WO2019151597A1 - 연골 재생용 바이오 잉크 조성물, 이를 이용한 맞춤형 연골 재생용 스캐폴드의 제조방법, 및 상기 제조방법을 이용하여 제조된 맞춤형 연골 재생용 스캐폴드 - Google Patents

연골 재생용 바이오 잉크 조성물, 이를 이용한 맞춤형 연골 재생용 스캐폴드의 제조방법, 및 상기 제조방법을 이용하여 제조된 맞춤형 연골 재생용 스캐폴드 Download PDF

Info

Publication number
WO2019151597A1
WO2019151597A1 PCT/KR2018/009707 KR2018009707W WO2019151597A1 WO 2019151597 A1 WO2019151597 A1 WO 2019151597A1 KR 2018009707 W KR2018009707 W KR 2018009707W WO 2019151597 A1 WO2019151597 A1 WO 2019151597A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
cartilage
cartilage regeneration
scaffold
regeneration
bio
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Ceased
Application number
PCT/KR2018/009707
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
유석환
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Rokit Healthcare Inc
Original Assignee
Rokit Healthcare Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority to JP2020541729A priority Critical patent/JP7105899B2/ja
Priority to AU2018406738A priority patent/AU2018406738B2/en
Priority to CN201880088344.9A priority patent/CN111670055B/zh
Priority to US16/966,111 priority patent/US20210038762A1/en
Priority to SG11202007115QA priority patent/SG11202007115QA/en
Priority to PE2020001139A priority patent/PE20211241A1/es
Priority to BR112020015615-9A priority patent/BR112020015615B1/pt
Priority to RU2020124011A priority patent/RU2793343C2/ru
Priority to MX2020008033A priority patent/MX2020008033A/es
Application filed by Rokit Healthcare Inc filed Critical Rokit Healthcare Inc
Priority to EP18903638.7A priority patent/EP3747477B1/en
Priority to ES18903638T priority patent/ES2933951T3/es
Priority to JOP/2020/0189A priority patent/JOP20200189A1/ar
Publication of WO2019151597A1 publication Critical patent/WO2019151597A1/ko
Priority to SA520412548A priority patent/SA520412548B1/ar
Priority to CONC2020/0009497A priority patent/CO2020009497A2/es
Anticipated expiration legal-status Critical
Ceased legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B33—ADDITIVE MANUFACTURING TECHNOLOGY
    • B33Y—ADDITIVE MANUFACTURING, i.e. MANUFACTURING OF THREE-DIMENSIONAL [3D] OBJECTS BY ADDITIVE DEPOSITION, ADDITIVE AGGLOMERATION OR ADDITIVE LAYERING, e.g. BY 3D PRINTING, STEREOLITHOGRAPHY OR SELECTIVE LASER SINTERING
    • B33Y70/00—Materials specially adapted for additive manufacturing
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
    • A61L27/38—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix containing added animal cells
    • A61L27/3804—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix containing added animal cells characterised by specific cells or progenitors thereof, e.g. fibroblasts, connective tissue cells, kidney cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61F—FILTERS IMPLANTABLE INTO BLOOD VESSELS; PROSTHESES; DEVICES PROVIDING PATENCY TO, OR PREVENTING COLLAPSING OF, TUBULAR STRUCTURES OF THE BODY, e.g. STENTS; ORTHOPAEDIC, NURSING OR CONTRACEPTIVE DEVICES; FOMENTATION; TREATMENT OR PROTECTION OF EYES OR EARS; BANDAGES, DRESSINGS OR ABSORBENT PADS; FIRST-AID KITS
    • A61F2/00—Filters implantable into blood vessels; Prostheses, i.e. artificial substitutes or replacements for parts of the body; Appliances for connecting them with the body; Devices providing patency to, or preventing collapsing of, tubular structures of the body, e.g. stents
    • A61F2/02—Prostheses implantable into the body
    • A61F2/30—Joints
    • A61F2/30756—Cartilage endoprostheses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61F—FILTERS IMPLANTABLE INTO BLOOD VESSELS; PROSTHESES; DEVICES PROVIDING PATENCY TO, OR PREVENTING COLLAPSING OF, TUBULAR STRUCTURES OF THE BODY, e.g. STENTS; ORTHOPAEDIC, NURSING OR CONTRACEPTIVE DEVICES; FOMENTATION; TREATMENT OR PROTECTION OF EYES OR EARS; BANDAGES, DRESSINGS OR ABSORBENT PADS; FIRST-AID KITS
    • A61F2/00—Filters implantable into blood vessels; Prostheses, i.e. artificial substitutes or replacements for parts of the body; Appliances for connecting them with the body; Devices providing patency to, or preventing collapsing of, tubular structures of the body, e.g. stents
    • A61F2/02—Prostheses implantable into the body
    • A61F2/30—Joints
    • A61F2/3094—Designing or manufacturing processes
    • A61F2/30942—Designing or manufacturing processes for designing or making customized prostheses, e.g. using templates, CT or NMR scans, finite-element analysis or CAD-CAM techniques
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/14—Macromolecular materials
    • A61L27/22—Polypeptides or derivatives thereof, e.g. degradation products
    • A61L27/225—Fibrin; Fibrinogen
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/14—Macromolecular materials
    • A61L27/22—Polypeptides or derivatives thereof, e.g. degradation products
    • A61L27/227—Other specific proteins or polypeptides not covered by A61L27/222, A61L27/225 or A61L27/24
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
    • A61L27/3604—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix characterised by the human or animal origin of the biological material, e.g. hair, fascia, fish scales, silk, shellac, pericardium, pleura, renal tissue, amniotic membrane, parenchymal tissue, fetal tissue, muscle tissue, fat tissue, enamel
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
    • A61L27/3604—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix characterised by the human or animal origin of the biological material, e.g. hair, fascia, fish scales, silk, shellac, pericardium, pleura, renal tissue, amniotic membrane, parenchymal tissue, fetal tissue, muscle tissue, fat tissue, enamel
    • A61L27/3612—Cartilage, synovial fluid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
    • A61L27/3604—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix characterised by the human or animal origin of the biological material, e.g. hair, fascia, fish scales, silk, shellac, pericardium, pleura, renal tissue, amniotic membrane, parenchymal tissue, fetal tissue, muscle tissue, fat tissue, enamel
    • A61L27/3633—Extracellular matrix [ECM]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
    • A61L27/3641—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix characterised by the site of application in the body
    • A61L27/3645—Connective tissue
    • A61L27/3654—Cartilage, e.g. meniscus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
    • A61L27/3683—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix subjected to a specific treatment prior to implantation, e.g. decellularising, demineralising, grinding, cellular disruption/non-collagenous protein removal, anti-calcification, crosslinking, supercritical fluid extraction, enzyme treatment
    • A61L27/3691—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix subjected to a specific treatment prior to implantation, e.g. decellularising, demineralising, grinding, cellular disruption/non-collagenous protein removal, anti-calcification, crosslinking, supercritical fluid extraction, enzyme treatment characterised by physical conditions of the treatment, e.g. applying a compressive force to the composition, pressure cycles, ultrasonic/sonication or microwave treatment, lyophilisation
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
    • A61L27/38—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix containing added animal cells
    • A61L27/3804—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix containing added animal cells characterised by specific cells or progenitors thereof, e.g. fibroblasts, connective tissue cells, kidney cells
    • A61L27/3834—Cells able to produce different cell types, e.g. hematopoietic stem cells, mesenchymal stem cells, marrow stromal cells, embryonic stem cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
    • A61L27/38—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix containing added animal cells
    • A61L27/3839—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix containing added animal cells characterised by the site of application in the body
    • A61L27/3843—Connective tissue
    • A61L27/3852—Cartilage, e.g. meniscus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/50—Materials characterised by their function or physical properties, e.g. injectable or lubricating compositions, shape-memory materials, surface modified materials
    • A61L27/54—Biologically active materials, e.g. therapeutic substances
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B33—ADDITIVE MANUFACTURING TECHNOLOGY
    • B33Y—ADDITIVE MANUFACTURING, i.e. MANUFACTURING OF THREE-DIMENSIONAL [3D] OBJECTS BY ADDITIVE DEPOSITION, ADDITIVE AGGLOMERATION OR ADDITIVE LAYERING, e.g. BY 3D PRINTING, STEREOLITHOGRAPHY OR SELECTIVE LASER SINTERING
    • B33Y10/00—Processes of additive manufacturing
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B33—ADDITIVE MANUFACTURING TECHNOLOGY
    • B33Y—ADDITIVE MANUFACTURING, i.e. MANUFACTURING OF THREE-DIMENSIONAL [3D] OBJECTS BY ADDITIVE DEPOSITION, ADDITIVE AGGLOMERATION OR ADDITIVE LAYERING, e.g. BY 3D PRINTING, STEREOLITHOGRAPHY OR SELECTIVE LASER SINTERING
    • B33Y80/00—Products made by additive manufacturing
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61F—FILTERS IMPLANTABLE INTO BLOOD VESSELS; PROSTHESES; DEVICES PROVIDING PATENCY TO, OR PREVENTING COLLAPSING OF, TUBULAR STRUCTURES OF THE BODY, e.g. STENTS; ORTHOPAEDIC, NURSING OR CONTRACEPTIVE DEVICES; FOMENTATION; TREATMENT OR PROTECTION OF EYES OR EARS; BANDAGES, DRESSINGS OR ABSORBENT PADS; FIRST-AID KITS
    • A61F2/00—Filters implantable into blood vessels; Prostheses, i.e. artificial substitutes or replacements for parts of the body; Appliances for connecting them with the body; Devices providing patency to, or preventing collapsing of, tubular structures of the body, e.g. stents
    • A61F2/02—Prostheses implantable into the body
    • A61F2/30—Joints
    • A61F2/3094—Designing or manufacturing processes
    • A61F2/30942—Designing or manufacturing processes for designing or making customized prostheses, e.g. using templates, CT or NMR scans, finite-element analysis or CAD-CAM techniques
    • A61F2002/30957—Designing or manufacturing processes for designing or making customized prostheses, e.g. using templates, CT or NMR scans, finite-element analysis or CAD-CAM techniques using a positive or a negative model, e.g. moulds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61F—FILTERS IMPLANTABLE INTO BLOOD VESSELS; PROSTHESES; DEVICES PROVIDING PATENCY TO, OR PREVENTING COLLAPSING OF, TUBULAR STRUCTURES OF THE BODY, e.g. STENTS; ORTHOPAEDIC, NURSING OR CONTRACEPTIVE DEVICES; FOMENTATION; TREATMENT OR PROTECTION OF EYES OR EARS; BANDAGES, DRESSINGS OR ABSORBENT PADS; FIRST-AID KITS
    • A61F2/00—Filters implantable into blood vessels; Prostheses, i.e. artificial substitutes or replacements for parts of the body; Appliances for connecting them with the body; Devices providing patency to, or preventing collapsing of, tubular structures of the body, e.g. stents
    • A61F2/02—Prostheses implantable into the body
    • A61F2/30—Joints
    • A61F2/3094—Designing or manufacturing processes
    • A61F2002/30985—Designing or manufacturing processes using three dimensional printing [3DP]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L2300/00—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices
    • A61L2300/40—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices characterised by a specific therapeutic activity or mode of action
    • A61L2300/432—Inhibitors, antagonists
    • A61L2300/434—Inhibitors, antagonists of enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L2400/00—Materials characterised by their function or physical properties
    • A61L2400/06—Flowable or injectable implant compositions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L2430/00—Materials or treatment for tissue regeneration
    • A61L2430/06—Materials or treatment for tissue regeneration for cartilage reconstruction, e.g. meniscus

