WO2020060382A1 - Способ получения биомассы личинок galleria mellonella - Google Patents

Способ получения биомассы личинок galleria mellonella Download PDF

Info

Publication number
WO2020060382A1
WO2020060382A1 PCT/MD2019/000005 MD2019000005W WO2020060382A1 WO 2020060382 A1 WO2020060382 A1 WO 2020060382A1 MD 2019000005 W MD2019000005 W MD 2019000005W WO 2020060382 A1 WO2020060382 A1 WO 2020060382A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
larvae
nutrient medium
biomass
galleria
galleria mellonella
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Ceased
Application number
PCT/MD2019/000005
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Чеслав ЧУХРИЙ
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Individual
Original Assignee
Individual
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Individual filed Critical Individual
Priority to EA202100067A priority Critical patent/EA202100067A1/ru
Priority to EP19862136.9A priority patent/EP3854209B1/en
Publication of WO2020060382A1 publication Critical patent/WO2020060382A1/ru
Anticipated expiration legal-status Critical
Ceased legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/56—Materials from animals other than mammals
    • A61K35/63—Arthropods
    • A61K35/64—Insects, e.g. bees, wasps or fleas
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K67/00—Rearing or breeding animals, not otherwise provided for; New or modified breeds of animals
    • A01K67/30—Rearing or breeding invertebrates
    • A01K67/34—Insects
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K50/00—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals
    • A23K50/90—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals for insects, e.g. bees or silkworms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/12—Keratolytics, e.g. wart or anti-corn preparations
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/18—Antioxidants, e.g. antiradicals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]

