WO2019104587A1 - 一种药物组合物及其用途 - Google Patents

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  • Traditional Chinese medicine is a gem of the Chinese nation. It has accumulated rich experience in disease prevention and treatment and has always played an important role. With the advancement of modernization of traditional Chinese medicine and the implementation of major national science and technology projects, the Chinese traditional medicine industry has developed rapidly. However, most Chinese medicine varieties are limited by the conditions of the original research period, and there are problems such as wide clinical positioning, insufficient efficacy of the drug-effect substances and their mechanism of action, rough pharmaceutical technology, and poor quality control technology, leading to the quality standards and product technology of Chinese patent medicines. The content is not high and lacks international market competitiveness. Traditional Chinese medicine has a history of 5,000 years of application, and China's new drug approval system has only been established for several decades.
  • the weight percentage of geranone is 8.24%
  • the weight percentage of zedoary dione is 22.46%
  • the weight percentage of furadiene is 18.05%
  • the weight percentage of zedoary alcohol is 3.11%.
  • ⁇ -elemene The weight percentage is 2.75%
  • the weight percentage of curcumene is 11.28%, and it does not contain 2,4,6-pentamethylaniline.

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Abstract

一种药物组合物及其用途，该药物组合物含有莪术油和冰片，其中莪术油含有牻牛儿酮(吉马酮)、莪术二酮、呋喃二烯、莪术醇、榄香烯和莪术烯，不含有2,4,6-五甲基苯胺，或者2,4,6-五甲基苯胺重量含量小于等于100ppm，所述药物组合物用于预防和/或治疗常见的HPV感染及其所致的各种疾病。将所述药物组合物制备成制剂，具有更好的安全性和更好的临床疗效。

Description

一种药物组合物及其用途 技术领域
本发明属于医药技术领域，具体涉及一种药物组合物及其用途，该药物组合物中含有新的莪术油，新的莪术油含有牻牛儿酮、莪术二酮、呋喃二烯、莪术醇、β-榄香烯和莪术烯，不含有2,4,6-五甲基苯胺。
