WO2021015583A2 - 암조건에서 이소플라본 유도체 고함량 콩잎의 제조방법 및 상기 방법으로 제조된 이소플라본 유도체 고함량 콩잎 - Google Patents

암조건에서 이소플라본 유도체 고함량 콩잎의 제조방법 및 상기 방법으로 제조된 이소플라본 유도체 고함량 콩잎 Download PDF

Info

Publication number
WO2021015583A2
WO2021015583A2 PCT/KR2020/009766 KR2020009766W WO2021015583A2 WO 2021015583 A2 WO2021015583 A2 WO 2021015583A2 KR 2020009766 W KR2020009766 W KR 2020009766W WO 2021015583 A2 WO2021015583 A2 WO 2021015583A2
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
extract
soybean
high content
leaves
isoflavone
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Ceased
Application number
PCT/KR2020/009766
Other languages
English (en)
French (fr)
Other versions
WO2021015583A3 (ko
Inventor
박기훈
반영준
송영훈
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Gyeongsang National University GNU
Original Assignee
Gyeongsang National University GNU
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Gyeongsang National University GNU filed Critical Gyeongsang National University GNU
Priority to US17/630,007 priority Critical patent/US11647710B2/en
Priority to EP20843249.2A priority patent/EP4005372B1/en
Publication of WO2021015583A2 publication Critical patent/WO2021015583A2/ko
Publication of WO2021015583A3 publication Critical patent/WO2021015583A3/ko
Anticipated expiration legal-status Critical
Ceased legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H5/00—Angiosperms, i.e. flowering plants, characterised by their plant parts; Angiosperms characterised otherwise than by their botanic taxonomy
    • A01H5/12—Leaves
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H3/00—Processes for modifying phenotypes, e.g. symbiosis with bacteria
    • A01H3/02—Processes for modifying phenotypes, e.g. symbiosis with bacteria by controlling duration, wavelength, intensity, or periodicity of illumination
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H3/00—Processes for modifying phenotypes, e.g. symbiosis with bacteria
    • A01H3/04—Processes for modifying phenotypes, e.g. symbiosis with bacteria by treatment with chemicals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H6/00—Angiosperms, i.e. flowering plants, characterised by their botanic taxonomy
    • A01H6/54—Leguminosae or Fabaceae, e.g. soybean, alfalfa or peanut
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H6/00—Angiosperms, i.e. flowering plants, characterised by their botanic taxonomy
    • A01H6/54—Leguminosae or Fabaceae, e.g. soybean, alfalfa or peanut
    • A01H6/542—Glycine max [soybean]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A21—BAKING; EDIBLE DOUGHS
    • A21D—TREATMENT OF FLOUR OR DOUGH FOR BAKING, e.g. BY ADDITION OF MATERIALS; BAKING; BAKERY PRODUCTS
    • A21D2/00—Treatment of flour or dough by adding materials thereto before or during baking
    • A21D2/08—Treatment of flour or dough by adding materials thereto before or during baking by adding organic substances
    • A21D2/36—Vegetable material
    • A21D2/362—Leguminous plants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; PREPARATION THEREOF
    • A23C15/00—Butter; Butter preparations; Making thereof
    • A23C15/12—Butter preparations
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23F—COFFEE; TEA; THEIR SUBSTITUTES; MANUFACTURE, PREPARATION, OR INFUSION THEREOF
    • A23F3/00—Tea; Tea substitutes; Preparations thereof
    • A23F3/06—Treating tea before extraction; Preparations produced thereby
    • A23F3/14—Tea preparations, e.g. using additives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; PREPARATION OR TREATMENT THEREOF
    • A23L13/00—Meat products; Meat meal; Preparation or treatment thereof
    • A23L13/40—Meat products; Meat meal; Preparation or treatment thereof containing additives
    • A23L13/42—Additives other than enzymes or microorganisms in meat products or meat meals
    • A23L13/428—Addition of flavours, spices, colours, amino acids or their salts, peptides, vitamins, yeast extract or autolysate, nucleic acid or derivatives, organic acidifying agents or their salts or acidogens, sweeteners, e.g. sugars or sugar alcohols; Addition of alcohol-containing products
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; PREPARATION OR TREATMENT THEREOF
    • A23L23/00—Soups; Sauces; Preparation or treatment thereof
    • A23L23/10—Soup concentrates, e.g. powders or cakes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; PREPARATION OR TREATMENT THEREOF
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/105—Plant extracts, their artificial duplicates or their derivatives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; PREPARATION OR TREATMENT THEREOF
    • A23L7/00—Cereal-derived products; Malt products; Preparation or treatment thereof
    • A23L7/10—Cereal-derived products
    • A23L7/101—Addition of antibiotics, vitamins, amino-acids, or minerals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/48—Fabaceae or Leguminosae (Pea or Legume family); Caesalpiniaceae; Mimosaceae; Papilionaceae
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
    • A61K8/49—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds containing heterocyclic compounds
    • A61K8/4973—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds containing heterocyclic compounds with oxygen as the only hetero atom
    • A61K8/498—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds containing heterocyclic compounds with oxygen as the only hetero atom having 6-membered rings or their condensed derivatives, e.g. coumarin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
    • A61K8/60—Sugars; Derivatives thereof
    • A61K8/602—Glycosides, e.g. rutin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/96—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
    • A61K8/97—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution from algae, fungi, lichens or plants; from derivatives thereof
    • A61K8/9783—Angiosperms [Magnoliophyta]
    • A61K8/9789—Magnoliopsida [dicotyledons]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A61P19/10—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease for osteoporosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A61Q19/08—Anti-ageing preparations
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D311/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only hetero atom, condensed with other rings
    • C07D311/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only hetero atom, condensed with other rings ortho- or peri-condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D311/04—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring
    • C07D311/22—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring with oxygen or sulfur atoms directly attached in position 4
    • C07D311/26—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring with oxygen or sulfur atoms directly attached in position 4 with aromatic rings attached in position 2 or 3
    • C07D311/34—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring with oxygen or sulfur atoms directly attached in position 4 with aromatic rings attached in position 2 or 3 with aromatic rings attached in position 3 only
    • C07D311/36—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring with oxygen or sulfur atoms directly attached in position 4 with aromatic rings attached in position 2 or 3 with aromatic rings attached in position 3 only not hydrogenated in the hetero ring, e.g. isoflavones
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H1/00—Processes for the preparation of sugar derivatives
    • C07H1/06—Separation; Purification
    • C07H1/08—Separation; Purification from natural products
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H17/00—Compounds containing heterocyclic radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
    • C07H17/04—Heterocyclic radicals containing only oxygen as ring hetero atoms
    • C07H17/06—Benzopyran radicals
    • C07H17/065—Benzo[b]pyrans
    • C07H17/07—Benzo[b]pyran-4-ones
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine

Definitions

  • the present invention relates to a method for producing soybean leaves with a high content of isoflavone derivatives in dark conditions, a soybean leaf with a high content of isoflavone derivatives prepared by the above method, use of the soybean leaf with a high content of the isoflavone derivative, and mass production of an isoflavone derivative from soybean leaves It's about how.
  • Estrogen a female hormone, begins to decrease after the 40s and ultimately causes menopause.
  • estrogen decreases aging begins in the bones, heart, skin, and brain, which are the points of action of this hormone.
  • estrogen substitutes are urgently required, and isoflavone derivatives having structural similarities have been reported as effective estrogen substitutes.
  • Isoflavone derivatives are representative flavonoids with excellent pharmacological efficacy, and a lot of capital is invested in the development of functional plants with high content of them worldwide.
  • Isoflavones are nonsteroidal estrogens, which are called phytoestrogens because their chemical and physiological properties are similar to estrogens, and are substances that act as estrogens or anti-estrogens by competitively binding to estrogen receptors (Hudson, 2001). They have a similar structure to estrogen, a female hormone, and show useful physiological activity in estrogen. Ingestion of isoflavones is known to regulate women's endocrine status and affect ovarian periodicity (Kenneth, Setchell, & Cassidy, 1999).
  • Isoflavone derivatives exist in the form of glycosides to which sugars are linked by beta-glycosidic bonds or in the form of non-glycosides from which sugars are separated.
  • Non-glycosides include genistein, daidzein, and glycitein
  • glycosides include genistin, daidzin, and glycitin.
  • soybean-derived non-fermented foods contain a lot of glycosides
  • fermented foods using soybeans, such as soybean paste mainly contain non-glycosides as sugar is decomposed from glycosides by bacteria related to fermentation.
  • Non-glycosides such as genistein and daidzein in soybeans are the most effective estrogen substitutes because they have high affinity for the estrogen receptor (ER), ER-beta (Endocrinology). 1997, 863).
  • soy isoflavones are a useful biological material as an estrogen substitute, but the content of proteins, fats and carbohydrates contained in soybeans is high, making it difficult to process such as extraction, purification, and commercialization of isoflavone derivatives.
  • Photosynthetic processes in plants are divided into light reactions and dark reactions, in which metabolites are synthesized by the Calvin Benison cycle (J. Biol. Chem. 1950, 781).
  • the present inventors were studying the technology of cultivation of soybean leaves containing high isoflavone derivatives in dark conditions where energy is not required, and secondary metabolites including carbohydrates, which are primary metabolites, were used by using ATP and NADPH obtained in the bright reaction under dark conditions. It was found that synthesis is possible.
  • the present inventors have revealed that the soybean leaves containing high isoflavones can be produced with higher efficiency by treating soybean leaves with a high concentration of ethylene in the soybean plant in a closed space even in dark conditions, and completed the present invention.
  • Another object of the present invention is to provide a bean leaf with a high content of isoflavone derivatives prepared by the above production method.
  • Another object of the present invention is to provide a high content of isoflavone derivatives, soybean leaves, extracts of soybean leaves, or use of food and pharmaceutical materials comprising a fraction of the extract.
  • Another object of the present invention is to provide a method for mass-producing isoflavone derivatives from soybean leaves using ethylene in dark conditions.
  • the present invention provides a method for producing a high content of isoflavone derivatives bean leaves represented by the following [Chemical Formula 1], comprising the step of treating ethylene in a dark condition. ;
  • R 1 is independently H or OH, and R 2 is independently glucose or glucose malonate.
  • the present invention provides a bean leaf with a high content of isoflavone derivatives prepared by the above production method.
  • the present invention provides a composition comprising a high content of isoflavone derivatives soybean leaf, an extract of the soybean leaf, or a fraction of the extract according to the present invention.
  • the present invention provides a pharmaceutical composition for the prevention and treatment of diseases caused by estrogen deficiency, containing a high content of isoflavone derivatives soybean leaves, extracts of the soybean leaves, or fractions of the extracts according to the present invention as an active ingredient.
  • the present invention provides a health food for the prevention and improvement of diseases caused by estrogen deficiency containing a high content of isoflavone derivatives, the extract of the soybean leaf, or a fraction of the extract according to the present invention as an active ingredient.
  • the present invention provides a pharmaceutical composition for antioxidant containing a high content of isoflavone derivatives soybean leaves, extracts of the soybean leaves, or fractions of the extracts according to the present invention as an active ingredient.
  • the present invention provides a health food for antioxidant containing a high content of isoflavone derivatives soybean leaves, extracts of the soybean leaves, or fractions of the extracts according to the present invention as an active ingredient.
  • the present invention provides a pharmaceutical composition for skin beauty comprising a high content of isoflavone derivatives soybean leaves, an extract of the soybean leaf, or a fraction of the extract according to the present invention as an active ingredient.
  • the present invention provides a cosmetic composition for skin beauty comprising a high content of isoflavone derivatives soybean leaves, an extract of the soybean leaf, or a fraction of the extract according to the present invention as an active ingredient.
  • the present invention provides a health food for skin beauty comprising a high content of isoflavone derivatives soybean leaves, an extract of the soybean leaf, or a fraction of the extract according to the present invention as an active ingredient.
  • the present invention provides a tea (Tea) using soybean leaves with a high content of isoflavone derivatives according to the present invention.
  • the present invention provides a method for producing tea using soybean leaves with a high content of isoflavone derivatives according to the present invention.
  • the present invention provides a method for mass-producing an isoflavone derivative from soybean leaves using ethylene.
  • soybean leaves containing very high isoflavones can be produced economically and quickly, and soybean leaves, extracts of soybean leaves, and extract fractions containing a high content of isoflavone derivatives are not affected by estrogen imbalance and lack of antioxidant activity. It can be usefully used as a food and pharmaceutical material for inducing diseases.
  • FIG. 1 is a diagram showing an HPLC chromatogram of an ethanol extract of soybean leaf without ethylene treatment.
  • FIG. 2 is a diagram showing an HPLC chromatogram (detection wavelength: 254 nm) of an ethanol extract of soybean leaf obtained by treatment with ethylene in dark conditions (peak a: daidgin, peak b: genistin, peak c: malonyl daidzin, And peak d: malonyl genistine).
  • FIG. 3 is a diagram showing an HPLC chromatogram (detection wavelength: 254 nm) of hot water extract of soybean leaves obtained by treatment with ethylene under dark conditions (peak a: daidjin, peak b: genistin).
  • FIG. 4 is a diagram showing a BPI (Base Peak Intensity) chromatogram of LC-ESI-TOF/MS of an ethanol extract of soybean leaf obtained by treatment with ethylene in dark conditions (peak a: daidgin, peak b: genistine, peak c : Malonyl daidgin, and peak d: malonyl genistin).
  • BPI Base Peak Intensity
  • HRESIMS high-resolution mass spectrometry
  • HRESIMS high-resolution mass spectrometry
  • HRESIMS high resolution mass spectrometry
  • Figure 8 is a diagram showing a high-resolution mass spectrometry (HRESIMS) spectrum of Figure 4 (BPI of LC-ESI-TOF/MS) peak d.
  • HRESIMS high-resolution mass spectrometry
  • 9 is a view comparing the total content of isoflavones of soybean leaves not treated with ethylene, soybean leaves treated with ethephon in light conditions, and soybean leaves treated with ethylene in dark conditions.
  • the present invention provides a method for producing soybean leaves having a high content of isoflavone derivatives, comprising the step of treating soybean leaves with ethylene in a dark condition.
  • the ethylene treatment in the dark condition may be performed in a closed space where light is completely blocked.
  • the temperature of the enclosed space is preferably 20°C to 40°C, and more preferably 25°C to 35°C, but is not limited thereto.
  • the humidity of the closed space is preferably 50% to 80%, more preferably 60% to 70%, but is not limited thereto.
  • the bean leaf is preferably a bean leaf that has passed 20 days or more after sowing, and more preferably a bean leaf that has passed 50 days after sowing, but is not limited thereto.
  • the ethylene is the simplest olefinic hydrocarbon (chemical formula: C 2 H 4 ), which is a colorless, sweet gas.
  • C 2 H 4 olefinic hydrocarbon
  • the ethylene is preferably treated at a concentration of 500 to 4000 ppm, and more preferably treated at a concentration of 2500 to 3500 ppm, but is not limited thereto.
  • the ethylene is preferably treated for 6 to 72 hours, more preferably 6 to 48 hours, but is not limited thereto.
  • the ethylene may be treated before or after harvesting soybean leaves, and it is preferable to treat before harvesting soybean leaves, but is not limited thereto.
  • the isoflavone derivative is preferably a compound represented by the following [Chemical Formula 1], and more preferably any one of the compounds represented by the following [Chemical Formula 2] to [Chemical Formula 5], but is not limited thereto.
  • R 1 is independently H or OH, and R 2 is independently glucose or glucose malonate.
  • the present invention provides a bean leaf with a high content of isoflavone derivatives prepared by the above production method.
  • the isoflavone derivative is preferably a compound represented by [Chemical Formula 1], and more preferably any one of the compounds represented by [Chemical Formula 2] to [Chemical Formula 5], but is not limited thereto.
  • the present inventors confirmed that as a result of treating ethylene in dark conditions on soybean plants 20 to 60 days after sowing soybeans, isoflavone derivatives were significantly increased in soybean leaves after treatment than before treatment (Fig. 1 to 3).
  • isoflavone derivatives were not detected in soybean leaves that were not treated with ethylene, and four kinds of isoflavone derivatives daidzin, genistin, and malonyl daidgin were detected in soybean leaves treated with ethylene in dark conditions. It was confirmed that (malonyldaidzin) and malonylgenistin were rapidly accumulated in bean leaves (see Tables 5 and 6).
  • soybean leaves treated with ethylene in the dark condition were extracted with ethanol to obtain an extract, which was separated and purified to obtain 4 kinds of isoflavone derivatives, daidzin, genistin, malonyl daidgin ( malonyldaidzin) and malonylgenistin were obtained (see FIGS. 4 to 8).
  • the present inventors described four isoflavone derivatives, daidzin, genistin, malonyldaidzin, and malonylgenistin isolated from soybean leaves harvested after ethylene treatment in dark conditions. ), as a result of performing quantitative analysis, it was confirmed that the content of isoflavone derivatives was significantly increased in the case of soybean leaves harvested after treatment with ethylene in dark conditions compared to soybean leaves treated with ethephon under light conditions. It was confirmed that a method of harvesting after treating soybean leaves with ethylene is possible with a method of preparing soybean leaves with a high content of isoflavone derivatives (see Table 7 and FIG. 9).
  • the present invention provides a method for mass-producing isoflavone derivatives from soybean leaves using ethylene in dark conditions.
  • the bean leaf of step 1) is preferably a bean leaf that has passed 20 days or more after sowing, more preferably a bean leaf that has passed 50 days after sowing, and the bean leaf that has passed 20 to 60 days after sowing is most preferred. .
  • the ethylene of step 1) can be treated before or after harvesting soybean leaves.
  • the ethylene of step 1) is preferably treated at a concentration of 500 to 4000 ppm, more preferably at a concentration of 2500 to 3500 ppm.
  • the isoflavone derivative is preferably a compound represented by [Chemical Formula 1], and more preferably any one or more of the compounds represented by [Chemical Formula 2] to [Chemical Formula 5].
  • ethylene is treated to soybean leaves under dark conditions to prepare soybean leaves containing a high content of isoflavone derivatives, and the method can be usefully used as a mass production method of isoflavone derivatives.
  • the present invention provides a composition
  • a composition comprising a bean leaf having a high content of isoflavone derivatives prepared by treating bean leaves with ethylene in a dark condition, an extract of the bean leaf, or a fraction of the extract.
  • the bean leaf extract or a fraction thereof is preferably prepared by a method comprising the following steps, but is not limited thereto:
  • the bean leaves of step 1) are collected and used from soybean plants in which isoflavones are accumulated in a high concentration after ethylene treatment in dark conditions.
  • the ethylene treatment can be performed even after the plant is collected, but it is more preferable to treat it before collection.
  • the ethylene-treated soybean plant may be used as leaves, leaves, or roots, but is not limited thereto, but it is preferable to use soybean leaves according to a preferred embodiment of the present invention.
  • the extraction solvent of step 1 it is preferable to use water, alcohol, or a mixture thereof as the extraction solvent of step 1). It is preferable to use C 1 to C 2 lower alcohol as the alcohol, and it is preferable to use ethanol or methanol as the lower alcohol.
  • the extraction method is preferably shaking extraction, Soxhlet extraction, or reflux extraction, but is not limited thereto. It is preferable to extract by adding 1 to 10 times the amount of the extraction solvent to the dried bean leaves, and more preferably to extract by adding 4 to 6 times.
  • the extraction temperature is preferably from 20 °C to 100 °C, more preferably from 20 °C to 40 °C, but is not limited thereto.
  • the extraction time is preferably 10 to 48 hours, more preferably 15 to 30 hours, and most preferably 24 hours, but is not limited thereto.
  • the number of extractions is preferably 1 to 5 times, more preferably 3 to 4 times repeated extraction, and most preferably 3 times, but is not limited thereto.
  • the vacuum concentration in step 3) is preferably a vacuum vacuum concentrator or a vacuum rotary evaporator, but is not limited thereto.
  • the drying is preferably vacuum drying, vacuum drying, boiling drying, spray drying, or freeze drying, but is not limited thereto.
  • the bean leaf extract of step 4) is preferably a dark brown crude extract, which is a bean leaf extract concentrated under reduced pressure, but is not limited thereto, and the organic solvent is preferably n-hexane, chloroform, ethyl acetate or butanol. , According to a preferred embodiment of the present invention, chloroform is more preferred, but is not limited thereto.
  • the fraction is preferably an n-hexane fraction, a chloroform fraction, an ethyl acetate fraction, a butanol fraction or a water fraction obtained by sequentially systemic fractionation with n-hexane, chloroform, ethyl acetate, butanol and water after suspending the soybean leaf extract in water.
  • the fraction may be obtained by repeating the fractionation process 1 to 5 times, preferably 3 times from the soybean leaf extract, and it is preferable to concentrate under reduced pressure after fractionation, but is not limited thereto.
  • the present invention is a disease caused by estrogen deficiency containing a high content of isoflavone derivatives soybean leaves, extracts of the soybean leaves, or fractions of the extracts as active ingredients prepared by treating soybean leaves with ethylene in dark conditions (dark conditioin). It provides a pharmaceutical composition for prevention and treatment.
  • the disease caused by the estrogen deficiency is preferably any one disease selected from the group consisting of osteoporosis, heart disease, breast cancer, vulvar disease, hyperlipidemia, skin aging, and hot flashes, but is not limited thereto.
  • soybean leaf extracts and fractions thereof containing the above compounds can be usefully used as a pharmaceutical composition for preventing and treating diseases caused by estrogen deficiency. I can.
  • composition of the present invention may further include suitable carriers, excipients, and diluents commonly used in the preparation of pharmaceutical compositions.
  • composition of the present invention can be administered orally or parenterally, and when administered parenterally, it is preferable to select an injection method for external use of the skin or intraperitoneal injection, rectal injection, subcutaneous injection, intravenous injection, intramuscular injection or intrathoracic injection. And, it is not limited thereto.
