WO2022045093A1 - 新規化合物、αシヌクレイン凝集体結合剤及びその利用 - Google Patents

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真人 樋口
麻衣子 小野
明栄 張
武志 山本
健志 若林
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Ono Pharmaceutical Co Ltd
Eisai R&D Management Co Ltd
Takeda Pharmaceutical Co Ltd
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Original Assignee
Ono Pharmaceutical Co Ltd
Eisai R&D Management Co Ltd
Takeda Pharmaceutical Co Ltd
National Institutes For Quantum Science and Technology
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Definitions

  • the present invention relates to a novel compound, an ⁇ -synuclein aggregate binder and its use, and more specifically, a novel compound, an ⁇ -synuclein aggregate binder containing the novel compound, a composition for optical imaging of an ⁇ -synuclein aggregate, ⁇ .
  • the present invention relates to a composition for radiative imaging of synuclein aggregates, an optical imaging method of ⁇ -synuclein aggregates in the brain, a radiative imaging method of ⁇ -synuclein aggregates in the brain, and an intermediate for synthesizing a novel compound.
  • Alpha-synuclein aggregates form the core pathology of Parkinson's disease, Lewy body dementia (DLB), and multiple system atrophy (MSA), and are thought to have a close causal relationship with neurodegenerative disease. Since the definitive diagnosis of such a disease is made by using the presence of ⁇ -synuclein aggregate (also referred to as “ ⁇ -synuclein lesion” in the present specification) as an index in the pathological analysis of the autopsy brain, the diagnosis cannot be confirmed before life. However, if ⁇ -synuclein aggregates can be visualized in the living brain, it will be possible to obtain information close to definitive information (confirmed diagnosis) regarding the diagnosis of these diseases from an early stage.
  • ⁇ -synuclein aggregates can be visualized in the living brain, it will be possible to obtain information close to definitive information (confirmed diagnosis) regarding the diagnosis of these diseases from an early stage.
  • ⁇ -synuclein aggregates can be visualized in the living brain of a disease model animal, it can be useful for evaluating the efficacy of candidate substances for therapeutic or prophylactic agents targeting ⁇ -synuclein aggregates by imaging over time.
  • [ 11C ] BF-227 is a PET (positron emission tomography) probe that has been conventionally shown to bind to ⁇ -synuclein in the living brain (Non-Patent Documents 1 and 2).
  • [ 11C ] BF-227 does not have sufficient binding affinity for ⁇ -synuclein aggregates, and among the above-mentioned diseases, ⁇ -synuclein lesions can be detected only in some MSA patients.
  • [11C] BF-227 has a problem of non-specific accumulation in the brain and a problem of low binding selectivity to ⁇ -synuclein aggregate because it binds to amyloid ⁇ aggregate.
  • Patent Document 1 a compound for imaging (imaging) tau protein accumulated in the brain (see Patent Document 1). Since the compound described in Patent Document 1 can image tau protein accumulated in the brain, the technique of Patent Document 1 is useful for the treatment and prevention of diseases caused by the accumulation of tau protein, for example, Alzheimer's disease (AD). However, Patent Document 1 does not describe binding to ⁇ -synuclein aggregates.
  • the present invention has been made in view of the above circumstances, and is an ⁇ -synuclein aggregate binder having high binding selectivity to ⁇ -synuclein aggregates, an imaging method using this ⁇ -synuclein aggregate conjugate, and ⁇ -synuclein. It is an object of the present invention to provide a novel compound that can be used as an aggregate binder.
  • the present inventors have found that a compound having a specific structure has high binding selectivity to ⁇ -synuclein aggregates, and have further studied to complete the present invention. More specifically, the present invention provides the following.
  • One aspect of the present invention is a compound represented by the following formula (I) or (II), a pharmaceutically acceptable salt thereof, or a solvate thereof.
  • ⁇ -synuclein aggregate binder having high binding selectivity to ⁇ -synuclein aggregates.
  • a and / or B is intended to be at least one of A and B.
  • the term "medically acceptable salt” refers to a salt that is not harmful to mammals, especially humans.
  • Pharmaceutically acceptable salts can be formed using non-toxic acids or bases, including inorganic acids or bases, or organic acids or bases.
  • examples of pharmaceutically acceptable salts include metal salts formed from aluminum, calcium, lithium, magnesium, potassium, sodium and zinc, or lysine, N, N'-dibenzylethylenediamine, chloroprocine, choline, There are organic salts formed from diethanolamine, ethylenediamine, meglumine (N-methylglucamine), prokine and the like.
  • pharmaceutically acceptable salts include acid-added salts and base-added salts.
  • the term "medically acceptable carrier” means a pharmaceutically acceptable material, composition, or vehicle, such as an aqueous solution of physiological saline, a liquid or solid filler, a diluent, a solvent, or an encapsulating material.
  • pharmaceutically acceptable carriers include water, saline, saline or phosphate buffered saline (PBS), sodium chloride injection, Ringer injection, isotonic dextrose injection, sterile water injection. , Dextrose, and lactic acid Ringer injection.
  • the term "effective amount” refers to the amount of a compound or composition capable of obtaining the desired effect.
  • the effective amount refers to the amount of compound or composition capable of optical or radioimaging of substances accumulating in the brain, such as ⁇ -synuclein aggregates.
  • solvate means a solvent-containing compound formed by the association of one or more solvent molecules with respect to the compound.
  • Solvates include, for example, monosolvates, disolvates, trisolvates, and tetrasolvates.
  • the solvate also contains a hydrate.
  • hydrate means a compound or a salt thereof further containing a stoichiometric or non-stoichiometric amount of water constrained by a non-covalent intermolecular force. Hydrate includes, for example, monohydrate, dihydrate, trihydrate, tetrahydrate and the like.
  • treatment means reducing or ameliorating the progression, severity and / or duration of a disease or condition.
  • prevention means reducing the risk of acquiring or developing a given disease or condition, or reducing or suppressing the recurrence, initiation, or progression of one or more symptoms of a given disease or condition. ..
  • binding property means the binding strength of a compound to a specific protein aggregate.
  • binding selectivity means that when a compound's binding to a particular protein aggregate is compared to its binding to other protein aggregates, there is a difference in their binding (a particular protein agglomeration). (Higher or lower binding to aggregates than to other protein aggregates). “High binding selectivity” means that the above difference in binding properties is large. For example, when a compound has "high binding selectivity to ⁇ -synuclein aggregates", there is a large difference in the binding property of the compound to ⁇ -synuclein aggregates and other protein aggregates, and there is a large difference in the binding properties of ⁇ -synuclein aggregates. It shows that the aggregate has higher binding properties.
  • the present invention is a (E) -1-fluoro-3-((2- (4- (5- (methylamino) pyrazine-2-yl) porcine) porcine represented by the following structural formula (I). -1-en-3-in-1-yl) benzo [d] thiazole-6-yl) oxy) propane-2-ol, or (E) -1-fluoro-represented by the following structural formula (II) 3-((2- (4- (2- (Methylamino) pyrimidine-5-yl) buta-1-en-3-in-1-yl) benzo [d] thiazole 6-yl) oxy) propane-2 -Providing an oar, a pharmaceutically acceptable salt thereof, or a solvate thereof.
  • compound (I) and compound (II) are a compound in which one or more atoms are radioisotopes of the atom, a salt thereof, or a solvate thereof.
  • the radioisotope is selected from the group consisting of 15 O, 13 N, 11 C, 18 F and the like, but is not particularly limited.
  • the radioisotope is 11 C or 18 F.
  • the half-life of 11C is about 20 minutes and the half-life of 18F is about 110 minutes
  • the compound labeled with 18F has higher commercial utility value. Conceivable. Therefore, most preferably, the radioisotope is 18F .
  • a methylamino group attached to a pyrimidine ring or a pyrazine ring, and a 3-fluoro-2-hydroxypropoxy group attached to a benzothiazole ring (-O-CH 2 -CH (OH) -CH 2 F).
  • a benzothiazole ring -O-CH 2 -CH (OH) -CH 2 F).
  • the 3-fluoro-2-hydroxypropoxy group attached to the benzothiazole ring is a group containing a radioisotope.
  • the fluorine atom in the 3-fluoro-2-hydroxypropoxy group is the radioisotope.
  • the radioisotope-containing compound (I) is preferably [ 18 F]-(E) -1-fluoro-3-((2- (4- (5- (methylamino) pyrazine-)-. 2-Il) Buta-1-en-3-in-1-yl) Benzo [d] Thiazole-6-yl) Oxy) Propane-2-ol.
  • the radioisotope-containing compound (II) is preferably [ 18 F]-(E) -1-fluoro-3-((2- (4- (2- (methylamino) pyrimidin-). 5-Il) Buta-1-en-3-in-1-yl) Benzo [d] Thiazole 6-yl) Oxy) Propane-2-ol.
  • X and Y are nitrogen atoms on one side and unsubstituted carbon atoms on the other side.
  • "unsubstituted carbon atom” indicates CH. That is, in the formula (III), when X is a nitrogen atom (N), Y is an unsubstituted carbon atom (CH), and when X is an unsubstituted carbon atom (CH), Y is a nitrogen atom (N). ).
  • R 1 is a hydroxy group or a group represented by the following formula (i).
  • Ts represents a p-toluenesulfonyl group
  • THP represents a tetrahydro-2H-pyran-2-yl group
  • * represents a binding position with a benzothiazole ring.
  • R2 is a hydrogen atom or a tert-butoxycarbonyl (Boc) group.
  • intermediate compounds are suitably used for the synthesis of compound (I) and compound (II), and further for the synthesis of radioisotope-labeled compound (I) and compound (II). Moreover, these intermediate compounds may be salts.
  • compound (I) or compound (II) contains various isomers such as stereoisomers (including optical isomers and rotational isomers), tautomers, or polar isomers, these isomers are contained.
  • the body is also included in compound (I) or compound (II).
  • Each of these isomers can be obtained as a single product by a known synthesis method and separation method.
  • Compound (III) can also include various isomers.
  • Compound (I), compound (II) or compound (III) may also be a crystal produced by a known crystallization method.
  • the compound (I) and the compound (II) and the intermediate compound (III) can be produced according to the method according to the production method shown below. If desired, deprotection reaction, amidation reaction, ureaization reaction, alkylation reaction, Mitsunobu reaction, oxidation reaction, reduction reaction, halogenation reaction, coupling reaction, nucleophilic addition reaction with carboanion, Grignard reaction, dehydration.
  • the compound (I), the compound (II) and the compound (III) can be produced by carrying out the reaction or the like individually or in combination of two or more thereof.
  • reaction conditions such as the solvent, the reagent and the temperature in each reaction may be appropriately set based on the common general knowledge of those skilled in the art.
  • the protecting and deprotecting reaction of the functional group is carried out according to a known reaction method, a reference example or a method described in Examples, and a conventional protecting group is used.
  • Compound (2) can be produced by reacting compound (1) with a phosphorous acid triester.
  • TBS is a tert-butyldimethylsilyl group.
  • Compound (III-i) can be produced by the Horner-Wadsworth-Emmons reaction (HWE reaction) between compound (2) and compound (3) described later, and the deprotection reaction that proceeds during the reaction.
  • HWE reaction Horner-Wadsworth-Emmons reaction
  • X and Y are nitrogen atoms on one side and unsubstituted carbon atoms (CH) on the other side.
  • Compound (5) can be produced by an alkylation reaction such as a Mitsunobu reaction between compound (III-i) and compound (4) described later.
  • Compound (I) and compound (II) can be produced by the deprotection reaction of compound (5).
  • the compound (3) used in the production method A can be produced from the compound (6) by the following method shown in the production scheme 2.
  • H represents a halogen atom (eg, chlorine atom, bromine atom, iodine atom).
  • the compound (7) can be produced by a coupling reaction between the compound (6) and 2-propyne-1-ol or the like.
  • Compound (3) can be produced by an oxidation reaction of compound (7).
  • the compound (4) used in the production method A can be produced from the compound (8) by the following method shown in the production scheme 3.
  • Compound (9) can be produced by the protective reaction of compound (8).
  • Compound (4) can be produced by the debenzyl reaction of compound (9).
  • the compound (5) used in the production method A can also be produced from the compound (2) by the following method shown in the production scheme 4.
  • Compound (10) can be produced by the deprotection reaction of compound (2).
  • Compound (11) can be produced by an alkylation reaction such as a Mitsunobu reaction between compound (10) and compound (4).
  • Compound (5) can also be produced by HWE reaction between compound (11) and compound (3).
  • Compound (13) can be produced by an alkylation reaction to compound (III-i) by an oxylane ring-opening reaction of compound (12).
  • Compound (I) and compound (II) can be produced by the deprotection reaction of compound (13).
  • Compound (15) can be produced by an alkylation reaction such as a Mitsunobu reaction between compound (III-i) and compound (14) described later.
  • Compound (16) can be produced by the deprotection reaction of compound (15).
  • Compound (III-iii) can be produced by the protective reaction of compound (16).
  • the compound (14) used in the production method D can be produced by the following method shown in the production scheme 8.
  • Compound (18) can be produced by the protective reaction of compound (17).
  • Compound (14) can be produced by the debenzyl reaction of compound (18).
  • the invention provides an alpha-synuclein aggregate binder.
  • the ⁇ -synuclein aggregate binder of the present embodiment (hereinafter, also referred to as a binder or an ⁇ -synuclein aggregate binder) is compound (I) or compound (II), a pharmaceutically acceptable salt thereof, or a solvate thereof. Contains substances.
  • Compound (I) and compound (II) have higher binding selectivity to ⁇ -synuclein aggregates than aggregates of tau protein and amyloid ⁇ .
  • pharmaceutically acceptable salts of compound (I) and compound (II), and solvates of compound (I) and compound (II) are also ⁇ -synucleins rather than aggregates of tau protein and amyloid ⁇ .
  • compound (I) and compound (II) fluoresce.
  • one or more atoms can be used as a radioisotope of the atom. Therefore, the binder of the present embodiment can be used as a molecular probe for optical imaging or radiographic imaging of ⁇ -synuclein aggregates accumulated in the brain.
  • ⁇ -synuclein is a protein localized in neuronal synapses even in a normal brain, and ⁇ -synuclein aggregates are ⁇ -synuclein aggregates.
  • the ⁇ -synuclein aggregate binder can contain a pharmaceutically acceptable carrier.
  • pharmaceutically acceptable carriers include water, saline, saline or phosphate buffered saline (PBS), sodium chloride injection, Ringer injection, isotonic dextrose injection, sterile water injection. There are solutions, dextrose, and lactic acid Ringer injection.
  • the content of compound (I) or compound (II) contained in the ⁇ -synuclein aggregate binder, a pharmaceutically acceptable salt thereof, or a solvate thereof, and a pharmaceutically acceptable carrier is not particularly limited. These contents are the type of compound used; the age, weight, health status, sex and dietary content of the mammal to be administered; the number of administrations and the route of administration; the treatment period; other drugs used at the same time, etc. , Determined by various factors.
  • the pharmaceutically acceptable carrier content can be 1 to 99% by weight of the ⁇ -synuclein aggregate binder.
  • the ⁇ -synuclein aggregate binder is prepared so that compound (I) or compound (II) can be administered, for example, in an amount of 5 ng / kg to 5 mg / kg per body weight (kg) of the subject. ..
  • the lower limit of the amount of the compound is 5 ng / kg or more, 0.01 mg / kg or more, 0.05 mg / kg or more, or 0.1 mg / kg or more.
  • the upper limit of the amount of the compound is 5 mg / kg or less, 3 mg / kg or less, 1 mg / kg or less, or 20 ⁇ g / kg or less.
  • the present invention provides a composition for optical imaging of ⁇ -synuclein aggregates.
  • the composition for optical imaging of the ⁇ -synuclein aggregate of the present embodiment contains the above-mentioned binder according to the present embodiment.
  • the optical imaging includes in vitro, ex vivo, and in vivo imaging.
  • optical imaging examples include a fluorescence microscope measurement method, a multiphoton imaging method, a two-photon imaging method, and a near-infrared fluorescence imaging method.
  • composition for optical imaging can contain a pharmaceutically acceptable carrier.
  • pharmaceutically acceptable carriers include water, saline, saline or phosphate buffered saline (PBS), sodium chloride injection, Ringer injection, isotonic dextrose injection, sterile water injection. There are solutions, dextrose, and lactic acid Ringer injection.
  • the content of compound (I) or compound (II) contained in the composition for optical imaging, a pharmaceutically acceptable salt thereof, or a solvate thereof, and a pharmaceutically acceptable carrier is not particularly limited. These contents are the type of compound used; the age, weight, health status, sex and dietary content of the mammal to be administered; the number of administrations and the route of administration; the treatment period; other drugs used at the same time, etc. , Determined by various factors.
  • the pharmaceutically acceptable carrier content can be from 1 to 99% by weight of the optical imaging composition.
  • the composition for optical imaging contains compound (I) or compound (II), for example, the amount of compound (mg) per subject body weight (kg) is 0.01 mg / kg to 5 mg / kg, preferably 0.05 mg. It is prepared so that it can be administered in an amount of / kg to 3 mg / kg, more preferably 0.1 mg / kg to 1 mg / kg.
  • composition for radiation imaging of ⁇ -synuclein aggregates contains the above-mentioned binder according to the present embodiment.
  • the radiation imaging includes in vitro, ex vivo, and in vivo imaging.
  • Examples of radiation imaging include positron emission tomography (PET), single photon emission tomography (SPECT), and autoradiography.
  • PET positron emission tomography
  • SPECT single photon emission tomography
  • autoradiography autoradiography
  • composition for radiation imaging can contain a pharmaceutically acceptable carrier.
  • pharmaceutically acceptable carriers include water, saline, saline or phosphate buffered saline (PBS), sodium chloride injection, Ringer injection, isotonic dextrose injection, sterile water injection. There are solutions, dextrose, and lactic acid Ringer injection.
  • the content of compound (I) or compound (II) contained in the composition for radiation imaging, a pharmaceutically acceptable salt thereof, or a solvate thereof, and a pharmaceutically acceptable carrier is not particularly limited. These contents are the type of compound used; the age, weight, health status, sex and dietary content of the mammal to be administered; the number of administrations and the route of administration; the treatment period; other drugs used at the same time, etc. , Determined by various factors.
  • the pharmaceutically acceptable carrier content can be from 1 to 99% by weight of the radioimaging composition.
  • composition for radiation imaging contains compound (I) or compound (II), for example, the amount of the compound per body weight (kg) of the subject is 5 ng / kg to 5 mg / kg, preferably 5 ng / kg to 20 ⁇ g / kg. Prepared for administration in volume.
  • the present invention provides a diagnostic agent for a disease associated with ⁇ -synuclein aggregates, or a companion diagnostic agent for the treatment or prevention of the disease.
  • the diagnostic agent for a disease related to ⁇ -synuclein aggregates of the present embodiment, or the companion diagnostic agent for the treatment or prevention of the disease (hereinafter, also referred to as a companion diagnostic agent) is the above-mentioned binding agent according to the present embodiment.
  • a companion diagnostic drug for treatment is a diagnostic drug for determining whether or not treatment can be expected when a disease is found.
  • a companion diagnostic drug for prevention is a diagnostic drug for predicting future onset or determining whether prevention to suppress the onset is expected when it is found to be a precursor state of the disease. be.
  • the diagnostic agent Using the diagnostic agent according to the present embodiment, data on the amount and / or distribution amount of ⁇ -synuclein aggregates in the brain obtained from the subject is obtained with the disease and the amount and / or distribution amount of ⁇ -synuclein aggregates obtained in advance. By collating with the correlation, it is possible to make a diagnosis regarding the target disease (specifically, the presence or absence of the disease, the severity, the possibility of seizure, etc.).
  • a companion diagnostic agent data on the amount and / or distribution of ⁇ -synuclein aggregates in the brain obtained from the subject can be obtained with the disease and the amount and / or distribution of ⁇ -synuclein aggregates in the brain obtained in advance.
  • the disease state of the target can be grasped. Therefore, based on this, a disease prevention / treatment plan (type, combination, dose, use, etc. of the prophylactic or therapeutic agent to be administered) can be formulated.
  • One embodiment of the present invention is a pharmaceutical for treating or preventing a disease associated with ⁇ -synuclein aggregates, which is administered based on data on the amount and / or distribution of ⁇ -synuclein aggregates in the brain obtained by companion diagnostics. It also relates to the medicines given in the plan.
  • the diagnostic kit for diseases related to substances accumulated in the brain of the present invention includes the above-mentioned binder according to the present embodiment.
  • Substances that accumulate in the brain include at least ⁇ -synuclein aggregates, and other examples include tau protein or amyloid ⁇ aggregates.
  • Diseases associated with substances that accumulate in the brain include at least ⁇ -synuclein aggregate-related diseases, such as Parkinson's disease, Lewy body dementias (DLB), and multiple system atrophy (MSA). Can be mentioned.
  • Other diseases associated with substances that accumulate in the brain include Alzheimer's disease (AD) and frontotemporal lobar degeneration, which are diseases associated with aggregates of tau protein or amyloid ⁇ .
  • AD Alzheimer's disease
  • frontotemporal lobar degeneration which are diseases associated with aggregates of tau protein or amyloid ⁇ .
  • the binder of this embodiment has higher binding selectivity to ⁇ -synuclein aggregates than aggregates of tau protein and amyloid ⁇ .
  • the compound described in Patent Document 1 has higher binding property to the tau protein aggregate than the ⁇ -synuclein aggregate.
  • the diagnostic kit comprises a compound (I) or compound (II) having high binding selectivity to ⁇ -synuclein aggregates, a pharmaceutically acceptable salt thereof or a solvate thereof, and a tau protein. It can contain both other compounds having high binding selectivity to aggregates (eg, compounds described in Patent Document 1).
  • a diagnostic kit by comparing the former detection result (amount and / or distribution of detected light or radiation) with the latter detection result, which substance is present in each imaged region. I can identify it. Specifically, ⁇ -synuclein aggregates and tau protein aggregates can be classified, and the abundance of each can be quantified.