背景技术
中医药学是中华民族的瑰宝，积累了丰富的防病治病经验，一直以来发挥着重要的作用。随着中药现代化的推进和国家科技重大专项的实施，中国中药产业快速发展。然而，大多数中药品种因原研时期条件所限，存在临床定位宽泛、药效物质及其作用机制不够清晰、制药工艺较为粗糙、质量控制技术尚较落后等问题，导致中成药质量标准及产品科技含量不高，缺乏国际市场竞争力。中医药有5000年的应用历史，而我国的新药审批制度仅建立几十年，目前批准的中药品种有9000多种，约5.8万个批准文号，只有少部分品种具有较扎实的研究基础。虽然大部分中药品种源自于经方或验方，有一定的临床基础，但符合现代药物研究开发要求的前期研究工作薄弱，且上市后大部分品种没有再开展系统规范的研究，上市后有效性和安全性缺乏评价，因此，进行中药的二次开发有着重要意义。
德国科学家Harald Zur Hausen证实持续性HPV感染是宫颈癌发生的必要条件，使宫颈癌成为目前所有癌症中唯一病因明确的可防可治的癌症，2008年获诺贝尔生理学或医学奖。因此治愈宫颈HR-HPV感染即可阻断向宫颈癌的演变。近十几年来，中医药治疗女性生殖道HR-HPV感染取得了一定的成效，但迄今为止，尚无国际公认治疗HPV感染安全有效的药物。寻找到治疗HR-HPV感染的药物成为众人的期待。
中药品种“保妇康栓”为妇女阴道外用栓剂，具有行气破瘀，生肌止痛之功效。主治湿热瘀滞所致的带下病，症见带下量多、色黄、时有阴部瘙痒；霉菌性阴道炎、老年性阴道炎、宫颈糜烂见上述证候者。保妇康栓含有莪术油和冰片，莪术辛温，破血行气，消积止痛；冰片辛寒，清热解毒，消肿止痛。两者合用，共奏清热活血，消肿止痛之功。近17年来，经过基础研究及临床研究表明：“保妇康栓”能治疗HR-HPV感染及持续感染引起的各种疾病和/或LR-HPV感染及及其引起的各种疾病，是目前经过大型RCT临床研究证实的中药中唯一对HPV感染具有临床疗效的药物，因此，针对该产品进行二次开发，具有非常重要的临床价值。
发明内容
基于上述原因，申请人经过多年的不懈研究，发明一种新的莪术油，该莪术油含有牻牛儿酮、莪术二酮、呋喃二烯、莪术醇、β-榄香烯、莪术烯，不含有2,4,6-五甲基苯胺，或者2,4,6-五甲基苯胺重量含量小于等于100ppm，与冰片组合成药物组合物，用于预防和/或治疗常见的HPV感染及其所致的各种疾病，其中高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)包括但不限于HPV16、18、30、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、69等亚型感染或持续感染及所致宫颈上皮内瘤变CINI、CINII、CINIII及宫颈癌等；其中低危型人乳头瘤病毒(LR-HPV)包括但不限于HPV 6、11、42、43、44、61、CP8304等各亚型感染及其所致的扁平疣、乳头状瘤、生殖道尖锐湿疣等疾病。本发明使用新的莪术油与冰片组合，制备成制剂，具有更好的安全性，具有更好的临床疗效。
本发明通过若干创造性试验，针对莪术油中若干有效成分进行研究，发现去除掉莪术油中的2,4,6-五甲基苯胺后，与冰片组合制备成制剂，具有更好的安全性，具有更好的临床疗效，为中药的二次开发奠定了物质基础。
本发明是通过下述技术方案实现的：
一种药物组合物，该药物组合物含有莪术油和冰片，莪术油中含有牻牛儿酮、莪术二酮、呋喃二烯、莪术醇、β-榄香烯和莪术烯，不含有2,4,6-五甲基苯胺，或者2,4,6-五甲基苯胺重量含量小于等于100ppm，
所述的一种药物组合物，其中莪术油中牻牛儿酮重量百分含量为5.0％～13.0％，莪术二酮重量百分含量为10.0％～30.0％，呋喃二烯重量百分含量为10.0％～26.0％，莪术醇重量百分含量为0.5％～6.0％，β-榄香烯重量百分含量为1.0％～6.0％，莪术烯重量百分含量为2.0％～21％，不含有2,4,6-五甲基苯胺，或者2,4,6-五甲基苯胺重量含量小于等于100ppm至不含有。
所述的一种药物组合物，其中莪术油中牻牛儿酮重量百分含量为6.0％～12.0％，莪术二酮重量百分含量为13.0％～26.0％，呋喃二烯重量百分含量为12.0％～25.0％，莪术醇重量百分含量为0.8％～5.0％，β-榄香烯重量百分含量为2.0％～5.0％，莪术烯重量百分含量为7.5％～19.0％，不含有2,4,6-五甲基苯胺，或者2,4,6-五甲基苯胺重量含量小于等于10ppm。