Definitions

  • the invention relates to biotechnology, in particular to the production of entomological biomass - Galleria mellonella larvae with high biological activity (for example, keratolytic, antioxidant, anti-inflammatory, immunomodulating, etc.), which can be used as raw materials for the production of pharmaceuticals and cosmetics .
  • high biological activity for example, keratolytic, antioxidant, anti-inflammatory, immunomodulating, etc.
  • a known method for producing biomass of Galleria mellonella larvae which includes the cultivation of larvae of the first or second age on a nutrient medium that contains wheat flour (PO g), baker's yeast (100 g), milk powder (70 g), wax (50 g), glycerin (80 g), wheat bran (350 g), bee honey (50 g) and water (160 g); and larvae of the third or fourth age — on a medium that contains wheat bran (350 g), wheat flour (P O g), baker's yeast (100 g), milk powder (70 g), wax (50 g), glycerin (80 g), water (210 g) [1].
  • Larvae are intended for use as a host organism for various pathogens in scientific research [1].
  • the disadvantage of this method is the use of a poor nutrient medium for growing larvae of the third or fourth age, which cannot provide a high biological value of biomass.
  • Also known is a method for producing biomass of Galleria mellonella larvae including incubating larvae of the last age or pupae in containers in the dark for 1-3 weeks to obtain the maximum number of eggs, transferring the eggs (twice a week) into food containers for 20 days for receiving larvae.
  • the nutrient medium used for feeding the larvae has the following composition: corn flour 250 g. Yeast extract 1 50 g, soy flour 100 g, milk powder 1 00 g, bee honey 200 g, glycerin 200 g, blocks of beeswax.
  • Larvae are highly resistant to infections of Staphylococcus aureus, Escherichia coli, and Candida albicans and are used as hosts in the study of entomopathogens [2].
  • the disadvantage of this method is that the obtained larvae vary significantly in size (from 1 to 2 cm) and biomass quality due to different ages, which is unacceptable, when biomass is used as a raw material for the production of cosmetic or pharmaceutical substances.
  • the nutrient medium used has the following composition: 1 18 g of wheat flour, 206 g of wheat bran, 1 18 g of milk powder, 88 g of brewer's yeast, 24 g of wax powder, 175 ml of honey and 175 ml of glycerin.
  • the resulting larvae are used as a host organism for growing entomophage nematodes [3].
  • the disadvantage of this method is the 51-day duration of the growth process, which leads to a significant increase in the cost of insect cultivation technology.
  • Closest to the claimed invention is a method for producing biomass of Galleria mellonella larvae [4] for use as raw materials for the production of cosmetic and pharmaceutical preparations with keratolytic effect.
  • This process includes three consecutive stages: 1. Preparation of conditions for the passage of the full life cycle in conditions of artificial cultivation.
  • premises of 20m 2 are used . They are painted with a special resin, which makes it possible to disinfect with disinfectant solutions.
  • the temperature is maintained at 26 ⁇ 2 ° C, and humidity - 70%.
  • the premises in which the larvae are grown are equipped with dark boxes and are provided with automatic systems and control of temperature and humidity. In these rooms maintain a temperature of 30-31 ° C and a humidity of 80%; 2. Growing insects.
  • a nutrient medium of the following composition yellow corn extract 1 74.0-206.0 g, red corn extract 1 83.0-214.0 g, glucose 70 0-85.0 g, fructose 65.0- 81.0 g, sucrose 4, 0-4, 8 g, maltose 4, 0-5.0 g, casein 1 1 7.0-148.0, retinol (vitamin A) 2500-3000 units, tocopherol acetate (vitamin E) 40-58 units, vitamin C 0.05-0.06 g, riboflavin (vitamin B 2 ) 0, 0014-0.0017 g, calcium pantothenate (vitamin At 5) 0.005-0.01, thiamine (vitamin B i) 0,002-0,003 g 0.003-0.004 g pyridoxine, biotin 0,0000
  • the disadvantage of this method is the use of a very complex nutrient medium consisting of more than 30 components, as well as the collection of larvae immediately after molting, when the number of enzymes with keratolytic effect decreases as a result of their use in the process of removing the old exoskeleton.
  • Another disadvantage of all the methods described above is that the development of the larval stage of the insect Galleria mellonella, which includes from 3 to 10 links (depending on the example given), occurs in the same containers in which the eggs or larvae of the first or second age. This leads to the accumulation of waste products of insects and a decrease in the yield of biomass.