  • composition of the present invention can be formulated and used in the form of oral dosage forms such as powders, granules, tablets, capsules, suspensions, emulsions, syrups, aerosols, etc., external preparations, suppositories, and sterile injectable solutions according to a conventional method. have.
  • Carriers, excipients, and diluents that may be included in the composition include lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, xylitol, erythritol, maltitol, starch, gum acacia, alginate, gelatin, calcium phosphate, calcium silicate, cellulose, methyl cellulose , Microcrystalline cellulose, polyvinyl pyrrolidone, water, methylhydroxybenzoate, propylhydroxybenzoate, talc, magnesium stearate, and mineral oils.
  • Solid preparations for oral administration include tablets, pills, powders, granules, capsules, and the like, and these solid preparations include at least one excipient, such as starch, calcium carbonate, and sucrose, in a mixed herbal preparation. Or it is prepared by mixing lactose, gelatin, and the like. In addition to simple excipients, lubricants such as magnesium stearate and talc are also used.
  • Liquid preparations for oral use include suspensions, liquid solutions, emulsions, syrups, etc.
  • Preparations for parenteral administration include sterile aqueous solutions, non-aqueous solutions, suspensions, emulsions, lyophilized preparations, and suppositories.
  • non-aqueous solvent and suspending agent propylene glycol, polyethylene glycol, vegetable oil such as olive oil, and injectable ester such as ethyl oleate may be used.
  • injectable ester such as ethyl oleate
  • a base for suppositories witepsol, macrogol, tween 61, cacao butter, laurin, glycerogelatin, and the like may be used.
  • the preferred dosage of the composition of the present invention varies depending on the condition and weight of the patient, the degree of disease, the form of the drug, the route and duration of administration, but may be appropriately selected by those skilled in the art. However, for a desirable effect, the composition is preferably administered at 0.0001 to 1 g/kg per day, preferably 0.001 to 200 mg/kg, but is not limited thereto. The administration may be administered once a day, or may be divided several times. The above dosage does not in any way limit the scope of the present invention.
  • the present invention provides a health food for preventing and improving diseases caused by estrogen deficiency containing a high content of isoflavone derivatives soybean leaves, extracts of the soybean leaves, or fractions of the extracts prepared by treating soybean leaves with ethylene as an active ingredient. to provide.
  • the disease caused by the estrogen deficiency is preferably any one disease selected from the group consisting of osteoporosis, heart disease, breast cancer, vulvar disease, hyperlipidemia, skin aging, and hot flashes, but is not limited thereto.
  • soybean leaf extracts and fractions thereof containing the above compounds can be usefully used as health functional foods for preventing and improving diseases caused by estrogen deficiency. I can.
  • the health functional food of the present invention may be added to the isoflavone derivative high content soybean leaf, the extract of the soybean leaf, or a fraction of the extract as it is, or used with other foods or food ingredients, and may be suitably used according to a conventional method. .
  • health functional food refers to a food manufactured using nutrients that are easily deficient in daily meals or raw materials or ingredients having useful functions for the human body, and refers to foods that help maintain human health, but is not limited thereto. It is used as a meaning that includes all health foods in the usual meaning.
  • the form and type of the health functional food is not particularly limited.
  • the health functional food may be in the form of tablets, capsules, powders, granules, liquids, and pills.
  • the health functional food may contain various flavoring agents, sweetening agents, or natural carbohydrates as additional ingredients.
  • the sweetener may be a natural or synthetic sweetener, and examples of the natural sweetener include taumatin and stevia extract.
  • examples of synthetic sweeteners include saccharin and aspartame.
  • the natural carbohydrates may be monosaccharides, disaccharides, polysaccharides, oligosaccharides and sugar alcohols.
  • the health functional food of the present invention includes nutrients, vitamins, electrolytes, flavoring agents, coloring agents, pexane and salts thereof, alginic acid and salts thereof, organic acids, protective colloidal thickeners, pH adjusters, stabilizers, preservatives. , Glycerin, alcohol, and the like may be further included. These ingredients can be used independently or in combination.
  • the proportion of the additive may be selected in the range of 0.01 to 0.1 parts by weight per 100 parts by weight of the composition of the present invention.
  • the high content of the isoflavone derivative of the present invention soybean leaf, the extract of the soybean leaf, or a fraction of the extract may be added to food as it is or used with other foods or food ingredients.
  • the content of the added active ingredient may be determined according to the purpose.
  • the content of the health functional food may be 0.01 to 90 parts by weight of the total food weight.
  • the amount may be less than the above range, and if there is no problem in terms of safety, the active ingredient may be used in an amount greater than the above range.
  • the present invention provides a pharmaceutical composition for antioxidant containing as an active ingredient a high content of isoflavone derivatives soybean leaves, extracts of the soybean leaves, or fractions of the extracts prepared by treating soybean leaves with ethylene in dark conditions do.
  • the present invention provides a health food for antioxidants containing as an active ingredient a high content of isoflavone derivatives soybean leaves, extracts of the soybean leaves, or fractions of the extracts prepared by treating soybean leaves with ethylene in dark conditions. .
  • soybean leaf extracts and fractions thereof containing the above compounds can be usefully used as an antioxidant composition.
  • the present invention provides a pharmaceutical composition for skin beauty containing as an active ingredient a high content of isoflavone derivatives soybean leaves, extracts of the soybean leaves, or fractions of the extracts prepared by treating soybean leaves with ethylene in a dark condition. to provide.
  • the present invention provides a cosmetic composition for skin beauty containing as an active ingredient a high content of isoflavone derivatives soybean leaves, extracts of the soybean leaves, or fractions of the extracts prepared by treating soybean leaves with ethylene in a dark condition. do.
  • the present invention provides a health food for skin beauty containing as an active ingredient a high content of isoflavone derivatives soybean leaves, extracts of the soybean leaves, or fractions of the extracts prepared by treating soybean leaves with ethylene in a dark condition. do.
  • soybean leaf extracts and fractions thereof containing the above compounds can be usefully used as a skin cosmetic composition.
  • the cosmetic composition may include a lotion, ointment, gel, cream, patch, or spray, but is not limited thereto.
  • the extract of the soybean leaf, or a fraction of the extract the isoflavone derivative high content of the present invention in a composition for external application for skin usually contained, the bean leaf
  • the extract of, or a fraction of the extract may be added in an amount of 3 to 30 parts by weight, preferably 5 or 20 parts by weight.
  • soybean leaves in addition to the isoflavone derivatives of the present invention, soybean leaves, extracts of the soybean leaves, or fractions of the extracts, fatty substances, organic solvents, solubilizers, thickeners and gelling agents, emollients, antioxidants, suspending agents , Stabilizers, foaming agents, fragrances, surfactants, water, ionic or nonionic emulsifiers, fillers, sequestering agents and chelating agents, preservatives, vitamins, blockers, wetting agents, essential oils, dyes, pigments , Hydrophilic or lipophilic active agents, lipid vesicles or any other ingredients commonly used in cosmetic compositions, such as adjuvants commonly used in the field of dermatology.
  • ingredients may be introduced in amounts generally used in the field of dermatology.
  • the present invention provides a tea (tea) using soybean leaves with a high content of isoflavone derivatives according to the present invention.
  • the present invention provides a mixture of the isoflavone derivative high content soybean leaf, and a herbal plant having a flavor according to the present invention.
  • It can be prepared by a manufacturing method comprising the step of drying the roasted leaves.
  • the pulverization in step 1) is preferably finely crushed into 1 to 5 mm using a crusher, but the size is not limited thereto.
  • the roasting of step 2) is preferably roasted in a stirrer at a temperature of 250 to 300° C. for 30 to 60 minutes without burning, but the temperature and time are not limited thereto.
  • the drying in step 3) may be dried using natural drying or a dryer, and drying is preferably performed at a temperature of 30 to 50° C. for 24 to 36 hours, but the temperature and time are not limited thereto.
  • the herbal plant is preferably at least one selected from the group consisting of chamomile, lemongrass, rosehip, lavender, peppermint, fennel, rosemary, jasmine, hibiscus, roseflower, apple fruit, strawberry fruit, lemon fruit, and orange flower, and used as tea. Any herbs that can be used can be used.
  • the tea or mixed tea may be processed into a form selected from the group consisting of flavored tea, tea bag, instant tea, and can.
  • Soybean plants 10 to 15 days after sowing were transplanted into an experimental pot and cultivated for 50 to 60 days until the growth time reached R1.
  • the cultivated soybean plant pot was put in a closed space in a dark condition where light is completely blocked, and stabilized for 24 hours at a temperature of 30°C and a humidity of 70%.
  • 3000 ppm of ethylene was treated for 6 to 48 hours depending on the growth state of the bean leaves (the degree of development of the cutin layer), and immediately obtained after the ethylene treatment time elapsed, and dried at 40°C.
  • the bean leaves obtained by the method of ⁇ Example 1> were dried, and 50 ml of 90% ethanol was added to 1 g of the dried bean leaves, followed by sonication for 2 hours, followed by extraction at 40°C.
  • the extracted solvent was concentrated under reduced pressure to obtain an ethanol extract of bean leaves in a yield of 15-20%.
  • the bean leaves obtained by the method of ⁇ Example 1> were dried, and 50 ml of 90% ethanol was added to 1 g of dried bean leaves, followed by extraction at 25° C. for 5 days. The extracted solvent was concentrated under reduced pressure to obtain an ethanol extract of soybean leaves in a yield of 18-22%.
  • the bean leaves obtained by the method of ⁇ Example 1> were dried, and 50 ml of water was added to 1 g of the dried bean leaves, followed by extraction with hot water at 100°C for 24 hours. The extracted solvent was concentrated under reduced pressure to obtain a hot water extract of bean leaves in a yield of 20-25%.
  • HPLC analysis was performed on the extracts prepared in ⁇ Example 2-1> and ⁇ Example 3> to confirm the accumulation degree of isoflavone derivatives in ethylene-treated soybean leaves under dark conditions.
  • UPLC BEH C18 column (2.1mm ⁇ 100mm, 1.7 ⁇ waters) was used, and the elution condition was acetonitrile (solvent B) as a mixed solution of 0.1% formic acid aqueous solution (solvent A) and 0.1% formic acid acetonitrile (solvent B).
  • solvent B acetonitrile
  • Isoflavone derivatives were separated by applying gradient elution as shown in Table 2. At this time, the amount of the injected extraction solution was 1 ⁇ l, and UPLC-ESI-TOF mass spectrometry was performed under the conditions shown in Table 3.
  • BPI Base Peak Intensity
  • the ethanol extract of Example 2-1 was filtered using a membrane filtration filter having a pore of 0.2 ⁇ m, and then the total amount of isoflavones according to the presence or absence of ethylene treatment, treatment concentration, and time was measured.
  • HPLC was performed using 1290 Infinity LC of Agilent Technology (Agilent, USA), and Zolbox Bonus-RP (150 ⁇ 4.6mm) of ODS was used for the column.
  • As the mobile phase 0.1% acetic acid aqueous solution (solvent A) and acetonitrile (solvent B) were used, and gradient elution as shown in Table 4 was applied. The flow rate was adjusted to 1 ml/min, the amount of the injected extraction solution was 10 ⁇ l, and the detection wavelength was analyzed at 254 nm.
  • the standard solution used for the quantitative analysis was prepared by dissolving daidgin and genistine of 98% purity purchased from Sigma (USA) in methanol in a range of 1-100 ⁇ g/ml. HPLC analysis was performed with the prepared standard solution to prepare a calibration curve from the peak area. At this time, the retention time (RT) of Daidjin and Genistin was 13.19 minutes and 23.89 minutes, respectively.
  • Isoflavone ( ⁇ g) Ethylene concentration (ppm) 500 1000 2000 3000 Daidjin 476 1024 1923 2754 Jenistine 938 2016 3787 5424 Malonyldide Gin 1298 2792 5245 7513 Malonylgenistine 2506 5390 10124 14502 sum 4580 9850 18500 26500
  • Example 2 50 bean plant pots for each experimental group were prepared in the same manner and conditions as in Example 1.
  • a bean plant pot grown in light conditions with light was treated with 800 ppm of ethephon at a temperature of 28 ⁇ 10° C. for 96 hours, and then immediately bean leaves were obtained and dried at 40° C.
  • 3000 ppm of ethylene was treated in the closed space under the above conditions for 24 hours. Soybean leaves were immediately obtained and dried at 40°C.
  • the obtained dried soybean leaves were treated in the same conditions and methods as in Experimental Example 3 to prepare an ethanol extract of soybean leaves, and quantitative analysis of the content of isoflavone derivatives was performed.
  • the above ingredients were mixed and filled in an airtight cloth to prepare a powder.
  • tablets were prepared by a direct tableting method.
  • the powder was filled in a hard capsule according to a conventional capsule manufacturing method to prepare a capsule.
  • Each component was added and dissolved in purified water according to a conventional method for preparing a liquid, and lemon flavor was added in an appropriate amount, and the above components were mixed. Then, purified water was added to adjust the total volume to 100 ml, and then filled in a brown bottle and sterilized to prepare a solution.
  • a mixed tea was prepared by mixing soybean leaves having a high content of isoflavone derivatives of the present invention, an extract thereof, or a fraction of the extract and a herbal plant having a flavor.
  • the isoflavone derivative of the present invention isoflavone derivative high content 0.5 to 5.0 parts by weight of soybean leaves, extracts thereof or fractions of the extract were added to flour, and bread, cakes, cookies, crackers and noodles were prepared using a mixture obtained by mixing them.
  • Soybean leaves having a high content of isoflavone derivatives of the present invention, extracts thereof, or fractions of the extracts were added to soups and juices by adding 0.1 to 5.0 parts by weight to meat products for health promotion, soup of noodles, and juices.
  • Ground beef for health promotion was prepared by adding 10 parts by weight of soybean leaves with high content of isoflavone derivatives of the present invention, extracts thereof, or fractions of extracts to ground beef.
  • Soybean leaves having a high content of isoflavone derivatives of the present invention, extracts thereof, or 5 to 10 parts by weight of an extract fraction were added to milk, and various dairy products such as butter and ice cream were prepared using the milk.
  • Brown rice, barley, glutinous rice, and adlay were gelatinized by a known method, dried, and roasted, and then prepared into a powder having a particle size of 60 mesh with a grinder.
  • Black soybeans, black sesame seeds, and perilla seeds were also steamed and dried by a known method, and then roasted, and then prepared into a powder having a particle size of 60 mesh with a grinder.
  • Soybean leaves having a high content of isoflavone derivatives of the present invention, extracts thereof, or fractions of extracts thereof were concentrated under reduced pressure in a vacuum concentrator, sprayed and dried with a hot air dryer, and the resulting dried product was pulverized with a grinder to a particle size of 60 mesh to obtain a dry powder.
  • the grains, seeds, and soybean leaves with a high content of the isoflavone derivative of the present invention, extracts thereof, or fractions of the extracts were prepared by blending in the following ratio.
  • Seeds perilla 7 parts by weight, black beans 8 parts by weight, black sesame 7 parts by weight
  • the resulting solution is stirred and heated at 85° C. for about 1 hour, and the resulting solution is filtered and obtained in a sterilized 1 liter container, sealed and sterilized, and then stored in a refrigerator. It is used in the manufacture of health beverage composition.
  • composition ratio is composed of ingredients suitable for a relatively preferred beverage in a preferred embodiment, but the mixing ratio may be arbitrarily modified according to regional and ethnic preferences such as the demand class, the country of demand, and the purpose of use.