  • the ratio of the binding property to the ⁇ -synuclein aggregate to the binding property to the tau protein aggregate is determined by the binder of the present embodiment and a substance having high binding selectivity to the tau protein aggregate (for example, Patent Document).
  • a substance having high binding selectivity to the tau protein aggregate for example, Patent Document.
  • Each of the compounds described in 1) is specified in advance. Then, if the amount ratio of light or radiation in each region of the brain after administration of the former and the latter in the subject is measured, ⁇ -synuclein aggregates can be found in the region due to the relationship between the ratio specified in advance and the measured dose ratio. It is possible to classify which of the tau protein aggregates is present and quantify each amount.
  • the above-mentioned diagnostic kit of the present embodiment can be further used as a diagnostic kit in combination with an amyloid ⁇ imaging agent.
  • the diagnostic kit in which the diagnostic kit of the present embodiment and the imaging agent of amyloid ⁇ are combined can identify which substance is present in each imaged region. Specifically, ⁇ -synuclein aggregates, tau protein aggregates, and amyloid ⁇ aggregates can be classified, and the abundance of each can be quantified. Therefore, it is possible to diagnose a disease associated with ⁇ -synuclein aggregate, a disease related to tau protein, and / or a disease associated with amyloid ⁇ with high accuracy.
  • One embodiment of the present invention is a pharmaceutical for treating or preventing a disease related to ⁇ -synuclein aggregates, and the amount of a substance accumulated in the brain containing ⁇ -synuclein aggregates obtained by the diagnostic kit according to the present embodiment. And / or related to drugs administered in a dosing regimen based on data on distribution.
  • the invention provides an optical imaging method.
  • the optical imaging method of the present embodiment is a first method, which is emitted from the living body brain of a subject to which the binder according to the present embodiment is administered, after irradiating the living body brain with light of the first wavelength from outside the brain. Includes a step of detecting light having a second wavelength different from that of.
  • the binder transferred to the living brain binds to the ⁇ -synuclein aggregate present in the living brain.
  • Light of the first wavelength that excites the binder is irradiated from outside the brain to the living body brain of the subject to which the binder is administered, and light of the second wavelength emitted from the binder in the brain (for example, fluorescence).
  • optical imaging (imaging) of ⁇ -sinucrane aggregates can be performed.
  • Mammals include, for example, humans, rats, mice, rabbits, guinea pigs, hamsters, monkeys, dogs, ferrets, or mini pigs.
  • the administration method is not particularly limited, and examples thereof include oral administration and parenteral administration such as intravenous administration or intraperitoneal administration. Intravenous administration or intraperitoneal administration is preferable. Most preferably, it is administered intravenously.
  • the dose is preferably 0.01 mg / kg to 5 mg / kg, 0.05 mg / kg to 3 mg / kg, or 0.1 mg / kg to 1 mg / kg, most preferably 0.1 mg / kg to. It is 1 mg / kg.
  • the invention provides a radiation imaging method.
  • the radioimaging method of the present embodiment comprises compound (I) or compound (II) in which one or more atoms are radioisotopes of the atom, a pharmaceutically acceptable salt thereof, or a solvate thereof.
  • the step includes a step of detecting the radiation emitted from the living brain of the subject to which the binder according to the present embodiment is administered.
  • the binder transferred to the living brain binds to the ⁇ -synuclein aggregate present in the living brain.
  • the radiation imaging imaging
  • mammals examples include, for example, humans, rats, mice, rabbits, guinea pigs, hamsters, monkeys, dogs, ferrets, or mini pigs.
  • the mammal is a human.
  • the administration method is not particularly limited, and examples thereof include oral administration and parenteral administration such as intravenous administration or intraperitoneal administration. Intravenous administration or intraperitoneal administration is preferable. Most preferably, it is administered intravenously.
  • the dose is preferably 5 ng / kg to 5 mg / kg, more preferably 5 ng to 20 ⁇ g / kg.
  • the dose of radioactivity is preferably 37 MBq to 7.4 GBq per individual, and more preferably 370 MBq to 3,700 MBq.
  • the present invention provides a method for screening a therapeutic or prophylactic agent for a disease associated with ⁇ -synuclein aggregates in the brain.
  • the method for screening a disease related to ⁇ -synuclein aggregates in the brain of the present embodiment or a preventive agent is an optical imaging according to the present embodiment before and after administration of a candidate substance to a subject. It comprises the step of selecting a candidate substance based on the difference in the amount and / or distribution of light or radiation detected by the method or radiation imaging method.
  • the subject and administration method are the same as those described in the above-mentioned [optical imaging method] and [radiation imaging method].
  • the candidate substance is the disease or symptom.
  • the candidate compound may be useful as a therapeutic compound for the disease or condition.
  • data on the amount (intensity) and / or distribution of light or radiation such as fluorescence of the binder before and after administration of the candidate substance obtained from the subject to which the candidate substance was administered was obtained in advance for feeding the candidate substance without administration.
  • changes in the amount and / or distribution of light or radiation, such as the fluorescence of the binder before and after the onset of the disease associated with ⁇ -synuclein aggregates in the brain in animals. Then, the increase in the light or radiation dose such as fluorescence observed after the onset of the disease is suppressed by the administration of the candidate substance, and / or the light or radiation dose such as the fluorescence is suppressed after the administration of the candidate substance.
  • Candidate substances may be useful as prophylactic compounds for the disease or condition if they show values close to those of normal mammals as before administration. Similarly, the change in the distribution of light or radiation such as fluorescence observed after the onset of the disease is suppressed by the administration of the candidate substance, and / or the change in the distribution of light or radiation such as fluorescence is the candidate substance.
  • the candidate substance may be useful as a preventive compound for the disease or symptom after administration of the above, even if the distribution is close to that in a normal mammal as before administration.
  • the present invention provides a method for quantifying or determining the accumulation of ⁇ -synuclein aggregates in the brain.
  • the above-mentioned binder containing compound (I) or compound (II), a pharmaceutically acceptable salt thereof, or a solvate thereof is administered.
  • the detection includes a step of irradiating the living body brain of the subject with light of a first wavelength from outside the brain, and then detecting light of a second wavelength different from the first wavelength emitted from the brain.
  • the accumulation of ⁇ -synuclein aggregates in the brain is quantified or determined based on the amount and / or distribution of the emitted light.
  • This method is a method of quantifying or determining the accumulation of ⁇ -synuclein aggregates in the brain by optical imaging.
  • the subject and administration method are the same as those described in the above [optical imaging method].
  • compound (I) or compound (II), wherein one or more atoms are radioactive isotopes of the atom is administered, and the amount of the detected radiation and / Or, based on the distribution, the accumulation of ⁇ -synuclein aggregates in the brain is quantified or determined.
  • This method is a method for quantifying or determining the accumulation of ⁇ -synuclein aggregates in the brain by radioimaging.
  • Quantifying the accumulation of ⁇ -synuclein aggregates in the brain and in the brain by determining the difference between the amount and / or distribution of detected light or radiation of the subject and that of other normal mammals. It is possible to determine the presence or absence of accumulation of ⁇ -synuclein aggregates.
  • the present invention provides a method for determining the classification and accumulation of substances that accumulate in the brain.
  • the method for determining the classification and accumulation of substances accumulating in the brain of the present invention comprises a binding according to the present embodiment comprising compound (I) or compound (II), a pharmaceutically acceptable salt thereof, or a solvate thereof.
  • the amount of light detected in the first step including the second step of detecting the light of the fourth wavelength different from the third wavelength emitted from the brain after irradiating the light of the wavelength of Based on the and / or distribution data and the amount and / or distribution data of the light detected in the second step, the classification and accumulation of the substances accumulated in the brain are determined.
  • This method is a method of determining the classification and accumulation of substances accumulated in the brain by optical imaging.
  • the subject and administration method are the same as those described in the above [optical imaging method].
  • the first step of detecting the light emitted from the brain caused by the administration of a binder having high binding selectivity to ⁇ -synuclein aggregates, and the substance having high binding selectivity to tau protein aggregates in the same subject Since it includes both a second step of detecting the light emitted from the brain due to administration, the detection result of the first step (amount and / or distribution of the detected light) and the detection result of the second step. By comparing with, it is possible to determine the classification and accumulation of whether or not the substance accumulated in the brain is ⁇ -synuclein aggregate and / or tau protein aggregate.
  • compound (I) or compound (II), wherein one or more atoms are radioactive isotopes of the atom In another aspect of the method of determining the classification and accumulation of substances accumulating in the brain of this embodiment, compound (I) or compound (II), wherein one or more atoms are radioactive isotopes of the atom.
  • a second step of detecting radiation emitted from the brain of the subject to which a substance having high binding selectivity (for example, a compound described in Patent Document 1) is administered at a time different from that of the first step is included.
  • This method is a method of determining the classification and accumulation of substances accumulated in the brain by radiation imaging.
  • One aspect of the present invention is a compound represented by the following formula (I) or (II), a pharmaceutically acceptable salt thereof, or a solvate thereof.
  • One aspect of the present invention is an ⁇ -synuclein aggregate binder containing the compound, a pharmaceutically acceptable salt thereof, or a solvate thereof.
  • One aspect of the present invention is a composition for optical imaging of ⁇ -synuclein aggregates containing the binder.
  • One aspect of the present invention is a composition for radiation imaging of ⁇ -synuclein aggregates containing the binder.
  • One aspect of the present invention is a second aspect different from the first wavelength emitted from the brain after irradiating the living body brain of the subject to which the binding agent is administered with light having a first wavelength from outside the brain. It is an optical imaging method of ⁇ -synuclein aggregates in the brain, which comprises a step of detecting light of a wavelength.
  • One aspect of the present invention is a radiation imaging method for ⁇ -synuclein aggregates in the brain, which comprises a step of detecting radiation emitted from the living brain of a subject to which the binder is administered.
  • One aspect of the present invention is an intermediate for synthesizing the compound represented by the following formula (III).
  • One of X and Y is a nitrogen atom (N) and the other is an unsubstituted carbon atom (CH) (that is, if X is a nitrogen atom, Y is an unsubstituted carbon atom (CH). , If X is an unsubstituted carbon atom (CH), then Y is a nitrogen atom); R 1 is a hydroxy group or a group represented by the following formula (i);
  • Ts represents a p-toluenesulfonyl group and represents.
  • THP represents a tetrahydro-2H-pyran-2-yl group and represents * Represents the binding position with the benzothiazole ring.
  • R2 is a hydrogen atom or a tert-butoxycarbonyl (Boc) group).
  • One aspect of the present invention is a diagnostic kit containing the compound (I) or compound (II) having high binding selectivity to ⁇ -synuclein aggregates.
  • the "room temperature" in the following production examples usually indicates about 10 ° C to about 35 ° C. % Indicates weight% unless otherwise specified. Further, with respect to the description of the compound used in each production example, "manufactured in Reference Example (Example) X" is intended to include the case of “manufactured in the same manner as in Reference Example (Example) X”.
  • elution in column chromatography of the production example was performed under observation by TLC (Thin Layer Chromatography, thin layer chromatography).
  • TLC Thin Layer Chromatography, thin layer chromatography
  • 60 F254 manufactured by Merck was used as the TLC plate
  • the solvent used as the elution solvent in the column chromatography was used as the developing solvent.
  • a UV detector was used for detection.
  • M Molar concentration DMSO-d 6 : Deuterated dimethyl sulfoxide 1 H NMR: Proton nuclear magnetic resonance DIEA: N-ethyl-N-isopropylpropane-2-amine DMF: N, N-dimethylformamide (also referred to as "dimethylformamide" in the present specification).
  • THF Tetrahydrofuran MeOH: Methanol EtOH: Ethanol DMSO: Dimethyl sulfoxide
  • TEA Triethylamine
  • TFA Trifluoroacetic acid.
  • Methyl iodide (3.45 ml) was added to a solution of tert-butyl (5-iodopyrazine-2-yl) carbamate (13.7 g) and cesium carbonate (20.9 g) in DMF (85 ml) prepared in Reference Example 2. Added at ° C. The mixture was stirred at room temperature from 0 ° C. overnight, cooled to 0 ° C. and diluted with water. The precipitated solid was collected by filtration, washed with water and dried to give the title compound (13.0 g) as a beige solid.
  • the filtrate was concentrated under reduced pressure, the residue was diluted with ethyl acetate, acidified with a 5% citric acid aqueous solution, filtered through cerite, and the filtrate was extracted with ethyl acetate.
  • the extract was washed with water and brine, dried over anhydrous sodium sulfate, and concentrated under reduced pressure through a silica gel pad to give the title compound (10.2 g) as a brown solid.
  • the precipitated solid was collected by filtration, washed with water and ethyl acetate, and dried.
  • the filtrate and washing solution were combined and extracted with ethyl acetate.
  • the extract was washed with water and brine, dried over anhydrous sodium sulfate, and concentrated under reduced pressure.
  • the solid residue was suspended in ethyl acetate, and the solid obtained by filtration was washed with ethyl acetate and dried.
  • This solid and the solid collected by filtration before extraction were suspended in ethyl acetate, and the solid obtained by filtration was washed with ethyl acetate and dried to give the title compound (1.07 g) as a yellow solid.
  • Example 8 (E) -3-((2- (4- (5-((tert-butoxycarbonyl) (methyl) amino) pyrazine-2-yl) pig-1-en-3-in-1-) Il) Benzo [d] Thiazole-6-yl) Oxy) -2-((Tetrahydro-2H-pyran-2-yl) Oxy) Propyl 4-methylbenzenesulfonate
  • Example 10 Production Example 1 of [ 18 F] SCAL-T-06
  • SPAR-T-06 (hereinafter, [ 18 F] SPAR-T-06) having a fluorine atom of 18 F was produced.
  • Example 11 Production Example 2 of [ 18 F] SCAL-T-06 [ 18F ] SCAL-T-06 was produced by the following scheme.
  • Optical imaging of human brain Postmortem human brains were obtained from autopsy performed on patients with Lewy body dementia (DLB) and patients with Alzheimer's disease (AD). Frozen DLB tissue was sliced 20 ⁇ m thick in a cryostat (HM560, Carl Zeiss). In addition, AD brain tissue was fixed in 10% neutral buffered formalin, embedded in a paraffin block, and sliced to a thickness of 6 ⁇ m.
  • the arrowhead indicates the fluorescence of the compound bound to the ⁇ -synuclein aggregate in the brain of the DLB patient
  • the arrow indicates the fluorescence of the compound bound to the amyloid ⁇ aggregate in the brain of the AD patient
  • the asterisk indicates the tau aggregate in the brain of the AD patient. Shows the fluorescence of the bound compound.
  • the fluorescence brightness of the lesion region and the lesion non-formation region (background) was quantified using analysis software (Image J). The results are shown in FIG. As the test compounds, SCAL-T-05 and SCAL-T-06 were used.
  • BF-227 (2- (2- [2-dimethylaminothiazole-5-yl] ethenyl) -6- (2- [fluoro] ethoxy) benzoxazole obtained from Nard Institute (catalog). Numbers NP039-0)) and PBB3 (2-((1E, 3E) -4- (6- (methylamino) pyridin-3-yl) pig-1,3-dienyl) benzo [d] thiazole-6-ol ) (Catalog number NP039-0) was used.
  • SCAL-T-06 and SCAL-T-05 bind to ⁇ -synuclein aggregates formed in the patient's brain of DLB with a stronger intensity than PBB3. .. It was also confirmed that the binding of SCAL-T-06 and SCAL-T-05 to ⁇ -synuclein aggregates is stronger than the binding of tau or amyloid ⁇ formed in the patient brain of AD to the aggregates. .. That is, it was shown that the compound of the present invention has high binding selectivity to ⁇ -synuclein aggregates.
  • the brains of patients with multiple system atrophy (MSA) were also measured with an in vitro fluorescence microscope in the same manner as the brains of DLB patients, and similar results were obtained.
  • BF-227 which has been reported as a PET probe for ⁇ -synuclein lesions, mainly binds to amyloid ⁇ aggregates of AD, and the binding to ⁇ -synuclein aggregates is to SPAL-T-06 and SPAL-T-05. It was confirmed that it was weak in comparison. That is, it was shown that BF-227 has low binding selectivity to ⁇ -synuclein aggregates.
  • Mouse ⁇ -synuclein is expressed and extracted in E. coli as a recombinant protein and incubated in vitro to form insoluble aggregates.
  • this ⁇ -synuclein aggregate is inoculated into the striatum of a mouse, the ⁇ -synuclein aggregate propagates to the surrounding area via a neural circuit, and after several months, an ⁇ -synuclein lesion is observed in the neocortex ( Masuda-Suzukake et al. Acta Neuropathol Commun 2, 88, 2014; Shimozawa et al.
  • mouse ⁇ -synuclein was expressed and extracted in Escherichia coli as a recombinant protein and incubated in vitro to form insoluble ⁇ -synuclein aggregates. Then, when this ⁇ -synuclein aggregate was inoculated into the striatum of a mouse, the ⁇ -synuclein aggregate propagated to the surrounding region via a neural circuit, and a few months later, an ⁇ -synuclein lesion was observed in the neocortex. Was done.
  • mice The striatum of mice was inoculated with this ⁇ -synuclein aggregate by the following method. First, remove the hair on the head of a 9-week-old C57 / BL / 6 male mouse anesthetized with 1.5% (v / v) isoflurane, disinfect the scalp with isodine, apply xylocaine, and make a notch in the scalp. The scalp was exposed.
  • ⁇ -synuclein fiber solution (mouse ⁇ -synuclein fiber 4 mg / ml in saline) was injected at a depth of 2 ⁇ m using a glass pipette. After that, the scalp was returned and sutured.
  • the right side is anti-phosphorylated ⁇ -synuclein antibody staining.
  • On the left side are SPAL-T-05 and SPAL-T-06 fluorescent stains.
  • arrowheads show lesions consisting of phosphorylated ⁇ -synuclein in ⁇ -synuclein fiber-inoculated mouse brain and fluorescence of compounds bound to them.
  • mice were fixed under a two-photon laser fluorescence microscope, 100 ⁇ l of physiological saline containing 5 mM of sulforhodamine 101 was intraperitoneally administered, and then biological two-photon fluorescence imaging was performed at an excitation wavelength of 900 nm.
  • the detection wavelength for BF-227, PBB3, SCAL-T-05 and SPAR-T-06 was 500 to 550 nm, and the detection wavelength for sulforhodamine 101 was 573 to 648 nm.
  • the results are shown in FIG. In FIG. 4, the arrowheads indicate blood vessels, and the arrows indicate fluorescence of the compound bound to the ⁇ -synuclein lesion.
  • PET scans are 0.851 mm thick (intercentric) 95 slices, 19.0 cm axial field of view (FOV), and 7.6 cm intra-section FOV, provided by micro PET Focus 220 Animal Scanner (Siemens Medical Solutions).
  • FOV axial field of view
  • micro PET Focus 220 Animal Scanner Animal Scanner (Siemens Medical Solutions).
  • Prior to scanning ⁇ -synuclein fiber-inoculated mice and saline-inoculated mice (controls) were anesthetized with 1.5% (v / v) isoflurane.
  • Emission scans were performed in 3D list mode for 90 minutes after intravenous injection of [ 18F ] SPAR-T-06 (a compound labeled SVAL-T-06 with positron-releasing nuclides) (30.1 ⁇ 0.13MBq).
  • the energy window was 350-750 keV.
  • Injections and scans of the radioactive compound were performed in dim light to avoid photoisomerization of the compound.
  • All list mode data was sorted into 3D synograms and then converted into 2D synograms by Fourier-rebining (frames: 10x1, 6x5, 5x10 minutes). Addition images at 0-30 minutes, 30-60 minutes, and 60-90 minutes after injection of the radioactive compound were obtained by reconstruction by maximum a posteriori estimation.
  • the dynamic image was reconstructed by the filter correction back projection method using a 0.5 mm Hanning filter.
  • the volume of interest (VOI) was set in the striatum, cerebral cortex and cerebellum using PMOD image analysis software (PMOD Technologies) with reference to the MRI template. The results are shown in FIGS. 5 to 7.
  • FIG. 5 shows the results in the case of ⁇ -synuclein fiber-inoculated mice 30 to 60 minutes after intravenous injection of [ 18F ] SPAR-T-06
  • the right side of FIG. 5 shows the results in the case of saline-inoculated mice.
  • the upper part is an image of the coronal section of the brain including the striatum
  • the lower part is the image of the coronal section of the brain including the cerebellum, which are displayed superimposed on the standard brain MRI image.
  • FIG. 6 is a time-radioactivity curve after intravenous injection of [ 18 F] SPAR-T-06 in the striatum, cerebral cortex, and cerebellum
  • FIG. 7 (a) to (d) are [ 18 F].
  • Comparison with water-injected mice (n 2, mean ⁇ SEMs).
  • FIG. 7 (a) shows the temporal transition of the striatum sUVR with the cerebellum as the control region after [ 18 F] SPAR-T-06 intravenous injection
  • FIG. 7 (b) shows the striatum sUVR.
  • the average of ( control area: cerebellum) at 30 to 60 minutes is shown in FIG. 7 (c).
  • (d) of FIG. 7 shows the average of SUVR (control area: cerebellum) of the cerebral cortex at 30 to 60 minutes, respectively.
  • SPAN-T-06 was labeled with positron-releasing nuclei, and PET scans were performed by intravenous injection into ⁇ -synuclein fiber-inoculated model mice and saline-injected mice (controls). As shown in FIGS. 5 to 7, appropriate. It has been shown that it has a good brain transferability or clearance rate from the brain, and exhibits good properties as a probe for imaging ⁇ -synuclein aggregates with PET.
  • an intraorgan tube was intubated into a marmoset immobilized with ketamine (5-10 mg / kg) and xylazine (0.2-0.5 mg / kg), and then anesthetized with 1-3% (v / v) isoflurane. ..
  • the hair on the marmoset's head was removed, the scalp was disinfected with isodine, then xylocaine was applied, and a notch was made in the scalp to expose the skull.