Definitions

  • the present invention relates to a bio-ink composition for cartilage regeneration, a method for producing a custom cartilage regeneration scaffold using the same, and a scaffold for custom cartilage regeneration manufactured using the method.
  • Degenerative arthritis is a disease in which local degenerative changes occur as the articular cartilage wears down, also called osteoarthritis or osteoarthritis.
  • Degenerative arthritis is a type of chronic arthritis, a disease caused by overgrowth of bones in the joint surface due to degenerative changes in the joint cartilage under heavy weight load, and appearing in middle-aged adults. The disease is first, the cartilage cells that make up the cartilage composition components are degraded due to aging, the cartilage loses its elasticity. Then, as time passes, the surface of the cartilage becomes rough, and various kinds of substances enter the inside of the joint cavity, which is wrapped in the joint membrane, thereby causing inflammation. Clinically, recurrent pain, joint stiffness, and gradual dyskinesia of the joints are present.
  • the causes of degenerative arthritis are deeply related to aging and excessive weight, and the more and more severely in women as they age.
  • Early symptoms include one or two joints with stiff pain, such as stiffness, prolonged prolongation of the cartilage, hardening of the subchondral bone, hyperplasia of the bone around the joint, and deformation of the joint.
  • degenerative changes in articular cartilage has not yet been identified, but an absolute decrease in the number of chondrocytes and imbalances in the synthesis and degradation of chondrocytes in chondrocytes is known as one cause.
  • degenerative changes in articular cartilage reduce cartilage strength and ability as a cushion due to degradation of cartilage substrate.
  • the present invention is to provide a cartilage regeneration bio ink composition for the manufacture of a custom cartilage regeneration scaffold for cartilage regeneration of the missing cartilage site. Furthermore, using the bio-ink composition for cartilage regeneration, to provide a method for producing a custom cartilage regeneration scaffold and a custom cartilage regeneration scaffold manufactured using the same.
  • a first liquid containing adipose tissue derived stromal vascular fraction, hyaline cartilage powder, and fibrinogen provides a bio ink composition for cartilage regeneration comprising a; and a second liquid containing thrombin.
  • Another embodiment of the present invention a) using a 3D scanner, to obtain the three-dimensional data of the missing cartilage region, using a 3D printer to manufacture a mold for the scaffold; b) applying a first liquid comprising an adipose tissue derived stromal vascular fraction, a hyaline cartilage powder, and fibrinogen to form a first layer by applying in a mold for the scaffold step; c) applying a second liquid comprising thrombin to the first layer to form a second layer; And d) reacting the first layer and the second layer to form a scaffold for cartilage regeneration.
  • Another embodiment of the present invention provides a scaffold for custom cartilage regeneration, which is manufactured using the above production method.
  • the bio ink composition for cartilage regeneration according to the present invention has an advantage of manufacturing a patient-specific cartilage regeneration scaffold.
  • Custom cartilage regeneration scaffold manufactured using the bio-ink composition for cartilage regeneration according to the present invention increases the cartilage differentiation ability of the transplanted adipose tissue-derived stromal blood vessel fraction, and further increases the regeneration of cartilage at the transplantation site. It is possible.
  • Scaffold for custom cartilage regeneration according to the present invention has an excellent bonding force to the affected area, and thus has the advantage of excellent cartilage differentiation and cartilage regeneration effect.
  • a method for manufacturing a custom cartilage regeneration scaffold can be manufactured directly by 3D scanning a cartilage defect part of an affected part in an operating room, so that the scaffold can be implanted through a single surgical procedure.
  • Figure 1 shows the manufacturing process of the pellet for confirming the cartilage differentiation capacity of Experimental Example 1.
  • Figure 2 shows the result of staining safranin O on the pellet of Comparative Example 1 (MCCM 0 mg) according to Experimental Example 1.
  • Figure 3 shows the result of staining safranin O in the pellet of Example 1 (MCCM 10 mg) according to Experimental Example 1.
  • Figure 4 shows the result of staining safranin O in the pellet of Example 2 (MCCM 50 mg) according to Experimental Example 1.
  • Figure 5 shows the result of staining safranin O in the pellet of Example 3 (MCCM 100 mg) according to Experimental Example 1.
  • Figure 6 shows the animal experiment for confirming whether the regeneration of cartilage of Experimental Example 2.
  • FIG. 7 shows the micro CT imaging images of the defect area after the scaffold implantation and the image during the animal experiment of Example 4 according to Experimental Example 2.
  • FIG. 7 shows the micro CT imaging images of the defect area after the scaffold implantation and the image during the animal experiment of Example 4 according to Experimental Example 2.
  • FIG. 8 shows micro CT imaging images of defect regions 6 weeks after scaffold implantation and images of the animal experiment of Comparative Example 2 according to Experimental Example 2.
  • FIG. 8 shows micro CT imaging images of defect regions 6 weeks after scaffold implantation and images of the animal experiment of Comparative Example 2 according to Experimental Example 2.
  • FIG. 9 shows the results of safranin O staining on the defective areas 6 weeks after transplantation of Comparative Example 2 according to Experimental Example 2.
  • Figure 10 shows the result of safranin O staining for the defective region 6 weeks after the implantation of Example 4 according to Experimental Example 2.
  • FIG. 11 shows the result of immunochemical staining (Immunohistochemistry (IHC)) with collagen type 1 (Collagen type 1) on the defect region 6 weeks after transplantation of Comparative Example 2 according to Experimental Example 2.
  • IHC immunohistochemistry
  • FIG. 12 shows the results of immunochemical staining (Immunohistochemistry (IHC)) with collagen type 1 (Collagen type 1) on the defective region 6 weeks after implantation of Example 4 according to Experimental Example 2.
  • IHC immunohistochemistry
  • FIG. 13 shows the result of immunohistochemistry (IHC) treatment with collagen type 2 (Collagen type 2) on the defective region 6 weeks after transplantation of Comparative Example 2 according to Experimental Example 2.
  • IHC immunohistochemistry
  • Figure 14 shows the results of immunohistochemistry (IHC) treatment with collagen type 2 (Collagen type 2) for the defect region 6 weeks after implantation of Example 4 according to Experimental Example 2.
  • IHC immunohistochemistry
  • the first liquid comprising adipose tissue-derived stromal vessel fraction, free cartilage powder, and fibrinogen; It provides a bio ink composition for cartilage regeneration comprising a; and a second liquid containing thrombin.
  • the cartilage regeneration bio ink composition according to the present invention is a two-component type, and the first liquid and the second liquid are sequentially applied and then reacted to form a scaffold for cartilage regeneration.
  • thrombin in the second solution and fibrinogen in the first solution may react to form a fibrin network, which may serve to sufficiently fix the adipose tissue-derived stromal vessel fraction and free cartilage powder.
  • the adipose tissue derived stromal vascular fraction includes adipose derived stem cells.
  • the adipose tissue-derived stromal vascular fraction may be substantially free of cells other than adipose tissue-derived stem cells (eg, adipocytes, erythrocytes and other stromal cells, etc.) and extracellular matrix material. More preferably, no other cells and no extracellular matrix material.
  • the adipose tissue-derived stromal vascular fraction may be extracted from the adipose tissue of the same or different animals.
  • the adipose tissue-derived stromal vascular fraction may be extracted from autologous adipose tissue.
  • the adipose tissue-derived stromal blood vessel fraction may be extracted by using adipose cells of a patient or an animal to be treated.
  • the content of the adipose tissue-derived stromal blood vessel fraction may be 10 5 to 10 7 per 1 ml of the first liquid.
  • the cartilage differentiation ability and cartilage regeneration ability of the scaffold to be manufactured may be greatly improved.
  • the adipose tissue-derived stromal blood vessel fraction may be used together with free cartilage powder to differentiate into cartilage cells, whereby the customized cartilage regeneration scaffold may be actively induced to differentiate into cartilage cells when transplanted to the affected area. have.
  • the hyaline cartilage powder may be an element constituting the support of the scaffold manufactured by using the bio ink composition for cartilage regeneration. Specifically, the fibrin matrix through the reaction of the fibrinogen and thrombin may bind the particles of the free cartilage powder to each other.
  • the glass cartilage powder may be derived from the same or different kinds of free cartilage.
  • the free cartilage powder may be derived from the same kind of free cartilage.
  • the cartilage treatment target is a human
  • glass cartilage powder extracted from human cartilage may be used.
  • the cartilage treatment target is an animal
  • free cartilage powder extracted from free cartilage of the same species of animal may be used.
  • the free cartilage powder may discharge cartilage regeneration-related growth factors, thereby inducing the differentiation of adipose tissue-derived stromal blood vessels into cartilage cells. Furthermore, the protein contained in the free cartilage powder may play a role in helping the cartilage regeneration of the affected area is actively performed.
  • the glass cartilage powder may be derived from rib cartilage (costal cartilage).
  • the free cartilage powder may be derived from human cartilage cartilage.
  • the free cartilage powder may be derived from rib cartilage of the same species as the animal.