所述的一种药物组合物，其中莪术油中牻牛儿酮重量百分含量为6.0％～12.0％，莪术二酮重量百分含量为13.0％～26.0％，呋喃二烯重量百分含量为12.0％～25.0％，莪术醇重量百分含量为0.8％～5.0％，β-榄香烯重量百分含量为2.3％～4.0％,莪术烯重量百分含量为8％～16％，不含有2,4,6-五甲基苯胺。
药物组合物在制备用于预防和/或治疗的HPV感染为高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)各亚型的感染或持续感染及其所致的CINI、CINII、CINIII及宫颈癌等；和/或低危型人乳头瘤病毒(LR-HPV)各亚型的感染及其所致的生殖道尖锐湿疣等的药物中的应用。
其中HR-HPV包括HPV16、18、30、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、69；LR-HPV包括HPV 6、11、42、43、44、61、CP8304。
所述药物组合物制备成的药物制剂。
所述药物制剂包括外用制剂、口服制剂、注射制剂。
所述药物组合物中莪术油与冰片的重量比为：164：150。
所述药物组合物在预防和/或治疗各种病毒、细菌、霉菌、衣原体、支原体、滴虫感染；眼耳鼻喉感染、外阴炎、各种阴道炎、混合感染性阴道炎、皮肤感染、粘膜感染、痔疮感染、便秘、宫颈炎、附件炎、抗氧化等药物中的应用。
其中外用制剂包括莪术油、冰片和透皮吸收促进剂。
所述透皮吸收促进剂包括：月桂氮卓酮、二甲基亚砜、十四烷醇、辛酸、油酸中的一种或多种。
本发明所述的莪术油可以通过下述方法制备：
用SFE-CO 2法，加夹带剂95％乙醇生产出萃取莪术油。制备方法包括但不限于：从所有容器及空间整体消毒过的冷库中取出鲜莪术，精洗、切片2-3mm、40-60℃烘干、粉碎成莪术细粉过40-80目筛；取莪术细粉装于萃取釜中，调节萃取釜工作压力为10-12MPa、工作温度为40-50℃；Ⅰ级分离柱工作压力为7～9MPa、工作温度为50-60℃；Ⅱ级分离柱工作压力为4～5MPa、工作温度为30-40℃，萃取90～100分钟，得萃取莪术油；取萃取莪术油，加入乙酸乙酯或二氯甲烷溶解完全，加入0.01mol/L的盐酸水溶液，搅拌，静置，保留乙酸乙酯层或二氯甲烷层，回收有机溶剂至尽，得到新莪术油。
本发明所述的莪术油可以通过下述方法制备：
市售水蒸气蒸馏莪术油(深圳市国鑫香精香料有限公司，购买日期20160108)；
取市售水蒸气蒸馏莪术油，加入乙酸乙酯或二氯甲烷溶解完全，加入0.01mol/L的盐酸水溶液，搅拌，静置，保留乙酸乙酯层或二氯甲烷层，回收有机溶剂至尽，得到新莪术油。
本发明所述：牻牛儿酮(吉马酮)：CAS号：6902-91-6；莪术二酮：CAS号：13657-68-6；呋喃二烯：CAS号：19912-61-9；莪术醇，CAS号:4871-97-0；莪术烯：CAS号:17910-09-7；β-榄香烯：CAS号:515-13-9。
莪术油的检测分析方法：
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，水为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长为216nm。理论板数按牻牛儿酮峰计算不低于5000。
表1梯度流动相
时间(分钟) 流动相A(％) 流动相B(％)
0-15 75 25
16～25 75→90 25→10
25～35 90 10
参照物溶液的制备：取牻牛儿酮对照品及呋喃二烯对照品适量，精密称定，加无水乙醇制成每1ml含牻牛儿酮30μg、呋喃二烯50μg、莪术二酮35μg、莪术醇50μg、莪术烯30μg、β-榄香烯30μg的混合溶液，即得。
供试品溶液的制备：取本品0.1g，精密称定，置50ml量瓶中，加无水乙醇至刻度，摇匀，精密量取5ml，置25ml量瓶中，加无水乙醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
