.03 0.85 0.78 0.81
o__Ellin329 0.0001 0.0004 0.0012 0.0018 0.0001 14.59 0.87 0.85 0.77
소변 내 세균유래 소포를 과(family) 수준에서 분석한 결과, Verrucomicrobiaceae, Chitinophagaceae, 및 Helicobacteraceae 과 세균에서 하나 이상의 바이오마커로 진단모형을 개발하였을 때, 전립선암에 대한 진단적 성능이 유의하게 나타났다 (표 10 및 도 10 참조).
　 전립선비대증 전립선암 t-test
Taxon Mean SD Mean SD p-value Ratio AUC sensitivity specificity
f__Verrucomicrobiaceae 0.0281 0.0405 0.0570 0.0561 0.0028 2.03 0.85 0.82 0.83
f__Chitinophagaceae 0.0002 0.0005 0.0007 0.0010 0.0007 4.70 0.84 0.76 0.79
f__Helicobacteraceae 0.0001 0.0005 0.0009 0.0020 0.0070 6.76 0.83 0.73 0.79
소변 내 세균유래 소포를 속(genus) 수준에서 분석한 결과, Ruminococcus, Akkermansia, 및 Flexispira 속 세균에서 하나 이상의 바이오마커로 진단모형을 개발하였을 때, 전립선암에 대한 진단적 성능이 유의하게 나타났다 (표 11 및 도 11 참조).
　 전립선비대증 전립선암 t-test
Taxon Mean SD Mean SD p-value Ratio AUC sensitivity specificity
g__Ruminococcus 0.0292 0.0371 0.0129 0.0137 0.0035 0.44 0.84 0.78 0.83
g__Akkermansia 0.0280 0.0404 0.0566 0.0560 0.0031 2.02 0.85 0.82 0.83
g__Flexispira 0.0001 0.0004 0.0008 0.0019 0.0084 7.71 0.83 0.73 0.79
실시예 6. 정상인과 전립선비대증 소변에서 분리한 세균유래 소포 메타게놈 분석 기반 전립선비대증 진단모형
상기 실시예 3의 방법으로, 전립선암환자 55명과 정상인 159명의 소변에서 소포를 분리한 후 메타게놈 시퀀싱을 수행하였다. 진단모형 개발은 먼저 t-test에서 두 군 사이의 p값이 0.05 이하이고, 두 군 사이에 2배 이상 차이가 나는 균주를 선정하고 난 후, logistic regression analysis 방법으로 진단적 성능 지표인 AUC(area under curve), 민감도, 및 특이도를 산출하였다.
소변 내 세균유래 소포를 문(phylum) 수준에서 분석한 결과, Euryarchaeota, 및 Acidobacteria 문 세균에서 하나 이상의 바이오마커로 진단모형을 개발하였을 때, 전립선비대증에 대한 진단적 성능이 유의하게 나타났다 (표 12 및 도 12 참조).
　 정상인 전립선비대증 t-test
Taxon Mean SD Mean SD p-value fold AUC Accuracy sensitivity specificity
p__Euryarchaeota 0.0006 0.0013 0.0032 0.0064 0.0044 5.50 0.69 0.77 0.96 0.20
p__Acidobacteria 0.0005 0.0017 0.0023 0.0043 0.0032 4.61 0.69 0.77 0.98 0.15
소변 내 세균유래 소포를 강(class) 수준에서 분석한 결과, Methanobacteria, Acidobacteria, 및 Acidobacteriia 강 세균에서 하나 이상의 바이오마커로 진단모형을 개발하였을 때, 전립선비대증에 대한 진단적 성능이 유의하게 나타났다 (표 13 및 도 13 참조).
　 정상인 전립선비대증 t-test
Taxon Mean SD Mean SD p-value fold AUC Accuracy sensitivity specificity
c__Methanobacteria 0.0006 0.0012 0.0032 0.0064 0.0042 5.68 0.69 0.77 0.96 0.20
c__Acidobacteria-6 0.0001 0.0003 0.0004 0.0009 0.0070 7.75 0.64 0.76 0.97 0.15
c__Acidobacteriia 0.0000 0.0002 0.0013 0.0029 0.0021 31.00 0.69 0.79 0.99 0.20
소변 내 세균유래 소포를 목(order) 수준에서 분석한 결과, Stramenopiles, RF39, Saprospirales, Pseudomonadales, Methanobacteriales, 및 Acidobacteriales 목 세균에서 하나 이상의 바이오마커로 진단모형을 개발하였을 때, 전립선비대증에 대한 진단적 성능이 유의하게 나타났다 (표 14 및 도 14 참조).