  • the glass cartilage powder may be used by powdering allogeneic costal cartilage (allogenic costal cartilage) in the market.
  • the glass cartilage powder may have a particle diameter of 30 ⁇ m or more and 300 ⁇ m or less. If the average particle diameter of the glass cartilage powder is within the above range, there is an advantage that the differentiation and regeneration of the cartilage cells is effectively performed.
  • the concentration of the glass cartilage powder may be 0.005% (w / v) to 0.1% (w / v). That is, the glass cartilage powder may be included in 0.005 g to 0.1 g per 1 ml of the first liquid.
  • the concentration of the free cartilage powder is preferably 0.005% (w / v) to 0.07% (w / v), more preferably 0.005% (w / v) to 0.03% (w / v), most preferably 0.007% (w / v) to 0.03% (w / v).
  • the number of the adipose tissue-derived stromal blood vessel fraction may be 10 5 to 10 7 .
  • the number of adipose tissue-derived stromal blood vessel fractions may be 10 5 to 10 7 .
  • the number of adipose tissue-derived stromal blood vessel fractions may be 10 5 to 10 7 .
  • the first liquid may further include aprotinin.
  • the aprotinin is an inhibitor of the protease secreted by the pancreas and is a polypeptide consisting of a total of 58 amino acids. It is mainly extracted from bovine lungs and inhibits the breakdown of fibrin in the blood.
  • the fibrinogen may be included as 65 mg to 115 mg per 1 ml of the first liquid.
  • the aprotinin may be included as 900 KIU to 1,100 KIU (kininogen Inactivator Unit), specifically 1000 KIU per 1 ml of the first liquid.
  • the first liquid is 10 5 to 10 7 adipose tissue-derived stromal blood vessel fraction, 5 mg to 100 mg free cartilage powder, 65 mg to 115 mg per 1 ml Fibrinogen and aprotinin from 900 KIU to 1,100 KIU.
  • the second liquid may be a thrombin dispersed in a calcium chloride solution.
  • the second liquid may include 400 IU to 600 IU thrombin and 5 mg to 6.5 mg calcium chloride per ml.
  • the solvent of the first liquid and the second liquid may be water, specifically, saline.
  • fibrinogen in the first liquid and thrombin in the second liquid can be obtained through a commercial fibrin glue kit.
  • the bio-ink composition for cartilage regeneration is instantaneously used to create a patient-specific cartilage regeneration scaffold using a 3D printer at the procedure site. There is an advantage to manufacture.
  • the present invention uses a fibrin glue composed of fibrinogen and fibrin as an adhesive, which can ensure a higher viscosity than hyaluronic acid adhesive or collagen adhesive, the custom cartilage regeneration scaffold has excellent adhesion to the affected area, further High strength can be maintained.
  • Another embodiment of the present invention a) using a 3D scanner, to obtain the three-dimensional data of the missing cartilage region, using a 3D printer to manufacture a mold for the scaffold; b) applying a first liquid comprising an adipose tissue derived stromal vascular fraction, a hyaline cartilage powder, and fibrinogen to form a first layer by applying in a mold for the scaffold step; c) applying a second liquid comprising thrombin to the first layer to form a second layer; And d) reacting the first layer and the second layer to form a scaffold for cartilage regeneration.
  • Step a) may use 3D scanner equipment and 3D printing equipment known in the art.
  • the scaffold mold may play a role of fixing the three-dimensional shape when the first liquid and the second liquid are applied.
  • the scaffold mold may be removed after the scaffold for cartilage regeneration is formed.
  • the scaffold mold may be formed using biocompatible polymers generally used in the art.
  • steps b) and c) may be performed using inkjet printing or 3D printing.
  • step b) and step c) may use a printing apparatus having two or more nozzles known in the art, and the first liquid and the second liquid may be discharged from each nozzle to form a three-dimensional shape.
  • steps b) and c) may be repeatedly performed alternately two or more times. Specifically, when the formation of a bulky cartilage regeneration scaffold is required, steps b) and c) are alternately carried out, such as " first layer / second layer / first layer / second layer " And then solidify to form a scaffold for cartilage regeneration.
  • step d) can be completed within 10 minutes, preferably within 5 minutes. Specifically, step d) may react for 3 to 7 minutes to form a scaffold for cartilage regeneration by reacting the first layer and the second layer.
  • the first incision is made to extract the tissue of the missing cartilage region of the patient, and then a second incision is necessary to transplant the affected part through the culture process of the tissue.
  • a scaffold corresponding to the missing cartilage region can be prepared within a short time and then transplanted into the missing cartilage region.
  • Another embodiment of the present invention provides a scaffold for custom cartilage regeneration, which is manufactured using the above production method.
  • the customized cartilage regeneration scaffold may be manufactured and implanted into a shape corresponding to the missing cartilage region within a short time.
  • the custom cartilage regeneration scaffold does not require a culture process for cells, and after transplantation, the adipose tissue-derived stromal blood vessel fraction in the scaffold is differentiated into cartilage cells, and the free cartilage powder activates the regeneration of cartilage and regeneration. Can increase the survival rate of cartilage cells.
  • the natural cartilage (specifically knee cartilage) may be induced to be regenerated by natural bone (free cartilage) growth factor and protein secreted from the free cartilage powder. Can be.
  • the custom cartilage regeneration scaffold is applied to the affected area, it can be effectively restored to the same or similar to the existing cartilage.
  • Adipose tissue-derived stromal vascular fraction (SVF) cells were obtained through the following steps.
  • Glass cartilage powder was prepared as a powder having a particle size of 30 ⁇ m to 300 ⁇ m using commercially available rib cartilage (Costal cartilage).
  • the free cartilage powder is referred to as a micronized costal cartilage matrix (MCCM).
  • Figure 1 shows the manufacturing process of the pellet for confirming the cartilage differentiation capacity. Specifically, the experiment for confirming the cartilage differentiation ability was performed as follows.
  • Example 1 10 mg (Example 1), 50 mg (Example 2) and 100 mg (Example 3) of the prepared cartilage powder (MCCM) were dispersed in the obtained SVF (10 5 to 10 7 pieces). Mixed saline solution.
  • the mixture was centrifuged at 1000 rpm for 5 minutes at 4 ° C., and then the physiological saline supernatant was removed to obtain an MCCM / SVF mixture.
  • the MCCM / SVF mixture was mixed with 1 ml of aprotinin solution mixed with fibrinogen using a mix syringe.
  • Example 1 MCCM 10 mg
  • Example 2 MCCM 10 mg
  • the viability of chondrocytes and differentiation into chondrocytes was the most active. That is, when the content of MCCM is too large, it is determined that the differentiation into chondrocytes is slow because there is less space for differentiation into chondrocytes.
  • Figure 6 shows the animal experiment process for checking whether the cartilage regeneration. Specifically, animal experiments for confirming whether cartilage regeneration was performed as follows.
  • the obtained SVF (10 5 to 10 7 ) was mixed with physiological saline in which 10 mg of the prepared glass cartilage powder (MCCM) was dispersed.
  • the mixture was centrifuged at 1000 rpm for 5 minutes at 4 ° C., and then the physiological saline supernatant was removed to obtain an MCCM / SVF mixture.
  • the MCCM / SVF mixture was mixed with 1 ml of aprotinin solution mixed with fibrinogen using a mix syringe.
  • the knee thigh joint of the experimental beagle was exposed, and a defect area of about 6 mm in diameter and about 2 mm in depth was formed therein.
  • a 3D scanner was used to obtain three-dimensional data of the missing cartilage area of the experimental beagle, based on which a 3D Bio 3D printer (INVIVO, ROKIT) was used for medical grade PCL. (polycaprolactone) outer wall was output. Furthermore, MCCM / SVF / fibrinogen solution and calcium chloride solution in which thrombin is dispersed are sequentially applied to the scaffold mold using a 3D Bio 3D printer (INVIVO, ROKIT), respectively, and then hardened for 5 minutes.
  • a 3D Bio 3D printer INVIVO, ROKIT
  • FIG. 7 and FIG. 8 show micro CT imaging images of the defect areas after the scaffold implantation and the images during the animal experiments of Example 4 and Comparative Example 2 according to Experimental Example 2, respectively.
  • FIGS. 7 and 8 it can be confirmed that the micro CT imaging results according to Example 4 exhibit very high bone density compared to the micro CT imaging results according to Comparative Example 2.
  • collagen type 1 (Collagen type) in order to determine what kind of cartilage regeneration is performed in the defect area 6 weeks after transplantation of Comparative Example 2 and Example 4 according to Experimental Example 2, respectively.
  • the type 1 collagen is an antibody (antibody) bound for the identification of fibro-cartilage, and serves to detect only the fibrocartilage and express it in brown.
  • FIG. 12 it can be seen that the regenerated portion in the defective region is expressed in blue color, which indicates that the regenerated cartilage is regenerated into cartilage cells suitable for the defective region as free cartilage rather than fibrocartilage.
  • the area differentiated into free cartilage could not be confirmed.
  • FIG. 13 and FIG. 14 show collagen type 2 (Collagen type) in order to check whether cartilage regeneration is performed in the defect area 6 weeks after transplantation of Comparative Example 2 and Example 4 according to Experimental Example 2, respectively. 2) shows the result of immunochemical staining (Immunohistochemistry, IHC).
  • the type 2 collagen is an antibody (body) bound for the identification of free cartilage (hyaline cartilage), and serves to detect only free cartilage and express it in brown.
  • FIG. 14 it can be seen that the regenerated portion in the defective region is expressed in brown color, which indicates that the regenerated cartilage is regenerated into cartilage cells suitable for the defective region as free cartilage rather than fibrocartilage.
  • the region differentiated into free cartilage could not be confirmed.

