WO2023020605A1 - 喜树碱衍生物、其药物组合物及其应用 - Google Patents

喜树碱衍生物、其药物组合物及其应用 Download PDF

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WO2023020605A1
WO2023020605A1 PCT/CN2022/113499 CN2022113499W WO2023020605A1 WO 2023020605 A1 WO2023020605 A1 WO 2023020605A1 CN 2022113499 W CN2022113499 W CN 2022113499W WO 2023020605 A1 WO2023020605 A1 WO 2023020605A1
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atoms
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唐锋
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刘力锋
赵春艳
唐任宏
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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D491/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00
    • C07D491/22—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00 in which the condensed system contains four or more hetero rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
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    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/47—Quinolines; Isoquinolines
    • A61K31/4738—Quinolines; Isoquinolines ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A61K31/4745—Quinolines; Isoquinolines ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems condensed with ring systems having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. phenantrolines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents

Definitions

  • the disclosure relates to a new camptothecin compound, or its stereoisomer or pharmaceutically acceptable salt, a pharmaceutical composition containing them and its use as an antitumor drug.
  • Camptothecin is a quinoline alkaloid extracted from Camptotheca acuminata. Due to its significant cytotoxic activity, it is often used in research related to cancer therapy. Subsequent studies on related mechanisms have shown that camptothecin has the activity of inhibiting topoisomerase I, and it can combine with the complex of topoisomerase I and DNA to form a stable ternary complex, thus hindering the topoisomerase I-mediated The induced DNA breaks, thereby blocking the processes of DNA replication, transcription and repair, and finally leading to cell cycle arrest and cell apoptosis.
  • camptothecin has problems such as low solubility, poor chemical stability, and obvious toxic and side effects, which ultimately hinder its clinical application.
  • camptothecin derivatives such as topotecan and irinotecan obtained by transforming camptothecin were successfully used to treat malignant tumors such as ovarian cancer, lung cancer and colorectal cancer.
  • these clinical drugs still have the problems of low solubility and poor chemical stability leading to low oral bioavailability, as well as severe clinical adverse reactions such as vomiting and bone marrow suppression. Therefore, improving the physical and chemical properties, activity and safety of camptothecin drugs is still an urgent problem to be solved.
  • R 1 is selected from halogen, CN, C 1 -C 6 alkyl, C 3 -C 6 cycloalkyl or C 2 -C 6 alkynyl, said C 1 -C 6 alkyl, C 3 -C 6 cycloalkane or C 2 -C 6 alkynyl is optionally substituted by R a1 ;
  • X 1 is selected from CR 2 or N;
  • R 2 is selected from H, halogen, CN, or R 1 , R 2 and the atoms they are connected together form a 5-6 membered heterocyclic group, and the 5-6 membered heterocyclic group is optionally substituted by R a2 ;
  • R 5 is selected from H, halogen, CN, NH 2 or NO 2 , or R 1 , R 5 and the atoms they connect together form a 5-6 membered heterocyclic group, a 5-6 membered heteroaryl group or a C 5 -C 7 Cycloalkenyl, the 5-6 membered heterocyclic group, 5-6 membered heteroaryl or C 5 -C 7 cycloalkenyl is optionally substituted by R a5 ;
  • R 3 is selected from H
  • X is selected from NH 2 or OH
  • R 6 is selected from H or C 1 -C 3 alkyl
  • R 7 is selected from H, C 1 -C 3 alkyl or C 3 -C 6 cycloalkyl, or R 6 , R 7 and the C atom to which it is connected together form a C 3 -C 6 cycloalkyl group, and the C 3 -C 6 cycloalkyl group is optionally substituted by R a3 ;
  • n is selected from 1, 2, 3 or 4;
  • R 4 is selected from H, or R 4 and R 7 together form a 5-6 membered heterocyclic group with the atoms they are connected to, and the 5-6 membered heterocyclic group is optionally substituted by R a4 ;
  • R 1 when R 1 is selected from methyl, R 2 is selected from F, R 3 is selected from Wherein R 6 is selected from H or C 1 -C 3 alkyl, R 7 is selected from H, C 1 -C 3 alkyl or C 3 -C 6 cycloalkyl, n is selected from 1, 2, 3 or 4; ii ) when X is selected from NH , R is not selected from H; and iii) the compound shown in formula (I) does not include the following compounds:
  • the compound represented by the aforementioned formula (I), or its stereoisomer or pharmaceutically acceptable salt wherein, R 1 is selected from halogen, CN, C 1 -C 6 alkyl, C 3 - C 6 cycloalkyl or C 2 -C 6 alkynyl, said C 1 -C 6 alkyl, C 3 -C 6 cycloalkyl or C 2 -C 6 alkynyl is optionally substituted by R a1 ;
  • X 1 is selected from CR 2 or N;
  • R 2 is selected from H, halogen, CN, or R 1 , R 2 and the atoms they are connected together form a 5-6 membered heterocyclic group, and the 5-6 membered heterocyclic group is optionally substituted by R a2 ;
  • R 5 is selected from H, halogen, CN or NO 2 , or R 1 and R 5 together form a 5-6 membered heteroaryl group or a C 5 -C 7 cycloalkenyl group with the atoms they are connected to, and the 5-6 membered heteroaryl group Aryl or C 5 -C 7 cycloalkenyl is optionally substituted by R a5 ;
  • R 3 is selected from H
  • R 6 is selected from H or C 1 -C 3 alkyl
  • R 7 is selected from H, C 1 -C 3 alkyl or C 3 -C 6 cycloalkyl, or R 6 and R 7 are jointly formed by the C atom to which they are connected C 3 -C 6 cycloalkyl, the C 3 -C 6 cycloalkyl is optionally substituted by R a3 ;
  • n is selected from 1, 2, 3 or 4;
  • R 4 is selected from H, or R 4 and R 7 together form a 5-6 membered heterocyclic group with the atoms they are connected to, and the 5-6 membered heterocyclic group is optionally substituted by R a4 ;
  • R 1 when R 1 is selected from methyl, R 2 is selected from F, R 3 is selected from wherein R is selected from H or C 1 -C 3 alkyl, R 7 is selected from H, C 1 -C 3 alkyl or C 3 -C 6 cycloalkyl, n is selected from 1, 2, 3 or 4; and ii)
  • the compound shown in formula (I) does not include the following compounds:
  • R 1 is selected from halogen, CN, C 1 -C 6 alkyl, C 3 -C 6 cycloalkyl or C 2 -C 6 alkynyl, said C 1 -C 6 alkyl, C 3 -C 6 cycloalkane or C 2 -C 6 alkynyl is optionally substituted by R a1 ;
  • X 1 is selected from CR 2 or N;
  • R 2 is selected from H, halogen, CN, or R 1 , R 2 and the atoms they are connected together form a 5-6 membered heterocyclic group, and the 5-6 membered heterocyclic group is optionally substituted by R a2 ;
  • R 5 is selected from H, halogen or CN, or R 1 and R 5 together form a 5-6 membered heteroaryl group with the atoms they are connected to, and the 5-6 membered heteroaryl group is optionally substituted by R a5 ;
  • R 3 is selected from H
  • R 6 is selected from H or C 1 -C 3 alkyl
  • R 7 is selected from H, C 1 -C 3 alkyl or C 3 -C 6 cycloalkyl, or R 6 and R 7 are jointly formed by the C atom to which they are connected C 3 -C 6 cycloalkyl, the C 3 -C 6 cycloalkyl is optionally substituted by R a3 ;
  • n is selected from 1, 2, 3 or 4;
  • R 4 is selected from H, or R 4 and R 7 together form a 5-6 membered heterocyclic group with the atoms they are connected to, and the 5-6 membered heterocyclic group is optionally substituted by R a4 ;
  • R 1 when R 1 is selected from methyl, R 2 is selected from F, R 3 is selected from wherein R is selected from H or C 1 -C 3 alkyl, R 7 is selected from H, C 1 -C 3 alkyl or C 3 -C 6 cycloalkyl, n is selected from 1, 2, 3 or 4; and ii)
  • the compound shown in formula (I) does not include the following compounds:
  • R 1 is selected from halogen, CN, C 1 -C 6 alkyl, C 3 -C 6 cycloalkyl or C 2 -C 6 alkynyl, said C 1 -C 6 alkyl, C 3 -C 6 cycloalkane or C 2 -C 6 alkynyl is optionally substituted by R a1 ;
  • X 1 is selected from CR 2 or N;
  • R 2 is selected from halogen, CN, or R 1 , R 2 and the atoms they are connected together form a 5-6 membered heterocyclic group, and the 5-6 membered heterocyclic group is optionally substituted by R a2 ;
  • R is selected from H, halogen or CN
  • R3 is selected from H or R 6 is selected from H, R 7 is selected from H or C 3 -C 6 cycloalkyl, or R 6 , R 7 and the C atom to which they are connected together form a C 3 -C 6 cycloalkyl, and the C 3 -C 6 Cycloalkyl is optionally substituted by R a3 ;
  • R 4 is selected from H, or R 4 and R 7 together form a 5-6 membered heterocyclic group with the atoms they are connected to, and the 5-6 membered heterocyclic group is optionally substituted by R a4 ;
  • R a2 , R a3 are independently selected from D.
  • R 1 is selected from halogen, C 1 -C 3 alkyl, C 3 -C 6 cycloalkyl, or C 2 -C 3 alkynyl.
  • R is selected from Cl, Br, methyl, cyclopropyl or ethynyl.
  • R is selected from Cl, Br, or methyl.
  • X is selected from N.
  • X 1 is selected from CR 2 .
  • R 2 is selected from H, halogen, CN, or R 1 , R 2 and the atoms they are connected together form a 5-6 membered heterocyclic group, and the 5-6 membered heterocyclic group contains 1 or 2 an oxygen atom as a ring atom, and the 5-6 membered heterocyclic group is optionally substituted by a D atom.
  • R 2 is selected from H, halogen, CN, or R 1 , R 2 and the atoms they are connected together form a 5-6 membered heterocyclic group, and the 5-6 membered heterocyclic group contains 1 or 2 oxygen atoms as ring atoms.
  • R 2 is selected from halogen, CN, or R 1 , R 2 and the atoms they are connected together form a 5-6 membered heterocyclic group, and the 5-6 membered heterocyclic group contains 1 or 2 oxygen atoms as ring atoms.
  • R 2 is selected from H and halogen, or R 1 , R 2 and the atoms they are connected together form a 5-6 membered heterocyclic group, and the 5-6 membered heterocyclic group contains 1 or 2 oxygen atoms as ring atoms.
  • R 2 is selected from H, F or Cl, or R 1 , R 2 and the atoms to which they are attached together form
  • R 2 is selected from H, F or Cl, or R 1 , R 2 and the atoms to which they are attached together form
  • R 2 is selected from F or Cl, or R 1 , R 2 and the atoms they are connected together form
  • R1 is selected from methyl and R2 is selected from F or Cl.
  • R1 is selected from methyl and R2 is selected from Cl.
  • R 1 is selected from Cl, Br, cyclopropyl, or ethynyl
  • R 2 is selected from F.
  • R 5 is selected from H, halogen, NH 2 or NO 2 , or R 1 , R 5 and the atoms they are connected together form a 5-6 membered heteroaryl or C 5 -C 6 cycloalkenyl, The 5-6 membered heteroaryl or C 5 -C 6 cycloalkenyl is optionally substituted by R a5 .
  • R 5 is selected from H, halogen or NO 2 , or R 1 and R 5 together form a 5-6 membered heteroaryl or C 5 -C 6 cycloalkenyl with the atoms they are connected to, and the 5 -6-membered heteroaryl or C 5 -C 6 cycloalkenyl is optionally substituted by R a5 .
  • R 5 is selected from H or halogen, or R 1 , R 5 and the atoms to which they are attached together form a 5-6 membered heteroaryl.
  • R5 is selected from H, halogen, or NO2 .
  • R is selected from H or halogen.
  • R 5 is selected from H, Cl, F, NH 2 or NO 2 , or R 1 , R 5 and the atoms to which they are attached together form
  • R 5 is selected from H, Cl, F or NO 2 , or R 1 , R 5 and the atoms to which they are attached together form
  • R 5 is selected from H or F, or R 1 , R 5 and the atoms to which they are attached together form
  • R5 is selected from H, Cl, F, or NO2 .
  • R is selected from H or F.
  • R is selected from H.
  • R is selected from
  • R is selected from X is selected from NH2 or OH, R6 is selected from H or methyl, R7 is selected from H, methyl, isopropyl or cyclopropyl optionally substituted by D atoms.
  • R is selected from X is selected from NH2 or OH, R6 is selected from H or methyl, R7 is selected from H, methyl, isopropyl or cyclopropyl.
  • R is selected from R6 is selected from H or methyl
  • R7 is selected from H, methyl, cyclopropyl or isopropyl.
  • R is selected from R6 is selected from H or methyl
  • R7 is selected from H, methyl, cyclopropyl or isopropyl.
  • R is selected from R 6 is selected from H, and R 7 is selected from H or cyclopropyl.
  • R is selected from R 6 is selected from H, and R 7 is selected from H or cyclopropyl.
  • R is selected from R 6 , R 7 and their connected C atoms jointly form a C 3 -C 6 cycloalkyl group.
  • R is selected from R 6 , R 7 and the C atom to which they are connected together form a cyclopropyl group.
  • R 1 is selected from methyl
  • X 1 is selected from CF and CCl
  • R 3 is selected from R 6 , R 7 and their connected C atoms jointly form a C 3 -C 6 cycloalkyl group.
  • R 1 is selected from methyl
  • X 1 is selected from CF
  • R 3 is selected from R 6 , R 7 and their connected C atoms jointly form a C 3 -C 6 cycloalkyl group.
  • R 1 is selected from methyl
  • R 2 is selected from F or Cl
  • R 3 is selected from
  • R 1 is selected from methyl
  • R 2 is selected from F
  • R 3 is selected from
  • R4 is selected from H.
  • R 4 , R 7 and the atoms to which they are attached together form a 5-6 membered heterocyclyl.
  • R 4 , R 7 and the atoms to which they are attached together form a 5-membered heterocyclyl.
  • R is selected from H or R4 is selected from H.
  • both R 3 and R 4 are selected from H.
  • R 4 is selected from H
  • R 3 is selected from R 6 is selected from H
  • R 7 is selected from H or cyclopropyl, or R 6 , R 7 and the C atom to which they are connected together form a cyclopropyl.
  • R is selected from R 6 is selected from H, R 4 , R 7 and the atoms they are connected to together form a 5-6 membered heterocyclic group.
  • R is selected from R 6 is selected from H, R 4 , R 7 and the atoms they are connected to together form a 5-membered heterocyclic group.
  • R 1 , R 2 and the atoms to which they are attached together form R 3 is selected from H
  • R 4 is selected from H
  • R 6 is selected from H
  • R 7 is selected from H or a cyclopropyl group optionally substituted by a D atom
  • R 6 , R 7 and the C atom to which they are connected together form a C 3 -C 6 cycloalkyl group .
  • R 1 , R 2 and the atoms to which they are attached together form R3 is selected from R 4 is selected from H, R 6 is selected from H, R 7 is selected from cyclopropyl optionally substituted by D atom, or R 6 , R 7 and the C atom to which they are connected together form cyclopropyl.
  • R 1 , R 2 and the atoms to which they are attached together form R3 is selected from R 4 is selected from H, R 6 is selected from H, R 7 is selected from cyclopropyl, or R 6 , R 7 and the C atom to which they are connected together form a C 3 -C 6 cycloalkyl group.
  • R 1 , R 2 and the atoms to which they are attached together form R 3 is selected from H
  • R 4 is selected from H
  • R 6 is selected from H
  • R 7 is selected from H or cyclopropyl
  • R 6 , R 7 and the C atom to which they are connected together form a C 3 -C 6 cycloalkyl group.
  • R 1 , R 2 and the atoms to which they are attached together form R3 is selected from R 4 is selected from H, R 6 is selected from H, R 7 is selected from H or cyclopropyl, or R 6 , R 7 and the C atom to which they are connected together form a C 3 -C 6 cycloalkyl group.
  • R 1 and R 5 together form a 5-6 membered heteroaryl or C 5 -C 6 cycloalkenyl with the atoms they are connected to, and R 3 is selected from
  • R 1 , R 5 and the atoms they are connected together form a 5-6 membered heteroaryl, and R 3 is selected from
  • R 1 , R 5 and the atoms they are connected together form a 5-6 membered heteroaryl, and R 3 is selected from
  • R 1 , R 5 and the atoms they are connected together form a 5-6 membered heteroaryl, and R 3 is selected from
  • R 2 is selected from H, R 1 , R 5 and the atoms they are connected together form a 5-6 membered heteroaryl or C 5 -C 6
  • R 2 is selected from H, and R 1 , R 5 and the atoms they are connected together form a C 5 -C 6 cycloalkenyl group.
  • R 2 is selected from H, R 1 , R 5 and the atoms they are connected together form a 5-6 membered heteroaryl group.
  • R 2 is selected from H, R 1 , R 5 and the atoms they are connected together form a 5-6 membered heteroaryl group
  • R 3 is selected from
  • R is selected from H, wherein X is selected from NH 2 or OH, R 6 is selected from H or methyl, R 7 is selected from H, methyl, isopropyl or cyclopropyl optionally substituted by D atoms; R 4 is selected from H, or R 4. R 7 and the atoms to which they are connected together form a 5-membered heterocyclic group.
  • R is selected from H, Wherein X is selected from NH2 or OH, R6 is selected from H or methyl, R7 is selected from H, methyl, isopropyl or cyclopropyl; R4 is selected from H.
  • R 1 is selected from methyl
  • X 1 is selected from CF
  • R 1 , R 2 together with the atoms to which they are attached form Structural units selected from
  • R 1 , R 2 and the atoms to which they are attached together form Structural units selected from
  • R 1 , R 2 and the atoms to which they are attached together form Structural units selected from
  • R 1 , R 5 together with the atoms to which they are attached form Structural units selected from
  • R 1 , R 5 together with the atoms to which they are attached form Structural units selected from
  • the compound represented by formula (I), or its stereoisomer or pharmaceutically acceptable salt is selected from the compound represented by formula (Ia), or its stereoisomer or pharmaceutically acceptable salt :
  • R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , and R 5 are as defined above.
  • the compound represented by formula (I), or its stereoisomer or pharmaceutically acceptable salt is selected from the compound represented by formula (Ib), or its stereoisomer or pharmaceutically acceptable salt :
  • R 1 , R 3 , R 4 , and R 5 are as defined above.
  • R 8 is selected from hydroxyl, halogen, CN, C 1 -C 6 alkyl, C 3 -C 6 cycloalkyl or C 2 -C 6 alkynyl;
  • X 2 is selected from CR 9 or N;
  • R 9 is selected from H, halogen, CN, or R 8 , R 9 and their respective connected atoms together form a 5-6 membered heterocyclic group;
  • R 10 and R 11 are independently selected from H, C 3 -C 6 cycloalkyl, or R 10 , R 11 and the C atom to which they are connected together form a C 3 -C 6 cycloalkyl.
  • R is selected from hydroxyl, halo, or CN.
  • R is selected from hydroxyl .
  • X2 is selected from CH.
  • both R 10 and R 11 are selected from H.
  • the compound represented by the formula (I) or formula (II), or a stereoisomer or a pharmaceutically acceptable salt thereof is selected from the following compounds, or a stereoisomer or a pharmaceutically acceptable salt thereof Acceptable salts:
  • the present disclosure also provides a pharmaceutical composition, which comprises the compound represented by formula (I) or formula (II), or its stereoisomer or pharmaceutically acceptable salt and pharmaceutically acceptable auxiliary materials.
  • the present disclosure provides a compound represented by formula (I) or formula (II), or a stereoisomer or a pharmaceutically acceptable salt thereof, or a pharmaceutical composition thereof used for preventing or treating topoisomerase I Use in medicine for related diseases.
  • the present disclosure provides compounds represented by formula (I) or formula (II), or stereoisomers or pharmaceutically acceptable salts thereof, or pharmaceutical compositions thereof in the prevention or treatment of topoisomerase I-related diseases the use of.
  • the present disclosure provides a compound of formula (I) or formula (II), or a stereoisomer or a pharmaceutically acceptable salt thereof, or a pharmaceutical composition thereof, for preventing or treating topoisomerase I-related diseases.
  • the present disclosure also provides a method for treating topoisomerase I-related diseases, the method comprising administering to a patient a therapeutically effective dose of a compound of formula (I) or formula (II), or a stereoisomer or a pharmaceutically acceptable salt thereof , or a pharmaceutical composition thereof, or a pharmaceutical preparation comprising a compound of formula (I) or formula (II) described in the present disclosure, or a stereoisomer or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
  • the topoisomerase I-related diseases include, but are not limited to, cancer.
  • the present disclosure provides a compound represented by formula (I) or formula (II), or a stereoisomer or a pharmaceutically acceptable salt thereof, or a pharmaceutical composition thereof in the preparation of an antitumor drug.
  • the present disclosure provides the compound represented by formula (I) or formula (II), or its stereoisomer or pharmaceutically acceptable salt, or its pharmaceutical composition for anti-tumor application.
  • the present disclosure provides a compound of formula (I) or formula (II), or a stereoisomer or a pharmaceutically acceptable salt thereof, or a pharmaceutical composition thereof, for antitumor use.
  • the present disclosure also provides a method for treating tumors, the method comprising administering to a patient a therapeutically effective dose of a compound of formula (I) or formula (II), or a stereoisomer or a pharmaceutically acceptable salt thereof, or a pharmaceutical composition thereof , or a pharmaceutical preparation comprising a compound of formula (I) or formula (II), or a stereoisomer or a pharmaceutically acceptable salt thereof of the present disclosure.
  • tautomer refers to isomers of functional groups resulting from the rapid movement of an atom in a molecule between two positions.
  • Compounds of the present disclosure may exhibit tautomerism.
  • Tautomeric compounds can exist in two or more interconvertible species. Tautomers generally exist in equilibrium and attempts to isolate a single tautomer usually result in a mixture whose physicochemical properties are consistent with the mixture of compounds. The position of equilibrium depends on the chemical properties within the molecule. For example, in many aliphatic aldehydes and ketones such as acetaldehyde, the keto form predominates; in phenols, the enol form predominates. This disclosure encompasses all tautomeric forms of the compounds.
  • stereoisomer refers to isomers resulting from differences in the arrangement of atoms in a molecule in space, including cis-trans isomers, enantiomers and diastereomers.
  • the compounds of the present disclosure may have asymmetric atoms such as carbon atoms, sulfur atoms, nitrogen atoms, phosphorus atoms or asymmetric double bonds, and thus the compounds of the present disclosure may exist in specific geometric or stereoisomeric forms.
  • Specific geometric or stereoisomeric forms may be cis and trans isomers, E and Z geometric isomers, (-)- and (+)-enantiomers, (R)- and (S )-enantiomers, diastereomers, (D)-isomers, (L)-isomers, and racemic or other mixtures thereof, such as enantiomers or diastereomers Enriched mixtures, all of the above isomers and mixtures thereof are within the definition of the disclosed compounds.
  • asymmetric carbon atoms there may be additional asymmetric carbon atoms, asymmetric sulfur atoms, asymmetric nitrogen atoms or asymmetric phosphorus atoms in substituents such as alkyl groups, and these isomers and their mixtures involved in all substituents are also included in Compounds of the disclosure are within the definition.
  • Compounds of the present disclosure containing asymmetric atoms can be isolated in optically pure or racemic forms, optically pure forms can be resolved from racemic mixtures, or synthesized by using chiral starting materials or chiral reagents .
  • substituted means that any one or more hydrogen atoms on the specified atom are replaced by a substituent, as long as the valence of the specified atom is normal and the substituted compound is stable.
  • an ethyl group is "optionally" substituted with halogen, meaning that the ethyl group can be unsubstituted (CH 2 CH 3 ), mono-substituted (such as CH 2 CH 2 F, CH 2 CH 2 Cl, etc.), poly-substituted (such as CHFCH 2 F, CH 2 CHF 2 , CHFCH 2 Cl, CH 2 CHCl 2 etc.) or fully substituted (CF 2 CF 3 , CF 2 CCl 3 , CCl 2 CCl 3 etc.). It will be appreciated by those skilled in the art that for any group containing one or more substituents, no sterically impossible and/or synthetically impossible substitution or substitution pattern is introduced.
  • any variable eg R a , R b
  • its definition is independent at each occurrence. For example, if a group is substituted by 2 R b , each R b has independent options.
  • linking group When the number of a linking group is 0, such as -(CH 2 ) 0 -, it means that the linking group is a bond.
  • linking group mentioned herein does not indicate its linking direction
  • its linking direction is arbitrary.
  • L 1 in is selected from “C 1 -C 3 alkylene-O”
  • L 1 can connect ring Q and R 1 in the same direction as the reading order from left to right to form “ring QC 1 -C 3 alkylene-OR 1 "
  • ring Q and R 1 can also be connected in the opposite direction according to the reading order from left to right to form “ring QOC 1 -C 3 alkylene-R 1 ".
  • C m -C n herein means having an integer number of carbon atoms in the range of mn.
  • C 1 -C 10 means that the group can have 1 carbon atom, 2 carbon atoms, 3 carbon atoms, 4 carbon atoms, 5 carbon atoms, 6 carbon atoms, 7 carbon atoms, 8 carbon atoms, 9 carbon atoms or 10 carbon atoms.
  • alkyl refers to a hydrocarbon group having the general formula C n H 2n+1 , and the alkyl group may be straight or branched.
  • C 1 -C 6 alkyl is understood to mean a straight-chain or branched saturated hydrocarbon radical having 1, 2, 3, 4, 5 or 6 carbon atoms.
  • the alkyl group includes but not limited to methyl, ethyl, propyl, butyl, pentyl, hexyl, isopropyl, isobutyl, sec-butyl, tert-butyl, isopentyl, 2-methylbutyl Base, 1-methylbutyl, 1-ethylpropyl, 1,2-dimethylpropyl, neopentyl, 1,1-dimethylpropyl, 4-methylpentyl, 3-methyl Amylpentyl, 2-methylpentyl, 1-methylpentyl, 2-ethylbutyl, 1-ethylbutyl, 3,3-dimethylbutyl, 2,2-dimethylbutyl 1,1-dimethylbutyl, 2,3-dimethylbutyl, 1,3-dimethylbutyl or 1,2-dimethylbutyl, etc.; the term "C 1 -C 3 "Alkyl" refers to an alkyl group containing 1 to
  • C 1 -C 6 alkyl described herein may further include “C 1 -C 3 alkyl”.
  • alkynyl refers to a straight or branched unsaturated aliphatic hydrocarbon group consisting of carbon atoms and hydrogen atoms, having at least one triple bond.
  • C2 - C6alkynyl is to be understood as a straight-chain or branched hydrocarbon radical comprising one or more triple bonds and having 2, 3, 4, 5 or 6 carbon atoms.
  • C 2 -C 6 alkynyl examples include, but are not limited to, ethynyl (-C ⁇ CH), prop-1-ynyl (1-propynyl, -C ⁇ CCH 3 ), prop-2-ynyl (—CH 2 C ⁇ CH), but-1-ynyl, but-2-ynyl or but-3-ynyl.
  • C 2 -C 6 alkynyl may include “C 2 -C 3 alkynyl", and examples of “C 2 -C 3 alkynyl” include ethynyl (-C ⁇ CH), prop-1-ynyl (1- propynyl, -C ⁇ CCH 3 ), prop-2-ynyl (-CH 2 C ⁇ CH).
  • cycloalkyl refers to a fully saturated carbocyclic group in the form of a monocyclic ring, a condensed ring, a bridged ring, or a spiro ring.
  • C 3 -C 6 cycloalkyl refers to a cycloalkyl group having 3, 4, 5 or 6 ring carbon atoms, specific examples include but are not limited to cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, cyclohexyl wait.
  • cycloalkenyl refers to an incompletely saturated non-aromatic carbocyclic group having at least one carbon-carbon double bond and existing in the form of a single ring, a condensed ring, a bridged ring, or a spiro ring. Unless otherwise indicated, the carbocycle is typically a 5 to 8 membered ring.
  • C 5 -C 7 cycloalkenyl refers to a cycloalkenyl group with 5, 6 or 7 ring atoms, specific examples include but not limited to cyclopentenyl, cyclopentadienyl, cyclohexenyl, cyclohexyl Dienyl, cycloheptenyl or cycloheptadienyl, etc.
  • C 5 -C 7 cycloalkenyl may include “C 5 -C 6 cycloalkenyl” and other ranges.
  • C 5 -C 6 cycloalkenyl refers to a cycloalkenyl group with 5 or 6 ring atoms, specific examples include but not limited to cyclopentenyl, cyclopentadienyl, cyclohexenyl, cyclohexadiene Base etc.
  • heterocyclyl refers to a fully saturated or partially saturated monocyclic, fused, spiro or bridged ring group containing 1-5 (eg 1-3 or 1-2) ring atoms
  • 4-membered heterocyclic group refers to a heterocyclic group with 4, 5, 6 or 7 ring atoms, and its ring atoms contain 1-3 heteroatoms or heteroatom groups independently selected from the above.
  • 4-membered heterocyclic groups include but are not limited to azetidinyl, oxetanyl
  • 5-membered heterocyclic groups include but are not limited to tetrahydrofuranyl, dioxolyl, pyrrole Alkyl, imidazolidinyl, pyrazolidinyl, pyrrolinyl, 4,5-dihydrooxazole, or 2,5-dihydro-1H-pyrrolyl
  • examples of 6-membered heterocyclic groups include, but are not limited to, tetrahydro Pyranyl, piperidinyl, morpholinyl, dithianyl, thiomorpholinyl, piperazinyl, trithianyl, tetrahydro Pyranyl, pipe
  • 5-6 membered heteroaryl refers to an aromatic ring group having 5 or 6 ring atoms, and it contains 1-3, eg 1-2 heteroatoms independently selected from N, O and S.
  • 5-6 membered heteroaryl groups include, but are not limited to, thienyl, furyl, pyrrolyl, oxazolyl, thiazolyl, imidazolyl, pyrazolyl, isoxazolyl, isothiazolyl, oxadiazolyl, Triazolyl, thiadiazolyl, pyridyl, pyridazinyl, pyrimidinyl, pyrazinyl or triazinyl, etc.
  • halo or halogen refers to fluorine, chlorine, bromine and iodine.
  • terapéuticaally effective amount means (i) treating a particular disease, condition or disorder, (ii) alleviating, ameliorating or eliminating one or more symptoms of a particular disease, condition or disorder, or (iii) delaying The amount of a compound of the disclosure required for the onset of one or more symptoms of a particular disease, condition or disorder.
  • the amount of a compound of the present disclosure that constitutes a “therapeutically effective amount” will vary depending on the compound, the disease state and its severity, the mode of administration, and the age of the mammal to be treated, but can be routinely determined by one skilled in the art according to its own knowledge and this disclosure.
  • prevention means administering a compound or formulation of the present disclosure to prevent a disease or one or more symptoms associated with said disease, and includes preventing a disease or disease state from occurring in an individual, such as a mammal, Especially when such individuals (eg mammals) are susceptible to the disease state, but have not yet been diagnosed as having the disease state.
  • pharmaceutically acceptable refers to those compounds, materials, compositions and/or dosage forms which, within the scope of sound medical judgment, are suitable for use in contact with human and animal tissues without excessive Toxicity, irritation, allergic reaction, or other problems or complications, commensurate with a reasonable benefit/risk ratio.
  • pharmaceutically acceptable salt refers to salts of pharmaceutically acceptable acids or bases, including salts formed between compounds and inorganic or organic acids, and salts formed between compounds and inorganic or organic bases.
  • composition refers to a mixture of one or more compounds of the present disclosure or salts thereof and pharmaceutically acceptable excipients.
  • the purpose of a pharmaceutical composition is to facilitate administration of a compound of the present disclosure to an organism.
  • pharmaceutically acceptable excipients refers to those excipients that have no obvious stimulating effect on the organism and will not impair the biological activity and performance of the active compound. Suitable excipients are well known to those skilled in the art, such as carbohydrates, waxes, water-soluble and/or water-swellable polymers, hydrophilic or hydrophobic materials, gelatin, oils, solvents, water and the like.
  • the term "patient” includes mammals and non-mammals.
  • mammals include, but are not limited to, any member of the class Mammalia: humans, non-human primates (such as chimpanzees and other apes and monkeys); livestock such as cattle, horses, sheep, goats, pigs; domesticated animals , such as rabbits, dogs, and cats; laboratory animals, including rodents, such as rats, mice, and guinea pigs.
  • non-human mammals include, but are not limited to, birds, fish, and the like.
  • the mammal is a human.
  • the terms "patient” and “individual” are used interchangeably.
  • the disclosure also includes isotopically labeled compounds of the disclosure that are identical to those described herein, but with one or more atoms replaced by an atom of an atomic mass or mass number different from that normally found in nature.
  • isotopes that can be incorporated into compounds of the present disclosure include isotopes of hydrogen, carbon, nitrogen, oxygen, phosphorus, sulfur, fluorine, iodine, and chlorine, such as 2 H, 3 H, 11 C, 13 C, 14 C, 13 N, 15 N, 15 O, 17 O, 18 O, 31 P, 32 P, 35 S, 18 F, 123 I, 125 I and 36 Cl, etc.
  • isotopically-labeled compounds of the disclosure are useful in compound and/or substrate tissue distribution assays. Tritiated (ie3H ) and carbon-14 ( ie14C ) isotopes are especially preferred for their ease of preparation and detectability.
  • Positron-emitting isotopes such as 15 O, 13 N, 11 C, and 18 F, can be used in positron emission tomography (PET) studies to determine substrate occupancy.
  • Isotopically labeled compounds of the disclosure can generally be prepared by following procedures similar to those disclosed in the Schemes and/or Examples below, by substituting an isotopically labeled reagent for a non-isotopically labeled reagent.
  • the pharmaceutical composition of the present disclosure can be prepared by combining the compound of the present disclosure with suitable pharmaceutically acceptable auxiliary materials, for example, it can be formulated into solid, semi-solid, liquid or gaseous preparations, such as tablets, pills, capsules, powders , granules, ointments, emulsions, suspensions, suppositories, injections, inhalants, gels, microspheres and aerosols, etc.
  • Typical routes of administration of a compound of the present disclosure, or a stereoisomer or pharmaceutically acceptable salt thereof, or a pharmaceutical composition thereof include, but are not limited to, oral, rectal, topical, inhalation, parenteral, sublingual, intravaginal, intranasal, Intraocular, intraperitoneal, intramuscular, subcutaneous, intravenous administration.
  • the pharmaceutical composition of the present disclosure can be produced by methods well known in the art, such as conventional mixing methods, dissolving methods, granulating methods, emulsifying methods, freeze-drying methods and the like.
  • the pharmaceutical composition is in oral form.
  • the pharmaceutical compositions can be formulated by mixing the active compounds with pharmaceutically acceptable excipients well known in the art. These excipients enable the compounds of the present disclosure to be formulated into tablets, pills, lozenges, dragees, capsules, liquids, gels, slurries, suspensions and the like for oral administration to patients.
  • Solid oral compositions can be prepared by conventional methods of mixing, filling or tabletting. It can be obtained, for example, by mixing the active compound with solid excipients, optionally milling the resulting mixture, adding other suitable excipients if desired, and processing the mixture into granules to obtain tablets Or the core of the sugar coating.
  • Suitable auxiliary materials include but are not limited to: binders, diluents, disintegrants, lubricants, glidants, sweeteners or flavoring agents, etc.
  • the pharmaceutical composition may also be adapted for parenteral administration as a suitable unit dosage form of sterile solutions, suspensions or lyophilized products.
  • the daily dosage is 0.01 to 200 mg/kg body weight, preferably 0.05 to 50 mg/kg body weight, more preferably 0.1 to 30 mg/kg body weight, in single or divided doses form.
  • ratios indicated for mixed solvents are volume mixing ratios.
  • % means wt%.
  • NMR nuclear magnetic resonance
  • MS mass spectroscopy
  • the following eluent or mobile phase can be composed of two or more solvents to form a mixed eluent or mobile phase, and the ratio is the volume ratio of each solvent, such as "0-10% methanol/dichloromethane" means gradient elution During the process, the volume ratio of methanol and dichloromethane in the mixed eluent is 0:100-10:100.
  • Step 1 1-(7-Amino-2,3-dihydrobenzo[b][1,4]dioxan-6-yl)-2-chloroethane-1-one (intermediate 1- 2) Synthesis of
  • Reactant 1-1 (500mg, 3.31mmol) was dissolved in 1,2-dichloroethane (3mL), the reaction solution was cooled to 0°C, and boron trichloride (1M, 2.65mL) and trichloro Chloroacetonitrile (299.67 mg, 3.97 mmol) was added to the reaction liquid at 0°C under the protection of nitrogen, and the reaction liquid was stirred at 90°C for 16 hours under the protection of nitrogen. LC-MS detected that the reaction was complete. After the reaction was cooled to room temperature, ice water (30 mL) and 1N HCl (10 mL) were added successively, followed by stirring for 30 min.
  • Step 2 (S)-15-(Chloromethyl)-8-ethyl-8-hydroxy-2,3,11,14-tetrahydro-12H-[1,4]dioxane[2, Synthesis of 3-g]pyrano[3',4':6,7]indoxazino[1,2-b]quinoline-9,12(8H)-dione (intermediate 1-4)
  • Step 3 (S)-15-(Azidomethyl)-8-ethyl-8-hydroxy-2,3,11,14-tetrahydro-12H-[1,4]dioxane[2 ,3-g]pyrano[3',4':6,7]indoxazino[1,2-b]quinoline-9,12(8H)-dione (intermediate 1-5) synthesis
  • Step 4 (S)-15-(aminomethyl)-8-ethyl-8-hydroxy-2,3,11,14-tetrahydro-12H-[1,4]dioxane[2, Synthesis of 3-g]pyrano[3',4':6,7]indoxazino[1,2-b]quinoline-9,12(8H)-dione (intermediate 1-6)
  • Step 5 (S)-N-((8-Ethyl-8-hydroxy-9,12-dioxo-2,3,8,9,12,14-hexahydro-11H-[1,4] Dioxane[2,3-g]pyrano[3',4':6,7]indoxazino[1,2-b]quinolin-15-yl)methyl)-2- Synthesis of Glycolamide (Compound 1)
  • reaction solution was filtered and purified by preparative high performance liquid chromatography (YMC-Actus Triart C18 column 5 ⁇ m silica, 25 mm diameter, 100 mm length; a mixture of water (containing 0.05% formic acid) and acetonitrile in decreasing polarity as eluent (acetonitrile Gradient ratio 10%-30%, elution time 12 minutes) to obtain the title compound (7mg).
  • Step 1 Synthesis of 1-(2-amino-5-chloro-4-fluorophenyl)-2-chloroethan-1-one (intermediate 2-2)
  • the crude product was purified by preparative high-performance liquid chromatography (YMC-Actus Triart C18 column 5 ⁇ m silica, 25 mm diameter, 100 mm length; a mixture of decreasing polarity of water (containing 0.05% formic acid) and acetonitrile as elution solution (acetonitrile gradient ratio 40%-60%, elution time 10 minutes) to obtain the title compound (320 mg).
  • Step 2 (S)-9-Chloro-11-(chloromethyl)-4-ethyl-8-fluoro-4-hydroxy-1,12-dihydro-14H-pyrano[3',4' : Synthesis of 6,7]indolazino[1,2-b]quinoline-3,14(4H)-dione (intermediate 2-3)
  • Step 3 (S)-11-(aminomethyl)-9-chloro-4-ethyl-8-fluoro-4-hydroxy-1,12-dihydro-14H-pyrano[3',4' : Synthesis of 6,7]indoleazino[1,2-b]quinoline-3,14(4H)-dione (compound 2)
  • the reaction was cooled to room temperature, concentrated to dryness under reduced pressure, and purified by preparative high-performance liquid chromatography (YMC-Actus Triart C18 column 5 ⁇ m silica, 25 mm diameter, 100 mm length; the polarity of water (containing 0.225% formic acid) and methanol decreased The mixture was used as the eluent (methanol gradient ratio 0%-30%, elution time 12 minutes) to obtain the title compound (22 mg).
