WO2023112442A1 - 生体成分濃度測定試薬、測定方法およびセンサ - Google Patents

生体成分濃度測定試薬、測定方法およびセンサ Download PDF

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    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/52—Use of compounds or compositions for colorimetric, spectrophotometric or fluorometric investigation, e.g. use of reagent paper and including single- and multilayer analytical elements

Definitions

  • the present invention relates to a biocomponent concentration measuring reagent, a biocomponent concentration measuring method, and a sensor.
  • the present invention relates to biocomponent concentration measuring reagents, biocomponent concentration measuring methods and sensors used to measure the concentration of an analyte such as glucose contained in a whole blood sample.
  • the biological component measurement reagents described above are often used as solid reagents (dry reagents) that are dried after being coated with a reagent solution in order to be incorporated into a sensor or the like.
  • the dry reagent contains a low-molecular-weight salt compound such as nitrite, there is a problem in speeding up the detection reaction.
  • an object of the present invention is to provide a means for rapidly measuring biocomponent concentrations even in hemolyzed whole blood samples.
  • a biological component concentration measuring reagent comprising a chromogenic dye, an oxidoreductase, a hemolytic agent, and a low-molecular-weight salt compound, and further comprising sucralose.
  • the salt compound is at least one selected from the group consisting of transition metal salts and inorganic salts; 3. The biological component concentration measurement reagent according to .
  • the inorganic salt is a nitrite; 3.
  • the biological component concentration measurement reagent according to .
  • the content mass ratio of the sucralose to the low-molecular-weight salt compound is 1 to 10; ⁇ 3.
  • the biocomponent concentration measuring reagent according to any one of 1.
  • the sugar alcohol is at least one selected from the group consisting of lactitol, erythritol, sorbitol, xylitol, and mannitol; 3.
  • the biological component concentration measurement reagent according to .
  • the molar ratio of the sugar alcohol to the sucralose is 10% or more; or 6. 3. The biological component concentration measurement reagent according to .
  • a whole blood sample was prepared as follows:1. ⁇ 7. contacting with the biological component concentration measuring reagent according to any one of 1, measuring the amount of color development, and quantifying the concentration of the biological component in the whole blood sample based on the amount of color development. Measuring method.
  • the biocomponent is glucose, cholesterol, triglyceride, nicotinamide adenine dinucleotide phosphate (NADPH), nicotinamide adenine dinucleotide (NADH), or uric acid; The method described in .
  • a sensor for measuring biocomponent concentration in a whole blood sample comprising a reaction portion, the reaction portion comprising:1. ⁇ 7.
  • a sensor comprising the biological component concentration measurement reagent according to any one of 1.
  • FIG. 1 is a plan view schematically showing a blood glucose meter (component measuring device) equipped with a measurement sensor according to the present embodiment.
  • FIG. 2 is an enlarged perspective view showing the sensor and the photometric portion of the apparatus main body shown in FIG.
  • FIG. 3 is a top view showing the measuring sensor of FIG. 1.
  • FIG. 4A is a first plan view showing the mounting operation of the measuring sensor and the apparatus main body of FIG. 1.
  • FIG. 4B is a second cross-sectional plan view showing the mounting operation following FIG. 4A.
  • FIG. 5A is a schematic diagram of a blood glucose meter sensor used in Examples.
  • FIG. 5B is a diagram for explaining the length, width, and thickness of the inner surface of the blood glucose meter sensor of FIG. 5A.
  • FIG. 6A is a photograph showing an image of the dried reagent and a developed image.
  • FIG. 6B is a graph showing changes in color absorbance over time.
  • FIG. 7 is a graph showing the relationship between the glucose concentration and the absorbance of the formazan and Zn 2+ chelate compounds when an aqueous glucose solution is applied to a blood glucose meter sensor (blood glucose level measuring sensor) to which tetrazolium salt 1 is applied.
  • a first aspect of the present disclosure is a biological component concentration measuring reagent containing a coloring dye, an oxidoreductase, a hemolytic agent, and a low-molecular-weight salt compound, and further containing sucralose.
  • a whole blood sample is brought into contact with the biological component concentration measuring reagent according to the first aspect of the present disclosure, the amount of color development is measured, and based on the amount of color development, A method of measuring biocomponent concentration comprising quantifying the concentration of a biocomponent.
  • a third aspect of the present disclosure is a sensor for measuring a biological component concentration in a whole blood sample, having a reaction portion, wherein the reaction portion is the biological component concentration measurement sensor according to the first aspect of the present disclosure.
  • a sensor containing a reagent is a sensor for measuring a biological component concentration in a whole blood sample, having a reaction portion, wherein the reaction portion is the biological component concentration measurement sensor according to the first aspect of the present disclosure.
  • the concentration of biocomponents (that is, contained in both blood cells and plasma) can be rapidly measured for hemolyzed whole blood samples.
  • biological component concentration measurement reagent is also simply referred to as “reagent” or “reagent of the present disclosure”.
  • X to Y includes X and Y and means “X or more and Y or less”.
  • M means mol/L.
  • operations and measurements of physical properties are performed under the conditions of room temperature (20 to 25° C.)/relative humidity of 40 to 50% RH.
  • a first aspect of the present disclosure is a biological component concentration measuring reagent comprising a chromogenic dye, an oxidoreductase, a hemolyzing agent, and a low-molecular-weight salt compound, and further comprising sucralose.
  • a biological component concentration measuring reagent comprising a chromogenic dye, an oxidoreductase, a hemolyzing agent, and a low-molecular-weight salt compound, and further comprising sucralose.
  • low-molecular-weight salt compound Small molecules specifically refer to compounds with a molecular weight of less than 1000, preferably less than 500, more preferably less than 300. Although the lower limit of the molecular weight of the low-molecular-weight salt compound is not particularly limited, it is usually 30 or more. The low-molecular-weight salt compounds do not contain color-developing dyes.
  • the salt compound is a hydrate, the compound itself, excluding water, is the salt compound. That is, when calculating the molecular weight, the molecular weight excluding the molecular weight of water is the molecular weight of the salt compound, and the content of the salt compound is the content excluding the content of water.
  • a preferred embodiment of the low-molecular-weight salt compound is at least one selected from the group consisting of transition metal salts and inorganic salts.
  • the low-molecular-weight salt compounds may be used singly or in combination of two or more.
  • the formazan produced by the reduction reaction of the tetrazolium salt has a maximum absorption wavelength on the long wavelength side.
  • the tetrazolium salt of the following formula (1) can further shift the maximum absorption wavelength to the longer wavelength side by forming a chelate compound with transition metal ions.
  • the reagents of the present disclosure preferably contain transition metal salts. That is, in a preferred form of the invention, the reagent further contains a transition metal salt.
  • the biological component concentration measuring reagent contains a tetrazolium salt (especially a tetrazolium salt of formula (1) below) as a coloring dye, and further contains a transition metal salt.
  • the biological component concentration measuring reagent contains a tetrazolium salt (especially a tetrazolium salt of formula (1) below) as a coloring dye, and further contains an oxidoreductase and a transition metal salt.
  • formazan has a maximum absorption wavelength in a wavelength region (600 nm or more) that does not overlap with the main absorption band of hemoglobin, even when measuring the biocomponent concentration in a whole blood sample. Therefore, it is possible to further improve the measurement sensitivity of the biological component concentration even for a biological sample, particularly a whole blood sample.
  • the transition metal salt (also referred to as transition metal compound) is not particularly limited. Specifically, compounds capable of generating transition metal ions such as nickel ions (Ni 2+ ), cobalt ions (Co 2+ ), zinc ions (Zn 2+ ), and copper ions (Cu 2+ ) can be used. With such ions, the maximum absorption wavelength of formazan can be shifted to longer wavelengths. Among these, compounds capable of generating nickel ions or zinc ions are preferred as transition metal salts. In particular, zinc ions are more preferable because time-dependent structural changes are less likely to occur when they react with tetrazolium salts.
  • the transition metal salt is a zinc salt.
  • the compound that generates transition metal ions is not particularly limited, but is preferably one that generates ions in an aqueous liquid (eg, water, buffer solution, blood, body fluid). Examples thereof include transition metal salts such as chlorides, bromides, sulfates and acetates of the above transition metals.
  • the above transition metal salts may be used singly or in combination of two or more.
  • the content of the transition metal salt is not particularly limited.
  • the coloring dye is a tetrazolium salt, it can be appropriately selected according to the desired maximum absorption wavelength of the formazan compound.
  • the content of the transition metal salt is preferably 0.1 to 10 mol, more preferably 0.5 to 4 mol, particularly The amount is preferably more than 1 mol and less than 3 mol.
  • the content of the transition metal salt (in terms of solid content) is preferably 5 to 30 parts by mass, more preferably 5 to 15 parts by mass, and particularly The amount is preferably more than 5 parts by weight and less than 12 parts by weight. With such an amount, the maximum absorption wavelength of the formazan compound can be shifted to a desired wavelength range. In addition, with such an amount, it is possible to further suppress changes in wavelength characteristics due to structural changes over time.
  • the content of the transition metal salt is substantially the same as the proportion of the transition metal salt charged in preparing the reagent.
  • the content of the transition metal salts means the total amount of the transition metal salts to be blended.
  • inorganic salts include salts of inorganic acids such as hydrochloric acid, nitric acid, nitrous acid, sulfuric acid, sulfurous acid, thiosulfuric acid, phosphonic acid, phosphoric acid, phosphomolybdic acid, phosphotungstic acid, and vanadic acid.
  • inorganic salts include inorganic salts such as lithium, sodium, potassium, calcium, magnesium and ammonium salts.
  • inorganic salts include sodium nitrate, potassium nitrate, ammonium nitrate, magnesium nitrate, calcium nitrate, sodium nitrite, potassium nitrite, ammonium nitrite, sodium sulfate, potassium sulfate, ammonium sulfate, calcium sulfate, magnesium sulfate, sodium sulfite, Potassium sulfite, calcium sulfite, magnesium sulfite, potassium thiosulfate, lithium sulfate, magnesium sulfate, sodium thiosulfate, sodium bisulfite, sodium bisulfate, potassium bisulfate, disodium glutarate, lithium fluoride, sodium fluoride, fluoride Potassium, calcium fluoride, ammonium fluoride, potassium chloride, sodium chloride, ammonium chloride, calcium chloride, potassium bromide, sodium bromide, ammonium bromide, calcium bromide, sodium
  • a preferred aspect of the inorganic salt is nitrite.
  • Hemoglobin (Fe(II)) is liberated from red blood cells when a hemolyzed whole blood sample is subjected.
  • a tetrazolium salt is used as a color-developing dye, non-enzymatic reduction of the tetrazolium salt by hemoglobin produces colored formazan, resulting in false color development.
  • nitrite which may be included in the reagents of the present disclosure, acts as a mattifying agent that oxidizes the core divalent iron ions (Fe 2+ ) in hemoglobin to trivalent iron ions (Fe 3+ ).
  • nitrous acid takes electrons from hemoglobin released from red blood cells before the coloring dye, thereby suppressing non-enzymatic reduction (false coloring) of the coloring dye.
  • nitrites for example, sodium nitrite, potassium nitrite, calcium nitrite, ammonium nitrite, etc. can be used.
  • Sodium nitrite and potassium nitrite are preferable, and sodium nitrite is more preferable, from the viewpoints of further improving the effect of the present invention, stability and versatility.
  • Nitrite may be used individually by 1 type, or may be used in combination of 2 or more type.
  • the content of nitrite in the reagent is, for example, 0.8 to 10.0 parts by mass, preferably 1.5 to 7.5 parts by mass with respect to 100 parts by mass of the total amount (solid content) of the reagent, More preferably, it is 2.0 parts by mass or more and less than 5.0 parts by mass. With such an amount, false coloring can be suppressed more effectively. Therefore, analyte concentrations (eg, glucose concentrations) can be measured with greater accuracy even for hemolyzed whole blood samples. Also, analyte concentrations (eg, glucose concentrations) in whole blood samples can be measured with greater sensitivity.
  • the nitrite content is substantially the same as the proportion of the nitrite charged in preparing the reagent. Moreover, when the reagent contains two or more nitrites, the content of the above nitrites means the total amount of the nitrites to be blended.
  • the content of nitrite is preferably 50 mol or less per 1 mol of the coloring dye. That is, in a preferred embodiment of the present invention, the nitrite is contained in a ratio of 50 mol or less per 1 mol of the coloring dye.
  • the nitrite competes with the coloring pigment, inhibiting the reaction between the coloring pigment and the enzyme (coloration inhibition).
  • the coloring dye is a tetrazolium salt and the reagent further contains an oxidoreductase
  • the nitrite takes electrons from the formazan produced from the tetrazolium salt, making it impossible to obtain a coloring amount corresponding to the object to be measured.
  • the content of nitrite is more preferably less than 10 mol, still more preferably less than 5 mol, particularly preferably 3.0 mol, per 1 mol of the coloring dye when converted to nitrite ion (NO 2 ⁇ ). is less than
  • the nitrite content is preferably 0.2 mol or more, more preferably more than 0.5 mol, and particularly preferably more than 1.0 mol, per 1 mol of the coloring dye. Within such a range, non-enzymatic coloring and inhibition of coloring can be more effectively suppressed. In addition, it is possible to secure a sufficient amount of coloring by the coloring dye for measurement of the object to be measured.
  • the chromogenic dye is a tetrazolium salt and the reagent further contains an oxidoreductase (e.g., glucose dehydrogenase)
  • the chromogenic dye can steal electrons from the oxidoreductase in preference to nitrite, so nitrite Suppresses inhibition of color development by (salt) (color development reaction can proceed more efficiently). Therefore, analyte concentrations can be measured with greater accuracy even for hemolyzed whole blood samples. That is, according to a preferred embodiment of the present disclosure, nitrous acid or a salt thereof is contained at a ratio of 0.2 mol or more and less than 10 mol with respect to 1 mol of the coloring dye.
  • the nitrite is contained in a ratio of more than 0.5 mol and less than 5 mol per 1 mol of the coloring dye.
  • nitrous acid or a salt thereof is contained in a ratio of more than 1.0 mol and less than 3.0 mol with respect to 1 mol of the coloring dye.
  • the above nitrite content is substantially equivalent to the ratio of the total charged amount (mol) of nitrite to the total charged amount (mol) of color-developing dye in preparing the reagent.
  • the content of nitrite is obtained by dividing the total amount (mol) of nitrite charged by the total amount (mol) of coloring dye when preparing the reagent, obtained to the second decimal place, and rounded off. Use the value calculated to the first decimal place.
  • the reagents of the present disclosure contain both transition metal salts and nitrites.
  • Reagents of the present disclosure include disaccharides or derivatives thereof.
  • precipitation of low-molecular-weight salt compounds such as nitrites and transition metal salts can be suppressed, and the reagent can be made transparent. More specifically, the dry reagent can be made amorphous by suppressing precipitation of salt compounds.
  • the dissolution of the reagent in blood can be accelerated compared to when the disaccharide or derivative thereof is not included. Therefore, the analyte (biological component) concentration can be measured more rapidly even when salt compounds are included.
  • the biological component concentration measuring reagent contains a tetrazolium salt (especially a tetrazolium salt of the following formula (1)) as a coloring dye, and further sucralose (1′,4,6′-trichlorogalactosucrose), sucrose , trehalose.
  • the biological component concentration measuring reagent contains a tetrazolium salt (particularly the tetrazolium salt of formula (1)) as a coloring dye, and further contains sucralose, an oxidoreductase and a transition metal salt.
  • the content of the disaccharide or derivative thereof in the reagent of the present disclosure is not particularly limited, but can be appropriately selected according to the composition of the reagent.
  • the content of the disaccharide or its derivative is preferably 10 to 50 parts by mass, more preferably 15 to 45 parts by mass, and particularly preferably 15 parts by mass with respect to 100 parts by mass of the total amount (solid content) of the reagent. parts and less than 40 parts by mass. With such an amount, precipitation of low-molecular-weight salt compounds can be more effectively suppressed, and the reagent can be made amorphous. Amorphized reagents have transparency. Therefore, analyte (biological component) concentrations can be measured much more quickly.
  • the content mass ratio of the disaccharide or derivative thereof to the low-molecular salt compound is preferably 1 to 10, more preferably more than 1 and 5 or less, and 1.5 to 5. Even more preferred. With such a content mass ratio, precipitation of low-molecular-weight salt compounds can be more effectively suppressed, and the transparency of the reagent can be more effectively achieved (false coloring can be further suppressed and prevented). Therefore, the analyte (biological component) concentration can be measured with even higher accuracy. Also, the content mass ratio of sucralose to the low-molecular-weight salt compound is preferably 1 to 10, more preferably more than 1 and 5 or less, and even more preferably 1.5 to 5.
  • precipitation of low-molecular-weight salt compounds can be more effectively suppressed, and the transparency of the reagent can be more effectively achieved (false coloring can be further suppressed and prevented). Therefore, the analyte (biological component) concentration can be measured with even higher accuracy.
  • the reagents of the present disclosure preferably contain sugar alcohols. Thereby, wettability can be improved. Therefore, since the analyte (biological component) spreads quickly over the entire reaction section (good spreadability), the analyte (biological component) can react in the entire reaction section. Therefore, the analyte (biological component) concentration can be measured with higher accuracy. That is, in a preferred embodiment of the present invention, the biological component concentration measuring reagent further contains a sugar alcohol. In a more preferred embodiment of the present invention, the biological component concentration measuring reagent contains a tetrazolium salt (especially a tetrazolium salt of the following formula (1)) as a coloring dye, and further contains a sugar alcohol.
  • a tetrazolium salt especially a tetrazolium salt of the following formula (1)
  • the biological component concentration measuring reagent contains a tetrazolium salt (especially a tetrazolium salt of the following formula (1)) as a coloring dye, and further comprises a sugar alcohol, an oxidoreductase, a transition metal salt, an inorganic salt and a Contains sugars or derivatives thereof. Furthermore, in a particularly preferred embodiment of the present invention, the biological component concentration measuring reagent contains a tetrazolium salt (especially a tetrazolium salt of the following formula (1)) as a coloring dye, and further comprises sugar alcohol, oxidoreductase, transition metal salt, and inorganic salt. and sucralose.
  • a tetrazolium salt especially a tetrazolium salt of the following formula (1)
  • sugar alcohols examples include lactitol, erythritol, sorbitol, xylitol, mannitol, and maltitol.
  • lactitol, erythritol, sorbitol, xylitol, and mannitol are preferred from the viewpoint of suppressing false coloring of coloring dyes, and erythritol, sorbitol, xylitol, and mannitol are more preferred from the viewpoint of further improving wettability, and sorbitol is preferred. Especially preferred.
  • the sugar alcohol content is not particularly limited, but can be appropriately selected according to the composition of the reagent.
  • the content of the sugar alcohol is preferably 0.1 to 15 parts by mass, more preferably 0.5 to 15 parts by mass, particularly preferably 1 part by mass, based on 100 parts by mass of the total amount (solid content) of the reagent. It is an amount that exceeds parts by mass and is less than 10 parts by mass. With such an amount, the wettability of the dry reagent can be more effectively improved. Therefore, the analyte (biological component) spreads throughout the dry reagent more quickly. Therefore, the analyte (biological component) can more reliably react with the whole dry reagent, so that the concentration of the target substance can be measured with higher accuracy.
  • the sugar alcohols used here do not include sucralose.
  • the reagent of the present disclosure comprises a disaccharide or derivative thereof (particularly sucralose) and a sugar alcohol
  • the molar ratio of sugar alcohol to disaccharide or derivative thereof (particularly sucralose) is 10% or more. % or more is more preferable.
  • the blood expandability is further improved.
  • the molar ratio of sugar alcohol to disaccharides or derivatives thereof (especially sucralose) is preferably 200% or less, more preferably 150% or less, and from the viewpoint of transparency. Therefore, it is more preferably 100% or less, and from the viewpoint of high temperature deterioration, it is more preferably 50% or less, and particularly preferably 30% or less.
  • the value obtained using each molar concentration obtained to the first decimal place is adopted.
  • Hemolytic agent Reagents of the present disclosure include hemolytic agents.
  • red blood cells hematocrit value
  • the amount of erythrocytes is usually determined by the amount of hemoglobin in erythrocytes.
  • the actual amount of red blood cells and the amount of hemoglobin may not match.
  • a special measurement method may be required for measuring the amount of red blood cells.
  • red blood cells usually contain the same amount of analyte (eg, glucose) as is contained in plasma. Therefore, according to the reagent of the present disclosure, the amount of hemoglobin can be corrected by a simpler method, and the analyte (biological component) (eg, glucose) in plasma and blood cells (ie, whole blood sample) Concentration can be measured (ie, the analyte concentration in a whole blood sample can be known). Also, no operations or devices (eg, centrifugation, filtration, porous membranes) to separate red blood cells from whole blood are required. Since there is no need to separate the plasma, less sample volume is required.
  • the hemolytic agent may be used singly or in combination of two or more.
  • nonionic surfactants for example, amphoteric surfactants, anionic surfactants, etc. can be used.
  • Nonionic surfactants are preferred because they do not inhibit enzyme activity.
  • the nonionic surfactant preferably has an HLB value of 11 or more and 15 or less (more preferably 12 or more and 14 or less) from the viewpoint of erythrocyte membrane disruption or water solubility.
  • nonionic surfactants include polyoxyethylene alkyl ethers and nonylphenyl polyethylenes having an average added mole number of oxyethylene groups of 1 to 150 and alkyl groups of 1 to 18 carbon atoms. glycol and the like. Such nonionic surfactants may be synthesized or obtained commercially.
  • Amphoteric surfactants may also be synthesized or commercially available products may be used.
  • Commercially available products include CHAPS (3-(3-cholamidepropyl)dimethylammonio-1-propanesulphonate), alkylpolyaminoethylglycine chloride; sodium dodecylsulfate, and the like.
  • the composition (content) of the hemolytic agent in the reagent can be appropriately selected according to the sample volume (whole blood volume).