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Oral & Maxillofacial Surgery (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Manufacturing & Machinery (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Materials Engineering (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Geometry (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Materials For Medical Uses (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Ink Jet (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Prostheses (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

본 명세서는, 지방조직 유래 기질혈관분획(adipose tissue derived stromal vascular fraction), 유리연골(hyaline cartilage) 파우더, 및 피브리노겐을 포함하는 제1 액; 및 트롬빈을 포함하는 제2 액;을 포함하는, 연골 재생용 바이오 잉크 조성물, 이를 이용한 맞춤형 연골 재생용 스캐폴드의 제조방법, 및 상기 제조방법을 이용하여 제조된 맞춤형 연골 재생용 스캐폴드에 관한 것이다.

Description

연골 재생용 바이오 잉크 조성물, 이를 이용한 맞춤형 연골 재생용 스캐폴드의 제조방법, 및 상기 제조방법을 이용하여 제조된 맞춤형 연골 재생용 스캐폴드
본 명세서는 2018년 1월 31일에 한국특허청에 제출된 한국 특허 출원 제 10-2018-0012221호의 출원일의 이익을 주장하며, 그 내용 전부는 본 명세서에 포함된다.
본 발명은 연골 재생용 바이오 잉크 조성물, 이를 이용한 맞춤형 연골 재생용 스캐폴드의 제조방법, 및 상기 제조방법을 이용하여 제조된 맞춤형 연골 재생용 스캐폴드에 관한 것이다.
퇴행성 관절염(degenerative arthritis)은 관절 연골이 닳아 없어지면서 국소적인 퇴행성 변화가 나타나는 질환으로서, 골관절염(osteoarthritis) 또는 골관절증이라고도 한다. 퇴행성관절염은 만성관절염의 하나로, 체중 부하를 많이 받는 관절 연골에서 퇴행성 변화가 일어나 관절면의 뼈가 과잉 성장되어 발생되는 질환이며, 중장년기 성인에게 많이 나타난다. 이 질환은 먼저, 연골 조성 성분을 만들어내는 연골세포가 노화로 인해 기능이 떨어지면서 연골이 탄력성을 잃게 된다. 그리고, 시간이 흐르면서 연골의 표면이 거칠어지고, 관절막으로 싸여진 관절강 내부로 여러 종류의 물질이 유입되어 염증이 생기게 된다. 임상적으로는 반복적인 동통, 관절의 강직감, 관절의 점진적인 운동장애 등이 나타난다. 퇴행성 관절염의 원인은 노화 현상이나 과다한 체중과 관계가 깊으며, 나이가 많아질수록 여성에게서 더 많이 그리고 더 심하게 나타난다. 초기 증상은 한 개 또는 두 개의 관절이 강직과 함께 쑤시는 듯한 동통이 나타나며, 장기화 되면 연골 하골의 경화, 관절 주변에 골의 과잉형성, 관절의 변형 등을 초래하게 된다.
관절연골의 퇴행성 변화의 원인은 아직 규명되어 있지는 않지만, 연골세포 수의 절대적 감소와 연골세포(chondrocytes)에서 일어나는 연골기질 합성과 분해의 불균형이 하나의 원인으로 알려져 있다. 따라서, 관절연골의 퇴행성 변화는 연골기질의 분해로 인하여 연골 강도와 쿠션으로서의 능력이 감소된다.
기존 세포 치료제들은 이식된 세포가 중력에 의해 한 방향으로 쏠리기 때문에 결손 부위에 균등하게 분포되기 어려운 단점이 있으며, 세포 생착의 어려움이 있어 연골 결손부의 세포 재생을 감소시킨다. 또한, 자가 연골세포 이식술 및 줄기세포 이식술의 경우엔 조직을 추출한 후 배양과정을 거쳐 환자에게 적용되므로 2번의 수술이 필요하며, 약 4주간의 세포 배양기간 또는 조작을 필요로 한다. 아울러, 이식된 세포가 중력에 의해 결손 부위에 균등하게 분포 및 생착 되기 어렵고, 초자연골의 분화가 아닌 섬유연골로의 분화가 유도되어 추후에 연골이 잘 부서지는 현상이 생기는 문제가 있다. 그러므로, 연골 결손부의 세포 재생을 효과적으로 수행할 수 있는 방법의 개발이 필요한 실정이다.
[선행기술문헌]
[특허문헌]
KR 특허 공개 공보 10-2017-0012099
본 발명은 결손된 연골 부위의 연골 재생을 위한 맞춤형 연골 재생용 스캐폴드의 제조를 위한 연골 재생용 바이오 잉크 조성물을 제공하고자 한다. 나아가, 상기 연골 재생용 바이오 잉크 조성물을 이용하여, 맞춤형 연골 재생용 스캐폴드의 제조방법 및 이를 이용하여 제조된 맞춤형 연골 재생용 스캐폴드를 제공하고자 한다.
본 발명의 일 실시상태는, 지방조직 유래 기질혈관분획(adipose tissue derived stromal vascular fraction), 유리연골(hyaline cartilage) 파우더, 및 피브리노겐을 포함하는 제1 액; 및 트롬빈을 포함하는 제2 액;을 포함하는, 연골 재생용 바이오 잉크 조성물을 제공한다.
본 발명의 다른 실시상태는, a) 3D 스캐너를 이용하여, 결손된 연골 부위의 3차원 데이터를 수득하고, 3D 프린터를 이용하여 스캐폴드용 몰드를 제조하는 단계; b) 지방조직 유래 기질혈관분획(adipose tissue derived stromal vascular fraction), 유리연골(hyaline cartilage) 파우더, 및 피브리노겐을 포함하는 제1 액을 이용하여 상기 스캐폴드용 몰드 내에 도포하여 제1 층을 형성하는 단계; c) 트롬빈을 포함하는 제2 액을 상기 제1 층 상에 도포하여 제2 층을 형성하는 단계; 및 d) 상기 제1 층 및 상기 제2 층이 반응하여, 연골 재생용 스캐폴드를 형성하는 단계;를 포함하는, 맞춤형 연골 재생용 스캐폴드의 제조방법을 제공한다.
본 발명의 또 다른 실시상태는, 상기 제조방법을 이용하여 제조된, 맞춤형 연골 재생용 스캐폴드를 제공한다.
본 발명에 따른 연골 재생용 바이오 잉크 조성물은 환자 맞춤형 연골 재생용 스캐폴드를 제조할 수 있는 장점이 있다.
본 발명에 따른 연골 재생용 바이오 잉크 조성물을 이용하여 제조된 맞춤형 연골 재생용 스캐폴드는 이식된 지방조직 유래 기질혈관분획의 연골 분화능을 높이고, 나아가 이식 부위에서의 연골 재생을 증가시켜 효과적인 연골 치료가 가능하다.
본 발명에 따른 맞춤형 연골 재생용 스캐폴드는 환부에 대하여 우수한 접합력을 가지며, 이로 인하여 연골 분화능 및 연골 재생 효과가 우수한 장점이 있다.
본 발명에 따른 맞춤형 연골 재생용 스캐폴드의 제조방법은 수술실에서 환부의 연골 결손부를 3D 스캐닝하여 바로 맞춤형 연골 재생용 스캐폴드를 제조할 수 있으므로, 한번의 수술 과정을 통하여 스캐폴드를 이식할 수 있는 장점이 있다.
도 1은 실험예 1의 연골 분화 능력을 확인하기 위한 펠렛의 제조 과정을 도시한 것이다.
도 2는 실험예 1에 따른 비교예 1(MCCM 0 ㎎)의 펠렛에 사프라닌 O 염색을 한 결과를 나타낸 것이다.
도 3은 실험예 1에 따른 실시예 1(MCCM 10 ㎎)의 펠렛에 사프라닌 O 염색을 한 결과를 나타낸 것이다.
도 4는 실험예 1에 따른 실시예 2(MCCM 50 ㎎)의 펠렛에 사프라닌 O 염색을 한 결과를 나타낸 것이다.
도 5는 실험예 1에 따른 실시예 3(MCCM 100 ㎎)의 펠렛에 사프라닌 O 염색을 한 결과를 나타낸 것이다.
도 6은 실험예 2의 연골 재생 여부의 확인을 위한 동물 실험 과정을 도시한 것이다.
도 7은 실험예 2에 따른 실시예 4의 동물 실험 과정 중의 이미지 및 스캐폴드 이식 후 6 주 후의 결함 영역에 대한 마이크로 CT 촬영 이미지를 나타낸 것이다.
도 8은 실험예 2에 따른 비교예 2의 동물 실험 과정 중의 이미지 및 스캐폴드 이식 후 6 주 후의 결함 영역에 대한 마이크로 CT 촬영 이미지를 나타낸 것이다.
도 9는 실험예 2에 따른 비교예 2의 이식 후 6 주 후의 결함 영역에 대하여, 사프라닌 O 염색한 결과를 나타낸 것이다.
도 10은 실험예 2에 따른 실시예 4의 이식 후 6 주 후의 결함 영역에 대하여, 사프라닌 O 염색한 결과를 나타낸 것이다.
도 11은 실험예 2에 따른 비교예 2의 이식 후 6 주 후의 결함 영역에 대하여, 1형 콜라겐(Collagen type 1)으로 면역 화학 염색(Immunohistochemistry, IHC) 처리한 결과를 나타낸 것이다.
도 12는 실험예 2에 따른 실시예 4의 이식 후 6 주 후의 결함 영역에 대하여, 1형 콜라겐(Collagen type 1)으로 면역 화학 염색(Immunohistochemistry, IHC) 처리한 결과를 나타낸 것이다.
도 13은 실험예 2에 따른 비교예 2의 이식 후 6 주 후의 결함 영역에 대하여, 2형 콜라겐(Collagen type 2)으로 면역 화학 염색(Immunohistochemistry, IHC) 처리한 결과를 나타낸 것이다.
도 14는 실험예 2에 따른 실시예 4의 이식 후 6 주 후의 결함 영역에 대하여, 2형 콜라겐(Collagen type 2)으로 면역 화학 염색(Immunohistochemistry, IHC) 처리한 결과를 나타낸 것이다.
본 명세서에서 어떤 부재가 다른 부재 "상에" 위치하고 있다고 할 때, 이는 어떤 부재가 다른 부재에 접해 있는 경우뿐 아니라 두 부재 사이에 또 다른 부재가 존재하는 경우도 포함한다.
본 명세서에서 어떤 부분이 어떤 구성요소를 "포함" 한다고 할 때, 이는 특별히 반대되는 기재가 없는 한 다른 구성요소를 제외하는 것이 아니라 다른 구성 요소를 더 포함할 수 있는 것을 의미한다.
이하, 본 발명에 대하여 상세히 설명한다.
본 발명의 일 실시상태는, 지방조직 유래 기질혈관분획, 유리연골 파우더, 및 피브리노겐을 포함하는 제1 액; 및 트롬빈을 포함하는 제2 액;을 포함하는, 연골 재생용 바이오 잉크 조성물을 제공한다.
본 발명에 따른 연골 재생용 바이오 잉크 조성물은 2액형으로서, 상기 제1 액과 상기 제2 액이 순차적으로 도포된 후 반응하여 연골 재생용 스캐폴드가 형성될 수 있다. 구체적으로, 상기 제2 액 내의 트롬빈과 상기 제1 액 내의 피브리노겐이 반응하여 피브린 네트워크를 형성할 수 있으며, 이는 상기 지방조직 유래 기질혈관분획, 유리 연골 파우더가 충분히 고정되도록 하는 역할을 할 수 있다.
