WO2022045091A1 - ケンペロールアグリコン含有抽出物 - Google Patents

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泰隆 池田
翼 溝上
領 芹沢
康弘 阿比留
尚人 野呂
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Otsuka Pharmaceutical Co Ltd
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    • C12Y302/01008—Endo-1,4-beta-xylanase (3.2.1.8)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
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    • C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
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    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D311/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only hetero atom, condensed with other rings
    • C07D311/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only hetero atom, condensed with other rings ortho- or peri-condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D311/04—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring
    • C07D311/22—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring with oxygen or sulfur atoms directly attached in position 4
    • C07D311/26—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring with oxygen or sulfur atoms directly attached in position 4 with aromatic rings attached in position 2 or 3
    • C07D311/28—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring with oxygen or sulfur atoms directly attached in position 4 with aromatic rings attached in position 2 or 3 with aromatic rings attached in position 2 only
    • C07D311/30—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring with oxygen or sulfur atoms directly attached in position 4 with aromatic rings attached in position 2 or 3 with aromatic rings attached in position 2 only not hydrogenated in the hetero ring, e.g. flavones

Definitions

  • Kaempferol is a substance represented by the following structural formula, such as tea, broccoli, grapefruit, cabbage, kale, beans, kikujisha, cabbage, tomato, strawberry, bidou, Brussels sprouts, apple, kinua, western wasabi, etc. It is a kind of natural flavonoid contained in edible plants.
  • Patent Document 2 As a method for increasing polyphenols contained in plants, a cultivation method of irradiating buds of monocotyledonous plants with UV-B (Patent Document 2), a method of cultivating plants with warm water (Patent Document 3), molecular genetics. A method of reducing the activity of flavanone 3-hydroxylase using the above method (Patent Document 4) has been reported.
  • Item A1 A plant extract containing 1 mg / g or more of kenperol aglycone in terms of dry weight.
  • Item A2 Item 2.
  • Item A3 Item 2.
  • Item A4 The plant extract according to any one of Items A1 to A3, which further contains 0.1 mg / g or more of quercetin in terms of dry weight.
  • Item A5 Item 6.
  • Item A6 Item 2. The plant extract according to Item A5, wherein the cruciferous plant is western wasabi, kale, arugula, takana, mizuna, turnip, radish, broccoli, cabbage, radish sprouts, or bok choy.
  • Item A7 Item 6. The plant extract according to any one of Items A1 to A4, which is an extract of Theaceae plants.
  • Item A8 Item 2. The extract according to Item A7, wherein the Theaceae plant is black tea, oolong tea, jasmine tea, green tea, roasted tea, or sencha.
  • Item A9 Item 6. The plant extract according to any one of Items A1 to A6, which is an extract of horseradish leaves.
  • Item A10 A food, pharmaceutical, or cosmetic containing the plant extract according to any one of Items A1 to A9.
  • Item A11 (1) Extracting a plant raw material containing a kaempferol glycoside with a solvent, and (2) Hydrolyzing the extract obtained in (1) above.
  • Item A12 Item 9. The method according to Item 9, wherein the hydrolysis treatment comprises causing an enzyme or a microorganism to act on the extract.
  • Item A13 Item 2.
  • the method according to Item A11 or A12, wherein the hydrolysis treatment comprises causing an enzyme to act on the extract, wherein the enzyme comprises xylanase.
  • Item A14 Item 6.
  • the method according to Item A13, wherein the enzyme further comprises ⁇ -glucosidase.
  • Item A15 Item 6.
  • Item B1 Plants with increased content of keperol and / or kaempferol glycosides per unit weight (dry weight equivalent), including growing plants under conditions of oxygen concentration of 19% by volume or less or oxygen partial pressure of 193 hPa or less. How to make.
  • Item B2 A method for improving the ability of a plant to produce kaempferol and / or kaempferol glycosides, which comprises cultivating a plant under conditions of an oxygen concentration of 19% by volume or less or an oxygen partial pressure of 193 hPa or less.
  • Item B3 A method for producing a plant having an improved ability to produce kaempferol and / or kaempferol glycoside, which comprises cultivating a plant under the conditions of an oxygen concentration of 19% by volume or less or an oxygen partial pressure of 193 hPa or less.
  • Item B4 Item 6. The method according to any one of Items B1 to B3, wherein the condition is an oxygen concentration of 19% by volume or less.
  • Item B5 Item 6. The method according to any one of Items B1 to B3, wherein the condition is an oxygen partial pressure of 50 hPa or more and 193 hPa or less.
  • Item B6 Item 6. The method according to any one of Items B1 to B5, wherein the plant is a Brassicaceae plant.
  • Item B7 Item 6.
  • Item B8 Item 6.
  • Item B9 The plant obtained by the method according to any one of Items B1 to B8.
  • Item B10 Item 9.
  • a method for producing an extract containing kaempferol and kaempferol glycoside which comprises extracting kaempferol and kaempferol glycoside from the plant according to Item 9.
  • Item B11 (A) Extracting kaempferol and kaempferol glycosides from the plant according to item B9, and (b) hydrolyzing the extract obtained in (a) above.
  • Item C1 A method for increasing the efficiency of plant keperol production, which comprises giving L-tyrosine and / or L-phenylalanine to a plant capable of producing keperol.
  • Item C2 A method for increasing the kaempferol content of a plant, which comprises giving L-tyrosine and / or L-phenylalanine to a plant capable of producing kaempferol.
  • Item C3 A method for producing a plant having an increased efficiency of kaempferol production, which comprises giving L-tyrosine and / or L-phenylalanine to a plant capable of producing kaempferol.
  • Item C4 Item 6.
  • plant-derived kaempferol glycosides can be efficiently converted to aglycones.
  • kaempferol and kaempferol glycosides may be collectively referred to as kaempferol.
  • the white bar graph is for cultivation at an oxygen concentration of 21 vol%, and the black bar graph is for cultivation at an oxygen concentration of 17.5 vol%.
  • the amount of kaempferol measured for horseradish cultivated under various oxygen concentration conditions is shown.
  • the horizontal axis is the oxygen concentration (% by volume), and the vertical axis is the amount of kaempferol (mg / g).
  • the leaf length measured for horseradish cultivated under various oxygen concentration conditions is shown.
  • the horizontal axis is the oxygen concentration (% by volume), and the vertical axis is the leaf length (cm).
  • the stem length measured for horseradish cultivated under various oxygen concentration conditions is shown.
  • the horizontal axis is the oxygen concentration (% by volume), and the vertical axis is the length of the stem (cm).
  • TAL Tyrosine ammonia lyase
  • PAL Phenylalanine ammonia lyase
  • C4H Cinnamic acid 4-hydroxylase
  • 4CL 4-Coumaric acid CoA ligase
  • CHS Chalcone synthase
  • CHI Chalcone isomerase.
  • F3H Flavanone 3-hydroxylase
  • FLS Flavonol synthase
  • F3'H Flavonoid 3'-hydroxylase.
  • the white outline is the case where the L-phenylalanine aqueous solution is given
  • the diagonal line is the case where the L-tyrosine-containing aqueous solution is given
  • the black line is the case where the aqueous solution containing both L-phenylalanine and L-tyrosine is given.
  • KMP kaempferol
  • Qur quercetin
  • the vertical axis shows the kaempferol or quercetin content
  • the horizontal axis shows the concentration of L-tyrosine and / or L-phenylalanine in the aqueous solution.
  • the white outline is the case where the L-phenylalanine aqueous solution is given
  • the diagonal line is the case where the L-tyrosine-containing aqueous solution is given
  • the black line is the case where the aqueous solution containing both L-phenylalanine and L-tyrosine is given.
  • the kaempferol (KMP) content (upper) and quercetin (Qur) content measured for radish sprouts cultivated by giving an aqueous solution containing L-tyrosine or L-phenylalanine are shown.
  • the vertical axis shows the kaempferol or quercetin content, and the horizontal axis shows the concentration of L-tyrosine and / or L-phenylalanine in the aqueous solution.
  • the white bar graph is for cultivation under the condition of oxygen concentration of 21 vol%, and the black bar graph is for the case of cultivation under the condition of oxygen concentration of 17.5 vol%.
  • the plant extract preferably contains quercetin (aglycone type) in addition to chemperol aglycone.
  • the content of quercetin in the plant extract is, for example, 0.1 mg / g to 100 mg / g, preferably 1 mg / g to 30 mg / g, and more preferably 5 mg to 10 mg in terms of dry weight.
  • the lower limit and the upper limit are not particularly limited, but examples of the lower limit value are 0.1 mg / g, 0.5 mg / g, 1 mg / g, 2.5 mg / g, and 5 mg / g, and examples of the upper limit value are 100 mg / g.
  • the plant extract By containing quercetin, the plant extract has physiological effects such as antioxidant effect, anti-inflammatory effect, anti-arteriosclerosis effect, prevention of cerebrovascular disease, antitumor effect, hypotensive effect, and / or vascular relaxing effect. Can be provided effectively.
  • the plant extract preferably contains ferulic acid in addition to kenperol aglycone.
  • the content of ferulic acid in the plant extract is, for example, 0.1 mg / g or more, 0.2 mg / g or more, 0.3 mg / g or more, 0.4 mg / g or more, 0.5 mg in terms of dry weight.
  • the ferulic acid content there is no particular upper limit to the ferulic acid content, but for example, it may be 10 mg / g, 9 mg / g, 8 mg / g, 7 mg / g, 6 mg / g, 5 mg / g, 4 mg / g, 3 mg / g, or 2 mg / g.
  • the method for quantifying ferulic acid in the plant extract is not particularly limited, and the ferulic acid can be measured by a conventional method.
  • the plant extract By containing ferulic acid, the plant extract can effectively provide physiological effects such as antioxidant activity and / or antitumor activity.
  • the plant extract is preferably an extract of Brassicaceae or Theaceae.
  • cruciferous plants include western wasabi, kale, arugula, takana, mizuna, turnip, radish, broccoli, cabbage, radish sprouts, and bok choy.
  • theaceae plants include black tea, oolong tea, jasmine tea, green tea, roasted tea, and sencha.
  • the plant extract is preferably the extract of the plant described in "B. Method for improving kaempferol-producing ability and plant with improved kaempferol-producing ability" below.
  • the plant extract may be a plant other than Brassicaceae and Theaceae.
  • plants include saffron, gymnema, onion hulls, garlic, parsley, and millets such as quinoa, canario beans, and lentils.
  • the plant extract can be an extract of any part of the plant.
  • it can be an extract of any of the whole plant, leaves, stems, roots, and flowers, or any combination thereof.
  • a Brassicaceae plant or a Theaceae plant is used as a raw material, it is preferable to use those leaves.
  • leaves other than onions For plants exemplified as plants other than Brassicaceae and Theaceae, it is preferable to use leaves other than onions.
  • the plant extract is preferably a horseradish extract, preferably a horseradish leaf extract. This is because the leaves of horseradish contain a large amount of kaempferol glycosides.
  • the plant extract is obtained not only by subjecting the plant raw material to extraction, but also by subjecting it to a treatment of converting glycosides into aglycones.
  • the above-mentioned plant extract can be obtained by any method, but it is preferably obtained by the method for producing a plant extract described later.
  • the above-mentioned plant extract can be processed into any product, and for example, foods, pharmaceuticals, or cosmetics containing the plant extract are provided.
  • the plant extract When used for such a purpose, the plant extract may be used as it is after being treated with an enzyme, or may be purified and used. If necessary, it can be used as a dry solid by being subjected to a drying treatment. In order to improve the storage stability of the plant extract, it is desirable to make it solid by drying treatment (including freeze-drying). Further, the dried plant extract may be powdered by subjecting it to a powdering treatment, if necessary.
  • the daily intake of foods containing plant extracts varies depending on the age and weight of the ingestor, the purpose of ingestion, and the like.
  • the daily intake of the plant extract can be adjusted to be 2 mg or more, 10 mg or more, or 50 mg or more, and 200 mg or less, 150 mg or less, or 100 mg or less in terms of dry weight.
  • the intake of kenperol aglycone is preferably 0.1 mg or more, 1 mg or more, 2 mg or more, 3 mg or more, or 5 mg or more, and 100 mg or less, 50 mg or less, 40 mg or less, 20 mg or less, 12 mg or less. preferable. These lower and upper limit values can be combined arbitrarily.
  • the daily intake of kenperol aglycone can be adjusted to 0.1 mg or more and 100 mg or less, 1 mg or more and 50 mg or less, or 2 mg or more and 40 mg or less.
  • the plant extract When the plant extract is used as a pharmaceutical material, the plant extract may be, for example, a tablet, a pill, a powder, a liquid, a suspension, an emulsion, a granule, a capsule, an aerosol, a patch, an injection or a suppository. It can be prepared as a pharmaceutical preparation in the form of the above.
  • the dose of the drug varies depending on the age and body weight of the recipient, symptoms, frequency of administration, purpose of administration, etc. and cannot be uniformly specified.