  • the composition (content) (solid content conversion) of the hemolytic agent in the reagent is, for example, 1 to 10% by volume with respect to a 1.0 ⁇ L whole blood sample.
  • the content of the hemolytic agent in the sensor shape is 10 to 50% by mass, preferably 20 to 40% by mass, relative to the total amount (solid content) of the reagent. With such an amount, for example, a sensor capable of sufficiently hemolyzing a whole blood sample with a hematocrit of 20 to 70% can be obtained.
  • the content of the hemolytic agent is substantially the same as the proportion of the hemolytic agent charged in preparing the reagent.
  • the content of the hemolytic agents is intended to be the total amount of the hemolytic agents to be blended.
  • Reagents of the present disclosure include chromogenic dyes.
  • the coloring dye is preferably a tetrazolium salt, such as 2-benzothiazolyl-3-(4-carboxy-2-methoxyphenyl)-5-[4-(2-sulfoethyl Carbamoyl)phenyl]-2H-tetrazolium (2-Benzothiazolyl-3-(4-carboxy-2-methoxyphenyl)-5-[4-(2-sulfoethylcarbamoyl)phenyl]-2H-tetrazolium), WO 2018/051822 Tetrazolium salts described in pamphlets are more preferred, and tetrazolium salts described in WO 2018/051822 are particularly preferred.
  • a tetrazolium salt such as 2-benzothiazolyl-3-(4-carboxy-2-methoxyphenyl)-5-[4-(2-sulfoethyl Carbamoyl)phenyl]-2H-tetrazolium
  • the coloring dye is a tetrazolium salt.
  • the chromogenic dye is 2-benzothiazolyl-3-(4-carboxy-2-methoxyphenyl)-5-[4-(2-sulfoethylcarbamoyl)phenyl]-2H-tetrazolium and It is at least one selected from the group consisting of tetrazolium salts represented by formula (1).
  • the coloring dye is a tetrazolium salt represented by formula (1) below.
  • R 1 is any one selected from the group consisting of a hydrogen atom, a hydroxyl group, a methoxy group, and an ethoxy group
  • R 2 is a nitro group, —OR 4 , and a carboxyl group.
  • R3 is a hydrogen atom, a methyl group or an ethyl group, at least one is a methyl group or an ethyl group, R4 is a methyl group or an ethyl group where m is the number of sulfo groups (—SO 3 ⁇ ) bonded to the phenyl group at the 5-position of the tetrazole skeleton and is 1 or 2 ; is the number of bonds and is an integer of 0 to 2, p is the number of bonds of the sulfo group (—SO 3 ⁇ ) to the phenyl group at the 3-position of the tetrazole skeleton, 0 or 1, and n+p is 1 above, q is 1 or 2, and when q is 2, each OR 3 is arranged adjacently, at this time, each OR 3 may form a ring with each other, and X is a hydrogen atom or Represents an alkali metal.
  • a substituted benzothiazolyl group exists at the 2-position of the tetrazole skeleton.
  • the presence of a benzothiazolyl group at the 2-position of the tetrazole ring allows efficient and rapid formation of a chelate compound with a transition metal compound (the maximum absorption wavelength of the formazan compound can be shifted to a longer wavelength region).
  • the maximum absorption wavelength at the time of chelation between the generated formazan and transition metal ions such as Zn 2+ becomes longer. shift to the side.
  • q is 1 or 2.
  • R3 is a methyl group or an ethyl group, preferably a methyl group from the viewpoint of water solubility.
  • R 3 is an alkyl group having 3 or more carbon atoms, the tetrazolium salt and the formazan produced from the tetrazolium salt are not preferable because of their poor water solubility.
  • At least one of —OR 3 of the substituted benzothiazolyl group present at the 2-position of the tetrazole skeleton is preferably bonded to the 6-position of the benzothiazolyl group. According to this embodiment, the maximum absorption wavelength at the time of chelation with transition metal ions such as Zn 2+ can be shifted to the long wavelength side.
  • the substitution position of —OR 3 which is a substituent of the benzothiazolyl group present at the 2-position of the tetrazole skeleton, is not particularly limited, and may be any of the 4-, 5-, 6- and 7-positions. may be
  • the substituted position of —OR 3 is preferably bonded to the 6-position of the benzothiazolyl group. That is, in a preferred form of the invention, it is preferred that q is 1 and -OR 3 is attached to the 6-position of the benzothiazolyl group.
  • the maximum absorption wavelength at the time of chelation with transition metal ions such as Zn 2+ can be shifted to the long wavelength side.
  • R3 is a hydrogen atom, a methyl group or an ethyl group, and at least one is a methyl group or an ethyl group.
  • each OR 3 may be placed adjacently and each OR 3 may form a ring with each other.
  • preferred combinations for R 3 are a combination of a hydrogen atom and a methyl group, and a combination of a methyl group and a methyl group.
  • the substitution position of —OR 3 which is a substituent of the benzothiazolyl group present at the 2-position of the tetrazole skeleton, is not particularly limited as long as two —OR 3 are arranged adjacent to each other.
  • At least one substituted position of —OR 3 is preferably bonded to the 6-position of the benzothiazolyl group. That is, the substitution positions of two —OR 3 are preferably 5,6-positions or 6,7-positions.
  • the substituted benzothiazolyl group present at the 2-position of the tetrazole skeleton is preferably any one of the following substituents.
  • the substituted benzothiazolyl group present at the 2-position of the tetrazole skeleton is any of the above substituents
  • the substituted sulfonated phenyl group present at the 3-position of the tetrazole skeleton is 4-methoxy
  • a -5-sulfophenyl group is preferable from the viewpoint of the effect of shifting the maximum absorption wavelength to the longer wavelength side when chelating with transition metal ions such as Zn 2+ .
  • R 1 is any one selected from the group consisting of a hydrogen atom, a hydroxyl group, a methoxy group and an ethoxy group
  • R 2 is a nitro group, -OR 4 , and a carboxyl group
  • at least one R 2 is a —OR 4 group
  • R 3 is a hydrogen atom, a methyl group, or an ethyl group, and at least one is a methyl group or an ethyl group
  • R 4 is a methyl group or an ethyl group
  • m is the number of sulfo groups (—SO 3 ⁇ ) bonded to the phenyl group at the 5-position of the tetrazole skeleton, and 1 or 2
  • n is the number of R 2 bonded to the phenyl group at the 3-position of the tetrazole skeleton and is 1 or 2
  • p is the sulfo group (—SO
  • each OR 3 is placed adjacently, wherein each OR 3 may form a ring with each other, and when each OR 3 forms a ring with each other, the substituted benzothiazolyl group present at the 2-position of the tetrazole skeleton is any of the substituents represented below,
  • X represents a hydrogen atom or an alkali metal; It is a tetrazolium salt represented by the above formula (1).
  • R1 which is a substituent of the sulfonated phenyl group, is any one selected from the group consisting of a hydrogen atom, a hydroxyl group, a methoxy group and an ethoxy group.
  • R 1 is preferably a hydrogen atom or a hydroxyl group, since it can stably form a chelate with a transition metal ion in a wide pH range.
  • R 1 are more preferably hydrogen atoms.
  • R 1 is a hydroxyl group, a methoxy group or an ethoxy group, the substitution position is not particularly limited, but the 4-position is preferred.
  • m is the number of sulfo groups (—SO 3 ⁇ ) bonded to the phenyl group at the 5-position of the tetrazole skeleton, and is 1 or 2.
  • the sulfo group is at the 2- or 4-position, or at the 2- and 4-positions, the water solubility can be further improved.
  • the sulfo groups are at the 2,4-positions, it is advantageous in that it is easy to synthesize a building block for synthesis. It is highly water-soluble, and can stably form a chelate compound with a transition metal ion over a wide pH range, or improves water-solubility. and more preferably R 1 is a hydrogen atom.
  • p which is the number of sulfo groups (—SO 3 ⁇ ) bonded to the 3-position phenyl group of the tetrazole skeleton, is preferably 1.
  • the bonding position of the sulfo group (—SO 3 ⁇ ) to the 5-position phenyl group of the tetrazole skeleton is not particularly limited. Tetrazolium salts and water-solubility of formazan produced from tetrazolium salts can be further improved, and the maximum absorption wavelength can be shifted to the longer wavelength side . , 2,4- and 3,5-positions of the phenyl group. It is particularly preferable that sulfo groups are present at the 2 and 4-positions of the phenyl group, and a tetrazolium salt compound that does not precipitate even in the presence of a high concentration of transition metal ions can be obtained.
  • the phenyl group at the 5-position of the tetrazole skeleton is preferably a phenyl group having sulfo groups ( --SO.sub.3.sup.- ) at the 2- and 4-positions.
  • a substituted phenyl group exists at the 3-position of the tetrazole skeleton. Since the phenyl group is obligatory substituted, n+p is 1 or more.
  • R 2 as a substituent of the 3-position phenyl group of the tetrazole skeleton is any one selected from the group consisting of a nitro group, —OR 4 and a carboxyl group.
  • R 2 is preferably a nitro group or —OR 4 from the viewpoint of chelate formation between formazan and transition metal ions, and preferably a carboxyl group from the viewpoint of water solubility.
  • n is the number of R 2 bonds to the 3-position phenyl group of the tetrazole skeleton, and is an integer of 0-2.
  • n 1 or 2
  • R 2 is a —OR 4 group.
  • n 1 or 2
  • R 2 is a —OR 4 group.
  • the —OR 4 group is preferably a methoxy group.
  • R4 is a methyl group or an ethyl group, preferably a methyl group from the viewpoint of water solubility.
  • R 4 is an alkyl group having 3 or more carbon atoms, the tetrazolium salt and the formazan produced from the tetrazolium salt are not preferable because of their poor water solubility.
  • the substitution position of R 2 is not particularly limited, but it may be the 2-, 3-, 4-, 5- or 6-position of the phenyl group present at the 3-position of the tetrazole skeleton.
  • at least one R2 is in the 2- or 4-position, preferably in the 2- and/or 4-position.
  • Such a structure can improve the water solubility and improve the stability of the tetrazolium salt and the formazan produced from the tetrazolium salt.
  • the sulfo group is an electron-withdrawing group, so the presence of other electron-withdrawing groups (e.g., nitro group) destabilizes the cationic charge of the nitrogen atom on the tetrazolium ring, May reduce compound stability.
  • the substitution position of the sulfo group (—SO 3 ⁇ ) substituting the 3-position phenyl group of the tetrazole skeleton is not particularly limited, but the 3-position or 5-position is preferred. By substituting this position with a sulfo group, the stability of the tetrazolium salt and the formazan produced from the tetrazolium salt can be more effectively improved.
  • the substituent present at the 3-position of the tetrazole skeleton is a 4-methoxy-3-sulfophenyl group, a 2-methoxy-5-sulfophenyl group, a 2-methoxy-4-nitro-5- sulfophenyl group, 2-methoxy-4-nitrophenyl group, 4-sulfophenyl group, 4-carboxy-2-methoxyphenyl group, 5-carboxy-2-methoxyphenyl group, 3-carboxy-4-methoxyphenyl group, Or 4-methoxy-5-sulfophenyl group is preferred, 4-methoxy-3-sulfophenyl group, 2-methoxy-5-sulfophenyl group, 3-carboxy-4-methoxyphenyl group, or 4-methoxy-5- A sulfophenyl group is more preferred, and a 4-methoxy-3-sulfophenyl group, a 4-methoxy-5-s
  • the phenyl group present at the 3-position of the tetrazole skeleton is particularly preferably a 4-methoxy-3-sulfophenyl group, since the maximum absorption wavelength of the formazan compound itself can be made longer.
  • X represents a hydrogen atom or an alkali metal.
  • X exists to neutralize the anion (sulfo group (--SO 3 ⁇ )). Therefore, the type of alkali metal is not particularly limited, and may be lithium, sodium, potassium, rubidium, or cesium.
  • Preferred examples of tetrazolium salts include those having the following structures.
  • X represents an alkali metal.
  • a particularly preferred example of the tetrazolium salt is the following structure. That is, in a preferred form of the present invention, the coloring dye has the following structure.
  • the coloring pigment may be synthesized or a commercially available product may be used.
  • 2-benzothiazolyl-3-(4-carboxy-2-methoxyphenyl)-5-[4-(2-sulfoethylcarbamoyl)phenyl]-2H-tetrazolium 2-Benzothiazolyl-3 -(4-carboxy-2-methoxyphenyl)-5-[4-(2-sulfoethylcarbamoyl)phenyl]-2H-tetrazolium
  • WST-4 trade name
  • the tetrazolium salt of the above formula (1) preferably used in the present disclosure is not limited to the following, but can be produced, for example, by the method described in International Publication No. 2018/051822, or by appropriately modifying the method. .
  • a hydrazone is synthesized by dehydration condensation of an aldehyde and a hydrazine, and then the corresponding diazonium salt is reacted in an aqueous solvent under basic conditions to obtain a formazan.
  • sodium hydroxide, potassium hydroxide and the like are used as the basifying agent.
  • the resulting formazan is then oxidized in an alcohol solvent (e.g., methanol, ethanol) using an oxidizing agent such as ethyl nitrite, butyl nitrite or sodium hypochlorite to obtain the tetrazolium salt of formula (1).
  • an alcohol solvent e.g., methanol, ethanol
  • an oxidizing agent such as ethyl nitrite, butyl nitrite or sodium hypochlorite
  • benzenediazonium chloride compound having The hydrazone compound obtained above and the benzenediazonium chloride compound are reacted under basic conditions (for example, in the presence of sodium hydroxide or potassium hydroxide) to give the following structure:
  • the formazan compound thus obtained is oxidized in an alcoholic solvent (e.g., methanol, ethanol) using an oxidizing agent (e.g., nitrite such as sodium nitrite, ethyl nitrite, butyl nitrite).
  • an oxidizing agent e.g., nitrite such as sodium nitrite, ethyl nitrite, butyl nitrite.
  • the composition (content) (solid content conversion) of the coloring dye in the reagent is, for example, 10 to 40 parts by mass, preferably 15 to 35 parts by mass, with respect to 100 parts by mass of the total amount of the reagent (solid content), More preferably, it is more than 15 parts by mass and less than 30 parts by mass.
  • the coloring dye eg, tetrazolium salt
  • the analyte concentration eg, glucose concentration
  • the content of the color-developing dye is substantially the same as the proportion of the amount of the color-developing dye charged in preparing the reagent.
  • the content of the coloring dyes means the total amount of the coloring dyes to be blended.
  • the formazan produced from the tetrazolium salt of formula (1) above, or a chelate compound of formazan and a transition metal ion, alone or by forming a chelate compound with a transition metal compound, does not overlap the main absorption bands of hemoglobin. It has a large absorption wavelength band in the wavelength range (600 nm or more). Moreover, the tetrazolium salt of the above formula (1) has high water solubility. Therefore, by using the tetrazolium salt of the above formula (1), the biocomponent concentration can be measured with high sensitivity even for a hemolyzed whole blood sample.
  • Formazan having such absorption or a chelate compound of formazan and a transition metal ion is less susceptible to blood absorption, and the biocomponent concentration can be determined more accurately. and can be measured with good sensitivity.
  • the maximum absorption wavelength ( ⁇ max) of the chelate compound of formazan and transition metal ion is the value measured according to the following method.
  • the biological component concentration measuring reagent contains a tetrazolium salt (especially the tetrazolium salt of formula (1) above) as a coloring dye, and further contains an oxidoreductase that specifically reacts with the analyte.
  • the oxidoreductase is not particularly limited and can be appropriately selected depending on the type of biological component to be measured. Specifically, glucose dehydrogenase (GDH), glucose dehydrogenase (PQQ-GDH) with pyrroloquinoline quinone (PQQ) as a coenzyme, glucose dehydrogenase (FAD-GDH) with flavin adenine dinucleotide (FAD) as a coenzyme, Glucose dehydrogenases (GDH), such as nicotinamide adenine dinucleotide (NAD) coenzyme glucose dehydrogenase (NAD-GDH) and nicotinamide adenine dinucleotide phosphate (NADP) coenzyme (NADP-GDH), glucose Oxidase (GOD), lactate dehydrogenase (LDH), cholesterol dehydrogenase, cholesterol oxidase, urate dehydrogenas
  • the oxidoreductases may be used singly or in combination of two or more.
  • the oxidoreductase is preferably glucose dehydrogenase or glucose oxidase.
  • the oxidoreductase is preferably cholesterol dehydrogenase or cholesterol oxidase.
  • the biological component concentration measurement reagent contains an oxidoreductase, the content of the oxidoreductase is not particularly limited, and can be appropriately selected according to the amount of the tetrazolium salt.
  • the reagents of the present disclosure essentially contain chromogenic dyes, oxidoreductases, hemolytic agents, low-molecular-weight salt compounds and disaccharides or derivatives thereof (particularly sucralose).
  • the reagents of the present disclosure may contain other components in addition to the above.
  • a component that is normally appropriately selected according to the type of biological component to be measured and added to measure the concentration of the biological component can be similarly used. Specific examples include transition metal compounds, electron mediators, pH buffers, and the like.
  • each of the above other components may be used alone or in combination of two or more.
  • each of the other components may be used alone or in combination of two or more.
  • the reagent of the present disclosure preferably does not contain surfactants other than the hemolyzing agent.
  • the electron carrier is not particularly limited, and known electron carriers may be used. Specifically, diaphorase, phenazine methylsulfate (PMS), 1-methoxy-5-methylphenazinium methylsulfate (1-Methoxy PMS or m-PMS), nicotinamide adenine dinucleotide phosphate (NADPH), nicotinamide adenine dinucleotide (NADH) and the like.
  • the electron carriers may be used singly or in combination of two or more.
  • the biological component concentration measuring reagent contains an electron carrier
  • the content of the electron carrier is not particularly limited, and can be appropriately selected according to the amount of the tetrazolium salt.
  • the form of use of the reagent is not particularly limited, and may be solid, gel, sol, or liquid.
  • the reagents are preferably used in a solid (dry state), ie the reagents of the present disclosure are preferably dry reagents.
  • the dry reagent is usually formed by applying a coating liquid for forming the dry reagent onto the base material.
  • the coating liquid may contain water, a buffer (pH buffer) and the like from the viewpoint of formability.
  • the buffer is not particularly limited, and buffers generally used for measuring biocomponent concentrations can be used in the same way.
  • Tris-HCl buffer Tris
  • the concentration of the buffer is not particularly limited, it is preferably 0.01 to 1.0M.
  • the buffer concentration refers to the concentration (M, mol/L) of the buffer contained in the coating liquid.
  • the pH of the buffer solution is preferably near neutral, eg, about 5.0 to 8.0.
  • the concentration of the tetrazolium salt in the coating solution is not particularly limited as long as the concentration of the desired biological component can be measured.
  • the concentration of the tetrazolium salt in the coating solution is preferably 0.01 to 0.2 mol/L, more preferably 0.05 to 0.1 mol/L. be. With such an amount, the tetrazolium salt is substantially all contained in the biological sample (for example, 95 mol% or more, preferably 98 mol% or more, particularly preferably 100 mol%). to react. Therefore, the desired biocomponent concentration can be measured accurately and quickly with good sensitivity.
  • the concentration of a specific biological component contained in a whole blood sample can be measured with high accuracy.
  • the concentrations of biocomponents can be measured with high accuracy in hemolyzed whole blood samples (that is, contained in both blood cells and plasma).
  • a whole blood sample is brought into contact with the biological component concentration measuring reagent of the present disclosure, the amount of color development is measured, and the concentration of the biological component in the whole blood sample is quantified based on the amount of color development.
  • a method for measuring biocomponent concentration comprising:
  • the sample to be measured is whole blood.
  • a sensor containing the biological component concentration measuring reagent or dye of the present disclosure or a sensor attached to a component measuring device e.g., a blood glucose meter
  • a component measuring device e.g., a blood glucose meter
  • the biological component is not particularly limited, and a biological component that is usually measured by a colorimetric method or an electrode method can be similarly used. Specific examples include glucose, cholesterol, neutral fat, nicotinamide adenine dinucleotide phosphate (NADPH), nicotinamide adenine dinucleotide (NADH), uric acid and the like.
  • the reagents of the present disclosure contain glucose, cholesterol, triglycerides, nicotinamide adenine dinucleotide phosphate (NADPH), nicotinamide adenine dinucleotide (NADH) or uric acid in whole blood.
  • the biocomponent is glucose, cholesterol, neutral fat, nicotinamide adenine dinucleotide phosphate (NADPH), nicotinamide adenine dinucleotide (NADH) or uric acid.
  • the measurement method is not particularly limited, and can be appropriately selected according to the type of biological component to be measured.
  • the coloring dye is a tetrazolium salt
  • the biological component is ⁇ -D-glucose
  • the oxidoreductase is glucose dehydrogenase (GDH)
  • glucose is oxidized by GDH to produce gluconic acid.
  • the coenzyme or electron transfer substance of GDH is reduced at that time, specifically the resulting reduced tetrazolium salt (hence formazan or chelate compound of formazan and transition metal ion) Coloring degree
  • a method of optical measurement colorimetric method
  • a method of measuring current generated by oxidation-reduction reaction electrode method
  • the blood sugar level measurement by the colorimetric method has advantages such as easy correction using the hematocrit value when calculating the blood sugar level and a simple manufacturing process. Therefore, the biological component concentration measuring reagent can be suitably used for the colorimetric method.
  • Colorimetric methods are preferably used, particularly when measuring glucose concentrations in whole blood samples.
  • the reagent of the present disclosure may be used for measuring biocomponent concentrations in a form in which each component is mixed, but may be incorporated in a sensor (whole blood component concentration measurement sensor) in a dry state. That is, the present invention provides a sensor for measuring biocomponent concentration in a whole blood sample, which has a reaction portion, wherein the reaction portion contains the biocomponent concentration measurement reagent of the present disclosure (hereinafter referred to as Also referred to simply as a "sensor").
  • the reagents and methods of the present disclosure can be incorporated into automatic analyzers, measurement kits, simple blood glucose meters, and the like, and can be used for routine clinical examinations. It is also possible to incorporate the reagents of the present disclosure into commercially available biosensors.
