WO2021052447A1 - 一种乙肝表面抗原抑制剂的晶型及其应用 - Google Patents

一种乙肝表面抗原抑制剂的晶型及其应用 Download PDF

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Definitions

  • the surface antigen protein of hepatitis B virus plays a very important role in the process of HBV invading liver cells, and is of great significance for the prevention and treatment of HBV infection.
  • Surface antigen proteins include large (L), medium (M) and small (S) surface antigen proteins, sharing a common C-terminal S region. They are expressed in an open reading frame, and their different lengths are determined by the three AUG start codons in the reading frame.
  • the three surface antigen proteins include pre-S1/pre-S2/S, pre-S2/S and S domains.
  • the HBV surface antigen protein is integrated into the endoplasmic reticulum (ER) membrane, which is initiated by the N-terminal signal sequence.
  • the present invention provides a method for preparing the crystal form of compound A of formula (I), which comprises adding any form of compound of formula (I) to alcohol solvent, acetone, ethyl acetate, acetonitrile or alcohol solvent, acetone, acetonitrile and Stir in water at a certain temperature for a period of time, then filter, and dry the filter cake to obtain crystal form A.
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Abstract

一种乙肝表面抗原抑制剂的晶型及其制备方法，以及所述晶型在制备乙肝表面抗原抑制剂中的应用。

Description

一种乙肝表面抗原抑制剂的晶型及其应用
本申请要求申请日为2019/9/19的中国专利申请201910887908.1的优先权。本申请引用上述中国专利申请的全文。
技术领域
本发明涉及一种乙肝表面抗原抑制剂的晶型及其制备方法，还包括所述晶型在制备乙肝表面抗原抑制剂中的应用。
背景技术
乙型病毒性肝炎，简称乙肝，是一种由乙型肝炎病毒(Hepatitis B Virus，简称HBV)感染机体后所引起的疾病。乙型肝炎病毒是一种嗜肝病毒，主要存在于肝细胞内并损害肝细胞，引起肝细胞炎症、坏死、纤维化。乙型病毒性肝炎分急性和慢性两种。急性乙型肝炎在成年人中大多数可通过其自身的免疫机制而自愈。但是慢性乙型肝炎(CHB)已成为全球健康保健所面临的极大挑战，同时也是引起慢性肝病，肝硬化(cirrhosis)和肝癌(HCC)的主要原因。据估计，全球有20亿人感染了慢性乙型肝炎病毒，超过3亿5千万人口已发展成为了乙型肝炎，每年近60万人死于慢性乙型肝炎的并发症。我国是乙肝高发区，乙型肝炎累积病人多，危害严重。据资料显示，我国现有乙型肝炎病毒感染者约9300万，而其中约2000万患者确诊为慢性乙型肝炎，当中10％-20％可演变成肝硬化，1％-5％可发展成肝癌。
乙肝功能性治愈的关键是清除HBsAg(乙型肝炎病毒表面抗原)，产生表面抗体。HBsAg量化是一个非常重要的生物指标。在慢性感染病人中，很少能观察到HBsAg的减少和血清转化，这是目前治疗的终点。
乙型肝炎病毒(HBV)的表面抗原蛋白在HBV侵入肝细胞的过程中起非常重要的作用，对于防治HBV的感染有重要意义。表面抗原蛋白包括大(L)、中(M)和小(S)的表 面抗原蛋白，共享共同的C端S区。它们从一个开放读码框中表达，其不同的长度是由读码框三个AUG起始密码子决定的。这三个表面抗原蛋白包括前S1/前S2/S，前S2/S和S域。HBV表面抗原蛋白被整合到内质网(ER)膜，由N端信号序列启动。它们不仅构成了病毒体的基本结构，而且还形成球状和丝状亚病毒颗粒(SVPs，HBsAg)，聚集在ER，宿主ER和前高尔基体器，SVP包含大多S表面抗原蛋白。L蛋白，在病毒的形态发生与核衣壳相互作用方面是至关重要的，但对于SVP的形成是没有必要的。由于它们缺乏核衣壳，所述的SVPs是非感染性的。SVPs大大参与了疾病进展，尤其是对乙肝病毒的免疫应答，在感染者的血液里，SVPs的量至少是病毒数量的10，000倍，诱捕了免疫系统，削弱人体对乙肝病毒的免疫反应。HBsAg也可抑制人的天然免疫，能够抑制多糖(LPS)和IL-2诱导的细胞因子产生，抑制树状细胞DC功能以及LPS对ERK-1/2和c-Jun N端的干扰激酶-1/2在单核细胞的诱导活性。值得注意的是，肝硬化和肝细胞癌的疾病进展很大程度也与持续分泌的HBsAg相关。这些研究结果表明HBsAg在慢性肝炎的发展中起重要作用。
目前被批准上市的抗HBV药物主要是免疫调节剂(干扰素-α和聚乙二醇干扰素-α-2α)和抗病毒治疗药物(拉米夫定、阿德福韦酯、恩替卡韦、替比夫定、替诺福韦、克拉夫定等)。其中，抗病毒治疗药物属于核苷酸类药物，其作用机制是抑制HBV DNA的合成，并不能直接减少HBsAg水平。与延长治疗一样，核苷酸类药物显示HBsAg清除速度类似于自然观察结果。
临床已有疗法降低HBsAg疗效不佳，因此，开发能够有效降低HBsAg的小分子口服抑制剂是目前临床用药所亟需的。
罗氏公司开发了一个名为RG7834的表面抗原抑制剂用于治疗乙肝，并报道了该化合物在土拨鼠抗乙肝模型中的药效：在以RG7834作为单药使用时可以降低2.57个Log的表面抗原，降低1.7个Log的HBV-DNA。目前仍然需要有新的能够有效降低乙肝表面抗原的化合物，尤其是用作预防或治疗慢性乙型肝炎的药物。
发明内容
本发明提供了式(I)化合物的A晶型的X射线粉末衍射图谱在下列2θ角处具有特征衍射峰：6.30±0.20°、9.30±0.20°和20.16±0.20°；
Figure PCTCN2020116051-appb-000001
本发明的一些方案中，上述A晶型的X射线粉末衍射图谱在下列2θ角处具有特征衍射峰：6.30±0.20°、9.30±0.20°、9.84±0.20°、18.68±0.20°、20.16±0.20°、23.06±0.20°、24.00±0.20°和25.38±0.20°。
本发明的一些方案中，上述A晶型的X射线粉末衍射图谱在下列2θ角处具有特征衍射峰：6.30±0.20°、9.30±0.20°、9.84±0.20°、12.84±0.20°、18.68±0.20°、20.16±0.20°、21.26±0.20°、23.06±0.20°、24.00±0.20°、25.38±0.20°。
本发明的一些方案中，上述A晶型的X射线粉末衍射图谱在下列2θ角处具有特征衍射峰：6.302°、7.883°、9.301°、9.842°、12.838°、15.436°、16.580°、18.124°、18.680°、19.459°、20.161°、20.800°、21.262°、21.704°、23.057°、24.000°、24.837°、25.382°、26.244°、26.558°、27.740°、28.119°、28.827°、29.502°、29.880°、30.261°、30.762°、31.678°、32.595°、33.061°、34.347°、35.253°、35.738°、36.642°、38.619°和39.558°。