  • the problem solved by the present invention is to develop a new effective method for producing biomass of Galleria mellonella larvae with high biological activity.
  • the essence of the invention lies in the fact that the proposed method for producing biomass of Galleria mellonella larvae with high biological activity, which consists in preparing the conditions for growing larvae in artificial conditions. growing larvae on a nutrient medium and collecting larvae, and the nutrient medium for Galleria mellonella larvae has the following composition, g / kg:
  • the method for producing biomass of Galleria mellonella larvae includes a simpler and less expensive medium that provides more biomass (149, 7 - 160.0 mg of biomass on average per 1 g compared with 1 13.6 - 121, 3 for the prototype) with higher biological activity.
  • the technical result of the invention is due to the fact that during the development of Galleria mellonella larvae, at least two transfer of larvae to fresh medium is carried out, which prevents the inhibition effect caused by the accumulation of waste products in insect growth containers.
  • Galleria mellonella pupae reach the refrigerator, where they were stored at a temperature of 3-5 ° C and left at room temperature for 2 hours. After this time, the pupae are transferred to closed containers containing a small amount of nutrient medium (1/10 of the container volume) for their subsequent development and transition to the adult phase and egg laying. To initiate hatching of larvae from eggs in dark containers, maintain a temperature of 27 ° C and a relative humidity of 75%. 48 hours after placing the pupae in containers, larvae of the first age appear. The process is monitored, over a period of time for which an 80% yield is provided, but not more than 6 hours.
  • the nutrient medium used has the following composition, g / kg:
  • Purified water to SOOg Preparing new containers with a nutrient medium. 6 hours after the start of hatching, the larvae of the first generation are selected with tweezers from the containers in which they appeared, and placed in prepared containers.
  • the growth of the larvae lasts 20 days from the date of the first transfer.
  • the temperature of the container is maintained at 27 ° C, and the relative humidity is 75% in dark conditions.
  • Galleria mellonella pupae reach the refrigerator, where they were stored at a temperature of 3-5 ° C and left at room temperature for 2 hours. After this time, the pupae are transferred to closed containers containing a small amount of nutrient medium (1/10 of the container volume) for their subsequent development and transition to the adult phase and egg laying. To initiate hatching of larvae from eggs in dark containers, maintain a temperature of 27 ° C and a relative humidity of 75%. 48 hours after placing the pupae in containers, larvae of the first age appear. The process is monitored, over a period of time for which an 80% yield is provided, but not more than 6 hours.
  • the nutrient medium used has the following composition, g / kg:
  • the growth of the larvae lasts 20 days from the date of the first transfer.
  • the temperature of the container is maintained at 27 ° C, and the relative humidity is 75% in dark conditions.
  • the collection of larvae occurs on the 20th day of cultivation.
  • the larvae are washed twice four times the volume of saline and another four times the volume of purified water.
  • Galleria mellonella pupae reach the refrigerator, where they were stored at a temperature of 3-5 ° C and left at room temperature for 2 hours. After this time, the pupae are transferred to closed containers containing a small amount of nutrient medium (1/10 of the container volume) for their subsequent development and transition to the adult phase and egg laying. To initiate hatching of larvae from eggs in dark containers, maintain a temperature of 27 ° C and a relative humidity of 75%. 48 hours after placing the pupae in containers, larvae of the first age appear. The process is monitored, over a period of time for which an 80% yield is provided, but not more than 6 hours.
  • the nutrient medium used has the following composition, g / kg:
  • Larvae growth lasts 21 days from the day of the first transfer.
  • the temperature of the container is maintained at 27 ° C and the relative humidity is 75% in dark conditions.
  • Ciuhrii V Complex de ridge enlomologica in propilenglicol cu ac (iune chera! Olitica, proceedeu de ob nere a acesluia,rank farmaceutice ⁇ i cosmelice pe bazaizi (varianle). Brevet de inventie, MD 4198, BOPI nr.2, 2013.

