WO2020003905A1 - インターロイキン－６、１０産生促進剤 - Google Patents

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淳平 吉田
建史 白井
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Definitions

  • the present invention relates to interleukin-6, 10 production.
  • the immune system attacks the invading pathogens in the body, such as phagocytosis by phagocytic cells such as neutrophils and macrophages (innate immune system), and release of cytotoxic substances such as perforin of cytotoxic T cells. Destruction, inactivation of pathogens by antibodies produced by B cells (adaptive immune system), and the like. Cytokines play an important role in the activation and function suppression of cells related to the immune system, and one of them is interleukin secreted by leukocytes. A plurality of interleukins have been identified so far. Among them, interleukin-6 (IL-6) is known to have an action such as induction of an acute response by stimulating macrophages. In addition, it is known that interleukin-10 (IL-10) is mainly produced by type 2 helper T cells (Th2) and acts to suppress an inflammatory reaction.
  • Th2 type 2 helper T cells
  • Non-Patent Document 1 an immunostimulatory effect has been reported for ⁇ -glucan obtained by hydrolyzing or enzymatically treating yeast cell walls and then purifying by centrifugation.
  • An object of the present invention is to provide a novel technique capable of promoting the production of interleukin-6.
  • Another object of the present invention is to provide a novel technique capable of promoting the production of interleukin-10.
  • the gist of the present invention is as follows. [1] An interleukin-6 production promoter comprising an unpurified yeast cell wall hydrolyzate. [2] The yeast cell wall hydrolyzate is a yeast cell wall hydrolyzate obtained by adjusting the pH of the yeast cell wall to 8.0 to 14.0 and hydrolyzing at 60 to 120 ° C. for 3 to 24 hours. The interleukin-6 production promoter according to [1]. [3] An interleukin-10 production promoter comprising an unpurified yeast cell wall hydrolyzate. [4] The yeast cell wall hydrolyzate is a yeast cell wall hydrolyzate obtained by adjusting the pH of the yeast cell wall to 8.0 to 14.0 and hydrolyzing at 60 to 120 ° C. for 3 to 24 hours.
  • the interleukin-10 production promoter according to [3].
  • [5] Use of a crude yeast cell wall hydrolyzate for preparing a composition that promotes interleukin-6 production.
  • the yeast cell wall hydrolyzate is a yeast cell wall hydrolyzate obtained by adjusting the pH of the yeast cell wall to 8.0 to 14.0 and hydrolyzing at 60 to 120 ° C. for 3 to 24 hours. Use according to [5].
  • [7] Use of an unpurified yeast cell wall hydrolyzate for preparing a composition that promotes the production of interleukin-10.
  • the yeast cell wall hydrolyzate is a yeast cell wall hydrolyzate obtained by adjusting the pH of the yeast cell wall to 8.0 to 14.0 and hydrolyzing at 60 to 120 ° C.
  • Non-therapeutic use of a yeast cell wall hydrolyzate for promoting the production of interleukin-6 is a yeast cell wall hydrolyzate obtained by adjusting the pH of the yeast cell wall to 8.0 to 14.0 and hydrolyzing at 60 to 120 ° C. for 3 to 24 hours. Use according to [10].
  • the yeast cell wall hydrolyzate is a yeast cell wall hydrolyzate obtained by adjusting the pH of the yeast cell wall to 8.0 to 14.0 and hydrolyzing at 60 to 120 ° C. for 3 to 24 hours. Use according to [12].
  • a method for promoting the production of interleukin-6 in a subject comprising ingesting the unpurified yeast cell wall hydrolyzate into the subject.
  • the yeast cell wall hydrolyzate is a yeast cell wall hydrolyzate obtained by adjusting the pH of the yeast cell wall to 8.0 to 14.0 and hydrolyzing at 60 to 120 ° C. for 3 to 24 hours. The method according to [14].
  • yeast cell wall hydrolyzate is a yeast cell wall hydrolyzate obtained by adjusting the pH of the yeast cell wall to 8.0 to 14.0 and hydrolyzing at 60 to 120 ° C. for 3 to 24 hours. The method according to [16].
  • a novel technique capable of promoting the production of interleukin-6 can be provided. Further, according to the present invention, a novel technique capable of promoting the production of interleukin-10 can be provided.