本发明的一些方案中，上述A晶型的XRPD图谱如图1所示。
本发明的一些方案中，上述A晶型的XRPD图谱解析数据如表1所示：
表1 式(I)化合物A晶型的XRPD图谱解析数据
Figure PCTCN2020116051-appb-000002
Figure PCTCN2020116051-appb-000003
本发明的一些方案中，上述A晶型，其差示扫描量热曲线在224.58±3℃处具有吸热峰的峰值。
本发明的一些方案中，上述A晶型，其DSC图谱如图2所示。
本发明的一些方案中，上述A晶型，其热重分析曲线在200.00±3℃时失重达0.127％；在250±3℃时又失重达0.224％。
本发明的一些方案中，上述A晶型，其TGA图谱如图3所示。
本发明提供了式(I)化合物A晶型的制备方法，包括将任意一种形式的式(I)化合物加入到醇类溶剂、丙酮、乙酸乙酯、乙腈或醇类溶剂、丙酮、乙腈与水中，在一定温度下搅拌一段时间，然后过滤，将滤饼干燥得到晶型A。
本发明的一些方案中，上述的醇类溶剂、丙酮、乙腈与水的体积比例选自1:5～3。
本发明的一些方案中，上述的醇类溶剂、丙酮、乙腈与水的体积比例选自1:1～3。
本发明的一些方案中，上述醇类溶剂选自甲醇、乙醇或异丙醇。
本发明的一些方案中，上述搅拌温度选自25℃～65℃。
本发明的一些方案中，上述搅拌时间选自1小时～72小时。
本发明的一些方案中，上述式(I)化合物与溶剂的重量比选自1:1～30。
本发明的一些方案中，上述式(I)化合物与溶剂的重量比选自1:5～30。
本发明还提供了上述式(I)化合物，或上述式(I)化合物的A晶型在制备治疗慢性乙型肝炎相关药物上的应用。
技术效果
本发明化合物有显著的抗乙肝病毒活性。本发明化合物对细胞色素P450同工酶没有抑制，显示药物-药物相互作用的风险较低；在大鼠、人和小鼠这三个种属中的肝微粒体稳定性优秀，显示化合物不易被代谢；具有较好的暴露量和生物利用度；在单次给药的神经毒性研究中耐受性较好。
本发明化合物的A晶型易于获得、物理稳定性和化学稳定性均较好，具有很高的工业应用价值和经济价值。
定义和说明
除非另有说明，本文所用的下列术语和短语旨在含有下列含义。一个特定的短语或术语在没有特别定义的情况下不应该被认为是不确定的或不清楚的，而应该按照普通的含义去理解。当本文出现商品名时，旨在指代其对应的商品或其活性成分。
本发明的中间体化合物可以通过本领域技术人员所熟知的多种合成方法来制备，包括下面列举的具体实施方式、其与其他化学合成方法的结合所形成的实施方式以及本领域技术上人员所熟知的等同替换方式，优选的实施方式包括但不限于本发明的实施例。
本发明具体实施方式的化学反应是在合适的溶剂中完成的，所述的溶剂须适合于本发明的化学变化及其所需的试剂和物料。为了获得本发明的化合物，有时需要本领域技术人员在已有实施方式的基础上对合成步骤或者反应流程进行修改或选择。
下面会通过实施例具体描述本发明，这些实施例并不意味着对本发明的任何限制。
本发明所使用的所有溶剂是市售的，无需进一步纯化即可使用。
化合物经手工或者
Figure PCTCN2020116051-appb-000004
软件命名，市售化合物采用供应商目录名称。
本发明粉末X-射线衍射(X-ray powder diffractometer,XRPD)方法
仪器型号：丹东浩元DX-2700BH X-射线衍射仪
测试方法：大约10～20mg样品用于XRPD检测。
详细的XRPD参数如下：
光管：Cu,kα,
Figure PCTCN2020116051-appb-000005
光管电压：40kV，光管电流：30mA
发散狭缝：1mm
探测器狭缝：0.3mm
防散射狭缝：1mm
扫描范围：3-40deg
步径：0.02deg
步长：0.5秒
本发明差热分析(Differential Scanning Calorimeter,DSC)方法
仪器型号：METTLER TOLEDO DSC1差示扫描量热仪
测试方法：取样品(2～6mg)置于30UL的DSC镀金高压坩锅内进行测试，以10℃/min的升温速率，加热样品从40℃到350℃。
本发明热重分析(Thermal Gravimetric Analyzer,TGA)方法
仪器型号：TA TGA550热重分析仪
测试方法：取样品(2～10mg)置于铝坩埚内，然后放置于铂金吊篮内进行测试，在氮气(N 2)条件下，以40mL/min的气体流速，以10℃/min的升温速率，加热样品从 40℃到500℃。
附图说明
图1为式(I)化合物A晶型的Cu-Kα辐射的XRPD谱图。
图2为式(I)化合物A晶型的DSC谱图。
图3为式(I)化合物A晶型的TGA谱图。
图4为式(II)化合物的单晶X射线衍射立体结构椭球图。
具体实施方式
为了更好的理解本发明的内容，下面结合具体实施例来做进一步的说明，但具体的实施方式并不是对本发明的内容所做的限制。
实施例1：式(I)化合物的制备
Figure PCTCN2020116051-appb-000006
Figure PCTCN2020116051-appb-000007
步骤A：将1-1(10.00克，59.5毫摩尔)在0℃下溶解于二氯甲烷(500毫升)中，然后加入磺酰氯(10.77克，79.77毫摩尔，7.98毫升)，混合溶液在35℃下搅拌38小时。然后将溶液倒入300毫升饱和碳酸氢钠水溶液中并搅拌并分液。水相经乙酸乙酯萃取(150毫升*3次)，然后将合并的有机相经饱和食盐水洗涤(40毫升*3次)，并通过无水硫酸钠干燥，并经过减压蒸馏得到白色残留物。然后将白色残留物经硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝30/1至20/1)得到化合物1-2。
1H NMR(400MHz,MeOH-d 4)δ10.75(s,1H),7.74(s,1H),6.54(s,1H),5.98(s,1H),3.85(s,3H)。
步骤B：将1-2(8.00克，39.49毫摩尔)，1-溴-3-甲氧基-丙烷(7.25克，47.39毫摩尔)溶于N，N-二甲基甲酰胺(100.00毫升)，冷却至0℃后向其中加入碳酸钾(10.92克，78.98毫摩尔)，再将混合溶液升温至25℃并搅拌10小时。然后将乙酸乙酯(300毫升)和水(50毫升)加入溶液中，并在25℃下搅拌10分钟。将有机相分离出来并饱和食盐水洗涤(40毫升*3)，然后通过无水硫酸钠干燥，并减压浓缩得到黄色液体。再将黄色液体经硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝30/1至20/1)得到化合物1-3。
1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ10.90(s,1H),7.82(s,1H),6.52(s,1H),4.16(t,J＝6.0Hz,2H),3.94(s,3H),3.60(t,J＝6.0Hz,2H),3.38(s,3H),2.13(t,J＝6.0Hz,2H)。
步骤C：向1-3(3.64克，13.25毫摩尔)，氯化苄(2.18克，17.23毫摩尔，1.98毫 升)的N，N-二甲基甲酰胺(10.00毫升)溶液中加入碳酸钾(4.76克，34.45毫摩尔)，混合溶液在25℃下搅拌20小时。乙酸乙酯(150毫升)和水(30毫升)加入溶液中，溶液在20℃下搅拌10分钟。然后分离有机相并经过水(30毫升*2)和饱和食盐水(30毫升*2)洗涤，然后通过无水硫酸钠干燥，并经减压浓缩得到化合物1-4。
步骤D：将1-4(2.00克，5.48毫摩尔)和一水合氢氧化锂(1.38克，32.89毫摩尔)加入到四氢呋喃(20毫升)和水(10毫升)的混合溶液中，之后在10～20℃下搅拌10小时。然后将溶液经乙酸乙酯/石油醚1/1(5毫升*3)洗涤。将水相调酸性至酸碱度值1～2。再将溶液经二氯甲烷(50毫升*3)萃取，将有机相合并后经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩得到化合物2-苄氧基-5-氯-4-(3-甲氧基丙烷)苯甲酸。向2-苄氧基-5-氯-4-(3-甲氧基丙烷)苯甲酸甲酸(1.00克，2.85毫摩尔)的二氯甲烷(10.00毫升)溶液中加入氯化亚砜(508.60毫克，4.28毫摩尔，310.12微升)，混合液在25℃下搅拌1小时。然后将溶液减压浓缩得到残留物。再将残留物溶于甲苯，并继续减压浓缩得到残留物，将残留物1-5在氮气环境下保存。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ12.87-12.22(m,1H),7.74(s,1H),7.53(br d,J＝7.2Hz,2H),7.40(t,J＝7.6Hz,2H),7.36-7.30(m,1H),6.94(s,1H),5.27(s,2H),4.20(s,2H),3.50(s,2H),3.26(s,3H),1.98(t,J＝6.4Hz,2H)。