测定法：分别精密吸取参照物溶液和供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，记录色谱图，即得。
2,4,6-五甲基苯胺含量检测：委托海南省药检所检验。
具体实施例
以下以具体实施例来说明本发明的技术方案，但本发明的保护范围不限于此。
本说明书实施例所述的内容仅仅是对发明构思的实现形式的列举，本发明的保护范围不应当被视为仅限于实施例所陈述的具体形式，本发明的保护范围也及于本领域技术人员根据本发明构思所能够想到的等同技术手段。尽管以下本发明的实施方案进行了描述，但本发明并不局限于上述的具体实施方案和应用领域，下述的具体实施方案仅仅是示意性的、指导性的，而不是限制性的。本领域的普通技术人员在本说明书的启示下和在不脱离本发明权利要求所保护的范围的情况下，还可以做出很多种的形式，这些均属于本发明保护之列。
本发明下述试验，是在多次创造性试验的基础上，以本发明所要保护的技术方案为基础，总结的研发人员的结论性试验。
试验1
工艺研究
本发明方法：用SFE-CO 2法，加夹带剂95％乙醇生产出萃取莪术油：从所有容器及空间整体消毒过的冷库中取出鲜莪术，精洗、切片2-3mm、50℃烘干、粉碎成莪术细粉过60目筛； 取莪术细粉装于萃取釜中，调节萃取釜工作压力为11MPa、工作温度为45℃；Ⅰ级分离柱工作压力为8MPa、工作温度为55℃；Ⅱ级分离柱工作压力为4.5MPa、工作温度为35℃，萃取95分钟，得萃取莪术油；取莪术油，加入乙酸乙酯溶解完全，加入0.01mol/L的盐酸水溶液，搅拌，静置，保留乙酸乙酯层，回收有机溶剂至尽，得到新莪术油。
对比方法：水蒸气蒸馏法得到的莪术油。
试验结果下表2。
表2“莪术油”中有效成分比较
Figure PCTCN2017113811-appb-000001
意想不到的是，采用本发明方法得到的莪术油其刺激性成分比SD法少11种，比例由17.43％降到1.31％，降低了16.12％；同时主要有效成分增加。因此，本发明莪术油不仅刺激性大大减少，而且疗效也应有所增加。
表3不同方法“莪术油”中具有刺激性化学成分比较
Figure PCTCN2017113811-appb-000002
Figure PCTCN2017113811-appb-000003
注：表中“—”为未检出。
本发明药物组合物保留下来的四个主要有效成分不仅含量高，而且有非常确切的药理活性，简述如下：
1、呋喃二烯：在体内和体外实验中，均显示对肿瘤细胞的抑制作用。对人早幼粒白血病HL-60、胃癌SGC-7901、前列腺癌PC3细胞具有很强的抑制和杀伤效应，梁海燕应用CCK-8法测定呋喃二烯对宫颈癌SiHa和HeLa细胞增殖有抑制作用，
2、牻牛儿酮：对人卵巢癌A2780、结肠癌HCT和鼻咽癌KB3种瘤株有抑制作用。对人卵巢癌A2780细胞、结肠癌HCT细胞和鼻咽癌KB3细胞有抑制增殖作用。剂量依赖地抑制病毒抗原表达及病毒基因组复制。对金刚烷胺耐药株、B型流感病毒株和A型流感病毒H3N2亚型株均有抗病毒活性。
3、莪术二酮：对小鼠肉瘤37、小鼠宫颈癌U14及小鼠艾氏腹水癌均有明显的抑制作用，使癌细胞变性坏死。经本品处理的艾氏腹水癌，可成功地使小鼠获得主动性免疫。临床结果表明对宫颈癌有较好的疗效。莪术二酮还具有抗炎镇痛作用。
4、莪术醇：莪术醇是多版中国药典中莪术油的指标性成分，能增强免疫细胞活性，增强机体免疫力和免疫原性。对小鼠肉瘤S37,75mg/kg抑制率为53.47～61.96％；75mg/kg剂量时对小鼠宫颈癌U14抑制率为45.1～77.13％；临床有报道莪术醇对宫颈癌有较好的疗效,对小鼠艾氏腹水癌(EAC)，75mg/kg时,其抑制率为65.8-78.9％。莪术醇能明显抑制H22荷瘤小鼠肿瘤的增长；在体外可诱导HT-29和HepG2细胞凋亡；莪术醇可抑制人结肠癌SW1116的增殖,诱导其凋亡；莪术醇还有较强的抗真菌活性，且无明显不良反应。
试验2
急性毒性试验研究
试验1组：莪术油118g(试验1中本发明莪术油)，冰片108g；
制备方法为：取本发明莪术油118g、冰片108g、加入适量乙醇中，搅拌使溶解。另取聚乙二醇4000 49.00g,加热使熔化，加入月桂氮卓酮2.78g，搅匀，加入上述药液，搅匀，灌入栓剂模中，冷却后取出，制成1000粒，即得。