  • IL-6 interleukin-6
  • IL-10 interleukin-10
  • the unpurified yeast cell wall hydrolyzate can be obtained by subjecting the yeast cell wall to a hydrolysis treatment.
  • the yeast cell wall may be a commercially available product, or may be prepared from yeast cells.
  • the method for obtaining the yeast cell wall from the yeast cells is not particularly limited, and for example, it can be obtained from the yeast cells by a known method. Specifically, the yeast cells are heated to 45 to 65 ° C. and autolyzed for 5 to 20 hours, and then the supernatant is removed by a centrifuge, or the yeast cells are heated to 80 ° C. or higher. A method of removing the supernatant by centrifugation as it is after sterilization, a method of adding an enzyme, removing the supernatant by centrifugation after the reaction, and the like can be mentioned.
  • the yeast from which the yeast cell wall is derived is not particularly limited, and can be appropriately set by those skilled in the art.
  • food-grade yeasts such as those belonging to the genus Saccharomyces, the genus Kluyveromyces, the genus Cluyveromyces, the genus Candida, the genus Pichia, and the genus Torulopsis (Bekatorou et al, 2006, Food Technol. Biotechnol. 44 (3), 407-415).
  • yeast belonging to the genus Saccharomyces such as brewer's yeast, is preferable from the viewpoint of further promoting the production of IL-6 and IL-10.
  • yeast yeast cell wall hydrolysates may be used. It may be used for preparation.
  • brewer's yeast for example, a muddy brewer's yeast, a pressed brewer's yeast, a dried brewer's yeast, a brewer's yeast suspension or the like obtained from yeast cell walls can be mentioned.
  • the method for hydrolyzing the yeast cell wall is also not particularly limited, and can be appropriately set by those skilled in the art.
  • the pH of the yeast cell wall is adjusted to 8.0 to 14.0 (more preferably 10.0 to 12.0), Hydrolysis at 120 to 120 ° C (more preferably 85 to 95 ° C) for 3 to 24 hours (more preferably 12 to 20 hours) can be mentioned.
  • stirring may or may not be performed.
  • the yeast cell wall to be subjected to hydrolysis may be subjected to washing treatment or the like under alkaline conditions, if necessary, before the hydrolysis treatment.
  • IL production promoters include, for example, unpurified yeast cell wall hydrolysates that can be obtained as described above.
  • the term “unpurified” refers to a state in which a step for increasing the purity of a specific component in the yeast cell wall such as ⁇ -glucan or mannan has not been performed.
  • a step aimed at increasing the purity of a specific component in the yeast cell wall for example, centrifugation and filtration, distillation, recrystallization, extraction, sublimation performed on the yeast cell wall hydrolyzate obtained as described above , Chromatography, isoelectric point precipitation separation, ethanol precipitation separation, salting out and the like.
  • a process not aimed at increasing the purity of a specific component in the yeast cell wall for example, a process aimed at removing foreign substances to ensure the quality of food and drink, etc. Not included.
  • a person skilled in the art can determine whether or not the step is a step for increasing the purity of a specific component in the yeast cell wall hydrolyzate based on equipment used in the step, processing conditions, and the like.
  • the IL production promoter may contain other components in addition to the unpurified yeast cell wall hydrolyzate as long as the object of the present invention can be achieved.
  • the form (formulation) of the IL production promoter is not particularly limited, and it can be produced as a drug, a quasi-drug, a food or drink, or the like.
  • unpurified yeast cell wall degraded product and, for example, excipients, binders, stabilizers, disintegrants, lubricants, flavoring agents, suspensions
  • An agent, a coating agent, and other optional components can be appropriately mixed and formulated.
  • the dosage form can be tablets, pills, capsules, granules, powders, powders, syrups and the like, and it is desirable to administer these orally.
  • the IL production promoting agent when produced in the form of a food or drink, it may be a normal food or drink, a special-purpose food such as a food for specified health use, a nutritionally functional food, or the like.
  • foods and drinks include, for example, dietary supplements (supplements), milk, processed milk, milk drinks, soft drinks, fermented milk, yogurt, cheese, bread, biscuits, crackers, pizza crust, ice cream, candy, gummy , Gums, prepared milk powders, liquid foods, foods for the sick, foods such as infant milk powders, foods such as nursing milk powders, and the like.
