WO2021069527A1 - Microsphere d'embolisation non degradable - Google Patents

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    • C08F222/10—Esters
    • C08F222/1006—Esters of polyhydric alcohols or polyhydric phenols
    • C08F222/102—Esters of polyhydric alcohols or polyhydric phenols of dialcohols, e.g. ethylene glycol di(meth)acrylate or 1,4-butanediol dimethacrylate

Definitions

  • the present invention relates to non-biodegradable embolization microspheres comprising a crosslinked polymeric matrix advantageously intended to be injected into an individual, and optionally intended to release in a controlled manner active principles or macromolecules.
  • Therapeutic vascular occlusion i.e., embolization
  • embolization is used to prevent the flow of blood into an area of the body, which leads to ischemia. It can be administered through catheters to position particulate occluding agents in the circulatory system. It has a variety of medical applications such as the treatment of vascular malformations, hemorrhagic processes or tumors, including, for example, uterine fibroids, primary or secondary tumors of the liver.
  • vascular occlusion can cause tumor necrosis and prevent a more invasive operation.
  • This occlusion technique can also be coupled with the provision of an anticancer agent as part of chemoembolization. This increases the local drug concentration by targeted injection, as well as its residence time in the tumor.
  • vascular occlusion helps normalize blood flow to normal tissue and aid in surgery by limiting the risk of bleeding.
  • vascular occlusion can lead to decreased flow, which promotes healing of the arterial wound.
  • embolic agents for vascular occlusion include embolization fluids (acrylic glues, gels), mechanical devices and particles for embolization.
  • embolization agents are conventionally introduced into a blood vessel via a catheter, in particular a microcatheter, the diameter of which is smaller than that of the vessel to be treated.
  • solid embolizing agents such as particles
  • their shape must therefore allow them to circulate inside said catheter, then, once released, to occupy a volume sufficient to achieve occlusion of the vessel over its entire diameter.
  • the shape and size of the embolic agents affect the accuracy of the target region.
  • microspheres in the prior art whose development occurred in parallel with the development of increasingly fine microcatheters which allowed more distal arterial access.
  • the practitioner can proceed with vascular targeting by performing a more or less distal occlusion.
  • Embolization can be performed at selected levels. For example in the case of tumors, the tumor-intended vessels can also be more easily occluded while respecting the vessels intended for normal tissues.
  • These microspheres can be biodegradable in order to achieve temporary embolizations.
  • non-biodegradable embolization microspheres allow embolization for permanent purposes.
  • Different non-biodegradable microspheres were tested in the 1960s, with the aim of carrying out embolizations (lead, stainless steel, silicone beads).
  • embolizations lead, stainless steel, silicone beads.
  • the small size of these microspheres and the large reflux into healthy non-target organs increased complication rates in patients.
  • non-biodegradable microspheres made from a polymer, trisacryl (N-acryloyl-2-amino-2-hydroxymethylpropan-1,3-diol), and gelatin which may be of porcine origin.
  • Embosphere® Biosphere Medical
  • Non-biodegradable microspheres based on acrylic and PVA copolymers have also been proposed for permanent embolization (Osuga et al. (2002) J. Vase Interv Radiol. 13: 929-34).
  • These are, for example, the Quadrasphere® microspheres from Biosphere Medical which are supplied in dry form and then swell after being mixed with physiological saline and / or iodinated contrast media before injection via a catheter.
  • the term “calibrated” is understood to mean that the microspheres must be able to be classified according to their size after swelling. The practitioner then chooses the size microspheres corresponding to the size of the vessel or the malformation to be embolized (Laurent et al. 2007). Any morphological defect in these embolization microspheres can cause occlusion of the catheter or impair their embolization properties.
  • the compressive strength and elasticity of the embolization microspheres are also important. Indeed, they must be able to be injected via a microcatheter with a diameter smaller than theirs, while regaining their original shape and size at the exit of the microcatheter, when they are injected into a blood vessel.
  • the compressibility of the microspheres In order to target a specific embolization site, the compressibility of the microspheres must be controlled. Moreover, to be injectable, the microspheres are generally suspended in a mixture of nonionic iodinated contrast product and of buffer solution. For this, radiologists generally use a mixture of 50% contrast product and 50% physiological saline, bicarbonate buffer or phosphate buffer. To ensure their injectability, the microspheres must be kept in suspension of homogeneously in this 50/50 solution. If the microspheres sediment or, conversely, float on the surface of the solution, the resulting suspension is inhomogeneous, unstable and therefore cannot be injected into the patient.
  • microspheres having an adequate density to allow their suspension in a homogeneous manner in a mixture comprising 50% of contrast product and 50% of physiological serum, bicarbonate buffer, phosphate buffer or tris buffer. (tris (hydroxymethyl) aminomethane.
  • non-biodegradable embolization microspheres which are: - of calibrated size, - composed of biocompatible materials without risk of allergy, and exhibiting mechanical properties, in particular a of swelling, elasticity and compressibility, adequate for injection via a catheter or microcatheter and capable of recovering their original shape after injection while avoiding embolization far from the target site. active agents while retaining their mechanical properties SUMMARY OF THE INVENTION The present invention makes it possible to meet these needs.
  • embolization microspheres comprising a hydrophilic, non-biodegradable, solid, calibrated, elastic, compressible polymeric crosslinked matrix with a controlled swelling rate sufficient for permanent and targeted embolization.
  • the mechanical properties (swelling, elasticity, strength, compressive strength) of the microspheres of the invention allow them to be suitable for injection and capable of providing a sufficient and permanent level of embolization when they are injected into the. vascular tree of a mammal, preferably a human.
  • transfer agent chosen from alkyl halides and cycloaliphatic or aliphatic thiols having in particular from 2 to 24 carbon atoms, and optionally having another functional group chosen from amino, hydroxy and carboxy groups, the percentages of monomers a) and b) being cited in moles relative to the number of total moles of monomers and the percentages of compound c) being cited in moles relative to number of moles of hydrophilic monomer a).
  • transfer agent chosen from alkyl halides and cycloaliphatic or aliphatic thiols having in particular from 2 to 24 carbon atoms, and optionally having another functional group chosen from amino, hydroxy and carboxy groups, the percentages of monomers a) and b) being cited in moles relative to the number of total moles of monomers and the percentages of compound c) being cited in moles relative to number of moles of hydrophilic monomer a).
  • the inventors have discovered that the addition of 1.5% to less than 6% by mole relative to the number of moles of the hydrophilic monomer a), preferably 1.5% to 4.5%, preferably 3%, of a transfer agent chosen from those mentioned above in the reaction mixture for the polymerization of a crosslinked matrix comprising a hydrophilic polymer makes it possible to improve the mechanical properties of the non-biodegradable embolization microspheres, that is to say to increase their swelling, elasticity, solidity and improve their compressive strength.
  • the inventors have in particular discovered that the amount of transfer agent added to the reaction mixture must be strictly controlled to meet the needs mentioned above.
  • the swelling rate, elasticity and compression of the microspheres are optimal from 1.5% of transfer agent by mole relative to the number of moles of hydrophilic monomer a) present in the reaction mixture.
  • the microspheres obtained are not flexible enough to allow injection by microcatheter.
  • the transfer agent is present in amounts of 6% or more in the reaction mixture, the non-biodegradable embolization microspheres are too compressible, are not strong enough, and will break. Elasticity is also an important parameter.
  • the present invention also relates to embolization microspheres loaded with active substances, thus making it possible to combine vascular occlusion and the delivery of an active principle.
  • the present invention further relates to a pharmaceutical composition comprising non-biodegradable embolization microspheres as defined above, in association with a pharmaceutically acceptable vehicle, advantageously for administration by injection.
  • a subject of the present invention is also a kit comprising a pharmaceutical composition as defined above and at least one means of injecting said composition, for administration of said composition by the parenteral route.
  • a subject of the present invention is also a kit comprising on the one hand a pharmaceutical composition as defined above and on the other hand a contrast agent for imaging by X-ray, by magnetic resonance or by ultrasound, and optionally in less an injection medium for parenteral administration.
  • a pharmaceutical composition as defined above
  • a contrast agent for imaging by X-ray, by magnetic resonance or by ultrasound and optionally in less an injection medium for parenteral administration.
  • matrix based on should of course be understood to mean a matrix comprising the mixture and / or the product of the reaction between the constituents of bases used for the polymerization in a heterogeneous medium of this matrix, preferably only.
  • the basic constituents are the reagents intended to react together during the polymerization of the matrix.
  • the basic constituents are therefore introduced into a reaction mixture optionally further comprising a solvent or a mixture of solvents and / or other additives such as at least one salt and / or at least one polymerization initiator and / or at least one. stabilizer such as PVA.
  • the reaction mixture comprises at least the monomers a), b) and the transfer agent c) mentioned in the present description as basic constituents and at least one solvent, preferably a mixture solvents comprising an aqueous solvent and an organic solvent such as an apolar aprotic solvent, for example a water / toluene mixture.
  • a mixture solvents comprising an aqueous solvent and an organic solvent such as an apolar aprotic solvent, for example a water / toluene mixture.
  • the reaction mixture comprises a polymerization initiator such as for example t-butyl peroxide, benzoyl peroxide, azobiscyanovaleric acid (also called 4,4′-Azobis (4-cyanopentanoic acid)), AIBN (azobisisobutyronitrile), 1,1 ’Azobis (cyclohexane carbonitrile) or one or more thermal initiators such as 2-Hydroxy-4 ′ - (2-hydroxyethoxy) -2-methylpropiophenone (106797-53-9); 2-Hydroxy-2-methylpropiophenone (Darocur® 1173, 7473-98-5), 2,2-dimethoxy-2-phenylacetophenone (24650-42-8), 2,2-dimethoxy-2-phenyl acetophenone (Irgacure®, 24650-42-8) or 2-methyl-4 ′ - (methylthio) -2-morpholinopropiophenone (Irgacure®), 2-
  • the matrix is at least based on the monomers a), b) and the transfer agent c) mentioned in the present description, these compounds therefore being basic constituents.
  • the [basic component X] is in particular added to the reaction mixture in an amount of YY to YYY%” and to "the crosslinked matrix is in particular based on [component base X] in an amount of YY to YYY% ”are interpreted similarly.
  • the reaction mixture comprises at least [the base component X]” and "the crosslinked matrix is based on at least [the base component X]” are interpreted similarly.
  • organic phase of the reaction mixture is meant, within the meaning of the present invention, the phase comprising the organic solvent and the compounds soluble in said organic solvent, in particular the monomers, the transfer agent and the polymerization initiator.
  • grouping "(C X -VS Y ) alkyl ”means within the meaning of the present invention, a monovalent saturated, linear or branched hydrocarbon chain, comprising X to Y carbon atoms, X and Y being whole numbers between 1 and 36, preferably 1 and 18 , in particular 1 and 6.
  • (CX-CY) aryl is meant, within the meaning of the present invention, an aromatic hydrocarbon group, preferably comprising from X to Y carbon atoms, and comprising one ring or several joined rings, X and Y being integers between 5 and 36, preferably 5 and 18, in particular 5 and 10.
  • (CX-CY) heteroaryl is meant, within the meaning of the present invention, an aromatic group comprising X to Y cyclic atoms including one or more heteroatoms, advantageously 1 to 4 and even more advantageously 1 or 2, such as by example of sulfur, nitrogen or oxygen atoms, the other ring atoms being atoms of carbon.
  • X and Y are whole numbers between 5 and 36, preferably 5 and 18, in particular 5 and 10.
  • heteroaryl groups are furyl, thienyl, pyrrolyl, pyridinyl, pyrimidinyl, pyrazolyl, imidazolyl, triazolyl, tetrazolyl groups or indyle.
  • (CX-CY) alkylene group is meant, within the meaning of the present invention, a divalent, linear or branched hydrocarbon chain, comprising X to Y carbon atoms, X and Y being whole numbers between 1 and 36 , preferably 1 and 18, in particular 1 and 6.
  • X-CY) cycloalkylene group is meant, within the meaning of the present invention, a cyclic divalent saturated hydrocarbon group comprising from X to Y cyclic carbon atoms, X and Y being integers between 3 and 36 , preferably 3 and 18, in particular 3 and 6.
  • cyclopropylene cyclohexylene or also cyclopentylene groups.
  • grouping "(C X -VS Y ) alkenylene ”means within the meaning of the present invention, a divalent, linear or branched hydrocarbon chain, comprising X to Y carbon atoms and at least one double bond, X and Y being whole numbers between 2 and 36, preferably 2 and 18, in particular 2 and 6.
  • (CX-CY) cycloalkenylene means a cyclic divalent saturated hydrocarbon group comprising from X to Y cyclic carbon atoms and at least one double bond, X and Y being numbers integers between 3 and 36, preferably 3 and 18, in particular 3 and 6.
  • (CX-CY) alkynylene is understood to mean, within the meaning of the present invention, a divalent linear or branched hydrocarbon chain, comprising X to Y carbon atoms and at least one triple bond, X and Y being whole numbers between 2 and 36, preferably 2 and 18, in particular 2 and 6.
  • (C X -VS Y ) cycloalkynylene a cyclic divalent saturated hydrocarbon group comprising from X to Y cyclic carbon atoms and at least one triple bond, X and Y being whole numbers between 3 and 36, preferably 3 and 18, in particular 3 and 6.
  • (CX-CY) arylene is meant, within the meaning of the present invention, a divalent aromatic hydrocarbon group, comprising from X to Y carbon atoms, and comprising a or several adjoining cycles, X and Y being integers between 5 and 36, of preferably 5 and 18, in particular 5 and 10.
  • Park X -VS Y ) heteroarylene means, within the meaning of the present invention, a divalent aromatic group comprising from X to Y cyclic atoms including one or more heteroatoms, advantageously 1 to 4 and even more advantageously 1 or 2, such as for example atoms sulfur, nitrogen or oxygen, the other ring atoms being carbon atoms.
  • X and Y are integers between 5 and 36, preferably 5 and 18, in particular 5 and 10.
  • divalent radical is meant, within the meaning of the present invention, a radical having a valence of 2, c that is, having two chemical bonds covalent, polar covalent or ionic. Said radical can comprise, for example, carbon and / or oxygen atoms.
  • dry extract is meant, within the meaning of the present invention, the mass of dry microspheres contained in 1 ml of water-swollen microspheres.
  • transfer agent is understood to mean a chemical compound having at least one weak chemical bond. This agent reacts with the radical site of a growing polymer chain and interrupts the growth of the chain. In the chain transfer process, the radical is temporarily transferred to the transfer agent which restarts growth by transferring the radical to another polymer or monomer.
  • said chain transfer agent is chosen from the group consisting of monofunctional or polyfunctional thiols and alkyl halides.
  • said chain transfer agent is a cycloaliphatic or aliphatic thiol typically having from 2 to about 24 carbon atoms, preferably 2 to 12 carbon atoms, more preferably 6 carbon atoms, and optionally having a functional group additional selected from amino, hydroxy and carboxy groups.
  • chain transfer agents are thioglycolic acid, 2-mercaptoethanol, dodecanethiol, hexanethiol, and mixtures thereof, preferably hexanethiol.
  • the transfer agent is in particular present in the reaction mixture in an amount of 1.5% to less than 6%, preferably of 1.5% to 4.5% and in particular of 3% by mole, based on the number of moles of the hydrophilic monomer a).
  • the matrix is in particular based on transfer agent in an amount of 1.5% to less than 6%, preferably from 1.5% to 4.5% and in particular by 3% by mole, relative to the number of moles of the hydrophilic monomer a).
  • the matrix of the non-biodegradable embolization microspheres according to the invention is based on a transfer agent in amounts of 1.5% to 4.5% by mole relative to the number of moles.
  • the microspheres according to the invention comprise a crosslinked matrix based on 1.5% to 3% of transfer agent, preferably 3%.
  • a transfer agent to the reaction mixture in the abovementioned amounts, in particular between 1.5% and 3% by mole relative to the number of moles of hydrophilic monomer a), makes it possible in particular to avoid the presence of morphological defect on the microspheres of the invention after swelling and sterilization.
  • the absence of morphological defects is defined as the absence of twin or Siamese microspheres; microspheres themselves contained in other microspheres (or bead in bead); fractured microspheres or residues of fractured microspheres; stack or cluster of microspheres; cracked microspheres; deformed microspheres (non-spherical in shape); microspheres of non-smooth surfaces or polymer debris under magnification up to 100 times; inclusions in microspheres; drops of water trapped in the microspheres.
  • the embolization microspheres of the present invention advantageously exhibit Young's modulus values typically between 3000 Pa and 30,000 Pa, preferably between 3000 Pa and 25,000 Pa, more preferably between 3000 Pa and 10,000 Pa, preferably 5000 Pa at 10,000 Pa which testify to a high compressive strength of the microspheres, associated with a swelling rate and an optimal elasticity of said microspheres.
  • the non-biodegradable embolization microspheres comprise a homogeneous crosslinked matrix.
  • homogeneous crosslinked matrix is meant, within the meaning of the present invention, a matrix consisting of a three-dimensional polymer network in which the components are uniformly distributed. This limits the presence of structural defect and reinforces the strength of said network.
  • a sphere is defined as a surface of which all the points are equidistant from a point called the center.
  • microspheres is meant, within the meaning of the present invention, spherical particles having a diameter after swelling ranging from 20 to 1200 ⁇ m, for example from 20 to 100 ⁇ m, 40 to 150 ⁇ m, from 100 to 300 ⁇ m, from 300 to 500 ⁇ m, 500 to 700 ⁇ m, 700 to 900 ⁇ m, or 900 to 1200 ⁇ m, as determined by light microscopy.
  • the microspheres advantageously have a diameter small enough to be injected by needles, catheters or microcatheters with an internal diameter varying from a few hundred micrometers to more than one millimeter.
  • the expression "after swelling” means that the size of the microspheres is considered after the polymerization and sterilization steps which take place during their preparation.
  • the sterilization step involves, for example, passing the microspheres after the polymerization step in an autoclave at high temperature, typically at a temperature above 100 ° C, preferably at a temperature between 110 ° C and 150 ° C, preferably 121 ° C. During this sterilization step, the microspheres continue to swell. According to the present invention, the overall swelling rate of the microspheres is controlled.
  • the rate of swelling is defined as: Where m w is the weight in grams of 1 mL of sedimented microspheres and m d is the weight in grams of 1 ml of sedimented microspheres which were then lyophilized.
  • controlled swelling rate is meant, within the meaning of the present invention, that the overall swelling rate of the microspheres is reproducible depending on the batches, in particular that it differs by less than 15% from one batch to the next. other.
  • the term “sedimented microsphere” is understood to mean microspheres dissolved in a container and then left long enough without stirring so that they fall to the bottom of the container in which they are contained, the supernatant thus having been able to. be withdrawn.
  • lyophilized microsphere is meant, within the meaning of the present invention, microspheres which have undergone freezing followed by dehydration by sublimation.
  • hydrophilic monomer is meant, within the meaning of the present invention, a monomer having a strong affinity for water, that is to say tending to dissolve in water, to mix with water. , to be wetted by water, or capable of swelling in water after polymerization.
  • the hydrophilic monomer a) according to the invention is chosen from the group consisting of N-vinylpyrrolidone, vinyl alcohol, 2-hydroxyethyl methacrylate, sec-butyl acrylate, n-butyl
  • the hydrophilic monomer a) is poly (ethylene glycol) methyl ether methacrylate (m-PEGMA).
  • the hydrophilic monomer a) is in particular present in the reaction mixture in an amount of 20% to 95%, preferably 30% to 95%, more preferably 45% to 95%, of preferably from 45% to 75%, in particular from 45% to 70%, more particularly from 45% to 65% by mole, relative to the total number of moles of monomers.
  • crosslinking monomer is meant, within the meaning of the present invention, an at least bifunctional but also multifunctional monomer having a double bond at each polymerizable end.
  • the crosslinking monomer in combination with the other monomers in the mixture, allows the formation of a crosslinked network.
  • the structure and the amount of crosslinking monomer (s) in the mixture of monomers can be easily chosen by one skilled in the art to provide the desired crosslinking density.
  • the crosslinker is also advantageous for the stability of the microspheres.
  • the crosslinker prevents the microspheres from dissolving in any solvent.
  • the crosslinker also improves the compressibility of the microspheres, which is favorable for embolization.
  • non-biodegradable hydrophilic crosslinking agent is meant, within the meaning of the present invention, a crosslinking agent as defined above, having a strong affinity for water and which cannot be degraded under the physiological conditions of the body of a person.
  • the biodegradation of a molecule is permitted when the latter contains sufficient functional sites which can be cleaved under physiological conditions, in particular by the endogenous enzymes of the body of a mammal, in particular of the human body, and / or in physiological pH (usually around 7.4).
  • the functional sites cleavable under physiological conditions are in particular the amide bonds, the ester bonds and the acetals.
  • a molecule comprising an insufficient number of said functional sites will therefore be considered as non-biodegradable.
  • the crosslinking monomer contains less than 20 physiologically cleavable functional sites, preferably less than 15 sites, more preferably less than 10 sites, still more preferably less than 5 sites.
  • the linear or branched non-biodegradable hydrophilic crosslinker according to the invention is in particular a non-biodegradable crosslinker soluble in organic solvent and comprising the polymerizable groups of diacrylate, methacrylate, acrylamide, and / or methacrylamide.
  • R 7 and R 8 independently of one another H or a (C1-C6) alkyl such as a methyl group,
  • A represents, alone or with au at least one of the atoms to which it is bonded, a (C1-C6) alkylene or a polyethylene glycol (PEG), preferably a polyethylene glycol (PEG).
  • PEG polyethylene glycol
  • the polyethylene glycol has a length varying from 200 to 10,000 g / mol, preferably from 200 to 2000 g / mol, more preferably from 500 to 1000 g / mol.
  • crosslinking monomer which can be used within the framework of the present invention, there may be mentioned (without being limiting): 1,4-butanediol diacrylate, pentaerythritol tetraacrylate, methylenebisacrylamide, glycerol 1,3-diglycerolate diacrylate and poly (ethylene glycol) dimethacrylate (PEGDMA).
  • the crosslinking monomer is poly (ethylene glycol) dimethacrylate (PEGDMA), the polyethylene glycol unit having a length varying from 200 to 10,000 g / mol, preferably from 200 to 2000 g / mol, more preferably from 500 to 1000 g / mol.
  • the crosslinking monomer is in particular present in the reaction mixture in an amount of 1% to 15%, preferably 2% to 10%, in particular 2% to 7%, more particularly 2%. at 5%, in particular 5% by mole relative to the total number of moles of monomers.
  • the crosslinked polymeric matrix of the microspheres is based on the basic constituents a), b) and c) as defined above only, in the aforementioned proportions, no other basic constituent not being added to the reaction medium. It is thus obvious that the sum of the proportions of monomers a) and b) mentioned above must be equal to 100%.
  • formula (III): (CH 2 CR
  • ionized or ionizable group is meant, within the meaning of the present invention, a charged group or which may be in charged form (in ion form), that is to say bearing at least one positive or negative charge, depending on the pH of the medium.
  • the COOH group can be ionized in COO- form and the NH2 group can be in ionized NH3 form. + .
  • the introduction of an ionized or ionizable monomer into the reaction mixture makes it possible to increase the hydrophilicity of the resulting microspheres, thus increasing the rate of swelling of said microspheres, further facilitating their injection via catheters and microcatheters.
  • the ionized or ionizable monomer is a cationic monomer, advantageously chosen from the group consisting of (methacryloyloxy) ethylphosphorylcholine, 2- (dimethylamino) ethyl (meth) acrylate, 2- (diethylamino) (meth) acrylate ethyl) and 2 - ((meth) acryloyloxy) ethyl) - trimethylammonium chloride, advantageously the cationic monomer is diethylamino) ethyl (meth) acrylate.
  • the crosslinked matrix of the microspheres according to the present invention can be obtained by adding to the reaction mixture between 1 and 40 mol% of a cationic monomer mentioned above on the basis of the total amount of monomers.
  • the crosslinked matrix according to the invention is obtained by adding to the reaction mixture between 5% and 15%, preferably by adding 10%, in moles of ionized or ionizable monomer relative to the total number of moles of monomers when the microspheres results are not intended to be loaded with an active substance.