试验方法：试验1组大鼠一日内两次给药，每次给予2粒受试物，两次给药时间至少间隔4小时，给药1天。给药后连续观察至少4小时，以后每天观察1次，持续观察14天。
试验结果：给药剂量达2419±112mg/kg时，未见动物明显异常。给药后至试验观察期结束未见动物死亡，所有动物于给药后第15天剖检进行剖检大体观察，全部动物生理腔道未见异常分泌物、胸腹腔内主要脏器包括气管、食道、胸腺、肾上腺、胰腺、胃、肠(十二指肠、空肠、回肠、结肠、直肠)、心、肺、肝脏、脾、肾、脑、淋巴结、膀胱、子宫、卵巢及阴道(给药部位)的解剖位置正常，颜色正常有光泽，质地均匀，未见异常增大或缩小。按公斤体重折算相当于人临床日用剂量的886±41倍的剂量下，对SD大鼠阴道给药急性毒性试验均未见明显的毒性反应。
试验结论：传统保妇康栓的最大耐受剂量为786.7±32mg/kg，而本发明新莪术油制备成的制剂最大耐受剂量大于2419±112mg/kg，本发明具有更广泛的安全窗，进一步说明本发明制剂具有更好的安全性。去除2,4,6-五甲基苯胺(或者含量非常低)的莪术油与冰片组合后，其最大耐受剂量明显提高，安全窗变宽。
试验3
特殊安全性试验研究
(1)过敏性试验
受试药为试验1中试验1组制剂，对豚鼠阴道致敏给药，每隔7日给药1次，连续致敏3次，末次致敏后14d，以每只给0.1g进行激发，24小时和48小时观察，受试药组动物外阴未出现水肿、充血、分泌物等异常症状。激发后48小时剖开豚鼠阴道肉眼观察，受试药组动物阴道粘膜均未出现充血，水肿等阴道局部过敏反应症状。
表明受试药对家兔阴道粘膜致敏不成立。
(2)刺激性试验
受试药为试验2中试验1组制剂。每天定时给完整阴道组、破损阴道组受试药，以消毒的玻璃套管将2枚栓剂缓缓推入阴道深处，给药前用消毒过的玻璃套管刺激使其排尿，给药后将家兔仰卧位固定10min后放回，连续给药7天。于末次试验后24h内将雌兔处死解剖，肉眼观察并记录阴道充血和炎症情况。取阴道组织，以10％甲醛液固定，分成上、中、下三段，制成5μm石蜡包埋切片，常规染色进行组织学炎症刺激程 度判定染色，光镜下观察。按Eckstein标准，以充血、水肿、炎症细胞浸润及上皮细胞坏死4项指标评分。
试验结论：本发明药物组合物刺激总分为1.3分，表明受试药对家兔完整阴道和破损阴道均无明显刺激反应症状，提示该受试品阴道刺激性试验结果符合局部用药规定。
试验4
试验1组：莪术油82g(试验1组本发明莪术油)，冰片75g；
制备方法为：取莪术油82g、冰片75g、加人适量乙醇中，搅拌使溶解。另取硬脂酸聚烃氧(40)酯1235g和聚乙二醇4000 200g,加热使熔化，加入聚乙二醇400 120g和月桂氮卓酮17.5g，搅匀，加入上述药液，搅匀，灌入栓剂模中，冷却后取出，制成1000粒。
对HR-HPV感染的治疗作用
试验研究对象：本研究在海南医学院附属医院进行，2016年2月至2017年2月，妇科门诊确诊宫颈HR-HPV感染者共42例。平均年龄34.16±6.57岁。均签署了知情同意书。
入选标准：(1)年龄≥18岁，有性生活史的女性；(2)HR-HPVDNA检测为阳性；(3)宫颈细胞学检测未见异常上皮细胞和癌细胞者；(4)无重大脏器疾患；(5)无药物过敏史(特别是过敏体质者)。
治疗方法：患者使用试验4栓剂，于月经干净后1～2天开始用药，每晚使用2粒，每月连用16天，连用3个月经周期为一个疗程。患者均按要求接受全程治疗及追踪观察，并使用工具避孕，治疗3个月后第4个月进行第1次访视，检测患者HR-HPV DNA转阴情况，如亚型转阴即为治愈。
试验结果：见表4。表4对HR-HPV感染的转阴率
HR-HPV 转阴例数 总例数 转阴率
16型 10 13 76.93％
18型 3 5 60.00％
33型 1 2 50.00％
52型 7 9 77.78％
56型 2 4 50.00％
58型 2 4 50.00％
68型 5 5 100.00％
总计 30 42 71.43％
试验结论：本发明新莪术油和冰片制成的药物组合物对HPV感染具有很好的转阴率。
试验5
本发明莪术油和冰片制备成的栓剂对CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ的治疗作用：