　 정상인 전립선비대증 t-test
Taxon Mean SD Mean SD p-value fold AUC Accuracy sensitivity specificity
o__Stramenopiles 0.0026 0.0059 0.0000 0.0000 0.0013 0.00 0.77 0.72 0.95 0.07
o__RF39 0.0023 0.0068 0.0006 0.0012 0.0027 0.26 0.65 0.75 0.98 0.07
o__[Saprospirales] 0.0006 0.0016 0.0002 0.0005 0.0033 0.27 0.64 0.74 1.00 0.00
o__Pseudomonadales 0.1154 0.1282 0.0573 0.0344 0.0000 0.50 0.73 0.79 0.96 0.27
o__Methanobacteriales 0.0006 0.0012 0.0032 0.0064 0.0042 5.68 0.69 0.77 0.96 0.20
o__Acidobacteriales 0.0000 0.0002 0.0013 0.0029 0.0021 31.00 0.69 0.79 0.99 0.20
소변 내 세균유래 소포를 과(family) 수준에서 분석한 결과, Exiguobacteraceae, Flavobacteriaceae, Actinomycetaceae, Moraxellaceae, Ruminococcaceae, Rikenellaceae, Methanobacteriaceae, 및 Koribacteraceae 과 세균에서 하나 이상의 바이오마커로 진단모형을 개발하였을 때, 전립선비대증에 대한 진단적 성능이 유의하게 나타났다 (표 15 및 도 15 참조).
　 정상인 전립선비대증 t-test
Taxon Mean SD Mean SD p-value fold Auc Accuracy sensitivity specificity
f__[Exiguobacteraceae] 0.0019 0.0065 0.0001 0.0003 0.0008 0.05 0.66 0.74 1.00 0.00
f__Flavobacteriaceae 0.0019 0.0030 0.0004 0.0007 0.0000 0.20 0.70 0.75 0.99 0.05
f__Actinomycetaceae 0.0043 0.0102 0.0016 0.0020 0.0016 0.36 0.67 0.75 1.00 0.02
f__Moraxellaceae 0.0532 0.0884 0.0231 0.0187 0.0001 0.43 0.69 0.75 0.97 0.11
f__Ruminococcaceae 0.0867 0.0797 0.1921 0.1608 0.0000 2.22 0.75 0.80 0.98 0.27
f__Rikenellaceae 0.0016 0.0026 0.0062 0.0079 0.0001 3.97 0.79 0.79 0.96 0.31
f__Methanobacteriaceae 0.0006 0.0012 0.0032 0.0064 0.0042 5.68 0.69 0.77 0.96 0.20
f__Koribacteraceae 0.0000 0.0002 0.0013 0.0029 0.0022 40.87 0.69 0.79 0.99 0.20
소변 내 세균유래 소포를 속(genus) 수준에서 분석한 결과, Rhizobium, Proteus, Acinetobacter, SMB53, Halomonas, Ruminococcus, Faecalibacterium, Klebsiella, Roseburia, Leuconostoc, Bilophila, Chromohalobacter, 및 Methanobrevibacter 속 세균에서 하나 이상의 바이오마커로 진단모형을 개발하였을 때, 전립선비대증에 대한 진단적 성능이 유의하게 나타났다 (표 16 및 도 16 참조).
　 정상인 전립선비대증 t-test
Taxon Mean SD Mean SD p-value fold Auc Accuracy sensitivity specificity
g__Rhizobium 0.0032 0.0050 0.0000 0.0000 0.0000 0.00 0.92 0.89 0.97 0.67
g__Proteus 0.0115 0.0202 0.0006 0.0010 0.0000 0.05 0.83 0.79 0.93 0.36
g__Acinetobacter 0.0431 0.0871 0.0113 0.0086 0.0000 0.26 0.71 0.75 0.96 0.15
g__SMB53 0.0018 0.0029 0.0005 0.0007 0.0000 0.30 0.70 0.75 0.97 0.11
g__Halomonas 0.0003 0.0007 0.0010 0.0016 0.0050 2.90 0.68 0.76 0.97 0.16
g__Ruminococcus 0.0098 0.0156 0.0292 0.0371 0.0004 2.98 0.69 0.78 0.98 0.20
g__Faecalibacterium 0.0269 0.0355 0.0813 0.0841 0.0000 3.02 0.73 0.81 0.99 0.31
g__Klebsiella 0.0024 0.0046 0.0075 0.0086 0.0001 3.14 0.80 0.78 0.96 0.25
g__Roseburia 0.0021 0.0040 0.0085 0.0085 0.0000 4.04 0.81 0.79 0.94 0.35
g__Leuconostoc 0.0003 0.0007 0.0011 0.0019 0.0017 4.28 0.68 0.78 0.98 0.20
g__Bilophila 0.0002 0.0008 0.0009 0.0018 0.0064 4.29 0.70 0.77 0.99 0.13
g__Chromohalobacter 0.0001 0.0006 0.0006 0.0012 0.0066 5.06 0.67 0.77 0.99 0.13
g__Methanobrevibacter 0.0004 0.0009 0.0028 0.0063 0.0067 7.55 0.68 0.78 0.96 0.25
상기 진술한 본 발명의 설명은 예시를 위한 것이며, 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가진 자는 본 발명의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 쉽게 변형이 가능하다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해해야만 한다.