  • reaction solution was filtered, concentrated to dryness under reduced pressure, and the crude product was purified by preparative high-performance liquid chromatography (YMC-Actus Triart C18 column 5 ⁇ m silica, 25 mm diameter, 100 mm length; The mixture was used as an eluent (acetonitrile gradient ratio 10%-40%, elution time 12 minutes) to obtain the title compound (2.20 mg).
  • Step 1 Synthesis of 1-(2-amino-5-bromo-4-fluorophenyl)-2-chloroethan-1-one (intermediate 4-2)
  • Step 2 (S)-9-Bromo-11-(chloromethyl)-4-ethyl-8-fluoro-4-hydroxy-1,12-dihydro-14H-pyrano[3',4' : Synthesis of 6,7]indolazino[1,2-b]quinoline-3,14(4H)-dione (intermediate 4-3)
  • Step 3 (S)-11-(aminomethyl)-9-bromo-4-ethyl-8-fluoro-4-hydroxy-1,12-dihydro-14H-pyrano[3',4' : Synthesis of 6,7]indoleazino[1,2-b]quinoline-3,14(4H)-dione (compound 4)
  • the reaction was cooled to room temperature, concentrated to dryness under reduced pressure, and the crude product was purified by preparative high-performance liquid chromatography (YMC-Actus Triart C18 column 5 ⁇ m, 25 mm diameter, 100 mm length; a mixture of water (containing 0.225% formic acid) and acetonitrile in decreasing polarity As an eluent (acetonitrile gradient ratio 6%-26%, elution time 12 minutes), the title compound (30 mg) was obtained.
  • reaction solution was filtered, concentrated to dryness under reduced pressure, and the crude product was purified by preparative high-performance liquid chromatography (YMC-Actus Triart C18 column 5 ⁇ m, 25 mm diameter, 100 mm length; a mixture of decreasing polarity of water (containing 0.05% formic acid) and acetonitrile was used as the eluent. Eluting (acetonitrile gradient ratio 6%-36%, elution time 12 minutes) gave the title compound (2.09 mg).
  • Step 1 Synthesis of 1-(2-amino-4-chloro-5-methylphenyl)-2-chloroethan-1-one (intermediate 6-2)
  • Step 2 (S)-8-Chloro-11-(chloromethyl)-4-ethyl-4-hydroxy-9-methyl-1,12-dihydro-14H-pyrano[3',4 ': Synthesis of 6,7]indolazino[1,2-b]quinoline-3,14(4H)-dione (intermediate 6-3)
  • the reaction was cooled to room temperature, concentrated to dryness under reduced pressure, and purified by preparative high-performance liquid chromatography (YMC-Actus Triart C18 column 5 ⁇ m, 25 mm diameter, 100 mm length; a mixture of decreasing polarity of water (containing 0.225% formic acid) and acetonitrile was used as The eluent (acetonitrile gradient ratio 2%-32%, elution time 12 minutes) gave the title compound (11.0 mg).
  • Step 4 (S)-N-((8-Chloro-4-ethyl-4-hydroxy-9-methyl-3,14-dioxo-3,4,12,14-tetrahydro-1H- Synthesis of pyrano[3',4':6,7]indoleazino[1,2-b]quinolin-11-yl)methyl)-2-hydroxyacetamide (Compound 6)
  • the reaction solution was filtered, concentrated to dryness under reduced pressure, and the crude product was purified by preparative high-performance liquid chromatography (YMC-Actus Triart C18 column 5 ⁇ m, 25 mm diameter, 100 mm length; a mixture of decreasing polarity of water (containing 0.05% formic acid) and acetonitrile was used as the eluent. Eluting (acetonitrile gradient 10%-40%, elution time 12 minutes) gave the title compound (3.00 mg).
  • intermediate 7-4 (6.7 g) and tributyl-(2-ethoxyvinyl) tin (10.4 g) were dissolved in 100 mL of anhydrous 1,4-dioxane, and Bis(triphenylphosphine)palladium dichloride (1.8 g) was added, and the reaction system was stirred overnight at 100°C.
  • the reaction solution was cooled to room temperature, 30 mL of 3N hydrochloric acid was added, and stirred at room temperature for 1 h.
  • the reaction solution was filtered through Celite, and the obtained filtrate was diluted with 100 mL of ethyl acetate, and washed with water (100 mL*2).
  • Step 6 Synthesis of 1-(5-amino-2,3-dihydro-1H-inden-4-yl)-2-chloroethan-1-one (Intermediate 7-7)
  • Step 7 (S)-15-(Chloromethyl)-8-ethyl-8-hydroxy-1,2,3,8,11,14-hexahydro-9H,12H-cyclopentadiene[f Synthesis of ]pyrano[3',4':6,7]indolazino[1,2-b]quinoline-9,12-dione (intermediate 7-8)
  • Step 8 (S)-15-(aminomethyl)-8-ethyl-8-hydroxy-1,2,3,8,11,14-hexahydro-9H,12H-cyclopentadieno[f Synthesis of ]pyrano[3',4':6,7]indolazino[1,2-b]quinoline-9,12-dione (intermediate 7-9)
  • reaction solution was cooled to room temperature, added concentrated hydrochloric acid (0.5mL) and stirred for 0.5h, then concentrated to dryness under reduced pressure, and the residue was purified by preparative high performance liquid chromatography (Waters Xbridge C18 column 5 ⁇ m, 25mm diameter, 100mm length; Decreasingly polar mixtures of water (containing 0.225% formic acid) and acetonitrile were used as eluents; acetonitrile gradient ratio 20%-40%, elution time 12 minutes) to obtain the title compound (22.0 mg).
  • Step 9 (S)-N-((8-Ethyl-8-hydroxy-9,12-dioxo-2,3,8,9,12,14-hexahydro-1H,11H-cyclopentadiene Ekeno[f]pyrano[3',4':6,7]indoxazino[1,2-b]quinolin-15-yl)methyl)-2-hydroxyacetamide (Compound 7) Synthesis
  • reaction solution was filtered, the filtrate was concentrated to dryness under reduced pressure, and the residue was purified by preparative high-performance liquid chromatography (Waters Xbridge C18 column 5 ⁇ m, 25mm diameter, 100mm length; the polarity of water (containing 0.05% formic acid) and acetonitrile decreased The mixture was used as the eluent (acetonitrile gradient ratio 30%-50%, elution time 12 minutes) to obtain the title compound (9.0 mg).
  • Step 1 (S)-10-((1,3-dioxoisoindolin-2-yl)methyl)-4-ethyl-4,9-dihydroxy-1,12-dihydro Synthesis of -14H-pyrano[3',4':6,7]indoxazino[1,2-b]quinoline-3,14(4H)-dione (intermediate 8-3)
  • Reactant 8-1 (200 mg, 548.92 ⁇ mol) was dissolved in concentrated sulfuric acid (2 mL), and the temperature of the reaction solution was cooled to 0°C.
  • Reactant 8-2 (116.69 mg, 658.71 ⁇ mol) was slowly added thereto, and the reaction solution was stirred at 0° C. for 0.5 h under nitrogen protection. After 0.5h, the reaction solution was raised to 25°C under nitrogen protection and stirred for 5h.
  • Step 2 (S)-10-(aminomethyl)-4-ethyl-4,9-dihydroxy-1,12-dihydro-14H-pyrano[3',4':6,7] Synthesis of Indoleazino[1,2-b]quinoline-3,14(4H)-dione (Intermediate 8-4)
  • Step 3 (S)-N-((4-Ethyl-4,9-dihydroxy-3,14-dioxo-3,4,12,14-tetrahydro-1H-pyrano[3' ,4':6,7]Synthesis of indoleazino[1,2-b]quinolin-10-yl)methyl)-2-hydroxyacetamide (Compound 8)
  • reaction solution was filtered, concentrated to dryness under reduced pressure, and the crude product was purified by preparative high-performance liquid chromatography (YMC-Actus Triart C18 column 5 ⁇ m silica, 25 mm diameter, 100 mm length; The mixture was used as an eluent (acetonitrile gradient ratio 11%-41%, elution time 12 minutes) to obtain the title compound (46 mg).
  • reaction solution was filtered and purified by preparative high performance liquid chromatography (YMC-Actus Triart C18 column 5 ⁇ m silica, 25 mm diameter, 100 mm length; a mixture of water (containing 0.05% formic acid) and acetonitrile in decreasing polarity as eluent (acetonitrile Gradient ratio 6%-36%, elution time 12 minutes) to obtain the title compound (3.00mg).
  • the crude product was purified by preparative high-performance liquid chromatography (YMC-Actus Triart C18 column 5 ⁇ m silica, 25 mm diameter, 100 mm length; a mixture of water (containing 0.225% formic acid) and acetonitrile in decreasing polarity as eluent (acetonitrile gradient ratio 16 %-46%, elution time 12 minutes) to obtain the title compound (2.20mg).
  • reaction solution was filtered, concentrated to dryness under reduced pressure, and the crude product was purified by preparative high-performance liquid chromatography (YMC-Actus Triart C18 column 5um, 25mm diameter, 100mm length; a mixture of water (containing 0.225% formic acid) and acetonitrile in decreasing polarity as the washing Eluting (acetonitrile gradient ratio 16%-46%, elution time 12 minutes) gave the title compound (3.0 mg).
  • Step 1 Synthesis of 1-(6-amino-3-chloro-2,4-difluorophenyl)-2-chloroethan-1-one (intermediate 12-2)
  • Step 2 (S)-9-Chloro-11-(chloromethyl)-4-ethyl-8,10-difluoro-4-hydroxy-1,12-dihydro-14H-pyrano[3' ,4':6,7]Indoleazino[1,2-b]quinoline-3,14(4H)-dione (Intermediate 12-3) Synthesis
  • the reaction was cooled to room temperature, concentrated to dryness under reduced pressure, and purified by preparative high-performance liquid chromatography (YMC-Actus Triart C18 column 5 ⁇ m silica, 25 mm diameter, 100 mm length; the polarity of water (containing 0.225% formic acid) and acetonitrile was decreasing The mixture was used as the eluent (acetonitrile gradient 2%-32%, elution time 12 minutes) to obtain the title compound (1.22 mg).
  • Step 1 2-Cyclopropyl-N-(((S)-8-ethyl-8-hydroxy-9,12-dioxo-2,3,8,9,12,14-hexahydro-1H ,11H-cyclopentadieno[f]pyrano[3',4':6,7]indoxazino[1,2-b]quinolin-15-yl)methyl)-2-hydroxyl
  • Acetamide Compound 13
  • reaction solution was filtered, the filtrate was concentrated to dryness under reduced pressure, and the residue was purified by preparative high-performance liquid chromatography (Waters Xbridge C18 column 5 ⁇ m, 25mm diameter, 100mm length; the polarity of water (containing 0.05% formic acid) and acetonitrile decreased The mixture was used as the eluent (acetonitrile gradient ratio 34%-54%, elution time 12 minutes) to obtain the title compound (0.8 mg).
  • Step 1 Synthesis of 1-(6-nitrobenzo[d][1,3]dioxol-5-yl)ethanone (Intermediate 14-2)
  • Step 2 Synthesis of 1-(6-aminobenzo[d][1,3]dioxol-5-yl)ethanone (Intermediate 14-3)
  • Step 3 Synthesis of N-(6-acetylbenzo[d][1,3]dioxol-5-yl)acetamide (Intermediate 14-4)
  • Step 4 Synthesis of N-(6-(2-bromoacetyl)benzo[d][1,3]dioxol-5-yl)acetamide (Intermediate 14-5)
  • Step 5 Synthesis of 1-(6-aminobenzo[d][1,3]dioxol-5-yl)-2-chloroethanone (Intermediate 14-6)
  • Step 6 (S)-14-(Bromomethyl)-7-ethyl-7-hydroxy-10,13-dihydro-11H-[1,3]dioxole[4,5- g] Synthesis of pyrano[3',4':6,7]indoxazino[1,2-b]quinoline-8,11(7H)-dione (intermediate 14-7)
  • Step 7 (S)-14-(Aminomethyl)-7-ethyl-7-hydroxy-10,13-dihydro-11H-[1,3]dioxole[4,5- g] Synthesis of pyrano[3',4':6,7]indolazino[1,2-b]quinoline-8,11(7H)-dione (intermediate 14-8)
  • Step 8 2-cyclopropyl-N-(((S)-7-ethyl-7-hydroxy-8,11-dioxo-7,8,11,13-tetrahydro-10H-[1, 3] dioxole[4,5-g]pyrano[3',4':6,7]indoxazino[1,2-b]quinolin-14-yl)methyl )-2-hydroxyacetamide (compound 14) synthesis
  • reaction solution was filtered and purified by preparative high performance liquid chromatography (YMC-Actus Triart C18 column 5 ⁇ m, 30 mm diameter, 150 mm length; a mixture of water (containing 0.225% formic acid) and acetonitrile in decreasing polarity as eluent ( Acetonitrile gradient ratio 4%-44%, elution time 9 minutes) to obtain the title compound (3mg).
  • Step 9 Preparation of benzyl 2-cyclopropyl-2-hydroxyacetate (intermediate 14-9-P1/P2)
  • intermediate 14-9 The resolution of intermediate 14-9 afforded isomers 14-9-P1 and 14-9-P2.
  • Intermediate 14-9 (1.3 g) was prepared by supercritical fluid chromatography (DAICEL CHIRALPAK AD column, 10 ⁇ m silica, 30 mm diameter, 250 mm length; using ethanol (containing 0.1% ammonia) as eluent) to obtain intermediate 14 -9-P1 (600 mg) and intermediate 14-9-P2 (600 mg).
  • Step 10 Synthesis of 2-cyclopropyl-2-hydroxyacetic acid (intermediate 14-10-P1/P2)
  • intermediate 14-9-P1 (500 mg) was added to methanol (15 mL), wet palladium carbon (10 mg, 10%) was added to the reaction solution, and the reaction solution was stirred at 25° C. for 16 hours under hydrogen atmosphere. After the reaction, the reactant was filtered, and the filtrate was concentrated under reduced pressure to obtain intermediate 14-10-P1 (273 mg).
  • intermediate 14-9-P2 (500mg) was added to methanol (15mL), wet palladium carbon (10mg, 10%) was added to the reaction solution, and the reaction solution was stirred at 25°C for 16 hours under hydrogen atmosphere. After the reaction, the reactant was filtered, and the filtrate was concentrated under reduced pressure to obtain intermediate 14-10-P2 (279 mg).
  • Step 11 2-Cyclopropyl-N-(((S)-7-ethyl-7-hydroxy-8,11-dioxo-7,8,11,13-tetrahydro-10H-[1, 3] dioxole[4,5-g]pyrano[3',4':6,7]indoxazino[1,2-b]quinolin-14-yl)methyl )-2-hydroxyacetamide (compound 14-P1/P2) synthesis
  • reaction solution was purified by preparative high-performance liquid chromatography (Boston Green ODS C18 column 5 ⁇ m silica, 30 mm diameter, 150 mm length; water (containing 0.225% formic acid) and a mixture of decreasing polarity of acetonitrile as eluent ( Acetonitrile gradient ratio 16%-46%, elution time 12 minutes) to obtain compound 14-P1 (22.00 mg).
  • reaction solution was directly purified by preparative high-performance liquid chromatography (Boston Green ODS C18 column 5 ⁇ m silica, 30 mm diameter, 150 mm length; a mixture of water (containing 0.225% formic acid) and acetonitrile in decreasing polarity as the eluent (Acetonitrile gradient ratio 16%-46%, elution time 12 minutes) to obtain compound 14-P2 (8.00 mg).
  • the two isomers were further analyzed separately by the following chiral supercritical fluid chromatography analysis method.
  • Step 1 Synthesis of 1-(5-amino-2-bromopyridin-4-yl)ethanone (Intermediate 15-2)
  • Step 3 Synthesis of 1-(5-amino-2-bromopyridin-4-yl)-2-bromoethanone (intermediate 15-4)
  • Step 4 Synthesis of 1-(5-amino-2-bromopyridin-4-yl)-2-chloroethanone (Intermediate 15-5)
  • Step 5 (S)-9-Bromo-11-(chloromethyl)-4-ethyl-4-hydroxy-1,12-dihydro-14H-pyrano[3',4':6,7 Synthesis of ]indoleazino[1,2-b][1,7]naphthyridine-3,14(4H)-dione (Intermediate 15-6)
  • Step 6 (S)-11-(aminomethyl)-9-bromo-4-ethyl-4-hydroxy-1,12-dihydro-14H-pyrano[3',4':6,7 Synthesis of ]indoleazino[1,2-b][1,7]naphthyridine-3,14(4H)-dione (Intermediate 15-7)
  • Step 7 (S)-N-((9-Bromo-4-ethyl-4-hydroxy-3,14-dioxo-3,4,12,14-tetrahydro-1H-pyrano[3 Synthesis of ',4':6,7]indoleazino[1,2-b][1,7]naphthyridin-11-yl)methyl)-2-hydroxyacetamide (compound 15)
  • reaction solution was filtered and purified by preparative high performance liquid chromatography (YMC-Actus Triart C18 column 5 ⁇ m, 25 mm diameter, 100 mm length; a mixture of water (containing 0.05% formic acid) and acetonitrile in decreasing polarity as eluent ( Acetonitrile gradient ratio 8%-28%, elution time 12 minutes) to obtain the title compound (1.00mg).
  • Step 1 (S)-N-((9-chloro-4-ethyl-8,10-difluoro-4-hydroxy-3,14-dioxo-3,4,12,14-tetrahydro- 1H-pyrano[3',4':6,7]indoleazino[1,2-b]quinolin-11-yl)methyl)-1-hydroxycyclopropane-1-carboxamide (compound 16)
  • reaction solution was filtered and purified by preparative high performance liquid chromatography (YMC-Actus Triart C18 column 5 ⁇ m, 25 mm diameter, 100 mm length; a mixture of water (containing 0.225% formic acid) and acetonitrile in decreasing polarity as eluent ( Acetonitrile gradient ratio 14%-34%, elution time 12 minutes) to obtain the title compound (3mg).
  • Step 1 (S)-N-((8-Chloro-4-ethyl-4-hydroxy-9-methyl-3,14-dioxo-3,4,12,14-tetrahydro-1H- Pyrano[3',4':6,7]indoxazino[1,2-b]quinolin-11-yl)methyl)-2-hydroxy-2-methylpropionamide (compound 17) Synthesis
  • reaction solution was filtered and purified by preparative high-performance liquid chromatography (Waters Xbridge C18 column 5 ⁇ m silica, 25 mm diameter, 100 mm length; a mixture of water (containing 0.05% formic acid) and acetonitrile in decreasing polarity as eluent (Acetonitrile gradient ratio 22%-42%, elution time 12 minutes) to obtain the title compound (1 mg).
  • Step 1 N-(((S)-8-chloro-4-ethyl-4-hydroxy-9-methyl-3,14-dioxo-3,4,12,14-tetrahydro-1H- Pyrano[3',4':6,7]indoleazino[1,2-b]quinolin-11-yl)methyl)-2-hydroxy-3-methylbutyramide (compound 18) Synthesis
  • reaction solution was filtered and purified by preparative high performance liquid chromatography (Waters Xbridge C18 column 5 ⁇ m, 25 mm diameter, 100 mm length; a mixture of water (containing 0.05% formic acid) and acetonitrile in decreasing polarity as eluent (acetonitrile gradient Proportion 25%-45%, elution time 12 minutes) to obtain the title compound (1.20mg).
  • Step 2 (S)-11-(Chloromethyl)-4-ethyl-8-fluoro-4-hydroxy-9-methyl-1,12-dihydro-14H-pyrano[3',4 ': Synthesis of 6,7]indolazino[1,2-b]quinoline-3,14(4H)-dione (intermediate 19-3)
  • Step 3 (S)-4-Ethyl-8-fluoro-4-hydroxy-11-(((1-(hydroxymethyl)cyclopropyl)amino)methyl)-9-methyl-1,12 -Synthesis of dihydro-14H-pyrano[3',4':6,7]indoxazino[1,2-b]quinoline-3,14(4H)-dione (compound 19)
  • reaction solution was filtered and purified by preparative high performance liquid chromatography (Waters Xbridge C18 column 5 ⁇ m, 25 mm diameter, 100 mm length; a mixture of water (containing 0.05% formic acid) and acetonitrile in decreasing polarity as eluent (acetonitrile gradient Proportion 10%-40%, elution time 12 minutes) to obtain the title compound (1.3mg).
  • Step 1 Synthesis of 1-(5-aminobenzofuran-4-yl)-2-chloroethanone (intermediate 20-2)
  • reaction liquid was cooled to room temperature, and ice water (50mL) and 5% HCl (10mL) were added slowly in turn, stirred at 25°C for 30min, then dichloromethane (60mL) was added, and the organic phase was washed with water (30mL*2) , and the washed organic phase was dried with an appropriate amount of anhydrous sodium sulfate.
  • Step 2 (S)-15-(Chloromethyl)-8-ethyl-8-hydroxy-11,14-dihydro-12H-furo[3,2-f]pyrano[3',4 Synthesis of ':6,7]indole azino[1,2-b]quinoline-9,12(8H)-dione (intermediate 20-3)
  • Step 3 (S)-15-(aminomethyl)-8-ethyl-8-hydroxy-11,14-dihydro-12H-furo[3,2-f]pyrano[3',4 ': Synthesis of 6,7]indolazino[1,2-b]quinoline-9,12(8H)-dione (intermediate 20-4)
  • reaction solution was cooled to room temperature, concentrated to dryness under reduced pressure, and purified by preparative high-performance liquid chromatography (YMC-Actus Triart C18 column 5 ⁇ m, 25mm diameter, 100mm length; polarity of water (containing 0.225% formic acid) and methanol The decreasing mixture was used as eluent; methanol gradient ratio 5%-25%, elution time 12 minutes) to obtain the title compound (17 mg).
  • Step 4 (S)-N-((8-Ethyl-8-hydroxy-9,12-dioxo-8,9,12,14-tetrahydro-11H-furo[3,2-f] Pyrano[3',4':6,7]indoleazino[1,2-b]quinolin-15-yl)methyl)-2-hydroxyacetamide (Compound 20)
  • reaction solution was filtered and purified by preparative high performance liquid chromatography (YMC-Actus Triart C18 column 5 ⁇ m, 25 mm diameter, 100 mm length; a mixture of water (containing 0.05% formic acid) and acetonitrile in decreasing polarity as eluent ( Acetonitrile gradient ratio 15%-35%, elution time 12 minutes) to obtain the title compound (3mg).
  • Step 1 (S)-N-((9-chloro-4-ethyl-8,10-difluoro-4-hydroxy-3,14-dioxo-3,4,12,14-tetrahydro- Synthesis of 1H-pyrano[3',4':6,7]indoleazino[1,2-b]quinolin-11-yl)methyl)-2-hydroxyacetamide (compound 21)
  • reaction solution was filtered and purified by preparative high performance liquid chromatography (Waters Xbridge C18 column 5 ⁇ m, 25 mm diameter, 100 mm length; a mixture of water (containing 0.05% formic acid) and acetonitrile in decreasing polarity as eluent (acetonitrile gradient Proportion 20%-40%, elution time 12 minutes) to obtain the title compound (1mg).
  • Step 1 (S)-N-((9-chloro-4-ethyl-8,10-difluoro-4-hydroxy-3,14-dioxo-3,4,12,14-tetrahydro- 1H-pyrano[3',4':6,7]indoleazino[1,2-b]quinolin-11-yl)methyl)-2-hydroxy-2-methylpropanamide (compound twenty two)
  • reaction solution was filtered and purified by preparative high performance liquid chromatography (YMC-Actus Triart C18 column 5 ⁇ m, 25 mm diameter, 100 mm length; a mixture of water (containing 0.225% formic acid) and acetonitrile in decreasing polarity as eluent ( Acetonitrile gradient ratio 20%-40%, elution time 12 minutes) to obtain the title compound (1.07mg).
  • Step 1 N-(((S)-9-chloro-4-ethyl-8,10-difluoro-4-hydroxy-3,14-dioxo-3,4,12,14-tetrahydro- 1H-pyrano[3',4':6,7]indoleazino[1,2-b]quinolin-11-yl)methyl)-2-cyclopropyl-2-hydroxyacetamide ( Compound 23)
  • reaction solution was filtered and purified by preparative high performance liquid chromatography (YMC-Actus Triart C18 column 5 ⁇ m, 25 mm diameter, 100 mm length; a mixture of water (containing 0.225% formic acid) and acetonitrile in decreasing polarity as eluent ( Acetonitrile gradient ratio 41%-61%, elution time 12 minutes) to obtain the title compound (7 mg).
  • Step 1 (S)-9-Chloro-4-ethyl-8,10-difluoro-4-hydroxy-11-(((1-(hydroxymethyl)cyclopropyl)amino)methyl)-1 ,12-Dihydro-14H-pyrano[3',4':6,7]indoxazino[1,2-b]quinoline-3,14(4H)-dione (Compound 24) synthesis
  • reaction solution was filtered, and the filtrate was purified by preparative high-performance liquid chromatography (Waters Xbridge C18 column 5 ⁇ m, 25 mm diameter, 100 mm length; a mixture of water (containing 0.05% formic acid) and acetonitrile in decreasing polarity as eluent (acetonitrile Gradient ratio 30%-50%, elution time 12 minutes) to obtain the title compound (3.1mg).
  • Step 1 (R)-N-(((S)-9-chloro-4-ethyl-8,10-difluoro-4-hydroxy-3,14-dioxo-3,4,12,14 -tetrahydro-1H-pyrano[3',4':6,7]indoxazino[1,2-b]quinolin-11-yl)methyl)-2-hydroxypropionamide (compound 25 )Synthesis
  • reaction solution was filtered and purified by preparative high performance liquid chromatography (Waters Xbridge C18 column 5 ⁇ m, 25 mm diameter, 100 mm length; a mixture of water (containing 0.05% formic acid) and acetonitrile in decreasing polarity as eluent (acetonitrile gradient Proportion 20%-40%, elution time 12 minutes) to obtain the title compound (1.80mg).
  • Step 1 (S)-N-(((S)-9-chloro-4-ethyl-8,10-difluoro-4-hydroxy-3,14-dioxo-3,4,12,14 -tetrahydro-1H-pyrano[3',4':6,7]indoxazino[1,2-b]quinolin-11-yl)methyl)-2-hydroxypropionamide (compound 26 )Synthesis
  • reaction solution was filtered and purified by preparative high-performance liquid chromatography (Waters Xbridge C18 column 5 ⁇ m, 25 mm diameter, 100 mm length; a mixture of water (containing 0.05% formic acid) and acetonitrile in decreasing polarity as eluent; acetonitrile gradient Proportion 20%-40%, elution time 12 minutes) to obtain the title compound (1.60mg).
  • Step 2 Synthesis of ethyl 7-chloro-5-nitrobenzofuran-2-carboxylate (Intermediate 27-4)
  • Step 6 Synthesis of 1-(5-amino-7-chlorobenzofuran-4-yl)-2-chloroethan-1-one (intermediate 27-8)
  • Step 7 (S)-4-Chloro-15-(chloromethyl)-8-ethyl-8-hydroxy-11,14-dihydro-12H-furo[3,2-f]pyrano[ Synthesis of 3',4':6,7]indoxazino[1,2-b]quinoline-9,12(8H)-dione (Intermediate 27-9)
  • Step 8 (S)-15-(Aminomethyl)-4-chloro-8-ethyl-8-hydroxy-11,14-dihydro-12H-furo[3,2-f]pyrano[ Synthesis of 3',4':6,7]indoxazino[1,2-b]quinoline-9,12(8H)-dione (intermediate 27-10)
  • reaction solution was cooled to room temperature, added concentrated hydrochloric acid (2mL) and stirred, then concentrated to dryness under reduced pressure, and the residue was purified by preparative high-performance liquid chromatography (Waters Xbridge C18 column 5 ⁇ m, 25mm diameter, 100mm length; water (containing 0.225% formic acid) and acetonitrile with decreasing polarity as eluent; acetonitrile gradient ratio 13%-43%, elution time 12 minutes) to obtain the title compound (60.0mg).
  • Step 9 (S)-N-((4-Chloro-8-ethyl-8-hydroxy-9,12-dioxo-8,9,12,14-tetrahydro-11H-furo[3, 2-f]pyrano[3',4':6,7]indoleazino[1,2-b]quinolin-15-yl)methyl)-2-hydroxyacetamide (compound 27) synthesis
  • Step 1 N-(((S)-4-chloro-8-ethyl-8-hydroxy-9,12-dioxo-8,9,12,14-tetrahydro-11H-furo[3, 2-f]pyrano[3',4':6,7]indoxazino[1,2-b]quinolin-15-yl)methyl)-2-cyclopropyl-2-hydroxyethyl Synthesis of Amide (Compound 28)
  • reaction solution was filtered, the filtrate was concentrated to dryness under reduced pressure, and the residue was purified by preparative high-performance liquid chromatography (Waters Xbridge C18 column 5 ⁇ m, 25mm diameter, 100mm length; the polarity of water (containing 0.05% formic acid) and acetonitrile decreased The mixture was used as the eluent (acetonitrile gradient ratio 34%-54%, elution time 12 minutes) to obtain the title compound (6.2 mg).
  • Step 1 (S)-14-(Chloromethyl)-7-ethyl-7-hydroxy-15-nitro-10,13-dihydro-11H-[1,3]dioxole [4,5-g]pyrano[3',4':6,7]indoxazino[1,2-b]quinoline-8,11(7H)-dione (intermediate 29-1 )Synthesis
  • Step 2 (S)-14-(Aminomethyl)-7-ethyl-7-hydroxy-15-nitro-10,13-dihydro-11H-[1,3]dioxole [4,5-g]pyrano[3',4':6,7]indoxazino[1,2-b]quinoline-8,11(7H)-dione (intermediate 29-2 )Synthesis
  • Step 3 2-cyclopropyl-N-(((S)-7-ethyl-7-hydroxy-15-nitro-8,11-dioxo-7,8,11,13-tetrahydro- 10H-[1,3]dioxole[4,5-g]pyrano[3',4':6,7]indoxazino[1,2-b]quinoline-14 Synthesis of -yl)methyl)-2-hydroxyacetamide (compound 29)
  • reaction solution was filtered, the filtrate was concentrated to dryness under reduced pressure, and the residue was purified by preparative high-performance liquid chromatography (Boston Prime C18 column 5 ⁇ m silica, 30 mm diameter, 150 mm length; water (containing 0.05% formic acid) and acetonitrile Mixtures of decreasing polarity were used as eluents; acetonitrile gradient ratio 15%-45%, elution time 12 minutes) to obtain the title compound (5.20 mg).
  • Step 3 Synthesis of 1-(4-Chlorobenzo[d][1,3]dioxol-5-yl)ethan-1-ol (Intermediate 30-4)
  • Step 4 Synthesis of 1-(4-Chlorobenzo[d][1,3]dioxol-5-yl)ethan-1-one (Intermediate 30-5)
  • Step 5 Synthesis of 1-(4-Chloro-6-nitrobenzo[d][1,3]dioxol-5-yl)ethan-1-one (Intermediate 30-6)
  • Step 6 Synthesis of 1-(6-amino-4-chlorobenzo[d][1,3]dioxol-5-yl)ethan-1-one (Intermediate 30-7)
  • Step 7 Synthesis of N-(6-acetyl-7-chlorobenzo[d][1,3]dioxol-5-yl)acetamide (Intermediate 30-8)
  • Step 8 Preparation of N-(6-(2-bromoacetyl)-7-chlorobenzo[d][1,3]dioxol-5-yl)acetamide (Intermediate 30-9) synthesis
  • Step 10 (S)-15-Chloro-14-(chloromethyl)-7-ethyl-7-hydroxy-10,13-dihydro-11H-[1,3]dioxole[ 4,5-g]pyrano[3',4':6,7]indoxazino[1,2-b]quinoline-8,11(7H)-dione (Intermediate 30-11) Synthesis
  • Step 11 (S)-14-(Aminomethyl)-15-chloro-7-ethyl-7-hydroxy-10,13-dihydro-11H-[1,3]dioxole[ 4,5-g]pyrano[3',4':6,7]indoxazino[1,2-b]quinoline-8,11(7H)-dione (Intermediate 30-12) Synthesis
  • Step 12 N-(((S)-15-chloro-7-ethyl-7-hydroxy-8,11-dioxo-7,8,11,13-tetrahydro-10H-[1,3] Dioxole[4,5-g]pyrano[3',4':6,7]indoxazino[1,2-b]quinolin-14-yl)methyl)- Synthesis of 2-cyclopropyl-2-hydroxyacetamide (compound 30)
  • reaction solution was filtered, the filtrate was concentrated to dryness under reduced pressure, and the residue was purified by preparative high-performance liquid chromatography (Boston Prime C18 column 5 ⁇ m silica, 30 mm diameter, 150 mm length; water (containing 0.05% formic acid) and acetonitrile Mixtures of decreasing polarity were used as eluents (acetonitrile gradient ratio 31%-51%, elution time 12 minutes) to obtain the title compound (2.30 mg).
  • preparative high-performance liquid chromatography Boston Prime C18 column 5 ⁇ m silica, 30 mm diameter, 150 mm length; water (containing 0.05% formic acid) and acetonitrile Mixtures of decreasing polarity were used as eluents (acetonitrile gradient ratio 31%-51%, elution time 12 minutes) to obtain the title compound (2.30 mg).
  • Step 1 (S)-N-((15-Chloro-7-ethyl-7-hydroxy-8,11-dioxo-7,8,11,13-tetrahydro-10H-[1,3] Dioxole[4,5-g]pyrano[3',4':6,7]indoxazino[1,2-b]quinolin-14-yl)methyl)- Synthesis of 2-hydroxyacetamide (compound 31)
  • reaction solution was filtered, the filtrate was concentrated to dryness under reduced pressure, and the residue was purified by preparative high-performance liquid chromatography (Boston Prime C18 column 5 ⁇ m silica, 30 mm diameter, 150 mm length; water (containing 0.225% formic acid) and acetonitrile Mixtures of decreasing polarity were used as eluents; acetonitrile gradient ratio 20%-40%, elution time 12 minutes) to obtain the title compound (2.50 mg).
  • reaction solution was filtered, the filtrate was concentrated to dryness under reduced pressure, and the residue was purified by preparative high-performance liquid chromatography (Waters Xbridge C18 column 5 ⁇ m, 25mm diameter, 100mm length; the polarity of water (containing 0.05% formic acid) and acetonitrile decreased The mixture was used as the eluent (acetonitrile gradient ratio 28%-48%, elution time 12 minutes) to obtain the title compound (0.80mg).
  • Step 3 Synthesis of 5-amino-7-chloro-2,3-dihydro-1H-inden-4-ol (intermediate 33-4)
  • Step 6 Synthesis of 5-Acetamido-7-chloro-2,3-dihydro-1H-inden-4-yl trifluoromethanesulfonate (Intermediate 33-7)
  • Step 7 Synthesis of N-(4-(1-butoxyvinyl)-7-chloro-2,3-dihydro-1H-inden-5-yl)acetamide (Intermediate 33-8)
  • Step 8 Synthesis of N-(4-acetyl-7-chloro-2,3-dihydro-1H-inden-5-yl)acetamide (Intermediate 33-9)
  • Step 9 Synthesis of N-(4-(2-bromoacetyl)-7-chloro-2,3-dihydro-1H-inden-5-yl)acetamide (Intermediate 33-10)
  • Step 10 Synthesis of 1-(5-amino-7-chloro-2,3-dihydro-1H-inden-4-yl)-2-chloroethane-1-one (Intermediate 33-11)
  • Step 11 (S)-4-Chloro-15-(chloromethyl)-8-ethyl-1,2,3,8,11,14-hexahydro-9H,12H-cyclopentadieno[f Synthesis of ]pyrano[3',4':6,7]indolazino[1,2-b]quinoline-9,12-dione (intermediate 33-12)
  • Step 12 (S)-15-(aminomethyl)-4-chloro-8-ethyl-8-hydroxy-1,2,3,8,11,14-hexahydro-9H,12H-cyclopentadiene Synthesis of Ekeno[f]pyrano[3',4':6,7]indoxazino[1,2-b]quinoline-9,12-dione (Intermediate 33-13)
  • Step 13 (S)-N-((4-Chloro-8-ethyl-8-hydroxy-9,12-dioxo-2,3,8,9,12,14-hexahydro-1H,11H -Cyclopenta[f]pyrano[3',4':6,7]indolazino[1,2-b]quinolin-15-yl)methyl)-2-hydroxyacetamide Synthesis of (Compound 33)
  • reaction solution was filtered and purified by preparative high performance liquid chromatography (Boston Green ODS C18 column 5 ⁇ m silica, 30 mm diameter, 150 mm length; a mixture of water (containing 0.05% FA) and acetonitrile in decreasing polarity as eluent (Acetonitrile gradient ratio 32%-52%, elution time 12 minutes) to obtain the title compound (2.0mg).
  • reaction solution was filtered and purified by preparative high performance liquid chromatography (Boston Prime C18 column 5 ⁇ m silica, 30 mm diameter, 150 mm length; a mixture of water (containing 0.05% FA) and acetonitrile in decreasing polarity as eluent ; acetonitrile gradient ratio 35%-55%, elution time 12 minutes) to obtain the title compound (2.0mg).
  • Step 1 Synthesis of 1-(2-fluoro-3,4-dimethoxyphenyl)ethan-1-one (Intermediate 35-2)
  • Step 3 Synthesis of 1-(4-fluorobenzo[d][1,3]dioxol-5-yl)ethan-1-one (Intermediate 35-4)
  • Step 4 Synthesis of 1-(4-fluoro-6-nitrobenzo[d][1,3]dioxol-5-yl)ethan-1-one (Intermediate 35-5)
  • Step 5 Synthesis of 1-(6-amino-4-fluorobenzo[d][1,3]dioxol-5-yl)ethan-1-one (Intermediate 35-6)
  • Step 7 Preparation of N-(6-(2-bromoacetyl)-7-fluorobenzo[d][1,3]dioxol-5-yl)acetamide (Intermediate 35-8) synthesis
  • Step 8 1-(6-Amino-4-fluorobenzo[d][1,3]dioxol-5-yl)-2-chloroethane-1-one (Intermediate 35-9 )Synthesis
  • Step 9 (S)-14-(Chloromethyl)-7-ethyl-15-fluoro-7-hydroxy-10,13-dihydro-11H-[1,3]dioxole[ 4,5-g]pyrano[3',4':6,7]indoxazino[1,2-b]quinoline-8,11(7H)-dione (Intermediate 35-10) Synthesis
  • Step 10 (S)-14-(Aminomethyl)-7-ethyl-15-fluoro-7-hydroxy-10,13-dihydro-11H-[1,3]dioxole[ Synthesis of 4,5-g]pyrano[3',4':6,7]indoxazino[1,2-b]quinoline-8,11(7H)-dione (compound 35)
  • the reaction solution was slowly poured into ice water, then ethyl acetate (50 mL) was added, the organic phase was washed with water (30 mL*2), the washed organic phase was dried with an appropriate amount of anhydrous sodium sulfate, and the organic phase was concentrated under reduced pressure , the residue was purified by silica gel column chromatography ( 12g Flash silica gel column, gradient 0-40% petroleum ether/ethyl acetate, flow rate 60mL/min), the title compound (0.2g) was obtained.
  • Step 2 1-(5-fluoro-7-nitro-2,3-dihydrobenzo[b][1,4]dioxin-6-yl)ethan-1-one (intermediate Synthesis of body 36-2)
  • Dissolve intermediate 36-4 (100.0 mg) in acetic acid (2 mL), add hydrogen bromide in acetic acid solution (290.48 mg, 33% content), and slowly add liquid bromine (75.73 mg) dropwise to the reaction solution .
  • the reaction solution was stirred at 25 °C for 0.5 h. After the reaction, the reaction solution was slowly poured into ice water and stirred for 0.5 h, filtered, and the filter cake was dried to obtain the title compound (80.0 mg).
  • Step 7 (S)-15-(Chloromethyl)-8-ethyl-16-fluoro-8-hydroxy-2,3,11,14-tetrahydro-12H-[1,4]dioxane Hexeno[2,3-g]pyrano[3',4':6,7]indoxazino[1,2-b]quinoline-9,12(8H)-dione (intermediate 36-7) Synthesis
  • Step 8 (S)-15-(aminomethyl)-8-ethyl-16-fluoro-8-hydroxy-2,3,11,14-tetrahydro-12H-[1,4]dioxane Hexeno[2,3-g]pyrano[3',4':6,7]indoxazino[1,2-b]quinoline-9,12(8H)-dione (compound 36 )Synthesis
  • reaction solution was concentrated to dryness under reduced pressure, and the residue was purified by preparative high-performance liquid chromatography (Boston Prime C18 column 5 ⁇ m silica, 30 mm diameter, 150 mm length; water (containing 0.225% formic acid) and acetonitrile with decreasing polarity The mixture was used as the eluent (acetonitrile gradient ratio 15%-45%, elution time 12 minutes) to obtain the title compound (6.50 mg).
