WO2024120457A1 - 一种吡咯并[3,2-d]嘧啶-4-酮类衍生物及其制备方法和医药用途 - Google Patents

一种吡咯并[3,2-d]嘧啶-4-酮类衍生物及其制备方法和医药用途 Download PDF

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WO2024120457A1
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赖英杰
王斌
乐晓亮
吴康
熊晓琳
韦庆祝
邢伟
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Shenzhen Salubris Pharmaceuticals Co Ltd
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Shenzhen Salubris Pharmaceuticals Co Ltd
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    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/519—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim ortho- or peri-condensed with heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D487/04—Ortho-condensed systems

Definitions

  • the present invention belongs to the technical field of chemical medicines and provides a series of myeloperoxidase (MPO) inhibitors.
  • MPO myeloperoxidase
  • the present invention also relates to pharmaceutical compositions containing these compounds and the use of the compounds in medicines for treating cardiovascular diseases.
  • MPO Myeloperoxidase
  • LDL low-density lipoprotein
  • MPO is considered to be the most promising cardiovascular marker. Increased MPO levels in the body indicate the risk of arteriosclerosis and coronary heart disease. It is an early warning of myocardial infarction and is more sensitive than other indicators such as troponin T, CK-MB and CRP, allowing for earlier diagnosis and risk assessment. MPO levels can increase significantly within 2 hours of chest pain onset, so for patients with chest pain, MPO will have more important clinical significance in diagnosing acute coronary syndrome (ACS).
  • ACS acute coronary syndrome
  • the present invention aims to discover new MPO inhibitors, especially new compounds with good biological properties that can be safely applied to the human body.
  • the present invention also provides the necessary tools for preventing and/or treating related diseases, especially cardiovascular-related diseases.
  • the present invention provides a series of pyrrolo[3,2-d]pyrimidin-4-one derivatives, preparation methods thereof and medical applications thereof.
  • the present invention provides compounds of formula (I) or stereoisomers, tautomers, pharmaceutically acceptable salts thereof, wherein all variables are as defined herein.
  • MPO myeloperoxidase
  • the present invention is implemented through the following technical solutions:
  • R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5 are independently selected from hydrogen, halogen, hydroxyl, amino, cyano, C 1-6 alkyl, C 1-6 alkoxy, alkoxyalkyl, cycloalkyl, aryl or heteroaryl, wherein aryl and heteroaryl may be optionally substituted by one or more independently selected from halogen, hydroxyl, cyano, carboxyl, C 1-6 alkyl, C 1-6 alkoxy, and halogenated C 1-6 alkyl;
  • X and Y are independently selected from O, CH 2 , and NR 6 ;
  • R 6 is independently selected from hydrogen, halogen, C 1-6 alkyl, C 2-6 alkenyl, C 1-6 alkoxy, alkoxyalkyl, cycloalkyl, hydroxy, amino, cyano, C 1-6 alkyl substituted with cyano, C 1-6 alkyl substituted with amino, halogenated C 1-6 alkyl, halogenated C 1-6 alkoxy, -(CH 2 ) n -C( ⁇ O)-R 7 , -(CH 2 ) n -C( ⁇ O)OR 8 , -(CH 2 ) n -NHC( ⁇ O)-R 9 ;
  • R 7 , R 8 , and R 9 are independently selected from hydrogen and C 1-6 alkyl;
  • n 0, 1, 2 or 3.
  • the compound is as shown in formula (II):
  • X, Y, R 1 and n are as defined above.
  • the alkyl group refers to a branched, unbranched and cyclic saturated hydrocarbon chain containing a specified number of carbon atoms, preferably a C1-6 alkyl group, and the C1-6 alkyl group is selected from methyl, ethyl, propyl, isopropyl, n-butyl, isobutyl, sec-butyl, tert-butyl, n-pentyl, sec-pentyl, 1-ethylpropyl, 2-methylbutyl, tert-pentyl, 1,2-dimethylpropyl, isopentyl, neopentyl, n-hexyl, isohexyl, sec-hexyl, tert-hexyl, neohexyl, 2-methylpentyl, 1,2-dimethylbutyl, and 1-ethylbutyl.
  • the C2-6 alkenyl is selected from vinyl, 1-propenyl, 2-propenyl, 1-methylvinyl, 1-butenyl, 2-butenyl, 3-butenyl, 1-methyl-1-propenyl, 2-methyl-1-propenyl, 1-methyl-2-propenyl, 2-methyl-2-propenyl, 1-pentenyl, 2-pentenyl, 3-pentenyl, 4-pentenyl, 1-methyl-1-butenyl, 2-methyl-1-butenyl, 3-methyl-1-butenyl, 1-methyl-2-butenyl, 2-methyl-2-butenyl, 3-methyl-2-butenyl, 1-methyl-3-butenyl, 2-methyl-3-butenyl, 1-methyl-3-pentenyl, 1-methyl-2-pentenyl, 2-methyl-2-pentenyl, 3-methyl-1-pentenyl, 4-methyl-1-pentenyl, 1-methyl-2-pentenyl, 2-methyl-2-pentenyl, 3-methyl-1-pentenyl, 4-
  • the alkoxy group refers to an alkyl ether free radical, preferably a C 1-6 alkoxy group, and the C 1-6 alkoxy group is selected from methoxy, ethoxy, propoxy, isopropoxy, n-butoxy, isobutoxy, sec-butoxy, tert-butoxy, n-pentoxy, sec-pentoxy, 1-ethylpropoxy, 2-methylbutoxy, tert-pentoxy, 1,2-dimethylpropoxy, isopentyl, neopentyl, n-hexyl, isohexyl, sec-hexyl, tert-hexyl, neohexyl, 2-methylpentyl, 1,2-dimethylbutoxy, and 1-ethylbutoxy.
  • the alkoxyalkyl group refers to an alkyl group in which one or more hydrogen atoms are substituted by an alkoxy group, preferably selected from C1-4 alkoxy C1-4 alkyl, and further selected from methoxymethyl, methoxyethyl, methoxypropyl, methoxybutyl, ethoxymethyl, ethoxyethyl, ethoxypropyl, ethoxybutyl, propoxymethyl, propoxyethyl, propoxypropyl, propoxybutyl, butoxymethyl, butoxyethyl, butoxypropyl, butoxybutyl and the like.
  • the halogen is selected from fluorine, chlorine, bromine and iodine
  • the halogenated C 1-6 alkyl group refers to a C 1-6 alkyl group in which one or more hydrogen atoms are replaced by halogen
  • the halogenated C 1-6 alkoxy group refers to a C 1-6 alkoxy group in which one or more hydrogen atoms are replaced by halogen.
  • the cyano-substituted C 1-6 alkyl group refers to a C 1-6 alkyl group in which one or more hydrogen atoms are replaced by a cyano group
  • the amino-substituted C 1-6 alkyl group refers to a C 1-6 alkyl group in which one or more hydrogen atoms are replaced by an amino group.
  • the aryl group is selected from phenyl; the heteroaryl group is selected from 5- to 12-membered heteroaryl groups; the 5- to 12-membered heteroaryl groups are selected from
  • the "alkylene group” refers to an alkyl group which can be independently substituted by 0 to 2 substituents when the valence permits, the cyano group refers to the group -CN, the hydroxyl group refers to the group -OH, and the sulfone group refers to the group -SO 2 .
  • the cycloalkane is selected from C 3-6 cycloalkyl
  • the C 3-6 cycloalkyl is selected from cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl and cyclohexyl.
  • the compound or its stereoisomer, tautomer, pharmaceutically acceptable salt is as shown in formula (I), wherein: R 1 is selected from hydrogen or chlorine;
  • R 2 , R 3 , and R 5 are selected from hydrogen
  • R4 is selected from hydrogen, methyl, methoxy
  • X is O, CH 2 , N—CH 3 , NC( ⁇ O)—O—CH 2 —CH 3 ;
  • Y is O, CH 2 , or N—CH 3 ;
  • n 0, 1, or 2.
  • the compound or its pharmaceutically acceptable salt is selected from the following compounds:
  • the compound or its pharmaceutically acceptable salt is selected from the following compounds:
  • the pharmaceutically acceptable salt refers to a salt prepared from a compound and a pharmaceutically acceptable acid or base.
  • one or more hydrogen atoms in the compound are substituted by isotopes, preferably by deuterium.
  • Another object of the present invention is to provide a pharmaceutical composition, comprising the aforementioned compound of formula (I), or its stereoisomers, tautomers, pharmaceutically acceptable salts and one or more pharmaceutically acceptable carriers.
  • Another object of the present invention is to provide the medical use of the compound of formula (I), or its stereoisomers, tautomers, and pharmaceutically acceptable salts, specifically, the use of the compound of formula (I) in the preparation of drugs for treating and/or preventing MPO enzyme-related diseases, specifically, the use of drugs for cardiovascular-related diseases.
  • pharmaceutically acceptable salt refers to salts of the compounds of the present invention, which are prepared from the compounds having specified substituents discovered in the present invention and pharmaceutically acceptable acids or bases.
  • compounds provided by the present invention also exist in prodrug form.
  • Prodrugs of compounds described herein easily undergo chemical changes under physiological conditions to be converted into compounds of the present invention.
  • prodrugs can be converted to compounds of the present invention by chemical or biochemical methods in an in vivo environment.
  • Certain compounds of the present invention may exist in unsolvated forms as well as solvated forms, including hydrated forms.
  • the solvated forms are equivalent to the unsolvated forms and are encompassed within the scope of the present invention.
  • the compounds of the present invention may exist in specific geometric or stereoisomeric forms.
  • the present invention contemplates all such compounds, including cis and trans isomers, (-)- and (+)-enantiomers, (R)- and (S)-enantiomers, diastereomers, (D)-isomers, (L)-isomers, and racemic mixtures and other mixtures thereof, such as enantiomerically or diastereomerically enriched mixtures, all of which are within the scope of the present invention.
  • Additional asymmetric carbon atoms may be present in substituents such as alkyl. All of these isomers and their mixtures are included within the scope of the present invention.
  • Optically active (R)- and (S)-isomers can be prepared by chiral synthesis or chiral reagents or other conventional techniques. If one enantiomer of a compound of the invention is desired, it can be prepared by asymmetric synthesis or derivatization with a chiral auxiliary, wherein the resulting diastereomeric mixture is separated and the auxiliary group is cleaved to provide the pure desired enantiomer.
  • diastereomeric salts are formed with an appropriate optically active acid or base, followed by diastereomeric resolution by conventional methods known in the art, and then the pure enantiomer is recovered.
  • the separation of enantiomers and diastereomers is usually accomplished by using chromatography, which employs a chiral stationary phase and is optionally combined with chemical derivatization (e.g., carbamate formation from an amine).
  • the atom of the compound of the present invention molecule is an isotope, and isotope derivatization can generally extend the half-life, reduce the clearance rate, stabilize metabolism and improve the effects of in vivo activity. And, include an embodiment, wherein at least one atom is replaced by an atom with the same atomic number (proton number) and different mass numbers (protons and neutrons).
  • the example of the isotope included in the compound of the present invention includes hydrogen atom, carbon atom, nitrogen atom, oxygen atom, phosphorus atom, sulfur atom, fluorine atom, chlorine atom, which includes 2 H, 3 H, 13 C, 14 C, 15 N, 17 O, 18 O, 31 P, 32 P, 35 S, 18 F, 36 Cl respectively.
  • the radioactive isotope such as 3 H or 14 C that emits radiation with its decay can be used for local anatomy inspection of pharmaceutical preparations or compounds in vivo.
  • Stable isotopes neither decay or change with their amount, nor have radioactivity, so they can be used safely.
  • the isotopes can be converted according to a common method by replacing the reagent used in the synthesis with a reagent containing the corresponding isotope.
  • the compounds of the present invention may contain unnatural proportions of atomic isotopes on one or more of the atoms constituting the compounds.
  • compounds may be labeled with radioactive isotopes, such as deuterium ( 2H ), iodine-125 ( 125I ) or C-14 ( 14C ). All isotopic changes in the compounds of the present invention, whether radioactive or not, are included within the scope of the present invention.
  • one or more hydrogen atoms of the compounds of the present invention are replaced by the isotope deuterium ( 2H ).
  • the compounds of the present invention After deuteration, the compounds of the present invention have the effects of extending half-life, reducing clearance rate, stabilizing metabolism and improving in vivo activity.
  • the preparation method of the isotopic derivative generally includes: a phase transfer catalytic method.
  • a preferred deuteration method uses a phase transfer catalyst (e.g., tetrabutylammonium bromide, TBAB).
  • a phase transfer catalyst e.g., tetrabutylammonium bromide, TBAB.
  • deuterated silane e.g., triethyldeuterated monosilane
  • a Lewis acid such as aluminum trichloride using sodium deuterated borate in the presence of an acid (e.g., methanesulfonic acid).
  • pharmaceutically acceptable carrier refers to any formulation carrier or medium that can deliver an effective amount of the active substance of the present invention, does not interfere with the biological activity of the active substance, and has no toxic side effects on the host or patient.
  • Representative carriers include water, oil, vegetables and minerals, cream bases, lotion bases, ointment bases, etc. These bases include suspending agents, viscosity enhancers, transdermal enhancers, etc. Their preparations are well known to technicians in the field of cosmetics or topical drugs.
  • Remington The Science and Practice of Pharmacy, 21st Ed., Lippincott, Williams & Wilkins (2005), the contents of which are incorporated herein by reference.
  • excipient generally refers to carriers, diluents and/or vehicles required to formulate an effective pharmaceutical composition.
  • an "effective amount” or “therapeutically effective amount” refers to a sufficient amount of the drug or agent that is non-toxic but can achieve the desired effect.
  • an "effective amount” of an active substance in a composition refers to an amount that, when used in combination with another active substance in the composition, is sufficient to achieve the desired effect. The amount required for the desired effect.
  • the determination of the effective amount varies from person to person, depending on the age and general condition of the recipient and on the specific active substance. The appropriate effective amount in each case can be determined by a person skilled in the art based on routine tests.
  • active ingredient refers to a chemical entity that is effective in treating a target disorder, disease, or condition.
  • the compounds of the present invention can be prepared by a variety of synthetic methods well known to those skilled in the art, including the specific embodiments listed below, embodiments formed by combining them with other chemical synthesis methods, and equivalent substitutions well known to those skilled in the art. Preferred embodiments include but are not limited to the examples of the present invention.
  • FIG1 is a schematic diagram of the single crystal structure of 6A hydrochloride in Example 6.
  • NMR nuclear magnetic resonance
  • MS mass spectrometry
  • ⁇ NMR shifts ( ⁇ ) are given in units of 10 -6 (ppm).
  • NMR measurements were performed using a Bruker AVANCE-III NMR spectrometer, with deuterated dimethyl sulfoxide (DMSO-d 6 ) and deuterated chloroform (CDCl 3 ) as solvents and tetramethylsilane (TMS) as the internal standard.
  • DMSO-d 6 deuterated dimethyl sulfoxide
  • CDCl 3 deuterated chloroform
  • TMS tetramethylsilane
  • MS was determined using an ISQ EC mass spectrometer (manufacturer: Thermo, model: ISQ EC).
  • HPLC High performance liquid chromatography
  • the CombiFlash rapid preparation instrument uses CombiFlash Rf+LUMEN (TELEDYNE ISCO).
  • the thin layer chromatography silica gel plate uses Yantai Yinlong HSGF 254 or GF 254 silica gel plate.
  • the silica gel plate used in thin layer chromatography (TLC) adopts a specification of 0.17mm-0.23mm, and the specification used for thin layer chromatography separation and purification products is 0.4mm-0.5mm.
  • Silica gel column chromatography generally uses Rushan Shangbang silica gel 100-200 mesh silica gel as the carrier.
  • Reagents NaBH 3 - sodium borohydride, EtOH-ethanol, NaOAc-sodium acetate, toluene-toluene, rt-room temperature, NaCO 3 -sodium carbonate, MeOH-methanol, AcOH-acetic acid, AcONa-sodium acetate, H 2 SO 4 -sulfuric acid, NaOH-sodium hydroxide, CS 2 CO 3 -cesium carbonate, TEMPO-2,2,6,6,-tetramethylpiperidinoxide, TMSN 3 -azidotrimethylsilane, ACN-acetonitrile, NaBH 3 CN-sodium cyanoborohydride, p-TsOH-p-toluenesulfonic acid, NaH-sodium hydride, THF-tetrahydrofuran, CH 3 I-iodomethane, Acetone-acetone, CCL 4 -carbon tetrachloride, NBS-
  • Step A Synthesis of ethyl 3-(5-bromo-2-chlorophenyl)acrylate
  • Step B Synthesis of 2-bromo-4-chlorophenylethyl-2-methylpropane-2-sulfenamide
  • reaction solution was added with 25 ml of water, extracted with dichloromethane (20 ml x 2), and the combined organic phases were washed with aqueous NaHCO 3 solution, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered, and spin-dried. Without further purification, 1.5 g of tert-butyl (7-bromo-4-chloro-2,3-dihydro-1H-inden-1-yl) carbamate was obtained (yield: 97%).
  • Step G Synthesis of tert-butyl (7-bromo-4-chloro-2,3-dihydro-1H-inden-1-yl) (tert-butyloxycarbonyl) carbamate
  • tert-Butyl (7-bromo-4-chloro-2,3-dihydro-1H-inden-1-yl) carbamate (1.5 g, 4.32 mmol), di-tert-butyl dicarbonate (1.89 g, 8.65 mmol) and 4-dimethylaminopyridine (1.05 g, 8.65 mmol) were dissolved in dimethyltetrahydrofuran (15 ml) and reacted at 55° C. for 4 hours.