본 발명에 따른 인체 유래 샘플을 이용한 세균 유래 세포밖　소포에 존재하는 유전자에 대하여 메타게놈 분석을 통해 전립선암 및 전립선비대증 발병의 위험도를 미리 예측함으로써 전립선질환의 위험군을 조기에 진단 및 예측하여 적절한 관리를 통해 발병 시기를 늦추거나 발병을 예방할 수 있으며, 전립선비대증 혹은 전립선암 발병 후에도 조기진단 할 수 있어 전립선질환의 발병률을 낮추고 치료효과를 높일 수 있다.

Claims (14)

  1. (a) 피검체 샘플에서 분리한 세포밖 소포로부터 DNA를 추출하는 단계;
    (b) 상기 추출한 DNA에 대하여 서열번호 1 및 서열번호 2의 프라이머 쌍을 이용하여 PCR을 수행하는 단계; 및
    (c) 상기 PCR 산물의 서열분석을 통하여 정상인과 전립선암환자 유래 샘플에서 세균 유래 세포밖 소포의 함량 증감을 비교하는 단계; 또는
    상기 PCR 산물의 서열분석을 통하여 전립선비대증환자와 전립선암환자 유래 샘플에서 세균 유래 세포밖 소포의 함량 증감을 비교하는 단계; 또는
    상기 PCR 산물의 서열분석을 통하여 정상인과 전립선비대증환자 유래 샘플에서 세균 유래 세포밖 소포의 함량 증감을 비교하는 단계를 포함하는, 전립선질환 진단을 위한 정보제공방법.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 (c)단계에서, PCR 산물의 서열분석을 통하여 정상인과 전립선암환자 유래 샘플에서 세균 유래 세포밖 소포의 함량 증감을 비교하는 단계를 통하여 전립선암을 진단하는 것을 특징으로 하는, 전립선질환 진단을 위한 정보제공방법.
  3. 제2항에 있어서,
    상기 (c)단계에서, 테네리쿠테스(Tenericutes), 유리고세균(Euryarchaeota), 우미균문(Verrucomicrobia), 겜마티모나스균문(Gemmatimonadetes), 아키도박테리아(Acidobacteria), 및 부유균문(Planctomycetes)로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 문(phylum) 세균 유래 세포밖 소포,
    몰리쿠테스강(Mollicutes), 메타노박테리아(Methanobacteria), 우미균강(Verrucomicrobiae), 아키디미크로비움강(Acidimicrobiia), 스파르토박테리아(Spartobacteria), 아키도박테리아-6(Acidobacteria-6), 겜마티모나스균강(Gemmatimonadetes), 아키도박테리움강(Acidobacteriia), 페도스파이라(Pedosphaerae), 및 물곰팡이강(Saprospirae)로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 강(class) 세균 유래 세포밖 소포,
    스트라메노필레스(Stramenopiles), 알테로모나목(Alteromonadales), 리케차목(Rickettsiales), 나이세리아레스(Neisseriales), 메타노박테리아목(Methanobacteriales), 우미균목(Verrucomicrobiales), 점액세균목(Myxococcales), 아키디미크로비움목(Acidimicrobiales), 크토니오박터목(Chthoniobacterales), 아키도박테리움목(Acidobacteriales), 페도스파이라목(Pedosphaerales), 물곰팡이목(Saprospirales), 슈도모나달레스(Pseudomonadales), RF39, iii1-15, 및 Ellin329으로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 목(order) 세균 유래 세포밖 소포,
    펩토코카시에(Peptococcaceae), 엑시구박터과(Exiguobacteraceae), 방선균과(Actinomycetaceae), 셀룰로모나다시에(Cellulomonadaceae), 미토콘드리아(mitochondria), 푸소박테리아시에(Fusobacteriaceae), 포르피로모나아시에(Porphyromonadaceae), 플라보박테리움과(Flavobacteriaceae), 모락셀라(Moraxellaceae), 나이세리아시에(Neisseriaceae), 메타노박테리아시에(Methanobacteriaceae), 우미균과(Verrucomicrobiaceae), 리케넬라시에(Rikenellaceae), 위크셀라시에(Weeksellaceae), 연쇄상구균과(Streptomycetaceae), 헬리코박터과(Helicobacteraceae), 크토니오박터과(Chthoniobacteraceae), 코리박테라시에(Koribacteraceae) 키티노파가스과(Chitinophagaceae), 루미노코카시에(Ruminococcaceae), 및 S24-7로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 과(family) 세균 유래 세포밖 소포, 또는
    리조비움(Rhizobium), 테트라게노콕쿠스속(Tetragenococcus), 프로테우스(Proteus), 모르가넬라(Morganella), 엑시구박터속(Exiguobacterium), 오리박테리움(Oribacterium), 박테로이데스(Porphyromonas), 방선균속(Actinomyces), 셀룰로모나스(Cellulomonas), 요트갈리코커스(Jeotgalicoccus), 아시네토박터(Acinetobacter), 푸소박테리움(Fusobacterium), 엔테로박터(Enterobacter), 나이세리아(Neisseria), 아들러크레우치아(Adlercreutzia), 파라박테로이데스(Parabacteroides), 패칼리박테리움(Faecalibacterium), 카테니박테리움(Catenibacterium), 로즈뷰리아(Roseburia), 아커만시아속(Akkermansia), 메타노브레비박터(Methanobrevibacter), 클로스트리듐(Clostridium), 클렙시엘라(Klebsiella), 크리세오박테리움(Chryseobacterium), 할로모나스(Halomonas), 아그레가티박터(Aggregatibacter), 로도플라네스(Rhodoplanes), 써모언에어로박테리움(Thermoanaerobacterium), 칸디다투스 코리박터(Candidatus Koribacter), 플렉시피라(Flexispira), 루미노코커스(Ruminococcus), 류코노스톡속(Leuconostoc), 빌로필라(Bilophila), 크로모할로박터속(Chromohalobacter), 및 SMB53로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 속(genus) 세균 유래 세포밖 소포의 함량 증감을 비교하는 것을 특징으로 하는, 전립선질환 진단을 위한 정보제공방법.