  • the IL production promoter is not limited to drugs, quasi-drugs, and foods and drinks intended for humans, and may be in the form of drugs or feeds for animals other than humans.
  • non-human animals include non-human higher vertebrates, especially non-human mammals, and more specifically, domestic animals such as dogs, cats and other pets, cows, horses, pigs, sheep, and the like. be able to.
  • birds and fish can also be mentioned, and more specifically, farmed fish such as meat chicken, laying hen, turkey, salmon, carp, crucian carp, tilapia, catfish, sea bass, yellowtail, amberjack, flounder, Thailand, tuna, etc. Can be exemplified.
  • invertebrates such as shrimp and crab can also be mentioned.
  • the daily intake of the IL production promoter is also not particularly limited.
  • 0.01 to 100 g, preferably 0.1 to 10 g of unpurified yeast cell wall hydrolyzate can be taken. What is necessary is just to adjust a compounding quantity etc.
  • the content ratio of the unpurified yeast cell wall hydrolyzate in the IL production promoter is not particularly limited, and may be appropriately adjusted according to the ease of production, the preferable daily dose, and the like.
  • the unpurified yeast cell wall hydrolyzate and the like according to the present embodiment the mode of ingestion is not particularly limited, for example, a drug containing the unpurified yeast cell wall hydrolyzate, a quasi-drug, By ingesting it in the form of food or the like, production of IL-6 and IL-10 can be promoted.
  • the mode of ingestion is not particularly limited, for example, a drug containing the unpurified yeast cell wall hydrolyzate, a quasi-drug, By ingesting it in the form of food or the like, production of IL-6 and IL-10 can be promoted.
  • the activation of the immune function will alleviate the symptoms of infectious diseases.
  • yeast cell wall degradation product (Example) A yeast cell wall (solid content: 10%) derived from brewer's yeast belonging to the genus Saccharomyces manufactured at Asahi Group Foods Co., Ltd. Tochigi Koganei Plant was subjected to a hydrolysis treatment. Specifically, the yeast cell wall was adjusted to pH 11 with sodium hydroxide, heated to 90 ° C., and treated for 18 hours. This was dried with a drum dryer to obtain a yeast cell wall hydrolyzate (hereinafter, HYCW).
  • HYCW yeast cell wall hydrolyzate
  • a ⁇ -glucan fraction and a mannan fraction can be separated.
  • the dried precipitate was YG and the ⁇ -glucan purity was increased to about 33%, and the dried supernatant was YM and the ⁇ -glucan purity was about 1%, which was almost not contained.
  • IL-6 and IL-10 production amount were measured (Sonck et al, 2010, Veterinary Immunology and Immunopathology 135, 199-207). Peripheral blood was collected into heparin tubes from the jugular vein of five 14-week-old weaned piglets. Then, using Lymphoprep, density gradient centrifugation was performed under the conditions of 800 ⁇ g, 18 ° C., and 25 minutes to obtain peripheral blood mononuclear cells (PBMC). After lysing erythrocytes with ammonium chloride and centrifuging at 350 ⁇ g at 18 ° C.
  • PBMC peripheral blood mononuclear cells
  • PBMC Peripheral blood mononuclear cells
  • PBMC peripheral blood mononuclear cells
  • FIGS. As can be understood from FIGS. 2 and 3, it can be understood that the production amount of IL-6 and IL-10 is significantly increased by the stimulation by HYCW as compared with the case of YG and YM.