试验研究对象：本研究在沈阳市妇婴医院进行，2016年1月至2017年1月，经组织学诊断为CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ患者116人，年龄18～42岁。平均年龄36.77±8.20岁。自愿签署了知情同意书。
试验方法：患者116例首先进行病理免疫组化检测Ki67、P16、P53蛋白表达检测；P16基因是一种新型抑癌基因；P53基因是重要的肿瘤抑制基因；Ki67的表达与细胞增殖活性密切相关。
然后进行治疗，CINⅠ及CINⅡ各38例，不手术，月经干净后1-2天开始用药；CINⅢ40例行Leep术或冷刀锥切术，术后第7天开始用药；睡前洗净外阴部，将试验4中药物组合物塞入阴道深部，2粒/1次/晚，连用16天/月，连用6个月。停药后3～7天阴道镜下宫颈组织取活检，再次作病理免疫组化检测Ki67、P16、P53蛋白表达，与用药前蛋白表达比较。
试验结果见表5-表7。
表5对CIN患者本药物组合物栓治疗前、后P16蛋白表达
Figure PCTCN2017113811-appb-000004
表6对CIN患者本药物组合物栓治疗前、后p53蛋白表达
Figure PCTCN2017113811-appb-000005
表7、对CIN患者本药物组合物栓治疗前、后ki67蛋白表达
组别 例数 治疗前 治疗后 χ2 P值
    阳性数 阳性率(％) 阳性数 阳性率(％)    
CINⅠ组 38 7 18.42 1 2.63 5.029 0.025
CINⅡ组 38 15 39.47 4 10.53 8.491 0.004
CINⅢ组 40 19 47.50 8 20.00 6.765 0.009
结论：本发明药物组合物治疗CIN后能降低ki67、P16、P53蛋白的表达，提示对CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ均有很好的治疗作用，进而抑制肿瘤细胞活性，可阻止宫颈癌的发生。
制备实施例
实施例1
本发明莪术油的制备方法：用SFE-CO 2法，加夹带剂95％乙醇生产出萃取莪术油：从所有容器及空间整体消毒过的冷库中取出鲜莪术，精洗、切片2-3mm、40℃烘干、粉碎成莪术细粉过40目筛；取莪术细粉装于萃取釜中，调节萃取釜工作压力为10MPa、工作温度为40℃；Ⅰ级分离柱工作压力为7MPa、工作温度为50℃；Ⅱ级分离柱工作压力为4MPa、工作温度为30℃，萃取90分钟，得萃取莪术油；取莪术油，加入乙酸乙酯溶解完全，加入0.01mol/L的盐酸水溶液，搅拌，静置，保留乙酸乙酯层，回收有机溶剂至尽，得到新莪术油。
牻牛儿酮重量百分含量为6.13％，莪术二酮重量百分含量为16.24％，呋喃二烯重量百分含量为12.10％，莪术醇重量百分含量为3.85％，β-榄香烯重量百分含量为2.15％，莪术烯重量百分含量为14.10％，2,4,6-五甲基苯胺重量含量8ppm。
制剂处方：本发明莪术油164g，冰片150g；
制备方法为：取莪术油164g、冰片150g、加入适量乙醇中，搅拌使溶解。另取硬脂酸聚烃氧(40)酯1235g和聚乙二醇4000 125g，加热使熔化，加入聚乙二醇400 38g和月桂氮卓酮17.5g，搅匀，加入上述药液，搅匀，灌入栓剂模中，冷却后取出，制成1000粒，即得。
实施例2
用SFE-CO 2法，加夹带剂95％乙醇生产出萃取莪术油：从所有容器及空间整体消毒过的冷库中取出鲜莪术，精洗、切片2-3mm、50℃烘干、粉碎成莪术细粉过60目筛；取莪术细粉装于萃取釜中，调节萃取釜工作压力为11MPa、工作温度为45℃；Ⅰ级分离柱工作压力为8MPa、工作温度为55℃；Ⅱ级分离柱工作压力为4.5MPa、工作温度为45℃，萃取95分钟，得萃取莪术油；取莪术油，加入乙酸乙酯溶解完全，加入0.01mol/L的盐酸水溶液，搅拌，静置，保留乙酸乙酯层，回收有机溶剂至尽，得到新莪术油。
其中牻牛儿酮重量百分含量为7.85％，莪术二酮重量百分含量为25.81％，呋喃二烯重量百分含量为25.00％，莪术醇重量百分含量为4.80％，β-榄香烯重量百分含量为3.41％,莪术烯重量百分含量为10.02％，不含有2,4,6-五甲基苯胺。
制剂处方：本发明莪术油164g，冰片150g；
