WO2022045857A2 - 안정한 약제학적 제제 - Google Patents

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    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding

Definitions

  • the present invention relates to a stable pharmaceutical formulation comprising an antibody that binds to Interleukin-6 Receptor (IL-6R).
  • IL-6R Interleukin-6 Receptor
  • Interleukin-6 is one of cytokines involved in acute inflammatory response regulation, B cell differentiation, T cell activation, bone metabolism, thrombosis, immune response, and the like. Interleukin-6 (Interleukin 6, IL-6) has been implicated in various autoimmune diseases, inflammatory diseases, malignancies, and the like. These abnormal diseases can be treated by using an antibody that binds to an interleukin-6 receptor (IL-6R).
  • IL-6R interleukin-6 receptor
  • Antibody refers to an immunoglobulin molecule consisting of four polypeptide chains in which two heavy chains and two light chains are linked to each other by disulfide bonds.
  • Each heavy chain consists of a heavy chain variable region and a heavy chain constant region.
  • the heavy chain constant region consists of three domains (CH1, CH2 and CH3).
  • Each light chain consists of a light chain variable region and a light chain constant region.
  • the light chain constant region consists of one domain (CL).
  • the heavy and light chain variable regions can be further subdivided into hypervariable regions called complementarity determining regions (CDRs) co-located with more conserved regions called framework regions (FR).
  • CDRs complementarity determining regions
  • FR framework regions
  • Each heavy chain variable region and light chain variable region consists of three CDRs and four FRs, arranged from amino terminus to carboxy terminus in the following order: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4.
  • Antibodies that bind to the Interleukin-6 Receptor are unstable proteins. These antibodies are susceptible to physical or chemical changes due to heat stress, light stress, or the like. Thus, stability and/or activity may be compromised after the product has been stored, particularly after storage for a long period of time.
  • the problem to be solved by the present invention is to provide a stable pharmaceutical formulation, including an antibody that binds to an interleukin-6 receptor.
  • Another problem to be solved by the present invention is to provide a vial filled with the pharmaceutical agent.
  • Another problem to be solved by the present invention is to provide a cartridge (Cartridge) filled with the pharmaceutical agent.
  • Another problem to be solved by the present invention is to provide a pre-filled syringe filled with the pharmaceutical agent (Pre-filled syringe).
  • Another problem to be solved by the present invention is to provide an auto-injector in which the pre-filled syringe is included.
  • the present inventors have developed a stable formulation containing an antibody binding to the interleukin-6 receptor.
  • the present invention relates to (A) an antibody or antigen-binding fragment thereof that binds to interleukin-6 receptor; (B) a surfactant; (C) a stabilizer that is i) an amino acid or an amino acid derivative, ii) a sugar or a sugar alcohol or a mixture thereof; and (D) a buffer, wherein the antibody or antigen-binding fragment thereof comprises a CDR1 domain comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1, a CDR2 domain comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 2, and amino acids of SEQ ID NO: 3 a light chain variable region comprising a CDR3 domain comprising a sequence; and a heavy chain variable region comprising a CDR1 domain comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 4, a CDR2 domain comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 5, and a CDR3 domain comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 6.
  • a stable pharmaceutical formulation is provided.
  • the pharmaceutical formulation may be in a liquid form, but is not limited thereto.
  • antibody is an immunoglobulin molecule consisting of four polypeptide chains in which two heavy chains and two light chains are connected to each other by disulfide bonds, and other changed structures naturally occurring antibodies, such as camelid antibodies.
  • the antibody or antigen-binding fragment thereof according to the present invention is a polyclonal antibody, monoclonal antibody, recombinant antibody, single-chain antibody, hybrid antibody, chimeric antibody, humanized antibody or fragment thereof (antigen-binding fragment), preferably a monoclonal antibody or a fragment thereof.
  • the antibody or antigen-binding fragment thereof according to the present invention may be a humanized monoclonal antibody or a fragment thereof, most preferably a humanized immunoglobulin (Immunoglobulin G, IgG) monoclonal antibody, It can be prepared by a known method.
  • a humanized immunoglobulin immunoglobulin G, IgG
  • the antigen-binding fragment includes any naturally occurring, enzymatically obtainable, synthetic or genetically engineered polypeptide or glycoprotein that specifically binds to an antigen to form a complex, for example, a Nanobody ( Nanobodies) and the like.
  • the humanized antibody is also called a reshaped human antibody, and the complementarity determining region (CDR) of a non-human mammal, for example, a mouse antibody is grafted into the complementarity determining region of a human antibody. It may be one, or it may be prepared by other commonly known genetic recombination techniques.
  • the antibody or antigen-binding fragment thereof comprises a CDR1 domain comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1, a CDR2 domain comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 2, and the amino acid sequence of SEQ ID NO: 3 a light chain variable region comprising a CDR3 domain; and a heavy chain variable region comprising a CDR1 domain comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 4, a CDR2 domain comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 5, and a CDR3 domain comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 6.
  • the antibody or antigen-binding fragment thereof comprises a light chain variable region comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 7;
  • SEQ ID NO: may include a heavy chain variable region comprising the amino acid sequence of 8.
  • the antibody or antigen-binding fragment thereof comprises a light chain comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 9; and a heavy chain comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 10.
  • the antibody or antigen-binding fragment thereof according to the present invention may be tocilizumab, sarilumab, sapelizumab, bobarilizumab, or a mixture thereof.
  • the antibody or antigen-binding fragment thereof may be tocilizumab, sapelizumab, bovarilizumab or a mixture thereof.
  • the antibody or antigen-binding fragment thereof may be tocilizumab.
  • the 'tocilizumab' is hPM-1 described in International Publication No. WO1992-019759, an original drug substance as well known in the art, or a biosimilar thereof can
  • the 'Sarilumab' may be an interleukin-6 receptor-binding antibody, also known as KEVZARA ® or a biosimilar thereof.
  • the 'Sapelizumab' may be an interleukin-6 receptor-binding antibody, also known as SA-237 or Satralizumab, or a biosimilar thereof.
  • the 'Vobarilizumab' also known as ALX-0061, may be an interleukin-6 receptor binding nanobody linked to an anti-human serum albumin nanobody or a biosimilar thereof. .
  • the concentration of the antibody or antigen-binding fragment thereof is 1 to 300 mg/ml, preferably 20 to 250 mg/ml, more preferably 50 to 220 mg/ml, most preferably It may be 100 to 200 mg/ml.
  • concentration of the antibody or antigen-binding fragment thereof is within the above-mentioned range, the degree of freedom of administration dose and administration cycle can be increased, and long-term stability and low viscosity (1 cP to 15 cP, preferably 1 cP to 10 cP) can be obtained. show excellent
  • the antibody or antigen-binding fragment thereof may be included in a high concentration of 50 mg / ml or more.
  • a formulation containing a monoclonal antibody (mAb) drug at a high concentration has different stability and colloidal properties than the formulation at a low protein concentration due to the complexity of the molecule itself and various intermolecular interactions. The higher the level, the more aggregation and degradation are promoted, making it difficult to develop a stable medical formulation.
  • reversible self-binding occurs, which affects viscosity increase, etc., and causes difficulties in the development of stable formulations and the manufacturing process of pharmaceuticals.
  • the present inventors have confirmed through experiments that the formulation of the present invention is stable at a high concentration despite the above-mentioned difficulties.
  • surfactant refers to a substance that can be used to significantly increase the water solubility of a hydrophobic or oily substance or to increase the miscibility of two substances having different hydrophobicities.
  • the surfactant according to the present invention is polyoxyethylene sorbitan fatty acid ester (eg, polysorbate, etc.), polyoxyethylene alkyl ether (eg, Brij ® , etc.), alkylphenylpolyoxyethylene ethers (eg, Triton-X, etc.), polyoxyethylene-polyoxypropylene copolymers (eg, poloxamer, Pluronic ® , etc.), sodium dodecyl sulfate (SDS), etc., but therein It is not limited.
  • polyoxyethylene sorbitan fatty acid ester eg, polysorbate, etc.
  • polyoxyethylene alkyl ether eg, Brij ® , etc.
  • alkylphenylpolyoxyethylene ethers eg, Triton-X, etc.
  • polyoxyethylene-polyoxypropylene copolymers eg, poloxamer, Pluronic ® , etc.
  • SDS sodium dodec
  • the surfactant may be polyoxyethylene sorbitan fatty acid ester, polyoxyethylene alkyl ether, alkylphenyl polyoxyethylene ether, polyoxyethylene-polyoxypropylene copolymer, sodium dodecyl sulfate, or a mixture thereof.
  • the surfactant may be preferably a polyoxyethylene sorbitan fatty acid ester, a polyoxyethylene-polyoxypropylene copolymer or a mixture thereof, more preferably a polyoxyethylene sorbitan fatty acid ester.
  • the surfactant may be polysorbate, poloxamer, or a mixture thereof, preferably polysorbate.
  • the surfactant may be polysorbate 20, polysorbate 40, polysorbate 60, polysorbate 80 or a mixture thereof, preferably polysorbate 80.
  • the concentration of the surfactant can be freely adjusted within a range that does not adversely affect the stability and viscosity of the stable pharmaceutical formulation according to the present invention.
  • the concentration of surfactant is 0.001 to 1% (w/v), preferably 0.005 to 0.1% (w/v), most preferably 0.01 to 0.05% (w/v) v) can be
  • concentration of the surfactant is within the above-mentioned range, it exhibits excellent long-term stability and low viscosity.
  • stabilizer is a substance that is physiologically acceptable and imparts stability to the formulation.
  • the stabilizing agent is i) an amino acid or an amino acid derivative; ii) sugars or sugar alcohols; or a mixture thereof.
  • the amino acid or amino acid derivative (provided that it is different from histidine contained in the buffer according to the present invention) is threonine, methionine, arginine, proline, leucine, glycine, taurine, phenylalanine, tryptophan, It may be any one or more selected from the group consisting of glutamine, aspartate, glutamate, alanine, asparagine, serine, glycine, and tyrosine, but is not limited thereto.
  • the i) amino acid or amino acid derivative may be any one or more selected from the group consisting of threonine, methionine, arginine, proline, leucine, glycine, and taurine.
  • the sugar or sugar alcohol is sucrose, trehalose, sorbitol, glucose, fructose, galactose, xylose, maltose, lactose, xylitol, mannitol, D-maltitol, inositol, lactitol And it may be any one or more selected from the group consisting of isomalt, but is not limited thereto.
  • the ii) sugar or sugar alcohol may be at least one selected from the group consisting of sucrose, trehalose and sorbitol.
  • the stabilizing agent may preferably be a mixture of threonine and methionine.
  • the concentration ratio of the mixture of threonine and methionine is 1:1 to 10:1, preferably 1:1 to 8:1, more preferably 1:1 to 7 It can be :1.
  • the concentration of the stabilizer can be freely adjusted within a range that does not substantially adversely affect the stability and viscosity of the pharmaceutical formulation according to the present invention.
  • the concentration of the amino acid or amino acid derivative may be 10 to 500 mM, preferably 30 to 450 mM, more preferably 100 to 400 mM, and most preferably 130 to 300 mM.
  • the concentration of the threonine may be 5 to 300 mM, preferably 100 to 250 mM, more preferably 110 to 190 mM.
  • the concentration of methionine may be 5 to 200 mM, preferably 10 to 150 mM, more preferably 30 to 110 mM.
  • the concentration of the sugar or sugar alcohol may be 0.1 to 30% (w/v), preferably 5 to 10% (w/v).
  • the concentration of the stabilizer according to the present invention when the concentration of the stabilizer according to the present invention is within the range described in the present invention, long-term stability and low viscosity are excellent.
  • buffer is a substance that minimizes changes in pH caused by acids or alkalis.
  • the buffer is histidine or a salt thereof, acetic acid or a salt thereof, phosphoric acid or a salt thereof, citric acid or a salt thereof, succinic acid ( Succinic acid) or a salt thereof, Glutamic acid or a salt thereof, 2-(N-morpholino)ethanesulfonic acid (2-(N-morpholino)ethanesulfonic acid, MES) or a salt thereof, Tris (Tromethamine, Tris ) or a salt thereof, but is not limited thereto.
  • the buffer is histidine or a salt thereof, acetic acid or a salt thereof, phosphoric acid or a salt thereof, citric acid or a salt thereof, succinic acid or a salt thereof or a mixture thereof.
  • the buffer may more preferably be histidine or a salt thereof or a mixture thereof.
  • the histidine salt according to the present invention may be histidine chloride, histidine acetate, histidine phosphate, histidine sulfate, etc., but is not limited thereto.
  • the acetate salt according to the present invention may be sodium acetate, zinc acetate, aluminum acetate, ammonium acetate, potassium acetate, and the like, but is not limited thereto.
  • the phosphate salt according to the present invention may be potassium phosphate, sodium phosphate, ammonium phosphate, calcium phosphate, magnesium phosphate, etc., but is not limited thereto.
  • the citrate according to the present invention may be sodium citrate, calcium citrate, potassium citrate, or the like, but is not limited thereto.
  • the succinate according to the present invention may be sodium succinate, calcium succinate, potassium succinate, sodium sulfosuccinate, potassium sulfosuccinate, calcium sulfosuccinate, etc., but is not limited thereto.
  • the glutamate according to the present invention may be sodium glutamate, potassium glutamate, ammonium glutamate, or the like, but is not limited thereto.
  • the 2-(N-morpholino)ethanesulfonic acid (MES) salt according to the present invention may be MES chloride, MES sodium, etc., but is not limited thereto.
  • the tris salt according to the present invention may be tris hydrogen chloride, tris acetate, tris borate, etc., but is not limited thereto.
  • the content of the buffering agent can be freely adjusted within a range that does not substantially adversely affect the stability and viscosity of the pharmaceutical formulation according to the present invention.
  • the content of the buffer may be 0.1 to 50 mM, preferably 1 to 25 mM.
  • the pH of the stable pharmaceutical preparation according to the present invention can be adjusted in a range that optimizes the therapeutic efficacy by using a buffer or a pH adjusting agent.
  • the pH may be 5 or more to less than 7.
  • the pH When the pH is within the above-mentioned range, it exhibits excellent long-term stability and low viscosity.
  • pH adjusting agent is a substance used to adjust the pH of a formulation.
  • the pharmaceutical formulation according to the present invention may further include a pH adjusting agent (acid or base).
  • a pH adjusting agent (acid or base).
  • the content of the pH adjusting agent can be freely adjusted within a range that does not substantially adversely affect the stability and viscosity of the formulation.
  • the pH adjusting agent may be acetic acid, phosphoric acid, sodium hydroxide, sodium hydrogen carbonate, etc., but is not limited thereto.
  • the stable pharmaceutical preparation according to the present invention may not contain a preservative.
  • the preservative may be a preservative commonly used in the art.
  • the preservative may be octadecyldimethylbenzyl ammonium chloride, hexamethonium chloride, benzalkonium chloride, benzethonium chloride, phenol, butyl alcohol, benzyl alcohol, alkyl paraben, catechol, resorcinol, cyclohexanol, It may be 3-pentanol, m-cresol, or the like, but is not limited thereto.
  • the formulation does not contain a preservative, so that stability can be improved.
  • the term “free” or “free” means that it does not contain any component at all or does not contain any component substantially, that is, it does not depend on the activity of the antibody, stability or viscosity of the pharmaceutical formulation. It means to include it in a range that does not affect it. For example, 1% (w/v) or less, 1 mM or less, 1 mg/ml or less, 1 ppm (w/v) or less, or 1 ppb (w/ v) means to include the following.
  • the stable pharmaceutical formulation of the present invention may further include additives known in the art within a range that does not substantially adversely affect the stability and viscosity of the formulation.
  • the additive may be, for example, an aqueous carrier, an antioxidant, or a mixture thereof.
  • the aqueous carrier may be a useful carrier for the preparation of a pharmaceutical preparation that is safe and non-toxic when administered to humans. Examples of the aqueous carrier include, but are not limited to, Sterile Water for Injection (SWFI), Bacteristetic Water for Injection (BWFI), sterile saline solution, Ringer's solution, dextrose, and the like.
  • the antioxidant includes, but is not limited to, ascorbic acid.
  • stable or “stabilization” means that during the manufacturing process and/or upon storage or storage, the ingredient according to the invention or a composition or formulation comprising the same exhibits its physical stability, chemical stability and/or biological activity. means to indicate In the present invention, various analytical techniques for measuring stability are readily available in the art.
  • the physical stability can be evaluated by a method known in the art, for example, it can be evaluated by measuring the sample apparent attenuation of light (absorption or optical density). This light attenuation measurement is related to the turbidity of the formulation.
  • the content of high molecular weight components, the content of low molecular weight components, the amount of intact protein, the number of insoluble foreign matter particles, etc. can be measured for physical stability.
  • the chemical stability can be evaluated by a method known in the art, for example, by detecting and quantifying the chemically changed form of the antibody, charge change that can be evaluated by ion exchange chromatography (eg, For example, it can be evaluated by measuring a change in charge that occurs as a result of deamidation or oxidation) or a charge variant (measurement of an acidic or basic peak).
  • charge change that can be evaluated by ion exchange chromatography (eg, For example, it can be evaluated by measuring a change in charge that occurs as a result of deamidation or oxidation) or a charge variant (measurement of an acidic or basic peak).
  • the biological activity can be evaluated by a method known in the art, for example, it can be evaluated by measuring the antigen binding affinity through enzyme-linked immunosorbent assay (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, ELISA). .
  • enzyme-linked immunosorbent assay Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, ELISA.
  • stable pharmaceutical agent refers to a pharmaceutical agent satisfying one or more of the following (G)-1 to (G)-11.