  • the crosslinked matrix according to the invention is obtained by adding to the reaction mixture between 20% and 40%, preferably by adding to the reaction mixture 20% to 30%, preferably 30% by moles of ionized or ionizable monomer relative to the total number of moles of monomers.
  • the ionized or ionizable monomer is an anionic monomer advantageously chosen from the group consisting of acrylic acid, methacrylic acid, 2-carboxyethyl acrylate, 2-acrylate oligomers.
  • the crosslinked matrix of the non-biodegradable embolization microspheres according to the present invention can be obtained by adding to the reaction mixture between 1% and 40% by moles of an anionic monomer mentioned above on the basis of the total amount of monomers. , more preferably between 10% and 30% by moles.
  • the ionized or ionizable monomer is methacrylic acid.
  • the crosslinked matrix according to the invention is based on methacrylic acid (MA or AM) in amounts of between 10% and 30% by moles based on the total amount of monomers.
  • the crosslinked matrix of the microspheres according to the invention is also based on at least one halogenated, preferably iodinated, monomer.
  • a halogenated, preferably iodinated, monomer has the effect of increasing the density of the resulting microspheres.
  • the inventors have discovered that when a halogenated monomer, typically iodinated, is used in the reaction mixture to obtain the crosslinked matrix of the invention, in amounts advantageously between 1% and 15% by moles relative to the total number of monomers, the resulting embolization microspheres form an optimal and stable suspension in a mixture comprising 50% physiological serum and 50% contrast agent.
  • a halogenated monomer typically iodinated
  • the introduction of a halogenated monomer, in particular iodine, in the aforementioned amounts makes it possible to prevent the microspheres from floating on the surface of such a mixture.
  • the halogenated monomer is in particular added to the reaction mixture in an amount of 5% to 15%, preferably 5% to 10%, more particularly 5% to 7%, by mole relative to to the total number of moles of monomers. Further, by using 15% or less of the halogenated monomer by mole based on the total number of moles of the monomer, the resulting microspheres are not radiopaque. The halogenated monomer is introduced in an insufficient quantity to impart radiopacity to the microsphere.
  • the halogenated monomer is more advantageously a monomer of general formula (IV) as defined above, in which Y represents NH-W, O-W or (O-R 16 ) p -W, preferably NH-W or (O-R 16 ) p -W, more preferably (O-R 16 ) p -W, W representing Ar or L-Ar, p, R 16 , L and Ar being as defined above.
  • Y represents NH-W, O-W or (O-R 16 ) p -W, preferably NH-W or (O-R 16 ) p -W, more preferably (O-R 16 ) p -W, W representing Ar or L-Ar, p, R 16 , L and Ar being as defined above.
  • R 16 is a (C 1 -VS 36 ) alkylene, in particular a (C 1 -VS 18 ) alkylene, more particularly a (C 1 -VS 6 ) alkylene;
  • L represents -OCO-;
  • Ar represents a (C 5 -VS 36 ) aryl, in particular a (C5-C10) aryl, more particularly a phenyl, substituted with one, two or three atom (s) of iodine and / or bromine, preferably of iodine, and optionally two or three, groups chosen from -NR at R b , -NR vs HORN d , -COOR e , -OCOR g , -CONR h R i , -OCONR j R k , - NRlCOORo- and -NRrCONRsRt, preferably -NRaRb, -NRcCORd.
  • the halogenated monomer is a monomer of general formula (IV) as defined above, in which Y represents NH-W or (O-R16) p-W, more advantageously (O-R 16 ) p -W, W representing Ar or L-Ar, and p, R 16 , L and Ar being as defined above.
  • R 16 is a (C 2 -VS 36 ) alkylene, in particular a (C 2 - C18) alkylene, more particularly a (C 2 -VS 6 ) alkylene;
  • L represents -OCO-, -C (O) NR17-, or -NR18C (O) -;
  • Ar represents a (C5-C36) aryl, in particular a (C5-C10) aryl, more particularly a phenyl, substituted by one, two or three atom (s) of iodine and / or bromine, preferably of iodine, and optionally two or three, groups chosen from - NR at R b , -NR vs HORN d , -COOR e , -OCOR g , -CONR h R i , -OCONR j R k , -NR l COOR o - and -NR r CONR s R
  • Ar represents a (C 5 -VS 10 ) aryl, more particularly a phenyl, substituted with three atoms of iodine and / or bromine, preferably iodine, and optionally two groups chosen from (C 1 -VS 10 ) alkyl, -NRaRb, -NRcCORd, -COORe, -OCORg, -CONRhRi, -OCONRjRk, -NRlCOORo- and -NRrCONRsRt.
  • Ar represents a phenyl substituted with three atoms of iodine and / or bromine, preferably iodine, and optionally two groups chosen from (C 1 - VS 10 ) alkyl, -NR at R b , -NR vs HORN d , -COOR e , -OCOR g , -CONR h R i , -OCONR j R k , -NR l COOR o - and - NRrCONRsRt, advantageously among (C 1 -VS 10 ) alkyl, -NRaRb, -NRcCORd, -COORe, -CONRhRi, - NRlCOORo- and -NRrCONRsRt.
  • the halogenated monomer is a monomer of general formula (IV) as defined above, in which Y represents O-C6H4I, O-C6H3I2, O-C6H2I3, NH-C6H4I, NH-C 6 H 3 I 2 , NH-C 6 H 2 I 3 , O-CH 2 -CH 2 -C (O) -C 6 H 4 I, O-CH 2 -CH 2 -O-C (O) -C 6 H 3 I 2 , O-CH 2 -CH 2 -O-C (O) - C 6 H 2 I 3 , NH-CH 2 -CH 2 -C (O) -C 6 H 4 I, NH-CH 2 -CH 2 -O-C (O) -C 6 H 3 I 2 , or NH-CH 2 -CH 2 -O-C (O) -C 6 H 2 I 3 , in particular O-C6H2I3, NH-C6H2I,
  • R 29 represents a (C 1 -VS 6 ) alkyl, more preferably a (C 1 - VS 3 ) alkyl, more preferably methyl.
  • R 30 represents a (C 2 -VS 18 ) alkylene, more particularly a (C 2 - VS 6 ) alkylene, more preferably ethylene.
  • R31 and R32 represent, independently of each other, a hydrogen atom.
  • W ’ advantageously represents a single bond, -C (O) NH-, or -NHC (O) -.
  • Ar ' represents a (C5-C10) aryl, more particularly a phenyl, substituted with one, two or three atom (s) of iodine and / or bromine, preferably of iodine, and optionally two or three, groups chosen from (C 1 -VS 10 ) alkyl, -NR 33 R 34 , - NR 35 HORN 36 , -C (O) OR 37 , -GOLD 38 , -OC (O) R 39 , -C (O) NR 40 R 41 , -OC (O) NR 42 R 43 , -NR 44 C (O) OR 45 , - NR 46 C (O) NR 47 R 48 , -OC (O) OR 49 , and -C (O) R 50 .
  • Ar ’ represents a (C 5 -VS 10 ) aryl, more particularly a phenyl, substituted with three atoms of iodine and / or bromine, preferably iodine, and optionally two groups chosen from (C 1 -VS 10 ) alkyl, -NR 33 R 34 , -NR 35 HORN 36 , -C (O) OR 37 , -GOLD 38 , - OC (O) R39, -C (O) NR40R41, -OC (O) NR42R43, -NR44C (O) OR45, -NR46C (O) NR47R48, -OC (O) OR49, and - C (O) R 50 .
  • Ar ' represents a phenyl substituted with three atoms of iodine and / or bromine, preferably of iodine, and optionally two groups chosen from (C1-C10) alkyl, -NR33R34, -NR35C (O) R36, - C (O) OR37, -OR38, -OC (O) R39, -C (O) NR40R41, -OC (O) NR42R43, -NR44C (O) OR45, -NR46C (O) NR47R48, -OC (O) OR49 , and -C (O) R50, advantageously from (C1- C10) alkyl, -NR33R34, -NR35C (O) R36, -C (O) OR37, -OR38, -C (O) NR40R41, -NR44C (O) OR45, - NR 46 C (O) NR 47 R 48, and optionally two groups
  • the halogenated monomer is chosen from the following compounds of general formula (VI):
  • the halogenated monomer is chosen from the following compounds: More advantageously, the halogenated monomer is chosen from (tri-iodobenzoyl) oxo ethyl methacrylate (MAOETIB) of formula (IVa) below: or 2- (2- (2- (2- (2,3,5-triiodobenzamido) ethoxy) ethyl methacrylate of the following formula:
  • the crosslinked matrix of the microspheres according to the invention is also based on at least one colored monomer to make them visible to the naked eye.
  • the crosslinked matrix of the microspheres according to the invention is also based on at least one colored monomer of the following general formula (V): , in which, ⁇ Z1 and Z2 represent, independently of each other, H or OR26, R26 representing H or a (C1-C6) alkyl, advantageously Z1 and Z2 represent H; ⁇ X represents H or a halogen such as Cl, advantageously H; ⁇ R24 represents a group selected from (C1-C6) linear or branched alkylene, (C5- C36) arylene, (C5-C18) arylene-O-R27, (C5-C18) heteroarylene and (C5-C18) heteroarylene-O -R28, R27 and R28 representing a (C1-C6) alkyl or a (C1-C6) alky
  • ⁇ R25 represents H or a (C1-C6) alkyl, advantageously a (C1-C6) alkyl, in particular a methyl.
  • the colored monomer has the following formula (Va) or (Vb):
  • the colored monomer is in particular added to the reaction mixture in an amount from 0% to 1%, preferably from 0% to 0.5%, more particularly from 0.01% to 0, 2%, more preferably from 0.02% to 0.2%, and even more particularly from 0.04% to 0.1% by mole, relative to the number of total moles of monomers.
  • Magnetic Resonance Imaging MRI is used in the medical community to provide two-dimensional sectional images of the internal structures of a patient's body without exposing them to harmful radiation.
  • the crosslinked matrix of embolization microspheres according to the invention may further be based on particles making it possible to make the microspheres visible on magnetic resonance imaging scans.
  • the particles visible on MRI are advantageously added to the reaction mixture in an amount of 0% to 10%, preferably 0.1% to 10% by volume of organic phase.
  • the crosslinked matrix of the microspheres does not comprise an ionized or ionizable monomer as basic constituent, it is advantageously based on: - 94.5% to 98%% of hydrophilic monomer a) , preferably 94.5% to 96%, more preferably 94.96%; - 2% to 5% of non-biodegradable hydrophilic crosslinking monomer b), preferably 3% to 5%, preferably 5%; - 1% to 3% of transfer agent c), preferably 3%; - 0% to 0.5% of colored monomer, preferably 0.02% to 0.1%, preferably 0.04%; and - 0% to 10% of particles visible on MRI, preferably 0% to 5%, preferably 1%, each of the monomers mentioned and the nature of their associated percentages being as defined above
  • the microspheres according to the invention not loaded with an active substance comprise a crosslinked matrix advantageously based on: - 79.5% to 93% of hydrophilic monomer a), preferably 80% 90%, preferably 84.96%; - 2% to 5% of non-biodegradable hydrophilic crosslinking monomer b), preferably 3% to 5%, preferably 5%; - 1% to 3% of transfer agent c), preferably 3%; - 5% to 15% of ionized or ionizable monomer, preferably 8% to 12%, preferably 10%; - 0% to 0.5% of colored monomer, preferably 0.02% to 0.1%, preferably 0.04%; and - 0% to 10% of particles visible on MRI, preferably 0% to 5%, preferably 1%, each of the monomers mentioned and the nature of their associated percentages being as defined above in the present description.
  • the microspheres according to the invention not loaded with an active substance comprise a crosslinked matrix advantageously based on: - 63% to 95% of hydrophilic monomer a), preferably 70% to 90 %, preferably 75% to 80%, preferably 79.96%; - 2% to 5% of non-biodegradable hydrophilic crosslinking monomer b), preferably 3% to 5%, preferably 5%; - 1% to 3% of transfer agent c), preferably 3%; - 5% to 15% of ionized or ionizable monomer, preferably 8% to 12%, preferably 10%; - 5% to 7% of halogenated monomer, preferably 5% to 6%, preferably 5%; - 0% to 0.5% of colored monomer, preferably 0.02% to 0.1%, preferably 0.04%; and - 0% to 10% of particles visible in MRI
  • the microspheres according to the invention loaded with an active substance comprise a crosslinked matrix advantageously based on: - 45% to 65% of hydrophilic monomer a), preferably 50% to 65%, preferably 55% to 65%, preferably 64.96%; - 2% to 5% of non-biodegradable hydrophilic crosslinking agent b), preferably 3% to 5%, preferably 5%; - 1% to 3% of transfer agent c), preferably 3%; - 20% to 40% of ionized or ionizable charged monomer, preferably 30% to 40%, preferably 30%; - 0% to 0.5% of colored monomer, preferably 0.02% to 0.1%, preferably 0.04%; and - 0% to 10% of particles visible on MRI, preferably 0% to 5%, preferably 1%, each of the monomers mentioned and the nature of their associated percentages being as defined above in the present description.
  • the microspheres according to the invention loaded with an active substance comprise a crosslinked matrix advantageously based on: - 47.5% to 73% of hydrophilic monomer a), preferably 50% to 70%, preferably 59, 96%; - 2% to 5% of non-biodegradable hydrophilic crosslinking agent b), preferably 3% to 5%, preferably 5%; - 1% to 3% of transfer agent c), preferably 3%; - 20% to 40% of ionized or ionizable charged monomer, preferably 30% to 40%, preferably 30%; - 5% to 7% of halogenated monomer, preferably 5% to 6%, preferably 5%; - 0% to 0.5% of colored monomer, preferably 0.02% to 0.1%, preferably, preferably 0.04%; and - 0% to 10% of particles visible on MRI, preferably 0% to 5%, preferably 1%, each of the
  • the crosslinked matrix of the microspheres according to the invention can be easily synthesized by numerous methods well known to those skilled in the art.
  • the crosslinked matrix according to the invention can typically be obtained by suspension polymerization, direct or reverse, as described below and in the examples.
  • a direct suspension can take place as follows: (a) kneading or stirring a reaction mixture comprising: (i) at least one hydrophilic monomer a) as defined above, at least one non-biodegradable hydrophilic crosslinker b) as defined above above, and at least one transfer agent c) as defined above; (ii) a polymerization initiator present in amounts ranging from 0.1 to about 2 parts by weight per 100 parts by weight of monomers; (iii) a surfactant in an amount of not more than about 5 parts by weight per 100 parts by weight of aqueous phase, preferably not more than about 3 parts by weight and most preferably in the range of 0.2 to 1.5 parts by weight of aqueous phase; and (iv) water to form an oil-in-water suspension; and (b) polymerizing the basic constituents.
  • the surfactant can be selected from the group consisting of hydroxyethyl cellulose, polyvinylalcohol (PVA), polyvinylpyrrolidone, polyethylene oxide, polyethylene glycol and Polysorbate 20 (Tween ® 20); preferably it is PVA.
  • PVA polyvinylalcohol
  • Tween ® 20 polyvinylpyrrolidone
  • the microspheres thus obtained are then washed and calibrated according to techniques well known to those skilled in the art.
  • Inverse suspension can proceed as follows: (a) kneading or stirring a reaction mixture comprising: (i) at least one hydrophilic monomer a) as defined above, at least one non-biodegradable hydrophilic crosslinker b) as defined above, and at least one transfer agent c) as defined above; (ii) a polymerization initiator present in amounts ranging from 0.1 to about 2 parts by weight per 100 parts by weight of monomers; (iii) a surfactant in an amount of not more than about 10 parts by weight per 100 parts by weight of the oil phase, preferably not more than about 8 parts by weight and most preferably in the range of 3 to 7 parts by weight ; and (iv) the oil to form a water-in-oil suspension; and (b) polymerizing the basic constituents.
  • a reaction mixture comprising: (i) at least one hydrophilic monomer a) as defined above, at least one non-biodegradable hydrophilic crosslinker b) as defined above, and at
  • the polymerization initiator may in particular be t-butyl peroxide, benzoyl peroxide, azobiscyanovaleric acid (also called 4,4′-Azobis (4-cyanopentanoic acid), 1,1 'Azobis (cyclohexane carbonitrile) or AIBN (azobisisobutyronitrile) or one or more thermal initiators such as 2-Hydroxy- 4 ′ - (2-hydroxyethoxy) -2-methylpropiophenone (106797-53-9); 2- Hydroxy-2-methylpropiophenone (Darocur® 1173, 7473-98-5), 2,2-dimethoxy-2-phenylacetophenone (24650-42-8), 2,2-dimethoxy-2-phenyl acetophenone (Irgacure®, 24650- 42-8) or 2-methyl-4 ′ - (methylthio) -2-morpholinopropiophenone (Irgacure®, 718
  • the surfactant can be selected from the group consisting of esters sorbitan such as sorbitan monolaurate (Span ® 20), sorbitan monopalmitate (Span ® 40), sorbitan monooleate (Span ® 80) and sorbitan trioleate (Span ® 85), hydroxyethyl cellulose, a mixture of glyceryl stearate and PEG stearate (Arlacel ® ) and cellulose acetate.
  • the oil used in the process described above can be chosen from paraffin oil, silicone oil and organic solvents such as hexane, cyclohexane, ethyl acetate or acetate. butyl.
  • a drug, an active substance, a diagnostic agent or macromolecules can / can also be loaded on microspheres, that is to say adsorbed on the crosslinked matrix by non- interactions covalent, optionally in the presence of pharmaceutically acceptable excipient (s) well known to those skilled in the art.
  • This particular way of trapping drugs or active substances is called physical encapsulation. No special requirements are imposed on the drug or active substance to be loaded. Loading can be done by many methods well known to those skilled in the art such as passive adsorption (swelling of the crosslinked matrix in a drug solution) or by ionic interaction.
  • the microspheres can be loaded with a drug, an active substance or a diagnostic agent and thus allow their release on a target site, said target site being inside the body. of a mammal, in particular within a human body.
  • the crosslinked matrix of the microspheres according to the invention can therefore be loaded with a drug or an active substance or a diagnostic agent, advantageously having a molar mass of less than 5000 Da, typically less than 1000 Da, the drug or the active substance being advantageously chosen from the group consisting of anti-inflammatory agents, local anesthetics, analgesics, antibiotics, anticancer agents, steroids, antiseptics and a mixture of these .
  • the polymer according to the invention can be loaded with an anticancer agent.
  • the anticancer agent is preferably chosen from anthracyclines such as doxorubicin, epirubicin or idarubicin, platinum complexes, compounds related to anthracyclines such as mitoxantrone and nemorubicin, antibiotics such as mitomycin C (Ametycine ® ), bleomycin and actinomycin D, other anti-neoplastic compounds such as irinotecan, 5-Fluoro-Uracil (Adrucil®), sorafenib (Nevaxar ® ), sunitinib (Sutent ® ), regorafenib, brivanib, orantinib, linsitinib, erlotinib, cabozantinib, foretinib, tivantinib, fotemustine, tauromustine (TCNU), carmustine, cytosine C, cyclophosphonamide, cytosine arabinoside
  • the anticancer agent is chosen from anthracyclines, immuno-stimulants, platinum complexes, anti-neoplastics and their mixtures. Even more preferably, the anticancer agent is chosen from anthracyclines, antibodies, anti-neoplastics and their mixtures.
  • the antibodies are for example chosen from anti-PD-1, anti-PD-L1, anti-CTLA-4, anti-CEA (CarcinoEmbryonic Antigen) or a mixture of these.
  • Anti-PD-1s are, for example, nivolumab or pembrolizumab.
  • Anti-PD-L1s are, for example, avelumab, durvalumab or atezolizumab.
  • Anti-CTLA-4s are, for example, ipilimumab or tremelimumab.
  • the anticancer drug is selected from the group consisting of paclitaxel, doxorubicin, epirubicin, idarubicin, irinotecan, GM-CSF (Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor), tumor necrosing Factor-alpha (TNFalpha), antibodies, and their mixtures.
  • the local anesthetic is chosen from lidocaine, bupivacaine and their mixtures.
  • the anti-inflammatory can be selected from ibuprofen, niflumic acid, dexamethasone, naproxen and mixtures thereof.
  • the polymer can be loaded, in particular by extemporaneous adsorption, with macromolecules chosen from the group consisting of enzymes, antibodies, cytokines, growth factors, coagulation factors, hormones. , plasmids, antisense oligonucleotides, siRNA, ribozymes, DNA enzyme (also called DNAzyme), aptamers, anti-inflammatory proteins, bone morphogenic proteins (BMP), pro-angiogenic factors, factors of vascular endothelial growth (VEGF) and TGF-beta, and angiogenesis inhibitors or anti-tyrosine kinases and mixtures thereof.
  • macromolecules chosen from the group consisting of enzymes, antibodies, cytokines, growth factors, coagulation factors, hormones. , plasmids, antisense oligonucleotides, siRNA, ribozymes, DNA enzyme (also called DNAzyme), aptamers, anti-inflammatory proteins, bone morphogenic proteins (BMP), pro-angi
  • Anti-inflammatory proteins are, for example, infliximab or rilonacept and their mixture.
  • the proangiogenic factors are, for example, fibroblast growth factors (FGFs) and their mixture.
  • Angiogenesis inhibitors are, for example, bevacizumab, ramucirumab, nesvacumab, olaratumab, vanucizumab, rilotumumab, emibetuzumab, aflibercept, ficlatuzumab, pegaptanib and mixtures thereof.
  • Anti-tyrosine kinases are, for example, lenvatinib, sorafenib, sunitinib, pazopanib, vandetanib, axitinib, regorafenib, cabozantinib, fruquintinib, nintedanib, anlotinib, motesanib, cediranib, sulfatinib, dovetinib, linifanib and their mixtures.
  • the polymer can be loaded with macromolecules chosen from anti-tyrosine kinases, TGF-beta, angiogenesis inhibitors and their mixtures.
  • the invention in a second aspect, relates to a pharmaceutical composition comprising non-biodegradable embolization microspheres according to the invention, in association with a pharmaceutically acceptable vehicle, advantageously for administration by injection.
  • a pharmaceutically acceptable vehicle includes, but is not limited to, water for injection, saline also referred to as physiological saline, starch, hydrogel, polyvinylpyrrolidone, polysaccharide, ester of hyaluronic acid, plasma, a contrast agent for X-ray, magnetic resonance or ultrasound imaging, a buffering agent, a preservative, a gelling agent and / or a surfactant.
  • the pharmaceutically acceptable vehicle is physiological serum, water for injection, a contrast agent for imaging by X-ray, by magnetic resonance or by echography, or their mixtures. More advantageously, the pharmaceutically acceptable vehicle is physiological saline, a contrast agent for imaging by X-ray, by magnetic resonance or by ultrasound, or a mixture of physiological saline and a contrast agent for imaging by X-ray, for example magnetic resonance or ultrasound.
  • the contrast agent is preferably a contrast agent for X-ray imaging.
  • nonionic iodinated water-soluble contrast agent such as, for example, iobitridol (Xenetix ® ), iopamidol (Iopamiron ® , Isovue ® ), iomeprol (Iomeron ® ), ioversol (Optiray ® , Optiject ® ), iohexol (Omnipaque ® ), iopentol (Imagopaque ® ), ioxitol (Oxilan®), iopromide (Ultravist ® ), metrizamide (Amipaque ® ), iosarcol (Melitrast ® ), iotrolan (Isovist ® ), iodixanol (Visipaque ® ), iosimenol and iosimide (Univist ® ) and a mixture
  • the contrast agent is a contrast agent for magnetic resonance imaging (MRI). These are advantageously gadolinium chelates (Dotarem®).
  • the contrast agent is a contrast agent for ultrasound imaging. It is advantageously sulfur hexafluoride (Sonovue®).
  • the pharmaceutical composition comprises non-biodegradable embolization microspheres according to the invention, in combination with physiological serum, said composition being intended to be mixed with at least one contrast agent for X-ray, magnetic resonance or ultrasound imaging as defined above, in particular for X-ray imaging, before administration by injection, such a mixture causing the microspheres according to the invention to be suspended.