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Botany (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Physiology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Alternative & Traditional Medicine (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Dermatology (AREA)

Abstract

본 발명은 암조건(dark condition)에서 이소플라본 유도체 고함량 콩잎의 제조방법 및 상기 방법으로 제조된 이소플라본 유도체 고함량 콩잎에 관한 것이다. 구체적으로, 암조건에서 파종 후 20일 내지 60일 경과한 콩 식물체(soybean plant)에 일정 농도의 에틸렌을 처리하면 높은 수준의 에너지가 요구되는 광조건에서 에테폰을 처리한 경우보다, 이소플라본 유도체가 콩잎에 높은 농도로 축적됨을 확인하였다. 따라서 본 발명의 방법을 이용할 경우 이소플라본이 매우 높게 함유된 콩잎을 경제적이고 빠르게 제조할 수 있고, 이소플라본 유도체를 고함량으로 함유하는 콩잎, 콩잎의 추출물, 추출 분획물은 에스트로겐 불균형 및 항산화능 결핍에서 유발되는 질환용 식품 및 의약소재로 유용하게 사용될 수 있다.

Description

암조건에서 이소플라본 유도체 고함량 콩잎의 제조방법 및 상기 방법으로 제조된 이소플라본 유도체 고함량 콩잎
본 발명은 암조건(dark condition)에서 이소플라본 유도체 고함량 콩잎의 제조방법, 상기 방법으로 제조된 이소플라본 유도체 고함량 콩잎, 상기 이소플라본 유도체 고함량 콩잎의 용도 및 콩잎으로부터 이소플라본 유도체의 대량 생산 방법에 관한 것이다.
여성호르몬인 에스트로겐은 40대 이후 줄어들기 시작하여 궁극적으로 갱년기를 유발한다. 에스트로겐이 줄어들면 이 호르몬의 작용점인 뼈, 심장, 피부, 뇌 등에 노화가 시작된다. 이러한 노화 진행을 억제하기 위해 에스트로겐 대체제가 절실히 요구되며 구조적인 유사성을 갖는 이소플라본 유도체가 효과적인 에스트로겐 대체제로 보고되고 있다.
이소플라본 유도체는 약리학적 효능이 뛰어난 대표적인 플라보노이드(flavonoid)로서 전세계적으로 이들이 고함유된 기능성 식물개발에 많은 자본이 투자되고 있는 실정이다. 이소플라본은 비스테로이드 에스트로겐(nonsteroid estrogen)으로 화학적 및 생리학적 특성이 에스트로겐과 유사하여 식물성 에스트로겐이라 불리며 경쟁적으로 에스트로겐 수용체와 결합함으로써 에스트로겐 또는 항 에스트로겐 작용을 하는 물질이다(Hudson, 2001). 이들은 여성호르몬인 에스트로겐과 구조가 유사하여 에스트로겐에서 나타나는 유용한 생리활성을 보여준다. 이소플라본을 섭취하면, 여성의 내분비 상태를 조절하고 난소의 주기성에 영향을 미친다고 알려져 있다(Kenneth, Setchell, & Cassidy, 1999). 특히 여성호르몬이 부족하여 나타날 수 있는 갱년기 증세 중 하나인 골다공증의 위험을 감소시키고, 혈장 내 콜레스테롤 수치를 낮추는 것으로 보고되고 있다(Obstetrics & Gynecology 2001. 389). 또한 관상동맥심장질환(coronary arterial heart disease, CAHD)의 위험을 낮추는 효과와 항산화 활성이 뛰어난 것으로 알려져 있다.
이소플라본 유도체는 베타-글리코시드 결합에 의해 당이 연결된 배당체 형태나 당이 떨어져 나간 비배당체 형태로 존재한다. 비배당체로는 제니스테인(genistein), 다이드제인(daidzein) 및 글리시테인(glycitein) 등이 있으며, 배당체로는 제니스틴(genistin), 다이드진(daidzin) 및 글리시틴(glycitin) 등이 있다. 대두유래 비 발효 식품에는 배당체가 많은 반면, 된장과 같은 대두를 이용한 발효식품에는 발효에 관계된 박테리아에 의해 배당체로부터 당이 분해되면서 비배당체가 주로 존재하게 된다.
콩에 있는 제니스테인(genistein) 및 다이드제인(daidzein)과 같은 비배당체는 에스트로겐 수용체(estrogen receptor, ER)인 ER-베타(estrogen receptor beta)에 높은 친화도를 가지고 있어 가장 효과적인 에스트로겐 대체제이다(Endocrinology 1997, 863). 이와 같이 콩 이소플라본은 에스트로겐 대체제로 유용한 생물소재이지만 콩에 포함된 단백질, 지방 및 탄수화물의 함량이 높아 이소플라본 유도체의 추출, 정제 및 제품화와 같은 가공과정에 어려움이 있다.
이소플라본이 고함유된 콩 개발을 위해 많은 연구가 진행되고 있으며, 최근에 콩잎에 에틸렌 또는 에틸렌 공여체인 에테폰을 처리하여 이소플라본 유도체 고함유 콩잎을 생산하는 재배 방법 기술이 보고되었다. 이는 이소플라본 유도체가 13,000 μg/ml이상 축적된 콩잎을 넓은 면적의 필드에서 생산할 수 있는 효과적인 기술이나(한국 등록특허 제 10-1451298), 밀폐된 공간에서만 가능하다는 점, 소비자들이 화학물질인 에테폰에 대해 거부감을 가지고 있다는 점 및 높은 수준의 에너지가 요구되는 LED 인조 전등이 반드시 필요하다는 점에서 한계가 있다.
식물의 광합성 과정은 명반응(light reaction)과 암반응(dark reaction)으로 나누어지는데, 암반응에서는 캘빈 베니슨 회로(Calvin Benison cycle)에 의해 대사체들이 합성된다(J. Biol. Chem. 1950, 781). 본 발명자들은 에너지가 요구되지 않는 암조건에서 이소플라본 유도체 고함유 콩잎 재배 기술을 연구하던 중, 명반응에서 얻어진 ATP와 NADPH를 암조건(dark condition)에서 이용하여 일차 대사산물인 탄수화물을 비롯한 이차 대사체 합성이 가능함을 알아내었다.
이에, 본 발명자들은 암조건이라도 밀폐된 공간에서 콩 식물체에 높은 농도의 에틸렌을 콩잎에 처리하면 보다 높은 효율로 이소플라본 고함유 콩잎을 생산할 수 있음을 밝히고 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 목적은 암조건(dark condition)에서 콩잎에 에틸렌을 처리하는 단계를 포함하는 이소플라본 유도체 고함량 콩잎의 제조방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 상기 제조방법으로 제조된 이소플라본 유도체 고함량 콩잎을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 이소플라본 유도체 고함량 콩잎, 콩잎의 추출물, 또는 상기 추출물의 분획물을 포함하는 식품 및 의약소재 용도를 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 암조건(dark condition)에서 에틸렌을 이용하여 콩잎으로부터 이소플라본 유도체를 대량 생산하는 방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 암조건(dark condition)에서 에틸렌(ethylene)을 처리하는 단계를 포함하는 하기 [화학식 1]로 표기되는 이소플라본 유도체 고함량 콩잎의 제조방법을 제공한다;
[화학식 1]
Figure PCTKR2020009766-appb-img-000001
(상기 화학식 1에서, R 1은 독립적으로 H 또는 OH이고, R 2는 독립적으로 글루코오스(glucose) 또는 글루코오스 말로네이트(glucose malonate)이다.)
또한, 본 발명은 상기 제조방법으로 제조된 이소플라본 유도체 고함량 콩잎을 제공한다.
또한, 본 발명은 본 발명에 따른 이소플라본 유도체 고함량 콩잎, 상기 콩잎의 추출물, 또는 상기 추출물의 분획물을 포함하는 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 본 발명에 따른 이소플라본 유도체 고함량 콩잎, 상기 콩잎의 추출물, 또는 상기 추출물의 분획물을 유효성분으로 함유하는 에스트로겐 결핍에 기인한 질환의 예방 및 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 본 발명에 따른 이소플라본 유도체 고함량 콩잎, 상기 콩잎의 추출물, 또는 상기 추출물의 분획물을 유효성분으로 함유하는 에스트로겐 결핍에 기인한 질환의 예방 및 개선용 건강식품을 제공한다.
또한, 본 발명은 본 발명에 따른 이소플라본 유도체 고함량 콩잎, 상기 콩잎의 추출물, 또는 상기 추출물의 분획물을 유효성분으로 함유하는 항산화용 약학적 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 본 발명에 따른 이소플라본 유도체 고함량 콩잎, 상기 콩잎의 추출물, 또는 상기 추출물의 분획물을 유효성분으로 함유하는 항산화용 건강식품을 제공한다.
또한, 본 발명은 본 발명에 따른 이소플라본 유도체 고함량 콩잎, 상기 콩잎의 추출물, 또는 상기 추출물의 분획물을 유효성분으로 함유하는 피부미용용 약학적 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 본 발명에 따른 이소플라본 유도체 고함량 콩잎, 상기 콩잎의 추출물, 또는 상기 추출물의 분획물을 유효성분으로 함유하는 피부미용용 화장료 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 본 발명에 따른 이소플라본 유도체 고함량 콩잎, 상기 콩잎의 추출물, 또는 상기 추출물의 분획물을 유효성분으로 함유하는 피부미용용 건강식품을 제공한다.
또한, 본 발명은 본 발명에 따른 이소플라본 유도체 고함량 콩잎을 이용한 차(Tea)를 제공한다.
또한, 본 발명은 본 발명에 따른 이소플라본 유도체 고함량 콩잎을 이용한 차(Tea)의 제조방법을 제공한다.
또한, 본 발명은 에틸렌(ethylene)을 이용하여 콩잎으로부터 이소플라본 유도체를 대량 생산하는 방법을 제공한다.
아울러, 본 발명은
1) 암조건(dark condition)에서 콩잎에 에틸렌을 처리하여 콩잎을 제조하는 단계; 및
2) 상기 단계 1)의 콩잎을 추출하여 이소플라본 유도체를 분리하는 단계를 포함하는 이소플라본 유도체의 대량 생산 방법을 제공한다.
본 발명은 암조건(dark condition)에서 파종 후 20일 내지 60일 경과한 콩 식물체(soybean plant)에 일정 농도의 에틸렌을 처리하면 높은 수준의 에너지가 요구되는 광조건에서 에테폰을 처리한 경우보다 이소플라본 유도체가 콩잎에 높은 농도로 축적됨을 확인하였다. 따라서 본 발명의 방법을 이용할 경우 이소플라본이 매우 높게 함유된 콩잎을 경제적이고 빠르게 제조할 수 있고, 이소플라본 유도체를 고함량으로 함유하는 콩잎, 콩잎의 추출물, 추출 분획물은 에스트로겐 불균형 및 항산화능 결핍에서 유발되는 질환용 식품 및 의약소재로 유용하게 사용될 수 있다.
도 1은 에틸렌을 처리하지 않은 콩잎 에탄올 추출물의 HPLC 크로마토그램을 나타낸 도이다.
도 2는 암조건에서 에틸렌을 처리하여 얻은 콩잎 에탄올 추출물의 HPLC 크로마토그램(검출파장: 254nm)을 나타낸 도이다(피크 a: 다이드진, 피크 b: 제니스틴, 피크 c: 말로닐 다이드진, 및 피크 d: 말로닐 제니스틴).
도 3은 암조건에서 에틸렌을 처리하여 얻은 콩잎 열수 추출물의 HPLC 크로마토그램(검출파장: 254nm)을 나타낸 도이다(피크 a: 다이드진, 피크 b: 제니스틴).
도 4는 암조건에서 에틸렌을 처리하여 얻은 콩잎 에탄올 추출물의 LC-ESI-TOF/MS의 BPI(Base Peak Intensity) 크로마토그램을 나타낸 도이다(피크 a: 다이드진, 피크 b: 제니스틴, 피크 c: 말로닐 다이드진, 및 피크 d: 말로닐 제니스틴).
도 5는 도 4(LC-ESI-TOF/MS의 BPI) 피크 a의 고분해능질량분석 (HRESIMS) 스펙트럼을 나타낸 도이다.
도 6은 도 4(LC-ESI-TOF/MS의 BPI) 피크 b의 고분해능질량분석 (HRESIMS) 스펙트럼을 나타낸 도이다.
도 7은 도 4(LC-ESI-TOF/MS의 BPI) 피크 c의 고분해능질량분석 (HRESIMS) 스펙트럼을 나타낸 도이다.
도 8은 도 4(LC-ESI-TOF/MS의 BPI) 피크 d의 고분해능질량분석 (HRESIMS) 스펙트럼을 나타낸 도이다.
도 9는 에틸렌을 처리하지 않은 콩잎, 광조건에서 에테폰을 처리한 콩잎 및 암조건에서 에틸렌을 처리한 콩잎의 이소플라본 총 함량을 비교한 도이다.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
본 발명은 암조건(dark condition)에서 콩잎에 에틸렌(ethylene)을 처리하는 단계를 포함하는 이소플라본 유도체 고함량 콩잎의 제조방법을 제공한다.
상기 암조건에서의 에틸렌 처리는 광이 완전히 차단된 밀폐된 공간에서 이루어지는 것일 수 있다.
상기 밀폐 공간의 온도는 20℃ 내지 40℃인 것이 바람직하고, 25℃ 내지 35℃인 것이 더욱 바람직하나 이에 한정되지 않는다.
상기 밀폐 공간의 습도는 50% 내지 80%인 것이 바람직하고, 60% 내지 70% 인 것이 더욱 바람직하나 이에 한정되지 않는다.