  • a pharmaceutical formulation having an absorbance A 600 of 0 to 0.03 measured with a spectrophotometer after storage for 0 days, 5 days, 10 days, 2 weeks, 3 weeks, or 4 weeks at a temperature of 5 ⁇ 3°C;
  • the main component measured by SEC-HPLC is 97 % to 100% pharmaceutical formulations
  • Insoluble foreign matter particles measured by MFI a pharmaceutical formulation in which the number of 10 ⁇ m ⁇ , ⁇ 100 ⁇ m) is 0 to 2000 and the number of insoluble foreign particles (25 ⁇ m ⁇ , ⁇ 100 ⁇ m) is 0 to 200;
  • the oxidation rate of heavy chain Met 106 measured by LC-MS after storage for 0 days (0 weeks), 5 days, 10 days, 2 weeks, 3 weeks or 4 weeks at a temperature of 5 ⁇ 3 ° C is 0% to 6% pharmaceutical preparations;
  • - Heavy chain Met measured by LC-MS after storage for 0 weeks, 5 days, 10 days, 2 weeks, 3 weeks, 4 weeks or 6 weeks at a temperature of 40 ⁇ 2°C, relative humidity of 75 ⁇ 5%, and sealed conditions a pharmaceutical formulation having an oxidation rate of 106 from 0% to 10%;
  • - IL-6R measured by ELISA after storage for 0 weeks, 5 days, 10 days, 2 weeks, 3 weeks, 4 weeks or 6 weeks at a temperature of 40 ⁇ 2°C, relative humidity of 75 ⁇ 5%, and sealed conditions pharmaceutical agents having a binding affinity of 80% to 120%;
  • the viscosity measured with a viscometer is 1 cP to 15 cP.
  • the viscosity of the stable pharmaceutical formulation according to the present invention may be 1 to 15 cP, preferably 1 to 10 cP.
  • the stable pharmaceutical preparation according to the present invention is
  • the stable pharmaceutical preparation according to the present invention is
  • the present invention provides a stable pharmaceutical formulation according to the present invention; And it provides a product comprising a container containing the stable pharmaceutical formulation in a closed state.
  • the stable pharmaceutical formulation is as described above in this specification.
  • the container may be formed of a material such as glass, polymer (eg, plastic), metal, but is not limited thereto.
  • the container according to the present invention may include a bottle, a vial, a cartridge, a syringe (eg, a pre-filled syringe, an auto-injector, etc.) or a tube ( Tube), preferably a glass or polymer vial, or a glass or polymer pre-filled syringe.
  • a syringe eg, a pre-filled syringe, an auto-injector, etc.
  • Tube preferably a glass or polymer vial, or a glass or polymer pre-filled syringe.
  • the present invention provides a vial filled with the pharmaceutical agent according to the present invention, a cartridge filled with the pharmaceutical agent, and a pre-filled syringe filled with the pharmaceutical agent (Pre-filled syringe), or the pre-filled syringe provides an auto-injector (Auto-injector) contained therein.
  • Pre-filled syringe a pre-filled syringe filled with the pharmaceutical agent
  • Auto-injector Auto-injector
  • the container may be a container for single administration.
  • the product according to the present invention may further include instructions for providing a method of use, a method of storage, or both of the stable pharmaceutical preparation.
  • the instructions may include a treatment method, administration route, dosage, or administration timing for interleukin-6 receptor-related diseases.
  • the product may include other tools necessary from a commercial and user point of view, for example, a needle, a syringe, and the like.
  • the stable pharmaceutical formulation of the present invention can be prepared by a known method, and is not limited to a specific method.
  • an antibody may be added to the mixed solution to prepare a pharmaceutical formulation.
  • a surfactant may be added to the solution to prepare a pharmaceutical formulation.
  • the stable pharmaceutical preparation according to the present invention may exhibit a therapeutic effect on interleukin-6 receptor-related diseases.
  • the interleukin-6 receptor-related disease may be an autoimmune disease, an inflammatory disease, a malignant tumor, Still's disease, vasculitis, juvenile idiopathic arthritis, osteoarthritis, and the like.
  • the interleukin-6 receptor-related disease is Rheumatoid Arthritis (RA), Adult Onset Still's disease (AOSD), systemic Juvenile Idiopathic Arthritis (sJIA), polyarticular type Polyarticular Juvenile Idiopathic Arthritis (pJIA), Castleman's Disease (CD), Giant Cell Arteritis (GCA), Takayasu's Arteritis (TAK), Systemic Sclerosis (SSc) , Systemic Sclerosis-Associated Interstitial Lung Disease (SSc-ILD), Cytokine Release Syndrome (CRS), Hand Osteoarthritis, Polymyalgia Rheumatica, PMR ), Antineutrophil cytoplasmic antibody associated vasculitis (ANCA), Rheum
  • the interleukin-6 receptor-related disease is rheumatoid arthritis, adult Still's disease, systemic juvenile idiopathic arthritis, polyarticular juvenile idiopathic arthritis, Castleman's disease, giant cell arteritis, Takayasu's arteritis, systemic sclerosis, systemic sclerosis-associated epilepsy It may be any one or more selected from the group consisting of sexual pulmonary disease, cytokine release syndrome, and polymyalgia rheumatica.
  • the stable pharmaceutical formulation according to the present invention may be used for intravenous (Intravenous, IV) or subcutaneous (Subcutaneous, SC) administration.
  • the stable pharmaceutical preparation may be subjected to a dilution step before use.
  • the subcutaneous (SC) formulation of the present invention may be used as an intravenous (IV) formulation through a dilution step.
  • the stable pharmaceutical preparation may not undergo reconstitution before use.
  • Concentrations of other components including the antibody in the pharmaceutical formulation are as described above, and the total volume of the pharmaceutical formulation according to the present invention may be 0.9 to 20 ml.
  • the dosage or administration period of the pharmaceutical agent may vary depending on the type of disease, the severity and course of the disease, the patient's health and response to treatment, or the judgment of the treating physician, and may vary depending on the specific dosage or administration period. not limited
  • the present invention provides a patient with an interleukin-6 receptor-related disease (A) an antibody or antigen-binding fragment thereof that binds to the interleukin-6 receptor;
  • A an antibody or antigen-binding fragment thereof that binds to the interleukin-6 receptor;
  • a method of treating an Interleukin-6 receptor-related disease comprising administering a stable pharmaceutical formulation comprising (B) a surfactant, (C) a stabilizing agent, and (D) a buffer.
  • the present invention provides (A) an antibody or antigen-binding fragment thereof that binds to an Interleukin-6 receptor, (B) a surfactant, (C) a stabilizer, and (D) a buffer It provides a method of stabilizing an antibody in a pharmaceutical formulation, comprising preparing a stable pharmaceutical formulation comprising a.
  • the stable pharmaceutical formulation is as described above in this specification.
  • the treatment method or stabilization method according to the present invention applies mutatis mutandis as described above in the present specification.
  • the stable pharmaceutical formulation according to the present invention has a low viscosity even when it contains an antibody, especially at a high concentration, and has excellent long-term storage stability based on excellent stability under accelerated and severe conditions, and is administered intravenously or subcutaneously. is possible
  • tocilizumab cultured and purified at Celltrion Research Institute was used.
  • the following method was used as a method for measuring physical stability, chemical stability, and biological activity of a pharmaceutical formulation to be described later.
  • the absorbance at 600 nm was measured using a UV-Vis spectrophotometer.
  • the main component content (main peak; %) was measured using Size Exclusion High Performance Liquid Chromatography (SEC-HPLC).
  • the content (pre-peak; %) of the high molecular weight component was measured using size exclusion high performance liquid chromatography (SEC-HPLC).
  • the content (post-peak; %) of the low molecular weight component was measured using Size Exclusion High Performance Liquid Chromatography (SEC-HPLC).
  • the content (%) of intact immunoglobulin G was measured using Non-Reduced Capillary Electrophoresis-Sodium Dodecyl Sulfate (NR CE-SDS).
  • the content (%) of intact heavy and light chains was measured using Reduced Capillary Electrophoresis-Sodium Dodecyl Sulfate (R CE-SDS).
  • MFI Micro Flow Imaging
  • the oxidation rate (%) of heavy chain Met 106 was measured through peptide mapping using liquid chromatography-mass spectrometry (LC-MS) through mass spectrometry.
  • the main peak (%) was measured by Ion Exchange Chromatography-High Performance Liquid Chromatography (IEC-HPLC).
  • Examples 1 to 37 of Table 1 below were prepared by preparing each buffer to suit each pH, adding a stabilizer, then adding an antibody, and then adding a surfactant. Specific content of each component is as described in Table 1 below.
  • Example 1 180 mg/ml Polysorbate 80 0.02 % (w/v) Arginine 150 mM Sodium acetate 20 mM 5.5
  • Example 2 180 mg/ml Polysorbate 80 0.02 % (w/v) Arginine 150 mM Sodium Phosphate 20 mM 6
  • Example 3 180 mg/ml Polysorbate 80 0.02 % (w/v) Arginine 150 mM sodium citrate 20 mM 6
  • Example 4 180 mg/ml Polysorbate 80 0.02 % (w/v) Arginine 150 mM Sodium succinate 20 mM 6
  • Example 5 180 mg/ml Polysorbate 80 0.02 % (w/v) Arginine 150 mM histidine 20 mM 5.5
  • Example 6 180 mg/ml Polysorbate 80 0.02 % (w/v) Sorbitol 5.0% (w/v) Sodium acetate 20 mM 5.5
  • Example 7 180 mg/ml Polysorbate
  • Example 1 Stability of Examples 1 to 5 prepared according to Experimental Example 1 was measured under initial conditions and thermal acceleration conditions, and the results are shown in Table 2 and FIGS. 1 to 3 below.
  • the initial conditions were samples stored for 0 to 5 days at 5 ⁇ 3° C., and thermal acceleration conditions were tested with samples stored for 10 days at 40 ⁇ 2° C. and 75 ⁇ 5% relative humidity.
  • Example 1 Example 2 Example 3 Example 4 Example 5 Buffer 20 mM sodium acetate sodium phosphate sodium citrate sodium succinate histidine Antibody (mg/ml) 180 180 180 180 180 180 Polysorbate 80 (%(w/v)) 0.02 0.02 0.02 0.02 0.02 0.02 Arginine (mM) 150 150 150 150 150 Early turbidity 0.0147 0.0122 0.0104 0.0115 0.0135 Main component content (main peak %) 99.57 99.53 99.53 99.52 99.72 High molecular weight component content (%) 0.43 0.47 0.47 0.48 0.28 Low molecular weight component content (%) 0 0 0 0 0 0 Viscosity (cP) 6.47 6.34 6.8 6.48 6.37 thermal acceleration turbidity 0.0171 0.0146 0.0179 0.019 0.0165 Main component content (main peak %) 98.92 98.86 98.82 98.96 99.36 High molecular weight component content (%) 0.8 0.9 0.94 0.78 0.38 Low
  • Examples 1 to 5 are all turbidity 0.03 or less, main component content 98% or more, high molecular weight component content 1.5% or less, low molecular weight component content 1% or less, viscosity 1 cP to 11 cP, pharmaceutically acceptable stable Among them, the main component content of Example 1 and Example 5 was the highest at 99.57% and 99.72%, respectively, and the content of the high molecular weight component was the lowest at 0.43 and 0.28, respectively, and the Example containing acetic acid or histidine buffer was It was found to be the most stable.
  • Examples 1 to 5 Under thermally accelerated conditions, all of Examples 1 to 5 have a turbidity of 0.06 or less, a main component content of 97% or more, a high molecular weight component content of 2% or less, a low molecular weight component content of 1.5% or less, and a viscosity of 1 cP to 15 cP, which is pharmaceutically acceptable. It was found that the examples were stable. Among them, the content of the main component of Example 5 was the highest as 99.36% and the content of the high molecular weight component was the lowest as 0.38%, and it was found that the Example including the histidine buffer had the highest stability.
  • Example 6 to 13 Stability of Examples 6 to 13 prepared according to Experimental Example 1 was measured under initial conditions and thermal acceleration conditions, and the results are shown in Table 3 and FIGS. 4 to 6 below.
  • the initial condition was a sample stored for 0 days at a temperature of 5 ⁇ 3°C
  • the thermal acceleration condition was tested with a sample stored for 10 days at a temperature of 40 ⁇ 2°C and 75 ⁇ 5% relative humidity.
  • Example 6 Example 7
  • Example 8 Example 9
  • Example 10 Example 11
  • Example 12 stabilizer Sorbitol 5.0% (w/v) Sucrose 10.0 % (w/v) Trehalose 10.0% (w/v) Threonine 300 mM 300 mM proline Arginine 100 mM Leucine 50 mM Taurine 300 mM Glycine 300 mM Antibody (mg/ml) 180 180 180 180 180 180 180 180 180 180 180 180 180 180 180 180 180 180 180 180 180 180 180 180 180 180 180 180 180 180 180 180 180 180 180 180 180 180 180 180 180 180 180 180 180 180 180 180 180 180 180 180 180 180 180 180 180 180 180 180 180 Polysorbate 80 (%(w/v)) 0.02 0.02 0.02 0.02 0.02 0.02 0.02 0.02 Sodium Acetate (mM) 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20
  • Example 6 to 13 are turbidity 0.03 or less, main component content 98% or more, high molecular weight component content 1.5% or less, low molecular weight component content 1% or less, viscosity 1 cP to 11 cP, and are pharmaceutically acceptable and stable.
  • the main component content of Example 9 and Example 12 was the highest as 99.72% and 99.74%, respectively, and the content of the high molecular weight component was the lowest at 0.28 and 0.26, respectively. It was found that the example had the highest stability.
  • Example 6 to 13 Under thermal acceleration conditions, all of Examples 6 to 13 have a turbidity of 0.06 or less, a main component content of 97% or more, a high molecular weight component content of 2% or less, a low molecular weight component content of 1.5% or less, and a viscosity of 1 cP to 15 cP, which is pharmaceutically acceptable. It was found that the examples were stable. Among them, the main component content of Example 9 and Example 12 was 99.35% and 99.37%, respectively, which were the highest, and it was found that the Example including the threonine or taurine stabilizer had the highest stability.
  • Example 14 to 16 prepared according to Experimental Example 1 was measured under initial, long-term, thermal acceleration 1 and thermal acceleration 2 conditions, and the results are shown in Table 4 and FIGS. 7 to 9 below.
  • the initial condition is a sample stored for 0 days at a temperature of 5 ⁇ 3°C
  • a long-term condition is a sample stored at a temperature of 5 ⁇ 3°C for 4 weeks
  • the thermal acceleration 1 condition is a sample stored at a temperature of 40 ⁇ 2°C and 75 ⁇ 5% relative humidity. Samples stored for 2 weeks, thermal acceleration 2 conditions were tested with samples stored for 4 weeks at 40 ⁇ 2°C temperature and 75 ⁇ 5% relative humidity.
  • Example 15 stabilizer Taurine 300 mM Threonine 300 mM Threonine 200 mM Methionine 100 mM Antibody (mg/ml) 180 180 180 Polysorbate 80 (%(w/v)) 0.02 0.02 0.02 Histidine (mM) 20 20 20 Early turbidity 0.0163 0.0163 0.0159 Main component content (main peak %) 99.57 99.55 99.56 High molecular weight component content (%) 0.43 0.45 0.44 Low molecular weight component content (%) 0 0 0 Number of insoluble foreign matter particles (10 ⁇ m ⁇ , ⁇ 100 ⁇ m) 231 164 201 (25 ⁇ m ⁇ , ⁇ 100 ⁇ m) 31 28 33 Viscosity (cP) 6.56 7.78 7.35 Content of intact immunoglobulin G (Intact IgG%) 97.77 97.49 98.06 Intact heavy and light chain content (Intact LC+HC%) 99.82 99.95 99.77 Oxidation rate (
  • the number of insoluble foreign particles (10 ⁇ m ⁇ , ⁇ 100 ⁇ m) measured by MFI is 1000 or less
  • the number of insoluble foreign particles (25 ⁇ m ⁇ , ⁇ 100 ⁇ m) is 150 or less
  • viscosity 1 cP to 11 cP It was found that the intact immunoglobulin G content was 96% or more, the intact heavy and light chain contents were 99% or more, and the oxidation rate was 6% or less, indicating that it was a pharmaceutically acceptable and stable Example.
  • the turbidity is 0.06 or less
  • the main component content is 97% or more
  • the high molecular weight component content is 2% or less
  • the low molecular weight component content is 1.5% or less
  • Example 17 to 22 The stability of Examples 17 to 22 prepared according to Experimental Example 1 was measured under the initial condition, the thermal acceleration 1 condition, and the thermal acceleration 2 condition, and the results are shown in Table 5 and FIGS. 10 to 12 below.
  • Initial conditions were samples stored at 5 ⁇ 3°C for 0 days, thermal acceleration 1 condition was 40 ⁇ 2°C temperature and 75 ⁇ 5% relative humidity for 3 weeks, and thermal acceleration 2 conditions were 40 ⁇ 2°C Samples stored for 6 weeks at temperature and 75 ⁇ 5% relative humidity were tested.