  • PET scans are 0.851 mm thick (intercentric) 95 slices, 19.0 cm axial field of view (FOV), and 7.6 cm intra-section FOV, provided by micro PET Focus 220 Animal Scanner (Siemens Medical Solutions).
  • FOV axial field of view
  • micro PET Focus 220 Animal Scanner Animal Scanner (Siemens Medical Solutions).
  • Prior to scanning alpha-synuclein fiber-inoculated marmosets were anesthetized with 1-3% (v / v) isoflurane.
  • the transmission scan was performed for about 20 minutes using a PET calibration source Ge-68.
  • Emission scans were performed 90 minutes after intravenous injection of [ 18F ] SPAR-T-06 (a compound labeled SVAL-T-06 with positron-emitting nuclides) (73.0MBq) in 3D wrist mode, energy window 350-750keV. I went there. Injections and scans of the radioactive compound were performed in dim light to avoid photoisomerization of the compound. All list mode data was sorted into 3D synograms and then converted into 2D synograms by Fourier-rebining (frames: 10x1, 6x5, 5x10 minutes). Addition images at 0-30 minutes, 30-60 minutes, and 60-90 minutes after injection of the radioactive compound were obtained by reconstruction by maximum a posteriori estimation.
  • FIG. 9A is a coronal cross-sectional image of the brain containing the caudate nucleus of the ⁇ -synuclein fiber-inoculated marmoset 20 to 60 minutes after the intravenous injection of [ 18F ] SPAR-T-06, superimposed on the standard brain MRI image. Is displayed.
  • 9B is an anti-phosphorylated ⁇ -synuclein antibody-stained image of a coronal section of the brain containing the caudate nucleus of an ⁇ -synuclein fiber-inoculated marmoset.
  • 2 is an enlarged image of antiphospholipid ⁇ -synuclein antibody staining of the caudate nucleus of the right brain infused with ⁇ -synuclein fiber
  • 1 is an enlarged image of antiphospholipid ⁇ -synuclein antibody staining of the caudate nucleus of the left brain infused with physiological saline.
  • B / F separation (B: binding ligand, F: free ligand) is performed by suction filtration and washing, and the radioactivity captured on the glass filter is subjected to a gamma counter (2480WIZARD2, ParkinElmer). It was measured. For each concentration of unlabeled SCAL-T-06, the test was performed in triplets. The results were analyzed using Prism 6J (GraphPad), and the substitution curve of the test substance, IC 50 , was calculated. The results are shown in FIG.
  • the sections were then washed twice with 50 mM Tris-HCl (containing 20% EtOH) at 4 ° C. for 2 minutes and rinsed with MilliQ. After air-drying the sections, the sections and the imaging plate were contacted in a cassette for 5 minutes, and then an autoradiograph was obtained using BAS-5000 (Fuji Film). The results are shown in FIG.
  • the arrowhead in FIG. 11 shows a region containing a lesion consisting of phosphorylated ⁇ -synuclein in the brain of a DLB patient and the brain of an MSA patient.
  • FIG. 12 (a) (indicated by “1” in the figure) is anti-phosphorylated ⁇ -synuclein antibody staining and SPAL-T-06 fluorescent staining of DLB patient brain
  • FIG. 12 (b) (in the figure, “1”). 2 ”) are anti-phosphorylated ⁇ -synuclein antibody staining and SPAL-T-06 fluorescent staining of MSA patient brain.
  • SPAL-T-06 was labeled with positron-releasing nuclei and autoradiography was performed using DLB patient brain ectopic section, MSA patient brain cerebellar section, and healthy subject brain frontal cortex section. Binding of [ 18F ] SPAL-T-06 to a lesion-rich region of phosphorylated ⁇ -synuclein in the brain of MSA patients was confirmed. Fluorescence staining and immunohistochemical staining were performed on the autoradiographed sections, and it was confirmed that SPAR-T-06 was bound to the ⁇ -synuclein lesions contained in these brain sections. In addition, in the brain frontal cortex sections of healthy subjects, almost no non-specific binding of [ 18F ] SPAL-T-06 was observed in both gray matter and white matter.
  • an ⁇ -synuclein aggregate binder having high binding selectivity to ⁇ -synuclein aggregates. Then, it is possible to provide an imaging method using this ⁇ -synuclein aggregate binder. In addition, it is possible to provide an ⁇ -synuclein aggregate binder or a novel compound that can be used for other purposes.

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Abstract

本発明は、式（Ｉ）又は（ＩＩ）で表される化合物、その医薬として許容し得る塩、又はその溶媒和物に関する。

Description

新規化合物、αシヌクレイン凝集体結合剤及びその利用
　本発明は、新規化合物、αシヌクレイン凝集体結合剤及びその利用に関し、詳細には、新規化合物、当該新規化合物を含有するαシヌクレイン凝集体結合剤、αシヌクレイン凝集体の光学イメージング用組成物、αシヌクレイン凝集体の放射イメージング用組成物、脳内αシヌクレイン凝集体の光学イメージング方法、脳内αシヌクレイン凝集体の放射イメージング方法、及び、新規化合物を合成するための中間体に関する。
　αシヌクレイン凝集体は、パーキンソン病、レビー小体型認知症（ＤＬＢ）、多系統萎縮症（ＭＳＡ）の中核病理を形成し、神経変性と密接な因果関係を有すると考えられている。こうした疾患の確定診断は、剖検脳の病理解析でαシヌクレイン凝集体（本明細書中「αシヌクレイン病変」ともいう）の存在を指標として行われるため、生前に診断を確定することはできない。しかしながら、生体脳でαシヌクレイン凝集体を可視化できれば、早期からこれら疾患の診断に関する確定的な情報（確定診断）に近い情報を得ることが可能になる。また、疾患モデル動物の生体脳でαシヌクレイン凝集体を可視化できれば、経時的なイメージング等により、αシヌクレイン凝集体を標的とする治療又は予防薬の候補物質の薬効評価にも役立ちうる。
　従来生体脳でαシヌクレインに結合することが示されているＰＥＴ（ポジトロン断層撮影法）プローブとして、［１１Ｃ］ＢＦ－２２７がある（非特許文献１及び２）。しかしながら［１１Ｃ］ＢＦ－２２７は、αシヌクレイン凝集体への結合親和性が十分ではなく、上記の疾患のうち、ＭＳＡ患者の一部でαシヌクレイン病変が検出できるにとどまっている。また、［１１Ｃ］ＢＦ－２２７は、非特異的な脳内集積という問題、及びアミロイドβ凝集体へ結合するためαシヌクレイン凝集体への結合選択性が低いという問題がある。
　ところで、発明者らは、脳内に蓄積したタウタンパク質をイメージング（画像化）するための化合物を開発した（特許文献１参照）。特許文献１に記載の化合物は、脳内に蓄積したタウタンパク質をイメージングできるため、特許文献１の技術は、タウタンパク質の蓄積により生じる疾患、例えばアルツハイマー病（ＡＤ）の治療及び予防等に役立つ。しかし、特許文献１にはαシヌクレイン凝集体への結合について記載されていない。
国際公開第２０１４／０９７４７４号パンフレット
Kikuchi, A. et al., Brain, 133:1772-1778 (2010) Verdurand, M. et al., Contrast Media Mol. Imaging, 2018: 9165458 (2018)
　本発明は、上記の状況に鑑みてなされたものであり、αシヌクレイン凝集体への結合選択性が高いαシヌクレイン凝集体結合剤、このαシヌクレイン凝集体結合体を用いたイメージング方法、及びαシヌクレイン凝集体結合剤に用いることができる新規化合物を提供することを目的とする。
　本発明者らは、特定の構造を有する化合物がαシヌクレイン凝集体への結合選択性が高いことを見出し、さらに検討を重ねて、本発明を完成するに至った。より具体的には、本発明は以下のものを提供する。
　本発明の一態様は、下記式（Ｉ）又は（ＩＩ）で表される化合物、その医薬として許容し得る塩、又はその溶媒和物である。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000004
　本発明によれば、αシヌクレイン凝集体への結合選択性が高いαシヌクレイン凝集体結合剤を提供することができる。
ＤＬＢ患者脳及びＡＤ患者脳の蛍光顕微鏡測定結果を示す図である。 病変領域及び病変非形成領域の蛍光輝度の定量結果を示す図である。 αシヌクレイン線維接種マウスの蛍光顕微鏡測定結果を示す図である。 αシヌクレイン線維接種６週間以降のモデルマウスの二光子レーザースキャニング蛍光顕微鏡検査結果を示す図である。 αシヌクレイン線維接種マウスのＰＥＴイメージング結果を示す図である。 αシヌクレイン線維接種マウスのＰＥＴイメージング結果を示す図である。 αシヌクレイン線維接種マウスのＰＥＴイメージング結果を示す図である。 マウス脳のエキソビボイメージング結果を示す図である。 αシヌクレイン線維接種マーモセットのＰＥＴイメージング結果を示す図である。 ＤＬＢ患者脳及びＡＤ患者脳のインビトロ結合試験結果を示す図である。 ＤＬＢ患者脳及びＭＳＡ患者脳のオートラジオグラフィ結果を示す図である。 ＤＬＢ患者脳及びＭＳＡ患者脳のインビトロ蛍光顕微鏡測定の結果を示す図である。
　以下、本発明の一実施形態について説明する。なお、本明細書において、「Ａ及び／又はＢ」とは、Ａ及びＢの少なくとも一方を意図している。
　［定義］
　用語「医薬として許容し得る塩」とは、哺乳動物、特にヒトに対して有害でない塩を指す。医薬として許容し得る塩は、無機酸若しくは無機塩基、又は有機酸若しくは有機塩基を含む、無毒性の酸又は塩基を用いて形成することができる。医薬として許容し得る塩の例を挙げると、アルミニウム、カルシウム、リチウム、マグネシウム、カリウム、ナトリウム及び亜鉛などから形成される金属塩、又はリジン、Ｎ，Ｎ’－ジベンジルエチレンジアミン、クロロプロカイン、コリン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、メグルミン（Ｎ－メチルグルカミン）及びプロカインなどから形成される有機塩などがある。また、医薬として許容し得る塩は、酸付加塩及び塩基付加塩を包含する。
　用語「医薬として許容し得る担体」とは、生理食塩水溶液、液体若しくは固体の充填剤、希釈剤、溶媒、又は封入材料などの医薬として許容し得る材料、組成物、又はビヒクルを意味する。医薬として許容し得る担体の例を挙げると、水、食塩水、生理食塩水又はリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）、塩化ナトリウム注射液、リンゲル注射液、等張性デキストロース注射液、無菌水注射液、デキストロース、及び乳酸リンゲル注射液などがある。
　用語「有効量」とは、目的の効果を得ることができる、化合物又は組成物の量をいう。例えば、一部の実施態様において、有効量は、αシヌクレイン凝集体等の脳内に蓄積する物質の光学イメージング又は放射イメージングが可能な、化合物又は組成物の量をいう。
　用語「溶媒和物」とは、化合物に対する１つ又は複数の溶媒分子の会合により形成される含溶媒化合物を意味する。溶媒和物は、例えば、一溶媒和物、二溶媒和物、三溶媒和物、及び四溶媒和物を含む。また、溶媒和物は、水和物を含む。
　用語「水和物」とは、非共有結合性分子間力によって拘束された化学量論的又は非化学量論的量の水をさらに含む化合物又はその塩を意味する。水和物は、例えば、一水和物、二水和物、三水和物、及び四水和物などを含む。
　用語「治療」とは、疾患又は状態の進行、重症度及び／又は持続期間を低減すること又は寛解することを意味する。
　用語「予防」とは、所定の疾患又は状態を獲得する又は進行させる危険の低減、或いは、所定の疾患又は条件の１つ又は複数の症状の再発、開始、又は進行の低減又は抑制を意味する。
　用語「結合性」とは、ある特定のタンパク質凝集体に対する化合物の結合強度を意味する。
　用語「結合選択性」とは、化合物の、ある特定のタンパク質凝集体に対する結合性と、その他のタンパク質凝集体に対する結合性を比較したとき、それらの結合性に差がある（ある特定のタンパク質凝集体に対する結合性がその他のタンパク質凝集体に対する結合性より高い又は低い）ことを指す。「結合選択性が高い」とは、上記の結合性の差が大きいことを意味する。例えば、ある化合物が「αシヌクレイン凝集体への結合選択性が高い」とは、当該化合物のαシヌクレイン凝集体に対する結合性とその他のタンパク質凝集体に対する結合性には大きな差があり、αシヌクレイン凝集体により高い結合性を有していることを示す。
　［化合物］
　一実施形態において、本発明は、下記構造式（Ｉ）で表される（Ｅ）－１－フルオロ－３－（（２－（４－（５－（メチルアミノ）ピラジン－２－イル）ブタ－１－エン－３－イン－１－イル）ベンゾ［ｄ］チアゾール－６－イル）オキシ）プロパン－２－オール、又は下記構造式（ＩＩ）で表される（Ｅ）－１－フルオロ－３－（（２－（４－（２－（メチルアミノ）ピリミジン－５－イル）ブタ－１－エン－３－イン－１－イル）ベンゾ［ｄ］チアゾール６－イル）オキシ）プロパン－２－オール、その医薬として許容し得る塩、又はその溶媒和物を提供する。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000005
 　本明細書において、式（Ｉ）及び（ＩＩ）で表される化合物をそれぞれ「化合物（Ｉ）」及び「化合物（ＩＩ）」ともいう。
　一実施態様において、化合物（Ｉ）及び化合物（ＩＩ）は、１個又はそれ以上の原子が該原子の放射性同位体である化合物、その塩、又はその溶媒和物である。放射性同位体は、１５Ｏ、１３Ｎ、１１Ｃ、及び１８Ｆなどからなる群から選択されるが、特に限定されない。好ましくは、放射性同位体は、１１Ｃ又は１８Ｆである。このうち、１１Ｃの半減期が約２０分であり、１８Ｆの半減期が約１１０分であることを考慮すれば、１８Ｆで標識した化合物の方が、商業的利用価値が高いものと考えられる。したがって、最も好ましくは、放射性同位体は、１８Ｆである。
　好ましくは、ピリミジン環若しくはピラジン環に結合しているメチルアミノ基、及びベンゾチアゾール環に結合している３－フルオロ－２－ヒドロキシプロポキシ基（－Ｏ－ＣＨ２－ＣＨ（ＯＨ）－ＣＨ２Ｆ）の少なくとも一方が、放射性同位体を含む基である。より好ましくは、ベンゾチアゾール環に結合している３－フルオロ－２－ヒドロキシプロポキシ基が、放射性同位体を含む基である。さらに好ましくは、３－フルオロ－２－ヒドロキシプロポキシ基におけるフッ素原子が放射性同位体である。
　一実施態様において、放射性同位体を含む化合物（Ｉ）は、好ましくは、［１８Ｆ］－（Ｅ）－１－フルオロ－３－（（２－（４－（５－（メチルアミノ）ピラジン－２－イル）ブタ－１－エン－３－イン－１－イル）ベンゾ［ｄ］チアゾール－６－イル）オキシ）プロパン－２－オールである。
　一実施態様において、放射性同位体を含む化合物（ＩＩ）は、好ましくは、［１８Ｆ］－（Ｅ）－１－フルオロ－３－（（２－（４－（２－（メチルアミノ）ピリミジン－５－イル）ブタ－１－エン－３－イン－１－イル）ベンゾ［ｄ］チアゾール６－イル）オキシ）プロパン－２－オールである。
　［中間体］
　下記の化合物の製造方法に示されている通り、下記式（ＩＩＩ）で表される化合物は、化合物（Ｉ）及び化合物（ＩＩ）の製造中間体化合物（本明細書において、単に“中間体”ともいう。）である。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000006
 　式（ＩＩＩ）中、Ｘ及びＹは一方が窒素原子であり、他方が置換されていない炭素原子である。本明細書において「置換されていない炭素原子」は、ＣＨを示す。すなわち、式（ＩＩＩ）において、Ｘが窒素原子（Ｎ）の場合Ｙは置換されていない炭素原子（ＣＨ）であり、Ｘが置換されていない炭素原子（ＣＨ）の場合Ｙは窒素原子（Ｎ）である。
　Ｒ１は、ヒドロキシ基又は下記式（ｉ）で表される基である。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000007
 　ここで、Ｔｓはｐ－トルエンスルホニル基を表し、ＴＨＰはテトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル基を表し、＊はベンゾチアゾール環との結合位置を表す。
　Ｒ２は、水素原子又はｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）基である。
　これら中間体化合物は、化合物（Ｉ）及び化合物（ＩＩ）の合成、さらに放射性同位体標識された化合物（Ｉ）及び化合物（ＩＩ）の合成に好適に用いられる。また、これら中間体化合物は、塩であってもよい。
　化合物（Ｉ）又は化合物（ＩＩ）が、各々立体異性体（光学異性体及び回転異性体を含む）、互変異性体、又は極性体等の各種異性体を含有する場合には、これらの異性体も、化合物（Ｉ）又は化合物（ＩＩ）に包含される。これらの異性体は、公知の合成手法、分離手法により、それぞれを単品として得ることができる。化合物（ＩＩＩ）もまた、各種異性体を包含し得る。
　化合物（Ｉ）、化合物（ＩＩ）又は化合物（ＩＩＩ）はまた、公知の結晶化法により製造される結晶であってもよい。
　［化合物（Ｉ）及び化合物（ＩＩ）並びに中間体の製造方法］
　化合物（Ｉ）及び化合物（ＩＩ）並びに中間体である化合物（ＩＩＩ）は、以下に示す製造法に準ずる方法に従い製造することができる。また、所望により、脱保護反応、アミド化反応、ウレア化反応、アルキル化反応、光延反応、酸化反応、還元反応、ハロゲン化反応、カップリング反応、カルボアニオンによる求核付加反応、Ｇｒｉｇｎａｒｄ反応、脱水反応などを各々、単独又はその二つ以上を組み合わせて行うことにより化合物（Ｉ）、化合物（ＩＩ）及び化合物（ＩＩＩ）を製造することができる。また、各反応における溶媒、試薬及び温度等の反応条件は、当業者の技術常識に基づき適宜設定すればよい。官能基の保護及び脱保護反応は、公知の反応方法、参考例又は実施例に記載された方法に準じて行われ、保護基としては慣用のものが用いられる。
　下記の製造法中、特に指定しない限り、用いられる各記号の意味は先述と同様である。
　（製造法Ａ）
　化合物（Ｉ）、化合物（ＩＩ）及びＲ１がヒドロキシ基でありＲ２がＢｏｃ基である化合物（ＩＩＩ）（化合物（ＩＩＩ－ｉ））は、製造スキーム１で示す以下の方法で製造することができる。以下では、各スキーム中、（１）、（２）等で示す化合物を、化合物（１）、化合物（２）等と称する。
　（製造スキーム１）
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000008
 　化合物（２）は、化合物（１）と亜リン酸トリエステルとの反応により製造することができる。化合物（１）中、ＴＢＳはｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル基である。
　化合物（ＩＩＩ－ｉ）は、化合物（２）と後述する化合物（３）とのホーナー・ワズワース・エモンズ反応（ＨＷＥ反応）、及び反応中に進行する脱保護反応により製造することができる。化合物（３）中、Ｘ及びＹは一方が窒素原子であり、他方が置換されていない炭素原子（ＣＨ）である。
　化合物（５）は、化合物（ＩＩＩ－ｉ）と後述する化合物（４）との光延反応などのアルキル化反応により製造することができる。
　化合物（Ｉ）及び化合物（ＩＩ）は、化合物（５）の脱保護反応により製造することができる。
　製造法Ａで用いられる化合物（３）は、製造スキーム２で示す以下の方法で化合物（６）から製造することができる。
　（製造スキーム２）
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000009
 　化合物（６）中、Ｈａｌはハロゲン原子（例えば、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子）を示す。化合物（７）は、化合物（６）と２－プロピン－１－オールとのカップリング反応などにより製造することができる。
　化合物（３）は、化合物（７）の酸化反応により製造することができる。
　製造法Ａで用いられる化合物（４）は、製造スキーム３で示す以下の方法で化合物（８）から製造することができる。
　（製造スキーム３）
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000010
 　化合物（９）は、化合物（８）の保護反応により製造することができる。
　化合物（４）は、化合物（９）の脱ベンジル反応により製造することができる。