상기 지방조직 유래 기질 혈관분획(adipose tissue derived stromal vascular fraction)은 지방조직 유래 줄기세포(adipose derived stem cells)를 포함한다. 바람직하게는, 상기 지방조직 유래 기질 혈관분획은 지방조직 유래 줄기세포 외의 다른 세포들(예를 들어, 지방세포, 적혈구세포 및 다른 기질세포, 등) 및 세포외 매트릭스 물질을 실질적으로 포함하지 않을 수 있으며, 보다 바람직하게는 다른 세포들 및 세포외 매트릭스 물질을 전혀 포함하지 않을 수 있다.
상기 지방조직 유래 기질 혈관분획은 동종 동물 또는 이종 동물의 지방 조직으로부터 추출된 것일 수 있다. 바람직하게는, 상기 지방조직 유래 기질 혈관 분획은 자가 유래 지방 조직으로부터 추출된 것일 수 있다. 보다 구체적으로, 상기 지방조직 유래 기질 혈관분획은 시술 대상인 환자 또는 동물의 지방세포를 이용하여 추출된 것일 수 있다.
본 발명의 일 실시상태에 따르면, 상기 지방 조직 유래 기질혈관분획의 함량은 1 ㎖의 제1 액 당 105 개 내지 107 개일 수 있다. 상기 지방 조직 유래 기질혈관분획의 함량이 상기 범위 내인 경우, 제조되는 스캐폴드의 연골 분화 능력 및 연골 재생 능력이 크게 향상될 수 있다.
상기 지방조직 유래 기질 혈관분획은 유리연골 파우더와 함께 사용됨으로써, 연골 세포로 분화될 수 있으며, 이로 인하여 상기 맞춤형 연골 재생용 스캐폴드는 환부에 이식되는 경우 연골 세포로의 분화가 활발하게 유도될 수 있다.
상기 유리연골(hyaline cartilage) 파우더는 상기 연골 재생용 바이오 잉크 조성물을 이용하여 제조된 스캐폴드의 지지체를 구성하는 요소가 될 수 있다. 구체적으로, 상기 피브리노겐과 트롬빈의 반응을 통한 피브린 매트릭스는 상기 유리연골 파우더의 입자들을 서로 결합시킬 수 있다.
상기 유리연골 파우더는 동종 또는 이종의 유리연골로부터 유래된 것일 수 있다. 바람직하게는, 상기 유리 연골 파우더는 동종의 유리연골로부터 유래된 것일 수 있다. 구체적으로, 연골 시술 대상이 사람인 경우, 사람의 유리연골로부터 추출된 유리연골 파우더를 사용할 수 있다. 또한, 연골 시술 대상이 동물인 경우, 같은 종의 동물의 유리연골로부터 추출된 유리연골 파우더를 사용할 수 있다.
상기 유리연골 파우더는 연골 재생 관련 성장인자를 배출하여, 상기 지방조직 유래 기질 혈관분획이 연골 세포로 분화되는 것을 유도할 수 있다. 나아가, 상기 유리연골 파우더에 포함되는 단백질은 환부의 연골 재생이 활발하게 이루어지도록 돕는 역할을 할 수 있다.
본 발명의 일 실시상태에 따르면, 상기 유리연골 파우더는 갈비 연골(costal cartilage)로부터 유래된 것일 수 있다. 구체적으로, 상기 맞춤형 연골 재생용 스캐폴드의 적용 대상이 사람인 경우, 상기 유리연골 파우더는 사람의 갈비 연골로부터 유래될 수 있다. 또한, 상기 맞춤형 연골 재생용 스캐폴드의 적용 대상이 동물인 경우, 상기 유리연골 파우더는 대상인 동물과 같은 종의 갈비 연골로부터 유래될 수 있다. 예를 들어, 상기 유리연골 파우더는 시중에 판매되는 동종 이계의 늑골 연골(allogenic costal cartilage)을 파우더화하여 사용할 수 있다.
본 발명의 일 실시상태에 따르면, 상기 유리연골 파우더의 입경은 30 ㎛ 이상 300 ㎛ 이하일 수 있다. 상기 유리연골 파우더의 평균 입경이 상기 범위 내인 경우 연골 세포의 분화 및 재생이 효과적으로 이루어지는 장점이 있다.
본 발명의 일 실시상태에 따르면, 상기 유리연골 파우더의 농도는 0.005 %(w/v) 내지 0.1 %(w/v)일 수 있다. 즉, 상기 유리연골 파우더는 상기 제1 액 1 ㎖ 당 0.005 g 내지 0.1 g으로 포함될 수 있다. 상기 유리연골 파우더의 농도는 바람직하게는 0.005 %(w/v) 내지 0.07 %(w/v), 보다 바람직하게는 0.005 %(w/v) 내지 0.03 %(w/v), 가장 바람직하게는 0.007 %(w/v) 내지 0.03 %(w/v)일 수 있다. 상기 유리연골 파우더의 농도가 상기 범위 내인 경우, 맞춤형 연골 재생용 스캐폴드의 이식 후, 연골 세포의 생존성, 연골 세포로의 분화 및 모폴로지가 가장 우수하게 구현될 수 있다.
본 발명의 일 실시상태에 따르면, 상기 유리연골 파우더 5 ㎎ 내지 100 ㎎ 에 대하여, 상기 지방조직 유래 기질혈관분획의 개수는 105 내지 107 개일 수 있다. 바람직하게는, 상기 유리연골 파우더 5 ㎎ 내지 70 ㎎ 에 대하여, 상기 지방조직 유래 기질혈관분획의 개수는 105 내지 107 개일 수 있다. 보다 바람직하게는, 상기 유리연골 파우더 5 ㎎ 내지 30 ㎎ 에 대하여, 상기 지방조직 유래 기질혈관분획의 개수는 105 내지 107 개일 수 있다.
본 발명의 일 실시상태에 따르면, 상기 제1 액은 아프로티닌을 더 포함할 수 있다. 상기 아프로티닌(aprotinin)은 췌장에서 분비되는 프로틴분해효소의 억제제로서, 총 58 개의 아미노산으로 이루어진 폴리펩티드이다. 주로 소의 폐에서 추출되며 혈액 속에서는 피브린의 분해를 저지하여, 지혈작용을 하는 것으로 알려져 있다.
본 발명의 일 실시상태에 따르면, 상기 피브리노겐은 1 ㎖의 제1 액 당 65 ㎎ 내지 115 ㎎으로 포함될 수 있다.
본 발명의 일 실시상태에 따르면, 상기 아프로티닌은 1 ㎖의 제1 액 당 900 KIU 내지 1,100 KIU(kininogen Inactivator Unit), 구체적으로 1000 KIU로 포함될 수 있다.
구체적으로, 본 발명의 일 실시상태에 따르면, 상기 제1 액은 1 ㎖ 당, 105 내지 107 개의 지방조직 유래 기질혈관분획, 5 ㎎ 내지 100 ㎎의 유리연골 파우더, 65 ㎎ 내지 115 ㎎의 피브리노겐 및 900 KIU 내지 1,100 KIU의 아프로티닌을 포함할 수 있다.
본 발명의 일 실시상태에 따르면, 상기 제2 액은 염화칼슘 용액 내에 트롬빈이 분산된 것일 수 있다. 구체적으로, 상기 제2 액은 1 ㎖ 당, 400 IU 내지 600 IU의 트롬빈, 5 ㎎ 내지 6.5 ㎎의 염화칼슘을 포함할 수 있다.
상기 제1 액 및 제2 액의 용매는 물, 구체적으로는 생리식염수일 수 있다. 또한, 상기 제1 액 내의 피브리노겐과 상기 제2 액 내의 트롬빈은 상용의 피브린 글루 키트를 통하여 입수할 수 있다.
상기 제1 액과 제2 액은 10분 이내, 바람직하게는 5분 이내에 반응이 완료되므로, 상기 연골 재생용 바이오 잉크 조성물은 시술 현장에서 3D 프린터기를 이용하여 환자 맞춤형 연골 재생용 스캐폴드를 즉석에서 제조할 수 있는 장점이 있다.
본 발명은 피브리노겐 및 피브린으로 구성되는 피브린 글루를 접착제로 사용하며, 이는 히알루론산 접착제 또는 콜라겐 접착제보다 높은 점성을 확보할 수 있으므로, 상기 맞춤형 연골 재생용 스캐폴드는 환부와의 우수한 접착력을 가지고, 나아가 높은 강도를 유지할 수 있다.
본 발명의 다른 실시상태는, a) 3D 스캐너를 이용하여, 결손된 연골 부위의 3차원 데이터를 수득하고, 3D 프린터를 이용하여 스캐폴드용 몰드를 제조하는 단계; b) 지방조직 유래 기질혈관분획(adipose tissue derived stromal vascular fraction), 유리연골(hyaline cartilage) 파우더, 및 피브리노겐을 포함하는 제1 액을 이용하여 상기 스캐폴드용 몰드 내에 도포하여 제1 층을 형성하는 단계; c) 트롬빈을 포함하는 제2 액을 상기 제1 층 상에 도포하여 제2 층을 형성하는 단계; 및 d) 상기 제1 층 및 상기 제2 층이 반응하여, 연골 재생용 스캐폴드를 형성하는 단계;를 포함하는, 맞춤형 연골 재생용 스캐폴드의 제조방법을 제공한다.
a) 단계는 당업계에서 알려진 3D 스캐너 장비 및 3D 프린트 장비를 이용할 수 있다. 또한, 상기 스캐폴드용 몰드는 상기 제1 액 및 제2 액의 도포시 입체적 형태를 고정할 수 있도록 하는 역할을 할 수 있다. 상기 스캐폴드용 몰드는 상기 연골 재생용 스캐폴드 형성 후 제거될 수 있다. 상기 스캐폴드용 몰드는 당 업계에서 일반적으로 사용되는 생체 적합성 고분자를 이용하여 형성될 수 있다.
본 발명의 일 실시상태에 따르면, b) 단계 및 c) 단계는 잉크젯 프린팅 또는 3D 프린팅을 이용하여 수행될 수 있다. 구체적으로, b) 단계 및 c) 단계는 당업계에서 알려진 2 이상의 노즐을 가지는 프린팅 장치를 이용할 수 있으며, 각각의 노즐에서 상기 제1 액 및 제2 액을 각각 토출하여 입체 형상을 만들 수 있다.
본 발명의 일 실시상태에 따르면, b) 단계 및 c) 단계는 2회 이상 교대로 반복 수행될 수 있다. 구체적으로, 부피가 큰 연골 재생용 스캐폴드의 형성이 필요한 경우, b) 단계 및 c) 단계가 교대로 수행되어, "제1 층/제2 층/제1 층/제2 층"과 같이 적층된 후 응고하여 연골 재생용 스캐폴드가 형성될 수 있다.
본 발명의 일 실시상태에 따르면, d) 단계는 10분 이내에 완료될 수 있으며, 바람직하게는 5분 이내에 완료될 수 있다. 구체적으로, d) 단계는 3분 내지 7분 동안 반응하여 상기 제1 층 및 상기 제2 층이 반응하여, 연골 재생용 스캐폴드를 형성하는 것일 수 있다.
기존의 자가 연골세포 이식술 및 줄기세포 이식술의 경우, 환자의 결손된 연골 영역의 조직을 추출하기 위하여 환부를 1차 절개한 후, 상기 조직의 배양 과정을 거쳐 환부에 이식하기 위한 2차 절개가 필요하여 2번의 수술과정이 필요한 문제가 있었다. 이에 반하여, 상기 맞춤형 연골 재생용 스캐폴드의 제조방법은 1차 절개를 통하여 결손된 연골 영역을 확인한 후, 단시간 내에 결손된 연골 영역에 대응하는 스캐폴드를 제조하여 결손된 연골 영역에 이식할 수 있는 장점이 있다. 즉, 본 발명에 따른 맞춤형 연골 재생용 스캐폴드의 제조방법은 1회의 절개만으로 환부에 맞춤형 스캐폴드를 이식할 수 있는 장점이 있다.
본 발명의 또 다른 실시상태는, 상기 제조방법을 이용하여 제조된, 맞춤형 연골 재생용 스캐폴드를 제공한다.
상기 맞춤형 연골 재생용 스캐폴드는 전술한 바와 같이, 단시간 내에 결손된 연골 영역에 대응하는 형상으로 제조되어 이식될 수 있다. 상기 맞춤형 연골 재생용 스캐폴드는 세포를 위한 배양과정을 필요로 하지 않으며, 이식 후 상기 스캐폴드 내의 지방조직 유래 기질혈관분획은 연골 세포로 분화되며, 유리연골 파우더는 연골의 재생을 활성화시키고, 재생된 연골 세포의 생존율을 높일 수 있다.