  • Step H Synthesis of tert-butyl(tert-butyloxycarbonyl)(4-chloro-7-vinyl-2,3-dihydro-1H-inden-1-yl)carbamate
  • Step I Synthesis of tert-butyl(tert-butyloxycarbonyl)(4-chloro-7-formyl-2,3-dihydro-1H-inden-1-yl)carbamate
  • Step J Synthesis of methyl 3-(((3-(bis(tert-butyloxycarbonyl)amino)-7-chloro-2,3-dihydro-1H-inden-4-yl)methyl)amino)-1H-pyrrole-2-carboxylate
  • Step K Synthesis of tert-butyl(tert-butyloxycarbonyl)(4-chloro-7-((4-oxo-2-thioxo-2,3,4,5-tetrahydro-1H-pyrrolo[3,2-d]pyrimidin-1-yl)methyl)-2,3-dihydro-1H-inden-1-yl
  • the anhydrous methanol in the reaction solution was dried by spin drying.
  • the mixture was extracted with 20 ml of water and ethyl acetate (20 ml x 2), and the combined organic phases were dried over anhydrous sodium sulfate, filtered, and dried by spin drying.
  • the obtained residue was purified by reverse phase column (eluent: 0.1% aqueous ammonia solution) to obtain 700 mg of tert-butyl (tert-butyloxycarbonyl) (4-chloro-7-((4-oxo-2-thioxo-2,3,4,5-tetrahydro-1H-pyrrolo[3,2-d]pyrimidin-1-yl)methyl)-2,3-dihydro-1H-inden-1-yl (yield: 76%).
  • Step L Synthesis of 1-((3-amino-7-chloro-2,3-dihydro-1H-inden-4-yl)methyl)-2-thioxo-1,2,3,5-tetrahydro-4H-pyrrolo[3,2-d]pyrimidin-4-one
  • reaction solution was added with 10 ml of water and extracted with dichloromethane (10 ml x 2).
  • dichloromethane (10 ml x 2).
  • the combined organic phases were washed with aqueous NaHCO 3 solution, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered, and spin-dried.
  • Step D Synthesis of tert-butyl (4-bromo-7-chloro-2,3-dihydrobenzofuran-3-yl)carbamate
  • Step E Synthesis of tert-butyl (4-bromo-7-chloro-2,3-dihydrobenzofuran-3-yl)(tert-butoxycarbonyl)carbamate
  • tert-butyl (4-bromo-7-chloro-2,3-dihydrobenzofuran-3-yl)carbamate (1.2 g, 3.45 mmol) was dissolved in dichloromethane (20 ml), and (Boc)2O (1.5 g, 6.9 mmol) and DMAP (0.84 g, 6.9 mmol) were added and stirred at room temperature for 12 hours.
  • Step F Synthesis of (tert-butyl(tert-butyloxycarbonyl)(7-chloro-4-vinyl-2,3-dihydrobenzofuran-3-yl)carbamate
  • Step G Synthesis of tert-butyl(tert-butoxycarbonyl)(7-chloro-4-formyl-2,3-dihydrobenzofuran-3-yl)carbamate
  • Step H Synthesis of ethyl 3-(((3-(bis(tert-butoxycarbonyl)amino)-7-chloro-2,3-dihydrobenzofuran-4-yl)methyl)amino)-1H-pyrrole-2-carboxylate
  • Step I Synthesis of tert-butyl (7-chloro-4-((4-oxo-2-thioxo-2,3,4,5-tetrahydro-1H-pyrrolo[3,2-d]pyrimidin-1-yl)methyl)-2,3-dihydrobenzofuran-3-yl)carbamate
  • the anhydrous methanol in the reaction solution was dried by spin drying.
  • the mixture was extracted with 20 ml of water and ethyl acetate (20 ml x 2), and the organic phases were combined and dried over anhydrous sodium sulfate, filtered, and dried by spin drying.
  • Step J Synthesis of 1-((3-amino-7-chloro-2,3-dihydrobenzofuran-4-yl)methyl)-2-thioxo-1,2,3,5-tetrahydro-4H-pyrrolo[3,2-d]pyrimidin-4-one
  • Step B Synthesis of tert-butyl (4-bromo-2,3-dihydrobenzofuran-3-yl)carbamate
  • Step C Synthesis of tert-butyl (4-bromo-2,3-dihydrobenzofuran-3-yl)(tert-butoxycarbonyl)carbamate
  • Step D Synthesis of tert-butyl (4-vinyl-2,3-dihydrobenzofuran-3-yl)carbamate
  • Step E Synthesis of tert-butyl (4-formyl-2,3-dihydrobenzofuran-3-yl)carbamate
  • tert-butyl (4-vinyl-2,3-dihydrobenzofuran-3-yl) carbamate (1.16 g, 3.21 mmol) was dissolved in a mixture of tetrahydrofuran (12 ml) and water (3 ml), potassium osmate (59 mg, 0.16 mmol) was added to the reaction solution, and after stirring at room temperature for 30 minutes, sodium periodate (2.08 g, 9.63 mmol) was added to the reaction solution, and the reaction was allowed to react at room temperature for 1.5 hours.
  • Step F Synthesis of ethyl 3-((3-(bis(tert-butoxycarbonyl)amino)-2,3-dihydrobenzofuran-4-ylmethyl)amino)-1H-pyrrole-2-carboxylate
  • Step G Synthesis of tert-butyl (4-(4-oxo-2-thioxo-2,3,4,5-tetrahydro-1H-pyrrolo[3,2-d]pyrimidin-1-yl)methyl)-2,3-dihydrobenzofuran-3-yl)carbamate
  • Step H Synthesis of 1-(3-amino-2,3-dihydrobenzofuran-4-yl)methyl)-2-thioxo-1,2,3,5-tetrahydro-4H-pyrrolo[3,2-d]pyrimidin-4-one
  • tert-butyl (4-(4-oxo-2-thioxo-2,3,4,5-tetrahydro-1H-pyrrolo[3,2-d]pyrimidin-1-yl)methyl)-2,3-dihydrobenzofuran-3-yl)carbamate (300 mg, 0.58 mmol) was dissolved in DCM (20 ml), 1,4-dioxane hydrochloride (4.38 ml, 17.5 mmol) was added, and the reaction was carried out at room temperature for 12 hours.
  • 5-Bromo-8-chlorochroman-4-one (1 g, 3.82 mmol) was dissolved in EtOH (10 ml) at room temperature, and AcONH 4 (2.95 g, 38.2 mmol) and NaBH 3 CN (1.2 g, 19.1 mmol) were added, and the mixture was stirred at 100° C. for 16 h.
  • Step D Synthesis of tert-butyl (5-bromo-8-chlorochroman-4-yl) carbamate
  • Step E Synthesis of tert-butyl (5-bromo-8-chlorochroman-4-yl) (tert-butoxycarbonyl) carbamate
  • 5-Bromo-8-chlorochroman-4-amine (1.2 g, 3.31 mmol) was dissolved in 2-MeTHF (15 ml) at room temperature, and DMAP (0.808 g, 6.62 mmol) and (Boc) 2 O (1.44 g, 6.62 mmol) were added. The mixture was heated to 50° C. and stirred for 16 hours.
  • Step F Synthesis of tert-butyl(tert-butoxycarbonyl)(8-chloro-5-vinylchroman-4-yl)carbamate
  • Step G Synthesis of tert-butyl(tert-butoxycarbonyl)(8-chloro-5-formylchroman-4-yl)carbamate
  • tert-Butyl(tert-butoxycarbonyl)(8-chloro-5-vinylchroman-4-yl)carbamate (1 g, 2.44 mmol) was dissolved in THF/H 2 O (30 ml/6 ml) at room temperature, K 2 OsO 4 (90 mg, 0.244 mmol) and NaIO 4 (2.087 g, 9.785 mmol) were added, and the mixture was stirred at room temperature for 1 hour.
  • Step H Synthesis of ethyl 3-(((4-(bis(tert-butoxycarbonylamino)-8-chlorochroman-5-yl)methyl)amino)-1H-pyrrole-2-carboxylate
  • ethyl 3-amino-1H-pyrrole-2-carboxylate hydrochloride (277 mg, 1.457 mmol) was dissolved in anhydrous MeOH (10 ml), and DIEA (188 mg, 1.457 mmol) and AcOH (87 mg, 1.457 mmol) were added.
  • DIEA 188 mg, 1.457 mmol
  • AcOH 87 mg, 1.457 mmol
  • Tert-butyl (tert-butoxycarbonyl) (8-formyl-1,2,4-tetrahydronaphthalen-1-yl) carbamate (500 mg, 1.214 mmol) was added, and the mixture was stirred at room temperature for 1 hour.
  • NaBH 3 CN 9 mg, 1.457 mmol was added, and the mixture was stirred at room temperature for 1 hour.
  • Step I tert-Butyl(tert-butoxycarbonyl)(8-chloro-5-((4-oxo-2-thioxo-2,3,4,5-tetrahydro-1H-pyrrolo[3,2-d]pyrimidin-1-yl)methyl)pyran-4-yl)carbamate
  • Step J Synthesis of 1-((4-amino-8-chlorochroman-5-yl)methyl)-2-thioxo-1,2,3,5-tetrahydro-4H-pyrrolo[3,2-d]pyrimidin-4-one
  • tert-butyl(tert-butoxycarbonyl)(8-chloro-5-((4-oxo-2-thioxo-2,3,4,5-tetrahydro-1H-pyrrolo[3,2-d]pyrimidin-1-yl)methyl)pyran-4-yl)carbamate 240 mg, 0.426 mmol
  • DCM DCM
  • hydrochloric acid 1.1 mg, 4.26 mmol, 4 M in dioxane
  • 5-Bromo-4-chromanone (4.4 g, 19.37 mmol) was dissolved in anhydrous methanol (44 ml) and isopropanol (55 ml), and ammonium acetate (29.87 g, 387 mmol) and sodium cyanoborohydride (6.08 g, 96.85 mmol) were added, and the mixture was refluxed at 80°C for 12 hours.
  • Step B Synthesis of tert-butyl (5-bromo-4-chroman-amine) carbamate
  • reaction solution was added with 20 ml of water, extracted with dichloromethane (20 ml x 2), and the combined organic phases were washed with an aqueous solution of NaHCO 3 , dried over anhydrous sodium sulfate, filtered, and spin-dried.
  • Step C Synthesis of tert-butyl (5-bromo-4-chroman)(tert-butoxycarbonyl) carbamate
  • Step D Synthesis of tert-butyl (5-vinyl-4-chroman)(tert-butoxycarbonyl) carbamate
  • Step E Synthesis of tert-butyl (5-formyl-4-chroman)(tert-butoxycarbonyl)carbamate
  • Step F Synthesis of ethyl 3-(((4-(bis(tert-butoxycarbonyl)amino)pyran-5-yl)methyl)amino)-1H-pyrrole-2-carboxylate
  • 3-Amino-2-ethoxycarbonylpyrrole hydrochloride (333 mg, 1.75 mmol) was dissolved in 6 ml of anhydrous ethanol, and then N,N-diisopropylethylamine (190 mg, 1.75 mmol) and glacial acetic acid (270 mg, 4.74 mmol) were added to the mixture. After stirring at room temperature for 10 minutes, tert-butyl (5-formyl-4-benzodihydropyran) (tert-butoxycarbonyl) carbamate (600 mg, 1.58 mmol) was added to the mixture. After stirring at room temperature for 2 hours, sodium cyanoborohydride (180 mg, 3.16 mmol) was added to the mixture, and the mixture was reacted at room temperature for 12 hours.
  • Step G Synthesis of tert-butyl(tert-butoxycarbonyl)(5-((4-oxo-2-thioxo-2,3,4,5-tetrahydro-1H-pyrrolo[3,2-d]pyrimidin-1-yl)methyl)chroman-4-yl)carbamate
  • the anhydrous methanol in the reaction solution was dried by spin drying.
  • the mixture was extracted with 20 ml of water and ethyl acetate (20 ml x 2), and the combined organic phases were dried over anhydrous sodium sulfate, filtered, and dried by spin drying.
  • Step H Synthesis of 1-((4-aminochroman-5-yl)methyl)-2-thioxo-1,2,3,5-tetrahydro-4H-pyrrolo[3,2-d]pyrimidin-4-one
  • Step A Synthesis of 8-bromo-1,2,3,4-tetrahydronaphthalene-1-amine
  • Step B Synthesis of tert-butyl (8-bromo-1,2,3,4-tetrahydronaphthalen-1-yl) carbamate
  • Step C Synthesis of methyl tert-butyl (8-bromo-1,2,3,4-tetrahydronaphthalen-1-yl) (tert-butoxycarbonyl) carbamate
  • Step D Synthesis of tert-butyl(tert-butoxycarbonyl)(8-vinyl-1,2,3,4-tetrahydronaphthalen-1-yl)carbamate
  • Methyl tert-butyl(8-bromo-1,2,3,4-tetrahydronaphthalen-1-yl)(tert-butoxycarbonyl)carbamate (220 mg, 0.52 mmol), potassium vinyl trifluoroborate (100 mg, 0.78 mmol), Pd(ppf)Cl 2 (36 mg, 0.05 mmol), K 2 CO 3 (200 mg, 1.56 mmol) were dissolved in anhydrous dioxane (10 mL) The mixture was stirred at 100°C for 12 hours.
  • Step E Synthesis of tert-butyl(tert-butoxycarbonyl)(8-formyl-1,2,4-tetrahydronaphthalen-1-yl)carbamate
  • tert-butyl(tert-butoxycarbonyl)(8-vinyl-1,2,3,4-tetrahydronaphthalen-1-yl)carbamate (30 mg, 0.08 mmol) was dissolved in anhydrous THF (5 ml), K 2 OsO 4 (5 mg, 0.01 mmol) was added, and after stirring at room temperature for 1 hour, NaIO 4 (136 mg, 0.64 mmol) was added, and stirred at room temperature for 1 hour.
  • Step F Synthesis of ethyl 3-((8-(bis(tert-butoxycarbonyl)amino)-5,6,7,8-tetrahydronaphthalen-1-yl)methyl)amino)-1H-pyrrole-2-carboxylate
  • tert-butyl (tert-butoxycarbonyl) (8-formyl-1,2,4-tetrahydronaphthalen-1-yl) carbamate (30 mg, 0.08 mmol) was dissolved in anhydrous MeOH (5 ml), and DIEA (20 mg, 0.1 mmol) and ACOH (6 mg, 0.1 mmol) were added.
  • DIEA 20 mg, 0.1 mmol
  • ACOH 6 mg, 0.1 mmol
  • ethyl 3-amino-1H-pyrrole-2-carboxylate 14 mg, 0.1 mmol
  • NaBH 3 (CN) (6 mg, 0.1 mmol) was added, and stirred at room temperature for 1 hour.
  • Step G tert-Butyl(tert-butoxycarbonyl)(8-((4-oxo-2-thioxo-2,3,4,5-tetrahydro-1H-pyrrolo[3,2-d]pyrimidin-1-yl)methyl)-1,2,3,4-tetrahydronaphthalen-1-yl)carbamate
  • Step H Synthesis of 1-((8-amino-5,6,7,8-tetrahydronaphthalen-1-yl)methyl)-2-thioxo-1,2,3,5-tetrahydro-4H-pyrrolo[3,2-d]pyrimidin-4-one
  • Step A Synthesis of compounds tert-butyl (R)(tert-butoxycarbonyl)(6-((4-oxo-2-thioxo-2,3,4,5-tetrahydro-1H-pyrrolo[3,2-d]pyrimidin-1-yl)methyl)-2,3,4.5-tetrahydrobenzo[b]oxypyrimidin-5-yl)carbamate and tert-butyl (S)(tert-butoxycarbonyl)(6-((4-oxo-2-thioxo-2,3,4,5-tetrahydro-1H-pyrrolo[3,2-d]pyrimidin-1-yl)methyl)-2,3,4.5-tetrahydrobenzo[b]oxypyrimidin-5-yl)carbamate
  • Step A Synthesis of compound 3-((4-(bis(tert-butyloxycarbonyl)amino)chroman-5-ylmethyl)amino)-4-methylpyrrole-2-carboxylic acid ethyl ester
  • Step B Synthesis of the compound tert-butyl (5-((7-methyl-4-oxo-2-thioxo-2,3,4,5-tetrahydro-1H-pyrrolo[3,2-d]pyrimidin-1-yl)methyl)chroman-4-yl)carbamate
  • Step C Synthesis of compound 1-(4-aminobenzopyran-5-yl)methyl)-7-methyl-2-thioxo-1,2,3,5-tetrahydro-4H-pyrrolo[3,2-d]pyrimidin-4-one hydrochloride
  • tert-butyl (5-((7-methyl-4-oxo-2-thioxo-2,3,4,5-tetrahydro-1H-pyrrolo[3,2-d]pyrimidin-1-yl)methyl)chroman-4-yl)carbamate (90 mg, 0.17 mmol) was dissolved in DCM (10 ml), hydrochloric acid-ethyl acetate (1.3 ml, 5 mmol) was added, and the mixture was reacted at room temperature for 12 hours. After the reaction was completed, dichloromethane was dried by spin drying.