制备方法为：取莪术油164g、冰片150g、加入适量乙醇中，搅拌使溶解。另取硬脂酸聚烃氧(40)酯1235g和聚乙二醇4000 125g，加热使熔化，加入聚乙二醇400 38g和月桂氮卓酮17.5g，搅匀，加入上述药液，搅匀，灌入栓剂模中，冷却后取出，制成1000粒，即得。实施例3
用SFE-CO 2法，加夹带剂95％乙醇生产出萃取莪术油：从所有容器及空间整体消毒过的冷库中取出鲜莪术，精洗、切片2-3mm、50℃烘干、粉碎成莪术细粉过60目筛；取莪术细粉装于萃取釜中，调节萃取釜工作压力为11MPa、工作温度为45℃；Ⅰ级分离柱工作压力为8MPa、工作温度为55℃；Ⅱ级分离柱工作压力为4.5MPa、工作温度为35℃，萃取95分钟，得萃取莪术油；取莪术油，加入乙酸乙酯溶解完全，加入0.01mol/L的盐酸水溶液，搅拌，静置，保留乙酸乙酯层，回收有机溶剂至尽，得到新莪术油。
其中牻牛儿酮重量百分含量为11.92％，莪术二酮重量百分含量为23.78％，呋喃二烯重量百分含量为19.20％，莪术醇重量百分含量为4.12％，β-榄香烯重量百分含量为3.80％，莪术烯重量百分含量4.20％，不含有2,4,6-五甲基苯胺。
制剂处方：本发明莪术油164g，冰片150g；
制备方法为：取莪术油164g、冰片150g、加入适量乙醇中，搅拌使溶解。另取硬脂酸聚烃氧(40)酯1235g和聚乙二醇4000 125g，加热使熔化，加入聚乙二醇400 38g和月桂氮卓酮17.5g，搅匀，加入上述药液，搅匀，灌入栓剂模中，冷却后取出，制成1000粒，即得。实施例4
用SFE-CO 2法，加夹带剂95％乙醇生产出萃取莪术油。从所有容器及空间整体消毒过的冷库中取出鲜莪术，精洗、切片2-3mm、40℃烘干、粉碎成莪术细粉过40目筛；取莪术细粉装于萃取釜中，调节萃取釜工作压力为10MPa、工作温度为40℃；Ⅰ级分离柱工作压力为7MPa、工作温度为50℃；Ⅱ级分离柱工作压力为4MPa、工作温度为40℃，萃取90分钟，得萃取莪术油；取莪术油，加入二氯甲烷溶解完全，加入0.01mol/L的盐酸水溶液，搅拌，静置，保留二氯甲烷层，回收有机溶剂至尽，得到新莪术油。
其中牻牛儿酮重量百分含量为8.41％，莪术二酮重量百分含量为23.18％，呋喃二烯重量百分含量为17.90％，莪术醇重量百分含量为3.11％，β-榄香烯重量百分含量为3.05％，莪术烯重量百分含量为11.05％，不含有2,4,6-五甲基苯胺。
制剂处方：本发明莪术油164g，冰片150g；
制备方法为：取莪术油164g、冰片150g、加入适量乙醇中，搅拌使溶解。另取硬脂酸聚烃氧(40)酯1235g和聚乙二醇4000 125g，加热使熔化，加入聚乙二醇400 38g和月桂氮卓酮17.5g，搅匀，加入上述药液，搅匀，灌入栓剂模中，冷却后取出，制成1000粒，即得。
实施例5
用SFE-CO 2法，加夹带剂95％乙醇生产出萃取莪术油。从所有容器及空间整体消毒过的冷库中取出鲜莪术，精洗、切片2-3mm、60℃烘干、粉碎成莪术细粉过80目筛；取莪术细粉装于萃取釜中，调节萃取釜工作压力为12MPa、工作温度为50℃；Ⅰ级分离柱工作压力为9MPa、工作温度为60℃；Ⅱ级分离柱工作压力为5MPa、工作温度为40℃，萃取100分钟，得萃取莪术油；取莪术油，加入二氯甲烷溶解完全，加入0.01mol/L的盐酸水溶液，搅拌，静置，保留二氯甲烷层，回收有机溶剂至尽，得到新莪术油。
其中牻牛儿酮重量百分含量为7.89％，莪术二酮重量百分含量为21.78％，呋喃二烯重量百分含量为18.34％，莪术醇重量百分含量为3.04％，β-榄香烯重量百分含量为2.91％，莪术烯重量百分含量为10.83％，不含有2,4,6-五甲基苯胺。
制剂处方：本发明莪术油164g，冰片150g；
制备方法为：取莪术油164g、冰片150g、加入适量乙醇中，搅拌使溶解。另取硬脂酸聚烃氧(40)酯1235g和聚乙二醇4000 125g，加热使熔化，加入聚乙二醇400 38g和月桂氮卓酮17.5g，搅匀，加入上述药液，搅匀，灌入栓剂模中，冷却后取出，制成1000粒，即得。
实施例6
用SFE-CO 2法，加夹带剂95％乙醇生产出萃取莪术油。从所有容器及空间整体消毒过的冷库中取出鲜莪术，精洗、切片2-3mm、50℃烘干、粉碎成莪术细粉过60目筛；取莪术细粉装于萃取釜中，调节萃取釜工作压力为11MPa、工作温度为45℃；Ⅰ级分离柱工作压力为8MPa、工作温度为55℃；Ⅱ级分离柱工作压力为4MPa、工作温度为45℃，萃取95分钟，得萃取莪术油；取莪术油，加入二氯甲烷溶解完全，加入0.01mol/L的盐酸水溶液，搅拌，静置，保留二氯甲烷层，回收有机溶剂至尽，得到新莪术油。