  • the content of the reagent per sensor is not particularly limited, and the amount normally used in the field can be similarly employed.
  • the tetrazolium salt of formula (1)) is preferably included in an amount sufficient for the amount of the desired biocomponent present.
  • the concentration of the coloring dye is preferably 3 to 50 nmol, more preferably 10 to 30 nmol per sensor. In such amounts, the chromogenic dye will react in proportion to the amounts of substantially all biological components contained in the whole blood sample. Therefore, the desired biocomponent concentration can be measured accurately and quickly with good sensitivity.
  • the measurement sensor colorimetric blood glucose meter
  • the present invention is characterized by using the biological component concentration measuring reagent of the present disclosure, and the structure of the sensor is not particularly limited.
  • the biological component concentration measuring reagent of the present disclosure can be used with commercially available measurement sensors and sensors described in publications such as WO 2016/051930, WO 2018/51822, and WO 2020/137532. may be applied to Similarly, in the following embodiments, specific forms of sensors for the purpose of measuring blood sugar levels will be described, but the sensors for measurement are not limited to this application, and may be similarly or appropriately applied to other applications. Can be applied with modification.
  • FIG. 1 is a plan view schematically showing a blood glucose meter used for detecting glucose (blood sugar) using a measurement sensor according to this embodiment.
  • the blood glucose meter 10 is configured as a device for measuring glucose (blood sugar) in a whole blood sample.
  • This blood glucose meter 10 can be mainly used for personal use operated by a user (subject). Users can also monitor their blood sugar by measuring blood sugar before meals.
  • the blood glucose meter 10 can also be used by a medical professional to evaluate the health condition of the subject. In this case, the blood glucose meter 10 may be modified as appropriate and installed in medical facilities.
  • the blood glucose meter 10 employs the colorimetric principle of optically measuring the glucose content (blood glucose level) contained in a whole blood sample.
  • the blood glucose meter 10 performs blood glucose measurement using a transmissive measurement unit 14 that emits measurement light of a predetermined wavelength and receives light that has passed through the measurement area of the measurement sensor 12 .
  • the blood glucose meter 10 is attached with the measurement sensor 12 that has taken blood, or with the measurement sensor 12 attached, the blood is introduced into the measurement sensor 12, and the measurement unit 14 detects glucose.
  • the measurement sensor 12 may be configured as a disposable type that is discarded after each measurement.
  • the blood glucose meter 10 is preferably configured as a portable and robust instrument so that the user can easily repeat the measurements.
  • the measurement sensor 12 includes a plate-shaped sensor main body 18 and a cavity 20 (liquid cavity) extending in the planar direction of the plate surface inside the sensor main body 18 . Prepare.
  • the sensor main body 18 has a long side 22 in the direction of insertion and withdrawal of the blood glucose meter 10 (the distal and proximal directions of the blood glucose meter 10, that is, direction B) and a short side in the A direction. 24 is formed in a rectangular shape.
  • the length of the long side 22 of the sensor main body 18 is preferably set to be twice or more the length of the short side 24 . As a result, a sufficient amount of insertion of the measurement sensor 12 into the blood glucose meter 10 is ensured.
  • the thickness of the sensor main body 18 is formed to be extremely small (thin) compared to the side surfaces formed in a rectangular shape (in FIG. 2, it is intentionally illustrated as having a sufficient thickness).
  • the thickness of the sensor main body 18 is preferably set to 1/10 or less of the short side 24 described above.
  • the thickness of the sensor main body 18 may be appropriately designed according to the shape of the insertion hole 58 of the blood glucose meter 10 .
  • the measuring sensor 12 has a sensor main body 18 with a pair of plate pieces 30 and a pair of spacers 32 so as to have a hollow portion 20 .
  • FIG. 3 is a top view showing the measurement sensor of FIG.
  • the sensor main body 18 has sharp corners, but the corners may be rounded, for example.
  • the sensor main body 18 is not limited to a thin plate shape, and the shape may be freely designed.
  • the sensor main body 18 may be formed in a square shape, another polygonal shape, a circular shape (including an elliptical shape), or the like when viewed from above.
  • the hollow portion 20 provided inside the sensor main body portion 18 is located at the intermediate position in the short axis direction of the sensor main body portion 18 and is formed linearly along the longitudinal direction of the sensor main body portion 18 .
  • the hollow portion 20 is connected to a distal opening 20a formed on a distal side 24a of the sensor main body 18 and a proximal opening 20b formed on a proximal side 24b of the sensor main body 18, and communicates with the outside of the sensor main body 18.
  • the cavity 20 can cause the blood to flow along the extension direction based on capillary action. A small amount of blood flows through the cavity 20, and even if it moves to the proximal opening 20b, the tension prevents leakage.
  • An absorbing portion (for example, a spacer 32 described later that is porous only on the proximal side) may be provided on the proximal side 24b side of the sensor main body 18 to absorb blood.
  • a reagent (coloring reagent) 26 that develops a color corresponding to the concentration of glucose (blood sugar) in blood is applied, and a measurement target portion 28 to be measured by the blood glucose meter 10 is set.
  • the blood flowing in the cavity 20 in the proximal direction comes into contact with the reagent 26 applied to the part to be measured 28, and the blood reacts with the reagent 26 to develop a color.
  • the application position of the reagent 26 and the measurement target portion 28 may be offset from each other in the longitudinal direction of the hollow portion 20.
  • the reaction portion coated with the reagent 26 may be positioned upstream of the measurement target portion 28 in the blood flow direction. may be provided.
  • the measuring sensor 12 includes a pair of plate pieces 30 and a pair of spacers 32 to form the sensor main body 18 so as to have the cavity 20 described above.
  • the pair of plate pieces 30 are each formed in the above-described rectangular shape when viewed from the side, and are arranged in the stacking direction. That is, the pair of plate pieces 30 constitute both side surfaces (upper surface and lower surface) of the sensor main body 18 .
  • the plate thickness of each plate piece 30 is very small, and is preferably set to the same dimension of about 5 to 50 ⁇ m, for example. The thickness of the two (a set of) plate pieces 30 may be different from each other.
  • the pair of plate pieces 30 has the strength to maintain the plate shape and not undergo plastic deformation even if a certain amount of pressing force is applied from the direction perpendicular to the surface direction. Further, each plate piece 30 has a transparent portion or a translucent portion so that the measurement light can pass therethrough. Furthermore, each plate piece 30 is preferably formed on a flat plate surface having moderate hydrophilicity so that blood can flow in cavity 20 .
  • each plate piece 30 is not particularly limited, but thermoplastic resin material, glass, quartz, or the like may be applied.
  • thermoplastic resin materials include polyolefins (e.g., polyethylene, polypropylene, etc.), cycloolefin polymers, polyesters (e.g., polyethylene terephthalate (PET), polyethylene naphthalate, etc.), polyvinyl chloride, polystyrene, ABS resins, Polymer materials such as acrylic resins, polyamides, fluorine resins, or mixtures thereof can be used.
  • each spacer 32 is a member that forms the hollow portion 20 between the pair of plate pieces 30 and the pair of spacers 32 themselves by being arranged between the pair of plate pieces 30 so as to separate them.
  • one spacer 32 is arranged to contact the upper long side 22a of the sensor main body 18 in FIG. 3 and extend in the distal and proximal directions along the upper long side 22a.
  • the other spacer 32 is arranged to contact the lower long side 22b of the sensor main body 18 in FIG. 3 and extend in the distal and proximal directions along the lower long side 22b.
  • the material (base material) forming the pair of spacers 32 is not particularly limited, but examples thereof include styrene, polyolefin, polyurethane, polyester, polyamide, polybutadiene, transpolyisoprene, and fluororubber. and various thermoplastic elastomers such as chlorinated polyethylene. Alternatively, in addition to the thermoplastic elastomer, various elastically deformable materials may be applied, and a structural body such as an elastically deformable porous body (for example, sponge) may be applied. Furthermore, the spacers 32 having an adhesive on one or both sides of the substrate may be applied to adhere the plate pieces 30 to each other by being cured or semi-cured between the pair of plate pieces 30 . Further, the spacer 32 may contain the reagent 26 to elute the reagent 26 into the cavity 20 .
  • the plate piece 30 and the spacer 32 may be hydrophilized.
  • a method of hydrophilization for example, an aqueous solution containing hydrophilic polymers such as surfactants, polyethylene glycol, polypropylene glycol, hydroxypropylcellulose, water-soluble silicone, polyacrylic acid, polyvinylpyrrolidone, and polyacrylamide is immersed.
  • hydrophilic polymers such as surfactants, polyethylene glycol, polypropylene glycol, hydroxypropylcellulose, water-soluble silicone, polyacrylic acid, polyvinylpyrrolidone, and polyacrylamide is immersed.
  • method, spray method, and the like plasma irradiation, glow discharge, corona discharge, ultraviolet irradiation (eg, excimer light irradiation), and the like, and these methods may be used alone or in combination.
  • the blood glucose meter 10 has a housing 40 that constitutes its appearance.
  • the housing 40 includes a box body portion 44 that is sized to be easily gripped by the user and accommodates the controller 42 of the blood glucose meter 10 therein, and a box body portion 44 that protrudes in the distal direction from one side (the distal end side) of the box body portion 44 and has a and a cylindrical photometry section 46 that accommodates the measurement section 14 of the optical system.
  • a power button 48 , an operation button 50 and a display 52 are provided on the upper surface of the box portion 44 , and an eject lever 54 is provided on the upper surface of the photometry portion 46 .
  • the power button 48 switches between activation and deactivation of the blood glucose meter 10 under user's operation.
  • the operation button 50 functions as an operation unit for measuring and displaying the blood glucose level, switching display of measurement results (including past measurement results), etc., based on the user's operation in the activated blood glucose meter 10 . do.
  • the display 52 is composed of a liquid crystal, an organic EL, or the like, and displays information provided to the user during the measurement operation, such as measurement result display and error display.
  • the ejection lever 54 is provided movably in the distal and proximal directions, unlocks an ejection pin (not shown) provided in the photometry unit 46, and enables the ejection pin to advance in the distal direction.
  • the photometry part 46 of the device main body 16 extends long in the tip direction from the box part 44 in order to press the tip against the user's finger or the like.
  • the photometry section 46 is provided with a sensor mounting section 60 having an insertion hole 58 and a measurement section 14 for optically detecting glucose (blood sugar) in the blood.
  • the sensor mounting portion 60 is made of a material having high hardness (rigidity) (for example, stainless steel), and has a flange portion 60a protruding outward from the distal end side, and is formed in a cylindrical shape having a predetermined length in the axial direction. .
  • the sensor mounting portion 60 is positioned and fixed over the tip surface and the axial center portion (central portion) of the photometry portion 46 made of a resin material. As shown in FIG. 4A, a fixing wall 46a is formed on the inner surface of the photometry section 46 so as to firmly fix the sensor mounting section 60 thereon.
  • Materials constituting the sensor mounting portion 60 include, for example, metals such as stainless steel and titanium, aluminum treated with anodized aluminum, liquid crystal polymers, plastics with added fillers such as glass and mica, nickel-plated surfaces with hardened films, and the like. Materials such as plastics, carbon fibers, fine ceramics, etc., which are hard, do not easily change in dimension, are resistant to wear even when the sensor for measurement is repeatedly inserted and removed, and can be processed with high dimensional accuracy. Among these materials, if a metal material is used, the insertion hole 58 can be easily formed with high dimensional accuracy when the sensor mounting portion 60 is manufactured (injection molding, press molding, or the like). Note that the device main body 16 may integrally form the sensor mounting section 60 by forming the photometry section 46 itself from a hard material (for example, a metal material).
  • An insertion hole 58 is provided in the axial center portion of the sensor mounting portion 60 by being surrounded by the wall portion 62 of the sensor mounting portion 60 .
  • the insertion hole 58 is formed in a rectangular cross-section that is long in the insertion direction (B direction) and short in the horizontal width direction (A direction).
  • the insertion hole 58 has a predetermined depth from the distal end surface toward the inner portion (in the proximal direction) in a state where the sensor mounting portion 60 is fixed to the photometry portion 46 .
  • An insertion opening 58a is formed on the distal end side of the sensor mounting portion 60 so as to continue to the insertion hole 58 and to communicate with the outside.
  • the dimension of the insertion opening 58a in the direction of insertion (direction B) matches the dimension of the short side 24 of the measuring sensor 12 (length in direction A).
  • the dimension of the insertion opening 58a in the lateral width direction that is, the interval between the pair of wall portions 62 forming the side surfaces of the insertion hole 58 is the thickness of the measuring sensor 12 in the stacking direction (FIG. 4A Tall in).
  • the sensor mounting portion 60 forms a pair of element housing spaces 64 in cooperation with the fixed wall 46a of the photometry portion 46 at a midway position along which the insertion hole 58 (the measurement hole portion 59) extends.
  • a pair of element housing spaces 64 are part of the measurement section 14 and are provided at opposite positions with the insertion hole 58 interposed therebetween. 59.
  • the measurement unit 14 includes a light emitting unit 70 by accommodating a light emitting element 68 in one element accommodating space 64 , and a light receiving unit 74 by accommodating a light receiving element 72 in the other element accommodating space 64 .
  • the light guide portion 66 of the sensor mounting portion 60 is formed into a circular hole having an appropriate diameter, thereby serving as a so-called aperture.
  • the light-emitting element 68 of the light-emitting unit 70 includes a first light-emitting element 68a that irradiates the measurement sensor 12 with measurement light having a first wavelength, and a measurement light that has a second wavelength different from the first wavelength. and a second light emitting element 68b that irradiates the sensor 12 (illustration is omitted in FIG. 2).
  • the first light-emitting element 68 a and the second light-emitting element 68 b are arranged side by side at a position facing the light guide section 66 of the element housing space 64 .
  • the light emitting elements 68 may be composed of light emitting diodes (LEDs).
  • the first wavelength is a wavelength for detecting the color density of the reagent 26 corresponding to the amount of blood sugar, and is, for example, 600 nm to 680 nm.
  • the second wavelength is a wavelength for detecting red blood cell concentration in blood, and is, for example, 510 nm to 540 nm.
  • the controller 42 in the box 44 supplies drive currents to cause the first and second light emitting elements 68a and 68b to emit light at predetermined timings.
  • the blood glucose level obtained from the color concentration is corrected using the hematocrit value obtained from the red blood cell concentration to determine the blood glucose level. It should be noted that noise caused by blood cells may be corrected by measuring at another measurement wavelength.
  • the light receiving section 74 is configured by arranging one light receiving element 72 at a position facing the light guide section 66 in the element housing space 64 .
  • the light receiving section 74 receives the transmitted light from the measurement sensor 12, and may be composed of, for example, a photodiode (PD).
  • PD photodiode
  • an eject pin 56 (eject portion) connected to the eject lever 54 is provided at the bottom (base end surface) of the insertion hole 58 .
  • the eject pin 56 includes a rod portion 56a extending along the axial direction of the photometric portion 46, and a receiving portion 56b having a large diameter radially outward at the tip portion of the rod portion 56a.
  • the base end side 24b of the measuring sensor 12 inserted into the insertion hole 58 contacts the receiving portion 56b.
  • a coil spring 76 surrounding the eject pin 56 in a non-contact manner is provided between the bottom of the insertion hole 58 and the receiving portion 56b of the eject pin 56. As shown in FIG. The coil spring 76 elastically supports the receiving portion 56 b of the eject pin 56 .
  • the measurement target portion 28 of the measurement sensor 12 is arranged at a position overlapping the light guide portion 66 as shown in FIG. 4B.
  • the eject pin 56 is displaced in the proximal direction by pushing the receiving portion 56 b as the user inserts the measurement sensor 12 , and is locked (fixed) by a locking mechanism (not shown) provided inside the housing 40 .
  • the coil spring 76 elastically contracts according to the displacement of the receiving portion 56b.
  • the locking mechanism is unlocked and the elastic restoring force of the coil spring 76 causes the eject pin 56 to slide in the distal direction.
  • the measuring sensor 12 is pushed out by the eject pin 56 and removed from the insertion hole 58 .
  • control unit 42 of the device main body 16 is configured by, for example, a control circuit having a calculation unit, a storage unit, and an input/output unit (not shown).
  • a well-known computer can be applied to this control unit 42 .
  • the control unit 42 drives and controls the measurement unit 14 to detect and calculate glucose in the blood under the user's operation of the operation button 50 , and displays the calculated blood glucose level on the display 52 .
  • the control unit 42 based on the Beer-Lambert law shown in the following equation (A): Calculate the measurement result.
  • l0 is the intensity of light before entering the whole blood sample
  • l1 is the intensity of light after it is emitted from the whole blood sample
  • ⁇ is the extinction coefficient
  • L is the distance through which the measurement light passes. (cell length).
  • hydrazone compound 1 Disodium 4-Formylbenzene-1,3-disulfonate (manufactured by Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.) 1.59 g and (6-methoxybenzothiazole-2) 1.0 g of 2-Hydrazino-6-methoxy-1,3-benzothiazole (manufactured by Santa Cruz Biotechnology) was suspended in 60 mL of RO water. This suspension was heated and stirred in a water bath at 60° C. for 2 hours under the acidity of acetic acid. After completion of heating and stirring, the solvent was removed. After washing the residue with isopropanol, the precipitate was filtered off. The precipitate was dried in a fume hood to obtain hydrazone compound 1.
  • the solvent of the collected fraction was removed, 15 mL of methanol, 250 ⁇ L of 9.6N HCl, and 5 mL of 15% ethyl nitrite (CH 3 CH 2 NO 2 )-ethanol solution were added to the obtained solid component, and the mixture was kept at room temperature ( 25° C.) The mixture was stirred in the dark.
  • Test strip assembly First layer: 100 ⁇ m PET film (no reagent), second layer: 45 ⁇ m space layer (double-sided tape), third layer: 188 ⁇ m PET film (dry reagent), a test paper was assembled.
  • Evaluation method 1 transmittance measurement2. The transmittance was measured by transmission spectroscopy (900 nm) using the test paper assembled in . Further, each dried reagent was image-observed using a shape measuring machine (Keyence Corporation, VR-3200). The results are shown in Table 2 below. Moreover, the result of image observation is shown to FIG. 6A.
  • the dry reagents 1 and 2 coated with the coating liquids 1 and 2 had a transmittance of more than 61% and were transparent in appearance, whereas the dry reagent 3 coated with the coating liquid 3 was opaque. Met. From the above results, it was found that the addition of sucralose yielded a highly transparent dried reagent and made it possible to make the dried reagent amorphous.
  • the transmittance of the dry reagent having a thickness of 3 to 14 ⁇ m is preferably 68 to 74%.
  • the thickness of the dried reagent means that after drying the applied reagent solution, the thickness from the surface of the PET film to the surface of the dried reagent near the center of the application area is measured with a shape measuring machine (Keyence Corporation, LS -1100).
  • ⁇ Test Example 2 Color development reaction evaluation>
  • a blood sample plasma 400 mg/dL
  • Absorbance at 605 nm was measured using a fiber spectrophotometer for 15 seconds after the blood sample reached the reagent zone.
  • FIG. 6A shows a reagent image after color development.
  • dry reagents 1 and 2 containing sucralose show a high color development rate. Therefore, it can be seen that the addition of sucralose speeds up the detection reaction. As seen above, this is thought to be based on the fact that the addition of sucralose enabled clarification (amorphization) and improved the dissolution rate of whole blood in the dry reagent.
  • Evaluation Method 1 Contact Angle The contact angle was measured in the same manner as in Test Example 1. The results are also shown in Table 3 below.
  • Evaluation method 2 Transmittance was measured in the same manner as in Test Example 1. The results are also shown in Table 3 below. The transmittance of the sensor to which no reagent was applied was 76%.
  • the contact angle with water is preferably less than 40°, more preferably 23-29°.
  • Test Solution A test solution having the composition shown in Table 4-1 below was prepared.
  • test solutions 16 to 20 with added sugar alcohol, test solution 22 with trehalose, and test solution 23 with sucrose did not cause false color development after 3 hours.
  • Test Liquid 21 to which disodium succinate, which is not a sugar alcohol, was added a white precipitate was formed immediately after production.
  • a blood glucose meter sensor (blood glucose measurement sensor) shown in FIG. 5 was produced as follows. First, on a polyethylene terephthalate (PET) film (manufacturer name: Toray Industries, Inc., product name: Lumirror T60, thickness 188 ⁇ m, 8 mm ⁇ 80 mm) placed on a stage (“reagent coating surface 3” in FIG. 5A) side), 3.15 ⁇ L of each of the prepared coating solutions 1, 7, 14, and 24 to 33 is inkjet (Labojet-500Bio manufactured by Microjet) using a patterning accuracy within ⁇ 5 to 8 ⁇ m and 1 pL to 1000 pL. and dried at 25° C.
  • PET polyethylene terephthalate
  • a film piece (“film piece 2” in FIG. 5A) was prepared by cutting the reagent layer-attached PET into a predetermined size (8 mm ⁇ 1.6 mm). Each film piece was coated with 0.063 ⁇ L of the coating liquid.
  • the reagent mass (0.063 ⁇ L as coating liquid) per blood glucose level measurement sensor is determined by the composition (mass) of each reagent component added when preparing the coating liquid and the final volume of the prepared reagent liquid (731.3 ⁇ L ) and the number of film pieces 2 made from PET with a reagent layer.
  • each piece of film coated with coating liquid 1 contains 2.4 ⁇ g of tetrazolium salt 1 (color-developing dye), 0.7 ⁇ g of zinc acetate (transition metal compound), 0.3 ⁇ g of sodium nitrite, 2. 9 ⁇ g sucralose, 0.2 ⁇ g sorbitol (sugar alcohol), 0.7 ⁇ g FAD-GDH (oxidoreductase), 2.6 ⁇ g Nonidet (hemolytic agent) in the form of dry reagent.