  • the daily dose for an adult is a plant extract in terms of dry weight. It can be 0.1 mg / kg to 10 g / kg (body weight), preferably 1 mg to 5 g / kg (body weight).
  • the plant extract When the plant extract is used as a cosmetic material, the plant extract may be in various desired forms such as paste-like, mousse-like, gel-like, liquid, milky liquid, suspension-like, cream-like, ointment-like, and sheet-like. Prepared in morphology.
  • Such cosmetics can be used as basic cosmetics such as milky lotions, creams, lotions, oils and facial masks; cleaning agents such as washing pigments, cleansing and body cleaning; cleaning agents; and various cosmetics such as cleaning agents.
  • the mixing ratio of the plant extract in the cosmetics can be appropriately set according to the type of cosmetics, the content of kaempferol, the purpose of use, and the like. For example, 0.01 g to 95 g, preferably 0.1 g to 50 g, and more preferably 1 g to 5 g of the plant extract can be mentioned with respect to 100 g of the cosmetic.
  • Method for producing food extract is not particularly limited, but the plant raw material containing kaempferol glycoside is extracted with a solvent, and the obtained extract is hydrolyzed (aglycone-ized treatment). It is preferable to include offering to.
  • the plant raw material may be in a raw state, or may be a dried product or a crudely dried product. However, from the viewpoint of efficiently extracting kaempferol or its glycoside, the raw material is crushed by a conventional method. It is preferable to use it after. In one embodiment, it is preferable to use the plant described in the following "B. Method for improving kaempferol-producing ability and plant with improved kaempferol-producing ability" as a plant raw material.
  • the plant extract extracted using water or an organic solvent may be subjected to purification treatment such as column purification or solid-liquid separation before being subjected to hydrolysis treatment.
  • the means of hydrolysis treatment is not particularly limited, but can be carried out using enzymes, microorganisms, acids, and / or bases.
  • aglycone When aglycone is formed using an enzyme, it is preferable to select the enzyme to be used according to the type of sugar constituting the kaempferol glycoside and the structure of the glycoside.
  • Glucose, galactose, rhamnose, xylose, and combinations thereof for example, sophorose (glucose + glucose), rutinose (rhamnose + glucose), neoheseridos) may be contained in the plant extract as saccharides constituting the kenperol glycoside. (Rhamnose + glucose)).
  • These sugars form glycosides by O-glycosidic bonds at the 3-position, 5-position, and / or 7-position of kaempferol.
  • Suitable enzymes for aglyconizing such chemperol glycosides include, for example, xylanase, lactase, glucosidase, arabinosidase, rhamnosidase, xylosidase ( Examples include xylosidase, cellulase, hesperidinase, naringinase, glucuronidase, pectinase, galactosidase, amyloglucosidase, or amylase. One or more of these can be used in combination as appropriate.
  • the kaempferol glycoside contained in the horseradish leaf extract is aglycone-ized, it is preferable to use xylanase, a combination of xylanase and ⁇ -glucosidase is more preferable, and a combination of xylanase and lactase is further preferable. ..
  • xylanase a combination of xylanase and ⁇ -glucosidase is more preferable, and a combination of xylanase and lactase is further preferable.
  • ⁇ -glucosidase When the kaempferol glycoside contained in the extract of kale, mustard, radish leaf, black tea and quinoa is aglycone-ized, it is preferable to use ⁇ -glucosidase.
  • the amount of xylanase and ⁇ -glucosidase used is not particularly limited.
  • the glycoside by adding the microorganism to the plant extract and culturing the microorganism under conditions suitable for growth, for example.
  • the conditions suitable for growth can be set for each microorganism, and can be appropriately designed, for example, under the conditions of 20 to 40 ° C. and pH 4 to 7.
  • the acid that can be used for aglyconization of the chemperol glycoside is, for example, one or more acids selected from the group consisting of hydrochloric acid, sulfuric acid and nitric acid, or selected from the group consisting of these acids and ethanol, methanol and butanol.
  • examples thereof include a mixed solvent with any one or more alcohols.
  • the concentration of the acid is not particularly limited, but is, for example, 0.1 to 2N.
  • the alcohol content of the mixed solvent is not particularly limited, but is, for example, 50 to 70%.
  • the reaction temperature is, for example, 50 to 100 ° C., and the reaction time can be designed, for example, in the range of 0.5 to 24 hours.
  • Examples of the bases that can be used for aglyconization of chemperol glycosides include any one or more bases selected from the group consisting of sodium hydroxide and potassium hydroxide, or the group consisting of these bases and ethanol, methanol and butanol.
  • a mixed solvent with any one of alcohols selected from the above can be mentioned.
  • the concentration of the base is not particularly limited, but is, for example, 0.1 to 0.5N.
  • the alcohol content of the mixed solvent is not particularly limited, but is, for example, 50 to 70 v / v%.
  • the reaction temperature is, for example, 50 to 100 ° C., and the reaction time can be designed, for example, in the range of 0.5 to 24 hours. It was
  • Methods for improving kaempferol-producing ability and plants with improved kaempferol-producing ability Method for producing plants with increased content of kaempferol and / or kaempferol glycosides, methods for improving kaempferol and / or kaempferol glycoside-producing ability of plants, And the method for producing plants with improved kaempferol and / or kaempferol glycoside production is under acidity concentrations lower than about 20.9% by volume, which is the acidity concentration in the natural environment, or oxygen content lower than about 213 hPa. It is preferred to include growing the plant under pressure.
  • the oxygen concentration in the environment in which the plant is cultivated can be measured using a commercially available oxygen concentration measuring device. It can also be measured by the device itself that controls the oxygen concentration or oxygen partial pressure in the air, which will be described later.
  • the lower limit of the oxygen partial pressure is not particularly limited as long as the plant can grow, but for example, 50 hPa or more, 60 hPa or more, 70 hPa or more, 80 hPa or more, 90 hPa or more, 102 hPa or more, 112 hPa or more, 122 hPa or more, 132 hPa or more, 142 hPa or more. , 152 hPa or more, or 163 hPa or more.
  • the method of controlling the oxygen concentration or oxygen partial pressure when cultivating a plant as described above is arbitrary.
  • a plant can be cultivated in an environment where the plant can be cultivated while controlling the oxygen concentration or the oxygen partial pressure within a certain range, or in a facility or device.
  • agricultural houses, plant factories, and other containers or covers in which plants can be cultivated can be used.
  • the oxygen concentration or oxygen partial pressure of the air in contact with the plant is within the above range, the oxygen concentration or oxygen partial pressure of the entire environment in which the plant is cultivated need not be completely within the above range.
  • the means for controlling the oxygen concentration or oxygen partial pressure is arbitrary. For example, selectively removing oxygen from the environment in which the plant is cultivated, supplying a gas other than oxygen (for example, nitrogen or carbon dioxide) to the environment in which the plant is cultivated, pre-existing oxygen concentration or oxygen partial pressure. For example, supplying controlled air to the environment in which plants are cultivated. Since various devices for supplying air having a controlled oxygen concentration are known, they can be appropriately selected and used.
  • cultivating a plant under an acidity concentration of less than about 20.9% by volume or an oxygen partial pressure of less than about 213 hPa observes the oxygen concentration or oxygen partial pressure of the environment in which the plant is present.
  • the observation frequency can be appropriately designed, for example, 3 times 1 day to 1 time / week, specifically 3 times / day, 2 times / day, 1 time / day, 1 time / week. It can be 2 days, 1 time / 3 days, 1 time / 4 days, 1 time / 5 days, 1 time / 6 days, or 1 time / 7 days.
  • the cultivation conditions of the plant other than the oxygen concentration or the oxygen partial pressure can be appropriately designed within the range of the conditions under which the plant can grow, preferably the conditions suitable for the growth of the plant.
  • the light source may be natural light (sunlight) or an artificial light source, and may or may not be irradiated with ultraviolet rays (for example, UV-A, UV-B).
  • the cultivation method may be hydroponic cultivation (solid medium cultivation, hydroponics, spray cultivation) or conventional soil cultivation.
  • the temperature condition for example, it can be appropriately designed in the range of 10 ° C. or higher and 35 ° C. or lower and 15 ° C. or higher and 30 ° C. or lower.
  • the place where the plant is cultivated is arbitrary, and in one embodiment, for example, a place having an altitude of 0 m or more and 1000 m or less, 0 m or more and 800 m or less, and 0 m or more and 600 m or less can be appropriately selected.
  • concentration of a gas other than oxygen eg, carbon dioxide
  • L-tyrosine and / or L-phenylalanine it is preferable to give L-tyrosine and / or L-phenylalanine to cultivate the plant.
  • L-tyrosine and / or L-phenylalanine By giving L-tyrosine and / or L-phenylalanine, the biosynthesis of kaempferol by plants can be promoted.
  • the method of giving L-tyrosine and / or L-phenylalanine to the plant is not particularly limited and is arbitrary. For example, dissolving L-tyrosine and / or L-phenylalanine in a solvent such as water and giving it to the plant or soil in which the plant grows, or adding L-tyrosine and / or L-phenylalanine directly to the soil in which the plant grows. Can be done.
  • the amount of L-tyrosine and / or L-phenylalanine given is not particularly limited, and can be appropriately set in consideration of, for example, the type, size, growing environment, and growing condition of the plant.
  • the concentration of L-tyrosine and / or L-phenylalanine in the aqueous solution is, for example, 30 mg / L or more, 35 mg / L or more, 40 mg / L.
  • the upper limit of the concentration of L-tyrosine and / or L-phenylalanine in the aqueous solution is arbitrary, for example, 2000 mg / L or less, 1500 mg / L or less, 1000 mg / L or less, 500 mg / L or less, 400 mg / L or less, 300 mg.
  • L-tyrosine and / or L-phenylalanine may be given to the plant only once or continuously for a certain period of time.
  • the fixed period is, for example, 1 day or more, 2 days or more, 3 days or more, 4 days or more, 5 days or more, 6 days or more, 1 week or more, 2 weeks or more, 3 weeks or more, 4 weeks or more, or 1 month.
  • the period for cultivating the plant under an acidity concentration lower than about 20.9% by volume or an oxygen partial pressure lower than about 213 hPa is arbitrary, and depending on the type and purpose of the plant, for example, a period of one day to several months. Can be designed as appropriate.
  • the timing of cultivating the plant in the growing process under an acidity concentration lower than about 20.9% by volume or an oxygen partial pressure lower than about 213 hPa is also arbitrary, for example, at the time of sowing, germination, growing season, harvesting. It can be one or more selected from the group consisting of pre-harvest, post-harvest and combinations thereof. In one embodiment, it is preferred to grow the plant under an acidity concentration of less than about 20.9% by volume or under an oxygen partial pressure of less than about 213 hPa over the entire period from sowing to harvest.
  • the type of plant is not limited, but it is preferable to have the ability to produce kaempferol.
  • the plant having a kaempferol-producing ability may be a plant originally having a kaempferol-producing ability or a plant having an artificially acquired kaempferol-producing ability by a genetic engineering method or the like.
  • the plant is preferably a Brassicaceae plant or a Theaceae plant, preferably a Brassicaceae plant.
  • cruciferous plants include western wasabi, kale, arugula, takana, mizuna, turnip, radish, broccoli, cabbage, radish sprouts, and bok choy.
  • the Brassicaceae plant is preferably horseradish, radish, cabbage, or radish sprouts.
  • theaceae plants include black tea, oolong tea, jasmine tea, green tea, roasted tea, and sencha.
  • a method for producing an extract containing kaempferol and a kaempferol glycoside which comprises extracting kaempferol and a kaempferol glycoside from a plant cultivated by the above method.
  • a method for producing a kaempferol-containing extract which comprises hydrolyzing a kaempferol glycoside extracted from a plant cultivated by the above method.
  • the means of hydrolysis is not particularly limited and can be carried out using enzymes, microorganisms, acids and / or bases.
  • the kaempferol-containing extract can be obtained by the extraction method described in A above.
  • the kaempferol-containing extract can be used in the uses, purposes, and forms described in A above.
  • a method for increasing the efficiency of plant keperol production, a method for increasing the kaempferol content of a plant, and a method for producing a plant having an increased efficiency of kaempferol production may include feeding L-tyrosine and / or L-phenylalanine to the plant.
  • the type of plant, the method of giving L-tyrosine and / or L-phenylalanine to the plant, and the like are the same as those described for B above.
  • KMP amount of each material The total KMP amount contained in each plant material was measured by the following procedure. After milling each material, 0.8 g of the pulverized product was taken, 40 mL of 70% ethanol was added, and the mixture was suspended at room temperature at 20,000 rpm for 1 minute with a polytron homogenizer. 1 mL of the suspension was dispensed and weighed in a glass test tube. After adding 1 mL of 2N hydrochloric acid and mixing with vortex, it was heated at 100 ° C. for 20 minutes in a heat block. After heating, it was ice-cooled for 5 minutes or more. After cooling, 5 mL of hexane was added and the mixture was shaken horizontally 20 times.