步骤E：零下70℃下向六甲基二硅基胺基锂(1摩尔/升，23.88毫升)的四氢呋喃(20毫升)溶液中逐滴加入(5分钟)1-5(2.94克，7.96毫摩尔)和化合物a(1.62g,8.76毫摩尔,1.10eq)的四氢呋喃(20毫升)溶液，然后移走冷却槽并让混合物持续搅拌5分钟。再将醋酸铵(3.23克，41.95毫摩尔)和醋酸(67.85克，1.13毫摩尔)加入到混合物中，并将绝大部分四氢呋喃通过旋转蒸发仪在60℃下除去，并将残留物在60～65℃下加热1.5小时。将反应混合物冷却，然后向其中加入水(40毫升)和二氯甲烷(200毫升)。混合物搅拌10分钟后分离，有机相经水洗(10毫升*3)和碳酸氢钠水溶液洗，干燥，然后浓缩得到黄色残余物。残余物再经硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝10/1)得到 化合物1-6。
步骤F：向1-6(3.00g,6.36毫摩尔)的四氢呋喃(20毫升)溶液中加入活化湿钯碳(500毫克)，溶液在25℃下于氢气(15psi)气氛中搅拌2小时。然后将棕色悬浊液过滤，收集滤液，并将其减压浓缩得到残留物。再将残留物经石油醚/乙酸乙酯(4/1)打浆(两次)并过滤得到化合物1-7。
步骤G：在零下10℃下，向1-8(20.00克，178.33毫摩尔)的二氯甲烷溶液(150.00毫升)中加入吡啶(2.82克，35.67毫摩尔)，然后再加入五氯化磷(37.14克，178.33毫摩尔)，得到的混合物在零下10℃下反应0.5小时。反应完成后，向反应体系中加入碳酸氢钠(44.94克，534.99毫摩尔)。反应继续搅拌0.5小时，然后通过硅藻土过滤，并用二氯甲烷(20毫升*3)洗涤，将滤液浓缩得到残余物1-9。
1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ7.68(d,J＝3.91Hz,1H),7.35-7.44(m,5H),7.22(d,J＝3.67Hz,1H),6.91(s,1H),5.34(s,2H)。
步骤H:将1-7(10.00克,26.19毫摩尔)，碳酸铯(38.40克，117.86毫摩尔)和1-9(21.88克，130.95毫摩尔)的二甲亚砜(100.00毫升)溶液在100℃下搅拌16小时。反应完成后，用50毫升水淬灭反应，再用150毫升水稀释反应液，用二氯甲烷(100毫升*3)进行萃取，再将有机相合并，用饱和食盐水(100毫升*3)洗涤，无水硫酸钠干燥后，减压浓缩得到残余物。残余物经硅胶柱层析纯化(洗脱剂：二氯甲烷/乙醇＝100/1至8/1)得到化合物1-10。
步骤I：将1-10经手性色谱柱制备分离(分离柱:AS(250mm*30mm,10um)；流动相:[0.1％氨水-乙醇]；洗脱梯度:40％-40％,4.3min；120min)纯化得到两个构型的异构体，保留时间＝2.516min和时间＝5.098min。再将保留时间＝2.516min的异构体(55毫克，116.64微摩尔)置入甲醇(10毫升)溶液中，加入4摩尔每升的氢氧化钠(145.80微升)。反应液在25至30℃下搅拌2小时。将反应液减压浓缩，残余物溶于水(20毫升)中，用2摩尔每升的盐酸调节pH至1～2，固体析出后过滤烘干得到式(I)化合物(保留 时间＝3.842min)，ee值(对映体过量)：100％。测ee值(对映体过量)方法：OD-3S_3_40_3ML分离柱:Chiralcel OD-3 100×4.6mm I.D.,3μm流动相:40％甲醇(0.05％二乙胺)in CO 2流速:3mL/min波长:220nm。
式(I)化合物： 1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ15.40(s,1H),8.32(s,1H),7.62(s,1H),7.41(dd,J＝1.28,4.83Hz,1H),6.93-6.98(m,2H),6.91(s,1H),6.88(s,1H),6.62(s,1H),4.09(t,J＝6.24Hz,2H),3.51(t,J＝5.87Hz,2H),3.28(s,3H),2.05(quin,J＝6.08Hz,2H)。
实施例2：式(I)化合物A晶型的制备
控制温度在40℃，将式(I)化合物(1g)加入到反应瓶中，然后加入丙酮(10mL)，将混合物在40℃搅拌24小时，冷却至室温过滤，滤饼用丙酮(10mL)洗涤，得到粗品，粗品经真空干燥箱干燥(45℃，16小时)得到式(I)化合物A晶型。
实施例3：式(I)化合物A晶型在高温，高湿条件下的固体稳定性试验
平行称取2份式(I)化合物A晶型样品，每份大约100mg，置于玻璃样品瓶的底部，摊成薄薄一层。样品用铝箔纸封瓶口，并在铝箔纸上扎些小孔，保证样品能与环境空气充分接触，置于40℃/75％湿度条件恒温恒湿箱。在上述条件下放置的样品于第5天，10天取样检测，检测结果与0天的初始检测结果进行比较，试验结果见下表2所示：
表2 A晶型在高温，高湿条件下的固体稳定性试验
时间点(天) 外观 晶型 纯度(％) 总杂质(％)
0 白色粉末 A晶型 99.79 0.21
5 白色粉末 A晶型 99.79 0.21
10 白色粉末 A晶型 99.79 0.21
实验结论：本发明式(I)化合物A晶型稳定性好，易于成药。
实施例4：式(I)化合物A晶型在不同温度和湿度及光照条件下固体物理稳定性试验
平行称取4份式(I)化合物A晶型，每份大约100mg，放置于玻璃样品瓶的底部，摊成薄薄一层，铝箔纸封瓶口，并在铝箔纸上扎些小孔，保证样品能与环境空气充分接 触。把制备的4份样品分别放置于25℃/92.5％的相对湿度，60℃，40℃/75％及光照条件下，考察样品第10天的物理稳定性。同时，单独称取一份大约100mg式(I)化合物A晶型固体，放置于玻璃样品瓶的底部，用螺纹瓶盖密封后，保存于-20℃条件下，作为对照品使用。在第10天，取出所有样品，恢复至室温，观察样品外观变化，并用XRPD检测样品晶型。通过对加速样品与对照样品的比较，判断式(I)化合物A晶型的固体物理稳定性。下表3为A晶型固体物理稳定性实验结果。
表3 A晶型在不同温度和湿度条件下及光照下固体物理稳定性试验
Figure PCTCN2020116051-appb-000008
实验结论：本发明式(I)化合物A晶型稳定性好，易于成药。
实施例5：单晶X射线衍射检测分析
式(I)化合物不易培养单晶，为了确证其绝对构型，将式(I)化合物用三甲基硅重氮甲烷甲酯化，得到式(II)化合物，再对式(II)化合物培养单晶。
制备方法如下：
Figure PCTCN2020116051-appb-000009
将式(I)化合物(5克,11.16毫摩尔)加到甲醇(15毫升)和四氢呋喃(45毫升)的 混合液中，室温下一次性加入三甲基硅重氮甲烷(2摩尔/升,8.37毫升)，然后室温搅拌12小时。将反应液浓缩，再加入20毫升叔丁基甲醚，搅拌后过滤干燥得到式(II)化合物。将式(II)化合物溶于甲醇，使用溶剂挥发法，室温经过10天培养获得式(II)化合物的单晶，衍射用晶体尺寸为0.06×0.08×0.16mm。晶体属于三斜晶系，空间群为P1，晶胞参数为：a＝13.0669(13)，b＝13.4585(12)，
Figure PCTCN2020116051-appb-000010
α＝90.348(4)，β＝109.374(4)，γ＝96.367(4)，晶胞体积
Figure PCTCN2020116051-appb-000011
晶胞内不对称单位数Z＝1。
用Bruker D8 venture衍射仪收集衍射强度数据，光源为CuKα辐射，扫描方式：
Figure PCTCN2020116051-appb-000012
扫描，收集总衍射点数为40999个，独立衍射点数为15341个，可观察点数(I/sigma≥2)为5471个。