  • Example 17 Example 18 Example 19 Example 20
  • Example 21 Example 22 Threonine (mM) 140 180 160 160 110 189 Methionine (mM) 60 60 40 80 110 31 Antibody (mg/ml) 180 180 180 180 180 180 180 180 180 180 180 180 180 180 180 180 180 180 180 180 180 180 180 180 180 180 180 180 180 180 180 180 180 180 180 180 180 180 180 180 180 180 180 180 180 180 180 180 180 180 180 180 180 180 180 180 180 180 180 180 Polysorbate 80 (%(w/v)) 0.02 0.02 0.02 0.02 0.02 0.02 0.02 Histidine (mM) 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 Early turbidity 0.0074 0.0099 0.006 0.0056 0.0065 0.0034 Main component content (main peak %) 98.85 98.85 98.84 98.85 99.25 99.11 High molecular weight component content (%) 1.08 1.08 1.09 1.06 0.63 0.77 Low molecular weight component content (%) 0.08 0.08 0.08 0.08 0.12 0.12 Number of
  • Example 23 to 27 The stability of Examples 23 to 27 prepared according to Experimental Example 1 was measured under the initial condition, thermal acceleration 1 condition, and thermal acceleration 2 condition, and the results are shown in Table 6 and FIGS. 13 to 15 below.
  • Initial conditions were samples stored at 5 ⁇ 3°C for 0 days
  • thermal acceleration 1 condition was 40 ⁇ 2°C temperature and 75 ⁇ 5% relative humidity for 3 weeks
  • thermal acceleration 2 conditions were 40 ⁇ 2°C Samples stored for 6 weeks at temperature and 75 ⁇ 5% relative humidity were tested.
  • Example 24 Example 25 Example 26 Example 27 Histidine Buffer (mM) 25 15 10 5 One Antibody (mg/ml) 180 180 180 180 180 180 180 Polysorbate 80 (%(w/v)) 0.02 0.02 0.02 0.02 0.02 0.02 Threonine (mM) 160 160 160 160 Methionine (mM) 60 60 60 60 60 60 Early turbidity 0.0055 0.0054 0.0067 0.0051 0.0086 Main component content (main peak %) 99.2 98.86 99.23 98.84 99.16 High molecular weight component content (%) 0.69 1.06 0.64 1.07 0.69 Low molecular weight component content (%) 0.11 0.08 0.13 0.09 0.14 Number of insoluble foreign matter particles (10 ⁇ m ⁇ , ⁇ 100 ⁇ m) 103 130 225 64 69 (25 ⁇ m ⁇ , ⁇ 100 ⁇ m) 30 30 42 12 25 Content of intact immunoglobulin G (Intact IgG%) 99.8 99.73 99.8 99.74 99.83 Charge Variant (Main Peak Peak
  • Examples 23 to 27 have a turbidity of 0.03 or less, a main component content of 98% or more, a high molecular weight component content of 1.5% or less, a low molecular weight component content of 1% or less, and insoluble foreign matter particles measured by MFI (10 ⁇ m ⁇ , ⁇ 100 ⁇ m) is 1000 or less, the number of insoluble foreign particles (25 ⁇ m ⁇ , ⁇ 100 ⁇ m) is 150 or less, the content of intact immunoglobulin G is 96% or more, the charge variant (main peak%) 60% to 70% As a result, it can be seen that this is a pharmaceutically acceptable and stable Example.
  • Example 25 and 28 to 30 prepared according to Experimental Example 1 was measured under the initial condition, the thermal acceleration 1 condition, and the thermal acceleration 2 condition, and the results are shown in Table 7 and FIGS. 16 to 18 below.
  • Initial conditions were samples stored at 5 ⁇ 3°C for 0 days, thermal acceleration 1 condition was 40 ⁇ 2°C temperature and 75 ⁇ 5% relative humidity for 3 weeks, and thermal acceleration 2 conditions were 40 ⁇ 2°C Samples stored for 6 weeks at temperature and 75 ⁇ 5% relative humidity were tested.
  • Example 25 Example 28 Example 29 Example 30
  • Examples 25 and 28 to 30 all had a turbidity of 0.06 or less, a main component content of 97% or more, and a high molecular weight component content of 2% or less. , low molecular weight component content of 1.5% or less, the number of insoluble foreign particles (10 ⁇ m ⁇ , ⁇ 100 ⁇ m) measured by MFI is 2000 or less, and the number of insoluble foreign particles (25 ⁇ m ⁇ , ⁇ 100 ⁇ m) is 200 or less , The content of intact immunoglobulin G is 93% or more, the IL-6R binding affinity is 80% to 120%, and the charge variant (main peak%) is 40% to 60%, it can be seen that it is a pharmaceutically acceptable stable example. . Experimental Example 4-5. pH comparison
  • Examples 31 and 32 and Comparative Example 1 prepared according to Experimental Example 1 were measured for stability under the initial condition, thermal acceleration 1 condition, and thermal acceleration 2 condition, and the results are shown in Tables 8 and 19 below.
  • Initial conditions were samples stored at 5 ⁇ 3°C for 0 days, thermal acceleration 1 condition was 40 ⁇ 2°C temperature and 75 ⁇ 5% relative humidity for 3 weeks, and thermal acceleration 2 conditions were 40 ⁇ 2°C Samples stored for 6 weeks at temperature and 75 ⁇ 5% relative humidity were tested.
  • Example 32 Comparative Example 1 pH 5.7 6.3 7 Antibody (mg/ml) 180 180 180 Polysorbate 80 (%(w/v)) 0.02 0.02 0.02 Threonine (mM) 160 160 160 Methionine (mM) 60 60 60 Histidine (mM) 10 10 10 Early turbidity 0.005 0.0033 0.005 Main component content (main peak %) 98.89 98.81 99.17 High molecular weight component content (%) 1.03 1.12 0.69 Low molecular weight component content (%) 0.08 0.08 0.13 Number of insoluble foreign matter particles (10 ⁇ m ⁇ , ⁇ 100 ⁇ m) 67 446 94 (25 ⁇ m ⁇ , ⁇ 100 ⁇ m) 10 101 4 Content of intact immunoglobulin G (Intact IgG%) 99.73 99.72 99.83 Charge Variant (Main Peak %) 66.26 65.9 68.09 thermal acceleration 1 turbidity 0.0033 0.004 0.0064 Main component content (main peak %) 98.24
  • Examples 31 and 32 both had a turbidity of 0.03 or less, a main component content of 98% or more, a high molecular weight component content of 1.5% or less, a low molecular weight component content of 1% or less, and insoluble foreign matter particles measured by MFI (10 ⁇ m ⁇ , ⁇ The number of 100 ⁇ m or less) is 1000 or less, the number of insoluble foreign particles (25 ⁇ m ⁇ , ⁇ 100 ⁇ m) is 150 or less, the content of intact immunoglobulin G is 96% or more, the charge variant (main peak%) 60% to 70 %, it was found that the examples were pharmaceutically acceptable and stable.
  • Examples 31 and 32 had a turbidity of 0.06 or less, a main component content of 97% or more, a high molecular weight component content of 2% or less, and a low molecular weight Component content 1.5% or less, the number of insoluble foreign particles (10 ⁇ m ⁇ , ⁇ 100 ⁇ m) measured by MFI is 2000 or less, the number of insoluble foreign particles (25 ⁇ m ⁇ , ⁇ 100 ⁇ m) is 200 or less, intact immunity
  • the content of globulin G was 93% or more, the IL-6R binding affinity was 80% to 120%, and the charge variant (main peak%) was 40% to 60%, indicating that it was a pharmaceutically acceptable and stable example.
  • the charge variant (main peak %) was less than 40% under the condition of thermal acceleration 2, and through this, it was found that the stability of the example having a pH of 7 or higher was deteriorated.
  • Example 33 to 35 and Comparative Example 2 prepared according to Experimental Example 1 was measured under the initial condition, thermal acceleration 1 condition, and thermal acceleration 2 condition, and the results are shown in Table 9 and FIGS. 20 and 21 below.
  • Initial conditions were samples stored at 5 ⁇ 3°C for 0 days, thermal acceleration 1 condition was 40 ⁇ 2°C temperature and 75 ⁇ 5% relative humidity for 3 weeks, and thermal acceleration 2 conditions were 40 ⁇ 2°C Samples stored for 6 weeks at temperature and 75 ⁇ 5% relative humidity were tested.
  • Examples 33 to 35 all had a turbidity of 0.03 or less, a main component content of 98% or more, a high molecular weight component content of 1.5% or less, a low molecular weight component content of 1% or less, and insoluble foreign matter particles measured by MFI (10 ⁇ m ⁇ , ⁇ The number of 100 ⁇ m or less) is 1000 or less, the number of insoluble foreign particles (25 ⁇ m ⁇ , ⁇ 100 ⁇ m) is 150 or less, the content of intact immunoglobulin G is 96% or more, the charge variant (main peak%) 60% to 70 %, so it can be seen that this is a pharmaceutically acceptable and stable example.
  • Examples 33 to 35 have a turbidity of 0.06 or less, a main component content of 97% or more, a high molecular weight component content of 2% or less, and a low molecular weight component Content 1.5% or less, the number of insoluble foreign particles (10 ⁇ m ⁇ , ⁇ 100 ⁇ m) measured by MFI is 2000 or less, the number of insoluble foreign particles (25 ⁇ m ⁇ , ⁇ 100 ⁇ m) is 200 or less, intact immunoglobulin Since the content of G is 93% or more, the IL-6R binding affinity is 80% to 120%, and the charge variant (main peak%) is 40% to 60%, it can be seen that this is a pharmaceutically acceptable and stable example. On the other hand, in Comparative Example 2, the IL-6R binding affinity was less than 80% under the thermal acceleration 2 condition. Through this, it was found that the stability of the example in which the surfactant was not included was inferior.

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Abstract

본 발명에 따른 안정한 약제학적 제제는 (A) 인터루킨-6 수용체(Interleukin-6 receptor)에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편; (B) 계면활성제; (C) 안정화제; 및 (D) 완충제를 포함한다. 본 발명에 따른 안정한 약제학적 제제는 항체를 포함, 특히 항체를 고농도로 포함하는 경우에도 낮은 점도를 가지고, 가속 조건 및 가혹 조건에서의 우수한 안정성을 바탕으로 장기간 보관 안정성이 우수하며, 정맥 또는 피하 투여가 가능하다.

Description

안정한 약제학적 제제
본 발명은 인터루킨-6 수용체(Interleukin-6 Receptor, IL-6R)에 결합하는 항체를 포함하는 안정한 약제학적 제제에 관한 것이다.
인터루킨-6(Interleukin 6, IL-6)는 급성 염증 반응 조절, B 세포 분화, T 세포 활성화, 골대사, 혈전증, 면역 반응 등에 관여하는 사이토카인 중 하나이다. 인터루킨-6(Interleukin 6, IL-6)는 다양한 자가 면역 질환, 염증성 질환, 악성 종양 등에 연관되어 있다. 이러한 이상 질환은 인터루킨-6 수용체(Interleukin 6 Receptor, IL-6R)에 결합하는 항체를 사용함으로써 치료할 수 있다.
항체는 2개의 중쇄(Heavy Chain) 및 2개의 경쇄(Light Chain)가 디설파이드 결합에 의해 서로 연결되어 있는 4개의 폴리펩타이드쇄로 이루어진 면역글로불린 분자를 가리킨다. 각각의 중쇄는 중쇄 가변 영역 및 중쇄 불변 영역으로 이루어진다. 중쇄 불변 영역은 3개의 도메인(CH1, CH2 및 CH3)으로 이루어진다. 각각의 경쇄는 경쇄 가변 영역 및 경쇄 불변 영역으로 이루어진다. 경쇄 불변 영역은 1개의 도메인(CL)으로 이루어진다. 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역은, 골격 영역(FR)으로 불리는 보다 보존된 영역과 함께 배치된, 상보성 결정 영역(CDR)으로 불리는 초가변성 영역으로 더욱 세분될 수 있다. 각각의 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역은 3개의 CDR 및 4개의 FR로 이루어지고, 이들은 아미노 말단에서 카복시 말단까지 하기의 순서로 배열되어 있다: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4.
인터루킨-6 수용체(Interleukin-6 Receptor)에 결합하는 항체는 불안정한 단백질이다. 이들 항체는 열 스트레스, 빛 스트레스 등에 의해 물리적 또는 화학적 변화가 발생하기 쉽다. 따라서, 생성물이 저장된 후, 특히 장시간 동안 저장된 후에는, 안정성 및/또는 활성이 저해될 수 있다.
즉, 항체와 같은 생리 활성 단백질을 포함하는 약제학적 조성물은 단백질 활성이 적정 시간 동안 유지 가능하게끔 안정성을 확보하면서 제제화시키기 어렵다는 문제가 있다.
본 발명이 해결하고자 하는 과제는 인터루킨-6 수용체(Interleukin-6 receptor)에 결합하는 항체를 포함하는, 안정한 약제학적 제제를 제공하는 것이다.
본 발명이 해결하고자 하는 다른 과제는 상기 약제학적 제제가 충진된 바이알(Vial)을 제공하는 것이다.
본 발명이 해결하고자 하는 다른 과제는 상기 약제학적 제제가 충진된 카트리지(Cartridge)를 제공하는 것이다.
본 발명이 해결하고자 하는 다른 과제는 상기 약제학적 제제가 충진된 프리-필드 시린지(Pre-filled syringe)를 제공하는 것이다.
본 발명이 해결하고자 하는 다른 과제는 상기 프리-필드 시린지가 그 내부에 포함된 자동 주사기(Auto-injector)를 제공하는 것이다.
본 발명자들은 상술한 문제점을 극복하고자 연구를 거듭한 결과, 인터루킨-6 수용체(Interleukin-6 receptor)에 결합하는 항체를 포함하는 안정한 제형을 개발하였다.
본 발명은 (A) 인터루킨-6 수용체(Interleukin-6 receptor)에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편; (B) 계면활성제; (C) i) 아미노산 또는 아미노산 유도체, ii) 당 또는 당알코올 또는 이들의 혼합물인 안정화제; 및 (D) 완충제를 포함하고, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호: 1의 아미노산 서열을 포함하는 CDR1 도메인, 서열번호: 2의 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 도메인, 및 서열번호: 3의 아미노산 서열을 포함하는 CDR3 도메인을 포함하는 경쇄 가변영역; 및 서열번호: 4의 아미노산 서열을 포함하는 CDR1 도메인, 서열번호: 5의 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 도메인, 및 서열번호: 6의 아미노산 서열을 포함하는 CDR3 도메인을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함하는, 안정한 약제학적 제제를 제공한다.
본 발명의 일 구현예에서, 상기 약제학적 제제는 액상일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
(A) 항체 또는 이의 항원 결합 단편
본 발명에 있어, 용어 "항체"는 2개의 중쇄(Heavy Chain) 및 2개의 경쇄(Light Chain)가 디설파이드 결합에 의해 서로 연결되어 있는 4개의 폴리펩타이드쇄로 이루어진 면역글로불린 분자로, 기타 변화된 구조를 갖는 자연 발생 항체, 예를 들어 카멜리드 항체를 포함할 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, 본 발명에 따른 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 폴리클로날 항체, 모노클로날 항체, 재조합 항체, 단일쇄 항체, 하이브리드 항체, 키메라 항체, 인간화 항체 또는 이의 단편(항원 결합 단편)일 수 있으며, 바람직하게는 모노클로날 항체 또는 이의 단편일 수 있다.
본 발명에 있어, 본 발명에 따른 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 인간화 모노클로날 항체 또는 이의 단편, 가장 바람직하게는 인간화 이뮤노글로불린(Immunoglobulin G, IgG) 모노클로날 항체일 수 있으며, 당해 기술분야에서 공지된 방법으로 제조될 수 있다.
본 발명에 있어, 상기 항원 결합 단편은 복합체를 형성하도록 항원에 특이적으로 결합하는 임의의 자연 발생, 효소로 수득 가능한, 합성 또는 유전 조작된 폴리펩티드 또는 당단백질을 포함하며, 일 예로는 나노바디(Nanobodies) 등이 있다.
본 발명에 있어, 상기 인간화 항체는 재구성(Reshaped) 인간 항체로도 불리며, 인간 이외의 포유동물, 예를 들어 마우스 항체의 상보성 결정영역 (Complementarity Determining Region, CDR)을 인간 항체의 상보성 결정영역에 이식한 것일 수 있고, 그 외 일반적으로 알려진 유전자 재조합 수법으로 제조될 수 있다.
본 발명에 있어, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호: 1의 아미노산 서열을 포함하는 CDR1 도메인, 서열번호: 2의 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 도메인, 및 서열번호: 3의 아미노산 서열을 포함하는 CDR3 도메인을 포함하는 경쇄 가변영역; 및 서열번호: 4의 아미노산 서열을 포함하는 CDR1 도메인, 서열번호: 5의 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 도메인, 및 서열번호: 6의 아미노산 서열을 포함하는 CDR3 도메인을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함할 수 있다.
본 발명에 있어, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호: 7의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변영역; 및 서열번호: 8의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함할 수 있다.
본 발명에 있어, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 및 서열번호: 10의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함할 수 있다.
본 발명에 있어, 본 발명에 따른 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 토실리주맙(Tocilizumab), 사릴루맙(Sarilumab), 사펠리주맙(Sapelizumab), 보바릴리주맙(Vobarilizumab) 또는 이들의 혼합물일 수 있다. 바람직하게는, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 토실리주맙, 사펠리주맙, 보바릴리주맙 또는 이들의 혼합물일 수 있다. 가장 바람직하게는, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 토실리주맙일 수 있다.
본 발명에 있어, 상기 '토실리주맙(Tocilizumab)'은 국제공개번호 제WO1992-019759호 내 기재된 hPM-1, 당해 기술 분야에 잘 알려진 바와 같은 원조 약물 물질, 또는 그의 바이오시밀러(Biosimilar)일 수 있다.