  • the pharmaceutical composition advantageously has an acceptable viscosity for injection.
  • the pharmaceutical composition according to the invention comprises non-biodegradable embolization microspheres according to the invention, in combination with a mixture of physiological serum and a contrast agent as defined herein.
  • physiological serum and the contrast being present in proportions 70/30 to 20/80, advantageously from 50/50 to 20/80, preferably 50/50.
  • the pharmaceutical composition according to the invention comprises microspheres obtained by polymerization of a reaction mixture comprising from 5% to 10%, more preferably from 5% to 7% of halogenated monomer as described in the present description
  • said composition pharmaceutical comprises said microspheres in combination with a mixture of physiological serum and a contrast agent in proportions of 80/20 and 0/100, preferably 70/30 and 40/60, in particular 50/50.
  • said microspheres have a size of 500 to 700 ⁇ m, 700 to 900 ⁇ m or 900 to 1200 ⁇ m. In this way, the suspension of microspheres in the solution is homogeneous and stable for the time required for injection.
  • the pharmaceutical composition according to the invention comprises microspheres obtained by polymerization of a reaction mixture not comprising halogenated monomer as described in the present description
  • said pharmaceutical composition comprises said microspheres in combination with a mixture of physiological serum and a contrast agent in proportions of between 80/20 and 0/100.
  • the fields of application of the non-biodegradable embolization microspheres according to the invention include in particular vessel embolization, in particular in the case of uterine fibroids and of chemoembolization, for example in the case of hepatocarcinoma also called hepatocellular carcinoma ( HCC) or primary liver cancer, which consists of eliminating a tumor by combining vascular occlusion with the delivery of one or more active ingredients or macromolecules loaded into embolization microspheres.
  • HCC hepatocellular carcinoma
  • HCC hepatocellular carcinoma
  • This technique makes it possible to concentrate the drug load at the level of the tumor and therefore to reduce the systemic concentration and at the same time the undesirable effects.
  • the non-biodegradable embolization microspheres according to the invention can, as indicated above, be used for various biomedical purposes, which means that they must be compatible with the human body or the body of a mammal. More particularly, suitable biomedical materials do not possess hemolytic properties.
  • the present invention further relates to the specific use of a transfer agent in the polymerization of a crosslinked matrix comprised in non-biodegradable embolization microspheres to allow injection of said microspheres, in particular injection into a catheter or a tube. microcatheter with an internal diameter varying from a few hundred micrometers to more than one millimeter.
  • the present invention also relates to the specific use of a transfer agent in the polymerization of a crosslinked matrix to improve the mechanical properties (swelling, elasticity, strength, compressive strength).
  • Said transfer agent is in particular chosen from cycloaliphatic or aliphatic thiols having in particular from 2 to 24 carbon atoms, and optionally having another functional group chosen from amino, hydroxy and carboxy groups.
  • a subject of the present invention is also a kit comprising a pharmaceutical composition as defined above and at least one means of injecting said composition, for administration of said composition by the parenteral route.
  • injection means means any means allowing parenteral administration.
  • said injection means is one or more syringes and / or one or more syringe (s) which can be pre-filled and / or one or more catheter (s) or microcatheter (s) for administration of said composition by injection.
  • the pharmaceutical composition present in said kit comprises the microspheres according to the present invention in combination with physiological serum, a contrast agent, or a mixture thereof. More advantageously, said pharmaceutical composition comprises the microspheres according to the present invention in combination with a mixture of physiological serum and of a contrast agent in proportions of between 80/20 and 0/100, advantageously of between 70/30 and 40 / 60, preferably 50/50.
  • said pharmaceutical composition comprises said microspheres in combination with a mixture of physiological serum and of a contrast agent in proportions of between 60/40 and 0/100, advantageously 50/50.
  • said pharmaceutical composition comprises said microspheres in combination with a mixture of physiological serum and a contrast agent in proportions of between 80/20 and 0/100.
  • the injection means present in the kit according to the invention is suitable for parenteral administration of the pharmaceutical composition according to the invention.
  • the size of the syringe (s) or of the (micro) catheter (s) will be adapted according to the size of the microspheres according to the invention and the volume to be injected for embolization.
  • a subject of the present invention is also a kit comprising on the one hand a pharmaceutical composition as defined above and on the other hand at least one contrast agent for imaging by X-ray, by magnetic resonance or by echography, and optionally at least one injection means for parenteral administration.
  • the injection means is as defined above.
  • the pharmaceutical composition and the contrast agent are packaged separately and are intended to be mixed just before administration by injection.
  • at least one contrast agent is as defined above in the description.
  • the at least one contrast agent is a contrast agent for X-ray imaging as defined above in the description.
  • the pharmaceutical composition advantageously comprises the microspheres according to the present invention in association with a pharmaceutically acceptable vehicle for administration by injection.
  • Said pharmaceutically acceptable vehicle may be, for example, but not limited to, water for injection, physiological saline, starch, hydrogel, polyvinylpyrrolidone, polysaccharide, ester. hyaluronic acid and / or plasma.
  • the pharmaceutical composition advantageously comprises the microspheres according to the present invention in combination with physiological saline or water for injection.
  • the pharmaceutical composition is advantageously packaged directly in an injection means, in particular in a syringe, suitable for the injection of parenteral embolization microspheres.
  • the contrast agent is advantageously packaged in a vial or directly in an injection means, in particular a syringe, in particular suitable for the injection of parenteral embolization microspheres.
  • the pharmaceutically acceptable vehicle / contrast agent proportions are between 80/20 and 0/100, advantageously between 70/30 and 40/60, preferably 50/50.
  • the pharmaceutically acceptable vehicle proportions / contrast agent are between 70/30 and 0/100, advantageously between 60/40 and 20/80, preferably 50/50.
  • the proportions of pharmaceutically acceptable vehicle / contrast agent are between 80/20 and 0/100. Description of the figures Figure 1: Average diameter of the microspheres (MS) after sterilization as a function of the concentration of transfer agent.
  • Figure 2 Percentage of defect-free microspheres as a function of transfer agent concentration.
  • Figure 3 Example of microspheres: A: flawless with 0% hexanethiol; B: fractured with 0% hexanethiol; C: deformed with 0% hexanethiol; D: flawless with 6% hexane thiol; E: fractured with 6% hexanethiol.
  • Figure 4 Dry extract as a function of the transfer agent concentration.
  • Figure 5 Swelling rate as a function of the transfer agent concentration.
  • Figure 6 Young's modulus as a function of the transfer agent concentration.
  • MS were deposited on a sample holder of the Morphology instrument 4,500 MS were imaged and stored in the software database for further analysis.
  • a standard operating procedure (SOP) was used in the imaging process to ensure consistency of measurements. After each measurement, the defective MS were excluded from the total MS (500 MS). The most reliable method was to visually examine each MS and delete or keep them in image databases based on their defect and integrity. Histogram, mean diameter and standard deviation were also obtained for intact MS.
  • MS microsphere
  • the percentage of MS without defect was calculated accordingly: Dry extract, mass swelling rate
  • the dry extract is produced as follows: 1 ml of sedimented DM is placed in a 5 ml Eppendorf flask, frozen at -80 ° C and lyophilized by a lyophilizer (Heto PowerDry LL 1500, Thermo Scientific) overnight. The mass of the MS after lyophilization is then measured. The measurement was carried out for three samples and the average was taken as the final value of the dry mass of the DM.
  • Swelling rate The same sample preparation as described above was used to calculate the mass swelling rate of MS: where (mw) is the weight in grams of 1 mL of sedimented DM and (md) is the weight in grams of 1 ml of sedimented microspheres which have been lyophilized. The measurement was carried out for three samples and the average was taken as the final value of the rate of mass swelling. Rheology and compressibility The rheological properties of the MS were measured on an HR2 Discovery rheometer (TA Instruments, USA). Young's modulus is measured using a uniaxial compression mode. A plane-plane geometry with 50mm diameter plates and an initial spacing of 1600 ⁇ m was used. The temperature of the samples is maintained at 25 ° C. by the Peltier effect.
  • the normal force is zeroed by the software.
  • a homogeneous bed of a single layer of microspheres is then deposited on the plate.
  • a first measurement is carried out in order to determine the point of contact with the MS as well as the linear strain regime.
  • the gap between the plates is reduced from 1600 ⁇ m to 700 ⁇ m with a speed of 16.7 ⁇ m / s (1 mm / min) and the normal force is measured.
  • the point of contact is the distance between the plates at which a normal force begins to be exerted.
  • the normal force follows a linear regime according to the applied strain, up to a point.
  • the gap between the plates during this divergence corresponds to the output of the linear regime.
  • a second measurement is then carried out 3 times in a row in order to measure the mean as well as the measurement error of the Young's modulus.
  • This second measurement consists of placing the top plate directly at the point of contact and applying an axial strain up to the maximum output value of the linear regime. The measured normal force then evolves linearly as a function of the applied strain. The slope of this curve corresponds to the Young's modulus.
  • Another method used to measure Young's modulus (method n ° 2) Compression tests are carried out on single microspheres using a compression machine (Synergie 800, MTS, France), using a 15.3 piston. mm diameter printed in 3D. The exerted force is measured by a 2 N force transducer, which provides accurate and repeatable measurements from 1 mN.
  • TestWorks4 software is an interface for directing the piston and recording data measured by the sensor.
  • the use of a lamp (100 W bulb) is necessary in order to illuminate the cell containing the analyzed microsphere, and to allow the camera to clearly see the microsphere and the piston.
  • Image processing software, ImageJ is used to measure the exact size of microspheres by measuring the number of pixels in the image.
  • the piston speed is set at 1 mm / min and the test starts with the piston positioned approximately 100 ⁇ m above the microsphere.
  • Young's modulus is calculated using the Hertz model, applicable to the compression of a sphere between two planes. Injection of MS MSs were injected through a microcatheter in order to test their mechanical properties during injections.
  • a solution composed of 30% by volume of Xenetix® contrast product 350 mg of iodine / ml and 70% by volume of physiological saline was prepared. 20 mL of this solution was withdrawn using a 20 mL syringe, and in parallel 2 mL of sedimented MS were withdrawn into the sterilized vial as described above using a 3 mL syringe .
  • the two syringes (3mL and 20mL) are connected to a three-way stopcock.
  • the MS are suspended in the above mixture by performing about 15 back-and-forth movements between the two syringes.
  • Example 1 Synthesis by direct suspension polymerization of microspheres (DM) according to the invention (900-1200 ⁇ m) An aqueous solution of hydrolyzed polyvinyl alcohol and sodium chloride is poured into a reactor and heated to 50 ° C.
  • the organic phase containing poly (ethylene glycol) methyl ether methacrylate (m-PEGMA) (hydrophilic monomer), poly (ethylene glycol) dimethacrylate (PEGDMA) (crosslinking), coloring monomer, methacrylic acid (ionized or ionizable monomer) ), the transfer agent and AIBN (initiator) dissolved in toluene is then introduced into the reactor. Agitation is applied with a propeller-type stirrer at the appropriate speed so as to obtain droplets of the desired diameter. The temperature is then increased to 80 ° C and stirring is maintained for 12 hours. The mixture is then filtered through a 40 ⁇ m sieve in order to collect the DM.
  • the DM retained by said sieve are then washed 3 times with acetone and then 3 times with water. These washed MS are then sieved between a 900 ⁇ m sieve and a 710 ⁇ m sieve. The DM collected between these two sieves are then sterilized by autoclave at 121 ° C for 20 minutes which will have the effect of swelling the DM and obtaining DM of the desired size, that is to say here 900 to 1200 ⁇ m.
  • the microspheres synthesized according to the method described above therefore have the following composition (Tables 1 and 1a): Table 1 HT: 1-hexanethiol, TGA: thioglycolic acid, DODEC: 1-dodecanethiol, BTCM: bromotrichloromethane Table 1bis
  • Example 2 Size of the microspheres from Example 1 The average diameter of the microspheres is measured after sterilization, for each of lots 1 to 9 and L9 to assess the impact of the concentration of the transfer agent on the size of the MS. The MS were sterilized according to the procedure described above. The mean diameter after sterilization of the calibrated MS (900-1200) for each of the lots is shown in Figure 1.
  • Example 3 Percentage of non-defective microspheres obtained from example 1 The percentage of defective MS was calculated according to the method described above on a sample of MS of size 900-1200 ⁇ m comprising different concentrations of HT as transfer agent or transfer agents of a different nature (lots 1 to 9 and L9). The results are shown in Figure 2. From 0% to 1.5% HT (lots 1 to 4), the percentage of defect-free DM varies from 89% to 91%.
  • Example 4 Dry extract of the microspheres obtained from Example 1 Figure 4 shows the dry extract of the DM (mg / ml), calculated according to the method described above, depending on the concentration or the nature of the transfer agent.
  • the dry extract (mg) for a given volume of DM decreases linearly when the concentration of HT increases (lots 1, 2, 3, 4, 5, 6 and 7).
  • the dry extract of the DM in lot L9 is approximately 101 mg / mL. Without transfer agent, the dry mass of 1mL of sedimented DM is approximately 159 mg. At 6% HT, this dry extract is only about 52 mg.
  • Example 5 Swelling rate of the microspheres from Example 1 The swelling rate of the microspheres was determined according to the method described above on batches 1 to 9 and L9) in order to assess the influence of the concentration and the nature of the transfer agent. The results are illustrated in FIG. 5. It is observed that the higher the concentration of HT, the higher the rate of swelling obtained.
  • Example 6 Rheology and compressibility of the microspheres from Example 1
  • the compressibility of the microspheres can be characterized by measuring the Young's modulus according to the method described above. The Young's moduli of lots 1 to 9 are shown in FIG. 6. The results obtained with method No. 2 for measuring the Young's modulus gave fairly similar results.
  • the Young's modulus decreases from about 13 kPa to about 6 kPa as the concentration of HT goes from 0% to 3% and then reaches a plateau at about 6 kPa for the higher concentrations (4.5 % and 6%).
  • DM containing between 0% and 0.5% HT (lots 1 to 4) are more solid and rigid and unsuitable for injection. From 1.5% HT, the values of the Young's modulus of the DM fall below 10 kPa, which is the limit targeted by the present invention, and are therefore softer and more flexible. From a concentration of 3%, the DM becomes softer and more flexible. At the same concentration of transfer agent, here 3%, all the DM have the same plateau value of about 6 kPa.
  • Example 7 Injection of the microspheres from Example 1 into a microcatheter Each of batches 1 to 9 and L9 of MS was injected into 4Fr and 5Fr microcatheters. No blockages were observed. For batch 7 (6% HT), the DM did not tolerate the preparation for injection, and all broke. The mechanical properties of the MS obtained with 6% transfer agent are therefore not compatible for injection by microcatheter.
  • Example 8 Synthesis by direct suspension polymerization of microspheres intended to be charged according to the invention (100-300 ⁇ m) An aqueous solution of hydrolyzed polyvinyl alcohol and sodium chloride is poured into a reactor and heated to 50 ° C.
  • m-PEGMA hydrophilic monomer
  • PEGDMA poly (ethylene glycol) dimethacrylate
  • AM methacrylic acid
  • HT hexanethiol
  • violet dye (1- (4 - ((2- methacryloxye
  • Example 8Bis Synthesis by direct suspension polymerization of microspheres (MS) without ionizable monomer according to the invention (900-1200 ⁇ m) and evaluation of the loading capacity Synthesis of the microspheres 900 - 1200 ⁇ m An aqueous solution of polyvinyl alcohol hydrolyzed and sodium chloride is poured into a reactor and heated to 50 ° C.
  • the organic phase containing poly (ethylene glycol) methyl ether methacrylate (m-PEGMA) (hydrophilic monomer), poly (ethylene glycol) dimethacrylate (PEGDMA) (crosslinker), coloring monomer, hexanethiol (transfer agent) and AIBN (initiator) dissolved in toluene is then introduced into the reactor. Agitation is applied with a propeller-type stirrer at the appropriate speed so as to obtain droplets of the desired diameter. The temperature is then increased to 80 ° C and stirring is maintained for 12 hours. The mixture is then filtered through a 40 ⁇ m sieve in order to collect the microspheres.
  • microspheres retained by said sieve are then washed 3 times with acetone and then 3 times with water. These washed microspheres are then sieved between a 900 ⁇ m sieve and a 710 ⁇ m sieve. The microspheres collected between these two sieves are then sterilized by autoclave at 121 ° C for 20 minutes which will have the effect of swelling the microspheres and obtaining microspheres of the desired size, that is to say here 900 to 1200 ⁇ m.
  • the microspheres synthesized according to the method described above therefore have the following composition: Table 3 below summarizes the main parameters and the composition of the organic phase and of the aqueous phase:
  • the dry extract (dry weight) is produced as follows: 1 ml of sedimented MS is placed in a 5 ml Eppendorf flask, frozen at -80 ° C and lyophilized by a lyophilizer (Heto PowerDry® LL 1500, Thermo Scientific) overnight. The mass of the microspheres after lyophilization is then measured. The measurement was carried out for three samples and the average was taken as the final value of the dry mass of the DM. The average diameter is measured by analysis of microscopy images on 2000 microspheres (Morphologi 4, Malvern).
  • the injectability test in microcatheters is carried out with 1 ml of microsphere sediment suspended beforehand in 10 ml of iodinated contrast medium (70% of Optiray® 300, Guerbet, 30% of physiological serum). A homogeneous suspension of microspheres in a 3 mL syringe is then injected into the microcatheter.
  • the microcatheters the supplier of which is the company Terumo, were chosen such that their internal diameter is just slightly greater than the average diameter of the microspheres.
  • the resistance felt during the injection of the microspheres into the microcatheter is recorded (Table 3Bis). A blockage during the injection would mean a failure of the injection.
  • microspheres After injection, the microspheres are observed under a microscope in order to check whether the microspheres regain their spherical shape. Characterization results: Table 3bis 100-300 ⁇ m microspheres are also synthesized without methacrylic acid (same composition as the microspheres of Example 8 with 0% methacrylic acid (MA) and 94.96% m-PEGMA) then sterilized by autoclaving. Their loading capacity of doxorubicin is evaluated and compared with that of microspheres as synthesized according to Example 8. Loading of doxorubicin: the loading objective is 37.5 mg of doxorubicin per mL of microspheres.
  • doxorubicin-HCl Adriblastine®, Pfizer
  • doxorubicin-HCl Adriblastine®, Pfizer
  • the suspension is made up to 6 mM of sodium bicarbonate (Lavoisier). Loading is carried out at room temperature and with stirring for one hour. Measurement of the residual amount of doxorubicin (absorbance at 490 nm) present in the supernatants is used to determine the amount of drug loaded on the microspheres.
  • LC Loading capacity
  • LE Initial MDrug loading efficiency: Amount of drug solubilized
  • CDrug_sur Drug concentration in the supernatant after loading
  • Vsur Supernatant volume
  • VMS Volume of microspheres
  • the loading efficiency without methacrylic acid is 82.6%, compared to 99 , 6% in the presence of 30% methacrylic acid.
  • the ability of microspheres without ionizable monomers to charge doxorubicin is explained by the establishment of hydrophobic or van der Waals bonds. In the presence of ionizable monomer, in addition to these bonds, doxorubicin is charged by electrostatic bonds. Kinetics and loading capacities are improved.
  • Example 9 Synthesis by direct suspension polymerization of polymers containing 5% of MAOETIB according to the invention in the form of microspheres of size 700-900 ⁇ m An aqueous solution of hydrolyzed polyvinyl alcohol and sodium chloride is poured into a reactor and heated at 50 ° C.
  • Example 10 Suspension in a 50/50 mixture of contrast agent and physiological serum of the microspheres of Example 9 and comparison with equivalent microspheres without MAOETIB 2 mL of bead sediment are added to a mixture of 10 mL 50/50 physiological serum / contrast agent (5 mL of Optiray® 300 mgI / mL and 5 mL of physiological serum). The mixture is passed 5 times through a three-way stopcock using 20 mL syringes. The syringe containing the mixture is then placed vertically and the destabilization of the mixture is observed; the microspheres then rise to the surface. The time corresponding to a destabilization interface arriving at mid-height of the syringe is measured.
  • Example 11 Synthesis by direct suspension polymerization of polymers of different natures in the form of microspheres of size 700-900 ⁇ m Synthesis An aqueous solution of hydrolyzed polyvinyl alcohol and sodium chloride is poured into a reactor and heated to 50 ° C.
  • the organic phase containing the hydrophilic monomer, the crosslinking agent, the coloring monomer, the transfer agent, the halogenated monomer if applicable, the ionizable monomer if applicable and the AIBN (initiator) dissolved in the toluene is then introduced into the reactor. Agitation is applied with a propeller-type stirrer at the appropriate speed so as to obtain droplets of the desired diameter. The temperature is then increased to 80 ° C. and stirring is maintained for 12 hours. The mixture is then filtered through a 40 ⁇ m sieve in order to collect the microspheres. The microspheres retained by said sieve are then washed 3 times with acetone and then 3 times with water.
  • microspheres are then sieved between a 900 ⁇ m sieve and a 710 ⁇ m sieve.
  • the microspheres collected between these two sieves are then sterilized by autoclave at 121 ° C for 20 minutes which will have the effect of swelling the microspheres and obtaining microspheres of the desired size, that is to say here 700 to 900 ⁇ m.
  • Table 6 summarizes the main parameters and the composition of the organic phase.
  • Example 12 Synthesis by direct suspension polymerization of polymers containing different amounts of MAOETIB according to the invention in the form of microspheres of size 100-300 ⁇ m
  • Synthesis An aqueous solution of hydrolyzed polyvinyl alcohol and sodium chloride is poured in in a reactor and heated to 50 ° C.
  • Example 13 Suspension in a 50/50 mixture of contrast agent and physiological serum of the microspheres of Example 12 with different levels of MAOETIB 2 mL of bead sediment are added to a mixture of 10 mL 50/50 physiological saline / contrast agent (5 mL of Xenetix® 350 mgI / mL and 5 mL of physiological saline). The mixture is passed 5 times through a three-way stopcock using 20 mL syringes. The syringe containing the mixture is then placed vertically and the destabilization of the mixture is observed, either by creaming or by sedimentation depending on the MAOETIB concentration.

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Abstract

L'invention porte sur des microsphères d'embolisation non biodégradables comprenant une matrice réticulée, ladite matrice étant à base d'au moins : a) 20 % à 95 % de monomère hydrophile; b) 1 % à 15 % d'un monomère réticulant hydrophile non biodégradable; et c) 1,5 % à moins de 6 % d'agent de transfert choisi parmi les halogénures d'alkyle et les thiols cycloaliphatiques ou aliphatiques ayant notamment de 2 à 24 atomes de carbone, et ayant éventuellement un autre groupe fonctionnel choisi parmi les groupes amino, hydroxy et carboxy. L'invention porte en outre sur une composition pharmaceutique comprenant des microsphères d'embolisation non biodégradables selon l'invention, en association avec un véhicule pharmaceutiquement acceptable, avantageusement pour une administration par voie parentérale. L'invention porte en outre sur un kit comprenant une composition pharmaceutique comprenant des microsphères d'embolisation non biodégradables selon l'invention en association avec un véhicule pharmaceutiquement acceptable pour une administration par voie parentérale, et au moins un moyen d'injection.