  4. 제1항에 있어서,
    상기 (c)단계에서, PCR 산물의 서열분석을 통하여 전립선비대증환자와 전립선암환자 유래 샘플에서 세균 유래 세포밖 소포의 함량 증감을 비교하는 단계를 통하여 전립선암을 진단하는 것을 특징으로 하는, 전립선질환 진단을 위한 정보제공방법.
  5. 제4항에 있어서,
    상기 (c)단계에서, 테네리쿠테스(Tenericutes), 유리고세균(Euryarchaeota), 우미균문(Verrucomicrobia), 겜마티모나스균문(Gemmatimonadetes), 아키도박테리아(Acidobacteria), 및 부유균문(Planctomycetes)로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 문(phylum) 세균 유래 세포밖 소포,
    몰리쿠테스강(Mollicutes), 메타노박테리아(Methanobacteria), 우미균강(Verrucomicrobiae), 아키디미크로비움강(Acidimicrobiia), 스파르토박테리아(Spartobacteria), 아키도박테리아-6(Acidobacteria-6), 겜마티모나스균강(Gemmatimonadetes), 아키도박테리움강(Acidobacteriia), 페도스파이라(Pedosphaerae), 및 물곰팡이강(Saprospirae)로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 강(class) 세균 유래 세포밖 소포,
    스트라메노필레스(Stramenopiles), 알테로모나목(Alteromonadales), 리케차목(Rickettsiales), 나이세리아레스(Neisseriales), 메타노박테리아목(Methanobacteriales), 우미균목(Verrucomicrobiales), 점액세균목(Myxococcales), 아키디미크로비움목(Acidimicrobiales), 크토니오박터목(Chthoniobacterales), 아키도박테리움목(Acidobacteriales), 페도스파이라목(Pedosphaerales), 물곰팡이목(Saprospirales), 슈도모나달레스(Pseudomonadales), RF39, iii1-15, 및 Ellin329으로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 목(order) 세균 유래 세포밖 소포,
    펩토코카시에(Peptococcaceae), 엑시구박터과(Exiguobacteraceae), 방선균과(Actinomycetaceae), 셀룰로모나다시에(Cellulomonadaceae), 미토콘드리아(mitochondria), 푸소박테리아시에(Fusobacteriaceae), 포르피로모나아시에(Porphyromonadaceae), 플라보박테리움과(Flavobacteriaceae), 모락셀라(Moraxellaceae), 나이세리아시에(Neisseriaceae), 메타노박테리아시에(Methanobacteriaceae), 우미균과(Verrucomicrobiaceae), 리케넬라시에(Rikenellaceae), 위크셀라시에(Weeksellaceae), 연쇄상구균과(Streptomycetaceae), 헬리코박터과(Helicobacteraceae), 크토니오박터과(Chthoniobacteraceae), 코리박테라시에(Koribacteraceae) 키티노파가스과(Chitinophagaceae), 루미노코카시에(Ruminococcaceae), 및 S24-7로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 과(family) 세균 유래 세포밖 소포, 또는
    리조비움(Rhizobium), 테트라게노콕쿠스속(Tetragenococcus), 프로테우스(Proteus), 모르가넬라(Morganella), 엑시구박터속(Exiguobacterium), 오리박테리움(Oribacterium), 박테로이데스(Porphyromonas), 방선균속(Actinomyces), 셀룰로모나스(Cellulomonas), 요트갈리코커스(Jeotgalicoccus), 아시네토박터(Acinetobacter), 푸소박테리움(Fusobacterium), 엔테로박터(Enterobacter), 나이세리아(Neisseria), 아들러크레우치아(Adlercreutzia), 파라박테로이데스(Parabacteroides), 패칼리박테리움(Faecalibacterium), 카테니박테리움(Catenibacterium), 로즈뷰리아(Roseburia), 아커만시아속(Akkermansia), 메타노브레비박터(Methanobrevibacter), 클로스트리듐(Clostridium), 클렙시엘라(Klebsiella), 크리세오박테리움(Chryseobacterium), 할로모나스(Halomonas), 아그레가티박터(Aggregatibacter), 로도플라네스(Rhodoplanes), 써모언에어로박테리움(Thermoanaerobacterium), 칸디다투스 코리박터(Candidatus Koribacter), 플렉시피라(Flexispira), 루미노코커스(Ruminococcus), 류코노스톡속(Leuconostoc), 빌로필라(Bilophila), 크로모할로박터속(Chromohalobacter), 및 SMB53로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 속(genus) 세균 유래 세포밖 소포의 함량 증감을 비교하는 것을 특징으로 하는, 전립선질환 진단을 위한 정보제공방법.