　製造法Ａで用いられる化合物（５）は化合物（２）から、製造スキーム４で示す以下の方法で製造することもできる。
　（製造スキーム４）
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000011
 　化合物（１０）は、化合物（２）の脱保護反応により製造することができる。
　化合物（１１）は、化合物（１０）と化合物（４）との光延反応などのアルキル化反応により製造することができる。
　化合物（５）は、化合物（１１）と化合物（３）とのＨＷＥ反応により製造することもできる。
　（製造法Ｂ）
　化合物（Ｉ）及び化合物（ＩＩ）は、製造スキーム５で示す以下の方法で製造することもできる。
　（製造スキーム５）
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000012
 　化合物（１３）は、化合物（１２）のオキシラン開環反応による、化合物（ＩＩＩ－ｉ）へのアルキル化反応により製造することができる。
　化合物（Ｉ）及び化合物（ＩＩ）は、化合物（１３）の脱保護反応により製造することができる。
　（製造法Ｃ）
　Ｒ１がヒドロキシ基でありＲ２が水素原子である化合物（ＩＩＩ）（化合物（ＩＩＩ－ｉｉ））は、下記製造スキーム６で示すように、化合物（ＩＩＩ－ｉ）の脱保護反応により製造することができる。
　（製造スキーム６）
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000013
 　（製造法Ｄ）
　Ｒ１が式（ｉ）である化合物（ＩＩＩ）（化合物（ＩＩＩ－ｉｉｉ））は、製造スキーム７で示す以下の方法で製造することができる。
　（製造スキーム７）
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000014
 　化合物（１５）は、化合物（ＩＩＩ－ｉ）と後述する化合物（１４）との光延反応などのアルキル化反応により製造することができる。
　化合物（１６）は、化合物（１５）の脱保護反応により製造することができる。
　化合物（ＩＩＩ－ｉｉｉ）は、化合物（１６）の保護反応により製造することができる。
　製造法Ｄで用いられる化合物（１４）は、製造スキーム８で示す以下の方法で製造することができる。
　（製造スキーム８）
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000015
 　化合物（１８）は、化合物（１７）の保護反応により製造することができる。
　化合物（１４）は、化合物（１８）の脱ベンジル反応により製造することができる。
　［αシヌクレイン凝集体結合剤］
　一実施形態において、本発明は、αシヌクレイン凝集体結合剤を提供する。本実施形態のαシヌクレイン凝集体結合剤（以下、結合剤又はαシヌクレイン凝集体結合剤とも記載する）は、化合物（Ｉ）若しくは化合物（ＩＩ）、その医薬として許容し得る塩、又はその溶媒和物を含有する。
　化合物（Ｉ）及び化合物（ＩＩ）は、タウタンパク質及びアミロイドβの凝集体よりもαシヌクレイン凝集体への結合選択性が高い。また、同様に、化合物（Ｉ）及び化合物（ＩＩ）の医薬として許容し得る塩、並びに化合物（Ｉ）及び化合物（ＩＩ）の溶媒和物も、タウタンパク質及びアミロイドβの凝集体よりもαシヌクレイン凝集体への結合選択性が高い。また、化合物（Ｉ）及び化合物（ＩＩ）は、蛍光を発する。また、上述の通り、化合物（Ｉ）及び化合物（ＩＩ）において、１個又はそれ以上の原子を該原子の放射性同位体とすることができる。したがって、本実施形態の結合剤は、脳内に蓄積したαシヌクレイン凝集体の光学イメージング又は放射イメージングのための分子プローブとして用いることができる。
　なお、αシヌクレインは、正常な脳でもニューロンのシナプス等に局在するタンパク質であり、αシヌクレインが凝集したものがαシヌクレイン凝集体である。
　αシヌクレイン凝集体結合剤は、医薬として許容し得る担体を含むことができる。該医薬として許容し得る担体の例を挙げると、水、食塩水、生理食塩水又はリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）、塩化ナトリウム注射液、リンゲル注射液、等張性デキストロース注射液、無菌水注射液、デキストロース、及び乳酸リンゲル注射液などがある。
　αシヌクレイン凝集体結合剤が含む化合物（Ｉ）又は化合物（ＩＩ）、その医薬として許容される塩、又はその溶媒和物、及び医薬として許容し得る担体の含有量は、特に制限はない。これらの含有量は、使用される化合物の種類；投与される哺乳動物の年齢、体重、健康状態、性別及び食事内容；投与の回数、及び投与経路；治療期間；同時に使用される他の薬剤など、様々な要因により決定される。医薬として許容し得る担体の含有量は、αシヌクレイン凝集体結合剤の１～９９重量％の量とすることができる。αシヌクレイン凝集体結合剤は、化合物（Ｉ）又は化合物（ＩＩ）を、例えば、対象の体重（ｋｇ）あたりの化合物量が、５ｎｇ／ｋｇ～５ｍｇ／ｋｇの量で投与できるように調製される。好ましくは、当該化合物量の下限は５ｎｇ／ｋｇ以上、０．０１ｍｇ／ｋｇ以上、０．０５ｍｇ／ｋｇ以上、又は、０．１ｍｇ／ｋｇ以上である。また、当該化合物量の上限は５ｍｇ／ｋｇ以下、３ｍｇ／ｋｇ以下、１ｍｇ／ｋｇ以下、又は、２０μｇ／ｋｇ以下の量である。
　［αシヌクレイン凝集体の光学イメージング用組成物］
　一実施形態において、本発明は、αシヌクレイン凝集体の光学イメージング用組成物を提供する。本実施形態のαシヌクレイン凝集体の光学イメージング用組成物（以下、光学イメージング用組成物とも記載する）は、上述の本実施形態に係る結合剤を含む。当該光学イメージングは、インビトロ、エキソビボ、及びインビボイメージングを含む。
　光学イメージングとしては、例えば、蛍光顕微鏡測定法、多光子イメージング法、二光子イメージング法、及び近赤外蛍光イメージング法が挙げられる。
　光学イメージング用組成物は、医薬として許容し得る担体を含むことができる。該医薬として許容し得る担体の例を挙げると、水、食塩水、生理食塩水又はリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）、塩化ナトリウム注射液、リンゲル注射液、等張性デキストロース注射液、無菌水注射液、デキストロース、及び乳酸リンゲル注射液などがある。
　光学イメージング用組成物が含む化合物（Ｉ）又は化合物（ＩＩ）、その医薬として許容し得る塩、又はその溶媒和物、及び医薬として許容し得る担体の含有量は、特に制限はない。これらの含有量は、使用される化合物の種類；投与される哺乳動物の年齢、体重、健康状態、性別及び食事内容；投与の回数、及び投与経路；治療期間；同時に使用される他の薬剤など、様々な要因により決定される。医薬として許容し得る担体の含有量は、光学イメージング用組成物の１～９９重量％の量とすることができる。光学イメージング用組成物は、化合物（Ｉ）又は化合物（ＩＩ）を、例えば、対象の体重（ｋｇ）あたりの化合物量（ｍｇ）が、０．０１ｍｇ／ｋｇ～５ｍｇ／ｋｇ、好ましくは０．０５ｍｇ／ｋｇ～３ｍｇ／ｋｇ、さらに好ましくは、０．１ｍｇ／ｋｇ～１ｍｇ／ｋｇの量で投与できるように調製される。
　［αシヌクレイン凝集体の放射イメージング用組成物］
　一実施形態において、本発明は、αシヌクレイン凝集体の放射イメージング用組成物を提供する。本実施形態のαシヌクレイン凝集体の照射イメージング用組成物（以下、放射イメージング用組成物とも記載する）は、上述の本実施形態に係る結合剤を含む。当該放射イメージングは、インビトロ、エキソビボ、及びインビボイメージングを含む。
　放射イメージングとしては、例えば、ポジトロン断層撮影法（Positron Emission Tomography、ＰＥＴ）、単一光子放射断層撮影法（Single photon emission computed tomography、ＳＰＥＣＴ）、及びオートラジオグラフィが挙げられる。
　放射イメージング用組成物は、医薬として許容し得る担体を含むことができる。該医薬として許容し得る担体の例を挙げると、水、食塩水、生理食塩水又はリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）、塩化ナトリウム注射液、リンゲル注射液、等張性デキストロース注射液、無菌水注射液、デキストロース、及び乳酸リンゲル注射液などがある。
　放射イメージング用組成物に含まれる化合物（Ｉ）又は化合物（ＩＩ）、その医薬として許容し得る塩、又はその溶媒和物、及び医薬として許容し得る担体の含有量は、特に制限はない。これらの含有量は、使用される化合物の種類；投与される哺乳動物の年齢、体重、健康状態、性別及び食事内容；投与の回数、及び投与経路；治療期間；同時に使用される他の薬剤など、様々な要因により決定される。医薬として許容し得る担体の含有量は、放射イメージング用組成物の１～９９重量％の量とすることができる。放射イメージング用組成物は、化合物（Ｉ）又は化合物（ＩＩ）を、例えば、対象の体重（ｋｇ）あたりの化合物量が、５ｎｇ／ｋｇ～５ｍｇ／ｋｇ、好ましくは５ｎｇ／ｋｇ～２０μｇ／ｋｇの量で投与できるように調製される。
　［αシヌクレイン凝集体が関連する疾患の診断薬、又は当該疾患の治療又は予防のためのコンパニオン診断薬］
　一実施形態において、本発明は、αシヌクレイン凝集体が関連する疾患の診断薬、又は当該疾患の治療又は予防のためのコンパニオン診断薬を提供する。本実施形態のαシヌクレイン凝集体が関連する疾患の診断薬、又は当該疾患の治療又は予防のためのコンパニオン診断薬（以下、コンパニオン診断薬ともいう）は、上述の本実施形態に係る結合剤を含む。治療のためのコンパニオン診断薬とは、疾患であることが判明した場合に、治療が見込めるかどうかを判断するための診断薬である。また、予防のためのコンパニオン診断薬とは、疾患の前駆状態であることが判明した場合に、今後の発症を予測する、若しくは発症を抑制する予防が見込めるかどうかを判断するための診断薬である。
　本実施形態に係る診断薬を用いて、対象から得られる脳内αシヌクレイン凝集体の量及び／又は分布量に関するデータを、予め取得した疾患とαシヌクレイン凝集体の量及び／又は分布量との相関性に照合することで、対象の疾患に関する診断（具体的には、疾患の罹患有無、重篤性、及び発作可能性等）が可能である。
　また、コンパニオン診断薬を用いて、対象から得られる脳内αシヌクレイン凝集体の量及び／又は分布量に関するデータを、予め取得した疾患と脳内αシヌクレイン凝集体の量及び／又は分布量との相関性に照合することで、対象の疾患状態を把握することができる。そのため、これに基づき、疾患の予防／治療計画（投与する予防薬又は治療薬の種類、組み合わせ、用量、及び用途など）を策定することができる。
　本発明の一実施形態は、αシヌクレイン凝集体が関連する疾患の治療又は予防のための医薬であって、コンパニオン診断で得られる脳内αシヌクレイン凝集体の量及び／又は分布に関するデータに基づく投与計画で投与される医薬にも関する。
　［脳内に蓄積する物質が関連する疾患の診断キット］
　本発明の脳内に蓄積する物質が関連する疾患の診断キット（以下、診断キットともいう）は、上述の本実施形態に係る結合剤を含む。
　脳内に蓄積する物質としては、少なくともαシヌクレイン凝集体を含み、その他に、タウタンパク質又はアミロイドβの凝集体が挙げられる。
　脳内に蓄積する物質が関連する疾患としては、少なくともαシヌクレイン凝集体が関連する疾患を含み、当該疾患としては、パーキンソン病、レビー小体型認知症（ＤＬＢ）、及び多系統萎縮症（ＭＳＡ）が挙げられる。脳内に蓄積する物質が関連する疾患は、この他に、タウタンパク質又はアミロイドβの凝集体が関連する疾患であるアルツハイマー病（ＡＤ）及び前頭側頭葉変性症が挙げられる。
　本実施形態の結合剤はタウタンパク質及びアミロイドβの凝集体よりもαシヌクレイン凝集体への結合選択性が高い。一方で、例えば、特許文献１記載の化合物は、αシヌクレイン凝集体よりもタウタンパク質凝集体への結合性が高いことが、本発明者らの検討の結果から判明した。
　本実施形態の一実施態様において、診断キットは、αシヌクレイン凝集体への結合選択性が高い化合物（Ｉ）若しくは化合物（ＩＩ）又はその医薬として許容し得る塩若しくはその溶媒和物、及びタウタンパク質凝集体への結合選択性が高い他の化合物（例えば、特許文献１記載の化合物）の両方を含むことができる。このような診断キットにおいては、前者の検出結果（検出される光若しくは放射線の量及び／又は分布）と後者の検出結果とを比較することで、イメージングされた各領域に存在する物質がどの物質なのか特定できる。具体的にはαシヌクレイン凝集体と、タウタンパク質凝集体とを分類することができ、さらに各々の存在量を定量することもできる。このため、αシヌクレイン凝集体が関連する疾患、及び／又は、タウタンパク質が関連する疾患を高精度に診断することができる。例えば、αシヌクレイン凝集体への結合性と、タウタンパク質凝集体への結合性との比を、本実施形態の結合剤と、タウタンパク質凝集体への結合選択性が高い物質（例えば、特許文献１記載の化合物）との各々について予め特定しておく。そのうえで、被検体での前者及び後者投与後の脳内各領域での光又は放射線の量比を測定すれば、予め特定した比と測定した量比との関係から当該領域にαシヌクレイン凝集体、タウタンパク質凝集体のいずれが存在するのかを分類し、各量の定量が可能である。
　また、本実施形態の上記診断キットを、さらにアミロイドβのイメージング剤と組み合わせた診断キットとすることもできる。本実施形態の診断キットとアミロイドβのイメージング剤とを組み合わせた診断キットは、イメージングされた各領域に存在する物質がどの物質なのか特定できる。具体的にはαシヌクレイン凝集体と、タウタンパク質凝集体と、アミロイドβ凝集体とを分類することができ、さらに各々の存在量を定量することもできる。このため、αシヌクレイン凝集体が関連する疾患、タウタンパク質が関連する疾患、及び／又はアミロイドβが案連する疾患を高精度に診断することができる。
　本発明の一実施形態は、αシヌクレイン凝集体が関連する疾患の治療又は予防のための医薬であって、本実施形態に係る診断キットで得られるαシヌクレイン凝集体を含む脳内蓄積物質の量及び／又は分布に関するデータに基づく投与計画で投与される医薬にも関する。
　［光学イメージング方法］
　一実施形態において、本発明は、光学イメージング方法を提供する。本実施形態の光学イメージング方法は、上述の本実施形態に係る結合剤を投与された被検体の生体脳に脳外から第１の波長の光を照射した後に、該脳から発せられる、第１の波長とは異なる第２の波長の光を検出する工程を含む。
　被検体に有効量の結合剤を投与すると、生体脳に移行した結合剤が、生体脳内に存在するαシヌクレイン凝集体に結合する。結合剤を励起させる第１の波長の光を、結合剤を投与された被検体の生体脳に脳外から照射し、脳内の結合剤から発せられる第２の波長の光（例えば、蛍光）を検出することにより、αシヌクレイン凝集体の光学イメージング（画像化）をすることができる。
　被検体としては、哺乳動物が挙げられる。哺乳動物は、例えば、ヒト、ラット、マウス、ウサギ、モルモット、ハムスター、サル、イヌ、フェレット、又はミニブタなどを含む。
　投与方法は、特に制限されないが、例えば、経口投与、及び静脈内投与又は腹腔内投与等の非経口投与がある。好ましくは、静脈内投与又は腹腔内投与である。最も好ましくは、静脈内投与である。投与量は、０．０１ｍｇ／ｋｇ～５ｍｇ／ｋｇ、０．０５ｍｇ／ｋｇ～３ｍｇ／ｋｇ、又は０．１ｍｇ／ｋｇ～１ｍｇ／ｋｇであることが好ましく、最も好ましくは、０．１ｍｇ／ｋｇ～１ｍｇ／ｋｇである。
　［放射イメージング方法］
　一実施形態において、本発明は、放射イメージング方法を提供する。本実施形態の放射イメージング方法は、１個又はそれ以上の原子が該原子の放射性同位体である化合物（Ｉ）又は化合物（ＩＩ）、その医薬として許容し得る塩、又はその溶媒和物を含む本実施形態に係る結合剤を投与された被検体の生体脳から発せられる放射線を検出する工程を含む。
　被検体に有効量の結合剤を投与すると、生体脳に移行した結合剤が、生体脳内に存在するαシヌクレイン凝集体に結合する。脳内の結合剤から発せられる放射線を検出することにより、αシヌクレイン凝集体の放射イメージング（画像化）をすることができる。
　被検体としては、哺乳動物が挙げられる。哺乳動物は、例えば、ヒト、ラット、マウス、ウサギ、モルモット、ハムスター、サル、イヌ、フェレット、又はミニブタなどを含む。好ましくは、哺乳動物は、ヒトである。
　投与方法は、特に制限されないが、例えば、経口投与、及び静脈内投与又は腹腔内投与等の非経口投与がある。好ましくは、静脈内投与又は腹腔内投与である。最も好ましくは、静脈内投与である。投与量は、５ｎｇ／ｋｇ～５ｍｇ／ｋｇであることが好ましく、５ｎｇ～２０μｇ／ｋｇであることがより好ましい。投与放射能量は、個体あたり３７ＭＢｑ～７．４ＧＢｑであることが好ましく、３７０ＭＢｑ～３，７００ＭＢｑであることがより好ましい。
　［脳内αシヌクレイン凝集体が関連する疾患の治療薬又は予防薬のスクリーニング方法］
　一実施形態において、本発明は、脳内αシヌクレイン凝集体が関連する疾患の治療又は予防薬のスクリーニング方法を提供する。本実施形態の脳内αシヌクレイン凝集体が関連する疾患の治療又は予防薬のスクリーニング方法（以下、スクリーニング方法ともいう）は、被検体への候補物質の投与前後における、本実施形態に係る光学イメージング方法又は放射イメージング方法によって検出される光又は放射線の量及び／又は分布の差異に基づいて、候補物質を選抜する工程を有する。
　脳内αシヌクレイン凝集体が関連する疾患は、上記［脳内に蓄積する物質が関連する疾患の診断キット］に記載されたものと同様である。
　また、被検体及び投与方法は、上記［光学イメージング方法］及び［放射イメージング方法］に記載されたものと同様である。
　例えば、候補物質の投与後、結合剤の蛍光等の光又は放射線の量（強度）が、候補物質を投与する前のものと比較して減少している場合、候補物質が、該疾患又は症状の治療用化合物として有用であり得る。
　また、検出される被検体の光又は放射線の量及び／又は分布を、他の正常な哺乳動物のものと比較し、候補化合物の投与後に投与前よりも正常な哺乳動物のものに近づく場合、該候補化合物が、該疾患又は症状の治療用化合物として有用であり得る。
　例えば、候補物質を投与された対象から得られる候補物質投与前後の結合剤の蛍光等の光又は放射線の量（強度）及び／又は分布に関するデータを、予め取得した候補物質を投与されていない哺乳動物における、脳内αシヌクレイン凝集体が関連する疾患発症前後での結合剤の蛍光等の光又は放射線の増加量及び／又は分布の変化と比較する。そして、疾患発症後に見られる当該蛍光等の光又は放射線量の増加が、候補物質の投与により抑制されている、及び／又は、当該蛍光等の光又は放射線量が、候補物質の投与後において、投与前と同様に正常な哺乳動物のものと近い値を示す場合、候補物質が、該疾患又は症状の予防用化合物として有用であり得る。同様に、疾患発症後に見られる当該蛍光等の光又は放射線の分布の変化が、候補物質の投与により抑制されるか、及び／又は、当該蛍光等の光又は放射線の分布の変化が、候補物質の投与後において、投与前と同様に正常な哺乳動物における分布に近い場合にも、候補物質が、該疾患又は症状の予防用化合物として有用であり得る。
　［脳内αシヌクレイン凝集体の蓄積を定量又は判定する方法］
　一実施形態において、本発明は、脳内αシヌクレイン凝集体の蓄積を定量又は判定する方法を提供する。本実施形態の脳内αシヌクレイン凝集体の蓄積を定量又は判定する方法は、化合物（Ｉ）又は化合物（ＩＩ）、その医薬として許容し得る塩、又はその溶媒和物を含む上記結合剤を投与された被検体の生体脳に脳外から第１の波長の光を照射した後に、該脳から発せられる、第１の波長とは異なる第２の波長の光を検出する工程を含み、該検出した光の量及び／又は分布に基づいて、脳内αシヌクレイン凝集体の蓄積を定量又は判定する。この方法は、光学イメージングにより、脳内αシヌクレイン凝集体の蓄積を定量又は判定する方法である。
　被検体及び投与方法は、上記［光学イメージング方法］に記載されたものと同様である。
　検出される被検体の光の量及び／又は分布と、他の正常な哺乳動物のものとの差を求めることで、脳内のαシヌクレイン凝集体の蓄積を定量すること、及び脳内のαシヌクレイン凝集体の蓄積の有無を判定することができる。
　本実施形態の脳内αシヌクレイン凝集体の蓄積を定量又は判定する方法の別の態様では、１個又はそれ以上の原子が該原子の放射性同位体である化合物（Ｉ）又は化合物（ＩＩ）、その医薬として許容し得る塩、又はその溶媒和物を含む本実施形態に係る結合剤を投与された被検体の生体脳から発せられる放射線を検出する工程を含み、該検出した放射線の量及び／又は分布に基づいて、脳内αシヌクレイン凝集体の蓄積を定量又は判定する。この方法は、放射イメージングにより、脳内αシヌクレイン凝集体の蓄積を定量又は判定する方法である。
　被検体及び投与方法は、上記［放射イメージング方法］に記載されたものと同様である。
　検出される被検体の光又は放射線の量及び／又は分布と、他の正常な哺乳動物のものとの差を求めることで、脳内のαシヌクレイン凝集体の蓄積を定量すること、及び脳内のαシヌクレイン凝集体の蓄積の有無を判定することができる。
　［脳内に蓄積する物質の分類及び蓄積を判定する方法］
　一実施形態において、本発明は、脳内に蓄積する物質の分類及び蓄積を判定する方法を提供する。本発明の脳内に蓄積する物質の分類及び蓄積を判定する方法は、化合物（Ｉ）又は化合物（ＩＩ）、その医薬として許容し得る塩、又はその溶媒和物を含む本実施形態に係る結合剤を投与された被検体の生体脳に脳外から第１の波長の光を照射した後に、該脳から発せられる、第１の波長とは異なる第２の波長の光を検出する第１の工程と、タウタンパク質凝集体への結合選択性が高い物質（例えば、特許文献１記載の化合物）を、第１の工程と異なる時期に投与された該被検体の生体脳に脳外から第３の波長の光を照射した後に、該脳から発せられる、第３の波長とは異なる第４の波長の光を検出する第２の工程と、を含み、第１の工程において検出した光の量及び／又は分布データと、第２の工程において検出した光の量及び／又は分布データと、に基づいて、脳内に蓄積する物質の分類及び蓄積を判定する。この方法は、光学イメージングにより、脳内に蓄積する物質の分類及び蓄積を判定する方法である。
　被検体及び投与方法は、上記［光学イメージング方法］に記載されたものと同様である。
　αシヌクレイン凝集体への結合選択性が高い結合剤の投与に起因する脳から発せられる光を検出する第１の工程と、同じ被検体における、タウタンパク質凝集体への結合選択性が高い物質の投与に起因する脳から発せられる光を検出する第２の工程との両方を含むため、第１の工程の検出結果（検出される光の量及び／又は分布）と第２の工程の検出結果とを比較することで、脳内に蓄積する物質がαシヌクレイン凝集体及び／又はタウタンパク質凝集体であるか否かの分類及び蓄積を判定することができる。
　本実施形態の脳内に蓄積する物質の分類及び蓄積を判定する方法の別の態様では、１個又はそれ以上の原子が該原子の放射性同位体である化合物（Ｉ）又は化合物（ＩＩ）、その医薬として許容し得る塩、又はその溶媒和物を含む本実施形態に係る結合剤を投与された被検体の生体脳から発せられる放射線を検出する第１の工程と、タウタンパク質凝集体への結合選択性が高い物質（例えば、特許文献１記載の化合物）を、第１の工程と異なる時期に投与された該被検体の脳から発せられる放射線を検出する第２の工程と、を含み、第１の工程において検出した放射線の量及び／又は分布データと、第２の工程において検出した光の量及び／又は分布データと、に基づいて、脳内に蓄積する物質の分類及び蓄積を判定する。この方法は、放射イメージングにより、脳内に蓄積する物質の分類及び蓄積を判定する方法である。
　被検体及び投与方法は、上記［放射イメージング方法］に記載されたものと同様である。
　αシヌクレイン凝集体への結合選択性が高い結合剤の投与に起因して脳から発せられる放射線を検出する第１の工程と、同じ被検体における、タウタンパク質凝集体への結合選択性が高い物質の投与に起因する脳から発せられる放射線を検出する第２の工程との両方を含むため、第１の工程の検出結果（検出される放射線の量及び／又は分布）と第２の工程の検出結果とを比較することで、脳内に蓄積する物質がαシヌクレイン凝集体及び／又はタウタンパク質凝集体であるか否かの分類及び蓄積を判定することができる。
　（まとめ）
　以下に本発明の実施形態をまとめる。
　本発明の一態様は、下記式（Ｉ）又は（ＩＩ）で表される化合物、その医薬として許容し得る塩、又はその溶媒和物である。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000016
 　本発明の一態様は、前記化合物、その医薬として許容し得る塩、又はその溶媒和物を含有する、αシヌクレイン凝集体結合剤である。
　本発明の一態様は、前記結合剤を含む、αシヌクレイン凝集体の光学イメージング用組成物である。
　本発明の一態様は、前記結合剤を含む、αシヌクレイン凝集体の放射イメージング用組成物である。
　本発明の一態様は、前記結合剤を投与された被検体の生体脳に脳外から第１の波長の光を照射した後に、前記脳から発せられる、第１の波長とは異なる第２の波長の光を検出する工程を含む、脳内αシヌクレイン凝集体の光学イメージング方法である。
　本発明の一態様は、前記結合剤を投与された被検体の生体脳から発せられる放射線を検出する工程を含む、脳内αシヌクレイン凝集体の放射イメージング方法である。
　本発明の一態様は、下記式（ＩＩＩ）で表される、前記化合物を合成するための中間体である。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000017
 　（式（ＩＩＩ）中、