  • tetrazolium salt 1 color-developing dye
  • zinc acetate transition metal compound
  • sodium nitrite 2. 9 ⁇ g sucralose, 0.2 ⁇ g sorbitol (sugar alcohol), 0.7 ⁇ g FAD-GDH (oxidoreductase)
  • Nonidet hemolytic agent
  • a double-sided tape (manufacturer name: Nitto Denko, trade name: 5605BN, thickness: 50 ⁇ m) (“Double-sided tape 4” in FIG. 5A) was provided as a spacer and an adhesive portion (sensor base).
  • the film piece (“film piece 2” in FIG. 5A) prepared above is placed so that the reagent layer (“reagent coating surface 3” in FIG. 5A) faces the sensor base and the flow path (“Flow channel 6” in FIG. 5A).
  • the film piece it was pressed so that the film piece was embedded in the double-sided tape by a predetermined amount.
  • a double-sided tape manufactured by 3M Company, trade name: polyester film substrate, double-sided adhesive tape 9965, thickness: 80 ⁇ m
  • a film piece (“polyester film 7” in FIG. 5A) was covered to prepare a blood glucose meter sensor (blood glucose level measuring sensor).
  • the manufactured blood glucose meter sensor (blood glucose level measurement sensor) has a flow path portion and a measurement portion (reagent portion).
  • the channel portion in FIG. 5B the channel length (“L1” in FIG. 5B) is 9 mm
  • the width (“W” in FIG. 5B) is 1.1 mm
  • the thickness ( "t1") was 0.13 mm.
  • the reagent length (“L2” in FIG. 5B) is 1.6 mm
  • the width (“W” in FIG. 5B) is 1.1 mm
  • the thickness (“L2” in FIG. 5B) is 1.1 mm.
  • "t2") was 0.05 mm.
  • the length L1 in the direction orthogonal to the sensor thickness direction (channel longitudinal direction) in the channel portion is not particularly limited and can be appropriately selected depending on the purpose, but is preferably 5 to 10 mm. .
  • the length L1 is long, it is advantageous in that it is easy to attach (insert) to the component measuring device and that disturbance light entering the optical measuring section is reduced.
  • a short length L1 is advantageous in that the amount of specimen can be reduced. Therefore, the upper and lower limits of the length L1 are determined in consideration of the ease of attachment (insertion) to the component measuring device, the influence of ambient light, and the balance of the sample amount.
  • the length L2 of the flow channel in the reagent part in the direction orthogonal to the sensor thickness direction is not particularly limited and can be appropriately selected depending on the purpose, but is preferably 1 to 4 mm. .
  • the longer the length L2 the larger the area of the irradiation spot can be obtained in the longitudinal direction, which is advantageous in that accurate measurement can be performed. Become. Therefore, the upper limit and lower limit of the length L2 are determined in consideration of the balance between the measurement accuracy and the sample amount.
  • Evaluation method-2 (degradation test) After the prepared blood glucose level measuring sensor was placed in an aluminum package, it was stored in a constant temperature and humidity chamber (manufactured by Yamato Scientific Co., Ltd.) at 60°C ⁇ 1°C. After 3 days had passed, the blood glucose level measuring sensor was taken out from the thermo-hygrostat, and false coloring and coloring of the dried reagent were evaluated. The evaluation was made by measuring the absorbance at a wavelength of 605 nm and evaluating the increase in absorbance relative to the blood glucose level measuring sensor (blank value) stored at 25°C for 3 days.
  • the dry reagent 14 using the coating liquid 14 and the dry reagent 7 using the coating liquid 7 By comparing the dry reagent 14 using the coating liquid 14 and the dry reagent 7 using the coating liquid 7, it can be seen that the addition of the sugar alcohol improves the blood spreadability. This is believed to be due to the improved wettability of whole blood, as confirmed above. Further, by comparing the coating liquids 28 and 29, the dry reagent 28 using the coating liquid 28 having a sugar alcohol ratio to sucralose of 14% or more has better blood spreadability than the dry reagent 29 using the coating liquid 29. It turns out that it is good.
  • FIG. 7 is a graph showing the relationship between the glucose concentration and the absorbance at the maximum absorption wavelength (605 nm) of the chelate compounds of formazan and Ni 2+ when each sample was measured with a blood glucose level measuring sensor.
  • the absorbance and glucose concentration exhibit a linear relationship (proportional relationship). It is thus contemplated that the sensors of the present disclosure can be used to accurately measure blood glucose levels based on absorbance.
  • a hemolyzed sample of whole blood is applied to the reagent (blood glucose level measurement sensor) of the present disclosure, the amount of color development is measured, and a calibration curve is prepared based on the amount of color development. Concentrations of biological components can be calculated accurately.
  • reagent ribbon 1 reagent ribbon, 2 film strips, 3 reagent application surface, 4 double-sided tape, 5 polyester film, 6 channels, 7 polyester film, 10 blood glucose meter, 12 measuring sensor, 14 measuring unit, 16 device body, 18 sensor body, 20 cavities, 20a tip opening, 20b proximal mouth, 22 long side, 22a upper long side, 22b lower long side, 24 short side, 24a tip side, 24b proximal side, 26 reagents, 28 part to be measured, 30 plate pieces, 32 spacers, 40 housing, 42 control unit, 44 box body, 46 photometric unit, 48 power button, 50 operation buttons, 52 display, 54 eject lever, 56 eject pin, 56a bar, 56b receiving part, 58 insertion hole, 58a insertion opening; 59 measurement hole, 60 sensor mounting part, 60a flange portion, 62 wall, 64 element housing space, 66 light guide, 68 light-emitting element, 70 light emitting unit, 72 light receiving element, 74 light receiving unit, 76 coil spring.

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Abstract

溶血した全血試料に対しても迅速に全血成分濃度を測定できる手段を提供する。発色色素、酸化還元酵素、溶血剤、および低分子の塩化合物を含み、さらに、スクラロースを含む、生体成分濃度測定試薬。

Description

生体成分濃度測定試薬、測定方法およびセンサ
　本発明は、生体成分濃度測定試薬、生体成分濃度の測定方法およびセンサに関する。特に、本発明は、全血試料に含まれる、グルコース等の分析対象物の濃度を測定するために使用される生体成分濃度測定試薬、生体成分濃度の測定方法およびセンサに関する。
　従来から、臨床化学検査において、血液中に含まれる分析対象物（例えば、グルコース）を電気化学的手段や光学的手段（比色法）により測定する技術が知られている。
　血液中から分析対象物を測定する際に、血漿成分を分離することは煩雑であり、全血試料のまま十分な感度で分析対象物を定量できる発色試薬が求められている。しかしながら、全血試料を用いて測定した場合、ヘモグロビンが試薬中の発色色素を還元することで測定への干渉が発生する場合がある。このため、例えば、特開２０００－０９３１９８号公報（対応　米国特許第５９０２７３１号明細書）では、試薬に亜硝酸塩を含有させている。
　上記のような生体成分測定試薬は、センサなどに組み込むために試薬液を塗布したのちに乾燥させた固体状の試薬（乾燥試薬）として用いられることが多い。
　しかしながら、乾燥試薬が亜硝酸塩のような低分子の塩化合物を含む場合、検出反応の迅速化の点で課題があった。
　したがって、本発明は、上記事情を鑑みてなされたものであり、溶血した全血試料に対しても迅速に生体成分濃度を測定できる手段を提供することを目的とする。
　本発明は、上記課題を解決すべく、鋭意研究を行った結果、低分子の塩化合物存在下であってもスクラロースを組み合わせて用いることで、上記課題を解決できることを見出し、本発明を完成させた。
　すなわち、上記目的は、以下によって達成できる。
　１．発色色素、酸化還元酵素、溶血剤、および低分子の塩化合物を含み、さらに、スクラロースを含む、生体成分濃度測定試薬。
　２．前記塩化合物が遷移金属塩および無機塩からなる群から選択される少なくとも１種である、１．に記載の生体成分濃度測定試薬。
　３．前記無機塩が亜硝酸塩である、２．に記載の生体成分濃度測定試薬。
　４．前記低分子の塩化合物に対する前記スクラロースの含有質量比が、１～１０である、１．～３．のいずれか１に記載の生体成分濃度測定試薬。
　５．さらに糖アルコールを含む、１．～４．のいずれか１に記載の生体成分濃度測定試薬。
　６．前記糖アルコールは、ラクチトール、エリスリトール、ソルビトール、キシリトール、およびマンニトールからなる群から選択される少なくとも１種である、５．に記載の生体成分濃度測定試薬。
　７．前記スクラロースに対する前記糖アルコールのモル比率が１０％以上である、５．または６．に記載の生体成分濃度測定試薬。
　８．全血試料を、１．～７．のいずれか１に記載の生体成分濃度測定試薬と接触させて、発色量を測定し、当該発色量に基づいて前記全血試料中の生体成分の濃度を定量することを有する、生体成分濃度の測定方法。
　９．前記生体成分が、グルコース、コレステロール、中性脂肪、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸（ＮＡＤＰＨ）、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤＨ）、または尿酸である、８．に記載の方法。
　１０．反応部を有する、全血試料中の生体成分濃度を測定するためのセンサであって、前記反応部は、１．～７．のいずれか１に記載の生体成分濃度測定試薬を含む、センサ。
図１は、本形態に係る測定用センサが装着された血糖計（成分測定装置）を概略的に示す平面図である。 図２は、図１のセンサと装置本体の測光部を拡大して示す斜視図である。 図３は、図１の測定用センサを示す上面視図である。 図４Ａは、図１の測定用センサと装置本体の装着動作を示す第１平面図である。 図４Ｂは、図４Ａに続く装着動作を示す第２平面断面図である。 図５Ａは、実施例で用いた血糖計センサの模式図である。 図５Ｂは、図５Ａの血糖計センサの内面の長さ、幅、厚みを説明するための図である。 図６Ａは、乾燥試薬の画像および発色画像を示す写真である。 図６Ｂは、時間経過による発色吸光度の変化を示すグラフである。 図７は、テトラゾリウム塩１を適用した血糖計センサ（血糖値測定センサ）にグルコース水溶液を作用させた際のグルコース濃度と、ホルマザンおよびＺｎ２＋のキレート化合物の吸光度との関係を示すグラフである。
　以下、本開示の実施の形態を説明する。なお、本開示は、以下の実施の形態のみには限定されない。
　本開示の第１の態様は、発色色素、酸化還元酵素、溶血剤、および低分子の塩化合物を含み、さらに、スクラロースを含む、生体成分濃度測定試薬である。
　本開示の第２の態様は、全血試料を本開示の第１の態様に係る生体成分濃度測定試薬と接触させて、発色量を測定し、当該発色量に基づいて前記全血試料中の生体成分の濃度を定量することを有する、生体成分濃度の測定方法である。
　本開示の第３の態様は、反応部を有する、全血試料中の生体成分濃度を測定するためのセンサであって、前記反応部は、本開示の第１の態様に係る生体成分濃度測定試薬を含む、センサである。
　本開示によれば、溶血した全血試料に対して（すなわち、血球および血漿双方に含まれる）生体成分（分析対象物）の濃度を迅速に測定できる。
　本明細書において、生体成分濃度測定試薬を、単に「試薬」または「本開示の試薬」とも称する。
　以下、本発明の実施の形態を説明する。なお、本発明は、以下の実施の形態のみには限定されない。また、図面の寸法比率は、説明の都合上誇張されており、実際の比率とは異なる場合がある。
　また、本明細書において、範囲を示す「Ｘ～Ｙ」は、ＸおよびＹを含み、「Ｘ以上Ｙ以下」を意味する。「Ｍ」は、ｍｏｌ／Ｌを意味する。また、特記しない限り、操作および物性等の測定は室温（２０～２５℃）／相対湿度４０～５０％ＲＨの条件で行う。
　＜生体成分濃度測定試薬＞
　本開示の第１の態様は、発色色素、酸化還元酵素、溶血剤、および低分子の塩化合物を含み、さらに、スクラロースを含む、生体成分濃度測定試薬である。以下、試薬を構成する各成分について詳細に説明する。
　（低分子の塩化合物）
　低分子とは、具体的には分子量が１０００未満の化合物を指し、好ましくは分子量が５００未満、より好ましくは３００未満である。低分子の塩化合物の分子量の下限は特に限定されないが、通常３０以上となる。なお、低分子の塩化合物に発色色素は含まない。また、塩化合物が水和物の場合には、水を除外した、化合物自体を塩化合物とする。すなわち、分子量の計算の際には、水の分子量を除外した分子量を塩化合物の分子量とし、塩化合物の含有量は、水の含有量を除外した含有量を塩化合物の含有量とする。
　低分子の塩化合物の好適な一態様は、遷移金属塩および無機塩からなる群から選択される少なくとも１種である。低分子の塩化合物は、１種単独で用いても２種以上併用してもよい。
　本開示の試薬が下記式（１）のテトラゾリウム塩を発色色素として含む場合には、当該テトラゾリウム塩の還元反応により生成したホルマザンは、長波長側に極大吸収波長を有する。特に、下記式（１）のテトラゾリウム塩は、遷移金属イオンとキレート化合物を生成することにより、極大吸収波長をさらに長波長側にシフトすることができる。このため、本開示の試薬は、遷移金属塩を含むことが好ましい。すなわち、本発明の好ましい形態では、試薬は、さらに遷移金属塩を含む。本発明のより好ましい形態では、生体成分濃度測定試薬は、発色色素としてテトラゾリウム塩（特に下記式（１）のテトラゾリウム塩）を含み、さらに遷移金属塩を含む。本発明のさらにより好ましい形態では、生体成分濃度測定試薬は、発色色素としてテトラゾリウム塩（特に下記式（１）のテトラゾリウム塩）を含み、さらに酸化還元酵素および遷移金属塩を含む。当該形態によると、全血試料中の生体成分濃度を測定する場合であっても、ホルマザンが血色素の主な吸収帯と重ならない波長域（６００ｎｍ以上）に極大吸収波長を有する。このため、生体試料、特に全血試料に対しても、生体成分濃度の測定感度をさらに向上できる。