采用直接法(Shelxs97)解析晶体结构，获得124个非氢原子位置，使用最小二乘法修正结构参数和判别原子种类，使用几何计算法和差值Fourier法获得全部氢原子位置，精修后R 1＝0.1357，wR 2＝0.4252(w＝1/α|F| 2)，S＝1.817。最终确定化学计量式为4(C 22H 20ClNO 6S)，计算单个分子量为461.90，计算晶体密度为1.287g/cm 3。
该反应是在中性环境下进行的，条件温和，手性碳不会发生翻转。因此，式(I)化合物的绝对构型与式(II)化合物的一致。通过式(II)化合物的单晶数据，可以确定式(I)化合物的绝对构型。式(II)化合物单分子立体结构椭球图见附图4。式(II)化合物晶体的原子坐标(×10 4)和等价各向同性移位参数
Figure PCTCN2020116051-appb-000013
见表4。式(II)化合物的键长
Figure PCTCN2020116051-appb-000014
和键角[deg]见表5。式(II)化合物扭转角度[deg]见表6。
表4 式(II)化合物晶体的原子坐标(×10 4)和等价各向同性移位参数
Figure PCTCN2020116051-appb-000015
  x y z U(eq)
Cl(1) -5132(6) 7567(4) 1373(5) 110(2)
Cl(2) 6227(6) 2481(4) 4348(5) 117(2)
Cl(3) 4871(6) 7558(4) 6373(5) 111(2)
Cl(4) -3762(6) 2481(4) -653(5) 115(2)
S(1) -5696(6) 1040(5) 343(5) 114(2)
S(2) 6789(6) 8996(5) 3561(5) 111(2)
S(3) 4294(6) 1034(5) 5343(5) 116(2)
S(4) -3211(6) 8991(5) -1439(5) 114(2)
O(1) -7185(15) 6424(12) 378(14) 113(5)
O(1') -1935(18) 7130(20) 1900(30) 229(16)
O(2) -5885(10) 3214(9) 844(10) 76(4)
O(2') -252(15) 5983(19) 1814(17) 164(8)
O(3) -862(15) 4102(16) 2377(15) 132(7)
O(3') 1441(14) 3930(20) 3151(18) 174(10)
O(4) -1920(30) 930(20) 2470(30) 165(11)
O(4') 3000(18) 2905(19) 2890(20) 216(14)
O(5') 8061(17) 7140(20) 6910(20) 215(14)
O(5) -489(19) 2110(20) 2500(20) 190(14)
O(6') 9741(14) 5981(18) 6858(16) 151(7)
O(6) -9850(40) 8180(30) -430(30) 360(30)
O(7) 8342(18) 3625(11) 4729(14) 127(6)
O(7') 11433(15) 3930(20) 8155(19) 206(11)
O(8) 7007(10) 6823(10) 4199(10) 78(4)
O(8') 13003(18) 2873(18) 7880(20) 208(13)
O(9) 1927(13) 5900(20) 2588(15) 150(9)
O(10) 1552(16) 7951(19) 2559(17) 156(9)
O(11) 2899(17) 8900(20) 3351(16) 145(8)
O(13) 2767(14) 6425(10) 5344(12) 99(5)
O(14) 4126(11) 3191(10) 5870(10) 86(4)
O(15) 9167(16) 4090(17) 7397(15) 137(7)
O(16) 9490(20) 2100(20) 7510(20) 193(12)
O(17) 8090(20) 950(20) 7440(30) 164(12)
O(18) 310(50) 8280(30) 4650(30) 300(30)
O(19) -1768(16) 3632(11) -309(14) 118(5)
O(20) -2994(11) 6845(9) -786(10) 81(4)
O(21) -8059(13) 5913(18) -2396(13) 134(7)
O(22) -8448(16) 7930(19) -2424(18) 156(9)
O(23) -7100(20) 8920(30) -1636(16) 149(12)
N(1) -4050(14) 3042(13) 1759(12) 81(5)
N(2) 5141(13) 7003(14) 3969(12) 78(5)
N(3) 5940(13) 3050(12) 6764(12) 75(5)
N(4) -4837(13) 6998(13) -1016(11) 73(4)
C(1) -4460(20) 5715(16) 1584(17) 84(6)
C(2) -5358(19) 6302(15) 1215(17) 82(7)
C(3) -6381(19) 5788(15) 743(16) 87(7)
C(4) -6594(18) 4796(16) 602(16) 82(6)
C(5) -5736(17) 4262(14) 972(16) 73(6)
C(6) -5241(19) 2717(15) 1629(16) 83(6)
C(7) -3738(17) 4058(16) 1742(15) 75(6)
C(8) -4671(17) 4684(14) 1435(15) 76(5)
C(9) -2664(19) 4400(20) 1937(18) 101(8)
C(10) -1850(20) 3760(30) 2180(20) 113(9)
C(11) -2220(20) 2680(20) 2174(18) 103(8)
C(12) -3263(19) 2408(17) 2004(15) 84(6)
C(13) -1560(40) 1670(40) 2330(30) 140(20)
C(14) 200(60) 1210(50) 2640(50) 270(30)
C(15) -5515(18) 1598(13) 1455(16) 88(7)
C(16) -5713(16) 912(12) 2196(17) 77(6)
C(17) -5980(20) -72(17) 1650(20) 104(8)
C(18) -5980(20) -61(15) 760(20) 103(8)
C(19) -8210(20) 6070(20) 64(17) 109(10)
C(20) -9020(20) 6810(30) -390(30) 166(16)
C(21) -9160(40) 7530(40) 90(30) 240(30)
C(22) -10350(30) 8580(40) -30(40) 250(30)
C(23) 5606(19) 4307(16) 4099(13) 82(6)
C(24) 6450(20) 3780(16) 4295(15) 80(6)
C(25) 7480(20) 4178(17) 4473(19) 93(7)
C(26) 7663(18) 5240(16) 4444(16) 84(6)
C(27) 6808(17) 5803(14) 4260(16) 74(5)
C(28) 6299(16) 7351(14) 4556(15) 76(5)
C(29) 4877(19) 5987(18) 3782(16) 83(6)
C(30) 5728(18) 5365(17) 4046(15) 79(6)
C(31) 3860(20) 5640(20) 3320(20) 98(8)
C(32) 2950(30) 6210(20) 3026(19) 122(11)
C(33) 3256(17) 7260(30) 3254(17) 110(10)
C(34) 4370(20) 7650(17) 3747(17) 90(7)
C(35) 2470(30) 7970(20) 3010(20) 117(11)
C(36) 2130(30) 9580(30) 3030(40) 220(30)
C(37) 6655(17) 8416(14) 4537(17) 89(6)
C(38) 6862(16) 9157(14) 5391(16) 81(6)