  • reaction solution was concentrated to dryness under reduced pressure, and the residue was purified by preparative high-performance liquid chromatography (Boston Green ODS C18 column 5 ⁇ m silica, 30 mm diameter, 150 mm length; water (containing 0.225% formic acid) and the polarity of acetonitrile
  • the decreasing mixture was used as the eluent; the gradient ratio of acetonitrile was 17%-47%, and the elution time was 12 minutes) to obtain compound 37-P1 (2.87 mg).
  • reaction solution was concentrated to dryness under reduced pressure, and the residue was purified by preparative high-performance liquid chromatography (Boston Green ODS C18 column 5 ⁇ m silica, 30 mm diameter, 150 mm length; water (containing 0.225% formic acid) and the polarity of acetonitrile
  • the decreasing mixture was used as the eluent; the gradient ratio of acetonitrile was 17%-47%, and the elution time was 12 minutes) to obtain compound 37-P2 (2.01 mg).
  • the two isomers were further analyzed separately by the following chiral supercritical fluid chromatography analysis method.
  • reaction solution was concentrated to dryness under reduced pressure, and the residue was purified by preparative high-performance liquid chromatography (Waters Xbridge C18 column 5 ⁇ m, 25 mm diameter, 100 mm length; a mixture of water (containing 0.05% formic acid) and acetonitrile in decreasing polarity was used as The eluent (acetonitrile gradient ratio 18%-48%, elution time 12 minutes) gave the title compound (2.40 mg).
  • Example 39 2-cyclopropyl-N-(((S)-7-ethyl-7-hydroxyl-8,11-dioxo-7,8,11,13-tetrahydro-10H-[1 ,3]dioxole[4,5-g]pyrano[3',4':6,7]indoxazino[1,2-b]quinolin-14-yl-2 ,2-d 2 ) Methyl)-2-hydroxyacetamide (Compound 39, Compound 39-P1/P2)
  • Step 1 Synthesis of 1-(Benzo[d][1,3]dioxol-5-yl-2,2-d 2 )ethan-1-one (Intermediate 39-2)
  • Step 3 Synthesis of N-(6-acetylbenzo[d][1,3]dioxol-5-yl-2,2-d 2 )acetamide (Intermediate 39-4)
  • Step 6 (S)-14-(Chloromethyl)-7-ethyl-7-hydroxy-10,13-dihydro-11H-[1,3]dioxole[4,5- g]pyrano[3',4':6,7]indolazino[1,2-b]quinoline-8,11(7H)-dione-2,2-d 2 (intermediate 39 -7) Synthesis
  • Step 7 (S)-14-(Aminomethyl)-7-ethyl-7-hydroxy-10,13-dihydro-11H-[1,3]dioxole[4,5- g]pyrano[3',4':6,7]indolazino[1,2-b]quinoline-8,11(7H)-dione-2,2-d 2 (intermediate 39 -8) Synthesis
  • Step 8 2-cyclopropyl-N-(((S)-7-ethyl-7-hydroxy-8,11-dioxo-7,8,11,13-tetrahydro-10H-[1, 3]dioxole[4,5-g]pyrano[3',4':6,7]indoxazino[1,2-b]quinolin-14-yl-2, 2-d 2 ) Synthesis of methyl)-2-hydroxyacetamide (compound 39)
  • reaction solution was filtered and purified by preparative high performance liquid chromatography (Waters Xbridge C18 column 5 ⁇ m, 25 mm diameter, 100 mm length; a mixture of water (containing 0.05% formic acid) and acetonitrile in decreasing polarity as eluent (acetonitrile gradient ratio 20%-50%, elution time 12 minutes), the title compound (2.60 mg) was obtained.
  • Step 9 2-cyclopropyl-N-(((S)-7-ethyl-7-hydroxy-8,11-dioxo-7,8,11,13-tetrahydro-10H-[1, 3]dioxole[4,5-g]pyrano[3',4':6,7]indoxazino[1,2-b]quinolin-14-yl-2, 2-d 2 ) Synthesis of methyl)-2-hydroxyacetamide (compound 39-P1/P2)
  • reaction solution was concentrated to dryness under reduced pressure, and the residue was purified by preparative high-performance liquid chromatography (Waters Xbridge C18 column 5 ⁇ m, 25 mm diameter, 100 mm length; a mixture of water (containing 0.05% formic acid) and acetonitrile in decreasing polarity was used as Eluent: acetonitrile gradient ratio 15%-45%, elution time 12 minutes) to obtain compound 39-P1 (3.30 mg).
  • reaction solution was concentrated to dryness under reduced pressure, and the residue was purified by preparative high-performance liquid chromatography (Waters Xbridge C18 column 5 ⁇ m, 25 mm diameter, 100 mm length; a mixture of water (containing 0.05% formic acid) and acetonitrile in decreasing polarity was used as The eluent (acetonitrile gradient ratio 15%-45%, elution time 12 minutes) yielded compound 39-P2 (4.0 mg).
  • the two isomers were further analyzed separately by the following chiral supercritical fluid chromatography analysis method.
  • Step 1 (S)-(2-(((7-Ethyl-15-fluoro-7-hydroxy-8,11-dioxo-8,10,11,13-tetrahydro-10H-[1, 3] dioxole[4,5-g]pyrano[3',4':6,7]indoxazino[1,2-b]quinolin-14-yl)methyl )amino)-2-oxoethyl) tert-butyl carbamate (intermediate 40-1) synthesis
  • Step 2 (S)-2-amino-N-((7-ethyl-15-fluoro-7-hydroxy-8,11-dioxo-7,8,11,13-tetrahydro-10H-[ 1,3]dioxole[4,5-g]pyrano[3',4':6,7]indoxazino[1,2-b]quinolin-14-yl) Synthesis of Methyl)acetamide (Compound 40)
  • Human colorectal cancer cell line HCT116 was purchased from Kangyuan Bochuang
  • human breast cancer cell line SKBR3 was purchased from ATCC
  • human ovarian cancer cell line OVCAR3 was purchased from ATCC
  • bovine serum Gibco (U.S.)
  • bovine insulin Solarbio#I8040
  • Solarbio 96-well plate
  • Cell- Titer Glo reagent Cell- Titer Glo reagent (Promega#G7568#0000411325) was purchased
  • HCT116 cells and SKBR3 cells were cultured with McCoy's 5a medium containing 10% fetal bovine serum + 1% penicillin-streptomycin at 37°C and 5% CO 2
  • OVCAR3 cells were cultured with 20% fetal bovine serum + 2 ⁇ g/mL bovine insulin + 1% penicillin-streptomycin 1640 culture solution was cultured at 37°C and 5% CO 2 .
  • Cells in the logarithmic growth phase can be used for experiments.
  • Detection of cell proliferation activity Cell-Titer Glo reagent was used to detect the inhibitory activity of the compound on the proliferation of HCT116, SKBR3 and OVCAR3 cell lines.
  • HCT116 cells (1500 per well), SKBR3 cells (3000 per well) and OVCAR3 cells (5000 per well) were seeded in 96-well plates and cultured at 37°C and 5% CO2 for 24 hours.
  • negative control group and positive control group were set as Bottom and Top respectively.
  • the negative control group did not add cells, but only added the same volume of medium, and other operations were consistent with the experimental group; the positive control group did not add the test compound, only added the same volume of DMSO, and other operations were consistent with the experimental group.
  • % Compound inhibition 1-100%*(Signal-Bottom)/(Top-Bottom).
  • Signal represents the signal value of the experimental group
  • Bottom represents the average signal value of the negative control group
  • Top represents the average signal value of the positive control group.
  • the compound of the present disclosure exhibited strong growth inhibitory activity on HCT116 cells, SKBR3 cells and OVCAR3 cells.
  • the corresponding anti-cell proliferation activities of the disclosed compounds are specifically shown in Table 1.
  • human ovarian cancer cell line SK-OV-3 was purchased from ATCC
  • human ovarian cancer cell line PA-1 was purchased from ATCC
  • human small cell lung cancer cell line NCI-H82 was purchased from ATCC
  • human breast cancer cell line MDA- MB-231 was purchased from ATCC
  • human non-small cell lung cancer cell line A549 was purchased from ATCC
  • bovine serum Gibco#10099-141C
  • McCoy's 5a medium Gibco#16600-082
  • MEM medium Gibco#11095-080
  • 1640 Medium Gibco#A10491-01
  • DMEM Medium Gibco#11995-065
  • MEM NEAA Gibco#11140-050
  • Sodium Pyruvate Gibco#11360-070
  • Penicillin-Streptomycin Gibco#15140-122
  • 0.25% Trypsin-EDTA Gibco#25200-056
  • SK-OV-3 cells use McCoy's 5a medium containing 10% fetal bovine serum + 1% penicillin-streptomycin
  • PA-1 cells use 10% fetal bovine serum + 1% MEM NEAA + 1% acetone MEM culture fluid containing sodium bicarbonate + 1% penicillin-streptomycin
  • NCI-H82 cells and MDA-MB-231 cells both use 1640 culture medium containing 10% fetal bovine serum + 1% penicillin-streptomycin
  • A549 cells In the DMEM medium containing 10% fetal bovine serum + 1% penicillin-streptomycin, Wuzhu cells were cultured at 37°C and 5% CO 2 . Cells in the logarithmic growth phase can be used for experiments.
  • Cell-Titer Glo reagent was used to detect the inhibitory activity of the compound on the proliferation of five cell lines SK-OV-3, PA-1, NCI-H82, MDA-MB-231 and A549.
  • SK-OV-3 cells 1000 per well
  • PA-1 cells 800 per well
  • NCI-H82 cells 5000 per well
  • MDA-MB-231 cells 3000 per well
  • A549 Cells 400 cells per well
  • the compound to be tested was dissolved in DMSO, so that the concentration of the compound to be tested was 1 mM, and then the compound to be tested was diluted with DMSO and the corresponding medium gradient, and transferred to a 96-well cell plate, so that the final concentration was 300 nM at the beginning, 3-fold dilution, 9 concentration point. Culture was continued for 5 days at 37°C and 5% CO 2 . Add Cell-Titer Glo reagent to detect cell viability.
  • negative control group and positive control group were set as Bottom and Top respectively.
  • the negative control group did not add cells, but only added the same volume of medium, and other operations were consistent with the experimental group; the positive control group did not add the test compound, only added the same volume of DMSO, and other operations were consistent with the experimental group.
  • % Compound inhibition 1-100%*(Signal-Bottom)/(Top-Bottom). Signal refers to the signal value of the experimental group, Bottom refers to the average signal value of the negative control group, and Top refers to the average signal value of the positive control group.
  • the compound of the present disclosure exhibited strong growth inhibitory activity against five cell lines of PA-1, SK-OV-3, NCI-H82, MDA-MB-231 and A549.
  • the corresponding anti-cell proliferation activities of the disclosed compounds are specifically shown in Table 2.
  • Table 1 and Table 2 show that the compound of the present disclosure is effective on human colorectal cancer cell line HCT116, human breast cancer cell line SKBR3 and MDA-MB-231, human small cell lung cancer cell line NCI-H82, human non-small cell lung cancer cell line A549 And human ovarian cancer cell lines OVCAR3, PA-1, SK-OV-3 and other tumor cells simultaneously exhibited strong anti-proliferation activity, and has good effect on a variety of high-incidence and refractory tumors such as colon cancer, breast cancer, lung cancer, etc. therapeutic potential.
  • Test Example 3 Determination of Metabolic Stability of Compounds of the Disclosure in Liver Microsomes
  • the metabolic stability of the disclosed compounds in liver microsomes was determined using the following test method.
  • KH 2 PO 4 (Tianjin Guangfu Fine Chemical Research Institute 20180920)
  • Intrinsic clearance in vitro (unit: ⁇ L/min/mg protein) was calculated with the following formula:
  • CL int is the intrinsic clearance rate
  • k is the elimination rate constant
  • volume of incubation is the incubation volume ( ⁇ L)
  • amount of proteins is the protein amount (mg)
  • the disclosed compound has good liver microsomal stability, see Table 3 for details.
  • Test Example 4 Determination of Membrane Permeability and Transport Properties of Compounds of the Disclosure
  • Membrane permeability and transport properties of the disclosed compounds were determined using the following test methods.
  • HEPES Solarbio 804D049
  • penicillin/streptomycin Solarbio 20200109
  • PBS PBS
  • Fetal bovine serum (FBS) (Sigma WXBD0055V), fluorescent yellow (Sigma MKCJ3738) and NaHCO 3 (Sigma SLBZ4647)
  • HBSS Hank’s balanced salt solution
  • NEAA non-essential amino acids
  • Trpsin/EDTA Trypsin/EDTA
  • TEER value measured TEER value ( ⁇ ) ⁇ membrane area (cm 2 )
  • the resistance of the monolayer cell membrane is less than 230 ⁇ cm 2 , indicating that the monolayer cell membrane is poorly compacted and cannot be used for the test.
  • Fluorescence value was measured after the transfer experiment, and a 10 mM lucifer yellow stock solution was prepared with water, and then diluted to 100 ⁇ M with a transfer buffer solution.
  • I acceptor (I receiving end ) refers to the fluorescence density of the receiving side (0.3mL)
  • I donor (I donor ) refers to the fluorescence density of the administration side (0.1mL).
  • LY > 1.0% indicates poor monolayer membrane compactness and corresponding results will be excluded from the evaluation.
  • V A is the volume of the receiving end solution (A ⁇ B is 0.3mL, B ⁇ A is 0.1mL), Area (membrane area) is the membrane area of Transwell-96 well plate (0.143cm 2 ); incubation time is the incubation time (unit : s); [drug] acceptor ([drug] receiving end ) is the drug concentration at the receiving end; [drug] initial donor ([drug] initial, donor ) is the initial drug concentration at the administration side.
  • P app(BA) is the apparent permeability coefficient from the base to the top
  • P app(AB) is the apparent permeability from the top to the base.
  • the disclosed compound has good membrane permeability and transport properties, see Table 4 for details.
  • the protein binding rate of the disclosed compounds in human and mouse plasma was determined by the following test methods.
  • Concentration is the preparation of the buffer solution of 100mM sodium phosphate and 150mM NaCl: prepare the alkaline solution that concentration is 14.2g/L Na HPO 4 and 8.77g/L NaCl with ultrapure water, prepare concentration with ultrapure water 12.0g/L NaH 2 PO 4 and 8.77g/L NaCl acidic solution, then titrate the alkaline solution with acidic solution to pH 7.4 to prepare a buffer solution with a concentration of 100mM sodium phosphate and 150mM NaCl.
  • Preparation of the dialysis membrane Soak the dialysis membrane in ultrapure water for 60 minutes to separate the membrane into two pieces, then soak in 20% ethanol for 20 minutes, and finally soak in dialysis buffer for 20 minutes.
  • Plasma preparation Thaw the frozen plasma quickly at room temperature, then centrifuge at 4°C, 3,220g for 10 minutes to remove clots, and collect the supernatant into a new centrifuge tube. The pH of the plasma was measured and recorded, using plasma with a pH of 7-8.
  • Equilibrium dialysis step assemble the dialysis device according to the operating instructions. 120 ⁇ L of plasma samples containing 1 ⁇ M compound were added to one side of the dialysis membrane, and an equal volume of dialysate (phosphate buffered saline) was added to the other side. The experiment has two samples. The dialysis plate was sealed, placed in an incubation device, and incubated at 37° C., 5% CO 2 and about 100 rpm for 6 hours. After incubation, remove the sealant and pipette 50 ⁇ L of samples from the buffer side and plasma side of each well into different wells of a new plate.
  • dialysate phosphate buffered saline
  • the peak areas of the compounds on the buffer side and the plasma side were determined.
  • the formula for calculating the plasma protein binding rate of a compound is as follows:
  • % free rate (the buffer side of the ratio of the peak area of the compound to the peak area of the internal standard/the plasma side of the ratio of the peak area of the compound to the peak area of the internal standard) ⁇ 100%.
  • Test Example 6 Inhibition of CYP2C9, CYP2D6, and CYP3A4 Enzyme Activity by Compounds of the Disclosure
  • the inhibition of CYP2C9, CYP2D6, and CYP3A4 enzyme activities by the disclosed compounds is determined by the following test methods.
  • Substrate working solutions 120 ⁇ M diclofenac, 400 ⁇ M dextromethorphan, and 200 ⁇ M midazolam were prepared at 200 ⁇ concentrations in water, acetonitrile or acetonitrile/methanol.
  • the reduction of metabolite production in the drug-dosed group compared with the control group was compared by the ratio of the peak area of the sample to the internal standard, and the IC 50 value was calculated with Excel XLfit 5.3.1.3.
  • Remaining activity percentage ratio of metabolite peak area to internal standard peak area test substance /metabolite peak area to internal standard peak area ratio blank solvent ⁇ 100%.

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Abstract

提供了式(I)所示化合物、或其立体异构体或药学上可接受的盐、其药物组合物，以及它们在抗肿瘤方面的用途。

Description

喜树碱衍生物、其药物组合物及其应用
本公开要求2021年8月19日向中国国家知识产权局提交的，专利申请号为CN202110955364.5，发明名称为“喜树碱衍生物及其应用”；2021年12月13日向中国国家知识产权局提交的，专利申请号为CN202111515247.3，发明名称为“喜树碱衍生物及其应用”以及2022年5月12日向中国国家知识产权局提交的，专利申请号为CN202210515797.3，发明名称为“喜树碱衍生物及其应用”的中国专利申请的优先权。上述在先申请的全文通过援引整体并入本文中。
技术领域
本公开涉及一种新的喜树碱类化合物、或其立体异构体或药学上可接受的盐，含有它们的药物组合物及其作为抗肿瘤药物的用途。
背景技术
喜树碱(Camptothecin)是从中国蓝果树科植物喜树(Camptotheca acuminata)中提取获得的一种喹啉类生物碱。由于其具有显著的细胞毒活性，因此经常用于癌症治疗相关研究当中。后续相关机制研究表明，喜树碱具有抑制拓扑异构酶I的活性，其能够与拓扑异构酶I与DNA的复合物结合，形成稳定的三元复合物，从而阻碍拓扑异构酶I介导的DNA断裂，进而阻断DNA复制、转录和修复等过程，最终导致细胞周期阻滞，细胞凋亡。
早期临床显示，喜树碱存在溶解度低、化学稳定性差以及毒副作用明显等问题，最终阻碍其临床应用。后续通过对喜树碱进行改造得到的拓扑替康(topotecan)、伊立替康(irinotecan)等喜树碱类衍生物成功用于治疗卵巢癌、肺癌及结直肠癌等恶性肿瘤。尽管如此，这些临床药物仍存在溶解度低、化学稳定性差导致口服生物利用度低的问题，以及伴随有呕吐、骨髓抑制等严重临床不良反应的发生。因此，改善喜树碱类药物的理化性质、提高活性及安全性仍是目前亟待解决的问题。
发明内容
本公开提供一种式(I)所示化合物、或其立体异构体或药学上可接受的盐：
Figure PCTCN2022113499-appb-000001
其中，
R 1选自卤素、CN、C 1-C 6烷基、C 3-C 6环烷基或C 2-C 6炔基，所述C 1-C 6烷基、C 3-C 6环烷基或C 2-C 6炔基任选被R a1取代；
X 1选自CR 2或N；
R 2选自H、卤素、CN，或者R 1、R 2与它们连接的原子共同形成5-6元杂环基，所述5-6元杂环基任选被R a2取代；
R 5选自H、卤素、CN、NH 2或NO 2，或者R 1、R 5与它们连接的原子共同形成5-6元杂环基、5-6元杂芳基或C 5-C 7环烯基，所述5-6元杂环基、5-6元杂芳基或C 5-C 7环烯基任选被R a5取代；
R 3选自H、
Figure PCTCN2022113499-appb-000002
X选自NH 2或OH，R 6选自H或C 1-C 3烷基，R 7选自H、C 1-C 3烷基或者C 3-C 6环烷基，或者R 6、R 7与其连接的C原子共同形成C 3-C 6环烷基，所述C 3-C 6环烷基任选被R a3取代；
n选自1、2、3或4；
R 4选自H，或者R 4、R 7与它们连接的原子共同形成5-6元杂环基，所述5-6元杂环基任选被R a4取代；
每一个R a1、R a2、R a3、R a4、R a5独立地选自D、卤素、CN、＝O、OH、NH 2、C 1-C 3烷基、C 3-C 6环烷基或4-7元杂环基，所述OH、NH 2、C 1-C 3烷基、C 3-C 6环烷基或4-7元杂环基任选被R b取代；
每一个R b独立地选自卤素、CN、＝O、C 1-C 3烷基、OH、O(C 1-C 3烷基)、NH 2、NH(C 1-C 3烷基)或N(C 1-C 3烷基) 2；
条件是：i)当R 1选自甲基，R 2选自F时，R 3选自
Figure PCTCN2022113499-appb-000003
其中R 6选自H或C 1-C 3烷基，R 7选自H、C 1-C 3烷基或者C 3-C 6环烷基，n选自1、2、3或4；ii)当X选自NH 2时，R 5不选自H；并且iii)式(I)所示化合物不包含以下化合物：
Figure PCTCN2022113499-appb-000004
在一些实施方案中，前述式(I)所示化合物、或其立体异构体或药学上可接受的盐，其中，R 1选自卤素、CN、C 1-C 6烷基、C 3-C 6环烷基或C 2-C 6炔基，所述C 1-C 6烷基、C 3-C 6环烷基或C 2-C 6炔基任选被R a1取代；
X 1选自CR 2或N；
R 2选自H、卤素、CN，或者R 1、R 2与它们连接的原子共同形成5-6元杂环基，所述5-6元杂环基任选被R a2取代；
R 5选自H、卤素、CN或NO 2，或者R 1、R 5与它们连接的原子共同形成5-6元杂芳基或C 5-C 7环烯基，所述5-6元杂芳基或C 5-C 7环烯基任选被R a5取代；
R 3选自H、
Figure PCTCN2022113499-appb-000005
R 6选自H或C 1-C 3烷基，R 7选自H、C 1-C 3烷基或者C 3-C 6环烷基，或者R 6、R 7与其连接的C原子共同形成C 3-C 6环烷基，所述C 3-C 6环烷基任选被R a3取代；
n选自1、2、3或4；
R 4选自H，或者R 4、R 7与它们连接的原子共同形成5-6元杂环基，所述5-6元杂环基任选被R a4取代；
每一个R a1、R a2、R a3、R a4、R a5独立地选自卤素、CN、＝O、OH、NH 2、C 1-C 3烷基、C 3-C 6环烷基或4-7元杂环基，所述OH、NH 2、C 1-C 3烷基、C 3-C 6环烷基或4-7元杂环基任选被R b取代；
每一个R b独立地选自卤素、CN、＝O、C 1-C 3烷基、OH、O(C 1-C 3烷基)、NH 2、NH(C 1-C 3烷基)或N(C 1-C 3烷基) 2；
条件是：i)当R 1选自甲基，R 2选自F时，R 3选自
Figure PCTCN2022113499-appb-000006
其中R 6选自H或C 1-C 3烷基，R 7选自H、C 1-C 3烷基或者C 3-C 6环烷基，n选自1、2、3或4；并且ii)式(I)所示化合物不包含以下化合物：
Figure PCTCN2022113499-appb-000007
Figure PCTCN2022113499-appb-000008
在一些实施方案中，前述式(I)所示化合物、或其立体异构体或药学上可接受的盐，其中，
R 1选自卤素、CN、C 1-C 6烷基、C 3-C 6环烷基或C 2-C 6炔基，所述C 1-C 6烷基、C 3-C 6环烷基或C 2-C 6炔基任选被R a1取代；
X 1选自CR 2或N；
R 2选自H、卤素、CN，或者R 1、R 2与它们连接的原子共同形成5-6元杂环基，所述5-6元杂环基任选被R a2取代；
R 5选自H、卤素或CN，或者R 1、R 5与它们连接的原子共同形成5-6元杂芳基，所述5-6元杂芳基任选被R a5取代；
R 3选自H、
Figure PCTCN2022113499-appb-000009
R 6选自H或C 1-C 3烷基，R 7选自H、C 1-C 3烷基或者C 3-C 6环烷基，或者R 6、R 7与其连接的C原子共同形成C 3-C 6环烷基，所述C 3-C 6环烷基任选被R a3取代；
n选自1、2、3或4；
R 4选自H，或者R 4、R 7与它们连接的原子共同形成5-6元杂环基，所述5-6元杂环基任选被R a4取代；
每一个R a1、R a2、R a3、R a4、R a5独立地选自卤素、CN、＝O、OH、NH 2、C 1-C 3烷基、C 3-C 6环烷基或4-7元杂环基，所述OH、NH 2、C 1-C 3烷基、C 3-C 6环烷基或4-7元杂环基任选被R b取代；
每一个R b独立地选自卤素、CN、＝O、C 1-C 3烷基、OH、O(C 1-C 3烷基)、NH 2、NH(C 1-C 3烷基)或N(C 1-C 3烷基) 2；
条件是：i)当R 1选自甲基，R 2选自F时，R 3选自
Figure PCTCN2022113499-appb-000010
其中R 6选自H或C 1-C 3烷基，R 7选自H、C 1-C 3烷基或者C 3-C 6环烷基，n选自1、2、3或4；并且ii)式(I)所示化合物不包含以下化合物：
Figure PCTCN2022113499-appb-000011
Figure PCTCN2022113499-appb-000012
在一些实施方案中，前述式(I)所示化合物、或其立体异构体或药学上可接受的盐，其中，
R 1选自卤素、CN、C 1-C 6烷基、C 3-C 6环烷基或C 2-C 6炔基，所述C 1-C 6烷基、C 3-C 6环烷基或C 2-C 6炔基任选被R a1取代；
X 1选自CR 2或N；
R 2选自卤素、CN，或者R 1、R 2与它们连接的原子共同形成5-6元杂环基，所述5-6元杂环基任选被R a2取代；
R 5选自H、卤素或CN；
R 3选自H或
Figure PCTCN2022113499-appb-000013
R 6选自H，R 7选自H或者C 3-C 6环烷基，或者R 6、R 7与其连接的C原子共同形成C 3-C 6环烷基，所述C 3-C 6环烷基任选被R a3取代；
R 4选自H，或者R 4、R 7与它们连接的原子共同形成5-6元杂环基，所述5-6元杂环基任选被R a4取代；
每一个R a1、R a2、R a3、R a4独立地选自卤素、CN、＝O、OH、NH 2、C 1-C 3烷基、C 3-C 6环烷基或4-7元杂环基，所述OH、NH 2、C 1-C 3烷基、C 3-C 6环烷基或4-7元杂环基任选被R b取代；
每一个R b独立地选自卤素、CN、＝O、C 1-C 3烷基、OH、O(C 1-C 3烷基)、NH 2、NH(C 1-C 3烷基)或N(C 1-C 3烷基) 2；
条件是：i)当R 1选自甲基，R 2选自F时，R 3选自
Figure PCTCN2022113499-appb-000014
并且ii)式(I)所示化合 物不包含以下化合物：
Figure PCTCN2022113499-appb-000015
Figure PCTCN2022113499-appb-000016
在一些实施方案中，R a1、R a2、R a3、R a4、R a5独立地选自D、卤素、CN、＝O或OH。
在一些实施方案中，R a1、R a2、R a3、R a4、R a5独立地选自卤素、CN、＝O或OH。
在一些实施方案中，R a1、R a2、R a3、R a4独立地选自卤素、CN、＝O或OH。
在一些实施方案中，R a2、R a3独立地选自D。
在一些实施方案中，R 1选自卤素、C 1-C 3烷基、C 3-C 6环烷基或C 2-C 3炔基。
在一些实施方案中，R 1选自Cl、Br、甲基、环丙基或乙炔基。
在一些实施方案中，R 1选自Cl、Br或甲基。
在一些实施方案中，X 1选自N。
在一些实施方案中，X 1选自CR 2。
在一些实施方案中，R 2选自H、卤素、CN，或者R 1、R 2与它们连接的原子共同形成5-6元杂环基，所述5-6元杂环基含有1或2个氧原子作为环原子，所述5-6元杂环基任选被D原子取代。
在一些实施方案中，R 2选自H、卤素、CN，或者R 1、R 2与它们连接的原子共同形成5-6元杂环基，所述5-6元杂环基含有1或2个氧原子作为环原子。
在一些实施方案中，R 2选自卤素、CN，或者R 1、R 2与它们连接的原子共同形成5-6元杂环基，所述5-6元杂环基含有1或2个氧原子作为环原子。
在一些实施方案中，R 2选自H和卤素，或者R 1、R 2与它们连接的原子共同形成5-6元杂环基，所述5-6元杂环基含有1或2个氧原子作为环原子。
在一些实施方案中，R 2选自H、F或Cl，或者R 1、R 2与它们连接的原子共同形成
Figure PCTCN2022113499-appb-000017
Figure PCTCN2022113499-appb-000018
在一些实施方案中，R 2选自H、F或Cl，或者R 1、R 2与它们连接的原子共同形成
Figure PCTCN2022113499-appb-000019
Figure PCTCN2022113499-appb-000020
在一些实施方案中，R 2选自F或Cl，或者R 1、R 2与它们连接的原子共同形成
Figure PCTCN2022113499-appb-000021
Figure PCTCN2022113499-appb-000022
在一些实施方案中，R 1选自甲基，R 2选自F或Cl。
在一些实施方案中，R 1选自甲基，R 2选自Cl。
在一些实施方案中，R 1选自Cl、Br、环丙基或乙炔基，R 2选自F。
在一些实施方案中，R 5选自H、卤素、NH 2或NO 2，或者R 1、R 5与它们连接的原子共同形成5-6元杂芳基或C 5-C 6环烯基，所述5-6元杂芳基或C 5-C 6环烯基任选被R a5取代。
在一些实施方案中，R 5选自H、卤素或NO 2，或者R 1、R 5与它们连接的原子共同形成5-6元杂芳基或C 5-C 6环烯基，所述5-6元杂芳基或C 5-C 6环烯基任选被R a5取代。
在一些实施方案中，R 5选自H或卤素，或者R 1、R 5与它们连接的原子共同形成5-6元杂芳基。
在一些实施方案中，R 5选自H、卤素或NO 2。
在一些实施方案中，R 5选自H或卤素。
在一些实施方案中，R 5选自H、Cl、F、NH 2或NO 2，或者R 1、R 5与它们连接的原子共同形成
Figure PCTCN2022113499-appb-000023
在一些实施方案中，R 5选自H、Cl、F或NO 2，或者R 1、R 5与它们连接的原子共同形成
Figure PCTCN2022113499-appb-000024
在一些实施方案中，R 5选自H或F，或者R 1、R 5与它们连接的原子共同形成
Figure PCTCN2022113499-appb-000025
在一些实施方案中，R 5选自H、Cl、F或NO 2。
在一些实施方案中，R 5选自H或F。
在一些实施方案中，R 3选自H。
在一些实施方案中，R 3选自
Figure PCTCN2022113499-appb-000026
在一些实施方案中，R 3选自
Figure PCTCN2022113499-appb-000027
X选自NH 2或OH，R 6选自H或甲基，R 7选自H、甲基、异丙基或任选被D原子取代的环丙基。
在一些实施方案中，R 3选自
Figure PCTCN2022113499-appb-000028
X选自NH 2或OH，R 6选自H或甲基，R 7选自H、甲基、异丙基或环丙基。
在一些实施方案中，R 3选自
Figure PCTCN2022113499-appb-000029
R 6选自H或甲基，R 7选自H、甲基、环丙基或异丙基。
在一些实施方案中，R 3选自
Figure PCTCN2022113499-appb-000030
R 6选自H或甲基，R 7选自H、甲基、环丙基或异丙基。
在一些实施方案中，R 3选自
Figure PCTCN2022113499-appb-000031
R 6选自H，R 7选自H或者环丙基。
在一些实施方案中，R 3选自
Figure PCTCN2022113499-appb-000032
R 6选自H，R 7选自H或者环丙基。
在一些实施方案中，R 3选自
Figure PCTCN2022113499-appb-000033
R 6、R 7与其连接的C原子共同形成C 3-C 6环烷基。
在一些实施方案中，R 3选自
Figure PCTCN2022113499-appb-000034
R 6、R 7与其连接的C原子共同形成环丙基。
在一些实施方案中，R 1选自甲基，X 1选自CF和CCl，R 3选自
Figure PCTCN2022113499-appb-000035
R 6、R 7与其连接的C原子共同形成C 3-C 6环烷基。
在一些实施方案中，R 1选自甲基，X 1选自CF，R 3选自
Figure PCTCN2022113499-appb-000036
R 6、R 7与其连接的C原子共同形成C 3-C 6环烷基。
在一些实施方案中，R 1选自甲基，R 2选自F或Cl，R 3选自
Figure PCTCN2022113499-appb-000037
在一些实施方案中，R 1选自甲基，R 2选自F，R 3选自
Figure PCTCN2022113499-appb-000038
在一些实施方案中，R 4选自H。
在一些实施方案中，R 4、R 7与其各自连接的原子共同形成5-6元杂环基。
在一些实施方案中，R 4、R 7与其各自连接的原子共同形成5元杂环基。
在一些实施方案中，R 3选自H或
Figure PCTCN2022113499-appb-000039
R 4选自H。
在一些实施方案中，R 3、R 4均选自H。
在一些实施方案中，R 4选自H，R 3选自
Figure PCTCN2022113499-appb-000040
R 6选自H，R 7选自H或者环丙基，或者R 6、R 7与其连接的C原子共同形成环丙基。
在一些实施方案中，R 3选自
Figure PCTCN2022113499-appb-000041
R 6选自H，R 4、R 7与其各自连接的原子共同形成5-6元杂环基。
在一些实施方案中，R 3选自
Figure PCTCN2022113499-appb-000042
R 6选自H，R 4、R 7与其各自连接的原子共同形成5元杂环基。
在一些实施方案中，R 1、R 2与其各自连接的原子共同形成
Figure PCTCN2022113499-appb-000043