  • cruciferous plants such as western wasabi leaves, kale, arugula, mustard and mustard, black tea leaves, oolong tea, jasmine tea, green tea, and roasted green tea, as well as quinoa, canario beans, and lens beans. High total KMP content was observed in such miscellaneous grains.
  • the extraction recovery rate was calculated with the total value of the KMP amount of the extract residue and the extract as 100%.
  • the extraction recovery rate of KMP under each condition is shown in FIG. As shown in FIG. 1, it was confirmed that the KMP glycoside of horseradish leaves can be recovered by hot water extraction or 30 to 70% water ethanol extraction, and the extraction temperature is good at 30 to 70 ° C. ..
  • A3-2. Aglyconization test 2 (Aglyconization with xylanase) A hot water extract of horseradish leaves was prepared and adjusted to 50 ⁇ g / mL and pH 5.0 as KMP aglycone. Hemicellulase "Amano" 90 was added to the prepared reaction solution at final concentrations of 250, 500, 1000 and 1500 ⁇ g / mL, reacted at 50 ° C. for 5 hours, and the KMP aglycone concentration was measured by the HPLC method. The aglycone formation rate is shown with the KMP aglycone concentration at the time of acid hydrolysis as 100%.
  • xylanase hemicellase "Amano" 90, manufactured by Amano Enzyme
  • a 250 ⁇ g / mL enzyme achieves 70% aggreconization.
  • a reaction of more than 90% can be achieved in 4 hours when the enzyme amount is 500 ⁇ g / mL, and 100% in 2 hours when 1000 ⁇ g / mL enzyme is used.
  • aggreconization could be achieved, and when an enzyme of 1500 ⁇ g / mL was used, more than 100% aglyconization could be achieved in 1 hour. From this result, it can be seen that xylanase is effective for aglycone formation of KMP glycosides in horseradish leaf extract.
  • A3-3 Aglycone conversion of KMP glycosides in various plant extracts by xylanase
  • KMP aglycones at 25 ⁇ g / mL, pH 5.0. Adjusted to be.
  • Xylanase hemicellulase "Amano" 90
  • the aglycone formation rate is shown with the KMP aglycone concentration at the time of acid hydrolysis as 100%.
  • A3-4 Aglycone formation by a combination of enzymes
  • a hot water extract of horseradish leaves was prepared and adjusted to 50 ⁇ g / mL and pH 5.0 as KMP aglycone.
  • Xylanase hemicellulase "Amano" 90
  • lactase or ⁇ -glucosidase was added at the final concentration shown in the table below, reacted at 50 ° C for 4 hours, and the KMP aglycone concentration was measured by the HPLC method to confirm the combined effect of multiple enzymes.
  • the aglycone formation rate was shown assuming that the KMP aglycone concentration at the time of acid hydrolysis was 100%.
  • xylanase hemicellulase "Amano" 90
  • xylanase hemicellulase "Amano" 90
  • the KMP aglycon concentration was measured to confirm the optimum conditions for the enzymatic reaction.
  • the aglycone formation rate is shown assuming that the KMP aglycone concentration at the time of acid hydrolysis is 100%.
  • the optimum active pH of xylanase was 4 to 6, and the optimum activity temperature was around 50 ° C.
  • a hot water extract of horseradish leaves was prepared and adjusted to 50 ⁇ g / mL and pH 5.0 as KMP aglycone.
  • Xylanase hemicellulase "Amano" 90
  • Lactobacillus such as L. tucceti, L. sakei, L. pentosus, L. casei, L. kefigranum can efficiently convert KMP glycosyl derived from western wasabi leaves to aggrecon at 95% or more in 24 hours. Was confirmed.
  • Insoluble matter and low-polarity components were removed from the extract using a filter and a spin column.
  • the same extraction operation was performed for no sample to obtain a mock sample.
  • the mock sample was prepared to confirm and remove background noise mixed in during sample preparation and LC-MS analysis.
  • Each extract was subjected to LC-MS analysis and metabolome analysis was performed.
  • Quercetin is known to have physiological actions such as antioxidative action, antiinflammatory action, antiarteriosclerosis action, prevention of cerebrovascular disease, antitumor action, hypotensive action, and vascular relaxation action.
  • Ferulic acid is known to have physiological effects such as antioxidant activity and antitumor activity.
  • PCR is TaqMan Gene Expression Assays [flavonoid3'-hydroxylase (F3'H)), flavonol synthase (FLS), ACTIN] and using TaqMan Fast Advanced Master Mix (Thermofisher) , the QuantStudio TM 3 Real Time PCR System ( Thermofisher) It was carried out. Actin was used as an endogenous control for quantification.
  • L-tyrosine can be converted to kaempferol via p-coumaric acid, 4-coumaroyl CoA, naringenin chalcone, naringenin, dihydrokaempferol.
  • the kaempferol content was increased by giving L-tyrosine or L-phenylalanine under any oxygen concentration condition. It was confirmed that the rate of increase in kaempferol content due to the addition of L-tyrosine or L-phenylalanine was significantly increased under the condition of low oxygen concentration (17.5 vol%). This indicates that the addition of L-tyrosine or L-phenylalanine is more effective in cultivation under hypoxic conditions. No clear effect on plant growth (total length and weight) was observed with the addition of L-tyrosine or L-phenylalanine.

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Abstract

ケンペロールによる生理作用を享受するために有用な手段を提供すること。 乾燥重量換算でケンペロールアグリコンを１ｍｇ／ｇ以上 含有する、植物抽出物。

Description

ケンペロールアグリコン含有抽出物
　ケンペロールアグリコンに関する技術、及び、植物のケンペロール産生能を向上させる技術に関連する技術的事項が開示される。
　ケンペロール(Kaempferol)は下記の構造式で表される物質であり、茶、ブロッコリー、グレープフルーツ、キャベツ、ケール、豆類、キクヂシャ、セイヨウニラネギ、トマト、イチゴ、ビドウ、メキャベツ、リンゴ、キヌア、西洋ワサビ等多くの食用植物に含まれる天然フラボノイドの一種である。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000001