C(39) 7120(20) 10130(18) 5033(19) 117(10)
C(40) 7110(20) 10107(19) 4130(20) 106(8)
C(41) 9520(20) 4000(20) 5060(20) 111(9)
C(42) 10030(50) 2800(40) 5280(40) 270(20)
C(45) 5530(19) 5731(16) 6584(15) 88(6)
C(46) 4630(20) 6243(13) 6206(17) 88(7)
C(47) 3540(20) 5804(18) 5694(17) 86(7)
C(48) 3422(19) 4783(16) 5616(15) 88(6)
C(49) 4302(17) 4218(15) 5988(15) 76(6)
C(50) 4764(16) 2715(14) 6688(17) 82(6)
C(51) 6243(17) 4071(14) 6745(14) 73(5)
C(52) 5329(19) 4702(17) 6443(16) 79(6)
C(53) 7321(19) 4390(20) 6925(16) 97(7)
C(54) 8170(20) 3790(20) 7159(18) 104(8)
C(55) 7760(20) 2690(20) 7165(18) 100(9)
C(56) 6713(18) 2388(18) 6983(15) 91(7)
C(57) 8410(30) 1730(40) 7400(20) 162(19)
C(58) 10160(50) 1260(40) 7400(50) 540(60)
C(59) 4492(18) 1626(18) 6444(16) 92(7)
C(60) 4272(16) 929(13) 7181(17) 81(6)
C(61) 4040(30) -79(19) 6670(20) 118(9)
C(62) 4050(20) -79(17) 5750(20) 118(9)
C(63) 1662(19) 5956(19) 5048(19) 103(7)
C(64) 880(30) 6770(20) 4580(20) 138(11)
C(65) 980(40) 7580(30) 5130(30) 220(20)
C(66) -350(30) 8550(40) 4960(40) 200(20)
C(67) -4417(19) 4312(15) -921(14) 77(6)
C(68) -3580(20) 3778(14) -729(15) 80(6)
C(69) -2550(20) 4235(17) -512(16) 92(7)
C(70) -2332(17) 5295(13) -554(16) 84(7)
C(71) -3210(17) 5828(16) -762(16) 81(6)
C(72) -3670(17) 7353(15) -410(17) 86(7)
C(73) -5137(18) 5977(15) -1221(14) 73(6)
C(74) -4288(16) 5359(14) -950(15) 70(5)
C(75) -6193(18) 5650(20) -1699(15) 96(7)
C(76) -7050(20) 6300(30) -1968(19) 109(11)
C(77) -6700(20) 7370(20) -1722(17) 93(7)
C(78) -5584(19) 7637(19) -1240(15) 87(6)
C(79) -7510(30) 8010(30) -2040(30) 139(17)
C(80) -7880(20) 9610(30) -1960(40) 230(30)
C(81) -3339(17) 8440(17) -460(15) 82(6)
C(82) -3144(16) 9142(14) 412(15) 79(6)
C(83) -2890(30) 10120(20) -10(20) 132(12)
C(84) -2910(20) 10130(20) -890(30) 112(9)
C(85) -660(20) 4080(20) -90(20) 130(10)
C(86) 270(60) 3700(50) 640(50) 390(30)
C(88) 1700(50) 1330(50) 400(40) 530(30)
O(24) 140(50) 1500(40) 360(40) 511(17)
C(87) -310(40) 2930(40) -50(40) 331(19)
H(1A) -3762 6021 1916 101
H(4A) -7294 4485 267 98
H(6A) -5380 2915 2226 100
H(9A) -2467 5080 1907 121
H(12A) -3484 1735 2054 101
H(16A) -5680 1062 2834 93
H(17A) -6134 -662 1934 125
H(18A) -6127 -647 371 124
H(19A) -8394 5775 610 130
H(19B) -8316 5530 -420 130
H(20A) -8826 7086 -933 199
H(20B) -9732 6417 -673 199
H(21A) -8453 7911 416 293
H(21B) -9437 7269 594 293
H(22A) -10795 9011 -483 376
H(22B) -10809 8090 173 376
H(22C) -9859 8973 526 376
H(23A) 4912 3972 3992 98
H(26A) 8366 5552 4551 101
H(28A) 6418 7185 5239 91
H(31A) 3702 4958 3175 118
H(34A) 4562 8330 3913 108
H(36A) 2462 10242 3291 330
H(36B) 1878 9578 2326 330
H(36C) 1523 9392 3251 330
H(38A) 6829 9019 6011 97
H(39A) 7286 10720 5419 140
H(40A) 7264 10682 3823 127
H(45A) 6224 6058 6911 106
H(48A) 2729 4447 5304 106
H(53A) 7509 5071 6887 116
H(56A) 6492 1710 7001 109
H(58A) 10892 1545 7484 816
H(58B) 10167 779 7888 816
H(58C) 9831 941 6759 816
H(60A) 4277 1087 7809 97
H(61A) 3906 -664 6967 141
H(62A) 3930 -665 5367 141
H(67A) -5115 3980 -1040 93
H(70A) -1628 5608 -446 101
H(75A) -6386 4968 -1864 116
H(78A) -5344 8310 -1063 105
H(80A) -7557 10264 -1658 348
H(80B) -8091 9648 -2659 348
H(80C) -8507 9400 -1778 348
H(82A) -3172 9010 1033 95
H(83A) -2722 10707 373 159
H(84A) -2763 10713 -1189 134
表5 式(II)化合物的键长
Figure PCTCN2020116051-appb-000016
和键角[deg]
Figure PCTCN2020116051-appb-000017
Figure PCTCN2020116051-appb-000018
Figure PCTCN2020116051-appb-000019
Figure PCTCN2020116051-appb-000020
Figure PCTCN2020116051-appb-000021
Figure PCTCN2020116051-appb-000022
Figure PCTCN2020116051-appb-000023
Figure PCTCN2020116051-appb-000024
Figure PCTCN2020116051-appb-000025
表6 式(II)化合物扭转角度[deg].