　遷移金属塩（遷移金属化合物とも称する）としては、特に制限されない。具体的には、ニッケルイオン（Ｎｉ２＋）、コバルトイオン（Ｃｏ２＋）、亜鉛イオン（Ｚｎ２＋）、銅イオン（Ｃｕ２＋）などの遷移金属イオンを生成できる化合物が使用できる。このようなイオンであれば、ホルマザンの極大吸収波長をより長波長側にシフトできる。これらのうち、遷移金属塩としては、ニッケルイオンまたは、亜鉛イオンを生成できる化合物が好ましい。特に、亜鉛イオンは、テトラゾリウム塩と反応した場合に、時間依存的な構造変化が起きにくいため、より好ましい。このため、亜鉛イオンを有する化合物を遷移金属化合物として含む試薬は、経時的な構造変化による波長特性変化の影響を受けにくいため、反応中および反応完了後において発色特性が変化しにくい。すなわち、本発明の好ましい形態によると、遷移金属塩は、亜鉛塩である。また、上記遷移金属イオンを生成する化合物は特に制限されないが、水性液体（例えば、水、緩衝液、血液、体液）中でイオンを生成するものであることが好ましい。例えば、上記遷移金属の、塩化物、臭化物、硫酸塩、酢酸塩などの遷移金属塩などが挙げられる。これらのうち、塩化ニッケル、酢酸ニッケル、塩化亜鉛、酢酸亜鉛が好ましく、塩化ニッケル、酢酸亜鉛がより好ましく、酢酸亜鉛が特に好ましい。上記遷移金属塩は、１種を単独で使用しても、または２種以上を併用してもよい。また、本形態において、遷移金属塩の含有量は、特に制限されないが、例えば、発色色素がテトラゾリウム塩である場合には、ホルマザン化合物の所望の極大吸収波長に応じて適切に選択できる。具体的には、遷移金属塩の含有量は、遷移金属（遷移金属イオン）が、テトラゾリウム塩　１モルに対して、好ましくは０．１～１０モル、より好ましくは０．５～４モル、特に好ましくは１モルを超えて３モル未満となるような量である。または、本形態において、遷移金属塩の含有量（固形分換算）は、試薬全量（固形分）　１００質量部に対して、好ましくは５～３０質量部、より好ましくは５～１５質量部、特に好ましくは５質量部を超えて１２質量部未満となるような量である。このような量であれば、ホルマザン化合物の極大吸収波長を所望の波長域にまでシフトできる。また、このような量であれば、経時的な構造変化による波長特性の変化をより抑制できる。上記遷移金属塩の含有量は、試薬を調製する際の遷移金属塩の仕込み量の割合と実質的に同等である。また、試薬が２種以上の遷移金属塩を含む場合には、上記遷移金属塩の含有量は配合する遷移金属塩の合計量を意図する。
　無機塩としては、塩酸、硝酸、亜硝酸、硫酸、亜硫酸、チオ硫酸、ホスホン酸、リン酸、リンモリブデン酸、リンタングステン酸、バナジン酸等の無機酸の塩が挙げられる。これらの酸の塩の例としては、リチウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、アンモニウム塩などの無機塩が挙げられる。無機塩としては、具体的には、硝酸ナトリウム、硝酸カリウム、硝酸アンモニウム、硝酸マグネシウム、硝酸カルシウム、亜硝酸ナトリウム、亜硝酸カリウム、亜硝酸アンモニウム、硫酸ナトリウム、硫酸カリウム、硫酸アンモニウム、硫酸カルシウム、硫酸マグネシウム、亜硫酸ナトリウム、亜硫酸カリウム、亜硫酸カルシウム、亜硫酸マグネシウム、チオ硫酸カリウム、硫酸リチウム、硫酸マグネシウム、チオ硫酸ナトリウム、亜硫酸水素ナトリウム、硫酸水素ナトリウム、硫酸水素カリウム、グルタル酸二ナトリウム、フッ化リチウム、フッ化ナトリウム、フッ化カリウム、フッ化カルシウム、フッ化アンモニウム、塩化カリウム、塩化ナトリウム、塩化アンモニウム、塩化カルシウム、臭化カリウム、臭化ナトリウム、臭化アンモニウム、臭化カルシウム、ヨウ化ナトリウム、ヨウ化カリウム、三ヨウ化カリウム、ヨウ化カルシウム、リン酸三リチウム、リン酸三カリウム、リン酸三ナトリウム、リン酸三アンモニウム、リン酸一水素ナトリウム、リン酸一水素カリウム、リン酸二水素ナトリウム、リン酸二水素カリウム、リン酸二水素アンモニウム等が挙げられる。
　無機塩の好適な一態様は、亜硝酸塩である。溶血した全血試料を対象とする際、赤血球からヘモグロビン（Ｆｅ（ＩＩ））が遊離する。例えば、発色色素としてテトラゾリウム塩を使用する場合、ヘモグロビンがテトラゾリウム塩を非酵素的に還元することにより、着色したホルマザンが生成することで偽発色が発生する。しかし、本開示の試薬に含まれうる亜硝酸塩は、ヘモグロビン中の核をなす２価の鉄イオン（Ｆｅ２＋）を３価の鉄イオン（Ｆｅ３＋）に酸化するメト化剤として作用する。このため、溶血した全血試料を測定対象としても、亜硝酸が赤血球から遊離したヘモグロビンに対して発色色素より先に電子を奪い、発色色素の非酵素的な還元（偽発色）を抑制する。
　亜硝酸塩としては、例えば、亜硝酸ナトリウム、亜硝酸カリウム、亜硝酸カルシウム、亜硝酸アンモニウムなどが使用できる。本発明による効果のさらなる向上、安定性や汎用性の高さの点から、亜硝酸ナトリウム、亜硝酸カリウムが好ましく、亜硝酸ナトリウムがより好ましい。亜硝酸塩は、１種を単独で使用しても、または２種以上を組み合わせて使用してもよい。
　試薬における亜硝酸塩の含有量は、例えば、試薬全量（固形分）１００質量部に対して、０．８～１０．０質量部であり、好ましくは１．５～７．５質量部であり、より好ましくは２．０質量部以上５．０質量部未満である。このような量であれば、偽発色をさらに効果的に抑制できる。ゆえに、溶血した全血試料に対しても分析対象物濃度（例えば、グルコース濃度）をより高い精度で測定できる。また、全血試料における分析対象物濃度（例えば、グルコース濃度）をより高い感度で測定できる。上記亜硝酸塩の含有量は、試薬を調製する際の亜硝酸塩の仕込み量の割合と実質的に同等である。また、試薬が２種以上の亜硝酸塩を含む場合には、上記亜硝酸塩の含有量は配合する亜硝酸塩の合計量を意図する。
　また、亜硝酸塩の含有量は、発色色素　１モルに対して、５０モル以下であることが好ましい。すなわち、本発明の好ましい形態では、亜硝酸塩は、発色色素　１モルに対して、５０モル以下の割合で含まれる。発色色素１モルに対する亜硝酸塩の含有量が、５０モルを超えると、亜硝酸塩が発色色素と競合するため、発色色素と酵素との反応が阻害される（発色阻害）。特に、発色色素がテトラゾリウム塩であり、試薬が酸化還元酵素をさらに含む場合には、テトラゾリウム塩から生成するホルマザンから亜硝酸塩が電子を奪い、被測定物に応じた発色量が得られなくなる。換言すれば、測定精度が低下してしまう可能性がある。亜硝酸塩の含有量は、亜硝酸イオン（ＮＯ２ －）に換算した場合に、発色色素　１モルに対して、より好ましくは１０モル未満、さらに好ましくは５モル未満、特に好ましくは３．０モル未満である。また、亜硝酸塩の含有量は、発色色素　１モルに対して、好ましくは０．２モル以上、より好ましくは０．５モルを超え、特に好ましくは１．０モルを超える。このような範囲であれば、非酵素的な発色や発色阻害をさらに効果的に抑制できる。また、被測定物の測定のための発色色素による十分な発色量を確保できる。特に、発色色素がテトラゾリウム塩であり、試薬が酸化還元酵素（例えば、グルコースデヒドロゲナーゼ）をさらに含む場合には、発色色素が酸化還元酵素に対して亜硝酸塩より優先して電子を奪えるため、亜硝酸（塩）による発色阻害を抑制する（発色反応をより効率的に進行できる）。ゆえに、溶血した全血試料に対しても分析対象物濃度をより高い精度で測定できる。すなわち、本開示の好ましい形態によると、亜硝酸またはその塩は、発色色素　１モルに対して、０．２モル以上１０モル未満の割合で含まれる。本開示のより好ましい形態によると、亜硝酸塩は、発色色素　１モルに対して、０．５モルを超え５モル未満の割合で含まれる。本開示の特に好ましい形態によると、亜硝酸またはその塩は、発色色素　１モルに対して、１．０モルを超え３．０モル未満の割合で含まれる。上記亜硝酸塩の含有量は、試薬を調製する際の発色色素の合計仕込み量（モル）に対する亜硝酸塩の合計仕込み量（モル）の割合と実質的に同等である。また、亜硝酸塩の含有量は、試薬を調製する際の、亜硝酸塩の合計仕込み量（モル）を発色色素の合計仕込み量（モル）で除した値を、小数点第２位まで求め、四捨五入して小数点第１位まで求めた値を採用する。
　本発明の好ましい一態様は、本開示の試薬が、遷移金属塩および亜硝酸塩の双方を含む。
　（二糖類またはその誘導体）
　本開示の試薬は、二糖類またはその誘導体を含む。これにより、亜硝酸塩や遷移金属塩などの低分子の塩化合物の析出を抑え、試薬の透明化を図ることができる。より具体的には、塩化合物の析出を抑制することで乾燥試薬を非晶質とすることができる。二糖類またはその誘導体を含まない場合と比べて、血液に対する試薬の溶解を促進できる。ゆえに、塩化合物を含んだ場合であっても分析対象物（生体成分）濃度をより迅速に測定できる。
　本発明の好ましい形態では、生体成分濃度測定試薬は、発色色素としてテトラゾリウム塩（特に下記式（１）のテトラゾリウム塩）を含み、さらにスクラロース（１’，４，６’－トリクロロガラクトスクロース）、スクロース、トレハロースの少なくともいずれか１を含む。本発明の特に好ましい形態では、生体成分濃度測定試薬は、発色色素としてテトラゾリウム塩（特に式（１）のテトラゾリウム塩）を含み、さらにスクラロース、酸化還元酵素および遷移金属塩を含む。
　本開示の試薬において、二糖類またはその誘導体の含有量は、特に制限されないが、試薬の組成などに応じて適切に選択できる。具体的には、二糖類またはその誘導体の含有量は、試薬全量（固形分）　１００質量部に対して、好ましくは１０～５０質量部、より好ましくは１５～４５質量部、特に好ましくは１５質量部を超えて４０質量部未満となるような量である。このような量であれば、低分子の塩化合物の析出をさらに効果的に抑え、試薬を非晶質とできる。非晶質化された試薬は、透明性を有する。ゆえに、分析対象物（生体成分）濃度をさらにより迅速に測定できる。
　また、低分子の塩化合物に対する二糖類またはその誘導体の含有質量比が、１～１０であることが好ましく、１を超え、５以下であることがより好ましく、１．５～５であることがさらにより好ましい。このような含有質量比であれば、低分子の塩化合物の析出をさらに効果的に抑え、試薬の透明化をさらに効果的に図ることができる（偽発色をさらに抑制・防止できる）。ゆえに、分析対象物（生体成分）濃度をさらにより高精度で測定できる。また、低分子の塩化合物に対するスクラロースの含有質量比が、１～１０であることが好ましく、１を超え、５以下であることがより好ましく、１．５～５であることがさらにより好ましい。このような含有質量比であれば、低分子の塩化合物の析出をさらに効果的に抑え、試薬の透明化をさらに効果的に図ることができる（偽発色をさらに抑制・防止できる）。ゆえに、分析対象物（生体成分）濃度をさらにより高精度で測定できる。
　（糖アルコール）
　本開示の試薬は、糖アルコールを含むことが好ましい。これにより、濡れ性を向上できる。ゆえに、分析対象物（生体成分）が素早く反応部全体にいきわたる（展開性がよい）ため、分析対象物（生体成分）は反応部全体で反応できる。このため、分析対象物（生体成分）濃度をより高精度で測定できる。すなわち、本発明の好ましい形態では、生体成分濃度測定試薬は、さらに糖アルコールを含む。また、本発明のより好ましい形態では、生体成分濃度測定試薬は、発色色素としてテトラゾリウム塩（特に下記式（１）のテトラゾリウム塩）を含み、さらに糖アルコールを含む。本発明の特に好ましい形態では、生体成分濃度測定試薬は、発色色素としてテトラゾリウム塩（特に下記式（１）のテトラゾリウム塩）を含み、さらに糖アルコール、酸化還元酵素、遷移金属塩、無機塩および二糖類またはその誘導体を含む。さらに、本発明の特に好ましい形態では、生体成分濃度測定試薬は、発色色素としてテトラゾリウム塩（特に下記式（１）のテトラゾリウム塩）を含み、さらに糖アルコール、酸化還元酵素、遷移金属塩、無機塩およびスクラロースを含む。ここで、糖アルコールとしては、例えば、ラクチトール、エリスリトール、ソルビトール、キシリトール、マンニトール、マルチトールなどが挙げられる。上記糖アルコールは、１種を単独で使用しても、または２種以上を併用してもよい。これらのうち、発色色素の偽発色抑制などの観点から、ラクチトール、エリスリトール、ソルビトール、キシリトール、マンニトールが好ましく、濡れ性のさらなる向上などの観点から、エリスリトール、ソルビトール、キシリトール、マンニトールがより好ましく、ソルビトールが特に好ましい。本形態において、糖アルコールの含有量は、特に制限されないが、試薬の組成などに応じて適切に選択できる。具体的には、糖アルコールの含有量は、試薬全量（固形分）　１００質量部に対して、好ましくは０．１～１５質量部、より好ましくは０．５～１５質量部、特に好ましくは１質量部を超えて１０質量部未満となるような量である。このような量であれば、乾燥試薬の濡れ性をより効果的に向上できる。ゆえに、分析対象物（生体成分）は、より素早く乾燥試薬全体にいきわたる。このため、分析対象物（生体成分）は乾燥試薬全体とより確実に反応できるため、目的物質の濃度をさらに高精度で測定できる。なお、ここでいう糖アルコールにスクラロースは含まない。
　本開示の試薬が二糖類またはその誘導体（特にはスクラロース）および糖アルコールを含む場合の、二糖類またはその誘導体（特にはスクラロース）に対する糖アルコールのモル比率が１０％以上であることが好ましく、１４％以上であることがより好ましい。このような比率で含むことで、血液展開性が一層良好となる。また、偽発色性の観点からは、二糖類またはその誘導体（特にはスクラロース）に対する糖アルコールのモル比率が２００％以下であることが好ましく、１５０％以下であることがより好ましく、透明性の観点から、１００％以下であることがさらにより好ましく、高温劣化の観点からは、５０％以下であることがより好ましく、３０％以下であることが特に好ましい。二糖類またはその誘導体（特にはスクラロース）に対する糖アルコールのモル比率は、小数第一位まで求めた各モル濃度を用いて求めた値を採用する。
　（溶血剤）
　本開示の試薬は、溶血剤を含む。一般に血漿中のグルコース濃度を測定する場合には、赤血球量（ヘマトクリット値）を考慮する必要がある。通常、光学的な測定の場合、赤血球量は、赤血球中の血色素量で判断する。しかし、血色素量を光学的に正確に測定することは難しい。また、実際の赤血球量と血色素量が一致しないことがある。また、赤血球による光錯乱により、赤血球量の測定自体に特別な測定手法が必要な場合がある。これに対して、本開示の試薬は、赤血球を溶血させるので、特に分析対象物がグルコースである場合には、赤血球による光散乱の影響を考慮する必要がない。このため、より簡易な手法で、より正確な血色素量（ヘモグロビン値）を得ることができる。また、通常、赤血球内には、血漿中に含まれるのと同量程度の分析対象物（例えば、グルコース）が存在している。このため、本開示の試薬によれば、より簡便な方法で血色素量を補正することができ、血漿および血球（すなわち、全血試料）中の分析対象物（生体成分）（例えば、グルコース）の濃度を測定できる（すなわち、全血試料中の分析対象物濃度を把握できる）。また、全血から赤血球を分離する操作や装置（例えば、遠心分離、濾過、多孔質膜）を必要としない。血漿を分離する必要がないため、サンプル量が少なくて済む。
　溶血剤は、１種を単独で使用しても、または２種以上を組み合わせて使用してもよい。
　溶血剤としては、例えば、非イオン性界面活性剤、両性界面活性剤、アニオン性界面活性剤などが使用できる。酵素活性を阻害しないとの観点から、非イオン性界面活性剤が好ましい。
　非イオン性界面活性剤としては、赤血球膜の破壊性または水への溶解性などの観点から１１以上１５以下（より好ましくは、１２以上１４以下）のＨＬＢ値を有することが好ましい。このような非イオン性界面活性剤としては、オキシエチレン基の平均付加モル数が１以上１５０以下であり、かつアルキル基の炭素数が１以上１８以下であるポリオキシエチレンアルキルエーテル、ノニルフェニルポリエチレングリコールなどが挙げられる。このような非イオン性界面活性剤は、合成しても、または市販品を使用してもよい。市販品としては、ポリオキシエチレン（９）オクチルフェニルエーテル（オクチルフェノキシポリ（エチレンオキシ）エタノールまたはオクチルフェニル－ポリエチレングリコール）（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社製、ＮｏｎｉｄｅｔＴＭ　Ｐ－４０）、Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）　Ｘ－１００（ポリオキシエチレン（１０）オクチルフェニルエーテル）、Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）　Ｘ－１１４（ポリオキシエチレン（８）オクチルフェニルエーテル）等のポリオキシエチレンｐ－ｔ－オクチルフェニルエーテル（Ｔｒｉｔｏｎ系界面活性剤）；Ｔｗｅｅｎ（登録商標）　８５等のポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル；Ｄｏｄｅｃｙｌ－β－Ｄ－ｍａｌｔｏｓｅ；Ｏｃｔｙｌ－β－Ｄ－ｇｌｕｃｏｓｉｄｅ；Ｎｏｎｉｄｅｔ（登録商標）Ｐ－４０（オクチルフェノキシポリ(エチレンオキシ)エタノール、）及びＮｏｎｉｄｅｔ（登録商標）Ｐ－４０代替品；Ｔｅｒｇｉｔｏｌ（登録商標）　ＮＰ－１０　Ｓｕｒｆａｃｔａｎｔ（Ｎｏｎｙｌｐｈｅｎｏｌ　Ｅｔｈｏｘｙｌａｔｅ）；ＩＧＥＰＡＬ（登録商標）　ＣＡ－６３０（オクチルフェノキシポリ(エチレンオキシ)エタノール）；エマルゲン（登録商標）　１０８（ポリオキシエチレンラウリルエーテル）、エマルゲン（登録商標）　１０９Ｐ；Ｂｒｉｊ（登録商標）　９６ポリエチレングリコールモノオレイルエーテル（ｎ＝約２）などが使用できる。
　また、両性界面活性剤もまた、合成しても、または市販品を使用してもよい。市販品としては、ＣＨＡＰＳ（3-(3-cholamidepropyl)dimethylammonio-1-propanesulphonate）、塩化アルキルポリアミノエチルグリシン；ドデシル硫酸ナトリウムなどが使用できる。
　試薬における溶血剤の組成（含有量）は、サンプル量（全血量）に応じて適切に選択できる。試薬における溶血剤の組成（含有量）（固形分換算）は、例えば、１．０μＬの全血試料に対して１～１０容積％である。また、センサ形状にした場合の溶血剤の含有量は、試薬全量（固形分）に対して、１０～５０質量％であり、好ましくは２０～４０質量％である。このような量であれば、例えば、ヘマトクリット２０～７０％の全血試料を十分溶血できるセンサとすることができる。上記溶血剤の含有量は、試薬を調製する際の溶血剤の仕込み量の割合と実質的に同等である。また、試薬が２種以上の溶血剤を含む場合には、上記溶血剤の含有量は配合する溶血剤の合計量を意図する。
　（発色色素）
　本開示の試薬は、発色色素を含む。
　発色色素は、本発明による効果のさらなる向上の点から、テトラゾリウム塩であることが好ましく、２－ベンゾチアゾリル－３－（４－カルボキシ－２－メトキシフェニル）－５－［４－（２－スルホエチルカルバモイル）フェニル］－２Ｈ－テトラゾリウム(2-Benzothiazolyl-3-(4-carboxy-2-methoxyphenyl)-5-[4-(2-sulfoethylcarbamoyl)phenyl]-2H-tetrazolium)、国際公開第２０１８／０５１８２２号パンフレットに記載されるテトラゾリウム塩であることがより好ましく、国際公開第２０１８／０５１８２２号パンフレットに記載されるテトラゾリウム塩であることが特に好ましい。
　すなわち、本開示の好ましい形態によると、発色色素は、テトラゾリウム塩である。本開示のより好ましい形態によると、発色色素は、２－ベンゾチアゾリル－３－（４－カルボキシ－２－メトキシフェニル）－５－［４－（２－スルホエチルカルバモイル）フェニル］－２Ｈ－テトラゾリウムおよび下記式（１）で示されるテトラゾリウム塩からなる群より選択される少なくとも一種である。本開示の特に好ましい形態によると、発色色素は、下記式（１）で示されるテトラゾリウム塩である。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000001
　上記式（１）において、Ｒ１は、水素原子、水酸基、メトキシ基、およびエトキシ基からなる群から選択されるいずれか一つであり、Ｒ２は、ニトロ基、－ＯＲ４、およびカルボキシル基からなる群から選択されるいずれか一つであり、Ｒ３は、水素原子、メチル基またはエチル基であり、少なくとも１はメチル基またはエチル基であり、Ｒ４は、メチル基またはエチル基であり、ｍは、スルホ基（－ＳＯ３ －）がテトラゾール骨格の５位のフェニル基に結合する数であり、１または２であり、ｎは、Ｒ２がテトラゾール骨格の３位のフェニル基に結合する数であり、０～２の整数であり、ｐは、スルホ基（－ＳＯ３ －）がテトラゾール骨格の３位のフェニル基に結合する数であり、０または１であり、ｎ＋ｐは１以上であり、ｑは１または２であり、ｑが２の場合、各ＯＲ３は隣接して配置され、この際、各ＯＲ３が互いに環を形成してもよく、Ｘは、水素原子またはアルカリ金属を表わす。
　式（１）において、テトラゾール骨格の２位には置換ベンゾチアゾリル基が存在する。上記式（１）において、テトラゾール環の２位にベンゾチアゾリル基が存在することにより、遷移金属化合物と効率よくかつ速やかにキレート化合物を形成できる（ホルマザン化合物の極大吸収波長を長波長域にシフトできる）。そして、テトラゾール骨格の２位のベンゾチアゾリル基に、少なくとも１のメトキシ基またはエトキシ基が導入されることで、さらに生成するホルマザンとＺｎ２＋等の遷移金属イオンとのキレート時の極大吸収波長が長波長側にシフトする。
　また、ｑは１または２である。好ましくは、ｑが１である。ここで、ｑ＝１の場合、Ｒ３は、メチル基またはエチル基であり、水溶性の観点からはメチル基であることが好ましい。Ｒ３が炭素原子数３以上のアルキル基である場合には、テトラゾリウム塩およびテトラゾリウム塩から生じるホルマザンは、水溶性に劣るため好ましくない。
　式（１）において、テトラゾール骨格の２位に存在する置換ベンゾチアゾリル基の－ＯＲ３の少なくとも１がベンゾチアゾリル基の６位に結合することが好ましい。当該形態によれば、Ｚｎ２＋等の遷移金属イオンとのキレート時の極大吸収波長を長波長側にシフトできる。
　ｑ＝１の場合、テトラゾール骨格の２位に存在するベンゾチアゾリル基の置換基である－ＯＲ３の置換位置は特に限定されるものではなく、４位、５位、６位、または７位のいずれであってもよい。－ＯＲ３の置換位置は、ベンゾチアゾリル基の６位に結合することが好ましい。すなわち、本発明の好ましい形態では、ｑが１でありかつ－ＯＲ３がベンゾチアゾリル基の６位に結合することが好ましい。また、Ｚｎ２＋等の遷移金属イオンとのキレート時の極大吸収波長を長波長側にシフトできる。
　ｑ＝２の場合、Ｒ３は、水素原子、メチル基またはエチル基であり、少なくとも一がメチル基、またはエチル基である。また、ｑが２である場合、各ＯＲ３は隣接して配置され、各ＯＲ３が互いに環を形成してもよい。この際、好適な組み合わせとしては、Ｒ３が、水素原子およびメチル基の組み合わせ、メチル基およびメチル基の組み合わせである。ｑ＝２の場合、テトラゾール骨格の２位に存在するベンゾチアゾリル基の置換基である－ＯＲ３の置換位置は２つの－ＯＲ３が隣接して配置されれば特に限定されるものではなく、４，５位、５，６位、または６，７位のいずれであってもよい。Ｚｎ２＋等の遷移金属イオンとのキレート時の長波長側への極大吸収波長のシフトの効果の点では、少なくとも一の－ＯＲ３の置換位置は、ベンゾチアゾリル基の６位に結合することが好ましく、すなわち、２つの－ＯＲ３の置換位置は、５，６位、または６，７位であることが好ましい。具体的には、ｑが２である場合、テトラゾール骨格の２位に存在する置換ベンゾチアゾリル基は以下のいずれかの置換基であることが好ましい。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000002