R 3选自H、
Figure PCTCN2022113499-appb-000044
R 4选自H，R 6选自H，R 7选自H或任选被D原子取代的环丙基，或者R 6、R 7与其连接的C原子共同形成C 3-C 6环烷基。
在一些实施方案中，R 1、R 2与其各自连接的原子共同形成
Figure PCTCN2022113499-appb-000045
R 3选自
Figure PCTCN2022113499-appb-000046
R 4选自H，R 6选自H，R 7选自任选被D原子取代的环丙基，或者R 6、R 7与其连接的C原子共同形成环丙基。
在一些实施方案中，R 1、R 2与其各自连接的原子共同形成
Figure PCTCN2022113499-appb-000047
R 3选自
Figure PCTCN2022113499-appb-000048
R 4选自H，R 6选自H，R 7选自环丙基，或者R 6、R 7与其连接的C原子共同形成C 3-C 6环烷基。
在一些实施方案中，R 1、R 2与其各自连接的原子共同形成
Figure PCTCN2022113499-appb-000049
R 3选自H、
Figure PCTCN2022113499-appb-000050
Figure PCTCN2022113499-appb-000051
R 4选自H，R 6选自H，R 7选自H或环丙基，或者R 6、R 7与其连接的C原子共同形成C 3-C 6环烷基。
在一些实施方案中，R 1、R 2与其各自连接的原子共同形成
Figure PCTCN2022113499-appb-000052
R 3选自
Figure PCTCN2022113499-appb-000053
R 4选自H，R 6选自H，R 7选自H或环丙基，或者R 6、R 7与其连接的C原子共同形成C 3-C 6环烷基。
在一些实施方案中，R 1、R 5与它们连接的原子共同形成5-6元杂芳基或C 5-C 6环烯基，R 3选自
Figure PCTCN2022113499-appb-000054
在一些实施方案中，R 1、R 5与它们连接的原子共同形成5-6元杂芳基，R 3选自
Figure PCTCN2022113499-appb-000055
Figure PCTCN2022113499-appb-000056
在一些实施方案中，R 1、R 5与它们连接的原子共同形成5-6元杂芳基，R 3选自
Figure PCTCN2022113499-appb-000057
在一些实施方案中，R 1、R 5与它们连接的原子共同形成5-6元杂芳基，R 3选自
Figure PCTCN2022113499-appb-000058
在一些实施方案中，R 2选自H，R 1、R 5与它们连接的原子共同形成5-6元杂芳基或C 5-C 6
环烯基。
在一些实施方案中，R 2选自H，R 1、R 5与它们连接的原子共同形成C 5-C 6环烯基。
在一些实施方案中，R 2选自H，R 1、R 5与它们连接的原子共同形成5-6元杂芳基。
在一些实施方案中，R 2选自H，R 1、R 5与它们连接的原子共同形成5-6元杂芳基，R 3选自
Figure PCTCN2022113499-appb-000059
在一些实施方案中，R 3选自H、
Figure PCTCN2022113499-appb-000060
其中X选自NH 2或OH，R 6选自H或甲基，R 7选自H、甲基、异丙基或任选被D原子取代的环丙基；R 4选自H，或者R 4、R 7与其各自连接的原子共同形成5元杂环基。
在一些实施方案中，R 3选自H、
Figure PCTCN2022113499-appb-000061
其中X选自NH 2或OH，R 6选自H或甲基，R 7选自H、甲基、异丙基或环丙基；R 4选自H。
在一些实施方案中，结构单元
Figure PCTCN2022113499-appb-000062
选自
Figure PCTCN2022113499-appb-000063
Figure PCTCN2022113499-appb-000064
在一些实施方案中，结构单元
Figure PCTCN2022113499-appb-000065
选自
Figure PCTCN2022113499-appb-000066
Figure PCTCN2022113499-appb-000067
在一些实施方案中，结构单元
Figure PCTCN2022113499-appb-000068
选自
Figure PCTCN2022113499-appb-000069
Figure PCTCN2022113499-appb-000070
Figure PCTCN2022113499-appb-000071
在一些实施方案中，结构单元
Figure PCTCN2022113499-appb-000072
选自
Figure PCTCN2022113499-appb-000073
Figure PCTCN2022113499-appb-000074
在一些实施方案中，结构单元
Figure PCTCN2022113499-appb-000075
选自
Figure PCTCN2022113499-appb-000076
Figure PCTCN2022113499-appb-000077
在一些实施方案中，R 1选自甲基，X 1选自CF，结构单元
Figure PCTCN2022113499-appb-000078
选自
Figure PCTCN2022113499-appb-000079
在一些实施方案中，R 1、R 2与它们连接的原子共同形成
Figure PCTCN2022113499-appb-000080
结构单元
Figure PCTCN2022113499-appb-000081
选自
Figure PCTCN2022113499-appb-000082
在一些实施方案中，R 1、R 2与其各自连接的原子共同形成
Figure PCTCN2022113499-appb-000083
结构单元
Figure PCTCN2022113499-appb-000084
选 自
Figure PCTCN2022113499-appb-000085
在一些实施方案中，R 1、R 2与其各自连接的原子共同形成
Figure PCTCN2022113499-appb-000086
结构单元
Figure PCTCN2022113499-appb-000087
选自
Figure PCTCN2022113499-appb-000088
在一些实施方案中，R 1、R 5与它们连接的原子共同形成
Figure PCTCN2022113499-appb-000089
结构单元
Figure PCTCN2022113499-appb-000090
选自
Figure PCTCN2022113499-appb-000091
在一些实施方案中，R 1、R 5与它们连接的原子共同形成
Figure PCTCN2022113499-appb-000092
结构单元
Figure PCTCN2022113499-appb-000093
选自
Figure PCTCN2022113499-appb-000094
在一些实施方案中，式(I)所示化合物、或其立体异构体或药学上可接受的盐选自式(Ia)所示化合物、或其立体异构体或药学上可接受的盐：
Figure PCTCN2022113499-appb-000095
其中，R 1、R 2、R 3、R 4、R 5如上文定义。
应理解，在涉及式(Ia)的权利要求11中，当权利要求11引用前述权利要求x时，所述式(Ia)中的R 1、R 2、R 3、R 4、R 5如权利要求x定义。例如，当权利要求11引用前述权利要求1时，所述式(Ia)中的R 1、R 2、R 3、R 4、R 5如权利要求1定义；当权利要求11引用前述权利要求2时，所述式(Ia)中的R 1、R 2、R 3、R 4、R 5如权利要求2定义，以此类推。
在一些实施方案中，式(I)所示化合物、或其立体异构体或药学上可接受的盐选自式(Ib)所示化合物、或其立体异构体或药学上可接受的盐：
Figure PCTCN2022113499-appb-000096
其中，R 1、R 3、R 4、R 5如上文定义。
应理解，在涉及式(Ib)的权利要求12中，当权利要求12引用前述权利要求x时，所述式(Ib)中的R 1、R 3、R 4、R 5如权利要求x定义。例如，当权利要求12引用前述权利要求1时，所述式(Ib)中的R 1、R 3、R 4、R 5如权利要求1定义；当权利要求12引用前述权利要求2时，所述式(Ib)中的R 1、R 3、R 4、R 5如权利要求2定义，以此类推。
本公开提供一种式(II)所示化合物、或其立体异构体或药学上可接受的盐：
Figure PCTCN2022113499-appb-000097
其中，
R 8选自羟基、卤素、CN、C 1-C 6烷基、C 3-C 6环烷基或C 2-C 6炔基；
X 2选自CR 9或N；
R 9选自H、卤素、CN，或者R 8、R 9与其各自连接的原子共同形成5-6元杂环基；
R 10、R 11独立地选自H、C 3-C 6环烷基，或者R 10、R 11与其连接的C原子共同形成C 3-C 6环烷基。
在一些实施方案中，R 8选自羟基、卤素或CN。
在一些实施方案中，R 8选自羟基。
在一些实施方案中，X 2选自CH。
在一些实施方案中，R 10、R 11均选自H。
在不冲突的情况下，应理解上述实施方案可以任意组合，形成包括所组合的实施方案的特征的技术方案。这样的组合的技术方案在本发明的范围内。在一些实施方案中，所述式(I)或式(II)所示的化合物、或其立体异构体或药学上可接受的盐，选自以下化合物、或其立体异构体或药学上可接受的盐：
Figure PCTCN2022113499-appb-000098
Figure PCTCN2022113499-appb-000099
Figure PCTCN2022113499-appb-000100
Figure PCTCN2022113499-appb-000101
Figure PCTCN2022113499-appb-000102
本公开还提供药物组合物，其包含式(I)或式(II)所示化合物、或其立体异构体或药学上可接受的盐和药学上可接受的辅料。
进一步，本公开提供式(I)或式(II)所示的化合物、或其立体异构体或药学上可接受的盐，或其药物组合物在制备用于预防或者治疗拓扑异构酶I相关疾病的药物中的用途。
进一步，本公开提供式(I)或式(II)所示的化合物、或其立体异构体或药学上可接受的盐，或其药物组合物在预防或者治疗拓扑异构酶I相关疾病中的用途。
进一步，本公开提供用于预防或者治疗拓扑异构酶I相关疾病的式(I)或式(II)化合物、或其立体异构体或药学上可接受的盐，或其药物组合物。
本公开还提供治疗拓扑异构酶I相关疾病的方法，该方法包括给以患者治疗上有效剂量的式(I)或式(II)化合物、或其立体异构体或药学上可接受的盐，或者其药物组合物，或者包含本公开所述的式(I)或式(II)化合物、或其立体异构体或药学上可接受的盐的药物 制剂。
在一些实施方案中，所述的拓扑异构酶I相关疾病包括但不限于癌症。
进一步，本公开提供式(I)或式(II)所示的化合物、或其立体异构体或药学上可接受的盐，或其药物组合物在制备用于抗肿瘤药物中的用途。
进一步，本公开提供式(I)或式(II)所示的化合物、或其立体异构体或药学上可接受的盐，或其药物组合物在抗肿瘤方面的用途。
进一步，本公开提供用于抗肿瘤的式(I)或式(II)化合物、或其立体异构体或药学上可接受的盐，或其药物组合物。
本公开还提供治疗肿瘤的方法，该方法包括给以患者治疗上有效剂量的式(I)或式(II)化合物、或其立体异构体或药学上可接受的盐，或者其药物组合物，或者包含本公开所述的式(I)或式(II)化合物、或其立体异构体或药学上可接受的盐的药物制剂。
术语定义和说明
除非另有说明，本公开中所用的术语具有下列含义，本公开中记载的基团和术语定义，包括其作为实例的定义、示例性的定义、优选的定义、表格中记载的定义、实施例中具体化合物的定义等，可以彼此之间任意组合和结合。一个特定的术语在没有特别定义的情况下不应该被认为是不确定的或不清楚的，而应该按照本领域普通的含义去理解。当本文中出现商品名时，意在指代其对应的商品或其活性成分。
本文中
Figure PCTCN2022113499-appb-000103
表示连接位点。
本文中消旋体或者对映体纯的化合物的图示法来自Maehr，J.Chem.Ed.1985，62:114-120。除非另有说明，用楔形键和虚楔键
Figure PCTCN2022113499-appb-000104
表示一个立体中心的绝对构型，用黑实键和虚键
Figure PCTCN2022113499-appb-000105
表示一个立体中心的相对构型(如脂环化合物的顺反构型)。
术语“互变异构体”是指因分子中某一原子在两个位置迅速移动而产生的官能团异构体。本公开化合物可表现出互变异构现象。互变异构的化合物可以存在两种或多种可相互转化的种类。互变异构体一般以平衡形式存在，尝试分离单一互变异构体时通常产生一种混合物，其理化性质与化合物的混合物是一致的。平衡的位置取决于分子内的化学特性。例如，在很多脂族醛和酮如乙醛中，酮型占优势；而在酚中，烯醇型占优势。本公开包含化合物的所有互变异构形式。
术语“立体异构体”是指由分子中原子在空间上排列方式不同所产生的异构体，包括顺反异构体、对映异构体和非对映异构体。
本公开的化合物可以具有不对称原子如碳原子、硫原子、氮原子、磷原子或不对称双键，因此本公开的化合物可以存在特定的几何或立体异构体形式。特定的几何或立体异构体形式可以是顺式和反式异构体、E型和Z型几何异构体、(-)-和(+)-对映体、(R)-和(S)-对映体、非对映异构体、(D)-异构体、(L)-异构体，以及其外消旋混合物或其它混合物，例如对映异构体或非对映体富集的混合物，以上所有这些异构体以及它们的混合物都属于本公开化合物的定义范围之内。烷基等取代基中可存在另外的不对称碳原子、不对称硫原子、不对称氮原子或不对称磷原子，所有取代基中涉及到的这些异构体以及它们的混合物，也均包括在本公开化合物的定义范围之内。本公开的含有不对称原子的化合物可以以光学活性纯的形式或外消旋形式被分离出来，光学活性纯的形式可以从外消旋混合物拆分，或通过使用手性原料或手性试剂合成。
术语“被取代”是指特定原子上的任意一个或多个氢原子被取代基取代，只要特定原子的价态是正常的并且取代后的化合物是稳定的。当取代基为氧代(即＝O)时，意味着两个氢原子被取代，氧代不会发生在芳香基上。
术语“任选”或“任选地”是指随后描述的事件或情况可以发生或不发生，该描述包括发生 所述事件或情况和不发生所述事件或情况。例如，乙基“任选”被卤素取代，指乙基可以是未被取代的(CH 2CH 3)、单取代的(如CH 2CH 2F、CH 2CH 2Cl等)、多取代的(如CHFCH 2F、CH 2CHF 2、CHFCH 2Cl、CH 2CHCl 2等)或完全被取代的(CF 2CF 3、CF 2CCl 3、CCl 2CCl 3等)。本领域技术人员可理解，对于包含一个或多个取代基的任何基团，不会引入任何在空间上不可能存在和/或不能合成的取代或取代模式。
当任何变量(例如R a、R b)在化合物的组成或结构中出现一次以上时，其在每一种情况下的定义都是独立的。例如，如果一个基团被2个R b所取代，则每个R b都有独立的选项。
当一个连接基团的数量为0时，比如-(CH 2) 0-，表示该连接基团为键。
当其中一个变量选自化学键或不存在时，表示其连接的两个基团直接相连，比如A-L-Z中L代表键时表示该结构实际上是A-Z。
当本文中涉及到的连接基团若没有指明其连接方向，则其连接方向是任意的。例如当结构单元
Figure PCTCN2022113499-appb-000106
中的L 1选自“C 1-C 3亚烷基-O”时，此时L 1既可以按照与从左到右的读取顺序相同的方向连接环Q和R 1构成“环Q-C 1-C 3亚烷基-O-R 1”，也可以按照从左到右的读取顺序相反的方向连接环Q和R 1构成“环Q-O-C 1-C 3亚烷基-R 1”。
本文中的C m-C n，是指具有m-n范围中的整数个碳原子。例如“C 1-C 10”是指该基团可具有1个碳原子、2个碳原子、3个碳原子、4个碳原子、5个碳原子、6个碳原子、7个碳原子、8个碳原子、9个碳原子或10个碳原子。
术语“烷基”是指通式为C nH 2n+1的烃基，该烷基可以是直链或支链的。术语“C 1-C 6烷基”应理解为表示具有1、2、3、4、5或6个碳原子的直链或支链饱和烃基。所述烷基包括但不限于甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、异丙基、异丁基、仲丁基、叔丁基、异戊基、2-甲基丁基、1-甲基丁基、1-乙基丙基、1，2-二甲基丙基、新戊基、1，1-二甲基丙基、4-甲基戊基、3-甲基戊基、2-甲基戊基、1-甲基戊基、2-乙基丁基、1-乙基丁基、3，3-二甲基丁基、2，2-二甲基丁基、1，1-二甲基丁基、2，3-二甲基丁基、1，3-二甲基丁基或1，2-二甲基丁基等；术语“C 1-C 3烷基”指含有1至3个碳原子的烷基，例如甲基、乙基、正丙基、异丙基。
本文所述“C 1-C 6烷基”可以进一步包含“C 1-C 3烷基”。
术语“炔基”是指由碳原子和氢原子组成的直链或支链的具有至少一个三键的不饱和脂肪族烃基。例如，术语“C 2-C 6炔基”应理解为直链或支链的烃基，其包含一个或多个三键并且具有2、3、4、5或6个碳原子。“C 2-C 6炔基”的实例包括但不限于乙炔基(-C≡CH)、丙-1-炔基(1-丙炔基、-C≡CCH 3)、丙-2-炔基(-CH 2C≡CH)、丁-1-炔基、丁-2-炔基或丁-3-炔基。“C 2-C 6炔基”可以包含“C 2-C 3炔基”，“C 2-C 3炔基”实例包括乙炔基(-C≡CH)、丙-1-炔基(1-丙炔基、-C≡CCH 3)、丙-2-炔基(-CH 2C≡CH)。
术语“环烷基”指完全饱和的且以单环、稠环、桥环或螺环等形式存在的碳环基。术语“C 3-C 6环烷基”是指具有3、4、5或6个环碳原子的环烷基，具体实例包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基等。
术语“环烯基”是指不完全饱和的具有至少一个碳-碳双键且以单环、稠环、桥环或螺环等形式存在的非芳香族碳环基。除非另有指示，该碳环通常为5至8元环。术语“C 5-C 7环烯基”是指环原子数为5、6或7的环烯基，具体实例包括但不限于环戊烯基、环戊二烯基、环己烯基、环己二烯基、环庚烯基或环庚二烯基等。术语“C 5-C 7环烯基”可以包含“C 5-C 6环烯基”等范围。术语“C 5-C 6环烯基”是指环原子数为5或6的环烯基，具体实例包括但不限于环戊烯基、环戊二烯基、环己烯基、环己二烯基等。
术语“杂环基”是指完全饱和的或部分饱和的单环、稠环、螺环或桥环基团，其环原子中含有1-5个(例如1-3个或1-2个)杂原子或杂原子团(即含有杂原子的原子团)，所述“杂原子或杂原子团”包括但不限于氮原子(N)、氧原子(O)、硫原子(S)、磷原子(P)、硼原子(B)、-S(＝O) 2-、-S(＝O)-、-P(＝O) 2-、-P(＝O)-、-NH-、-S(＝O)(＝NH)-、-C(＝O)NH-或-NHC(＝O)NH-等。术语“4-7元杂环基”指环原子数目为4、5、6或7的杂环基，且其环原子中含有1-3个独立选 自上文所述的杂原子或杂原子团。其中，4元杂环基的实例包括但不限于氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基；5元杂环基的实例包括但不限于四氢呋喃基、二氧杂环戊烯基、吡咯烷基、咪唑烷基、吡唑烷基、吡咯啉基、4,5-二氢噁唑或2,5-二氢-1H-吡咯基；6元杂环基的实例包括但不限于四氢吡喃基、哌啶基、吗啉基、二噻烷基、硫代吗啉基、哌嗪基、三噻烷基、四氢吡啶基或4H-[1,3,4]噻二嗪基；7元杂环基的实例包括但不限于二氮杂环庚烷基。“4-7元杂环基”可以包含“4-7元杂环烷基”、“5-6元杂环基”、“5-6元杂环烷基”等范围。
术语“5-6元杂芳基”指具有5或6个环原子的芳族环基，且其包含1-3个，例如1-2个独立选自N、O和S的杂原子。5-6元杂芳基的实例包括但不限于噻吩基、呋喃基、吡咯基、噁唑基、噻唑基、咪唑基、吡唑基、异噁唑基、异噻唑基、噁二唑基、三唑基、噻二唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基或三嗪基等。
术语“卤”或“卤素”是指氟、氯、溴和碘。
术语“治疗有效量”意指(i)治疗特定疾病、病况或障碍，(ii)减轻、改善或消除特定疾病、病况或障碍的一种或多种症状，或(iii)延迟本文中所述的特定疾病、病况或障碍的一种或多种症状发作的本公开化合物的用量。构成“治疗有效量”的本公开化合物的量取决于该化合物、疾病状态及其严重性、给药方式以及待被治疗的哺乳动物的年龄而改变，但可例行性地由本领域技术人员根据其自身的知识及本公开内容而确定。
术语“预防”意为将本公开所述化合物或制剂进行给药以预防疾病或与所述疾病相关的一个或多个症状，且包括预防疾病或疾病状态在个体(例如哺乳动物)中出现，特别是当这类个体(例如哺乳动物)易患有该疾病状态，但尚未被诊断为已患有该疾病状态时。
术语“药学上可接受的”，是针对那些化合物、材料、组合物和/或剂型而言，它们在可靠的医学判断的范围之内，适用于与人类和动物的组织接触使用，而没有过多的毒性、刺激性、过敏性反应或其它问题或并发症，与合理的利益/风险比相称。
术语“药学上可接受的盐”是指药学上可接受的酸或碱的盐，包括化合物与无机酸或有机酸形成的盐，以及化合物与无机碱或有机碱形成的盐。
术语“药物组合物”是指一种或多种本公开的化合物或其盐与药学上可接受的辅料组成的混合物。药物组合物的目的是有利于对有机体给予本公开的化合物。
术语“药学上可接受的辅料”是指对有机体无明显刺激作用，而且不会损害该活性化合物的生物活性及性能的那些辅料。合适的辅料是本领域技术人员熟知的，例如碳水化合物、蜡、水溶性和/或水可膨胀的聚合物、亲水性或疏水性材料、明胶、油、溶剂、水等。
术语“患者”包括哺乳动物和非哺乳动物。哺乳动物的实例包括但不限于哺乳动物纲的任何成员：人，非人的灵长类动物(例如黑猩猩和其它猿类和猴)；家畜，例如牛、马、绵羊、山羊、猪；家养动物，例如兔、狗和猫；实验室动物，包括啮齿类动物，例如大鼠、小鼠和豚鼠等。非人哺乳动物的实例包括但不限于鸟类和鱼类等。在本文提供的一个有关方法和组合物的实施方案中，所述哺乳动物为人。术语“患者”和“个体”可互换地使用。
词语“包括(comprise)”或“包含(comprise)”及其英文变体例如comprises或comprising应理解为开放的、非排他性的意义，即“包括但不限于”。
本公开还包括与本文中记载的那些相同的，但一个或多个原子被原子量或质量数不同于自然中通常发现的原子量或质量数的原子置换的同位素标记的本公开化合物。可结合到本公开化合物的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧、磷、硫、氟、碘和氯的同位素，诸如分别为 2H、 3H、 11C、 13C、 14C、 13N、 15N、 15O、 17O、 18O、 31P、 32P、 35S、 18F、 123I、 125I和 36Cl等。
某些同位素标记的本公开化合物(例如用 3H及 14C标记的那些)可用于化合物和/或底物组织分布分析中。氚化(即 3H)和碳-14(即 14C)同位素对于由于它们易于制备和可检测性是尤其优选的。正电子发射同位素，诸如 15O、 13N、 11C和 18F可用于正电子发射断层扫描(PET)研究以测定底物占有率。通常可以通过与公开于下文的方案和/或实施例中的那些类似的下列程序，通过同位素标记试剂取代未经同位素标记的试剂来制备同位素标记的本公开化合物。
本公开的药物组合物可通过将本公开的化合物与适宜的药学上可接受的辅料组合而制 备，例如可配制成固态、半固态、液态或气态制剂，如片剂、丸剂、胶囊剂、粉剂、颗粒剂、膏剂、乳剂、悬浮剂、栓剂、注射剂、吸入剂、凝胶剂、微球及气溶胶等。
给予本公开化合物、或其立体异构体或药学上可接受的盐或其药物组合物的典型途径包括但不限于口服、直肠、局部、吸入、肠胃外、舌下、阴道内、鼻内、眼内、腹膜内、肌内、皮下、静脉内给药。
本公开的药物组合物可以采用本领域众所周知的方法制造，如常规的混合法、溶解法、制粒法、乳化法、冷冻干燥法等。
在一些实施方案中，药物组合物是口服形式。对于口服给药，可以通过将活性化合物与本领域熟知的药学上可接受的辅料混合，来配制该药物组合物。这些辅料能使本公开的化合物被配制成片剂、丸剂、锭剂、糖衣剂、胶囊剂、液体、凝胶剂、浆剂、悬浮剂等，用于对患者的口服给药。
可以通过常规的混合、填充或压片方法来制备固体口服组合物。例如，可通过下述方法获得：将所述的活性化合物与固体辅料混合，任选地碾磨所得的混合物，如果需要则加入其它合适的辅料，然后将该混合物加工成颗粒，得到了片剂或糖衣剂的核心。适合的辅料包括但不限于：粘合剂、稀释剂、崩解剂、润滑剂、助流剂、甜味剂或矫味剂等。
药物组合物还可适用于肠胃外给药，如合适的单位剂型的无菌溶液剂、混悬剂或冻干产品。
本文所述的通式Ⅰ化合物的所有施用方法中，每天给药的剂量为0.01到200mg/kg体重，优选为0.05到50mg/kg体重，更优选0.1到30mg/kg体重，以单独或分开剂量的形式。
具体实施方式
下面通过实施例对本公开方案进行详细描述，但并不意味着对本公开任何不利限制。本文已经详细地描述了本公开方案，其中也公开了其具体实施例方式，对本领域的技术人员而言，在不脱离本发明精神和范围的情况下针对本公开具体实施方式进行各种改变和改进将是显而易见的。本公开所使用的所有试剂是市售的，无需进一步纯化即可使用。
除非另作说明，混合溶剂表示的比例是体积混合比例。
除非另作说明，否则，％是指wt％。
化合物经手工或
Figure PCTCN2022113499-appb-000107
软件命名，市售化合物采用供应商目录名称。
化合物的结构是通过核磁共振(NMR)和/或质谱(MS)来确定的。NMR位移的单位为10 -6(ppm)。NMR测定的溶剂为氘代二甲基亚砜、氘代氯仿、氘代甲醇等，内标为四甲基硅烷(TMS)；“IC 50”指半数抑制浓度，指达到最大抑制效果一半时的浓度。
下文的洗脱剂或流动相可由两种或多种溶剂形成混合的洗脱剂或流动相，其比值为各溶剂的体积比，如“0～10％甲醇/二氯甲烷”表示梯度洗脱过程中，混合洗脱剂中的甲醇与二氯甲烷的体积用量比为0:100～10:100。
实施例1、(S)-N-((8-乙基-8-羟基-9,12-二氧代-2,3,8,9,12,14-六氢-11H-[1,4]二噁己环并[2,3-g]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-15-基)甲基)-2-羟基乙酰胺(化合物1)
Figure PCTCN2022113499-appb-000108
步骤1：1-(7-氨基-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁己环-6-基)-2-氯乙烷-1-酮(中间体1-2)的合成
将反应物1-1(500mg,3.31mmol)溶于1,2-二氯乙烷(3mL)中，反应液降温至0℃，向其中加入三氯化硼(1M,2.65mL)和三氯化铝(573.36mg，4.30mmol)，反应液于氮气保护下0℃向其中加入氯乙腈(299.67mg,3.97mmol)，反应液于氮气保护下90℃搅拌16h。LC-MS检测反应完毕。待反应冷却至室温，依次加入冰水(30mL)和1N HCl(10mL)，然后搅拌30min。向反应液中加入二氯甲烷(30mL*3)萃取3遍，合并有机相后用饱和食盐水(30mL)洗涤，洗涤后的有机相用适量无水硫酸钠干燥。减压浓缩至干，粗品经制备薄层色谱法(二氧化硅，石油醚：乙酸乙酯＝9:1)得标题化合物(210mg)。
MS m/z(ESI):228.0[M+H] +。
步骤2：(S)-15-(氯甲基)-8-乙基-8-羟基-2,3,11,14-四氢-12H-[1,4]二噁己环并[2,3-g]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-9,12(8H)-二酮(中间体1-4)的合成
将中间体1-2(100mg,439.28μmol)和中间体1-3(115.64mg,439.28μmol)溶于无水甲苯(3mL)中，向其中加入对甲苯磺酸吡啶盐(PPTS,22.08mg,87.86μmol)，反应液于氮气保护下100℃搅拌16h。LC-MS检测反应完毕。待反应冷却至室温，反应液过滤，滤饼用乙醇(5mL*2)洗涤得标题化合物粗品(130mg)。
MS m/z(ESI):455.1[M+H] +。
步骤3：(S)-15-(叠氮甲基)-8-乙基-8-羟基-2,3,11,14-四氢-12H-[1,4]二噁己环并[2,3-g]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-9,12(8H)-二酮(中间体1-5)的合成
将中间体1-4(120mg,263.82μmol)溶于二甲亚砜(1mL)中，向其中加入叠氮化钠(25.73mg,395.73μmol)，反应液于氮气保护下25℃搅拌3h。LC-MS检测反应完毕。向其中加入冰水(2mL)搅拌0.5h，过滤得标题化合物粗品(90mg)。
MS m/z(ESI):462.1[M+H] +。
步骤4：(S)-15-(氨基甲基)-8-乙基-8-羟基-2,3,11,14-四氢-12H-[1,4]二噁己环并[2,3-g]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-9,12(8H)-二酮(中间体1-6)的合成
将中间体1-5(90mg,195.05μmol)溶于无水甲苯(1mL)中，向其中加入亚磷酸三乙酯(81.02mg,487.62μmol)，反应液于氮气保护下100℃搅拌3h。反应液降温至25℃，向其中加入盐酸甲醇溶液(0.5mL)，反应液于氮气保护下85℃搅拌16h。LC-MS检测反应完毕。待反应冷却至室温，过滤得标题化合物(18mg)。
MS m/z(ESI):436.1[M+H] +。
步骤5：(S)-N-((8-乙基-8-羟基-9,12-二氧代-2,3,8,9,12,14-六氢-11H-[1,4]二噁己环并[2,3-g]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-15-基)甲基)-2-羟基乙酰胺(化合物1)的合成
将中间体1-6(18mg,41.34μmol)和2-羟基乙酸(15.72mg,206.69μmol)溶于无水 N,N-二甲基甲酰胺(1mL)，向其中加入2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU)(23.58mg,62.01μmol)和N,N-二异丙基乙胺(DIEA)(16.03mg，124.02μmol)，反应液于25℃搅拌3h。LC-MS检测反应完毕。反应液过滤，经制备高效液相色谱纯化(YMC-Actus Triart C18柱5μm二氧化硅，25mm直径，100mm长度；用水(含有0.05％甲酸)和乙腈的极性递减的混合物作为洗脱液(乙腈梯度比例10％-30％,洗脱时间12分钟)得标题化合物(7mg)。
MS m/z(ESI):494.1[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝8.69(t,J＝6.0Hz,1H),7.92(s,1H),7.56(s,1H),7.26(s,1H),6.49(s,1H),5.57(t,J＝5.7Hz,1H),5.46(s,2H),5.43(s,2H),4.74(d,J＝6.0Hz,2H),4.44(s,4H),3.82(d,J＝5.6Hz,2H),1.94-1.80(m,2H),0.88(m,3H)。
实施例2、(S)-11-(氨基甲基)-9-氯-4-乙基-8-氟-4-羟基-1,12-二氢-14H-吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-3,14(4H)-二酮(化合物2)
Figure PCTCN2022113499-appb-000109
步骤1：1-(2-氨基-5-氯-4-氟苯基)-2-氯乙烷-1-酮(中间体2-2)的合成
将三氯化硼(1M，13.74mL)溶于1,2-二氯乙烷(24mL)中，反应液降温至0℃，向其中加入反应物2-1(2g，13.74mmol)和氯乙腈(1.56g，20.61mmol)，反应在0℃下搅拌10min，向其中加入三氯化铝(2.38g，17.86mmol)。之后反应液在氮气保护下升至25℃搅拌10min。反应液于氮气保护下90℃搅拌18h。LC-MS检测反应完毕。待反应冷却至室温，依次缓慢加入冰水(50mL)和5％HCl(10mL)于25℃下搅拌30min，再加入二氯甲烷(50mL)，有机相用水(2mL*2)洗涤，洗涤后的有机相用适量无水硫酸钠干燥。减压浓缩至干，粗品经制备高效液相色谱纯化(YMC-Actus Triart C18柱5μm二氧化硅，25mm直径，100mm长度；用水(含有0.05％甲酸)和乙腈的极性递减的混合物作为洗脱液(乙腈梯度比例40％-60％，洗脱时间10分钟)得标题化合物(320mg)。
MS m/z(ESI):222.0[M+H] +。
步骤2：(S)-9-氯-11-(氯甲基)-4-乙基-8-氟-4-羟基-1,12-二氢-14H-吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-3,14(4H)-二酮(中间体2-3)的合成
将中间体2-2(220mg,990.80μmol)和中间体1-3(273.86mg,1.04mmol)溶于甲苯(2mL)中，向其中加入对甲基苯磺酸吡啶盐(24.90mg,99.08μmol)。反应液在100℃搅拌18h。LC-MS检测反应完毕。待反应冷却至室温，加入乙醇(1mL),反应液于25℃搅拌0.5h。反应液过滤，滤饼用乙醇(2mL*2)洗涤得标题化合物粗品(270mg)。
MS m/z(ESI):449.0[M+H] +。
步骤3：(S)-11-(氨基甲基)-9-氯-4-乙基-8-氟-4-羟基-1,12-二氢-14H-吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-3,14(4H)-二酮(化合物2)的合成
将中间体2-3(50mg,111.29μmol)溶于乙醇(1mL)中，向其中加入乌洛托品(23.40mg,166.94μmol)。反应液在90℃搅拌1.5h。LC-MS检测反应完毕。待反应冷却至室温，减压浓缩至干，经制备高效液相色谱纯化(YMC-Actus Triart C18柱5μm二氧化硅，25mm直径，100mm长度；用水(含有0.225％甲酸)和甲醇的极性递减的混合物作为洗脱液(甲醇梯度比例0％-30％,洗脱时间12分钟)得标题化合物(22mg)。
MS m/z(ESI):430.1[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝8.71(d,J＝8.0Hz,1H),8.23(d,J＝10.3Hz,1H),8.14(s,0.3H， HCOOH),7.36(s,1H),6.57(s,1H),5.52(s,2H),5.46(s,2H),4.55(s,2H),1.93-1.84(m,2H),0.90-0.85(m,3H)。
实施例3、(S)-N-((9-氯-4-乙基-8-氟-4-羟基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-11-基)甲基)-2-羟基乙酰胺(化合物3)
Figure PCTCN2022113499-appb-000110
将化合物2(22mg,51.18μmol)和2-羟基乙酸(19.46mg,255.92μmol)溶于无水N,N-二甲基甲酰胺(1mL)，向其中加入HATU(29.19mg,76.77μmol)和N,N-二异丙基乙胺(19.84mg，153.55μmol)，反应液于25℃搅拌1.5h。LC-MS检测反应完毕。反应液过滤，减压浓缩至干，粗品经制备高效液相色谱纯化(YMC-Actus Triart C18柱5μm二氧化硅，25mm直径，100mm长度；用水(含有0.05％甲酸)和乙腈的极性递减的混合物作为洗脱液(乙腈梯度比例10％-40％，洗脱时间12分钟)得标题化合物(2.20mg)。
MS m/z(ESI):488.1[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝8.90-8.85(m,2H),8.20(d,J＝10.3Hz,1H),7.35(s,1H),6.55(s,1H),5.60(t,J＝5.7Hz,1H),5.56(s,2H),5.45(s,2H),4.83(d,J＝6.0Hz,2H),3.83(d,J＝5.8Hz,2H),1.93-1.81(m,2H),0.88(m,3H)。
实施例4、(S)-11-(氨基甲基)-9-溴-4-乙基-8-氟-4-羟基-1,12-二氢-14H-吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-3,14(4H)-二酮(化合物4)
Figure PCTCN2022113499-appb-000111
步骤1：1-(2-氨基-5-溴-4-氟苯基)-2-氯乙烷-1-酮(中间体4-2)的合成
将三氯化硼(1M，10.53mL)溶于1,2-二氯乙烷(24mL)中，反应液降温至0℃，向其中加入中间体4-1(2g，10.53mmol)和氯乙腈(1.19g，15.79mmol)，反应在0℃下搅拌10min，向其中加入三氯化铝(1.82g，13.68mmol)。反应液在氮气保护下，25℃搅拌10min。随后升温至90℃搅拌18h。LC-MS检测反应完毕。待反应冷却至室温，依次缓慢加入冰水(50mL)和5％HCl(10mL)于25℃下搅拌30min，再加入二氯甲烷(50mL)，有机相用水(2mL*2)洗涤，洗涤后的有机相用适量无水硫酸钠干燥。经制备高效液相色谱纯化(YMC-Actus Triart C18柱5μm二氧化硅，25mm直径，100mm长度；用水(含有0.05％甲酸)和乙腈的极性递减的混合物作为洗脱液(乙腈梯度比例39％-49％，洗脱时间12分钟)得标题化合物(380mg)。
MS m/z(ESI):265.9[M+H] +。
步骤2：(S)-9-溴-11-(氯甲基)-4-乙基-8-氟-4-羟基-1,12-二氢-14H-吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-3,14(4H)-二酮(中间体4-3)的合成
将中间体4-2(200mg,750.48μmol)和中间体1-3(207.44mg,788.01μmol)溶于无水甲苯(4mL)中，向其中加入对甲基苯磺酸吡啶盐(22.63mg,90.06μmol)。反应液在100℃搅拌18h。LC-MS检测反应完毕。待反应冷却至室温，加入乙醇(1mL)，反应液于25℃搅拌0.5h。反应液过滤，滤饼用乙醇(2mL*2)洗涤得标题化合物粗品(200mg)。
MS m/z(ESI):493.0[M+H] +。
步骤3：(S)-11-(氨基甲基)-9-溴-4-乙基-8-氟-4-羟基-1,12-二氢-14H-吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-3,14(4H)-二酮(化合物4)的合成
将中间体4-3(200mg,405.10μmol)溶于乙醇(4mL)中，向其中加入乌洛托品(113.58mg,810.19μmol)。反应液在90℃搅拌1.5h。LC-MS检测反应完毕。待反应冷却至室温，减压浓缩至干，粗品经制备高效液相色谱纯化(YMC-Actus Triart C18柱5μm，25mm直径，100mm长度；用水(含有0.225％甲酸)和乙腈的极性递减的混合物作为洗脱液(乙腈梯度比例6％-26％，洗脱时间12分钟)得标题化合物(30mg)。
MS m/z(ESI):476.0[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝8.83(d,J＝7.4Hz,1H),8.18(d,J＝9.8Hz,1H),8.14(s,0.4H， HCOOH),7.36(s,1H),6.57(s,1H),5.52(s,2H),5.46(s,2H),4.53(s,2H),1.92-1.85(m,2H),0.88(t,J＝7.3Hz,3H)。
实施例5、(S)-N-((9-溴-4-乙基-8-氟-4-羟基-3,14-二氧亚基-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-11-基)甲基)-2-羟基乙酰胺(化合物5)
Figure PCTCN2022113499-appb-000112
将化合物4(15mg,26.88μmol)和2-羟基乙酸(10.22mg,134.41μmol)溶于无水N,N-二甲基甲酰胺(1mL)，向其中加入HATU(15.33mg,40.32μmol)和N,N-二异丙基乙胺(10.42mg，80.65μmol)，反应液于25℃搅拌1h。LC-MS检测反应完毕。反应液过滤，减压浓缩至干，粗品经制备高效液相色谱纯化(YMC-Actus Triart C18柱5μm，25mm直径，100mm长度；用水(含有0.05％甲酸)和乙腈的极性递减的混合物作为洗脱液(乙腈梯度比例6％-36％，洗脱时间12分钟)得标题化合物(2.09mg)。
MS m/z(ESI):532.0[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝9.00(d,J＝7.5Hz,1H),8.86(t,J＝5.9Hz,1H),8.15(d,J＝9.8Hz,1H),7.35(s,1H),6.54(s,1H),5.60(t,J＝5.7Hz,1H),5.56(s,2H),5.45(s,2H),4.83 (d,J＝5.8Hz,2H),3.83(d,J＝5.9Hz,2H),1.94-1.82(m,2H),0.88(t,J＝7.4Hz,3H)。
实施例6、(S)-N-((8-氯-4-乙基-4-羟基-9-甲基-3,14-二氧亚基-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-11-基)甲基)-2-羟基乙酰胺(化合物6)
Figure PCTCN2022113499-appb-000113
步骤1：1-(2-氨基-4-氯-5-甲基苯基)-2-氯乙烷-1-酮(中间体6-2)的合成
将三氯化硼(1M，2.82mL)溶于1,2-二氯乙烷(8mL)中，反应液降温至0℃，向其中加入反应物6-1(0.5g，3.53mmol)和氯乙腈(319.91g，4.24mmol)，反应在0℃下搅拌10min，向其中加入三氯化铝(612.09mg，4.59mmol)。反应液在氮气保护下25℃搅拌10min。之后反应液升温至90℃搅拌18h。LC-MS检测反应完毕。待反应冷却至室温，依次缓慢加入冰水(25mL)和5％HCl(5mL)于25℃下搅拌30min，再加入二氯甲烷(20mL)，有机相用水(20mL*2)洗涤，洗涤后的有机相用适量无水硫酸钠干燥。经制备薄层色谱法(二氧化硅，石油醚：乙酸乙酯＝9:1)得标题化合物(500mg)。
MS m/z(ESI):218.0[M+H] +
步骤2：(S)-8-氯-11-(氯甲基)-4-乙基-4-羟基-9-甲基-1,12-二氢-14H-吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-3,14(4H)-二酮(中间体6-3)的合成
将中间体6-2(250mg,1.15mmol)和中间体1-3(316.87mg,1.20mmol)溶于甲苯(5mL)中，向其中加入对甲基苯磺酸吡啶盐(34.57mg,137.56μmol)。反应液在100℃搅拌18h。LC-MS检测反应完毕。待反应冷却至室温，加入乙醇(1mL)，反应液于25℃搅拌0.5h。反应液过滤，滤饼用乙醇(2mL*2)洗涤得标题化合物粗品(230mg)。
MS m/z(ESI):445.1[M+H] +。
步骤3：(S)-11-(氨基甲基)-8-氯-4-乙基-4-羟基-9-甲基-1,12-14H-吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-3,14(4H)-二酮(中间体6-4)的合成
将中间体6-3(49.56mg,111.29μmol)溶于乙醇(0.5mL)中，向其中加入乌洛托品(23.40mg,166.94μmol)。反应液在90℃搅拌1.5h。LC-MS检测反应完毕。待反应冷却至室温，减压浓缩至干，经制备高效液相色谱纯化(YMC-Actus Triart C18柱5μm，25mm直径，100mm长度；用水(含有0.225％甲酸)和乙腈的极性递减的混合物作为洗脱液(乙腈梯度比例2％-32％,洗脱时间12分钟)得标题化合物(11.0mg)。
MS m/z(ESI):426.2[M+H] +。
步骤4：(S)-N-((8-氯-4-乙基-4-羟基-9-甲基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-11-基)甲基)-2-羟基乙酰胺(化合物6)的合成
将中间体6-4(11mg,25.83μmol)和2-羟基乙酸(9.82mg,129.15μmol)溶于无水N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)，向其中加入HATU(14.73mg,38.74μmol)和N,N-二异丙基乙胺(10.01 mg，77.49μmol)，反应液于25℃搅拌1h。LC-MS检测反应完毕。反应液过滤，减压浓缩至干，粗品经制备高效液相色谱纯化(YMC-Actus Triart C18柱5μm，25mm直径，100mm长度；用水(含有0.05％甲酸)和乙腈的极性递减的混合物作为洗脱液(乙腈梯度比例10％-40％，洗脱时间12分钟)得标题化合物(3.00mg)。
MS m/z(ESI):484.1[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝8.77(t,J＝6.1Hz,1H),8.52(s,1H),8.26(s,1H),7.32(s,1H),6.54(s,1H),5.59(t,J＝5.8Hz,1H),5.52(s,2H),5.44(s,2H),4.85(d,J＝6.0Hz,2H),3.84(d,J＝5.6Hz,2H),2.60(s,3H),1.91-1.82(m,2H),0.88(t,J＝7.3Hz,3H)。
实施例7、(S)-N-((8-乙基-8-羟基-9,12-二氧代-2,3,8,9,12,14-六氢-1H,11H-环戊二烯并[f]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-15-基)甲基)-2-羟基乙酰胺(化合物7)
Figure PCTCN2022113499-appb-000114
步骤1：4,6-二溴-2,3-二氢-1H-茚-5-胺(中间体7-2)的合成
将中间体7-1(10.0g)溶解在无水乙腈中，在0℃下分批加入N-溴代丁二酰亚胺(NBS)(27.5g)，随后在室温下搅拌过夜。将反应液过滤，滤液减压浓缩，残余物溶于200mL乙酸乙酯，并用水(100mL*2)洗涤。所得有机相用无水硫酸钠干燥，硅胶拌样，然后置于硅藻土上，用500mL石油醚淋洗，滤液浓缩得到标题化合物(17.0g)。
MS m/z(ESI):289.9[M+H] +。
步骤2：4-溴-2,3-二氢-1H-茚-5-胺(中间体7-3)的合成
将中间体7-2(15.0g)和氯化亚锡(15.0g)溶解在75mL醋酸中，并加入6N的浓盐酸140mL，在90℃下反应3h。将反应体系冷却至室温，浓缩除去醋酸，残留物溶解在乙酸乙酯100mL中，用饱和碳酸钠水溶液调节pH至8左右，过滤，滤液分去有机相，水相再用乙酸乙酯(50mL*3)萃取。合并有机相并用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到标题化合物(10g)。
MS m/z(ESI):212.0[M+H] +。
步骤3：N-(4-溴-2,3-二氢-1H-茚-5-基)乙酰胺(中间体7-4)的合成
将中间体7-3(10.0g)溶于无水二氯甲烷100mL，加入三乙胺(10.6g)，并在0℃下缓慢滴加乙酰氯(5.5g)，然后反应体系在室温下搅拌过夜。反应液用水(100mL*2)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤。滤液减压浓缩，残余物用硅胶柱层析法纯化(石油醚：乙酸乙酯＝90：10)得到标题化合物(7.1g)。
MS m/z(ESI):254.0[M+H] +。
步骤4：N-(4-乙酰基-2,3-二氢-1H-茚-5-基)乙酰胺(中间体7-5)的合成
在氮气保护下，将中间体7-4(6.7g)和三丁基-(2-乙氧基乙烯基)锡(10.4g)溶于100mL 无水1,4-二氧六环中，然后加入二(三苯基膦)二氯化钯(1.8g)，然后反应体系在100℃下搅拌过夜。反应液冷却至室温，加入3N的盐酸30mL，室温下搅拌1h。用硅藻土过滤反应液，所得滤液用乙酸乙酯100mL稀释，并用水(100mL*2)洗涤。有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残余物经硅胶柱层析法纯化(石油醚：乙酸乙酯＝85：15)得到标题化合物(4.7g)。
MS m/z(ESI):218.1[M+H] +。
步骤5：N-(4-(2-溴乙酰基)-2,3-二氢-1H-茚-5-基)乙酰胺(中间体7-6)的合成
将中间体7-5(4.7g)溶于50mL醋酸中，加入33％的氢溴酸-乙酸溶液7.3g，室温下缓慢滴加溴素(2.85g)，然后室温下继续搅拌反应3h。反应结束后，将反应液倒入冰水中，搅拌至大量固体析出，过滤，用石油醚洗涤滤饼，所得固体干燥得到标题化合物(5.0g)。
MS m/z(ESI):296.0[M+H] +。
步骤6：1-(5-氨基-2,3-二氢-1H-茚-4-基)-2-氯乙-1-酮(中间体7-7)的合成
将中间体7-6(5.0g)溶于30mL乙醇中，加入6N浓盐酸35mL，反应体系在80℃下搅拌2h。反应体系冷却至室温，减压浓缩除去溶剂，残留物用二氯甲烷100mL溶解，用饱和碳酸氢钠水溶液调节pH至7左右，分去有机相，水相再用二氯甲烷(50mL*2)萃取。合并有机相并用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残余物经硅胶柱层析法纯化(石油醚：乙酸乙酯＝75：25)得到标题化合物(840mg)。
MS m/z(ESI):210.0[M+H] +。
步骤7:(S)-15-(氯甲基)-8-乙基-8-羟基-1,2,3,8,11,14-六氢-9H,12H-环戊二烯并[f]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-9,12-二酮(中间体7-8)的合成
将中间体7-7(100mg)和中间体1-3(125.55mg)溶于甲苯(5mL)中，向其中加入对甲基苯磺酸吡啶盐(5.99mg)。反应液在90℃搅拌18h。待反应冷却至室温，加入乙醇(1mL)，反应液于25℃搅拌0.5h。反应液过滤，滤饼用石油醚(2mL*2)洗涤得标题化合物(180mg)。
MS m/z(ESI):437.0[M+H] +。
步骤8：(S)-15-(氨基甲基)-8-乙基-8-羟基-1,2,3,8,11,14-六氢-9H,12H-环戊二烯并[f]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-9,12-二酮(中间体7-9)的合成
将中间体7-8(50mg)溶于甲醇(1mL)和N,N-二甲基甲酰胺(1mL)的混合溶液中，向其中加入乌洛托品(483.13mg)。反应液在50℃搅拌4h。反应结束后，反应液冷却至室温，加入浓盐酸(0.5mL)搅拌0.5h，然后减压浓缩至干，残余物经制备高效液相色谱纯化(Waters Xbridge C18柱5μm，25mm直径，100mm长度；用水(含有0.225％甲酸)和乙腈的极性递减的混合物作为洗脱液；乙腈梯度比例20％-40％,洗脱时间12分钟)得标题化合物(22.0mg)。
MS m/z(ESI):418.2[M+H] +。
步骤9：(S)-N-((8-乙基-8-羟基-9,12-二氧代-2,3,8,9,12,14-六氢-1H,11H-环戊二烯并[f]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-15-基)甲基)-2-羟基乙酰胺(化合物7)的合成
将中间体7-9(15mg)和羟基乙酸(10.93mg)溶于无水N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)，向其中加入HATU(27.32mg)和二异丙基乙胺(4.64mg)，反应液于25℃搅拌1h。反应结束后，反应液过滤，滤液减压浓缩至干，残余物经制备高效液相色谱纯化(Waters Xbridge C18柱5μm，25mm直径，100mm长度；用水(含有0.05％甲酸)和乙腈的极性递减的混合物作为洗脱液(乙腈梯度比例30％-50％,洗脱时间12分钟)得标题化合物(9.0mg)。
MS m/z(ESI):476.2[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝8.28(t,J＝5.1Hz,1H),8.02(d,J＝8.5Hz,1H),7.78(d,J＝8.3Hz,1H),7.30(s,1H),6.53(s,1H),5.49-5.45(m,1H),5.43(s,2H),5.36(s,2H),4.97(d,J＝5.0Hz,2H),3.88(d,J＝5.5Hz,2H),3.57(t,J＝7.2Hz,2H),3.09(t,J＝7.4Hz,2H),2.23-2.15(m,2H),1.95-1.80(m,2H),0.88(t,J＝7.3Hz,3H)。