　Ｘ及びＹの一方は窒素原子（Ｎ）であり、他方は置換されていない炭素原子（ＣＨ）であり（すなわち、Ｘが窒素原子の場合、Ｙは置換されていない炭素原子（ＣＨ）であり、Ｘが置換されていない炭素原子（ＣＨ）の場合、Ｙは窒素原子であり）；
　Ｒ１は、ヒドロキシ基又は下記式（ｉ）で表される基であり；
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000018
 　ここで、Ｔｓはｐ－トルエンスルホニル基を表し、
　ＴＨＰはテトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル基を表し、
　＊はベンゾチアゾール環との結合位置を表し、
　Ｒ２は、水素原子又はｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）基である）。
　本発明の一態様は、αシヌクレイン凝集体への結合選択性が高い前記化合物（Ｉ）又は化合物（ＩＩ）を含む診断キットである。
　本発明は上述した各実施形態に限定されるものではなく、請求項に示した範囲で種々の変更が可能であり、異なる実施形態にそれぞれ開示された技術的手段を適宜組み合わせて得られる実施形態についても本発明の技術的範囲に含まれる。
　（製造例）
　以下の製造例（参考例及び実施例）中の「室温」は通常約１０℃～約３５℃を示す。％は特に断らない限り重量％を示す。また各製造例の使用化合物の説明に関し、「参考例（実施例）Ｘで製造した」は、「参考例（実施例）Ｘと同様にして製造した」場合も含むことを意図している。
　製造例のカラムクロマトグラフィーにおける溶出は、特に言及しない限り、ＴＬＣ（Thin Layer Chromatography，薄層クロマトグラフィー）による観察下に行った。ＴＬＣ観察においては、ＴＬＣプレートとしてメルク（Merck）社製の６０　Ｆ２５４を用い、展開溶媒として、カラムクロマトグラフィーで溶出溶媒として用いた溶媒を用いた。また、検出にはＵＶ検出器を採用した。
　１Ｈ　ＮＭＲの解析にはＡＣＤ／ＳｐｅｃＭａｎａｇｅｒ（商品名）ソフトウェアなどを用い、得られた解析値を記載した。ヒドロキシ基及びアミノ基などのプロトンピークが非常に緩やかなピークについては記載していないことがある。
　以下の実施例においては下記の略号を使用する。
Ｍ：モル濃度
ＤＭＳＯ－ｄ６：重ジメチルスルホキシド
１Ｈ　ＮＭＲ：プロトン核磁気共鳴
ＤＩＥＡ：Ｎ－エチル－Ｎ－イソプロピルプロパン－２－アミン
ＤＭＦ：Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（本明細書中「dimethylformamide」とも記載する）
ＴＨＦ：テトラヒドロフラン
ＭｅＯＨ：メタノール
ＥｔＯＨ：エタノール
ＤＭＳＯ：ジメチルスルホキシド
ＴＥＡ：トリエチルアミン
ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸。
　参考例１：ジ－ｔｅｒｔ－ブチル　（５－ヨードピラジン－２－イル）－２－イミドジカルボナートの製造
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000019
 　５－ヨードピラジン－２－アミン（ＣＡＳ［８８６８６０－５０－０］）（１０．５ｇ）のＴＨＦ（１００ｍｌ）溶液に二炭酸ジ－ｔｅｒｔ－ブチル（２５．９ｇ）のＴＨＦ（５０ｍｌ）溶液とＮ，Ｎ－ジメチルピリジン－４－アミン（１．４５ｇ）を０℃で加えた。その混合物を０℃から室温で終夜撹拌後、水と酢酸エチルで希釈して、不溶物を濾別したのち、酢酸エチルで抽出した。抽出液を水と食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥して、短いシリカゲルカラムを通して減圧下で濃縮し、標題化合物（１８．８ｇ）を茶色固体として得た。
１Ｈ　ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ１．３７－１．４１（１８Ｈ，ｍ），８．６５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．３Ｈｚ），８．９０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．５Ｈｚ）。
　参考例２：ｔｅｒｔ－ブチル　（５－ヨードピラジン－２－イル）カルバマートの製造
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000020
 　参考例１で製造したジ－ｔｅｒｔ－ブチル　（５－ヨードピラジン－２－イル）－２－イミドジカルボナート（１８．８ｇ）のＭｅＯＨ（２００ｍｌ）溶液に炭酸カリウム（７．４０ｇ）を室温で加えた。その混合物を室温で２時間撹拌後、減圧下に４分の１程度に濃縮し、０℃に冷却後、５％クエン酸水溶液で中和後に水で希釈した。析出した固体を濾取して、水で洗浄後に乾燥し、標題化合物（１３．７ｇ）を茶色固体として得た。
１Ｈ　ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ１．４７（９Ｈ，ｓ），８．５５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．３Ｈｚ），８．８７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．５Ｈｚ），１０．２９（１Ｈ，ｂｒｓ）。
　参考例３：ｔｅｒｔ－ブチル　（５－ヨードピラジン－２－イル）（メチル）カルバマートの製造
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000021
 　参考例２で製造したｔｅｒｔ－ブチル　（５－ヨードピラジン－２－イル）カルバマート（１３．７ｇ）と炭酸セシウム（２０．９ｇ）のＤＭＦ（８５ｍｌ）溶液にヨウ化メチル（３．４５ｍｌ）を０℃で加えた。その混合物を０℃から室温で終夜撹拌後、０℃に冷却して、水で希釈した。析出した固体を濾取して、水で洗浄後に乾燥し、標題化合物（１３．０ｇ）をベージュ色固体として得た。
１Ｈ　ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ１．４９（９Ｈ，ｓ），３．２７（３Ｈ，ｓ），８．７２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．５Ｈｚ），８．８３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．５Ｈｚ）。
　参考例４：ｔｅｒｔ－ブチル　（５－（３－ヒドロキシプロプ－１－イン－１－イル）ピラジン－２－イル）（メチル）カルバマートの製造
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000022
 　参考例３で製造したｔｅｒｔ－ブチル　（５－ヨードピラジン－２－イル）（メチル）カルバマート（１３．０ｇ）、２－プロピン－１－オール（３．４３ｍｌ）及びヨウ化銅（Ｉ）（７３９ｍｇ）のＴＥＡ（２７ｍｌ）とＴＨＦ（２７ｍｌ）との混合溶液に、ジクロロビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）（５４５ｍｇ）を窒素雰囲気下に室温で加えた。その混合物を室温で２時間撹拌したのち、酢酸エチルで希釈後、セライト濾過をした。濾液を減圧下で濃縮し、残渣を酢酸エチルで希釈後、５％クエン酸水溶液で酸性にして、セライト濾過をし、濾液を酢酸エチルで抽出した。抽出液を水と食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥して、シリカゲルパッドを通して減圧下で濃縮し、標題化合物（１０．２ｇ）を茶色固体として得た。
１Ｈ　ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ１．５０（９Ｈ，ｓ），３．３１（３Ｈ，ｓ），４．３５（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ），５．４８（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ），８．５２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．５Ｈｚ），８．９８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．５Ｈｚ）。
　参考例５：ｔｅｒｔ－ブチル　（５－（３－ヒドロキシプロプ－１－イン－１－イル）ピリミジン－２－イル）（メチル）カルバマートの製造
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000023
 　ｔｅｒｔ－ブチル　（５－ヨードピリミジン－２－イル）（メチル）カルバマート（ＣＡＳ［１５７８２６４－１８－２］）（２５０ｍｇ）を用いて参考例４と同様な方法により、標題化合物（１９５ｍｇ）を茶色固体として得た。
１Ｈ　ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ１．４４（９Ｈ，ｓ），３．３１（３Ｈ，ｓ），４．３４（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ），５．４４（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．８Ｈｚ），８．７７（２Ｈ，ｓ）。
　参考例６：ｔｅｒｔ－ブチル　メチル（５－（３－オキソプロプ－１－イン－１－イル）ピラジン－２－イル）カルバマートの製造
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000024
 　参考例４で製造したｔｅｒｔ－ブチル　（５－（３－ヒドロキシプロプ－１－イン－１－イル）ピラジン－２－イル）（メチル）カルバマート（１０．４ｇ）のアセトニトリル（２００ｍｌ）溶液に、１，１，１－トリアセトキシ－１，１－ジヒドロ－１，２－ベンゾヨードキソール－３－（１Ｈ）－オン（２０．１ｇ）を室温で加えた。その混合物を室温で２時間撹拌したのち、０℃に冷却し、飽和チオ硫酸ナトリウム水溶液と５％炭酸水素ナトリウム水溶液を加えて５分間撹拌後、酢酸エチルで抽出した。抽出液を水と食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥して、短いシリカゲルカラムを通して減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル）で精製し、標題化合物（６．２０ｇ）を黄色固体として得た。
１Ｈ　ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ１．５２（９Ｈ，ｓ），３．３５（３Ｈ，ｓ），８．８２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．３Ｈｚ），９．１７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．５Ｈｚ），９．４８（１Ｈ，ｓ）。
　参考例７：ｔｅｒｔ－ブチル　メチル（５－（３－オキソプロプ－１－イン－１－イル）ピリミジン－２－イル）カルバマートの製造
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000025
 　参考例５で製造したｔｅｒｔ－ブチル　（５－（３－ヒドロキシプロプ－１－イン－１－イル）ピリミジン－２－イル）（メチル）カルバマート（１９０ｍｇ）を用いて参考例６と同様な方法により、標題化合物（１４９ｍｇ）を白色固体として得た。
１Ｈ　ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ１．４７（９Ｈ，ｓ），３．３６（３Ｈ，ｓ），９．００（２Ｈ，ｓ），９．４６（１Ｈ，ｓ）。
　参考例８：２－（（１－（ベンジルオキシ）－３－フルオロプロパン－２－イル）オキシ）テトラヒドロ－２Ｈ－ピランの製造
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000026
 　１－（ベンジルオキシ）－３－フルオロプロパン－２－オール（ＣＡＳ［１１２４８２－３６－７］）（６．３７ｇ）と３，４－ジヒドロ－２Ｈ－ピラン（３．７５ｍｌ）とのＴＨＦ（６７ｍｌ）溶液に、ｐ－トルエンスルホン酸一水和物（１３２ｍｇ）を室温で加えた。その混合物を室温で終夜撹拌したのち、ＤＩＥＡ（０．２４２ｍｌ）を加えて減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル）で精製し、標題化合物（８．３７ｇ）を無色液体として得た。
１Ｈ　ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ１．３５－１．５４（４Ｈ，ｍ），１．５６－１．８０（２Ｈ，ｍ），３．３６－３．４７（１Ｈ，ｍ），３．４８－３．６３（２Ｈ，ｍ），３．８０（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝１１．２，７．９，３．４Ｈｚ），３．９０－４．０６（１Ｈ，ｍ），４．３５－４．７０（２Ｈ，ｍ），４．５１（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．１Ｈｚ），４．７４－４．８１（１Ｈ，ｍ），７．２４－７．４１（５Ｈ，ｍ）。
　参考例９：２－（（（Ｒ）－１－（ベンジルオキシ）－３－フルオロプロパン－２－イル）オキシ）テトラヒドロ－２Ｈ－ピランの製造
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000027
 　（Ｒ）－１－（ベンジルオキシ）－３－フルオロプロパン－２－オール（ＣＡＳ［１４７３３２－３４－１］）（７．８５ｇ）を用いて参考例８と同様な方法により、標題化合物（１０．３６ｇ）を無色液体として得た。
１Ｈ　ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ１．４７（４Ｈ，ｂｒ　ｄｄ，Ｊ＝７．４，３．９Ｈｚ），１．５６－１．８０（２Ｈ，ｍ），３．３５－３．４７（１Ｈ，ｍ），３．４７－３．６３（２Ｈ，ｍ），３．８０（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝１１．３，８．０，３．４Ｈｚ），３．８９－４．１１（１Ｈ，ｍ），４．３４－４．６９（４Ｈ，ｍ），４．７３－４．８３（１Ｈ，ｍ），７．１９－７．４９（５Ｈ，ｍ）。
　参考例１０：２－（（（Ｓ）－１－（ベンジルオキシ）－３－フルオロプロパン－２－イル）オキシ）テトラヒドロ－２Ｈ－ピランの製造
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000028
 　（Ｓ）－１－（ベンジルオキシ）－３－フルオロプロパン－２－オール（ＣＡＳ［１７０７１４６－２１－１］）（７．５５ｇ）を用いて参考例８と同様な方法により、標題化合物（１０．４８ｇ）を無色液体として得た。
１Ｈ　ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ１．４７（４Ｈ，ｂｒ　ｄｄ，Ｊ＝７．４，３．９Ｈｚ），１．５６－１．７９（２Ｈ，ｍ），３．３５－３．４７（１Ｈ，ｍ），３．４８－３．６２（２Ｈ，ｍ），３．８０（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝１１．２，７．９，３．３Ｈｚ），３．９０－４．０８（１Ｈ，ｍ），４．３５－４．７０（４Ｈ，ｍ），４．７３－４．８１（１Ｈ，ｍ），７．２４－７．４２（５Ｈ，ｍ）。
　参考例１１：３－（ベンジルオキシ）－２－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）プロピル　４－メチルベンゼンスルホナートの製造
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000029
 　３－（ベンジルオキシ）－２－ヒドロキシプロピル　４－メチルベンゼンスルホナート（ＣＡＳ［９９８８１－４８－８］）（２．８０ｇ）と１Ｈ－イミダゾール（７３７ｍｇ）のＤＭＦ（３０ｍｌ）溶液にｔｅｒｔ－ブチルジメチルクロロシラン（１．５１ｇ）を０℃で加えた。その混合物を室温で終夜撹拌し、０℃に冷却後に酢酸エチルと水で希釈して、５％クエン酸水溶液でｐＨ約５としたのち、酢酸エチルで抽出した。抽出液を水と食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥して、減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル）で精製して、標題化合物（３．３７ｇ）を無色液体として得た。
１Ｈ　ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ－０．０２（６Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．１Ｈｚ），０．７９（９Ｈ，ｓ），２．４１（３Ｈ，ｓ），３．３６（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．３Ｈｚ），３．８６－４．０５（３Ｈ，ｍ），４．４３（２Ｈ，ｓ），７．２０－７．３９（５Ｈ，ｍ），７．４７（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ），７．７７（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ）。
　参考例１２：３－フルオロ－２－（（テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）オキシ）プロパン－１－オールの製造
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000030
 　参考例８で製造した２－（（１－（ベンジルオキシ）－３－フルオロプロパン－２－イル）オキシ）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン（８．３０ｇ）と１０％パラジウム－炭素（５０％含水，１．９８ｇ）及びＥｔＯＨ（８５ｍｌ）の混合物を常圧の水素雰囲気下、室温で終夜撹拌した。触媒を濾去し、濾液を減圧下で濃縮して、標題化合物（５．４５ｇ）を無色液体として得た。
１Ｈ　ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ１．３３－１．５５（４Ｈ，ｍ），１．５６－１．８６（２Ｈ，ｍ），３．３６－３．５８（３Ｈ，ｍ），３．６８－３．８８（２Ｈ，ｍ），４．３１－４．７０（２Ｈ，ｍ），４．７１－４．８６（２Ｈ，ｍ）。
　参考例１３：（２Ｒ）－３－フルオロ－２－（（テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）オキシ）プロパン－１－オールの製造
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000031
 　参考例９で製造した２－（（（Ｒ）－１－（ベンジルオキシ）－３－フルオロプロパン－２－イル）オキシ）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン（１０．３５ｇ）を用いて参考例１２と同様な方法により、標題化合物（６．８５ｇ）を無色液体として得た。
１Ｈ　ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ１．３５－１．５３（４Ｈ，ｍ），１．５５－１．８１（２Ｈ，ｍ），３．３７－３．６２（３Ｈ，ｍ），３．６７－３．９１（２Ｈ，ｍ），４．２９－４．６９（２Ｈ，ｍ），４．７１－４．８７（２Ｈ，ｍ）。
　参考例１４：（２Ｓ）－３－フルオロ－２－（（テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）オキシ）プロパン－１－オールの製造
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000032
 　参考例１０で製造した２－（（（Ｓ）－１－（ベンジルオキシ）－３－フルオロプロパン－２－イル）オキシ）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン（１０．４５ｇ）を用いて参考例１２と同様な方法により、標題化合物（６．９０ｇ）を無色液体として得た。
１Ｈ　ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ１．３３－１．５６（４Ｈ，ｍ），１．５７－１．８１（２Ｈ，ｍ），３．３５－３．５９（３Ｈ，ｍ），３．６９－３．９０（２Ｈ，ｍ），４．３１－４．６８（２Ｈ，ｍ），４．７１－４．８７（２Ｈ，ｍ）。
　参考例１５：２－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）－３－ヒドロキシプロピル　４－メチルベンゼンスルホナートの製造
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000033
 　参考例１１で製造した３－（ベンジルオキシ）－２－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）プロピル　４－メチルベンゼンスルホナート（３．３６ｇ）を用いて参考例１２と同様な方法により、標題化合物（２．６６ｇ）を無色液体として得た。
１Ｈ　ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ－０．０１（３Ｈ，ｓ），０．０１（３Ｈ，ｓ），０．８０（９Ｈ，ｓ），２．４２（３Ｈ，ｓ），３．２０－３．３８（２Ｈ，ｍ），３．７５－３．９１（２Ｈ，ｍ），４．０２－４．１０（１Ｈ，ｍ），４．８１（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ），７．４９（２Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．６，０．７Ｈｚ），７．７７（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ）。
　参考例１６：（２Ｓ）－３－フルオロ－２－（（テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）オキシ）プロパン－１－オールと（２Ｓ）－１－フルオロ－３－（（テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）オキシ）プロパン－２－オールの混合物の製造
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000034
 　参考例１４で製造した（２Ｓ）－３－フルオロ－２－（（テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）オキシ）プロパン－１－オール（６．９０ｇ）を室温で保管して、標題化合物（６．９０ｇ）を無色液体として得た。
１Ｈ　ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ１．３３－１．５４（４Ｈ，ｍ），１．５６－１．８５（２Ｈ，ｍ），３．２８－３．９６（５Ｈ，ｍ），４．１８－４．９２（３Ｈ，ｍ），４．９２－５．２０（１Ｈ，ｍ）。
　参考例１７：ジエチル　（（６－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）ベンゾ［ｄ］チアゾール－２－イル）メチル）ホスホナートの製造
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000035
 　２－（ブロモメチル）－６－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）ベンゾ［ｄ］チアゾール（ＣＡＳ［１６３８６８５－６５－０］）（３．０６ｇ）と亜リン酸トリエチル（１．７８ｍｌ）との混合物を１００℃で３時間撹拌したのち、室温に冷却してシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル／メタノール）で精製し、標題化合物（２．３９ｇ）を黄色液体として得た。
１Ｈ　ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ０．２２（６Ｈ，ｓ），０．９７（９Ｈ，ｓ），１．２３（６Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ），３．８０－３．９２（２Ｈ，ｍ），４．０１－４．１３（４Ｈ，ｍ），７．００（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．７，２．５Ｈｚ），７．５６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ），７．８１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ）。
　参考例１８：ジエチル　（（６－ヒドロキシベンゾ［ｄ］チアゾール－２－イル）メチル）ホスホナートの製造
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000036