본 발명에 있어, 상기 '사릴루맙(Sarilumab)'은 KEVZARA®로도 알려진 인터루킨-6 수용체 결합 항체 또는 그의 바이오시밀러일 수 있다.
본 발명에 있어, 상기 '사펠리주맙(Sapelizumab)'은 SA-237 또는 사트랄리주맙(Satralizumab)로도 알려진 인터루킨-6 수용체 결합 항체 또는 그의 바이오시밀러일 수 있다.
본 발명에 있어, 상기 '보바릴리주맙(Vobarilizumab)'은 ALX-0061로도 알려져 있으며, 항-인간 혈청 알부민(Serum albumin) 나노바디에 연결된 인터루킨-6 수용체 결합 나노바디 또는 그의 바이오시밀러일 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 농도는 1 내지 300 mg/ml, 바람직하게는 20 내지 250 mg/ml, 더욱 바람직하게는 50 내지 220 mg/ml, 가장 바람직하게는 100 내지 200 mg/ml일 수 있다. 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 농도가 상술한 범위 내인 경우, 투여 용량 및 투여 주기의 자유도를 높일 수 있고, 장기간 안정성 및 저점도(1 cP 내지 15 cP, 바람직하게는 1 cP 내지 10 cP)를 우수하게 나타낸다.
본 발명의 다른 구현예에서, (A) 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 50 mg/ml 이상의 고농도로 포함될 수 있다. 예를 들어, 단클론항체(monoclonal antibody, mAb) 약물을 고농도로 포함하는 제제는 분자 자체의 복잡성과 다양한 분자간 상호 작용으로 인하여 낮은 단백질 농도에서의 제형과 다른 안정성 및 콜로이드 특성을 갖게 되며, 단백질 농도가 높아질수록 응집과 분해가 촉진되어 안정한 의학적 제제 개발에 어려움이 있다. 또한, 가역적인 자가 결합이 발생되어 점도 증가 등에 영향을 미치고 안정한 제제 개발 및 의약품 제조 과정에 어려움이 발생된다. 본 발명자들은 상술한 어려움이 있음에도, 본 발명의 제제가 고농도에서 안정함을 실험을 통하여 확인하였다.
(B) 계면활성제
본 발명에 있어, 용어 "계면활성제"는 소수성 또는 유성 물질의 수용해도를 현저히 증가시키거나 상이한 소수성을 갖는 두 물질의 혼화성을 증가시키는 데 사용될 수 있는 물질을 의미한다.
본 발명에 있어, 본 발명에 따른 계면활성제는 폴리옥시에틸렌소르비탄지방산에스테르 (예를 들어, 폴리소르베이트 등), 폴리옥시에틸렌알킬에테르 (예를 들어, Brij ® 등), 알킬페닐폴리옥시에틸렌에테르 (예를 들어, Triton-X 등), 폴리옥시에틸렌-폴리옥시프로필렌 코폴리머 (예를 들어, 폴록사머, Pluronic® 등), 나트륨 도데실 설페이트 (Sodium Dodecyl Sulfate, SDS) 등일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명에 있어, 상기 계면활성제는 폴리옥시에틸렌소르비탄지방산에스테르, 폴리옥시에틸렌알킬에테르, 알킬페닐폴리옥시에틸렌에테르, 폴리옥시에틸렌-폴리옥시프로필렌 코폴리머, 나트륨 도데실 설페이트 또는 이들의 혼합물일 수 있다. 상기 계면활성제는 바람직하게는 폴리옥시에틸렌소르비탄지방산에스테르, 폴리옥시에틸렌-폴리옥시프로필렌 코폴리머 또는 이들의 혼합물, 더욱 바람직하게는 폴리옥시에틸렌소르비탄지방산에스테르일 수 있다.
본 발명에 있어, 상기 계면활성제는 폴리소르베이트, 폴록사머 또는 이들의 혼합물, 바람직하게는 폴리소르베이트일 수 있다.
본 발명에 있어, 상기 계면활성제는 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 40, 폴리소르베이트 60, 폴리소르베이트 80 또는 이들의 혼합물, 바람직하게는 폴리소르베이트 80일 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, 상기 계면활성제의 농도는 본 발명에 따른 안정한 약제학적 제제의 안정성 및 점도에 악영향을 미치지 않는 범위 내에서 자유롭게 조절할 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, (B) 계면활성제의 농도는 0.001 내지 1%(w/v), 바람직하게는 0.005 내지 0.1%(w/v), 가장 바람직하게는 0.01 내지 0.05%(w/v)일 수 있다. 상기 계면활성제의 농도가 상술한 범위 내인 경우, 장기간 안정성 및 저점도를 우수하게 나타낸다.
(C) 안정화제
본 발명에 있어, 용어 "안정화제"는 생리학적으로 용인되고 제제에 안정성을 부여하는 물질이다.
본 발명의 일 구현예에서, (C) 안정화제는 i) 아미노산 또는 아미노산 유도체; ii) 당 또는 당알코올; 또는 이들의 혼합물일 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, 상기 i) 아미노산 또는 아미노산 유도체(단, 본 발명에 따른 완충제에 포함되는 히스티딘과 상이함)는 트레오닌, 메티오닌, 아르기닌, 프롤린, 류신, 글리신, 타우린, 페닐알라닌, 트립토판, 글루타민, 아스파르테이트, 글루탐산염, 알라닌, 아스파라긴, 세린, 글리신, 티로신으로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 본 발명에 있어, 상기 i) 아미노산 또는 아미노산 유도체는 바람직하게는, 트레오닌, 메티오닌, 아르기닌, 프롤린, 류신, 글리신, 및 타우린으로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상일 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, 상기 ii) 당 또는 당알코올은 수크로스, 트레할로스, 소르비톨, 글루코스, 프럭토스, 갈락토스, 자일로스, 말토스, 락토스, 자일리톨, 만니톨, D-말티톨, 이노시톨, 락티톨 및 이소말트로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 본 발명에 있어, 상기 ii) 당 또는 당알코올은 바람직하게는 수크로스, 트레할로스 및 소르비톨로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상일 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, 상기 안정화제는 바람직하게는 트레오닌 및 메티오닌의 혼합물일 수 있다.
본 발명에 있어, 상기 트레오닌 및 메티오닌의 혼합물의 농도 비율(즉, 트레오닌:메티오닌)은 1:1 내지 10:1, 바람직하게는 1:1 내지 8:1, 더욱 바람직하게는 1:1 내지 7:1일 수 있다.
본 발명에 있어, 상기 안정화제 농도는 본 발명에 따른 약제학적 제제의 안정성 및 점도에 악영향을 실질적으로 미치지 않는 범위 내에서 자유롭게 조절할 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, 상기 아미노산 또는 아미노산 유도체의 농도는 10 내지 500 mM, 바람직하게는 30 내지 450 mM, 더욱 바람직하게는 100 내지 400 mM, 가장 바람직하게는 130 내지 300 mM일 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, 상기 트레오닌의 농도는 5 내지 300 mM, 바람직하게는 100 내지 250 mM, 더욱 바람직하게는 110 내지 190 mM일 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, 상기 메티오닌의 농도는 5 내지 200 mM, 바람직하게는 10 내지 150 mM, 더욱 바람직하게는 30 내지 110 mM일 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, 상기 당 또는 당알코올의 농도는 0.1 내지 30%(w/v), 바람직하게는 5 내지 10%(w/v)일 수 있다.
본 발명에 있어, 본 발명에 따른 안정화제 농도가 본 발명에 기재된 범위 내인 경우, 장기간 안정성 및 저점도를 우수하게 나타낸다.
(D) 완충제
본 발명에 있어, 용어 "완충제"는 산이나 알칼리에 의한 pH의 변화를 최소화시키는 물질이다.
본 발명의 일 구현예에서, (D) 완충제는 히스티딘(Histidine) 또는 이의 염, 아세트산(Acetic acid) 또는 이의 염, 인산(Phosphoric acid) 또는 이의 염, 시트르산(Citric acid) 또는 이의 염, 숙신산(Succinic acid) 또는 이의 염, 글루타민산(Glutamic acid) 또는 이의 염, 2-(N-모르폴리노)에탄설포닉산(2-(N-morpholino)ethanesulfonic acid, MES) 또는 이의 염, 트리스(Tromethamine, Tris) 또는 이의 염 등일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 바람직하게는, 상기 완충제는 히스티딘(Histidine) 또는 이의 염, 아세트산(Acetic acid) 또는 이의 염, 인산(Phosphoric acid) 또는 이의 염, 시트르산(Citric acid) 또는 이의 염, 숙신산(Succinic acid) 또는 이의 염 또는 이들의 혼합물일 수 있다.
본 발명에 있어, 상기 완충제는 더욱 바람직하게는 히스티딘 또는 이의 염 또는 이들의 혼합물일 수 있다.
예를 들어, 본 발명에 따른 히스티딘염은 히스티딘 클로라이드, 히스티딘 아세테이트, 히스티딘 포스페이트, 히스티딘 설페이트 등일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
예를 들어, 본 발명에 따른 아세트산염은 아세트산나트륨, 아세트산아연, 아세트산알루미늄, 아세트산암모늄, 아세트산칼륨 등일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
예를 들어, 본 발명에 따른 인산염은 인산칼륨, 인산나트륨, 인산암모늄, 인산칼슘, 인삼마그네슘 등일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
예를 들어, 본 발명에 따른 시트르산염은 시트르산나트륨, 시트르산칼슘, 시트르산 칼륨 등일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
예를 들어, 본 발명에 따른 숙신산염은 숙신산나트륨, 숙신산칼슘, 숙신산칼륨, 설포숙신산 나트륨, 설포숙신산칼륨, 설포숙신산 칼슘 등일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
예를 들어, 본 발명에 따른 글루타민산염은 글루타민산나트륨, 글루타민산칼륨, 글루타민산암모늄 등일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
예를 들어, 본 발명에 따른 2-(N-모르폴리노)에탄설포닉산(MES)염은 MES 클로라이드, MES 나트륨 등일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다
예를 들어, 본 발명에 따른 트리스염은 트리스염화수소, 트리스아세테이트, 트리스보레이트 등일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명에 있어, 완충제의 함량은 본 발명에 따른 약제학적 제제의 안정성 및 점도에 악영향을 실질적으로 미치지 않는 범위 내에서 자유롭게 조절할 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, (D) 완충제의 함량은 0.1 내지 50 mM, 바람직하게는 1 내지 25 mM일 수 있다.
(E) pH
본 발명에 있어, 본 발명에 따른 안정한 약제학적 제제의 pH는 완충제 또는 pH 조절제를 이용하여 치료 유효성을 최적화하는 범위로 조절할 수 있다.
본 발명에 있어, 상기 pH는 5 이상 내지 7 미만일 수 있다. 상기 pH가 상술한 범위 내인 경우, 장기간 안정성 및 저점도를 우수하게 나타낸다.
본 발명에 있어, 용어 "pH 조절제"는 제제의 pH를 조정하는 데 사용되는 물질이다.
본 발명의 일 구현예에서, 본 발명에 따른 약제학적 제제는 pH 조절제 (산 또는 염기)를 추가로 포함할 수 있다. 상기 pH 조절제의 함량은 제제의 안정성 및 점도에 악영향을 실질적으로 미치지 않는 범위 내에서 자유롭게 조절할 수 있다.
본 발명에 있어, 상기 pH 조절제는 아세트산, 인산, 수산화나트륨, 탄산수소나트륨 등일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
(F) 기타 성분
본 발명에 있어, 본 발명에 따른 안정한 약제학적 제제는 보존제를 포함하지 않을 수 있다. 상기 보존제는 해당 기술분야에 통상적으로 사용되는 보존제일 수 있다. 예를 들어, 상기 보존제는 옥타데실디메틸벤질 암모늄 클로라이드, 헥사메토늄 클로라이드, 벤잘코늄 클로라이드, 벤제토늄 클로라이드, 페놀, 부틸 알코올, 벤질 알콜, 알킬 파라벤, 카테콜, 레소르시놀, 시클로헥산올, 3-펜탄올, m-크레졸 등일 수 있으나, 이에 한정되지 않는다. 바람직하게는, 상기 제제는 보존제를 포함하지 않음으로써 안정성이 개선될 수 있다.
본 명세서에서, 용어 "포함하지 않는" 또는 "포함하지 않음"은 임의의 성분을 전혀 포함하지 않거나 임의의 성분을 실질적으로 포함하지 않는 것, 즉, 항체의 활성, 약제학적 제제의 안정성 또는 점도에 영향을 주지 않는 범위로 포함하는 것을 의미한다. 예를 들어, 약제학적 제제의 전체 중량을 기준으로 임의의 성분을 1 %(w/v) 이하, 1 mM 이하, 1 mg/ml 이하, 1 ppm(w/v) 이하 또는 1 ppb(w/v) 이하로 포함하는 것을 의미한다.
본 발명에 있어, 본 발명의 안정한 약제학적 제제는 제제의 안정성 및 점도에 악영향을 실질적으로 미치지 않는 범위 내에서 당해 기술분야에서 공지된 첨가제를 추가로 포함할 수 있다. 상기 첨가제는 예를 들어 수성 담체, 산화방지제, 또는 이들의 혼합물일 수 있다. 본 발명에 있어, 상기 수성 담체는 인간에게 투여시 안전하고 무독성인, 약제학적 제제의 제조에 유용한 담체일 수 있다. 상기 수성 담체의 예로는 멸균 주사용수(Sterile Water for Injection, SWFI), 정균성 주사용수(Bacteristetic Water for Injection, BWFI), 멸균 염수 용액, 링거 용액, 덱스트로스 등이 있으나, 이에 한정되지 않는다. 본 발명에 있어, 상기 산화방지제는 아스코르브산 등이 있으나, 이에 한정되지 않는다.
(G) "안정한" 약제학적 제제
본 발명에 있어, 용어 "안정한" 또는 "안정화"는 제조 공정 동안 및/또는 보관 또는 저장 시에 본 발명에 따른 성분 또는 이를 포함하는 조성물이나 제제가 이의 물리적 안정성, 화학적 안정성 및/또는 생물학적 활성을 나타내는 것을 의미한다. 본 발명에 있어, 안정성을 측정하는 다양한 분석학적 기술은 당해 기술분야에서 용이하게 이용할 수 있는 것이다.
본 발명에 있어, 상기 물리적 안정성은 당해 기술분야에 공지된 방법으로 평가할 수 있으며, 예를 들어 광(흡광 또는 광학 밀도)의 샘플 겉보기 감쇠 측정을 통해 평가할 수 있다. 이러한 광 감쇠 측정은 제제의 탁도와 관련된다. 또한, 물리적 안정성에 대해 고분자량 성분 함량, 저분자량 성분 함량, 온전한 단백질량, 불용성 이물 입자수 등을 측정할 수 있다.
본 발명에 있어, 상기 화학적 안정성은 당해 기술분야에 공지된 방법으로 평가할 수 있으며, 예를 들어 화학적으로 변화된 형태의 항체를 검출하고 정량함으로써, 이온 교환 크로마토그래피에 의해 평가될 수 있는 하전 변화(예를 들어, 탈아미드화 또는 산화의 결과로서 발생하는 하전 변화) 또는 전하 변형체(산성 또는 염기성 피크 측정) 등을 측정하여 평가할 수 있다.
본 발명에 있어, 상기 생물학적 활성은 당해 기술분야에 공지된 방법으로 평가할 수 있으며, 예를 들어 효소결합면역흡착검사(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, ELISA)를 통해 항원 결합 친화도를 측정하여 평가할 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, 용어 "안정한" 약제학적 제제는 다음 (G)-1 내지 (G)-11 중 하나 이상을 만족하는 약제학적 제제를 의미한다.