상기 맞춤형 연골 재생용 스캐폴드는 환부에 이식되는 경우, 상기 유리연골 파우더로부터 분비되는 초자연골(유리연골) 성장 인자 및 단백질에 의하여 연골(구체적으로는 무릎 연골) 본연의 초자연골이 재생되도록 유도할 수 있다. 이를 통하여, 상기 맞춤형 연골 재생용 스캐폴드가 환부에 적용되는 경우, 효과적으로 기존의 연골과 동일 또는 유사한 상태로 회복이 될 수 있다.
이하, 본 발명을 구체적으로 설명하기 위해 실시예를 들어 상세하게 설명하기로 한다. 그러나, 본 발명에 따른 실시예들은 여러 가지 다른 형태로 변형될 수 있으며, 본 발명의 범위가 아래에서 기술하는 실시예들에 한정되는 것으로 해석되지 않는다. 본 명세서의 실시예들은 당업계에서 평균적인 지식을 가진 자에게 본 발명을 보다 완전하게 설명하기 위해 제공되는 것이다.
지방조직 유래 기질혈관분획(SVF) 세포의 분리
지방조직 유래 기질혈관 분획(SVF) 세포는 하기 단계를 통하여 수득하였다.
1. 무균 수술실에서 의사의 주도하에 지방흡입술을 실시하여 약 60 cc의 지방 조직을 추출하고, 이와 동일한 양으로 0.075 %의 콜라게나아제 지질 파지(collagenase Lipid phage)를 첨가하고, 이를 37 ℃의 온도에서 230 rpm의 Shaking incubation으로 30 분 동안 반응시켰다.
2. 상기와 같이 반응 후, 420 g의 반응물을 25 ℃에서 10분간 원심분리를 하였으며, 원심 분리 결과 SVF 펠렛층, 콜라게나아제층 및 오일층의 3층으로 구분되었다.
3. SVF 펠렛층을 제외한 상부액을 제거하고, SVF 펠렛층을 PBS(Phosphate Buffered Saline)로 재현탁한 후, 100 ㎛ 의 나일론 필터(Cell strainer)를 이용하여 재현탁한 SVF층의 섬유질과 남아있는 불순물을 제거하였다.
4. 필터링된 SVF를 포함하는 용액을 재현탁하며 3회 원심분리를 한 후, 최하층의 펠렛만 남기고 제거한 후, Cell counter를 이용하여 nucleus cell을 계산한 결과, 105 개 내지 107 개의 SVF가 수득된 것을 확인할 수 있었다.
유리연골 파우더의 제조
유리연골 파우더는 시중에서 입수할 수 있는 갈비 연골(Costal cartilage)을 이용하여, 30 ㎛ 내지 300 ㎛ 입자 사이즈를 가지는 파우더로 제조하였다. 이하, 상기 유리연골 파우더는 MCCM(micronized costal cartilage matrix)로 지칭한다.
실험예 1 - 연골 형성 분화(Chondrogenesis Differentiation) 여부의 확인을 위한 펠렛 제조 (In vitro 실험)
[실시예 1 내지 실시예 3]
도 1은 연골 분화 능력을 확인하기 위한 펠렛의 제조 과정을 도시하였다. 구체적으로, 연골 분화 능력을 확인하기 위한 실험은 하기와 같이 실시하였다.
1. 상기 수득된 SVF(105 개 내지 107 개)를 상기 제조된 유리연골 파우더(MCCM) 10 ㎎(실시예 1), 50 ㎎(실시예 2) 및 100 ㎎(실시예 3)가 분산된 생리 식염수와 혼합하였다.
2. 상기 혼합액을 4 ℃에서 5 분간 1000 rpm으로 원심분리한 후, 생리 식염수 상층액을 제거하여 MCCM/SVF 혼합물을 수득하였다.
3. MCCM/SVF 혼합물을 피브리노겐이 혼합된 아프로티닌액 1 ㎖와 혼합 주사기(mix syringe)를 이용해서 혼합하였다.
4. MCCM/SVF/피브리노겐 용액 1 ㎖와 트롬빈이 분산된 염화칼슘 용액 1 ㎖를 각각 Y자 피스에 연결하고, 15 ㎖ 원뿔형 튜브(conical tube)에 각각 200 μl씩 분주하여, 상온에서 5분 동안 굳혀 펠렛을 형성하였다.
5. 펠렛이 충분히 잠길 정도로 생장인자 유리 배지(Growth factor free media)를 일주일에 3회 교체 투여하고, 37 ℃, 5% CO2의 조건에서 5 주간 인큐베이팅한 후, 사프라닌 O 염색을 실시하여 연골 형성 분화를 확인하였다.
[비교예 1]
MCCM 없이 SVF만을 피브리노겐이 혼합된 아프로티닌액과 혼합(MCCM 0 ㎎, 비교예 1)하여, 상기와 같은 방법으로 펠렛을 형성하고 인큐베이팅한 후, 사프라닌 O 염색을 실시하여 연골 형성 분화를 확인하였다.
도 2 내지 도 5는 각각 비교예 1(MCCM 0 ㎎), 은 실시예 1(MCCM 10 ㎎), 실시예 2(MCCM 50 ㎎), 및 실시예 3(MCCM 100 ㎎)에 따른 펠렛에 사프라닌 O 염색을 한 결과를 나타낸 것이다. 도 2 내지 도 5에 있어서, 사프라닌 O 염색에 따라 연골 부분 및 MCCM은 붉은색으로 염색이 되었으며, 실시예 1 내지 3의 MCCM 주변에 연골 세포의 핵이 관찰되는 것을 확인할 수 있었으며, 다수의 살아있는 연골 세포가 존재하고 있는 것을 확인할 수 있었다. 다만, MCCM을 사용하지 않은 비교예 1의 경우에는 연골 세포가 분화된 것을 확인할 수 없었다. 상기 결과를 통하여, MCCM의 단백질 및 생장인자 등이 방출되며 SVF의 연골 세포로의 분화를 유도한 것으로 유추될 수 있다. 나아가, MCCM의 함량과 관련하여, 실시예 1(MCCM 10 ㎎)이 실시예 2 및 실시예 3에 비하여, 연골 세포의 생존성 및 연골 세포로의 분화가 가장 활발히 이루어진 것을 확인할 수 있었다. 즉, MCCM의 함량이 지나치게 많은 경우, 연골 세포로 분화할 수 있는 공간이 적어지기 때문에 연골 세포로의 분화가 더디게 되는 것으로 판단된다.
실험예 2 - 연골 재생(Cartilage Regeneration) 여부의 확인을 위한 동물 실험(In vivo 실험)
[실시예 4]
도 6은 연골 재생 여부의 확인을 위한 동물 실험 과정을 도시하였다. 구체적으로, 연골 재생 여부의 확인을 위한 동물 실험은 하기와 같이 진행되었다.
1. 상기 수득된 SVF(105 개 내지 107 개)를 상기 제조된 유리연골 파우더(MCCM) 10 ㎎이 분산된 생리 식염수와 혼합하였다.
2. 상기 혼합액을 4 ℃에서 5 분간 1000 rpm으로 원심분리한 후, 생리 식염수 상층액을 제거하여 MCCM/SVF 혼합물을 수득하였다.
3. MCCM/SVF 혼합물을 피브리노겐이 혼합된 아프로티닌액 1 ㎖와 혼합 주사기(mix syringe)를 이용해서 혼합하였다.
4. MCCM/SVF/피브리노겐 용액 1 ㎖와 트롬빈이 분산된 염화칼슘 용액 1 ㎖를 각각 준비하였다.
5. 실험용 비글의 무릎 대퇴부 관절구를 노출시키고, 여기에 지름 약 6 ㎜, 깊이 약 2 ㎜ 크기의 결함(defect) 영역을 형성하였다.
6. 스캐폴드용 몰드를 제조하기 위하여, 3D 스캐너를 이용하여 실험용 비글의 결손된 연골 부위의 3차원 데이터를 수득하고, 이를 기초로 3D Bio 3D 프린터(INVIVO, ROKIT)를 사용하여 의료 등급의 PCL(polycaprolactone) 외벽을 출력하였다. 나아가, MCCM/SVF/피브리노겐 용액과 트롬빈이 분산된 염화칼슘 용액을 각각 3D Bio 3D 프린터(INVIVO, ROKIT)를 이용하여 상기 스캐폴드용 몰드 내에 순차적으로 도포한 후 5분 간 굳혀 맞춤형 연골 재생용 스캐폴드를 제조하였다.
7. 실험용 비글의 결함 영역에 피브린 글루(베리플라스트)를 100 μl를 주입하고, 제조된 맞춤형 연골 재생용 스캐폴드를 이식한 후 수술 부위를 봉합하였다.
8. 6주 후, 이식된 맞춤형 연골 재생용 스캐폴드 내에 연골 세포가 형성되는지 확인하였다.
[비교예 2]
MCCM 없이 SVF만을 피브리노겐이 혼합된 아프로티닌액과 혼합하여, 상기와 같은 방법으로 동물 실험을 진행하였다.
도 7 및 도 8은 각각 실험예 2에 따른 실시예 4 및 비교예 2의 동물 실험 과정 중의 이미지 및 스캐폴드 이식 후 6 주 후의 결함 영역에 대한 마이크로 CT 촬영 이미지를 나타내었다. 도 7 및 8에 있어서, 실시예 4에 따른 마이크로 CT 촬영 결과는 비교예 2에 따른 마이크로 CT 촬영 결과에 비하여 매우 높은 골밀도를 나타내는 것을 확인할 수 있다. 이를 통하여, MCCM을 이용한 실시예 4의 경우 높은 연골 생성 능력이 있음을 확인할 수 있다.
도 9 및 도 10은 각각 실험예 2에 따른 비교예 2 및 실시예 4의 이식 후 6 주 후의 결함 영역에 대하여, 사프라닌 O 염색한 결과를 나타낸 것이다. 사프라닌 O 염색 결과, 실시예 4의 경우만이 결함 영역의 연골이 재생되는 것을 확인할 수 있었다. 이는 도 10의 화살표 표시된 부분의 붉게 발현된 볼륨이 생긴 부분으로 확인할 수 있다. 나아가, 도 9에서의 붉게 발현된 부분은 결함 영역을 제작했을 때 정상 연골이 남아있는 부분에 불과한 영역이다.
도 11 및 도 12는 각각 실험예 2에 따른 비교예 2 및 실시예 4의 이식 후 6 주 후의 결함 영역에서의 연골 재생이 어떠한 종류의 연골로 재생이 되는지 확인하기 위하여, 1형 콜라겐(Collagen type 1)으로 면역 화학 염색(Immunohistochemistry, IHC) 처리한 결과를 나타낸 것이다. 상기 1형 콜라겐은 섬유 연골(fibro-cartilage)의 확인을 위한 항체(antibody)가 결합된 것으로서, 섬유 연골만을 검출하여 갈색으로 발현시키는 역할을 한다. 도 12에 따르면, 결함 영역에서 재생된 부분이 푸른색으로 발현되는 것을 확인할 수 있으며, 이는 재생된 연골이 섬유 연골이 아닌 유리연골로서 결함 영역에 적합한 연골 세포로 재생된 것임을 알 수 있다. 이에 반하여, 도 11의 경우 유리연골로 분화된 영역을 확인할 수 없었다.
도 13 및 도 14는 각각 실험예 2에 따른 비교예 2 및 실시예 4의 이식 후 6 주 후의 결함 영역에서의 연골 재생이 어떠한 종류의 연골로 재생이 되는지 확인하기 위하여, 2형 콜라겐(Collagen type 2)으로 면역 화학 염색(Immunohistochemistry, IHC) 처리한 결과를 나타낸 것이다. 상기 2형 콜라겐은 유리연골(hyaline cartilage)의 확인을 위한 항체(antibody)가 결합된 것으로서, 유리연골만을 검출하여 갈색으로 발현시키는 역할을 한다. 도 14에 따르면, 결함 영역에서 재생된 부분이 갈색으로 발현되는 것을 확인할 수 있으며, 이는 재생된 연골이 섬유 연골이 아닌 유리연골로서 결함 영역에 적합한 연골 세포로 재생된 것임을 알 수 있다. 이에 반하여, 도 13의 경우 유리연골로 분화된 영역을 확인할 수 없었다.
상기 실시예 및 비교예의 결과를 통하여, 실시예와 같이 지방조직 유래 기질혈관분획과 유리연골 파우더를 동시에 사용한 본 발명에 따른 맞춤형 연골 재생용 스캐폴드를 이식하는 경우, 연골 세포로의 분화가 효과적으로 이루어지고, 나아가 연골 세포의 확산 및 재생이 향상되는 것을 확인할 수 있다.