　さらには、ｑが２である場合、テトラゾール骨格の２位に存在する置換ベンゾチアゾリル基は上記いずれかの置換基である場合、テトラゾール骨格の３位に存在する置換スルホ化フェニル基が、４－メトキシ－５－スルホフェニル基であることが、Ｚｎ２＋等の遷移金属イオンとのキレート時の長波長側への極大吸収波長のシフトの効果の点で好ましい。　　　
　本発明の好ましい形態では、発色色素は、Ｒ１は、水素原子、水酸基、メトキシ基、およびエトキシ基からなる群から選択されるいずれか一つであり、Ｒ２は、ニトロ基、－ＯＲ４、およびカルボキシル基からなる群から選択されるいずれか一つであり、かつ少なくとも１のＲ２が－ＯＲ４基であり、Ｒ３は、水素原子、メチル基またはエチル基であり、少なくとも１はメチル基またはエチル基であり、Ｒ４は、メチル基またはエチル基であり、ｍは、スルホ基（－ＳＯ３ －）がテトラゾール骨格の５位のフェニル基に結合する数であり、１または２であり、ｎは、Ｒ２がテトラゾール骨格の３位のフェニル基に結合する数であり、１または２であり、ｐは、スルホ基（－ＳＯ３ －）がテトラゾール骨格の３位のフェニル基に結合する数であり、０または１であり、ｎ＋ｐは１以上であり、ｑは１または２であり、ｑが２の場合、各ＯＲ３は隣接して配置され、この際、各ＯＲ３が互いに環を形成してもよく、各ＯＲ３が互いに環を形成する場合には、テトラゾール骨格の２位に存在する置換ベンゾチアゾリル基は以下で表される置換基のいずれかであり、
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000003
Ｘは、水素原子またはアルカリ金属を表わす、
上記式（１）で示されるテトラゾリウム塩である。
　式（１）において、テトラゾール骨格の５位には置換スルホ化フェニル基が存在する。該スルホ化フェニル基の置換基であるＲ１は、水素原子、水酸基、メトキシ基、およびエトキシ基からなる群から選択されるいずれか一つである。テトラゾリウム塩およびテトラゾリウム塩から生じるホルマザンの水溶性を向上させるという観点からは、Ｒ１は、水素原子または水酸基であることが好ましく、幅広いｐＨ領域で遷移金属イオンとのキレートを安定的に形成できることから、Ｒ１は水素原子であることがより好ましい。また、Ｒ１が水酸基、メトキシ基、およびエトキシ基である場合の置換位置は特に限定されないが、４位であることが好ましい。
　テトラゾール骨格の５位には、スルホ基（－ＳＯ３ －）が少なくとも１個存在する（ｍ＝１または２）。これにより、テトラゾリウム塩およびテトラゾリウム塩から生じるホルマザンの水溶性が向上するものと考えられる。式（１）において、ｍは、スルホ基（－ＳＯ３ －）がテトラゾール骨格の５位のフェニル基に結合する数であり、１または２である。特にスルホ基が２位または４位にある場合、さらには、２，４位にある場合には、よりいっそうの水溶性の向上が発揮出来る。さらにスルホ基が２，４位にある場合には合成するためのビルディングブロックの合成が容易である点で、有利である。水溶性が高く、また、幅広いｐＨ領域で遷移金属イオンとのキレート化合物を安定的に形成することができる、または水溶性が向上することから、ｍ＝２であることが好ましく、ｍ＝２であり、Ｒ１が水素原子であることがより好ましい。
　この際、ｍ＝２である場合には、スルホ基（－ＳＯ３ －）がテトラゾール骨格の３位のフェニル基に結合する数であるｐが１であることが好ましい。かような置換基数を選択することで、テトラゾリウム塩およびこれから生じるホルマザンの水溶性が一層向上する。
　なお、水溶性の観点からは、下記（１）～（４）：（１）ｍ＝２かつｐ＝１である、（２）ｍ＝１かつｎ＝０である、（３）テトラゾール骨格の５位に存在するフェニル基において、Ｒ１が水酸基であり、この際、スルホ基（ＳＯ３ －）および水酸基が２，４位、または４，６位にある、（４）ｐ＝０かつ少なくとも一のＲ２がカルボキシル基である、のいずれかを満たすことが好ましく、（１）ｍ＝２かつｐ＝１または、（４）ｐ＝０かつ少なくとも一のＲ２がカルボキシル基であることがより好ましい。また、上記（３）では、スルホ基（ＳＯ３ －）および水酸基が、ベンゼン環上で隣接した置換基として存在しないため、水素結合することがなく、または少なく、両置換基が効率的に水溶性に寄与できるためであると考えられる。
　ここで、テトラゾール骨格の５位に存在するフェニル基へのスルホ基（－ＳＯ３ －）の結合位置は特に制限されない。テトラゾリウム塩およびテトラゾリウム塩から生じるホルマザンの水溶性のさらなる向上効果、極大吸収波長を長波長側へシフトすることができることの点から、ｍ＝２の場合には、スルホ基（－ＳＯ３ －）は、フェニル基の、２，４位、３，５位に存在することが好ましい。フェニル基の２，４位にスルホ基が存在することが特に好ましく、高濃度の遷移金属イオンの存在下でも沈殿が発生しないテトラゾリウム塩化合物とすることができる。すなわち、このテトラゾリウム塩を発色試薬として使用することで、分析対象物（生体成分）が高濃度な場合であっても、定量可能な試薬を調製できる。すなわち、本発明の好ましい形態では、テトラゾール骨格の５位のフェニル基が、スルホ基（－ＳＯ３ －）が２，４位に存在するフェニル基であることが好ましい。
　式（１）において、テトラゾール骨格の３位には置換フェニル基が存在する。フェニル基は必須に置換されるため、ｎ＋ｐは１以上である。
　テトラゾール骨格の３位のフェニル基の置換基としてのＲ２は、ニトロ基、－ＯＲ４、およびカルボキシル基からなる群から選択されるいずれか一つである。Ｒ２は、ホルマザンと遷移金属イオンとのキレート形成性の観点からは、ニトロ基または－ＯＲ４であることが好ましく、水溶性の観点からは、カルボキシル基であることが好ましい。また、ｎは、Ｒ２がテトラゾール骨格の３位のフェニル基に結合する数であり、０～２の整数である。Ｒ２を導入することで、化合物の極大吸収波長を長波長域に移動させることや、化合物の安定性を向上させることが可能となるため、ｎ＝１または２であることが好ましい。Ｒ２が２存在する場合、すなわち、ｎ＝２である場合、Ｒ２は同じであっても異なるものであってもよい。
　ｎ＝１または２である場合、少なくとも１のＲ２が－ＯＲ４基であることが好ましい。すなわち、本発明の好適な形態は、ｎが１または２であり、かつ、少なくとも１のＲ２が－ＯＲ４基である。フェニル基の置換基としてアルコキシ基を導入することで、化合物の安定性が向上する。テトラゾリウム塩およびテトラゾリウム塩から生じるホルマザンの水溶性を向上させるという観点からは、－ＯＲ４基がメトキシ基であることが好ましい。ここで、Ｒ４は、メチル基またはエチル基であり、水溶性の観点からはメチル基であることが好ましい。Ｒ４が炭素原子数３以上のアルキル基である場合には、テトラゾリウム塩およびテトラゾリウム塩から生じるホルマザンは、水溶性に劣るため好ましくない。
　ｎが１または２である場合の、Ｒ２の置換位置は特に限定されないが、テトラゾール骨格の３位に存在するフェニル基の２位、３位、４位、５位または６位であることが好ましく、少なくとも一のＲ２が２位または４位にあることが好ましく、２位および／または４位であることが好ましい。かような構造とすることで、水溶性が向上するとともに、テトラゾリウム塩およびテトラゾリウム塩から生じるホルマザンの安定性を向上させることができる。
　ｐは、スルホ基（－ＳＯ３ －）がテトラゾール骨格の３位のフェニル基に結合する数であり、０または１である。テトラゾリウム塩およびテトラゾリウム塩から生じるホルマザンの水溶性を向上させるという観点からは、ｐ＝１であることが好ましい。なお、ｐ＝１の場合、スルホ基は電子吸引性基であるため、他の電子吸引性基（例えば、ニトロ基）があると、テトラゾリウム環上の窒素原子のカチオン電荷を不安定化させ、化合物の安定性を低下させる場合がある。上述したとおり、フェニル基の置換基としてアルコキシ基を導入することで、化合物の安定性が向上するが、ニトロ基が同時に導入されると、アルコキシ基導入による安定性の向上が発揮されない場合がある。このため、安定性向上という観点からは、ｐ＝１の場合には、ｎが１または２であり、好ましくは、ｎが１であり、かつ、Ｒ２は、－ＯＲ４、およびカルボキシル基からなる群から選択されるいずれか一つであることが好ましく、Ｒ２は－ＯＲ４であることがより好ましい。または、テトラゾリウム塩およびテトラゾリウム塩から生じるホルマザンの水溶性を向上させるという観点からは、ｐ＝０かつ少なくとも一のＲ２がカルボキシル基であることが好ましい。すなわち、好適な実施形態は、式（１）において、ｐが１である、またはｐ＝０かつ少なくとも一のＲ２がカルボキシル基である。より好適には、ｍ＝２かつｐ＝１である、またはｐ＝０かつ少なくとも一のＲ２がカルボキシル基である。
　ｐ＝１である場合、テトラゾール骨格の３位のフェニル基を置換するスルホ基（－ＳＯ３ －）の置換位置は特に限定されるものではないが、３位または５位であることが好ましい。この位置にスルホ基が置換することで、テトラゾリウム塩およびテトラゾリウム塩から生じるホルマザンの安定性をより有効に向上できる。
　また、式（１）において、テトラゾール骨格の３位に存在する置換基が、４－メトキシ－３－スルホフェニル基、２－メトキシ－５－スルホフェニル基、２－メトキシ－４－ニトロ－５－スルホフェニル基、２－メトキシ－４－ニトロフェニル基、４－スルホフェニル基、４－カルボキシ－２－メトキシフェニル基、５－カルボキシ－２－メトキシフェニル基、３－カルボキシ－４－メトキシフェニル基、または４－メトキシ－５－スルホフェニル基が好ましく、４－メトキシ－３－スルホフェニル基、２－メトキシ－５－スルホフェニル基、３－カルボキシ－４－メトキシフェニル基、または４－メトキシ－５－スルホフェニル基であることがより好ましく、４－メトキシ－３－スルホフェニル基、４－メトキシ－５－スルホフェニル基、または、２－メトキシ－５－スルホフェニル基であることが特に好ましい。かような構造とすることで、発色感度が向上し、水溶性が向上するとともに、テトラゾリウム塩およびテトラゾリウム塩から生じるホルマザンの安定性を向上させることができる。また、ホルマザン化合物自体の極大吸収波長をより長波長域にすることができることから、テトラゾール骨格の３位に存在するフェニル基が、４－メトキシ－３－スルホフェニル基であることが特に好ましい。
　上記式（１）において、Ｘは、水素原子またはアルカリ金属を表わす。ここで、Ｘは、アニオン（スルホ基（－ＳＯ３ －））を中和するために存在する。このため、アルカリ金属の種類は特に制限されず、リチウム、ナトリウム、カリウム、ルビジウム、セシウムのいずれでもよい。
　テトラゾリウム塩の好ましい例としては、以下の構造を有するものが挙げられる。なお、下記構造において、Ｘは、アルカリ金属を表わす。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000004
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000005
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000006
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000007
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000008
　テトラゾリウム塩の特に好ましい例としては、以下の構造がある。すなわち、本発明の好ましい形態では、発色色素は、下記構造を有する。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000009
　発色色素は、合成しても、または市販品を使用してもよい。例えば、本開示で好ましく使用される２－ベンゾチアゾリル－３－（４－カルボキシ－２－メトキシフェニル）－５－［４－（２－スルホエチルカルバモイル）フェニル］－２Ｈ－テトラゾリウム(2-Benzothiazolyl-3-(4-carboxy-2-methoxyphenyl)-5-[4-(2-sulfoethylcarbamoyl)phenyl]-2H-tetrazolium)は、Dojindo Molecular Technologies, Incから、ＷＳＴ－４の商品名で市販されている。また、本開示で好ましく使用される上記式（１）のテトラゾリウム塩は、以下に制限されないが、例えば、国際公開第２０１８／０５１８２２号に記載の方法、または当該方法を適宜修飾した方法によって製造できる。一例としては、アルデヒドとヒドラジンの脱水縮合によりヒドラゾンを合成し、次いで、対応するジアゾニウム塩を水性溶媒中、塩基性条件下で反応させて、ホルマザンを得る。ここで、塩基性化剤としては、水酸化ナトリウム、水酸化カリウムなどが用いられる。次いで得られたホルマザンを亜硝酸エチル、亜硝酸ブチル又は次亜塩素酸ナトリウム等の酸化剤を用いアルコール溶媒（例えば、メタノール、エタノール）中で酸化し、式（１）のテトラゾリウム塩を得ることができる。一実施形態を挙げると、下記構造：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000010
を有するヒドラジノ置換ベンゾチアゾールと、下記構造：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000011
を有する置換スルホ化ベンズアルデヒドとを反応させて、下記構造：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000012
を有するヒドラゾン化合物を得る。一方、下記構造：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000013
を有する置換スルホ化アニリンを氷冷しながら塩酸を加え、さらに亜硝酸ナトリウム溶液を滴下して、下記構造：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000014
を有する塩化ベンゼンジアゾニウム化合物を得る。上記にて得られたヒドラゾン化合物と塩化ベンゼンジアゾニウム化合物とを塩基性条件（例えば、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム存在）下で反応させて、下記構造：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000015
を有するホルマザン化合物を得る。次いで、このようにして得られたホルマザン化合物を、酸化剤（例えば、亜硝酸ナトリウム、亜硝酸エチル、亜硝酸ブチル等の亜硝酸エステル）を用いてアルコール溶媒（例えば、メタノール、エタノール）中で酸化することによって、上記式（１）のテトラゾリウム塩が得られる。
　試薬における発色色素の組成（含有量）（固形分換算）は、例えば、試薬全量（固形分）　１００質量部に対して、１０～４０質量部であり、好ましくは１５～３５質量部であり、より好ましくは１５質量部を超え３０質量部未満である。このような量であれば、発色色素（例えば、テトラゾリウム塩）は、分析対象物に対して、十分な発色量を呈することができる。ゆえに、溶血サンプルにおける分析対象物濃度（例えば、グルコース濃度）をより高い精度で測定できる。上記発色色素の含有量は、試薬を調製する際の発色色素の仕込み量の割合と実質的に同等である。また、試薬が２種以上の発色色素を含む場合には、上記発色色素の含有量は配合する発色色素の合計量を意図する。
　上記式（１）のテトラゾリウム塩から生成するホルマザン、またはホルマザンと遷移金属イオンとのキレート化合物は、単独でまたは遷移金属化合物とのキレート化合物を形成することにより、血色素の主な吸収帯と重ならない波長域（６００ｎｍ以上）に大きな吸収波長帯を有する。また、上記式（１）のテトラゾリウム塩は、高い水溶性を有する。このため、上記式（１）のテトラゾリウム塩を用いることによって、溶血した全血試料に対しても感度よく生体成分濃度を測定できる。具体的には、上記式（１）のテトラゾリウム塩から生成したホルマザン、またはホルマザンと遷移金属イオンとのキレート化合物の６００ｎｍ以上８００ｎｍ以下における、最大吸光度は（２００ｍｇ／ｄＬのグルコース水溶液中、セル長＝０．０４５ｍｍ）は、０．３以上、より好ましくは０．５以上である。このような吸収を有するホルマザンまたはホルマザンと遷移金属イオンとのキレート化合物（ゆえに、このようなホルマザンを生成できるテトラゾリウム塩）であれば、血液の吸収の影響を受けにくく、生体成分濃度をより正確にかつ良好な感度で測定できる。なお、本明細書において、特記しない限り、ホルマザンと遷移金属イオンとのキレート化合物の最大吸収波長（λｍａｘ）は、下記方法に従って測定された値を採用する。
　－ホルマザンと遷移金属イオンとのキレート化合物の最大吸収波長（λｍａｘ）の評価－
　ホルマザン化合物の終濃度が５０～２００ｍＭとなるように、１０ｍＭ　ＭＯＰＳ水溶液を加えて、試料を作製する。別途、１Ｍの遷移金属イオン（例えば、ニッケルイオン）を含む水溶液を作製する。
　上記試料　１００μＬに、別途調製した遷移金属イオンを含む水溶液を１０μＬ加え、素早く攪拌し、混合液を調製する。この混合溶液について、スペクトルを、分光光度計（測定セル長：１０ｍｍ）にて測定する。スペクトルに基づいて、６００ｎｍ以上における最大吸収波長（ｎｍ）を求める。なお、最大吸収波長（λｍａｘ）として、６００ｎｍ以上において最大吸光度（０．３以上）を満たす範囲であれば、任意の波長を選択することができる。
　（酸化還元酵素）
　本開示の試薬は、酸化還元酵素を含む。本発明のより好ましい形態では、生体成分濃度測定試薬は、発色色素としてテトラゾリウム塩（特に上記式（１）のテトラゾリウム塩）を含み、さらに分析対象物と特異的に反応する酸化還元酵素を含む。
　ここで、酸化還元酵素は、特に制限されず、測定される対象である生体成分の種類によって適切に選択されうる。具体的には、グルコースデヒドロゲナーゼ（ＧＤＨ）、ピロロキノリンキノン（ＰＱＱ）を補酵素とするグルコースデヒドロゲナーゼ（ＰＱＱ－ＧＤＨ）、フラビンアデニンジヌクレオチド（ＦＡＤ）を補酵素とするグルコースデヒドロゲナーゼ（ＦＡＤ－ＧＤＨ）、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤ）を補酵素とするグルコースデヒドロゲナーゼ（ＮＡＤ－ＧＤＨ）およびニコチンアデニンジヌクレオチドリン酸（ＮＡＤＰ）を補酵素とするもの（ＮＡＤＰ－ＧＤＨ）等のグルコースデヒドロゲナーゼ（ＧＤＨ）、グルコースオキシダーゼ（ＧＯＤ）、乳酸脱水素酵素（ＬＤＨ）、コレステロールデヒドロゲナーゼ、コレステロールオキシダーゼ、尿酸デヒドロゲナーゼなどが挙げられる。ここで、酸化還元酵素は、１種を単独で使用しても、または２種以上を組み合わせてもよい。例えば、分析対象物（生体成分）がグルコースである場合には、酸化還元酵素がグルコースデヒドロゲナーゼやグルコースオキシダーゼであることが好ましい。また、分析対象物（生体成分）がコレステロールである場合には、酸化還元酵素がコレステロールデヒドロゲナーゼやコレステロールオキシダーゼであることが好ましい。生体成分濃度測定試薬が酸化還元酵素を含む場合の、酸化還元酵素の含有量は、特に制限されず、テトラゾリウム塩の量に応じて適宜選択できる。
　（その他の成分）
　本開示の試薬は、発色色素、酸化還元酵素、溶血剤、低分子の塩化合物および二糖類またはその誘導体（特にはスクラロース）を必須に含む。本開示の試薬は、上記に加えて、他の成分を含んでもよい。ここで、他の成分としては、通常、測定対象である生体成分の種類に応じて適切に選択され、生体成分濃度を測定するために添加される成分が同様にして使用できる。具体的には、遷移金属化合物、電子伝達体、ｐＨ緩衝剤などが挙げられる。ここで、上記他の成分は、それぞれ、１種を単独で使用しても、または２種以上を組み合わせて使用してもよい。また、上記他の成分のそれぞれは、１種を単独で使用しても、または２種以上を併用してもよい。なお、本開示の試薬は、溶血剤以外の界面活性剤は含まないことが好ましい。
　電子伝達体は、特に制限されず、公知の電子伝達体が使用してもよい。具体的には、ジアホラーゼ、フェナジンメチルサルフェート（ｐｈｅｎａｚｉｎｅ　ｍｅｔｈｏｓｕｌｆａｔｅ）（ＰＭＳ）、１－メトキシ－５－メチルフェナジウムメチルサルフェート（１－ｍｅｔｈｏｘｙ－５－ｍｅｔｈｙｌｐｈｅｎａｚｉｎｉｕｍ　ｍｅｔｈｙｌｓｕｌｆａｔｅ）（１－Ｍｅｔｈｏｘｙ ＰＭＳまたはｍ－ＰＭＳ）、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸（ＮＡＤＰＨ）、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤＨ）などが挙げられる。ここで、電子伝達体は、１種を単独で使用しても、または２種以上を組み合わせてもよい。生体成分濃度測定試薬が電子伝達体を含む場合の、電子伝達体の含有量は、特に制限されず、テトラゾリウム塩の量に応じて適宜選択できる。
　試薬の使用形態は、特に制限されず、固体、ゲル状、ゾル状、または液体のいずれの形態であってもよい。本開示の試薬においては、試薬は、好ましくは、固体（乾燥状態）で使用され、すなわち、本開示の試薬は、乾燥試薬であることが好ましい。
　乾燥試薬は、通常基材に乾燥試薬形成用の塗布液を塗布することで形成される。塗布液は、形成性の点から、水、バッファー（ｐＨ緩衝剤）等を含んでもよい。ここで、バッファーは、特に制限されず、一般的に生体成分濃度を測定する際に使用されるバッファーが同様にして使用できる。具体的には、リン酸緩衝剤、クエン酸緩衝剤、クエン酸－リン酸緩衝剤、トリスヒドロキシメチルアミノメタン－ＨＣｌ緩衝剤（トリス塩酸緩衝剤）、ＭＥＳ緩衝剤（２－モルホリノエタンスルホン酸緩衝剤）、ＴＥＳ緩衝剤（Ｎ－トリス（ヒドロキシメチル）メチル－２－アミノエタンスルホン酸緩衝剤）、酢酸緩衝剤、ＭＯＰＳ緩衝剤（３－モルホリノプロパンスルホン酸緩衝剤）、ＭＯＰＳ－ＮａＯＨ緩衝剤、ＨＥＰＥＳ緩衝剤（４－（２－ヒドロキシエチル）－１－ピペラジンエタンスルホン酸緩衝剤）、ＨＥＰＥＳ－ＮａＯＨ緩衝剤などのＧＯＯＤ緩衝剤、グリシン－塩酸緩衝剤、グリシン－ＮａＯＨ緩衝剤、グリシルグリシン－ＮａＯＨ緩衝剤、グリシルグリシン－ＫＯＨ緩衝剤などのアミノ酸系緩衝剤、トリス－ホウ酸緩衝剤、ホウ酸－ＮａＯＨ緩衝剤、ホウ酸緩衝剤などのホウ酸系緩衝剤、またはイミダゾール緩衝剤などが用いられる。これらのうち、リン酸緩衝剤、クエン酸緩衝剤、クエン酸－リン酸緩衝剤、トリス塩酸緩衝剤、ＭＥＳ緩衝剤、酢酸緩衝剤、ＭＯＰＳ緩衝剤、ＨＥＰＥＳ－ＮａＯＨ緩衝剤が好ましい。ここで、緩衝剤の濃度としては、特に制限されないが、０．０１～１．０Ｍであるのが好ましい。なお、本発明において緩衝剤の濃度とは、塗布液中に含まれる緩衝剤の濃度（Ｍ、ｍｏｌ／Ｌ）をいう。緩衝液のｐＨは、中性付近、例えば、５．０～８．０程度であることが好ましい。なお、塗布液におけるテトラゾリウム塩の濃度は、所望の生体成分濃度を測定できる濃度であれば特に制限されないが、テトラゾリウム塩が所望の生体成分の存在量に対して十分量含まれることが好ましい。上記観点及び通常測定すべき生体成分濃度などを考慮すると、テトラゾリウム塩の濃度は、塗布液において、好ましくは０．０１～０．２ｍｏｌ／Ｌ、より好ましくは０．０５～０．１ｍｏｌ／Ｌである。このような量であれば、テトラゾリウム塩は、生体試料に含まれる実質的にすべて（例えば、９５モル％以上、好ましくは９８モル％以上、特に好ましくは１００モル％）の生体成分の量に応じて反応する。このため、所望の生体成分濃度を正確にかつ良好な感度で速やかに測定できる。