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Animal Husbandry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Insects & Arthropods (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Biodiversity & Conservation Biology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Cosmetics (AREA)
  • Feed For Specific Animals (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)

Abstract

Изобретение относится к биотехнологии. Предложен способ получения биомассы личинок Galleria Mellanella. Способ включает приготовление условий для выращивания личинок в искусственных условиях, выращивание и сбор личинок Galleria Mellanella. Для выращивания личинок используют питательную среду следующего состава, г/кг: Пшеничная мука 185-200 г Кукурузная мука 180-190 г Пшеничные отруби 110-130 г Дрожжевой экстракт 15-20 г Сухое молоко 120-140 г Пчелиный мед 75-95 г Г лицерин 80-90 г Восковая пыль 40-55 г Пинобанксин 0,02-0,03 г Пиноцембрин 0,02-0,03 г Очищенная вода до 1000 г В период выращивания проводят не менее двух переносов личинок на свежую питательную среду, сбор личинок проводят на различной стадии развития. Способ обеспечивает получение биомассы личинок Galleria Mellanella с высокой биологической активностью.

Description

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БИОМАССЫ ЛИЧИНОК GALLERIA MELLONELLA
Изобретение относится к биотехнологии, а именно к получению энтомологической биомассы - личинок Galleria mellonella с высокой биологической активностью (например, кератолитической, антиоксидантной, противовоспалительной, иммуномодулирующей и т. д.), которая может быть использована в качестве сырья для производства фармацевтических препаратов и косметических средств.
Известен способ получения биомассы личинок Galleria mellonella , который включает выращивание личинок первого-второго возраста на питательной среде, которая содержит пшеничную муку (ПО г), пекарские дрожжи (100 г), сухое молоко (70 г), воск (50 г), глицерин (80 г), пшеничные отруби (350 г), пчелиный мед (50 г) и воду ( 160 г); а личинок третьего-четвертого возраста - на среде, которая содержит пшеничные отруби (350 г), пшеничную муку (П О г), пекарские дрожжи (100 г), сухое молоко (70 г), воск (50 г), глицерин (80 г), воду (210 г) [1 ]. Личинки предназначены для использования в качестве организма - хозяина для различных патогенов в научных исследованиях [1 ].
Недостатком этого способа является использование бедной питательной среды для выращивания личинок третьего-четвертого возраста, оторая не может обеспечить высокую биологическую ценность биомассы.
Также известен способ получения биомассы личинок Galleria mellonella, включающий инкубацию личинок последнего возраста или куколок в контейнерах, в темноте в течение 1 -3 недель для получения максимального количества яиц, переноса яиц (два раза в неделю ) в контейнеры для пищевых продуктов на 20 дней для получения личинок. Питательная среда, используемая для кормления личинок, имеет следующий состав: кукурузная мука 250 г. дрожжевой экстракт 1 50 г, соевая мука 100 г, сухое молоко 1 00 г, пчелиный мед 200 г, глицерин 200 г, блоки пчелиного воска. Личинки характеризуются высокой устойчивостью к инфекциям Staphylococcus aureus, Escherichia coli и Candida albicans и используются в качестве хозяев при изучении энтомопатогенов [2].
Недостатком способа является то, что полученные личинки существенно различаю тся по размерам (от 1 до 2 см) и качеству биомассы из-за разного возраста, что недопустимо, когда биомасса используется в качестве сырья для производства косметических или фармацевтических веществ.
Также известен способ получения личинок Galleria mellomlla, заключающиеся в том. что яйца насекомых помещают в пластиковые ящики с питательной средой, где они развиваются в течение 51 дня. Используемая питательная среда имеет следующий состав: 1 18 г пшеничной муки, 206 г пшеничных отрубей, 1 18 г сухого молока, 88 г пивных дрожжей, 24 г воскового порошка, 175 мл меда и 175 мл глицерина. Полученные личинки используются в качестве организма - хозяина для выращивания энтомофаговых нематод [3].
Недостаток этого способа заключается в 51 -дневной продолжительности процесса роста, что приводит к значительному удорожанию технологии выращивания насекомых.
Наиболее близким к заявляемому изобретению является способ получения биомассы личинок Galleria mellonella [4] для использования в качестве сырья для производства косметических и фармацевтических препаратов, обладающих кератолитическим эффектом. Этот процесс включает в себя три последовательных этапа: 1. Подготовка условий для прохождения полного жизненного цикла в условиях искусственного выращивания. Для выращивания насекомых используются помещения площадью 20м2. С тены окрашены специальной смолой, которая обеспечивает возможность дезинфекции дезинфицирующими растворами. В помещениях, где инкубируют яйца, температуру поддерживают на уровне 26 ± 2°С, а влажность - 70%. Помещения, в которых выращивают личинки, оборудованы темными коробками и обеспечены автоматическими системам и контроля температуры и влажности. В этих помещениях поддерживают температуру 30-31 °С и влажность 80%; 2. Выращивание насекомых. Сразу после вылупления личинки переносят из инкубационных комнат в помещения, предназначенные для выращивания личинок. Личинки помещают в темные контейнеры, где поддерживаются необходимые условия, а насекомые получают необходимое питание - питательная среда следующего состава: экстракт желтой кукурузы 1 74,0-206,0 г, экстракт красной кукурузы 1 83,0-214,0 г, глюкоза 70,0-85,0 г, фруктоза 65,0- 81 ,0 г, сахароза 4, 0-4, 8 г, мальтоза 4, 0-5,0 г, казеин 1 1 7,0-148,0, ретинол (витамин А) 2500- 3000 Ед, токоферола ацетат (витамин Е) 40-58 Ед, витамин С 0,05-0,06 г, рибофлавин (витамин В2) 0, 0014-0,0017 г, пантотенат кальция (витамин В5) 0,005-0,01 , тиамин (Витамин B i) 0,002-0,003 г, пиридоксин 0,003-0,004 г, биотин 0,00002-0,00003 г, ниацин (витамин В3) 0,0002-0,0003 г, пинобанксин 0,015-0,020 г, пиноцембрин 0,010-0,015 г, глицерин 120,0-139,0 г, !MaN03 0, 8- 1 ,1 г, КН2Р04 1 , 7-2,0 г, NaCl 1 , 5-2,0 г, СаС12 0,2 - 0,5, MgS04 * 7Н20 0,05-0, 1 г. ZnS04 * 7Н20 0,005-0,01 г, MnS04 * 5Н20 0,007-0,015 г, CuS04 . 