  6. 제1항에 있어서,
    상기 (c)단계에서, PCR 산물의 서열분석을 통하여 정상인과 전립선비대증환자 유래 샘플에서 세균 유래 세포밖 소포의 함량 증감을 비교하는 단계를 통하여 전립선비대증을 진단하는 것을 특징으로 하는, 전립선질환 진단을 위한 정보제공방법.
  7. 제6항에 있어서,
    상기 (c)단계에서, 테네리쿠테스(Tenericutes), 유리고세균(Euryarchaeota), 우미균문(Verrucomicrobia), 겜마티모나스균문(Gemmatimonadetes), 아키도박테리아(Acidobacteria), 및 부유균문(Planctomycetes)로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 문(phylum) 세균 유래 세포밖 소포,
    몰리쿠테스강(Mollicutes), 메타노박테리아(Methanobacteria), 우미균강(Verrucomicrobiae), 아키디미크로비움강(Acidimicrobiia), 스파르토박테리아(Spartobacteria), 아키도박테리아-6(Acidobacteria-6), 겜마티모나스균강(Gemmatimonadetes), 아키도박테리움강(Acidobacteriia), 페도스파이라(Pedosphaerae), 및 물곰팡이강(Saprospirae)로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 강(class) 세균 유래 세포밖 소포,
    스트라메노필레스(Stramenopiles), 알테로모나목(Alteromonadales), 리케차목(Rickettsiales), 나이세리아레스(Neisseriales), 메타노박테리아목(Methanobacteriales), 우미균목(Verrucomicrobiales), 점액세균목(Myxococcales), 아키디미크로비움목(Acidimicrobiales), 크토니오박터목(Chthoniobacterales), 아키도박테리움목(Acidobacteriales), 페도스파이라목(Pedosphaerales), 물곰팡이목(Saprospirales), 슈도모나달레스(Pseudomonadales), RF39, iii1-15, 및 Ellin329으로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 목(order) 세균 유래 세포밖 소포,
    펩토코카시에(Peptococcaceae), 엑시구박터과(Exiguobacteraceae), 방선균과(Actinomycetaceae), 셀룰로모나다시에(Cellulomonadaceae), 미토콘드리아(mitochondria), 푸소박테리아시에(Fusobacteriaceae), 포르피로모나아시에(Porphyromonadaceae), 플라보박테리움과(Flavobacteriaceae), 모락셀라(Moraxellaceae), 나이세리아시에(Neisseriaceae), 메타노박테리아시에(Methanobacteriaceae), 우미균과(Verrucomicrobiaceae), 리케넬라시에(Rikenellaceae), 위크셀라시에(Weeksellaceae), 연쇄상구균과(Streptomycetaceae), 헬리코박터과(Helicobacteraceae), 크토니오박터과(Chthoniobacteraceae), 코리박테라시에(Koribacteraceae) 키티노파가스과(Chitinophagaceae), 루미노코카시에(Ruminococcaceae), 및 S24-7로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 과(family) 세균 유래 세포밖 소포, 또는
    리조비움(Rhizobium), 테트라게노콕쿠스속(Tetragenococcus), 프로테우스(Proteus), 모르가넬라(Morganella), 엑시구박터속(Exiguobacterium), 오리박테리움(Oribacterium), 박테로이데스(Porphyromonas), 방선균속(Actinomyces), 셀룰로모나스(Cellulomonas), 요트갈리코커스(Jeotgalicoccus), 아시네토박터(Acinetobacter), 푸소박테리움(Fusobacterium), 엔테로박터(Enterobacter), 나이세리아(Neisseria), 아들러크레우치아(Adlercreutzia), 파라박테로이데스(Parabacteroides), 패칼리박테리움(Faecalibacterium), 카테니박테리움(Catenibacterium), 로즈뷰리아(Roseburia), 아커만시아속(Akkermansia), 메타노브레비박터(Methanobrevibacter), 클로스트리듐(Clostridium), 클렙시엘라(Klebsiella), 크리세오박테리움(Chryseobacterium), 할로모나스(Halomonas), 아그레가티박터(Aggregatibacter), 로도플라네스(Rhodoplanes), 써모언에어로박테리움(Thermoanaerobacterium), 칸디다투스 코리박터(Candidatus Koribacter), 플렉시피라(Flexispira), 루미노코커스(Ruminococcus), 류코노스톡속(Leuconostoc), 빌로필라(Bilophila), 크로모할로박터속(Chromohalobacter), 및 SMB53로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 속(genus) 세균 유래 세포밖 소포의 함량 증감을 비교하는 것을 특징으로 하는, 전립선질환 진단을 위한 정보제공방법.