　ケンペロール（以下、「KMP」と称する場合がある。）は、近年、生体内での酸素利用効率を向上させ、運動効率低下抑制や疲労軽減といった生理作用を有することが報告されている（特許文献１）。また、KMPは、抗炎症作用や抗ガン作用、メタボリック症候群などの様々な疾患に対し効果を有する可能性も示唆されている（非特許文献１）。
　しかしながら、ケンペロールはアグリコンの形態で有用な生理作用を発揮するが、植物に含まれるケンペロールの殆どは配糖体として存在するため、植物またはその抽出物をそのまま摂取しても、ケンペロールによる有用な生理作用の享受は限定的である。
　植物に含まれるポリフェノール類を増加させる方法として、ＵＶ－Ｂを単子葉栽培植物の芽ネギに照射する栽培方法（特許文献２）、温水で植物を栽培する方法（特許文献３）、分子遺伝学の手法を用いてフラバノン３－ヒドロキシラーゼの活性を低下させる方法（特許文献４）などが報告されている。
ＷＯ２０１９／０４４９６４ 特開２００８－８６２７２号公報 特開２０１７－１８０５６号公報 特表２００３－５０３０３２号公報
Ｅｘｐ　Ｔｈｅｒ　Ｍｅｄ　１８：２７５９－２７７６，２０１９
　斯かる現状の下、ケンペロールによる生理作用を享受するために有用な手段を提供することが１つの課題である。植物のケンペロール産生能を向上させることが別の課題である。
　鋭意調査、研究を重ねた結果、特定の植物がケンペロールを多く含むこと、及び植物のケンペロール配糖体を効率的にアグリコン化できることが見出された。また、酸素濃度又は酸素分圧を低下させた条件下で植物を栽培することにより、ケンペロール産生能が向上することを見出された。斯かる知見に更なる研究を重ね、下記に代表される発明が提供される。
項Ａ１
乾燥重量換算でケンペロールアグリコンを１ｍｇ／ｇ以上含有する、植物抽出物。
項Ａ２
前記ケンペロールアグリコンを３０ｍｇ／ｇ以上含有する、項Ａ１に記載の植物抽出物。
項Ａ３
前記ケンペロールアグリコンを１００ｍｇ／ｇ以上含有する、項１Ａ又はＡ２に記載の植物抽出物。
項Ａ４
更に、乾燥重量換算で、ケルセチンを０．１ｍｇ／ｇ以上含有する、項Ａ１～Ａ３のいずれかに記載の植物抽出物。
項Ａ５
アブラナ科植物の抽出物である、項Ａ１～Ａ４のいずれかに記載の植物抽出物。
項Ａ６
前記アブラナ科植物が、西洋ワサビ、ケール、ルッコラ、高菜、水菜、カブ、大根、ブロッコリー、キャベツ、カイワレ大根、またはチンゲンサイである、項Ａ５に記載の植物抽出物。
項Ａ７
ツバキ科植物の抽出物である、項Ａ１～Ａ４のいずれかに記載の植物抽出物。
項Ａ８
前記ツバキ科植物が、紅茶、ウーロン茶、ジャスミン茶、緑茶、ほうじ茶、または煎茶である、項Ａ７に記載の抽出物。
項Ａ９
西洋ワサビ葉の抽出物である、項Ａ１～Ａ６のいずれかに記載の植物抽出物。
項Ａ１０
項Ａ１～Ａ９のいずれかに記載の植物抽出物を含む食品、医薬品、又は化粧品。
項Ａ１１
（１）ケンペロール配糖体を含む植物原料を溶媒で抽出すること、及び
（２）上記（１）で得られた抽出物を加水分解処理すること、
を含む、項Ａ１～Ａ７のいずれかに記載の植物抽出物を製造する方法。
項Ａ１２
前記加水分解処理が酵素または微生物を前記抽出物に作用させることを含む、項９に記載方法。
項Ａ１３
前記加水分解処理が酵素を前記抽出物に作用させることを含み、前記酵素がキシラナーゼを含む、項Ａ１１またはＡ１２に記載の方法。
項Ａ１４
前記酵素が更にβ－グルコシダーゼを含む、項Ａ１３に記載の方法。
項Ａ１５
前記β－グルコシダーゼがラクターゼである、項Ａ１４に記載の方法。
項Ｂ１
１９体積％以下の酸素濃度または１９３ｈＰａ以下の酸素分圧の条件下で植物を栽培することを含む、単位重量当たり（乾燥重量換算）のケペロール及び／又はケンペロール配糖体の含量が増加した植物を製造する方法。
項Ｂ２
１９体積％以下の酸素濃度または１９３ｈＰａ以下の酸素分圧の条件下で植物を栽培することを含む、植物のケンペロール及び／又はケンペロール配糖体産生能を向上させる方法。
項Ｂ３
１９体積％以下の酸素濃度または１９３ｈＰａ以下の酸素分圧の条件下で植物を栽培することを含む、ケンペロール及び／又はケンペロール配糖体の産生能が向上した植物を製造する方法。
項Ｂ４
前記条件が１９体積％以下の酸素濃度である、項Ｂ１～Ｂ３のいずれかに記載の方法。
項Ｂ５
前記条件が５０ｈＰａ以上１９３ｈＰａ以下の酸素分圧である、項Ｂ１～Ｂ３のいずれかに記載の方法。
項Ｂ６
前記植物がアブラナ科植物である、項Ｂ１～Ｂ５のいずれかに記載の方法。
項Ｂ７
前記アブラナ科植物が、西洋ワサビ、ケール、ルッコラ、高菜、水菜、カブ、大根、ブロッコリー、キャベツ、カイワレ大根、またはチンゲンサイである、項Ｂ６に記載の方法。
項Ｂ８
前記アブラナ科植物が、西洋ワサビ、大根、キャベツ、またはカイワレ大根である、項Ｂ６又はＢ７に記載の方法。 
項Ｂ９
項Ｂ１～Ｂ８のいずれかに記載の方法によって得られる植物。
項Ｂ１０
項９に記載の植物からケンペロール及びケンペロール配糖体を抽出することを含む、ケンペロール及びケンペロール配糖体を含む抽出物を製造する方法。
項Ｂ１１
（ａ）項Ｂ９に記載の植物からケンペロール及びケンペロール配糖体を抽出すること、及び
（ｂ）上記（ａ）で得られた抽出物を加水分解すること、
を含む、ケンペロール含有抽出物の製造方法。
項Ｂ１２．
Ｌ－チロシン及び／又はＬ－フェニルアラニンを植物に与えることを含む、項Ｂ１～Ｂ８のいずれかに記載の方法。
項Ｃ１
ケペロール産生能を有する植物にＬ－チロシン及び／又はＬ－フェニルアラニンを与えることを含む、植物のケペロール産生効率を高める方法。
項Ｃ２
ケペロール産生能を有する植物にＬ－チロシン及び／又はＬ－フェニルアラニンを与えることを含む、植物のケンペロール含量を高める方法。
項Ｃ３
ケペロール産生能を有する植物にＬ－チロシン及び／又はＬ－フェニルアラニンを与えることを含む、ケンペロールの産生効率が高まった植物を製造する方法。
項Ｃ４
前記植物がアブラナ科植物である、項Ｃ１～Ｃ３のいずれかに記載の方法。
項Ｃ５
前記アブラナ科植物が、西洋ワサビ、ケール、ルッコラ、高菜、水菜、カブ、大根、ブロッコリー、キャベツ、カイワレ大根、またはチンゲンサイである、項Ｃ４に記載の方法。
　一実施形態において、ケンペロールアグリコンを高含有率で含有する植物抽出物を提供可能であり、効率的にケンペロールによる生理作用を享受することができる。他の実施形態において、植物由来のケンペロール配糖体を効率的にアグリコン化することができる。
　別の実施形態において、植物のケンペロール及び／又はケンペロール配糖体産生能を向上させることが可能である。なお、本書において、ケペロールとケンペロール配糖体を纏めてケンペロールと称する場合もある。
植物素材からのＫＭＰ配糖体の抽出条件を検討した結果を示す。（Ａ）は、抽出溶媒として、水、３０％エタノール、５０％エタノール、及び７０％エタノールを使用した試験の結果である。溶媒の温度はいずれも７０℃である。（Ｂ）は、５０％エタノールを抽出溶媒として用いた場合の溶媒温度の影響を測定した結果を示す。 西洋ワサビ葉抽出物またはキヌア抽出物をβ－グルコシダーゼまたはα－グルコシダーゼで処理することによる、KMP配糖体のアグリコン化率を測定した結果を示す。 西洋ワサビ葉抽出物を種々の濃度のキシラナーゼで処理することによるKMP配糖体のアグリコン化率を測定した結果を示す。 西洋ワサビ葉、紅茶、大根葉、キヌア、高菜、またはケールの抽出物をキシラナーゼで処理することによる、KMP配糖体のアグリコン化率を測定した結果を示す。 西洋ワサビ葉抽出物中のKMP配糖体のキシラナーゼでのアグリコン化に対するpH及び温度の影響を測定した結果を示す。 西洋ワサビ葉抽出物中のKMP配糖体をキシラナーゼ及びβ－グルコシダーゼで処理した際の生成物を測定した結果を示す。 酸素濃度２１ｖｏｌ％又は１７．５ｖｏｌ％で栽培したカイワレ大根について測定したケンペロール及びケルセチンの量を示す。「ＫＭＰ」はケンペロールであり、「Ｑｕｅ」はケルセチンである。縦軸は、測定されたＫＭＰ又はＱｕｅ量（ｍｇ／ｇ）である。 植物におけるケンペロール周辺の合成経路を示す。「ＦＬＳ」はフラボノールシンターゼであり、「Ｆ３′Ｈ」はフラボノイド３’ヒドロキシラーゼである。 カイワレ大根及びブロッコリーについて測定したＦ３′Ｈ遺伝子の発現レベルを示す。白抜きの棒グラフは、酸素濃度２１ｖｏｌ％で栽培した場合であり、黒で塗りつぶした棒グラフは、酸素濃度１７．５ｖｏｌ％で栽培した場合である。 カイワレ大根及びブロッコリーについて測定したＦＬＳ遺伝子の発現レベルを示す。白抜きの棒グラフは、酸素濃度２１ｖｏｌ％で栽培した場合であり、黒で塗りつぶした棒グラフは、酸素濃度１７．５ｖｏｌ％で栽培した場合である。 種々の酸素濃度条件下で栽培した西洋ワサビについて測定したケンペロール量を示す。横軸は酸素濃度（体積％）であり、縦軸はケンペロール量（ｍｇ／ｇ）である。 種々の酸素濃度条件下で栽培した西洋ワサビについて測定した葉の長さを示す。横軸は酸素濃度（体積％）であり、縦軸は葉の長さ（ｃｍ）である。 種々の酸素濃度条件下で栽培した西洋ワサビについて測定した茎の長さを示す。横軸は酸素濃度（体積％）であり、縦軸は茎の長さ（ｃｍ）である。 Ｌ－チロシン又はＬ－フェニルアラニンからケンペロールへの生合成経路を示す。ＴＡＬはTyrosine ammonia lyaseであり、ＰＡＬはPhenylalanine ammonia lyaseであり、Ｃ４ＨはCinnamic acid 4-hydroxylaseであり、４ＣＬは4-Coumaric acid CoA ligaseであり、ＣＨＳはChalcone synthaseであり、ＣＨＩはChalcone isomeraseであり、Ｆ３ＨはFlavanone 3-hydroxylaseであり、ＦＬＳはFlavonol synthaseであり、Ｆ３’ＨはFlavonoid 3’-hydroxylaseである。 Ｌ－チロシン及び／又はＬ－フェニルアラニンを含有する水溶液を与えて栽培したカイワレ大根について測定したケンペロール（ＫＭＰ）含量（上段）並びにケルセチン（Ｑｕｒ）含量を示す。縦軸はケンペロールまたはケルセチン含量を示し、横軸は水溶液中のＬ－チロシン及び／又はＬ－フェニルアラニンの濃度を示す。白抜きは、Ｌ－フェニルアラニン水溶液を与えた場合であり、斜線はＬ－チロシン含有水溶液を与えた場合であり、黒はＬ－フェニルアラニン及びＬ－チロシンの両方を含む水溶液を与えた場合である。 Ｌ－チロシン及び／又はＬ－フェニルアラニンを含有する水溶液を与えて栽培したブロッコリースプラウトについて測定したケンペロール（ＫＭＰ）含量（上段）並びにケルセチン（Ｑｕｒ）含量を示す。縦軸はケンペロールまたはケルセチン含量を示し、横軸は水溶液中のＬ－チロシン及び／又はＬ－フェニルアラニンの濃度を示す。白抜きは、Ｌ－フェニルアラニン水溶液を与えた場合であり、斜線はＬ－チロシン含有水溶液を与えた場合であり、黒はＬ－フェニルアラニン及びＬ－チロシンの両方を含む水溶液を与えた場合である。 Ｌ－チロシン又はＬ－フェニルアラニンを含有する水溶液を与えて栽培したカイワレ大根について測定したケンペロール（ＫＭＰ）含量（上段）並びにケルセチン（Ｑｕｒ）含量を示す。縦軸はケンペロールまたはケルセチン含量を示し、横軸は水溶液中のＬ－チロシン及び／又はＬ－フェニルアラニンの濃度を示す。白抜き棒グラフは、酸素濃度２１ｖｏｌ％の条件で栽培した場合であり、黒棒グラフは、酸素濃度１７．５ｖｏｌ％の条件で栽培した場合である。
Ａ．植物抽出物及びその製造方法
Ａ１．食品抽出物
　植物抽出物は、乾燥重量換算で、例えば、１ｍｇ／ｇ～５００ｍｇ／ｇ、好ましくは１０ｍｇ／ｇ～３００ｍｇ／ｇ、３０ｍｇ～４００ｍｇさらに好ましくは１００ｍｇ～２００ｍｇのケンペロールアグリコンを含有することが好ましい。ケンペロールアグリコン含有量の下限および上限は、特に制限されないが、下限値の例として１ｍｇ／ｇ、５ｍｇ／ｇ、１０ｍｇ／ｇ、３０ｍｇ、５０ｍｇ／ｇ、および１００ｍｇ／ｇ、上限値の例として、４００ｍｇ／ｇ、３００ｍｇ／ｇ、２５０ｍｇ／ｇ、および２００ｍｇ／ｇが挙げられる。ケンペロールアグリコン含有量の好ましい範囲は該上限値と該下限値の任意の組合せにより示されうる。植物抽出物中のケンペロールアグリコンの定量方法は特に限定されず、常法により測定できるが、例えば、後述する実施例採用した方法で測定できる。なお、ケンペロールの測定は、ｐＨ２～７の条件で行うことが好ましい。