  • Step B Synthesis of Compound tert-butyl (5-bromo-4-chroman-amine) carbamate
  • Step C Synthesis of the compound tert-butyl (5-bromo-4-chroman)(tert-butoxycarbonyl) carbamate
  • Step D Synthesis of the compound tert-butyl (5-vinyl-4-chroman)(tert-butoxycarbonyl) carbamate
  • reaction solution was cooled to room temperature, filtered with diatomaceous earth, the filtrate was collected, and then 100 ml of water was added, extracted with ethyl acetate (300 ml x 3), and the combined organic phases were washed with NaCl aqueous solution, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered, and spin-dried.
  • Step E Synthesis of tert-butyl (5-formyl-4-chroman)(tert-butoxycarbonyl)carbamate
  • Step F Synthesis of compound 3-(((4-(bis(tert-butoxycarbonyl)amino)pyran-5-yl)methyl)amino)-4-methoxy-1H-pyrrole-2-carboxylic acid ethyl ester
  • Step G Synthesis of the compound tert-butyl(tert-butoxycarbonyl)(5-((7-methoxy-4-oxo-2-thioxo-2,3,4,5-tetrahydro-1H-pyrrolo[3,2-d]pyrimidin-1-yl)methyl)pyran-4-yl)carbamate
  • Step H Synthesis of compound 1-((4-aminochroman-5-yl)methyl)-7-methoxy-2-thioxo-1,2,3,5-tetrahydro-4H-pyrrolo[3,2-d]pyrimidin-4-one hydrochloride
  • Example 18 In vitro evaluation of the inhibitory effect of the compounds of the present invention on human myeloperoxidase (hMPO) activity
  • Inhibition rate (%) [1-(Slope Control - Slope cpd )/Slope Control - Slope Blank )] * 100, where Slope Blank is the slope of the control without compound and MPO wells from 0 to 5 min (Ex/Em: 544/620nm reading/reaction time t); Slope Control is the slope of the well without compound (containing 1% DMSO) from 0 to 5 min (linear reaction stage); Slope cpd is the slope of the compound from 0 to 5 min.
  • SD rats male, 180-350 g, purchased from Zhejiang Weitonglihua Experimental Animal Technology Co., Ltd.
  • DMSO dimethyl sulfoxide
  • PEG-400 polyethylene glycol 400
  • normal saline acetonitrile
  • formic acid formic acid
  • propranolol internal standard
  • DMSO-PEG-400-normal saline 5:60:35, v/v/v
  • EDTA-K2 anticoagulant tubes 15min, 30min, 1h, 2h, 5h, 7h, and 24h (5min for iv group), centrifuge at 10000rpm for 2min, and freeze the plasma at -80°C for testing.
  • Mobile phase A water (0.1% formic acid)
  • mobile phase B acetonitrile
  • flow rate 0.5 mL/min
  • gradient elution gradient elution:
  • WinNonlin 6.1 software was used to calculate the pharmacokinetic parameters using the non-compartmental model method. The test results are shown in Table 2.
  • Williams'Medium E (without phenol red) was purchased from Sigma-Aldrich Trading Co., Ltd.; Williams'Medium E, human recombinant insulin, GlutaMAX and HEPES were purchased from Life Technologies; Isotonic Percoll was purchased from General Electric; Fetal bovine serum was purchased from Corning; dexamethasone is commercially available; CellTiter-Fluor TM Cell Viability Assay kit was purchased from Promega; Taqman Gene Expression Assay probe (20 ⁇ , CYP1A2, FAM labeled), Taqman Gene Expression Assay probe (20 ⁇ , CYP2B6, FAM labeled), Taqman Gene Expression Assay probe (20 ⁇ , CYP3A4, FAM labeled) and Taqman Gene Expression Assay probe (20 ⁇ , ACTB, VIC labeled) were purchased from AB (Applied biosystems); human primary hepatocytes were purchased from BioIVT.
  • test compound positive inducer, negative inducer, and internal standard to prepare the corresponding concentration of stock solution.
  • cell recovery solution and incubation solution, mRNA extraction, reverse transcription, and related reagents and consumables for fluorescence quantitative PCR.
  • the frozen primary human hepatocytes were revived and seeded on appropriate cell culture plates at a certain density for monolayer cell culture to meet the cell growth requirements.
  • Midazolam and testosterone were purchased from Cerilliant and PANPHY; ketoconazole was purchased from MCE; human liver microsomes were purchased from Corning.
  • the inhibitory potential of the compounds on the cytochrome P450 enzyme CYP3A was evaluated using a phosphate buffered saline (100mM, pH 7.4) system containing 0.2mg/mL human liver microsomes.
  • the test concentrations of the compounds were 0.068, 0.206, 0.62, 1.85, 5.56, 16.67 and 50 ⁇ M.
  • the positive substrates in the incubation system were 1 ⁇ M midazolam and 40 ⁇ M testosterone (CYP3A), respectively, and the concentration of the positive inhibitor ketoconazole (CYP3A) in the incubation system was 0.05 ⁇ M.
  • the incubation was carried out at 37°C, and the reaction was initiated by adding a NADPH solution with a final concentration of 1mM.
  • the incubation time was 10 minutes. After the incubation, all samples were added with 300 ⁇ L of acetonitrile solution containing 3% formic acid and internal standard (0.5 ⁇ M tolbutamide) to precipitate proteins and UPLC-MS/MS was used to detect the amount of metabolites generated by the labeled substrates, thereby calculating the IC 50 value of the compound inhibition.
  • IC50 values of the test compounds for inhibition of CYP3A are shown in the table below.

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Abstract

式（I）的化合物、其制备方法及其在医药上的应用。具体而言，提供式（I）的化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐，还涉及包含这些化合物的药物组合物以及使用该化合物治疗和/或预防心血管疾病的药物中的用途。这些化合物是髓过氧化物酶（MPO）的抑制剂。

Description

一种吡咯并[3,2-d]嘧啶-4-酮类衍生物及其制备方法和医药用途 技术领域
本发明属于化学药物技术领域，提供了一系列的髓过氧化物酶(MPO)的抑制剂。本发明还涉及包含这些化合物的药物组合物以及使用该化合物治疗心血管疾病的药物中的用途。
背景技术
髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)是高度敏感及特异的血管炎症介质指标，已成为心脑血管事件风险预测的重要指标。MPO可以通过催化氧化氯离子产生次氯酸在吞噬细胞内杀灭微生物，破坏多种靶物质，对机体产生和调节炎症反应等多方面发挥作用。更重要的是，其氧化修饰低密度脂蛋白(LDL)可引起动脉粥样硬化，因此MPO被认为与心血管疾病的发生有关。
目前，MPO被认为是最有前景的心血管标志物，体内MPO含量升高预示着有动脉硬化以及冠心病的风险，是心肌梗死的早期预警，比其他指标如肌钙蛋白T、CK-MB以及CRP更灵敏，更早地诊断和危险评估。在胸痛发生2h内MPO水平即可明显升高,所以，对于胸痛患者而言，MPO对于诊断急性冠脉综合征(ACS)将有更重要的临床意义。
因此，本发明意在发现新的MPO抑制剂，特别是具有良好的生物性能、能够被安全地应用到人体中的新化合物，本发明也提供用于预防和/或治疗涉及相关疾病、特别是心血管相关疾病的所需工具。
发明内容
本发明提供了一系列的吡咯并[3,2-d]嘧啶-4-酮类衍生物、其制备方法及其在医药上的应用。
具体而言，本发明提供式(I)的化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐，其中所有变量如本文所定义。
这些化合物是髓过氧化物酶(MPO)的抑制剂。本发明还涉及包含这些化合物的药物组合物以及使用该化合物预防和/或治疗心血管相关疾病的药物中的用途。
具体的，本发明通过以下技术方案来实现：
式(I)的化合物：
所述R1、R2、R3、R4、R5独立地选自氢、卤素、羟基、氨基、氰基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、烷氧烷基、环烷基、芳基或杂芳基，其中芳基和杂芳基可以任选被一个或多个独立地选自卤素、羟基、氰基、羧基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、和卤代C1-6烷基取代；
X、Y独立地选自O、CH2、NR6，R6独立地选自氢、卤素、C1-6烷基、C2-6烯基、C1-6烷氧基、烷氧烷基、环烷基、羟基、氨基、氰基、氰基取代的C1-6烷基、氨基取代的C1-6烷基、卤代C1-6烷基、卤代C1-6烷氧基、-(CH2)n-C(＝O)-R7、-(CH2)n-C(＝O)OR8、-(CH2)n-NHC(＝O)-R9；R7、R8、R9独立地选自氢、C1-6烷基；
n为0、1、2或3。
作为本发明的一种优选方案，所述化合物如式(II)所示：
其中：X、Y、R1、n如上定义。
作为本发明的一种优选方案，所述烷基是指包含指定数量的碳原子的分支的、不分支的和环状的饱和烃链，优选自C1-6的烷基，所述C1-6的烷基选自甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、仲戊基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、叔戊基、1,2-二甲基丙基、异戊基、新戊基、正己基、异己基、仲己基、叔己基、新己基、2-甲基戊基、1，2-二甲基丁基、1-乙基丁基。
作为本发明的一种优选方案，所述C2-6的烯基选自乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基、1-甲基乙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基、3-丁烯基、1-甲基-1-丙烯基、2-甲基-1-丙烯基、1-甲基-2-丙烯基、2-甲基-2-丙烯基、1-戊烯基、2-戊烯基、3-戊烯基、4-戊烯基、1-甲基-1-丁烯基、2-甲基-1-丁烯基、3-甲基-1-丁烯基、1-甲基-2-丁烯基、2-甲基-2-丁烯基、3-甲基-2-丁烯基、1-甲基-3-丁烯基、2-甲基-3-丁烯基、3-甲基-3-丁烯基、1，1-二甲基-2-丙烯基、1，2-二甲基-1-丙烯基、1，2-二甲基-2-丙烯基、1-乙基-1-丙烯基、1-乙基-2-丙烯基、1-己烯基、2-己烯基、3-己烯基、4-己烯基、5-己烯基、1-甲基-1-戊烯基、2-甲基-1-戊烯基、3-甲基-1-戊烯基、4-甲基-1-戊烯基、1-甲基-2-戊烯基、2-甲基-2-戊烯基、3-甲基-2-戊烯基、4-甲基-2-戊烯基、1-甲基-3-戊烯基、2-甲基-3-戊烯基、3-甲基-3-戊烯基、4-甲基-3-戊烯基、1-甲基-4-戊烯基、2-甲基-4-戊烯基、3-甲基-4-戊烯基、4-甲基-4-戊烯基、1，1-二甲基-2-丁烯基、1，1-二甲基-3-丁烯基、1，2-二甲基-1-丁烯基、1，2-二甲基-2-丁烯基、1，2-二甲基-3-丁烯基、1，3-二甲基-1-丁烯基、1，3-二甲基-2-丁烯基、1，3-二甲基-3-丁烯基、2，2-二甲基-3-丁烯基、2，3-二甲基-1-丁烯基、2，3-二甲基-2-丁烯基、2，3-二甲基-3-丁烯基、3，3-二甲基-1-丁烯基、3，3-二甲基-2-丁烯基、1-乙基-1-丁烯基、1-乙基-2-丁烯基、1-乙基-3-丁烯基、2-乙基-1-丁烯基、2-乙基-2-丁烯基、2-乙基-3-丁烯基、1，1，2-三甲基-2-丙烯基、1-乙基-1-甲基-2-丙烯基、1-乙基-2-甲基-1-丙烯基和1-乙基-2-甲基-2-丙烯基。
作为本发明的一种优选方案，所述烷氧基是指烷基醚自由基，优选自C1-6的烷氧基，所述C1-6的烷氧基选自甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、正戊氧基、仲戊氧基、1-乙基丙氧基、2-甲基丁氧基、叔戊氧基、1,2-二甲基丙氧基、异戊氧基、新戊氧基、正己氧基，异己氧基，仲己氧基，叔己氧基，新己氧基，2-甲基戊氧基，1，2-二甲基丁氧基，1-乙基丁氧基。
作为本发明的一种优选方案，所述烷氧烷基是指烷基一个以上的氢原子被烷氧基取代，优选自C1-4的烷氧C1-4的烷基，进一步选自甲氧甲基、甲氧乙基、甲氧丙基、甲氧丁基、乙氧甲基、乙氧乙基、乙氧丙基、乙氧丁基、丙氧甲基、丙氧乙基、丙氧丙基、丙氧丁基、丁氧甲基、丁氧乙基、丁氧丙基、丁氧丁基等。
作为本发明的一种优选方案，所述卤素选自氟、氯、溴、碘，卤代C1-6烷基指C1-6烷基一个以上的氢原子被卤素取代，卤代C1-6烷氧基指C1-6烷氧基一个以上的氢原子被卤素取代。
所述氰基取代的C1-6烷基指C1-6烷基一个以上的氢原子被氰基取代、氨基取代的C1-6烷基指C1-6烷基一个以上的氢原子被氨基取代。
作为本发明的一种优选方案，所述芳基选自苯基；所述杂芳基选自5至12元杂芳基，所述5至12元杂芳基选自
作为本发明的一种优选方案，所述的“亚烷基”，是指烷基在化合价容许时可独立地经0至2个独立地被取代基取代，所述氰基是指基团-CN，所述羟基是指基团-OH，所述砜基是指基团-SO2。
作为本发明的一种优选方案，所述环烷选自C3-6的环烷基，C3-6的环烷基选自环丙基、环丁基、环戊基、环己基。
作为本发明的一种优选方案，所述化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐如式(I)所示，其中：R1选自氢或氯；
R2、R3、R5选自氢；
R4选自氢、甲基、甲氧基；
X为O、CH2、N-CH3、N-C(＝O)-O-CH2-CH3；
Y为O、CH2、N-CH3；
n为0、1、2。
作为本发明的一种优选方案，所述化合物或其药学上可接受的盐，选自以下化合物：
作为本发明的一种优选方案，所述化合物或其药学上可接受的盐，选自以下化合物：


作为本发明的一种优选方案，所述药学上可接受的盐是指化合物与药学上可接受的酸或碱制备。
作为本发明的一种优选方案，所述化合物的一个以上的氢原子上被同位素所取代，优选被氘取代。
本发明另一目的提供了一种药物组合物，包括前述的式(I)的化合物，或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐和一种以上药学上可接受的载体。
本发明另一目的在于提供所述的式(I)的化合物，或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐的医药用途，具体地，在制备用于制备治疗和/或预防MPO酶相关疾病的药物用途，具体地，涉及心血管相关疾病的药物用途。
除非另有说明，本文所用的下列术语和短语旨在具有下列含义。一个特定的术语或短语在没有特别定义的情况下不应该被认为是不确定的或不清楚的，而应该按照普通的含义去理解。当本文中出现商品名时，意在指代其对应的商品或其活性成分。这里所采用的术语“药学上可接受的”，是针对那些化合物、材料、组合物和/或剂型而言，它们在可靠的医学判断的范围之内，适用于与人类和动物的组织接触使用，而没有过多的毒性、刺激性、过敏性反应或其它问题或并发症，与合理的利益/风险比相称。
术语“药学上可接受的盐”是指本发明化合物的盐，由本发明发现的具有特定取代基的化合物与药学上可接受的酸或碱制备。
除了盐的形式，本发明所提供的化合物还存在前药形式。本文所描述的化合物的前药容易地在生理条件下发生化学变化从而转化成本发明的化合物。此外，前体药物可以在体内环境中通过化学或生化方法被转换到本发明的化合物。
本发明的某些化合物可以以非溶剂化形式或者溶剂化形式存在，包括水合物形式。一般而言，溶剂化形式与非溶剂化的形式相当，都包含在本发明的范围之内。