Claims (14)

  1. 지방조직 유래 기질혈관분획(adipose tissue derived stromal vascular fraction), 유리연골(hyaline cartilage) 파우더, 및 피브리노겐을 포함하는 제1 액 및
    트롬빈을 포함하는 제2 액을 포함하는, 연골 재생용 바이오 잉크 조성물.
  2. 청구항 1에 있어서,
    상기 지방 조직 유래 기질혈관분획의 함량은 1 ㎖의 제1 액 당 105 개 내지 107 개인 것을 특징으로 하는, 연골 재생용 바이오 잉크 조성물.
  3. 청구항 1에 있어서,
    상기 유리연골 파우더의 농도는 0.005 %(w/v) 내지 0.1 %(w/v)인 것을 특징으로 하는, 연골 재생용 바이오 잉크 조성물.
  4. 청구항 1에 있어서,
    상기 제1 액은 아프로티닌을 더 포함하는 것을 특징으로 하는, 연골 재생용 바이오 잉크 조성물.
  5. 청구항 1에 있어서,
    상기 제2 액은 염화칼슘 용액 내에 트롬빈이 분산된 것을 특징으로 하는, 연골 재생용 바이오 잉크 조성물.
  6. 청구항 1에 있어서,
    상기 지방 조직 유래 기질혈관분획은 자가 유래 지방 조직으로부터 추출된 것을 특징으로 하는, 연골 재생용 바이오 잉크 조성물.
  7. 청구항 1에 있어서,
    상기 유리연골 파우더는 동종의 유리연골로부터 유래된 것을 특징으로 하는, 연골 재생용 바이오 잉크 조성물.
  8. 청구항 1에 있어서,
    상기 유리연골 파우더의 입경은 30 ㎛ 이상 300 ㎛ 이하인 것을 특징으로 하는, 연골 재생용 바이오 잉크 조성물.
  9. 청구항 1에 있어서,
    상기 유리연골 파우더는 갈비 연골(costal cartilage)로부터 유래된 것을 특징으로 하는, 연골 재생용 바이오 잉크 조성물.
  10. a) 3D 스캐너를 이용하여, 결손된 연골 부위의 3차원 데이터를 수득하고, 3D 프린터를 이용하여 스캐폴드용 몰드를 제조하는 단계;
    b) 지방조직 유래 기질혈관분획(adipose tissue derived stromal vascular fraction), 유리연골(hyaline cartilage) 파우더, 및 피브리노겐을 포함하는 제1 액을 이용하여 상기 스캐폴드용 몰드 내에 도포하여 제1 층을 형성하는 단계;
    c) 트롬빈을 포함하는 제2 액을 상기 제1 층 상에 도포하여 제2 층을 형성하는 단계; 및
    d) 상기 제1 층 및 상기 제2 층이 반응하여, 연골 재생용 스캐폴드를 형성하는 단계;를 포함하는, 맞춤형 연골 재생용 스캐폴드의 제조방법.
  11. 청구항 10에 있어서,
    b) 단계 및 c) 단계는 2회 이상 교대로 반복 수행되는 것을 특징으로 하는, 맞춤형 연골 재생용 스캐폴드의 제조방법.
  12. 청구항 10에 있어서,
    d) 단계는 10분 이내에 완료되는 것을 특징으로 하는, 맞춤형 연골 재생용 스캐폴드의 제조방법.
  13. b) 단계 및 c) 단계는 잉크젯 프린팅 또는 3D 프린팅을 이용하여 수행되는 것을 특징으로 하는, 맞춤형 연골 재생용 스캐폴드의 제조방법.
  14. 청구항 10에 따른 제조방법을 이용하여 제조된, 맞춤형 연골 재생용 스캐폴드.
PCT/KR2018/009707 2018-01-31 2018-08-23 연골 재생용 바이오 잉크 조성물, 이를 이용한 맞춤형 연골 재생용 스캐폴드의 제조방법, 및 상기 제조방법을 이용하여 제조된 맞춤형 연골 재생용 스캐폴드 Ceased WO2019151597A1 (ko)

Priority Applications (14)

Application Number Priority Date Filing Date Title
MX2020008033A MX2020008033A (es) 2018-01-31 2018-08-23 Composición de tinta bilógica para regeneración de cartílago, método de fabricación de armazón personalizado para regeneración de cartílago usando la misma, y armazón personalizado para regeneración de cartílago fabricado con el método de fabricación.
CN201880088344.9A CN111670055B (zh) 2018-01-31 2018-08-23 软骨再生用生物墨水组合物及其应用
US16/966,111 US20210038762A1 (en) 2018-01-31 2018-08-23 Bioink composition for cartilage regeneration, method for manufacturing customized scaffold for cartilage regeneration using same, and customized scaffold for cartilage regeneration manufactured using manufacturing method
SG11202007115QA SG11202007115QA (en) 2018-01-31 2018-08-23 Bioink composition for cartilage regeneration, method for manufacturing customized scaffold for cartilage regeneration using same, and customized scaffold for cartilage regeneration manufactured using manufacturing method
PE2020001139A PE20211241A1 (es) 2018-01-31 2018-08-23 Composicion de tinta biologica para regeneracion de cartilago, metodo de fabricacion de armazon personalizado para regeneracion de cartilago usando la misma, y armazon personalizado para regeneracion de cartilago fabricado con el metodo de fabricacion
BR112020015615-9A BR112020015615B1 (pt) 2018-01-31 2018-08-23 Composição de biotinta para regeneração de cartilagem, método para fabricar arcabouço customizado para regeneração de cartilagem usando a mesma e arcabouço customizado para regeneração de cartilagem fabricado usando o método de fabricação
RU2020124011A RU2793343C2 (ru) 2018-01-31 2018-08-23 Композиция биочернил для восстановления хряща, способ изготовления индивидуализированного каркаса для восстановления хряща с ее применением и индивидуализированный каркас для восстановления хряща, изготовленный с помощью способа изготовления
JP2020541729A JP7105899B2 (ja) 2018-01-31 2018-08-23 軟骨再生用バイオインク組成物、これを用いたオーダーメード型軟骨再生用スキャフォールドの製造方法、および該製造方法を用いて製造されたオーダーメード型軟骨再生用スキャフォールド
EP18903638.7A EP3747477B1 (en) 2018-01-31 2018-08-23 Bioink composition for cartilage regeneration, method for manufacturing customized scaffold for cartilage regeneration using same, and customized scaffold for cartilage regeneration manufactured using manufacturing method
AU2018406738A AU2018406738B2 (en) 2018-01-31 2018-08-23 Bioink composition for cartilage regeneration, method for manufacturing customized scaffold for cartilage regeneration using same, and customized scaffold for cartilage regeneration manufactured using manufacturing method
ES18903638T ES2933951T3 (es) 2018-01-31 2018-08-23 Composición de tinta biológica para la regeneración de cartílagos, método de fabricación de armazón personalizado para regeneración de cartílagos usando la misma y armazón personalizado para regeneración de cartílagos fabricado con el método de fabricación
JOP/2020/0189A JOP20200189A1 (ar) 2018-01-31 2018-08-23 تركيبة حبر حيوي لتجديد غضروف، طريقة لتصنيع بنية متراصة مخصصة لتجديد غضروف باستخدامها، وبنية متراصة مخصصة لتجديد غضروف مصنع باستخدام طريقة التصنيع
SA520412548A SA520412548B1 (ar) 2018-01-31 2020-07-29 تركيبة حبر حيوي لتجديد غضروف، طريقة لتصنيع بنية متراصة مخصصة لتجديد غضروف باستخدامها، وبنية متراصة مخصصة لتجديد غضروف مصنع باستخدام طريقة التصنيع
CONC2020/0009497A CO2020009497A2 (es) 2018-01-31 2020-07-30 Composición de tinta bilógica para regeneración de cartílago, método de fabricación de armazón personalizado para regeneración de cartílago usando la misma, y armazón personalizado para regeneración de cartílago fabricado con el método de fabricación

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR20180012221 2018-01-31
KR10-2018-0012221 2018-01-31

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2019151597A1 true WO2019151597A1 (ko) 2019-08-08

Family

ID=67478349

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/KR2018/009707 Ceased WO2019151597A1 (ko) 2018-01-31 2018-08-23 연골 재생용 바이오 잉크 조성물, 이를 이용한 맞춤형 연골 재생용 스캐폴드의 제조방법, 및 상기 제조방법을 이용하여 제조된 맞춤형 연골 재생용 스캐폴드

Country Status (17)

Country Link
US (1) US20210038762A1 (ko)
EP (1) EP3747477B1 (ko)
JP (1) JP7105899B2 (ko)
KR (2) KR102068176B1 (ko)
CN (1) CN111670055B (ko)
AU (1) AU2018406738B2 (ko)
BR (1) BR112020015615B1 (ko)
CL (1) CL2020002004A1 (ko)
CO (1) CO2020009497A2 (ko)
EC (1) ECSP20045844A (ko)
ES (1) ES2933951T3 (ko)
JO (1) JOP20200189A1 (ko)
MX (1) MX2020008033A (ko)
PE (1) PE20211241A1 (ko)
SA (1) SA520412548B1 (ko)
SG (1) SG11202007115QA (ko)
WO (1) WO2019151597A1 (ko)

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111686306A (zh) * 2020-07-08 2020-09-22 四川大学 一种基于脱细胞肋软骨基质的3d打印生物墨水及其制备方法与应用
CN113710293A (zh) * 2019-03-11 2021-11-26 罗基医疗保健公司 使用冻干透明软骨粉生产软骨再生用组合物的方法、使用该方法生产的软骨再生用组合物、使用软骨再生用组合物生产患者定制的软骨再生用支架的方法和患者定制的软骨再生用支架
CN114080244A (zh) * 2020-03-06 2022-02-22 爱恩斯生物科技(昆山)有限公司 利用基于软骨成分的生物墨水的治疗小耳症目的结构体制造用组合物及其制造方法
JP2023508856A (ja) * 2019-12-18 2023-03-06 グリフォルス・ワールドワイド・オペレーションズ・リミテッド 骨複合体及び同骨複合体を調製するための組成物
AU2019382300B2 (en) * 2019-10-08 2026-03-05 Rokit Healthcare Inc. Method of manufacturing diabetic foot patient-specific dermal regeneration sheet and diabetic foot patient-specific dermal regeneration sheet manufactured using the same

Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP7105899B2 (ja) * 2018-01-31 2022-07-25 ロキット ヘルスケア インク． 軟骨再生用バイオインク組成物、これを用いたオーダーメード型軟骨再生用スキャフォールドの製造方法、および該製造方法を用いて製造されたオーダーメード型軟骨再生用スキャフォールド
WO2021006669A1 (ko) 2019-07-10 2021-01-14 사회복지법인 삼성생명공익재단 연골조직 형성용 바이오잉크 조성물
KR20210087313A (ko) 2020-01-02 2021-07-12 엘지전자 주식회사 스마트게이트
WO2023196787A2 (en) * 2022-04-04 2023-10-12 Vascudyne, Inc. Improved constructed tissue
WO2024243646A1 (en) * 2023-05-31 2024-12-05 The University Of Melbourne Apparatus for use in tissue repair
WO2025038839A1 (en) * 2023-08-16 2025-02-20 Carnegie Mellon University Stabilization of high-density cell bioinks

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20100041027A (ko) * 2008-10-13 2010-04-22 아주대학교산학협력단 동물조직 분말을 이용한 다공성 3차원 지지체의 제조방법 및 이를 이용하여 제조된 다공성 3차원 지지체
KR20130037324A (ko) * 2011-10-06 2013-04-16 주식회사 본셀바이오텍 조직재생용 스캐폴드 제조를 위한 3차원 프린팅 적층용 조성물과 그 제조방법
WO2015048317A1 (en) * 2013-09-25 2015-04-02 The Children's Mercy Hospital Decellularized hyaline cartilage powder for tissue scaffolds
US20160095958A1 (en) * 2013-05-28 2016-04-07 The Johns Hopkins University Bone regeneration using stromal vascular fraction, platelet-derived growth factor-rich hydrogel, three-dimensional printed poly-epsilon-caprolactone scaffolds
KR20170012099A (ko) 2015-07-21 2017-02-02 주식회사 바이오잉크솔루션스 물리적 및 생물학적 특성이 개선된 바이오 잉크 조성물
KR20180012221A (ko) 2016-07-26 2018-02-05 폭스바겐 악티엔 게젤샤프트 적어도 2개의 통신 파트너 사이에서 인증된 접속을 제공하는 방법