　ケンペロールアグリコンを高含有率で含有する植物抽出物を摂取することにより、体内での酸素利用効率を向上させ、運動効率の低下抑制、疲労軽減、動体視力の低下抑制といった作用を享受することができる。
　植物抽出物は、ケンペロールアグリコンに加え、ケルセチン（アグリコン型）を含有することが好ましい。植物抽出物中のケルセチンの含有量は、乾燥重量換算で、例えば、０．１ｍｇ／ｇ～１００ｍｇ／ｇ、好ましくは１ｍｇ／ｇ～３０ｍｇ／ｇ、さらに好ましくは５ｍｇ～１０ｍｇである。下限および上限は特に制限されないが、下限値の例として０．１ｍｇ／ｇ、０．５ｍｇ／ｇ、１ｍｇ／ｇ、２．５ｍｇ／ｇ、および５ｍｇ／ｇ、上限値の例として１００ｍｇ／ｇ、５０ｍｇ／ｇ、３０ｍｇ／ｇ、２０ｍｇ／ｇ、および１０ｍｇ／ｇが挙げられる。ケルセチン含有量の好ましい範囲は該上限値と該下限値の任意の組合せにより示されうる。植物抽出物中のケルセチンの定量方法は特に限定されず、常法により測定できるが、例えば、後述する実施例で採用した方法で測定できる。
　一実施形態において、植物抽出物中のアグリコン型ケルセチンの含有量は、乾燥重量換算でアグリコン型ケンペロールの含有量に対して、１／２０００以上、１／１０００以上、１／５００以上、１／１００以上または１／５０以上であることが好ましく、１／１０以下、１／２０以下、１／５０以下、１／１００以下、または１／５００以下であることが好ましい。これらの上限及び下限は任意に組み合わせられる。
　ケルセチンを含有することにより、植物抽出物は、抗酸化作用、抗炎症作用、抗動脈硬化作用、脳血管疾患の予防、抗腫瘍作用、降血圧作用、及び／又は血管弛緩作用等の生理作用を効果的に提供することができる。
　植物抽出物は、ケンペロールアグリコンに加え、フェルラ酸を含有することが好ましい。植物抽出物中のフェルラ酸の含有量は、乾燥重量換算で、例えば、０．１ｍｇ／ｇ以上、０．２ｍｇ／ｇ以上、０．３ｍｇ／ｇ以上、０．４ｍｇ／ｇ以上、０．５ｍｇ／ｇ以上、０．６ｍｇ／ｇ以上、０．７ｍｇ／ｇ以上、０．８ｍｇ／ｇ以上、０．９ｍｇ／ｇ以上、１ｍｇ／ｇ以上、１．１ｍｇ／ｇ以上、１．２ｍｇ／ｇ以上、１．３ｍｇ／ｇ以上、１．４ｍｇ／ｇ以上、１．５ｍｇ／ｇ以上、１．６ｍｇ／ｇ以上、１．７ｍｇ／ｇ以上、１．８ｍｇ／ｇ以上、１．９ｍｇ／ｇ以上、又は２ｍｇ／ｇ以上であることが好ましい。フェルラ酸含有量の上限は特にないが、例えば、１０ｍｇ／ｇ、９ｍｇ／ｇ、８ｍｇ／ｇ、７ｍｇ／ｇ、６ｍｇ／ｇ、５ｍｇ／ｇ、４ｍｇ／ｇ、３ｍｇ／ｇ、又は２ｍｇ／ｇに設定することができる。植物抽出物中のフェルラ酸の定量方法は特に限定されず、常法により測定できる。
　フェルラ酸を含有することにより、植物抽出物は、抗酸化作用及び／又は抗腫瘍作用といった生理作用を効果的に提供することができる。
　一実施形態において、植物抽出物は、アブラナ科植物又はツバキ科植物の抽出物であることが好ましい。アブラナ科植物としては、例えば、西洋ワサビ、ケール、ルッコラ、高菜、水菜、カブ、大根、ブロッコリー、キャベツ、カイワレ大根、及びチンゲンサイを挙げることができる。ツバキ科の植物としては、例えば、紅茶、ウーロン茶、ジャスミン茶、緑茶、ほうじ茶、及び煎茶等を挙げることができる。一実施形態において、植物抽出物は、下記「Ｂ．ケンペロール産生能の向上方法及びケンペロール産生能が向上した植物」に記載する植物の抽出物であることが好ましい。
　一実施形態において、植物抽出物は、アブラナ科及びツバキ科以外の植物であってもよい。そのような植物としては、例えば、サフラン、ギムネマ、タマネギの外皮、ニラ、パセリや、キヌア、カナリオ豆、レンズ豆等の雑穀類を挙げることができる。
　植物抽出物は、植物の任意の部位の抽出物であり得る。例えば、植物の全草、葉、茎、根、及び花のいずれか又はこれらの任意の組み合わせの抽出物であり得る。例えば、アブラナ科植物またはツバキ科の植物を原料として用いる場合、それらの葉を用いることが好ましい。アブラナ科及びツバキ科以外の植物として例示した植物についても、タマネギ以外は葉を用いることが好ましい。
　一実施形態において、植物抽出物は、西洋ワサビの抽出物であることが好ましく、西洋ワサビの葉の抽出物であることが好ましい。西洋ワサビの葉にはケンペロール配糖体が多量に含まれるためである。
　植物抽出物は、植物原料を抽出に供するだけでなく、更に配糖体をアグリコン化する処理に供して得られるものであることが好ましい。上述の植物抽出物は、任意の方法で得ることができるが、後述する植物抽出物の製造方法で得ることが好ましい。
　上述の植物抽出物は任意の製品に加工することができ、例えば、植物抽出物を含有する食品、医薬品、又は化粧品が提供される。このような目的で使用する場合、植物抽出物は、酵素処理されたものをそのまま使用してもよく、精製して使用してもよい。必要に応じて乾燥処理に供して乾燥固形物状にして使用することもできる。植物抽出物の保存安定性を向上させるためには、乾燥処理（凍結乾燥を含む）により固形状にしておくことが望ましい。また乾燥処理された植物抽出物は、必要に応じて粉末化処理に供して、粉末状にしてもよい。
　植物抽出物を食品素材として使用する場合、植物抽出物は、例えば、顆粒、細粒、カプセル、錠剤、粉末、飲料（清涼飲料、炭酸飲料、栄養飲料、粉末飲料、果実飲料、乳飲料、ゼリー飲料など）、乳製品、菓子類（クッキー、ビスケット、チョコレート菓子、チップス、ケーキ、ガム、キャンディー、グミ、饅頭、羊羹、プリン、ゼリー、ヨーグルト、アイスクリーム、シャーベットなど）、バター、その他の固形食品、又は半固形食品等の形態に調製され得る。植物抽出物を含有する食品は、一般の食品の他、特定保健用食品、機能性表示食品、栄養補助食品、機能性食品、病者用食品等とすることができる。
　食品中の該植物抽出物の配合割合は、食品の種類や目的、ケンペロールの含量、摂取対象者の年齢や性別、期待されている効果等に応じて適宜設定することができる。例えば、乾燥重量換算で、食品１００ｇあたり、植物抽出物を２ｍｇ以上、１０ｍｇ以上、５０ｍｇ以上、１００ｍｇ以上、５００ｍｇ以上、又は１ｇ以上含有することが好ましく、５０ｇ以下、３０ｇ以下、１０ｇ以下、５ｇ以下、又は２ｇ以下含有することが好ましい。これらの含有量の下限及び上限の値は任意に組み合わせることができる。例えば、食品は乾燥重量換算で１００ｇあたり、２ｍｇ以上５０ｇ以下、１０ｍｇ以上３０ｇ以下、又は５０ｍｇ以上１０ｇ以下の植物抽出物を含有し得る。或いは、例えば、乾燥重量換算で食品１００ｇあたりケンペロールアグリコンの含量は０．１ｍｇ以上、０．５ｍｇ以上、１ｍｇ以上、又は２ｍｇ以上であることが好ましく、１０００ｍｇ以下、１００ｍｇ以下、２０ｍｇ以下、１０ｍｇ以下、又は５ｍｇ以下であることが好ましい。これらの下限及び上限の値は任意に組み合わせることができる。例えば、食品は、乾燥重量換算で、１００ｇあたり、０．１ｍｇ以上１０００ｍｇ以下、０．５ｍｇ以上１００ｍｇ以下、１ｍｇ以上２０ｍｇ以下のケンペロールアグリコンを含有し得る。
　植物抽出物を含有する食品の１日当たりの摂取量は、摂取者の年齢や体重、摂取目的などによって異なる。例えば、１日当たりの植物抽出物の摂取量が、乾燥重量換算で２ｍｇ以上、１０ｍｇ以上、又は５０ｍｇ以上であり、２００ｍｇ以下、１５０ｍｇ以下、又は１００ｍｇ以下となるように調整することができる。或いは、ケンペロールアグリコンの摂取量として０．１ｍｇ以上、１ｍｇ以上、２ｍｇ以上、３ｍｇ以上、又は５ｍｇ以上とすることが好ましく、１００ｍｇ以下、５０ｍｇ以下、４０ｍｇ以下、２０ｍｇ以下、１２ｍｇ以下とすることが好ましい。これらの下限及び上限の値は任意に組み合わせることができる。例えば、１日あたりのケンペロールアグリコンの摂取量は、０．１ｍｇ以上１００ｍｇ以下、１ｍｇ以上５０ｍｇ以下、又は２ｍｇ以上４０ｍｇ以下に調整することができる。
　植物抽出物を医薬品素材として使用する場合、植物抽出物は、例えば、錠剤、丸剤、散剤、液剤、懸濁剤、乳剤、顆粒剤、カプセル剤、エアゾール剤、貼付剤、注射剤又は坐剤等の形態の医薬製剤に調製することができる。医薬品の投与量は、投与対象者の年齢や体重、症状、投与回数、投与目的等によって異なり一律に規定することはできないが、例えば、成人１日当たりの投与量として、乾燥重量換算で植物抽出物０．１ｍｇ／ｋｇ～１０ｇ／ｋｇ（体重）、好ましくは１ｍｇ～５ｇ／ｋｇ（体重）とすることができる。
　植物抽出物を化粧品素材として使用する場合、植物抽出物は、例えば、ぺースト状、ムース状、ジェル状、液状、乳液状、懸濁液状、クリーム状、軟膏状、シート状等の各種所望の形態に調製される。このような化粧料は乳液、クリーム、ローション、オイル及びパック等の基礎化粧料；洗顔料、クレンジング、ボディ洗浄等の洗浄料；清拭剤；清浄剤等の各種化粧料として使用できる。
　化粧品中の植物抽出物の配合割合は、化粧料の種類、ケンペロールの含量、使用目的等に応じて、適宜設定することができる。例えば、上記化粧料１００ｇに対して、乾燥重量換算で植物抽出物０．０１ｇ～９５ｇ、好ましくは０．１ｇ～５０ｇ、さらに好ましくは１ｇ～５ｇを挙げることができる。
Ａ２．食品抽出物の製造方法
　上述の植物抽出物の製造方法は特に制限されないが、ケンペロール配糖体を含む植物原料を溶媒で抽出すること、及び得られた抽出物を加水分解処理（アグリコン化処理）に供することを含むことが好ましい。
　植物原料は、生の状態であってもよいし、乾燥品や粗乾燥品であってもよいが、ケンペロールまたはその配糖体を効率的に抽出するという観点から、原料を常法により粉砕してから用いることが好ましい。一実施形態において、植物原料として、下記「Ｂ．ケンペロール産生能の向上方法及びケンペロール産生能が向上した植物」に記載する植物を用いることが好ましい。
　抽出方法は、特に限定されず、製剤学または食品工学の分野で通常用いられる方法によって行うことができる。例えば、水、或いは、エタノール、メタノール、ブタノール、エーテル、エチルアセテートおよびクロロホルムよりなる群から選ばれるいずれか一種以上の有機溶媒、または、これらの有機溶媒と水との混合溶媒を用いる抽出が挙げられる。一実施形態において、３０～７０％エタノール水溶液を用いて３０～７０℃で抽出することが好ましい。抽出時のｐＨは、３～７であることが好ましい。
　水または有機溶媒を用いて抽出した植物抽出物は、加水分解処理に供する前にカラム精製や固液分離等の精製処理に供しても良い。
　加水分解処理（アグリコン化）の手段は、特に制限されないが、酵素、微生物、酸、及び／又は塩基を用いて実施することができる。
　酵素を用いてアグリコン化する場合、使用する酵素は、ケンペロール配糖体を構成する糖の種類及び配糖体の構造に応じて選択することが好ましい。植物抽出物に含まれうるケンペロール配糖体を構成する糖類としては、グルコース、ガラクトース、ラムノース、キシロース、およびこれらの組合せ（例えば、ソホロース（グルコース＋グルコース）、ルチノース（ラムノース＋グルコース）、ネオヘスペリドース（ラムノース＋グルコース））が挙げられる。これらの糖類が、ケンペロールの３位、５位、および／または７位にＯ－グリコシド結合して配糖体を形成している。
　植物の種類によって、ケンペロール配糖体の構成は異なり、具体的な植物種と配糖体を構成する糖の種類の関係は例えば下記のとおりである。
西洋わさび葉：ガラクトース＋キシロース
サフラン：グルコース；
茶葉：グルコース、ガラクトース＋ラムノース＋グルコース、キシロース＋ラムノース＋グルコース、ガラクトース＋グルコース、グルコース＋ルチノース（ラムノース＋グルコース）；
ケール：グルコース＋グルコース
高菜：グルコース＋グルコース＋グルコース
ルッコラ：グルコース
　このようなケンペロール配糖体をアグリコン化するのに適した酵素としては、例えば、キシラナーゼ（xylanase）、ラクターゼ(lactase)、グルコシダーゼ(glucosidase)、アラビノシダーゼ(arabinosidase)、ラムノシダーゼ(rhamnosidase)、キシロシダーゼ(xylosidase)、セルラーゼ(cellulase)、ヘスペリジナーゼ(hesperidinase)、ナリギナーゼ(naringinase)、グルクロニダーゼ(glucuronidase)、ペクチナーゼ(pectinase)、ガラクトシダーゼ(galactosidase)、アミログルコシダーゼ(amyloglucosidase)、またはアミラーゼ（amylase）を挙げることができる。これらの１種または２種以上を適宜組み合わせて使用することができる。例えば、西洋ワサビ葉の抽出物に含まれるケンペロール配糖体をアグリコン化する場合は、キシラナーゼを用いることが好ましく、キシラナーゼとβ－グルコシダーゼとの組み合わせがより好ましく、キシラナーゼとラクターゼとの組み合わせがさらに好ましい。ケール、高菜、大根の葉、紅茶、キヌアの抽出物に含まれるケンペロール配糖体をアグリコン化する場合は、β－グルコシダーゼを用いることが好ましい。