(G)-1 탁도
- 온도 5±3℃에서 0일, 5일, 10일, 2주, 3주 또는 4주 동안 보관한 후 분광 광도계로 측정한 흡광도 A600이 0 내지 0.03인 약제학적 제제;
- 온도 40±2℃, 상대습도 75±5%, 및 밀폐 조건에서 0주, 5일, 10일, 2주, 3주, 4주 또는 6주 동안 보관한 후 분광 광도계로 측정한 흡광도 A600이 0 내지 0.06인 약제학적 제제;
(G)-2 주성분 함량(메인 피크(Main peak%))
- 온도 5±3℃에서 0일, 5일, 10일, 2주, 3주 또는 4주 동안 보관한 후 SEC-HPLC로 측정한 주성분이 98% 내지 100%인 약제학적 제제;
- 온도 40±2℃, 상대습도 75±5% 및 밀폐 조건에서 0주, 5일, 10일, 2주, 3주, 4주 또는 6주 동안 보관한 후 SEC-HPLC로 측정한 주성분이 97% 내지 100%인 약제학적 제제;
(G)-3 고분자량 성분 함량(메인 피크(온전한 IgG)를 기준으로 체류 시간(retention time)이 앞쪽인 피크(Pre-peak%))
- 온도 5±3℃에서 0일(0주), 5일, 10일, 2주, 3주 또는 4주 동안 보관한 후 SEC-HPLC로 측정한 고분자량 성분 함량이 0 내지 1.5%인 약제학적 제제;
- 온도 40±2℃, 상대습도 75±5% 및 밀폐 조건에서 0주, 5일, 10일, 2주, 3주, 4주 또는 6주 동안 보관한 후 SEC-HPLC로 측정한 고분자량 성분 함량이 0 내지 2%인 약제학적 제제;
(G)-4 저분자량 성분 함량(메인 피크(온전한 IgG)를 기준으로 체류 시간(retention time)이 뒤쪽인 피크(Post Peak%))
- 온도 5±3℃에서 0일(0주), 5일, 10일, 2주, 3주 또는 4주 동안 보관한 후 SEC-HPLC로 측정한 저분자량 성분 함량이 0 내지 1%인 약제학적 제제;
- 온도 40±2℃, 상대습도 75±5% 및 밀폐 조건에서 0주, 5일, 10일, 2주, 3주, 4주 또는 6주 동안 보관한 후 SEC-HPLC로 측정한 저분자량 성분 함량이 0 내지 1.5%인 약제학적 제제;
(G)-5 온전한 면역글로불린 G의 함량
- 온도 5±3℃에서 0일(0주), 5일, 10일, 2주, 3주 또는 4주 동안 보관한 후 비환원 CE-SDS로 측정한 온전한 면역글로불린 G의 함량(Intact IgG%)이 96% 내지 100%인 약제학적 제제;
- 온도 40±2℃, 상대습도 75±5% 및 밀폐 조건에서 0주, 5일, 10일, 2주, 3주, 4주 또는 6주 동안 보관한 후 비환원 CE-SDS로 측정한 온전한 면역글로불린 G의 함량(Intact IgG%)이 93% 내지 100%인 약제학적 제제;
(G)-6 온전한 중쇄 및 경쇄의 함량
- 온도 5±3℃에서 0일(0주), 5일, 10일, 2주, 3주 또는 4주 동안 보관한 후 환원 CE-SDS로 측정한 온전한 중쇄 및 경쇄의 함량(Intact HC+LC%)이 99% 내지 100%인 약제학적 제제;
- 온도 40±2℃, 상대습도 75±5%, 및 밀폐 조건에서 0주, 5일, 10일, 2주, 3주, 4주 또는 6주 동안 보관한 후 환원 CE-SDS로 측정한 온전한 중쇄 및 경쇄의 함량(Intact HC+LC%)이 98% 내지 100%인 약제학적 제제;
(G)-7 불용성 이물 입자수
- 온도 5±3℃에서 0일(0주), 5일, 10일, 2주, 3주 또는 4주 동안 보관한 후 MFI로 측정한 불용성 이물 입자(10㎛≤, <100㎛)의 개수가 0 내지 1000개이고 불용성 이물 입자(25㎛≤, <100㎛)의 개수가 0 내지 150개인 약제학적 제제;
- 온도 40±2℃, 상대습도 75±5%, 및 밀폐 조건에서 0주, 5일, 10일, 2주, 3주, 4주 또는 6주 동안 보관한 후 MFI로 측정한 불용성 이물 입자(10㎛≤, <100㎛)의 개수가 0 내지 2000개이고 불용성 이물 입자(25㎛≤, <100㎛)의 개수가 0 내지 200개인 약제학적 제제;
(G)-8 산화율
- 온도 5±3℃에서 0일(0주), 5일, 10일, 2주, 3주 또는 4주 동안 보관한 후 LC-MS로 측정한 중쇄 Met 106의 산화율이 0% 내지 6%인 약제학적 제제;
- 온도 40±2℃, 상대습도 75±5%, 및 밀폐 조건에서 0주, 5일, 10일, 2주, 3주, 4주 또는 6주 동안 보관한 후 LC-MS로 측정한 중쇄 Met 106의 산화율이 0% 내지 10%인 약제학적 제제;
(G)-9 전하 변형체 (이온 교환 크로마토그래피에서 산성 또는 염기성 피크를 제외한 메인 피크)
- 온도 5±3℃에서 0일(0주), 5일, 10일, 2주, 3주 또는 4주 동안 보관한 후 IEC-HPLC로 측정한 메인 피크가 60% 내지 70%인 약제학적 제제;
- 온도 40±2℃, 상대습도 75±5%, 및 밀폐 조건에서 0주, 5일, 10일, 2주, 3주, 4주 또는 6주 동안 보관한 후 IEC-HPLC로 측정한 메인 피크가 40% 내지 60%인 약제학적 제제;
(G)-10 IL-6R 결합 친화도
- 온도 40±2℃, 상대습도 75±5%, 및 밀폐 조건에서 0주, 5일, 10일, 2주, 3주, 4주 또는 6주 동안 보관한 후 ELISA로 측정한 IL-6R 결합 친화도가 80% 내지 120%인 약제학적 제제;
(G)-11 점도
- 온도 5±3℃에서 0일(0주), 5일, 10일, 2주, 3주 또는 4주 동안 보관한 후 점도계로 측정한 점도가 1 cP 내지 11 cP 인 약제학적 제제;
- 온도 40±2℃, 상대습도 75±5%, 및 밀폐 조건에서 0주, 5일, 10일, 2주, 3주, 4주 또는 6주 동안 보관한 후 점도계로 측정한 점도가 1 cP 내지 15 cP 인 약제학적 제제.
본 발명의 일 구현예에 있어, 본 발명에 따른 안정한 약제학적 제제의 점도는 1 내지 15 cP, 바람직하게는 1 내지 10 cP일 수 있다.
본 발명의 다른 구현예에 있어, 본 발명에 따른 안정한 약제학적 제제는
(A) 서열번호: 1의 아미노산 서열을 포함하는 CDR1 도메인, 서열번호: 2의 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 도메인, 및 서열번호: 3의 아미노산 서열을 포함하는 CDR3 도메인을 포함하는 경쇄 가변영역; 및 서열번호: 4의 아미노산 서열을 포함하는 CDR1 도메인, 서열번호: 5의 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 도메인, 및 서열번호: 6의 아미노산 서열을 포함하는 CDR3 도메인을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편 1 내지 300 mg/ml; (B) 계면활성제 0.001 내지 1 %(w/v); (C) 안정화제로 아미노산 또는 아미노산 유도체 1 내지 500 mM; 및 (D) 완충제 0.1 내지 50 mM을 포함한다.
본 발명의 또 다른 구현예에 있어, 본 발명에 따른 안정한 약제학적 제제는
(A) 서열번호: 1의 아미노산 서열을 포함하는 CDR1 도메인, 서열번호: 2의 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 도메인, 및 서열번호: 3의 아미노산 서열을 포함하는 CDR3 도메인을 포함하는 경쇄 가변영역; 및 서열번호: 4의 아미노산 서열을 포함하는 CDR1 도메인, 서열번호: 5의 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 도메인, 및 서열번호: 6의 아미노산 서열을 포함하는 CDR3 도메인을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편 1 내지 300 mg/ml; (B) 계면활성제 0.001 내지 1 %(w/v); (C) 안정화제로 당 또는 당알코올 0.1 내지 30%(w/v); 및 (D) 완충제 0.1 내지 50 mM을 포함한다.
[제품]
본 발명의 일 구현예에 있어, 본 발명은 본 발명에 따른 안정한 약제학적 제제; 및 상기 안정한 약제학적 제제를 밀폐된 상태로 수용하는 용기를 포함하는 제품을 제공한다.
상기 안정한 약제학적 제제는 본 명세서에서 상술한 바와 같다.
본 발명에 있어, 상기 용기는 유리, 폴리머(예를 들어, 플라스틱), 금속 등의 물질로부터 형성될 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.
예를 들어, 본 발명에 따른 용기는 병, 바이알(Vial), 카트리지(Cartridge), 주사기(예를 들어, 프리-필드 시린지(Pre-filled syringe), 자동 주사기(Auto-injector 등) 또는 튜브(Tube), 바람직하게는 유리 또는 폴리머 바이알, 또는 유리 또는 폴리머 프리-필드 시린지일 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.
본 발명의 일 구현예에 있어, 본 발명은 본 발명에 따른 약제학적 제제가 충진된 바이알(Vial), 상기 약제학적 제제가 충진된 카트리지(Cartridge), 상기 약제학적 제제가 충진된 프리-필드 시린지(Pre-filled syringe), 또는 상기 프리-필드 시린지가 그 내부에 포함된 자동 주사기(Auto-injector)를 제공한다.
상기 바이알, 카트리지, 프리-필드 시린지, 자동 주사기 등의 구체적인 제품형태 및 상기 안정한 약제학적 제제를 상기 바이알, 카트리지, 프리-필드 시린지, 자동 주사기 등에 충진하는 방법은 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자라면 용이하게 입수하거나 실시할 수 있는 방법을 이용할 수 있다. 예를 들어, 미국 등록특허 제4,861,335호, 제6,331,174호 등은 프리-필드 시린지의 구체적인 제품형태 및 충진방법을 개시한다. 예를 들어, 미국 등록특허 제5,085,642호, 제5,681,291호 등은 자동 주사기의 구체적인 제품형태 및 조립방법을 개시한다. 또한, 상기 바이알, 카트리지, 프리-필드 시린지, 자동 주사기 등으로 상용화된 제품을 그대로 이용하거나, 상기 안정한 약제학적 제제의 물성, 투여부위, 투여량 등을 고려하여 별도로 주문 제작한 제품을 이용할 수 있다.
본 발명에 있어, 상기 용기는 1회 투여용 용기일 수 있다.
본 발명에 있어, 본 발명에 따른 제품은 상기 안정한 약제학적 제제의 사용방법, 보관방법 또는 이들 모두를 제공하는 지시사항을 추가로 포함할 수 있다. 상기 지시사항은 인터루킨-6 수용체(Interleukin-6 receptor) 관련 질병의 치료법, 투여경로, 투여량 또는 투여시기를 포함할 수 있다.
본 발명에 있어, 상기 제품은 상업적 및 사용자 관점에서 필요한 기타 도구, 예를 들어 바늘, 주사기 등을 포함할 수 있다.
[안정한 약제학적 제제의 제조방법]
본 발명의 안정한 약제학적 제제는 공지된 방법으로 제조될 수 있으며, 특정 제조 방법으로 한정되지 않는다. 일 예로, 계면활성제 및 안정화제를 포함하는 용액에 완충제를 첨가하면서 pH를 조절한 후, 이 혼합 용액에 항체를 넣어 약제학적 제제를 제조할 수 있다. 다른 일 예로, 정제 공정의 최종 단계에서 항체, 완충제 및 안정화제를 포함하는 용액을 제조한 후, 이 용액에 계면활성제를 첨가하여 약제학적 제제를 제조할 수 있다.
[안정한 약제학적 제제의 사용방법]
본 발명에 있어, 본 발명에 따른 안정한 약제학적 제제는 인터루킨-6 수용체(Interleukin-6 receptor) 관련 질병의 치료 효과를 나타낼 수 있다.
본 발명에 있어, 상기 인터루킨-6 수용체 관련 질병은 자가 면역 질환, 염증성 질환, 악성 종양, 스틸병, 혈관염, 소아 특발성 관절염, 골관절염 등일 수 있다. 예를 들어, 상기 인터루킨-6 수용체 관련 질병은 류마티스 관절염(Rheumatoid Arthritis, RA), 성인 스틸병(Adult Onset Still's disease, AOSD), 전신형 소아 특발성 관절염(systemic Juvenile Idiopathic Arthritis, sJIA), 다관절형 소아 특발성 관절염(polyarticular Juvenile Idiopathic Arthritis, pJIA), 캐슬만병(Castleman's Disease, CD), 거대세포 동맥염(Giant Cell Arteritis, GCA), 타까야수 동맥염(Takayasu's Arteritis, TAK), 전신 경화증(Systemic Sclerosis, SSc), 전신 경화증 관련 간질성 폐질환 (Systemic Sclerosis-Associated Interstitial Lung Disease, SSc-ILD), 사이토카인 방출 증후군(Cytokine Release Syndrome, CRS), 손 골관절염(Hand Osteoarthritis), 류마티스성 다발근통(Polymyalgia Rheumatica, PMR), 항중성구 세포질 항체 관련 혈관염(Antineutrophil cytoplasmic antibody associated vasculitis, ANCA-AAV), 재발성 다발 연골염(Relapsing Polychondritis, RP), 제2형 당뇨병(Type 2 diabetes, T2D), 강직성 척추염(Ankylsoing Spondylitis, AS), 축성 척추관절염(Axial Spondyloarthritis, axSpA), 건선(Psoriasis, Ps), 건선성 관절염(Psoriatic Arthritis, PsA), 염증성 장 질환(Inflammatory Bowel Disease, IBD), 크론병(Crohn's disease, CD), 궤양성 대장염(Ulcerative Colitis, UC), 갑상선 관련 눈병(Thyroid ophthalmopathy, TAO), 류마티스 관절염 관련 심혈관 질환(Rheumatoid arthritis-Associated Cardiovascular Disease), 급성이식편대숙주병(Acute Graft Versus Host Disease, GVHD), 비ST분절 상승형 심근경색(Non-ST-segment Elevation MI, NSTEMI), 전신 홍반성 루푸스(Systemic Lupus Erythematosus, SLE), 정신분열증(Schizophrenia), 포도막염(Uveitis), 난소암(Ovarian Cancer), 시신경 척수염(Neuromyelitis Optica, NMO), 사구체신염(Glomerulonephritis, GN), 만성사구체신염(Chronic Glomerulonephritis), 결장 직장암(Rectal Cancer), 폐렴(Pneumonia), 폐암(Lung Cancer) 등이 있으나, 이에 한정되지 않는다. 바람직하게는, 상기 인터루킨-6 수용체 관련 질병은 류마티스 관절염, 성인 스틸병, 전신형 소아 특발성 관절염, 다관절형 소아 특발성 관절염, 캐슬만병, 거대세포 동맥염, 타까야수 동맥염, 전신 경화증, 전신 경화증 관련 간질성 폐질환, 사이토카인 방출 증후군, 류마티스성 다발근통으로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상일 수 있다.
본 발명에 있어, 본 발명에 따른 안정한 약제학적 제제는 정맥 투여용(Intravenous, IV) 또는 피하 투여용(Subcutaneous, SC)으로 사용될 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, 상기 안정한 약제학적 제제는 사용 전에 희석(Dilution) 단계를 거칠 수 있다. 본 발명에 있어, 본 발명의 피하 투여용(Subcutaneous, SC) 제제는 희석 단계를 거쳐 정맥 투여용(Intravenous, IV) 제제로 사용될 수 있다.
본 발명의 일 구현예에서, 상기 안정한 약제학적 제제는 사용 전에 재용해(Reconstitution) 단계를 거치지 않을 수 있다.
상기 약제학적 제제 내 항체를 비롯한 다른 성분들의 농도는 상술한 바와 같으며, 본 발명에 따른 약제학적 제제의 전체 부피는 0.9 내지 20 ml일 수 있다.
상기 약제학적 제제의 투여량 또는 투여시기는 질병의 종류, 질병의 중증도 및 경과 상태, 환자의 건강 및 치료에 대한 반응, 또는 치료하는 의사의 판단에 따라 달라질 수 있으며, 특정 투여량 또는 투여시기로 한정되지 않는다.
[치료방법 및 안정화 방법]
본 발명의 일 구현예에서, 본 발명은 인터루킨-6 수용체(Interleukin-6 receptor) 관련 질병을 갖는 환자에게 (A) 인터루킨-6 수용체(Interleukin-6 receptor)에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편, (B) 계면활성제, (C) 안정화제 및 (D) 완충제를 포함하는 안정한 약제학적 제제를 투여하는 것을 포함하는, 인터루킨-6 수용체(Interleukin-6 receptor) 관련 질병을 치료하는 방법을 제공한다.
본 발명의 다른 구현예에서, 본 발명은 (A) 인터루킨-6 수용체(Interleukin-6 receptor)에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편, (B) 계면활성제, (C) 안정화제 및 (D) 완충제를 포함하는 안정한 약제학적 제제를 제조하는 것을 포함하는, 항체를 약제학적 제제 내에서 안정화하는 방법을 제공한다.
상기 안정한 약제학적 제제는 본 명세서에서 상술한 바와 같다.
본 발명에 따른 치료방법 또는 안정화 방법은 본 명세서에서 상술한 설명을 준용한다.
본원에 기재된 상기 각 특징들은 조합되어 사용될 수 있으며, 상기 각 특징들이 특허청구범위의 서로 다른 종속항에 기재된다는 사실은 이들이 조합되어 사용될 수 없음을 나타내는 것은 아니다.
본 발명에 따른 안정한 약제학적 제제는 항체를 포함하는 경우, 특히 고농도로 포함하는 경우에도 낮은 점도를 가지고, 가속 조건 및 가혹 조건에서의 우수한 안정성을 바탕으로 장기간 보관 안정성이 우수하며, 정맥 또는 피하 투여가 가능하다.
도 1은 실시예 1 내지 5의 주성분 함량 측정 결과이다.
도 2는 실시예 1 내지 5의 고분자량 성분 함량 측정 결과이다.
도 3은 실시예 1 내지 5의 저분자량 성분 함량 측정 결과이다.
도 4는 실시예 6 내지 13의 주성분 함량 측정 결과이다.
도 5는 실시예 6 내지 13의 고분자량 성분 함량 측정 결과이다.
도 6은 실시예 6 내지 13의 저분자량 성분 함량 측정 결과이다.
도 7은 실시예 14 내지 16의 주성분 함량 측정 결과이다.
도 8은 실시예 14 내지 16의 고분자량 성분 함량 측정 결과이다.
도 9는 실시예 14 내지 16의 저분자량 성분 함량 측정 결과이다.
도 10은 실시예 17 내지 22의 주성분 함량 측정 결과이다.
도 11은 실시예 17 내지 22의 고분자량 성분 함량 측정 결과이다.
도 12은 실시예 17 내지 22의 저분자량 성분 함량 측정 결과이다.
도 13은 실시예 23 내지 27의 주성분 함량 측정 결과이다.
도 14은 실시예 23 내지 27의 고분자량 성분 함량 측정 결과이다.