상기 콩잎은 파종 후 20일 이상 경과한 콩잎인 것이 바람직하고, 파종 후 50일 경과한 콩잎인 것이 더욱 바람직하나 이에 한정되지 않는다.
상기 에틸렌은 가장 간단한 올레핀계 탄화수소(화학식: C 2H 4)로 무색이며, 감미가 있는 기체이다. 식물호르몬의 일종으로서 청과물의 수확 뒤의 생리변화, 특히 원예작물의 성숙이나 엽채류의 황색화 등 식물조직의 성숙을 촉진하는 작용을 갖는다.
상기 에틸렌은 500 내지 4000 ppm의 농도로 처리하는 것이 바람직하며, 2500 내지 3500 ppm의 농도로 처리하는 것이 더욱 바람직하나 이에 한정되지 않는다.
상기 에틸렌은 6시간 내지 72시간 처리하는 것이 바람직하며, 6시간 내지 48시간 처리하는 것이 더욱 바람직하나 이에 한정되지 않는다.
상기 에틸렌은 콩잎 수확 전 또는 수확 후 처리가 가능하고, 콩잎 수확 전에 처리하는 것이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.
상기 이소플라본 유도체는 하기 [화학식 1]로 표기되는 화합물인 것이 바람직하고, 하기 [화학식 2] 내지 [화학식 5]로 표기되는 화합물 중 어느 하나인 것이 더욱 바람직하나 이에 한정되지 않는다.
Figure PCTKR2020009766-appb-img-000002
(상기 화학식 1에서, R 1은 독립적으로 H 또는 OH이고, R 2는 독립적으로 글루코오스(glucose) 또는 글루코오스 말로네이트(glucose malonate)이다.)
Figure PCTKR2020009766-appb-img-000003
Figure PCTKR2020009766-appb-img-000004
Figure PCTKR2020009766-appb-img-000005
Figure PCTKR2020009766-appb-img-000006
또한, 본 발명은 상기 제조방법으로 제조된 이소플라본 유도체 고함량 콩잎을 제공한다.
상기 이소플라본 유도체는 상기 [화학식 1]로 표기되는 화합물인 것이 바람직하고, 상기 [화학식 2] 내지 [화학식 5]로 표기되는 화합물 중 어느 하나인 것이 더욱 바람직하나 이에 한정되지 않는다.
본 발명의 구체적인 실시예에서, 본 발명자들은 콩 파종 후 20일 내지 60일의 콩 식물체에 암조건에서 에틸렌을 처리한 결과, 처리 전보다 처리 후 콩잎에 이소플라본 유도체가 현저히 증가하는 것을 확인하였다(도 1 내지 도 3 참조). 또한, 에틸렌을 처리하지 않은 콩잎에서는 이소플라본 유도체가 검출되지 않았고, 암조건에서 에틸렌을 처리한 콩잎에서는 4종의 이소플라본 유도체인 다이드진(daidzin), 제니스틴(genistin), 말로닐 다이드진(malonyldaidzin), 말로닐 제니스틴(malonylgenistin)이 콩잎에 급격히 축적됨을 확인하였다(표 5 및 표 6 참조). 또한, 상기 암조건에서 에틸렌을 처리한 콩잎을 에탄올로 추출하여 추출물을 획득하고, 이를 분리 정제하여 4종의 이소플라본 유도체, 다이드진(daidzin), 제니스틴(genistin), 말로닐 다이드진(malonyldaidzin) 및 말로닐 제니스틴(malonylgenistin)을 획득하였다(도 4 내지 도 8 참조).
또한, 본 발명자들은 암조건에서 에틸렌 처리 후 수확한 콩잎에서 분리된 4종의 이소플라본 유도체, 다이드진(daidzin), 제니스틴(genistin), 말로닐 다이드진(malonyldaidzin) 및 말로닐 제니스틴(malonylgenistin)에 대한 정량분석을 수행한 결과, 암조건에서 에틸렌을 처리한 후 수확한 콩잎의 경우 광조건에서 에테폰을 처리한 콩잎에 비해 이소플라본 유도체의 함량이 현저하게 증가하는 것을 확인함으로써, 암조건에서 콩잎에 에틸렌을 처리한 후 수확하는 방법이 이소플라본 유도체 고함량 콩잎 제조 방법으로 가능함을 확인하였다(표 7 및 도 9 참조).
또한, 본 발명은 암조건에서 에틸렌을 이용하여 콩잎으로부터 이소플라본 유도체를 대량으로 생산하는 방법을 제공한다.
구체적으로, 상기 방법은
1) 암조건(dark condition)에서 콩잎에 에틸렌을 처리하여 콩잎을 제조하는 단계; 및
2) 상기 단계 1)의 콩잎을 추출하여 이소플라본 유도체를 분리하는 단계를 포함하는 방법으로 수행하는 것이 바람직하다.
상기 방법에 있어서, 단계 1)의 콩잎은 파종 후 20일 이상 경과한 콩잎인 것이 바람직하고, 파종 후 50일 경과한 콩잎인 것이 더욱 바람직하며, 파종 후 20 내지 60일 경과한 콩잎이 가장 바람직하다.
상기 방법에 있어서, 단계 1)의 에틸렌은 콩잎 수확 전 또는 수확 후 처리 가능하다.
상기 방법에 있어서, 단계 1)의 에틸렌은 500 내지 4000 ppm의 농도로 처리하는 것이 바람직하며, 2500 내지 3500 ppm의 농도로 처리하는 것이 더욱 바람직하다.
상기 방법에 있어서, 이소플라본 유도체는 상기 [화학식 1]로 표기되는 화합물인 것이 바람직하고, 상기 [화학식 2] 내지 [화학식 5]로 표기되는 화합물 중 어느 하나 이상인 것이 더욱 바람직하다.
본 발명은 암조건에서 에틸렌을 콩잎에 처리하여 이소플라본 유도체가 고함유된 콩잎을 제조하고, 상기 제조방법은 이소플라본 유도체의 대량 생산 방법으로 유용하게 이용할 수 있다.
또한, 본 발명은 암조건(dark condition)에서 콩잎에 에틸렌을 처리하여 제조된 이소플라본 유도체 고함량 콩잎, 상기 콩잎의 추출물, 또는 상기 추출물의 분획물을 포함하는 조성물을 제공한다.
상기 콩잎 추출물 또는 이의 분획물은 하기의 단계들을 포함하는 제조방법에 의해 제조되는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다:
1) 콩잎에 추출용매를 가하여 추출하는 단계;
2) 단계 1)의 추출물을 여과하는 단계;
3) 단계 2)의 여과한 추출물을 감압 농축한 후 건조하여 콩잎 추출물을 제조하는 단계; 및
4) 단계 3)의 콩잎 추출물에 추가적으로 유기용매로 추출하여 콩잎 분획물을 제조하는 단계.
상기 방법에 있어서, 단계 1)의 콩잎은 암조건에서 에틸렌 처리 후 이소플라본이 높은 농도로 축적된 콩 식물체에서 채취하여 사용한다. 상기 에틸렌 처리는 식물체를 채취하고 난 후에도 가능하나 채취하기 전에 처리하는 것이 더욱 바람직하다. 상기 에틸렌을 처리한 콩 식물체는 잎, 잎 또는 뿌리 모두 이용가능하고 이에 한정하지 않으나, 본 발명의 바람직한 실시예에 의하면 콩잎을 사용하는 것이 바람직하다.
상기 방법에 있어서, 상기 단계 1)의 추출용매는 물, 알코올 또는 이들의 혼합물을 사용하는 것이 바람직하다. 상기 알코올로는 C 1 내지 C 2 저급 알코올을 이용하는 것이 바람직하며, 저급 알코올로는 에탄올 또는 메탄올을 이용하는 것이 바람직하다. 추출방법으로는 진탕추출, Soxhlet 추출 또는 환류 추출을 이용하는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다. 상기 추출용매를 건조된 콩잎 분량에 1 내지 10배 첨가하여 추출하는 것이 바람직하고, 4 내지 6배 첨가하여 추출하는 것이 더욱 바람직하다. 추출온도는 20℃ 내지 100℃ 인 것이 바람직하고, 20℃ 내지 40℃인 것이 더욱 바람직하나, 이에 한정하지 않는다. 또한, 추출시간은 10 내지 48시간인 것이 바람직하며, 15 내지 30시간인 것이 더욱 바람직하고, 24시간인 것이 가장 바람직하나, 이에 한정하지 않는다. 아울러, 추출 횟수는 1 내지 5회인 것이 바람직하며, 3 내지 4회 반복 추출하는 것이 더욱 바람직하고, 3회인 것이 가장 바람직하나, 이에 한정되는 것은 아니다.
상기 방법에 있어서, 단계 3)의 감압농축은 진공감압농축기 또는 진공회전증발기를 이용하는 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다. 또한, 건조는 감압건조, 진공건조, 비등건조, 분무건조 또는 동결건조하는 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다.
상기 방법에 있어서, 단계 4)의 콩잎 추출물은 감압농축된 콩잎 추출물인 흑갈색 조추출물을 이용하는 것이 바람직하나 이에 한정하지 않으며, 또한, 유기용매는 n-헥산, 클로로포름, 에틸아세테이트 또는 부탄올인 것이 바람직하고, 본 발명의 바람직한 실시예에 의하면 클로로포름인 것이 더욱 바람직하나 이에 한정하지 않는다. 상기 분획물은 콩잎 추출물을 물에 현탁시킨 후 n-헥산, 클로로포름, 에틸아세테이트, 부탄올 및 물로 순차적으로 계통 분획하여 수득한 n-헥산 분획물, 클로로포름 분획물, 에틸아세테이트 분획물, 부탄올 분획물 또는 물 분획물인 것이 바람직하나, 이에 한정하지 않는다. 상기 분획물은 상기 콩잎 추출물로부터 분획 과정을 1 내지 5회, 바람직하게는 3회 반복하여 수득할 수 있고, 분획 후 감압 농축하는 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다.
또한, 본 발명은 암조건(dark conditioin)에서 콩잎에 에틸렌을 처리하여 제조된 이소플라본 유도체 고함량 콩잎, 상기 콩잎의 추출물, 또는 상기 추출물의 분획물을 유효성분으로 함유하는 에스트로겐 결핍에 기인한 질환의 예방 및 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
상기 에스트로겐 결핍에 기인한 질환은 골다공증, 심장질환, 유방암, 외음질 질환, 과지질혈증, 피부노화 및 안면홍조로 구성된 군으로부터 선택된 어느 하나의 질환인 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다.
본 발명의 이소플라본 고함량 콩잎에서 분리한 이소플라본 유도체들은 생리활성이 확립되어 있으므로, 상기 화합물들을 포함하는 콩잎 추출물 및 이의 분획물을 에스트로겐 결핍에 기인한 질환 예방 및 치료용 약학적 조성물로 유용하게 사용할 수 있다.
상기 본 발명의 조성물은 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다.
상기 본 발명의 조성물은 경구 또는 비경구 투여할 수 있으며, 비경구 투여시 피부 외용 또는 복강내주사, 직장내주사, 피하주사, 정맥주사, 근육내 주사 또는 흉부내 주사 주입방식을 선택하는 것이 바람직하며, 이에 한정되는 것은 아니다.
상기 본 발명의 조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 상기 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토오스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로오스, 메틸 셀룰로오스, 미정질 셀룰로오스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 혼합생약재에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로오스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한, 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.
본 발명의 조성물의 바람직한 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 그러나, 바람직한 효과를 위해서, 상기 조성물은 1일 0.0001 내지 1 g/kg으로, 바람직하게는 0.001 내지 200 mg/kg으로 투여하는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다. 상기 투여는 하루에 한 번 투여할 수도 있고, 수 회 나누어 투여할 수도 있다. 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.
또한, 본 발명은 콩잎에 에틸렌을 처리하여 제조된 이소플라본 유도체 고함량 콩잎, 상기 콩잎의 추출물, 또는 상기 추출물의 분획물을 유효성분으로 함유하는 에스트로겐 결핍에 기인한 질환의 예방 및 개선용 건강식품을 제공한다.
상기 에스트로겐 결핍에 기인한 질환은 골다공증, 심장질환, 유방암, 외음질 질환, 과지질혈증, 피부노화 및 안면홍조로 구성된 군으로부터 선택된 어느 하나의 질환인 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다.
본 발명의 이소플라본 고함유 콩잎에서 분리한 이소플라본 유도체들은 생리활성이 확립되어 있으므로, 상기 화합물들을 포함하는 콩잎 추출물 및 이의 분획물을 에스트로겐 결핍에 기인한 질환 예방 및 개선용 건강기능식품으로 유용하게 사용할 수 있다.
본 발명의 건강기능식품은 상기 이소플라본 유도체 고함량 콩잎, 상기 콩잎의 추출물, 또는 상기 추출물의 분획물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다.
본 명세서의 "건강기능식품"이란 일상 식사에서 결핍되기 쉬운 영양소나 인체에 유용한 기능을 가진 원료나 성분을 사용하여 제조한 식품으로, 인체의 건강을 유지하는데 도움을 주는 식품을 의미하나 이에 한정되지 않으며 통상적인 의미의 건강식품을 모두 포함하는 의미로 사용한다.