　一実施形態において、キシラナーゼ及びβ－グルコシダーゼ（例えば、ラクターゼ）を組み合わせてアグリコン化に使用する場合、キシラナーゼとβ－グルコシダーゼの使用量は、特に制限されない。例えば、効率的なアグリコン化という観点から、重量比で、キシラナーゼ：β－グルコシダーゼ＝１０：０．５～１０：１０、好ましくは１０：２～１０：４である。
　微生物を用いてケンペロール配糖体をアグリコン化する場合、上述の酵素を産生する微生物を用いることが好ましい。そのような微生物としては、例えば、ラクトバチラス（Lactobacillus）属、ラクトコッカス（Lactococcus）属、アスペルギルス(Aspergillus)属、バチルス(Bacillus)属、ペニシリウム(Penicillium)属、クモノカスビ(Rhizopus)属、リゾムコール(Rhizomucor)属、タラロマイセス(Talaromyces)属、ビフィドバクテリウム(Bifidobacterium)属、モルティエラ(Mortierella)属、クリプトコッカス(Cryptococcus)属、またはミクロバクテリウム(Microbacterium)属の微生物等を挙げることができる。これらの１種または２種以上を適宜組み合わせて使用することができる。例えば、西洋ワサビ葉の抽出物に含まれるケンペロール配糖体をアグリコン化する場合は、ラクトバチラス（Lactobacillus）属の微生物、好ましくはL. pentosus、L. plantarum、L. casei、L. sakei、L. kefirgranum、L.brevis、及びL.tuccetiからなる群より選択される１種以上であり、より好ましくはL. pentosus、L. plantarum、L. casei、及びL.tuccetiからなる群より選択される１種以上である。
　微生物を植物抽出物に添加し、例えば、生育に適した条件下で微生物を培養することで、配糖体をアグリコン化することが好ましい。生育に適した条件は、微生物毎に設定し得るが、例えば２０～４０℃、ｐＨ４～７の条件で適宜設計することができる。
　ケンペロール配糖体のアグリコン化に使用できる酸としては、例えば、塩酸、硫酸および硝酸よりなる群から選ばれるいずれか一種以上の酸、または、これらの酸とエタノール、メタノールおよびブタノールよりなる群から選ばれるいずれか一種以上のアルコールとの混合溶媒等を挙げることができる。酸の濃度は、特に制限されないが、例えば、０．１～２Ｎである。混合溶媒のアルコール含量は、特に制限されないが、例えば、５０～７０％である。反応温度は、例えば、５０～１００℃であり、反応時間は、例えば、０．５～２４時間の範囲で設計できる。
　ケンペロール配糖体のアグリコン化に使用できる塩基としては、例えば、水酸化ナトリウムおよび水酸化カリウムよりなる群から選ばれるいずれか一種以上の塩基、または、これらの塩基とエタノール、メタノールおよびブタノールからなる群から選ばれるいずれか一種のアルコールとの混合溶媒を挙げることができる。塩基の濃度は、特に制限されないが、例えば、０．１～０．５Ｎである。混合溶媒のアルコール含量は、特に制限されないが、例えば、５０～７０ｖ／ｖ％である。反応温度は、例えば、５０～１００℃であり、反応時間は、例えば、０．５～２４時間の範囲で設計できる。　
Ｂ．ケンペロール産生能の向上方法及びケンペロール産生能が向上した植物
　ケペロール及び／又はケンペロール配糖体の含量が増加した植物を製造する方法、植物のケンペロール及び／又はケンペロール配糖体産生能を向上させる方法、及びケンペロール及び／又はケンペロール配糖体の産生能が向上した植物を製造する方法は、自然環境中の酸度濃度である約２０．９体積％よりも低い酸度濃度下または約２１３ｈＰａよりも低い酸素分圧下で植物を栽培することを含むことが好ましい。植物が栽培される環境の酸素濃度は、市販される酸素濃度測定器を用いて測定することができる。また、後述する空気中の酸素濃度又は酸素分圧を制御する装置自体で測定することもできる。
　約２０．９体積％よりも低い酸度濃度は、約２０体積％以下、約１９．５体積％以下、約１９体積％以下、約１８．５体積％以下、約１８体積％以下、約１７．５体積％以下、約１７体積％以下、約１６．５体積％以下、又は約１６体積％以下であることが好ましい。酸度濃度の下限は植物が生育可能である限り特に制限されないが、例えば、１０体積％以上、１１体積％以上、１２体積％以上、１３体積％以上、１４体積％以上、１５体積％以上、又は１６体積％以上に設定することができる。これらの上限及び下限に関する値は、任意に組み合わせることができる。
　約２１３ｈＰａよりも低い酸素分圧は、例えば、２０３ｈＰａ以下、１９８ｈＰａ以下、１９３ｈＰａ以下、１８８ｈＰａ以下、１８３ｈＰａ以下、１７８ｈＰａ以下、１７３ｈＰａ以下、１６８ｈＰａ以下、又は１６３Ｐａ以下であることが好ましい。酸素分圧の下限は、植物が生育可能である限り特に制限されないが、例えば、５０ｈＰａ以上、６０ｈＰａ以上、７０ｈＰａ以上、８０ｈＰａ以上、９０ｈＰａ以上、１０２ｈＰａ以上、１１２ｈＰａ以上、１２２ｈＰａ以上、１３２ｈＰａ以上、１４２ｈＰａ以上、１５２ｈＰａ以上、又は１６３ｈＰａ以上に設定することができる。
　植物を栽培する際の酸素濃度又は酸素分圧を上記のように制御する方法は任意である。例えば、酸素濃度又は酸素分圧を一定の範囲に制御しながら植物を栽培できる環境下或いは施設若しくは装置内で植物を栽培することができる。例えば、農業用ハウス、植物工場、その他植物を栽培可能な容器若しくは覆いを用いることができる。植物が接する空気の酸素濃度又は酸素分圧が上記の範囲である限り、植物が栽培される環境全体の酸素濃度又は酸素分圧が完全に上記範囲である必要はない。
　酸素濃度又は酸素分圧を制御する手段は任意である。例えば、植物が栽培される環境から酸素を選択的に除去すること、植物が栽培される環境に酸素以外のガス（例えば、窒素または二酸化炭素）を供給すること、予め酸素濃度または酸素分圧が制御された空気を植物が栽培される環境に供給すること等が挙げられる。酸素濃度を制御した空気を供給する装置は種々知られているため、それらを適宜選択して使用することができる。
　一実施形態において、約２０．９体積％よりも低い酸度濃度下または約２１３ｈＰａよりも低い酸素分圧下で植物を栽培することは、当該植物が存在する環境の酸素濃度又は酸素分圧を観測しながら当該植物を栽培することが好ましい。観測頻度は適宜設計でき、例えば、３回１日～１回／週の範囲で設計することができ、具体的には、３回／日、２回／日、１回／日、１回／２日、１回／３日、１回／４日、１回／５日、１回／６日、又は１回／７日とすることができる。
　酸素濃度又は酸素分圧以外の植物の栽培条件は、植物が生育可能な条件、好ましくは植物の生育に適した条件の範囲内で適宜設計することができる。例えば、光源は自然光（太陽光）でも人工光源でもよく、紫外線（例えば、ＵＶ－Ａ、ＵＶ－Ｂ）等の照射は行っても、行わなくてもよい。栽培手法は、養液栽培（固形培地耕、水耕、噴霧耕）でも従来型の土壌栽培でもよい。温度条件を制御する場合は、例えば、１０℃以上３５℃以下、１５℃以上３０℃以下といった範囲で適宜設計できる。植物を栽培する場所は任意であり、一実施形態において、例えば、海抜０ｍ以上１０００ｍ以下、０ｍ以上８００ｍ以下、０ｍ以上６００ｍ以下の場所を適宜選択できる。酸素以外のガス（例えば、二酸化炭素）の濃度は、植物の種類や目的に応じて、制御（低減または増加）してもよく、しなくてもよい。
　一実施形態において、Ｌ－チロシン及び／又はＬ－フェニルアラニンを与えて植物を栽培することが好ましい。Ｌ－チロシン及び／又はＬ－フェニルアラニンを与えることにより、植物によるケンペロールの生合成を促進することができる。植物へのＬ－チロシン及び／又はＬ－フェニルアラニンの与え方は特に制限されず、任意である。例えば、Ｌ－チロシン及び／又はＬ－フェニルアラニンを水などの溶媒に溶かして植物または植物が生育する土壌に与えるか、Ｌ－チロシン及び／又はＬ－フェニルアラニンを直接植物が生育する土壌に添加することができる。Ｌ－チロシン及び／又はＬ－フェニルアラニンを与える量は特に制限されず、例えば、植物の種類、大きさ、生育環境、生育状況などを考慮して適宜設定することができる。Ｌ－チロシン及び／又はＬ－フェニルアラニンを水に溶解して植物に与える場合、水溶液のＬ－チロシン及び／又はＬ－フェニルアラニンの濃度は、例えば、３０ｍｇ／Ｌ以上、３５ｍｇ／Ｌ以上、４０ｍｇ／Ｌ以上、４５ｍｇ／Ｌ以上、５０ｍｇ／Ｌ、６０ｍｇ／Ｌ以上、７０ｍｇ／Ｌ以上、８０ｍｇ／Ｌ以上、９０ｍｇ／Ｌ以上、１００ｍｇ／Ｌ以上、１５０ｍｇ／Ｌ以上、２００ｍｇ／Ｌ以上、３００ｍｇ／Ｌ以上、４００ｍｇ／Ｌ以上、又は５００ｍｇ／Ｌ以上とすることができる。水溶液中のＬ－チロシン及び／又はＬ－フェニルアラニンの濃度の上限は、任意であり、例えば、２０００ｍｇ／Ｌ以下、１５００ｍｇ／Ｌ以下、１０００ｍｇ／Ｌ以下、５００ｍｇ／Ｌ以下、４００ｍｇ／Ｌ以下、３００ｍｇ／Ｌ以下、２００ｍｇ／以下、又は１００ｍｇ／Ｌ以下とすることができる。これら濃度の上限及び下限は、任意に組み合わせることができる。Ｌ－チロシン及び／又はＬ－フェニルアラニンは、一度だけ植物に与えてもよく、一定期間継続して与えてもよい。一定期間とは、例えば、１日以上、２日以上、３日以上、４日以上、５日以上、６日以上、１週間以上、２週間以上、３週間以上、４週間以上、又は１ヶ月以上、１年以下、６ヶ月以下、５ヶ月以下、４ヶ月以下、３ヶ月以下、２ヶ月以下、１ヶ月以下、４週間以下、３週間以下、２週間以下又は１週間以下である。これらの下限及び上限は任意に組み合わせることができる。
　約２０．９体積％よりも低い酸度濃度下または約２１３ｈＰａよりも低い酸素分圧下で植物を栽培する期間は任意であり、植物の種類や目的に応じて、例えば、１日～数ヶ月の期間で適宜設計することができる。植物の生育過程における、約２０．９体積％よりも低い酸度濃度下または約２１３ｈＰａよりも低い酸素分圧下で植物を栽培する時期も任意であり、例えば、播種時、発芽時、生育期、収穫前、収穫後及びこれらの組み合わせから成る群から選択される１つ以上であり得る。一実施形態において、播種時から収穫期までの全期間に亘って約２０．９体積％よりも低い酸度濃度下または約２１３ｈＰａよりも低い酸素分圧下で植物を栽培することが好ましい。
　植物の種類は制限されないが、ケンペロールを産生する能力を有することが好ましい。ケンペロール産生能を有する植物は、本来的にケンペロール産生能を有する植物でも、遺伝子工学的手法などにより人為的にケンペロール産生能を獲得した植物であってもよい。一実施形態において植物は、アブラナ科植物又はツバキ科植物であることが好ましく、アブラナ科植物であることが好ましい。
　アブラナ科植物としては、例えば、西洋ワサビ、ケール、ルッコラ、高菜、水菜、カブ、大根、ブロッコリー、キャベツ、カイワレ大根、及びチンゲンサイ等を挙げることができる。一実施形態において、アブラナ科植物は、西洋ワサビ、大根、キャベツ、またはカイワレ大根であることが好ましい。ツバキ科の植物としては、例えば、紅茶、ウーロン茶、ジャスミン茶、緑茶、ほうじ茶、及び煎茶等を挙げることができる。
　アブラナ科及びツバキ科以外のケンペロール産生能を有する植物としては、例えば、サフラン、ギムネマ、タマネギの外皮、ニラ、パセリや、キヌア、カナリオ豆、レンズ豆等の雑穀類を挙げることができる。
　上述の方法で栽培された植物は、自然環境中の酸度濃度である約２０．９体積％の酸度濃度下または約２１３ｈＰａの酸素分圧下で栽培された植物と比較して高いケンペロール若しくはケンペロール配糖体産生能、及び／又は高いケンペロール若しくはケンペロール配糖体含量を有する。また、上述の方法で栽培された植物は、生育阻害（例えば、胚軸の縮小、葉面積の縮小）を伴わないことが好ましい。植物中のケンペロール及び／又はケンペロール配糖体の量は、後述する実施例で採用した方法にて測定することができる。
　一実施形態において、上述の方法で栽培された植物からケンペロール及びケンペロール配糖体を抽出することを含む、ケンペロール及びケンペロール配糖体を含む抽出物を製造する方法が提供される。上述の方法で栽培された植物を原料とすることにより、ケンペロール及び／又はケンペロール配糖体の含有量が高い抽出物を効率的に得ることができる。
　抽出方法は、特に限定されず、製剤学または食品工学の分野で通常用いられる方法によって行うことができる。例えば、水、或いは、エタノール、メタノール、ブタノール、エーテル、エチルアセテートおよびクロロホルムよりなる群から選ばれるいずれか一種以上の有機溶媒、または、これらの有機溶媒と水との混合溶媒を用いる抽出が挙げられる。一実施形態において、３０～７０％エタノール水溶液を用いて３０～７０℃で抽出することが好ましい。抽出時のｐＨは、３～７であることが好ましい。