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Abstract

【課題】インターロイキン－６の産生を促進することができる新規な技術を提供する。また、インターロイキン－１０の産生を促進することができる新規な技術を提供する。 【解決手段】未精製である酵母細胞壁加水分解物を含むインターロイキン－６産生促進剤、および未精製である酵母細胞壁加水分解物を含むインターロイキン－１０産生促進剤。

Description

インターロイキン－６、１０産生促進剤
　本発明はインターロイキン－６、１０産生に関する。
　体内に浸入した病原体等に対する免疫系の攻撃として、好中球やマクロファージなどの貪食細胞による貪食作用（自然免疫系）、細胞傷害性Ｔ細胞のパーフォリン等の細胞傷害性物質の放出による宿主細胞の破壊、Ｂ細胞により産生された抗体による病原体の不活化（適応免疫系）などがある。
　免疫系に係る細胞の活性化や機能抑制にはサイトカインが重要な役割を果たしており、そのうちの一つとして、白血球により分泌されるインターロイキンが挙げられる。
　インターロイキンはこれまで複数同定されており、このうち、インターロイキン－６（ＩＬ－６）はマクロファージを刺激しての急性反応誘導などの作用が知られている。また、インターロイキン－１０（ＩＬ－１０）については主に２型ヘルパーＴ細胞（Ｔｈ２）により産生され、炎症反応の抑制などに作用することが知られている。
　一方、酵母細胞壁を加水分解または酵素処理した後、遠心分離によって精製することにより得られるβ－グルカンについて、免疫賦活効果が報告されている（非特許文献１）。
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/?term=Triggering+dectin1+pathway+alone+is+not+sufficient
　本発明は、インターロイキン－６の産生を促進することができる新規な技術を提供することを目的とする。また、本発明はインターロイキン－１０の産生を促進することができる新規な技術を提供することを目的とする。
　本発明者は鋭意研究の結果、未精製の状態である酵母細胞壁の加水分解物が精製物と比較して、インターロイキン－６やインターロイキン－１０の産生を促進することができることを見出し、本発明を完成させた。
　本発明の要旨は以下のとおりである。
［１］　未精製である酵母細胞壁加水分解物を含む、インターロイキン－６産生促進剤。
［２］　前記酵母細胞壁加水分解物が、酵母細胞壁のｐＨを８．０～１４．０に調整し、６０～１２０℃で３～２４時間加水分解することにより得られる酵母細胞壁加水分解物である［１］に記載のインターロイキン－６産生促進剤。
［３］　未精製である酵母細胞壁加水分解物を含む、インターロイキン－１０産生促進剤。
［４］　前記酵母細胞壁加水分解物が、酵母細胞壁のｐＨを８．０～１４．０に調整し、６０～１２０℃で３～２４時間加水分解することにより得られる酵母細胞壁加水分解物である［３］に記載のインターロイキン－１０産生促進剤。
［５］　インターロイキン－６の産生を促進する組成物を調製するための未精製である酵母細胞壁加水分解物の使用。
［６］　前記酵母細胞壁加水分解物が、酵母細胞壁のｐＨを８．０～１４．０に調整し、６０～１２０℃で３～２４時間加水分解することにより得られる酵母細胞壁加水分解物である［５］に記載の使用。
［７］　インターロイキン－１０の産生を促進する組成物を調製するための未精製である酵母細胞壁加水分解物の使用。
［８］　前記酵母細胞壁加水分解物が、酵母細胞壁のｐＨを８．０～１４．０に調整し、６０～１２０℃で３～２４時間加水分解することにより得られる酵母細胞壁加水分解物である［７］に記載の使用。
［９］　前記組成物が食品組成物または医薬組成物である［５］から[８]のいずれか一つに記載の使用。
［１０］　インターロイキン－６の産生を促進するための酵母細胞壁加水分解物の非治療的使用。
［１１］　前記酵母細胞壁加水分解物が、酵母細胞壁のｐＨを８．０～１４．０に調整し、６０～１２０℃で３～２４時間加水分解することにより得られる酵母細胞壁加水分解物である［１０］に記載の使用。
［１２］　インターロイキン－１０の産生を促進するための未精製である酵母細胞壁加水分解物の非治療的使用。