  8. (a) 피검체 샘플에서 분리한 세포밖 소포로부터 DNA를 추출하는 단계;
    (b) 상기 추출한 DNA에 대하여 서열번호 1 및 서열번호 2의 프라이머 쌍을 이용하여 PCR을 수행하는 단계; 및
    (c) 상기 PCR 산물의 서열분석을 통하여 정상인과 전립선암환자 유래 샘플에서 세균 유래 세포밖 소포의 함량 증감을 비교하는 단계; 또는
    상기 PCR 산물의 서열분석을 통하여 전립선비대증환자와 전립선암환자 유래 샘플에서 세균 유래 세포밖 소포의 함량 증감을 비교하는 단계; 또는
    상기 PCR 산물의 서열분석을 통하여 정상인과 전립선비대증환자 유래 샘플에서 세균 유래 세포밖 소포의 함량 증감을 비교하는 단계를 포함하는, 전립선질환 진단방법.
  9. 제8항에 있어서,
    상기 (c)단계에서, PCR 산물의 서열분석을 통하여 정상인과 전립선암환자 유래 샘플에서 세균 유래 세포밖 소포의 함량 증감을 비교하는 단계를 통하여 전립선암을 진단하는 것을 특징으로 하는, 전립선질환 진단방법.
  10. 제9항에 있어서,
    상기 (c)단계에서, 테네리쿠테스(Tenericutes), 유리고세균(Euryarchaeota), 우미균문(Verrucomicrobia), 겜마티모나스균문(Gemmatimonadetes), 아키도박테리아(Acidobacteria), 및 부유균문(Planctomycetes)로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 문(phylum) 세균 유래 세포밖 소포,
    몰리쿠테스강(Mollicutes), 메타노박테리아(Methanobacteria), 우미균강(Verrucomicrobiae), 아키디미크로비움강(Acidimicrobiia), 스파르토박테리아(Spartobacteria), 아키도박테리아-6(Acidobacteria-6), 겜마티모나스균강(Gemmatimonadetes), 아키도박테리움강(Acidobacteriia), 페도스파이라(Pedosphaerae), 및 물곰팡이강(Saprospirae)로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 강(class) 세균 유래 세포밖 소포,
    스트라메노필레스(Stramenopiles), 알테로모나목(Alteromonadales), 리케차목(Rickettsiales), 나이세리아레스(Neisseriales), 메타노박테리아목(Methanobacteriales), 우미균목(Verrucomicrobiales), 점액세균목(Myxococcales), 아키디미크로비움목(Acidimicrobiales), 크토니오박터목(Chthoniobacterales), 아키도박테리움목(Acidobacteriales), 페도스파이라목(Pedosphaerales), 물곰팡이목(Saprospirales), 슈도모나달레스(Pseudomonadales), RF39, iii1-15, 및 Ellin329으로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 목(order) 세균 유래 세포밖 소포,
    펩토코카시에(Peptococcaceae), 엑시구박터과(Exiguobacteraceae), 방선균과(Actinomycetaceae), 셀룰로모나다시에(Cellulomonadaceae), 미토콘드리아(mitochondria), 푸소박테리아시에(Fusobacteriaceae), 포르피로모나아시에(Porphyromonadaceae), 플라보박테리움과(Flavobacteriaceae), 모락셀라(Moraxellaceae), 나이세리아시에(Neisseriaceae), 메타노박테리아시에(Methanobacteriaceae), 우미균과(Verrucomicrobiaceae), 리케넬라시에(Rikenellaceae), 위크셀라시에(Weeksellaceae), 연쇄상구균과(Streptomycetaceae), 헬리코박터과(Helicobacteraceae), 크토니오박터과(Chthoniobacteraceae), 코리박테라시에(Koribacteraceae) 키티노파가스과(Chitinophagaceae), 루미노코카시에(Ruminococcaceae), 및 S24-7로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 과(family) 세균 유래 세포밖 소포, 또는
    리조비움(Rhizobium), 테트라게노콕쿠스속(Tetragenococcus), 프로테우스(Proteus), 모르가넬라(Morganella), 엑시구박터속(Exiguobacterium), 오리박테리움(Oribacterium), 박테로이데스(Porphyromonas), 방선균속(Actinomyces), 셀룰로모나스(Cellulomonas), 요트갈리코커스(Jeotgalicoccus), 아시네토박터(Acinetobacter), 푸소박테리움(Fusobacterium), 엔테로박터(Enterobacter), 나이세리아(Neisseria), 아들러크레우치아(Adlercreutzia), 파라박테로이데스(Parabacteroides), 패칼리박테리움(Faecalibacterium), 카테니박테리움(Catenibacterium), 로즈뷰리아(Roseburia), 아커만시아속(Akkermansia), 메타노브레비박터(Methanobrevibacter), 클로스트리듐(Clostridium), 클렙시엘라(Klebsiella), 크리세오박테리움(Chryseobacterium), 할로모나스(Halomonas), 아그레가티박터(Aggregatibacter), 로도플라네스(Rhodoplanes), 써모언에어로박테리움(Thermoanaerobacterium), 칸디다투스 코리박터(Candidatus Koribacter), 플렉시피라(Flexispira), 루미노코커스(Ruminococcus), 류코노스톡속(Leuconostoc), 빌로필라(Bilophila), 크로모할로박터속(Chromohalobacter), 및 SMB53로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 속(genus) 세균 유래 세포밖 소포의 함량 증감을 비교하는 것을 특징으로 하는, 전립선질환 진단방법.