5Н20 0,007 0,008 г, FeCI3 * 6Н20 0,0100-0,0175 г, ЭДТА 0,006-0,0075 г, желтый воск 250-350 г, очищенная вода - до 1000 г. 3. Сбор личинок. Личинки собирают при вступлении в 7-ой возраст, сразу же после линьки. Эта биомасса используется для получения активного комплекса обладающего кератолитическим действием.
Недостатком этого способа является применение очень сложной питательной среды, состоящей из более 30 компонентов, а также сбор личинок сразу после линьки, когда количество ферментов, обладающих кератолитическим эффектом, уменьшается в результате их использования в процессе удаления старого экзоскелета.
Также недостатком всех описанных выше способов является то, что развитие личиночной стадии насекомого Galleria mellonella, который включает от 3 до 10 линек (в зависимости от приведенного примера), происходит в одних и тех же контейнерах, в которые были помещены яйца или личинки первого - второго возраста. Это приводит к накоплению продуктов жизнедеятельности насекомых и снижению выхода биомассы.
Задача, решаемая настоящим изобретением, заключается в разработке нового эффективного способа получения биомассы личинок Galleria mellonella с высокой биологической активностью.
Сущность изобретения заключается в том, что предлагается способ получения биомассы личинок Galleria mellonella с высокой биологической активностью, заключающийся в подготовке условий для выращивания личинок в искусственных условиях. выращивании личинок на питательной среде и сборе личинок, а питательная среда для личинок Galleria mellonella имеет следующий состав, г / кг:
Пшеничная мука 185 - 200 г Кукурузная мука 1 80 - 190 г Пшеничные отруби П О - 130 г Дрожжевой экстракт 15 - 20 г
Сухое молоко 120 - 140 г Пчелиный мед 75 - 95 г
Глицерин, 80 - 90 г
Восковой порошок 40 - 55 г
Пинобанксин 0,02 - 0,03 г Пиноцембрин 0,02 - 0,03 г Очищенная вода до 1000 г,
и в течение периода выращивания личинок проводят не менее 2-х переносов на свежую питательную среду, личинки собирают в различном возрасте в зависимости от типа требуемой биологической активности. Технический результат изобретения, по сравнению с наиболее близким решением, состоит в том, что способ получения биомассы личинок Galleria mellonella включает более простую и менее дорогую среду, которая обеспечивает получение большего количества биомассы (149, 7 - 160,0 мг биомассы в среднем на 1 г по сравнению с 1 13,6 - 121 ,3 для прототипа) с более высокой биологической активностью.
Технический результат изобретения обусловлен тем, что при развитии личинок Galleria mellonella осуществляются как минимум два переноса личинок на свежую среду, что предотвращает эффект ингибирования, вызванный накоплением продуктов жизнедеятельности в контейнерах для роста насекомых.
Примеры применения изобретения:
Пример 1:
Получение биомассы личинок Galleria mellonella с кератолитичеекой активностью
Куколки Galleria mellonella достают холодильника, где хранились при температуре 3- 5°С и оставляют при комнатной температуре на 2 часа. По истечении этого времени куколки переносят в закрытые контейнеры, содержащие небольшое количество питательной среды (1 /10 объема контейнера) для их последующего развития и перехода в фазу имаго и откладки яиц. Для инициации вылупления личинок из яиц в темных контейнерах поддерживают температуру 27°С и относительную влажность 75%. Через 48 часов после помещения куколок в контейнеры появляются личинки первого возраста. Процесс контролируется, на протяжении периода времени за который обеспечивается 80%-ый выход, но не более 6 часов.
Используемая питательная среда имеет следующий состав, г / кг:
Пшеничная мука 185 г
Кукурузная мука 1 80 г
Пшеничные отруби 1 1 0 г
Дрожжевой жкстракт 1 5 г
Сухое молоко 120г
Пчелиный мед 75 г
Глицерин, 80г
Восковой порошок 40г
Пинобанксин 0,02г
Пиноцембрин 0,02г
Очищенная вода до ЮООг ; Подготавливаются новые контейнеры с питательной средой. Через 6 часов после начала вылупления, личинки первого поколения выбираются пинцетом из контейнеров в которых они появились, и помещаются в подготовленные контейнеры.
Рост личинок длится 20 дней со дня первого переноса. Температура контейнера поддерживается на уровне 27°С, а относительная влажность составляет 75% в темных условиях.
В течении данного периода на 7-й день и 14-й день проводят два переноса личинок на свежую питательную среду.
Для получения биомассы личинок с высокой кератолитической активностью сбор личинок происходит на 19-й день культивирования, до начала б-ой линьки личинок. Личинки дважды промывают четырехкратными объемами физиологического раствора и еще дважды четырехкратными объемами очищенной воды.
В полученной биомассе определяют качественные и количественные показатели . Полученные результаты приведены в таблице 1 .
Таблица 1
Figure imgf000006_0001
Данные в Таблице 1 доказывают, что использование упрощенной среды приводит к значительному снижению затрат на производство личинок (затраты на питание в предлагаемом решении составляют 25% от стоимости среды-прототипа), а количества биомассы, произведенной с использованием одного грамма среды больше на 31 ,8% по сравнению с прототипом. Также увеличивается кератолитическая активность биомассы в два раза. Пример 2:
Получение биомассы личинок Galleria mellonella с высокой антиоксидантной активностью
Куколки Galleria mellonella достают холодильника, где хранились при температуре 3- 5°С и оставляют при комнатной температуре на 2 часа. По истечении этого времени куколки переносят в закрытые контейнеры, содержащие небольшое количество питательной среды (1 /10 объема контейнера) для их последующего развития и перехода в фазу имаго и откладки яиц. Для инициации вылупления личинок из яиц в темных контейнерах поддерживают температуру 27°С и относительную влажность 75%. Через 48 часов после помещения куколок в контейнеры появляются личинки первого возраста. Процесс контролируется, на протяжении периода времени за который обеспечивается 80%-ый выход, но не более 6 часов.
Используемая питательная среда имеет следующий состав, г / кг:
Пшеничная мука 200 г
Кукурузная мука 190 г
Пшеничные отруби 1 30 г
Дрожжевой жкстракт 20 г
Сухое молоко 140г
Пчелиный мед 95 г
Глицерин, 90г
Восковой порошок 55 г
Пинобанксин 0,03 г
Пиноцембрин 0,03 г
Очищенная вода до ЮООг ;
Подготавливаются новые контейнеры с питательной средой. Через б часов после начала вылупления, личинки первого поколения выбираются пинцетом из контейнеров, в которых они появились, и помещаются в подготовленные контейнеры.
Рост личинок длится 20 дней со дня первого переноса. Температура контейнера поддерживается на уровне 27°С, а относительная влажность составляет 75% в темных условиях.
В течении данного периода на 7-й день и 14-й день проводят два переноса личинок на свежую питательную среду.
Для получения биомассы личинок с высокой антиоксидантной активностью сбор личинок происходит на 20-й день культивирования. Личинки дважды промывают четырехкратными объемами физиологического раствора и еще дважды четырехкратными объемами очищенной воды.
В полученной биомассе определяют качественные и количественные показатели . Полученные результаты приведены в таблице 2.
Таблица 2
Figure imgf000008_0001
Данные в Таблице 2 показывают, что количество биомассы, полученной с использованием одного грамма среды, увеличивается на 3 1 ,7% по сравнению с прототипом. Также увеличивает антиоксидантная активность биомассы в 1,3 раза.
Пример 3:
Получение биомассы личинок Galleria mellonella с противовоспалительной активностью
Куколки Galleria mellonella достают холодильника, где хранились при температуре 3- 5°С и оставляют при комнатной температуре на 2 часа. По истечении этого времени куколки переносят в закрытые контейнеры, содержащие небольшое количество питательной среды ( 1 /10 объема контейнера) для их последующего развития и перехода в фазу имаго и откладки яиц. Для инициации вылупления личинок из яиц в темных контейнерах поддерживают температуру 27°С и относительную влажность 75%. Через 48 часов после помещения куколок в контейнеры появляются личинки первого возраста. Процесс контролируется, на протяжении периода времени за который обеспечивается 80%-ый выход, но не более 6 часов.
Используемая питательная среда имеет следующий состав, г / кг:
Пшеничная мука 190 г Кукурузиая мукэ 1 80 г
Пшеничные отруби 1 25 г
Дрожжевой жкстракт 1 8 г
Сухое молоко 130г
Пчелиный мед 90 г
Глицерин, 90 г
Восковой порошок 55г
Пинобанксин 0,03 г
Пиноцембрин 0,03 г
Очищенная вода до ЮООг ;
Подготавливаются новые контейнеры с питательной средой. Через б часов после начала вылупления, личинки первого поколения выбираются пинцетом из контейнеров в которых они появились, и помещаются в подготовленные контейнеры.
Рост личинок длится 21 дней со дня первого переноса. Температура контейнера поддерживается на уровне 27°С, а относительная влажность составляе т 75% в темных условиях.
В течении данного периода на 7-й день и 14-й день проводят два переноса личинок на свежую питательную среду.
Для получения биомассы личинок с высокой противовоспалительной активностью сбор личинок происходит на 21 -й день культивирования. Личинки дважды промывают четырехкратными объемами физиологического раствора и еще дважды четырехкратными объемами очищенной воды.
В полученной биомассе определяют качественные и количественные показа тели . Полученные результаты приведены в таблице 3.
Таблица 3
Figure imgf000009_0001
Данные в Таблице 3 демонстрируют, что количество биомассы, полученно с использованием одного грамма среды, увеличивается на 31 ,9% по сравнению с прототипом. Также наблюдался более высокий уровень противовоспалительной активности, выражающийся в снижении уровня провоспалительного фактора - интерлейкина 8 (снижение в предлагаемом способе на 37, 1 % по сравнению со снижением на 28,5% для протопипа).
Источники:
1. Исмаилов В. Я., Ширинян Ж.А., Квасенков О. И. Способ разведения Galleria mellonella, Патент RU 221 0210, publicat la 20.08.2003.
2. Adeline L. Jorjao, Luciane D. Oliveira, Liliana Scorzoni, Livia Mara A. Figueiredo-Godoi, Marcia Cristina A. Prata, Antonio Olavo C. Jorge & Juliana C. Junqueira (201 8) From moths to caterpillars: Ideal conditions for Galleriamellonella rearing for in vivo microbiological studies, Virulence, 9: 1 , 383-389.
3. C.van Zyl, A.P.Malan. Cost-Effective Culturing of Galleria mellonella and Tenebrio Molitor and Entomopathogenic Nematode Production in Various Hosts. African Entomology 23(2):361 -375. 2015.
4. Ciuhrii V. Complex de origine enlomologica in propilenglicol cu ac(iune chera!olitica, procedeu de ob nere a acesluia, produse farmaceutice §i cosmelice pe baza lui (varianle). Brevet de inventie, MD 4198, BOPI nr.2, 2013.