［１３］　前記酵母細胞壁加水分解物が、酵母細胞壁のｐＨを８．０～１４．０に調整し、６０～１２０℃で３～２４時間加水分解することにより得られる酵母細胞壁加水分解物である［１２］に記載の使用。
［１４］　未精製である酵母細胞壁加水分解物を対象に摂取させることを含む、対象におけるインターロイキン－６の産生を促進する方法。
［１５］　前記酵母細胞壁加水分解物が、酵母細胞壁のｐＨを８．０～１４．０に調整し、６０～１２０℃で３～２４時間加水分解することにより得られる酵母細胞壁加水分解物である［１４］に記載の方法。
［１６］　未精製である酵母細胞壁加水分解物を対象に摂取させることを含む、対象におけるインターロイキン－１０の産生を促進する方法。
［１７］　前記酵母細胞壁加水分解物が、酵母細胞壁のｐＨを８．０～１４．０に調整し、６０～１２０℃で３～２４時間加水分解することにより得られる酵母細胞壁加水分解物である［１６］に記載の方法。
　本発明によれば、インターロイキン－６の産生を促進することができる新規な技術を提供することができる。また、本発明によれば、インターロイキン－１０の産生を促進することができる新規な技術を提供することができる。
実施例のβ－グルカンの純度に係るグラフである。 実施例のＩＬ－６産生量に係るグラフである。 実施例のＩＬ－１０産生量に係るグラフである。
　本発明の一つの態様はインターロイキン－６（ＩＬ－６）の産生促進剤に関する。また、本発明の他の態様はインターロイキン－１０（ＩＬ－１０）の産生促進剤に関する。これらを本明細書においてはＩＬ産生促進剤と総称し、共通する一つの実施形態について以下、詳細に説明する。
　ＩＬ産生促進剤は、未精製である酵母細胞壁加水分解物を含有する。
　未精製である酵母細胞壁加水分解物は、酵母細胞壁を加水分解処理に供することにより得ることができる。酵母細胞壁は市販品を用いるようにしてもよいほか、酵母菌体から調製してもよい。
　酵母菌体から酵母細胞壁を得る方法としては特に限定されず、例えば酵母菌体から公知の方法により得ることができる。具体的には、酵母菌体を４５～６５℃に加温して５～２０時間自己消化させた後、遠心分離機で上清を除去する方法や、酵母菌体を８０℃以上に昇温殺菌した後、そのまま遠心分離で上清を除去する方法や、酵素を添加、反応後に遠心分離して上清を除去する方法等が挙げられる。
　酵母細胞壁が由来する酵母についても特に限定されず当業者が適宜設定することができる。例えば、サッカロマイセス（Saccharomyces）属、クルイベロマイセス（Kluyveromyces）属、カンジダ（Candida）属、ピキア（Pichia）属、トルロプシス（Torulopsis）属に属する酵母等の食品グレードのもの（Bekatorou et al, 2006,Food Technol.Biotechnol.44(3),407-415）が挙げられる。
　このうち、ＩＬ－６、ＩＬ－１０の産生をより促進する観点から、ビール酵母などの属するサッカロマイセス（Saccharomyces）属の酵母が好ましい。サッカロマイセス（Saccharomyces）属に属するものとしては、ビール酵母、ウイスキー酵母、焼酎酵母、パン酵母、ワイン酵母、清酒酵母等を例示でき、例えばこれらのうち１種または２種以上を酵母細胞壁加水分解物の調製に用いるようにしてもよい。
　ビール酵母を用いる場合には、例えば泥状ビール酵母、圧搾ビール酵母、乾燥ビール酵母、ビール酵母懸濁液などから酵母細胞壁を得たものを挙げることがでる。
　酵母細胞壁を加水分解する方法についても特に限定されず、当業者が適宜設定することができる。
　このうち、ＩＬ－６、ＩＬ－１０の産生量促進の観点から好ましい態様として、酵母細胞壁のｐＨを８．０～１４．０（より好ましくは１０．０～１２．０）に調整し、６０～１２０℃（より好ましくは８５～９５℃）で３～２４時間（より好ましくは１２～２０時間）加水分解することを挙げることができる。加水分解の際、攪拌はしてもしなくてもよい。
　また、加水分解に供する酵母細胞壁は、加水分解処理の前に必要に応じアルカリ条件での洗浄処理等を行うようにしてもよい。