实施例8、(S)-N-((4-乙基-4,9-二羟基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并 [3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-10-基)甲基)-2-羟基乙酰胺(化合物8)
Figure PCTCN2022113499-appb-000115
步骤1：(S)-10-((1,3-二氧代异二氢吲哚-2-基)甲基)-4-乙基-4,9-二羟基-1,12-二氢-14H-吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-3,14(4H)-二酮(中间体8-3)的合成
将反应物8-1(200mg,548.92μmol)溶于浓硫酸(2mL)中，反应液降温至0℃。向其中缓慢加入反应物8-2(116.69mg,658.71μmol)，反应液于氮气保护下0℃搅拌0.5h。0.5h后反应液于氮气保护下，升至25℃搅拌5h。LC-MS检测反应完毕。依次加入冰水(10mL)和二氯甲烷(25mL)，有机相用水(20mL*2)洗涤，洗涤后的有机相用适量无水硫酸钠干燥。减压浓缩至干，粗品经制备薄层色谱法(二氧化硅，二氯甲烷：甲醇＝10:1)得标题化合物(280mg)。
MS m/z(ESI):524.3[M+H] +。
步骤2：(S)-10-(氨基甲基)-4-乙基-4,9-二羟基-1,12-二氢-14H-吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-3,14(4H)-二酮(中间体8-4)的合成
将中间体8-3(240mg,458.46μmol)溶于浓盐酸(3mL)中，反应液于90℃搅拌16h。LC-MS检测反应完毕。待反应冷却至室温，加入冰水(5mL)，滴加氨水调节pH至8到9。反应液过滤，滤饼浓缩至干中间体8-4粗品(150mg)。
MS m/z(ESI):394.1[M+H] +
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝8.75(s,1H),8.04(d,J＝9.1Hz,1H),7.51(d,J＝9.1Hz,1H),7.27(s,1H),5.43(s,2H),5.26(s,2H),4.44(s,2H),1.92-1.82(m,2H),0.92-0.83(m,3H)。
步骤3：(S)-N-((4-乙基-4,9-二羟基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-10-基)甲基)-2-羟基乙酰胺(化合物8)的合成
将中间体8-4(80mg,203.36μmol)和羟基乙酸(30.94mg,406.72μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(2mL)，向其中加入HATU(115.99mg,305.04μmol)和N,N-二异丙基乙胺(78.85mg，610.08μmol)，反应液于25℃搅拌1.5h。LC-MS检测反应完毕。反应液过滤，减压浓缩至干，粗品经制备高效液相色谱纯化(YMC-Actus Triart C18柱5μm二氧化硅，25mm直径，100mm长度；用水(含有0.05％甲酸)和乙腈的极性递减的混合物作为洗脱液(乙腈梯度比例11％-41％，洗脱时间12分钟)得标题化合物(46mg)。
MS m/z(ESI):452.1[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝10.91(s,1H),8.92(s,1H),8.49(t,J＝5.8Hz,1H),8.04(d,J＝9.3Hz,1H),7.51(d,J＝9.1Hz,1H),7.28(s,1H),6.51(s,1H),5.60(t,J＝5.8Hz,1H),5.42(s,2H),5.28(s,2H),4.73(d,J＝5.8Hz,2H),3.88(d,J＝5.8Hz,2H),1.95-1.81(m,2H),0.89(t,J＝7.3Hz,3H)。
实施例9、(S)-N-((4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-11-基)甲基)-1-羟基环丙烷-1-甲酰胺(化合物9)
Figure PCTCN2022113499-appb-000116
将中间体9-1(6.00mg,14.66μmol,可根据专利文献WO2020219287报道方法合成)和中间体9-2(4.49mg,43.97μmol)溶于无水N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)，向其中加入HATU(8.36mg,21.98μmol)和N,N-二异丙基乙胺(5.68mg，43.97μmol)，反应液于25℃搅拌1h。LC-MS检测反应完毕。反应液过滤，经制备高效液相色谱纯化(YMC-Actus Triart C18柱5μm二氧化硅，25mm直径，100mm长度；用水(含有0.05％甲酸)和乙腈的极性递减的混合物作为洗脱液(乙腈梯度比例6％-36％，洗脱时间12分钟)得标题化合物(3.00mg)。
MS m/z(ESI):494.2[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝8.96(t,J＝6.0Hz,1H),8.50(d,J＝8.3Hz,1H),7.90(d,J＝10.9Hz,1H),7.32(s,1H),6.53(s,1H),6.30(s,1H),5.52(s,2H),5.44(s,2H),4.85(d,J＝5.9Hz,2H),2.53(s,3H),1.92-1.83(m,2H),1.05-1.00(m,2H),0.88(t,J＝7.3Hz,3H),0.85-0.81(m,2H)。
实施例10、(S)-N-((8-氯-4-乙基-4-羟基-9-甲基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-11-基)甲基)-1-羟基环丙烷-1-甲酰胺(化合物10)
Figure PCTCN2022113499-appb-000117
将中间体6-4(6.24mg,14.66μmol)和中间体9-2(4.49mg,43.97μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中，向其中加入HATU(8.36mg,21.98μmol)和DIEA(5.68mg,43.97μmol)，反应液25℃搅拌1h。LC-MS检测反应完毕。反应液过滤，减压浓缩至干。粗品经制备高效液相色谱纯化(YMC-Actus Triart C18柱5μm二氧化硅，25mm直径，100mm长度；用水(含有0.225％甲酸)和乙腈的极性递减的混合物作为洗脱液(乙腈梯度比例16％-46％，洗脱时间12分钟)得标题化合物(2.20mg)。
MS m/z(ESI):510.1[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝8.96(t,J＝5.9Hz,1H),8.54(s,1H),8.26(s,1H),7.32(s,1H),6.54(s,1H),6.29(s,1H),5.52(s,2H),5.44(s,2H),4.84(d,J＝6.0Hz,2H),2.59(s,3H),1.94-1.80(m,2H),1.01(d,J＝3.0Hz,2H),0.88(t,J＝7.3Hz,3H),0.83(d,J＝3.0Hz,2H)。
实施例11、N-(((S)-8-氯-4-乙基-4-羟基-9-甲基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-11-基)甲基)-2-环丙基-2-羟基乙酰胺(化合物11)
Figure PCTCN2022113499-appb-000118
将中间体6-4(6.0mg,14.09μmol)和中间体11-1(8.18mg,70.45μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)中，向其中加入HATU(8.04mg,21.13μmol)和DIEA(5.46mg,42.27μmol)，反应液25℃搅拌1h。LC-MS检测反应完毕。反应液过滤，减压浓缩至干，粗品经制备高效液相色谱纯化(YMC-Actus Triart C18柱5um，25mm直径，100mm长度；用水(含有0.225％甲酸)和乙腈的极性递减的混合物作为洗脱液(乙腈梯度比例16％-46％，洗脱时间12分钟)得标题化合物(3.0mg)。
MS m/z(ESI):524.1[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝8.66(t,J＝5.9Hz,1H),8.47(s,1H),8.26(s,1H),7.32(s,1H),6.54(s,1H),5.53(d,J＝5.0Hz,1H),5.50(s,2H),5.44(s,2H),4.91-4.76(m,2H),3.61-3.55(m,1H),2.59(s,3H),1.94-1.82(m,2H),1.05-0.97(m,1H),0.88(t,J＝7.3Hz,3H),0.34-0.31(m,2H),0.29-0.20(m,2H)。
实施例12、(S)-11-(氨基甲基)-9-氯-4-乙基-8,10-二氟-4-羟基-1,12-二氢-14H-吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-3,14(4H)-二酮(化合物12)
Figure PCTCN2022113499-appb-000119
步骤1：1-(6-氨基-3-氯-2,4-二氟苯基)-2-氯乙烷-1-酮(中间体12-2)的合成
将三氯化硼(1M，6.11mL)溶于1,2-二氯乙烷(12mL)中，反应液降温至0℃，向其中加入反应物12-1(1g，6.11mmol)和氯乙腈(784.73mg，10.39mmol)，反应在0℃下搅拌10min，向其中加入三氯化铝(1.06g，7.95mmol)。之后反应液在氮气保护下升至25℃搅拌10min。反应液于氮气保护下90℃搅拌18h。LC-MS检测反应完毕。待反应冷却至室温，依次缓慢加入冰水(25mL)和5％盐酸(5mL)于25℃下搅拌30min，再加入二氯甲烷(50mL),有机相用水(2mL*2)洗涤，洗涤后的有机相用适量无水硫酸钠干燥。减压浓缩至干，粗品经制备薄层色谱法(二氧化硅，石油醚：乙酸乙酯＝9:1)得标题化合物(340mg)。
MS m/z(ESI):240.0[M+H] +。
步骤2：(S)-9-氯-11-(氯甲基)-4-乙基-8,10-二氟-4-羟基-1,12-二氢-14H-吡喃并 [3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-3,14(4H)-二酮(中间体12-3)的合成
将中间体12-2(0.2g，833.22μmol)和中间体1-3(219.34mg，833.22μmol)溶于甲苯(4mL)中，向其中加入对甲基苯磺酸吡啶盐(20.94mg，83.32μmol)。反应液在100℃搅拌18h。LC-MS检测反应完毕。待反应冷却至室温，加入乙醇(1mL)，反应液于25℃搅拌0.5h。反应液过滤，滤饼用乙醇(2mL*2)洗涤得标题化合物粗品(190mg)。
MS m/z(ESI):467.1[M+H] +。
步骤3：(S)-11-(氨基甲基)-9-氯-4-乙基-8,10-二氟-4-羟基-1,12-二氢-14H-吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-3,14(4H)-二酮(化合物12)的合成
将中间体12-3(50mg，107.01μmol)溶于乙醇(1mL)中，向其中加入乌洛托品(45.00mg，321.03μmol)。反应液在80℃搅拌1.5h。LC-MS检测反应完毕。待反应冷却至室温，减压浓缩至干，经制备高效液相色谱纯化(YMC-Actus Triart C18柱5μm二氧化硅，25mm直径，100mm长度；用水(含有0.225％甲酸)和乙腈的极性递减的混合物作为洗脱液(乙腈梯度比例2％-32％，洗脱时间12分钟)得标题化合物(1.22mg)。
MS m/z(ESI):448.0[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝8.14(d,J＝9.8Hz,1H),7.36(s,1H),6.57(s,1H),5.55(s,2H),5.46(s,2H),4.35(d,J＝3.0Hz,2H),1.94-1.83(m,2H),0.88(t,J＝7.3Hz,3H)。
实施例13、2-环丙基-N-(((S)-8-乙基-8-羟基-9,12-二氧代-2,3,8,9,12,14-六氢-1H,11H-环戊二烯并[f]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-15-基)甲基)-2-羟基乙酰胺(化合物13)
Figure PCTCN2022113499-appb-000120
步骤1：2-环丙基-N-(((S)-8-乙基-8-羟基-9,12-二氧代-2,3,8,9,12,14-六氢-1H,11H-环戊二烯并[f]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-15-基)甲基)-2-羟基乙酰胺(化合物13)的合成
将中间体7-9(10mg)和中间体11-1(8.34mg)溶于无水N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)，向其中加入HATU(13.66mg)和二异丙基乙胺(3.10mg)，反应液于25℃搅拌1h。反应结束后，反应液过滤，滤液减压浓缩至干，残余物经制备高效液相色谱纯化(Waters Xbridge C18柱5μm，25mm直径，100mm长度；用水(含有0.05％甲酸)和乙腈的极性递减的混合物作为洗脱液(乙腈梯度比例34％-54％,洗脱时间12分钟)得标题化合物(0.8mg)。
MS m/z(ESI):516.2[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝8.25(t,J＝5.0Hz,1H),8.01(d,J＝8.5Hz,1H),7.78(d,J＝8.5Hz,1H),7.30(s,1H),6.53(s,1H),5.43(s,2H),5.36(s,2H),4.99-4.85(m,2H),3.59(s,1H),3.56(d,J＝6.3Hz,2H),3.08(t,J＝7.7Hz,2H),2.23-2.16(m,2H),1.92-1.72(m,2H),1.15-1.01(m,1H),0.88(t,J＝7.4Hz,3H),0.46-0.19(m,4H)。
实施例14、2-环丙基-N-(((S)-7-乙基-7-羟基-8,11-二氧代-7,8,11,13-四氢-10H-[1,3]二氧杂环戊烯并[4,5-g]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-14-基)甲基)-2-羟基乙酰胺(化合物14)
Figure PCTCN2022113499-appb-000121
步骤1：1-(6-硝基苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基)乙酮(中间体14-2)的合成
将中间体14-1(10.0g,60.92mmol)溶于硝基甲烷(100mL)中，向其中缓慢加入硝酸(35.43g,365.50mmol,65％纯度)，反应液于25℃搅拌2.5h。反应结束后，向反应液中缓慢加入饱和碳酸氢钠溶液，调节pH至7-8，再向其中加入二氯甲烷(100mL)，有机相用水(50mL*2)洗涤，洗涤后的有机相用适量无水硫酸钠干燥。经制备薄层色谱法纯化(石油醚：乙酸乙酯＝1:2)得标题化合物(5g)。
MS m/z(ESI):210.0[M+H] +。
步骤2：1-(6-氨基苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基)乙酮(中间体14-3)的合成
将中间体14-2(2.37g,11.33mmol)溶于无水乙醇(25mL)中，向其中加入钯碳(0.2g,10％纯度)，反应液于氢气保护下25℃搅拌16h。反应结束后，反应液过滤，滤饼用乙酸乙酯洗涤2遍，滤液经减压浓缩至干得标题化合物(1.6g)。
MS m/z(ESI):180.1[M+H] +。
步骤3：N-(6-乙酰基苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基)乙酰胺(中间体14-4)的合成
将中间体14-3(1.0g,5.58mmol)溶于二氯甲烷(10mL)中，反应液冷却至0℃向其中加入N,N-二异丙基乙胺(DIEA)(1.08g,8.37mmol)和乙酰氯(569.55mg,7.26mmol)。反应液在25℃搅拌1.5h。反应结束后，反应液经减压浓缩至干得标题化合物(1.23g)。
MS m/z(ESI):222.1[M+H] +。
步骤4：N-(6-(2-溴乙酰基)苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基)乙酰胺(中间体14-5)的合成
将中间体14-4(1.23g,5.00mmol)溶于乙酸(12mL)中，向其中加入溴化氢的乙酸溶液(1.84g,7.51mmol,33％纯度)，再缓慢向其中加入液溴(959.69mg,6.01mmol)反应液于25℃搅拌1h。反应结束后，反应液倒入冰水中搅拌10min。过滤，滤饼用水洗涤2遍，减压浓缩至干，向残余物中加入乙酸乙酯(2mL)和石油醚(10mL)，反应液在25℃下搅拌0.5h。反应液过滤，滤饼经干燥得标题化合物(500mg)。
MS m/z(ESI):300.0[M+H] +。
步骤5：1-(6-氨基苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基)-2-氯乙酮(中间体14-6)的合成
将中间体14-5(0.2g,666.43μmol)溶于无水乙醇(1mL)和浓盐酸(1mL)中，反应液于60℃搅拌16h。反应结束后，待反应冷却至室温，依次缓慢加入冰水(10mL)和饱和碳酸氢钠(10mL)，再加入二氯甲烷(50mL)，有机相用水(20mL*2)洗涤，洗涤 后的有机相用适量无水硫酸钠干燥。经制备薄层色谱法(石油醚：乙酸乙酯＝6:1)得标题化合物(160mg)。
MS m/z(ESI):214.0[M+H] +。
步骤6：(S)-14-(溴甲基)-7-乙基-7-羟基-10,13-二氢-11H-[1,3]二氧杂环戊烯并[4,5-g]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-8,11(7H)-二酮(中间体14-7)的合成
将中间体14-6(50mg,234.06μmol)和中间体1-3(61.62mg,234.06μmol)溶于甲苯(1mL)中，向其中加入对甲基苯磺酸吡啶盐(5.88mg,23.41μmol)。反应液在90℃搅拌16h。反应结束后，待反应冷却至室温，加入乙醇(1mL)，反应液于25℃搅拌0.5h。反应液过滤，滤饼用乙醇(2mL*2)洗涤后，干燥得标题化合物(60mg)。
MS m/z(ESI):441.1[M+H] +。
步骤7：(S)-14-(氨基甲基)-7-乙基-7-羟基-10,13-二氢-11H-[1,3]二氧杂环戊烯并[4,5-g]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-8,11(7H)-二酮(中间体14-8)的合成
将中间体14-7(55.00mg,124.76μmol)溶于乙醇(1mL)中，向其中加入乌洛托品(52.47mg,374.29μmol)。反应液在80℃搅拌1.5h。反应结束后，待反应冷却至室温，减压浓缩至干，经制备高效液相色谱纯化(YMC-Actus Triart C18柱5μm，25mm直径，100mm长度；用水(含有0.225％甲酸)和甲醇的极性递减的混合物作为洗脱液(甲醇梯度比例0％-27％,洗脱时间12分钟)得标题化合物(10mg)。
MS m/z(ESI):422.1[M+H] +。
步骤8：2-环丙基-N-(((S)-7-乙基-7-羟基-8,11-二氧代-7,8,11,13-四氢-10H-[1,3]二氧杂环戊烯并[4,5-g]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-14-基)甲基)-2-羟基乙酰胺(化合物14)的合成
将中间体14-8(10.00mg,20.17μmol)和中间体11-1(23.42mg,201.71μmol)溶于无水N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)，向其中加入2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU)(11.50mg,30.26μmol)和N,N-二异丙基乙胺(7.82mg，60.51μmol)，反应液于25℃搅拌1.5h。反应结束后，反应液过滤，经制备高效液相色谱纯化(YMC-Actus Triart C18柱5μm，30mm直径，150mm长度；用水(含有0.225％甲酸)和乙腈的极性递减的混合物作为洗脱液(乙腈梯度比例4％-44％,洗脱时间9分钟)得标题化合物(3mg)。
MS m/z(ESI):520.1[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝8.61(t,J＝5.8Hz,1H),7.86(s,1H),7.52(s,1H),7.24(s,1H),6.49(s,1H),6.29(s,2H),5.51(d,J＝5.0Hz,1H),5.47(s,2H),5.42(s,2H),4.72(d,J＝5.5Hz,2H),1.92-1.78(m,2H),0.99(d,J＝6.3Hz,1H),0.87(t,J＝7.3Hz,3H),0.40-0.29(m,2H),0.29-0.19(m,2H)。
Figure PCTCN2022113499-appb-000122
步骤9：2-环丙基-2-羟基乙酸苄酯(中间体14-9-P1/P2)的制备
对中间体14-9进行拆分制备得到异构体14-9-P1和14-9-P2。取中间体14-9(1.3g)经超临界流体色谱制备(DAICEL CHIRALPAK AD柱，10μm二氧化硅，30mm直径，250mm长度；使用乙醇(含有0.1％氨水)作为洗脱液)得到中间体14-9-P1(600mg)和中间体14-9-P2(600mg)。
通过以下手性超临界流体色谱条件对上述两个异构体进一步分析。
Figure PCTCN2022113499-appb-000123
中间体14-9-P1：
在上述手性超临界流体色谱条件下，其保留时间为2.990分钟；
1H NMR(400MHz,METHANOL-d 4)δ7.43-7.29(m,5H),5.29-5.16(m,2H),3.67(d,J＝7.6Hz,1H),1.19-1.07(m,1H),0.58-0.38(m,4H)。
中间体14-9-P2：
在上述手性超临界流体色谱条件下，其保留时间为2.661分钟；
1H NMR(400MHz,METHANOL-d 4)δ7.46-7.28(m,5H),5.30-5.16(m,2H),3.67(d,J＝7.6Hz,1H),1.21-1.03(m,1H),0.60-0.36(m,4H)。
步骤10：2-环丙基-2-羟基乙酸(中间体14-10-P1/P2)的合成
氢气氛围下，将中间体14-9-P1(500mg)加入到甲醇(15mL)中,向反应液中加入湿钯碳(10mg,10％)，反应液在氢气氛围下25℃搅拌16小时。反应结束后，反应物经过滤，滤液经减压浓缩，得中间体14-10-P1(273mg)。
1H NMR(400MHz,METHANOL-d 4)δ3.63(d,J＝7.2Hz,1H),1.21-1.09(m,1H),0.61-0.40(m,4H)。
氢气氛围下，将中间体14-9-P2(500mg)加入到甲醇(15mL)中,向反应液中加入湿钯碳(10mg,10％)，反应液在氢气氛围下25℃搅拌16小时。反应结束后，反应物经过滤，滤液经减压浓缩，得中间体14-10-P2(279mg)。
1H NMR(400MHz,METHANOL-d 4)δ3.63(d,J＝7.2Hz,1H),1.19-1.08(m,1H),0.60-0.39(m,4H)。
步骤11：2-环丙基-N-(((S)-7-乙基-7-羟基-8,11-二氧代-7,8,11,13-四氢-10H-[1,3]二氧杂环戊烯并[4,5-g]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-14-基)甲基)-2-羟基乙酰胺(化合物14-P1/P2)的合成
将中间体14-8(40.00mg)和中间体14-10-P1(28.11mg)溶于无水N,N-二甲基甲酰胺(1mL)，向其中加入2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU)(46.02mg)和N,N-二异丙基乙胺(31.28mg)，反应液于25℃搅拌1.5h。反应结束后，反应液经制备高效液相色谱纯化(Boston Green ODS C18柱5μm二氧化硅，30mm直径，150mm长度；用水(含有0.225％甲酸)和乙腈的极性递减的混合物作为洗脱液(乙腈梯度比例16％-46％,洗脱时间12分钟)，得化合物14-P1(22.00mg)。
MS m/z(ESI):520.1[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝8.62(t,J＝5.7Hz,1H),7.86(s,1H),7.52(s,1H),7.25(s,1H),6.51(s,1H),6.29(s,2H),5.47(s,2H),5.43(s,2H),4.73(d,J＝5.9Hz,2H),3.54(d,J＝5.9Hz,1H),1.93-1.78(m,2H),1.06-0.96(m,1H),0.87(t,J＝7.3Hz,3H),0.39-0.30(m,2H),0.29-0.21(m,2H)。
将中间体14-8(10.00mg)和中间体14-10-P2(8.27mg)溶于无水N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)，向其中加入2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(18.05mg)和N,N-二异丙基乙胺(6.13mg)，反应液于25℃搅拌1.5h。反应结束后，反应液直接经制备高效液相色谱纯化(Boston Green ODS C18柱5μm二氧化硅，30mm直径，150mm长度；用水(含有0.225％甲酸)和乙腈的极性递减的混合物作为洗脱液(乙腈梯度比例16％-46％,洗脱时间12分钟)，得化合物14-P2(8.00mg)。
MS m/z(ESI):520.1[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝8.63(t,J＝5.9Hz,1H),7.86(s,1H),7.52(s,1H),7.24(s,1H),6.30(s,2H),5.46(s,2H),5.43(s,2H),4.72(d,J＝6.0Hz,2H),3.55(d,J＝6.0Hz,1H),1.92-1.81(m,2H),1.03-0.97(m,1H),0.88(t,J＝7.3Hz,3H),0.38-0.30(m,2H),0.28-0.22(m,2H)。
通过以下手性超临界流体色谱分析方法分别对两个异构体进一步分析。
Figure PCTCN2022113499-appb-000124
化合物14-P1：
在上述手性超临界流体色谱条件下，其保留时间为3.673分钟；
化合物14-P2：
在上述手性超临界流体色谱条件下，其保留时间为3.735分钟。
实施例15、(S)-N-((9-溴-4-乙基-4-羟基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b][1,7]萘啶-11-基)甲基)-2-羟基乙酰胺(化合物15)
Figure PCTCN2022113499-appb-000125
步骤1：1-(5-氨基-2-溴吡啶-4-基)乙酮(中间体15-2)的合成
将中间体15-1(500mg,3.67mmol)溶于无水四氢呋喃(90mL)中，向其中加入碳酸氢钠(617.04mg,7.34mmol)和2-吡咯烷酮三溴化氢盐(1.64g，5.03mmol)，反应液于25℃搅拌8h。反应结束后，反应液过滤，经制备薄层色谱法(二氧化硅，石油醚：乙酸乙酯＝20:1)得标题化合物(300mg)。
MS m/z(ESI):214.9[M+H] +。
步骤2：N-(4-乙酰基-6-溴吡啶-3-基)乙酰胺(中间体15-3)的合成
将中间体15-2(150mg,697.52mmol)溶于二氯甲烷(2mL)中，反应液冷却至0℃向其中加入N,N-二异丙基乙胺(180.30mg,1.40mmol)和乙酰氯(109.51mg,1.40mmol)。反应液在25℃搅拌3h。反应结束后，反应液减压浓缩至干，经制备薄层色谱法(二氧化硅，石油醚：乙酸乙酯＝3:1)得标题化合物(100mg)。
MS m/z(ESI):257.0[M+H] +。
步骤3：1-(5-氨基-2-溴吡啶-4-基)-2-溴乙酮(中间体15-4)的合成
将中间体15-3(95.00mg,273.45μmol)溶于乙酸(2mL)中，向其中加入溴化氢的乙酸溶液(100.57g,410.18μmol,33％纯度)，再缓慢向其中加入液溴(48.07mg,300.80μmol)反应液于25℃搅拌1h。反应结束后，反应液减压浓缩至干，经制备薄层色谱法(二氧化硅，石油醚：乙酸乙酯＝3:1)得标题化合物(45mg)。
MS m/z(ESI):292.9[M+H] +。
步骤4：1-(5-氨基-2-溴吡啶-4-基)-2-氯乙酮(中间体15-5)的合成
将中间体15-4(50.00mg,170.10μmol)溶于浓盐酸(1mL)中，反应液于60℃搅拌16h。反应结束后，待反应冷却至室温，依次缓慢加入冰水(10mL)和饱和碳酸氢钠(10mL)，再加入二氯甲烷(30mL),有机相用水(20mL*2)洗涤，洗涤后的有机相用适量无水硫酸钠干燥。有机相经减压浓缩至干得标题化合物(25mg)。
MS m/z(ESI):248.9[M+H] +。
步骤5：(S)-9-溴-11-(氯甲基)-4-乙基-4-羟基-1,12-二氢-14H-吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b][1,7]萘啶-3,14(4H)-二酮(中间体15-6)的合成
将中间体15-5(25mg,100.20μmol)和中间体1-3(26.38mg,100.20μmol)溶于甲苯(0.5 mL)中，向其中加入对甲基苯磺酸吡啶盐(2.52mg,10.02μmol)。反应液在90℃搅拌16h。反应结束后，待反应冷却至室温，加入乙醇(1mL),反应液于25℃搅拌0.5h。反应液过滤，滤饼用乙醇(2mL*2)洗涤得标题化合物(30mg)。
MS m/z(ESI):475.9[M+H] +。
步骤6：(S)-11-(氨基甲基)-9-溴-4-乙基-4-羟基-1,12-二氢-14H-吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b][1,7]萘啶-3,14(4H)-二酮(中间体15-7)的合成
将中间体15-6(30mg,62.93μmol)溶于乙醇(1mL)中，向其中加入乌洛托品(17.64mg,125.86μmol)。反应液在80℃搅拌2h。反应结束后，待反应冷却至室温，减压浓缩至干，经制备高效液相色谱纯化(YMC-Actus Triart C18柱5μm，25mm直径，100mm长度；用水(含有0.225％甲酸)和甲醇的极性递减的混合物作为洗脱液(甲醇梯度比例0％-25％,洗脱时间12分钟)得标题化合物(4mg)。
MS m/z(ESI):457.0[M+H] +。
步骤7：(S)-N-((9-溴-4-乙基-4-羟基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b][1,7]萘啶-11-基)甲基)-2-羟基乙酰胺(化合物15)的合成
将中间体15-7(4mg,8.75μmol)和羟基乙酸(3.33mg,43.74μmol)溶于无水N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)，向其中加入HATU(4.99mg,13.12μmol)和N,N-二异丙基乙胺(3.39mg，26.24μmol)，反应液于25℃搅拌2h。反应结束后，反应液过滤，经制备高效液相色谱纯化(YMC-Actus Triart C18柱5μm，25mm直径，100mm长度；用水(含有0.05％甲酸)和乙腈的极性递减的混合物作为洗脱液(乙腈梯度比例8％-28％,洗脱时间12分钟)得标题化合物(1.00mg)。
MS m/z(ESI):515.0[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝9.38(s,1H),8.88(t,J＝6.2Hz,1H),8.76(s,1H),7.39(s,1H),6.57(s,1H),5.64-5.61(m,1H),5.60(s,2H),5.45(s,2H),4.80(d,J＝6.0Hz,2H),3.83(d,J＝5.7Hz,2H),1.92-1.80(m,2H),0.88(t,J＝7.3Hz,3H)。
实施例16、(S)-N-((9-氯-4-乙基-8,10-二氟-4-羟基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-11-基)甲基)-1-羟基环丙烷-1-甲酰胺(化合物16)
Figure PCTCN2022113499-appb-000126
步骤1：(S)-N-((9-氯-4-乙基-8,10-二氟-4-羟基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-11-基)甲基)-1-羟基环丙烷-1-甲酰胺(化合物16)
将化合物12(5.75mg,12.84μmol)和中间体9-2(3.93mg,38.52μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)中，向其中加入HATU(7.32mg,19.26μmol)和二异丙基乙基胺(4.98mg,38.52μmol)，反应液30℃搅拌1h。反应结束后，反应液过滤，经制备高效液相色谱纯化(YMC-Actus Triart C18柱5μm，25mm直径，100mm长度；用水(含有0.225％甲酸)和乙腈的极性递减的混合物作为洗脱液(乙腈梯度比例14％-34％,洗脱时间12分钟)得标题化合物(3mg)。
MS m/z(ESI):532.1[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝8.46(t,J＝5.9Hz,1H),8.16(d,J＝9.8Hz,1H),7.36(s,1H),6.56(s,1H),6.33(s,1H),5.53(s,2H),5.45(s,2H),4.93(d,J＝3.6Hz,2H),1.92-1.82(m,2H),1.04-0.99(m,2H),0.90-0.87(m,2H),0.87-0.82(m,3H)。
实施例17、(S)-N-((8-氯-4-乙基-4-羟基-9-甲基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-11-基)甲基)-2-羟基-2-甲基丙酰胺(化合物17)
Figure PCTCN2022113499-appb-000127
步骤1：(S)-N-((8-氯-4-乙基-4-羟基-9-甲基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-11-基)甲基)-2-羟基-2-甲基丙酰胺(化合物17)的合成
将中间体6-4(5mg,11.74μmol)和中间体17-1(2.44mg,23.48μmol)溶于无水N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)，向其中加入HATU(8.95mg,23.48μmol)和N,N-二异丙基乙胺(1.19mg,11.74μmol)，反应液于25℃搅拌1h。反应结束后，反应液过滤，经制备高效液相色谱纯化(Waters Xbridge C18柱5μm二氧化硅，25mm直径，100mm长度；用水(含有0.05％甲酸)和乙腈的极性递减的混合物作为洗脱液(乙腈梯度比例22％-42％,洗脱时间12分钟)得标题化合物(1mg)。
MS m/z(ESI):512.1[M+H] +。
1H NMR(400MHz,Methanol-d 4)δ＝8.32(s,1H),8.22(s,1H),7.67(s,1H),5.62(d,J＝16.4Hz,1H),5.52(s,2H),5.42(d,J＝16.4Hz,1H),5.01(s,2H),2.65(s,3H),2.05-1.94(m,2H),1.38(s,6H),1.03(t,J＝7.5Hz,3H)。
实施例18、N-(((S)-8-氯-4-乙基-4-羟基-9-甲基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-11-基)甲基)-2-羟基-3-甲基丁酰胺(化合物18)
Figure PCTCN2022113499-appb-000128
步骤1：N-(((S)-8-氯-4-乙基-4-羟基-9-甲基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-11-基)甲基)-2-羟基-3-甲基丁酰胺(化合物18)的合成
将中间体6-4(5mg,11.74μmol)和中间体18-1(2.77mg,23.48μmol)溶于无水N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)，向其中加入HATU(8.95mg,23.48μmol)和N,N-二异丙基乙胺(1.19mg,11.74μmol)，反应液于25℃搅拌1h。反应结束后，反应液过滤，经制备高效液相色谱纯化(Waters Xbridge C18柱5μm，25mm直径，100mm长度；用水(含有0.05％甲酸)和乙腈的极性递减的混合物作为洗脱液(乙腈梯度比例25％-45％,洗脱时间12分钟)得标题化合物(1.20mg)。
MS m/z(ESI):526.1[M+H] +。
1H NMR(400MHz,Methanol-d 4)δ＝8.30(s,1H),8.13(s,1H),7.61(s,1H),5.60(d,J＝16.3Hz,1H),5.56-5.45(m,2H),5.42-5.37(m,1H),5.00-4.90(m,2H),3.91(d,J＝3.3Hz,1H),3.13(d,J＝6.5Hz,1H),2.62(s,3H),2.01-1.94(m,2H),1.05-1.00(m,6H),0.77-0.70(m,3H)。
实施例19、(S)-4-乙基-8-氟-4-羟基-11-(((1-(羟基甲基)环丙基)氨基)甲基)-9-甲基-1,12-二氢-14H-吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-3,14(4H)-二酮(化合物19)
Figure PCTCN2022113499-appb-000129
步骤1：1-(2-氨基-4-氟-5-甲基苯基)-2-氯乙酮(中间体19-2)的合成
将三氯化硼(749.03mg,6.39mml)溶于二氯乙烷(8mL)中，反应液降温至0℃，向其中加入中间体19-1(1g,7.99mmol)和氯乙腈(723.94mg,9.59mmol)，反应在0℃下搅拌10min，向其中加入三氯化铝(1.39mg,10.39mmol)。之后反应液在氮气保护下升至25℃搅拌10min。反应液于氮气保护下90℃搅拌18h。反应结束后，反应冷却至室温，依次缓慢加入冰水(30mL)和5％HCl(10mL)，25℃下搅拌30min，再加入二氯甲烷(50ml)，有机相用水(20mL*2)洗涤，洗涤后的有机相用适量无水硫酸钠干燥。经制备薄层色谱法(二氧化硅，石油醚：乙酸乙酯＝9:1,少量乙醇)得标题化合物(300mg)。
MS m/z(ESI):201.8[M+H] +。
1H NMR(400MHz,氘代氯仿)δ＝7.47(d,J＝8.0Hz,1H),6.35(d,J＝11.3Hz,1H),4.64(s,2H),2.20(s,3H)。
步骤2：(S)-11-(氯甲基)-4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲基-1,12-二氢-14H-吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-3,14(4H)-二酮(中间体19-3)的合成
将中间体19-2(200mg,991.94μmol)和中间体1-3(260.12mg,991.94μmol)溶于无水甲苯(3mL)中，向其中加入对甲苯磺酸吡啶盐(12.46mg,49.60μmol)，反应液于氮气保护下90℃搅拌18h。反应结束后，反应冷却至室温，反应液过滤，滤饼用乙醇(3mL*2)洗涤得标题化合物粗品(223mg)。
MS m/z(ESI):429.1[M+H] +。
步骤3：(S)-4-乙基-8-氟-4-羟基-11-(((1-(羟基甲基)环丙基)氨基)甲基)-9-甲基-1,12-二氢-14H-吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-3,14(4H)-二酮(化合物19)的合成
将中间体19-3(20mg,46.64μmol)和中间体19-4(6.09mg,69.96μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中，向其中加入碳酸铯(30.39mg,93.27μmol)，反应液于氮气保护下40℃搅拌1h。反应结束后，反应液过滤，经制备高效液相色谱纯化(Waters Xbridge C18柱5μm，25mm直径，100mm长度；用水(含有0.05％甲酸)和乙腈的极性递减的混合物作为洗脱液(乙腈梯度比例10％-40％,洗脱时间12分钟)得标题化合物(1.3mg)。
MS m/z(ESI):480.1[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝9.35-9.20(m,1H),8.45-8.30(m,1H),8.12-7.84(m,1H),7.35(d,J＝6.5Hz,1H),6.62-6.50(m,1H),5.57-5.43(m,4H),5.20-4.75(m,2H),3.90-3.75(m,2H),2.55(s,3H),1.98-1.76(m,2H),1.30-1.20(m,2H),0.90-0.80(m,5H)。
实施例20、(S)-N-((8-乙基-8-羟基-9,12-二氧代-8,9,12,14-四氢-11H-呋喃并[3,2-f]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-15-基)甲基)-2-羟基乙酰胺(化合物20)
Figure PCTCN2022113499-appb-000130
步骤1：1-(5-氨基苯并呋喃-4-基)-2-氯乙酮(中间体20-2)的合成
将三氯化硼(1M，9.61mL)溶于二氯乙烷(14mL)中，反应液降温至0℃，向其中加入中间体20-1(1.6g，12.02mmol)和氯乙腈(1.36g，18.03mmol)，反应在0℃下搅拌10min，向其中加入三氯化铝(1.92g，14.42mmol)。反应液在氮气保护下升至25℃搅拌10min。反应液于氮气保护下90℃搅拌18h。反应结束后，反应液冷却至室温，依次缓慢加入冰水(50mL)和5％HCl(10mL)于25℃下搅拌30min，再加入二氯甲烷(60mL)，有机相用水(30mL*2)洗涤，洗涤后的有机相用适量无水硫酸钠干燥。经制备薄层色谱法(石油醚：(乙酸乙酯+乙醇＝3:1)＝9:1)得标题化合物(300mg)。
MS m/z(ESI):210.0[M+H] +。
1H NMR(400MHz,氘代氯仿)δ＝7.72(d,J＝2.1Hz,1H),7.53(d,J＝9.0Hz,1H),6.89(d,J＝1.4Hz,1H),6.66(d,J＝9.0Hz,1H),4.78(s,2H)
步骤2：(S)-15-(氯甲基)-8-乙基-8-羟基-11,14-二氢-12H-呋喃并[3,2-f]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-9,12(8H)-二酮(中间体20-3)的合成
将中间体20-2(200mg，954.07μmol)和中间体1-3(251.15mg，954.07μmol)溶于无水甲苯(4mL)中，向其中加入对甲苯磺酸吡啶盐(23.98mg，95.41μmol)，反应液于氮气保护下90℃搅拌16h。反应结束后，反应液冷却至室温，反应液过滤，滤饼用乙醇(3mL*2)洗涤，得标题化合物(300mg)。
MS m/z(ESI):437.1[M+H] +。
步骤3：(S)-15-(氨基甲基)-8-乙基-8-羟基-11,14-二氢-12H-呋喃并[3,2-f]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-9,12(8H)-二酮(中间体20-4)的合成
将中间体20-3(70mg,160.24μmol)溶于乙醇(0.5mL)和无水N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)中，向其中加入乌洛托品(89.85mg,640.96μmol)。反应液在25℃搅拌3h。反应结束后，反应液冷却至室温，减压浓缩至干，经制备高效液相色谱纯化(YMC-Actus Triart C18柱5μm，25mm直径，100mm长度；用水(含有0.225％甲酸)和甲醇的极性递减的混合物作为洗脱液；甲醇梯度比例5％-25％,洗脱时间12分钟)得标题化合物(17mg)。
MS m/z(ESI):418.1[M+H] +。
步骤4：(S)-N-((8-乙基-8-羟基-9,12-二氧代-8,9,12,14-四氢-11H-呋喃并[3,2-f]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-15-基)甲基)-2-羟基乙酰胺(化合物20)
将中间体20-4(5.00mg,11.98μmol)和羟基乙酸(4.55mg,59.89μmol)溶于无水N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)，向其中加入HATU(6.83mg,17.97μmol)和N,N-二异丙基乙胺(4.64 mg，35.94μmol)，反应液于25℃搅拌1h。反应结束后，反应液过滤，经制备高效液相色谱纯化(YMC-Actus Triart C18柱5μm，25mm直径，100mm长度；用水(含有0.05％甲酸)和乙腈的极性递减的混合物作为洗脱液(乙腈梯度比例15％-35％,洗脱时间12分钟)得标题化合物(3mg)。
MS m/z(ESI):476.2[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝8.48-8.41(m,1H),8.35(d,J＝1.8Hz,1H),8.22(d,J＝8.0Hz,1H),8.14(d,J＝8.0Hz,1H),7.76(s,1H),7.35(s,1H),6.54(s,1H),5.58(t,J＝5.6Hz,1H),5.52(s,2H),5.45(s,2H),5.10(d,J＝5.3Hz,2H),3.88(d,J＝5.6Hz,2H),1.93-1.82(m,2H),0.89(t,J＝7.2Hz,3H)。
实施例21、(S)-N-((9-氯-4-乙基-8,10-二氟-4-羟基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-11-基)甲基)-2-羟基乙酰胺(化合物21)
Figure PCTCN2022113499-appb-000131
步骤1：(S)-N-((9-氯-4-乙基-8,10-二氟-4-羟基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-11-基)甲基)-2-羟基乙酰胺(化合物21)的合成
将化合物12(7mg,15.63μmol)和羟基乙酸(1.78mg,25.48μmol)溶于无水N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)，向其中加入HATU(11.89mg,31.26μmol)和二异丙基乙胺(2.02mg,15.63μmol)，反应液于25℃搅拌1h。反应结束后，反应液过滤，经制备高效液相色谱纯化(Waters Xbridge C18柱5μm，25mm直径，100mm长度；用水(含有0.05％甲酸)和乙腈的极性递减的混合物作为洗脱液(乙腈梯度比例20％-40％,洗脱时间12分钟)得标题化合物(1mg)。
MS m/z(ESI):506.1[M+H] +。
1H NMR(400MHz,Methanol-d 4)δ＝8.35(t,J＝5.8Hz,1H),8.15(dd,J＝1.8,9.8Hz,1H),7.36(s,1H),6.57(s,1H),5.59-5.50(m,3H),5.45(s,2H),4.91(d,J＝3.2Hz,2H),3.84(d,J＝5.7Hz,2H),1.90-1.80(m,2H),0.87(t,J＝7.3Hz,3H)。
实施例22、(S)-N-((9-氯-4-乙基-8,10-二氟-4-羟基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-11-基)甲基)-2-羟基-2-甲基丙酰胺(化合物22)
Figure PCTCN2022113499-appb-000132
步骤1：(S)-N-((9-氯-4-乙基-8,10-二氟-4-羟基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-11-基)甲基)-2-羟基-2-甲基丙酰胺(化合物22)
将化合物12(20mg,44.66μmol)和中间体17-1(13.95mg,133.98μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)中，向其中加入HATU(25.47mg,66.99μmol)和N,N-二异丙基乙胺(17.32mg,133.98μmol)，反应液25℃搅拌1h。反应结束后，反应液过滤，经制备高效液相色谱纯化(YMC-Actus Triart C18柱5μm，25mm直径，100mm长度；用水(含 有0.225％甲酸)和乙腈的极性递减的混合物作为洗脱液(乙腈梯度比例20％-40％,洗脱时间12分钟)得标题化合物(1.07mg)。
MS m/z(ESI):534.2[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝8.30(t,J＝5.9Hz,1H),8.19-8.07(m,1H),7.36(s,1H),6.56(s,1H),5.55-5.45(m,3H),5.45(s,2H),4.90(d,J＝3.7Hz,2H),1.90-1.82(m,2H),1.24(d,J＝4.3Hz,6H),0.87(t,J＝7.3Hz,3H)。
实施例23、N-(((S)-9-氯-4-乙基-8,10-二氟-4-羟基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-11-基)甲基)-2-环丙基-2-羟基乙酰胺(化合物23)
Figure PCTCN2022113499-appb-000133
步骤1：N-(((S)-9-氯-4-乙基-8,10-二氟-4-羟基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-11-基)甲基)-2-环丙基-2-羟基乙酰胺(化合物23)
将化合物12(7.0mg,15.63μmol)和中间体11-1(9.08mg,78.16μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)中，向其中加入HATU(8.92mg,23.45μmol)和二异丙基乙胺(6.06mg,46.89μmol)，反应液25℃搅拌1h。反应结束后，反应液过滤，经制备高效液相色谱纯化(YMC-Actus Triart C18柱5μm，25mm直径，100mm长度；用水(含有0.225％甲酸)和乙腈的极性递减的混合物作为洗脱液(乙腈梯度比例41％-61％,洗脱时间12分钟)得标题化合物(7mg)。
MS m/z(ESI):546.2[M+H] +。
化合物23(7mg)经过制备超临界流体色谱分离纯化(柱子:DAICEL CHIRALCEL OD-H(250mm*30mm,5μm)；流动相:A:二氧化碳；B:乙醇；B％:50％；流速:80毫升/分钟)，得到化合物23-P1(2.1mg,RT:5.106min)和化合物23-P2(2.09mg,RT:5.641min)。
化合物23-P1：
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝8.32(t,J＝5.5Hz,1H),8.15(d,J＝9.7Hz,1H),7.36(s,1H),6.57(s,1H),5.53(s,2H),5.47(d,J＝5.1Hz,1H),5.45(s,2H),4.93-4.86(m,2H),2.02-1.96(m,1H),1.91-1.81(m,2H),1.04-0.96(m,1H),0.87(t,J＝7.3Hz,3H),0.37-0.31(m,2H),0.29-0.23(m,2H).