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БИОМАССЫ ЛИЧИНОК GALLERIA MELL ON ELLA С ВЫСОКОЙ БИОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТЬЮ
Способ получения биомассы личинок Galleria mellonella с высокой биологической активностью, заключающийся в подготовке условий для выращивания личинок в искусственных условиях, выращивании личинок на питательной среде и сборе личинок, а питательная среда для личинок Galleria mellonella имеет следующий состав, г / кг:
Пшеничная мука 185 - 200 г Кукурузная мука 1 80 - 190 г Пшеничные отруби П О - 130 г Дрожжевой экстракт 15 - 20 г Сухое молоко 120 - 140 г Пчелиный мед 75 - 95 г Глицерин, 80 - 90 г
Восковой порошок 40 - 55 г Пинобанксин 0,02 - 0,03 г Пиноцембрин 0,02 - 0,03 г Очищенная вода до 1000 г,
и в течение периода выращивания личинок проводят не менее 2-х переносов на свежую питательную среду, личинки собираю) в различном возрасте в зависимости от типа требуемой биологической активности.
PCT/MD2019/000005 2018-09-19 2019-07-23 Способ получения биомассы личинок galleria mellonella Ceased WO2020060382A1 (ru)

Priority Applications (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EA202100067A EA202100067A1 (ru) 2018-09-19 2019-07-23 Способ получения биомассы личинок galleria mellonella с высокой биологической активностью
EP19862136.9A EP3854209B1 (en) 2018-09-19 2019-07-23 Method of producing biomass of galleria mellonella larvae

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
MDA20180081A MD4646C1 (ru) 2018-09-19 2018-09-19 Способ получения биомассы личинок Galleria mellonella с высокой биологической активностью
MDA20180081 2018-09-19

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2020060382A1 true WO2020060382A1 (ru) 2020-03-26

Family

ID=68062709

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/MD2019/000005 Ceased WO2020060382A1 (ru) 2018-09-19 2019-07-23 Способ получения биомассы личинок galleria mellonella

Country Status (4)

Country Link
EP (1) EP3854209B1 (ru)
EA (1) EA202100067A1 (ru)
MD (1) MD4646C1 (ru)
WO (1) WO2020060382A1 (ru)

Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111493030A (zh) * 2020-04-29 2020-08-07 金华市农业科学研究院 一种诱集大蜡螟幼虫的食物及其制备方法
CN114391516A (zh) * 2022-02-18 2022-04-26 吉林省农业科学院 一种亚洲玉米螟田间人工接虫的介质及其制备方法和应用
CN114916505A (zh) * 2022-06-21 2022-08-19 新疆农业科学院土壤肥料与农业节水研究所(新疆维吾尔自治区新型肥料研究中心) 一种大蜡螟生物降解农田残膜的种群延续研究方法
CN116369282A (zh) * 2023-03-23 2023-07-04 山西农业大学 基于废旧蜜蜂巢脾的蚯蚓培养基制备方法及蚯蚓养殖方法
WO2023149795A1 (ru) * 2022-02-07 2023-08-10 Чеслав ЧУХРИЙ Способ получения энтомологического комплекса с кератолитическим действием
CN120788101A (zh) * 2025-08-29 2025-10-17 贵州大学 一种大蜡螟幼虫食用人工饲料及其制备方法

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2038086C1 (ru) * 1991-03-26 1995-06-27 Спиридонов Николай Алексеевич Способ получения биологически активного продукта из личинок большой восковой моли
RU2210210C1 (ru) 2001-11-21 2003-08-20 Всероссийский научно-исследовательский институт биологической защиты растений Способ разведения galleria mellonella l.
CN107182948A (zh) * 2017-06-12 2017-09-22 湖南工业大学 大蜡螟规模化培养新方法

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MD4198C1 (ru) * 2011-08-26 2013-09-30 Вячеслав ЧУХРИЙ Комплекс энтомологического происхождения в пропиленгликоле кератолитического действия, способ его получения, фармацевтические и косметические продукты на его основе (варианты)

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2038086C1 (ru) * 1991-03-26 1995-06-27 Спиридонов Николай Алексеевич Способ получения биологически активного продукта из личинок большой восковой моли
RU2210210C1 (ru) 2001-11-21 2003-08-20 Всероссийский научно-исследовательский институт биологической защиты растений Способ разведения galleria mellonella l.
CN107182948A (zh) * 2017-06-12 2017-09-22 湖南工业大学 大蜡螟规模化培养新方法