　ＩＬ産生促進剤は例えば上記のようにして得ることができる未精製である酵母細胞壁加水分解物を含む。未精製とは、例えばβグルカンや、マンナンなど酵母細胞壁中の特定の成分の純度を上げるための工程を行っていない状態のものをいう。酵母細胞壁中の特定の成分の純度を上げることを目的とする工程としては、例えば上述のようにして得られた酵母細胞壁加水分解物について行う、遠心分離やろ過、蒸留、再結晶、抽出、昇華、クロマトグラフィー、等電点沈殿分離、エタノール沈殿分離、塩析等の工程が挙げられる。ただし、これらと同様の工程であっても、酵母細胞壁中の特定の成分の純度を上げることを目的としない工程、例えば飲食品としての品質を担保するための異物除去を目的とした工程等は含まない。酵母細胞壁加水分解物中の特定の成分の純度を上げるための工程であるか否かは、当業者は、当該工程において使用する機器や処理条件などから判別することができる。
　ＩＬ産生促進剤は未精製である酵母細胞壁加水分解物に加えて、本発明の目的を達することができる限り、他の成分を含んでいてもよい。
　ＩＬ産生促進剤の形態（剤型）については特に限定されず、医薬品、医薬部外品または飲食品などとして製造することができる。
　ＩＬ産生促進剤を医薬品、医薬部外品または飲食品とする場合、未精製の酵母細胞壁分解物と例えば賦型剤、結合剤、安定剤、崩壊剤、滑沢剤、矯味矯臭剤、懸濁剤、コーティング剤、その他の任意の成分とを適宜混合して製剤化することもできる。剤形としては、錠剤、丸剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、粉剤、シロップ剤等が可能であり、これらを経口的に投与することが望ましい。
　または、特に限定されないが、ＩＬ産生促進剤が飲食品としての態様で製造される場合、通常の飲食品のほか、特定保健用食品等の特別用途食品や栄養機能食品などであってもよい。飲食品の具体例としては、例えば、栄養補助食品（サプリメント）、牛乳、加工乳、乳飲料、清涼飲料、発酵乳、ヨーグルト、チーズ、パン、ビスケット、クラッカー、ピッツァクラスト、アイスクリーム、キャンディ、グミ、ガム、調製粉乳、流動食、病者用食品、幼児用粉乳等食品、授乳婦用粉乳等食品等を挙げることができる。
　また、ＩＬ産生促進剤は、ヒトを対象とする医薬品、医薬部外品、飲食品に限らず、ヒト以外の動物に対する医薬品や飼料などの形態であってもよい。ヒト以外の動物としてはヒト以外の高等脊椎動物、特にヒト以外の哺乳類を挙げることができ、より具体的にはイヌ、ネコ等の愛玩動物、ウシ、ウマ、ブタ、ヒツジ等の家畜を例示することができる。また、鳥類や魚類も挙げることができ、より具体的には肉鶏、産卵鶏、七面鳥や、サーモン、コイ、フナ、ティラピア、ナマズ、スズキ、ブリ、カンパチ、ヒラメ、タイ、マグロ等の養殖魚を例示することができる。さらに、エビ、カニ等無脊椎動物も挙げることができる。
　ＩＬ産生促進剤の一日あたりの摂取量についても特に限定されず、例えば、成人の場合、未精製の酵母細胞壁加水分解物を０．０１～１００ｇ、好ましくは０．１～１０g摂取できるように配合量等を調整すればよい。ＩＬ産生促進剤における未精製の酵母細胞壁加水分解物の含有割合も特に限定されず、製造の容易性や好ましい一日の投与量等に合わせて適宜調節すればよい。
　以上、本実施形態によれば、ＩＬ－６、ＩＬ－１０の産生を促進可能である新規な技術を提供できる。
　すなわち、本実施形態に係る未精製である酵母細胞壁加水分解物等を、摂取の態様は特に限定されないが、例えば上述の当該未精製である酵母細胞壁加水分解物を含む医薬品、医薬部外品、食品などの態様で摂取することにより、ＩＬ－６、ＩＬ－１０の産生を促進することができる。その結果、個人差はあるが、免疫機能の賦活化による感染症の症状緩和などが期待できる。
　以下、本発明を実施例により更に詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されない。
［未精製の酵母細胞壁分解物の調製（実施例）］
　アサヒグループ食品（株）栃木小金井工場にて製造したサッカロマイセス（Saccharomyces）属に属するビール酵母に由来する酵母細胞壁（固形分１０％）を、加水分解処理に供した。
　具体的は、酵母細胞壁を水酸化ナトリウムでｐＨ１１に調整後、９０℃に加熱し、１８時間処理した。これをドラムドライヤーにて乾燥し、酵母細胞壁加水分解物（以下、ＨＹＣＷ）とした。