Family Cites Families (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4904259A (en) * 1988-04-29 1990-02-27 Samuel Itay Compositions and methods for repair of cartilage and bone
ATE180492T1 (de) * 1991-09-05 1999-06-15 Baxter Int Topischer fibrinogenkomplex
US5792835A (en) * 1991-09-05 1998-08-11 Baxter International Inc. Method of preparing a topical fibrinogen complex
KR100531922B1 (ko) * 2003-12-23 2005-11-29 주식회사 셀론텍 연골치료제 조성물 및 그 사용방법
CN101002964A (zh) * 2006-12-07 2007-07-25 北京赛尔泰和生物医药科技有限公司 一种组织工程复合皮肤材料及其制备方法
CN101574543B (zh) * 2009-06-09 2014-10-29 广州迈普再生医学科技有限公司 一种基于自体细胞的人工关节软骨及其制备方法
KR101114773B1 (ko) * 2009-10-23 2012-03-05 세원셀론텍(주) 연골조직 수복용 조성물의 제조방법
CN103272288B (zh) * 2013-06-24 2014-07-09 谢杨 基于生物打印技术的细胞-生物支架复合物的制备方法
CN105530967B (zh) * 2013-07-18 2018-11-09 柳胜皓 包含软骨的注射移植用身体体积代替材及用于其注入的双针型注射器
RU2559089C1 (ru) * 2014-04-22 2015-08-10 Государственное автономное учреждение здравоохранения "Республиканская клиническая больница Министерства здравоохранения Республики Татарстан" Способ восстановления дефектов гиалинового хряща суставных поверхностей суставов конечностей
EP2998392A1 (en) * 2014-09-16 2016-03-23 The Provost, Fellows, Foundation Scholars, & the other members of Board, of the College of the Holy & Undiv. Trinity of Queen Elizabeth near Dublin A population of cells for use in single-stage cell-based cartilage regeneration
KR101521411B1 (ko) * 2015-02-05 2015-05-19 박재우 뼈 및 연골을 포함한 관절질환 치료용 조성물 및 이의 제조방법
EP3331984B1 (en) * 2015-08-07 2021-09-22 AlloSource Rapid allograft treatment systems and methods
CN107224614A (zh) * 2017-05-11 2017-10-03 黎洪棉 一种富含细胞因子的脂肪源性基质细胞复合移植材料的制备及其临床应用
JP7105899B2 (ja) * 2018-01-31 2022-07-25 ロキット ヘルスケア インク． 軟骨再生用バイオインク組成物、これを用いたオーダーメード型軟骨再生用スキャフォールドの製造方法、および該製造方法を用いて製造されたオーダーメード型軟骨再生用スキャフォールド

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20100041027A (ko) * 2008-10-13 2010-04-22 아주대학교산학협력단 동물조직 분말을 이용한 다공성 3차원 지지체의 제조방법 및 이를 이용하여 제조된 다공성 3차원 지지체
KR20130037324A (ko) * 2011-10-06 2013-04-16 주식회사 본셀바이오텍 조직재생용 스캐폴드 제조를 위한 3차원 프린팅 적층용 조성물과 그 제조방법
US20160095958A1 (en) * 2013-05-28 2016-04-07 The Johns Hopkins University Bone regeneration using stromal vascular fraction, platelet-derived growth factor-rich hydrogel, three-dimensional printed poly-epsilon-caprolactone scaffolds
WO2015048317A1 (en) * 2013-09-25 2015-04-02 The Children's Mercy Hospital Decellularized hyaline cartilage powder for tissue scaffolds
KR20170012099A (ko) 2015-07-21 2017-02-02 주식회사 바이오잉크솔루션스 물리적 및 생물학적 특성이 개선된 바이오 잉크 조성물
KR20180012221A (ko) 2016-07-26 2018-02-05 폭스바겐 악티엔 게젤샤프트 적어도 2개의 통신 파트너 사이에서 인증된 접속을 제공하는 방법

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
MULLER, A.M.ET AL.: "Towards an intraoperative engineering of osteogenic and vasculogenic grafts from the stromal vascular fraction of human adipose tissue", EUROPEAN CELLS AND MATERIALS, vol. 19, 2010, pages 127 - 135, XP055628596 *
See also references of EP3747477A4

Cited By (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113710293A (zh) * 2019-03-11 2021-11-26 罗基医疗保健公司 使用冻干透明软骨粉生产软骨再生用组合物的方法、使用该方法生产的软骨再生用组合物、使用软骨再生用组合物生产患者定制的软骨再生用支架的方法和患者定制的软骨再生用支架
JP2022526240A (ja) * 2019-03-11 2022-05-24 ロキット ヘルスケア インク． 凍結乾燥硝子軟骨パウダーを用いた軟骨再生用組成物の製造方法、これを用いて製造された軟骨再生用組成物、軟骨再生用組成物を用いた患者オーダーメード型軟骨再生用スキャフォールドの製造方法及び患者オーダーメード型軟骨再生用スキャフォールド
JP7319382B2 (ja) 2019-03-11 2023-08-01 ロキット ヘルスケア インク． 凍結乾燥硝子軟骨パウダーを用いた軟骨再生用組成物の製造方法、これを用いて製造された軟骨再生用組成物、軟骨再生用組成物を用いた患者オーダーメード型軟骨再生用スキャフォールドの製造方法及び患者オーダーメード型軟骨再生用スキャフォールド
US12440341B2 (en) 2019-03-11 2025-10-14 Rokit Healthcare Inc. Method for producing composition for regenerating cartilage using lyophilization hyaline cartilage powder, composition for regenerating cartilage produced using the same, method for producing scaffold for regenerating patient-customized cartilage using composition for regenerating cartilage, and scaffold for regenerating patient-customized cartilage
AU2019382300B2 (en) * 2019-10-08 2026-03-05 Rokit Healthcare Inc. Method of manufacturing diabetic foot patient-specific dermal regeneration sheet and diabetic foot patient-specific dermal regeneration sheet manufactured using the same
JP2023508856A (ja) * 2019-12-18 2023-03-06 グリフォルス・ワールドワイド・オペレーションズ・リミテッド 骨複合体及び同骨複合体を調製するための組成物
JP7826202B2 (ja) 2019-12-18 2026-03-09 グリフォルス・ワールドワイド・オペレーションズ・リミテッド 骨複合体及び同骨複合体を調製するための組成物
CN114080244A (zh) * 2020-03-06 2022-02-22 爱恩斯生物科技(昆山)有限公司 利用基于软骨成分的生物墨水的治疗小耳症目的结构体制造用组合物及其制造方法
CN111686306A (zh) * 2020-07-08 2020-09-22 四川大学 一种基于脱细胞肋软骨基质的3d打印生物墨水及其制备方法与应用

Also Published As

Publication number Publication date
EP3747477A4 (en) 2021-10-27
BR112020015615A2 (pt) 2021-01-05
CL2020002004A1 (es) 2020-12-04
ES2933951T3 (es) 2023-02-15
KR20200000421A (ko) 2020-01-02
AU2018406738A1 (en) 2020-08-20
US20210038762A1 (en) 2021-02-11
RU2020124011A3 (ko) 2022-02-28
AU2018406738B2 (en) 2024-10-10
BR112020015615B1 (pt) 2023-04-04
JP7105899B2 (ja) 2022-07-25
CO2020009497A2 (es) 2020-08-21
ECSP20045844A (es) 2021-01-29
CN111670055A (zh) 2020-09-15
KR102491318B1 (ko) 2023-01-25
EP3747477B1 (en) 2022-11-16
PE20211241A1 (es) 2021-07-09
JP2021512681A (ja) 2021-05-20
EP3747477A1 (en) 2020-12-09
CN111670055B (zh) 2023-04-07
SA520412548B1 (ar) 2023-12-05
KR102068176B1 (ko) 2020-01-20
JOP20200189A1 (ar) 2020-07-29
MX2020008033A (es) 2020-09-17
RU2020124011A (ru) 2022-02-28
SG11202007115QA (en) 2020-08-28
KR20190098904A (ko) 2019-08-23

Similar Documents

Publication Publication Date Title
WO2019151597A1 (ko) 연골 재생용 바이오 잉크 조성물, 이를 이용한 맞춤형 연골 재생용 스캐폴드의 제조방법, 및 상기 제조방법을 이용하여 제조된 맞춤형 연골 재생용 스캐폴드
JP6812475B2 (ja) 瘻の治療における脂肪組織由来間質幹細胞の使用
US7887843B2 (en) Method for in vitro production of three-dimensional vital cartilage tissue and use thereof as transplant material
CN112218942A (zh) 从人诱导多能干细胞制备软骨细胞颗粒的方法及其用途
WO2011037416A2 (ko) 세포이식술을 위한 혼합세포복합체인 세포스페로이드의 제조방법 및 이의 이용방법
WO2020184974A1 (ko) 동결건조 유리연골 파우더를 이용한 연골 재생용 조성물의 제조방법, 이를 이용하여 제조된 연골 재생용 조성물, 연골 재생용 조성물을 이용한 환자 맞춤형 연골 재생용 스캐폴드의 제조방법 및 환자 맞춤형 연골 재생용 스캐폴드
RU2793343C2 (ru) Композиция биочернил для восстановления хряща, способ изготовления индивидуализированного каркаса для восстановления хряща с ее применением и индивидуализированный каркас для восстановления хряща, изготовленный с помощью способа изготовления
US20210196760A1 (en) Pharmaceutical composition for treating cartilage damage, comprising nasal septum chondrocytes
WO2018139869A1 (ko) 골재생용 세포 치료제 및 이것의 제조 방법
WO2019004794A1 (ko) 골관절염 예방 또는 치료용 약학적 조성물
Liu et al. Dental pulp stem cells-derived cannabidiol-pretreated micro-spheroids showed robust osteogenic potential via upregulation of WNT6
WO2020036465A1 (ko) 코중격 연골세포를 포함하는 연골손상 치료용 약학적 조성물
US20200237828A1 (en) Pluripotent stem cells inducing osteochondral repair
HK1239731B (en) Use of adipose tissue-derived stromal stem cells in treating fistula
MX2008000001A (en) Use of adipose tissue-derived stromal stem cells in treating fistula
HK1180253A (en) Methods for complex tissue engineering

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 18903638

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 139950140003003994

Country of ref document: IR

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2020541729

Country of ref document: JP

Kind code of ref document: A

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: NC2020/0009497

Country of ref document: CO

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2018406738

Country of ref document: AU

Date of ref document: 20180823

Kind code of ref document: A

WWP Wipo information: published in national office

Ref document number: NC2020/0009497

Country of ref document: CO

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2020124011

Country of ref document: RU

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2018903638

Country of ref document: EP

Effective date: 20200831

REG Reference to national code

Ref country code: BR

Ref legal event code: B01A

Ref document number: 112020015615

Country of ref document: BR

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 112020015615

Country of ref document: BR

Kind code of ref document: A2

Effective date: 20200730

WWG Wipo information: grant in national office

Ref document number: NC2020/0009497

Country of ref document: CO

WWG Wipo information: grant in national office

Ref document number: 520412548

Country of ref document: SA

WWG Wipo information: grant in national office

Ref document number: MX/A/2020/008033

Country of ref document: MX