Non-Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ADELINE L JORJÃO; LUCIANE D OLIVEIRA; LILIANA SCORZONI; LÍVIA MARA A FIGUEIREDO-GODOI; MARCIA CRISTINA A PRATA; ANTONIO OLAVO C J: "From moths to caterpillars: ideal conditions for Galleria mellonella rearing for in vivo microbiological studies", VIRULENCE, vol. 9, no. 1, 31 December 2018 (2018-12-31), pages 383 - 389, XP055693529, ISSN: 2150-5594, DOI: 10.1080/21505594.2017.1397871 *
ADELINE L. JORJAOLUCIANE D. OLIVEIRALILIANA SCORZONILIVIA MARA A. FIGUEIREDO-GODOIMARCIA CRISTINA A. PRATAANTONIO OLAVO C. JORGEJU: "From moths to caterpillars: Ideal conditions for Galleriamellonella rearing for in vivo microbiological studies", VIRULENCE, vol. 9, no. 1, 2018, pages 383 - 389, XP055693529, DOI: 10.1080/21505594.2017.1397871
BRASLAVSKY, V. B: "Issledovanie elektronnykh spektrov flovonoidov topolia i propoliusa = [Study of the electronic spectra of poplar and propolius flavonoids]", MEDITSINSKY ALMANAKH, vol. 2, no. 15, 2011, pages 140 - 144, XP009527168, ISSN: 1997-7689 *
C.VAN ZYLA.P.MALAN: "Cost-Effective Culturing of Galleria mellonella and Tenebrio Molitor and Entomopathogenic Nematode Production in Various Hosts", AFRICAN ENTOMOLOGY, vol. 23, no. 2, 2015, pages 361 - 375
CIUHRII V: "Complex de origine enlomologica in propilenglicol cu actiune cheralolilica, procedeu de obtinere a acestuia, produse farmaceutice i cosmetice pe baza lui (variante", BREVET DE INVENTIE, 2013
See also references of EP3854209A4

Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111493030A (zh) * 2020-04-29 2020-08-07 金华市农业科学研究院 一种诱集大蜡螟幼虫的食物及其制备方法
WO2023149795A1 (ru) * 2022-02-07 2023-08-10 Чеслав ЧУХРИЙ Способ получения энтомологического комплекса с кератолитическим действием
CN114391516A (zh) * 2022-02-18 2022-04-26 吉林省农业科学院 一种亚洲玉米螟田间人工接虫的介质及其制备方法和应用
CN114916505A (zh) * 2022-06-21 2022-08-19 新疆农业科学院土壤肥料与农业节水研究所(新疆维吾尔自治区新型肥料研究中心) 一种大蜡螟生物降解农田残膜的种群延续研究方法
CN116369282A (zh) * 2023-03-23 2023-07-04 山西农业大学 基于废旧蜜蜂巢脾的蚯蚓培养基制备方法及蚯蚓养殖方法
CN120788101A (zh) * 2025-08-29 2025-10-17 贵州大学 一种大蜡螟幼虫食用人工饲料及其制备方法

Also Published As

Publication number Publication date
EP3854209B1 (en) 2024-11-13
MD4646B1 (ru) 2019-09-30
EP3854209A4 (en) 2023-05-24
MD4646C1 (ru) 2020-04-30
EP3854209A1 (en) 2021-07-28
EA202100067A1 (ru) 2021-06-10

Similar Documents

Publication Publication Date Title
WO2020060382A1 (ru) Способ получения биомассы личинок galleria mellonella
Ordal et al. Pathogenic myxobacteria
CN1029382C (zh) 北冬虫夏草菌人工栽培子实体的方法
CN101991588B (zh) 一种马氏珠母贝育珠的小片与珠核匹配处理液
CN101491228B (zh) 一种培育海水无核珍珠的方法
CN101491229A (zh) 珍珠贝外套膜组织的离体培养方法及培养基
KR101241540B1 (ko) 신균주 테트라셀미스 하제니 및 이의 용도
CN108041353A (zh) 一种桃蛀螟人工饲料及其制备方法和应用
CN101243778A (zh) 一种大银鱼苗种培育方法
CN112167177A (zh) 一种提高中华蜜蜂产蜜量的养殖方法
CN104256347A (zh) 生物强化细胞营养素在制备抗衰老功能食品中的应用
CN105379562B (zh) 一种培养无菌蚕虫草的方法
CN101940271A (zh) 天敌昆虫的人工饲料
CN106234317A (zh) 海南五指山蜘蛛幼蛛的养殖方法
EA044709B1 (ru) Способ получения биомассы личинок galleria mellonella с высокой биологической активностью
US12302906B2 (en) Feed stuff for beneficial organisms that can be used in integrated pest management
CN111202014B (zh) 一种金鱼高效养殖方法
KR20120077691A (ko) 미부화 폐란을 이용한 코디세핀 생산방법
KR100459869B1 (ko) 누에배지 또는 누에번데기 배지를 사용한 코디셉스시넨시스의 배양방법
CN108142382B (zh) 一种规模化饲养桃蛀螟的方法
CN1973620A (zh) 家蝇的工业化无菌饲养方法
CN115989770B (zh) 一种可规模化生产的蜂蛹虫草的培育方法
CN113693029A (zh) 一种产虫茶昆虫室内规模化繁殖的方法
CN111226691A (zh) 一种冬虫夏草人工培育方法
JPS62220155A (ja) アルテミアの高密度養成方法

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 19862136

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2019862136

Country of ref document: EP

Effective date: 20210419