本发明的化合物可以存在特定的几何或立体异构体形式。本发明设想所有的这类化合物，包括顺式和反式异构体、(-)-和(+)-对对映体、(R)-和(S)-对映体、非对映异构体、(D)-异构体、(L)-异构体，及其外消旋混合物和其他混合物，例如对映异构体或非对映体富集的混合物，所有这些混合物都属于本发明的范围之内。烷基等取代基中可存在另外的不对称碳原子。所有这些异构体以及它们的混合物，均包括在本发明的范围之内。
可以通过手性合成或手性试剂或者其他常规技术制备光学活性的(R)-和(S)-异构体，以及D和L异构体。如果想得到本发明某化合物的一种对映体，可以通过不对称合成或者具有手性助剂的衍生作用来制备，其中将所得非对映体混合物分离，并且辅助基团裂开以提供纯的所需对映异构体。或者，当分子中含有碱性官能团(如氨基)或酸性官能团(如羧基)时，与适当的光学活性的酸或碱形成非对映异构体的盐，然后通过本领域所公知的常规方法进行非对映异构体拆分，然后回收得到纯的对映体。此外，对映异构体和非对映异构体的分离通常是通过使用色谱法完成的，所述色谱法采用手性固定相，并任选地与化学衍生法相结合(例如由胺生成氨基甲酸盐)。
本发明化合物分子的原子是同位素，通过同位素衍生化通常可以延长半衰期、降低清除率、代谢稳定和提高体内活性等效果。并且，包括一个实施方案，其中至少一个原子被具有相同原子数(质子数)和不同质量数(质子和中子和)的原子取代。本发明化合物中包括的同位素的实例包括氢原子、碳原子、氮原子、氧原子、磷原子、硫原子、氟原子、氯原子，其分别包括2H、3H、13C、14C、15N、17O、18O、31P、32P、35S、18F、36Cl。特别的是，随其衰退而发射辐射的放射性同位素例如3H或14C可用于药物制剂或者体内化合物的局部解剖学检验。稳定的同位素既不随其量衰减或变化，也不具有放射性，因此其可以安全使用。当构成本发明化合物分子的原子是同位素时，通过用包含相应同位素的试剂替代合成中所用的试剂，可以根据通用方法转化同位素。
本发明的化合物可以在一个或多个构成该化合物的原子上包含非天然比例的原子同位素。例如，可用放射性同位素标记化合物，比如氘(2H)，碘-125(125I)或C-14(14C)。本发明的化合物的所有同位素组成的变换，无论放射性与否，都包括在本发明的范围之内。
进一步地，本发明的化合物一个或多个氢原子上被同位素氘(2H)取代，本发明化合物氘代后，具有延长半衰期、降低清除率、代谢稳定和提高体内活性等效果。
所述同位素衍生物的制备方法通常包括：相转移催化方法。例如，优选的氘化方法采用相转移催化剂(例如，四丁基溴化铵，TBAB)。使用相转移催化剂交换二苯基甲烷化合物的亚甲基质子，导致比在酸(例如，甲磺酸)存在下用氘化硅烷(例如三乙基氘化甲硅烷)或用路易斯酸如三氯化铝采用氘化硼酸钠还原而引入较高的氘。
术语“药学上可接受的载体”是指能够递送本发明有效量活性物质、不干扰活性物质的生物活性并且对宿主或者患者无毒副作用的任何制剂载体或介质，代表性的载体包括水、油、蔬菜和矿物质、膏基、洗剂基质、软膏基质等。这些基质包括悬浮剂、增粘剂、透皮促进剂等。它们的制剂为化妆品领域或局部药物领域的技术人员所周知。关于载体的其他信息，可以参考Remington:The Science and Practice of Pharmacy,21st Ed.,Lippincott,Williams&Wilkins(2005)，该文献的内容通过引用的方式并入本文。
术语“赋形剂”通常是指配制有效的药物组合物所需要载体、稀释剂和/或介质。
针对药物或药理学活性剂而言，术语“有效量”或“治疗有效量”是指无毒的但能达到预期效果的药物或药剂的足够用量。对于本发明中的口服剂型，组合物中一种活性物质的“有效量”是指与该组合物中另一种活性物质联用时为了达到 预期效果所需要的用量。有效量的确定因人而异，取决于受体的年龄和一般情况，也取决于具体的活性物质，个案中合适的有效量可以由本领域技术人员根据常规试验确定。
术语“活性成分”、“治疗剂”、“活性物质”或“活性剂”是指一种化学实体，它可以有效地治疗目标紊乱、疾病或病症。
“任选”或“任选地”指的是随后描述的事件或状况可能但不是必需出现的，并且该描述包括其中所述事件或状况发生的情况以及所述事件或状况不发生的情况。
本发明的化合物可以通过本领域技术人员所熟知的多种合成方法来制备，包括下面列举的具体实施方式、其与其他化学合成方法的结合所形成的实施方式以及本领域技术上人员所熟知的等同替换方式，优选的实施方式包括但不限于本发明的实施例。
附图说明
图1，为实施例6中6A盐酸盐的单晶结构示意图。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述，但发明的实施方式不限于此。
化合物的结构是通过核磁共振(NMR)或质谱(MS)来确定的。NMR位移(δ)以10-6(ppm)的单位给出。NMR的测定是用Bruker AVANCE-III核磁仪，测定溶剂为氘代二甲基亚砜(DMSO-d6)，氘代氯仿(CDCl3)，内标为四甲基硅烷(TMS)。
MS的测定用ISQ EC质谱仪(生产商：Thermo,型号：ISQ EC)。
高效液相色谱法(HPLC)分析使用Thermo U3000 HPLC DAD高效液相色谱仪和Agilent 1260高效液相色谱仪。
CombiFlash快速制备仪使用CombiFlash Rf+LUMEN(TELEDYNE ISCO)。
薄层层析硅胶板使用烟台银龙HSGF254或GF254硅胶板，薄层色谱法(TLC)使用的硅胶板采用的规格是0.17mm～0.23mm，薄层层析分离纯化产品采用的规格是0.4mm～0.5mm。
硅胶柱色谱法一般使用乳山上邦硅胶100～200目硅胶为载体。
试剂：NaBH3-硼氢化钠，EtOH-乙醇，NaOAc-醋酸钠，toluene-甲苯，r.t.-室温，NaCO3-碳酸钠，MeOH-甲醇，AcOH-乙酸，AcONa-醋酸钠，H2SO4-硫酸，NaOH-氢氧化钠，CS2CO3-碳酸铯，TEMPO-2,2,6,6,-四甲基哌啶氧化物，TMSN3-叠氮基三甲基硅烷，ACN-乙腈，NaBH3CN-氰基硼氢化钠，p-TsOH-对甲苯磺酸，NaH-氢化钠，THF-四氢呋喃，CH3I-碘甲烷，Acetone-丙酮，CCL4-四氯化碳，NBS-N-溴代丁二酰亚胺，AIBN-偶氮二异丁腈，DIEA-N,N-二异丙基乙胺，DMF-N,N-二甲基甲酰胺，Pd(PPh3)2Cl2-双三苯基磷二氯化钯，LiCL-氯化锂，n-BuLi-正丁基锂，NH2OH HCl-盐酸羟胺，AgNO3-硝酸银。
abs是指absolute configuration，绝对构型。
实施例1 1-((3-氨基-7-氯-2,3-二氢-1H-茚-4-基)甲基)-2-硫代-1,2,3,5-四氢-4H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-4-酮、化合物1A和1B
合成路线：

步骤A：合成3-(5-溴-2-氯苯基)丙烯酸乙酯
将2-(二乙氧基磷酸基)乙酸乙酯(11.2克，50.2毫摩尔)溶于THF(100毫升)，置于冰水浴中，加入NaH(2.0克，50.2毫摩尔)后反应30分钟，再加入5-溴-2-氯苯甲醛(10克，45.6毫摩尔)室温下反应12小时。
反应结束，向混合物中加30毫升水淬灭，用乙酸乙酯(20毫升x 3)萃取，合并有机相经饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干。无进一步纯化，得到13克白色固体3-(5-溴-2-氯苯基)丙烯酸乙酯(收率：98.5％)。1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.20(d,J＝2.4Hz,1H),7.81(d,J＝16.0Hz,1H),7.64(dd,J＝8.4,2.4Hz,1H),7.51(d,J＝8.4Hz,1H),6.85(d,J＝16.0Hz,1H),4.22(q,J＝7.0Hz,2H),1.26(q,J＝6.8Hz,4H)。
步骤B：合成2-溴-4-氯苯基乙基-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺
将3-(5-溴-2-氯苯基)丙烯酸乙酯(11.7克，40.6毫摩尔)溶于甲醇(100毫升),加入氯化钴(968毫克，4.07毫摩尔)，冰水浴下加入硼氢化钠(2.3克，61.0毫摩尔)，0℃下反应30分钟。
待反应完全后，将溶液中的甲醇旋干，向混合物中加入30毫升水，用乙酸乙酯(20毫升x 3)萃取，合并有机相经饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干。无进一步纯化，得到11克绿色固体2-溴-4-氯苯基乙基-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(收率：92.9％)。1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.58(d,J＝2.4Hz,1H),7.45(dd,J＝8.5,2.4Hz,1H),7.39(d,J＝8.5Hz,1H),4.15–3.95(m,2H),2.94(t,J＝7.6Hz,2H),2.63(t,J＝7.6Hz,2H),1.21–1.10(m,4H)。
步骤C：合成3-(5-溴-2-氯苯基)丙酸
将2-溴-4-氯苯基乙基-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(11克，37.8毫摩尔)溶于1:1的四氢呋喃与水混合物(30毫升)中，进入溶于水的氢氧化钠(3.0克，75.6毫摩尔)室温下反应16小时。
反应结束，加入HCl调PH至3，将四氢呋喃旋干，用乙酸乙酯(20毫升x 3)萃取，合并有机相经饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，得到9克白色固体3-(5-溴-2-氯苯基)丙酸(收率：90.5％)。1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.25(s,1H),7.57(d,J＝2.0Hz,1H),7.43(dt,J＝22.4,5.4Hz,2H),2.91(t,J＝7.6Hz,2H),2.54(dd,J＝14.0,6.4Hz,2H)。
步骤D：合成7-溴-4-氯-2,3-二氢-1H-茚-1-酮
将3-(5-溴-2-氯苯基)丙酸(3.5克，13.3毫摩尔)溶于二氯甲烷(10毫升)中，将氯磺酸(6毫升)加入到反应液中，室温下反应2小时。
反应结束，用冰水淬灭反应，用1摩尔的氢氧化钠溶液调PH至10，用二氯甲烷(20毫升x 3)萃取，合并有机相经饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干。所得残余物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝5/1)，得到1.2克7-溴-4-氯-2,3-二氢-1H-茚-1-酮(收率：36.8％)。1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.76–7.53(m,2H),3.12–2.93(m,2H),2.76–2.65(m,2H)。
步骤E：合成7-溴-4-氯-2,3-二氢-1H-茚-1-胺
将7-溴-4-氯-2,3-二氢-1H-茚-1-酮(500毫克，2.03毫摩尔)溶于无水乙醇(6毫升)中，加入乙酸铵(2.35克，30.5毫摩尔)和氰基硼氢化钠(153毫克，2.44毫摩尔)微波130℃下反应2小时。
反应结束，将溶液中乙醇旋干，用1摩尔的氢氧化钠溶液调PH至10，乙酸乙酯萃取(10毫升×3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩至干，所得残余物用反相柱纯化(0.1％TFA体系)，得到1.1克7-溴-4-氯-2,3-二氢-1H-茚-1-胺(收率79.0％)。1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.28(s,3H),7.57(d,J＝8.4Hz,1H),7.45(d,J＝8.4Hz,1H),4.81(d,J＝6.4Hz,1H),3.25(dt,J＝17.0,8.4Hz,1H),3.00(dd,J＝16.8,9.2,1.6Hz,1H),2.50–2.42(m,1H),2.16(dd,J＝14.4,7.8Hz,1H).步骤F：合成第三丁基(7-溴-4-氯-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯
将7-溴-4-氯-2,3-二氢-1H-茚-1-胺(1.1克，4.5毫摩尔)，二碳酸二叔丁酯(1.07克，4.9毫摩尔)和三乙胺(1.35克，13.4毫摩尔)溶于二氯甲烷(10毫升)中，室温反应2小时。
将反应液加入25毫升水，用二氯甲烷(20毫升x 2)萃取，合并有机相经NaHCO3水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥,过滤,旋干。无进一步纯化得到1.5克第三丁基(7-溴-4-氯-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯(收率：97％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.31(d,J＝8.4Hz,1H),7.12(d,J＝8.4Hz,1H),5.27(d,J＝22.0Hz,1H),4.68(s,1H),2.94(dd,J＝17.0,9.0,4.0Hz,1H),2.48(td,J＝16.8,8.0Hz,1H),2.12–2.04(m,1H),1.46(s,9H)。
步骤G：合成叔丁基(7-溴-4-氯-2,3-二氢-1H-茚-1-基)(叔丁氧羰基)氨基甲酸酯
将第三丁基(7-溴-4-氯-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯(1.5克，4.32毫摩尔)、二碳酸二叔丁酯(1.89克，8.65毫摩尔)和4-二甲氨基吡啶(1.05克，8.65毫摩尔)溶于二甲基四氢呋喃(15毫升)，55℃反应4小时。
反应结束，冷却至室温后旋干，加入20毫升水，用乙酸乙酯(25毫升x 2)萃取，合并有机相经NaHCO3水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥,过滤,旋干。所得残余物用反相柱纯化(0.1％氨水体系)，得到1.4克叔丁基(7-溴-4-氯-2,3-二氢-1H-茚-1- 基)(叔丁氧羰基)氨基甲酸酯(收率：72.5％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.25(s,1H),7.08(t,J＝8.8Hz,1H),5.96(dd,J＝9.8,6.4Hz,1H),3.18(ddd,J＝32.4,18.4,13.2Hz,1H),2.95–2.82(m,1H),2.63–2.50(m,1H),2.25–2.16(m,1H),1.46–1.27(m,18H)。
步骤H：合成叔丁基(叔丁氧羰基)(4-氯-7-乙烯基-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯
将叔丁基(7-溴-4-氯-2,3-二氢-1H-茚-1-基)(叔丁氧羰基)氨基甲酸酯(1.4克，3.13毫摩尔)、乙烯三氟硼酸钾(0.54克，4.07毫摩尔)、1,1'-双(二苯基膦)二茂铁二氯化钯(0.42克，0.62毫摩尔)和碳酸钾(1.29克，9.39毫摩尔)溶于二甲基亚砜(14毫升)，氮气保护，100℃反应12小时。
反应结束，冷却至室温，反应液用硅藻土过滤，收集滤液，然后加入50毫升水，用乙酸乙酯(50毫升x 3)萃取，合并有机相经NaCl水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥,过滤,旋干。将所得残余物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝10/1)，得到1.2克叔丁基(叔丁氧羰基)(4-氯-7-乙烯基-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯(收率：97％)。1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.53–7.32(m,1H),7.36–7.20(m,1H),6.68(dd,J＝17.6,11.2Hz,1H),5.93(dt,J＝31.2,15.6Hz,1H),5.77(dt,J＝17.6,5.2Hz,1H),5.38–5.09(m,1H),3.11–2.96(m,1H),2.91–2.75(m,1H),2.59–2.51(m,1H),2.14–2.01(m,1H),1.34–1.20(m,18H)。
步骤I：合成叔丁基(叔丁氧羰基)(4-氯-7-甲酰基-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯
将叔丁基(叔丁氧羰基)(4-氯-7-乙烯基-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯(1.2克，3.04毫摩尔)溶于四氢呋喃(24毫升)和水(6毫升)的混合液中，将锇酸钾(112毫克，0.30毫摩尔)加入到反应液中，室温搅拌30分钟后，将高碘酸钠(2.61克，12.2毫摩尔)加入到反应液中，室温反应2小时。
反应结束，向反应液中加入20毫升水，用乙酸乙酯(20毫升x 4)萃取，合并有机相经无水硫酸钠干燥,过滤,旋干。将所得残余物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝10/1)得到1.0克叔丁基(叔丁氧羰基)(4-氯-7-甲酰基-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯(收率：83.3％)。1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.03(s,1H),7.74(d,J＝8.0Hz,1H),7.58(d,J＝8.0Hz,1H),6.22(dd,J＝9.6,4.8Hz,1H),3.16–2.99(m,1H),2.95–2.82(m,1H),2.69–2.50(m,3H),2.13–2.02(m,1H),1.30(s,18H)。
步骤J：合成3-(((3-(双(叔丁氧羰基)氨基)-7-氯-2,3-二氢-1H-茚-4-基)甲基)氨基)-1H-吡咯-2-羧酸甲酯
将3-氨基-2-乙氧羰基吡咯盐酸盐(529毫克，2.78毫摩尔)溶于10毫升无水乙醇中，然后将N,N-二异丙基乙胺(359毫克，2.78毫摩尔)和冰乙酸(456毫克，7.59毫摩尔)加入到混合物中，室温下搅拌10分钟后，然后将叔丁基(叔丁氧羰基)(4-氯-7-甲酰基-2,3-二氢-1H-茚-1-基)氨基甲酸酯(1.0克，2.53毫摩尔)加入到混合物中，室温下搅拌2小时后，将氰基硼氢化钠(191毫克，3.04毫摩尔)加入到混合物中，该混合物在室温下反应12小时。
反应结束，将反应液中无水乙醇旋干。用水10毫升和乙酸乙酯(20毫升x 2)萃取，合并有机相经无水硫酸钠干燥,过滤,旋干。将所得残余物用反相柱纯化(洗脱剂：0.1％氨水溶液)，得到1.0克3-(((3-(双(叔丁氧羰基)氨基)-7-氯-2,3-二氢-1H-茚-4-基)甲基)氨基)-1H-吡咯-2-羧酸甲酯(收率：74.6％)。1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.77(s,1H),7.33–7.20(m,1H),7.14(d,J＝8.0Hz,1H),6.70(t,J＝3.2Hz,1H),5.97(dd,J＝9.6,4.4Hz,1H),5.77(s,1H),5.44(t,J＝2.4Hz,1H),4.26–4.09(m,4H),3.12–2.98(m,1H),2.91–2.75(m,1H),2.56(dd,J＝14.0,9.9,5.0Hz,1H),2.09(tt,J＝16.0,5.2Hz,1H),1.30(s,18H),1.30-1.24(m,3H)。
步骤K：合成叔丁基(叔丁氧羰基)(4-氯-7-((4-氧代-2-硫代-2,3,4,5-四氢-1H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-1-基)甲基)-2,3-二氢-1H-茚-1-基
将3-(((3-(双(叔丁氧羰基)氨基)-7-氯-2,3-二氢-1H-茚-4-基)甲基)氨基)-1H-吡咯-2-羧酸甲酯(0.9克，1.68毫摩尔)和苯甲酰基异硫氰酸酯(0.32克，2.02毫摩尔)溶于甲醇(5毫升)，室温下搅拌3小时后加入碳酸铯(1.09克，3.36毫摩尔)，该反应液在65℃反应2小时。
反应结束，将反应液中无水甲醇旋干。用水20毫升和乙酸乙酯(20毫升x 2)萃取，合并有机相经无水硫酸钠干燥,过滤,旋干。将所得残余物反相柱纯化(洗脱剂：0.1％氨水溶液)，得到700毫克叔丁基(叔丁氧羰基)(4-氯-7-((4-氧代-2-硫代-2,3,4,5-四氢-1H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-1-基)甲基)-2,3-二氢-1H-茚-1-基(收率：76％)。1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.51(s,1H),12.38(d,J＝8.0Hz,1H),7.32(t,J＝2.8Hz,1H),7.19(dd,J＝13.6,8.0Hz,1H),6.57(t,J＝7.2Hz,1H),6.11(dd,J＝9.6,4.4Hz,1H),5.89(dd,J＝9.6,7.2Hz,1H),5.78(d,J＝16.4Hz,1H),5.29(d,J＝16.4Hz,1H),3.11(ddd,J＝16.0,10.0,5.6Hz,1H),2.97–2.76(m,1H),2.63(ddd,J＝20.0,12.4,7.4Hz,1H),2.17(td,J＝9.9,5.1Hz,1H),1.33(s,18H).