  11. 제8항에 있어서,
    상기 (c)단계에서, PCR 산물의 서열분석을 통하여 전립선비대증환자와 전립선암환자 유래 샘플에서 세균 유래 세포밖 소포의 함량 증감을 비교하는 단계를 통하여 전립선암을 진단하는 것을 특징으로 하는, 전립선질환 진단방법.
  12. 제11항에 있어서,
    상기 (c)단계에서, 테네리쿠테스(Tenericutes), 유리고세균(Euryarchaeota), 우미균문(Verrucomicrobia), 겜마티모나스균문(Gemmatimonadetes), 아키도박테리아(Acidobacteria), 및 부유균문(Planctomycetes)로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 문(phylum) 세균 유래 세포밖 소포,
    몰리쿠테스강(Mollicutes), 메타노박테리아(Methanobacteria), 우미균강(Verrucomicrobiae), 아키디미크로비움강(Acidimicrobiia), 스파르토박테리아(Spartobacteria), 아키도박테리아-6(Acidobacteria-6), 겜마티모나스균강(Gemmatimonadetes), 아키도박테리움강(Acidobacteriia), 페도스파이라(Pedosphaerae), 및 물곰팡이강(Saprospirae)로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 강(class) 세균 유래 세포밖 소포,
    스트라메노필레스(Stramenopiles), 알테로모나목(Alteromonadales), 리케차목(Rickettsiales), 나이세리아레스(Neisseriales), 메타노박테리아목(Methanobacteriales), 우미균목(Verrucomicrobiales), 점액세균목(Myxococcales), 아키디미크로비움목(Acidimicrobiales), 크토니오박터목(Chthoniobacterales), 아키도박테리움목(Acidobacteriales), 페도스파이라목(Pedosphaerales), 물곰팡이목(Saprospirales), 슈도모나달레스(Pseudomonadales), RF39, iii1-15, 및 Ellin329으로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 목(order) 세균 유래 세포밖 소포,
    펩토코카시에(Peptococcaceae), 엑시구박터과(Exiguobacteraceae), 방선균과(Actinomycetaceae), 셀룰로모나다시에(Cellulomonadaceae), 미토콘드리아(mitochondria), 푸소박테리아시에(Fusobacteriaceae), 포르피로모나아시에(Porphyromonadaceae), 플라보박테리움과(Flavobacteriaceae), 모락셀라(Moraxellaceae), 나이세리아시에(Neisseriaceae), 메타노박테리아시에(Methanobacteriaceae), 우미균과(Verrucomicrobiaceae), 리케넬라시에(Rikenellaceae), 위크셀라시에(Weeksellaceae), 연쇄상구균과(Streptomycetaceae), 헬리코박터과(Helicobacteraceae), 크토니오박터과(Chthoniobacteraceae), 코리박테라시에(Koribacteraceae) 키티노파가스과(Chitinophagaceae), 루미노코카시에(Ruminococcaceae), 및 S24-7로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 과(family) 세균 유래 세포밖 소포, 또는
    리조비움(Rhizobium), 테트라게노콕쿠스속(Tetragenococcus), 프로테우스(Proteus), 모르가넬라(Morganella), 엑시구박터속(Exiguobacterium), 오리박테리움(Oribacterium), 박테로이데스(Porphyromonas), 방선균속(Actinomyces), 셀룰로모나스(Cellulomonas), 요트갈리코커스(Jeotgalicoccus), 아시네토박터(Acinetobacter), 푸소박테리움(Fusobacterium), 엔테로박터(Enterobacter), 나이세리아(Neisseria), 아들러크레우치아(Adlercreutzia), 파라박테로이데스(Parabacteroides), 패칼리박테리움(Faecalibacterium), 카테니박테리움(Catenibacterium), 로즈뷰리아(Roseburia), 아커만시아속(Akkermansia), 메타노브레비박터(Methanobrevibacter), 클로스트리듐(Clostridium), 클렙시엘라(Klebsiella), 크리세오박테리움(Chryseobacterium), 할로모나스(Halomonas), 아그레가티박터(Aggregatibacter), 로도플라네스(Rhodoplanes), 써모언에어로박테리움(Thermoanaerobacterium), 칸디다투스 코리박터(Candidatus Koribacter), 플렉시피라(Flexispira), 루미노코커스(Ruminococcus), 류코노스톡속(Leuconostoc), 빌로필라(Bilophila), 크로모할로박터속(Chromohalobacter), 및 SMB53로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 속(genus) 세균 유래 세포밖 소포의 함량 증감을 비교하는 것을 특징으로 하는, 전립선질환 진단방법.