　本開示の試薬を用いることにより、全血試料中に含まれる特定の生体成分濃度を高精度に測定できる。また、本開示の試薬を用いることにより、溶血した全血試料に対して（すなわち、血球および血漿双方に含まれる）生体成分（分析対象物）の濃度を高精度で測定できる。
　したがって、本発明は、全血試料を、本開示の生体成分濃度測定試薬と接触させて、発色量を測定し、当該発色量に基づいて前記全血試料中の生体成分の濃度を定量することを有する、生体成分濃度の測定方法をも提供する。
　本開示において、測定対象となる試料は、全血である。全血試料を本開示の生体成分濃度測定試薬または当該色素を含むセンサもしくは成分測定装置（例えば、血糖計）に取り付けられたセンサ内に導入して、全血試料を試薬と接触させることにより、測定する。また、生体成分は、特に制限されず、通常、比色法または電極法により測定される生体成分が同様にして使用できる。具体的には、グルコース、コレステロール、中性脂肪、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸（ＮＡＤＰＨ）、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤＨ）、尿酸などが挙げられる。すなわち、本発明の好ましい形態によると、本開示の試薬は、全血中の、グルコース、コレステロール、中性脂肪、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸（ＮＡＤＰＨ）、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤＨ）または尿酸の濃度の測定のために使用される。また、本発明の好ましい形態によると、生体成分は、グルコース、コレステロール、中性脂肪、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸（ＮＡＤＰＨ）、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤＨ）または尿酸である。
　本開示において、測定方法は、特に制限されず、測定対象となる生体成分の種類に応じて適宜選択できる。例えば、発色色素がテトラゾリウム塩であり、生体成分がβ－Ｄ－グルコースであり、酸化還元酵素がグルコースデヒドロゲナーゼ（ＧＤＨ）である場合には、グルコースがＧＤＨによって酸化されてグルコン酸を生成する。その際にＧＤＨの補酵素または電子伝達物質が還元されることを利用し、具体的には結果として還元されたテトラゾリウム塩（ゆえにホルマザンまたはホルマザンと遷移金属イオンとのキレート化合物）の呈色度合を光学的に測定する方法（比色法）、および酸化還元反応によって生じた電流を測定する方法（電極法）に大別される。上記方法のうち、比色法による血糖値の測定は、血糖値の算出の際にヘマトクリット値を用いた補正を行ないやすい、製造工程が簡易である等の利点を有している。このため、生体成分濃度測定試薬は比色法に好適に使用できる。特に全血試料中のグルコース濃度を測定する場合には、比色法が好ましく使用される。
　本開示の試薬は、各成分を混合した形態で生体成分濃度の測定に使用されてもよいが、乾燥状態でセンサ（全血成分濃度測定用センサ）に組み込まれてもよい。すなわち、本発明は、反応部を有する、全血試料中の生体成分濃度を測定するためのセンサであって、前記反応部は、本開示の生体成分濃度測定試薬を含む、センサ（以下では、単に「センサ」とも称する）をも提供する。また、本開示の試薬や方法は、自動分析機や測定キット、簡易血糖計等に組み込まれ、日常的な臨床検査に使用できる。また、本開示の試薬を市販のバイオセンサに組み込むことも可能である。なお、本開示の試薬をセンサに組み込む場合には、１センサ当たりの試薬の含有量は、特に制限されず、通常当該分野において使用される量が同様にして採用できるが、発色色素（特に、式（１）のテトラゾリウム塩）が所望の生体成分の存在量に対して十分量で含まれることが好ましい。上記観点及び通常測定すべき生体成分濃度などを考慮すると、発色色素の濃度は、１センサ当たり、好ましくは３～５０ｎｍｏｌ、より好ましくは１０～３０ｎｍｏｌである。このような量であれば、発色色素は、全血試料に含まれる実質的にすべての生体成分の量に応じて反応する。このため、所望の生体成分濃度を正確にかつ良好な感度で速やかに測定できる。
　以下では、比色法により血糖値を測定するに使用される本開示の測定用センサ（比色式血糖計）の形態を、図を参照しながら説明する。しかしながら、本発明は、本開示の生体成分濃度測定試薬を使用することを特徴とし、センサの構造は特に制限されない。このため、本開示の生体成分濃度測定試薬を、市販の測定用センサならびに国際公開第２０１６／０５１９３０号、国際公開第２０１８／５１８２２号、国際公開第２０２０／１３７５３２号等の公報に記載されるセンサに適用してもよい。同様にして、下記実施形態では、血糖値の測定を目的としたセンサの具体的な形態を説明するが、測定用センサは当該用途に限定されず、他の用途にも同様にしてまたは適切に修飾して適用できる。
　図１は、本実施形態に係る測定用センサを用いたグルコース（血糖）の検出に用いられる血糖計を概略的に示す平面図である。
　図１において、血糖計１０は、全血試料中のグルコース（血糖）を測定する機器として構成されている。この血糖計１０は、主に、ユーザ（被検者）が操作するパーソナルユースとして用いられ得る。ユーザは、食前の血糖を測定して自身の血糖管理を行うこともできる。また、医療従事者が被検者の健康状態を評価するために血糖計１０を使用することもでき、この場合、血糖計１０を適宜改変して医療施設等に設置可能な構成としてもよい。
　血糖計１０は、全血試料中に含まれるグルコースの含有量（血糖値）を光学的に測定する、比色法の原理を採用している。特に、この血糖計１０は、所定波長の測定光を照射し、測定センサ１２の測定エリアを透過した光を受光する、透過タイプの測定部１４により血糖測定を行う。
　血糖計１０は、血液を取り込んだ測定用センサ１２を装着して、または測定用センサ１２を装着した状態で測定用センサ１２に血液導入し、測定部１４によりグルコースを検出する。測定用センサ１２は、１回の測定毎に廃棄するディスポーザブルタイプに構成されてもよい。一方、血糖計１０は、ユーザが測定を簡易に繰り返すことができるように、携帯可能且つ頑強な機器に構成されることが好ましい。
　測定用センサ１２は、図２に示すように、板状に形成されたセンサ本体部１８と、センサ本体部１８の内部で板面の面方向に延びる空洞部２０（液体用空洞部）とを備える。
　センサ本体部１８は、図２に示すように、血糖計１０の挿入および離脱方向（血糖計１０の先端および基端方向、すなわちＢ方向）に長辺２２を有すると共に、Ａ方向に短い短辺２４を有する長方形状に形成されている。例えば、センサ本体部１８の長辺２２の長さは、短辺２４の２倍以上の長さに設定されるとよい。これにより測定用センサ１２は、血糖計１０に対して充分な挿入量が確保される。
　また、センサ本体部１８の厚みは、長方形状に形成された側面に比べて極めて小さく（薄く）形成される（図２では、敢えて十分な厚みを有するように図示している）。例えば、センサ本体部１８の厚みは、上述した短辺２４の１／１０以下に設定されることが好ましい。このセンサ本体部１８の厚みについては、血糖計１０の挿入孔５８の形状に応じて適宜設計されるとよい。
　測定用センサ１２は、空洞部２０を有するように、一対の板片３０と、一対のスペーサ３２とによりセンサ本体部１８を構成している。
　図３は、図１の測定用センサを示す上面視図である。図３中では、センサ本体部１８の角部が尖っているが、例えば角部は丸角に形成されてもよい。また、センサ本体部１８は、薄板状に限定されるものではなく、その形状を自由に設計してよいことは勿論である。例えば、センサ本体部１８は、上面視で、正方形状や他の多角形状、または円形状（楕円形状を含む）等に形成されてもよい。
　センサ本体部１８の内部に設けられる空洞部２０は、センサ本体部１８の短軸方向中間位置にあり、センサ本体部１８の長手方向にわたって直線状に形成される。この空洞部２０は、センサ本体部１８の先端辺２４ａに形成された先端口部２０ａと、基端辺２４ｂに形成された基端口部２０ｂにそれぞれ連なり、センサ本体部１８の外側に連通している。空洞部２０は、先端口部２０ａからユーザの血液を取り込むと、毛細管現象に基づき延在方向に沿って血液を流動させ得る。空洞部２０を流動する血液は少量であり、基端口部２０ｂまで移動しても張力により漏れが抑止される。なお、センサ本体部１８の基端辺２４ｂ側には、血液を吸収する吸収部（例えば、後述するスペーサ３２を基端側のみ多孔質体としたもの等）が設けられていてもよい。
　また、空洞部２０の所定位置（例えば、図３中に示す先端口部２０ａと基端口部２０ｂの中間点よりも若干基端寄りの位置）には、血液中のグルコース（血糖）と反応することにより血液中のグルコース（血糖）濃度に応じた色に呈色する試薬（発色試薬）２６が塗布され、血糖計１０により測定がなされる測定対象部２８が設定されている。空洞部２０を基端方向に流動する血液が測定対象部２８に塗布された試薬２６と接触し、血液と試薬２６とが反応することで呈色する。なお、空洞部２０の長手方向上において、試薬２６の塗布位置と測定対象部２８は互いにずれていてもよく、例えば試薬２６が塗布された反応部を測定対象部２８の血液流動方向上流側に設けてもよい。
　測定用センサ１２は、以上の空洞部２０を有するように、一対の板片３０と、一対のスペーサ３２とによりセンサ本体部１８を構成している。一対の板片３０は、側面視でそれぞれ上述した長方形状に形成され、互いに積層方向に配置される。つまり、一対の板片３０は、センサ本体部１８の両側面（上面および下面）を構成している。各板片３０の板厚は、非常に小さく、例えば、５～５０μｍ程度の同一寸法に設定されるとよい。２つ（一組）の板片３０の厚みは、相互に異なっていてもよい。
　一対の板片３０は、面方向と直交する方向からある程度の押圧力が加えられても、板形状を維持して塑性変形しない強度を有する。また、各板片３０は、測定光が透過可能となるように透明部又は半透明部分を備える。さらに、各板片３０は、空洞部２０において血液を流動させ得るように適度な親水性を有する平坦状の板面に形成されていることが好ましい。
　各板片３０を構成する材料は、特に限定されるものではないが、熱可塑性樹脂材料、ガラス、石英等を適用するとよい。熱可塑性樹脂材料としては、例えば、ポリオレフィン（例えば、ポリエチレン、ポリプ口ピレンなど）、シクロオレフィンポリマー、ポリエステル（例えば、ポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）、ポリエチレンナフタレートなど）、ポリ塩化ビニル、ポリスチレン、ＡＢＳ樹脂、アクリル樹脂、ポリアミド、フッ素樹脂等の高分子材料又はこれらの混合物が挙げられる。
　また、一対のスペーサ３２は、一対の板片３０の間に挟まれるように配置され、所定の接合手段（接着剤等）よりに各板片３０の対向面に強固に接着される。つまり各スペーサ３２は、一対の板片３０同士を離間させるように間に配置されることで、一対の板片３０と一対のスペーサ３２自体の間に空洞部２０を形成させる部材である。この場合、一方のスペーサ３２は、図３中のセンサ本体部１８の上側長辺２２ａに接し、この上側長辺２２ａに沿って先端および基端方向に延びるように配置される。他方のスペーサ３２は、図３中のセンサ本体部１８の下側長辺２２ｂに接し、この下側長辺２２ｂに沿って先端および基端方向に延びるように配置される。
　一対のスペーサ３２を構成する材料（基材）は、特に限定されるものではないが、例えば、スチレン系、ポリオレフィン系、ポリウレタン系、ポリエステル系、ポリアミド系、ポリブタジエン系、トランスポリイソプレン系、フッ素ゴム系、塩素化ポリエチレン系等の各種熱可塑性エラストマーが挙げられる。または、熱可塑性エス卜ラマ一以外にも、弾性変形可能な種々の材料を適用してもよく、また弾性変形可能な多孔質体（例えばスポンジ）等の構造体を適用してもよい。さらに、一対の板片３０の間で硬化状態又は半硬化状態となることにより板片３０同士を接着する接着剤を基材の一方または両面に有するスペーサ３２として適用してもよい。またさらに、スペーサ３２は、試薬２６を含有することで、空洞部２０に試薬２６を溶出する構成であってもよい。
　板片３０やスペーサ３２は、親水化処理されたものであってもよい。親水化処理の方法としては、例えば界面活性剤、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、ヒドロキシプロピルセルロース、水溶性シリコーンの他、ポリアクリル酸、ポリビニルピロリドン、ポリアクリルアミド等の親水性高分子を含有した水溶液を浸漬法またはスプレー法等により塗布する方法や、プラズマ照射、グロー放電、コロナ放電、紫外線照射（例えば、エキシマ光照射）等の方法等が挙げられ、これらの方法を単独又は組み合わせてもよい。
　次に血糖計１０の装置本体１６について説明する。図１に示すように、血糖計１０は、外観を構成する筐体４０を有する。筐体４０は、ユーザが把持操作し易い大きさでその内部に血糖計１０の制御部４２を収容する箱体部４４と、箱体部４４の一辺（先端側）から先端方向に突出し内部に光学系の測定部１４を収容する筒状の測光部４６とを含む。また、箱体部４４の上面には、電源ボタン４８、操作ボタン５０、ディスプレイ５２が設けられ、測光部４６の上面にはイジェク卜レバー５４が設けられている。
　電源ボタン４８は、ユーザの操作下に、血糖計１０の起動と起動停止を切り換える。操作ボタン５０は、起動状態となった血糖計１０において、ユーザの操作に基づき、血糖値の測定や表示を行う、測定結果（過去の測定結果を含む）の表示を切り換える等の操作部として機能する。ディスプレイ５２は、液晶や有機ＥＬ等により構成され、測定結果の表示やエラー表示等のように測定操作においてユーザに提供する情報を表示する。
　イジェク卜レバー５４は、先端および基端方向に移動可能に設けられ、測光部４６内に設けられる図示しないイジェク卜ピンのロックを解除して、イジェク卜ピンを先端方向に進出可能とする。
　一方、装置本体１６の測光部４６は、ユーザの指等に先端を押し当てるために、箱体部４４から先端方向に長く延出している。図２に示すように、この測光部４６には、挿入孔５８を有するセンサ装着部６０と、血中のグルコース（血糖）を光学的に検出する測定部１４とが設けられる。
　センサ装着部６０は、高い硬質性（剛性）を有する材料（例えば、ステンレス）により、外方向に突出するフランジ部６０ａを先端側に備え、軸方向に所定長さを有する筒状に形成される。このセンサ装着部６０は、樹脂材料で構成された測光部４６の先端面と軸心部（中心部）にわたって位置決め固定される。測光部４６の内面には、図４Ａに示すように、センサ装着部６０を強固に固定する固定壁４６ａが突出形成されている。
　センサ装着部６０を構成する材料としては、例えば、ステンレスやチタン等の金属、アルマイト皮膜処理をしたアルミニウム、液晶ポリマー、ガラスやマイカ等のフィラーを添加したプラスティック、ニッケルめっき等で表面を硬化皮膜したプラスティック、カーボンファイバー、ファインセラミック等、硬質で安易に寸法が変化せず、また繰り返し測定用センサの抜き差しをしても摩耗しにくく、且つ寸法精度良く加工可能な材料が挙げられる。この中でも金属材料を適用すれば、センサ装着部６０の製造（射出成形やプレス成形等）時に、高い寸法精度且つ容易に挿入孔５８を成形することができる。なお、装置本体１６は、測光部４６自体を硬質な材料（例えば、金属材料）により構成することで、センサ装着部６０を一体成形していてもよい。
　センサ装着部６０の軸心部には、このセンサ装着部６０の壁部６２に囲われることにより挿入孔５８が設けられる。挿入孔５８は、挿入方向（Ｂ方向）に長く、左右幅方向（Ａ方向）に短い断面長方形状に形成されている。挿入孔５８は、センサ装着部６０が測光部４６に固着された状態で、その先端面から奥部（基端方向）に向かって所定深さを有する。
　センサ装着部６０の先端側には、挿入孔５８に連なると共に、外部に連通する挿入開口部５８ａが形成される。この挿入開口部５８ａの挿入方向（Ｂ方向）の寸法は、測定用センサ１２の短辺２４の寸法（Ａ方向の長さ）に一致している。また、挿入開口部５８ａの左右幅方向の寸法、すなわち挿入孔５８の側面を構成する一対の壁部６２の間隔は、図４Ａに示すように、測定用センサ１２の積層方向の厚み（図４Ａ中のＴａｌｌ）と実質的に同じである。
　センサ装着部６０は、挿入孔５８（測定用孔部５９）が延在する途中位置に、測光部４６の固定壁４６ａと協働して一対の素子収容空間６４を形成している。一対の素子収容空間６４は、測定部１４の一部であり、挿入孔５８を挟んで互いに対向位置に設けられ、センサ装着部６０により形成された各導光部６６を介して測定用孔部５９に連通している。
　測定部１４は、一方の素子収容空間６４に発光素子６８を収容することで発光部７０を構成し、他方の素子収容空間６４に受光素子７２を収容することで受光部７４を構成している。センサ装着部６０の導光部６６は、適宜な直径を有する円形状の穴に形成されることで、所謂アパーチャの役割を果たしている。
　発光部７０の発光素子６８は、第１の波長を有する測定光を測定用センサ１２に照射する第１発光素子６８ａと、第１の波長とは異なる第２の波長を有する測定光を測定用センサ１２に照射する第２発光素子６８ｂとを含む（図２中では図示を省略する）。第１発光素子６８ａと第２発光素子６８ｂは、素子収容空間６４の導光部６６を臨む位置に並設されている。
　発光素子６８（第１及び第２発光素子６８ａ、６８ｂ）は、発光ダイオード（ＬＥＤ）で構成され得る。第１の波長は、血糖量に応じた試薬２６の呈色濃度を検出するための波長であり、例えば、６００ｎｍ～６８０ｎｍである。第２の波長は、血液中の赤血球濃度を検出するための波長であり、例えば、５１０ｎｍ～５４０ｎｍである。箱体部４４内の制御部４２は、駆動電流を供給して、第１及び第２発光素子６８ａ、６８ｂをそれぞれ所定タイミングで発光させる。この場合、呈色濃度から得られる血糖値を赤血球濃度から得られるヘマトクリット値を用いて補正し、血糖値を求める。なお、さらに他の測定波長で測定することで、血球に起因するノイズを補正してもよい。
　受光部７４は、素子収容空間６４の導光部６６を臨む位置に１つの受光素子７２を配置して構成される。この受光部７４は、測定用センサ１２からの透過光を受光するものであり、例えば、フォトダイオード（ＰＤ）で構成され得る。
　また、挿入孔５８の底部（基端面）には、イジェクトレバー５４に連結されたイジェクトピン５６（イジェクト部）が設けられている。イジェクトピン５６は、測光部４６の軸方向に沿って延びる棒部５６ａと、棒部５６ａの先端部で径方向外側に大径な受部５６ｂとを備える。受部５６ｂには、挿入孔５８に挿入された測定用センサ１２の基端辺２４ｂが接触する。また、挿入孔５８の底部とイジェクトピン５６の受部５６ｂの間には、イジェクトピン５６を非接触に囲うコイルバネ７６が設けられている。コイルバネ７６は、イジェクトピン５６の受部５６ｂを弾性的に支持する。
　測定用センサ１２の挿入が完了すると、図４Ｂに示すように、測定用センサ１２の測定対象部２８が導光部６６に重なる位置に配置される。
　イジェクトピン５６は、ユーザによる測定用センサ１２の挿入に伴い受部５６ｂが押されることで基端方向に変位し、筐体４０内に設けられた図示しないロック機構によりロック（固定）される。コイルバネ７６は、受部５６ｂの変位に従って弾性的に収縮する。そして、ユーザのイジェクトレバー５４の操作により、イジェクトピン５６が多少移動するとロック機構のロックが解除され、コイルバネ７６の弾性復元力により先端方向にスライドする。これにより、測定用センサ１２がイジェクトピン５６に押し出されて、挿入孔５８から取り出される。
　図１に戻り、装置本体１６の制御部４２は、例えば、図示しない演算部、記憶部、入出力部を有する制御回路によって構成される。この制御部４２は、周知のコンピュータを適用することが可能である。制御部４２は、例えば、ユーザの操作ボタン５０の操作下に、測定部１４を駆動制御して血中のグルコースを検出及び算出し、ディスプレイ５２に算出した血糖値を表示する。
　例えば、測定用センサ１２に対し測定光を透過させて分析対象物（例えば、グルコース）を測定する血糖計１０において、制御部４２は、以下の式（Ａ）で示すＢｅｅｒ－Ｌａｍｂｅｒｔ則に基づいて測定結果を算出する。
Figure JPOXMLDOC01-appb-M000016
　上記式（Ａ）において、ｌ０は全血試料に入射する前の光の強度、ｌ１は全血試料から出射した後の光の強度、αは吸光係数、Ｌは測定光が通過する距離（セル長）である。
　本発明の効果を、以下の実施例および比較例を用いて説明する。ただし、本発明の技術的範囲が以下の実施例のみに制限されるわけではない。なお、下記実施例において、特記しない限り、操作は室温（２５℃）で行われた。また、特記しない限り、「％」および「部」は、それぞれ、「質量％」および「質量部」を意味する。
　合成例１：テトラゾリウム塩１の合成
　下記方法に従って、下記構造を有する化合物（テトラゾリウム塩１）を合成した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000017
　１．ヒドラゾン化合物１の合成