步骤L：合成1-((3-氨基-7-氯-2,3-二氢-1H-茚-4-基)甲基)-2-硫代-1,2,3,5-四氢-4H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-4-酮
将叔丁基(叔丁氧羰基)(4-氯-7-((4-氧代-2-硫代-2,3,4,5-四氢-1H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-1-基)甲基)-2,3-二氢-1H-茚-1-基(80毫克，0.14毫摩尔)溶于乙酸乙酯(2毫升)，将盐酸乙酸乙酯溶液(2毫升)加入到反应液中，室温下搅拌1小时。
将反应液中溶剂旋干。然后用碳酸氢钠水溶液将溶液PH调到8，然后用乙酸乙酯(15毫升x 2)萃取，合并有机相经无水硫酸钠干燥,过滤,旋干。将所得残余物反相柱纯化(洗脱剂：0.1％氨水溶液)，得到30毫克1-((3-氨基-7-氯-2,3-二氢-1H-茚-4-基)甲基)-2-硫代-1,2,3,5-四氢-4H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-4-酮(收率：60％)。LC-MS:[M+H]+＝347.2.1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.19(dd,J＝14.1,2.6Hz,1H),7.10(dd,J＝8.2,3.9Hz,1H),6.56(dd,J＝23.0,16.3Hz,1H),6.07(d,J＝2.7Hz,1H),5.99–5.89(m,1H),5.79(d,J＝16.4Hz,1H),4.60(dd,J＝7.1,3.0Hz,1H),3.13–2.96(m,1H),2.84–2.66(m,1H),2.37(dt,J＝16.1,7.5Hz,1H),1.84(ddd,J＝12.4,8.3,4.0Hz,1H)。
步骤M：合成化合物M-1与M-2
将1-((3-氨基-7-氯-2,3-二氢-1H-茚-4-基)甲基)-2-硫代-1,2,3,5-四氢-4H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-4-酮(120毫克，0.34毫摩尔)，二碳酸二叔丁酯(83毫克，0.38毫摩尔)和三乙胺(103毫克，1.02毫摩尔)溶于二氯甲烷(2毫升)中，室温反应2小时。
将反应液加入10毫升水，用二氯甲烷(10毫升x 2)萃取，合并有机相经NaHCO3水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥,过滤,旋干。将所得残余物反相柱纯化(洗脱剂：0.1％氨水溶液)，纯化得到96毫克叔丁基1-((3-((叔丁氧羰基)氨基)-7-氯-2,3- 二氢-1H-茚-4-基)甲基)-4-氧代-2-硫代-1,2,3,4-四氢-5H-吡咯[3,2-d]嘧啶-5-羧酸盐。将白色固体送SFC拆分(IC柱子(250*25mm 10um)，使用Supercritical CO2,和MEOH(+0.1％7.0mol/l Ammonia in MEOH)作为流动相进行手性拆分制备得到异构体M-1(RT＝2.4min,20mg,yield＝21％，ee>99％)和M-2(RT＝3.4min,15mg,yield＝16％，ee>99％)。
步骤N：
将M-1(20毫克，0.036毫摩尔)溶于乙酸乙酯(2毫升)，将盐酸乙酸乙酯溶液(2毫升)加入到反应液中，室温下搅拌1小时。将反应液中溶剂旋干。将反应液旋干。然后用碳酸氢钠水溶液将溶液PH调到8，然后用乙酸乙酯(15毫升x 2)萃取，合并有机相经无水硫酸钠干燥,过滤,旋干。将所得残余物反相柱纯化(洗脱剂：0.1％氨水溶液)，经过冻干后得到10.6毫克化合物1A(收率84％)。LC-MS:[M+H]+＝347.2
将M-2(15毫克，0.027毫摩尔)溶于乙酸乙酯(2毫升)，将盐酸乙酸乙酯溶液(2毫升)加入到反应液中，室温下搅拌1小时。将反应液中溶剂旋干。然后用碳酸氢钠水溶液将溶液PH调到8，然后用乙酸乙酯(15毫升x 2)萃取，合并有机相经无水硫酸钠干燥,过滤,旋干。将所得残余物反相柱纯化(洗脱剂：0.1％氨水溶液)，经过冻干后得到8.5毫克化合物1B(收率89％)。LC-MS:[M+H]+＝347.2。
实施例2 1-((3-氨基-7-氯-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)-2-硫代-1,2,3,5-四氢-4H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-4-酮
合成路线：
步骤A：5-溴-2-氯苯基2-氯乙酸酯
将5-溴-2-氯苯酚(12克，0.058摩尔)和氯乙酰氯(19.6克，0.774摩尔)加入三口瓶中,加热回流反应16小时。
反应结束后，将反应液旋干，粗品经用硅胶柱纯化(石油醚：乙酸乙酯＝100：1到10：1)，得16克(0.056摩尔)白色固体产物5-溴-2-氯苯基2-氯乙酸酯(收率：97.1％).1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.73(d,J＝1.6Hz,1H),7.61–7.57(m,2H),4.78(s,2H)。
步骤B：合成4-溴-7-氯苯并呋喃-3(2H)-酮
将5-溴-2-氯苯基2-氯乙酸酯(16克，0.056摩尔)加入三口瓶中，氮气置换，加热至150度，加入AlCl3(22.54克，0.168摩尔),150度反应0.5小时。
反应结束后，加入冰水(50毫升)淬灭，再用乙酸乙酯(50毫升x3)萃取，饱和氯化钠溶液(30毫升x3)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干得粗品。粗品经用硅胶柱纯化(石油醚：乙酸乙酯＝100：1到10：1)，得3.2克(0.013摩尔)4-溴-7-氯苯并呋喃-3(2H)-酮(收率：23.1％)。1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.74(d,J＝8.3Hz,1H),7.34(d,J＝8.3Hz,1H),4.95(s,2H)。
步骤C：合成4-溴-7-氯-2,3-二氢苯并呋喃-3-胺
室温下将4-溴-7-氯苯并呋喃-3(2H)-酮(3.2克，12.95毫摩尔)溶于EtOH溶液(20毫升)中，再加入乙酸铵(9.98克,129.5毫摩尔),加热至100度反应12小时。
反应结束后，加入冰水(20毫升)淬灭，再将反应液中乙醇旋干，加入饱和碳酸氢钠溶液调节pH至4～5，再用乙酸乙酯(20毫升x3)萃取，饱和氯化钠溶液(30毫升x3)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干得粗品。粗品经C18反相柱层析(NH4CO3/CAN体系)纯化得1.5克(6.04毫摩尔)4-溴-7-氯-2,3-二氢苯并呋喃-3-胺(收率：46.9％)LC-MS:[M+H]+＝248.50.1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.30(d,J＝8.5Hz,1H),7.10(d,J＝8.5Hz,1H),5.91(d,J＝7.2Hz,1H),5.25(td,J＝6.9,2.0Hz,1H),4.63(dd,J＝10.4,6.5Hz,1H),4.42(dd,J＝10.4,2.1Hz,1H)。
步骤D：合成(4-溴-7-氯-2,3-二氢苯并呋喃-3-基)氨基甲酸叔丁酯
室温下，将4-溴-7-氯-2,3-二氢苯并呋喃-3-胺(1.5克，6.03毫摩尔)溶于二氯甲烷(20毫升)中，加入(Boc)2O(2.63克，12.07毫摩尔)，TEA(2.5毫升，18.09毫摩尔)室温下搅拌12小时。
反应结束，加入饱和碳酸氢钠(20毫升)淬灭反应，DCM萃取(10毫升×3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩至干，所得残余物用硅胶柱层析纯化(NH4CO3/CAN体系)，得到1.2克(3.44毫摩尔)(4-溴-7-氯-2,3-二氢苯并呋喃-3-基)氨基甲酸叔丁酯(收率57.1％)。LC-MS:[M+H]+＝348.12。1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.60(d,J＝8.6Hz,1H),7.27(d,J＝8.5Hz,1H),7.08(d,J＝8.5Hz,1H),5.38–5.30(m,1H),4.78(t,J＝9.2Hz,1H),4.32(dd,J＝9.5,4.1Hz,1H),1.39(s, 9H).
步骤E：合成(4-溴-7-氯-2,3-二氢苯并呋喃-3-基)(叔丁氧羰基)氨基甲酸叔丁酯
室温下，将(4-溴-7-氯-2,3-二氢苯并呋喃-3-基)氨基甲酸叔丁酯(1.2克，3.45毫摩尔)溶于二氯甲烷(20毫升)中，加入(Boc)2O(1.5克，6.9毫摩尔)，DMAP(0.84克，6.9毫摩尔)室温下搅拌12小时。
反应结束，加入饱和碳酸氢钠(20毫升)淬灭反应，DCM萃取(10毫升×3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩至干，所得残余物用C18反相柱层析纯化(NH4CO3/CAN体系)，得到1.2克(2.67毫摩尔)(4-溴-7-氯-2,3-二氢苯并呋喃-3-基)(叔丁氧羰基)氨基甲酸叔丁酯(收率80％)。LC-MS:[M+H]+＝448.74。1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.31–7.25(m,1H),7.07(d,J＝8.5Hz,1H),6.19(dd,J＝10.2,4.8Hz,1H),4.91–4.84(m,1H),4.58(dd,J＝9.8,4.9Hz,1H),1.43–1.20(m,18H)。
步骤F：合成(叔丁基(叔丁氧羰基)(7-氯-4-乙烯基-2,3-二氢苯并呋喃-3-基)氨基甲酸酯
将(叔丁基(叔丁氧羰基)(7-氯-4-乙烯基-2,3-二氢苯并呋喃-3-基)氨基甲酸酯(1.2克，2.68毫摩尔)、乙烯三氟硼酸钾(0.54克，4.01毫摩尔)、1,1'-双(二苯基膦)二茂铁二氯化钯(0.22克，0.3毫摩尔)和碳酸钾(1.11克，8.04毫摩尔)溶于二甲基亚砜(15毫升)，氮气保护，100℃反应12小时。
反应结束，冷却至室温，反应液用硅藻土过滤，收集滤液，然后加入50毫升水，用乙酸乙酯(50毫升x 3)萃取，合并有机相经NaCl水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥,过滤,旋干。将所得残余物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝10/1)，得到0.552克(1.32毫摩尔)(叔丁基(叔丁氧羰基)(7-氯-4-乙烯基-2,3-二氢苯并呋喃-3-基)氨基甲酸酯(收率：55％)。LC-MS:[M+H]+＝395.88.1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.30(d,J＝8.4Hz,1H),7.13(d,J＝8.4Hz,1H),6.62(dd,J＝17.6,11.1Hz,1H),6.24(dd,J＝9.9,4.3Hz,1H),5.83(d,J＝17.5Hz,1H),5.35(d,J＝11.2Hz,1H),4.80(t,J＝9.9Hz,1H),4.57(dd,J＝9.9,4.4Hz,1H),1.29(s,18H)。
步骤G：合成叔丁基(叔丁氧基羰基)(7-氯-4-甲酰基-2,3-二氢苯并呋喃-3-基)氨基甲酸酯
将(叔丁基(叔丁氧羰基)(7-氯-4-乙烯基-2,3-二氢苯并呋喃-3-基)氨基甲酸酯(552毫克，1.39毫摩尔)溶于四氢呋喃(4毫升)和水(1毫升)的混合液中，将锇酸钾(51.49毫克，0.14毫摩尔)加入到反应液中，室温搅拌30分钟后，将高碘酸钠(1.2克，5.56毫摩尔)加入到反应液中，室温反应2小时。
反应结束，向反应液中加入20毫升水，用乙酸乙酯(20毫升x 4)萃取，合并有机相经无水硫酸钠干燥,过滤,旋干。将所得残余物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝10/1)得到315毫克(0.79毫摩尔)叔丁基(叔丁氧基羰基)(7-氯-4-甲酰基-2,3-二氢苯并呋喃-3-基)氨基甲酸酯(收率：56.9％)。LC-MS:[M+H]+＝397.85.1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.97(s,1H),7.62(d,J＝8.2Hz,1H),7.46(d,J＝8.2Hz,1H),6.45(dd,J＝10.1,4.7Hz,1H),4.92(t,J＝10.1Hz,1H),4.61(dd,J＝9.9,4.7Hz,1H),1.31(s,18H)。
步骤H：合成3-(((3-(双(叔丁氧基羰基)氨基)-7-氯-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)氨基)-1H-吡咯-2-羧酸乙酯
将3-氨基-2-乙氧羰基吡咯盐酸盐(181.2毫克，0.951毫摩尔)溶于10毫升无水乙醇中，然后将N,N-二异丙基乙胺(122.83毫克，0.951毫摩尔)和冰乙酸(57.1毫克，0.951毫摩尔)加入到混合物中，室温下搅拌10分钟后，然后将叔丁基(叔丁氧基羰基)(7-氯-4-甲酰基-2,3-二氢苯并呋喃-3-基)氨基甲酸酯(315毫克，0.792毫摩尔)加入到混合物中，室温下搅拌2小时后，将氰基硼氢化钠(59.8毫克，0.95毫摩尔)加入到混合物中，该混合物在室温下反应4小时。
反应结束，将反应液中无水乙醇旋干。用水10毫升和乙酸乙酯(20毫升x 2)萃取，合并有机相经无水硫酸钠干燥,过滤,旋干。将所得残余物用反相柱纯化(洗脱剂：0.1％氨水溶液)，得到221毫克(0.41毫摩尔)3-(((3-(双(叔丁氧基羰基)氨基)-7-氯-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)氨基)-1H-吡咯-2-羧酸乙酯(收率：52.0％)。LC-MS:[M+H]+＝536.02。1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.77(s,1H),7.31–7.18(m,1H),6.81(d,J＝7.8Hz,1H),6.69(s,1H),6.24(d,J＝9.8Hz,1H),5.79(s,1H),5.46(s,1H),4.82(t,J＝8.7Hz,1H),4.61(d,J＝2.9Hz,1H),4.28–4.08(m,4H),1.27(d,J＝12.0Hz,21H)。
步骤I：合成叔丁基(7-氯-4-((4-氧代-2-硫代-2,3,4,5-四氢-1H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-1-基)甲基)-2,3-二氢苯并呋喃-3-基)氨基甲酸酯
将3-(((3-(双(叔丁氧基羰基)氨基)-7-氯-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)氨基)-1H-吡咯-2-羧酸乙酯(221毫克，0.41毫摩尔)和苯甲酰基异硫氰酸酯(80.75毫克，0.49毫摩尔)溶于甲醇(5毫升)，室温下搅拌3小时后加入碳酸铯(537.4毫克，1.64毫摩尔)，该反应液在65℃反应2小时。
反应结束，将反应液中无水甲醇旋干。用水20毫升和乙酸乙酯(20毫升x 2)萃取，合并有机相经无水硫酸钠干燥,过滤,旋干。将所得残余物反相柱纯化(洗脱剂：0.1％氨水溶液)，得65毫克(0.14毫摩尔)叔丁基(7-氯-4-((4-氧代-2-硫代-2,3,4,5-四氢-1H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-1-基)甲基)-2,3-二氢苯并呋喃-3-基)氨基甲酸酯(收率：35.1％)。LC-MS:[M+H]+＝448.92.1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.50(s,1H),12.39(s,1H),7.84(d,J＝8.7Hz,1H),7.32(s,1H),7.16(d,J＝8.3Hz,1H),6.28(d,J＝8.3Hz,1H),6.00(s,1H),5.72(d,J＝16.7Hz,1H),5.67–5.60(m,1H),5.48(d,J＝16.4Hz,1H),4.81(t,J＝9.3Hz,1H),4.40(d,J＝5.5Hz,1H),1.39(s,9H)。
步骤J：合成1-((3-氨基-7-氯-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)-2-硫代-1,2,3,5-四氢-4H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-4-酮
将叔丁基(7-氯-4-((4-氧代-2-硫代-2,3,4,5-四氢-1H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-1-基)甲基)-2,3-二氢苯并呋喃-3-基)氨基甲酸酯(65毫克，0.15毫摩尔)溶于DMF(2毫升)，将盐酸1，4-二氧六环溶液(5毫升)加入到反应液中，室温下搅拌1小时。将反应液加入10毫升水，用二氯甲烷(10毫升x 2)萃取，合并有机相经NaHCO3水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥,过滤,旋干。将所得残余物反相柱纯化(洗脱剂：0.1％氨水溶液)，纯化得到24.01毫克(1-((3-氨基-7-氯-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)-2-硫代-1,2,3,5-四氢-4H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-4-酮(收率47.5％)。LC-MS:[M+H]+＝348.81。1HNMR(400MHz,DMSO)δ7.30(d,J＝2.8Hz,1H),7.12(d,J＝8.3Hz,1H),6.31(d,J＝8.3Hz,1H),6.16(d,J＝2.8Hz,1H),5.88(d,J＝16.6Hz,1H),5.76(d,J＝16.6Hz,1H),4.92–4.83(m,1H),4.71(t,J＝8.7Hz,1H),4.30(dd,J＝9.4,4.1Hz,1H)。
实施例3 1-(3-氨基-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)-2-硫代-1,2,3,5-四氢-4H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-4-酮
步骤A：合成4-溴-2，3-二氢苯并呋喃-3-胺
室温下，将4-溴苯并呋喃-3(2H)(2.4克，11.26毫摩尔)，乙酸铵(8.7克，112.6毫摩尔)和氰基硼氢化钠(3.54克，56.3毫摩尔)溶于乙醇(30毫升)中，在焖罐中，该反应在100℃下反应72小时。
反应结束，在水泵上旋干反应液，用乙酸乙酯和水萃取反应液(30毫升×3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩至干，得到2.2克油状液体粗产物4-溴-2，3-二氢苯并呋喃-3-胺(收率91.28％)。LC-MS:[M+H]+＝214.06。
步骤B：合成(4-溴-2，3-二氢苯并呋喃-3-基)氨基甲酸叔丁酯
室温下，将4-溴-2，3-二氢苯并呋喃-3-胺(2.2克，10.33毫摩尔)，(Boc)2O(4.74毫升，20.66毫摩尔)和三乙胺(2.9毫升，20.66毫摩尔)溶于DCM(30毫升)中，室温搅拌2小时。
反应结束，加入水(30毫升)，用二氯甲烷萃取(30毫升×3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩至干，所得残余物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚：乙酸乙酯＝20：1)，得到1.6克油状液体产物(4-溴-2，3-二氢苯并呋喃-3-基)氨基甲酸叔丁酯(收率53.12％)。LC-MS:[M+H]+＝314.18。1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.54(d,J＝8.5Hz,1H),7.15(t,J＝7.9Hz,1H),7.06(d,J＝7.9Hz,1H),6.84(t,J＝9.5Hz,1H),5.29(dt,J＝12.3,6.3Hz,1H),4.67(t,J＝8.2Hz,1H),4.23(dd,J＝9.5,4.0Hz,1H),1.44(d,J＝28.9Hz,9H).