Description

MICROSPHERE D’EMBOLISATION NON DEGRADABLE DOMAINE DE L’INVENTION La présente invention a pour objet des microsphères d’embolisation non biodégradables comprenant une matrice polymérique réticulée avantageusement destinées à être injectées chez un individu, et éventuellement destinées à libérer de manière contrôlée des principes actifs ou macromolécules. ART ANTERIEUR L'occlusion vasculaire thérapeutique (c'est-à-dire l'embolisation) est utilisée pour empêcher l’écoulement du sang dans une région du corps, qui conduit à une ischémie. Elle peut être administrée au moyen de cathéters permettant de positionner des agents d'occlusion particulaire dans le système circulatoire. Elle a une variété d'applications médicales telles que le traitement des malformations vasculaires, des processus hémorragiques ou des tumeurs, y compris, par exemple, les fibromes utérins, les tumeurs primitives ou secondaires du foie. Par exemple, l'occlusion vasculaire peut provoquer une nécrose tumorale et éviter une opération plus invasive. Cette technique d’occlusion peut également être couplée à la fourniture d’un agent anticancéreux dans le cadre de la chimioembolisation. Cela permet d’augmenter la concentration locale de médicament par une injection ciblée, ainsi que son temps de résidence dans la tumeur. Dans le cas de malformations vasculaires, l'occlusion vasculaire permet de normaliser le flux sanguin vers les tissus normaux et d'aider à la chirurgie en limitant le risque d'hémorragie. Dans les processus hémorragiques, l'occlusion vasculaire peut entraîner une diminution du débit, ce qui favorise la cicatrisation de la plaie artérielle. Les agents emboliques commerciaux pour l'occlusion vasculaire comprennent les liquides d’embolisation (colles acryliques, gels), les dispositifs mécaniques et les particules pour l’embolisation. Le choix d'un matériau spécifique dépend de nombreux facteurs, tels que le type de lésion à traiter, le type de cathéter à utiliser et le besoin d’une embolisation temporaire ou permanente. Ces agents d’embolisation sont classiquement introduits dans un vaisseau sanguin via un cathéter, en particulier un microcathéter, dont le diamètre est inférieur à celui du vaisseau à traiter. Dans le cas d’agents d’embolisation solides, tels que des particules, leur forme doit donc leur permettre de circuler à l'intérieur dudit cathéter, puis, une fois libérés, d’occuper un volume suffisant pour réaliser l’occlusion du vaisseau sur tout son diamètre. La forme et le calibre des agents emboliques interviennent dans la précision de la région ciblée. S’agissant de particules, il a été constaté que lorsqu’elles sont sphériques et de calibre approprié à la lumière vasculaire, elles créent une embolisation totale et ne sont présentes que dans le tissu ciblé. Il existe dans l’art antérieur des microsphères dont le développement s’est produit parallèlement au développement de microcathéters de plus en plus fins qui permettaient un accès artériel plus distal. Selon la taille des microsphères utilisées, le praticien peut procéder à un ciblage vasculaire en réalisant une occlusion plus ou moins distale. L’embolisation peut être mise en place à des niveaux choisis. Par exemple dans le cas de tumeurs, les vaisseaux à destinée tumorale peuvent aussi être plus facilement occlus tout en respectant les vaisseaux destinés aux tissus normaux. Ces microsphères peuvent être biodégradables afin de réaliser des embolisations temporaires. Les difficultés majeures rencontrées par ces microsphères biodégradables sont : - La difficulté de maîtriser la vitesse de dégradation qui peut être comprise, selon la microsphère, entre quelques heures et quelques mois ; - La disparition contrôlée des microsphères sans débris, ni toxicité pour l’organisme et - La difficulté de charger ces microsphères en agents thérapeutiques. Par ailleurs, des réactions de transfert de chaînes indésirables au sein des microsphères polymériques peuvent être à l’origine d’une réticulation irréversible, pouvant entraîner la formation d’un polymère non-résorbable. Ainsi, dans les demandes WO 2012/120139 et WO 2012/120138, il est décrit que l’ajout d’un agent de transfert à la solution de monomères lors de la préparation des microsphères biodégradables permet d’éviter ces réactions secondaires indésirables et donc de conserver les propriétés de dégradation des microsphères d’embolisation. Contrairement à ces microsphères d’embolisation biodégradables dont l’intérêt est l’obtention d’une embolisation temporaire, les microsphères d’embolisation non biodégradables permettent une embolisation à des fins permanentes. Différentes microsphères non biodégradables ont été testées dans les années 1960, dans le but de réaliser des embolisations (billes de plomb, d’acier inoxydable, de silicone). Cependant, la petite taille de ces microsphères et le reflux important dans les organes sains non ciblés ont augmenté les taux de complication chez les patients. Il existe des microsphères non biodégradables à base d’un polymère, le trisacryl (N- acryloyl-2-amino-2- hydroxymethylpropane-1,3 diol), et de gélatine pouvant être d’origine porcine. Il s’agit du produit Embosphere® (Biosphere Medical) dont l’un des inconvénients est la présence de gélatine qui peut potentiellement être d’origine porcine. Des microsphères non biodégradables à base de copolymères acryliques et PVA ont également été proposées pour l'embolisation permanente (Osuga et al. (2002) J. Vase Interv Radiol. 13: 929-34). Il s’agit, par exemple, des microsphères Quadrasphere® de Biosphere Medical qui sont fournies sous forme sèche puis se gonflent après avoir été mélangées avec du sérum physiologique et/ou des produits de contraste iodés avant injection via un cathéter. Leur taille finale après gonflement varie en fonction de la charge ionique du milieu (respectivement x2 ou x4 par rapport à leur taille initiale dans une solution saline ou un produit de contraste). Cependant, le gonflement des microsphères n’est pas maitrisé et la taille finale est trop variable pour permettre le contrôle de leur volume après l'implantation, ce qui limite leur utilisation en embolisation. En effet, il a été démontré qu’il existe une correspondance entre la taille des microsphères et le diamètre des vaisseaux obstrués. Afin de cibler les vaisseaux à emboliser avec précision, il est préférable d’utiliser une taille de microsphères appropriée (Laurent et al. 2007). Ainsi, les microsphères d’embolisation doivent être sphériques et calibrées. Par « calibrées », on entend que les microsphères doivent pouvoir être classées selon leur taille après gonflement. Le praticien choisit alors les microsphères de taille correspondant à la taille du vaisseau ou de la malformation à emboliser (Laurent et al. 2007). Tout défaut morphologique de ces microsphères d’embolisation peut entrainer une occlusion du cathéter ou nuire aux propriétés d’embolisation de celles-ci. La résistance à la compression et l’élasticité des microsphères d’embolisation sont également importantes. En effet, elles doivent pouvoir être injectées via un microcathéter de diamètre inférieur au leur, tout en retrouvant leur forme et leur taille initiale à la sortie du microcathéter, lorsqu’elles sont injectées dans un vaisseau sanguin. Il a été démontré qu’une faible élasticité et une faible résistance à la compression diminue le niveau d’occlusion in vivo (Laurent & al. 2007). Le module de Young exprime la résistance à la compression, ou compressibilité. Il a été démontré que la valeur du module de Young des microsphères est directement liée au fait qu’elles vont se localiser dans une partie plus ou moins distale du vaisseau dans lequel elles sont injectées (Laurent A., Agents d’embolisation. EMC-Radiologie et imagerie médicale-principes et technique-radioprotection 2014 ; 9(1) :1-11). Des microsphères peu compressibles vont fournir une embolisation proche du lieu d’injection alors que des microsphères très compressibles vont fournir une embolisation éloignée du lieu d’injection. Des tests in vitro ont montré que les microsphères Embosphere® de Biosphere Medical, qui sont peu compressibles, créent une embolisation au niveau des zones proximales du vaisseau dans lequel elles sont injectées. A l’inverse, les microsphères Contour SE® de Boston Scientific, qui se déforment facilement, embolisent des zones du vaisseau plus éloignées du lieu d’injection. Un des problèmes rencontrés par des microsphères trop compressibles, et donc trop déformables, est qu’elles peuvent se déplacer à l'intérieur du vaisseau sous la pression du flux sanguin et cela rend incertaine leur localisation. A l’inverse, des microsphères peu compressibles, et donc peu déformables, pourraient être difficilement injectables ou ne pas retrouver leur forme initiale après injection. Afin de cibler un site d’embolisation spécifique, la compressibilité des microsphères doit être maîtrisée. Par ailleurs, pour être injectables, les microsphères sont généralement mises en suspension dans un mélange de produit de contraste iodé non ionique et de solution tampon. Pour cela, les radiologues utilisent généralement un mélange de 50% de produit de contraste et 50% de sérum physiologique, de tampon bicarbonate ou de tampon phosphate. Pour garantir leur injectabilité, les microsphères doivent être maintenues en suspension de manière homogène dans cette solution 50/50. Si les microsphères sédimentent ou, au contraire, flottent à la surface de la solution, la suspension résultante est non homogène, instable et ne peut donc pas être injectée au patient. Il est ainsi avantageux de disposer de microsphères ayant une densité adéquate pour permettre leur suspension de manière homogène au sein d’un mélange comprenant 50% de produit de contraste et 50% de sérum physiologique, de tampon bicarbonate, de tampon phosphate ou de tampon tris (tris(hydroxyméthyl)aminométhane. Il existe donc un besoin important pour des microsphères d’embolisation non biodégradables qui soient : - de taille calibrée, - composées de matériaux biocompatibles sans risque d’allergie, et présentant des propriétés mécaniques, en particulier un taux de gonflement, une élasticité et une compressibilité, adéquates pour une injection via un cathéter ou un microcathéter et pouvant retrouver leur forme initiale après injection tout en évitant une embolisation éloignée du site visé. Il faut par ailleurs qu’elles soient capables de charger des principes actifs tout en conservant leurs propriétés mécaniques. RESUME DE L’INVENTION La présente invention permet de répondre à ces besoins en proposant des microsphères d’embolisation comprenant une matrice réticulée polymérique hydrophile, non biodégradables, solides, calibrées, élastiques, compressibles et présentant un taux de gonflement maitrisé et suffisant pour une embolisation permanente et ciblée. Les propriétés mécaniques (gonflement, élasticité, solidité, résistance à la compression) des microsphères de l’invention leur permettent d’être adaptées à l’injection et capables de fournir un niveau d’embolisation suffisant et permanent lorsqu’elles sont injectées dans l’arbre vasculaire d’un mammifère, de préférence un être humain. La présente invention a principalement pour objet des microsphères d’embolisation non biodégradables comprenant une matrice polymérique réticulée, ladite matrice réticulée étant à base d’au moins : a) 20 % à 95 % de monomère hydrophile choisi parmi la N-vinylpyrrolidone, et un monomère de formule (I) suivante : (CH2=CR1)-CO-D (I) dans laquelle : ● D représente O-Z ou NH-Z, Z représentant (C1-C6)alkyle, -(CR2R3)m-CH3, -(CH2-CH2-O)m- H, -(CH2-CH2-O)m-CH3, -C(R4OH)m ou -(CH2)m-NR5R6 avec m représentant un nombre entier de 1 à 30 ; ● R1, R2, R3, R4, R5 et R6 représentent indépendamment les uns des autres H ou un (C1- C6)alkyle ; b) 1 % à 15 % d’un monomère réticulant hydrophile non biodégradable linéaire ou ramifié de formule (IIa) ou IIb) suivantes : (CH2=CR7)CO-NH-A-HN-OC(CR8=CH2) (IIa), ou (CH2=CR7)CO-O-A-O-OC(CR8=CH2) (IIb), dans lesquelles R7 et R8 représentent indépendamment l’un de l’autre H ou un (C1-C6)alkyle ; et A représente, seul ou avec au moins un des atomes auquel il est lié, un (C1-C6)alkylène, un polyéthylène glycol (PEG), un polysiloxane, un poly(diméthylsiloxane) (PDMS), un poly- glycérolique ester (PGE) ou un bisphénol A. et c) 1,5 % à moins de 6 % d’agent de transfert choisi parmi les halogénures d’alkyle et les thiols cycloaliphatiques ou aliphatiques ayant notamment de 2 à 24 atomes de carbone, et ayant éventuellement un autre groupe fonctionnel choisi parmi les groupes amino, hydroxy et carboxy, les pourcentages des monomères a) et b) étant cités en mole par rapport au nombre de moles total de monomères et les pourcentages du composé c) étant cités en mole par rapport au nombre de moles du monomère hydrophile a). Dans le cadre de la présente invention, l’addition d’un agent de transfert lors de la polymérisation de la matrice réticulée des microsphères selon l’invention permet d’augmenter le taux de gonflement des microsphères. L’augmentation du taux de gonflement entraine une diminution de l’extrait sec des microsphères pour un volume donné, et donc une plus forte proportion d’eau, ce qui facilite leur injection. De façon surprenante, la présence de cet agent de transfert améliore les propriétés élastiques ainsi que les propriétés de gonflement et de résistance à la compression. Les inventeurs ont découvert que l’addition de 1,5 % à moins de 6 % en mole par rapport au nombre de moles du monomère hydrophile a), préférentiellement 1,5 % à 4,5%, préférentiellement 3 %, d’un agent de transfert choisi parmi ceux cités ci-dessus dans le mélange réactionnel pour la polymérisation d’une matrice réticulée comprenant un polymère hydrophile permet d’améliorer les propriétés mécaniques des microsphères d’embolisation non biodégradables, c’est à dire d’augmenter leur gonflement, leur élasticité, leur solidité et d’améliorer leur résistance à la compression. Ces caractéristiques permettent l’injection des microsphères de l’invention au sein d’un individu à l’aide d’un cathéter ou d’un microcathéter, et la réalisation d’une embolisation ciblée, totale et définitive. Les inventeurs ont notamment découvert que la quantité d’agent de transfert ajoutée au sein du mélange réactionnel doit être strictement contrôlée pour répondre aux besoins cités ci-dessus. Ainsi, le taux de gonflement, l’élasticité et la compression des microsphères sont optimaux à partir de 1,5 % d’agent de transfert en mole par rapport au nombre de moles du monomère hydrophile a) présent au sein du mélange réactionnel. A un taux inférieur à 1,5 %, les microsphères obtenues ne sont pas assez souples pour permettre une injection par microcathéter. Lorsque l’agent de transfert est présent en des quantités de 6 % et plus dans le mélange réactionnel, les microsphères d’embolisation non biodégradables sont trop compressibles, elles ne sont pas assez solides et se brisent. L’élasticité, est également un paramètre important. Des microsphères peu élastiques seront peu déformées par la pression de la paroi vasculaire et resteront localisées dans la zone proximale du vaisseau dans lequel elles sont injectées. La présente invention porte également sur des microsphères d’embolisation chargées de substances actives, permettant ainsi de combiner l’occlusion vasculaire et la délivrance d’un principe actif. La présente invention porte en outre sur une composition pharmaceutique comprenant des microsphères d’embolisation non biodégradables telles que définies ci- dessus, en association avec un véhicule pharmaceutiquement acceptable, avantageusement pour une administration par injection. La présente invention a également pour objet un kit comprenant une composition pharmaceutique telle que définie ci-dessus et au moins un moyen d’injection de ladite composition, pour une administration de ladite composition par voie parentérale. La présente invention a également pour objet un kit comprenant d’une part une composition pharmaceutique telle que définie ci-dessus et d’autre part un agent de contraste pour l'imagerie par rayon X, par résonance magnétique ou par échographie, et éventuellement au moins un moyen d’injection pour une administration par voie parentérale. DESCRIPTION DETAILLEE Par l’expression « matrice à base de », il faut bien entendu comprendre une matrice comportant le mélange et/ou le produit de la réaction entre les constituants de bases utilisés pour la polymérisation en milieu hétérogène de cette matrice, de préférence uniquement le produit de la réaction entre les différents constituants de base utilisés pour cette matrice, certains d’entre eux pouvant être destinés à réagir ou susceptibles de réagir entre eux ou avec leur environnement chimique proche, au moins en partie, lors des différentes phases du procédé de fabrication de la matrice, en particulier au cours d’étape de polymérisation. Ainsi, les constituants de base sont les réactifs destinés à réagir ensemble lors de la polymérisation de la matrice. Les constituants de base sont donc introduits dans un mélange réactionnel comprenant éventuellement en outre un solvant ou un mélange de solvants et/ou d’autres additifs tels que au moins un sel et/ou au moins un amorceur de polymérisation et/ou au moins un stabilisant tel que le PVA. Dans le cadre de la présente invention, le mélange réactionnel comprend au moins les monomères a), b) et l’agent de transfert c) cités dans la présente description en tant que constituants de base et au moins un solvant, de préférence un mélange de solvants comprenant un solvant aqueux et un solvant organique tel qu’un solvant aprotique apolaire, par exemple un mélange eau/toluène. Eventuellement, le mélange réactionnel comprend un amorceur de polymérisation comme par exemple le peroxyde de t-butyle, le peroxyde de benzoyle, l’acide azobiscyanovalerique (aussi nommé acide 4,4′-Azobis(4-cyanopentanoique)), l’AIBN (azobisisobutyronitrile), 1,1’ Azobis (cyclohexane carbonitrile) ou un ou plusieurs amorceurs thermiques tels que 2-Hydroxy-4′-(2-hydroxyethoxy)-2-methylpropiophenone (106797-53-9); 2-Hydroxy-2-methylpropiophenone (Darocur® 1173, 7473-98-5), 2,2-dimethoxy-2- phenylacetophenone (24650-42-8), 2,2-dimethoxy-2-phenyl acetophenone (Irgacure®, 24650-42-8) ou 2-methyl-4′-(methylthio)-2-morpholinopropiophenone (Irgacure®, 71868-10- 5). Ainsi, selon la présente invention, la matrice est au moins à base des monomères a), b) et de l’agent de transfert c) cités dans la présente description, ces composés étant donc des constituants de base. Ainsi, dans la présente description, les expressions semblables à « le [constituant de base X] est en particulier ajouté dans le mélange réactionnel en une quantité de YY à YYY % » et à « la matrice réticulée est en particulier à base du [constituant de base X] en une quantité de YY à YYY % » sont interprétées de manière similaire. De même, les expressions semblables à « le mélange réactionnel comprend au moins [le constituant de base X] » et à « la matrice réticulée est à base d’au moins [le constituant de base X] » sont interprétées de manière similaire. Par « phase organique » du mélange réactionnel, on entend, au sens de la présente invention, la phase comprenant le solvant organique et les composés solubles dans ledit solvant organique, notamment les monomères, l’agent de transfert et l’amorceur de polymérisation. Par groupement « (CX-CY)alkyle », on entend, au sens de la présente invention, une chaîne hydrocarbonée monovalente saturée, linéaire ou ramifiée, comportant X à Y atomes de carbone, X et Y étant des nombres entiers compris entre 1 et 36, de préférence 1 et 18, en particulier 1 et 6. A titre d’exemple, on peut citer les groupes méthyle, éthyle, propyle, isopropyle, butyle, isobutyle, sec-butyle, tert-butyle, pentyle ou encore hexyle. Par « (CX-CY)aryle », on entend, au sens de la présente invention, un groupement hydrocarboné aromatique, comportant de préférence de X à Y atomes de carbone, et comprenant un cycle ou plusieurs cycles accolés, X et Y étant des nombres entiers compris entre 5 et 36, de préférence 5 et 18, en particulier 5 et 10. A titre d’exemple, on peut citer les groupes phényle ou naphtyle. Par « (CX-CY)hétéroaryle », on entend, au sens de la présente invention, un groupe aromatique comprenant X à Y atomes cycliques dont un ou plusieurs hétéroatomes, avantageusement 1 à 4 et encore plus avantageusement 1 ou 2, tels que par exemple des atomes de soufre, azote ou oxygène, les autres atomes cycliques étant des atomes de carbone. X et Y sont des nombres entiers compris entre 5 et 36, de préférence 5 et 18, en particulier 5 et 10. Des exemples de groupes hétéroaryle sont les groupes furyle, thiényle, pyrrolyle, pyridinyle, pyrimidinyle, pyrazolyle, imidazolyle, triazolyle, tétrazolyle ou encore indyle. Par groupement « (CX-CY)alkylène », on entend, au sens de la présente invention, une chaîne hydrocarbonée divalente, linéaire ou ramifiée, comprenant X à Y atomes de carbone, X et Y étant des nombres entiers compris entre 1 et 36, de préférence 1 et 18, en particulier 1 et 6. A titre d’exemple, on peut citer les groupements methylène, éthylène, propylène, butylène, pentylène ou encore hexylène. Par groupement « (CX-CY)cycloalkylène », on entend, au sens de la présente invention, un groupement hydrocarboné saturé divalent cyclique, comportant de X à Y atomes de carbone cycliques, X et Y étant des nombres entiers compris entre 3 et 36, de préférence 3 et 18, en particulier 3 et 6. A titre d’exemple, on peut citer les groupements cyclopropylène, cyclohexylène ou encore cyclopentylène. Par groupement « (CX-CY)alcénylène », on entend, au sens de la présente invention, une chaîne hydrocarbonée divalente, linéaire ou ramifiée, comprenant X à Y atomes de carbone et au moins une double liaison, X et Y étant des nombres entiers compris entre 2 et 36, de préférence 2 et 18, en particulier 2 et 6. A titre d’exemple, on peut citer les groupements vinylène (éthénylène) ou propénylène. Par groupement « (CX-CY)cycloalcénylène », on entend, au sens de la présente invention, un groupement hydrocarboné saturé divalent cyclique, comportant de X à Y atomes de carbone cycliques et au moins une double liaison, X et Y étant des nombres entiers compris entre 3 et 36, de préférence 3 et 18, en particulier 3 et 6. Par groupement « (CX-CY)alcynylène », on entend, au sens de la présente invention, une chaîne hydrocarbonée divalente, linéaire ou ramifiée, comprenant X à Y atomes de carbone et au moins une triple liaison, X et Y étant des nombres entiers compris entre 2 et 36, de préférence 2 et 18, en particulier 2 et 6. Par groupement « (CX-CY)cycloalcynylène », on entend, au sens de la présente invention, un groupement hydrocarboné saturé divalent cyclique, comportant de X à Y atomes de carbone cycliques et au moins une triple liaison, X et Y étant des nombres entiers compris entre 3 et 36, de préférence 3 et 18, en particulier 3 et 6. Par « (CX-CY)arylène », on entend, au sens de la présente invention, un groupement hydrocarboné divalent aromatique, comportant de X à Y atomes de carbone, et comprenant un ou plusieurs cycles accolés, X et Y étant des nombres entiers compris entre 5 et 36, de préférence 5 et 18, en particulier 5 et 10. A titre d’exemple, on peut citer le groupement phénylène. Par « (CX-CY)hétéroarylène », on entend, au sens de la présente invention, un groupement divalent aromatique, comportant de X à Y atomes cycliques dont un ou plusieurs