건강기능식품의 형태 및 종류는 특별히 제한되지 않는다. 구체적으로, 상기 건강기능식품은 정제, 캅셀, 분말, 과립, 액상 및 환의 형태일 수 있다. 상기 건강기능식품은 추가성분으로서 여러 가지 향미제, 감미제 또는 천연 탄수화물을 포함할 수 있다. 상기 감미제는 천연 또는 합성 감미제일 수 있고, 천연 감미제의 예로는 타우마틴, 스테비아 추출물 등이 있다. 한편, 합성 감미제의 예로는 사카린, 아스파탐 등이 있다. 또한, 상기 천연 탄수화물은 모노사카라이드, 디사카라이드, 폴리사카라이드, 올리고당 및 당알코올 등일 수 있다.
본 발명의 건강기능식품은 상기 서술한 추가성분 외에, 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙스탄 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올 등을 더 포함할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합으로 사용될 수 있다. 상기 첨가제의 비율은 본 발명의 조성물의 100 중량부당 0.01 내지 0.1 중량부의 범위에서 선택될 수 있다.
본 발명의 이소플라본 유도체 고함량 콩잎, 상기 콩잎의 추출물, 또는 상기 추출물의 분획물은 식품에 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있다. 이때, 첨가되는 유효성분의 함량은 목적에 따라 결정될 수 있다. 일반적으로, 건강기능식품 중의 함량은 전체 식품 중량의 0.01 내지 90 중량부일 수 있다. 그러나 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없다면 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다.
또한, 본 발명은 암조건(dark condition)에서 콩잎에 에틸렌을 처리하여 제조된 이소플라본 유도체 고함량 콩잎, 상기 콩잎의 추출물, 또는 상기 추출물의 분획물을 유효성분으로 함유하는 항산화용 약학적 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 암조건(dark condition)에서 콩잎에 에틸렌을 처리하여 제조된 이소플라본 유도체 고함량 콩잎, 상기 콩잎의 추출물, 또는 상기 추출물의 분획물을 유효성분으로 함유하는 항산화용 건강식품을 제공한다.
본 발명의 이소플라본 고함유 콩잎에서 분리한 이소플라본 유도체들은 생리활성이 확립되어 있으므로, 상기 화합물들을 포함하는 콩잎 추출물 및 이의 분획물을 항산화용 조성물로 유용하게 사용할 수 있다.
또한, 본 발명은 암조건(dark condition)에서 콩잎에 에틸렌을 처리하여 제조된 이소플라본 유도체 고함량 콩잎, 상기 콩잎의 추출물, 또는 상기 추출물의 분획물을 유효성분으로 함유하는 피부미용용 약학적 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 암조건(dark condition)에서 콩잎에 에틸렌을 처리하여 제조된 이소플라본 유도체 고함량 콩잎, 상기 콩잎의 추출물, 또는 상기 추출물의 분획물을 유효성분으로 함유하는 피부미용용 화장료 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 암조건(dark condition)에서 콩잎에 에틸렌을 처리하여 제조된 이소플라본 유도체 고함량 콩잎, 상기 콩잎의 추출물, 또는 상기 추출물의 분획물을 유효성분으로 함유하는 피부미용용 건강식품을 제공한다.
본 발명의 이소플라본 고함유 콩잎에서 분리한 이소플라본 유도체들은 생리활성이 확립되어 있으므로, 상기 화합물들을 포함하는 콩잎 추출물 및 이의 분획물을 피부미용용 조성물로 유용하게 사용할 수 있다.
상기 화장료 조성물은 로션, 연고, 겔, 크림, 패치 또는 분무제 등이 있으나 여기에 국한되는 것은 아니다. 본 발명의 이소플라본 유도체 고함량 콩잎, 상기 콩잎의 추출물, 또는 상기 추출물의 분획물을 함유하는 화장료 조성물을 제조함에 있어서, 통상적으로 함유되는 피부 외용제 조성물에 본 발명의 이소플라본 유도체 고함량 콩잎, 상기 콩잎의 추출물, 또는 상기 추출물의 분획물이 3 내지 30 중량부, 바람직하게는 5 또는 20 중량부로 첨가할 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물에는 본 발명의 이소플라본 유도체 고함량 콩잎, 상기 콩잎의 추출물, 또는 상기 추출물의 분획물에 추가로 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉쇄제 및 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 화장료 조성물에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 피부 과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다.
또한 상기 성분들은 피부 과학 분야에서 일반적으로 사용되는 양으로 도입될 수 있다.
또한, 본 발명은 본 발명에 따른 이소플라본 유도체 고함량 콩잎를 이용한 차(tea)를 제공한다.
또한, 본 발명은 본 발명에 따른 이소플라본 유도체 고함량 콩잎, 및 향미를 갖는 허브 식물체를 혼합한 혼합차를 제공한다.
상기 콩잎를 이용한 차는
1) 본 발명에 따른 이소플라본 유도체 고함량 콩잎를 세척한 후 파쇄하는 단계;
2) 상기 파쇄된 잎를 볶는 단계; 및
3) 상기 볶은 잎을 건조하는 단계를 포함하는 제조방법으로 제조될 수 있다.
상기 방법에 있어서, 단계 1)의 분쇄는 파쇄기를 이용하여 1 내지 5 mm로 잘게 파쇄하는 것이 바람직하나 상기 크기는 이에 한정되지 않는다.
상기 방법에 있어서, 단계 2)의 볶음은 볶음기에서 250 내지 300℃의 온도로 30 내지 60분 동안 타지 않게 볶는 것이 바람직하나 상기 온도 및 시간은 이에 한정되지 않는다.
상기 방법에 있어서, 단계 3)의 건조는 자연건조 또는 건조기를 이용하여 건조시킬 수 있으며, 30 내지 50℃의 온도로 24 내지 36시간 동안 건조하는 것이 바람직하나 상기 온도 및 시간은 이에 한정되지 않는다.
상기 허브 식물체는 캐모마일, 레몬그라스, 로즈힙, 라벤다, 페퍼민트, 펜넬, 로즈마리, 자스민, 히비스커스, 로즈플라워, 애플후르츠, 스트로베리후르츠, 레몬후르츠 및 오렌지 플라워로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상인 것이 바람직하고 티로 사용되는 허브는 모두 사용가능하다.
상기 차 또는 혼합차는 착향차, 티백(tea bag), 인스턴트(instant tea) 및 캔(can)으로 구성된 군으로부터 선택된 형태로 가공될 수 있다.
이하, 본 발명을 실시예 및 제조예에 의해 상세히 설명한다.
단 하기 실시예 및 제조예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예 및 제조예에 의해서 한정되는 것은 아니다.
<실시예 1> 암조건에서 에틸렌을 처리한 콩잎의 제조
파종 후 10일 내지 15일이 경과된 콩 식물체를 실험용 포트(pot)에 이식하고, 50일 내지 60일간 생육시기 R1이 될 때까지 재배하였다. 재배된 콩 식물체 포트를 광이 완전히 차단된 암 조건(dark condition)의 밀폐된 공간에 넣고 온도 30℃ 및 습도 70% 조건에서 24시간 안정화 시켰다. 상기 조건의 밀폐된 공간에 3000ppm의 에틸렌을 콩잎의 생육상태(큐틴층의 발달 정도)에 따라 6시간 내지 48시간 처리하였고, 에틸렌 처리 시간 경과 후 바로 수득하여 40℃에서 건조하였다.
<실시예 2> 암조건에서 에틸렌 처리된 콩잎의 에탄올 추출물의 제조
<2-1> 초음파 처리(sonication)를 통한 콩잎의 에탄올 추출물의 제조
상기 <실시예 1>의 방법으로 수득한 콩잎을 건조하고, 건조된 콩잎 1g에 90% 에탄올 50ml를 넣고 2시간 동안 초음파 처리(sonication) 하며 40 ℃에서 추출하였다. 상기 추출한 용매를 감압농축하여 15-20% 수율로 콩잎의 에탄올 추출물을 얻었다.
<2-2> 실온에서 콩잎의 에탄올 추출물의 제조
상기 <실시예 1>의 방법으로 수득한 콩잎을 건조하고, 건조된 콩잎 1g에 90% 에탄올 50ml를 넣고 25℃에서 5일간 추출하였다. 상기 추출한 용매를 감압농축하여18-22 %의 수율로 콩잎의 에탄올 추출물을 얻었다.
<실시예 3> 암조건에서 에틸렌 처리된 콩잎의 열수 추출물의 제조
상기 <실시예 1>의 방법으로 수득한 콩잎을 건조하고, 건조된 콩잎 1g에 물 50ml를 넣고 100℃의 열수로 24시간 추출하였다. 상기 추출한 용매를 감압 농축하여 20 - 25% 수율로 콩잎의 열수 추출물을 얻었다.
<실험예 1> 암조건에서 에틸렌 처리 콩잎의 에탄올 및 열수 추출물에서 이소플라본 유도체 축적 여부 확인
암조건에서 에틸렌 처리된 콩잎의 이소플라본 유도체 축적정도를 확인하기 위해 상기 <실시예 2-1> 및 <실시예 3>에서 준비된 추출물에 대해 HPLC 분석을 수행하였다.
HPLC는 에이질런트 테크놀로지사(Agilent, USA)의 1290 Infinity LC를 이용하였으며, 칼럼은 ODS 계열의 Zolbox Bonus-RP(150×4.6mm)을 사용하였다. 용리속도는 1 ml/분, 용리 조건은 0.1% 아세트산 수용액(용매 A)과 아세토니트릴(용매 B) 혼합용액을 사용하여 아세토니트릴(용매 B)을 표 1과 같은 구배용출(gradient elution)을 적용하여 이소플라본 유도체를 분리하였다. 이 때 254 nm의 검출파장에서 분석하였다.
그 결과, 암조건이라도 에틸렌을 처리하지 않은 콩잎에서는 주로 켐퍼페롤 배당체(kaempferol glycoside)가 대사체로 확인되었고(도 1), 에틸렌을 처리한 경우 도 2 및 도 3에 나타난 바와 같이 이소플라본 유도체가 급격히 축적됨을 확인하였다. 구체적으로, 암조건에서 에틸렌을 처리한 콩잎의 에탄올 추출물의 경우 다이드진(피이크 a), 제니스틴(피이크 b), 말로닐 다이드진(피이크 c), 및 말로닐 제니스틴(피이크 d)이 높은 농도로 검출되었으며, 에틸렌을 처리한 콩잎의 열수 추출물의 경우, 말로닐 다이드진(피이크 c)과 말로닐 제니스틴(피이크 d)은 가수분해되어 다이드진(피이크 a)과 제니스틴(피이크 b)으로 전환되었음을 확인하였다(도 2 및 도 3). 상기 결과는 콩 식물체에 암조건에서 에틸렌을 처리하는 경우 이소플라본 유도체를 고농도로 함유한 콩잎을 수득할 수 있음을 제시한다.
시간(분) 용매 B 농도(%)
0-5 15%
5-20 20%
20-50 50%
<실험예 2> 암조건에서 에틸렌 처리로 얻어진 콩잎의 에틸렌 추출물로부터 이소플라본 유도체의 분리, 정제 및 구조분석
상기 실시예 2-1의 에탄올 추출물에 포함된 이소플라본 유도체에 대해 UPLC-ESI-TOF/MS 분석을 수행하였다.
구체적으로, UPLC BEH C18 칼럼(2.1mm ×100mm, 1.7 μwaters)을 이용하고, 용리조건은 0.1% 포름산 수용액(용매 A)과 0.1% 포름산 아세토니트릴(용매 B) 혼합용액으로 아세토나이트릴(용매 B)을 표 2와 같은 구배용출(gradient elution)을 적용하여 이소플라본 유도체를 분리하였다. 이 때 주입된 추출용액의 양은 1㎕ 였으며, UPLC-ESI-TOF 질량분석은 표 3과 같은 조건으로 수행하였다.
시간(분) 용매 B 농도(%)
0-1 3%
1-5 15%
5-10 25%
10-11 30%
11-12 45%
세부사항 조건
Ionization ESI-positive mode
Capillary voltage 3 kV
Sample cone voltage 40 V
Desolvation gas flow 800 L/h
Cone gas flow 30 L/h
Desolvation temperature 400℃
Ion source temperature 100℃
Data collection m/z 50-1500 rage with a scan time of 0.2 s
Lock mass Leucine-enkephalin(556.2771 Da)
그 결과, 도 4에 나타낸 바와 같이, 이소플라본 유도체 4종의 BPI(Base Peak Intensity) 크로마토그램을 얻었다.
도 4의 피크 a의 고분해능 질량분석(HRESIMS) 스펙트럼에서 [M+H] +는 417.1184 (이론치, 417.1186)로 나타났다. 이로부터 원소조성이 다이드진의 원소조성과 일치하는 C 21H 21O 9임을 확인하였다. 또한 조각이온 255.0652 [M+H-248]는 다이드진에서 글루코실기가 떨어져 나가 생성된 것으로 피크 a는 참고문헌 (J. Agric. Food Chem. 2016, 64, 7315-7324)에 나타난 다이드진과 일치하는바, 다이드진으로 동정하였다(도 5).
[화학식 1]
Figure PCTKR2020009766-appb-img-000007
또한, 도 4의 피크 b 고분해능 질량분석(HRESIMS) 스펙트럼에서 [M+H] +는 433.1133 (이론치, 433.1135)로 나타났다. 이로부터 원소조성이 제니스틴의 원소조성과 일치하는 C 21H 21O 10임을 확인하였다. 또한 조각이온 271.0602 [M+H-248]은 제니스틴에서 글루코실기가 떨어져 나가 생성된 것으로 피크 b는 참고문헌 (J. Agric. Food Chem. 2016, 64, 7315-7324)에 나타난 제니스틴과 일치하는바, 제니스틴으로 동정하였다(도 6).