步骤C：合成(4-溴-2，3-二氢苯并呋喃-3-基)(叔丁氧羰基)氨基甲酸叔丁酯
50℃下，将(4-溴-2，3-二氢苯并呋喃-3-基)氨基甲酸叔丁酯(1.6克，5.11毫摩尔)，(Boc)2O(11.68毫升，51.2毫摩尔)和DMAP(1.25克，10.24毫摩尔)溶于2-甲基四氢呋喃(15毫升)中，在50℃下搅拌12小时。
反应结束，加入水(30毫升)，用乙酸乙酯萃取(30毫升×3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩至干，所得残余物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚：乙酸乙酯＝20：1)，得到2克油状液体产物(4-溴-2，3-二氢苯并呋喃-3-基)(叔丁氧羰基)氨基甲酸叔丁酯(收率94.78％)。LC-MS:[M+H]+＝414.30。1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.27–7.11(m,1H),7.06(t,J＝12.2Hz,1H),6.83(t,J＝10.9Hz,1H),6.10(dd,J＝10.1,4.8Hz,1H),4.77(t,J＝10.0Hz,1H),4.57–4.44(m,1H),1.61–1.19(m,18H).
步骤D：合成叔丁基(4-乙烯基-2，3-二氢苯并呋喃-3-基)氨基甲酸叔丁酯
将(4-溴-2，3-二氢苯并呋喃-3-基)(叔丁氧羰基)氨基甲酸叔丁酯(2克，4.84毫摩尔)、三氟硼酸钾(973毫克，7.26毫摩尔)、碳酸钾(3.23克，23.43毫摩尔)和DPPF二氯化钯(351毫克，0.484毫摩尔)溶于30毫升的1，4-二氧六环和3毫升水中，该反应在100℃下反应12小时。
反应结束，加入水(30毫升)，乙酸乙酯萃取(30毫升×3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩至干，所得残余物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚：乙酸乙酯＝20：1)，得到1.16克油状液体产物叔丁基(4-乙烯基-2，3-二氢苯并呋喃-3-基)氨基甲酸叔丁酯(收率66.36％)。LC-MS:[M+H]+＝361.44。1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.28–7.17(m,1H),7.10(d,J＝7.7Hz,1H),6.79–6.62(m,2H),6.14(dd,J＝9.9,4.2Hz,1H),5.88–5.68(m,1H),5.31(dd,J＝11.1,0.8Hz,1H),4.69(t,J＝9.9Hz,1H),4.48(dd,J＝9.8,4.3Hz,1H),1.28(s,18H)。
步骤E：合成叔丁基(4-甲酰基-2，3-二氢苯并呋喃-3-基)氨基甲酸叔丁酯
室温下，将叔丁基(4-乙烯基-2，3-二氢苯并呋喃-3-基)氨基甲酸叔丁酯(1.16克，3.21毫摩尔)溶于四氢呋喃(12毫升)和水(3毫升)的混合液中，将锇酸钾(59毫克，0.16毫摩尔)加入到反应液中，室温搅拌30分钟后，将高碘酸钠(2.08克，9.63毫摩尔)加入到反应液中，室温反应1.5小时。
反应结束，加入水(30毫升)，乙酸乙酯萃取(30毫升×3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩至干，所得残余物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚：乙酸乙酯＝20：1)，得到430毫克油状液体产物叔丁基(4-甲酰基-2，3-二氢苯并呋喃-3-基)氨基甲酸叔丁酯(收率36.87％)。LC-MS:[M+H]+＝363.41。1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.01(s,1H),7.57–7.38(m,2H),7.16(d,J＝7.8Hz,1H),6.34(dt,J＝61.4,30.8Hz,1H),4.91–4.71(m,1H),4.52(dd,J＝9.8,4.6Hz,1H),1.33(d,J＝23.6Hz,18H)。
步骤F：合成3-((3-(双(叔丁氧羰基)氨基)-2，3-二氢苯并呋喃-4-基甲基)氨基)-1H-吡咯-2-羧酸乙酯
室温下，将3-氨基-2-乙氧羰基吡咯盐酸盐(271毫克，1.42毫摩尔)和DIEA(0.22毫升，1.42毫摩尔)加入到乙醇中(20毫升)，反应5分钟后裔，加入冰乙酸(0.11毫升，1.42毫摩尔)，在室温下反应30分钟，加入叔丁基(4-甲酰基-2， 3-二氢苯并呋喃-3-基)氨基甲酸叔丁酯(430毫克，1.18毫摩尔)，在室温下反应1小时后，加入氰基硼氢化钠(219毫克，2.48毫摩尔)，在室温下反应12小时。
反应结束，旋干反应液中的乙醇，加入水(20毫升)，乙酸乙酯萃取(20毫升×3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩至干，所得残余物用反相柱层析纯化(洗脱剂：0.1％碳酸氢铵水溶液:乙腈＝0-50％)，得到450毫克3-((3-(双(叔丁氧羰基)氨基)-2，3-二氢苯并呋喃-4-基甲基)氨基)-1H-吡咯-2-羧酸乙酯(收率75.88％)。LC-MS:[M+H]+＝501.58。1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.76(s,1H),7.17(t,J＝7.8Hz,1H),6.89–6.59(m,3H),6.14(dd,J＝9.8,4.1Hz,1H),5.75(s,1H),5.51(t,J＝2.5Hz,1H),4.69(t,J＝9.9Hz,1H),4.51(dd,J＝9.9,4.2Hz,1H),4.33–4.06(m,4H),1.27(d,J＝3.7Hz,18H),1.24(d,J＝6.3Hz,3H)。
步骤G：合成(4-(4-氧代-2-硫代-2,3,4,5-四氢-1H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-1-基)甲基)-2,3-二氢苯并呋喃-3-基)氨基甲酸叔丁酯
在室温下，将3-((3-(双(叔丁氧羰基)氨基)-2,3-二氢苯并呋喃-4-基甲基)氨基)-1H-吡咯-2-羧酸乙酯(450毫克，0.9毫摩尔)和苯甲酰基异硫氰酸酯(0.18毫升，1.08毫摩尔)加入到30毫升的无水甲醇中，在室温下反应2小时，再加入碳酸铯(1.18克，3.6毫摩尔)，在65℃下反应2小时。
反应结束，旋干反应液中的甲醇，加入水(20毫升)，乙酸乙酯萃取(30毫升×3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩至干，所得残余物用反相柱层析纯化(洗脱剂：0.1％碳酸氢铵水溶液:乙腈＝0-50％)，得到300毫克(4-(4-氧代-2-硫代-2,3,4,5-四氢-1H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-1-基)甲基)-2,3-二氢苯并呋喃-3-基)氨基甲酸叔丁酯(收率65.07％)。LC-MS:[M+H]+＝414.48。1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.75(d,J＝8.3Hz,1H),7.16–6.92(m,2H),6.66(d,J＝7.9Hz,1H),6.29(d,J＝7.7Hz,1H),5.92–5.64(m,2H),5.56(d,J＝15.4Hz,2H),4.69(t,J＝9.2Hz,1H),4.35–4.20(m,1H),1.39(s,9H).步骤H：合成1-(3-氨基-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)-2-硫代-1,2,3,5-四氢-4H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-4-酮
在室温下，将(4-(4-氧代-2-硫代-2，3，4，5-四氢-1H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-1-基)甲基)-2，3-二氢苯并呋喃-3-基)氨基甲酸叔丁酯(300毫克，0.58毫摩尔)溶于DCM(20毫升)中，加入盐酸-1,4-二氧六环(4.38毫升，17.5毫摩尔)，在室温下反应12小时。
反应结束，用二氯甲烷打浆1小时，过滤得到209毫克固体1-(3-氨基-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)-2-硫代-1,2,3,5-四氢-4H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-4-酮盐酸盐。LC-MS:[M+H]+＝314.36。1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.45(d,J＝46.4Hz,2H),8.69(s,3H),7.27(dt,J＝15.9,5.4Hz,2H),6.86(d,J＝8.0Hz,1H),6.38(d,J＝7.7Hz,1H),6.12(dd,J＝12.9,10.3Hz,2H),5.65(d,J＝16.7Hz,1H),5.35(s,1H),4.78–4.60(m,2H)。
实施例4
参照实施例1的制备方法，制备得到下式化合物4。
LC-MS:[M+H]+＝361.1。
实施例5 1-((4-氨基-8-氯代色满--5-基)甲基)-2-硫代-1,2,3,5-四氢-4H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-4-酮
合成路线：
步骤A：3-(5-溴-2-氯苯氧基)丙酸
室温下，将5-溴-2-氯酚(3克，0.014摩尔)，溶于THF(40毫升)中，冷却到0℃，加入t-BuOK(1.79克，0.16摩尔)，0℃下反应0.5h，加入氧杂环己烷-2-酮(1.15克，0.016摩尔)，升至室温反应16h。
反应结束，加入冰水(10毫升)淬灭反应，乙酸乙酯萃取(30毫升×3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩至干，得到4.7克(147毫摩尔)白色固体产物3-(5-溴-2-氯苯氧基)丙酸粗品。
步骤B：5-溴-8-氯代色满--4-酮
室温下，将将3-(5-溴-2-氯苯氧基)丙酸(1.5克，5.4毫摩尔)，溶于Eation’s试剂(7毫升)中，加热60℃下搅拌2h。
反应结束，加入冰水(10毫升)淬灭反应，乙酸乙酯萃取(30毫升×3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩至干，粗品用硅胶柱纯化(PE：EA＝100：1到10：1)得到1克(1.47毫摩尔)5-溴-8-氯代色满--4-酮(收率70.8％)。1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.59(d,J＝8.5Hz,1H),7.32(d,J＝8.5Hz,1H),4.68(t,J＝6.5Hz,2H),2.93–2.83(m,2H)。
步骤C：合成5-溴-8-氯代色满--4-胺
室温下，将5-溴-8-氯代色满-4-酮(1克，3.82毫摩尔)，溶于EtOH(10毫升)中，加入AcONH4(2.95克，38.2毫摩尔)，NaBH3CN(1.2克，19.1毫摩尔)，100℃下搅拌16h。
反应结束，旋干除掉乙醇，加入水(20毫升)，饱和NaHCO3(10毫升)，乙酸乙酯萃取(50毫升×3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩至干，得到1.3克无色油状产物5-溴-8-氯代色满--4-胺。LC-MS:[M+H]+＝271.1。
步骤D：合成叔丁基(5-溴-8-氯代色满-4-基)氨基甲酸酯
室温下，将5-溴-8-氯代色满--4-胺(2克，7.61毫摩尔)溶于DCM(30毫升)中，加入TEA(2.31克，22.86毫摩尔)，(Boc)2O(3.32克，15.2毫摩尔),室温下搅拌48小时。
反应结束，加入水(10毫升)淬灭反应，乙酸乙酯萃取(30毫升×3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩至干，所得残余物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚:乙酸乙酯＝100:1到10:1)，得到1.2克(3.31毫摩尔)叔丁基(5-溴-8-氯代色满-4-基)氨基甲酸酯(收率43.5％)。1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.43(d,J＝7.6Hz,1H),7.32(d,J＝8.5Hz,1H),7.18(d,J＝8.5Hz,1H),4.67(d,J＝7.4Hz,1H),4.43(d,J＝10.9Hz,1H),4.11(dd,J＝22.6,11.8Hz,1H),2.04–1.82(m,2H),1.41(s,9H)。
步骤E：合成叔丁基(5-溴-8-氯代色满--4-基)(叔丁氧基羰基)氨基甲酸酯
室温下，将5-溴-8-氯代色满-4-胺(1.2克，3.31毫摩尔)溶于2-MeTHF(15毫升)中，加入DMAP(0.808克，6.62毫摩尔)，(Boc)2O(1.44克，6.62毫摩尔),加热至50℃搅拌16小时。
反应结束，加入水(20毫升)淬灭反应，乙酸乙酯萃取(20毫升×3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩至干，所得残余物用反相柱纯化，得到1.1克(2.38毫摩尔)叔丁基(5-溴-8-氯代色满--4-基)(叔丁氧基羰基)氨基甲酸酯(收率69.8％)。1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.34(d,J＝8.5Hz,1H),7.17(d,J＝8.5Hz,1H),5.30(t,J＝4.2Hz,1H),4.41(qd,J＝11.1,5.1Hz,2H),2.19–2.08(m,2H),1.35(d,J＝27.6Hz,18H)。
步骤F：合成叔丁基(叔丁氧基羰基)(8-氯-5-乙烯基色满--4-基)氨基甲酸酯
将叔丁基(5-溴-8-氯代色满-4-基)(叔丁氧基羰基)氨基甲酸酯(1克，2.16毫摩尔)，乙烯基三氟硼酸钾(0.43克，3.24毫摩尔)，Pd(ppf)Cl2(0.158克，0.216毫摩尔)，K2CO3(0.9克，6.483毫摩尔)，溶于无水二氧六环(20毫升)中，100℃下搅拌16小时。
反应结束，加入水(30毫升)淬灭反应，乙酸乙酯萃取(30毫升×3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩至干，所得残余物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚:乙酸乙酯＝100:1到10：1)，得到1克(2.44毫摩尔)无色油状产物叔丁基(叔丁氧基羰基)(8-氯-5-乙烯基色满--4-基)氨基甲酸酯(crude)。
步骤G：合成叔丁基(叔丁氧基羰基)(8-氯-5-甲酰基色满--4-基)氨基甲酸酯
室温下，将叔丁基(叔丁氧基羰基)(8-氯-5-乙烯基色满-4-基)氨基甲酸酯(1克，2.44毫摩尔)溶于THF/H2O(30毫升/6毫升)中，加入K2OsO4(90毫克，0.244毫摩尔)，NaIO4(2.087克，9.785毫摩尔),室温下搅拌1小时。
TLC显示反应结束，加入水(30毫升)淬灭反应，乙酸乙酯萃取(30毫升×3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩至干，所得残余物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚:乙酸乙酯＝10:1到10:1)，得到0.5克(1.21毫摩尔)棕色油状产物叔丁基(叔丁氧基羰基)(8-甲酰基-1,2,4-四氢萘-1-基)氨基甲酸酯(收率49.6％)。
步骤H：合成3-(((4-(双(叔丁氧基羰基氨基)-8-氯代色满-5-基)甲基)氨基)-1H-吡咯-2-羧酸乙酯
室温下，将3-氨基-1H-吡咯-2-羧酸乙酯盐酸盐(277毫克，1.457毫摩尔)溶于无水MeOH(10毫升)中，加入DIEA(188毫克，1.457毫摩尔),AcOH(87毫克，1.457毫摩尔)。加入叔丁基(叔丁氧基羰基)(8-甲酰基-1,2,4-四氢萘-1-基)氨基甲酸酯(500毫克，1.214毫摩尔)，室温下搅拌1小时。加入NaBH3CN(91毫克，1.457毫摩尔),室温下搅拌1小时。
反应结束，旋蒸除掉甲醇，加入水(10毫升)淬灭反应，乙酸乙酯萃取(30毫升×3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩至干，所得残余物用反相柱纯化，得到300毫克(0.545毫摩尔)3-(((4-(双(叔丁氧基羰基)氨基)-8-氯代色满-5-基)甲基)氨基)-1H-吡咯-2-羧酸乙酯(收率44.9％)。LC-MS:[M+H]+＝550.3。1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.80(s,1H),7.32(d,J＝8.3Hz,1H),6.86(d,J＝8.3Hz,1H),6.72(t,J＝3.0Hz,1H),5.72(s,1H),5.54–5.40(m,2H),4.47(dt,J＝13.5,6.8Hz,1H),4.32–4.24(m,2H),4.23–4.09(m,3H),2.15(d,J＝5.6Hz,2H),1.28(s,7H)。
步骤I：叔丁基(叔丁氧基羰基)(8-氯-5-((4-氧代-2-硫代-2,3,4,5-四氢-1H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-1-基)甲基)吡喃-4-基)氨基甲酸酯
室温下，将3-(((4-(双(叔丁氧基羰基)氨基)-8-氯代色满-5-基)甲基)氨基)-1H-吡咯-2-羧酸乙酯(300毫克，0.545毫摩尔)溶于无水MeOH(10毫升)中，加入异硫氰酸苯甲酰酯(107毫克，0.654毫摩尔),室温下搅拌1小时，再加入Cs2CO3(355毫克，1.091毫摩尔)，65℃下搅拌3小时。
反应结束，将溶剂浓缩至干，所得残余物用反应柱纯化，得到189毫克(0.336毫摩尔)叔丁基(叔丁氧基羰基)(8-氯-5-((4-氧代-2-硫代-2,3,4,5-四氢-1H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-1-基)甲基)吡喃-4-基)氨基甲酸酯(收率61.7％)。LC-MS:[M+H]+＝563.2。1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.51(s,1H),12.38(s,1H),7.33(t,J＝2.9Hz,1H),7.23(d,J＝8.4Hz,1H),6.24(d,J＝8.4Hz,1H),5.94(s,1H),5.65(t,J＝5.2Hz,2H),5.28(d,J＝16.5Hz,1H),4.51(dt,J＝12.1,6.0Hz,1H),4.38–4.27(m,1H),2.29(t,J＝12.3Hz,2H),1.33(s,18H)。
步骤J：合成1-((4-氨基-8-氯代色满-5-基)甲基)-2-硫代-1,2,3,5-四氢-4H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-4-酮
室温下，将叔丁基(叔丁氧基羰基)(8-氯-5-((4-氧代-2-硫代-2,3,4,5-四氢-1H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-1-基)甲基)吡喃-4-基)氨基甲酸酯(240毫克，0.426毫摩尔)溶于DCM(10毫升)中，加入盐酸(1.1毫克，4.26毫摩尔，4M in dioxane)，室温下搅拌3小时。
反应结束，将反应液过滤，滤饼用DCM(5mL)洗涤，干燥得到150毫克(0.376毫摩尔)1-((8-氨基-5,6,7,8-四氢萘-1-基)甲基)-2-硫代-1,2,3,5-四氢-4H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-4-酮盐酸盐(收率88.2％)。LC-MS:[M+H]+＝362.1。1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.53(s,1H),12.40(s,1H),8.76(s,3H),7.36(dd,J＝9.8,5.5Hz,2H),6.27(d,J＝8.4Hz,1H),6.19(s,1H),5.95(d,J＝16.7Hz,1H),5.71(d,J＝16.7Hz,1H),4.95(s,1H),4.57(dd,J＝11.4,4.0Hz,1H),4.39(t,J＝11.8Hz,1H),2.42(d,J＝13.6Hz,1H),2.29–2.15(m,1H)。
实施例6 1-((4-氨基色满-5-基)甲基)-2-硫代-1,2,3,5-四氢-4H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-4-酮、化合物6A和化合物6B
合成路线：
步骤A：合成5-溴代色满-4-胺
将5-溴-4-苯并二氢吡喃酮(4.4克，19.37毫摩尔)溶于无水甲醇(44毫升)和异丙醇(55毫升)中，加入乙酸铵(29.87克，387毫摩尔)和氰基硼氢化钠(6.08克，96.85毫摩尔)，80℃回流反应12小时。
反应结束，将溶液中溶剂旋干，用1摩尔的氢氧化钠溶液调PH至10，乙酸乙酯萃取(30毫升×2)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩至干，所得残余物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝0/1)，得到3.0克白色固体5-溴-4-苯并二氢吡喃-胺收率68.0％)。1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.16–7.01(m,2H),6.86–6.76(m,1H),4.32–4.17(m,2H),4.09–3.98(m,1H),1.96–1.77(m,2H).