hétéroatomes, avantageusement 1 à 4 et encore plus avantageusement 1 ou 2, tels que par exemple des atomes de soufre, azote ou oxygène, les autres atomes cycliques étant des atomes de carbone. X et Y sont des nombres entiers compris entre 5 et 36, de préférence 5 et 18, en particulier 5 et 10. Par « radical divalent », on entend, au sens de la présente invention, un radical ayant une valence de 2, c’est-à-dire ayant deux liaisons chimiques covalentes, covalentes polaires ou ioniques. Ledit radical peut comprendre par exemple des atomes de carbone et/ou d’oxygène. Par « extrait sec », on entend, au sens de la présente invention, la masse de microsphères sèches contenue dans 1ml de microsphères gonflées d’eau. Dans le cadre de la présente invention, on entend par « agent de transfert », un composé chimique possédant au moins une liaison chimique faible. Cet agent réagit avec le site radicalaire d'une chaîne polymère en croissance et interrompt la croissance de la chaîne. Dans le processus de transfert de chaîne, le radical est transféré temporairement à l'agent de transfert qui relance la croissance en transférant le radical à un autre polymère ou monomère. Avantageusement, ledit agent de transfert de chaine est choisi dans le groupe constitué par les thiols monofonctionnels ou polyfonctionnels et les halogénures d’alkyle. Parmi les halogénures d’alkyle pouvant servir d’agent de transfert, on retrouve en particulier le bromotrichlorométhane, le tétrachlorométhane et le tétrabromométhane. De manière particulièrement avantageuse, ledit agent de transfert de chaine est un thiol cycloaliphatique ou aliphatique ayant typiquement de 2 à environ 24 atomes de carbone, de préférence 2 à 12 atomes de carbone, plus préférentiellement 6 atomes de carbone, et ayant éventuellement un groupe fonctionnel supplémentaire choisi parmi les groupes amino, hydroxy et carboxy. Des exemples d’agents de transfert de chaine particulièrement préférés sont l’acide thioglycolique, le 2-mercaptoéthanol, le dodécanethiol, l’hexanethiol, et leurs mélanges, de préférence l’hexanethiol. Dans le cadre de la présente invention, l’agent de transfert est en particulier présent dans le mélange réactionnel en une quantité de 1,5 % à moins de 6% de préférence de 1,5 % à 4,5 % et en particulier de 3% par mole, par rapport au nombre de moles du monomère hydrophile a). Ainsi, dans le cadre de la présente invention, la matrice est en particulier à base d’agent de transfert en une quantité de 1,5 % à moins de 6% de préférence de 1,5 % à 4,5 % et en particulier de 3 % par mole, par rapport au nombre de moles du monomère hydrophile a). Dans un mode de réalisation préféré, la matrice des microsphères d’embolisation non biodégradables selon l’invention, est à base d’agent de transfert dans des quantités de 1,5 % à 4,5 % en mole par rapport au nombre de mole de monomère hydrophile a). De manière avantageuse, les microsphères selon l’invention comprennent une matrice réticulée à base de 1,5 % à 3 % d’agent de transfert, préférentiellement 3 %. L’ajout d’un agent de transfert dans le mélange réactionnel dans les quantités précitées, en particulier entre 1,5 % et 3 % en mole par rapport au nombre de mole de monomère hydrophile a), permet notamment d’éviter la présence de défaut morphologiques sur les microsphères de l’invention après gonflement et stérilisation. Dans le cadre de la présente invention, l’absence de défauts morphologiques est définie comme l’absence de microsphères jumelles ou siamoises ; de microsphères elles- mêmes contenues dans d’autres microsphères (ou bille dans bille) ; de microsphères fracturées ou résidus de microsphères fracturées ; d’empilement ou amas de microsphères ; de microsphères fissurées ; de microsphères déformées (de formes non sphériques) ; de microsphères de surfaces non lisses ou de débris de polymères sous un grossissement allant jusqu'à 100 fois ; d’inclusions dans les microsphères ; de gouttes d’eau piégées dans les microsphères. Les microsphères d’embolisation de la présente invention présentent avantageusement des valeurs de module de Young typiquement comprises entre 3000 Pa et 30 000 Pa, préférentiellement entre 3000 Pa et 25 000 Pa, plus préférentiellement entre 3000 Pa et 10000 Pa, de préférence 5000 Pa à 10000 Pa qui témoignent d’une importante résistance à la compression des microsphères, associée à un taux de gonflement et à une élasticité optimale desdites microsphères. Avantageusement, selon l’invention, les microsphères d’embolisation non biodégradables comprennent une matrice réticulée homogène. Par « matrice réticulée homogène », on entend, au sens de la présente invention, une matrice constituée d’un réseau polymérique tridimensionnel dans lequel les composants sont uniformément distribués. Cela limite la présence de défaut structurel et renforce la solidité dudit réseau. En effet, typiquement, en l’absence d’une matrice réticulée homogène, le réseau polymérique se brisera au niveau de ses zones non-homogènes sous l’action d’une force de compression. Dans le cadre de la présente invention, une sphère est définie comme une surface dont tous les points sont à égale distance d'un point appelé centre. Par microsphères, on entend, au sens de la présente invention, des particules sphériques ayant un diamètre après gonflement allant de 20 à 1200 µm, par exemple de 20 à 100 µm, 40 à 150 µm, de 100 à 300 µm, de 300 à 500 µm, de 500 à 700 µm, de 700 à 900 µm ou de 900 à 1200 µm, telle que déterminée par microscopie optique. Les microsphères ont avantageusement un diamètre suffisamment petit pour être injectées par des aiguilles, des cathéters ou des microcathéters de diamètre interne variant de quelques centaines de micromètres à plus d’un millimètre. L’expression « après gonflement » signifie que la taille des microsphères est considérée après les étapes de polymérisation et de stérilisation qui interviennent lors de leur préparation. L’étape de stérilisation implique par exemple un passage des microsphères après l’étape de polymérisation dans un autoclave à haute température, typiquement à une température supérieure à 100°C, de préférence à une température comprise entre 110°C et 150°C, de préférence 121°C. Lors de cette étape de stérilisation, les microsphères continuent de gonfler. Selon la présente invention, le taux de gonflement global des microsphères est maitrisé. Le taux de gonflement est défini comme :
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Où mw est le poids en gramme de 1 mL de microsphères sédimentées et md est le poids en gramme de 1ml de microsphères sédimentées qui ont ensuite été lyophilisées. Par « taux de gonflement maitrisé », on entend, au sens de la présente invention, que le taux de gonflement global des microsphères est reproductible en fonction des lots, notamment qu’il diffère de moins de 15 % d’un lot à l’autre. Par « microsphère sédimentée », on entend, au sens de la présente invention, des microsphères mises en solution dans un récipient puis laissées suffisamment longtemps sans agitation afin qu’elles tombent au fond du récipient dans lequel elles sont contenues, le surnageant ayant ainsi pu être retiré. Par « microsphère lyophilisée », on entend, au sens de la présente invention, des microsphères ayant subi une congélation suivie d’une déshydratation par sublimation. Par « monomère hydrophile », on entend, au sens de la présente invention, un monomère ayant une forte affinité pour l’eau, c’est-à-dire tendant à se dissoudre dans l’eau, à se mélanger avec l’eau, à être mouillé par l’eau, ou capable de gonfler dans l’eau après polymérisation. Le monomère hydrophile a) de la présente invention est choisi parmi la N- vinylpyrrolidone, et un monomère de formule (I) suivante : (CH2=CR1)-CO-D (I) dans laquelle : D représente O-Z ou NH-Z, Z représentant (C1-C6)alkyle, -(CR2R3)m-CH3, -(CH2-CH2-O)m-H, -(CH2-CH2-O)m-CH3, -C(R4OH)m ou -(CH2)m-NR5R6 avec m représentant préférablement un nombre entier compris entre 1 et 10, plus préférablement m est égal à 4 ou 5; Avantageusement, le monomère hydrophile a) selon l’invention est choisi dans le groupe constitué de N-vinylpyrrolidone, alcool vinylique, 2-hydroxyéthylméthacrylate, acrylate de sec-butyle, acrylate de n-butyle, acrylate de t-butyle, méthacrylate de t-butyle, méthylméthacrylate, N-diméthylaminoéthyl(méthyl)acrylate, N,N-diméthylaminopropyl- (méth)acrylate, t-butylaminoéthyl(méthyl)acrylate, Ν,Ν-diéthylaminoacrylate, (méth)acrylate de poly(éthylène oxyde), (méth)acrylate de méthoxy poly(éthylène oxyde), (méth)acrylate de butoxy poly(éthylène oxyde), (méth)acrylate de poly(éthylène glycol), (méth)acrylate de méthoxy poly(éthylène glycol), (méth)acrylate de butoxy poly(éthylène glycol), méthyl éther méthacrylate de poly(éthylène glycol) (m-PEGMA), et leurs mélanges. Plus avantageusement, le monomère hydrophile a) est le méthyl éther méthacrylate de poly(éthylène glycol) (m-PEGMA). Dans le cadre de la présente invention, le monomère hydrophile a) est en particulier présent dans le mélange réactionnel en une quantité de 20 % à 95 %, de préférence de 30 % à 95%, plus préférentiellement de 45 % à 95%, de manière préférée de 45 % à 75 %, en particulier de 45 % à 70 %, plus particulièrement de 45 % à 65 % par mole, par rapport au nombre de moles total de monomères. Par « monomère réticulant », on entend, au sens de la présente invention, un monomère au moins bifonctionnel mais aussi multifonctionnel possédant une double liaison à chaque extrémité polymérisable. Le monomère réticulant, en combinaison avec les autres monomères dans le mélange, permet la formation d'un réseau réticulé. La structure et la quantité de monomère(s) réticulant(s) dans le mélange de monomères peuvent être choisies aisément par l’homme du métier pour fournir la densité de réticulation souhaitée. Le réticulant est également avantageux pour la stabilité des microsphères. Le réticulant empêche que les microsphères puissent se dissoudre dans n’importe quel solvant. Le réticulant permet également d’améliorer la compressibilité des microsphères, ce qui est favorable à l’embolisation. Par « réticulant hydrophile non-biodégradable », on entend, au sens de la présente invention, un réticulant tel que défini ci-dessus, ayant une forte affinité pour l’eau et ne pouvant être dégradé dans les conditions physiologiques du corps d’un mammifère, en particulier du corps humain. En effet, la biodégradation d’une molécule est permise lorsque celle-ci contient suffisamment de sites fonctionnels pouvant être clivés dans les conditions physiologiques, en particulier par les enzymes endogènes du corps d’un mammifère, notamment du corps humain, et/ou à pH physiologique (généralement aux environs de 7,4). Les sites fonctionnels clivables dans les conditions physiologiques sont notamment les liaisons amides, les liaisons ester et les acétals. Une molécule comprenant un nombre insuffisant desdits sites fonctionnels sera donc considérée comme non biodégradable. Dans le contexte de la présente invention, le monomère réticulant contient moins de 20 sites fonctionnels clivables dans les conditions physiologiques, de préférence, moins de 15 sites, plus préférablement moins de 10 sites, encore plus préférablement moins de 5 sites. Le réticulant hydrophile non-biodégradable linéaire ou ramifié selon l’invention est en particulier un réticulant non-biodégradable soluble en solvant organique et comprenant les groupements polymérisables diacrylate, méthacrylate, acrylamide, et/ou méthacrylamide. Avantageusement, le réticulant est de formule générale (IIa) ou (IIb) suivante : (CH2=CR7)CO-NH-A-HN-OC(CR8=CH2) (IIa), (CH2=CR7)CO-O-A-O-OC(CR8=CH2) (IIb), dans lesquelles R7 et R8 représentent indépendamment l’un de l’autre H ou un (C1-C6)alkyle tel qu’un groupement méthyle, de préférence R7 et R8 représentent H ; et A représente préférablement, seul ou avec au moins un des atomes auquel il est lié, un (C1- C6)alkylène, un polyéthylène glycol (PEG), un polysiloxane, un poly(diméthylsiloxane) (PDMS), un poly-glycérolique ester (PGE) ou un bisphénol A. De manière encore plus avantageuse, A représente, seul ou avec au moins un des atomes auquel il est lié, un (C1-C6)alkylène ou un polyéthylène glycol (PEG), de préférence un polyéthylène glycol (PEG). Dans le cadre des définitions de A ci-dessus, le polyéthylène glycol a une longueur variant de 200 à 10000 g/mol, de préférence de 200 à 2000 g/mol, plus préférablement de 500 à 1000 g/mol. Comme exemple de monomère réticulant pouvant être utilisé dans le cadre de la présente invention, on peut citer (sans être limitatif) : le 1,4-butanediol diacrylate, le pentaérythritol tétraacrylate, le méthylènebisacrylamide, le glycérol 1,3-diglycérolate diacrylate et le poly(éthylène glycol)diméthacrylate (PEGDMA). Avantageusement, le monomère réticulant est le poly(éthylène glycol)diméthacrylate (PEGDMA), le motif polyéthylène glycol ayant une longueur variant de 200 à 10000 g/mol, de préférence de 200 à 2000 g/mol, plus préférablement de 500 à 1000 g/mol. Dans le cadre de la présente invention, le monomère réticulant est en particulier présent dans le mélange réactionnel en une quantité de 1 % à 15 %, de préférence de 2 % à 10 %, en particulier 2 % à 7 %, plus particulièrement 2 % à 5 %, notamment 5 % en mole par rapport au nombre de moles total de monomères. Dans un mode de réalisation particulier de la présente invention, la matrice polymérique réticulée des microsphères est à base des constituants de base a), b) et c) tels que définis ci-dessus uniquement, dans les proportions susmentionnées, aucun autre constituant de base n’étant ajouté au milieu réactionnel. Il est ainsi manifeste que la somme des proportions de monomères a) et b) susmentionnées doit être égale à 100 %. Selon un aspect particulier de l’invention, la matrice réticulée des microsphères selon l’invention est en outre à base d'au moins un monomère ionisé ou ionisable, de formule (III) suivante : (CH2=CR9)-M-E (III) dans laquelle : ● R9 représente H ou un (C1-C6) alkyle ; ● M représente une liaison simple ou un radical divalent ayant de 1 à 20 atomes de carbone, de préférence une liaison simple ; ● E représente un groupe ionisé ou ionisable, E étant avantageusement choisi dans le groupe constitué de -COOH, -COO-, -SO3H, -SO3-, -PO4H2, -PO4H-, -PO4 2-, -NR10R11, - NR12R13R14 +, ● R10, R11, R12, R13 et R14 représentent indépendamment les uns des autres H ou un (C1- C6)alkyle. Par groupement ionisé ou ionisable, on entend, au sens de la présente invention, un groupement chargé ou pouvant se trouver sous forme chargée (sous forme d’ion), c’est-à- dire portant au moins une charge positive ou négative, selon le pH du milieu. Par exemple, le groupement COOH pourra être ionisé sous forme COO- et le groupement NH2 peut se trouver sous forme ionisée NH3+. L’introduction d’un monomère ionisé ou ionisable dans le mélange réactionnel permet d’augmenter l’hydrophilie des microsphères résultantes, augmentant ainsi le taux de gonflement desdites microsphères, facilitant davantage leur injection via les cathéters et microcathéters. La présence d’un monomère ionisé ou ionisable facilite notamment le chargement de substances actives au sein de la microsphère. De préférence, le monomère ionisé ou ionisable est un monomère cationique, avantageusement choisi dans le groupe consistant en le (méthacryloyloxy)éthylphosphorylcholine, le (méth)acrylate de 2-(diméthylamino)éthyle, le (méth)acrylate de 2-(diéthylamino)éthyle) et le chlorure de 2-((méth)acryloyloxy)éthyl)- triméthylammonium, avantageusement, le monomère cationique est le (méth)acrylate de diéthylamino)éthyle. Avantageusement, la matrice réticulée des microsphères selon la présente invention peut être obtenue en ajoutant dans le mélange réactionnel entre 1 et 40% en moles d’un monomère cationique mentionné ci-dessus sur la base de la quantité totale de monomères. De préférence, la matrice réticulée selon l’invention est obtenue en ajoutant au mélange réactionnel entre 5 % et 15 %, de préférence en ajoutant 10 %, en moles de monomère ionisé ou ionisable par rapport au nombre de moles total de monomères lorsque les microsphères résultantes ne sont pas destinées à être chargées avec une substance active. Selon un autre mode de réalisation, lorsque les microsphères sont destinées à être chargées avec une substance active, la matrice réticulée selon l’invention est obtenue en ajoutant au mélange réactionnel entre 20 % et 40 %, de préférence en ajoutant au mélange réactionnel 20 % à 30%, de préférence 30 % en moles de monomère ionisé ou ionisable par rapport au nombre de moles total de monomères. Dans un autre mode de réalisation avantageux, le monomère ionisé ou ionisable, est un monomère anionique avantageusement choisi dans le groupe constitué par l'acide acrylique, l'acide méthacrylique, l'acrylate de 2-carboxyéthyle, les 2-oligomères d'acrylate de carboxyéthyle, le (méth)acrylate de 3-sulfopropyle, le sel de potassium et l'hydroxyde de 2-((méthacryloyloxy)éthyl)diméthyl-(3-sulfopropyl)ammonium. Avantageusement, la matrice réticulée des microsphères d’embolisation non biodégradables selon la présente invention peut être obtenue en ajoutant au mélange réactionnel entre 1 % et 40 % en moles d’un monomère anionique mentionné ci-dessus sur la base de la quantité totale de monomères, plus avantageusement entre 10 % et 30 % en moles. De manière particulièrement avantageuse, le monomère ionisé ou ionisable, est l’acide méthacrylique. Avantageusement, la matrice réticulée selon l’invention est à base d’acide méthacrylique (MA ou AM) en des quantités comprises entre 10 % et 30% en moles sur la base de la quantité totale de monomères. Selon un mode de réalisation préféré de la présente invention, la matrice réticulée des microsphères selon l’invention est en outre à base d’au moins un monomère halogéné, de préférence iodé. L’introduction d’un monomère halogéné, de préférence iodé, a pour effet d’augmenter la densité des microsphères résultantes. De manière surprenante, les inventeurs ont découvert que lorsqu’un monomère halogéné, typiquement iodé, est utilisé dans le mélange réactionnel pour l’obtention de la matrice réticulée de l’invention, dans des quantités avantageusement comprises entre 1 % et 15 % en moles par rapport au nombre total de monomères, les microsphères d’embolisation résultantes forment une suspension optimale et stable dans un mélange comprenant 50 % de sérum physiologique et 50 % d’agent de contraste. En d’autres termes, l’introduction d’un monomère halogéné, notamment iodé, dans les quantités susmentionnées permet d’éviter aux microsphères de flotter à la surface d’un tel mélange. Dans le cadre de la présente invention, le monomère halogéné est en particulier ajouté dans le mélange réactionnel en une quantité de 5 % à 15 %, de préférence 5 % à 10 %, plus particulièrement de 5 % à 7 %, en mole par rapport au nombre de moles total de monomères. En outre, en utilisant 15 % ou moins de monomère halogéné en mole par rapport au nombre total de moles de monomère, les microsphères résultantes ne sont pas radio- opaques. Le monomère halogéné est introduit en quantité insuffisante pour conférer une radio-opacité à la microsphère. Avantageusement, le monomère halogéné est de formule générale (IV) suivante : (CH2=CR15)-CO-Y (IV) dans laquelle ● Y représente O-W, (O-R16)p-W, (NH-R16)p-W ou NH-W, W représentant Ar, L-Ar, et p étant un nombre entier compris entre 1 et 10, de préférence entre 1 et 4 dans laquelle : ● Ar représente un groupement (C5-C36)aryle ou (C5-C36)hétéroaryle, ledit groupement étant substitué par un, deux ou trois atome(s) d’iode et/ou de brome, et éventuellement substitué par un à quatre, de préférence deux ou trois, groupements choisis parmi (C1- C10)alkyle, -NRaRb, -NRcCORd, -COORe, -ORf, -OCORg, -CONRhRi, -OCONRjRk, -NRlCOORo, - NRrCONRsRt, -OCOORu, et -CORv ; ● L représente –(CH2)n-, –(HCCH)n-, –O-, –S-, –SO-, -SO2-, -OSO2-, -NR17-, -CO-, -COO-, - OCO-, -OCOO-, -CONR18-, -NR19CO-, -OCONR20-, -NR21COO- ou -NR22CONR23-, n étant un nombre entier de 1 à 10 ; ● R17 à R23 et Ra à Rv représentent indépendamment les uns des autres un atome d’hydrogène, un (C1-C10)alkyle, ledit (C1-C10) alkyle étant éventuellement substitué par 1 à 10 groupement(s) OH, ou un groupement –(CH2-CH2-O)q-R’, R’ étant un atome d’hydrogène ou un –(C1-C6)alkyle et q étant un nombre entier compris entre 1 et 10, de préférence entre 1 et 5; ● R15 représente H ou un (C1-C6)alkyle ; ● R16 représente un groupement choisi parmi (C1-C36)alkylène, (C3-C36)cycloalkylène, (C2- C36)alcénylène, (C3-C36)cycloalcénylène, (C2-C36)alcynylène, (C3-C36)cycloalcynylène, (C5- C36)arylène et (C5-C36)hétéroarylène. Dans le cadre de la présente invention, le monomère halogéné est plus avantageusement un monomère de formule générale (IV) telle que définie ci-dessus, dans laquelle Y représente NH-W, O-W ou (O-R16)p-W, avantageusement NH-W ou (O-R16)p-W, plus avantageusement (O-R16)p-W, W représentant Ar ou L-Ar, p, R16, L et Ar étant tels que définis ci-dessus. De préférence, R16 est un (C1-C36)alkylène, en particulier un (C1-C18)alkylène, plus particulièrement un (C1-C6)alkylène ; L représente -OCO- ; et Ar représente un (C5-C36)aryle, en particulier un (C5-C10)aryle, plus particulièrement un phényle, substitué par un, deux ou trois atome(s) d’iode et/ou de brome, de préférence d’iode, et éventuellement deux ou trois, groupements choisis parmi -NRaRb, -NRcCORd, -COORe, -OCORg, -CONRhRi, -OCONRjRk, - NRlCOORo- et -NRrCONRsRt, de préférence -NRaRb, -NRcCORd. Avantageusement, le monomère halogéné est un monomère de formule générale (IV) telle que définie ci-dessus, dans laquelle Y représente NH-W ou (O-R16)p-W, plus avantageusement (O-R16)p-W, W représentant Ar ou L-Ar, et p, R16, L et Ar étant tels que définis ci-dessus. De préférence, R16 est un (C2-C36)alkylène, en particulier un (C2- C18)alkylène, plus particulièrement un (C2-C6)alkylène ; L représente -OCO-, -C(O)NR17-, ou -NR18C(O)- ; et Ar représente un (C5-C36)aryle, en particulier un (C5-C10)aryle, plus particulièrement un phényle, substitué par un, deux ou trois atome(s) d’iode et/ou de brome, de préférence d’iode, et éventuellement deux ou trois, groupements choisis parmi - NRaRb, -NRcCORd, -COORe, -OCORg, -CONRhRi, -OCONRjRk, -NRlCOORo- et -NRrCONRsRt, de préférence -NRaRb, -NRcCORd et -C(O)NRhRi. Avantageusement, Ar représente un (C5-C10)aryle, plus particulièrement un phényle, substitué par trois atomes d’iode et/ou de brome, de préférence d’iode, et éventuellement deux groupements choisis parmi (C1-C10)alkyle, -NRaRb, -NRcCORd, -COORe, -OCORg, -CONRhRi, -OCONRjRk, -NRlCOORo- et -NRrCONRsRt. Avantageusement, Ar représente un phényle substitué par trois atomes d’iode et/ou de brome, de préférence d’iode, et éventuellement deux groupements choisis parmi (C1- C10)alkyle, -NRaRb, -NRcCORd, -COORe, -OCORg, -CONRhRi, -OCONRjRk, -NRlCOORo- et - NRrCONRsRt, avantageusement parmi (C1-C10)alkyle, -NRaRb, -NRcCORd, -COORe, -CONRhRi, - NRlCOORo- et -NRrCONRsRt. Avantageusement, le monomère halogéné est un monomère de formule générale (IV) telle que définie ci-dessus, dans laquelle Y représente O-C6H4I, O-C6H3I2, O-C6H2I3, NH-C6H4I, NH-C6H3I2, NH-C6H2I3, O-CH2-CH2-C(O)-C6H4I, O-CH2-CH2-O-C(O)-C6H3I2, O-CH2-CH2-O-C(O)- C6H2I3, NH-CH2-CH2-C(O)-C6H4I, NH-CH2-CH2-O-C(O)-C6H3I2, ou NH-CH2-CH2-O-C(O)-C6H2I3, en particulier O-C6H2I3, NH-C6H2I3, O-CH2-CH2-O-C(O)-C6H2I3, ou NH-CH2-CH2-O-C(O)-C6H2I3. Dans un autre mode de réalisation, le monomère halogéné est de formule générale (VI) suivante : (CH2=CR29)-CO-Y’ (VI) dans laquelle ● R29 représente H ou un (C1-C6)alkyle ; ● Y’ représente, (O-R30)t-W’-Ar’, ou NH-W’-Ar’, t étant un nombre entier compris entre 1 et 10, de préférence entre 1 et 4 ; ● R30 représente un groupement choisi parmi (C2-C36)alkylène ; ● W’ représente une liaison simple, -CONR31-, ou -NR32CO- ; ● Ar’ représente un groupement (C5-C36)aryle, ledit groupement étant substitué par un, deux ou trois atome(s) d’iode et/ou de brome, et éventuellement substitué par un à quatre, de préférence deux ou trois, groupements choisis parmi (C1-C10)alkyle, -NR33R34, -NR35COR36, -COOR37, -OR38, -OCOR39, -CONR40R41, -OCONR42R43, -NR44COOR45, - NR46CONR47R48, -OCOOR49, et -COR50 ; ● R31 et R32 représentent, indépendamment l’un de l’autre, un atome d’hydrogène ou un (C1-C6)alkyle ; ● R33 à R50 représentent, indépendamment les uns des autres, un atome d’hydrogène, un (C1-C10)alkyle, ledit (C1-C10) alkyle étant éventuellement substitué par 1 à 10 groupement(s) OH, ou un groupement –(CH2-CH2-O)t’-R’’, R’’ étant un atome d’hydrogène ou un –(C1-C6)alkyle et t’ étant un nombre entier compris entre 1 et 10, de préférence entre 1 et 5. Avantageusement, R29 représente un (C1-C6)alkyle, plus avantageusement un (C1- C3)alkyle, plus avantageusement un méthyle. Avantageusement, R30 représente un (C2-C18)alkylène, plus particulièrement un (C2- C6)alkylène, plus avantageusement un éthylène. Avantageusement, R31 et R32 représentent, indépendamment l’un de l’autre, un atome d’hydrogène. Ainsi, W’ représente avantageusement une liaison simple, -C(O)NH-, ou -NHC(O)-. Avantageusement, Ar’ représente un (C5-C10)aryle, plus particulièrement un phényle, substitué par un, deux ou trois atome(s) d’iode et/ou de brome, de préférence d’iode, et éventuellement deux ou trois, groupements choisis parmi (C1-C10)alkyle, -NR33R34, - NR35C(O)R36, -C(O)OR37, -OR38, -OC(O)R39, -C(O)NR40R41, -OC(O)NR42R43, -NR44C(O)OR45, - NR46C(O)NR47R48, -OC(O)OR49, et -C(O)R50. Avantageusement, Ar’ représente un (C5-C10)aryle, plus particulièrement un phényle, substitué par trois atomes d’iode et/ou de brome, de préférence d’iode, et éventuellement deux groupements choisis parmi (C1-C10)alkyle, -NR33R34, -NR35C(O)R36, -C(O)OR37, -OR38, - OC(O)R39, -C(O)NR40R41, -OC(O)NR42R43, -NR44C(O)OR45, -NR46C(O)NR47R48, -OC(O)OR49, et - C(O)R50. Avantageusement, Ar’ représente un phényle substitué par trois atomes d’iode et/ou de brome, de préférence d’iode, et éventuellement deux groupements choisis parmi (C1- C10)alkyle, -NR33R34, -NR35C(O)R36, -C(O)OR37, -OR38, -OC(O)R39, -C(O)NR40R41, -OC(O)NR42R43, -NR44C(O)OR45, -NR46C(O)NR47R48, -OC(O)OR49, et -C(O)R50, avantageusement parmi (C1- C10)alkyle, -NR33R34, -NR35C(O)R36, -C(O)OR37, -OR38, -C(O)NR40R41, -NR44C(O)OR45, - NR46C(O)NR47R48, -OC(O)OR49, et -C(O)R50. Avantageusement, le monomère halogéné est choisi parmi les composés de formule générale (VI) suivants :