 　参考例１７で製造したジエチル　（（６－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）ベンゾ［ｄ］チアゾール－２－イル）メチル）ホスホナート（４．８７ｇ）のＴＨＦ（５０ｍｌ）溶液に、テトラ－ｎ－ブチルアンモニウムフルオリド（１Ｍ　ＴＨＦ溶液，１２．９ｍｌ）を室温で加えた。その混合物を室温で１時間撹拌したのち、水で希釈して、酢酸エチルで抽出した。抽出液を水と食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥して、減圧下で濃縮した。残渣の固体をヘキサン／酢酸エチルに懸濁したのち、濾取してヘキサン／酢酸エチルで洗浄後に乾燥し、標題化合物（２．８５ｇ）を黄色固体として得た。１Ｈ　ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ１．２２（６Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ），３．８１（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝２１．４Ｈｚ），４．０５（４Ｈ，ｄｑ，Ｊ＝８．３，７．１Ｈｚ），６．９３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．８，２．５Ｈｚ），７．３４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ），７．７３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ），９．７８（１Ｈ，ｂｒｓ）。
　参考例１９：ジエチル　（（６－（３－フルオロ－２－（（テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）オキシ）プロポキシ）ベンゾ［ｄ］チアゾール－２－イル）メチル）ホスホナートの製造
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000037
 　参考例１８で製造したジエチル　（（６－ヒドロキシベンゾ［ｄ］チアゾール－２－イル）メチル）ホスホナート（２．８４ｇ）、参考例１２で製造した３－フルオロ－２－（（テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）オキシ）プロパン－１－オール（２．５２ｇ）とトリフェニルホスフィン（４．２０ｇ）とのＴＨＦ（５０ｍｌ）溶液に、アゾジカルボン酸ジイソプロピル（３．１５ｍｌ）を室温で加えた。その混合物を室温で１日撹拌し、参考例１２で製造した３－フルオロ－２－（（テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）オキシ）プロパン－１－オール（０．５０４ｇ）、トリフェニルホスフィン（０．７４２ｇ）とアゾジカルボン酸ジイソプロピル（０．５５５ｍｌ）を室温で加え、室温で終夜撹拌したのち、減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル）で精製し、標題化合物（３．７８ｇ）を黄色液体として得た。
１Ｈ　ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ１．２２（６Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ），１．３７－１．５６（４Ｈ，ｍ），１．５９－１．８０（２Ｈ，ｍ），３．４１－３．５３（１Ｈ，ｍ），３．７８－３．９４（３Ｈ，ｍ），４．０１－４．１１（４Ｈ，ｍ），４．１２－４．２９（３Ｈ，ｍ），４．４８－４．６５（１Ｈ，ｍ），４．６５－４．８１（１Ｈ，ｍ），４．８３－４．９４（１Ｈ，ｍ），７．１２（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝９．０，２．１Ｈｚ），７．７０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ），７．８４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ）。
　参考例２０：ｔｅｒｔ－ブチル　（Ｅ）－（５－（４－（６－（３－フルオロ－２－（（テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）オキシ）プロポキシ）ベンゾ［ｄ］チアゾール－２－イル）ブタ－３－エン－１－イン－１－イル）ピラジン－２－イル）（メチル）カルバマートの製造
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000038
 　参考例１９で製造したジエチル　（（６－（３－フルオロ－２－（（テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）オキシ）プロポキシ）ベンゾ［ｄ］チアゾール－２－イル）メチル）ホスホナート（３．７７ｇ）と参考例６で製造したｔｅｒｔ－ブチル　メチル（５－（３－オキソプロプ－１－イン－１－イル）ピラジン－２－イル）カルバマート（２．５６ｇ）とのＴＨＦ（３０ｍｌ）溶液に、水素化ナトリウム（６０％油性，３９２ｍｇ）を０℃で加えた。その混合物を０℃で１０分間撹拌後、ＤＭＦ（３０ｍｌ）を０℃で加え、０℃から室温で３時間撹拌した。その混合物に参考例６で製造したｔｅｒｔ－ブチル　メチル（５－（３－オキソプロプ－１－イン－１－イル）ピラジン－２－イル）カルバマート（２５６ｍｇ）を室温で加えて室温で１時間撹拌したのち、酢酸エチル及び水で希釈後、５％クエン酸水溶液で中和して、酢酸エチルで抽出した。抽出液を水と食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥して減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル）で精製し、標題化合物を含むフラクションを減圧下で濃縮した。残渣の固体をヘキサンに懸濁して、濾取により得た固体をヘキサンで洗浄後に乾燥し、標題化合物（２．０６ｇ）を黄色固体として得た。
１Ｈ　ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ１．３９－１．５８（１３Ｈ，ｍ），１．５９－１．８１（２Ｈ，ｍ），３．３３（３Ｈ，ｓ），３．４１－３．５２（１Ｈ，ｍ），３．７８－３．９５（１Ｈ，ｍ），４．１３－４．３１（３Ｈ，ｍ），４．４８－４．６６（１Ｈ，ｍ），４．６６－４．８３（１Ｈ，ｍ），４．８４－４．９３（１Ｈ，ｍ），７．０１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１６．２Ｈｚ），７．１７（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝９．０，２．２Ｈｚ），７．４８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１６．０Ｈｚ），７．７７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ），７．９２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ），８．６５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．５Ｈｚ），９．０６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．５Ｈｚ）。
　実施例１：ｔｅｒｔ－ブチル　（Ｅ）－（５－（４－（６－ヒドロキシベンゾ［ｄ］チアゾール－２－イル）ブタ－３－エン－１－イン－１－イル）ピラジン－２－イル）（メチル）カルバマートの製造
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000039
 　参考例１７で製造したジエチル　（（６－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）ベンゾ［ｄ］チアゾール－２－イル）メチル）ホスホナート（２．３９ｇ）と参考例６で製造したｔｅｒｔ－ブチル　メチル（５－（３－オキソプロプ－１－イン－１－イル）ピラジン－２－イル）カルバマート（１．６５ｇ）とのＴＨＦ（２５ｍｌ）溶液に、水素化ナトリウム（６０％油性，３２２ｍｇ）を０℃で加えた。その混合物を０℃で５分間撹拌後、ＤＭＦ（２５ｍｌ）を０℃で加え、０℃で２時間撹拌した。その混合物に水素化ナトリウム（６０％油性，１３８ｍｇ）と参考例６で製造したｔｅｒｔ－ブチル　メチル（５－（３－オキソプロプ－１－イン－１－イル）ピラジン－２－イル）カルバマート（６０１ｍｇ）を０℃で加えて、０℃から室温で２時間撹拌したのち、０℃に冷却して５％クエン酸水溶液でｐＨ約５とし、水で希釈後に、酢酸エチルで抽出した。抽出液を水と食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、短いシリカゲルカラムクロマトグラフィーを通して減圧下で濃縮した。残渣の固体を酢酸エチル／ヘキサンに懸濁後に、濾取により得た固体を酢酸エチル／ヘキサンで洗浄したのちに乾燥し、標題化合物（１．８５ｇ）を黄色固体として得た。
１Ｈ　ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ１．５１（９Ｈ，ｓ），３．３３（３Ｈ，ｓ），６．９４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１６．０Ｈｚ），７．００（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．９，２．４Ｈｚ），７．３９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ），７．４４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１６．０Ｈｚ），７．８２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ），８．６４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．５Ｈｚ），９．０５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．５Ｈｚ），１０．１４（１Ｈ，ｂｒｓ）。
　実施例２：ｔｅｒｔ－ブチル　（Ｅ）－（５－（４－（６－ヒドロキシベンゾ［ｄ］チアゾール－２－イル）ブタ－３－エン－１－イン－１－イル）ピリミジン－２－イル）（メチル）カルバマートの製造
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000040
 　参考例１７で製造したジエチル　（（６－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）ベンゾ［ｄ］チアゾール－２－イル）メチル）ホスホナート（２５４ｍｇ）と参考例７で製造したｔｅｒｔ－ブチル　メチル（５－（３－オキソプロプ－１－イン－１－イル）ピリミジン－２－イル）カルバマート（１４５ｍｇ）とを用いて実施例１と同様な方法により、標題化合物（１０１ｍｇ）を黄色固体として得た。
１Ｈ　ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ１．４６（９Ｈ，ｓ），３．３４（３Ｈ，ｓ），６．９２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１６．０Ｈｚ），７．００（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．９，２．４Ｈｚ），７．３８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１６．０Ｈｚ），７．３９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ），７．８２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ），８．８７（２Ｈ，ｓ），１０．０１（１Ｈ，ｓ）。
　参考例２１：ｔｅｒｔ－ブチル　（５－（（Ｅ）－４－（６－（（２Ｒ）－３－フルオロ－２－（（テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）オキシ）プロポキシ）ベンゾ［ｄ］チアゾール－２－イル）ブタ－３－エン－１－イン－１－イル）ピラジン－２－イル）（メチル）カルバマートの製造
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000041
 　実施例１で製造したｔｅｒｔ－ブチル　（Ｅ）－（５－（４－（６－ヒドロキシベンゾ［ｄ］チアゾール－２－イル）ブタ－３－エン－１－イン－１－イル）ピラジン－２－イル）（メチル）カルバマート（１００ｍｇ）、参考例１３で製造した（２Ｒ）－３－フルオロ－２－（（テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）オキシ）プロパン－１－オール（１１４ｍｇ）とアゾジカルボン酸ビス（２－メトキシエチル）（１７２ｍｇ）を用いて参考例１９と同様な方法により、標題化合物（１００ｍｇ）を淡黄色固体として得た。
１Ｈ　ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ１．５１（１３Ｈ，ｓ），１．６０－１．７９（２Ｈ，ｍ），３．３４（３Ｈ，ｓ），３．４２－３．５４（１Ｈ，ｍ），３．７９－３．９６（１Ｈ，ｍ），４．１４－４．３１（３Ｈ，ｍ），４．４９－４．８２（２Ｈ，ｍ），４．８４－４．９６（１Ｈ，ｍ），７．０２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１６．１Ｈｚ），７．１７（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝９．０，２．１Ｈｚ），７．４８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１６．１Ｈｚ），７．７７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．５Ｈｚ），７．９２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ），８．６５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．４Ｈｚ），９．０６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．５Ｈｚ）。
　参考例２２：ｔｅｒｔ－ブチル　（５－（（Ｅ）－４－（６－（（２Ｓ）－３－フルオロ－２－（（テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）オキシ）プロポキシ）ベンゾ［ｄ］チアゾール－２－イル）ブタ－３－エン－１－イン－１－イル）ピラジン－２－イル）（メチル）カルバマートの製造
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000042
 　実施例１で製造したｔｅｒｔ－ブチル　（Ｅ）－（５－（４－（６－ヒドロキシベンゾ［ｄ］チアゾール－２－イル）ブタ－３－エン－１－イン－１－イル）ピラジン－２－イル）（メチル）カルバマート（１００ｍｇ）と、参考例１６で製造した（２Ｓ）－３－フルオロ－２－（（テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）オキシ）プロパン－１－オール及び（２Ｓ）－１－フルオロ－３－（（テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）オキシ）プロパン－２－オールの混合物（１１４ｍｇ）と、アゾジカルボン酸ビス（２－メトキシエチル）（１７２ｍｇ）とを用いて参考例１９と同様な方法により、標題化合物（２２ｍｇ）を淡黄色固体として得た。
１Ｈ　ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ１．５１（１３Ｈ，ｓ），１．６０－１．７９（２Ｈ，ｍ），３．３４（３Ｈ，ｓ），３．４２－３．５４（１Ｈ，ｍ），３．７９－３．９５（１Ｈ，ｍ），４．１３－４．３０（３Ｈ，ｍ），４．４９－４．８２（２Ｈ，ｍ），４．８４－４．９６（１Ｈ，ｍ），７．０２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１６．２Ｈｚ），７．１７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．８，２．４Ｈｚ），７．４８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１６．０Ｈｚ），７．７７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ），７．９２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ），８．６５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．３Ｈｚ），９．０６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．３Ｈｚ）。
　参考例２３：（Ｅ）－３－（（２－（４－（５－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）（メチル）アミノ）ピラジン－２－イル）ブタ－１－エン－３－イン－１－イル）ベンゾ［ｄ］チアゾール－６－イル）オキシ）－２－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）プロピル　４－メチルベンゼンスルホナートの製造
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000043
 　実施例１で製造したｔｅｒｔ－ブチル　（Ｅ）－（５－（４－（６－ヒドロキシベンゾ［ｄ］チアゾール－２－イル）ブタ－３－エン－１－イン－１－イル）ピラジン－２－イル）（メチル）カルバマート（９７１ｍｇ）と、参考例１５で製造した２－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）－３－ヒドロキシプロピル　４－メチルベンゼンスルホナート（１．１１ｇ）と、アゾジカルボン酸ビス（２－メトキシエチル）（８３５ｍｇ）とを用いて参考例１９と同様な方法により、標題化合物（１．４７ｇ）を淡黄色固体として得た。
１Ｈ　ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ０．０４（３Ｈ，ｓ），０．０４（３Ｈ，ｓ），０．８１（９Ｈ，ｓ），１．５１（９Ｈ，ｓ），２．３８（３Ｈ，ｓ），３．３４（３Ｈ，ｓ），３．９０－４．１９（４Ｈ，ｍ），４．２０－４．３２（１Ｈ，ｍ），７．０２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１６．０Ｈｚ），７．０２－７．０８（１Ｈ，ｍ），７．４５（２Ｈ，ｂｒｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ），７．４８（１Ｈ，ｂｒｄ，Ｊ＝１６．０Ｈｚ），７．６６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ），７．７９（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ），７．９１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ），８．６５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．５Ｈｚ），９．０６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．５Ｈｚ）。
　参考例２４：ｔｅｒｔ－ブチル　（Ｅ）－（５－（４－（６－（３－フルオロ－２－ヒドロキシプロポキシ）ベンゾ［ｄ］チアゾール－２－イル）ブタ－３－エン－１－イン－１－イル）ピリミジン－２－イル）（メチル）カルバマートの製造
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000044
 　実施例２で製造したｔｅｒｔ－ブチル　（Ｅ）－（５－（４－（６－ヒドロキシベンゾ［ｄ］チアゾール－２－イル）ブタ－３－エン－１－イン－１－イル）ピリミジン－２－イル）（メチル）カルバマート（９９ｍｇ）と炭酸カリウム（６６ｍｇ）とのＤＭＦ（３ｍｌ）溶液に２－（フルオロメチル）オキシラン（ＣＡＳ［５０３－０９－３］）（０．０６０ｍｌ）を室温で加えた。その混合物を８０℃で４時間加熱して、室温に冷却後、酢酸エチルと水で希釈して、５％クエン酸水溶液で中和後に、酢酸エチルで抽出した。抽出液を水と食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥して、減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル）で精製して、標題化合物（３６ｍｇ）を黄色固体として得た。
１Ｈ　ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ１．４６（９Ｈ，ｓ），３．３４（３Ｈ，ｓ），４．０２－４．１６（３Ｈ，ｍ），４．３９－４．４６（１Ｈ，ｍ），４．５６－４．６３（１Ｈ，ｍ），５．４９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．３Ｈｚ），６．９９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１６．２Ｈｚ），７．１６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．０，２．６Ｈｚ），７．４１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１６．２Ｈｚ），７．７３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ），７．９１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ），８．８７（２Ｈ，ｓ）。
　参考例２５：（Ｅ）－３－（（２－（４－（５－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）（メチル）アミノ）ピラジン－２－イル）ブタ－１－エン－３－イン－１－イル）ベンゾ［ｄ］チアゾール－６－イル）オキシ）－２－ヒドロキシプロピル　４－メチルベンゼンスルホナートの製造
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000045
 　参考例２３で製造した（Ｅ）－３－（（２－（４－（５－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）（メチル）アミノ）ピラジン－２－イル）ブタ－１－エン－３－イン－１－イル）ベンゾ［ｄ］チアゾール－６－イル）オキシ）－２－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）プロピル　４－メチルベンゼンスルホナート（１００ｍｇ）と酢酸（０．０２３ｍｌ）とのＴＨＦ（１０ｍｌ）溶液にテトラ－ｎ－ブチルアンモニウムフルオリド（１Ｍ　ＴＨＦ溶液，０．５３３ｍｌ）を０℃で加えた。その混合物を０℃で０．５時間撹拌したのち、水で希釈して、酢酸エチルで抽出した。抽出液を水と食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥して、減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル）で精製し、標題化合物（３７ｍｇ）を黄色固体として得た。
１Ｈ　ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ１．５１（９Ｈ，ｓ），２．３５（３Ｈ，ｓ），３．３４（３Ｈ，ｓ），３．９１－４．１９（５Ｈ，ｍ），５．５９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．９Ｈｚ），７．０２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１６．１Ｈｚ），７．００－７．０７（１Ｈ，ｍ），７．３５－７．４３（２Ｈ，ｍ），７．４８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１６．１Ｈｚ），７．６２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．５Ｈｚ），７．７７（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ），７．８９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ），８．６５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．５Ｈｚ），９．０６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．５Ｈｚ）。
　参考例２６：（Ｅ）－２－ヒドロキシ－３－（（２－（４－（５－（メチルアミノ）ピラジン－２－イル）ブタ－１－エン－３－イン－１－イル）ベンゾ［ｄ］チアゾール－６－イル）オキシ）プロピル　４－メチルベンゼンスルホナートの製造