C(8)-C(1)-C(2)-C(3) 1(3) C(52)-C(45)-C(46)-Cl(3) -179.6(16)
C(8)-C(1)-C(2)-Cl(1) -179.3(17) C(63)-O(13)-C(47)-C(48) 15(3)
C(19)-O(1)-C(3)-C(4) 14(4) C(63)-O(13)-C(47)-C(46) -166(2)
C(19)-O(1)-C(3)-C(2) -168(2) C(45)-C(46)-C(47)-O(13) -178(2)
C(1)-C(2)-C(3)-O(1) -177.7(19) Cl(3)-C(46)-C(47)-O(13) 1(3)
Cl(1)-C(2)-C(3)-O(1) 3(3) C(45)-C(46)-C(47)-C(48) 2(3)
C(1)-C(2)-C(3)-C(4) 0(4) Cl(3)-C(46)-C(47)-C(48) -178.7(16)
Cl(1)-C(2)-C(3)-C(4) 179.9(19) O(13)-C(47)-C(48)-C(49) 178(2)
O(1)-C(3)-C(4)-C(5) 178(2) C(46)-C(47)-C(48)-C(49) -2(3)
C(2)-C(3)-C(4)-C(5) 1(4) C(50)-O(14)-C(49)-C(52) 39(3)
C(6)-O(2)-C(5)-C(8) 39(3) C(50)-O(14)-C(49)-C(48) -143(2)
C(6)-O(2)-C(5)-C(4) -145(2) C(47)-C(48)-C(49)-O(14) -179(2)
C(3)-C(4)-C(5)-C(8) -3(4) C(47)-C(48)-C(49)-C(52) 0(3)
C(3)-C(4)-C(5)-O(2) -179(2) C(49)-O(14)-C(50)-C(59) -179.4(18)
C(5)-O(2)-C(6)-C(15) 176.0(17) C(49)-O(14)-C(50)-N(3) -62(2)
C(5)-O(2)-C(6)-N(1) -61.6(19) C(56)-N(3)-C(50)-O(14) -138.7(18)
C(12)-N(1)-C(6)-O(2) -141.7(18) C(51)-N(3)-C(50)-O(14) 50(2)
C(7)-N(1)-C(6)-O(2) 46(2) C(56)-N(3)-C(50)-C(59) -25(3)
C(12)-N(1)-C(6)-C(15) -20(3) C(51)-N(3)-C(50)-C(59) 164.4(17)
C(7)-N(1)-C(6)-C(15) 168.3(17) C(56)-N(3)-C(51)-C(53) 2(3)
C(12)-N(1)-C(7)-C(9) 2(3) C(50)-N(3)-C(51)-C(53) 172.7(19)
C(6)-N(1)-C(7)-C(9) 174(2) C(56)-N(3)-C(51)-C(52) 176.5(18)
C(12)-N(1)-C(7)-C(8) 178.4(18) C(50)-N(3)-C(51)-C(52) -12(3)
C(6)-N(1)-C(7)-C(8) -9(3) O(14)-C(49)-C(52)-C(45) -179(2)
O(2)-C(5)-C(8)-C(1) 180.0(19) C(48)-C(49)-C(52)-C(45) 2(3)
C(4)-C(5)-C(8)-C(1) 4(4) O(14)-C(49)-C(52)-C(51) 4(3)
O(2)-C(5)-C(8)-C(7) 2(3) C(48)-C(49)-C(52)-C(51) -174.9(19)
C(4)-C(5)-C(8)-C(7) -174(2) C(46)-C(45)-C(52)-C(49) -2(3)
C(2)-C(1)-C(8)-C(5) -3(3) C(46)-C(45)-C(52)-C(51) 175.2(19)
C(2)-C(1)-C(8)-C(7) 175.1(19) C(53)-C(51)-C(52)-C(49) 159(2)
C(9)-C(7)-C(8)-C(5) 160(2) N(3)-C(51)-C(52)-C(49) -16(3)
N(1)-C(7)-C(8)-C(5) -16(3) C(53)-C(51)-C(52)-C(45) -19(3)
C(9)-C(7)-C(8)-C(1) -18(3) N(3)-C(51)-C(52)-C(45) 166.9(19)
N(1)-C(7)-C(8)-C(1) 166(2) N(3)-C(51)-C(53)-C(54) -2(3)
N(1)-C(7)-C(9)-C(10) -2(4) C(52)-C(51)-C(53)-C(54) -177(2)
C(8)-C(7)-C(9)-C(10) -177(2) C(51)-C(53)-C(54)-O(15) -174(2)
C(7)-C(9)-C(10)-O(3) -179(2) C(51)-C(53)-C(54)-C(55) 2(4)
C(7)-C(9)-C(10)-C(11) 3(4) O(15)-C(54)-C(55)-C(56) 175(2)
O(3)-C(10)-C(11)-C(12) 177(2) C(53)-C(54)-C(55)-C(56) -1(4)
C(9)-C(10)-C(11)-C(12) -4(4) O(15)-C(54)-C(55)-C(57) -3(5)
O(3)-C(10)-C(11)-C(13) -4(5) C(53)-C(54)-C(55)-C(57) -179(2)
C(9)-C(10)-C(11)-C(13) 175(3) C(54)-C(55)-C(56)-N(3) 1(4)
C(10)-C(11)-C(12)-N(1) 5(4) C(57)-C(55)-C(56)-N(3) 179(2)
C(13)-C(11)-C(12)-N(1) -174(2) C(51)-N(3)-C(56)-C(55) -1(3)
C(7)-N(1)-C(12)-C(11) -4(3) C(50)-N(3)-C(56)-C(55) -172(2)
C(6)-N(1)-C(12)-C(11) -176(2) C(58)-O(16)-C(57)-O(17) 18(6)
C(14)-O(5)-C(13)-O(4) 18(8) C(58)-O(16)-C(57)-C(55) -161(3)
C(14)-O(5)-C(13)-C(11) -179(3) C(56)-C(55)-C(57)-O(17) -3(6)
C(12)-C(11)-C(13)-O(4) -14(6) C(54)-C(55)-C(57)-O(17) 176(4)
C(10)-C(11)-C(13)-O(4) 166(5) C(56)-C(55)-C(57)-O(16) 176(2)
C(12)-C(11)-C(13)-O(5) -180(2) C(54)-C(55)-C(57)-O(16) -6(4)
C(10)-C(11)-C(13)-O(5) 1(4) O(14)-C(50)-C(59)-C(60) -134.1(19)
O(2)-C(6)-C(15)-C(16) -132(2) N(3)-C(50)-C(59)-C(60) 113(2)
N(1)-C(6)-C(15)-C(16) 107(2) O(14)-C(50)-C(59)-S(3) 41(3)
O(2)-C(6)-C(15)-S(1) 44(2) N(3)-C(50)-C(59)-S(3) -73(2)
N(1)-C(6)-C(15)-S(1) -77(2) C(62)-S(3)-C(59)-C(60) -4.8(18)
C(18)-S(1)-C(15)-C(6) -178(2) C(62)-S(3)-C(59)-C(50) 180(2)
C(18)-S(1)-C(15)-C(16) -2.0(19) C(50)-C(59)-C(60)-C(61) -180(2)
C(6)-C(15)-C(16)-C(17) 178(2) S(3)-C(59)-C(60)-C(61) 5(2)
S(1)-C(15)-C(16)-C(17) 2(2) C(59)-C(60)-C(61)-C(62) -3(3)
C(15)-C(16)-C(17)-C(18) -1(3) C(60)-C(61)-C(62)-S(3) -1(4)