도 15은 실시예 23 내지 27의 저분자량 성분 함량 측정 결과이다.
도 16은 실시예 25, 28 내지 30의 주성분 함량 측정 결과이다.
도 17은 실시예 25, 28 내지 30의 고분자량 성분 함량 측정 결과이다.
도 18은 실시예 25, 28 내지 30의 저분자량 성분 함량 측정 결과이다.
도 19는 실시예 31, 32 및 비교예 1의 전하 변형체 측정 결과이다.
도 20은 실시예 33 내지 35 및 비교예 2의 IL-6R 결합친화도 측정 결과이다.
이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명한다. 하기 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐, 본 발명의 범위가 하기 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다. 본 발명에서 인용된 문헌은 본 발명의 명세서에 참조로서 통합된다.
하기 실험예에서 사용된 항체와 관련하여, 셀트리온 연구소에서 배양 및 정제된 토실리주맙을 사용하였다. 후술하는 약제학적 제제의 물리적 안정성, 화학적 안정성 및 생물학적 활성의 측정방법으로 다음과 같은 방법을 사용하였다.
- 탁도(Turbidity)
UV-Vis 분광 광도계를 이용하여 600 nm에서의 흡광도를 측정하였다.
- 주성분 함량
크기 배제 고성능 액체 크로마토그래피(Size Exclusion High Performance Liquid Chromatography; SEC-HPLC)를 이용하여 주성분 함량(main peak; %)을 측정하였다.
- 고분자량 성분 함량
크기 배제 고성능 액체 크로마토그래피(Size Exclusion High Performance Liquid Chromatography; SEC-HPLC)를 이용하여 고분자량 성분의 함량(pre-peak; %)을 측정하였다.
- 저분자량 성분 함량
크기 배제 고성능 액체 크로마토그래피(Size Exclusion High Performance Liquid Chromatography; SEC-HPLC)를 이용하여 저분자량 성분의 함량(post-peak; %)을 측정하였다.
- 온전한 면역글로불린 G의 함량(Intact IgG%)
비환원 모세관 전기이동 나트륨 도데실 설페이트(Non-Reduced Capillary Electrophoresis-Sodium Dodecyl Sulfate; NR CE-SDS)를 이용하여 온전한 면역글로불린 G의 함량(%)을 측정하였다.
- 온전한 중쇄 및 경쇄의 함량(Intact HC+LC%)
환원 모세관 전기이동 나트륨 도데실 설페이트(Reduced Capillary Electrophoresis-Sodium Dodecyl Sulfate; R CE-SDS)를 이용하여 온전한 중쇄 및 경쇄의 함량(%)을 측정하였다.
- 불용성 이물 입자(Sub-visible particles)의 수
마이크로 플로우 이미징 (Micro Flow Imaging; MFI)을 이용하여 불용성 이물 입자의 수를 측정하였다.
- 산화율(Oxidation)
질량분석을 통한 액체 크로마토그래피(Liquid chromatography-mass spectrometry; LC-MS)로 펩티드 매핑(Peptide mapping)을 통해 중쇄 Met 106의 산화율(%)을 측정하였다.
- 전하 변형체
이온 교환 크로마토그래피-고성능 액체 크로마토그래피(Ion Exchange Chromatography-High Performance Liquid Chromatography; IEC-HPLC)로 메인피크(%)를 측정하였다.
- IL-6R 결합 친화도
효소결합면역흡착 분석법(Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay; ELISA)으로 IL-6R 결합 친화도(%)를 측정하였다.
- 점도
플로우 셀(B05 센서형, 50μm 셀 깊이)이 장착된 마이크로-모세관 유동계(겉보기 전단율 범위: 103~105 s-1) 장비를 이용하여, 25±0.1℃에서 500㎕ 시린지에 담아 측정하였다.
실험예 1: 인터루킨-6 수용체(Interleukin-6 Receptor, IL-6R)에 결합하는 항체를 포함하는 약제학적 제제의 제조
하기 표 1의 실시예 1 내지 실시예 37는 각 완충제를 각 pH에 맞게 제조한 뒤 안정화제를 첨가한 다음, 항체를 첨가하고, 이후 계면활성제를 첨가하여 제조되었다. 각 성분의 구체적인 함량은 하기 표 1에 기재된 바와 같다.
구분 항체 계면활성제 안정화제 완충제 pH
실시예 1 180 mg/ml 폴리소르베이트 80 0.02 %(w/v) 아르기닌 150mM 아세트산나트륨 20 mM 5.5
실시예 2 180 mg/ml 폴리소르베이트 80 0.02 %(w/v) 아르기닌 150mM 포스페이트산나트륨 20 mM 6
실시예 3 180 mg/ml 폴리소르베이트 80 0.02 %(w/v) 아르기닌 150mM 시트르산나트륨 20 mM 6
실시예 4 180 mg/ml 폴리소르베이트 80 0.02 %(w/v) 아르기닌 150mM 숙신산나트륨 20 mM 6
실시예 5 180 mg/ml 폴리소르베이트 80 0.02 %(w/v) 아르기닌 150mM 히스티딘 20 mM 5.5
실시예 6 180 mg/ml 폴리소르베이트 80 0.02 %(w/v) 소르비톨 5.0 %(w/v) 아세트산나트륨 20 mM 5.5
실시예 7 180 mg/ml 폴리소르베이트 80 0.02 %(w/v) 수크로스 10.0 %(w/v) 아세트산나트륨 20 mM 5.5
실시예 8 180 mg/ml 폴리소르베이트 80 0.02 %(w/v) 트레할로스 10.0 %(w/v) 아세트산나트륨 20 mM 5.5
실시예 9 180 mg/ml 폴리소르베이트 80 0.02 %(w/v) 트레오닌 300mM 아세트산나트륨 20 mM 5.5
실시예 10 180 mg/ml 폴리소르베이트 80 0.02 %(w/v) 프롤린 300 mM 아세트산나트륨 20 mM 5.5
실시예 11 180 mg/ml 폴리소르베이트 80 0.02 %(w/v) 아르기닌 100mM 류신 50mM 아세트산나트륨 20 mM 5.5
실시예 12 180 mg/ml 폴리소르베이트 80 0.02 %(w/v) 타우린 300 mM 아세트산나트륨 20 mM 5.5
실시예 13 180 mg/ml 폴리소르베이트 80 0.02 %(w/v) 글리신 300 mM 아세트산나트륨 20 mM 5.5
실시예 14 180 mg/ml 폴리소르베이트 80 0.02 %(w/v) 타우린 300mM 히스티딘 20mM 6
실시예 15 180 mg/ml 폴리소르베이트 80 0.02 %(w/v) 트레오닌 300mM 히스티딘 20mM 6
실시예 16 180 mg/ml 폴리소르베이트 80 0.02 %(w/v) 트레오닌 200mM메티오닌 100mM 히스티딘 20mM 6
실시예 17 180 mg/ml 폴리소르베이트 80 0.02 %(w/v) 트레오닌 140mM메티오닌 60mM 히스티딘 10mM 6
실시예 18 180 mg/ml 폴리소르베이트 80 0.02 %(w/v) 트레오닌 180mM메티오닌 60mM 히스티딘 10mM 6
실시예 19 180 mg/ml 폴리소르베이트 80 0.02 %(w/v) 트레오닌 160mM메티오닌 40mM 히스티딘 10mM 6
실시예 20 180 mg/ml 폴리소르베이트 80 0.02 %(w/v) 트레오닌 160mM메티오닌 80mM 히스티딘 10mM 6
실시예 21 180 mg/ml 폴리소르베이트 80 0.02 %(w/v) 트레오닌 110mM메티오닌 110mM 히스티딘 10mM 6
실시예 22 180 mg/ml 폴리소르베이트 80 0.02 %(w/v) 트레오닌 189mM메티오닌 31mM 히스티딘 10mM 6
실시예 23 180 mg/ml 폴리소르베이트 80 0.02 %(w/v) 트레오닌 160mM메티오닌 60mM 히스티딘 25mM 6
실시예 24 180 mg/ml 폴리소르베이트 80 0.02 %(w/v) 트레오닌 160mM메티오닌 60mM 히스티딘 15mM 6
실시예 25 180 mg/ml 폴리소르베이트 80 0.02 %(w/v) 트레오닌 160mM메티오닌 60mM 히스티딘 10mM 6
실시예 26 180 mg/ml 폴리소르베이트 80 0.02 %(w/v) 트레오닌 160mM메티오닌 60mM 히스티딘 5mM 6
실시예 27 180 mg/ml 폴리소르베이트 80 0.02 %(w/v) 트레오닌 160mM메티오닌 60mM 히스티딘 1mM 6
실시예 28 100 mg/ml 폴리소르베이트 80 0.02 %(w/v) 트레오닌 160mM메티오닌 60mM 히스티딘 10mM 6
실시예 29 160 mg/ml 폴리소르베이트 80 0.02 %(w/v) 트레오닌 160mM메티오닌 60mM 히스티딘 10mM 6
실시예 30 200 mg/ml 폴리소르베이트 80 0.02 %(w/v) 트레오닌 160mM메티오닌 60mM 히스티딘 10mM 6
실시예 31 180 mg/ml 폴리소르베이트 80 0.02 %(w/v) 트레오닌 160mM메티오닌 60mM 히스티딘 10mM 5.7
실시예 32 180 mg/ml 폴리소르베이트 80 0.02 %(w/v) 트레오닌 160mM메티오닌 60mM 히스티딘 10mM 6.3
실시예 33 180 mg/ml 폴리소르베이트 80 0.01 %(w/v) 트레오닌 160mM메티오닌 60mM 히스티딘 10mM 6
실시예 34 180 mg/ml 폴리소르베이트 80 0.05 %(w/v) 트레오닌 160mM메티오닌 60mM 히스티딘 10mM 6
실시예 35 180 mg/ml 폴록사머 188 0.02 %(w/v) 트레오닌 160mM
메티오닌 60mM		 히스티딘 10mM 6
비교예 1 180 mg/ml 폴리소르베이트 80 0.02 %(w/v) 트레오닌 160mM메티오닌 60mM 히스티딘 10mM 7
비교예 2 180 mg/ml 폴리소르베이트 80 0.00 %(w/v) 트레오닌 160mM메티오닌 60mM 히스티딘 10mM 6
실험예 2: 완충제의 비교
실험예 1에 따라 제조된 실시예 1 내지 5를 초기 조건 및 열가속 조건에서 안정성을 측정하여, 그 결과를 하기 표 2, 도 1 내지 3에 나타내었다. 초기 조건은 5±3℃ 온도에서 0일 내지 5일 동안 보관된 시료, 열가속 조건은 40±2℃ 온도 및 75±5% 상대습도에서 10일 동안 보관된 시료로 실험하였다.
평가 실시예 및 결과 실시예 1 실시예 2 실시예 3 실시예 4 실시예 5
완충제 20 mM 아세트산나트륨 포스페이트산나트륨 시트르산나트륨 숙신산나트륨 히스티딘
항체 (mg/ml) 180 180 180 180 180
폴리소르베이트 80 (%(w/v)) 0.02 0.02 0.02 0.02 0.02
아르기닌 (mM) 150 150 150 150 150
초기 탁도 0.0147 0.0122 0.0104 0.0115 0.0135
주성분 함량(메인 피크%) 99.57 99.53 99.53 99.52 99.72
고분자량 성분 함량(%) 0.43 0.47 0.47 0.48 0.28
저분자량 성분 함량(%) 0 0 0 0 0
점도(cP) 6.47 6.34 6.8 6.48 6.37
열가속 탁도 0.0171 0.0146 0.0179 0.019 0.0165
주성분 함량(메인 피크%) 98.92 98.86 98.82 98.96 99.36
고분자량 성분 함량(%) 0.8 0.9 0.94 0.78 0.38
저분자량 성분 함량(%) 0.28 0.24 0.24 0.26 0.26
점도(cP) 6.55 6.23 7.2 6.5 6.12
초기 조건에서, 실시예 1 내지 5 모두 탁도 0.03 이하, 주성분 함량 98% 이상, 고분자량 성분 함량 1.5% 이하, 저분자량 성분 함량 1% 이하, 점도 1 cP 내지 11 cP로서, 약학적으로 허용 가능한 안정한 실시예임을 알 수 있었다.그중에서도 실시예 1과 실시예 5의 주성분 함량이 각각 99.57%, 99.72%로서 가장 높고, 고분자량 성분 함량이 각각 0.43, 0.28로서 가장 낮아, 아세트산 또는 히스티딘 완충제를 포함한 실시예가 가장 안정성이 높음을 알 수 있었다. 열가속 조건에서, 실시예 1 내지 5 모두 탁도 0.06 이하, 주성분 함량 97% 이상, 고분자량 성분 함량 2% 이하, 저분자량 성분 함량 1.5% 이하, 점도 1 cP 내지 15 cP로서, 약학적으로 허용 가능한 안정한 실시예임을 알 수 있었다.그중에서도 실시예 5의 주성분 함량이 99.36%로서 가장 높고, 고분자량 성분 함량 이 0.38%로서 가장 낮아, 히스티딘 완충제를 포함한 실시예가 가장 안정성이 높음을 알 수 있었다.
실험예 2에서 아세트산 또는 히스티딘 완충제를 포함한 실시예의 안정성이 높게 측정되었는바, 실험예 3에서는 아세트산 완충제 포함하는 여러 실시예를 추가적으로 실험하였고, 실험예 4에서는 히스티딘 완충제를 포함한 여러 실시예를 추가적으로 실험하였다.
실험예 3: 아세트산 완충제 포함하는 실시예에서 안정화제의 비교
실험예 1에 따라 제조된 실시예 6 내지 13을 초기 조건 및 열가속 조건에서 안정성을 측정하여, 그 결과를 하기 표 3, 도 4 내지 6에 나타내었다. 초기 조건은 5±3℃온도에서 0일 동안 보관된 시료, 열가속 조건은 40±2℃온도 및 75±5% 상대습도에서 10일 동안 보관된 시료로 실험하였다.
평가 실시예 및 결과 실시예 6 실시예 7 실시예 8 실시예 9 실시예 10 실시예 11 실시예 12 실시예 13
안정화제 소르비톨 5.0 %(w/v) 수크로스 10.0 %(w/v) 트레할로스 10.0 %(w/v) 트레오닌 300mM 프롤린 300 mM 아르기닌 100mM
류신 50mM		 타우린 300 mM 글리신 300mM
항체 (mg/ml) 180 180 180 180 180 180 180 180
폴리소르베이트 80 (%(w/v)) 0.02 0.02 0.02 0.02 0.02 0.02 0.02 0.02
아세트산나트륨 (mM) 20 20 20 20 20 20 20 20
초기 탁도 0.0066 0.01 0.0076 0.0073 0.0074 0.0132 0.0059 0.0079
주성분 함량(메인 피크%) 99.62 99.66 99.56 99.72 99.66 99.71 99.74 99.7
고분자량 성분 함량(%) 0.38 0.34 0.44 0.28 0.34 0.29 0.26 0.3
저분자량 성분 함량(%) 0 0 0 0 0 0 0 0
점도(cP) 7.48 7.62 10.51 6.85 7.31 5.91 5.44 6.73
열가속 탁도 0.01 0.0037 0.0241 0.0168 0.0129 0.0046 0.0298 0.0142
주성분 함량(메인 피크%) 99.13 99.12 99.06 99.35 99.24 99.34 99.37 99.25
고분자량 성분 함량(%) 0.69 0.69 0.75 0.46 0.57 0.42 0.42 0.55
저분자량 성분 함량(%) 0.18 0.19 0.19 0.19 0.19 0.24 0.2 0.19
점도(cP) 8.1 8.06 10.41 7.05 7.5 5.94 6.26 7.29
초기 조건에서, 실시예 6 내지 13 모두 탁도 0.03 이하, 주성분 함량 98% 이상, 고분자량 성분 함량 1.5% 이하, 저분자량 성분 함량 1% 이하, 점도 1 cP 내지 11 cP로서, 약학적으로 허용 가능한 안정한 실시예임을 알 수 있었다.그중에서도 실시예 9와 실시예 12의 주성분 함량이 각각 99.72%, 99.74%로서 가장 높고, 고분자량 성분 함량이 각각 0.28, 0.26로서 가장 낮아, 트레오닌 또는 타우린 안정화제를 포함한 실시예가 가장 안정성이 높음을 알 수 있었다. 열가속 조건에서, 실시예 6 내지 13 모두 탁도 0.06 이하, 주성분 함량 97% 이상, 고분자량 성분 함량 2% 이하, 저분자량 성분 함량 1.5% 이하, 점도 1 cP 내지 15 cP로서, 약학적으로 허용 가능한 안정한 실시예임을 알 수 있었다.그중에서도 실시예 9와 실시예 12의 주성분 함량이 각각 99.35%, 99.37%로서 가장 높아, 트레오닌 또는 타우린 안정화제를 포함한 실시예가 가장 안정성이 높음을 알 수 있었다.
실험예 3에서 트레오닌 또는 타우린 안정화제를 포함한 실시예의 안정성이 높게 측정되었는바, 실험예 4에서는 이를 기초로 여러 실시예를 추가적으로 실험하였다.
실험예 4: 히스티딘 완충제 포함하는 여러 실시예의 안정성 실험
실험예 4-1. 안정화제의 비교
실험예 1에 따라 제조된 실시예 14 내지 16을 초기, 장기, 열가속 1 및 열가속 2 조건에서 안정성을 측정하여, 그 결과를 하기 표 4, 도 7 내지 9에 나타내었다. 초기 조건은 5±3℃ 온도에서 0일 동안 보관된 시료, 장기 조건은 5±3℃ 온도에서 4주 동안 보관된 시료, 열가속 1 조건은 40±2℃ 온도 및 75±5% 상대습도에서 2주 동안 보관된 시료, 열가속 2 조건은 40±2℃ 온도 및 75±5% 상대습도에서 4주 동안 보관된 시료로 실험하였다.