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000046
 　参考例２３で製造した（Ｅ）－３－（（２－（４－（５－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）（メチル）アミノ）ピラジン－２－イル）ブタ－１－エン－３－イン－１－イル）ベンゾ［ｄ］チアゾール－６－イル）オキシ）－２－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）プロピル　４－メチルベンゼンスルホナート（７５０ｍｇ）のＴＦＡ（１３．５ｍｌ）と水（１．５ｍｌ）との混合溶液を室温で０．５時間撹拌後、０℃に冷却し、酢酸エチルで希釈後、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で中和して、酢酸エチルで抽出した。抽出液を水と食塩水で洗浄後に、抽出液から析出した固体を濾取した。濾液を無水硫酸ナトリウムで乾燥して、減圧下で濃縮した。残渣の固体と濾取した固体を合わせてヘキサンに懸濁した。濾取により得た固体をヘキサンで洗浄後に乾燥し、標題化合物（５５０ｍｇ）を黄色固体として得た。
１Ｈ　ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ２．３４（３Ｈ，ｓ），２．８４（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ），３．９０－３．９８（２Ｈ，ｍ），４．０２－４．１７（３Ｈ，ｍ），５．６０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ），６．９５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１６．０Ｈｚ），７．００（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．８，２．４Ｈｚ），７．２９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１６．０Ｈｚ），７．４０（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），７．５９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ），７．６８（１Ｈ，ｂｒｓ），７．７７（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ），７．８６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ），７．９４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．６Ｈｚ），８．２１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．２Ｈｚ）。
　実施例３：（Ｅ）－２－（４－（５－（メチルアミノ）ピラジン－２－イル）ブタ－１－エン－３－イン－１－イル）ベンゾ［ｄ］チアゾール－６－オールの製造
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000047
 　実施例１で製造したｔｅｒｔ－ブチル　（Ｅ）－（５－（４－（６－ヒドロキシベンゾ［ｄ］チアゾール－２－イル）ブタ－３－エン－１－イン－１－イル）ピラジン－２－イル）（メチル）カルバマート（２３０ｍｇ）のＴＦＡ（４ｍｌ）溶液を室温で１時間撹拌後、減圧下で濃縮した。残渣に酢酸エチルを加え０℃に冷却後、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で中和して酢酸エチルで抽出した。抽出液を水と食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下で濃縮した。残渣の固体を酢酸エチルに懸濁し、濾取により得た固体を酢酸エチルで洗浄後に乾燥し、標題化合物（１４０ｍｇ）を黄色固体として得た。
１Ｈ　ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ２．８４（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．９Ｈｚ），６．８１－６．９２（１Ｈ，ｍ），６．９８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．８，２．４Ｈｚ），７．２６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５．８Ｈｚ），７．３７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ），７．６３（１Ｈ，ｑ，Ｊ＝５．０Ｈｚ），７．７９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ），７．９４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．５Ｈｚ），８．２０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．１Ｈｚ），９．９７（１Ｈ，ｓ）。
　実施例４：（Ｅ）－１－フルオロ－３－（（２－（４－（５－（メチルアミノ）ピラジン－２－イル）ブタ－１－エン－３－イン－１－イル）ベンゾ［ｄ］チアゾール－６－イル）オキシ）プロパン－２－オール（以下、「ＳＰＡＬ－Ｔ－０６」という）の製造
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000048
 　参考例２０で製造したｔｅｒｔ－ブチル　（Ｅ）－（５－（４－（６－（３－フルオロ－２－（（テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）オキシ）プロポキシ）ベンゾ［ｄ］チアゾール－２－イル）ブタ－３－エン－１－イン－１－イル）ピラジン－２－イル）（メチル）カルバマート（２．０６ｇ）のＴＦＡ（２０ｍｌ）溶液を室温で０．５時間撹拌後、減圧下で濃縮した。残渣にトルエンを加え、その混合物を減圧下で濃縮した。残渣に酢酸エチルと水を加え、５％炭酸水素ナトリウム水溶液で中和した。析出した固体を濾取して、水と酢酸エチルで洗浄して乾燥した。濾液と洗浄液を合わせて、酢酸エチルで抽出した。抽出液を水と食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下で濃縮した。残渣の固体を酢酸エチルに懸濁し、濾取により得た固体を酢酸エチルで洗浄後乾燥した。この固体と抽出前に濾取した固体と合わせて酢酸エチルに懸濁し、濾取により得た固体を酢酸エチルで洗浄後に乾燥し、標題化合物（１．０７ｇ）を黄色固体として得た。
１Ｈ　ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ２．８４（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．９Ｈｚ），４．００－４．１６（３Ｈ，ｍ），４．３７－４．４９（１Ｈ，ｍ），４．５３－４．６６（１Ｈ，ｍ），５．５１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．１Ｈｚ），６．９５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１６．０Ｈｚ），７．１５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．０，２．６Ｈｚ），７．２９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１６．０Ｈｚ），７．６７（１Ｈ，ｑ，Ｊ＝４．６Ｈｚ），７．７１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．６Ｈｚ），７．８９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ），７．９４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．５Ｈｚ），８．２１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．３Ｈｚ）。
　実施例５：（Ｒ，Ｅ）－１－フルオロ－３－（（２－（４－（５－（メチルアミノ）ピラジン－２－イル）ブタ－１－エン－３－イン－１－イル）ベンゾ［ｄ］チアゾール－６－イル）オキシ）プロパン－２－オールの製造
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000049
 　参考例２１で製造したｔｅｒｔ－ブチル　（５－（（Ｅ）－４－（６－（（２Ｒ）－３－フルオロ－２－（（テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）オキシ）プロポキシ）ベンゾ［ｄ］チアゾール－２－イル）ブタ－３－エン－１－イン－１－イル）ピラジン－２－イル）（メチル）カルバマート（９８ｍｇ）を用いて実施例４と同様な方法により、標題化合物（５８ｍｇ）を淡黄色固体として得た。
１Ｈ　ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ２．８４（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ），４．０１－４．１７（３Ｈ，ｍ），４．３７－４．４９（１Ｈ，ｍ），４．５３－４．６５（１Ｈ，ｍ），５．５０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．１Ｈｚ），６．９５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１６．１Ｈｚ），７．１５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．９，２．６Ｈｚ），７．２９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１６．１Ｈｚ），７．６６（１Ｈ，ｑ，Ｊ＝４．９Ｈｚ），７．７１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．５Ｈｚ），７．８９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ），７．９４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．４Ｈｚ），８．２１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．３Ｈｚ）。
　実施例６：（Ｓ，Ｅ）－１－フルオロ－３－（（２－（４－（５－（メチルアミノ）ピラジン－２－イル）ブタ－１－エン－３－イン－１－イル）ベンゾ［ｄ］チアゾール－６－イル）オキシ）プロパン－２－オールの製造
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000050
 　参考例２２で製造したｔｅｒｔ－ブチル　（５－（（Ｅ）－４－（６－（（２Ｓ）－３－フルオロ－２－（（テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）オキシ）プロポキシ）ベンゾ［ｄ］チアゾール－２－イル）ブタ－３－エン－１－イン－１－イル）ピラジン－２－イル）（メチル）カルバマート（２０ｍｇ）を用いて実施例４と同様な方法により、標題化合物（１２ｍｇ）を淡黄色固体として得た。
１Ｈ　ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ２．８４（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．７Ｈｚ），４．００－４．１７（３Ｈ，ｍ），４．３７－４．４９（１Ｈ，ｍ），４．５３－４．６５（１Ｈ，ｍ），５．５１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．７Ｈｚ），６．９５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１６．０Ｈｚ），７．１５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．９，２．５Ｈｚ），７．２９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１６．２Ｈｚ），７．６２－７．７０（１Ｈ，ｍ），７．７１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ），７．８９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ），７．９４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．３Ｈｚ），８．２１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．１Ｈｚ）。
　実施例７：（Ｅ）－１－フルオロ－３－（（２－（４－（２－（メチルアミノ）ピリミジン－５－イル）ブタ－１－エン－３－イン－１－イル）ベンゾ［ｄ］チアゾール－６－イル）オキシ）プロパン－２－オール（以下、「ＳＰＡＬ－Ｔ－０５」という）の製造
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000051
 　参考例２４で製造したｔｅｒｔ－ブチル　（Ｅ）－（５－（４－（６－（３－フルオロ－２－ヒドロキシプロポキシ）ベンゾ［ｄ］チアゾール－２－イル）ブタ－３－エン－１－イン－１－イル）ピリミジン－２－イル）（メチル）カルバマート（３４ｍｇ）を用いて実施例４と同様な方法により、標題化合物（１５ｍｇ）を黄色固体として得た。
１Ｈ　ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ２．８４（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．５Ｈｚ），４．００－４．１６（３Ｈ，ｍ），４．３６－４．５０（１Ｈ，ｍ），４．５２－４．６６（１Ｈ，ｍ），５．４９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．３Ｈｚ），６．８６－６．９９（１Ｈ，ｍ），７．１０－７．１８（１Ｈ，ｍ），７．２５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５．８Ｈｚ），７．６７－７．７７（２Ｈ，ｍ），７．８８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ），８．３８－８．５８（２Ｈ，ｍ）。
　実施例８：（Ｅ）－３－（（２－（４－（５－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）（メチル）アミノ）ピラジン－２－イル）ブタ－１－エン－３－イン－１－イル）ベンゾ［ｄ］チアゾール－６－イル）オキシ）－２－（（テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）オキシ）プロピル　４－メチルベンゼンスルホナートの製造
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000052
 　参考例２５で製造した（Ｅ）－３－（（２－（４－（５－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）（メチル）アミノ）ピラジン－２－イル）ブタ－１－エン－３－イン－１－イル）ベンゾ［ｄ］チアゾール－６－イル）オキシ）－２－ヒドロキシプロピル　４－メチルベンゼンスルホナート（３５ｍｇ）と３，４－ジヒドロ－２Ｈ－ピラン（０．０５０ｍｌ）とのＴＨＦ（１５ｍｌ）溶液にｐ－トルエンスルホン酸一水和物（２１ｍｇ）を室温で加えた。その混合物を室温で４時間撹拌したのち、３，４－ジヒドロ－２Ｈ－ピラン（０．２４９ｍｌ）とｐ－トルエンスルホン酸一水和物（２１ｍｇ）を室温で加えた。その混合物を室温で終夜撹拌したのち、酢酸エチルで希釈後、５％炭酸水素ナトリウム水溶液で中和して、水で希釈後に酢酸エチルで抽出した。抽出液を水と食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥して、減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル）で精製し、標題化合物を含むフラクションを減圧下で濃縮した。残渣の固体をヘキサンに懸濁して濾取により得た固体をヘキサンで洗浄後に乾燥し、標題化合物（２８ｍｇ）を黄色固体として得た。
１Ｈ　ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ１．３２－１．７２（１５Ｈ，ｍ），２．３５（３Ｈ，ｓ），３．３４－３．４６（４Ｈ，ｍ），３．６１－３．９３（１Ｈ，ｍ），４．０１－４．４１（５Ｈ，ｍ），４．６６－４．９０（１Ｈ，ｍ），６．９９－７．０５（１Ｈ，ｍ），７．０２－７．０９（１Ｈ，ｍ），７．４１（２Ｈ，ｂｒｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ），７．４８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１６．２Ｈｚ），７．６５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．１Ｈｚ），７．７９（２Ｈ，ｂｒｄ，Ｊ＝７．３Ｈｚ），７．９０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ），８．６５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．１Ｈｚ），９．０６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝０．９Ｈｚ）。
　実施例９：（Ｅ）－３－（（２－（４－（５－（メチルアミノ）ピラジン－２－イル）ブタ－１－エン－３－イン－１－イル）ベンゾ［ｄ］チアゾール－６－イル）オキシ）－２－（（テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）オキシ）プロピル　４－メチルベンゼンスルホナートの製造
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000053
 　参考例２６で製造した（Ｅ）－２－ヒドロキシ－３－（（２－（４－（５－（メチルアミノ）ピラジン－２－イル）ブタ－１－エン－３－イン－１－イル）ベンゾ［ｄ］チアゾール－６－イル）オキシ）プロピル　４－メチルベンゼンスルホナート（３５ｍｇ）と３，４－ジヒドロ－２Ｈ－ピラン（０．０１８ｍｌ）とのＴＨＦ（１５ｍｌ）溶液にｐ－トルエンスルホン酸一水和物（１２ｍｇ）を室温で加えた。その混合物を室温で０．５時間撹拌し、ＤＭＦ（５ｍｌ）と３，４－ジヒドロ－２Ｈ－ピラン（０．１５９ｍｌ）とｐ－トルエンスルホン酸一水和物（２４ｍｇ）を室温で加えた。その混合物を室温で終夜撹拌したのち、水で希釈し、酢酸エチルで抽出した。抽出液を水と食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥して、減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル）で精製し、標題化合物を含むフラクションを減圧下で濃縮した。残渣の固体をヘキサンに懸濁し、濾取により得た固体をヘキサンで洗浄後に乾燥し、標題化合物（２１ｍｇ）を黄色固体として得た。
１Ｈ　ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ１．３２－１．７１（６Ｈ，ｍ），２．３５（３Ｈ，ｓ），２．８４（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．９Ｈｚ），３．３５－３．４６（１Ｈ，ｍ），３．６２－３．８７（１Ｈ，ｍ），４．０５－４．１９（３Ｈ，ｍ），４．２０－４．３６（２Ｈ，ｍ），４．６５－４．８７（１Ｈ，ｍ），６．９６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１６．２Ｈｚ），７．０２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．９，１．６Ｈｚ），７．３０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１６．０Ｈｚ），７．４１（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ），７．６２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．６Ｈｚ），７．６７（１Ｈ，ｑ，Ｊ＝４．４Ｈｚ），７．７９（２Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．４，１．６Ｈｚ），７．８６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ），７．９４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．５Ｈｚ），８．２１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．３Ｈｚ）。
　実施例１０：［１８Ｆ］ＳＰＡＬ－Ｔ－０６の製造例１
　以下のスキームにより、フッ素原子が１８ＦであるＳＰＡＬ－Ｔ－０６（以下、［１８Ｆ］ＳＰＡＬ－Ｔ－０６）を製造した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000054
　［１８Ｆ］エピフルオロヒドリンの合成は、［１８Ｆ］フッ化物イオンを用いたグリシジルトシレートの求核置換及び蒸留による精製により実施した。以下の反応は薄暗下で行った。［１８Ｆ］エピフルオロヒドリン、実施例３で製造した（Ｅ）－２－（４－（５－（メチルアミノ）ピラジン－２－イル）ブタ－１－エン－３－イン－１－イル）ベンゾ［ｄ］チアゾール－６－オール（２ｍｇ）を含むＤＭＦ（２５０μｌ）溶液、及び１Ｍ水酸化ナトリウム水溶液（６．５μｌ）を反応容器に加えた。反応混合液を、１３０℃にて２０分間加熱した。反応容器を冷却後、この後のＨＰＬＣに用いるＨＰＬＣ溶媒（５００μｌ）を加えた。混合液を、ＨＰＬＣ（ＨＰＬＣ：ＣＡＰＣＥＬＬ　ＰＡＫ　Ｃ１８　ＵＧ８０　１０ｍｍ×２５０ｍｍ、アセトニトリル／水＝４／６（０．１％トリエチルアミンを含む）、５ｍｌ／分）にて精製した。［１８Ｆ］ＳＰＡＬ－Ｔ－０６に相当する画分を、エタノール（３００μｌ）、２５％アスコルビン酸（１００μｌ）及びＴｗｅｅｎ８０（７５μｌ）を含むフラスコに回収し、減圧下で溶媒を留去した。残渣を、生理食塩水（３ｍｌ、ｐＨ７．４）に溶解し、注射溶液として、［１８Ｆ］ＳＰＡＬ－Ｔ－０６を得た。
　実施例１１：［１８Ｆ］ＳＰＡＬ－Ｔ－０６の製造例２
　以下のスキームにより、［１８Ｆ］ＳＰＡＬ－Ｔ－０６を製造した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000055
 　［１８Ｆ］フッ化物イオンを、Ｋ．２２２（Ｋｒｙｐｔｏｆｉｘ　２２２）（７．５ｍｇ）と炭酸カリウム（２．７７ｍｇ）を含む５０％アセトニトリル溶液（０．４ｍｌ）で溶出し、反応容器に導入した後、窒素ガス気流下で加熱し、溶媒を乾固させた。その後、無水アセトニトリル（０．１ｍｌ）を加えて共沸留去し、充分に反応容器内を乾燥させた。以下の反応は薄暗下で行った。実施例９で製造した（Ｅ）－３－（（２－（４－（５－（メチルアミノ）ピラジン－２－イル）ブタ－１－エン－３－イン－１－イル）ベンゾ［ｄ］チアゾール－６－イル）オキシ）－２－（（テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）オキシ）プロピル　４－メチルベンゼンスルホナート（２ｍｇ）を含むＤＭＳＯ（３００μｌ）溶液を反応容器に加えた。反応混合液を、１２０℃にて１５分間加熱した。反応容器を冷却後、ＴＦＡ／水（６００μｌ）を加え、９０℃で１０分間加水分解を行った。反応容器を冷却後、４Ｎ酢酸ナトリウム水溶液（１ｍｌ）を加えて攪拌した。混合液を、ＨＰＬＣ（ＨＰＬＣ：ＣＡＰＣＥＬＬ　ＰＡＫ　Ｃ１８　ＵＧ８０　１０ｍｍ×２５０ｍｍ、アセトニトリル／水＝４／６（０．１％トリエチルアミンを含む）、５ｍｌ／分）にて精製した。［１８Ｆ］ＳＰＡＬ－Ｔ－０６に相当する画分を、エタノール（３００μｌ）、２５％アスコルビン酸（１００μｌ）及びＴｗｅｅｎ８０（７５μｌ）を含むフラスコに回収し、減圧下で溶媒を留去した。残渣を、生理食塩水（３ｍｌ、ｐＨ７．４）に溶解し、注射溶液として、［１８Ｆ］ＳＰＡＬ－Ｔ－０６を得た。
　［ヒト脳の光学イメージング］
　（解剖脳組織）
　死後ヒト脳を、レビー小体型認知症（ＤＬＢ）患者、及び、アルツハイマー病（ＡＤ）患者に対して行われた剖検から得た。凍結ＤＬＢ組織をクリオスタット（ＨＭ５６０、Ｃａｒｌ　Ｚｅｉｓｓ）内で２０μｍ厚にスライスした。また、ＡＤ脳組織を１０％中性緩衝ホルマリンに固定し、パラフィンブロックに埋め込み、６μｍ厚にスライスした。
　（インビトロ蛍光顕微鏡測定）