Figure imgf000023_0001
De manière avantageuse, le monomère halogéné est choisi parmi les composés suivants :
Figure imgf000024_0001
Plus avantageusement, le monomère halogéné est choisi parmi le (tri- iodobenzoyl)oxo éthyl méthacrylate (MAOETIB) de formule (IVa) suivante :
Figure imgf000024_0002
ou le 2-(2-(2-(2,3,5-triiodobenzamido)ethoxy)ethyl methacrylate de formule suivante :
Figure imgf000024_0003
Dans le cadre de la présente invention, la matrice réticulée des microsphères selon l’invention est en outre à base d’au moins un monomère coloré pour les rendre visibles à l’œil nu. Cela permet notamment de vérifier avant injection que la suspension de microsphères est bien homogène dans la seringue et de contrôler la vitesse d’injection. Ainsi, selon un mode particulier, la matrice réticulée des microsphères selon l’invention est en outre à base d’au moins un monomère coloré de formule générale (V) suivante :
Figure imgf000025_0001
, dans laquelle, ● Z1 et Z2 représentent, indépendamment l’un de l’autre, H ou OR26, R26 représentant H ou un (C1-C6)alkyle, avantageusement Z1 et Z2 représentent H ; ● X représente H ou un halogène tel que Cl, avantageusement H ; ● R24 représente un groupe choisi parmi (C1-C6)alkylène linéaire ou ramifié, (C5- C36)arylène, (C5-C18)arylène-O-R27, (C5-C18)hétéroarylène et (C5-C18)hétéroarylène-O-R28, R27 et R28 représentant un (C1-C6)alkyle ou un (C1-C6)alkylène, avantageusement R24 représente un groupe -C6H4-O-(CH2)2- ou -C(CH3)2-CH2-. ● R25 représente H ou un (C1-C6)alkyle, avantageusement un (C1-C6)alkyle, en particulier un méthyle. Avantageusement, le monomère coloré est de formule (Va) ou (Vb) suivante :
Figure imgf000025_0002
Dans le cadre de la présente invention, le monomère coloré est en particulier ajouté dans le mélange réactionnel en une quantité de 0 % à 1%, de préférence de 0 % à 0,5 %, plus particulièrement de 0,01 % à 0,2%, plus préférentiellement de 0,02 % à 0,2 %, et encore plus particulièrement de 0,04 % à 0,1% en mole, par rapport au nombre de moles total de monomères. L’imagerie par résonance magnétique (IRM) est utilisée dans le milieu médical pour fournir des images en coupe bidimensionnelles des structures internes du corps d’un patient sans l’exposer à un rayonnement nuisible. La matrice réticulée des microsphères d’embolisation selon l’invention peut en outre être à base de particules permettant de rendre visibles les microsphères sur les scans d’imagerie par résonance magnétique. Ainsi, avantageusement, la matrice réticulée des microsphères selon l’invention est en outre à base d’agents visibles en imagerie par résonance magnétique (IRM) telles que des nanoparticules d’oxyde de fer, des chélates de gadolinium ou des chélates de magnésium, avantageusement des nanoparticules d’oxyde de fer telles que les USPIOs (Ultra Small Super Paramagnetic Iron Oxide ou Ultra Small Paramagnetic Iron Oxide = particules magnétiques à base d’un composé de fer qui présentent des caractéristiques superparamagnétiques qui les rendent visibles en IRM). Dans le cadre de la présente invention, les particules visibles en IRM sont avantageusement ajoutées dans le mélange réactionnel en une quantité de 0 % à 10%, de préférence de 0,1 % à 10 % en volume de phase organique. Dans le cadre de la présente invention, lorsque la matrice réticulée des microsphères ne comprend pas de monomère ionisé ou ionisable en tant que constituant de base, elle est avantageusement à base de : - 94,5 % à 98 % % de monomère hydrophile a), de préférence 94,5 % à 96 %, de préférence 94,96 % ; - 2 % à 5 % de monomère réticulant hydrophile non-biodégradable b), de préférence 3 % à 5 %, de préférence 5 % ; - 1 % à 3 % d’agent de transfert c), de préférence 3 % ; - 0 % à 0,5 % de monomère coloré, de préférence 0,02 % à 0,1 %, de préférence 0,04 % ; et - 0 % à 10 % de particules visibles en IRM, de préférence 0 % à 5 %, de préférence 1%, chacun des monomères cités et la nature de leurs pourcentages associés étant tels que définis ci-dessus dans la présente description. Il est manifeste que la somme des pourcentages susmentionnés de monomère doit être égale à 100 %. Selon un autre mode de réalisation de la présente invention, les microsphères selon l’invention non chargées avec une substance active comprennent une matrice réticulée avantageusement à base de : - 79,5 % à 93 % de monomère hydrophile a), de préférence 80 % à 90 %, de préférence 84,96 % ; - 2 % à 5 % de monomère réticulant hydrophile non-biodégradable b), de préférence 3 % à 5 %, de préférence 5 % ; - 1 % à 3 % d’agent de transfert c), de préférence 3 % ; - 5 % à 15 % de monomère ionisé ou ionisable, de préférence 8 % à 12 %, de préférence 10 % ; - 0 % à 0,5 % de monomère coloré, de préférence 0,02 % à 0,1 %, de préférence 0,04 % ; et - 0 % à 10 % de particules visibles en IRM, de préférence 0 % à 5 %, de préférence 1 %, chacun des monomères cités et la nature de leurs pourcentages associés étant tels que définis ci-dessus dans la présente description. Il est manifeste que la somme des pourcentages de monomères susmentionnés doit être égale à 100 %. Selon un mode de réalisation préféré de la présente invention, les microsphères selon l’invention non chargées avec une substance active comprennent une matrice réticulée avantageusement à base de : - 63 % à 95% de monomère hydrophile a), de préférence 70 % à 90 %, de préférence 75 % à 80 %, de préférence 79,96 % ; - 2 % à 5 % de monomère réticulant hydrophile non-biodégradable b), de préférence 3 % à 5 %, de préférence 5 % ; - 1 % à 3 % d’agent de transfert c), de préférence 3 % ; - 5 % à 15 % de monomère ionisé ou ionisable, de préférence 8 % à 12 %, de préférence 10 % ; - 5 % à 7 % de monomère halogéné, de préférence 5 % à 6 %, de préférence 5 % ; - 0 % à 0,5 % de monomère coloré, de préférence 0,02 % à 0,1 %, de préférence 0,04 % ; et - 0 % à 10 % de particules visibles en IRM, de préférence 0 % à 5 %, de préférence 1 %, chacun des monomères cités et la nature de leurs pourcentages associés étant tels que définis ci-dessus dans la présente description. Il est manifeste que la somme des pourcentages de monomère susmentionnés doit être égale à 100 %. Dans le cadre de la présente invention, les microsphères selon l’invention chargées avec une substance active comprennent une matrice réticulée avantageusement à base de: - 45 % à 65 % de monomère hydrophile a), de préférence 50 % à 65 %, de préférence 55 % à 65 %, de préférence 64,96 % ; - 2 % à 5 % de réticulant hydrophile non biodégradable b), de préférence 3 % à 5 %, de préférence 5 % ; - 1 % à 3 % d’agent de transfert c), de préférence 3 % ; - 20 % à 40 % de monomère chargé ionisé ou ionisable, de préférence 30 % à 40 %, de préférence 30 % ; - 0 % à 0,5 % de monomère coloré, de préférence 0,02 % à 0,1 %, de préférence 0,04 % ; et - 0 % à 10 % de particules visibles en IRM, de préférence 0 % à 5 %, de préférence 1 %, chacun des monomères cités et la nature de leurs pourcentages associés étant tels que définis ci-dessus dans la présente description. Il est manifeste que la somme des pourcentages de monomère susmentionnés doit être égale à 100 %. De manière préférée, les microsphères selon l’invention chargées avec une substance active comprennent une matrice réticulée avantageusement à base de : - 47,5 % à 73 % de monomère hydrophile a), de préférence 50 % à 70 %, de préférence 59,96 % ; - 2 % à 5 % de réticulant hydrophile non biodégradable b), de préférence 3 % à 5 %, de préférence 5 % ; - 1 % à 3 % d’agent de transfert c), de préférence 3% ; - 20 % à 40 % de monomère chargé ionisé ou ionisable, de préférence 30 % à 40%, de préférence 30 % ; - 5 % à 7 % de monomère halogéné, de préférence 5 % à 6 %, de préférence 5 % ; - 0 % à 0,5 % de monomère coloré, de préférence 0,02 % à 0,1 %, de préférence, de préférence 0,04 % ; et - 0 % à 10 % de particules visibles en IRM, de préférence 0 % à 5 %, de préférence 1 %, chacun des monomères cités et la nature de leurs pourcentages associés étant tels que définis ci-dessus dans la présente description. La matrice réticulée des microsphères selon l'invention peut être facilement synthétisée par de nombreux procédés bien connus de l'homme de l'art. A titre d'exemple, la matrice réticulée selon l'invention peut typiquement être obtenue par polymérisation en suspension, directe ou inverse, comme décrit ci-dessous et dans les exemples. Une suspension directe peut se dérouler comme suit : (a) malaxer ou agiter un mélange réactionnel comprenant : (i) au moins un monomère hydrophile a) tel que défini ci-dessus, au moins un réticulant hydrophile non biodégradable b) tel que défini ci-dessus, et au moins un agent de transfert c) tel que défini ci-dessus ; (ii) un amorceur de polymérisation présent en des quantités allant de 0,1 à environ 2 parties en poids pour 100 parties en poids de monomères ; (iii) un tensioactif en une quantité non supérieure à environ 5 parties en poids pour 100 parties en poids de phase aqueuse, de préférence non supérieure à environ 3 parties en poids et le plus préférablement dans la plage de 0,2 à 1,5 parties en poids de phase aqueuse; et (iv) de l'eau pour former une suspension huile dans l'eau ; et (b) polymériser les constituants de base. Dans un tel procédé de suspension directe, le tensioactif peut être choisi dans le groupe constitué de l’hydroxyethyl cellulose, du polyvinylalcool (PVA), de la polyvinylpyrrolidone, de l’oxyde de polyéthylène, le polyéthylène glycol et du Polysorbate 20 (Tween® 20) ; de préférence il s’agit du PVA. Les microsphères ainsi obtenues sont alors lavées et calibrées selon des techniques bien connues de l’homme de l’art. Une suspension inverse peut se dérouler comme suit : (a) malaxer ou agiter un mélange réactionnel comprenant : (i) au moins un monomère hydrophile a) tel que défini ci-dessus, au moins un réticulant hydrophile non biodégradable b) tel que défini ci-dessus, et au moins un agent de transfert c) tel que défini ci-dessus ; (ii) un amorceur de polymérisation présent en des quantités allant de 0,1 à environ 2 parties en poids pour 100 parties en poids de monomères ; (iii) un tensioactif en une quantité non supérieure à environ 10 parties en poids pour 100 parties en poids de la phase huile, de préférence non supérieure à environ 8 parties en poids et le plus préférablement dans la plage de 3 à 7 parties en poids ; et (iv) l'huile pour former une suspension d'eau dans l'huile ; et (b) polymériser les constituants de base. Dans les procédés cités ci-dessus, l’amorceur de polymérisation peut-être notamment le peroxyde de t-butyle, le peroxyde de benzoyle, l’acide azobiscyanovalerique (aussi nommé acide 4,4′-Azobis(4-cyanopentanoique), le 1,1’ Azobis (cyclohexane carbonitrile) ou l’AIBN (azobisisobutyronitrile) ou un ou plusieurs amorceurs thermiques tels que 2-Hydroxy- 4′-(2-hydroxyethoxy)-2-methylpropiophenone (106797-53-9); 2-Hydroxy-2- methylpropiophenone (Darocur® 1173, 7473-98-5), 2,2-dimethoxy-2- phenylacetophenone (24650-42-8), 2,2-dimethoxy-2-phenyl acetophenone (Irgacure®, 24650-42-8) ou 2-methyl-4′-(methylthio)-2-morpholinopropiophenone (Irgacure®, 71868-10- 5). Dans un tel procédé de suspension inverse, le tensioactif peut être choisi dans le groupe constitué d’esters de sorbitane tels que le monolaurate de sorbitane (Span® 20), le monopalmitate de sorbitane (Span® 40), le monooléate de sorbitane (Span® 80) et le trioléate de sorbitane (Span® 85), de l’hydroxyéthyl cellulose, du mélange de glycéryl stéarate et de PEG stéarate (Arlacel®) et d’acétate de cellulose. L’huile utilisée dans le procédé décrit ci-dessus peut être choisie parmi l’huile de paraffine, l’huile de silicone et les solvants organiques tels que l’hexane, le cyclohexane, l’acétate d’éthyle ou l’acétate de butyle. Lorsque la matrice réticulée selon l’invention est obtenue à partir de la polymérisation d'au moins un monomère ionisé ou ionisable, un médicament, une substance active, un agent de diagnostic ou des macromolécules, peut/peuvent également être chargé(es) sur les microsphères, c’est-à-dire adsorbé(es) sur la matrice réticulée par interactions non- covalentes, éventuellement en présence d’excipient(s) pharmaceutiquement acceptable(s) bien connu(s) de l’homme du métier. Cette façon particulière de piéger les médicaments ou les substances actives s'appelle l’encapsulation physique. Aucune exigence particulière n'est imposée sur le médicament ou la substance active à charger. Le chargement peut se faire par de nombreux procédés bien connus de l'homme de l'art tels que l'adsorption passive (gonflement de la matrice réticulée dans une solution de médicament) ou par interaction ionique. Ces méthodes sont par exemple décrites dans la demande internationale WO 2012/120138, notamment de la page 22 ligne 20 à la page 26 ligne 7. L'efficacité de l'encapsulation dépend principalement de la compatibilité entre les deux structures et/ou des interactions favorables. Dans le cadre de la présente invention, les microsphères peuvent être chargées d’un médicament, d’une substance active ou d’un agent de diagnostic et permettre ainsi leur relargage sur un site visé, ledit site visé étant à l’intérieur du corps d’un mammifère, en particulier à l’intérieur d’un corps humain. La matrice réticulée des microsphères selon l’invention peut donc être chargée d’un médicament ou d’une substance active ou d’un agent de diagnostic, ayant avantageusement une masse molaire inférieure à 5000 Da, typiquement inférieure à 1000 Da, le médicament ou la substance active étant avantageusement choisi dans le groupe constitué d’agents anti-inflammatoires, d’anesthésiques locaux, d’analgésiques, d’antibiotiques, d’agents anticancéreux, de stéroïdes, d’antiseptiques et d’un mélange de ceux-ci. De préférence, le polymère selon l’invention peut être chargé d’agent anticancéreux. L’agent anticancéreux est préférentiellement choisi parmi les anthracyclines telle que la doxorubicine, l’epirubicine ou l’idarubicine, les complexes de platine, les composés apparentés aux anthracyclines tels que la mitoxantrone et la nemorubicine, les antibiotiques tels que la mitomycine C (Ametycine®), la bléomycine et l’actinomycine D, les autres composés anti-néoplasiques tels que l’irinotecan, le 5-Fluoro-Uracile (Adrucil®), le sorafénib (Nevaxar®), le sunitinib (Sutent®), le regorafénib, le brivanib, l’orantinib, le linsitinib, l’erlotinib, le cabozantinib, le foretinib, le tivantinib, la fotémustine, la tauromustine (TCNU), la carmustine, la cytosine C, le cyclophosphonamide, la cytosine arabinoside (ou cytarabine), le paclitaxel, le docétaxel, le methotrexate, l’everolimus (Afinitor®), le PEG- arginine deiminase, la combinaison tegafur/gimeracil/oteracil (Teysuno®), le muparfostat, le pérétinoine, la gemcitabine, le bévacizumab (Avastin®), le ramucirumab, la floxuridine, les immunostimulants tels que le GM-CSF (Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor) et ses formes recombinantes : molgramostim ou sargramostim (Leukine®), l’OK-432 (Picibanil®), l’interleukine-2, l’interleukine-4 et le Tumor necrosing Factor-alpha (TNFalpha), les anticorps, les radio-éléments, les complexes de ces radioéléments avec des chélates, les séquences d’acide nucléique et un mélange d’un ou plusieurs de ces composés (préférentiellement un mélange d’une ou plusieurs anthracyclines). Préférentiellement, l’agent anticancéreux est choisi parmi les anthracyclines, les immuno-stimulants, les complexes de platine, les anti-néoplasiques et leurs mélanges. Encore plus préférentiellement, l’agent anticancéreux est choisi parmi les anthracyclines, les anticorps, les anti-néoplasiques et leurs mélanges. Les anticorps sont par exemple choisis parmi les anti-PD-1, les anti-PD-L1, les anti- CTLA-4, les anti-CEA (CarcinoEmbryonic Antigen) ou un mélange de ceux-ci. Les anti-PD-1 sont par exemple le nivolumab ou le pembrolizumab. Les anti-PD-L1 sont par exemple l’avelumab, le durvalumab ou l’atezolizumab. Les anti-CTLA-4 sont par exemple l’ipilimumab ou le tremelimumab. Encore plus avantageusement, l’anticancéreux est choisi dans le groupe constitué de paclitaxel, doxorubicine, epirubicine, idarubicine, irinotécan, GM-CSF (Granulocyte- macrophage colony-stimulating factor), tumor necrosing Factor-alpha (TNFalpha), les anticorps, et leurs mélanges. Préférentiellement, l’anesthésique local est choisi parmi la lidocaïne, la bupivacaïne et leurs mélanges. L’anti-inflammatoire peut être choisi parmi l’ibuprofène, l’acide niflumique, la dexaméthasone, le naproxène et leurs mélanges. Dans le cadre de la présente invention, le polymère peut être chargé, notamment par adsorption extemporanée, de macromolécules choisies dans le groupe constitué d’enzymes, d’anticorps, de cytokines, de facteurs de croissance, de facteurs de coagulation, d’hormones, de plasmides, d’oligonucléotides antisens, de siARN, de ribozymes, de DNA enzyme (aussi appelée DNAzyme), d’aptamères, de protéines anti-inflammatoires, des protéines morphogènes osseuses (BMP), des facteurs pro-angiogéniques, des facteurs de croissance endothéliale vasculaire (VEGF) et des TGF-bêta, et des inhibiteurs de l'angiogenèse ou des anti-tyrosine kinases et leurs mélanges. Les protéines anti-inflammatoires sont par exemple l’infliximab ou le rilonacept et leur mélange. Les facteurs pro-angiogéniques sont par exemple des facteurs de croissance des fibroblastes (FGF) et leur mélange. Les inhibiteurs de l'angiogenèse sont par exemple le bevacizumab, le ramucirumab, le nesvacumab, l’olaratumab, le vanucizumab, le rilotumumab, l’emibetuzumab, l’aflibercept, le ficlatuzumab, le pegaptanib et leurs mélanges. Les anti-tyrosine kinases sont par exemple le lenvatinib, le sorafenib, le sunitinib, le pazopanib, le vandetanib, l’axitinib, le regorafenib, le cabozantinib, le fruquintinib, le nintedanib, l’anlotinib, le motesanib, le cediranib, le sulfatinib, le dovetinib, le linifanib et leurs mélanges. De manière avantageuse, le polymère peut être chargé de macromolécules choisies parmi les anti-tyrosine kinases, les TGF-bêta, les inhibiteurs de l'angiogenèse et leurs mélanges. Dans un second aspect, l’invention porte sur une composition pharmaceutique comprenant des microsphères d’embolisation non biodégradables selon l’invention, en association avec un véhicule pharmaceutiquement acceptable, avantageusement pour une administration par injection. Un exemple de véhicule pharmaceutiquement acceptable comprend, mais sans s'y limiter, de l'eau pour injection, de la solution saline également appelée sérum physiologique, de l'amidon, de l'hydrogel, de la polyvinylpyrrolidone, du polysaccharide, de l'ester d'acide hyaluronique, du plasma, un agent de contraste pour l'imagerie par rayon X, par résonance magnétique ou par échographie, un agent tampon, un conservateur, un agent gélifiant et/ou un agent tensioactif. Avantageusement, le véhicule pharmaceutiquement acceptable est du sérum physiologique, de l'eau pour injection, un agent de contraste pour l'imagerie par rayon X, par résonance magnétique ou par échographie, ou leurs mélanges. Plus avantageusement, le véhicule pharmaceutiquement acceptable est du sérum physiologique, un agent de contraste pour l'imagerie par rayon X, par résonance magnétique ou par échographie, ou un mélange de sérum physiologique et d’un agent de contraste pour l'imagerie par rayon X, par résonance magnétique ou par échographie. Selon la présente invention, l’agent de contraste est préférablement un agent de contraste pour l'imagerie par rayon X. Il s’agit avantageusement d’un agent de contraste hydrosoluble iodé non ionique, tel que par exemple l’iobitridol (Xenetix®), l’iopamidol (Iopamiron®, Isovue®), l’iomeprol (Iomeron®), l’ioversol (Optiray®, Optiject®), l’iohexol (Omnipaque®), l’iopentol (Imagopaque®), l’ioxitol (Oxilan®), l’iopromide (Ultravist®), le metrizamide (Amipaque®), l’iosarcol (Melitrast®), l’iotrolan (Isovist®), l’iodixanol (Visipaque®), l’iosiménol et l’iosimide (Univist®) et un mélange de ceux-ci. Selon un autre mode de réalisation, l’agent de contraste est un agent de contraste pour l’imagerie par résonnance magnétique (IRM). Il s’agit avantageusement de chélates de gadolinium (Dotarem®). Selon un autre mode de réalisation, l’agent de contraste est un agent de contraste pour l’imagerie par échographie. Il s’agit avantageusement d’hexafluorure de soufre (Sonovue®). Dans un mode de réalisation particulier de la présente invention, la composition pharmaceutique comprend des microsphères d’embolisation non biodégradables selon l’invention, en association avec du sérum physiologique, ladite composition étant destinée à être mélangée avec au moins un agent de