[화학식 2]
Figure PCTKR2020009766-appb-img-000008
또한, 도 4의 피크 c 고분해능 질량분석(HRESIMS) 스펙트럼에서 [M+H] +는 503.1195 (이론치, 503.1190)로 나타났다. 이로부터 원소조성이 말로닐 다이드진의 원소조성과 일치하는 C 24H 23O 12임을 확인하였다. 또한 조각이온 255.0653 [M+H-248]은 말로닐 다이드진에서 말로닐 글루코실기가 떨어져 나가 생성된 것으로 피크 c는 참고문헌 (J. Agric. Food Chem. 2016, 64, 7315-7324)에 나타난 말로닐 다이드진과 일치하는바, 말로닐 다이드진으로 동정하였다(도 7).
[화학식 3]
Figure PCTKR2020009766-appb-img-000009
또한, 도 4의 피크 d 고분해능 질량분석(HRESIMS) 스펙트럼에서 [M+H] +는 519.1141 (이론치, 519.1139)로 나타났다. 이로부터 원소조성이 말로닐 제니스틴의 원소조성과 일치하는 C 24H 23O 13임을 확인하였다. 또한 조각이온 271.0604 [M+H-248]은 말로닐 제니스틴에서 말로닐 글루코실기가 떨어져 나가 생성된 것으로 피크 d는 참고문헌 (J. Agric. Food Chem. 2016, 64, 7315-7324)에 나타난 말로닐 제니스틴과 일치하는바, 말로닐 제니스틴으로 동정하였다(도 8).
[화학식 4]
Figure PCTKR2020009766-appb-img-000010
<실험예 3> HPLC를 이용한 이소플라본 유도체의 정량분석
상기 실시예 2-1의 에탄올 추출물을 0.2㎛의 공극을 가진 막 여과 필터를 이용하여 여과한 후 에틸렌 처리 유무, 처리 농도 및 시간에 따른 이소플라본 총량을 측정하였다.
구체적으로, HPLC는 에이질런트 테크놀로지사(Agilent, USA)의 1290 Infinity LC를 이용하였으며, 칼럼은 ODS 계열의 Zolbox Bonus-RP(150×4.6mm)을 사용하였다. 이동상은 0.1% 아세트산 수용액(용매 A)과 아세토니트릴(용매 B)을 사용하였으며, 표 4와 같은 구배 용출(gradient elution)을 적용하였다. 유속은 1 ㎖/min로 조절하였고 주입된 추출 용액의 양은 10 ㎕였으며, 검출파장은 254 nm로 분석하였다. 정량분석에 이용한 표준용액은 시그마사(Sigma, 미국)에서 구입한 순도 98%의 다이드진과 제니스틴을 메탄올에 용해시켜 1-100 ㎍/㎖범위로 제조하였다. 제조한 표준용액으로 HPLC 분석을 실시하여 피크 면적(peak area)으로부터 검량선을 작성하였다. 이 때, 다이드진과 제니스틴의 머무름 시간(retention time, RT)은 각각 13.19 분과 23.89 분으로 나타났다.
그 결과, 암조건에서 에틸렌을 다양한 농도로 온도 30±5℃에서 24시간 처리한 경우 이소플라본의 총량은 3000ppm일 때 26500㎍/g로 최고치를 나타내어 3000 ppm이 최적의 에틸렌 농도임을 확인하였다(표 5).
또한, 암조건에서 에틸렌 3000ppm의 농도로 온도 30±5℃에서 6~48시간 처리한 결과, 이소플라본의 총량은 24시간 처리시 26500㎍/g로 최고치를 나타내어 24시간이 최적의 처리 시간임을 확인하였다(표 6).
시간(분) 용매 B 농도(%)
0-5 15%
5-20 20%
20-50 50%
이소플라본(㎍) 에틸렌 농도(ppm)
500 1000 2000 3000
다이드진 476 1024 1923 2754
제니스틴 938 2016 3787 5424
말로닐다이드진 1298 2792 5245 7513
말로닐제니스틴 2506 5390 10124 14502
총 계 4580 9850 18500 26500
이소플라본(㎍) 처리시간(hr)
6 12 24 48
다이드진 996 1964 2754 2557
제니스틴 1961 3869 5424 5036
말로닐다이드진 2716 5358 7513 6974
말로닐제니스틴 5243 10343 14502 13462
총 계 9580 18900 26500 24600
< 실험예 4> 암조건에서 에틸렌을 처리한 경우와 광조건에서 에테폰을 처리한 경우의 이소플라본 유도체 함량 비교 분석
광조건에서 에테폰을 처리하여 제조한 이소플라본 유도체 고함량 콩잎과 본 발명의 암조건에서 에틸렌을 처리하여 제조한 이소플라본 유도체 고함량 콩잎의 이소플라본 유도체 함량을 비교하는 실험을 하기와 같이 수행하였다.
구체적으로, 상기 실시예 1과 동일한 방법 및 조건으로 각 실험군 별 50개의 콩 식물체 포트를 제조하였다. 빛이 있는 광조건에서 재배된 콩 식물체 포트에 800ppm의 에테폰을 28±10℃의 온도에서 96시간 동안 처리한 후 바로 콩잎을 수득하여 40℃에서 건조하였다. 재배된 콩 식물체 포트를 광이 완전히 차단된 암조건의 밀폐된 공간에 넣고 온도 30℃ 및 습도 60% 조건에서 24시간 안정화시킨 후, 상기 조건의 밀폐된 공간에 3000ppm의 에틸렌을 24시간 처리한 후 바로 콩잎을 수득하여 40℃에서 건조하였다. 수득한 건조 콩잎을 상기 실험예 3과 동일한 조건 및 방법으로 처리하여 콩잎의 에탄올 추출물을 제조하고, 이소플라본 유도체 함량 정량 분석을 실시하였다.
그 결과, 하기 표 7 및 도 9에 나타난 바와 같이, 광조건에서 800ppm의 에테폰을 처리한 콩잎에서는 13500㎍/g의 이소플라본 유도체가 함유되어 있었으나, 암조건에서 3000ppm의 에틸렌을 처리한 콩잎에서는 26500㎍/g의 총 이소플라본 유도체가 함유되어 있어 암조건에서 에틸렌을 처리한 경우 약 2배의 이소플라본 유도체 함량이 증가함을 확인할 수 있었다. 또한 이소플라본 유도체 함량 평균값의 표준편차가 암조건에서 에틸렌을 처리한 경우 1/4로 감소하여 표준편차의 균질도가 개선됨을 확인할 수 있었다. 상기 결과는 암조건에서 최적 농도의 에틸렌을 처리하는 경우 이소플라본 유도체 함량이 현저히 증가하며 높은 함량의 이소플라본 유도체가 함유된 콩잎을 안정적으로 수득할 수 있음을 보여준다.
구분 무처리 콩잎 광조건에서 에테폰처리 콩잎 암조건에서 에틸렌처리 콩잎
총이소플라본함량(㎍) <200 13500±2500 26500±600
하기에 본 발명의 조성물을 위한 제조예를 예시한다.
< 제조예 1> 약학적 제제의 제조
<1-1> 산제의 제조
본 발명의 이소플라본 유도체 고함량 콩잎,
이의 추출물 또는 추출물의 분획물 0.1 g
유당 1.5 g
탈크 0.5 g
상기의 성분들을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조하였다.
<1-2> 정제의 제조
본 발명의 이소플라본 유도체 고함량 콩잎,
이의 추출물 또는 추출물의 분획물 0.1 g
락토오스 7.9 g
결정성 셀룰로오스 1.5 g
마그네슘 스테아레이트 0.5 g
상기의 성분들을 혼합한 후 직타법(direct tableting method)으로 정제를 제조하였다.
<1-3> 캡슐제의 제조
본 발명의 이소플라본 유도체 고함량 콩잎,
이의 추출물 또는 추출물의 분획물 0.1 g
옥수수전분 5 g
카르복시 셀룰로오스 4.9 g
상기의 성분들을 혼합하여 분말을 제조한 후, 상기 분말을 통상의 캡슐제의 제조방법에 따라 경질 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.
<1-4> 주사제의 제조
본 발명의 이소플라본 유도체 고함량 콩잎,
이의 추출물 또는 추출물의 분획물 0.1 g
주사용 멸균 증류수 적량
pH 조절제 적량
통상의 주사제의 제조방법에 따라 1 앰플 당(2 ㎖) 상기의 성분 함량으로 제조하였다.
<1-5> 액제의 제조
본 발명의 이소플라본 유도체 고함량 콩잎,
이의 추출물 또는 추출물의 분획물 0.1 g
이성화당 10 g
만니톨 5 g
정제수 적량
통상의 액제의 제조방법에 따라 정제수에 각각의 성분을 가하여 용해시키고, 레몬향을 적량 가한 다음 상기의 성분을 혼합하였다. 그 다음 정제수를 가하여 전체 100 ㎖로 조절한 후 갈색병에 충진하여 멸균시켜 액제를 제조하였다.
< 제조예 2> 건강식품의 제조
<2-1> 혼합차의 제조
본 발명의 이소플라본 유도체 고함량 콩잎, 이의 추출물 또는 추출물의 분획물과 향미를 갖는 허브 식물체를 혼합하여, 혼합차를 제조하였다.
<2-2> 밀가루 식품의 제조
본 발명의 이소플라본 유도체 고함량 콩잎, 이의 추출물 또는 추출물의 분획물 0.5 ~ 5.0 중량부를 밀가루에 첨가하고, 이를 혼합한 혼합물을 이용하여 빵, 케이크, 쿠키, 크래커 및 면류를 제조하였다.
<2-3> 스프 및 육즙(gravies)의 제조
본 발명의 이소플라본 유도체 고함량 콩잎, 이의 추출물 또는 추출물의 분획물 0.1 ~ 5.0 중량부를 스프 및 육즙에 첨가하여 건강 증진용 육가공 제품, 면류의 수프 및 육즙을 제조하였다.
<2-4> 그라운드 비프(ground beef)의 제조
본 발명의 이소플라본 유도체 고함량 콩잎, 이의 추출물 또는 추출물의 분획물 10 중량부를 그라운드 비프에 첨가하여 건강 증진용 그라운드 비프를 제조하였다.
<2-5> 유제품(dairy products)의 제조
본 발명의 이소플라본 유도체 고함량 콩잎, 이의 추출물 또는 추출물의 분획물 5 ~ 10 중량부를 우유에 첨가하고, 상기 우유를 이용하여 버터 및 아이스크림과 같은 다양한 유제품을 제조하였다.
<2-6> 선식의 제조
현미, 보리, 찹쌀, 율무를 공지의 방법으로 알파화한 후 건조시킨 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60 메쉬의 분말로 제조하였다.
검정콩, 검정깨, 들깨도 공지의 방법으로 쪄서 건조시킨 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60 메쉬의 분말로 제조하였다.
본 발명의 이소플라본 유도체 고함량 콩잎, 이의 추출물 또는 추출물의 분획물을 진공 농축기에서 감압농축하고, 분무, 열풍건조기로 건조하여 얻은 건조물을 분쇄기로 입도 60 메쉬로 분쇄하여 건조분말을 얻었다.
상기에서 제조한 곡물류, 종실류 및, 본 발명의 이소플라본 유도체 고함량 콩잎, 이의 추출물 또는 추출물의 분획물을 하기의 비율로 배합하여 제조하였다.
곡물류(현미 30 중량부, 율무 15 중량부, 보리 20 중량부),
종실류(들깨 7 중량부, 검정콩 8 중량부, 검정깨 7 중량부),
본 발명의 이소플라본 유도체 고함량 콩잎, 이의 추출물 또는 추출물의 분획물(3 중량부),
영지(0.5 중량부),
지황(0.5 중량부)
< 제조예 3> 건강 음료의 제조
본 발명의 이소플라본 유도체 고함량 콩잎,
이의 추출물 또는 추출물의 분획물 100 ㎎
구연산 100 ㎎
올리고당 100 ㎎
매실농축액 2 ㎎
타우린 100 ㎎
정제수를 가하여 전체 500 ㎖
통상의 건강음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1 시간 동안 85℃에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 1 ℓ용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관하여 본 발명의 건강음료 조성물 제조에 사용한다.
상기 조성비는 비교적 기호음료에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였으나, 수요계층, 수요국가, 사용용도 등 지역적, 민족적 기호도에 따라서 그 배합 비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.
< 제제예 4> 화장료 조성물의 제조
<4-1> 크림의 제조
본 발명의 이소플라본 유도체 고함량 콩잎,
이의 추출물 또는 추출물의 분획물 4.6 중량부
세토스테아릴알코올 2.8 중량부
밀납 2.6 중량부
스테아린산 1.4 중량부
친유형모노스테아린산글리세린 2 중량부
피이지-100 스테아레이트 1 중량부
세스퀴올레인산소르비탈 1.4 중량부
호호바오일 4 중량부
스쿠알란 3.8 중량부
폴리소르베이트 60 1.1 중량부
마카다미아오일 2 중량부
초산토코페롤 0.2 중량부
메칠폴리실록산 0.4 중량부
에칠파라벤 0.1 중량부
프로필파라벤 0.1 중량부
Euxyl K-400 0.1 중량부
1,3-부틸렌글리콜 7 중량부
메칠파라벤 0.05 중량부
글리세린 6 중량부
d-판테놀 0.2 중량부
트리에탄올아민 0.2 중량부
pt 41891 0.2 중량부
p-H2O 46.05 중량부
<4-2> 로션의 제조
본 발명의 이소플라본 유도체 고함량 콩잎의 추출물 또는 추출물의 분획물 3.5 중량부
세토스테아릴알코올 1.6 중량부
스테아린산 1.4 중량부
친유형모노스테아린산글리세린 1.8 중량부
피이지-100 스테아레이트 2.6 중량부
세스퀴올레인산소르비탈 0.6 중량부
스쿠알렌 4.8 중량부
마카다미아오일 2 중량부
호호바오일 2 중량부
초산토코페롤 0.4 중량부
메칠폴리실록산 0.2 중량부
에칠파라벤 0.1 중량부
프로필파라벤 0.1 중량부
1,3-부틸렌글리콜 4 중량부
메칠파라벤 0.1 중량부
산탄검 0.1 중량부
글리세린 4 중량부
d-판테놀 0.15 중량부
알란토인 0.1 중량부
카르보내(2% aq. Sol) 4 중량부
트리에탄올아민 0.15 중량부
에탄올 3 중량부
pt 41891 0.1 중량부
p-H20 48.3 중량부