평가 실시예 및 결과 실시예 14 실시예 15 실시예 16
안정화제 타우린 300mM 트레오닌 300mM 트레오닌 200mM
메티오닌 100mM
항체 (mg/ml) 180 180 180
폴리소르베이트 80 (%(w/v)) 0.02 0.02 0.02
히스티딘 (mM) 20 20 20
초기 탁도 0.0163 0.0163 0.0159
주성분 함량(메인 피크%) 99.57 99.55 99.56
고분자량 성분 함량(%) 0.43 0.45 0.44
저분자량 성분 함량(%) 0 0 0
불용성 이물 입자수 (10㎛≤, <100㎛) 231 164 201
(25㎛≤, <100㎛) 31 28 33
점도(cP) 6.56 7.78 7.35
온전한 면역글로불린 G의 함량 (Intact IgG%) 97.77 97.49 98.06
온전한 중쇄 및 경쇄의 함량 (Intact LC+HC%) 99.82 99.95 99.77
산화율(Met 106) 4.1 4.3 4.4
장기 탁도 0.004 0.0062 0.0025
주성분 함량(메인 피크%) 98.94 98.94 98.96
고분자량 성분 함량(%) 1.01 1.03 1.01
저분자량 성분 함량(%) 0.05 0.04 0.03
불용성 이물 입자수 (10㎛≤, <100㎛) 652 586 744
(25㎛≤, <100㎛) 44 34 49
점도(cP) 6.81 7.95 7.52
온전한 면역글로불린 G의 함량 (Intact IgG%) 97.32 97.33 97.33
온전한 중쇄 및 경쇄의 함량 (Intact LC+HC%) 99.9 99.84 99.87
산화율(Met 106) 5.5 5.1 5.5
열가속 1 탁도 0.0087 0.0123 0.0143
주성분 함량(메인 피크%) 99.19 99.13 99.01
고분자량 성분 함량(%) 0.53 0.6 0.53
저분자량 성분 함량(%) 0.28 0.27 0.46
불용성 이물 입자수 (10㎛≤, <100㎛) 1799 890 1161
(25㎛≤, <100㎛) 139 53 82
점도(cP) 6.72 7.92 7.47
온전한 면역글로불린 G의 함량 (Intact IgG%) 97.15 97.56 97.5
온전한 중쇄 및 경쇄의 함량 (Intact LC+HC%) 99.9 99.92 99.93
산화율(Met 106) 4.7 4.6 5.1
열가속 2 탁도 0.0056 0.0074 0.0071
주성분 함량(메인 피크%) 98.31 98.17 98.34
고분자량 성분 함량(%) 1.26 1.41 1.24
저분자량 성분 함량(%) 0.43 0.42 0.43
불용성 이물 입자수 (10㎛≤, <100㎛) 1599 1256 670
(25㎛≤, <100㎛) 166 48 7
점도(cP) 6.46 7.32 7.09
온전한 면역글로불린 G의 함량 (Intact IgG%) 95.18 95.27 95.19
온전한 중쇄 및 경쇄의 함량 (Intact LC+HC%) 99.52 99.49 99.48
산화율(Met 106) 5.8 7.1 5.8
초기 및 장기 조건에서, 실시예 14 내지 16 모두 탁도 0.03 이하, 주성분 함량 98% 이상, 고분자량 성분 함량 1.5% 이하, 저분자량 성분 함량 1% 이하이며 실험 결과는 도7 내지 9에 나타내었다. 그리고 MFI로 측정한 불용성 이물 입자(10㎛≤, <100㎛)의 개수가 1000개 이하, 불용성 이물 입자(25㎛≤, <100㎛)의 개수가 150개 이하, 점도 1 cP 내지 11 cP, 온전한 면역글로불린 G의 함량 96% 이상, 온전한 중쇄 및 경쇄의 함량 99% 이상, 산화율 6% 이하로서, 약학적으로 허용 가능한 안정한 실시예임을 알 수 있었다. 열가속 1 및 2 조건에서, 실시예 14 내지 16 모두 탁도 0.06 이하, 주성분 함량 97% 이상, 고분자량 성분 함량 2% 이하, 저분자량 성분 함량 1.5% 이하이며 실험 결과는 실험 결과는 도7 내지 9에 나타내었다. 그리고 MFI로 측정한 불용성 이물 입자(10㎛≤, <100㎛)의 개수가 2000개 이하, 불용성 이물 입자(25㎛≤, <100㎛)의 개수가 200개 이하, 점도 1 cP 내지 15 cP로서, 온전한 면역글로불린 G의 함량 93% 이상, 온전한 중쇄 및 경쇄의 함량 98% 이상, 산화율 10% 이하로서, 약학적으로 허용 가능한 안정한 실시예임을 알 수 있었다. 따라서 타우린, 트레오닌, 트레오닌 및 메티오닌의 혼합물을 안정화제로 첨가하고, 히스티딘을 완충제로 첨가한 실시예는 약학적으로 허용 가능한 안정한 제제임을 알 수 있었다.
실험예 4-2. 안정화제 농도 비교
실험예 1에 따라 제조된 실시예 17 내지 22를 초기 조건, 열가속 1 조건, 및 열가속 2 조건에서 안정성을 측정하여, 그 결과를 하기 표 5, 도 10 내지 12에 나타내었다. 초기 조건은 5±3℃ 온도에서 0일 동안 보관된 시료, 열가속 1 조건은 40±2℃ 온도 및 75±5% 상대습도에서 3주 동안 보관된 시료, 열가속 2 조건은 40±2℃ 온도 및 75±5% 상대습도에서 6주 동안 보관된 시료로 실험하였다.
평가 실시예 및 결과 실시예 17 실시예 18 실시예 19 실시예 20 실시예 21 실시예 22
트레오닌(mM) 140 180 160 160 110 189
메티오닌(mM) 60 60 40 80 110 31
항체 (mg/ml) 180 180 180 180 180 180
폴리소르베이트 80 (%(w/v)) 0.02 0.02 0.02 0.02 0.02 0.02
히스티딘 (mM) 10 10 10 10 10 10
초기 탁도 0.0074 0.0099 0.006 0.0056 0.0065 0.0034
주성분 함량(메인 피크%) 98.85 98.85 98.84 98.85 99.25 99.11
고분자량 성분 함량(%) 1.08 1.08 1.09 1.06 0.63 0.77
저분자량 성분 함량(%) 0.08 0.08 0.08 0.08 0.12 0.12
불용성 이물 입자수 (10㎛≤, <100㎛) 66 142 156 138 155 245
(25㎛≤, <100㎛) 25 26 43 21 22 0
온전한 면역글로불린 G의 함량 (Intact IgG%) 99.72 99.74 99.74 99.74 99.81 99.79
전하 변형체(메인 피크%) 66.34 66.7 66.48 66.31 66.57 65.94
열가속 1 탁도 0.0046 0.0052 0.0043 0.011 0.0117 0.0092
주성분 함량(메인 피크%) 98.19 98.21 98.14 98.2 98.17 98.11
고분자량 성분 함량(%) 1.43 1.41 1.47 1.41 1.45 1.52
저분자량 성분 함량(%) 0.38 0.38 0.4 0.39 0.38 0.37
불용성 이물 입자수 (10㎛≤, <100㎛) 85 87 210 270 211 176
(25㎛≤, <100㎛) 18 23 41 52 41 15
온전한 면역글로불린 G의 함량 (Intact IgG%) 95.83 95.76 95.77 95.43 96.36 96.63
전하 변형체(메인 피크%) 54.5 54.39 54.75 54.33 56.73 56.32
열가속 2 탁도 0.0136 0.011 0.0066 0.0076 0.0143 0.0256
온전한 주성분 함량(메인 피크%) 98.25 98.3 98.25 98.27 98.3 98.27
고분자량 성분 함량(%) 0.99 0.96 1 0.97 0.97 1.01
저분자량 성분 함량(%) 0.76 0.74 0.75 0.76 0.73 0.72
불용성 이물 입자수 (10㎛≤, <100㎛) 136 473 108 79 208 118
(25㎛≤, <100㎛) 11 70 21 16 10 12
온전한 면역글로불린 G의 함량 (Intact IgG%) 96.5 96.63 96.52 96.57 97.18 97.06
IL-6R 결합 친화도(%) 93 91 96 98 97 102
전하 변형체(메인 피크%) 47.78 47.82 47.48 47.54 49.22 49.25
초기 조건에서, 실시예 17 내지 22 모두 탁도 0.03 이하, 주성분 함량 98% 이상, 고분자량 성분 함량 1.5% 이하, 저분자량 성분 함량 1% 이하, MFI로 측정한 불용성 이물 입자(10㎛≤, <100㎛)의 개수가 1000개 이하, 불용성 이물 입자(25㎛≤, <100㎛)의 개수가 150개 이하, 온전한 면역글로불린 G의 함량 96% 이상, 전하 변형체(메인 피크%) 60% 내지 70%로서, 약학적으로 허용 가능한 안정한 실시예임을 알 수 있었다.열가속 1 및 2 조건에서, 실시예 17 내지 22 모두 탁도 0.06 이하, 주성분 함량 97% 이상, 고분자량 성분 함량 2% 이하, 저분자량 성분 함량 1.5%이하, MFI로 측정한 불용성 이물 입자(10㎛≤, <100㎛)의 개수가 2000개 이하, 불용성 이물 입자(25㎛≤, <100㎛)의 개수가 200개 이하, 온전한 면역글로불린 G의 함량 93% 이상, IL-6R 결합 친화도가 80% 내지 120%, 전하 변형체(메인 피크%) 40% 내지 60%로서, 약학적으로 허용 가능한 안정한 실시예임을 알 수 있었다.따라서 트레오닌 및 메티오닌의 혼합물을 안정화제로 첨가하고, 히스티딘을 완충제로 첨가한 실시예는 약학적으로 허용 가능한 안정한 제제임을 알 수 있었다.
실험예 4-3. 완충제 농도 비교
실험예 1에 따라 제조된 실시예 23 내지 27를 초기 조건, 열가속 1 조건, 및 열가속 2 조건에서 안정성을 측정하여, 그 결과를 하기 표 6, 도 13 내지 15에 나타내었다. 초기 조건은 5±3℃온도에서 0일 동안 보관된 시료, 열가속 1 조건은 40±2℃온도 및 75±5% 상대습도에서 3주 동안 보관된 시료, 열가속 2 조건은 40±2℃온도 및 75±5% 상대습도에서 6주 동안 보관된 시료로 실험하였다.
평가 실시예 및 결과 실시예 23 실시예 24 실시예 25 실시예 26 실시예 27
히스티딘 완충제 (mM) 25 15 10 5 1
항체 (mg/ml) 180 180 180 180 180
폴리소르베이트 80 (%(w/v)) 0.02 0.02 0.02 0.02 0.02
트레오닌 (mM) 160 160 160 160 160
메티오닌 (mM) 60 60 60 60 60
초기 탁도 0.0055 0.0054 0.0067 0.0051 0.0086
주성분 함량(메인 피크%) 99.2 98.86 99.23 98.84 99.16
고분자량 성분 함량(%) 0.69 1.06 0.64 1.07 0.69
저분자량 성분 함량(%) 0.11 0.08 0.13 0.09 0.14
불용성 이물 입자수 (10㎛≤, <100㎛) 103 130 225 64 69
(25㎛≤, <100㎛) 30 30 42 12 25
온전한 면역글로불린 G의 함량 (Intact IgG%) 99.8 99.73 99.8 99.74 99.83
전하 변형체(메인 피크%) 66.2 65.92 66 66.03 68.5
열가속 1 탁도 0.0055 0.0058 0.0038 0.0035 0.0294
주성분 함량(메인 피크%) 98.27 98.23 98.08 98.15 98.31
고분자량 성분 함량(%) 1.36 1.38 1.51 1.46 1.3
저분자량 성분 함량(%) 0.37 0.39 0.42 0.39 0.39
불용성 이물 입자수 (10㎛≤, <100㎛) 64 251 156 159 179
(25㎛≤, <100㎛) 5 31 23 34 37
온전한 면역글로불린 G의 함량 (Intact IgG%) 96.56 95.52 96.81 95.5 94.81
전하 변형체(메인 피크%) 55.87 54.29 54.4 54.7 58.67
열가속 2 탁도 0.0326 0.0032 0.0289 0.0022 0.0457
주성분 함량(메인 피크%) 98.43 98.01 98.4 98.2 98.4
고분자량 성분 함량(%) 0.83 1.25 0.88 1.04 0.83
저분자량 성분 함량(%) 0.74 0.73 0.72 0.75 0.77
불용성 이물 입자수 (10㎛≤, <100㎛) 356 92 213 536 316
(25㎛≤, <100㎛) 46 46 17 77 52
온전한 면역글로불린 G의 함량 (Intact IgG%) 97.41 97.45 97.44 96.41 97.09
IL-6R 결합 친화도 99 101 96 100 99
전하 변형체(메인 피크%) 49.34 48.23 47.15 48.23 51.21
초기 조건에서, 실시예 23 내지 27 모두 탁도 0.03 이하, 주성분 함량 98% 이상, 고분자량 성분 함량 1.5% 이하, 저분자량 성분 함량 1% 이하, MFI로 측정한 불용성 이물 입자(10㎛≤, <100㎛)의 개수가 1000개 이하, 불용성 이물 입자(25㎛≤, <100㎛)의 개수가 150개 이하, 온전한 면역글로불린 G의 함량 96% 이상, 전하 변형체(메인 피크%) 60% 내지 70%로서, 약학적으로 허용 가능한 안정한 실시예임을 알 수 있었다.열가속 1 및 2 조건에서, 실시예 23 내지 27 모두 탁도 0.06 이하, 주성분 함량 97% 이상, 고분자량 성분 함량 2% 이하, 저분자량 성분 함량 1.5% 이하, MFI로 측정한 불용성 이물 입자(10㎛≤, <100㎛)의 개수가 2000개 이하, 불용성 이물 입자(25㎛≤, <100㎛)의 개수가 200개 이하, 온전한 면역글로불린 G의 함량 93% 이상, IL-6R 결합 친화도가 80% 내지 120%, 전하 변형체(메인 피크%) 40% 내지 60%로서, 약학적으로 허용 가능한 안정한 실시예임을 알 수 있었다.실험예 4-4. 항체 농도 비교
실험예 1에 따라 제조된 실시예 25, 28 내지 30을 초기 조건, 열가속 1 조건, 및 열가속 2 조건에서 안정성을 측정하여, 그 결과를 하기 표 7, 도 16 내지 18 에 나타내었다. 초기 조건은 5±3℃온도에서 0일 동안 보관된 시료, 열가속 1 조건은 40±2℃온도 및 75±5% 상대습도에서 3주 동안 보관된 시료, 열가속 2 조건은 40±2℃온도 및 75±5% 상대습도에서 6주 동안 보관된 시료로 실험하였다.
평가 실시예 및 결과 실시예 25 실시예 28 실시예 29 실시예 30
항체(mg/ml) 180 100 160 200
폴리소르베이트 80 (%(w/v)) 0.02 0.02 0.02 0.02
트레오닌 (mM) 160 160 160 160
메티오닌 (mM) 60 60 60 60
히스티딘 (mM) 10 10 10 10
초기 탁도 0.0067 0.0056 0.005 0.0082
주성분 함량(메인 피크%) 99.23 99.19 98.88 98.83
고분자량 성분 함량(%) 0.64 0.69 1.04 1.08
저분자량 성분 함량(%) 0.13 0.12 0.08 0.08
불용성 이물 입자수 (10㎛≤, <100㎛) 225 210 158 120
(25㎛≤, <100㎛) 42 41 52 12
온전한 면역글로불린 G의 함량 (Intact IgG%) 99.8 99.75 99.7 99.74
전하 변형체(메인 피크%) 66 66.24 66.22 66.17
열가속 1 탁도 0.0038 0.008 0.0036 0.0056
주성분 함량(메인 피크%) 98.08 98.53 98.28 98.1
고분자량 성분 함량(%) 1.51 1.1 1.33 1.5
저분자량 성분 함량(%) 0.42 0.37 0.39 0.4
불용성 이물 입자수 (10㎛≤, <100㎛) 156 143 126 128
(25㎛≤, <100㎛) 23 14 54 29
온전한 면역글로불린 G의 함량 (Intact IgG%) 96.81 96.59 95.91 95.78
전하 변형체(메인 피크%) 54.4 55.69 54.47 54.2
열가속 2 탁도 0.0289 0.0081 0.0056 0.0035
주성분 함량(메인 피크%) 98.4 98.56 98.34 98.33
고분자량 성분 함량(%) 0.88 0.68 0.93 0.96
저분자량 성분 함량(%) 0.72 0.76 0.73 0.71
불용성 이물 입자수 (10㎛≤, <100㎛) 213 681 508 635
(25㎛≤, <100㎛) 17 89 69 34
온전한 면역글로불린 G의 함량 (Intact IgG%) 97.44 96.81 96.54 96.44
IL-6R 결합 친화도(%) 96 83 101 96
전하 변형체(메인 피크%) 47.15 47.5 47.77 47.68
초기 조건에서, 실시예 25, 28 내지 30 모두 탁도 0.03 이하, 주성분 함량 98% 이상, 고분자량 성분 함량 1.5% 이하, 저분자량 성분 함량 1% 이하, MFI로 측정한 불용성 이물 입자(10㎛≤, <100㎛)의 개수가 1000개 이하, 불용성 이물 입자(25㎛≤, <100㎛)의 개수가 150개 이하, 온전한 면역글로불린 G의 함량 96% 이상, 전하 변형체(메인 피크%) 60% 내지 70%로서, 약학적으로 허용 가능한 안정한 실시예임을 알 수 있었다.열가속 1 및 2 조건에서, 실시예 25, 28 내지 30 모두 탁도 0.06 이하, 주성분 함량 97% 이상, 고분자량 성분 함량 2% 이하, 저분자량 성분 함량 1.5% 이하, MFI로 측정한 불용성 이물 입자(10㎛≤, <100㎛)의 개수가 2000개 이하, 불용성 이물 입자(25㎛≤, <100㎛)의 개수가 200개 이하, 온전한 면역글로불린 G의 함량 93% 이상, IL-6R 결합 친화도가 80% 내지 120%, 전하 변형체(메인 피크%) 40% 내지 60%로서, 약학적으로 허용 가능한 안정한 실시예임을 알 수 있었다.실험예 4-5. pH 비교
실험예 1에 따라 제조된 실시예 31, 32 및 비교예 1을 초기 조건, 열가속 1 조건, 및 열가속 2 조건에서 안정성을 측정하여, 그 결과를 하기 표 8 및 도 19에 나타내었다. 초기 조건은 5±3℃온도에서 0일 동안 보관된 시료, 열가속 1 조건은 40±2℃온도 및 75±5% 상대습도에서 3주 동안 보관된 시료, 열가속 2 조건은 40±2℃온도 및 75±5% 상대습도에서 6주 동안 보관된 시료로 실험하였다.