步骤B：合成叔丁基(5-溴-4-苯并二氢吡喃-胺)氨基甲酸酯
将5-溴-4-苯并二氢吡喃-胺(3.0克，13.2毫摩尔)，二碳酸二叔丁酯(3.15克，14.5毫摩尔)和三乙胺(4.0克，39.6毫摩尔)溶于二氯甲烷(30毫升)中，室温反应6小时。
将反应液加入20毫升水，用二氯甲烷(20毫升x 2)萃取，合并有机相经NaHCO3水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干。所得残余物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝10/1)，得到3..8克叔丁基(5-溴-4-苯并二氢吡喃)氨基甲酸酯(收率：88.3％)。LCMS:m/z(ESI),[M+Na]+＝350.0；1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.41(d,J＝7.6Hz,1H),7.16-7.09(m,2H),6.81(dd,J＝8.0,1.2Hz,1H),4.63(s,1H),4.25(d,J＝10.8Hz,1H),4.04(dd,J＝17.2,6.4Hz,1H),1.98–1.78(m,2H),1.42(s,9H).
步骤C：合成叔丁基(5-溴-4-苯并二氢吡喃)(叔丁氧基羰基)氨基甲酸酯
将叔丁基(5-溴-4-苯并二氢吡喃)氨基甲酸酯(3.8克，11.58毫摩尔)、二碳酸二叔丁酯(5.05克，23.16毫摩尔)和4-二甲氨基吡啶(2.83克，23.16毫摩尔)溶于二甲基四氢呋喃(20毫升)，60℃反应12小时。
反应结束，冷却至室温后旋干，加入20毫升水，用乙酸乙酯(30毫升x 2)萃取，合并有机相经NaHCO3水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥,过滤,旋干。所得残余物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝10/1)，得到3.5克叔丁基(5-溴-4-苯并二氢吡喃)(叔丁氧基羰基)氨基甲酸酯(收率：71.4％)。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.19–7.08(m,2H),6.87–6.78(m,1H),5.26(t,J＝4.2Hz,1H),4.37-4.32(m,1H),4.27–4.15(m,1H),2.16–2.00(m,2H),1.34(s,18H)。
步骤D：合成叔丁基(5-乙烯基-4-苯并二氢吡喃)(叔丁氧基羰基)氨基甲酸酯
将叔丁基(5-溴-4-苯并二氢吡喃)(叔丁氧基羰基)氨基甲酸酯(3.5克，8.17毫摩尔)、乙烯三氟硼酸钾(1.42克，10.6毫摩尔)、1,1'-双(二苯基膦)二茂铁二氯化钯(1.18克，1.63毫摩尔)和碳酸钾(3.38克，24.5毫摩尔)溶于二甲基亚砜(30毫升)，氮气保护，100℃反应12小时。
反应结束，冷却至室温，反应液用硅藻土过滤，收集滤液，然后加入50毫升水，用乙酸乙酯(40毫升x 3)萃取，合并有机相经NaCl水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥,过滤,旋干。将所得残余物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝10/1)，得到1.8克黄色油状，叔丁基(5-乙烯基-4-苯并二氢吡喃)(叔丁氧基羰基)氨基甲酸酯(收率：58.8％)。1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.15–7.06(m,1H),7.06(d,J＝7.2Hz,1H),6.76-6.69(m,2H),5.65(dd,J＝17.2,1.2Hz,1H),5.41(t,J＝5.2Hz,1H),5.30–5.21(m,1H),4.36(dd,J＝7.2,3.6Hz,1H),4.17–4.08(m,1H),2.17–2.02(m,3H),1.26(s,18H)。
步骤E：合成叔丁基(5-甲酰基-4-苯并二氢吡喃)(叔丁氧基羰基)氨基甲酸酯
将叔丁基(5-乙烯基-4-苯并二氢吡喃)(叔丁氧基羰基)氨基甲酸酯(1.0克，2.67毫摩尔)溶于四氢呋喃(16毫升)和水(4毫升)的混合液中，将锇酸钾(98.2毫克，0.267毫摩尔)加入到反应液中，室温搅拌30分钟后，将高碘酸钠(2.28克，10.68毫摩尔)加入到反应液中，室温反应2小时。
反应结束，向反应液中加入20毫升水，用乙酸乙酯(20毫升x 2)萃取，合并有机相经无水硫酸钠干燥,过滤,旋干。将所得残余物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝10/1)得到600毫克黄色油状，叔丁基(5-甲酰基-4-苯并二氢吡喃)(叔丁氧基羰基)氨基甲酸酯(收率：60.0％)。LCMS:m/z(ESI),[M+Na]+＝400.1；1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.02(s,1H),7.42–7.39(m,2H),7.14-7.01(m,1H),5.89(t,J＝5.6Hz,1H),4.43–4.37(m,1H),4.23–4.18(m,1H),2.2-2.12(m,2H),1.26(s,18H)。
步骤F：合成3-(((4-(双(叔丁氧基羰基)氨基)吡喃-5-基)甲基)氨基)-1H-吡咯-2-羧酸乙酯
将3-氨基-2-乙氧羰基吡咯盐酸盐(333毫克，1.75毫摩尔)溶于6毫升无水乙醇中，然后将N,N-二异丙基乙胺(190毫克，1.75毫摩尔)和冰乙酸(270毫克，4.74毫摩尔)加入到混合物中，室温下搅拌10分钟后，然后将叔丁基(5-甲酰基-4-苯并二氢吡喃)(叔丁氧基羰基)氨基甲酸酯(600毫克，1.58毫摩尔)加入到混合物中，室温下搅拌2小时后，将氰基硼氢化钠(180毫克，3.16毫摩尔)加入到混合物中，该混合物在室温下反应12小时。
反应结束，将反应液中无水乙醇旋干。用水10毫升和乙酸乙酯(20毫升x 2)萃取，合并有机相经无水硫酸钠干燥,过滤,旋干。将所得残余物用反相柱纯化(洗脱剂：0.1％氨水溶液)，得到450毫克3-(((4-(双(叔丁氧基羰基)氨基)吡喃-5-基)甲基)氨基)-1H-吡咯-2-羧酸乙酯(收率：81.9％)。1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.78(s,1H),7.13(t,J＝8.0Hz,1H),6.86(d,J＝7.6Hz,1H),6.73–6.67(m,2H),5.63(s,1H),5.52(t,J＝2.4Hz,1H),5.43(t,J＝4.4Hz,1H),4.47–4.34(m,1H),4.35–4.21(m,1H),4.24–4.08(m,4H),2.13-2.09(m,2H),1.26(m,18H),1.18(dd,J＝9.2,5.2Hz,3H)。
步骤G：合成叔丁基(叔丁氧基羰基)(5-((4-氧代-2-硫代-2,3,4,5-四氢-1H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-1-基)甲基)色满-4-基)氨基甲酸酯
将3-(((4-(双(叔丁氧基羰基)氨基)吡喃-5-基)甲基)氨基)-1H-吡咯-2-羧酸乙酯(450毫克，0.87毫摩尔)和苯甲酰基异硫氰酸酯(171毫克，1.05毫摩尔)溶于甲醇(10毫升)，室温下搅拌3小时后，加入碳酸铯(567毫克，1.74毫摩尔)，该反应液在65℃反应2小时。
反应结束，将反应液中无水甲醇旋干。用水20毫升和乙酸乙酯(20毫升x 2)萃取，合并有机相经无水硫酸钠干燥，过滤，旋干。将所得残余物反相柱纯化(洗脱剂：0.1％碳酸氢铵溶液)，得到400毫克叔丁基(叔丁氧基羰基)(5-((4-氧代-2-硫代-2,3,4,5-四氢-1H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-1-基)甲基)色满-4-基)氨基甲酸酯(收率：86.9％)。LCMS:m/z(ESI),[M+H]+＝529.0；1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.33(t,J＝2.8Hz,1H),7.04(t,J＝8.0Hz,1H),6.71(d,J＝8.0Hz,1H),6.24(d,J＝7.6Hz,1H),5.91(t,J＝2.4Hz,1H),5.71-5.67(m,1H),5.60(t,J＝5.2Hz,1H),5.35(d,J＝16.4Hz,1H),4.44-4.41(m,1H),4.21–4.17(m,1H),2.26-2.22(m,1H),1.32(s,18H)。
步骤H：合成1-((4-氨基色满-5-基)甲基)-2-硫代-1,2,3,5-四氢-4H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-4-酮
将叔丁基(叔丁氧基羰基)(5-((4-氧代-2-硫代-2,3,4,5-四氢-1H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-1-基)甲基)色满-4-基)氨基甲酸酯(200毫克，0.37毫摩尔)溶于乙酸乙酯(10毫升)，将盐酸乙酸乙酯溶液(10毫升)加入到反应液中，室温下搅拌12小时。将反应液旋干。然后用碳酸氢钠水溶液将溶液PH调到8，然后用乙酸乙酯(15毫升x 2)萃取，合并有机相经无水硫酸钠干燥,过滤,旋干。将所得残余物反相柱纯化(洗脱剂：0.1％氨水溶液)，得到93.83毫克1-((4-氨基色满-5-基)甲基)-2-硫代-1,2,3,5-四氢-4H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-4-酮(收率：68.4％)。LCMS:m/z(ESI),[M+H]+＝329.1；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.29(d,J＝2.9Hz,1H),6.96(t,J＝7.9Hz,1H),6.64(d,J＝8.1Hz,1H),6.21-6.15(m,2H),5.97(d,J＝16.4Hz,1H),5.83(d,J＝16.4Hz,1H),4.34-4.18(m,2H),4.15-4.05(m,1H),2.07-1.95(m,1H),1.87-1.79(m,1H)。
步骤I：合成化合物I-1和I-2
将叔丁基(叔丁氧基羰基)(5-((4-氧代-2-硫代-2,3,4,5-四氢-1H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-1-基)甲基)色满-4-基)氨基甲酸酯 (200毫克，0.38毫摩尔)送SFC拆分(OZ柱子(250*25mm 10μm)，使用Supercritical CO2,和MEOH(+0.1％7.0mol/l Ammonia in MEOH)作为流动相进行手性拆分制备得到异构体I-1(RT＝4.18min,70mg,yield＝34％，ee>99％)和I-2(RT＝5.16min,65mg,yield＝32％，ee>99％)。
化合物6A的制备：
将化合物I-1(200毫克，0.37毫摩尔)溶于乙酸乙酯(10毫升)，将盐酸乙酸乙酯溶液(10毫升)加入到反应液中，室温下搅拌12小时。将反应液旋干。然后用碳酸氢钠水溶液将溶液PH调到8，然后用乙酸乙酯(15毫升x 2)萃取，合并有机相经无水硫酸钠干燥,过滤,旋干。将所得残余物反相柱纯化(洗脱剂：0.1％氨水溶液)，得到96.5毫克化合物6A(R)-1-((4-氨基色满-5-基)甲基)-2-硫代-1,2,3,5-四氢-4H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-4-酮(收率：77.8％)。ee>99％.LCMS:m/z(ESI),[M+H]+＝329.1；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.28(d,J＝2.8Hz,1H),6.95(t,J＝7.9Hz,1H),6.64(d,J＝8.1Hz,1H),6.21–6.13(m,2H),5.97(d,J＝16.4Hz,1H),5.83(d,J＝16.4Hz,1H),4.34–4.17(m,2H),4.11(s,1H),2.07–1.94(m,1H),1.88–1.76(m,1H).
化合物6A盐酸盐的制备：
将(R)-叔丁基(叔丁氧基羰基)(5-((4-氧代-2-硫代-2,3,4,5-四氢-1H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-1-基)甲基)色满-4-基)氨基甲酸酯(200毫克，0.37毫摩尔)溶于乙酸乙酯(10毫升)，将盐酸乙酸乙酯溶液(4M,10毫升)加入到反应液中，室温下搅拌12小时。过滤，乙酸乙酯洗涤，得到94毫克白色固体(R)-1-((4-氨基色满-5-基)甲基)-2-硫代-1,2,3,5-四氢-4H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-4-酮盐酸盐(收率：68％)。LCMS:m/z(ESI),[M+H]+＝329.1.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.52(s,1H),12.38(s,1H),8.63(s,3H),7.36(t,J＝3.0Hz,1H),7.15(t,J＝8.0Hz,1H),6.77(d,J＝8.2Hz,1H),6.26(d,J＝7.7Hz,1H),6.16(t,J＝2.5Hz,1H),5.93(d,J＝16.6Hz,1H),5.71(d,J＝16.6Hz,1H),4.89(s,1H),4.45-4.36(m,1H),4.34-4.25(m,1H),2.39-2.31(m,1H),2.26-2.14(m,1H).