　一実施形態において、上述の方法で栽培された植物から抽出したケンペロール配糖体を加水分解することを含む、ケンペロール含有抽出物を製造する方法が提供される。上述の方法で栽培された植物を原料として用いることにより、ケンペロールの含有量が高い抽出物を効率的に得ることができる。加水分解（アグリコン化）の手段は、特に制限されず、酵素、微生物、酸、及び／又は塩基を用いて実施することができる。例えば、ケンペロール含有抽出物は、上記Ａに記載した抽出方法で得ることができる。また、ケンペロール含有抽出物は、上記Ａに記載した用途、目的、形態で使用できる。
Ｃ．植物のケペロール産生効率を高める方法、植物のケンペロール含量を高める方法、及びケンペロールの産生効率が高まった植物を製造する方法は、Ｌ－チロシン及び／又はＬ－フェニルアラニンを植物に与えることを含むことが好ましい。ここで、植物の種類、Ｌ－チロシン及び／又はＬ－フェニルアラニンを植物に与える手法等は、上記Ｂについて記載したものと同じである。
　以下、実施例により本発明についてさらに詳細に説明するが、本発明はこれらに制限されるものではない。
Ａ１．各素材のＫＭＰ量測定
　次の手順で各植物素材に含まれる総ＫＭＰ量を測定した。各素材をミル粉砕後、粉砕物を0.8g分取し、70%エタノール40mL添加後、ポリトロンホモジナイザーで、室温、20,000 rpm、1分間懸濁を行った。懸濁液1 mLをガラス試験管に分注・秤量した。2N塩酸を1 mL添加し、ボルテックスにて混合後、ヒートブロックにて100℃、20分間加熱した。加熱終了後5分以上氷冷した。冷却後、ヘキサン5 mLを添加し水平に20回振盪した。冷却遠心機にて4℃、3,000 rpm、5分間遠心後、上層を廃棄した。酢酸エチル5 mLを添加し、振盪機で室温、250 rpm、10分間水平に振盪した。大型冷却遠心機にて4℃、3,000 rpm、5分間遠心後、上層を乾固用のガラス試験管に回収した。下層には再度、酢酸エチル5 mLを添加し、振盪機で室温、250 rpm、10分間水平に振盪した。4℃、3,000 rpm、5分間遠心後，上層を乾固用のガラス試験管に回収した。回収した上層は吹付式窒素乾固機にて60℃で窒素乾固を行った。乾固が終了したら、70％エタノール水溶液を1 mL添加し、超音波発生装置にて1分間処理してボルテックスにて溶解した。0.45μmフィルターに溶解液を通した後に、HPLC分析に供し、KMPアグリコン分析を行った。
　なお，西洋わさび葉の原料懸濁液、抽出液、およびアグリコン化液等については、夾雑物質が少ないため、以下の簡易法を用いて(1)総ＫＭＰ量あるいは(2)ＫＭＰアグリコン量を測定した。
(1)総ＫＭＰ量（酸加水分解法）測定：検体液1 mLをガラス試験管に分注・秤量した。2N塩酸を1 mL添加し、ボルテックスにて混合後、ヒートブロックにて100℃、20分間加熱した。加熱終了後5分以上氷冷した。冷却後、2N水酸化ナトリウム溶液を960μL添加・混合してpHを4-7に調整した。中和液全量をパスツールピペットで10 mLメスフラスコに移し、70%エタノール溶液にて10mLに定容・混合した。0.45μmフィルターに通した後に、HPLC法にてKMPアグリコン分析を行い、総ＫＭＰ量とした。
(2)ＫＭＰアグリコン量測定：検体液1 mLを10 mLメスフラスコに分注・秤量し、70%エタノール溶液にて10mLに定容・混合した。0.45μmフィルターに通した後に、HPLC法にてKMPアグリコン分析を行い、ＫＭＰアグリコン量とした。
　下記の表１に示すとおり、西洋ワサビ葉、ケール、ルッコラ、高菜及びかつお菜といったアブラナ科植物、紅茶葉、ウーロン茶、ジャスミン茶、緑茶、及びほうじ茶といったツバキ科植物、並びにキヌア、カナリオ豆、レンズ豆といった雑穀に高い総KMP含量が認められた。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000002
Ａ２．ＫＭＰ配糖体の抽出条件の検討
  植物からのＫＭＰ配糖体の抽出における抽出溶媒および抽出温度の条件検討を行った。西洋わさび葉１．５ｇに、抽出溶媒として水あるいは３０～７０％のエタノール水溶液を７５ｇ添加し、７０℃にて２回の抽出操作を行った。また、西洋わさび葉１．５ｇに、抽出溶媒として５０％エタノール水溶液を７５ｇ添加し、３０～７０℃にて２回の抽出操作を行った。得られた抽出液は、全量を秤量した後、上記「(2)ＫＭＰアグリコン量測定」にてＫＭＰアグリコン量を測定した。抽出残渣と抽出液のKMP量の合計値を100％として抽出回収率を求めた。各条件でのＫＭＰの抽出回収率を図１に示した。図１に示すとおり、西洋わさび葉のＫＭＰ配糖体は、熱水抽出あるいは３０～７０％の水エタノール抽出で回収が可能で、抽出温度は３０～７０℃が良好であることが確認された。
Ａ３．ＫＭＰ配糖体のアグリコン化
Ａ３－１．アグリコン化試験１（β－グルコシダーゼによるアグリコン化）
　西洋わさび葉またはキヌアの熱水抽出物を作製し、KMPアグリコンとして50μg/mLになるように調整した。調整した反応液に、βグルコシダーゼ（アロマーゼ H2、天野エンザイム社製）、β－グルコシダーゼ（スミチーム BGA、新日本化学工業社製）、αグルコシダーゼ（天野エンザイム社製）を最終濃度500 μg/mLにて添加し、60℃で60分反応させ、HPLC法にてKMPアグリコン濃度を測定した。アグリコン化率を酸加水分解時のKMPアグリコン濃度を100％として図２に示した。なお、キヌア抽出物のアグリコン化は、βグルコシダーゼ（アロマーゼ H2）以外の酵素を用いた試験では行っていない。
　図２に示すとおり、β－グルコシダーゼ（アロマーゼＨ２）を用いた場合、キヌア抽出物中のＫＭＰ配糖体約７５％までアグリコン化することができたが、西洋ワサビ葉抽出物中のＫＭＰ配糖体については、僅か２～５％程度しかアグリコン化できなかった。同様の結果は、別の種類のβ－グルコシダーゼ（スミチーム BGA）を用いた試験でも確認された。また、αグルコシダーゼではアグリコン化は認められなかった。
Ａ３－２．アグリコン化試験２（キシラナーゼによるアグリコン化）
　西洋わさび葉の熱水抽出物を作製し、KMPアグリコンとして50μg/mL、pH5.0になるように調整した。調整した反応液に、ヘミセルラーゼ「アマノ」90を最終濃度250、500、1000、1500 μg/mLにて添加し，50℃で5時間反応させ、HPLC法にてKMPアグリコン濃度を測定した。アグリコン化率を酸加水分解時のKMPアグリコン濃度を100％として示した。
　図３に示すとおり、キシラナーゼ（ヘミセルラーゼ「アマノ」９０、天野エンザイム社製）で西洋ワサビ葉の熱水抽出物を処理すると、250 μg/mLの酵素では、７０％のアグリコン化を達成するのに５時間の反応を要するのに対し、酵素量を500 μg/mLにすると４時間で９０％超のアグリコン化を達成でき、1000 μg/mLの酵素を用いた場合は２時間で１００％のアグリコン化を達成でき、1500 μg/mLの酵素を用いた場合は１時間で１００％超のアグリコン化を達成できることが確認された。この結果から西洋ワサビ葉抽出物中のＫＭＰ配糖体のアグリコン化にはキシラナーゼが有効であることが分かる。
Ａ３－３．キシラナーゼによる各種植物抽出物中のＫＭＰ配糖体のアグリコン化
　ケール、高菜、キヌア、大根葉、紅茶葉、および西洋わさび葉の熱水抽出物を作製し、KMPアグリコンとして25μg/mL、pH5.0になるように調整した。調整した反応液に、キシラナーゼ（ヘミセルラーゼ「アマノ」90）を最終濃度1250 μg/mLにて添加し、50℃で6時間反応させ、HPLC法にてKMPアグリコン濃度を測定した。アグリコン化率を酸加水分解時のKMPアグリコン濃度を100％として示した。
　図４に示されるように、キヌア抽出物をキシラナーゼで処理しても殆どアグリコン化されないことが判明した。紅茶葉、大根葉、高菜及びケールの抽出物については、キシラナーゼによりキヌア抽出物よりも効率的にアグリコン化されることが確認された。
Ａ３－４．酵素の組み合わせによるアグリコン化
　西洋わさび葉の熱水抽出物を作製し、KMPアグリコンとして50μg/mL、pH5.0になるように調整した。調整した反応液に、キシラナーゼ（ヘミセルラーゼ「アマノ」90）を下記表に示す最終濃度にて添加した。さらにラクターゼまたはβグルコシダーゼ（アロマーゼ）を下記表に示す最終濃度にて添加し，50℃で4時間反応させ、HPLC法にてKMPアグリコン濃度を測定し，複数酵素の組み合わせ効果を確認した。アグリコン化率は、酸加水分解時のKMPアグリコン濃度を100％として示した。
　表２に示されるように、キシラナーゼとラクターゼまたはβグルコシダーゼを組み合わせることによりアグリコン化の効率が相乗的に高まることが判明した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000003
Ａ３－５．キシラナーゼによるアグリコン化の至適条件
　西洋わさび葉の熱水抽出物を作製し、KMPアグリコンとして50μg/mLになるように懸濁した。懸濁液をpH3～6.5に調整し、キシラナーゼ（ヘミセルラーゼ「アマノ」90）を最終濃度500μg/mLにて添加後、50℃で30分反応させpH依存性を検討した。また、pH 5.0に調整した西洋わさび葉の熱水抽出物に、キシラナーゼ（ヘミセルラーゼ「アマノ」90）を最終濃度500μg/mLにて添加後、30～70℃で30分反応させ、HPLC法でKMPアグリコン濃度を測定し、酵素反応の至適条件を確認した。アグリコン化率は酸加水分解時のKMPアグリコン濃度を100％として示した。図５に示されるとおり、キシラナーゼの至適活性ｐＨは４～６であり、至適活性温度５０度付近であることが確認された。
Ａ３－６．アグリコン化の解析
　西洋わさび葉の熱水抽出物を作製し、KMPアグリコンとして50μg/mL、pH5.0になるように調整した。調整した反応液に、キシラナーゼ（ヘミセルラーゼ「アマノ」90）を最終濃度1000 μg/mLにて添加し、50℃で30、60、120分間反応させ、HPLC分析チャートを観察し，西洋わさびの中間体ピークの有無について確認した。
　図６に示されるとおり、キシラナーゼによる西洋ワサビ葉由来KMP配糖体のアグリコン化は、中間体を経由して行われることが確認された。上記２－１、２－２及び２－４の結果を踏まえれば、西洋ワサビ葉のＫＭＰ配糖体をキシラナーゼ及びβ－グルコシダーゼ（ラクターゼ）でアグリコン化する場合、まずキシラナーゼの作用により中間体が生成され、中間体にβ－グルコシダーゼが作用することによりアグリコン型ＫＭＰが生成されると考えられる。
Ａ４．微生物を用いたアグリコン化
　西洋わさび葉熱水抽出物を50μg/mLに調整し、食品から単離した188株の菌種を別々に植菌した。植菌後、37℃で好気培養を行い、24および120時間後に、HPLC法にてKMPアグリコン濃度を測定し，微生物培養により西洋わさびのKMP配糖体がKMPアグリコンに変換されるか検討した。その結果、下記表３に示すとおり、壬生菜漬け、しば漬け、白菜漬け、キムチ、発酵茶、発酵豚、発酵魚、酒麹などの発酵物から単離されたLactobacillus plantarum, L. brevis, L. tucceti, L. sakei, L. pentosus, L. casei, L. kefigranumといった乳酸菌によって、２４時間で９５％以上と効率的に西洋ワサビ葉由来のＫＭＰ配糖体のアグリコン化が可能であることが確認された。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000004
Ａ５．成分分析
 　西洋わさび葉の５０％エタノール抽出物を減圧濃縮してエタノールを除去し、KMPアグリコンとして3 mg/mL、pH5.0になるように調整した。調整した反応液に、キシラナーゼ（ヘミセルラーゼ「アマノ」90）を最終濃度3 mg/mL、ラクターゼを最終濃度0.9 mg/mLにて添加し、50℃で2時間反応させた。その後、105度で15分処理し酵素を失活させた後、凍結乾燥した。得られた酵素処理された西洋わさび葉抽出物サンプルからメタノールを用いて化合物を抽出した。抽出液についてフィルターとスピンカラムを用いて不溶物や低極性成分を除去した。また、試料なしについても同様の抽出操作を行いmock試料とした。mock試料は試料調製やLC-MS分析中に混入するバックグラウンドノイズを確認・除去する為に作製した。各抽出液をLC-MS分析に供し、メタボローム解析を行った。