평가 실시예 및 결과 실시예 31 실시예 32 비교예 1
pH 5.7 6.3 7
항체 (mg/ml) 180 180 180
폴리소르베이트 80 (%(w/v)) 0.02 0.02 0.02
트레오닌 (mM) 160 160 160
메티오닌 (mM) 60 60 60
히스티딘 (mM) 10 10 10
초기 탁도 0.005 0.0033 0.005
주성분 함량(메인 피크%) 98.89 98.81 99.17
고분자량 성분 함량(%) 1.03 1.12 0.69
저분자량 성분 함량(%) 0.08 0.08 0.13
불용성 이물 입자수 (10㎛≤, <100㎛) 67 446 94
(25㎛≤, <100㎛) 10 101 4
온전한 면역글로불린 G의 함량 (Intact IgG%) 99.73 99.72 99.83
전하 변형체(메인 피크%) 66.26 65.9 68.09
열가속 1 탁도 0.0033 0.004 0.0064
주성분 함량(메인 피크%) 98.24 98.13 97.81
고분자량 성분 함량(%) 1.34 1.5 1.66
저분자량 성분 함량(%) 0.42 0.38 0.53
불용성 이물 입자수 (10㎛≤, <100㎛) 120 203 179
(25㎛≤, <100㎛) 21 43 28
온전한 면역글로불린 G의 함량 (Intact IgG%) 95.67 95.64 95.14
전하 변형체(메인 피크%) 53.19 54.62 47.1
열가속 2 탁도 0.0043 0.0077 0.0118
주성분 함량(메인 피크%) 98.3 98.19 97.53
고분자량 성분 함량(%) 0.89 1.07 1.39
저분자량 성분 함량(%) 0.81 0.74 1.07
불용성 이물 입자수 (10㎛≤, <100㎛) 321 146 108
(25㎛≤, <100㎛) 52 25 19
온전한 면역글로불린 G의 함량 (Intact IgG%) 96.33 96.44 95.19
IL-6R 결합 친화도(%) 103 99 82
전하 변형체(메인 피크%) 47.69 46.06 34.89
초기 조건에서, 실시예 31 및 32은 모두 탁도 0.03 이하, 주성분 함량 98% 이상, 고분자량 성분 함량 1.5% 이하, 저분자량 성분 함량 1% 이하, MFI로 측정한 불용성 이물 입자(10㎛≤, <100㎛)의 개수가 1000개 이하, 불용성 이물 입자(25㎛≤, <100㎛)의 개수가 150개 이하, 온전한 면역글로불린 G의 함량 96% 이상, 전하 변형체(메인 피크%) 60% 내지 70%로서, 약학적으로 허용 가능한 안정한 실시예임을 알 수 있었다.열가속 1 및 2 조건에서, 실시예 31 및 32은 탁도 0.06 이하, 주성분 함량 97% 이상, 고분자량 성분 함량 2% 이하, 저분자량 성분 함량 1.5% 이하, MFI로 측정한 불용성 이물 입자(10㎛≤, <100㎛)의 개수가 2000개 이하, 불용성 이물 입자(25㎛≤, <100㎛)의 개수가 200개 이하, 온전한 면역글로불린 G의 함량 93% 이상, IL-6R 결합 친화도가 80% 내지 120%, 전하 변형체(메인 피크%) 40% 내지 60%로서, 약학적으로 허용 가능한 안정한 실시예임을 알 수 있었다.그러나 비교예 1은 열가속 2 조건에서 전하 변형체(메인 피크%)가 40% 미만임을 확인할 수 있었고, 이를 통해 pH 7 이상인 실시예의 안정성이 떨어진다는 것을 알 수 있었다.
실험예 4-6. 계면활성제 비교
실험예 1에 따라 제조된 실시예 33 내지 35 및 비교예 2를 초기 조건, 열가속 1 조건, 및 열가속 2 조건에서 안정성을 측정하여, 그 결과를 하기 표 9, 도 20 및 21에 나타내었다. 초기 조건은 5±3℃ 온도에서 0일 동안 보관된 시료, 열가속 1 조건은 40±2℃ 온도 및 75±5% 상대습도에서 3주 동안 보관된 시료, 열가속 2 조건은 40±2℃ 온도 및 75±5% 상대습도에서 6주 동안 보관된 시료로 실험하였다.
평가 제형 및 결과 실시예 33 실시예 34 실시예 35 비교예 2
계면활성제 폴리소르베이트 80 0.01 %(w/v) 폴리소르베이트 80 0.05 %(w/v) 폴록사머 188 0.02%(w/v) 폴리소르베이트 80 0.00 %(w/v)
항체 (mg/ml) 180 180 180 180
트레오닌 (mM) 160 160 160 160
메티오닌 (mM) 60 60 60 60
히스티딘 (mM) 10 10 10 10
초기 탁도 0.0153 0.0093 0.0073 0.0048
주성분 함량(메인 피크%) 98.86 98.84 99.1 99.16
고분자량 성분 함량(%) 1.07 1.07 0.78 0.73
저분자량 성분 함량(%) 0.06 0.08 0.12 0.12
불용성 이물 입자수 (10㎛≤, <100㎛) 123 58 805 110
(25㎛≤, <100㎛) 65 10 100 18
온전한 면역글로불린 G의 함량 (Intact IgG%) 99.76 99.78 99.81 99.83
전하 변형체(메인 피크%) 66.18 66.15 65.72 68.84
열가속 1 탁도 0.0023 0.0055 0.0029 0.0038
주성분 함량(메인 피크%) 98.18 98.15 98.2 98.36
고분자량 성분 함량(%) 1.44 1.45 1.44 1.27
저분자량 성분 함량(%) 0.38 0.39 0.36 0.37
불용성 이물 입자수 (10㎛≤, <100㎛) 650 593 64 124
(25㎛≤, <100㎛) 77 26 23 46
온전한 면역글로불린 G의 함량 (Intact IgG%) 96 95.98 96.62 95.05
전하 변형체(메인 피크%) 54.56 54.4 55.68 58.24
열가속 2 탁도 0.005 0.0031 0.0072 0.0098
주성분 함량(메인 피크%) 98.3 98.27 98.32 98.48
고분자량 성분 함량(%) 0.98 0.99 0.94 0.82
저분자량 성분 함량(%) 0.73 0.74 0.74 0.7
불용성 이물 입자수 (10㎛≤, <100㎛) 861 657 61 434
(25㎛≤, <100㎛) 129 102 15 121
온전한 면역글로불린 G의 함량 (Intact IgG%) 96.52 96.66 96.74 96.88
IL-6R 결합 친화도(%) 99 92 94 79
전하 변형체(메인 피크%) 47.08 47.53 48.07 50.68
초기 조건에서, 실시예 33 내지 35은 모두 탁도 0.03 이하, 주성분 함량 98% 이상, 고분자량 성분 함량 1.5% 이하, 저분자량 성분 함량 1% 이하, MFI로 측정한 불용성 이물 입자(10㎛≤, <100㎛)의 개수가 1000개 이하, 불용성 이물 입자(25㎛≤, <100㎛)의 개수가 150개 이하, 온전한 면역글로불린 G의 함량 96% 이상, 전하 변형체(메인 피크%) 60% 내지 70%이므로 약제학적으로 허용 가능한 안정한 실시예임을 알 수 있었다.열가속 1 및 2 조건에서, 실시예 33 내지 35는 탁도 0.06 이하, 주성분 함량 97% 이상, 고분자량 성분 함량 2% 이하, 저분자량 성분 함량 1.5% 이하, MFI로 측정한 불용성 이물 입자(10㎛≤, <100㎛)의 개수가 2000개 이하, 불용성 이물 입자(25㎛≤, <100㎛)의 개수가 200개 이하, 온전한 면역글로불린 G의 함량 93% 이상, IL-6R 결합 친화도가 80% 내지 120%, 전하 변형체(메인 피크%) 40% 내지 60%이므로, 약제학적으로 허용 가능한 안정한 실시예임을 알 수 있었다. 반면, 비교예 2는 열가속 2 조건에서 IL-6R 결합 친화도가 80% 미만이었다. 이를 통해 계면활성제가 불포함된 실시예의 안정성이 떨어진다는 것을 알 수 있었다.

Claims (30)

  1. (A) 인터루킨-6 수용체(Interleukin-6 receptor)에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편;
    (B) 계면활성제;
    (C) i) 아미노산 또는 아미노산 유도체, ii) 당 또는 당알코올 또는 이들의 혼합물인 안정화제; 및
    (D) 완충제를 포함하고,
    상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호: 1의 아미노산 서열을 포함하는 CDR1 도메인, 서열번호: 2의 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 도메인, 및 서열번호: 3의 아미노산 서열을 포함하는 CDR3 도메인을 포함하는 경쇄 가변영역; 및 서열번호: 4의 아미노산 서열을 포함하는 CDR1 도메인, 서열번호: 5의 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 도메인, 및 서열번호: 6의 아미노산 서열을 포함하는 CDR3 도메인을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함하는, 안정한 약제학적 제제.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호: 7의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변영역; 및 서열번호: 8의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함하는, 안정한 약제학적 제제.
  3. 제1항에 있어서,
    상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 및 서열번호: 10의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는, 안정한 약제학적 제제.
  4. 제1항에 있어서,
    상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 토실리주맙(Tocilizumab)인, 안정한 약제학적 제제.
  5. 제1항에 있어서,
    상기 약제학적 제제는 액상인, 안정한 약제학적 제제.
  6. 제1항에 있어서,
    상기 약제학적 제제는 인터루킨-6 수용체(Interleukin-6 receptor) 관련 질병의 치료 효과를 나타내는, 안정한 약제학적 제제.
  7. 제6항에 있어서,
    상기 인터루킨-6 수용체(Interleukin-6 receptor) 관련 질병은 류마티스 관절염, 성인 스틸병, 전신형 소아 특발성 관절염, 다관절형 소아 특발성 관절염, 캐슬만병, 거대세포 동맥염, 타까야수 동맥염, 전신 경화증, 전신 경화증 관련 간질성 폐질환, 사이토카인 방출 증후군, 손 골관절염, 류마티스성 다발근통, 항중성구 세포질 항체 관련 혈관염, 재발성 다발 연골염, 제2형 당뇨병, 강직성 척추염, 축성 척추관절염, 건선, 건선성 관절염, 염증성 장 질환, 크론병, 궤양성 대장염, 갑상선 관련 눈병, 류마티스 관절염 관련 심혈관 질환, 급성이식편대숙주병, 비ST분절 상승형 심근경색, 전신 홍반성 루푸스, 정신분열증, 포도막염, 난소암, 시신경 척수염, 사구체신염, 만성사구체신염, 결장 직장암, 폐렴 및 폐암으로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상인, 안정한 약제학적 제제.
  8. 제1항에 있어서,
    상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 농도는 1 내지 300 mg/ml인, 안정한 약제학적 제제.
  9. 제1항에 있어서,
    상기 계면활성제는 폴리소르베이트, 폴록사머 또는 이들의 혼합물인, 안정한 약제학적 제제.
  10. 제9항에 있어서,
    상기 계면활성제는 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 40, 폴리소르베이트 60, 폴리소르베이트 80 또는 이들의 혼합물인, 안정한 약제학적 제제.
  11. 제10항에 있어서,
    상기 계면활성제는 폴리소르베이트 80인, 안정한 약제학적 제제.
  12. 제1항에 있어서,
    상기 계면활성제의 농도는 0.001 내지 1%(w/v)인, 안정한 약제학적 제제.
  13. 제1항에 있어서,
    상기 i) 아미노산 또는 아미노산 유도체는 트레오닌, 메티오닌, 아르기닌, 프롤린, 류신, 글리신, 및 타우린으로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상인, 안정한 약제학적 제제.
  14. 제1항에 있어서,
    상기 ii) 당 또는 당알코올은 수크로스, 트레할로스, 및 소르비톨로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상인, 안정한 약제학적 제제.
  15. 제1항에 있어서,
    상기 i) 아미노산 또는 아미노산 유도체의 농도는 10 내지 500 mM인, 안정한 약제학적 제제.
  16. 제1항에 있어서,
    상기 ii) 당 또는 당알코올의 농도는 0.1 내지 30%(w/v)인, 안정한 약제학적 제제.
  17. 제1항에 있어서,
    상기 안정화제는 트레오닌 및 메티오닌의 혼합물인, 안정한 약제학적 제제.
  18. 제17항에 있어서,
    상기 트레오닌 및 메티오닌의 혼합물의 농도 비율은 1:1 내지 10:1인, 안정한 약제학적 제제.
  19. 제17항에 있어서,
    상기 트레오닌의 농도는 5 내지 300 mM이며,
    상기 메티오닌의 농도는 5 내지 200 mM인, 안정한 약제학적 제제.
  20. 제1항에 있어서,
    상기 완충제는 히스티딘 또는 이의 염, 아세트산 또는 이의 염, 인산 또는 이의 염, 시트르산 또는 이의 염, 숙신산 또는 이의 염 또는 이들의 혼합물인, 안정한 약제학적 제제.
  21. 제1항에 있어서,
    상기 완충제의 함량은 0.1 내지 50 mM인, 안정한 약제학적 제제.
  22. 제1항에 있어서,
    상기 약제학적 제제의 pH가 5 이상 내지 7 미만인, 안정한 약제학적 제제.
  23. (A) 서열번호: 1의 아미노산 서열을 포함하는 CDR1 도메인, 서열번호: 2의 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 도메인, 및 서열번호: 3의 아미노산 서열을 포함하는 CDR3 도메인을 포함하는 경쇄 가변영역; 및 서열번호: 4의 아미노산 서열을 포함하는 CDR1 도메인, 서열번호: 5의 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 도메인, 및 서열번호: 6의 아미노산 서열을 포함하는 CDR3 도메인을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편 1 내지 300 mg/ml;
    (B) 계면활성제 0.001 내지 1 %(w/v);
    (C) 안정화제로 아미노산 또는 아미노산 유도체 10 내지 500 mM; 및
    (D) 완충제 0.1 내지 50 mM
    을 포함하는, 안정한 약제학적 제제.
  24. (A) 서열번호: 1의 아미노산 서열을 포함하는 CDR1 도메인, 서열번호: 2의 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 도메인, 및 서열번호: 3의 아미노산 서열을 포함하는 CDR3 도메인을 포함하는 경쇄 가변영역; 및 서열번호: 4의 아미노산 서열을 포함하는 CDR1 도메인, 서열번호: 5의 아미노산 서열을 포함하는 CDR2 도메인, 및 서열번호: 6의 아미노산 서열을 포함하는 CDR3 도메인을 포함하는 중쇄 가변영역을 포함하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편 1 내지 300 mg/ml;
    (B) 계면활성제 0.001 내지 1 %(w/v);
    (C) 안정화제로 당 또는 당알코올 0.1 내지 30%(w/v); 및
    (D) 완충제 0.1 내지 50 mM
    을 포함하는, 안정한 약제학적 제제.
  25. 제1항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 약제학적 제제는 정맥 투여 또는 피하 투여용인, 안정한 약제학적 제제.
  26. 제25항에 있어서,
    상기 피하 투여용 제제에 희석(Dilution) 단계를 거쳐 정맥 투여용 제제로 사용함을 특징으로 하는, 안정한 약제학적 제제.
  27. 제1항 내지 제26항 중 어느 한 항에 기재된 안정한 약제학적 제제가 충진된 바이알(Vial).
  28. 제1항 내지 제26항 중 어느 한 항에 기재된 안정한 약제학적 제제가 충진된 카트리지(Cartridge).
  29. 제1항 내지 제26항 중 어느 한 항에 기재된 안정한 약제학적 제제가 충진된 프리-필드 시린지(Pre-filled syringe).
  30. 제1항 내지 제26항 중 어느 한 항에 기재된 프리-필드 시린지(pre-filled syringe)가 그 내부에 포함된 자동 주사기(Auto-injector).
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