C(16)-C(17)-C(18)-S(1) -1(4) C(59)-S(3)-C(62)-C(61) 3(3)
C(15)-S(1)-C(18)-C(17) 1(3) C(47)-O(13)-C(63)-C(64) -175(2)
C(3)-O(1)-C(19)-C(20) -176(2) O(13)-C(63)-C(64)-C(65) -56(4)
O(1)-C(19)-C(20)-C(21) -65(5) C(63)-C(64)-C(65)-O(18) 177(4)
C(19)-C(20)-C(21)-O(6) 175(4) C(66)-O(18)-C(65)-C(64) 121(7)
C(22)-O(6)-C(21)-C(20) 149(6) C(74)-C(67)-C(68)-C(69) 3(4)
C(30)-C(23)-C(24)-C(25) 1(4) C(74)-C(67)-C(68)-Cl(4) 177.6(16)
C(30)-C(23)-C(24)-Cl(2) 179.9(15) C(85)-O(19)-C(69)-C(68) 179(2)
C(23)-C(24)-C(25)-O(7) 176(2) C(85)-O(19)-C(69)-C(70) 2(4)
Cl(2)-C(24)-C(25)-O(7) -3(3) C(67)-C(68)-C(69)-O(19) 179(2)
C(23)-C(24)-C(25)-C(26) 0(4) Cl(4)-C(68)-C(69)-O(19) 3(3)
Cl(2)-C(24)-C(25)-C(26) -179.1(16) C(67)-C(68)-C(69)-C(70) -5(4)
C(41)-O(7)-C(25)-C(24) -172(2) Cl(4)-C(68)-C(69)-C(70) -179.9(17)
C(41)-O(7)-C(25)-C(26) 4(4) O(19)-C(69)-C(70)-C(71) -179(2)
C(24)-C(25)-C(26)-C(27) 1(4) C(68)-C(69)-C(70)-C(71) 4(4)
O(7)-C(25)-C(26)-C(27) -175(2) C(72)-O(20)-C(71)-C(70) -144(2)
C(28)-O(8)-C(27)-C(26) -147(2) C(72)-O(20)-C(71)-C(74) 37(3)
C(28)-O(8)-C(27)-C(30) 38(3) C(69)-C(70)-C(71)-O(20) 179.0(19)
C(25)-C(26)-C(27)-O(8) -177.5(19) C(69)-C(70)-C(71)-C(74) -1(4)
C(25)-C(26)-C(27)-C(30) -3(4) C(71)-O(20)-C(72)-N(4) -58(2)
C(27)-O(8)-C(28)-C(37) 175.0(17) C(71)-O(20)-C(72)-C(81) 178.9(17)
C(27)-O(8)-C(28)-N(2) -59(2) C(78)-N(4)-C(72)-O(20) -142.4(18)
C(34)-N(2)-C(28)-O(8) -144.3(18) C(73)-N(4)-C(72)-O(20) 46(2)
C(29)-N(2)-C(28)-O(8) 44(2) C(78)-N(4)-C(72)-C(81) -25(3)
C(34)-N(2)-C(28)-C(37) -24(3) C(73)-N(4)-C(72)-C(81) 163.5(18)
C(29)-N(2)-C(28)-C(37) 164.1(19) C(78)-N(4)-C(73)-C(75) 3(3)
C(34)-N(2)-C(29)-C(31) 4(3) C(72)-N(4)-C(73)-C(75) 175.1(18)
C(28)-N(2)-C(29)-C(31) 176(2) C(78)-N(4)-C(73)-C(74) -179.6(18)
C(34)-N(2)-C(29)-C(30) -179.2(19) C(72)-N(4)-C(73)-C(74) -8(3)
C(28)-N(2)-C(29)-C(30) -8(3) O(20)-C(71)-C(74)-C(67) 179.0(18)
C(31)-C(29)-C(30)-C(27) 161(2) C(70)-C(71)-C(74)-C(67) -1(3)
N(2)-C(29)-C(30)-C(27) -16(3) O(20)-C(71)-C(74)-C(73) 4(3)
C(31)-C(29)-C(30)-C(23) -17(4) C(70)-C(71)-C(74)-C(73) -176(2)
N(2)-C(29)-C(30)-C(23) 166.2(19) C(68)-C(67)-C(74)-C(71) 0(3)
O(8)-C(27)-C(30)-C(29) 0(3) C(68)-C(67)-C(74)-C(73) 175(2)
C(26)-C(27)-C(30)-C(29) -175(2) C(75)-C(73)-C(74)-C(71) 159(2)
O(8)-C(27)-C(30)-C(23) 178.1(17) N(4)-C(73)-C(74)-C(71) -18(3)
C(26)-C(27)-C(30)-C(23) 4(3) C(75)-C(73)-C(74)-C(67) -16(4)
C(24)-C(23)-C(30)-C(29) 176(2) N(4)-C(73)-C(74)-C(67) 167.5(19)
C(24)-C(23)-C(30)-C(27) -3(3) N(4)-C(73)-C(75)-C(76) -3(3)
N(2)-C(29)-C(31)-C(32) -3(4) C(74)-C(73)-C(75)-C(76) -180(2)
C(30)-C(29)-C(31)-C(32) -180(2) C(73)-C(75)-C(76)-O(21) -177(2)
C(29)-C(31)-C(32)-O(9) -179(3) C(73)-C(75)-C(76)-C(77) 2(4)
C(29)-C(31)-C(32)-C(33) 2(4) O(21)-C(76)-C(77)-C(78) 178(2)
O(9)-C(32)-C(33)-C(34) 179(2) C(75)-C(76)-C(77)-C(78) -1(4)
C(31)-C(32)-C(33)-C(34) -1(3) O(21)-C(76)-C(77)-C(79) -5(4)
O(9)-C(32)-C(33)-C(35) -1(4) C(75)-C(76)-C(77)-C(79) 176(2)
C(31)-C(32)-C(33)-C(35) 179(2) C(73)-N(4)-C(78)-C(77) -3(3)
C(29)-N(2)-C(34)-C(33) -4(3) C(72)-N(4)-C(78)-C(77) -174(2)
C(28)-N(2)-C(34)-C(33) -174.8(18) C(79)-C(77)-C(78)-N(4) -175(3)
C(35)-C(33)-C(34)-N(2) -178(2) C(76)-C(77)-C(78)-N(4) 1(4)
C(32)-C(33)-C(34)-N(2) 2(3) C(80)-O(23)-C(79)-O(22) -12(5)
C(36)-O(11)-C(35)-O(10) -3(4) C(80)-O(23)-C(79)-C(77) 178(3)
C(36)-O(11)-C(35)-C(33) 176(3) C(78)-C(77)-C(79)-O(22) -179(4)
C(34)-C(33)-C(35)-O(10) 173(4) C(76)-C(77)-C(79)-O(22) 4(7)
C(32)-C(33)-C(35)-O(10) -7(5) C(78)-C(77)-C(79)-O(23) -12(5)
C(34)-C(33)-C(35)-O(11) -5(4) C(76)-C(77)-C(79)-O(23) 171(3)
C(32)-C(33)-C(35)-O(11) 175(2) O(20)-C(72)-C(81)-C(82) -132.8(19)
O(8)-C(28)-C(37)-C(38) -131.6(19) N(4)-C(72)-C(81)-C(82) 109(2)