contraste pour l'imagerie par rayon X, par résonance magnétique ou par échographie tel que défini ci-dessus, en particulier pour l’imagerie par rayon X, avant administration par injection, un tel mélange entrainant la mise en suspension des microsphères selon l’invention. La composition pharmaceutique a avantageusement une viscosité acceptable pour l'injection. Dans un mode de réalisation particulier selon l’invention, la composition pharmaceutique selon l’invention comprend des microsphères d’embolisation non biodégradables selon l’invention, en association avec un mélange de sérum physiologique et d’un agent de contraste tel que défini ci-dessus, le sérum physiologique et l’agent de contraste étant présent dans des proportions 70/30 à 20/80, avantageusement de 50/50 à 20/80, de préférence 50/50. Avantageusement, lorsque la composition pharmaceutique selon l’invention comprend des microsphères obtenues par polymérisation d’un mélange réactionnel comprenant de 5 % à 10 %, plus préférentiellement de 5 % à 7 % de monomère halogéné tel que décrit dans la présente description, ladite composition pharmaceutique comprend lesdites microsphères en association avec un mélange de sérum physiologique et d’un agent de contraste dans des proportions comprises 80/20 et 0/100, de préférence 70/30 et 40/60, en particulier 50/50. Préférentiellement lesdites microsphères ont une taille de 500 à 700 μm, 700 à 900 μm ou 900 à 1200 μm. De cette façon, la suspension de microsphères dans la solution est homogène et stable pendant le temps nécessaire à l’injection. Dans un autre mode de réalisation selon l’invention, lorsque la composition pharmaceutique selon l’invention comprend des microsphères obtenues par polymérisation d’un mélange réactionnel ne comprenant pas de monomère halogéné tel que décrit dans la présente description, ladite composition pharmaceutique comprend lesdites microsphères en association avec un mélange de sérum physiologique et d’un agent de contraste dans des proportions comprises entre 80/20 et 0/100. Les domaines d'application des microsphères d’embolisation non biodégradables selon l’invention comprennent en particulier l’embolisation de vaisseau notamment dans le cas du fibrome utérin et de la chimioembolisation, par exemple dans le cas de l’hépatocarcinome aussi appelé carcinome hépatocellulaire (CHC) ou cancer primitif du foie, qui consiste à éliminer une tumeur en combinant l’occlusion vasculaire avec la délivrance d’un ou plusieurs principes actifs ou macromolécules chargés dans des microsphères d’embolisation. Cette technique permet de concentrer la charge médicamenteuse au niveau de la tumeur et donc de diminuer la concentration systémique et en même temps les effets indésirables. Les microsphères d’embolisation non biodégradables selon l’invention peuvent, comme cela a été indiqué ci-dessus, être utilisées à diverses fins biomédicales, ce qui signifie qu’elles doivent être compatibles au corps humain ou au corps d’un mammifère. Plus particulièrement, les matériaux biomédicaux appropriés ne possèdent pas de propriétés hémolytiques. La présente invention concerne en outre l’utilisation spécifique d’un agent de transfert dans la polymérisation d’une matrice réticulée comprise dans des microsphères d’embolisation non biodégradables pour permettre l’injection desdites microsphères, notamment l’injection dans un cathéter ou un microcathéter de diamètre interne variant de quelques centaines de micromètres à plus d’un millimètre. La présente invention concerne également l’utilisation spécifique d’un agent de transfert dans la polymérisation d’une matrice réticulée pour améliorer les propriétés mécaniques (gonflement, élasticité, solidité, résistance à la compression). Ledit agent de transfert est notamment choisi parmi les thiols cycloaliphatiques ou aliphatiques ayant notamment de 2 à 24 atomes de carbone, et ayant éventuellement un autre groupe fonctionnel choisi parmi les groupes amino, hydroxy et carboxy. La présente invention a également pour objet un kit comprenant une composition pharmaceutique telle que définie ci-dessus et au moins un moyen d’injection de ladite composition, pour une administration de ladite composition par voie parentérale. Selon la présente invention, on entend par « moyen d’injection » tout moyen permettant une administration par voie parentérale. Avantageusement, ledit moyen d’injection est une ou plusieurs seringues et/ou une ou plusieurs seringue(s) pouvant être préremplies et/ou un ou plusieurs cathéter(s) ou microcatheter(s) pour une administration de ladite composition par injection. Avantageusement, la composition pharmaceutique présente dans ledit kit comprend les microsphères selon la présente invention en association avec du sérum physiologique, un agent de contraste, ou leur mélange. Plus avantageusement, ladite composition pharmaceutique comprend les microsphères selon la présente invention en association avec un mélange de sérum physiologique et d’un agent de contraste dans des proportions comprises entre 80/20 et 0/100, avantageusement comprises entre 70/30 et 40/60, préférentiellement 50/50. De manière avantageuse, lorsque les microsphères selon l’invention sont obtenues par polymérisation d’un mélange réactionnel comprenant de 5 % à 10%, plus préférentiellement de 5 % à 7 % de monomère halogéné tels que décrit dans la présente description, ladite composition pharmaceutique comprend lesdites microsphères en association avec un mélange de sérum physiologique et d’un agent de contraste dans des proportions comprises entre 60/40 et 0/100, avantageusement de 50/50. Selon un autre mode de réalisation de la présente invention, lorsque les microsphères selon l’invention sont obtenues par polymérisation d’un mélange réactionnel ne comprenant pas de monomère halogéné tels que décrit dans la présente description, ladite composition pharmaceutique comprend lesdites microsphères en association avec un mélange de sérum physiologique et d’un agent de contraste dans des proportions comprises entre 80/20 et 0/100. Avantageusement, le moyen d’injection présent dans le kit selon l’invention est adapté pour l’administration par voie parentérale de la composition pharmaceutique selon l’invention. Ainsi, la taille de la(des) seringue(s) ou du(des) (micro)cathéter(s) sera adaptée en fonction de la taille des microsphères selon l’invention et du volume à injecter pour l’embolisation. L’homme du métier saura choisir le moyen d’injection adapté. La présente invention a également pour objet un kit comprenant d’une part une composition pharmaceutique telle que définie ci-dessus et d’autre part au moins un agent de contraste pour l'imagerie par rayon X, par résonance magnétique ou par échographie, et éventuellement au moins un moyen d’injection pour une administration par voie parentérale. Le moyen d’injection est tel que défini ci-dessus. Dans ledit kit, la composition pharmaceutique et l’agent de contraste sont conditionnés séparément et sont destinés à être mélangés juste avant l’administration par injection. Dans ledit kit, l’au moins un agent de contraste est tel que défini ci-dessus dans la description. En particulier, l’au moins un agent de contraste est un agent de contraste pour l’imagerie par rayon X tel que défini ci-dessus dans la description. Dans ledit kit, la composition pharmaceutique comprend avantageusement les microsphères selon la présente invention en association avec un véhicule pharmaceutiquement acceptable pour une administration par injection. Ledit véhicule pharmaceutiquement acceptable peut être par exemple, mais sans s'y limiter, de l'eau pour injection, du sérum physiologique, de l'amidon, de l'hydrogel, de la polyvinylpyrrolidone, du polysaccharide, de l'ester d'acide hyaluronique et/ou du plasma. De préférence, Dans ledit kit, la composition pharmaceutique comprend avantageusement les microsphères selon la présente invention en association avec du sérum physiologique ou de l’eau pour injection. Dans ledit kit, la composition pharmaceutique est avantageusement conditionnée directement dans un moyen d’injection, notamment dans une seringue, adapté pour l’injection de microsphères d’embolisation par voie parentérale. Dans ledit kit, l’agent de contraste est avantageusement conditionné dans un flacon ou directement dans un moyen d’injection, notamment une seringue, en particulier adapté pour l’injection de microsphères d’embolisation par voie parentérale. Dans ledit kit, les proportions véhicule pharmaceutiquement acceptable / agent de contraste sont comprises entre 80/20 et 0/100, avantageusement comprises entre 70/30 et 40/60, de préférence 50/50. De manière avantageuse, lorsque les microsphères selon l’invention sont obtenues par polymérisation d’un mélange réactionnel comprenant 5 % à 10 %, préférentiellement de 5 % à 7 % de monomère halogéné tels que décrit dans la présente description, les proportions véhicule pharmaceutiquement acceptable / agent de contraste sont comprises entre 70/30 et 0/100, avantageusement comprises entre 60/40 et 20/80, de préférence 50/50. Selon un autre mode de réalisation de la présente invention, lorsque les microsphères selon l’invention sont obtenues par polymérisation d’un mélange réactionnel ne comprenant pas de monomère halogéné tels que décrit dans la présente description, les proportions véhicule pharmaceutiquement acceptable / agent de contraste sont comprises entre 80/20 et 0/100. Description des figures Figure 1 : Diamètre moyen des microsphères (MS) après stérilisation en fonction de la concentration en agent de transfert. Figure 2 : Pourcentage de microsphères sans défaut en fonction de la concentration en agent de transfert. Figure 3 : Exemple de microsphères : A : sans défaut avec 0% d’hexanethiol ; B : fracturée avec 0 % d’hexanethiol ; C : déformée avec 0 % d’hexanethiol ; D : sans défaut avec 6 % d’hexane thiol ; E : fracturée avec 6 % d’hexanethiol. Figure 4 : Extrait sec en fonction de la concentration en agent de transfert. Figure 5 : Taux de gonflement en fonction de la concentration en agent de transfert. Figure 6 : Module d’Young en fonction de la concentration en agent de transfert. Les exemples qui suivent visent à illustrer la présente invention. Dans la suite, le mot « microsphère », qu’il soit au singulier ou au pluriel, sera le plus souvent abrégé par « MS ». Exemples - Matériel et méthodes ● Matériel Le 2,2′-Azobis(2-méthylpropionitrile) (AIBN), le méthacrylate de poly(éthylène glycol) (Mn=300 g.mol-1) (PEG), le 1-hexanethiol (95 %), l‘acide méthacrylique (99 %), le poly(alcool vinylique) (Mn=30,000-70,000 g.mol-1) (PVA), l'acide thioglycolique (99 %), le 1-dodécanethiol (98%) ont été achetés chez Sigma-Aldrich. Le toluène et l'acétone ont été achetés chez VWR. Le NaCl a été acheté chez Merck. Le diméthacrylate de polyéthylène glycol (Mn=1000 g.mol- 1) (PEGDMA-1000) a été acheté chez Polysciences Inc. Les colorants violets et les monomères iodés ont été synthétisés au centre de R&D de Guerbet. Tous les matériaux ont été utilisés tels qu'ils ont été reçus sans aucune purification supplémentaire. ● Méthodes Morphologie Les propriétés morphologiques des MS obtenues ont été caractérisées par l'instrument Morphologi 4 (instrument Malvern, Royaume-Uni). L'instrument Morphologi 4 permet de produire des bases de données d'images de MS. Il est capable de représenter la distribution de la taille des MS mesurée.26 paramètres morphologiques différents ont pu être déterminés par l'instrument Morphologi 4. Le diamètre (µm) était le principal paramètre à étudier. Les MS ont été déposées sur un porte-échantillon de l'instrument Morphologie 4. 500 MS ont été imagées et conservées dans la base de données du logiciel pour une analyse plus poussée. Un mode opératoire normalisé (PON) a été utilisé dans le processus d'imagerie pour assurer l'uniformité des mesures. Après chaque mesure, les MS défectueuses ont été exclues du total des MS (500 MS). La méthode la plus fiable consistait à examiner visuellement chaque MS et à les supprimer ou les conserver dans les bases de données d'images en fonction de leur défaut et de leur intégrité. L'histogramme, la moyenne du diamètre et l'écart-type ont également été obtenus pour les MS intactes. Analyse des défauts : Il existe différentes classes de défauts des microsphères (MS), énumérés ici : - Classe 1 : MS sans défaut - Classe 2 : MS jumelles siamoises - Classe 3 : MS double cœur - Classe 4 : MS fracturée isolée - Classe 5 : Résidus ou résidus de MS fracturée - Classe 6 : Pile de MS après stérilisation - Classe 7 : Noyau MS sans USPIO - Classe 8 : MS très transparente (MS fantôme) - Classe 9 : Empilement de MS dans un fragment de polymère - Classe 10 : MS fissurée - Classe 11 : Objet de forme ovale contenant plusieurs petites MS - Classe 12 : MS déformée Dans l'étude sur les défauts à partir des 500 MS étudiées, les MS défectueuses ont été éliminées. Le pourcentage de MS sans défaut a été calculé en conséquence :
Figure imgf000040_0002
Extrait sec, taux de gonflement massique L’extrait sec est réalisé de la manière suivante : 1 ml de MS sédimentées est placé dans un flacon Eppendorf de 5 ml, congelé à -80°C et lyophilisé par un lyophilisateur (Heto PowerDry LL 1500, Thermo Scientific) pendant la nuit. La masse des MS après lyophilisation est ensuite mesurée. La mesure a été effectuée pour trois échantillons et la moyenne a été considérée comme la valeur finale de la masse sèche des MS. Taux de gonflement : La même préparation d'échantillon que celle décrite ci-dessus a été utilisée pour calculer le taux de gonflement massique des MS :
Figure imgf000040_0001
où (mw) est le poids en gramme de 1 mL de MS sédimentées et (md) est le poids en gramme de 1ml de microsphères sédimentées qui ont été lyophilisées. La mesure a été effectuée pour trois échantillons et la moyenne a été considérée comme la valeur finale du taux de gonflement massique. Rhéologie et compressibilité Les propriétés rhéologiques des MS ont été mesurées sur un rhéomètre HR2 Discovery (TA Instruments, USA). Le module d’Young est mesuré en utilisant un mode de compression uniaxiale. Une géométrie de type plan-plan avec des plaques de diamètre 50mm et un espacement initial de 1600 µm a été utilisée. La température des échantillons est maintenue à 25°C par effet Peltier. Avant la mesure, la force normale est mise à zéro par le logiciel. Un lit homogène d’une seule couche de microsphères est alors déposé sur la plaque. Une première mesure est réalisée afin de déterminer le point de contact avec les MS ainsi que le régime linéaire de déformation. Pour cela, l’écart entre les plaques est diminué de 1600 µm à 700 µm avec une vitesse de 16,7 µm/s (1 mm/min) et la force normale est mesurée. Le point de contact correspond à l’écart entre les plaques pour lequel une force normale commence à s’exercer. En continuant à réduire cet écart entre les plaques, la force normale suit un régime linéaire en fonction de la déformation appliquée, ceci jusqu’à un certain point. L’écart entre les plaques lors de cette divergence correspond à la sortie du régime linéaire. Une deuxième mesure est alors effectuée 3 fois de suite afin de mesurer la moyenne ainsi que l’erreur de mesure du module d’Young. Cette deuxième mesure consiste à placer la plaque supérieure directement au point de contact et à appliquer une déformation axiale jusqu’à la valeur maximale de sortie du régime linéaire. La force normale mesurée évolue alors linéairement en fonction de la déformation appliquée. La pente de cette courbe correspond au module d’Young. Autre méthode utilisée pour mesurer le module de Young (méthode n°2) Des essais de compression sont effectués sur des microsphères uniques grâce à une machine de compression (Synergie 800, MTS, France), à l’aide d’un piston de 15.3 mm de diamètre imprimé en 3D. La force exercée est mesurée par un capteur de force 2 N, qui fournit des mesures justes et répétables à partir de 1 mN. Le logiciel TestWorks4 est une interface permettant de diriger le piston et d’enregistrer les données mesurées par le capteur. L’utilisation d’une lampe (ampoule de 100 W) est nécessaire afin d’éclairer la cuve contenant la microsphère analysée, et de permettre à la caméra de voir avec netteté la microsphère et le piston. Le logiciel de traitement d’image, ImageJ, est utilisé afin de mesurer la taille exacte des microsphères en mesurant le nombre de pixels sur l’image. La vitesse du piston est fixée à 1 mm/min et l’essai démarre avec le piston positionné environ 100 µm au-dessus de la microsphère. A l’aide des données récoltées (mesures de force, du temps et du déplacement), le module de Young est calculé en utilisant le modèle de Hertz, applicable à la compression d’une sphère entre deux plans. Injection des MS Les MS ont été injectées via un microcathéter afin de tester leurs propriétés mécaniques pendant les injections. Une solution composée de 30 % en volume de produit de contraste Xenetix® 350mg d’iode / ml et de 70 % en volume de sérum physiologique a été préparée. 20 mL de cette solution ont été prélevés à l'aide d'une seringue de 20 mL, et en parallèle 2 mL de MS sédimentées ont été prélevés dans le flacon stérilisé tel que décrit ci-dessus au moyen d'une seringue de 3 mL. Les deux seringues (3mL et 20mL) sont reliées à un robinet trois voies. Les MS sont mises en suspension dans le mélange précité en effectuant environ 15 mouvements de va-et-vient entre les deux seringues. La seringue de 3ml est utilisée pour injecter la solution de MS en suspension dans un microcathéter de type Progreat® 2,8F (Terumo) ou GlideCath® 4F ou 5F (Terumo). Exemple 1 : Synthèse par polymérisation en suspension directe de microsphères (MS) selon l’invention (900-1200 µm) Une solution aqueuse d’alcool polyvinylique hydrolysé et de chlorure de sodium est versée dans un réacteur et chauffée à 50°C. La phase organique contenant le poly(éthylène glycol) méthyl éther méthacrylate (m-PEGMA) (monomère hydrophile), le poly(éthylène glycol) diméthacrylate (PEGDMA) (réticulant), le monomère colorant, l’acide méthacrylique (monomère ionisé ou ionisable), l’agent de transfert et l’AIBN (amorceur) dissous dans le toluène est ensuite introduite dans le réacteur. Une agitation est appliquée avec un agitateur de type hélice à la vitesse appropriée de manière à obtenir des gouttelettes de diamètre souhaité. La température est ensuite augmentée à 80°C et l’agitation est maintenue pendant 12 heures. Le mélange est ensuite filtré sur un tamis de 40 µm afin de recueillir les MS. Les MS retenues par ledit tamis sont ensuite lavées 3 fois à l’acétone puis 3 fois à l’eau. Ces MS lavées sont ensuite tamisées entre un tamis de 900 µm et un tamis de 710 µm. Les MS recueillies entre ces deux tamis sont ensuite stérilisées par autoclave à 121°C pendant 20 minutes ce qui va avoir pour effet de faire gonfler les MS et obtenir des MS de la taille voulue, c’est-à-dire ici 900 à 1200 µm. Les microsphères synthétisées selon la méthode décrite ci-dessus ont donc la composition suivante (Tableaux 1et 1bis):
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Tableau 1
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HT : 1-hexanethiol, TGA : acide thioglycolique, DODEC : 1-dodecanethiol, BTCM : bromotrichloromethane Tableau 1bis Exemple 2 : Taille des microsphères issues de l’exemple 1 Le diamètre moyen des microsphères est mesuré après stérilisation, pour chacun des lots 1 à 9 et L9 pour évaluer l’impact de la concentration de l’agent de transfert sur la taille des MS. Les MS ont été stérilisées selon la procédure décrite ci-dessus. Le diamètre moyen après stérilisation des MS calibrés (900-1200) pour chacun des lots est représenté sur la Figure 1. Le diamètre des MS après stérilisation augmente de 923 µm à 1259 µm à mesure que la concentration de HT augmente (lots 1, 2, 3, 4, 5, 6 et 7). Plus les microsphères contiennent d’agent de transfert, plus leur taille est importante. Exemple 3 : Pourcentage de microsphères non défectueuses issues de l’exemple 1 Le pourcentage de MS défectueuses a été calculé selon la méthode décrite ci-dessus sur un échantillon de MS de taille 900-1200 µm comprenant différentes concentrations d’HT en tant qu’agent de transfert ou des agents de transfert de nature différente (lots 1 à 9 et L9). Les résultats sont représentés sur la Figure 2. De 0 % à 1,5 % d'HT (lots 1 à 4), le pourcentage des MS sans défaut varie de 89 % à 91 %. A partir de 1,5 % d’agent de transfert, ce pourcentage augmente et atteint un maximum (plus de 95 %) à 3 % d’agent de transfert (lots 5 ; 8 ; 9 et L9). Selon la concentration en agent de transfert dans la microsphère, le type de défaut diffère. La figure 3 présente les deux exemples de défauts morphologiques les plus souvent observés. A une concentration de HT comprise entre 0 % et 1,5 % d'HT, les MS sont le plus souvent soit fissurées (B), soit déformées (C). A des concentrations de 6 % et plus de HT dans les MS, il y a de très nombreuses MS éclatées (voir figure 3). Exemple 4 : Extrait sec des microsphères issues de l’exemple 1 La figure 4 montre l’extrait sec des MS (mg/ml), calculée selon la méthode décrite ci-dessus, en fonction de la concentration ou de la nature de l’agent de transfert. L’extrait sec (mg) pour un volume de MS donné diminue linéairement lorsque la concentration de HT augmente (lots 1, 2, 3, 4, 5, 6 et 7). L’extrait sec des MS du lot L9 est d’environ 101 mg/mL. Sans agent de transfert, la masse sèche de 1mL de MS sédimentées est d’environ 159 mg. A 6 % de HT, cet extrait sec n’est plus que d’environ 52 mg. Exemple 5 : Taux de gonflement des microsphères issues de l’exemple 1 Le taux de gonflement des microsphères a été déterminé selon la méthode décrite ci-dessus sur les lots 1 à 9 et L9) afin d’évaluer l’influence de la concentration et de la nature de l’agent de transfert. Les résultats sont illustrés en figure 5. On observe que plus la concentration de HT est élevée, plus le taux de gonflement obtenu est élevé. Pour une concentration d'HT comprise entre 0 % et 6 %, le taux de gonflement massique passe de 7 à 26 g/g. Il est d’environ 8,88% pour les MS du lot L9. Les MS sans agent de transfert sont donc moins gonflées et ont une masse sèche très élevée. Ces données montrent que les différents agents de transfert testés permettent d’obtenir le taux de gonflement approprié. Exemple 6 : Rhéologie et compressibilité des microsphères issues de l’exemple 1 La compressibilité des microsphères peut être caractérisée en mesurant le module de Young selon la méthode décrite ci-dessus. Les modules de Young des lots 1 à 9 sont représentés sur la figure 6. Les résultats obtenus avec la méthode n°2 de mesure du module de Young a donné des résultats assez semblables. On observe que le module de Young diminue d’environ 13 kPa à environ 6 kPa au fur et à mesure que la concentration de HT passe de 0 % à 3 % puis atteint un plateau à environ 6 kPa pour les concentrations supérieures (4,5 % et 6 %). Les MS contenant entre 0 % et 0,5 % de HT (lots 1 à 4) sont plus solides et rigides et inadaptées pour l’injection. A partir de 1,5 % d’HT, les valeurs du module d’Young des MS passent en dessous de 10 kPa, qui est la limite visée par la présente invention, et sont donc plus molles et plus souples. A partir d’une concentration de 3 %, les MS deviennent plus molles et plus souples. A concentration égale d’agent de transfert, ici 3 %, toutes les MS ont la même valeur plateau d’environ 6 kPa. Lorsque la concentration en agent de transfert est comprise entre 1,5 % et moins de 6 %, la compressibilité des MS les rend adaptées à une injection par microcathéter. Exemple 7 : Injection des microsphères issues de l’exemple 1 dans un microcathéter Chacun des lots 1 à 9 et L9 de MS a été injecté dans des microcathéters 4Fr et 5Fr. Aucun blocage n’a été observé. Pour le lot 7 (6 % de HT), les MS n’ont pas toléré la préparation à l'injection, et se sont toutes brisées. Les propriétés mécaniques des MS obtenues avec 6 % d’agent de transfert ne sont donc pas compatibles pour une injection par microcathéter. Exemple 8 : Synthèse par polymérisation en suspension directe de microsphères destinées à être chargées selon l’invention (100-300 µm) Une solution aqueuse d’alcool polyvinylique hydrolysé et de chlorure de sodium est versée dans un réacteur et chauffée à 50°C. La phase organique contenant le poly(éthylène glycol) méthyl éther méthacrylate (m-PEGMA) (monomère hydrophile), le poly(éthylène glycol) diméthacrylate (PEGDMA) (le réticulant), l’acide méthacrylique (AM) (monomère ionisable), l’hexanethiol (HT) (agent de transfert), le colorant violet (1-(4-((2- méthacryloxyéthyl)oxy)phénylamino)-anthraquinone), la suspension de nanoparticules de fer et l’AIBN (amorceur) dissous dans le toluène est ensuite introduite dans le réacteur. Une agitation est appliquée avec un agitateur de type hélice à la vitesse appropriée de manière à obtenir des gouttelettes de diamètre souhaité. La température est ensuite augmentée à 80°C et l’agitation est maintenue pendant 8 heures. Le mélange est ensuite filtré et les microsphères sont lavées à l’acétone puis à l’eau avant d’être tamisées puis autoclavées. Le tableau 2 ci-dessous récapitule les paramètres principaux et la composition de la phase organique et de la phase aqueuse :