　ＤＬＢ患者脳偏桃体組織の後固定新鮮凍結切片、及び、脱パラフィンしたＡＤ患者脳中前頭回組織のホルマリン固定パラフィン包埋切片を使用した。３０μＭの試験化合物と脳切片を５０％エタノール溶液中にて３０分間室温でインキュベートした。その後切片を５０％エタノール溶液で５分間、超純水で３分間、２回洗浄した。封入剤（ＶＥＣＴＡＳＨＩＥＬＤ　Ｈ－１０００、Ｖｅｃｔｏｒ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を用いて切片を封入後、蛍光顕微鏡（ＤＭ４０００、Ｌｅｉｃａ、励起波長３９１－４３７ｎｍ）を用いて切片上の病変蓄積領域の画像を取得した、蛍光画像を図１に示す。図１において、矢頭はＤＬＢ患者脳のαシヌクレイン凝集体に結合した化合物の蛍光を、矢印はＡＤ患者脳のアミロイドβ凝集体に結合した化合物の蛍光を、アスタリスクはＡＤ患者脳のタウ凝集体に結合した化合物の蛍光を示す。解析ソフトウェア（Ｉｍａｇｅ　Ｊ）を用いて病変領域及び病変非形成領域（バックグラウンド）の蛍光輝度を定量した。結果を図２に示す。なお、試験化合物としては、ＳＰＡＬ－Ｔ－０５及びＳＰＡＬ－Ｔ－０６を用いた。また対照の化合物としては、ナード研究所から入手したＢＦ－２２７（２－（２－［２－ジメチルアミノチアゾール－５－イル］エテニル）－６－（２－［フルオロ］エトキシ）ベンゾオキサゾール（カタログ番号ＮＰ０３９－０））及びＰＢＢ３（２－（（１Ｅ，３Ｅ）－４－（６－（メチルアミノ）ピリジン－３－イル）ブタ－１，３－ジエニル）ベンゾ［ｄ］チアゾール－６－オール）（カタログ番号ＮＰ０３９－０）を使用した。
　図１及び図２に示すように、ＳＰＡＬ－Ｔ－０６及びＳＰＡＬ－Ｔ－０５は、ＰＢＢ３より強い強度でＤＬＢの患者脳で形成されるαシヌクレイン凝集体に結合していることが確認された。また、ＳＰＡＬ－Ｔ－０６及びＳＰＡＬ－Ｔ－０５のαシヌクレイン凝集体への結合性は、ＡＤの患者脳で形成されるタウ又はアミロイドβの凝集体への結合よりも強いことが確認された。すなわち、本発明の化合物はαシヌクレイン凝集体への結合選択性が高いことが示された。なお、多系統萎縮症（ＭＳＡ）患者脳についても、上記ＤＬＢ患者脳と同様にしてインビトロ蛍光顕微鏡測定を行ったところ、同様の結果を得た。
　なお、αシヌクレイン病変のＰＥＴプローブとして報告されているＢＦ－２２７は、主としてＡＤのアミロイドβ凝集体に結合し、αシヌクレイン凝集体への結合は、ＳＰＡＬ－Ｔ－０６及びＳＰＡＬ－Ｔ－０５に比較して弱いことが確認された。すなわち、ＢＦ－２２７はαシヌクレイン凝集体への結合選択性が低いことが示された。
　［マウス脳の光学イメージング］
　（αシヌクレイン線維接種マウスモデルの作製）
　マウスαシヌクレインをリコンビナントタンパク質として大腸菌で発現させて抽出し、試験管内でインキュベートすると、不溶性の凝集体を形成する。このαシヌクレイン凝集体をマウスの線条体に接種すると、神経回路を経路としてαシヌクレインの凝集体が周囲の領域に伝播し、数か月後には大脳新皮質でαシヌクレイン病変が観察される（Masuda-Suzukake et al. Acta Neuropathol Commun 2, 88, 2014; Shimozawa et al. Acta Neuropathol Commun 5, 12, 2017）。このマウスの脳を摘出し、切片を作製して蛍光染色で解析すると、リン酸化αシヌクレインからなる病変に、本発明の化合物が結合するかどうかを確認することができる。
　（αシヌクレイン線維接種マウスモデル作製）
　まず、マウスαシヌクレインをリコンビナントタンパク質として大腸菌で発現させて抽出し、試験管内でインキュベートして、不溶性のαシヌクレイン凝集体を形成した。そして、このαシヌクレイン凝集体をマウスの線条体に接種したところ、神経回路を経路としてαシヌクレインの凝集体が周囲の領域に伝播し、数か月後には大脳新皮質でαシヌクレイン病変が観察された。なお、このαシヌクレイン凝集体のマウスの線条体への接種は、以下の方法で行った。まず、１．５％（ｖ／ｖ）イソフルランで麻酔した９週齢のＣ５７／ＢＬ／６オスマウスの頭部の毛を取り除き、頭皮をイソジンで消毒後、キシロカインを塗り、頭皮に切れ込みを入れて頭蓋を露出させた。そして、Ｂｒｅｇｍａ　０．０５ｍｍ、Ｌａｔｅｒａｌ　２ｍｍの位置の頭蓋にドリルで穴を開け、ガラスピペットを用いて２μｍの深さ位置にαシヌクレイン線維溶液（マウスαシヌクレイン線維　４ｍｇ／ｍｌ　ｉｎ　ｓａｌｉｎｅ）３μｌを注入した後、頭皮を戻して縫合した。
　（インビトロ蛍光顕微鏡測定）
　このαシヌクレイン線維接種マウスの脳を摘出し、切片を作製して蛍光染色で解析した。具体的には、αシヌクレイン線維接種マウス脳切片と３０μＭの化合物を２０％エタノール溶液中にて３０分間室温でインキュベートした。その後切片を２０％エタノール溶液で５分間、超純水で３分間、２回洗浄した。封入剤（ＶＥＣＴＡＳＨＩＥＬＤ　Ｈ－１０００）を用いて切片を封入後、蛍光顕微鏡（ＤＭ４０００（励起波長３９１－４３７ｎｍ））を用いて切片上のαシヌクレイン凝集体蓄積領域の画像を取得した。リン酸緩衝液を用いて同一切片を洗浄後、抗原性賦活化のためにオートクレーブで処理した。抗リン酸化αシヌクレインモノクローナル抗体（ｐＳ１２９、ａｂｃａｍ、ａｂ５９２６４）（１：１０００）による免疫組織化学染色を行い、封入剤（ＶＥＣＴＡＳＨＩＥＬＤ　Ｈ－１０００）を用いて切片を封入後、蛍光顕微鏡（ＤＭ４０００（励起波長４６０－５００ｎｍ））を用いて上記と同一領域の画像を取得した。結果を図３に示す。図３の（ａ）及び（ｂ）はそれぞれＳＰＡＬ－Ｔ－０５及びＳＰＡＬ－Ｔ－０６についての結果を示し、図３の（ａ）及び（ｂ）において、右側が抗リン酸化αシヌクレイン抗体染色、左側がＳＰＡＬ－Ｔ－０５及びＳＰＡＬ－Ｔ－０６蛍光染色である。図３において、矢頭はαシヌクレイン線維接種マウス脳のリン酸化αシヌクレインからなる病変、及びそれらに結合した化合物の蛍光を示している。
　図３の結果から、リン酸化αシヌクレインからなる病変に、ＳＰＡＬ－Ｔ－０５及びＳＰＡＬ－Ｔ－０６が結合することが示された。
　［インビボ二光子レーザースキャニング蛍光顕微鏡検査］
　αシヌクレイン線維溶液注入６週間以降のモデルマウスを１．５％（ｖ／ｖ）イソフルランで麻酔し、Ｓｅｙｌａｚ－Ｔｏｍｉｔａ法（Tomita et al. J Cereb Blood Flow Metab 25, 858-67, 2005）に従い頭蓋窓を設置した。頭蓋窓設置から２週間以降のマウスを１．５％（ｖ／ｖ）イソフルランで麻酔し、ＢＦ－２２７、ＰＢＢ３、ＳＰＡＬ－Ｔ－０５又はＳＰＡＬ－Ｔ－０６を０．１％含むＤＭＳＯ溶液５０μｌを腹腔内投与した。投与３０分後にマウスを二光子レーザー蛍光顕微鏡下に固定し、スルホローダミン１０１を５ｍＭ含む生理食塩水１００μｌを腹腔内投与した後、励起波長９００ｎｍにて生体二光子蛍光イメージングを行った。ＢＦ－２２７、ＰＢＢ３、ＳＰＡＬ－Ｔ－０５及びＳＰＡＬ－Ｔ－０６に対する検出波長を５００～５５０ｎｍ、スルホローダミン１０１に対する検出波長を５７３～６４８ｎｍとした。結果を図４に示す。図４において、矢頭は血管、矢印はαシヌクレイン病変に結合した化合物の蛍光を示している。
　図４の結果から、ＳＰＡＬ－Ｔ－０５及びＳＰＡＬ－Ｔ－０６を腹腔内投与すると、該化合物が生体の脳内さらにニューロン内に移行して、個々のαシヌクレイン病変に結合する様子が生体二光子レーザー蛍光顕微鏡で観察された。したがって、該病変の密度又は総数が少なく、ＰＥＴで検出困難な場合でも、本発明の化合物を用いた生体蛍光イメージングにより病変を検出可能であると言える。一方、ＢＦ－２２７及びＰＢＢ３を腹腔内投与して観察を行ってもαシヌクレイン病変は検出されなかった。
　［マウス脳のインビボＰＥＴ（ポジトロン断層撮影法）イメージング］
　ＰＥＴスキャンは０．８５１ｍｍ厚で（中心間）９５枚のスライス、１９．０ｃｍ体軸方向視野（ＦＯＶ）、及び７．６ｃｍ断面内ＦＯＶを提供する、ｍｉｃｒｏ　ＰＥＴ　Ｆｏｃｕｓ　２２０動物スキャナー（Ｓｉｅｍｅｎｓ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ）を用いて行った。スキャン前に、αシヌクレイン線維接種マウス及び生理食塩水注入マウス（対照）を、１．５％（ｖ／ｖ）イソフルランで麻酔した。エミッションスキャンは、［１８Ｆ］ＳＰＡＬ－Ｔ－０６（ＳＰＡＬ－Ｔ－０６をポジトロン放出核種で標識した化合物）（３０．１±０．１３ＭＢｑ）の静脈内注射後に、９０分間、３Ｄリストモード、エネルギーウィンドウ３５０－７５０ｋｅＶで行った。放射性化合物の注射及びスキャンは、該化合物の光異性化を避けるように薄暗下で行った。全てのリストモードデータを、３Ｄサイノグラムにソートし、その後、Ｆｏｕｒｉｅｒ－ｒｅｂｉｎｉｎｇにより２Ｄサイノグラムに変換した（フレーム：１０×１、６×５、５×１０分）。放射性化合物の注射後、０～３０分、３０～６０分、及び６０～９０分間での加算イメージを、最大事後確率推定法による再構成（ｍａｘｉｍｕｍ　ａ　ｐｏｓｔｅｒｉｏｒｉ　ｒｅｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ）により得た。また、ダイナミックイメージを、０．５ｍｍハニングフィルターを用いて、フィルター補正逆投影法により再構成した。関心体積（Ｖｏｌｕｍｅ　ｏｆ　ｉｎｔｅｒｅｓｔ（ＶＯＩ））を、ＭＲＩテンプレートを参照して、線条体、大脳皮質及び小脳に、ＰＭＯＤイメージ分析ソフトウェア（ＰＭＯＤ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用いて設定した。結果を図５～７に示す。
　図５左は［１８Ｆ］ＳＰＡＬ－Ｔ－０６静注後３０～６０分における、αシヌクレイン線維接種マウスの場合の結果であり、図５右は生理食塩水注入マウスの場合の結果であり、それぞれ上段が線条体を含む脳の冠状断面、下段が小脳を含む脳の冠状断面の画像で、標準脳ＭＲＩ画像に重ね合わせて表示している。また、図６は線条体、大脳皮質、小脳における［１８Ｆ］ＳＰＡＬ－Ｔ－０６静注後の時間－放射能曲線であり、図７の（ａ）～（ｄ）は［１８Ｆ］ＳＰＡＬ－Ｔ－０６静注後の小脳を対照とした線条体及び大脳皮質のｓｔａｎｄａｒｄｉｚｅｄ　ｕｐｔａｋｅ　ｖａｌｕｅ　ｒａｔｉｏ（ＳＵＶＲ）の時間推移、及び３０～６０分におけるＳＵＶＲの平均のαシヌクレイン線維接種マウスと生理食塩水注入マウスとの比較である（ｎ＝２、平均±ＳＥＭｓ）。図７の（ａ）は、［１８Ｆ］ＳＰＡＬ－Ｔ－０６静注後の小脳を対照領域とした線条体のＳＵＶＲの時間推移を、図７の（ｂ）は、線条体のＳＵＶＲ（対照領域：小脳）の３０～６０分における平均を、図７の（ｃ）は、［１８Ｆ］ＳＰＡＬ－Ｔ－０６静注後の小脳を対照領域とした大脳皮質のＳＵＶＲの時間推移を、そして図７の（ｄ）は、大脳皮質のＳＵＶＲ（対照領域：小脳）の３０～６０分における平均を、それぞれ示す。
　ＳＰＡＬ－Ｔ－０６をポジトロン放出核種で標識し、αシヌクレイン線維接種モデルマウス及び生理食塩水注入マウス（対照）に静注してＰＥＴスキャンを実施したところ、図５～７に示すように、適切な脳移行性又は脳からのクリアランス速度を有し、ＰＥＴでαシヌクレイン凝集体を画像化するプローブとして良好な特性を示すことが明らかになった。なお、αシヌクレイン線維接種モデルマウスでは、αシヌクレイン病変を豊富に含む線条体及び大脳皮質への［１８Ｆ］ＳＰＡＬ－Ｔ－０６の明らかな集積が見られ、［１８Ｆ］ＳＰＡＬ－Ｔ－０６を用いたＰＥＴスキャンでαシヌクレイン凝集体を画像化できることが確認された。
　［マウス脳のエキソビボイメージング］
　生理食塩水注入マウスを１．５％（ｖ／ｖ）イソフルランで麻酔し、［１８Ｆ］ＳＰＡＬ－Ｔ－０６（２８．９ＭＢｑ）を静脈内注射した。［１８Ｆ］ＳＰＡＬ－Ｔ－０６投与４０分後に脳を採取して凍結し、クリオスタット（ＨＭ５６０）内で２０μｍ厚のＢｒｅｇｍａ　０．５０、－０．４６、－１．９４、－３．１６、－６．６４ｍｍを含む冠状断凍結切片を作製した。切片を風乾後、カセット内にて切片とイメージングプレートを１５分間コンタクトし、その後ＢＡＳ－５０００（Ｆｕｊｉ　Ｆｉｌｍ）を用いてオートラジオグラフを取得した。結果を図８に示す。
　図８の結果から、生理食塩水注入マウスに［１８Ｆ］ＳＰＡＬ－Ｔ－０６を静注しても、脳内に移行した該化合物は白質領域に非特異的な集積を示さないことが確認された。
　［マーモセット脳のＰＥＴ（ポジトロン断層撮影法）イメージング］
　（αシヌクレイン線維接種マーモセットモデル作製）
　まず、マーモセットαシヌクレインをリコンビナントタンパク質として大腸菌で発現させて抽出し、試験管内でインキュベートして、不溶性のαシヌクレイン凝集体を形成した。そして、このαシヌクレイン凝集体をマーモセットの尾状核及び被殻に接種したところ、神経回路を経路としてαシヌクレインの凝集体が周囲の領域に伝播し、数か月後には黒質でαシヌクレイン病変が観察された。このαシヌクレイン凝集体のマーモセットの尾状核及び被殻への接種は、以下の方法で行った。まず、ケタミン（５～１０ｍｇ／ｋｇ）及びキシラジン（０．２～０．５ｍｇ／ｋｇ）により不動化したマーモセットに器官内チューブを挿管した後、１～３％（ｖ／ｖ）イソフルランで麻酔した。マーモセットの頭部の毛を取り除き、頭皮をイソジンで消毒後、キシロカインを塗り、頭皮に切れ込みを入れて頭蓋を露出させた。Ｉｎｔｅｒａｕｒａｌ　９．７５ｍｍの位置の頭蓋にドリルで穴（直径～３ｍｍ）を開け、ハミルトンシリンジを用いて、右脳の尾状核及び被殻にαシヌクレイン線維溶液（マーモセットαシヌクレイン線維４ｍｇ／ｍｌ　ｉｎ　ｓａｌｉｎｅ）５０μｌをそれぞれ注入した。さらに、左脳の尾状核及び被殻に同様の方法にて生理食塩水５０μｌをそれぞれ注入した後、頭皮を戻して縫合した。
　（マーモセット脳のインビボＰＥＴ（ポジトロン断層撮影法）イメージング）
　ＰＥＴスキャンは０．８５１ｍｍ厚で（中心間）９５枚のスライス、１９．０ｃｍ体軸方向視野（ＦＯＶ）、及び７．６ｃｍ断面内ＦＯＶを提供する、ｍｉｃｒｏ　ＰＥＴ　Ｆｏｃｕｓ　２２０動物スキャナー（Ｓｉｅｍｅｎｓ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ）を用いて行った。スキャン前に、αシヌクレイン線維接種マーモセットを１～３％（ｖ／ｖ）イソフルランで麻酔した。トランスミッションスキャンは、ＰＥＴ校正用線源Ｇｅ－６８を用いて約２０分間実施した。エミッションスキャンは、［１８Ｆ］ＳＰＡＬ－Ｔ－０６（ＳＰＡＬ－Ｔ－０６をポジトロン放出核種で標識した化合物）（７３．０ＭＢｑ）の静脈内注射後に９０分間、３Ｄリストモード、エネルギーウィンドウ３５０－７５０ｋｅＶで行った。放射性化合物の注射及びスキャンは、該化合物の光異性化を避けるように薄暗下で行った。全てのリストモードデータを、３Ｄサイノグラムにソートし、その後、Ｆｏｕｒｉｅｒ－ｒｅｂｉｎｉｎｇにより２Ｄサイノグラムに変換した（フレーム：１０×１、６×５、５×１０分）。放射性化合物の注射後、０～３０分、３０～６０分、及び６０～９０分間での加算イメージを、最大事後確率推定法による再構成（ｍａｘｉｍｕｍ　ａ　ｐｏｓｔｅｒｉｏｒｉ　ｒｅｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ）により得た。また、ダイナミックイメージを、０．５ｍｍハニングフィルターを用いて、フィルター補正逆投影法により再構成した。結果を図９に示す。図９の（ａ）は［１８Ｆ］ＳＰＡＬ－Ｔ－０６静注後２０～６０分における、αシヌクレイン線維接種マーモセットの尾状核を含む脳の冠状断面画像で、標準脳ＭＲＩ画像に重ね合わせて表示している。
　（インビトロ蛍光顕微鏡測定）
　このαシヌクレイン線維接種マーモセットの脳を摘出し、切片を作製して免疫組織化学染色で解析した。具体的には、リン酸緩衝液を用いてαシヌクレイン線維接種マーモセット脳切片を洗浄後、抗原性賦活化のためにオートクレーブで処理した。抗リン酸化αシヌクレインモノクローナル抗体（ｐＳ１２９、ａｂｃａｍ、ａｂ５９２６４）（１：１０００）による免疫組織化学染色を行い、封入剤（ＶＥＣＴＡＳＨＩＥＬＤ　Ｈ－１０００）を用いて切片を封入後、蛍光顕微鏡（ＢＺ－Ｘ７１０，ＫＥＹＥＮＣＥ（励起波長４５０－４９０ｎｍ）、及びＤＭ４０００（励起波長４６０－５００ｎｍ））を用いて画像を取得した。結果を図９に示す。図９の（ｂ）はαシヌクレイン線維接種マーモセットの尾状核を含む脳の冠状切片の抗リン酸化αシヌクレイン抗体染色像である。２はαシヌクレイン線維を接種した右脳の尾状核の抗リン酸化αシヌクレイン抗体染色の拡大画像、１は生理食塩水を注入した左脳の尾状核の抗リン酸化αシヌクレイン抗体染色の拡大画像である。
　ＳＰＡＬ－Ｔ－０６をポジトロン放出核種で標識し、αシヌクレイン線維接種モデルマーモセットに静注してＰＥＴスキャンを実施したところ、αシヌクレイン病変を豊富に含む尾状核への［１８Ｆ］ＳＰＡＬ－Ｔ－０６の明らかな集積が見られ、［１８Ｆ］ＳＰＡＬ－Ｔ－０６を用いたＰＥＴスキャンでαシヌクレイン凝集体を画像化できることが確認された。
　［ヒト脳のインビトロ結合試験］
　ＤＬＢ患者脳偏桃体の新鮮凍結組織、及び、ＡＤ患者脳前頭皮質の新鮮凍結組織を使用した。新鮮凍結脳組織に、組織の湿重量の１０倍量の緩衝液とジルコニアビーズ（ＺＢ－２０，ＴＯＭＹ）を加え、Ｍｉｃｒｏ　Ｓｍａｓｈ（ＭＳ－１００Ｒ，ＴＯＭＹ）で粉砕した後、－８０℃で保存した。Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ緩衝液（２０％エタノールを含む）中にＤＬＢ患者脳ホモジェネート又はＡＤ患者脳ホモジェネート、［１８Ｆ］ＳＰＡＬ－Ｔ－０６（最終濃度５ｎＭ）、非標識ＳＰＡＬ－Ｔ－０６（最終濃度０．０１ｎＭ～１μＭ）を混合した。室温で３０分インキュベートした後、吸引ろ過及び洗浄によるＢ／Ｆ分離（Ｂ：結合リガンド、Ｆ：遊離リガンド）を行い、グラスフィルター上に捕捉された放射能をガンマカウンター（２４８０ＷＩＺＡＲＤ２、ＰａｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）にて測定した。非標識ＳＰＡＬ－Ｔ－０６の各濃度について、試験は三連にて実施した。結果をＰｒｉｓｍ　６Ｊ（ＧｒａｐｈＰａｄ）を用いて解析し、被験物質の置換曲線、ＩＣ５０を算出した。結果を図１０に示す。
　ＳＰＡＬ－Ｔ－０６をポジトロン放出核種で標識し、ＤＬＢ患者脳及びＡＤ患者脳のホモジェネートを用いて結合試験を実施したところ、αシヌクレイン病変を豊富に含むＤＬＢ患者脳ホモジェネートへの［１８Ｆ］ＳＰＡＬ－Ｔ－０６の高い親和性での結合（ＩＣ５０＝１．５８ｎＭ）が確認された。ＡＤ患者脳ホモジェネートへの［１８Ｆ］ＳＰＡＬ－Ｔ－０６の結合親和性は、ＤＬＢ患者脳ホモジェネートと比較して低く（ＩＣ５０＝１０．８６ｎＭ）、［１８Ｆ］ＳＰＡＬ－Ｔ－０６は、ＰＥＴによるイメージングでαシヌクレイン凝集体を画像化するプローブとして良好な結合親和性を示し、また、αシヌクレイン凝集体への結合は、タウ又はアミロイドβの凝集体への結合よりも強く、αシヌクレイン凝集体に高い結合選択性を有することが確認された。
　［ヒト脳のインビトロオートラジオグラフィ］
　（解剖脳組織）
　死後ヒト脳を、ＤＬＢ患者、多系統萎縮症（ＭＳＡ）患者、及び、健常対象者に対して行われた剖検から得た。凍結ＤＬＢ組織、及び、凍結健常対象者組織をクリオスタット（ＨＭ５６０、Ｃａｒｌ　Ｚｅｉｓｓ）内で２０μｍ厚にスライスした。また、ＭＳＡ脳組織を１０％中性緩衝ホルマリンに固定し、パラフィンブロックに埋め込み、６μｍ厚にスライスした。
　（オートラジオグラフィ試験）
　ＤＬＢ患者脳偏桃体組織、及び、健常対象者脳前頭皮質組織の後固定新鮮凍結切片、及び、脱パラフィンしたＭＳＡ患者脳小脳組織のホルマリン固定パラフィン包埋切片を使用した。［１８Ｆ］ＳＰＡＬ－Ｔ－０６（最終濃度１０ｎＭ）と脳組織切片を、２０％エタノールを含む５０ｍＭ　Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ中にて室温で１時間インキュベートした。特異結合を検出するため、［１８Ｆ］ＳＰＡＬ－Ｔ－０６（最終濃度１０ｎＭ）と非標識ＳＰＡＬ－Ｔ－０６（最終濃度１０μＭ）を含む５０ｍＭ　Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ（２０％エタノールを含む）中においても脳組織切片をインキュベートした。その後４℃の５０ｍＭ　Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ（２０％ＥｔＯＨを含む）にて切片を２分間、２回洗浄し、ＭｉｌｌｉＱでリンスした。切片を風乾後、カセット内にて切片とイメージングプレートを５分間コンタクトし、その後ＢＡＳ－５０００（Ｆｕｊｉ　Ｆｉｌｍ）を用いてオートラジオグラフを取得した。結果を図１１に示す。図１１の矢頭は、ＤＬＢ患者脳、及び、ＭＳＡ患者脳のリン酸化αシヌクレインからなる病変を含む領域を示している。
　（インビトロ蛍光顕微鏡測定）
　オートラジオグラフィを実施した切片について、蛍光染色で解析した。具体的には、切片と３０μＭのＳＰＡＬ－Ｔ－０６を５０％エタノール溶液中にて３０分間室温でインキュベートした。その後切片を５０％エタノール溶液で５分間、超純水で３分間、２回洗浄した。封入剤（ＶＥＣＴＡＳＨＩＥＬＤ　Ｈ－１０００）を用いて切片を封入後、蛍光顕微鏡（ＤＭ４０００（励起波長３９１－４３７ｎｍ））を用いて切片上のαシヌクレイン凝集体蓄積領域の画像を取得した。また、隣接する脳切片を、リン酸緩衝液を用いて洗浄後、抗原性賦活化のためにオートクレーブで処理した。抗リン酸化αシヌクレインモノクローナル抗体（ｐＳ１２９、ａｂｃａｍ、ａｂ５９２６４）（１：１０００）による免疫組織化学染色を行い、封入剤（ＶＥＣＴＡＳＨＩＥＬＤ　Ｈ－１０００）を用いて切片を封入後、蛍光顕微鏡（ＢＺ－Ｘ７１０（励起波長４５０－４９０ｎｍ）及びＤＭ４０００（励起波長４６０－５００ｎｍ））を用いて画像を取得した。結果を図１２に示す。図１２の（ａ）（図中「１」で示す）はＤＬＢ患者脳の抗リン酸化αシヌクレイン抗体染色、及び、ＳＰＡＬ－Ｔ－０６蛍光染色であり、図１２の（ｂ）（図中「２」で示す）はＭＳＡ患者脳の抗リン酸化αシヌクレイン抗体染色、及び、ＳＰＡＬ－Ｔ－０６蛍光染色である。
　ＳＰＡＬ－Ｔ－０６をポジトロン放出核種で標識し、ＤＬＢ患者脳偏桃体切片、ＭＳＡ患者脳小脳切片、及び健常対象者脳前頭皮質切片を用いてオートラジオグラフィを実施したところ、ＤＬＢ患者脳及びＭＳＡ患者脳のリン酸化αシヌクレインからなる病変を豊富に含む領域への［１８Ｆ］ＳＰＡＬ－Ｔ－０６の結合が確認された。オートラジオグラフィを実施した切片について、蛍光染色及び免疫組織化学染色を実施したところ、これらの脳切片に含まれるαシヌクレイン病変へのＳＰＡＬ－Ｔ－０６の結合が確認された。また、健常対象者脳前頭皮質切片においては、灰白質、白質の双方に［１８Ｆ］ＳＰＡＬ－Ｔ－０６の非特異結合はほとんど見られなかった。
　本発明によれば、αシヌクレイン凝集体への結合選択性が高いαシヌクレイン凝集体結合剤を提供することができる。そして、このαシヌクレイン凝集体結合剤を用いた、イメージング方法を提供することができる。また、αシヌクレイン凝集体結合剤又はその他の用途に用いることができる新規化合物を提供することができる。

Claims (9)

  1. 　下記式（Ｉ）又は（ＩＩ）で表される化合物、その医薬として許容し得る塩、又はその溶媒和物。
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000001
  2. 　前記式（Ｉ）又は（ＩＩ）で表される化合物において１個又はそれ以上の原子が該原子の放射性同位体である、請求項１に記載の化合物、その医薬として許容し得る塩、又はその溶媒和物。
  3. 　請求項１に記載の化合物、その医薬として許容し得る塩、又はその溶媒和物を含有する、αシヌクレイン凝集体結合剤。
  4. 　請求項２に記載の化合物、その医薬として許容し得る塩、又はその溶媒和物を含有する、αシヌクレイン凝集体結合剤。
  5. 　請求項３に記載のαシヌクレイン凝集体結合剤を含む、αシヌクレイン凝集体の光学イメージング用組成物。
  6. 　請求項４に記載のαシヌクレイン凝集体結合剤を含む、αシヌクレイン凝集体の放射イメージング用組成物。
  7. 　請求項３に記載のαシヌクレイン凝集体結合剤を投与された被検体の生体脳に脳外から第１の波長の光を照射した後に、前記脳から発せられる、第１の波長とは異なる第２の波長の光を検出する工程を含む、脳内αシヌクレイン凝集体の光学イメージング方法。
  8. 　請求項４に記載のαシヌクレイン凝集体結合剤を投与された被検体の生体脳から発せられる放射線を検出する工程を含む、脳内αシヌクレイン凝集体の放射イメージング方法。
  9. 　下記式（ＩＩＩ）で表される、請求項１又は２に記載の化合物を合成するための中間体。
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000002
     　（式（ＩＩＩ）中、
    　Ｘ及びＹの一方は窒素原子（Ｎ）であり、他方は置換されていない炭素原子（ＣＨ）であり、
    　Ｒ１は、ヒドロキシ基又は下記式（ｉ）で表される基であり、
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000003
     　ここで、Ｔｓはｐ－トルエンスルホニル基を表し、
    　ＴＨＰはテトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル基を表し、
    　＊はベンゾチアゾール環との結合位置を表し、
    　Ｒ２は、水素原子又はｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）基である）
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