N(2)-C(28)-C(37)-C(38) 107(2) O(20)-C(72)-C(81)-S(4) 50(2)
O(8)-C(28)-C(37)-S(2) 54(2) N(4)-C(72)-C(81)-S(4) -68(2)
N(2)-C(28)-C(37)-S(2) -68(2) C(84)-S(4)-C(81)-C(82) 0.1(18)
C(40)-S(2)-C(37)-C(38) 0.8(17) C(84)-S(4)-C(81)-C(72) 177.1(19)
C(40)-S(2)-C(37)-C(28) 176(2) C(72)-C(81)-C(82)-C(83) -177.6(19)
C(28)-C(37)-C(38)-C(39) -176(2) S(4)-C(81)-C(82)-C(83) 0(2)
S(2)-C(37)-C(38)-C(39) -1(2) C(81)-C(82)-C(83)-C(84) 1(3)
C(37)-C(38)-C(39)-C(40) 0(3) C(82)-C(83)-C(84)-S(4) -1(4)
C(38)-C(39)-C(40)-S(2) 0(3) C(81)-S(4)-C(84)-C(83) 0(3)
C(37)-S(2)-C(40)-C(39) -1(2) C(69)-O(19)-C(85)-C(86) 144(4)
C(25)-O(7)-C(41)-C(42) 177(3) O(19)-C(85)-C(86)-C(87) 55(5)
C(52)-C(45)-C(46)-C(47) 0(3) C(85)-C(86)-C(87)-O(24) -168(4)
实验例1：式(I)化合物的HBV体外活性测试
实验材料：
1.细胞系：HepG2.2.15细胞
HepG2.2.15细胞培养基(DMEM/F12，Invitrogen-11330032；10％血清，Invitrogen-10099141；100units/ml青霉素和100μg/ml链霉素，Hyclone-SV30010；1％非必需氨基酸，Invitrogen-11140050；2毫米L-GLUTAMINE，Invitrogen-25030081；300μg/ml Geneticin，Invitrogen-10131027
2.试剂：
胰酶(Invitrogen-25300062)
DPBS(Corning-21031CVR)
二甲基亚砜(Sigma-D2650-100ML)
高通量DNA纯化试剂盒(QIAamp 96 DNA Blood Kit，Qiagen-51162)
定量快速启动通用探针试剂(FastStart Universal Probe Master，Roche-04914058001)
乙型肝炎表面抗原定量检测试剂盒(安图生物，CL 0310)
3.耗材与仪器：
96孔细胞培养板(Corning-3599)
CO2培养箱(HERA-CELL-240)
光学封板膜(ABI-4311971)
定量PCR 96孔板(Applied Biosystems-4306737)
荧光定量PCR仪(Applied Biosystems-7500 real time PCR system)
实验方法：
1.种HepG2.2.15细胞(4x10 4细胞/孔)到96孔板，在37℃，5％CO 2培养过夜。
2.第二天，稀释化合物，共8个浓度，3倍梯度稀释。加不同浓度化合物到培养孔中，双复孔。培养液中二甲基亚砜的终浓度为0.5％。10μM ETV作为100％抑制对照；0.5％的二甲基亚砜作为0％抑制对照。
3.第五天，更换含有化合物的新鲜培养液。
4.第八天收取培养孔中的培养液，取部分样品ELISA测定乙肝病毒S抗原的含量；取部分样品使用高通量DNA纯化试剂盒(Qiagen-51162)提取DNA。
5.PCR反应液的配制如表7所示：
表7 PCR反应液的配制
Figure PCTCN2020116051-appb-000026
前引物序列：GTGTCTGCGGCGTTTTATCA
后引物序列：GACAAACGGGCAACATACCTT
探针序列：5'+FAM+CCTCTKCATCCTGCTGCTATGCCTCATC+TAMRA-3'
6.1在96孔PCR板中每孔加入15μL的反应混合液，然后每孔加入10μl的样品DNA或 HBV DNA的标准品。
6.2 PCR的反应条件为：95℃加热10分钟，然后95℃变性15秒，60℃延伸1分钟，共40个循环。
6.3 ELISA测定乙肝病毒S抗原的含量取50μl样品和标准品分别加入到反应板中，再每孔分别加入50μL酶结合物，震荡混匀，37℃温浴60分钟，然后用洗液洗板5次，再每孔加入50μL发光底物，混匀，室温避光反应10分钟，最后用酶标仪检测化学发光强度。
6.4数据分析：
计算抑制百分比：％Inh.＝(1-样品中的值/二甲基亚砜对照值)×100。
计算EC 50：使用GraphPad Prism软件计算化合物对HBV的50％抑制浓度(EC 50)值。
实验结果如表8所示：
表8 体外活性测试结果
Figure PCTCN2020116051-appb-000027
实验结论：式(I)化合物能有效抑制HBV-DNA和乙肝表面抗原(HBsAg)。

Claims (16)

  1. 式(I)化合物的A晶型，其X射线粉末衍射图谱在下列2θ角处具有特征衍射峰：6.30±0.20°、9.30±0.20°和20.16±0.20°；
    Figure PCTCN2020116051-appb-100001
  2. 根据权利要求1所述的A晶型，其X射线粉末衍射图谱在下列2θ角处具有特征衍射峰：6.30±0.20°、9.30±0.20°、9.84±0.20°、18.68±0.20°、20.16±0.20°、23.06±0.20°、24.00±0.20°和25.38±0.20°。
  3. 根据权利要求2所述的A晶型，其X射线粉末衍射图谱在下列2θ角处具有特征衍射峰：6.30±0.20°、9.30±0.20°、9.84±0.20°、12.84±0.20°、18.68±0.20°、20.16±0.20°、21.26±0.20°、23.06±0.20°、24.00±0.20°、25.38±0.20°。
  4. 根据权利要求3所述的A晶型，其X射线粉末衍射图谱在下列2θ角处具有特征衍射峰：6.302°、7.883°、9.301°、9.842°、12.838°、15.436°、16.580°、18.124°、18.680°、19.459°、20.161°、20.800°、21.262°、21.704°、23.057°、24.000°、24.837°、25.382°、26.244°、26.558°、27.740°、28.119°、28.827°、29.502°、29.880°、30.261°、30.762°、31.678°、32.595°、33.061°、34.347°、35.235°、35.738°、36.642°、38.619°和39.558°。
  5. 根据权利要求4所述的A晶型，其XRPD图谱如图1所示。
  6. 根据权利要求1～5任意一项所述的A晶型，其差示扫描量热曲线在224.58℃±3℃处具有吸热峰的峰值。
  7. 根据权利要求6所述的A晶型，其DSC图谱如图2所示。
  8. 根据权利要求1～5任意一项所述的A晶型，其热重分析曲线在200.00±3℃时失重达0.127％；在250±3℃时又失重达0.224％。
  9. 根据权利要求8所述的A晶型，其TGA图谱如图3所示。
  10. 式(I)化合物A晶型的制备方法，包括将任意一种形式的式(I)化合物加入到醇类溶剂、丙酮、乙酸乙酯、乙腈或醇类溶剂、丙酮、乙腈与水中，在一定温度下搅拌一定时间，然后过滤，滤饼烘干得到晶型A。
  11. 根据权利要求10所述的制备方法，其中醇类溶剂、丙酮、乙腈与水的体积比例选自1:1～3。
  12. 根据权利要求10或11所述的制备方法，其中醇类溶剂选自甲醇、乙醇或异丙醇。
  13. 根据权利要求10所述的制备方法，其中搅拌温度选自25℃～65℃。
  14. 根据权利要求10所述的制备方法，其中搅拌时间选自1小时～72小时。
  15. 根据权利要求10所述的制备方法，其中式(I)化合物与溶剂的重量比选自1:1～30。
  16. 根据权利要求1～9任意一项所述的A晶型在制备治疗慢性乙型肝炎相关药物上的应用。
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