其中牻牛儿酮重量百分含量为8.24％，莪术二酮重量百分含量为22.46％，呋喃二烯重量百分含量为18.05％，莪术醇重量百分含量为3.11％，β-榄香烯重量百分含量为2.75％，莪术烯重量百分含量11.28％，不含有2,4,6-五甲基苯胺。
制剂处方：本发明莪术油164g，冰片150g；
制备方法为：取莪术油164g、冰片150g、加人适量乙醇中，搅拌使溶解。另取硬脂酸聚烃氧(40)酯1235g和聚乙二醇4000 125g，加热使熔化，加入聚乙二醇400 38g和月桂氮卓酮17.5g，搅匀，加入上述药液，搅匀，灌入栓剂模中，冷却后取出，制成1000粒，即得。
按照本发明工艺方法，获得不同批次新莪术油含量见表8：
表8不同批次新莪术油有效成分含量
Figure PCTCN2017113811-appb-000006
制备实施例包括但不限于上述。

Claims (11)

  1. 一种药物组合物，该药物组合物含有莪术油和冰片，其特征在于：莪术油中含有牻牛儿酮、莪术二酮、呋喃二烯、莪术醇、β-榄香烯、莪术烯，不含有2,4,6-五甲基苯胺，或者2,4,6-五甲基苯胺重量含量小于等于100ppm。
  2. 根据权利要求1所述的一种药物组合物，其中莪术油中牻牛儿酮重量百分含量为5.0～13.0％，莪术二酮重量百分含量为10.0％～30.0％，呋喃二烯重量百分含量为10.0％～26.0％，莪术醇重量百分含量为0.5％～6.0％，β-榄香烯重量百分含量为1.0％～6.0％，莪术烯重量百分含量为2.0％～21.0％，不含有2,4,6-五甲基苯胺，或者2,4,6-五甲基苯胺重量含量小于等于100ppm至不含有。
  3. 根据权利要求1所述的一种药物组合物，其中莪术油中牻牛儿酮重量百分含量为6.0％～12.0％，莪术二酮重量百分含量为13.0％～26.0％，呋喃二烯重量百分含量为12.0％～25.0％，莪术醇重量百分含量为0.8％～5.0％，β-榄香烯重量百分含量为2.0％～5.0％，莪术烯重量百分含量为7.5％～19.0％，不含有2,4,6-五甲基苯胺，或者2,4,6-五甲基苯胺重量含量小于等于10ppm至不含有。
  4. 根据权利要求1-3任一项所述的一种药物组合物，其特征在于药物组合物在制备用于预防和/或治疗的HPV感染为高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)各亚型的感染或持续感染及其所致的CINI、CINII、CINIII及宫颈癌等；和/或低危型人乳头瘤病毒(LR-HPV)各亚型的感染及其所致的生殖道尖锐湿疣等的药物中的应用。
  5. 根据权利要求4所述的一种药物组合物，其中HR-HPV包括HPV16、18、30、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、69；LR-HPV包括HPV 6、11、42、43、44、61、CP8304。
  6. 根据权利要求1-3任一项所述的一种药物组合物，其特征在于药物组合物制备成的药物制剂。
  7. 根据权利要求6所述的一种药物组合物，其中药物制剂包括外用制剂、口服制剂、注射制剂。
  8. 根据权利要求6所述的一种药物组合物，其特征在于药物组合物中莪术油与冰片的重量比为：164：150。
  9. 根据权利要求1-3任一项所述的一种药物组合物，其特征在于药物组合物在预防和/或治疗各种病毒、细菌、真菌、衣原体、支原体、滴虫感染；眼耳鼻喉感染、外阴炎、各种 阴道炎、混合感染性阴道炎、皮肤感染、粘膜感染、痔疮感染、便秘、宫颈炎、附件炎、抗氧化等药物中的应用。
  10. 根据权利要求7所述的一种药物组合物，其中外用制剂包括莪术油、冰片和透皮吸收促进剂。
  11. 根据权利要求10所述的一种药物组合物，其中所述透皮吸收促进剂包括：月桂氮卓酮、二甲基亚砜、十四烷醇、辛酸、油酸中的一种或多种。
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