  13. 제8항에 있어서,
    상기 (c)단계에서, PCR 산물의 서열분석을 통하여 정상인과 전립선비대증환자 유래 샘플에서 세균 유래 세포밖 소포의 함량 증감을 비교하는 단계를 통하여 전립선비대증을 진단하는 것을 특징으로 하는, 전립선질환 진단방법.
  14. 제13항에 있어서,
    상기 (c)단계에서, 테네리쿠테스(Tenericutes), 유리고세균(Euryarchaeota), 우미균문(Verrucomicrobia), 겜마티모나스균문(Gemmatimonadetes), 아키도박테리아(Acidobacteria), 및 부유균문(Planctomycetes)로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 문(phylum) 세균 유래 세포밖 소포,
    몰리쿠테스강(Mollicutes), 메타노박테리아(Methanobacteria), 우미균강(Verrucomicrobiae), 아키디미크로비움강(Acidimicrobiia), 스파르토박테리아(Spartobacteria), 아키도박테리아-6(Acidobacteria-6), 겜마티모나스균강(Gemmatimonadetes), 아키도박테리움강(Acidobacteriia), 페도스파이라(Pedosphaerae), 및 물곰팡이강(Saprospirae)로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 강(class) 세균 유래 세포밖 소포,
    스트라메노필레스(Stramenopiles), 알테로모나목(Alteromonadales), 리케차목(Rickettsiales), 나이세리아레스(Neisseriales), 메타노박테리아목(Methanobacteriales), 우미균목(Verrucomicrobiales), 점액세균목(Myxococcales), 아키디미크로비움목(Acidimicrobiales), 크토니오박터목(Chthoniobacterales), 아키도박테리움목(Acidobacteriales), 페도스파이라목(Pedosphaerales), 물곰팡이목(Saprospirales), 슈도모나달레스(Pseudomonadales), RF39, iii1-15, 및 Ellin329으로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 목(order) 세균 유래 세포밖 소포,
    펩토코카시에(Peptococcaceae), 엑시구박터과(Exiguobacteraceae), 방선균과(Actinomycetaceae), 셀룰로모나다시에(Cellulomonadaceae), 미토콘드리아(mitochondria), 푸소박테리아시에(Fusobacteriaceae), 포르피로모나아시에(Porphyromonadaceae), 플라보박테리움과(Flavobacteriaceae), 모락셀라(Moraxellaceae), 나이세리아시에(Neisseriaceae), 메타노박테리아시에(Methanobacteriaceae), 우미균과(Verrucomicrobiaceae), 리케넬라시에(Rikenellaceae), 위크셀라시에(Weeksellaceae), 연쇄상구균과(Streptomycetaceae), 헬리코박터과(Helicobacteraceae), 크토니오박터과(Chthoniobacteraceae), 코리박테라시에(Koribacteraceae) 키티노파가스과(Chitinophagaceae), 루미노코카시에(Ruminococcaceae), 및 S24-7로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 과(family) 세균 유래 세포밖 소포, 또는
    리조비움(Rhizobium), 테트라게노콕쿠스속(Tetragenococcus), 프로테우스(Proteus), 모르가넬라(Morganella), 엑시구박터속(Exiguobacterium), 오리박테리움(Oribacterium), 박테로이데스(Porphyromonas), 방선균속(Actinomyces), 셀룰로모나스(Cellulomonas), 요트갈리코커스(Jeotgalicoccus), 아시네토박터(Acinetobacter), 푸소박테리움(Fusobacterium), 엔테로박터(Enterobacter), 나이세리아(Neisseria), 아들러크레우치아(Adlercreutzia), 파라박테로이데스(Parabacteroides), 패칼리박테리움(Faecalibacterium), 카테니박테리움(Catenibacterium), 로즈뷰리아(Roseburia), 아커만시아속(Akkermansia), 메타노브레비박터(Methanobrevibacter), 클로스트리듐(Clostridium), 클렙시엘라(Klebsiella), 크리세오박테리움(Chryseobacterium), 할로모나스(Halomonas), 아그레가티박터(Aggregatibacter), 로도플라네스(Rhodoplanes), 써모언에어로박테리움(Thermoanaerobacterium), 칸디다투스 코리박터(Candidatus Koribacter), 플렉시피라(Flexispira), 루미노코커스(Ruminococcus), 류코노스톡속(Leuconostoc), 빌로필라(Bilophila), 크로모할로박터속(Chromohalobacter), 및 SMB53로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 속(genus) 세균 유래 세포밖 소포의 함량 증감을 비교하는 것을 특징으로 하는, 전립선질환 진단방법.
PCT/KR2017/015576 2016-12-28 2017-12-27 세균 메타게놈 분석을 통한 전립선질환 진단 방법 Ceased WO2018124742A1 (ko)

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