MS m/z(ESI):546.2[M+H] +。
化合物23-P2：
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝8.37-8.29(m,1H),8.15(d,J＝9.9Hz,1H),7.36(s,1H),6.57(s,1H),5.53(s,2H),5.50-5.46(m,1H),5.45(s,2H),4.96-4.86(m,2H),2.10-1.95(m,1H),1.92-1.81(m,2H),1.04-0.98(m,1H),0.87(t,J＝7.3Hz,3H),0.40-0.31(m,2H),0.30-0.25(m,2H)。
MS m/z(ESI):546.2[M+H] +。
实施例24、(S)-9-氯-4-乙基-8,10-二氟-4-羟基-11-(((1-(羟甲基)环丙基)氨基)甲基)-1,12-二氢-14H-吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-3,14(4H)-二酮(化合物24)
Figure PCTCN2022113499-appb-000134
步骤1：(S)-9-氯-4-乙基-8,10-二氟-4-羟基-11-(((1-(羟甲基)环丙基)氨基)甲基)-1,12-二氢-14H-吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-3,14(4H)-二酮(化合物24)的合成
将中间体12-3(30mg,64.21μmol)和中间体19-4(27.97mg,321.03μmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中，向其中加入碳酸铯(41.84mg,128.41μmol)，反应液于氮气保护下40℃搅拌1h。反应结束后，反应液过滤，滤液经制备高效液相色谱纯化(Waters Xbridge C18柱5μm，25mm直径，100mm长度；用水(含有0.05％甲酸)和乙腈的极性递减的混合物作为洗脱液(乙腈梯度比例30％-50％,洗脱时间12分钟)得标题化合物(3.1mg)。
MS m/z(ESI):518.1[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝8.13-7.97(m,1H),7.26(s,1H),6.80-6.68(m,1H),6.56(s,1H),5.45-5.35(m,2H),4.25-4.15(m,1H),4.10-4.05(m,1H),2.98-2.90(m,3H),2.87-2.72(m,1H),2.69-2.56(m,1H),2.00-1.78(m,2H),0.87(t,J＝7.2Hz,3H),0.32-0.19(m,2H),0.18-0.01(m,2H)。
实施例25、(R)-N-(((S)-9-氯-4-乙基-8,10-二氟-4-羟基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-11-基)甲基)-2-羟基丙酰胺(化合物25)
Figure PCTCN2022113499-appb-000135
步骤1：(R)-N-(((S)-9-氯-4-乙基-8,10-二氟-4-羟基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-11-基)甲基)-2-羟基丙酰胺(化合物25)的合成
将化合物12(6mg,13.40μmol)和中间体25-1(2.41mg,26.80μmol)溶于无水N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)，向其中加入HATU(10.09mg,26.80μmol)和二异丙基乙胺(1.73mg,13.49μmol)，反应液于25℃搅拌1h。反应结束后，反应液过滤，经制备高效液相色谱纯化(Waters Xbridge C18柱5μm，25mm直径，100mm长度；用水(含有0.05％甲酸)和乙腈的极性递减的混合物作为洗脱液(乙腈梯度比例20％-40％,洗脱时间12分钟)得标题化合物(1.80mg)。
MS m/z(ESI):520.1[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝8.34(t,J＝5.7Hz,1H),8.15(d,J＝9.9Hz,1H),7.36(s,1H),6.57(s,1H),5.59(d,J＝5.0Hz,1H),5.51(s,2H),5.45(s,2H),4.90(s,2H),4.13-3.89(m,1H),1.95-1.77(m,2H),1.21(d,J＝6.8Hz,3H),0.87(t,J＝7.3Hz,3H)。
实施例26、(S)-N-(((S)-9-氯-4-乙基-8,10-二氟-4-羟基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-11-基)甲基)-2-羟基丙酰胺(化合物26)
Figure PCTCN2022113499-appb-000136
步骤1：(S)-N-(((S)-9-氯-4-乙基-8,10-二氟-4-羟基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-11-基)甲基)-2-羟基丙酰胺(化合物26)的合成
将化合物12(6mg,13.40μmol)和中间体26-1(2.41mg,26.80μmol)溶于无水N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)，向其中加入HATU(10.09mg,26.80μmol)和N,N-二异丙基乙胺(1.73mg,13.49μmol)，反应液于25℃搅拌1h。反应结束后，反应液过滤，经制备高效液相色谱纯化(Waters Xbridge C18柱5μm，25mm直径，100mm长度；用水(含有0.05％甲酸)和乙腈的极性递减的混合物作为洗脱液；乙腈梯度比例20％-40％,洗脱时间12分钟)得标题化合物(1.60mg)。
MS m/z(ESI):520.1[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝8.34(t,J＝5.7Hz,1H),8.23-8.03(m,1H),7.36(s,1H),6.57(s,1H),5.59(d,J＝5.0Hz,1H),5.51(s,2H),5.45(s,2H),4.90(s,2H),4.07-3.96(m,1H),1.93-1.81(m,2H),1.21(d,J＝6.8Hz,3H),0.87(t,J＝7.3Hz,3H)。
实施例27、(S)-N-((4-氯-8-乙基-8-羟基-9,12-二氧代-8,9,12,14-四氢-11H-呋喃并[3,2-f]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-15-基)甲基)-2-羟基乙酰胺(化合物27)
Figure PCTCN2022113499-appb-000137
步骤1：(3-氯-2-羟基-5-硝基苯基)甲二醇(中间体27-2)的合成
将中间体27-2(6g)溶于乙酸(25mL)中，反应液降温到0℃向其中缓慢加入硝酸(9.64g)。反应液在25℃搅拌4h。反应结束后，反应液缓慢低滴加到冰水中，然后用乙酸乙酯(60mL)萃取三次，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤后，减压浓缩至干得标题化合物(5.88g)。
1H NMR(400MHz,METHANOL-d4)δ＝8.16(d,J＝1.4,2.4Hz,1H),8.07-8.01(m,1H),5.68(s,1H)。
步骤2：7-氯-5-硝基苯并呋喃-2-甲酸乙酯(中间体27-4)的合成
将中间体27-2(5.88g)，中间体27-3(7.69g)和碳酸钾(7.41g)溶于丙酮(60mL)中， 反应液在70℃搅拌6h。反应结束后，向其中加入水(50ml)，然后用乙酸乙酯(50mL)萃取三次，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤后，减压浓缩至干得标题化合物(4.5g)。
1H NMR(400MHz,氘代氯仿)δ＝8.55(d,J＝2.1Hz,1H),8.39(d,J＝2.1Hz,1H),7.68(s,1H),4.49(q,J＝7.1Hz,2H),1.46(t,J＝7.1Hz,3H)。
步骤3：7-氯-5-硝基苯并呋喃-2-羧酸(中间体27-5)的合成
将中间体27-4(4.5g)溶于甲醇(50mL)中，向其中缓慢滴加氢氧化钠水溶液(2g in 25ml H 2O)，反应液在25℃搅拌3h。反应结束后，向其中加入水(120ml)，然后用乙酸乙酯(50mL)萃取两次。水相用稀盐酸调节pH值到1，再用乙酸乙酯(50mL)萃取三次，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤后，减压浓缩至干得标题化合物(4.0g)
1H NMR(400MHz,氘代氯仿)δ＝8.45(d,J＝2.1Hz,1H),8.25(d,J＝2.1Hz,1H),7.58(s,1H)。
步骤4：7-氯-5-硝基苯并呋喃(中间体27-6)的合成
将中间体27-5(4g)和氧化铜(1.05g)溶于喹啉(28mL)中，反应液通入氮气并在200℃搅拌0.5h。反应结束后，降温到0℃向其中缓慢滴加入稀盐酸(80ml)，然后加水(30ml)并用乙酸乙酯(30mL)萃取三次。有机相用无水硫酸钠干燥，过滤后，减压浓缩至干得标题化合物(2.4g)
1H NMR(400MHz,氘代氯仿)δ＝8.49(d,J＝2.1Hz,1H),8.31(d,J＝2.1Hz,1H),7.88(d,J＝2.3Hz,1H),7.02(d,J＝2.3Hz,1H)
步骤5：7-氯苯并呋喃-5-胺(中间体27-7)的合成
将中间体27-6(2.4g)和铁粉(1.55g)溶于甲醇(5mL)中，向其中滴加氯化铵水溶液(148.91mg,5ml)，反应液通入氮气并在80℃搅拌0.5h。反应结束后，降温到25℃向其中加入水(10ml)，并用乙酸乙酯(10mL)萃取三次。有机相用无水硫酸钠干燥，过滤后，减压浓缩至干得标题化合物(1.2g)。
MS m/z(ESI):167.8[M+H] +。
步骤6：1-(5-氨基-7-氯苯并呋喃-4-基)-2-氯乙-1-酮(中间体27-8)的合成
将三氯化硼(671.17mg)溶于1.2二氯乙烷(8mL)中，反应液降温至0℃，向其中加入中间体27-7(1.2g)和氯乙腈(702.75mg)，反应在0℃下搅拌10min，向其中加入三氯化铝(1.24g)。之后反应液在氮气保护下升至25℃搅拌10min。反应液于氮气保护下90℃搅拌18h。反应结束后，待反应冷却至室温，依次缓慢加入冰水(5mL)和5％HCl(1mL)于25℃下搅拌30min，再加入二氯甲烷(4mL)，有机相用水(2mL*2)洗涤，洗涤后的有机相用适量无水硫酸钠干燥。过滤后，减压浓缩至干，残余物经制备薄层色谱法(二氧化硅，石油醚：(乙酸乙酯与乙醇的3/1混合溶剂)＝9:1)得标题化合物(500mg)。
MS m/z(ESI):243.8[M+H] +。
步骤7:(S)-4-氯-15-(氯甲基)-8-乙基-8-羟基-11,14-二氢-12H-呋喃并[3,2-f]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-9,12(8H)-二酮(中间体27-9)的合成
将中间体27-8(450mg)和中间体1-3(480.35mg)溶于甲苯(5mL)中，向其中加入对甲基苯磺酸吡啶盐(23.17mg)。反应液在90℃搅拌18h。反应结束后，待反应冷却至室温，加入乙醇(1mL)，反应液于25℃搅拌0.5h。反应液过滤，滤饼用石油醚(2mL*2)洗涤，干燥后得标题化合物(500mg)。
MS m/z(ESI):471.0[M+H] +。
步骤8：(S)-15-(氨基甲基)-4-氯-8-乙基-8-羟基-11,14-二氢-12H-呋喃并[3,2-f]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-9,12(8H)-二酮(中间体27-10)的合成
将中间体27-9(450mg)溶于甲醇(1mL)和N,N-二甲基甲酰胺(1mL)的混合溶液中，向其中加入乌洛托品(267.71mg)。反应液在50℃搅拌4h。反应结束后，反应液冷却至室温，加入浓盐酸(2mL)搅拌，然后减压浓缩至干，残余物经制备高效液相色谱纯化(Waters Xbridge C18柱5μm，25mm直径，100mm长度；用水(含有0.225％甲酸)和乙腈的极性 递减的混合物作为洗脱液；乙腈梯度比例13％-43％,洗脱时间12分钟)得标题化合物(60.0mg)。
MS m/z(ESI):451.9[M+H] +。
步骤9：(S)-N-((4-氯-8-乙基-8-羟基-9,12-二氧代-8,9,12,14-四氢-11H-呋喃并[3,2-f]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-15-基)甲基)-2-羟基乙酰胺(化合物27)的合成
将中间体27-10(10mg)和羟基乙酸(5.05mg)溶于无水N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)，向其中加入HATU(16.83mg)和二异丙基乙胺(2.86mg)，反应液于25℃搅拌1h。反应结束后，反应液过滤，残余物经制备高效液相色谱纯化(Waters Xbridge C18柱5μm，25mm直径，100mm长度；用水(含有0.05％甲酸)和乙腈的极性递减的混合物作为洗脱液(乙腈梯度比例28％-48％,洗脱时间12分钟)得标题化合物(6.0mg)。
MS m/z(ESI):510.1[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝8.46(s,2H),8.36-8.20(m,1H),7.85(s,1H),7.35(s,1H),6.54(s,1H),5.58(t,J＝5.6Hz,1H),5.49(d,J＝2.9Hz,2H),5.45(s,2H),5.07(s,2H),3.88(d,J＝5.6Hz,2H),2.02-1.75(m,2H),0.89(t,J＝7.3Hz,3H)。
实施例28、N-(((S)-4-氯-8-乙基-8-羟基-9,12-二氧代-8,9,12,14-四氢-11H-呋喃并[3,2-f]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-15-基)甲基)-2-环丙基-2-羟基乙酰胺(化合物28)
Figure PCTCN2022113499-appb-000138
步骤1：N-(((S)-4-氯-8-乙基-8-羟基-9,12-二氧代-8,9,12,14-四氢-11H-呋喃并[3,2-f]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-15-基)甲基)-2-环丙基-2-羟基乙酰胺(化合物28)的合成
将中间体27-10(10mg)和中间体11-1(8.34mg)溶于无水N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)，向其中加入HATU(13.65mg)和二异丙基乙胺(3.10mg)，反应液于25℃搅拌1h。反应结束后，反应液过滤，滤液减压浓缩至干，残余物经制备高效液相色谱纯化(Waters Xbridge C18柱5μm，25mm直径，100mm长度；用水(含有0.05％甲酸)和乙腈的极性递减的混合物作为洗脱液(乙腈梯度比例34％-54％,洗脱时间12分钟)得标题化合物(6.2mg)。
MS m/z(ESI):550.1[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝8.48-8.43(m,2H),8.29(s,1H),7.84(s,1H),7.35(s,1H),6.56(s,1H),5.51(s,2H),5.45(s,2H),5.15-4.98(m,2H),3.57(d,J＝6.0Hz,1H),1.95-1.80(m,2H),1.10-1.00(m,1H),0.89(t,J＝7.3Hz,3H),0.41-0.32(m,2H),0.32-0.24(m,2H)。
实施例29、2-环丙基-N-(((S)-7-乙基-7-羟基-15-硝基-8,11-二氧代-7,8,11,13-四氢-10H-[1,3]二氧杂环戊烯并[4,5-g]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-14-基)甲基)-2-羟基乙酰胺(化合物29)
Figure PCTCN2022113499-appb-000139
步骤1：(S)-14-(氯甲基)-7-乙基-7-羟基-15-硝基-10,13-二氢-11H-[1,3]二氧杂环戊烯并[4,5-g]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-8,11(7H)-二酮(中间体29-1)的合成
将中间体14-7(500.0mg)溶于硫酸(15mL)中，反应液冷却至0℃。再缓慢向其中加入硝酸(357.35g，70％纯度)，反应液于25℃搅拌1.5h，反应完毕后，依次缓慢加入冰水(10mL)再加入二氯甲烷(30mL)，有机相用水40mL(20mL*2)洗涤，洗涤后的有机相用适量无水硫酸钠干燥。过滤后，滤液经减压浓缩至干得标题化合物粗品(280.0mg)。
MS m/z(ESI):486.0[M+H] +。
步骤2：(S)-14-(氨基甲基)-7-乙基-7-羟基-15-硝基-10,13-二氢-11H-[1,3]二氧杂环戊烯并[4,5-g]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-8,11(7H)-二酮(中间体29-2)的合成
将中间体29-1(270.0mg)溶于甲醇(2mL)和四氢呋喃(2mL)中，向其中加入乌洛托品(233.73mg)。反应液在60℃搅拌16h。反应完毕后，待反应冷却至室温，减压浓缩至干，残余物经制备高效液相色谱纯化(YMC-Pack CN C18柱5μm二氧化硅，30mm直径，150mm长度；用水(含有0.225％FA)和甲醇的极性递减的混合物作为洗脱液(甲醇梯度比例9％-29％,洗脱时间12分钟)得标题化合物(15.0mg)。
MS m/z(ESI):467.1[M+H] +。
步骤3：2-环丙基-N-(((S)-7-乙基-7-羟基-15-硝基-8,11-二氧代-7,8,11,13-四氢-10H-[1,3]二氧杂环戊烯并[4,5-g]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-14-基)甲基)-2-羟基乙酰胺(化合物29)的合成
将中间体29-2(12.00mg)和中间体11-1(14.94mg)溶于无水N,N-二甲基甲酰胺(1mL)，向其中加入HATU(14.67mg)和N,N-二异丙基乙胺(9.98mg)，反应液于25℃搅拌1.5h。反应完毕后，反应液过滤，滤液减压浓缩至干，残余物经制备高效液相色谱纯化(Boston Prime C18柱5μm二氧化硅，30mm直径，150mm长度；用水(含有0.05％甲酸)和乙腈的极性递减的混合物作为洗脱液；乙腈梯度比例15％-45％,洗脱时间12分钟)得标题化合物(5.20mg)。
MS m/z(ESI):565.2[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝8.25(t,J＝5.3Hz,1H),7.81(s,1H),7.28(s,1H),6.52(d,J＝2.6Hz,3H),5.55(d,J＝4.9Hz,1H),5.43(s,2H),5.36(s,2H),4.48(d,J＝5.1Hz,2H),3.53(t,J＝5.7Hz,1H),1.91-1.83(m,2H),1.10-0.98(s,1H),0.87(t,J＝7.3Hz,3H),0.42-0.28(m,4H)。
实施例30、N-(((S)-15-氯-7-乙基-7-羟基-8,11-二氧代-7,8,11,13-四氢-10H-[1,3]二氧杂环戊烯并[4,5-g]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-14-基)甲基)-2-环丙基-2-羟基乙酰胺(化合物30)
Figure PCTCN2022113499-appb-000140
步骤1：2-氯-3,4-二羟基苯甲醛(中间体30-2)的合成
将中间体30-1(20.0g)溶于无水二氯甲烷(100mL)中，反应液冷却至0℃，向其中缓慢加入三溴化硼(87.41g)，反应液于25℃搅拌4h。反应结束后，反应液缓慢倒入冰水中，再加入乙酸乙酯(200mL),有机相用水(100mL*2)洗涤，洗涤后的有机相用适量无水硫酸钠干燥，过滤后，滤液减压浓缩至干，残余物经乙酸乙酯：石油醚＝1：4溶液搅洗，过滤后得标题化合物(14g)。
MS m/z(ESI):173.1[M+H] +。
步骤2：4-氯苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-甲醛(中间体30-3)的合成
将中间体30-2(10.0g)溶于无水N,N-二甲基甲酰胺(100mL)中，向其中加入碳酸铯(28.32g)和二碘甲烷(23.28g)。反应液于100℃搅拌1h。反应完毕后，待反应冷却至室温，依次缓慢加入水(100mL)，再加入乙酸乙酯(150mL)，有机相用水(50mL*2)洗涤，洗涤后的有机相用适量无水硫酸钠干燥，过滤后，滤液经减压浓缩至干得标题化合物(5.2g)。
MS m/z(ESI):185.4[M+H] +。
步骤3：1-(4-氯苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基)乙-1-醇(中间体30-4)的合成
将中间体30-3(5.0g)溶于无水四氢呋喃(100mL)中，反应液冷却至-78℃，向其中缓慢加入甲基溴化镁(4.85g,3M)。氮气保护下反应液于25℃搅拌4h。反应结束后，依次缓慢加入水(50mL)，再加入乙酸乙酯(100mL),有机相用水(50mL*2)洗涤，洗涤后的有机相用适量无水硫酸钠干燥，过滤后，滤液经减压浓缩至干，残余物经制备柱层析色谱法纯化(石油醚：乙酸乙酯＝2:1)得标题化合物(5.3g)。
1H NMR(400MHz,氘代氯仿)δ＝6.99(d,J＝8.3Hz,1H),6.69(d,J＝8.1Hz,1H),5.97(s,2H),5.13(q,J＝6.4Hz,1H),1.41(d,J＝6.4Hz,3H)
步骤4：1-(4-氯苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基)乙-1-酮(中间体30-5)的合成
将中间体30-4(5.2g)溶于无水二氯甲烷(100mL)中，反应液冷却至0℃，向其中缓慢加入戴斯-马丁试剂(DMP)(16.49g)。氮气保护下反应液于25℃搅拌2h。反应结束后，依次缓 慢加入水(50mL)，再加入乙酸乙酯(100mL)，有机相用水(50mL*2)洗涤，洗涤后的有机相用适量无水硫酸钠干燥。过滤后，滤液减压浓缩至干，残余物经制备柱层析色谱法纯化(石油醚：乙酸乙酯＝3:1)得标题化合物(3.0g)。
MS m/z(ESI):199.2[M+H] +。
步骤5：1-(4-氯-6-硝基苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基)乙-1-酮(中间体30-6)的合成
将中间体30-5(2.50g)溶于无水二氯甲烷(20mL)中，向其中缓慢加入浓硫酸(1.23g)和硝酸(5.67g)。反应液在25℃搅拌3h。反应结束后，反应液缓慢倒入冰水中，再加入乙酸乙酯(150mL)，有机相用水(50mL*2)洗涤，洗涤后的有机相用适量无水硫酸钠干燥，过滤后，滤液减压浓缩至干，残余物经制备柱层析色谱法(石油醚：乙酸乙酯＝2:1)得标题化合物(1.8g)。
MS m/z(ESI):244.1[M+H] +。
步骤6：1-(6-氨基-4-氯苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基)乙-1-酮(中间体30-7)的合成
将中间体30-6(0.80g)溶于无水甲醇(6mL)中，向其中加入Raney Ni(400.0mg)。反应液在氢气氛围下25℃搅拌16h。反应结束后，反应液经过滤，滤液减压浓缩至干得标题化合物(510.0mg)。
MS m/z(ESI):214.2[M+H] +。
步骤7：N-(6-乙酰基-7-氯苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基)乙酰胺(中间体30-8)的合成
将中间体30-7(260.0mg)溶于无水二氯甲烷(5mL)中，反应液冷却至0℃向其中加入N,N-二异丙基乙胺(235.95mg)和氯乙酰(143.32mg)。反应液在25℃搅拌1.5h。反应结束后，反应液减压浓缩至干，残余物经制备层析色谱法纯化(石油醚：乙酸乙酯＝5:1)得标题化合物(140.0mg)。
MS m/z(ESI):256.0[M+H] +。
步骤8：N-(6-(2-溴乙酰基)-7-氯苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基)乙酰胺(中间体30-9)的合成
将中间体30-8(110.00mg)溶于乙酸(2mL)中，向其中加入溴化氢的乙酸溶液(158.24mg,33％含量)，再缓慢向其中加入液溴(72.20mg)反应液于25℃搅拌1h。反应结束后，反应液缓慢倒入冰水中，再加入乙酸乙酯(30mL)，有机相用水(20mL*2)洗涤，洗涤后的有机相用适量无水硫酸钠干燥。有机相经减压浓缩至干得标题化合物(110.0mg)。
MS m/z(ESI):334.0[M+H] +。
步骤9：1-(6-氨基-4-氯苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基)-2-氯乙-1-酮(中间体30-10)的合成
将中间体30-9(110.00mg)溶于无水乙醇(1mL)和浓盐酸(1mL)中，反应液于60℃搅拌16h。反应结束后，待反应冷却至室温，依次缓慢加入冰水(10mL)和饱和碳酸氢钠(10mL)，再加入二氯甲烷(30mL),有机相用水(20mL*2)洗涤，洗涤后的有机相用适量无水硫酸钠干燥。过滤后，滤液经减压浓缩至干，残余物经制备薄层色谱法纯化(石油醚：乙酸乙酯＝3:1)得标题化合物(75mg)。
MS m/z(ESI):248.0[M+H] +。
步骤10：(S)-15-氯-14-(氯甲基)-7-乙基-7-羟基-10,13-二氢-11H-[1,3]二氧杂环戊烯并[4,5-g]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-8,11(7H)-二酮(中间体30-11)的合成
将中间体30-10(75.00mg)和中间体1-3(83.57mg)溶于甲苯(3mL)中，向其中加入对甲基苯磺酸吡啶盐(PPTS)(11.4mg)。反应液在90℃搅拌16h。反应结束后，待反应冷却至室温，加入乙醇(1mL)，反应液于25℃搅拌0.5h。反应液过滤，滤饼用乙醇(2mL*2)洗涤，干燥后得标题化合物(75.0mg)。
MS m/z(ESI):475.1[M+H] +。
步骤11：(S)-14-(氨基甲基)-15-氯-7-乙基-7-羟基-10,13-二氢-11H-[1,3]二氧杂环戊烯并[4,5-g]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-8,11(7H)-二酮(中间体30-12)的合成
将中间体30-11(70.00mg)溶于无水甲醇(2mL)和无水四氢呋喃(1mL)中，向其中加入乌洛托品(61.94mg)。反应液在80℃搅拌2h。反应结束后，待反应冷却至室温，减压浓缩至干，残余物经制备高效液相色谱纯化(Boston Prime C18柱5μm二氧化硅，30mm直径，150mm长度；用水(含有0.225％甲酸)和乙腈的极性递减的混合物作为洗脱液(乙腈梯度比例5％-25％,洗脱时间12分钟)得标题化合物(16.0mg)。
MS m/z(ESI):456.1[M+H] +。
步骤12：N-(((S)-15-氯-7-乙基-7-羟基-8,11-二氧代-7,8,11,13-四氢-10H-[1,3]二氧杂环戊烯并[4,5-g]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-14-基)甲基)-2-环丙基-2-羟基乙酰胺(化合物30)的合成
将中间体30-12(5.00mg)和中间体11-1(6.37mg)溶于无水N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)，向其中加入HATU(6.26mg)和N,N-二异丙基乙胺(4.25mg)，反应液于25℃搅拌1h。反应结束后，反应液过滤，滤液减压浓缩至干，残余物经制备高效液相色谱纯化(Boston Prime C18柱5μm二氧化硅，30mm直径，150mm长度；用水(含有0.05％甲酸)和乙腈的极性递减的混合物作为洗脱液(乙腈梯度比例31％-51％,洗脱时间12分钟)得标题化合物(2.30mg)。
MS m/z(ESI):554.2[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝7.78(t,J＝5.4Hz,1H),7.35(s,1H),7.01(s,1H),6.30-6.25(m,1H),6.16(d,J＝1.5Hz,2H),5.27-5.21(m,2H),5.19(s,2H),4.93-4.78(m,2H),3.29(dd,J＝2.4,6.1Hz,1H),1.68-1.56(m,2H),0.81-0.72(m,1H),0.63(t,J＝7.3Hz,3H),0.14-0.06(m,2H),0.05-0.03(m,2H)。
实施例31、(S)-N-((15-氯-7-乙基-7-羟基-8,11-二氧代-7,8,11,13-四氢-10H-[1,3]二氧杂环戊烯并[4,5-g]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-14-基)甲基)-2-羟基乙酰胺(化合物31)
Figure PCTCN2022113499-appb-000141
步骤1：(S)-N-((15-氯-7-乙基-7-羟基-8,11-二氧代-7,8,11,13-四氢-10H-[1,3]二氧杂环戊烯并[4,5-g]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-14-基)甲基)-2-羟基乙酰胺(化合物31)的合成
将中间体30-12(5mg)和羟基乙酸(4.17mg)溶于N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)中，向其中加入HATU(6.26mg)和N,N-二异丙基乙胺(4.25mg)，反应液25℃搅拌1h。反应结束后，反应液过滤，滤液减压浓缩至干，残余物经制备高效液相色谱纯化(Boston Prime C18柱5μm二氧化硅，30mm直径，150mm长度；用水(含有0.225％甲酸)和乙腈的极性递减的混合物作为洗脱液；乙腈梯度比例20％-40％,洗脱时间12分钟)得标题化合物(2.50mg)。
MS m/z(ESI):514.2[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝8.03(t,J＝5.8Hz,1H),7.60(s,1H),7.25(s,1H),6.54-6.48(m,1H),6.41(s,2H),5.48(s,2H),5.43(s,2H),5.12(d,J＝6.0Hz,2H),3.82(s,2H),1.93-1.78(m,2H),0.87(t,J＝7.4Hz,3H).