　その結果、下記の表４に示すとおり、酵素処理によって、アグリコン型のＫＭＰに加え、ケルセチン及びフェルラ酸の含量が有意に増加することが判明した。ケルセチンは、抗酸化作用、抗炎症作用、抗動脈硬化作用、脳血管疾患の予防、抗腫瘍作用、降血圧作用、血管弛緩作用等の生理作用を有することが知られている。フェルラ酸は、抗酸化作用、抗腫瘍作用等の生理作用を有することが知られている。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000005
Ｂ１．低酸素栽培におけるカイワレ大根のKMP配糖体濃度測定
Ｂ１－１．カイワレ大根の栽培
　カイワレ大根は、水をつけた脱脂綿に種が重ならないよう播種した。酸素コントローラーＰｒｏＯｘ１１０及びチャンバー（協同インターナショナル社製）にて酸素濃度を２１．０ｖｏｌ％又は１７．５ｖｏｌ％制御した環境下で1週間栽培した。酸素濃度の制御（低減）は、チャンバー内に窒素を充填して行った。
Ｂ１－２．ケンペロール及びケルセチンの測定
　ケンペロール及びケルセチン量の測定は、それらの配糖体をすべて加水分解し、アグリコンに変換後測定した。実際には次の手順でおこなった。各サンプルをミル粉砕後、粉砕物を２．０ｇ秤量し、７０％エタノールを４０ｍＬ添加後、ポリトロンホモジナイザーで、室温、２０，０００ｒｐｍで１分間懸濁した。懸濁液１ｍＬをガラス試験管に分注・秤量し、２Ｎ塩酸を１ｍＬ添加し、ボルテックスにて混合後、ヒートブロックにて１００℃、３０分間加熱した。加熱終了後５分以上氷冷した。冷却後、ヘキサン５ｍＬを添加し水平に２０回振盪した。冷却遠心機にて４℃、３，０００ｒｐｍ、５分間遠心後、上層を廃棄した。酢酸エチル５ｍＬを添加し、振盪機で室温、２５０ｒｐｍで１０分間水平に振盪した。大型冷却遠心機にて４℃、３，０００ｒｐｍ、５分間遠心後、上層を乾固用のガラス試験管に回収した。下層には再度、酢酸エチ５ｍＬを添加し、振盪機で室温、２５０ｒｐｍで１０分間水平に振盪した。４℃３，０００ｒｐｍで５分間遠心後、上層を乾固用のガラス試験管に回収した。回収した上層は吹付式窒素乾固機にて６０℃で窒素乾固を行った。乾固が終了したら、７０％エタノール水溶液を１ｍＬ添加し、超音波発生装置にて1分間処理してボルテックスにて溶解させた。0.45μmフィルターに溶解液を通した後、ＨＰＬＣ分析に供し、ＫＭＰアグリコン分析を行い、ＫＭＰアグリコン量を求めた。
Ｂ１－３．結果
　酸素濃度２１ｖｏｌ％又は１７．５ｖｏｌ％で栽培したカイワレ大根について測定したケンペロール及びケルセチンの量を図７に示す。酸素濃度１７．５ｖｏｌ％で栽培したカイワレ大根に含まれるＫＭＰ含量 は０．２０７±０．００５ｍｇ／ｇ（平均値±標準偏差、以下同様）であり、酸素濃度２１ｖｏｌ％の通常栽培法方法（ＫＭＰ含量：０．０９６±０．００２ｍｇ／ｇ）と比較して、有意に約２倍に増加した。一方、低酸素条件及び通常条件のカイワレ大根に含まれるケルセチン含量は、それぞれ０．０２±０．００ｍｇ／ｇ及び０．０２±０．０１ｍｇ／ｇであり、低酸素栽培による影響は見られなかった。これらの結果から、栽培時に酸素濃度を低減することにより、ケンペロールの生産量が増加することが確認された。
Ｂ２．低酸素栽培によるフェノール生合成経路への影響
　低酸素栽培による、フェノール生合成経路への影響を検討した。具体的には、ジヒドロケンペロールからケンペロールへの合成及びジヒドロケルセチンからケルセチンへの合成の両方に関与するフラボノールシンターゼ（ＦＬＳ）、並びにジヒドロケンペロールからジヒドロヘルセチンへの合成に関与するフラボノイド３’ヒドロキシラーゼ（Ｆ３′Ｈ）の発現量に対する低温栽培の影響を下記の手順で測定した。ジヒドロケンペロールからケンペロールへの合成、ジヒドロケルセチンからケルセチンへの合成におけるＦＬＳの関与、並びにジヒドロケンペロールからジヒドロヘルセチンへの合成におけるＦ３′Ｈの関与を図８に示す。
Ｂ２－１．カイワレ大根とブロッコリーの栽培方法
　カイワレ大根とブロッコリーは、水をつけた脱脂綿に種が重ならないよう播種した。酸素コントローラーＰｒｏＯｘ１１０及びチャンバー（協同インターナショナル社製）にて酸素濃度を２１．０ｖｏｌ％又は１７．５ｖｏｌ％制御した環境下で１週間栽培した。酸素濃度の制御（低減）は、チャンバー内に窒素を充填しておこなった。
Ｂ２－２．遺伝子発現レベルの測定
　各サンプル（全草）を液体窒素で凍結させ、乳鉢と乳棒で粉砕後、粉砕物を１００ｍｇ秤量した。トータルＲＮＡをＲＮｅａｓｙ　Ｐｌａｎｔ　Ｍｉｎｉ　Ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ，　Ｖａｌｅｎｃｉａ，ＣＡ）を用いて抽出し、ＨｉｇｈーＣａｐａｃｉｔｙ　ｃＤＮＡ　Ｒｅｖｅｒｓｅ　Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ　Ｋｉｔ（Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ） を用いてトータルＲＮＡをｃＤＮＡに逆転写した。ＰＣＲはＴａｑＭａｎ　Ｇｅｎｅ　Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　Ａｓｓａｙｓ ［ｆｌａｖｏｎｏｉｄ３′―ｈｙｄｒｏｘｙｌａｓｅ（Ｆ３′Ｈ））,ｆｌａｖｏｎｏｌ　ｓｙｎｔｈａｓｅ（ＦＬＳ）, ＡＣＴＩＮ]とＴａｑＭａｎ　Ｆａｓｔ　Ａｄｖａｎｃｅｄ　Ｍａｓｔｅｒ　Ｍｉｘ（Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ）を用いて、ＱｕａｎｔＳｔｕｄｉｏＴＭ３　Ｒｅａｌ　Ｔｉｍｅ　ＰＣＲ　Ｓｙｓｔｅｍ（Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ）にて実施した。定量化のための内因性コントロールとしてアクチンを使用した。
Ｂ２－３．結果
　Ｆ３′Ｈ遺伝子の発現レベルを測定した結果を図９に、ＦＬＳ遺伝子の発現レベルを測定した結果を図１０に示す。酸素濃度２１ｖｏｌ％の通常栽培時のＦ３′Ｈ遺伝子発現量を１とした場合に、ケンペロール含量が増加することが確認された酸素濃度１７．５ｖｏｌ％で栽培した場合、カイワレ大根及びブロッコリーの両方でＦ３′Ｈ遺伝子発現量が有意に低下することが確認された。また、ＦＬＳについても、酸素濃度２１ｖｏｌ％で栽培した場合と比較して酸素濃度１７．５ｖｏｌ％で栽培した場合の発現量はカイワレ大根及びブロッコリーの両方で有意に増加することが確認された。これらの結果から、低酸素条件下で栽培すると、アブラナ科植物等のケンペロールを生産する植物において、ジヒドロケンペロールからケンペロールへの代謝反応が活性化され、ジヒドロケンペロールから他の物質への合成が抑制されることが示唆された。
Ｂ３．低酸素栽培による西洋わさびのＫＭＰ生産への影響
Ｂ３－１．西洋ワサビの栽培
　西洋ワサビは、根茎を土壌に播種した。酸素コントローラーＰｒｏＯｘ１１０及びチャンバー（協同インターナショナル社製）にて酸素濃度を２１．０ｖｏｌ％、１８．５ｖｏｌ％、１７．５ｖｏｌ％、又は１６．５ｖｏｌ％に制御した環境下で１週間栽培した。酸素濃度の制御（低減）は、チャンバー内に窒素を充填して行った。
Ｂ３－２．葉の長さ、葉柄の長さの測定方法
　各サンプルから葉、葉柄を切り取り、それぞれを定規にて測定した。
Ｂ３－３．結果
　各酸素濃度条件下で栽培した西洋ワサビの葉について、上記１－２と同じ方法で測定したケンペロール量を図１１に示す。栽培時の酸素濃度の低下に伴って、生産されるケンペロール量が増加することが確認された。図１２及び図１３に示すとおり、酸素濃度を限定することによる葉の長さ及び茎の長さへの有意な影響は見られなかった。
Ｃ．フェニルアラニン及びチロシン添加によるＫＭＰ合成の促進
Ｃ－１．フェニルアラニン又はチロシンからＫＭＰへの生合成経路
　Ｌ－チロシン及びＬ－フェニルアラニンは、ケンペロール生合成の間接的な原料となる。図１４に示すように、Ｌ－チロシンは、ｐ－クマル酸、４－クマロイルＣｏＡ、ナリンゲニンカルコン、ナリンゲニン、ジヒドロケンペロールを経由してケンペロールへの変換され得る。また、Ｌ－フェニルアラニンは、経皮酸、ｐ－クマル酸、４－クマロイルＣｏＡ、ナリンゲニンカルコン、ナリンゲニン、ジヒドロケンペロールを経由してケンペロールへの変換され得る。
Ｃ－２．Ｌ－チロシン又はＬ－フェニルアラニン添加による影響１
　Ｌ－フェニルアラニンを２５、５０、１００、２００、又は４００ｍｇ／Ｌの濃度で含む水溶液、Ｌ－チロシンを２５、５０、１００、２００、又は４００ｍｇ／Ｌの濃度で含む水溶液、並びに、Ｌ－チロシン及びＬ－フェニルアラニンの両方を２５、５０、１００、２００、又は４００ｍｇ／Ｌの濃度で含む水溶液を調製した。被験植物として、カイワレ大根及びブロッコリースプラウトを準備し、前記水溶液のいずれかを１０ｍｌ／日、７日間与え、暗所、酸素濃度２１ｖｏｌ％の条件で栽培した。７日後に、各被験植物についてケンペロール及びケルセチンの含量を上記Ｂ１－２と同様に測定した。カイワレ大根について測定した結果を図１５に、ブロッコリースプラウトについて測定した結果を図１６に示す。カイワレ大根及びブロッコリースプラウトのいずれについても、Ｌ－チロシン及び／又はＬ－フェニルアラニンを与えることにより、ケンペロール含量が増加することが確認された。Ｌ－チロシン及び／又はＬ－フェニルアラニンによるカイワレ大根中のケルセチン含量に対する有意な影響は見られなかった。また、ブロッコリースプラウトについては、Ｌ－チロシン及びＬ－フェニルアラニンの添加に関係なく、ケルセチンは検出されなかった。また、Ｌ－チロシン及び／又はＬ－フェニルアラニンの添加による植物の生育（全長及び重量）への明確な影響は見られなかった。
Ｃ－３．Ｌ－チロシン又はＬ－フェニルアラニン添加による影響２
　　Ｌ－フェニルアラニンを２５又は５０ｍｇ／Ｌの濃度で含む水溶液、及びＬ－チロシンを２５又は５０ｍｇ／Ｌの濃度で含む水溶液を調製した。被験植物として、カイワレ大根を準備し、前記水溶液のいずれかを１０ｍｌ／日、７日間与え、暗所、酸素濃度２１ｖｏｌ％ 又は１７．５ｖｏｌ％の条件で栽培した。７日後に、ケンペロール及びケルセチンの含量を上記Ｂ１－２と同様に測定した結果、図１７に示すとおり、いずれの酸素濃度条件でもＬ－チロシン又はＬ－フェニルアラニンを与えることにより、ケンペロール含量が増加し、低酸素濃度（１７．５ｖｏｌ％）条件下の方が、Ｌ－チロシン又はＬ－フェニルアラニンの添加によるケンペロール含量の上昇率が有意に高まることが確認された。これは、Ｌ－チロシン又はＬ－フェニルアラニンの添加が低酸素濃度条件下での栽培でより有効であることを示す。Ｌ－チロシン又はＬ－フェニルアラニンの添加による植物の生育（全長及び重量）への明確な影響は見られなかった。

Claims (13)

  1. 乾燥重量換算でケンペロールアグリコンを１ｍｇ／ｇ以上含有する、植物抽出物。
  2. 前記ケンペロールアグリコンを１００ｍｇ／ｇ以上含有する、請求項１に記載の植物抽出物。
  3. 更に、乾燥重量換算で、ケルセチンを０．１ｍｇ／ｇ以上含有する、請求項１又は２に記載の植物抽出物。
  4. 西洋ワサビ葉の抽出物である、請求項１～３のいずれかに記載の植物抽出物。
  5. （１）ケンペロール配糖体を含む植物原料を溶媒で抽出すること、及び
    （２）上記（１）で得られた抽出物を加水分解処理すること、
    を含む、請求項１～４のいずれかに記載の植物抽出物を製造する方法。
  6. 前記加水分解処理が酵素または微生物を前記抽出物に作用させることを含む、請求項５に記載方法。
  7. 前記加水分解処理が酵素を前記抽出物に作用させることを含み、前記酵素がキシラナーゼを含む、請求項５または６に記載の方法。
  8. １９体積％以下の酸素濃度または１９３ｈＰａ以下の酸素分圧の条件下で植物を栽培することを含む、単位重量当たりのケペロール及び／又はケンペロール配糖体の含量が増加した植物を製造する方法。
  9. １９体積％以下の酸素濃度または１９３ｈＰａ以下の酸素分圧の条件下で植物を栽培することを含む、植物のケンペロール及び／又はケンペロール配糖体産生能を向上させる方法。
  10. １９体積％以下の酸素濃度または１９３ｈＰａ以下の酸素分圧の条件下で植物を栽培することを含む、ケンペロール及び／又はケンペロール配糖体の産生能が向上した植物を製造する方法。
  11. 前記植物がアブラナ科植物である、請求項８～１０のいずれかに記載の方法。
  12. 請求項８～１１のいずれかに記載の方法によって得られる植物。
  13. 請求項１２に記載の植物からケンペロール及びケンペロール配糖体を抽出することを含む、ケンペロール及びケンペロール配糖体を含む抽出物を製造する方法。 
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