［精製した酵母細胞壁分解物の調製（比較例）］
　上記の加水分解処理後の乾燥を行わずに、塩酸でｐＨ５．５に調整後、遠心分離して得られた重液をドラムドライヤーで乾燥したものを酵母グルカン（以下、ＹＧ）とした。また、軽液をＢｒｉｘ４０％まで濃縮した後、１２５℃、４０秒の条件で殺菌し、スプレードライにて乾燥したものを酵母マンナン（以下、ＹＭ）とした。
　なお、実施例、比較例とも、２０１３年８月および同年９月製造の２種類の酵母細胞壁を用い、それぞれ上記の調製を行った。以下、２０１３年８月製造の酵母細胞壁に由来するものを（ａ）と、同年９月製造の酵母細胞壁に由来するものを（ｂ）とする。
［β－グルカン純度］
　実施例であるＨＹＣＷと、比較例であるＹＧ、ＹＭについて、採取した試料にα-アミラーゼ、プロテアーゼ、アミログルコシダーゼを順に作用させた後に、エタノールを添加した。生成した沈殿を８０％エタノール、アセトンを用いて洗浄した。その後、７２％ 硫酸を５ｍＬ添加し、２０℃で４時間分解した後、水を７０ｍＬ添加し、沸騰水浴中で２時間加水分解を行った。冷却、中和後、グルコースオキシダーゼ法によりグルコース濃度を定量し、それに０．９を乗じ、β-グルカン純度を算出した。
　結果を図１に示す。ＨＹＣＷを遠心分離することにより、β－グルカン画分とマンナン画分に分離することができる。沈殿を乾燥させたものがＹＧで、β－グルカン純度は約３３％に高まり、上清を乾燥させたものがＹＭでβ－グルカン純度は約１％とほぼ含まれていなかった。
［ＩＬ－６、ＩＬ－１０産生量の測定］
　公知の方法に従い、ＩＬ－６、ＩＬ－１０を測定した（Sonck et al,2010,Veterinary Immunology and Immunopathology 135,199-207）。１４週齢の離乳子豚５頭の頸静脈から、ヘパリン管に末梢血を採血した。その後、Lymphoprepを用い、８００×g・１８℃・２５分間の条件下で密度勾配遠心分離し、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を得た。塩化アンモニウムで赤血球を溶血し、３５０×g・１８℃・１０分間の遠心分離後、沈殿を１０％ ウシ胎児血清・非必須アミノ酸溶液・１００ μｇ／ｍＬピリビン酸ナトリウム・２９２ｍｇ／ｍＬ Ｌ-グルタミン・１００ ＩＵ／ｍＬ ペニシリン・１００ μｇ／ｍＬ ストレプトマイシン・１００ μｇ／ｍＬ カナマイシンを含むＲＰＭＩ１６４０培地で３回洗浄し、１０７　ｃｅｌｌｓ／ｍＬとなるように懸濁した。
  末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）に対しＨＹＣＷ、ＹＧ、ＹＭにより刺激し、ＩＬ－６、ＩＬ－１０の産生量を測定した。
　具体的には、２０μｇ／ｍＬもしくは２００μｇ／ｍＬ　の各サンプルで、マルチウェルプレート上にて１×１０７　ｃｅｌｌｓのＰＢＭＣを２４時間刺激した。
　その後、上清を回収し、市販のサイトカイン測定ＥＬＩＳＡキット（Ｒ＆Ｄ　Systems社）を用いて、マニュアルに従って測定した。negative control はHBSS（Hank's Balanced Salt Solution）を使用した。
　結果を図２、３に示す。
　図２、３から理解できるとおり、ＨＹＣＷによる刺激により、ＹＧ、ＹＭの場合と比較してＩＬ－６、ＩＬ－１０の産生量が大きく増加していることが理解できる。
 

Claims (4)

  1. 　未精製である酵母細胞壁加水分解物を含む、インターロイキン－６産生促進剤。
  2. 　前記酵母細胞壁加水分解物が、酵母細胞壁のｐＨを８．０～１４．０に調整し、６０～１２０℃で３～２４時間加水分解することにより得られる酵母細胞壁加水分解物である請求項１に記載のインターロイキン－６産生促進剤。
  3. 　未精製である酵母細胞壁加水分解物を含む、インターロイキン－１０産生促進剤。
  4. 　前記酵母細胞壁加水分解物が、酵母細胞壁のｐＨを８．０～１４．０に調整し、６０～１２０℃で３～２４時間加水分解することにより得られる酵母細胞壁加水分解物である請求項３に記載のインターロイキン－１０産生促進剤。
     
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