实施例32、(S)-N-((9-氯-4-乙基-8,10-二氟-4-羟基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-11-基)甲基)-3-羟基丙酰胺(化合物32)
Figure PCTCN2022113499-appb-000142
将化合物12(10mg)和羟基丙酸(2.21mg)溶于无水N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)，向其中加入HATU(12.70mg)和N,N-二异丙基乙胺(2.89mg)，反应液于25℃搅拌1h。反应结束后，反应液过滤，滤液减压浓缩至干，残余物经制备高效液相色谱纯化(Waters Xbridge C18柱5μm，25mm直径，100mm长度；用水(含有0.05％甲酸)和乙腈的极性递减的混合物作为洗脱液(乙腈梯度比例28％-48％,洗脱时间12分钟)得标题化合物(0.80mg)。
MS m/z(ESI):520.1[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝8.54(t,J＝5.6Hz,1H),8.15(d,J＝9.8Hz,1H),7.35(s,1H),6.57(s,1H),5.54(s,2H),5.45(s,2H),4.85(s,2H),4.54(s,1H),3.57(t,J＝6.5Hz,2H),2.32-2.26(m,2H),1.99-1.75(m,2H),0.87(t,J＝7.3Hz,3H)。
实施例33、(S)-N-((4-氯-8-乙基-8-羟基-9,12-二氧代-2,3,8,9,12,14-六氢-1H,11H-环戊二烯并[f]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-15-基)甲基)-2-羟基乙酰胺(化合物33)
Figure PCTCN2022113499-appb-000143
步骤1：7-氯-2,3-二氢-1H-茚-4-醇(中间体33-2)的合成
将中间体33-1(500mg)溶于无水乙腈(5mL)中，向其中加入NCS(547mg)，加毕，在25℃条件下搅拌2小时。反应结束后，向反应液加入水(10mL)，用乙酸乙酯萃取(10mL*3次)，饱和食盐水(30mL)洗涤有机层，有机层用无水硫酸钠干燥。过滤后，有机相经减压浓缩除去溶剂，残余物经硅胶柱层析法纯化(石油醚:乙酸乙酯＝100:1～10:1)得标题化合物(600mg)。
MS m/z(ESI):169.0[M+H] +。
步骤2：7-氯-5-硝基-2,3-二氢-1H-茚-4-醇(中间体33-3)的合成
将中间体33-2(10g)溶于AcOH(50mL)和H 2O(10mL)中，在0℃向其中加入HNO 3(8.62g,65％质量分数)。反应液于0℃下搅拌2小时。待反应完毕，缓慢将反应液加入冰水(200mL)。 过滤后，经减压浓缩除去溶剂得标题化合物(10g)。
MS m/z(ESI):214.0[M+H] +。
步骤3：5-氨基-7-氯-2,3-二氢-1H-茚-4-醇(中间体33-4)的合成
将中间体33-3(5g)溶于无水DCM(50mL)，向其中加入AcOH(14.04g)和Zn(7.61g)，反应液于25℃下搅拌12小时。待反应完毕，依次加入水(200mL)和乙酸乙酯(200mL)，有机相用饱和碳酸氢钠水溶液(50mL*2)洗涤，洗涤后的有机相用适量无水硫酸钠干燥。有机相经减压浓缩除去溶剂得标题化合物(4g)。
MS m/z(ESI):184.0[M+H] +。
步骤4：5-乙酰氨基-7-氯-2,3-二氢-1H-茚-4-基乙酸酯(中间体33-5)的合成
将中间体33-4(4g)溶于无水二氯甲烷(40mL)，向其中加入乙酸酐(Ac 2O)(6.67g)和三乙胺(TEA)(6.61g)，反应液于25℃下搅拌12小时。待反应完毕，依次加入水(200mL)和乙酸乙酯(200mL)，有机相用饱和NaCl水溶液(50mL*2)洗涤，洗涤后的有机相用适量无水硫酸钠干燥。有机相经减压浓缩除去溶剂，残余物经硅胶柱层析法纯化(石油醚:乙酸乙酯＝20:1～5:1)得标题化合物(4g)。
MS m/z(ESI):268.0[M+H] +。
步骤5：N-(7-氯-4-羟基-2,3-二氢-1H-茚-5-基)乙酰胺(中间体33-6)的合成
将中间体33-5(4g)溶于无水甲醇(20mL)，向其中加入K 2CO 3(6.19g)，反应液于25℃下搅拌12小时。待反应完毕，依次加入水(200mL)和乙酸乙酯(200mL)，有机相用饱和NaCl水溶液(50mL*2)洗涤，洗涤后的有机相用适量无水硫酸钠干燥。有机相经减压浓缩除去溶剂，残余物经硅胶柱层析法纯化(石油醚:乙酸乙酯＝20:1～1:1)得标题化合物(2.8g)。
MS m/z(ESI):226.0[M+H] +。
步骤6：5-乙酰氨基-7-氯-2,3-二氢-1H-茚-4-基三氟甲烷磺酸酯(中间体33-7)的合成
将中间体33-6(500mg)溶于二氯甲烷(5mL)，向其中加入三氟甲磺酸酐(Tf 2O)(749mg)和三乙胺(TEA)(672mg)，反应液于25℃下搅拌12小时。待反应完毕，依次加入水(50mL)和乙酸乙酯(50mL)，有机相用饱和NaCl水溶液(50mL*2)洗涤，洗涤后的有机相用适量无水硫酸钠干燥。有机相经减压浓缩除去溶剂，残余物经硅胶柱层析法纯化(石油醚:乙酸乙酯＝20:1～1:1)得标题化合物(580mg)。
MS m/z(ESI):358.0[M+H] +。
步骤7：N-(4-(1-丁氧基乙烯基)-7-氯-2,3-二氢-1H-茚-5-基)乙酰胺(中间体33-8)的合成
将中间体33-7(430mg)和乙烯基正丁醚(360.60mg)溶于二氧六环(20mL)中，加入二异丙基乙胺(DIEA)(466mg)，1,1'-双(二苯基膦)二茂铁(DPPF)(66mg)和三(二亚苄基丙酮)二钯(Pd 2(dba) 3)(110mg)，反应液于80℃氮气保护下搅拌反应16小时。反应结束后，反应液用水(50ml)稀释，乙酸乙酯萃取(50ml*3次)，合并有机相，用无水硫酸钠干燥。过滤后，有机相经减压浓缩除去溶剂，残余物经硅胶柱层析法纯化(石油醚:乙酸乙酯＝20:1～1:1)得标题化合物(300mg)。
MS m/z(ESI):308.0[M+H] +。
步骤8：N-(4-乙酰基-7-氯-2,3-二氢-1H-茚-5-基)乙酰胺(中间体33-9)的合成
将中间体33-8(200mg)溶于二氧六环(5mL)中，加入1N HCl(5mL),25℃下搅拌反应2小时。反应结束后，有机相经减压浓缩除去溶剂得标题化合物(150mg)。
MS m/z(ESI):252.0[M+H] +。
步骤9：N-(4-(2-溴乙酰基)-7-氯-2,3-二氢-1H-茚-5-基)乙酰胺(中间体33-10)的合成
将中间体33-9(300mg)溶于HBr/AcOH(4mL，33％质量分数)中，加入NBS(318.20mg)，反应液于25℃下搅拌反应2小时。待反应完毕，反应液经减压浓缩除去溶剂，得标题化合物(390mg)。
MS m/z(ESI):330.0[M+H] +。
步骤10:1-(5-氨基-7-氯-2,3-二氢-1H-茚-4-基)-2-氯乙烷-1-酮(中间体33-11)的合成
将中间体33-10(300mg)溶于无水乙醇加入HCl(12M,8.00mL)，反应液于80℃下搅拌反应2小时。待反应完毕，反应液经减压浓缩除去溶剂，残余物经制备高效液相色谱纯化(色谱柱:Gemini NX C18 5μm*10*150mm；流动相:A:水(0.225％甲酸v/v),B:乙腈；B％:30％-70％)纯化得标题化合物(64mg)。
MS m/z(ESI):244.0[M+H] +。
步骤11：(S)-4-氯-15-(氯甲基)-8-乙基-1,2,3,8,11,14-六氢-9H,12H-环戊二烯并[f]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-9,12-二酮(中间体33-12)的合成
将中间体33-11(45.00mg)和中间体1-3(48.53mg)溶于甲苯(1mL)中，向其中加入对甲基苯磺酸吡啶盐(4.63mg)。反应液在90℃搅拌16h。反应完毕后，冷却至室温，加入乙醇(1mL),反应液于25℃搅拌0.5h。反应液过滤，滤饼用乙醇(2mL*2)洗涤，干燥得标题化合物(80.0mg)。
MS m/z(ESI):471.1[M+H] +。
步骤12：(S)-15-(氨基甲基)-4-氯-8-乙基-8-羟基-1,2,3,8,11,14-六氢-9H,12H-环戊二烯并[f]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-9,12-二酮(中间体33-13)的合成
将中间体33-12(40.00mg)溶于无水甲醇(1mL)和无水N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)中，向其中加入乌洛托品(35.69mg)。反应液在50℃搅拌16h。反应完毕后，冷却至室温，反应液减压浓缩至干，残余物经制备高效液相色谱纯化(Boston Prime C18柱5μm二氧化硅，30mm直径，150mm长度；用水(含有0.225％FA)和乙腈的极性递减的混合物作为洗脱液(乙腈梯度比例35％-55％,洗脱时间12分钟)得标题化合物(15.0mg)。
MS m/z(ESI):452.1[M+H] +。
步骤13：(S)-N-((4-氯-8-乙基-8-羟基-9,12-二氧代-2,3,8,9,12,14-六氢-1H,11H-环戊二烯并[f]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-15-基)甲基)-2-羟基乙酰胺(化合物33)的合成
将中间体33-13(5.00mg)和羟基乙酸(4.21mg,55.30μmol)溶于无水N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)，向其中加入HATU(6.31mg)和N,N-二异丙基乙胺(4.29mg)，反应液于25℃搅拌1h。反应完毕，反应液过滤，经制备高效液相色谱纯化(Boston Green ODS C18柱5μm二氧化硅，30mm直径，150mm长度；用水(含有0.05％FA)和乙腈的极性递减的混合物作为洗脱液(乙腈梯度比例32％-52％,洗脱时间12分钟)得标题化合物(2.0mg)。
MS m/z(ESI):510.3[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝8.36-8.30(m,1H),8.14(s,1H),7.31(s,1H),6.55(s,1H),5.44(s,2H),5.38(s,2H),4.96(d,J＝5.3Hz,2H),3.88(s,2H),3.74-3.66(m,2H),3.14(t,J＝7.6Hz,2H),2.27-2.19(m,2H),1.92-1.82(m,2H),0.88(t,J＝7.3Hz,3H)。
实施例34、N-(((S)-4-氯-8-乙基-8-羟基-9,12-二氧代-2,3,8,9,12,14-六氢-1H,11H-环戊二烯并[f]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-15-基)甲基)-2-环丙基-2-羟基乙酰胺(化合物34)
Figure PCTCN2022113499-appb-000144
将中间体33-13(5.00mg)和中间体11-1(6.42mg)溶于无水N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)，向其中加入HATU(6.31mg)和二异丙基乙胺(4.29mg)，反应液于25℃搅拌1h。反应完毕后，反应液过滤，经制备高效液相色谱纯化(Boston Prime C18柱5μm二氧化硅，30mm直径，150mm长度；用水(含有0.05％FA)和乙腈的极性递减的混合物作为洗脱液；乙腈梯度比例 35％-55％,洗脱时间12分钟)得标题化合物(2.0mg)。
MS m/z(ESI):550.3[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝8.36-8.31(m,1H),8.14(s,1H),7.31(s,1H),6.54(s,1H),5.47-5.41(m,3H),5.38(s,2H),4.96-4.90(m,2H),3.69(t,J＝7.1Hz,2H),3.56(t,J＝5.8Hz,1H),3.14(t,J＝7.4Hz,2H),2.27-2.18(m,2H),1.93-1.81(m,2H),1.09-1.03(m,1H),0.88(t,J＝7.2Hz,3H),0.41-0.26(m,4H)。
实施例35、(S)-14-(氨基甲基)-7-乙基-15-氟-7-羟基-10,13-二氢-11H-[1,3]二氧杂环戊烯并[4,5-g]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-8,11(7H)-二酮(化合物35)
Figure PCTCN2022113499-appb-000145
步骤1：1-(2-氟-3,4-二甲氧苯基)乙烷-1-酮(中间体35-2)的合成
将中间体35-1(25.0g)溶于1,2-二氯乙烷(250mL)中，反应液冷却至0℃，向其中缓慢加入三氯化铝(64.04g)，再向反应液中滴加乙酰氯(64.04g)。反应液于氮气氛围下0℃搅拌2h。反应结束后，向其中加入水(300mL)，使用乙酸乙酯(150mL*3次)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥。过滤后，有机相经减压浓缩。残留物以硅胶柱层析法纯化(
Figure PCTCN2022113499-appb-000146
120g
Figure PCTCN2022113499-appb-000147
快速硅胶柱,梯度0～50％石油醚/乙酸乙酯，流速70mL/min)，得标题化合物(21.0g)。
MS m/z(ESI):199.0[M+H] +。
步骤2：1-(2-氟-3,4-二羟基苯基)乙烷-1-酮(中间体35-3)的合成
将中间体35-2(15.00g)溶于无水二氯甲烷(150mL)中，反应液冷却至-78℃，向缓慢向其中滴加三溴化硼(56.88g)，反应液于氮气氛围下-78℃搅拌2h，再升温至0℃反应4h。反应结束后，反应液缓慢滴入冰水中淬灭，淬灭完毕后，使用乙酸乙酯(150mL*3次)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥。过滤后，有机相经减压浓缩。残留物以硅胶柱层析法纯化(
Figure PCTCN2022113499-appb-000148
120g
Figure PCTCN2022113499-appb-000149
快速硅胶柱,梯度0～50％石油醚/乙酸乙酯，流速70mL/min)，得标题化合物(8.50g)。
MS m/z(ESI):171.0[M+H] +。
步骤3：1-(4-氟苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基)乙烷-1-酮(中间体35-4)的合成
将中间体35-3(4.0g)溶于无水N,N-二甲基甲酰胺(40mL)中，向其中加入碳酸铯(11.49g)和1,2-二碘甲烷(18.89g)。反应液于氮气氛围下100℃搅拌8min。反应结束后，反应液缓慢倒入水中，使用乙酸乙酯(50mL*3次)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥。过滤后，有机 相经减压浓缩。残留物以硅胶柱层析法纯化(
Figure PCTCN2022113499-appb-000150
24g
Figure PCTCN2022113499-appb-000151
快速硅胶柱,梯度0～15％石油醚/乙酸乙酯，流速60mL/min)得标题化合物(2.0g)。
MS m/z(ESI):183.0[M+H] +。
步骤4：1-(4-氟-6-硝基苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基)乙烷-1-酮(中间体35-5)的合成
将中间体35-4(2.0g)溶于无水二氯甲烷(15mL)中，向其中加浓硫酸(5.38g,98％质量分数)，反应液降温至0℃。再向反应液缓慢滴加浓硝酸(3.46g,68％质量分数)。反应液于25℃搅拌2h。反应结束后，将反应液缓慢滴入冰水(50mL)中，再加入乙酸乙酯(50mL)，有机相用水(50mL*2)洗涤，洗涤后的有机相用适量无水硫酸钠干燥。有机相经减压浓缩至干。残留物以硅胶柱层析法纯化(
Figure PCTCN2022113499-appb-000152
24g
Figure PCTCN2022113499-appb-000153
快速硅胶柱,梯度0～40％石油醚/乙酸乙酯，流速60mL/min)得标题化合物(1.8g)。
1H NMR(400MHz,氘代氯仿)δ＝7.51(s,1H),6.26(s,2H),2.63(s,3H)。
步骤5：1-(6-氨基-4-氟苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基)乙烷-1-酮(中间体35-6)的合成
将中间体35-5(1.8g)溶于无水甲醇(18mL)和水(9mL)中，向其中加入氯化铵(635.83mg)和铁粉(2.21mg)。氮气氛围下反应液于80℃搅拌2h。反应结束后，待反应冷却至室温。反应液过滤，滤液用乙酸乙酯(50mL)稀释，有机相用水(50mL*2)洗涤，洗涤后的有机相用适量无水硫酸钠干燥。有机相经减压浓缩至干，得标题化合物(1.5g)。
MS m/z(ESI):198.0[M+H] +。
步骤6：N-(6-乙酰基-7-氟苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基)乙酰胺(中间体35-7)的合成
将中间体35-6(500.0mg)溶于无水二氯甲烷(5mL)中，向其中加入吡啶(601.79mg)，氮气氛围下向反应中滴加乙酰氯(398.14mg)。氮气氛围下反应液于25℃搅拌1.5h。反应结束后，有机相经减压浓缩至干。残留物以硅胶柱层析法纯化(
Figure PCTCN2022113499-appb-000154
12g
Figure PCTCN2022113499-appb-000155
快速硅胶柱,梯度0～40％石油醚/乙酸乙酯，流速60mL/min)得标题化合物(380.0mg)。
1H NMR(400MHz,氘代氯仿)δ＝11.72(s,1H),8.18(d,J＝1.0Hz,1H),6.10(s,2H),2.64(d,J＝8.4Hz,3H),2.22(s,3H)。
步骤7：N-(6-(2-溴乙酰基)-7-氟苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基)乙酰胺(中间体35-8)的合成
将中间体35-7(380.0mg)溶于乙酸(3mL)中，向其中加入溴化氢的乙酸溶液(1.95g,33％含量)，再向反应液中缓慢滴加液溴(256.42mg)。反应液在25℃搅拌1h。反应结束后，反应液缓慢倒入冰水中搅拌0.5h，过滤，滤饼用水(20mL*2)洗涤，滤饼干燥，得标题化合物(400.0mg)。
MS m/z(ESI):317.8[M+H] +。
步骤8：1-(6-氨基-4-氟苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基)-2-氯乙烷-1-酮(中间体35-9)的合成
将中间体35-8(400.0mg)溶于无水乙醇(2mL)和浓盐酸(2mL)中，反应液于60℃搅拌3h。反应结束后，待反应冷却至室温，依次缓慢加入冰水(20mL)，用饱和碳酸氢钠调节至pH＝8，再加入乙酸乙酯(40mL),有机相用水(20mL*2)洗涤，洗涤后的有机相用适量无水硫酸钠干燥。有机相经减压浓缩至干，得标题化合物(220.0mg)。
MS m/z(ESI):232.0[M+H] +。
步骤9：(S)-14-(氯甲基)-7-乙基-15-氟-7-羟基-10,13-二氢-11H-[1,3]二氧杂环戊烯并[4,5-g]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-8,11(7H)-二酮(中间体35-10)的合成
将中间体35-9(200.0mg)和中间体1-3(227.32mg)溶于甲苯(3mL)中，向其中加入对甲基苯磺酸吡啶盐(21.70mg)。反应液在90℃搅拌16h。反应结束后，待反应冷却至室温，加入乙醇(1mL),反应液于25℃搅拌0.5h。反应液过滤，滤饼用乙醇(5mL*2)洗涤，得标题化合物(320.0mg)。
MS m/z(ESI):459.0[M+H] +。
步骤10：(S)-14-(氨基甲基)-7-乙基-15-氟-7-羟基-10,13-二氢-11H-[1,3]二氧杂环戊烯并 [4,5-g]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-8,11(7H)-二酮(化合物35)的合成
将中间体35-10(260.00mg)溶于无水甲醇(1mL)和无水N,N-二甲酰甲酰胺(1mL)中，向其中加入乌洛托品(238.32mg)。反应液在50℃搅拌3h。反应结束后，待反应冷却至室温，减压浓缩至干，经制备高效液相色谱纯化(Boston Prime C18柱5μm二氧化硅，30mm直径，150mm长度；用水(含有0.225％甲酸)和乙腈的极性递减的混合物作为洗脱液(乙腈梯度比例0％-30％,洗脱时间14分钟)得标题化合物(85.0mg)。
MS m/z(ESI):440.0[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝7.49(s,1H),7.26(s,1H),6.53(s,1H),6.38(s,2H),5.44(s,4H),4.27(s,2H),1.94-1.79(m,2H),0.88(t,J＝7.3Hz,3H)。
实施例36、(S)-15-(氨基甲基)-8-乙基-16-氟-8-羟基-2,3,11,14-四氢-12H-[1,4]二氧杂环己烯并[2,3-g]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-9,12(8H)-二酮(化合物36)
Figure PCTCN2022113499-appb-000156
步骤1：1-(5-氟-2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧杂环己烯-6-基)乙烷-1-酮(中间体36-1)的合成
将中间体35-3(0.5g)和1,2-二溴乙烷溶于无水N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，向其中加入碳酸钾(1.44g)，反应液于100℃搅拌10min。反应完毕后，反应液缓慢倒入冰水中，再加入乙酸乙酯(50mL)，有机相用水(30mL*2)洗涤，洗涤后的有机相用适量无水硫酸钠干燥，有机相经减压浓缩，残留物以硅胶柱层析法纯化(
Figure PCTCN2022113499-appb-000157
12g
Figure PCTCN2022113499-appb-000158
快速硅胶柱,梯度0～40％石油醚/乙酸乙酯，流速60mL/min)，得标题化合物(0.2g)。
MS m/z(ESI):197.0[M+H] +。
步骤2：1-(5-氟-7-硝基-2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧杂环己烯-6-基)乙烷-1-酮(中间体36-2)的合成
将中间体36-1(0.7g)溶于无水二氯甲烷(6mL)中，向其中加浓硫酸(1.75g,98％质量分数)，反应液降温至0℃。再向反应液缓慢滴加浓硝酸(1.12g,68％质量分数)，反应液于25℃搅拌2h。反应结束后，将反应液缓慢滴入冰水(20mL)中，再加入乙酸乙酯(50mL)，有机相用水(30mL*2)洗涤，洗涤后的有机相用适量无水硫酸钠干燥。有机相经减压浓缩至干。残留物以硅胶柱层析法纯化(
Figure PCTCN2022113499-appb-000159
12g
Figure PCTCN2022113499-appb-000160
快速硅胶柱,梯度0～50％石油醚/乙酸乙酯，流速60mL/min)得标题化合物(0.3g)。
1H NMR(400MHz,氘代氯仿)δ＝7.61(d,J＝1.9Hz,1H),4.48-4.44(m,2H),4.43-4.38(m,2H),2.63(s,3H)。
步骤3：1-(7-氨基-5-氟-2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧杂环己烯-6-基)乙烷-1-酮(中间体36-3)的合成
将中间体36-2(300.0mg)溶于无水甲醇(3mL)和水(0.5mL)中，向其中加入氯化铵(79.85mg)和铁粉(347.33mg)。氮气氛围下反应液于80℃搅拌1.5h。反应结束后，待反应冷却至室温。反应液过滤，滤液用乙酸乙酯(50mL)稀释，有机相用水(50mL*2)洗涤，洗涤后的有机相用适量无水硫酸钠干燥。有机相经减压浓缩至干，得标题化合物(250.0mg)。
MS m/z(ESI):212.0[M+H] +。
步骤4：N-(7-乙酰基-8-氟-2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧杂环己烯-6-基)乙酰胺(中间体36-4)的合成
将中间体36-3(250.0mg)溶于无水二氯甲烷(5mL)中，向其中加入三乙胺(598.93mg)，氮气氛围下向反应液中滴加乙酰氯(278.77mg)。氮气氛围下反应液于25℃搅拌0.5h。反应结束后，有机相经减压浓缩至干。残留物以硅胶柱层析法纯化(
Figure PCTCN2022113499-appb-000161
12g
Figure PCTCN2022113499-appb-000162
快速硅胶柱,梯度0～70％石油醚/乙酸乙酯，流速60mL/min)，得标题化合物(0.1g)。
MS m/z(ESI):254.0[M+H] +。
步骤5：N-(7-(2-溴乙酰基)-8-氟-2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧杂环己烯-6-基)乙酰胺(中间体36-5)的合成
将中间体36-4(100.0mg)溶于乙酸(2mL)中，向其中加入溴化氢的乙酸溶液(290.48mg,33％含量)，再向反应液中缓慢滴加液溴(75.73mg)。反应液在25℃搅拌0.5h。反应结束后，反应液缓慢倒入冰水中搅拌0.5h，过滤，滤饼干燥，得标题化合物(80.0mg)。
1H NMR(400MHz,氘代氯仿)δ＝11.04(s,1H),8.15(d,J＝2.1Hz,1H),4.56(d,J＝4.3Hz,2H),4.43-4.38(m,2H),4.37-4.32(m,2H),2.22(s,3H)。
步骤6：1-(7-氨基-5-氟-2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧杂环己烯-6-基)-2-氯乙烷-1-酮(中间体36-6)的合成
将中间体36-5(80.0mg)溶于无水乙醇(0.5mL)和浓盐酸(0.5mL)中，反应液于60℃搅拌2h。反应结束后，待反应冷却至室温，依次缓慢加入冰水(10mL)和饱和碳酸氢钠(10mL)，再加入二氯甲烷(30mL)，有机相用水(20mL*2)洗涤，洗涤后的有机相用适量无水硫酸钠干燥。有机相经减压浓缩至干，得标题化合物(60.0mg)。
MS m/z(ESI):246.0[M+H] +。
步骤7：(S)-15-(氯甲基)-8-乙基-16-氟-8-羟基-2,3,11,14-四氢-12H-[1,4]二氧杂环己烯并[2,3-g]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-9,12(8H)-二酮(中间体36-7)的合成
将中间体36-6(60.0mg)和中间体1-3(64.3mg)溶于甲苯(3mL)中，向其中加入对甲基苯磺酸吡啶盐(12.28mg)。反应液在95℃搅拌16h。反应结束后，待反应冷却至室温，加入乙醇(1mL)，反应液于25℃搅拌0.5h。反应液过滤，滤饼用乙醇(2mL*2)洗涤得标题化合物(60.0mg)。
MS m/z(ESI):473.0[M+H] +。
步骤8：(S)-15-(氨基甲基)-8-乙基-16-氟-8-羟基-2,3,11,14-四氢-12H-[1,4]二氧杂环己烯并[2,3-g]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-9,12(8H)-二酮(化合物36)的合成
将中间体36-7(60.00mg)溶于无水甲醇(1mL)和无水N,N-二甲酰甲酰胺(0.5mL)中，向其中加入乌洛托品(53.36mg)。反应液在50℃搅拌3h。反应结束后，待反应冷却至室温，反应液减压浓缩至干，残余物经制备高效液相色谱纯化(Boston Prime C18柱5μm二氧化硅，30mm直径，150mm长度；用水(含有0.225％甲酸)和乙腈的极性递减的混合物作为洗脱液(乙腈梯度比例0％-25％,洗脱时间12分钟)得标题化合物(24.0mg)。
MS m/z(ESI):454.1[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)7.60(s,1H),7.31(s,1H),6.55(s,1H),5.49(s,2H),5.45(s,2H),4.60(s,2H),4.54(s,4H),1.92-1.84(m,2H),0.88(t,J＝7.3Hz,3H)。
实施例37、2-环丙基-N-(((S)-7-乙基-15-氟-7-羟基-8,11-二氧代-7,8,11,13-四氢-10H-[1,3]二氧杂环戊烯并[4,5-g]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-14-基)甲基)-2-羟基乙酰胺(化合物37)
Figure PCTCN2022113499-appb-000163
将化合物35(6mg)和中间体11-1(7.93mg)溶于N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)中，向其中加入2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(7.79mg)和N,N-二甲基二异丙胺(5.29mg)，反应液25℃搅拌1h。反应结束后，反应液减压浓缩至干，残余物经制备高效液相色谱纯化(Boston Prime C18柱5μm二氧化硅，30mm直径，150mm长度；用水(含有0.225％甲酸)和乙腈的极性递减的混合物作为洗脱液(乙腈梯度比例15％-45％,洗脱时间12分钟)，得标题化合物(6.50mg)。
MS m/z(ESI):538.1[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝8.21(t,J＝6.0Hz,1H),7.51(s,1H),7.26(s,1H),6.53(s,1H),6.40(s,2H),5.47(s,2H),5.43(s,2H),4.84(d,J＝3.8Hz,2H),3.53(d,J＝6.3Hz,1H),1.90-1.81(m,2H),1.01(d,J＝5.5Hz,1H),0.89-0.85(m,3H),0.33(d,J＝6.0Hz,2H),0.30-0.25(m,2H)。
化合物37-P1和37-P2的合成
Figure PCTCN2022113499-appb-000164
将化合物35(6mg)和中间体14-10-P1(7.93mg)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中，向其中加入2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(7.79mg)和N,N-二甲基二异丙胺(5.29mg)，反应液25℃搅拌1h。反应结束后，反应液减压浓缩至干，残余物经制备高效液相色谱纯化(Boston Green ODS C18柱5μm二氧化硅，30mm直径，150mm长度；用水(含有0.225％甲酸)和乙腈的极性递减的混合物作为洗脱液；乙腈梯度比例17％-47％,洗脱时间12分钟)，得化合物37-P1(2.87mg)。
MS m/z(ESI):538.1[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝8.19(t,J＝5.9Hz,1H),7.51(s,1H),7.26(s,1H),6.51(s,1H),6.40(s,2H),5.47(s,2H),5.43(s,2H),4.84(d,J＝4.6Hz,2H),3.53(d,J＝6.4Hz,1H),1.91-1.80(m,2H),1.06-0.97(m,1H),0.87(t,J＝7.3Hz,3H),0.38-0.31(m,2H),0.31-0.24(m,2H)。
将化合物35(6mg)和中间体14-10-P2(4.76mg)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中，向其中加入2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(10.38mg)和N,N-二甲基二异丙胺(1.76mg)，反应液25℃搅拌1h。反应结束后，反应液减压浓缩至干，残余物经制备高效液相色谱纯化(Boston Green ODS C18柱5μm二氧化硅，30mm直径，150mm长度；用水(含有0.225％甲酸)和乙腈的极性递减的混合物作为洗脱液；乙腈梯度比例17％-47％,洗脱时间12分钟)，得化合物37-P2(2.01mg)。
MS m/z(ESI):538.1[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝8.26-8.16(m,1H),7.51(s,1H),7.26(s,1H),6.51(s,1H),6.40(s,2H),5.46(s,2H),5.43(s,2H),4.87-4.82(m,2H),3.53(d,J＝6.2Hz,1H),1.94-1.80(m,2H),1.05-0.96(m,1H),0.87(t,J＝7.3Hz,3H),0.39-0.30(m,2H),0.31-0.20(m,2H)。
通过以下手性超临界流体色谱分析方法分别对两个异构体进一步分析。
Figure PCTCN2022113499-appb-000165
化合物37-P1：
在上述手性超临界流体色谱条件下，其保留时间为3.519分钟；
化合物37-P2：
在上述手性超临界流体色谱条件下，其保留时间为3.573分钟。
实施例38、(S)-N-((7-乙基-15-氟-7-羟基-8,11-二氧代-7,8,11,13-四氢-10H-[1,3]二氧杂环戊烯并[4,5-g]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-14-基)甲基)-2-羟基乙酰胺(化合物38)
Figure PCTCN2022113499-appb-000166
将化合物35(6mg)和羟基乙酸(3.21mg)溶于无水N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)，向其中加入2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(10.38mg)和二异丙基乙胺(1.76mg)，反应液于25℃搅拌1h。反应结束后，反应液减压浓缩至干，残余物经制备高效液相色谱纯化(Waters Xbridge C18柱5μm，25mm直径，100mm长度；用水(含有0.05％甲酸)和乙腈的极性递减的混合物作为洗脱液(乙腈梯度比例18％-48％,洗脱时间12分钟)，得标题化合物(2.40mg)。
MS m/z(ESI):498.1[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝8.20(t,J＝5.9Hz,1H),7.51(s,1H),7.26(s,1H),6.39(s,2H),5.46(s,2H),5.43(s,2H),4.85(d,J＝4.3Hz,2H),3.83(s,2H),1.92-1.80(m,2H),0.87(t,J＝7.3Hz,3H)。
实施例39、2-环丙基-N-(((S)-7-乙基-7-羟基-8,11-二氧代-7,8,11,13-四氢-10H-[1,3]二氧杂环戊烯并[4,5-g]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-14-基-2,2-d 2)甲基)-2-羟基乙酰胺(化合物39,化合物39-P1/P2)
Figure PCTCN2022113499-appb-000167
步骤1：1-(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基-2,2-d 2)乙烷-1-酮(中间体39-2)的合成
将中间体39-1(3g)溶于无水DMF溶液(25mL)中，加入氘代二氯甲烷(8.57g)和碳酸钾(8.18g)，加毕，升温至90℃搅拌16h。随后将反应液加入到水(100mL)中，并用乙酸乙酯(200mL*2)萃取，合并有机相用饱和食盐水(100mL)洗涤，并用无水硫酸钠干燥。过滤后，滤液减压浓缩至干，残余物通过柱层析色谱法纯化(乙酸乙酯/石油醚＝5:1)，得标题化合物(2.4g)。
MS m/z(ESI):167.1[M+H] +。
步骤2：1-(6-硝基苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基-2,2-d 2)乙烷-1-酮(中间体39-3)的合成
将中间体39-2(2.4g)溶于无水醋酸(10mL)中，在0℃滴加浓硝酸(32.50g,70％含量)，加完0℃搅拌10min。随后升温至室温，搅拌1h。反应完毕后，将反应液滴加入到冰水(200mL)中，过滤后，滤饼干燥得标题化合物(1.9g)。
MS m/z(ESI):212.0[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ7.69(s,1H),7.30(s,1H),2.49(s,3H).