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Tableau 2 Exemple 8Bis : Synthèse par polymérisation en suspension directe de microsphères (MS) sans monomère ionisable selon l’invention (900-1200 μm) et évaluation de la capacité de chargement Synthèse des microsphères 900 – 1200 µm Une solution aqueuse d’alcool polyvinylique hydrolysé et de chlorure de sodium est versée dans un réacteur et chauffée à 50°C. La phase organique contenant le poly(éthylène glycol) méthyl éther méthacrylate (m-PEGMA) (monomère hydrophile), le poly(éthylène glycol) diméthacrylate (PEGDMA) (réticulant), le monomère colorant, l’hexanethiol (agent de transfert) et l’AIBN (amorceur) dissous dans le toluène est ensuite introduite dans le réacteur. Une agitation est appliquée avec un agitateur de type hélice à la vitesse appropriée de manière à obtenir des gouttelettes de diamètre souhaité. La température est ensuite augmentée à 80°C et l’agitation est maintenue pendant 12 heures. Le mélange est ensuite filtré sur un tamis de 40 μm afin de recueillir les microsphères. Les microsphères retenues par ledit tamis sont ensuite lavées 3 fois à l’acétone puis 3 fois à l’eau. Ces microsphères lavées sont ensuite tamisées entre un tamis de 900 μm et un tamis de 710 μm. Les microsphères recueillies entre ces deux tamis sont ensuite stérilisées par autoclave à 121°C pendant 20 minutes ce qui va avoir pour effet de faire gonfler les microsphères et obtenir des microsphères de la taille voulue, c’est-à-dire ici 900 à 1200 μm. Les microsphères synthétisées selon la méthode décrite ci-dessus ont donc la composition suivante : Le tableau 3 ci-dessous récapitule les paramètres principaux et la composition de la phase organique et de la phase aqueuse :
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Tableau 3 Caractérisations : L’extrait sec (poids sec) est réalisé de la manière suivante : 1 ml de MS sédimentées est placé dans un flacon Eppendorf de 5 ml, congelé à -80°C et lyophilisé par un lyophilisateur (Heto PowerDry® LL 1500, Thermo Scientific) pendant la nuit. La masse des microsphères après lyophilisation est ensuite mesurée. La mesure a été effectuée pour trois échantillons et la moyenne a été considérée comme la valeur finale de la masse sèche des MS. Le diamètre moyen est mesuré par analyse d’images de microscopie sur 2000 microsphères (Morphologi 4, Malvern). Le test d’injectabilité dans des microcathéters est réalisé avec 1 mL de sédiment de microsphères préalablement mis en suspension dans 10 mL de milieu de contraste iodé (70% de Optiray® 300, Guerbet, 30% de sérum physiologique). Une suspension homogène de microsphères dans une seringue de 3 mL est ensuite injectée dans le microcathéter. Les microcathéters, dont le fournisseur est la société Terumo, ont été choisis tel que leur diamètre interne soit juste légèrement supérieur au diamètre moyen des microsphères. La résistance ressentie pendant l’injection des microsphères dans le microcathéter est enregistrée (Tableau 3Bis). Un blocage au cours de l’injection signifierait un échec de l’injection. Après l’injection, les microsphères sont observées au microscope dans le but de vérifier si les microsphères retrouvent leur forme sphérique. Résultats des caractérisations :
Figure imgf000049_0001
Tableau 3bis Des microsphères 100-300 µm sont aussi synthétisées sans acide méthacrylique (même composition que les microsphères de l’Exemple 8 avec 0% d’acide méthacrylique (AM) et 94,96% de m-PEGMA) puis stérilisées par autoclavage. Leur capacité de chargement de la doxorubicine est évaluée et comparée à celle de microsphères telles que synthétisées selon l’Exemple 8. Chargement de doxorubicine : l’objectif de chargement est de 37,5 mg de doxorubicine par mL de microsphères. Pour cela, 3,8 mL de doxorubicine-HCl (Adriblastine®, Pfizer) en solution dans l’eau à 2,5 mg/mL sont ajoutés à 250 μL de sédiment humide de microsphères. Après mélange par inversion, la suspension est complétée à 6 mM de bicarbonate de sodium (Lavoisier). Le chargement est réalisé à température ambiante et sous agitation pendant une heure. La mesure de la quantité résiduelle de doxorubicine (absorbance à 490 nm) présente dans les surnageants sert à déterminer la quantité de médicament chargée sur les microsphères. Résultats (Tableau 4) :
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L’efficacité de chargement est calculée selon l’équation suivante :
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LC : Capacité de chargement
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LE : Efficacité de chargement MDrug initiale : Quantité de médicament solubilisée CDrug_sur : Concentration du médicament dans le surnageant après chargement Vsur : Volume du surnageant VMS : Volume de microsphères L’efficacité de chargement sans acide méthacrylique est de 82,6%, comparée à 99,6 % en présence de 30 % d’acide méthacrylique. La capacité des microsphères sans monomère ionisable à charger de la doxorubicine s’explique par l’établissement de liaisons hydrophobes ou de van der Waals. En présence de monomère ionisable, outre ces liaisons, la doxorubicine se charge par liaisons électrostatiques. Les cinétiques et les capacités de chargement en sont améliorées. Exemple 9 : Synthèse par polymérisation en suspension directe de polymères contenant 5% de MAOETIB selon l’invention sous forme de microsphères de taille 700-900 µm Une solution aqueuse d’alcool polyvinylique hydrolysé et de chlorure de sodium est versée dans un réacteur et chauffée à 50°C. La phase organique contenant le poly(éthylène glycol) méthyl éther méthacrylate (m-PEGMA) (monomère hydrophile), le poly(éthylène glycol) diméthacrylate (PEGDMA) (réticulant), l’acide méthacrylique (MA) (monomère ionisable), le MAOETIB (monomère halogéné), l’hexanethiol (l’agent de transfert), le colorant violet (1-(4-((2-méthacryloxyéthyl)oxy)phénylamino)-anthraquinone) et l’AIBN (amorceur) dissous dans le toluène est ensuite introduite dans le réacteur. Une agitation est appliquée avec un agitateur de type hélice à la vitesse appropriée de manière à obtenir des gouttelettes de diamètre souhaité. La température est ensuite augmentée à 80°C et l’agitation est maintenue pendant 12 heures. Le mélange est ensuite filtré et les microsphères sont lavées à l’acétone puis à l’eau avant d’être tamisées puis autoclavées. Le tableau 5 ci-dessous récapitule les paramètres principaux et la composition de la phase organique.
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Tableau 5. Exemple 10 : Mise en suspension dans un mélange 50/50 d’agent de contraste et de sérum physiologique des microsphères de l’exemple 9 et comparaison avec des microsphères équivalentes sans MAOETIB 2 mL de sédiment de billes sont ajoutés dans un mélange de 10 mL 50/50 sérum physiologique/ agent de contraste (5 mL d’Optiray® 300 mgI/mL et 5 mL de sérum physiologique). Le mélange est passé 5 fois dans un robinet trois voies en utilisant des seringues de 20 mL. La seringue contenant le mélange est ensuite posée verticalement et on observe la déstabilisation du mélange ; les microsphères remontent alors à la surface. Le temps correspondant à une interface de déstabilisation arrivant à mi-hauteur de la seringue est mesuré. Pour les particules de taille 700-900 µm ne contenant pas de MAOETIB, ce temps est de 20 secondes alors qu’il est de 120 secondes pour les particules contenant 5% de MAOETIB. Ce temps de déstabilisation passe même à 220 secondes si 7% de MAOETIB est ajouté. La présence de MAOETIB permet de stabiliser la suspension. Exemple 11 : Synthèse par polymérisation en suspension directe de polymères de différentes natures sous forme de microsphères de taille 700-900 µm Synthèse Une solution aqueuse d’alcool polyvinylique hydrolysé et de chlorure de sodium est versée dans un réacteur et chauffée à 50°C. La phase organique contenant le monomère hydrophile, le réticulant, le monomère colorant, l’agent de transfert, le monomère halogéné si applicable, le monomère ionisable si applicable et l’AIBN (amorceur) dissous dans le toluène est ensuite introduite dans le réacteur. Une agitation est appliquée avec un agitateur de type hélice à la vitesse appropriée de manière à obtenir des gouttelettes de diamètre souhaité. La température est ensuite augmentée à 80°C et l’agitation est maintenue pendant 12 heures. Le mélange est ensuite filtré sur un tamis de 40 μm afin de recueillir les microsphères. Les microsphères retenues par ledit tamis sont ensuite lavées 3 fois à l’acétone puis 3 fois à l’eau. Ces microsphères lavées sont ensuite tamisées entre un tamis de 900 μm et un tamis de 710 μm. Les microsphères recueillies entre ces deux tamis sont ensuite stérilisées par autoclave à 121°C pendant 20 minutes ce qui va avoir pour effet de faire gonfler les microsphères et obtenir des microsphères de la taille voulue, c’est-à- dire ici 700 à 900 μm. Le tableau 6 ci-dessous récapitule les paramètres principaux et la composition de la phase organique.
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Tableau 6 Caractérisation et Résultats : La caractérisation est effectuée de la même manière que dans l’exemple 8bis et les résultats sont regroupés dans le tableau 7.
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Tableau 7. Exemple 12 : Synthèse par polymérisation en suspension directe de polymères contenant différentes quantités de MAOETIB selon l’invention sous forme de microsphères de taille 100-300 μm Synthèse : Une solution aqueuse d’alcool polyvinylique hydrolysé et de chlorure de sodium est versée dans un réacteur et chauffée à 50°C. La phase organique contenant le poly(éthylène glycol) méthyl éther méthacrylate (m-PEGMA) (monomère hydrophile), le poly(éthylène glycol) diméthacrylate (PEGDMA) (réticulant), l’acide méthacrylique (MA) (monomère ionisable), le MAOETIB (monomère halogéné), l’hexanethiol (l’agent de transfert), le colorant violet (1-(4-((2-méthacryloxyéthyl)oxy)phénylamino)-anthraquinone) et l’AIBN (amorceur) dissous dans le toluène est ensuite introduite dans le réacteur. Une agitation est appliquée avec un agitateur de type hélice à la vitesse appropriée de manière à obtenir des gouttelettes de diamètre souhaité. La température est ensuite augmentée à 80°C et l’agitation est maintenue pendant 12 heures. Le mélange est ensuite filtré et les microsphères sont lavées à l’acétone puis à l’eau avant d’être tamisées puis autoclavées. Le tableau 8 ci-dessous récapitule les paramètres principaux et la composition de la phase organique.
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Tableau 8. Exemple 13 : Mise en suspension dans un mélange 50/50 d’agent de contraste et de sérum physiologique des microsphères de l’exemple 12 avec différents taux de MAOETIB 2 mL de sédiment de billes sont ajoutés dans un mélange de 10 mL 50/50 sérum physiologique/ agent de contraste (5 mL de Xenetix® 350 mgI/mL et 5 mL de sérum physiologique). Le mélange est passé 5 fois dans un robinet trois voies en utilisant des seringues de 20 mL. La seringue contenant le mélange est ensuite posée verticalement et on observe la déstabilisation du mélange, soit par crémage soit par sédimentation selon la concentration en MAOETIB. Le temps correspondant à une interface de déstabilisation arrivant à mi-hauteur de la seringue est mesuré. Les résultats sont regroupés dans le tableau 9.
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Tableau 9. L’ajout du MAOETIB en faible quantité permet de ralentir le crémage en rapprochant la densité des microsphères à celle du milieu de suspension. Toutefois, au-delà d’une certaine concentration, la densité des microsphères devient trop élevée et celles-ci sédimentent rapidement.

Claims

REVENDICATIONS 1. Microsphères d’embolisation non biodégradables comprenant une matrice réticulée, ladite matrice étant à base d’au moins : a) 20 % à 95 % de monomère hydrophile choisi parmi la N-vinylpyrrolidone, et un monomère de formule (I) suivante : (CH2=CR1)-CO-D (I) dans laquelle : ● D représente O-Z ou NH-Z, Z représentant (C1-C6)alkyle, -(CR2R3)m-CH3, -(CH2-CH2-O)m- H, -(CH2-CH2-O)m-CH3, -C(R4OH)m ou -(CH2)m-NR5R6 avec m représentant un nombre entier de 1 à 30 ; ● R1, R2, R3, R4, R5 et R6 représentent indépendamment les uns des autres H ou un (C1- C6)alkyle ; b) 1 % à 15 % d’un monomère réticulant hydrophile non biodégradable linéaire ou ramifié de formule (IIa) ou (IIb) suivantes : (CH2=(CR7))CO-NH-A-HN-OC(CR8=CH2) (IIa), (CH2=(CR7))CO-O-A-O-OC(CR8=CH2) (IIb), dans lesquelles R7 et R8 représentent indépendamment l’un de l’autre H ou un (C1-C6)alkyle ; et A représente, seul ou avec au moins un des atomes auquel il est lié, un (C1-C6)alkylène, un polyéthylène glycol (PEG), un polysiloxane, un poly(diméthylsiloxane) (PDMS), un poly- glycérolique ester (PGE) ou un bisphénol A ; et c) 1,5 % à moins de 6 % d’agent de transfert choisi parmi les halogénures d’alkyle et les thiols cycloaliphatiques ou aliphatiques ayant notamment de 2 à 24 atomes de carbone, et ayant éventuellement un autre groupe fonctionnel choisi parmi les groupes amino, hydroxy et carboxy, les pourcentages des monomères a) et b) étant cités en mole par rapport au nombre de moles total de monomères et les pourcentages du composé c) étant cités en mole par rapport au nombre de moles du monomère hydrophile a).
2. Microsphères d’embolisation non biodégradables selon la revendication 1, dans lesquelles ladite matrice réticulée est à base de 1,5 % à 4,5 %, de préférence 1,5 % à 3%, de manière plus préférée 3 % d’agent de transfert, en mole par rapport au nombre de moles du monomère hydrophile a).
3. Microsphères d’embolisation non biodégradables selon l’une quelconque des revendications précédentes, dans lesquelles le monomère hydrophile a) est choisi dans le groupe constitué de N-vinylpyrrolidone, alcool vinylique, 2-hydroxyéthylméthacrylate, acrylate de sec-butyle, acrylate de n-butyle, acrylate de t-butyle, méthacrylate de t-butyle, méthylméthacrylate, N-diméthylaminoéthyl(méthyl)acrylate, N,N-diméthylaminopropyl- (méth)acrylate, t-butylaminoéthyl(méthyl)acrylate, Ν,Ν-diéthylaminoacrylate, (méth)acrylate de poly(éthylène oxyde), (méth)acrylate de méthoxy poly(éthylène oxyde), (méth)acrylate de butoxy poly(éthylène oxyde), (méth)acrylate de poly(éthylène glycol), (méth)acrylate de méthoxy poly(éthylène glycol), (méth)acrylate de butoxy poly(éthylène glycol) et leurs mélanges, avantageusement le monomère a) est du méthyl éther méthacrylate de poly(éthylène glycol).
4. Microsphères d’embolisation non biodégradables selon l’une quelconque des revendications précédentes dans lesquelles l’agent de transfert est choisi parmi l’acide thioglycolique, le 2-mercaptoéthanol, le dodécanethiol, l’hexanethiol et leurs mélanges.
5. Microsphères d’embolisation non biodégradables selon l’une quelconque des revendications précédentes, dans lesquelles la matrice est en outre à base d’au moins un monomère ionisé ou ionisable de la formule (II) suivante : (CH2=CR9)-M-E (III) dans laquelle : ● R9 représente H ou un (C1-C6) alkyle ; ● M représente une liaison simple ou un radical divalent ayant de 1 à 20 atomes de carbone, de préférence une liaison simple ; ● E représente un groupe ionisé ou ionisable, E étant avantageusement choisi dans le groupe constitué de COOH, COO-, SO3H, SO3-, PO4H2, PO4H-, PO4 2-, NR10R11, NR12R13R14 +, ● R10, R11, R12, R13 et R14 représentent indépendamment les uns des autres H ou un (C1- C6)alkyle.
6. Microsphères d’embolisation non biodégradables selon la revendication 5, chargées d’un médicament, d’une substance active, d’un agent de diagnostic ou de macromolécules, le médicament, la substance active et l’agent de diagnostic ayant avantageusement une masse molaire inférieure à 5000 Da, de préférence inférieure à 1000 Da.
7. Microsphères d’embolisation non biodégradables comprenant une matrice réticulée selon la revendication 6, dans lesquelles le médicament ou la substance active est choisi dans le groupe constitué d’agents anti-inflammatoires, anesthésiques locaux, analgésiques, antibiotiques, agents anticancéreux, stéroïdes, antiseptiques et un mélange de ceux-ci.
8. Microsphères d’embolisation non biodégradables selon la revendication 6, dans lesquelles les macromolécules sont choisies dans le groupe constitué d’enzymes, d’anticorps par exemple des anti-PD-1 tels que nivolumab ou pembrolizumab, des anti-PD- L1 tels que avelumab, durvalumab, ou atezolizumab, des anti-CTLA-4 tels que ipilimumab ou tremelimumab, de cytokines, de facteurs de croissance, de facteurs de coagulation, d’hormones, de plasmides, d’oligonucléotides antisens, de siARN, de ribozymes, de DNA enzyme, d’aptamères, de protéines anti-inflammatoires telles que infliximab et rilonacept, des protéines morphogènes osseuses (BMP), des facteurs pro-angiogéniques tels que des facteurs de croissance des fibroblastes (FGF), des facteurs de croissance endothéliale vasculaire (VEGF), des TGF-bêta, et des inhibiteurs de l'angiogenèse tels que le bevacizumab, le ramucirumab, le nesvacumab, l’olaratumab, le vanucizumab, le rilotumumab, l’emibetuzumab, l’aflibercept, le ficlatuzumab, le pegaptanib, ou des anti- tyrosine kinases tels que le lenvatinib, le sorafenib, le sunitinib, le pazopanib, le vandetanib, l’axitinib, le regorafenib, le cabozantinib, le fruquintinib, le nintedanib, l’anlotinib, le motesanib, le cediranib, le sulfatinib, le dovetinib, le linifanib et leurs mélanges.
9. Microsphères d’embolisation non biodégradables selon l’une quelconque des revendications précédentes, ladite matrice étant en outre à base d’au moins un monomère coloré de formule générale (V) suivante : (V), dans laquelle, ● Z1 et Z2 représentent, indépendamment l’un de l’autre, H ou OR26, R26 représentant H ou un (C1-C6)alkyle, avantageusement Z1 et Z2 représentent H ; ● X représente H ou un halogène tel que Cl, avantageusement H ; ● R24 représente un groupe choisi parmi (C1-C6)alkylène linéaire ou ramifié, (C5- C36)arylène, (C5-C18)arylène-O-R27, (C5-C18)hétéroarylène et (C5-C18)hétéroarylène-O-R28, R27 et R28 représentant un (C1-C6)alkyle ou un (C1-C6)alkylène, avantageusement R24 représente un groupe -C6H4-O-(CH2)2- ou -C(CH3)2-CH2-. ● R25 représente H ou un (C1-C6)alkyle, avantageusement un (C1-C6)alkyle, en particulier un méthyle, avantageusement le monomère coloré correspond à la formule (Vb) :
Figure imgf000061_0001
10. Microsphères d’embolisation non biodégradables selon l’une quelconque des revendications précédentes, ladite matrice étant en outre à base de 5 % à 15%, de préférence 5 % à 7% d’un monomère halogéné, de préférence iodé, en particulier d’un monomère de formule (IV) : (CH2=CR15)-CO-Y (IV) dans laquelle ● Y représente O-W, (O-R16)p-W, (NH-R16)p-W ou NH-W, W représentant Ar, L-Ar, et p étant un nombre entier compris entre 1 et 10, de préférence entre 1 et 4 dans laquelle : ● Ar représente un groupement (C5-C36)aryle ou (C5-C36)hétéroaryle, ledit groupement étant substitué par un, deux ou trois atome(s) d’iode et/ou de brome, et éventuellement substitué par un à quatre, de préférence deux ou trois, groupements choisis parmi (C1- C10)alkyle, -NRaRb, -NRcCORd, -COORe, -ORf, -OCORg, -CONRhRi, -OCONRjRk, -NRlCOORo, - NRrCONRsRt, -OCOORu, et -CORv ; ● L représente –(CH2)n-, –(HCCH)n-, –O-, –S-, –SO-, -SO2-, -OSO2-, -NR17-, -CO-, -COO-, - OCO-, -OCOO-, -CONR18-, -NR19CO-, -OCONR20-, -NR21COO- ou -NR22CONR23-, n étant un nombre entier de 1 à 10 ; ● R17 à R23 et Ra à Rv représentent indépendamment les uns des autres un atome d’hydrogène, un (C1-C10)alkyle, ledit (C1-C10)alkyle étant éventuellement substitué par 1 à 10 groupement(s) OR’, ou un groupement –(CH2-CH2-O)q-R’, R’ étant un atome d’hydrogène ou un –(C1-C6)alkyle, q étant un nombre entier compris entre 1 et 10, de préférence entre 1 et 5; ● R15 représente H ou un (C1-C6)alkyle ; ^ R16 représente un groupement choisi parmi (C1-C36)alkylène, (C3-C36)cycloalkylène, (C2- C36)alcénylène, (C3-C36)cycloalcénylène, (C2-C36)alcynylène, (C3-C36)cycloalcynylène, (C5- C36)arylène et (C5-C36)hétéroarylène, le pourcentage dudit monomère halogéné étant cité en mole par rapport au nombre de moles total de monomères.
11. Microsphères d’embolisation non biodégradables comprenant une matrice réticulée comprenant au moins un monomère halogéné selon la revendication 10, dans laquelle le monomère halogéné correspond au (tri-iodobenzoyl)oxo éthyl méthacrylate (MAOETIB) de formule suivante :
Figure imgf000062_0001
.
12. Microsphères d’embolisation non biodégradables comprenant une matrice réticulée selon l’une quelconque des revendications précédentes, ladite matrice étant en outre à base de particules visibles en imagerie par résonance magnétique (IRM) telles que des nanoparticules d’oxyde de fer, des chélates de gadolinium ou des chélates de magnésium, avantageusement des nanoparticules d’oxyde de fer.
13. Composition pharmaceutique comprenant des microsphères d’embolisation non biodégradables selon l’une quelconque des revendications précédentes, en association avec un véhicule pharmaceutiquement acceptable, avantageusement pour une administration par voie parentérale.
14. Kit comprenant une composition pharmaceutique telle que définie dans la revendication 13, en association avec un véhicule pharmaceutiquement acceptable pour une administration par voie parentérale, et au moins un moyen d’injection.
15. Kit comprenant d’une part une composition pharmaceutique telle que définie dans la revendication 13 et d’autre part au moins un agent de contraste pour l'imagerie par rayon X, par résonance magnétique ou par échographie, et éventuellement au moins un moyen d’injection pour une administration par voie parentérale, la composition pharmaceutique et l’au moins un agent de contraste étant conditionnés séparément.
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