Claims (17)

  1. 암조건(dark condition)에서 콩잎에 에틸렌(ethylene)을 처리하는 단계를 포함하는 이소플라본 유도체 고함량 콩잎의 제조방법.
  2. 제1항에 있어서, 상기 콩잎은 파종 후 20일 내지 60일 경과한 콩잎인 것을 특징으로 하는 이소플라본 유도체 고함량 콩잎의 제조방법.
  3. 제1항에 있어서, 상기 에틸렌은 500내지 4000ppm의 농도로 처리하는 것을 특징으로 하는 이소플라본 유도체 고함량 콩잎의 제조방법.
  4. 제1항에 있어서, 상기 이소플라본 유도체는 하기 [화학식 1]로 표기되는 화합물인 것을 특징으로 하는 이소플라본 유도체 고함량 콩잎의 제조방법:
    [화학식 1]
    Figure PCTKR2020009766-appb-img-000011
    .
    .
  5. 제4항에 있어서, 상기 이소플라본 유도체는 하기 [화학식 2] 내지 [화학식 5]로 표기되는 화합물인 것을 특징으로 하는 이소플라본 유도체 고함량 콩잎의 제조방법:
    [화학식 2]
    Figure PCTKR2020009766-appb-img-000012
    ,
    [화학식 3]
    Figure PCTKR2020009766-appb-img-000013
    ,
    [화학식 4]
    Figure PCTKR2020009766-appb-img-000014
    ,및
    [화학식 5]
    Figure PCTKR2020009766-appb-img-000015
    .
  6. 제1항의 제조방법으로 제조된 이소플라본 유도체 고함량 콩잎.
  7. 1) 암조건에서 콩잎에 에틸렌을 처리하여 콩잎을 제조하는 단계; 및
    2) 상기 단계 1)의 콩잎을 추출하여 이소플라본 유도체를 분리하는 단계를 포함하는 이소플라본 유도체의 대량 생산 방법.
  8. 제6항의 이소플라본 유도체 고함량 콩잎, 상기 콩잎의 추출물, 또는 상기 추출물의 분획물을 포함하는 조성물.
  9. 제6항의 이소플라본 유도체 고함량 콩잎, 상기 콩잎의 추출물, 또는 상기 추출물의 분획물을 유효성분으로 함유하는 에스트로겐 결핍에 기인한 질환의 예방 및 치료용 약학적 조성물.
  10. 제9항에 있어서, 상기 에스트로겐 결핍에 기인한 질환은 골다공증, 심장질환, 유방암, 외음질 질환, 과지질혈증, 피부노화 및 안면홍조로 구성된 군으로부터 선택된 어느 하나의 질환인 것을 특징으로 하는 에스트로겐 결핍에 기인한 질환의 예방 및 치료용 약학적 조성물.
  11. 제6항의 이소플라본 유도체 고함량 콩잎, 상기 콩잎의 추출물, 또는 상기 추출물의 분획물을 유효성분으로 함유하는 에스트로겐 결핍에 기인한 질환의 예방 및 개선용 건강기능식품.
  12. 제11항에 있어서, 상기 에스트로겐 결핍에 기인한 질환은 골다공증, 심장질환, 유방암, 외음질 질환, 과지질혈증, 피부노화 및 안면홍조로 구성된 군으로부터 선택된 어느 하나의 질환인 것을 특징으로 하는 에스트로겐 결핍에 기인한 질환의 예방 및 개선용 건강기능식품.
  13. 제6항의 이소플라본 유도체 고함량 콩잎, 상기 콩잎의 추출물, 또는 상기 추출물의 분획물을 유효성분으로 함유하는 항산화용 건강기능식품.
  14. 제6항의 이소플라본 유도체 고함량 콩잎, 상기 콩잎의 추출물, 또는 상기 추출물의 분획물을 유효성분으로 함유하는 피부미용용 약학적 조성물.
  15. 제6항의 이소플라본 유도체 고함량 콩잎, 상기 콩잎의 추출물, 또는 상기 추출물의 분획물을 유효성분으로 함유하는 피부미용용 화장료 조성물.
  16. 제6항의 이소플라본 유도체 고함량 콩잎, 상기 콩잎의 추출물, 또는 상기 추출물의 분획물을 유효성분으로 함유하는 피부미용용 건강기능식품.
  17. 제6항의 이소플라본 유도체 고함량 콩잎을 이용한 차(tea).
PCT/KR2020/009766 2019-07-25 2020-07-24 암조건에서 이소플라본 유도체 고함량 콩잎의 제조방법 및 상기 방법으로 제조된 이소플라본 유도체 고함량 콩잎 Ceased WO2021015583A2 (ko)

Priority Applications (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US17/630,007 US11647710B2 (en) 2019-07-25 2020-07-24 Method for preparation of soybean leaf having high content of isoflavone derivative in dark condition and soybean leaf having high content of isoflavone derivative prepared thereby
EP20843249.2A EP4005372B1 (en) 2019-07-25 2020-07-24 Method for preparation of soybean leaf having high content of isoflavone derivative in dark condition and soybean leaf having high content of isoflavone derivative prepared thereby

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR10-2019-0090238 2019-07-25
KR1020190090238A KR102282625B1 (ko) 2019-07-25 2019-07-25 암조건(dark condition)에서 이소플라본 유도체 고함량 콩잎의 제조방법 및 상기 방법으로 제조된 이소플라본 유도체 고함량 콩잎

Publications (2)

Publication Number Publication Date
WO2021015583A2 true WO2021015583A2 (ko) 2021-01-28
WO2021015583A3 WO2021015583A3 (ko) 2021-03-18

Family

ID=74192899

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/KR2020/009766 Ceased WO2021015583A2 (ko) 2019-07-25 2020-07-24 암조건에서 이소플라본 유도체 고함량 콩잎의 제조방법 및 상기 방법으로 제조된 이소플라본 유도체 고함량 콩잎

Country Status (4)

Country Link
US (1) US11647710B2 (ko)
EP (1) EP4005372B1 (ko)
KR (1) KR102282625B1 (ko)
WO (1) WO2021015583A2 (ko)

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR102894138B1 (ko) * 2021-11-15 2025-12-02 경상국립대학교산학협력단 스마트-대사체 챔버를 이용한 이소플라본 유도체가 증진된 콩 식물체 재배방법
KR102879558B1 (ko) * 2022-12-30 2025-10-31 경상국립대학교산학협력단 이소플라본 유도체가 증진된 녹두 잎의 재배방법 및 그 이용
KR102810188B1 (ko) 2024-07-08 2025-05-22 주식회사 에이치이엠파마 Pmas 기술을 이용한 이퀄 생성자 여부 스크리닝 방법

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101451298B1 (ko) 2013-12-13 2014-10-16 경상대학교산학협력단 이소플라본 유도체 고함량 콩잎 및 그 제조방법

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2007520230A (ja) * 2004-02-06 2007-07-26 コンク ユニヴァーシティ インダストリアル コーペレーション コープ 高濃度イソフラボンを含む発芽豆及びその製造方法
KR100549494B1 (ko) 2004-04-28 2006-02-08 학교법인 건국대학교 이소플라본 강화 발아 콩 및 그 제조방법
CN106047889B (zh) 2016-06-03 2019-09-24 吉林大学 大豆myb转录因子基因提高大豆异黄酮生物合成的应用

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101451298B1 (ko) 2013-12-13 2014-10-16 경상대학교산학협력단 이소플라본 유도체 고함량 콩잎 및 그 제조방법

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
CALVIN BENISON, J. BIOL. CHEM., 1950, pages 781
J. AGRIC. FOOD CHEM., vol. 64, 2016, pages 7315 - 7324
See also references of EP4005372A4

Also Published As

Publication number Publication date
KR20210013672A (ko) 2021-02-05
EP4005372A4 (en) 2022-12-07
WO2021015583A3 (ko) 2021-03-18
KR102282625B1 (ko) 2021-07-29
US11647710B2 (en) 2023-05-16
US20220256796A1 (en) 2022-08-18
EP4005372A2 (en) 2022-06-01
EP4005372B1 (en) 2026-04-08

Similar Documents

Publication Publication Date Title
WO2013176512A1 (en) Panax spp. plant extract with increased content ratio of ginsenoside rg3, rg5, and rk1 produced by microwave irradiation, a method of preparing the panax spp. plant extract, and a composition including the panax spp. plant extract
WO2021137678A1 (ko) 식물 추출물을 함유하는 조성물
WO2021137677A1 (ko) 식물 추출물을 함유하는 조성물
WO2018124508A1 (ko) 3,5-디카페오일퀴닉에시드 또는 국화 추출물을 함유하는 근육 질환 예방 및 치료용 또는 근 기능 개선용 조성물
WO2021015583A2 (ko) 암조건에서 이소플라본 유도체 고함량 콩잎의 제조방법 및 상기 방법으로 제조된 이소플라본 유도체 고함량 콩잎
WO2017030410A1 (ko) 검정콩잎 추출물 및 이로부터 분리한 플라보놀배당체를 유효성분으로 함유하는 대사증후군의 예방 또는 치료용, 또는 항산화용 조성물
WO2022035115A1 (ko) 오리나무 추출물 또는 이로부터 분리된 화합물을 함유하는 골격근 근육관련 질환의 예방 및 치료용 조성물 및 이의 용도
WO2014175543A1 (ko) 복합 추출물을 포함하는 대장염 예방, 개선 또는 치료용 조성물
WO2013183920A1 (ko) 베르베논 유도체를 함유하는 퇴행성 뇌질환 치료 또는 예방용 약학 조성물
WO2014027832A1 (ko) 대장염 예방 또는 치료용 조성물
WO2012067316A1 (ko) 테로카판계 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 대사성 질환 또는 이들의 합병증의 예방 또는 치료용, 또는 항산화용 조성물
WO2015072678A1 (ko) 옥수수수염 유래 메이신을 포함하는 유효물질의 고수율 추출방법
WO2020106084A1 (en) Composition comprising combination of red clover extract and hops extract for improvement of menopausal disorder
WO2020050462A1 (ko) 결명 새싹 유래 나프토파이론 유도체를 포함하는 신경세포 보호용 조성물
WO2010090498A2 (ko) 이고들빼기 추출물, 이의 분획물 또는 이로부터 분리한 화합물을 유효성분으로 함유하는 간 기능 개선용 약학적 조성물 및 간 기능 개선용 건강기능 식품조성물
WO2012138146A2 (ko) 돌콩의 열처리분말 또는 추출물을 유효성분으로 하는 당뇨병 및 당뇨합병증의 예방 및 치료를 위한 조성물
WO2020085826A1 (ko) 육두구 추출물 또는 메이스리그난을 유효성분으로 함유하는 환경오염인자로부터 유도되는 피부자극 완화 및 피부보호용 조성물
WO2015160226A1 (ko) 레드클로버 및 석류의 복합 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물의 여성 갱년기 개선 용도
WO2018062820A1 (ko) 피토에스트로겐을 유효성분으로 포함하는 탈모방지 및 모발 성장 촉진용 조성물
WO2021080297A1 (ko) 달맞이꽃 추출물을 유효성분으로 포함하는 비만 또는 비만으로부터 유도된 대사증후군의 예방 또는 치료용 조성물
WO2016048085A1 (ko) 유효성분의 함량이 향상된 콩 유래 추출물
WO2020145619A1 (ko) 운데칸 또는 운데칸알을 유효성분으로 포함하는 항알러지, 아토피 피부염 개선, 또는 피부 재생용 조성물
WO2010120029A1 (en) Composition comprising the extract of anemarrhena asphodeloides bunge or the compounds isolated from the same for preventing and treating lipid metabolism disorder
WO2022250322A1 (ko) 시금치로부터 분리된 신규 화합물 및 이를 포함하는 염증성 질환 예방 또는 치료용 조성물
WO2019027239A2 (ko) 탈모 방지 또는 발모 촉진용 조성물

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 20843249

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A2

DPE1 Request for preliminary examination filed after expiration of 19th month from priority date (pct application filed from 20040101)
NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2020843249

Country of ref document: EP

Effective date: 20220225

WWG Wipo information: grant in national office

Ref document number: 2020843249

Country of ref document: EP