步骤3：N-(6-乙酰苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基-2,2-d 2)乙酰胺(中间体39-4)的合成
将中间体39-3(1.8g)溶于醋酸(25mL)中，加入醋酸酐(1.84g)和还原铁粉(4.76g)，室温搅拌1h。反应完毕后，过滤，滤液减压浓缩至干，残余物通过柱层析色谱法纯化(乙酸乙酯/石油醚＝5:1)，得标题化合物(1.5g)。
MS m/z(ESI):224.1[M+H] +。
步骤4：N-(6-(2-溴乙酰基)苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基-2,2-d 2)乙酰胺(中间体39-5)的合成
将HBr的乙酸溶液(2.39g,33％含量)滴加到中间体39-4(1.45g)的无水醋酸(25mL)溶液中，然后再滴加Br 2(1.07g)，滴加完，室温搅拌1h。反应完毕后，反应液减压浓缩至干，残余物加入到水(50mL)中，用乙酸乙酯(50mL*2)萃取，有机相用饱和食盐水(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤后，残余物通过柱层析色谱法纯化(乙酸乙酯/石油醚＝5:1)，得标题化合物(1.3g,)。
MS m/z(ESI):302.1[M+H] +。
步骤5：1-(6-氨基苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基-2,2-d 2)-2-氯乙烷-1-酮(中间体39-6)的合成
将中间体39-5(1.2g)和浓盐酸(144.82mg)溶于乙醇(15mL)中，反应液在60℃下搅拌16h。反应完毕后，反应液减压浓缩至干，残余物通过高效液相色谱法纯化(YMC-Actus Triart C18柱5μm二氧化硅，30mm直径，150mm长度；用水(含有0.05％NH 4HCO 3)和乙腈的极性递 减的混合物作为洗脱液(乙腈梯度比例40％-50％)，得标题化合物(577mg)。
MS m/z(ESI):216.0[M+H] +。
步骤6：(S)-14-(氯甲基)-7-乙基-7-羟基-10,13-二氢-11H-[1,3]二氧杂环戊烯并[4,5-g]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-8,11(7H)-二酮-2,2-d 2(中间体39-7)的合成
将中间体39-6(100.0mg)和中间体1-3(109.87mg)溶于甲苯(1mL)和乙酸(1mL)中，向其中加入对甲基苯磺酸吡啶盐(5.24mg)。反应液在100℃搅拌16h。反应结束后，待反应冷却至室温，直接将反应液经减压浓缩至干。加入乙醇(5mL),反应液于25℃搅拌0.5h。反应液过滤，滤饼用乙醇(5mL*2)洗涤得标题化合物(100.0mg)。
MS m/z(ESI):443.0[M+H] +。
步骤7：(S)-14-(氨基甲基)-7-乙基-7-羟基-10,13-二氢-11H-[1,3]二氧杂环戊烯并[4,5-g]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-8,11(7H)-二酮-2,2-d 2(中间体39-8)的合成
将中间体39-7(100.00mg)溶于无水乙醇(1.5mL)和无水N,N-二甲酰甲酰胺(1.5mL)中，向其中加入乌洛托品(94.97mg)。反应液在50℃搅拌6h。反应结束后，反应液经减压浓缩至干，残余物经高效液相色谱法纯化(柱子:Boston Green ODS 150*30mm*5μm；流动相:[A:水(甲酸)，B:乙腈]；B％:0％-30％,12min)得标题化合物(25.0mg)。
MS m/z(ESI):424.0[M+H] +。
步骤8：2-环丙基-N-(((S)-7-乙基-7-羟基-8,11-二氧代-7,8,11,13-四氢-10H-[1,3]二氧杂环戊烯并[4,5-g]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-14-基-2,2-d 2)甲基)-2-羟基乙酰胺(化合物39)的合成
将中间体39-8(7mg)和中间体11-1(5.76mg)溶于无水N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)，向其中加入2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(12.57mg)和二异丙基乙胺(4.27mg)，反应液于25℃搅拌1h。反应结束后，反应液过滤，经制备高效液相色谱纯化(Waters Xbridge C18柱5μm，25mm直径，100mm长度；用水(含有0.05％甲酸)和乙腈的极性递减的混合物作为洗脱液(乙腈梯度比例20％-50％,洗脱时间12分钟)，得标题化合物(2.60mg)。
MS m/z(ESI):522.1[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝8.62(t,J＝5.9Hz,1H),7.84(s,1H),7.51(s,1H),7.24(s,1H),6.49(s,1H),5.48-5.41(m,5H),4.72(d,J＝5.5Hz,2H),3.59-3.52(m,1H),2.00-1.76(m,2H),1.05-0.96(m,1H),0.88(t,J＝7.4Hz,3H),0.37-0.30(m,2H),0.29-0.19(m,2H)。
步骤9：2-环丙基-N-(((S)-7-乙基-7-羟基-8,11-二氧代-7,8,11,13-四氢-10H-[1,3]二氧杂环戊烯并[4,5-g]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-14-基-2,2-d 2)甲基)-2-羟基乙酰胺(化合物39-P1/P2)的合成
Figure PCTCN2022113499-appb-000168
将中间体39-8(7mg)和中间体14-10-P1(5.76mg)溶于无水N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)，向其中加入2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(12.57mg)和二异丙基乙胺(4.27mg)，反应液于25℃搅拌1h。反应结束后，反应液减压浓缩至干，残余物经制备高效液相色谱纯化(Waters Xbridge C18柱5μm，25mm直径，100mm长度；用水(含有0.05％甲酸)和乙腈的极性递减的混合物作为洗脱液；乙腈梯度比例15％-45％,洗脱时间12分钟)，得化合物39-P1(3.30mg)。
MS m/z(ESI):522.1[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝8.62(t,J＝6.0Hz,1H),7.86(s,1H),7.52(s,1H),7.25(s,1H),6.51(s,1H),5.54-5.51(m,1H),5.47(s,2H),5.43(s,2H),4.72(d,J＝6.0Hz,2H),3.55-3.53(m,1H),1.94-1.78(m,2H),1.05-0.96(m,1H),0.88(t,J＝7.3Hz,3H),0.40-0.30(m,2H),0.29-0.19(m,2H)。
将中间体39-8(7mg)和中间体14-10-P2(5.76mg)溶于无水N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)，向其中加入2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(12.57mg)和二异丙基乙胺(4.27mg)，反应液于25℃搅拌1h。反应结束后，反应液减压浓缩至干，残余物经制备高效液相色谱纯化(Waters Xbridge C18柱5μm，25mm直径，100mm长度；用水(含有0.05％甲酸)和乙腈的极性递减的混合物作为洗脱液(乙腈梯度比例15％-45％,洗脱时间12分钟)得化合物39-P2(4.0mg)。
MS m/z(ESI):522.1[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝8.62(t,J＝6.1Hz,1H),7.86(s,1H),7.52(s,1H),7.25(s,1H),6.50(s,1H),5.54-5.51(m,1H),5.46(s,2H),5.43(s,2H),4.72(d,J＝5.8Hz,2H),3.55-3.52(m,1H),1.94-1.80(m,2H),1.04-0.95(m,1H),0.88(t,J＝7.4Hz,3H),0.39-0.30(m,2H),0.29-0.21(m,2H)。
通过以下手性超临界流体色谱分析方法分别对两个异构体进一步分析。
Figure PCTCN2022113499-appb-000169
化合物39-P1：
在上述手性超临界流体色谱条件下，其保留时间为2.877分钟；
化合物39-P2：
在上述手性超临界流体色谱条件下，其保留时间为2.690分钟。
实施例40、(S)-2-氨基-N-((7-乙基-15-氟-7-羟基-8,11-二氧代-7,8,11,13-四氢-10H-[1,3]二氧杂环戊烯并[4,5-g]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-14-基)甲基)乙酰胺(化合物40)
Figure PCTCN2022113499-appb-000170
步骤1：(S)-(2-(((7-乙基-15-氟-7-羟基-8,11-二氧代-8,10,11,13-四氢-10H-[1,3]二氧杂环戊烯并[4,5-g]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-14-基)甲基)氨基)-2-氧代乙基)氨基甲酸叔丁酯酯(中间体40-1)的合成
将化合物35(7mg)和2-((叔-丁氧羰基)氨基)乙酸(5.58mg)溶于无水N,N-二甲基甲酰胺(1mL)，向其中加入2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(12.11mg)和二异丙基乙胺(2.06mg)，反应液于25℃搅拌1h。反应结束后，将反应液浓缩至干，得标题化合物(8.00mg)。
MS m/z(ESI):597.3[M+H] +。
步骤2：(S)-2-氨基-N-((7-乙基-15-氟-7-羟基-8,11-二氧代-7,8,11,13-四氢-10H-[1,3]二氧杂环戊烯并[4,5-g]吡喃并[3',4':6,7]吲哚嗪并[1,2-b]喹啉-14-基)甲基)乙酰胺(化合物40)的合成
将中间体40-1(6mg)溶于二氯甲烷(0.5mL)，向其中加入三氟乙酸(902.27mg)，反应液于25℃搅拌1h。反应结束后，反应液减压浓缩至干，残余物经制备高效液相色谱纯化(Waters Xbridge C18柱5μm，25mm直径，100mm长度；用水(含有0.05％甲酸)和乙腈的极性递减的混合物作为洗脱液(乙腈梯度比例2％-32％,洗脱时间12分钟)，得标题化合物(1.3mg)。
MS m/z(ESI):497.1[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ＝8.80-8.58(m,1H),7.51(s,1H),7.26(s,1H),6.52(s,1H),6.40(s,2H),5.50(s,2H),5.43(s,2H),4.85(s,2H),3.09-2.75(m,2H),1.92-1.79(m,2H),0.87(t,J＝7.1Hz,3H)。
除了在实施例1-40中合成的化合物之外的其它化合物可以通过参考实施例1-40中的合成路径和源材料合成得到。
生物学活性及相关性质测试例
以下测试例中的化合物均根据本公开上述实施例的方法制备获得。
测试例1、肿瘤细胞抗增殖活性测试1
细胞与材料：人结直肠癌细胞系HCT116购于康源博创，人乳腺癌细胞系SKBR3购于ATCC，人卵巢癌细胞系OVCAR3购于ATCC，牛血清(Gibco#10099-141C#2186958)，McCoy's5a培养基(Gibco#16600-082#2192439)，1640培养基(Gibco#A10491-01#2193156)，青霉素-链霉素(Gibco#15140-122#2211091)和0.25％Trypsin-EDTA(Gibco#25200-056#2186958)购于Gibco公司(美国)，牛胰岛素(Solarbio#I8040)购于Solarbio公司，96孔板(Greiner Bio-one#655098#E20103H8)购于康宁公司(美国)，Cell-Titer Glo试剂(Promega#G7568#0000411325)购于普洛麦格公司(美国)。
细胞培养：HCT116细胞和SKBR3细胞均用含10％胎牛血清+1％青霉素-链霉素的McCoy's 5a培养液于37℃、5％CO 2条件下培养，OVCAR3细胞用含20％胎牛血清+2μg/mL牛胰岛素+1％青霉素-链霉素的1640培养液于37℃、5％CO 2条件下培养。处于对数生长期细胞方可用于实验。
细胞增殖活性检测：利用Cell-Titer Glo试剂检测化合物对HCT116、SKBR3和OVCAR3三个细胞株增殖的抑制活性。将HCT116细胞(每孔1500个)、SKBR3细胞(每孔3000个)和OVCAR3细胞(每孔5000个)接种于96孔板中，置于37℃、5％CO 2条件下培养24小时。加入待测化合物溶液后(化合物用DMSO溶解，使化合物浓度为1mM,然后利用DMSO将化合物稀释至3μM,3倍稀释共9个浓度，转移10μL配置好的化合物溶液至96孔板中，使之终浓度为0-300nM)，置于37℃、5％CO 2条件下继续培养。HCT116细胞培养3天，SKBR3细胞和OVCAR3细胞培养5天。加入Cell-Titer Glo试剂，检测细胞活性。
另设阴性对照组和阳性对照组分别作为Bottom和Top。阴性对照组为不加细胞，仅加同体积的培养基，其他操作与实验组一致；阳性对照组为不加受试化合物，仅加同体积的DMSO，其他操作与实验组一致。
数据分析：计算％化合物抑制(％Compound inhibition)并拟合化合物IC 50。
化合物抑制百分数(％Compound inhibition)＝1-100％*(Signal-Bottom)/(Top-Bottom)。
Signal表示实验组的信号值，Bottom表示阴性对照组的平均信号值，Top表示阳性对照组的平均信号值。
实验结果：
在本实验条件下，本公开化合物对HCT116细胞、SKBR3细胞和OVCAR3细胞均展现出了较强的增殖抑制活性。本公开化合物相应的抗细胞增殖活性具体见表1。
表1本公开化合物抗细胞增殖活性
Figure PCTCN2022113499-appb-000171
Figure PCTCN2022113499-appb-000172
Figure PCTCN2022113499-appb-000173
“N/A”表示未测试。
测试例2、肿瘤细胞抗增殖活性测试2
细胞与材料：人卵巢癌细胞系SK-OV-3购于ATCC，人卵巢癌细胞系PA-1购于ATCC，人小细胞肺癌细胞系NCI-H82购于ATCC，人乳腺癌细胞系MDA-MB-231购于ATCC，人非小细胞肺癌细胞系A549购于ATCC，牛血清(Gibco#10099-141C)，McCoy's 5a培养基(Gibco#16600-082)，MEM培养基(Gibco#11095-080)，1640培养基(Gibco#A10491-01)，DMEM培养基(Gibco#11995-065)，MEM NEAA(Gibco#11140-050)，丙酮酸钠(Gibco#11360-070)，青霉素-链霉素(Gibco#15140-122)和0.25％Trypsin-EDTA(Gibco#25200-056)购于Gibco公司(美国)，牛胰岛素(Solarbio#I8040)购于Solarbio公司，96孔板(Greiner Bio-one#655098)购于康宁公司(美国)，Cell-Titer Glo试剂(Promega#G7568)购于普洛麦格公司(美国)。
细胞培养：SK-OV-3细胞用含10％胎牛血清+1％青霉素-链霉素的McCoy's 5a培养液，PA-1细胞用含10％胎牛血清+1％MEM NEAA+1％丙酮酸钠+1％青霉素-链霉素的MEM培养液，NCI-H82细胞和MDA-MB-231细胞均用含10％胎牛血清+1％青霉素-链霉素的1640培养液，A549细胞用含10％胎牛血清+1％青霉素-链霉素的DMEM培养液，五铢细胞均于37℃、5％CO 2条件下培养。处于对数生长期细胞方可用于实验。
细胞增殖活性检测：利用Cell-Titer Glo试剂检测化合物对SK-OV-3、PA-1、NCI-H82、MDA-MB-231和A549五株细胞增殖的抑制活性。将SK-OV-3细胞(每孔1000个)、PA-1细胞(每孔800个)、NCI-H82细胞(每孔5000个)、MDA-MB-231细胞(每孔3000个)和A549细胞(每孔400个)接种于96孔板中，置于37℃、5％CO 2条件下培养24小时。待测化合物用DMSO溶解，使待测化合物浓度为1mM,然后利用DMSO和对应培养基梯度稀释待测化合物，并转移至96孔细胞板中，使终浓度为300nM起始，3倍稀释，9个浓度点。置于37℃、5％CO 2条件下继续培养5天。加入Cell-Titer Glo试剂，检测细胞活性。
另设阴性对照组和阳性对照组分别作为Bottom和Top。阴性对照组为不加细胞，仅加同体积的培养基，其他操作与实验组一致；阳性对照组为不加受试化合物，仅加同体积的DMSO，其他操作与实验组一致。
数据分析：计算％化合物抑制(Compound inhibition)并拟合得到化合物的IC 50。
化合物抑制百分数(％Compound inhibition)＝1-100％*(Signal-Bottom)/(Top-Bottom)。Signal指实验组的信号值，Bottom指阴性对照组的平均信号值，Top指阳性对照组的平均信号值。
实验结果：
在本实验条件下，本公开化合物对PA-1、SK-OV-3、NCI-H82、MDA-MB-231和A549五株细胞均展现出了较强的增殖抑制活性。本公开化合物相应的抗细胞增殖活性具体见表2。表1和表2表明，本公开化合物对人结直肠癌细胞系HCT116、人乳腺癌细胞系SKBR3和MDA-MB-231、人小细胞肺癌细胞系NCI-H82、人非小细胞肺癌细胞系A549和人卵巢癌细胞系OVCAR3,PA-1,SK-OV-3等肿瘤细胞同时展现出了较强的增殖抑制活性，对多种高发难治肿瘤如肠癌、乳腺癌、肺癌等均具备良好的治疗潜力。
表2本公开化合物抗细胞增殖活性
Figure PCTCN2022113499-appb-000174
“N/A”表示未测试。
测试例3、本公开化合物在肝微粒体中的代谢稳定性测定
本公开化合物在肝微粒体中的代谢稳定性采用如下试验方法测定。
一、试验材料及仪器
1.人肝微粒体(Corning 452117)，比格犬肝微粒体(XENOTECH D1000)，SD大鼠肝微粒体(XENOTECH R1000)和CD-1小鼠肝微粒体(XENOTECH M1000)
2.Na 2HPO 4(天津市光复精细化工研究所20180130)
3.KH 2PO 4(天津市光复精细化工研究所20180920)
4.MgCl 2(天津市光复精细化工研究所20191216)
5.NADPH(Solarbio 1216C022)
6.阳性对照化合物维拉帕米(Sigma MKBV4993V)
7.AB Sciex API4000液质联用仪
二、试验步骤
1.100mM磷酸缓冲液(PBS)的配制：称取7.098g Na 2HPO 4，加入500mL纯水超声溶解，作为溶液A。称取3.400g KH 2PO 4，加入250mL纯水超声溶解，作为溶液B。将A溶液放置在搅拌器上缓慢加入B溶液直至pH值达到7.4即配制成100mM的PBS缓冲液。
2.反应体系的配制
按下表配制反应体系：
Figure PCTCN2022113499-appb-000175
3.将反应体系置于37℃水浴中预孵育10分钟。向反应体系中加入40μL 10mM NADPH溶液(NADPH由100mM的磷酸缓冲液溶解)，NADPH的最终浓度为1mM。用40μL磷酸缓冲液代替NADPH溶液作为阴性对照。阴性对照的作用是排除化合物自身化学稳定性的影响。
4.在反应体系中加入4μL 100μM的本公开化合物和阳性对照化合物维拉帕米启动反应，化合物的最终浓度为1μM。
5.涡旋振荡器上充分混匀后，在0.5、15、30、45和60分钟分别取出50μL孵育样品，用200μL含有内标的冰乙腈终止反应。样品在3220g转速下离心45分钟。离心结束后转移90μL上清液到进样板，加入90μL超纯水混匀，用于LC-MS/MS分析。
所有的数据均通过Microsoft Excel软件进行计算。提取离子图谱检测峰面积，通过对化合物消除百分比的自然对数与时间进行线性拟合，测定化合物的体外半衰期(t 1/2)。
体外(in vitro)半衰期(t 1/2)通过斜率k计算：
in vitro t 1/2＝0.693/k
体外固有清除率(单位：μL/min/mg蛋白质(protein))用下列公式计算：
in vitro CL int＝k×volume of incubation(μL)/amount of proteins(mg)
CL int为固有清除率；k为消除速率常数；volume of incubation为孵育体积(μL)；amount of proteins为蛋白量(mg)
本公开化合物具有良好的肝微粒体稳定性，具体见表3。
表3
Figure PCTCN2022113499-appb-000176
测试例4、本公开化合物的膜渗透性及转运特性测定
本公开化合物的膜渗透性及转运特性采用如下试验方法测定。
一、试验材料及仪器
1.Caco-2细胞(ATCC)
2.HEPES(Solarbio 804D049)、青霉素/链霉素(Solarbio 20200109)和PBS(Solarbio 20200620)
3.胎牛血清(FBS)(Sigma WXBD0055V)、荧光黄(Sigma MKCJ3738)和NaHCO 3(Sigma SLBZ4647)
4.Hank’s平衡盐溶液(HBSS)(Gibco 2085528)、非必需氨基酸(NEAA)(Gibco 2211548)和Trypsin/EDTA(Gibco 2120732)
5.高糖DMEM(Corning 20319014)
6.HTS Transwell-96 Well Permeable(Corning,3391)
7.电阻检测仪(Millipore，
Figure PCTCN2022113499-appb-000177
ERS-2)
8.
Figure PCTCN2022113499-appb-000178
Vision(Nexcelom Bioscience)
9.Infinite 200 PRO酶标仪(Tecan，Infinite M200PRO)
10.阳性对照化合物美托洛尔(Sinopharm 100084-201403)、红霉素(MCE 84550)和西咪替丁(Sinopharm 100158-201406)
11.ABI QTrap 5500液质联用仪
二、试验步骤
1.Caco-2细胞培养
1)转运缓冲液(含25mM HEPES的HBSS，pH 7.4)的配制：精确称量5.958g HEPES和0.35g NaHCO 3，加900mL纯水让其溶解，然后加100mL 10×HBSS搅拌均匀，调pH至7.4，过滤。
2)Caco-2细胞培养基的配制：高糖DMEM(含有L-谷氨酰胺)培养基中加入FBS、青霉素/链霉素、卡那霉素和NEAA配制成含10％FBS、100单位青霉素/0.1mg/mL链霉素、0.6μg/mL卡那霉素和1×NEAA的细胞培养基。
3)在37℃、5％CO 2的培养箱中用T-75培养瓶培养细胞，细胞生长达到80-90％密度时弃去培养基。用5mL PBS冲洗细胞，加入1.5mL Trypsin/EDTA，然后在37℃培养箱中孵育5-10分钟直至细胞呈流沙状脱落，最后用含FBS的培养基中和Trypsin/EDTA。
4)细胞混悬液在120g下离心10分钟，弃去上清液。
5)加细胞培养基重悬细胞，调至密度为6.86×10 5cells/mL(个细胞/mL)的细胞悬浮液。
2.Caco-2细胞接种
1)Transwell小室每孔加入50μL培养基，下层加入25mL培养基，置于37℃，5％CO 2培养箱中预热1小时。
2)预热的Transwell小室每孔加入50μL细胞悬浮液，最终接种密度为2.4×10 5cells/cm 2。
3)培养14-18天，隔一天换一次培养基，在最初种板以后的48小时之内更换培养基。实验前一天培养基必须更换。
3.评估单层细胞膜完整性
1)细胞培养14天后融合并且分化，准备进行转运实验。
2)用电阻仪测量单层膜电阻，记录每孔电阻。
3)测量完毕后，将Transwell培养板重新孵育。
4)计算TEER值：
TEER值＝TEER测量值(Ω)×膜面积(cm 2)
单层细胞膜的电阻<230Ω·cm 2，表明单层细胞膜致密性差，不能用于试验。
4.转运实验
1)用DMSO稀释10mM的本公开化合物或阳性对照化合物的储备液得到2mM的储备液，然后用转运缓冲液稀释2mM的储备液得到10μM的本公开化合物或阳性对照化合物的工作液。
2)从培养箱中取出Caco-2细胞板，然后用预热的转运缓冲液清洗Transwell培养板两次，再置于37℃培养箱孵育30分钟。
3)为测定化合物从顶端到基底端(A→B)的转运速率，加108μL化合物的工作液到Transwell小室(顶端)，同时立即从顶端取出8μL样品至72μL转运缓冲液中，加入240μL 含内标的终止液终止转运以作为初始顶端样品。同时，接收端(基底端)加入300μL转运缓冲液。试验设双样本。
4)为测定化合物从基底端到顶端(B→A)的转运速率，加308μL化合物的工作液到基底端，同时立即从基底端取出8μL样品至72μL转运缓冲液中，加入240μL含内标的终止液终止转运以作为初始基底端样品。同时，Transwell小室(顶端)加入100μL转运缓冲液。试验设双样本。
5)将细胞培养板置于37℃ CO 2培养箱中孵育2小时。
6)转运实验结束后，从给药端(即A→B方向的顶端和B→A方向的基底端)取8μL样品至72μL转运缓冲液中，然后加入240μL含内标的终止液终止转运。从接收端(即A→B方向的基底端和B→A方向的顶端)取80μL样品至240μL含内标的终止液中，1000rpm下涡旋10分钟，3220g下离心30分钟。取100μL上清液至进样板，加入100μL超纯水混匀，用于LC-MS/MS分析。
7)转运实验结束后测量荧光值，用水配制10mM荧光黄储备液，然后用转运缓冲溶液稀释至100μM。往Transwell小室(顶端)中加入100μL荧光黄溶液，基底端加入300μL转运缓冲溶液，置于37℃的CO 2培养箱中孵育30分钟。从顶端和基底端取80μL溶液至96孔板中，在激发波长为485nm及发射波长为530nm下用酶标仪测量细胞荧光值(检测膜完整性)。
用以下公式计算渗漏率(Percentage leakage(％)或LY(％))：
Percentage Leakage＝{I acceptor×0.3/(I acceptor×0.3+I donor×0.1)}×100％
I acceptor(I 接收端)指接收侧(0.3mL)的荧光密度，I donor(I 供体)指给药侧(0.1mL)的荧光密度。LY>1.0％表明单层细胞膜致密性差，相应的结果将从评估中排除。
测定化合物在给药侧和接收侧的峰面积，计算化合物的表观渗透系数(P app，单位：cm/s)和外排比(Efflux ratio)：
P app＝{V A×[drug] acceptor/(Area×incubation time×[drug] initial donor}
V A为接收端溶液的体积(A→B是0.3mL，B→A是0.1mL)，Area(膜面积)为Transwell-96孔板膜面积(0.143cm 2)；incubation time为孵育时间(单位：s)；[drug] acceptor([药物] 接收端)为接收端药物浓度；[drug] initial donor([药物] 初始，供体)为给药侧药物初始浓度。
Figure PCTCN2022113499-appb-000179
P app(B-A)为由基底端到顶端的表观渗透系数；P app(A-B)为由顶端到基底端的表观渗透系数。
本公开化合物具有良好的膜渗透性及转运特性，具体见表4。
表4
化合物 P app(A-B)(10 -6cm/s) P app(B-A)(10 -6cm/s) 外排比
化合物14 0.26 3.95 15.2
化合物39 0.71 4.21 5.9
测试例5、本公开化合物的血浆蛋白结合率测定
本公开化合物在人和小鼠血浆中的蛋白结合率采用如下试验方法测定。
一、试验材料及仪器
1.人血浆(BioIVT)、CD-1小鼠血浆(BioIVT)
2.Na 2HPO 4(Sigma S5136-500G)
3.NaH 2PO 4(Sigma S3139-500G)
4.NaCl(Sigma S5886-IKG)
5. 96孔平衡透析板(HTDialysis LLC,Gales Ferry,CT,HTD96B)和平衡透析膜(MWCO 12-14K,1101)
6.阳性对照化合物华法林
7.ABI QTrap 5500液质联用仪
二、试验步骤
1.浓度为100mM磷酸钠盐和150mM NaCl的缓冲液的配制：用超纯水配制浓度为14.2g/L Na 2HPO 4和8.77g/L NaCl的碱性溶液，用超纯水配制浓度为12.0g/L NaH 2PO 4和8.77g/L NaCl的酸性溶液，然后用酸性溶液滴定碱性溶液至pH值为7.4配制成浓度为100mM磷酸钠盐和150mM NaCl的缓冲液。
2.透析膜的准备：将透析膜浸泡在超纯水中60分钟以便将膜分离成两片，然后用20％乙醇浸泡20分钟，最后用透析用缓冲液浸泡20分钟。
3.血浆的准备：将冷冻的血浆迅速在室温下解冻，然后在4℃、3,220g下离心10分钟去除凝块，并将上清收集到新的离心管中。测定和记录血浆的pH值，使用pH值为7-8的血浆。
4.含化合物的血浆样品的配制：用DMSO稀释10mM的本公开化合物或阳性对照化合物的储备液得到200μM的工作液。597μL人或小鼠血浆中加入3μL 200μM的化合物工作液得到终浓度为1μM的血浆样品。
5.平衡透析步骤：按照操作说明将透析装置组装起来。在透析膜的一侧加入120μL含1μM化合物的血浆样品，另一侧加入等体积的透析液(磷酸盐缓冲液)。试验设双样本。透析板封膜，置于孵育装置，在37℃、5％CO 2及约100rpm转速下孵育6小时。孵育结束后，去除封膜，从每个孔的缓冲液侧和血浆侧吸取50μL样品到新板的不同孔中。在磷酸盐缓冲液样品中加入50μL空白血浆，在血浆样品中加入等体积的空白磷酸盐缓冲液，然后加入300μL含内标的乙腈沉淀蛋白。涡旋5分钟，在4℃、3220g下离心30分钟。取100μL上清液至进样板，加入100μL超纯水混匀，用于LC-MS/MS分析。
测定化合物在缓冲液侧和血浆侧的峰面积。计算化合物的血浆蛋白结合率公式如下：
％游离率＝(化合物峰面积与内标峰面积比值 缓冲液侧/化合物峰面积与内标峰面积比值 血浆侧)×100％。
％结合率＝100％-％游离率。
表5
化合物 人血浆蛋白结合率％ 小鼠血浆蛋白结合率％
化合物14-P1 89.4 63.7
化合物37-P1 87.2 67.3
化合物39 91.9 65.8
测试例6、本公开化合物对CYP2C9、CYP2D6、CYP3A4酶活性的抑制作用
本公开化合物对CYP2C9、CYP2D6、CYP3A4酶活性的抑制采用如下试验方法测定。
一、试验材料及仪器
1.人肝微粒体(Corning 452117)
2.NADPH(Solarbio 705Y021)
3.阳性底物双氯芬酸(Sigma SLBV3438)、右美沙芬(TRC 3-EDO-175-1)和咪达唑仑(Cerilliant FE01161704)
4.阳性抑制剂磺胺苯吡唑(D.Ehrenstorfer GmbH 109012)、奎尼丁(TCI WEODL-RE)和酮康唑(Sigma 100M1091V)
5.AB Sciex Triple Quad 5500液质联用仪
二、试验步骤
1.100mM磷酸缓冲液(PBS)的配制：称取7.098g Na 2HPO 4，加入500mL纯水超声溶解，作为溶液A。称取3.400g KH 2PO 4，加入250mL纯水超声溶解，作为溶液B。将A溶液 放置在搅拌器上缓慢加入B溶液直至pH值达到7.4即配制成100mM的PBS缓冲液。
2.用100mM的PBS缓冲液配制10mM的NADPH溶液。用DMSO稀释10mM的本公开化合物储备液得到200×浓度的化合物工作液(6000、2000、600、200、60、20、0μM)。用DMSO稀释阳性抑制剂储备液得到200×浓度的阳性抑制剂工作液(磺胺苯吡唑，1000、300、100、30、10、3、0μM；奎尼丁/酮康唑，100、30、10、3、1、0.3、0μM)。用水、乙腈或乙腈/甲醇配制200×浓度的底物工作液(120μM双氯芬酸、400μM右美沙芬和200μM咪达唑仑)。
3.取2μL 20mg/ml的肝微粒体溶液、1μL底物工作液、1μL化合物工作液和176μL PBS缓冲液，混合均匀，置于37℃水浴中预孵育15分钟。阳性对照组加入1μL磺胺苯吡唑、奎尼丁或酮康唑工作液代替化合物工作液。同时将10mM的NADPH溶液一起置于37℃水浴中预孵育15分钟。15分钟后，取20μL NADPH加入到各个孔中，启动反应，37℃下孵育5分钟(CYP2C9)、20分钟(CYP2D6)或5分钟(CYP3A4)。所有孵育样品设双样本。孵育相应时间后向所有样本中加入400μL含内标的冰甲醇终止反应。涡旋混匀，3220g、4℃下离心40分钟。离心结束后转移100μL上清液到进样板，加入100μL超纯水混匀，用于LC-MS/MS分析。
通过样品与内标峰面积比值来比较加药组比对照组代谢物生成的减少，并用Excel XLfit 5.3.1.3计算IC 50值。
用下列公式计算剩余活性百分比：
剩余活性百分比＝代谢产物峰面积与内标峰面积比值 测试物/代谢产物峰面积与内标峰面积比值 空白溶剂×100％。
药物相互作用(drug-druginteraction，DDI)是指2种或2种以上的药物所产生的物理或者化学变化，以及由于这些变化所造成的药效改变。了解药物相互作用，可为患者提供更好的药学服务及促进合理用药，最大化地避免不良反应的发生。药物的相互作用以代谢性相互作用为主，代谢性相互作用主要与参与药物代谢的CYP450酶有关。表6的实验结果表明，本公开化合物对CYP450的抑制能力弱，预示本公开化合物发生DDI的潜在风险较小。
表6
Figure PCTCN2022113499-appb-000180
测试例7、本公开化合物的hERG抑制活性测定
本公开化合物对hERG活性的抑制采用如下试验方法测定。
一、试验材料及仪器
原料/仪器                             厂家(货号)
1.F-12培养基                          Gibco(11765054)
2.牛血清蛋白                          Hyclone(SH30070)
3.二甲基亚砜                          Merck(102952)
4.磷酸盐缓冲液(不含钙镁离子)          Gibco(14190)
5.青霉素-链霉素(10000U/mL)            Gibco(15140122)
6.TrypLE TM Express细胞消化液           Gibco(12604)
7.潮霉素                              Invivogen(ant-hg-5)
8.遗传霉素                            Gibco(11811031)
9.StemPro TM Accutase TM细胞消化液         Gibco(A1110501)
10. 1M HEPES缓冲液(100mL)              Gibco(15630-080)
11.UltraPure TM 0.5M EDTA                Invitrogen(15575020)
12.七叶皂素                            Sigma(C4740)
13. 384微孔板                          Greiner(781201)
14. 10cm细胞培养皿                     NEST(704001)
15. 5mL移液管                          BIOFIL(GSP110005)
16. 10mL移液管                         BIOFIL(GSP110010)
17. 175cm 2细胞培养瓶                   CORNING(431082)
18.iSeries,50μL吸头                   Beckman coulter(B85753)
19.NPC-384膜片钳芯片                   Nanion(221401,4xhigh)
20.二氧化碳恒温培养箱                  Thermo(371)
21.Apricot高通量自动化移液工作站       Apricot Designs
22.Echo                                LABCYTE(550)
23.微孔板振荡器                        IKA(MS3digital)
24.Countess全自动细胞计数仪            Invitrogen(Countess II)
25.SyncroPatch 384i                    Nanion(384i)
二、细胞系与细胞培养
稳定表达hERG离子通道的CHO细胞株购自瑞士B’SYS GmbH公司。该细胞株被培养在含有10％FBS缓冲液、100U/mL青霉素-链霉素、100μg/mL潮霉素和100μg/mL G418的F-12(HAM)培养基中。使用胰酶替代物TrypLE TM Express进行消化并传代，每周传代三次并保持80％左右的融合。
三、细胞内/外液配制、待测化合物溶液配制
细胞外液
1)NMDG 60标准外液：80mM氯化钠、60mM NMDG、4mM氯化钾、2mM氯化钙、1mM氯化镁、5mM多聚葡萄糖、10mM HEPES，使用HCl将pH调至7.4，渗透压为289mOsm/kg；
2)NMDG 60细胞封接液：80mM氯化钠、60mM NMDG、4mM氯化钾、10mM氯化钙、1mM氯化镁、5mM多聚葡萄糖、10mM HEPES，使用HCl将pH调至7.4，渗透压为313mOsm/kg；
3)芯片填充液：140mM氯化钠、4mM氯化钾、5mM多聚葡萄糖、10mM HEPES，使用NaOH将pH调至7.4，渗透压为289mOsm/kg；
4)Standard标准外液：140mM氯化钠、4mM氯化钾、2mM氯化钙、1mM氯化镁、5mM多聚葡萄糖、10mM HEPES，使用NaOH将pH调至7.4，渗透压为298mOsm/kg。
细胞内液
KF110细胞内液：10mM EGTA、10mM HEPES、10mM氯化钾、10mM氯化钠、110mM氟化钾，使用KOH调节pH至7.2，渗透压大于280mOsm/kg。
待测化合物溶液
1)待测化合物用DMSO溶解并配制成终浓度为10mM的储备液。
2)将储备液以DMSO为溶剂，以1:3的比例梯度稀释成其他三个中间浓度溶液，浓度分别为(mM)：3.33、1.11和0.37。
3)实验开始前，用细胞外液将待测化合物梯度溶液再次按1:500的比例稀释成一系列浓度的工作液，其终浓度分别为(μM)：20、6.66、2.22和0.74，而60μM工作液由10mM储液按3:500比例稀释而成。在实验中，将40μL的工作液加入到40μL的细胞溶液中，得到2倍试验浓度的化合物工作液。
4)通过测试给定的浓度梯度中5个不同浓度点30、10、3.33、1.11和0.37μM对hERG通道的潜在抑制作用，拟合浓效曲线并计算相应的IC 50值。
四、实验步骤
实验前准备
1)在SyncroPatch 384i系统上运行“Home All Axes”。
2)运行“LH_Startup”方法，在实验开始前对仪器进行清洗。
3)将1号管放入装有内溶液的瓶中，置于1号位置，预填充细胞内液。
4)将配置好的细胞外液、工作浓度的化合物板放置在仪器中的对应板位，实验准备就绪。
细胞处理
1)取两个T175培养瓶的贴壁细胞，弃去上层培养基。
2)在室温下用10mL移液管吸取8mL DPBS-2mM EDTA冲洗2次，洗去多余培养基。
3)往培养瓶里加入3mL TrypLE TM Express，轻轻摇晃，使溶液覆盖整个细胞平面。
4)移去一半体积的消化液，使其在细胞表面仅铺有薄层。
5)将细胞置于37℃孵育8～10分钟，在显微镜下轻轻晃动，观察细胞的漂浮情况。
6)用离心管配制10mL含有15mM HEPES的F-12培养基，并加入10mL标准外液作。向每个培养瓶中加入3mL混合溶液，于4～8℃冰箱孵育5分钟。
7)用移液管轻轻吹打细胞3～5次将细胞吹散，转入10cm细胞培养皿中。
8)进行细胞计数，并用冷的标准外液稀释细胞，确保最终密度为0.5～2*10 6cells/mL。
9)将稀释好的细胞悬液转入10cm低吸附细胞培养皿中，4～10℃孵育10分钟。
10)轻轻吹动细胞使其混合均匀，将细胞转入SyncroPatch 384i系统专用的特氟龙平板，放入自动膜片钳系统的细胞孵育槽中，15℃孵育。
使用SyncroPatch 384i系统记录电生理信号
1)装载并清洗枪头。
2)在芯片内部填充芯片填充液，并对结合电位进行补偿。
3)往芯片内加入细胞悬液。
4)加入细胞封接液，设定钳制电位为-90mV。
5)用细胞外液冲洗细胞4次。
6)将内溶液中的5μM Escin穿孔到细胞内，得到完整的细胞结构。
7)补偿Analog Cslow和Digital Cslow。
8)设定500ms，-90mV的钳制电压；电流采样频率为500Hz，过滤频率为3k Hz。漏电流的检测条件为-90mV，时程500ms。
9)施加4.8秒去极化将膜电位从-90mV去极化至+30mV，然后瞬间施加复极化电压使膜电位降至-50mV，持续5.2秒以去除通道失活，从而得以观察到hERG尾电流，尾电流的峰值为hERG电流的大小。该刺激模式的采样间隔为15秒。
10)用于检测待测化合物的hERG电流在给药前均被持续记录120秒以评估受试细胞产生hERG电流的稳定性。只有在评价标准接受范围以内的稳定细胞，其后续检测结果才可置信。
11)以从中测定得到稳定的hERG电流作为检测基线。在hERG电流保持稳定至少5分钟后将含有待测化合物的溶液灌注于细胞周围。待电流趋于稳定后，读取5个稳定的hERG电流值。如果在10分钟内未达到稳定状态，则将记录的最后5个电流峰值作为读值。实验中采用西沙必利作为阳性对照，以验证实验细胞的稳定性与实验结果的准确性。本实验在2个相互独立的实验孔位(n＝2)上检测了5个不同浓度样品对hERG电流的抑制作用，用以拟合IC 50曲线。
五、数据验收标准
以下标准将用于确定数据的可接受性：
1)初始封接电阻大于100MΩ；
2)串联电阻小于25MΩ；
3)检测电压下的漏电流小于该条件下电流值的50％；
4)尾电流大于预脉冲的平台电流大小，初始尾电流值大于150pA；
5)尾电流的衰减率低于30％。
六、数据分析
符合上述hERG电流质量标准的数据将进一步进行分析，具体步骤如下：
1)电流抑制率用以下公式计算。
注：数据由Data control 384软件输出。
Figure PCTCN2022113499-appb-000181
2)量效曲线通过Graphpad Prism 8.0软件进行拟合并计算IC 50。
本公开化合物均对hERG钾离子通道无明显抑制，表明化合物因hERG钾离子通道抑制导致心脏毒性产生的风险低。本公开化合物的hERG钾离子通道抑制活性具体见表7。
表7
化合物 IC 50(μM)
化合物14-P1 >30
化合物14-P2 >30
化合物37-P1 >30
化合物39 >30

Claims (15)

  1. 式(I)所示化合物、或其立体异构体或药学上可接受的盐：
    Figure PCTCN2022113499-appb-100001
    其中，
    R 1选自卤素、CN、C 1-C 6烷基、C 3-C 6环烷基或C 2-C 6炔基，所述C 1-C 6烷基、C 3-C 6环烷基或C 2-C 6炔基任选被R a1取代；
    X 1选自CR 2或N；
    R 2选自H、卤素、CN，或者R 1、R 2与它们连接的原子共同形成5-6元杂环基，所述5-6元杂环基任选被R a2取代；
    R 5选自H、卤素、CN、NH 2或NO 2，或者R 1、R 5与它们连接的原子共同形成5-6元杂环基、5-6元杂芳基或C 5-C 7环烯基，所述5-6元杂环基、5-6元杂芳基或C 5-C 7环烯基任选被R a5取代；
    R 3选自H、
    Figure PCTCN2022113499-appb-100002
    X选自NH 2或OH，R 6选自H或C 1-C 3烷基，R 7选自H、C 1-C 3烷基或者C 3-C 6环烷基，或者R 6、R 7与其连接的C原子共同形成C 3-C 6环烷基，所述C 3-C 6环烷基任选被R a3取代；
    n选自1、2、3或4；
    R 4选自H，或者R 4、R 7与它们连接的原子共同形成5-6元杂环基，所述5-6元杂环基任选被R a4取代；
    每一个R a1、R a2、R a3、R a4、R a5独立地选自D、卤素、CN、＝O、OH、NH 2、C 1-C 3烷基、C 3-C 6环烷基或4-7元杂环基，所述OH、NH 2、C 1-C 3烷基、C 3-C 6环烷基或4-7元杂环基任选被R b取代；
    每一个R b独立地选自卤素、CN、＝O、C 1-C 3烷基、OH、O(C 1-C 3烷基)、NH 2、NH(C 1-C 3烷基)或N(C 1-C 3烷基) 2；
    条件是：i)当R 1选自甲基，R 2选自F时，R 3选自
    Figure PCTCN2022113499-appb-100003
    其中R 6选自H或C 1-C 3烷基，R 7选自H、C 1-C 3烷基或者C 3-C 6环烷基，n选自1、2、3或4；ii)当X选自NH 2时，R 5不选自H；并且iii)式(I)所示化合物不包含以下化合物：
    Figure PCTCN2022113499-appb-100004
  2. 根据权利要求1所述的式(I)所示化合物、或其立体异构体或药学上可接受的盐，其特征在于，R 1选自卤素、C 1-C 3烷基、C 3-C 6环烷基或C 2-C 3炔基；或者
    R 1选自Cl、Br、甲基、环丙基或乙炔基。
  3. 根据权利要求1或2所述的式(I)所示化合物、或其立体异构体或药学上可接受的盐，其特征在于，R 2选自H、卤素、CN，或者R 1、R 2与它们连接的原子共同形成5-6元杂环基，所述5-6元杂环基含有1或2个氧原子作为环原子，所述5-6元杂环基任选被D原子取代；或者
    R 2选自H或卤素，或者R 1、R 2与它们连接的原子共同形成5-6元杂环基，所述5-6元杂环基含有1或2个氧原子作为环原子，所述5-6元杂环基任选被D原子取代。
  4. 根据权利要求1至3中任一项所述的式(I)所示化合物、或其立体异构体或药学上可接受的盐，其特征在于，R 2选自H、F或Cl，或者R 1、R 2与它们连接的原子共同形成
    Figure PCTCN2022113499-appb-100005
    Figure PCTCN2022113499-appb-100006
  5. 根据权利要求1至4中任一项所述的式(I)所示化合物、或其立体异构体或药学上可接受的盐，其特征在于，R 3选自H、
    Figure PCTCN2022113499-appb-100007
    其中X选自NH 2或OH，R 6选自H或甲基，R 7选自H、甲基、异丙基或任选被D原子取代的环丙基；R 4选自H，或者R 4、R 7与其各自连接的原子共同形成5元杂环基；或者
    R 3选自
    Figure PCTCN2022113499-appb-100008
    X选自NH 2或OH，R 6选自H或甲基，R 7选自H、甲基、异丙基或任选被D原子取代的环丙基；或者
    R 3选自
    Figure PCTCN2022113499-appb-100009
    R 6选自H，R 7选自H或者环丙基，或者R 6、R 7与其连接的C原子共同形成C 3-C 6环烷基。
  6. 根据权利要求1至4中任一项所述的式(I)所示化合物、或其立体异构体或药学上可接受的盐，其特征在于，
    R 1、R 2与其各自连接的原子共同形成
    Figure PCTCN2022113499-appb-100010
    R 3选自H、
    Figure PCTCN2022113499-appb-100011
    Figure PCTCN2022113499-appb-100012
    R 4选自H，R 6选自H，R 7选自H或任选被D原子取代的环丙基，或者R 6、R 7与其连接的C原子共同形成C 3-C 6环烷基；或者
    R 1、R 2与其各自连接的原子共同形成
    Figure PCTCN2022113499-appb-100013
    R 3选自
    Figure PCTCN2022113499-appb-100014
    R 4选自H，R 6选自H，R 7选自任选被D原子取代的环丙基，或者R 6、R 7与其连接的C原子共同形成环丙基。
  7. 根据权利要求1至4中任一项所述的式(I)所示化合物、或其立体异构体或药学上可接受的盐，其特征在于，
    R 1、R 2与其各自连接的原子共同形成
    Figure PCTCN2022113499-appb-100015
    R 3选自H、
    Figure PCTCN2022113499-appb-100016
    R 4选自H，R 6选自H，R 7选自H或环丙基，或者R 6、R 7与其连接的C原子共同形成C 3-C 6环烷基；或者
    R 1、R 2与其连接的原子共同形成
    Figure PCTCN2022113499-appb-100017
    R 3选自
    Figure PCTCN2022113499-appb-100018
    R 4选自H，R 6选自H，R 7选自H或环丙基，或者R 6、R 7与其连接的C原子共同形成C 3-C 6环烷基。
  8. 根据权利要求1至7中任一项所述的式(I)所示化合物、或其立体异构体或药学上可接受的盐，其特征在于，R 5选自H、卤素、NH 2或NO 2，或者R 1、R 5与它们连接的原子共同形成5-6元杂芳基或C 5-C 6环烯基，所述5-6元杂芳基或C 5-C 6环烯基任选被R a5取代；或者
    R 5选自H、Cl、F、NH 2或NO 2，或者R 1、R 5与它们连接的原子共同形成
    Figure PCTCN2022113499-appb-100019
  9. 根据权利要求1至4和8中任一项所述的式(I)所示化合物、或其立体异构体或药学上可接受的盐，其特征在于，结构单元
    Figure PCTCN2022113499-appb-100020
    选自
    Figure PCTCN2022113499-appb-100021
    Figure PCTCN2022113499-appb-100022
    Figure PCTCN2022113499-appb-100023
  10. 根据权利要求1至9中任一项所述的式(I)化合物、或其立体异构体或药学上可接受的盐，其特征在于，所述式(I)所示化合物、或其立体异构体或药学上可接受的盐选自式(Ia)化合物、或其立体异构体或药学上可接受的盐：
    Figure PCTCN2022113499-appb-100024
    其中，R 1、R 2、R 3、R 4、R 5如权利要求1至9定义。
  11. 根据权利要求1-2、5和8-9中任一项所述的式(I)化合物、或其立体异构体或药学上可接受的盐，其特征在于，所述式(I)所示化合物、或其立体异构体或药学上可接受的盐选自式(Ib)化合物、或其立体异构体或药学上可接受的盐：
    Figure PCTCN2022113499-appb-100025
    其中，R 1、R 3、R 4、R 5如权利要求1-2、5和8-9定义。
  12. 式(II)所示化合物、或其立体异构体或药学上可接受的盐：
    Figure PCTCN2022113499-appb-100026
    其中，
    R 8选自羟基、卤素、CN、C 1-C 6烷基、C 3-C 6环烷基或C 2-C 6炔基；
    X 2选自CR 9或N；
    R 9选自H、卤素、CN，或者R 8、R 9与其各自连接的原子共同形成5-6元杂环基；
    R 10、R 11独立地选自H、C 3-C 6环烷基，或者R 10、R 11与其连接的C原子共同形成C 3-C 6环烷基。
  13. 化合物、或其立体异构体或药学上可接受的盐，所述化合物选自以下结构之一：
    Figure PCTCN2022113499-appb-100027
    Figure PCTCN2022113499-appb-100028
    Figure PCTCN2022113499-appb-100029
    Figure PCTCN2022113499-appb-100030
  14. 一种药物组合物，所述组合物包含权利要求1至13中任一项所述的化合物、或其立体异构体或药学上可接受的盐和药学上可接受的辅料。
  15. 权利要求1至13中任一项所述的化合物、或其立体异构体或药学上可接受的盐、或权利要求14所述的药物组合物在制备抗肿瘤药物中的用途。
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