　４－ホルミルベンゼン－１，３－ジスルホン酸二ナトリウム（Ｄｉｓｏｄｉｕｍ　４－Ｆｏｒｍｙｌｂｅｎｚｅｎｅ－１，３－ｄｉｓｕｌｆｏｎａｔｅ）（東京化成工業株式会社製）１．５９ｇ及び（６－メトキシベンゾチアゾール－２－イル）ヒドラジン（２－Ｈｙｄｒａｚｉｎｏ－６－ｍｅｔｈｏｘｙ－１，３－ｂｅｎｚｏｔｈｉａｚｏｌｅ）（Ｓａｎｔａ　Ｃｒｕｚ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社製）１．０ｇをＲＯ水６０ｍＬに懸濁させた。この懸濁液を、酢酸酸性下、ウォーターバスにて６０℃で２時間、加熱・攪拌した。加熱攪拌終了後、溶媒を除去した。この残渣をイソプロパノールで洗浄した後、沈殿を濾別した。この沈殿をドラフト中で乾燥させて、ヒドラゾン化合物１を得た。
　２．ホルマザン化合物１の合成
　上記１．のヒドラゾン化合物１　０．７６ｇをＲＯ水１０ｍＬおよびＤＭＦ１０ｍＬの混合液に溶解して、ヒドラゾン化合物１溶液を調製した。ｐ－アニシジン－３－スルホン酸（ｐ－ａｎｉｓｉｄｉｎ－３－ｓｕｌｆｏｎｉｃ　ａｃｉｄ）（東京化成工業株式会社製）０．２６４ｇをＲＯ水４．０９ｍＬに懸濁させ、１０Ｎ　ＮａＯＨ　１３０μＬを加え溶解させた。この溶液を０℃に保持しつつ、９．６Ｎ　ＨＣｌ　２８０μＬを加え、亜硝酸ナトリウム溶液を滴下し、ジアゾ化を行った。このジアゾ化溶液を－２０℃に保持し、ヒドラゾン化合物１溶液に滴下した。滴下終了後、１０Ｎ　ＮａＯＨ３００μＬを滴下し、２時間室温（２５℃）で攪拌して、ホルマザン化合物１を含む溶液（ホルマザン化合物１溶液）を調製した。このホルマザン化合物１溶液を、９．６Ｎ　ＨＣｌにてｐＨを中性に調整し、溶媒を除去した。得られた残渣をイソプロパノールで洗浄した後、沈殿を濾別した。この沈殿を乾燥させ、ホルマザン化合物１を得た。
　３．ホルマザン化合物１の精製およびテトラゾリウム塩１の合成
　上記２．のホルマザン化合物１をＲＯ水１０ｍＬに溶解して、ホルマザン化合物１溶液を調製した。ディスポーザブルカラム（大きさ：２０ｃｍ×５ｃｍ）に、カラムクロマトグラフィー用充填剤（ナカライテスク株式会社製、ＣＯＳＭＯＳＩＬ　４０Ｃ１８－ＰＲＥＰ）を充填し、カラム分取システム（日本ビュッヒ社製、商品名：セパコア）にセットした。このカラムシステムを用いて、ホルマザン化合物１溶液を精製した。採取したフラクションの溶媒を除去し、得られた固形成分にメタノール１５ｍＬ、９．６Ｎ　ＨＣｌ　２５０μＬ、１５％亜硝酸エチル（ＣＨ３ＣＨ２ＮＯ２）－エタノール溶液５ｍＬを加えて、７２時間、室温（２５℃）遮光にて攪拌した。
　４．テトラゾリウム塩１の回収
　上記３．の反応溶液に対し、ジエチルエーテル加えて、テトラゾリウム塩１を沈殿させた。この沈殿を遠心分離し、上澄みを除去後、さらにジエチルエーテルで洗浄した。得られた沈殿をドラフト内で乾燥させ、テトラゾリウム塩１を得た。
　＜試験例１：乾燥試薬の透明性評価＞
　１．塗布液の調製
　（１）塗布液１の調製
　１Ｍ　酢酸亜鉛水溶液（１Ｍ＝１８３．４８ｇ／Ｌ）　４６．８μＬ（遷移金属化合物としての酢酸亜鉛＝８．６ｍｇ相当）およびＲＯ水　３３９．６μＬ（３３９．６ｍｇ）を混合して、混合液１を調製した。次に、この混合液１に、亜硝酸ナトリウム（１Ｍ＝６８．９９５ｇ／Ｌ）　３．６ｍｇを加えて、混合液２を調製した。次に、この混合液２に、スクラロース（１Ｍ＝３９７．６４ｇ／Ｌ）　３３．４ｍｇを加えて、混合液３を調製した。次に、この混合液３に、糖アルコールとしてのソルビトール（１Ｍ＝１８２．１７ｇ／Ｌ）　２．５ｍｇを加えて、混合液４を調製した。次に、この混合液４に、発色色素としての合成例１のテトラゾリウム塩１（１Ｍ＝６９３ｇ／Ｌ）　２８．１ｍｇを加えて、混合液５を調製した。
　別途、溶血剤としての非イオン性界面活性剤（ポリオキシエチレン（９）オクチルフェニルエーテル、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社製、ＮｏｎｉｄｅｔＴＭ　Ｐ－４０、比重＝１．０６ｇ／ｍＬ；以下、単に「Ｎｏｎｉｄｅｔ」または「Ｎｏｎｉｄｅｔ　Ｐ－４０」とも称する）　１００．２ｍｇをＲＯ水　２４６．４μＬ（２４６．４ｍｇ）に加えて、３０質量％　Ｎｏｎｉｄｅｔ水溶液を調製した。
　上記で調製した混合液５、３０質量％　Ｎｏｎｉｄｅｔ水溶液および酸化還元酵素としてのフラビンアデニンジヌクレオチド依存性グルコースデヒドロゲナーゼ（ＦＡＤ－ＧＤＨ）（東洋紡株式会社、商品名：ＧＬＤ－３５１（Ｄ－Ｇｌｕｃｏｓｅ：（ｆｌａｖｉｎｅ　ａｄｅｎｉｎｅ　ｄｉｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ）－ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ））を、下記表１－１の組成になるように、混合して、塗布液（合計量＝７３１．３μＬ）を調製した。
　（２）塗布液２の調製
　塗布液１の組成において、スクラロース（１Ｍ＝３９７．６４ｇ／Ｌ）の添加量を１６．７ｍｇ（５７．５ｍＭ）に変更した以外は、塗布液１と同様にして塗布液２を作製した。
　（３）塗布液３（比較例）の調製
　塗布液１の組成において、スクラロース（１Ｍ＝３９７．６４ｇ／Ｌ）を添加しなかったこと以外は、塗布液１と同様にして塗布液３を作製した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000018
　２．乾燥試薬の作製
　（１）試薬塗布：ポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）フィルム（厚さ：１８８μｍ）上に幅１．１ｍｍ×長さ７５ｍｍの範囲で、塗布液６．５μＬを塗布し、室温にて１２時間保管し、乾燥試薬を得た。塗布液１を塗布した乾燥試薬を乾燥試薬１と、塗布液２を塗布した乾燥試薬を乾燥試薬２と、塗布液３を塗布した乾燥試薬を乾燥試薬３とする。
　（２）試験紙組立：
　１層目：ＰＥＴフィルム１００μｍ（試薬無し）、２層目：空間層４５μｍ（両面テープ）、３層目：ＰＥＴフィルム１８８μｍ（乾燥試薬）の３部材で試験紙を組み立てた。
　３．評価方法１：透過率計測
　２．で組み立てた試験紙を用いて、透過式分光法（９００ｎｍ）で透過率を計測した。また、各乾燥試薬を形状測定機（株式会社キーエンス、ＶＲ－３２００）を用いて画像観察した。結果を下記表２に示す。また、画像観察の結果を図６Ａに示す。
　４．評価方法２：接触角の測定
　測定装置として、協和界面科学株式会社製接触角計（ＤＭ３０１）を用いた。接触角の解析は全て、θ／２法にて行った。まず、接触角計に先端が下向き方向で取り付けられたシリンジから、超純水を吐出し、シリンジ先端に１μＬの超純水液滴を作製した。次に、このシリンジを垂直に下ろしていき、乾燥試薬の試薬塗布部に液滴を接触させて、表面に超純水１μＬを滴下した。このときの表面に広がった液滴を真横から撮影し、装置付属の解析ソフトであるＦＡＭＡＳを用いて、超純水に対する接触角を求めた。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000019
　上記の通り、塗布液１、２を塗布した乾燥試薬１、２は、透過率が６１％を超えて、外観も透明であったのに対し、塗布液３を塗布した乾燥試薬３は、不透明であった。以上の結果より、スクラロースの添加により高い透明性を有する乾燥試薬が得られ、乾燥試薬のアモルファス化が可能となることがわかった。
　なお、厚み３～１４μｍの乾燥試薬としたときの透過率は、６８～７４％であることが好ましい。なお、乾燥試薬の厚みとは、塗布後の試薬液を乾燥させた後、塗布領域の中央付近において、ＰＥＴフイルムの表面から乾燥試薬の表面までの厚みを、形状測定機（株式会社キーエンス、ＬＳ－１１００）を用いて測定したものを指す。
　＜試験例２：発色反応評価＞
　試験例１で作製した乾燥試薬１～３について、測定センサの流路入口に、血液試料（血漿４００ｍｇ／ｄＬ）をアプライした。血液試料が試薬部に到達してから１５秒間、ファイバー分光光度計を用いて、６０５ｎｍにおける吸光度を測定した。
　結果を図６Ｂに示す。また、発色後の試薬画像を図６Ａに示す。図６Ｂに示したように、スクラロースを含む乾燥試薬１、２は、発色速度が速いことがわかる。よって、スクラロースの添加により、検出反応が迅速化されることがわかる。これは上記でみたように、スクラロースの添加により、透明化（アモルファス化）が可能となり、全血の乾燥試薬への溶解速度が向上したことに基づくと考えられる。
　＜試験例３：乾燥試薬の濡れ性・展開性評価＞
　１．塗布液の調製
　下記表３に記載の組成の塗布液４～１４を塗布液１と同様の手順で作製した。
　２．乾燥試薬の作製
　試験例１と同様にして１．で作製した塗布液４～１４を用いて乾燥試薬４～１４を作製した。
　３．評価方法１：接触角
　試験例１と同様にして接触角を測定した。結果を下記表３に併せて示す。
　４．評価方法２：
試験例１と同様にして透過率を測定した。結果を下記表３に併せて示す。なお、試薬を塗布していないセンサでの透過率は７６％であった。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000020
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000021
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000022
　乾燥試薬４～１３の接触角は、乾燥試薬１４の接触角よりも低く、糖アルコールの添加により、接触角が３０°未満となることがわかった。乾燥試薬において、水に対する接触角が低いことは、血液への濡れ性が高いことを意味する。ゆえに糖アルコールの添加により、乾燥試薬上での血液展開性が向上し、一層の検査の検出反応の迅速化を図ることができる。
　なお、水に対する接触角は、４０°未満であることが好ましく、２３～２９°であることがより好ましい。
　＜試験例４：偽発色の評価＞
　発色色素を用いた検出方法において、検出精度向上の観点から、偽発色は少ないほうが好ましい。そこで、スクラロースおよび糖アルコールを添加した場合の偽発色について評価した。
　１．試験液の調製
　下記表４－１に示す組成の試験液を調製した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000023
　２．評価方法（耐熱性：偽発色）
　上記試験液を６０℃オーブンで保管した。３時間後、６０時間後の発色を目視で確認した。
　結果を下記表４－２に載せる。偽発色があったものを「有」、なかったのもの「無」と記載する。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000024
　上記結果より、糖アルコールを添加した試験液１６～２０、トレハロースを添加した試験液２２、およびスクロースを添加した試験液２３では、３時間後では偽発色は生じなかった。なお、糖アルコールではないコハク酸二ナトリウムを添加した試験液２１では、製造直後に白沈が生じた。
　＜試験例５：血液展開性および劣化評価＞
　１．塗布液および乾燥試薬の調製
　下記組成の塗布液２４～３１を塗布液１の調製と同様にして調製した。
　２．評価方法－１（血液展開性の評価）
　「血液展開性」とは、血糖値測定センサ内において、試薬層の第一端部側から第二端部側に向かって流入する血液が、試薬の上部に存在する空間に流入して、血液と血糖値測定試薬とが均一に混合・溶解することを指す。更には、「血糖値測定センサに流入した血液の展開性が良い」とは、流路を第一端部側から第二端部側に向かって流動する血液と、血糖値測定試薬とが混合・溶解する際に、血液の流動状態が乱れたりせず、所定の範囲内の速度で血糖値測定試薬と溶解しながら第二端部まで進むことをいう。「血液の流動状態が乱れない」とは、流路断面において、流入する血液の先端が均一に流路内を進むことを含む。
　（１）血糖値測定センサの作製
　以下のようにして図５に示される血糖計センサ（血糖値測定センサ）を作製した。まず、ステージ上に載置されたポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）フィルム（製造会社名：東レ株式会社、商品名：ルミラーＴ６０、厚み１８８μｍ、８ｍｍ×８０ｍｍ）上に（図５Ａ中の「試薬塗布面３」側に）、調製した塗布液１、７、１４および２４～３３のそれぞれ３．１５μＬをインクジェット（マイクロジェット社製、Ｌａｂｏｊｅｔ－５００Ｂｉｏ）を用いて、±５～８μｍ以内のパターニング精度および１ｐＬ～１０００ｐＬの吐出液量のヘッドで塗布し、２５℃で１０分間乾燥することにより、試薬層をＰＥＴフィルムに形成した（試薬層付ＰＥＴ）。この試薬層付ＰＥＴを所定の大きさ（８ｍｍ×１．６ｍｍ）に切り出してフィルム片（図５Ａ中の「フィルム片２」）を作製した。このフィルム片には、１個あたり０．０６３μＬの塗布液が塗布されていた。血糖値測定センサ１個あたりの試薬質量（塗布液として０．０６３μＬ）は、塗布液を調製する際に添加した各試薬成分の組成（質量）と、調製した試薬液の最終容量（７３１．３μＬ）及び、試薬層付ＰＥＴから作成したフィルム片２の個数から、算出できる。例えば、塗布液１を塗布したフィルム片は、１個あたり、２．４μｇのテトラゾリウム塩１（発色色素）、０．７μｇの酢酸亜鉛（遷移金属化合物）、０．３μｇの亜硝酸ナトリウム、２．９μｇのスクラロース、０．２μｇのソルビトール（糖アルコール）、０．７μｇのＦＡＤ－ＧＤＨ（酸化還元酵素）、２．６μｇのＮｏｎｉｄｅｔ（溶血剤）を乾燥試薬の形態で含む。
　第２基材としての親水処理ポリエステルフィルム（３Ｍ社製、商品名：親水処理ポリエステルフィルム９９０１Ｐ、厚み：１００μｍ）（図５Ａ中の「ポリエステルフィルム５」）の両側に、両面テープ（製造会社名：日東電工、商品名：５６０５ＢＮ、厚み：５０μｍ）（図５Ａ中の「両面テープ４」）をスペーサ及び接着部として設けた（センサ土台）。このセンサ土台に、上記にて作製したフィルム片（図５Ａ中の「フィルム片２」）を、試薬層（図５Ａ中の「試薬塗布面３」）がセンサ土台と対向し、かつ、流路（図５Ａ中の「流路６」）の中心となるように貼り付けた。フィルム片を貼り付ける際には、フィルム片が両面テープに所定量埋め込まれるように押圧した。さらに、フィルム片が貼り付けられたセンサ土台に、親水処理ポリエステルフィルムに両面テープ（製造会社名：３Ｍ社、商品名：ポリエステルフィルム基材、両面粘着テープ９９６５、厚み：８０μｍ）が貼り付けられたフィルム片（図５Ａ中の「ポリエステルフィルム７」）を被せて、血糖計センサ（血糖値測定センサ）を作製した。
　作製した血糖計センサ（血糖値測定センサ）は、流路部と測定部（試薬部）とを有する。図５Ｂ中の流路部において、流路長さ（図５Ｂ中の「Ｌ１」）は９ｍｍであり、幅（図５Ｂ中の「Ｗ」）は１．１ｍｍであり、厚み（図５Ｂ中の「ｔ１」）は０．１３ｍｍであった。図５Ｂ中の測定部において、試薬長さ（図５Ｂ中の「Ｌ２」）は１．６ｍｍであり、幅（図５Ｂ中の「Ｗ」）は１．１ｍｍであり、厚み（図５Ｂ中の「ｔ２」）は０．０５ｍｍであった。
　なお、流路部におけるセンサ厚み方向に対して直交する方向（流路長手方向）の長さＬ１としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、５～１０ｍｍが好ましい。ここで、長さＬ１は、長いと、成分測定装置への装着（挿入）が容易となる点、および光学測定部への外乱光の進入が減少するという点で有利である。長さＬ１が短いと、検体量を少なくできる点で有利となる。よって、成分測定装置への装着（挿入）のしやすさ、外乱光の影響、及び検体量のバランスを考慮して、長さＬ１の上限と下限が決定される。試薬部における流路のセンサ厚み方向に対して直交する方向（流路長手方向）の長さＬ２としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、１～４ｍｍが好ましい。ここで、長さＬ２は、長い方が、照射スポットの面積を長さ方向に大きく取れるため、精度良く測定ができる点で有利であるが、短い方が、検体量を少なくできる点で有利となる。よって、測定精度と検体量とのバランスを考慮して、長さＬ２の上限と下限が決定される。
　（２）血液展開性評価
　調製した血液（全血、ヘマトクリット値（Ｈｔ）６０）１ｍｍ３を、作製した血糖値測定センサに点着し、目視で下記評価基準により血液展開性評価を行った。なお、環境温度は２５℃で行った。
　＜＜評価基準＞＞
◎：全領域にすぐに血液検体が広がった、
○：中央の測定範囲にはすぐに広がったが、全領域に広がるのにやや時間がかかった。
△：中央の測定範囲にはすぐに広がったが、全領域に広がるのに時間がかかった。
　３．評価方法－２（劣化試験）
　作成した血糖値測定センサをアルミ包装に収めた後、６０℃±１℃の恒温恒湿槽（ヤマト科学社製）に保存した。３日間経過後、血糖値測定センサを恒温恒湿槽から取り出し、乾燥試薬の偽発色および着色を評価した。評価は、６０５ｎｍの波長における吸光度を測定し、２５℃で３日間保存した血糖値測定センサ（ブランク値）に対する吸光度上昇で評価した。
　＜＜評価基準＞＞
◎：６０℃保存後の吸光度は、ブランク値に対して０．０３未満
〇：６０℃保存後の吸光度は、ブランク値に対して０．０３以上０．０７未満
△：６０℃保存後の吸光度は、ブランク値に対して０．０７以上０．１５未満
×：６０℃保存後の吸光度は、ブランク値に対して０．１５を超える
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000025
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000026
　塗布液１４を用いた乾燥試薬１４と、塗布液７を用いた乾燥試薬７との比較により、糖アルコールの添加により、血液展開性が向上することがわかる。これは、上記で確認したように、全血の濡れ性が向上するためであると考えられる。また、塗布液２８と２９との比較により、スクラロースに対する糖アルコール比率が１４％以上である塗布液２８を用いた乾燥試薬２８のほうが、塗布液２９を用いた乾燥試薬２９よりも血液展開性が良好であることがわかる。
　＜試験例６：血糖計センサでの評価＞
　血液（全血、ヘマトクリット値（Ｈｔ）４０）に、高濃度のグルコース溶液（４０ｇ／ｄＬ）を添加して、グルコース濃度（ＢＧ）が１００ｍｇ／ｄＬの血液検体（ＢＧ１００）、２００ｍｇ／ｄＬの血液検体（ＢＧ２００）、４００ｍｇ／ｄＬの血液検体（ＢＧ４００）および５５０ｍｇ／ｄＬの血液検体（ＢＧ５５０）を調製した。また、対照として、血液（全血、ヘマトクリット値（Ｈｔ）４０）に、グルコース分解酵素を添加して、グルコース濃度（ＢＧ）が０ｍｇ／ｄＬの血液検体（ＢＧ０）を調製した。
　上記試験例５で作製した血糖値測定センサ（塗布液として塗布液１を用いた）の流路入口に、ＢＧ０、ＢＧ１００、ＢＧ２００、ＢＧ４００およびＢＧ５５０に調整した血液を点着した。各検体を試薬部に点着してから９秒後に、ファイバー分光光度計を用いて６０５ｎｍでの吸光度を測定した。結果を図７に示す。図７は各サンプルを血糖値測定センサで測定した際のグルコース濃度と、ホルマザンおよびＮｉ２＋のキレート化合物の極大吸収波長（６０５ｎｍ）における吸光度との関係を示すグラフである。
　図７に示されるように、吸光度とグルコース濃度とは直線関係（比例関係）を示す。これから、本開示のセンサを用いることにより、吸光度に基づき血糖値を正確に測定できることが考察される。
　これらのことから、本開示の試薬（血糖値測定センサ）に全血の溶血試料を適用して発色量を測定し、当該発色量に基づいて検量線を作製することにより、全血試料中の生体成分の濃度を正確に算出できる。
　本出願は、２０２１年１２月１３日に出願された日本特許出願番号２０２１－２０１６４６に基づいており、その開示内容は、参照され、全体として、組み入れられている。
　　１　　試薬リボン、
　　２　　フィルム片、
　　３　　試薬塗布面、
　　４　　両面テープ、
　　５　　ポリエステルフィルム、
　　６　　流路、
　　７　　ポリエステルフィルム、
　　１０　　血糖計、
　　１２　　測定用センサ、
　　１４　　測定部、
　　１６　　装置本体、
　　１８　　センサ本体部、
　　２０　　空洞部、
　　２０ａ　　先端口部、
　　２０ｂ　　基端口部、
　　２２　　長辺、
　　２２ａ　　上側長辺、
　　２２ｂ　　下側長辺、
　　２４　　短辺、
　　２４ａ　　先端辺、
　　２４ｂ　　基端辺、
　　２６　　試薬、
　　２８　　測定対象部、
　　３０　　板片、
　　３２　　スペーサ、
　　４０　　筺体、
　　４２　　制御部、
　　４４　　箱体部、
　　４６　　測光部、
　　４８　　電源ボタン、
　　５０　　操作ボタン、
　　５２　　ディスプレイ、
　　５４　　イジェクトレバー、
　　５６　　イジェクトピン、
　　５６ａ　　棒部、
　　５６ｂ　　受部、
　　５８　　挿入孔、
　　５８ａ　　挿入開口部、
　　５９　　測定用孔部、
　　６０　　センサ装着部、
　　６０ａ　　フランジ部、
　　６２　　壁部、
　　６４　　素子収容空間、
　　６６　　導光部、
　　６８　　発光素子、
　　７０　　発光部、
　　７２　　受光素子、
　　７４　　受光部、
　　７６　　コイルバネ。

Claims (10)

  1. 　発色色素、酸化還元酵素、溶血剤、および低分子の塩化合物を含み、
    　さらに、スクラロースを含む、生体成分濃度測定試薬。
  2. 　前記塩化合物が遷移金属塩および無機塩からなる群から選択される少なくとも１種である、請求項１に記載の生体成分濃度測定試薬。
  3. 　前記無機塩が亜硝酸塩である、請求項２に記載の生体成分濃度測定試薬。
  4. 　前記低分子の塩化合物に対する前記スクラロースの含有質量比が、１～１０である、請求項１または２に記載の生体成分濃度測定試薬。
  5. 　さらに糖アルコールを含む、請求項１または２に記載の生体成分濃度測定試薬。
  6. 　前記糖アルコールは、ラクチトール、エリスリトール、ソルビトール、キシリトール、およびマンニトールからなる群から選択される少なくとも１種である、請求項５に記載の生体成分濃度測定試薬。
  7. 　前記スクラロースに対する前記糖アルコールのモル比率が１０％以上である、請求項５に記載の生体成分濃度測定試薬。
  8. 　全血試料を、請求項１または２に記載の生体成分濃度測定試薬と接触させて、発色量を測定し、当該発色量に基づいて前記全血試料中の生体成分の濃度を定量することを有する、生体成分濃度の測定方法。
  9. 　前記生体成分が、グルコース、コレステロール、中性脂肪、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸（ＮＡＤＰＨ）、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤＨ）、または尿酸である、請求項８に記載の方法。
  10. 　反応部を有する、全血試料中の生体成分濃度を測定するためのセンサであって、
    　前記反応部は、請求項１または２に記載の生体成分濃度測定試薬を含む、センサ。
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