其中化合物6A盐酸盐的单晶结构示意图如图1所示，具体晶体参数如下：
化合物6B的制备：
将化合物I-2(200毫克，0.37毫摩尔)溶于乙酸乙酯(10毫升)，将盐酸乙酸乙酯溶液(10毫升)加入到反应液中，室温下搅拌12小时。将反应液旋干。然后用碳酸氢钠水溶液将溶液PH调到8，然后用乙酸乙酯(15毫升x 2)萃取，合并有机相经无水硫酸钠干燥,过滤,旋干。将所得残余物反相柱纯化(洗脱剂：0.1％氨水溶液)，得到93.6毫克化合物6B(S)-1-((4-氨基色满-5-基)甲基)-2-硫代-1,2,3,5-四氢-4H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-4-酮(收率：75.3％)。ee>99％.LCMS:m/z(ESI),[M+H]+＝329.1。
化合物6B盐酸盐合成步骤和上述步骤相同。LCMS:m/z(ESI),[M+H]+＝329.1。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.52(s,1H),12.38(s,1H),8.63(s,3H),7.36(t,J＝3.0Hz,1H),7.15(t,J＝8.0Hz,1H),6.77(d,J＝8.2Hz,1H),6.26(d,J＝7.7Hz,1H),6.16(t,J＝2.5Hz,1H),5.93(d,J＝16.6Hz,1H),5.71(d,J＝16.6Hz,1H),4.89(s,1H),4.45–4.36(m,1H),4.34–4.25(m,1H),2.39–2.31(m,1H),2.26–2.14(m,1H).
实施例7 1-((8-氨基-5,6,7,8-四氢萘-1-基)甲基)-2-硫代-1,2,3,5-四氢-4H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-4-酮、化合物7A和化合物7B
合成路线：
步骤A：合成8-溴-1,2,3,4-四氢萘-1-胺
室温下，将8-溴-3,4-二氢萘-1(2H)-酮(500毫克，2.22毫摩尔)，溶于ETOH(10毫升)中，加入NH4OAC(1.7克，22.22毫摩尔)，NaBH3(CN)(700毫克，11.11毫摩尔)，100℃下搅拌4h。
反应结束，旋干除掉乙醇，加入水(50毫升)淬灭反应，二氯甲烷萃取(50毫升×3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩至干，得到330毫克(1.47毫摩尔)白色固体产物8-溴-1,2,3,4-四氢萘-1-胺(收率66.0％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.40(d,J＝7.3Hz,1H),7.16-6.94(m,2H),4.08–3.96(m,1H),2.88–2.56(m,2H),2.05–1.79(m,4H),1.74–1.56(m,2H)。
步骤B：合成叔丁基(8-溴-1,2,3,4-四氢萘-1-基)氨基甲酸酯
室温下，将8-溴-1,2,3,4-四氢萘-1-胺(330毫克，1.46毫摩尔)溶于DCM(30毫升)中，加入TEA(440毫克，4.38毫摩尔)，(BOC)2O(640毫克，2.92毫摩尔),室温下搅拌12小时。
反应结束，加入水(40毫升)淬灭反应，二氯甲烷萃取(30毫升×3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩至干，所得残余物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚:乙酸乙酯＝10:1)，得到370毫克(1.14毫摩尔)黄色液体产物叔丁基(8-溴-1,2,3,4-四氢萘-1-基)氨基甲酸酯(收率78.0％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.42(t,J＝4.5Hz,1H),7.22–7.04(m,3H),4.70(d,J＝7.9Hz,1H),2.80–2.58(m,2H),1.93–1.54(m,4H),1.39(s,9H)。
步骤C：合成甲基叔丁基(8-溴-1,2,3,4-四氢萘-1-基)(叔丁氧基羰基)氨基甲酸
将(8-溴-1,2,3,4-四氢萘-1-基)氨基甲酸酯(370毫克，1.14毫摩尔)溶于2-甲基-四氢呋喃中,加入DMAP(280毫克，2.28毫摩尔)，(BOC)2O(500毫克，2.21毫摩尔),50℃下搅拌12小时。
反应结束，加入水(40毫升)淬灭反应，乙酸乙酯萃取(30毫升×3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩至干，所得残余物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚:乙酸乙酯＝10:1)，得到220毫克(0.52毫摩尔)无色液体产物甲基叔丁基(8-溴-1,2,3,4-四氢萘-1-基)(叔丁氧基羰基)氨基甲酸(收率45.8％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.42(t,J＝4.5Hz,1H),7.22–6.95(m,3H),4.70(d,J＝7.9Hz,1H),2.82–2.56(m,2H),1.96–1.53(m,4H),1.39(s,18H)。
步骤D：合成叔丁基(叔丁氧基羰基)(8-乙烯基-1,2,3,4-四氢萘-1-基)氨基甲酸酯
将甲基叔丁基(8-溴-1,2,3,4-四氢萘-1-基)(叔丁氧基羰基)氨基甲酸(220毫克，0.52毫摩尔)，乙烯基三氟硼酸钾(100毫克，0.78毫摩尔)，Pd(ppf)Cl2(36毫克，0.05毫摩尔)，K2CO3(200毫克，1.56毫摩尔)，溶于无水二氧六环(10毫 升)中，100℃下搅拌12小时。
反应结束，加入水(40毫升)淬灭反应，乙酸乙酯萃取(30毫升×3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩至干，所得残余物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚:乙酸乙酯＝10:1)，得到30毫克(0.08毫摩尔)无色液体产物叔丁基(叔丁氧基羰基)(8-乙烯基-1,2,3,4-四氢萘-1-基)氨基甲酸酯(收率15.7％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.01–10.45(m,1H),7.24–6.91(m,3H),6.72(s,1H),5.75(s,1H),5.48(s,1H),4.41–4.05(m,4H),2.89–2.63(m,1H),2.01(s,3H),1.62–1.55(m,1H),1.25(s,19H),0.89–0.67(m,2H)。
步骤E：合成叔丁基(叔丁氧基羰基)(8-甲酰基-1,2,4-四氢萘-1-基)氨基甲酸酯
室温下，将叔丁基(叔丁氧基羰基)(8-乙烯基-1,2,3,4-四氢萘-1-基)氨基甲酸酯(30毫克，0.08毫摩尔)溶于无水THF(5毫升)中，加入K2OsO4(5毫克，0.01毫摩尔)，室温下搅拌1小时后加入NaIO4(136毫克，0.64毫摩尔),室温下搅拌1小时。
反应结束，加入水(40毫升)淬灭反应，二氯甲烷萃取(30毫升×3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩至干，所得残余物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚:乙酸乙酯＝10:1)，得到30毫克(0.08毫摩尔)白色固体产物叔丁基(叔丁氧基羰基)(8-甲酰基-1,2,4-四氢萘-1-基)氨基甲酸酯(收率98.0％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.06(s,1H),7.61(dd,J＝7.2,1.8Hz,1H),7.48–6.94(m,2H),5.91(t,d＝6.6Hz,1H),2.88–2.64(m,2H),2.23–1.90(m,3H),1.75–1.56(m,2H),1.25(s,18H)。
步骤F：合成3-((8-(双(叔丁氧基羰基)氨基)-5,6,7,8-四氢萘-1-基)甲基)氨基)-1H-吡咯-2-羧酸乙酯
室温下，将叔丁基(叔丁氧基羰基)(8-甲酰基-1,2,4-四氢萘-1-基)氨基甲酸酯(30毫克，0.08毫摩尔)溶于无水MeOH(5毫升)中，加入DIEA(20毫克，0.1毫摩尔),ACOH(6毫克，0.1毫摩尔)。室温下搅拌5分钟后加入3-氨基-1H-吡咯-2-羧酸乙酯(14毫克，0.1毫摩尔)，室温下搅拌1小时后加入NaBH3(CN)(6毫克，0.1毫摩尔),室温下搅拌1小时。
反应结束，旋蒸除掉甲醇，加入水(40毫升)淬灭反应，二氯甲烷萃取(30毫升×3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩至干，所得残余物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：乙腈:水＝5:1)，得到40毫克(0.08毫摩尔)白色固体产物3-((8-(双(叔丁氧基羰基)氨基)-5,6,7,8-四氢萘-1-基)甲基)氨基)-1H-吡咯-2-羧酸乙酯(收率97.5％)。LC-MS:[M+H]+＝514.3。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.88–10.08(m,1H),7.20–6.93(m,3H),6.72(s,1H),5.75(s,1H),5.48(s,2H),4.35–4.11(m,4H),2.87–2.63(m,2H),2.01(s,3H),1.62–1.48(m,1H),1.21(d,J＝31.1Hz,19H),0.88–0.71(m,2H)。
步骤G：叔丁基(叔丁氧基羰基)(8-((4-氧代-2-硫代-2,3,4,5-四氢-1H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-1-基)甲基)-1,2,3,4-四氢萘-1-基)氨基甲酸酯
室温下，将3-((8-(双(叔丁氧基羰基)氨基)-5,6,7,8-四氢萘-1-基)甲基)氨基)-1H-吡咯-2-羧酸乙酯(40毫克，0.08毫摩尔)溶于无水MeOH(5毫升)中，加入苯甲酰基异硫氰酸酯(17毫克，0.1毫摩尔),室温下搅拌2小时，再加入Cs2CO3(104毫克，0.32毫摩尔)，65℃下搅拌5小时。
反应结束，加入水(40毫升)淬灭反应，二氯甲烷萃取(30毫升×3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩至干，所得残余物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：乙腈:水＝5:1)，得到40毫克(0.08毫摩尔)白色固体产物叔丁基(叔丁氧基羰基)(8-((4-氧代-2-硫代-2,3,4,5-四氢-1H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-1-基)甲基)-1,2,3,4-四氢萘-1-基)氨基甲酸酯(收率95.2％)。LC-MS:[M+H]+＝527.2。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.41(d,J＝65.8Hz,2H),7.33(s,1H),7.03(d,J＝7.5Hz,2H),6.62-6.36(m,1H),5.91–5.57(m,3H),5.47–5.26(m,1H),2.83–2.68(m,2H),2.01(s,3H),2.07(s,3H),1.69–1.59(m,2H),1.29(s,18H).
步骤H：合成1-((8-氨基-5,6,7,8-四氢萘-1-基)甲基)-2-硫代-1,2,3,5-四氢-4H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-4-酮
室温下，将叔丁基(叔丁氧基羰基)(8-((4-氧代-2-硫代-2,3,4,5-四氢-1H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-1-基)甲基)-1,2,3,4-四氢萘-1-基)氨基甲酸酯(40毫克，0.08毫摩尔)溶于乙酸乙酯(10毫升)中，将盐酸乙酸乙酯溶液(10毫升)，室温下搅拌2小时。
过滤，乙酸乙酯洗涤得到7毫克(0.02毫摩尔)1-((8-氨基-5,6,7,8-四氢萘-1-基)甲基)-2-硫代-1,2,3,5-四氢-4H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-4-酮盐酸盐(收率26.9％)。LC-MS:[M+H]+＝327.2。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.52(s,2H),8.21(s,3H),7.36(d,J＝2.7Hz,1H),7.24-7.05(m,2H),6.57(d,J＝7.5Hz,1H),6.14(d,J＝15.5Hz,1H),5.90(s,1H),5.86(s,1H),5.77(dd,J＝6.8Hz,16.0Hz,2H),4.89(s,1H),2.84(m,2H),2.24–2.11(m,1H),1.98–1.82(m,3H)。
步骤I：合成化合物L-1和L-2
叔丁基-(叔丁氧基羰基)(8-((4-氧代-2-硫代-2,3,4,5-四氢-1H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-1-基)甲基)-1,2,3,4-四氢萘-1-基)氨基甲酸酯(1克，1.90毫摩尔)送SFC拆分(OZ柱子(250*25mm 10μm)，使用Supercritical CO2,和MEOH(+0.1％7.0mol/l Ammonia in MEOH)作为流动相进行手性拆分制备得到异构体L-1(RT＝2.82min,400mg,yield＝40％，ee>99％)和L-2(RT＝3.87min,450mg,yield＝45％，ee>99％)。
化合物7A的制备：
将化合物L-1(400毫克，0.76毫摩尔)溶于二氯甲烷(10毫升)，将盐酸二氧六环溶液(5毫升)加入到反应液中，室温下搅拌2小时。反应结束，浓缩至干。然后用碳酸氢钠水溶液将溶液PH调到8，然后用乙酸乙酯(15毫升x 2)萃取，合并有机相经无水硫酸钠干燥,过滤,旋干。将所得残余物反相柱纯化(洗脱剂：0.1％氨水溶液)，得到208.42毫克化合物7A(收率84％)。LCMS:[M+H]+＝327.2；(ee>99％.,RT＝3.932min,coulumn DEA C4OJ)。
化合物7B的制备：
将化合物L-2(450毫克，0.85毫摩尔)溶于二氯甲烷(10毫升)，将盐酸二氧六环溶液(5毫升)加入到反应液中，室温下搅拌2小时。反应结束，浓缩至干。然后用碳酸氢钠水溶液将溶液PH调到8，然后用乙酸乙酯(15毫升x 2)萃取，合并有机相经无水硫酸钠干燥,过滤,旋干。将所得残余物反相柱纯化(洗脱剂：0.1％氨水溶液)，得到216.08毫克化合物7B(收率77％)。LCMS:[M+H]+＝327.2；(ee>99％.,RT＝3.770min,coulumn DEA C4 OJ)。
实施例8-14
参照实施例6的制备方法，分别制备得到下式化合物8-14。

实施例15 1-((5-氨基-2,3,4,5-四氢苯并[b]氧嘧啶-6-基)甲基)-2-硫代-1,2,3,5-四羟基-4H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-4-酮、化合物15A和15B

步骤A：合成化合物叔丁基(R)(叔丁氧基羰基)(6-((4-氧代-2-硫代-2,3,4,5-四氢-1H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-1-基)甲基)-2,3,4.5-四氢苯并[b]氧嘧啶-5-基)氨基甲酸酯和叔丁基(S)(叔丁氧基羰基)(6-((4-氧代-2-硫代-2,3,4,5-四氢-1H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-1-基)甲基)-2,3,4.5-四氢苯并[b]氧嘧啶-5-基)氨基甲酸酯
将叔丁基(R)(叔丁氧基羰基)(6-((4-氧代-2-硫代-2,3,4,5-四氢-1H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-1-基)甲基)-2,3,4.5-四氢苯并[b]氧嘧啶-5-基)氨基甲酸酯(380毫克，0.70毫摩尔)送SFC拆分(OJ柱子(250*25mm 10μm)，使用Supercritical CO2,和MEOH(+0.1％7.0mol/l Ammonia in MEOH)作为流动相进行手性拆分，将拆分后的溶剂低温旋干。分别得到120毫克白色固体15-1，叔丁基(R or S)(叔丁氧基羰基)(6-((4-氧代-2-硫代-2,3,4,5-四氢-1H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-1-基)甲基)-2,3,4.5-四氢苯并[b]氧嘧啶-5-基)氨基甲酸酯(RT＝1.46min,ee>99％)和115毫克15-2，叔丁基(S or R)(叔丁氧基羰基)(6-((4-氧代-2-硫代-2,3,4,5-四氢-1H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-1-基)甲基)-2,3,4.5-四氢苯并[b]氧嘧啶-5-基)氨基甲酸酯(RT＝2.47min,ee>99％)。
步骤B：合成化合物15A盐酸盐
将叔丁基(R)(叔丁氧基羰基)(6-((4-氧代-2-硫代-2,3,4,5-四氢-1H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-1-基)甲基)-2,3,4.5-四氢苯并[b]氧嘧啶-5-基)氨基甲酸酯(120毫克，0.22毫摩尔)溶于乙酸乙酯(2毫升)，将盐酸乙酸乙酯溶液(4毫升)加入到反应液中，室温下搅拌2小时。将反应液直接旋干。无进一步纯化，直接冻干后得到70.95毫克白色固体15A盐酸盐。
LCMS:RT＝1.233min,[Ms+H]+＝343.2；1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.50(s,1H),12.39(s,1H),8.40(s,3H),7.33(s,1H),7.19(t,J＝8.0Hz,1H),6.98(d,J＝8.0Hz,1H),6.42(d,J＝8.0Hz,1H),6.22(d,J＝2.0Hz,1H),6.01(d,J＝16.4Hz,1H),5.74(d,J＝16.4Hz,1H),4.89(s,1H),4.46(d,J＝11.2Hz,1H),3.62(t,J＝11.6Hz,1H),2.35–2.20(m,2H),1.87-1.80(m,2H).
步骤C：合成化合物15B盐酸盐
将叔丁基(S)(叔丁氧基羰基)(6-((4-氧代-2-硫代-2,3,4,5-四氢-1H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-1-基)甲基)-2,3,4.5-四氢苯并[b]氧嘧啶-5-基)氨基甲酸酯(115毫克，0.21毫摩尔)溶于乙酸乙酯(2毫升)，将盐酸乙酸乙酯溶液(4毫升)加入到反应液中，室温下搅拌2小时。将反应液直接旋干。无进一步纯化，直接冻干后得到70.28毫克粉色固体15B盐酸盐。
LCMS:RT＝1.223min,[Ms+H]+＝343.2；1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.50(s,1H),12.38(s,1H),8.42(s,3H),7.33(t,J＝2.8Hz,1H),7.19(t,J＝8.0Hz,1H),6.98(d,J＝8.0Hz,1H),6.41(d,J＝7.6Hz,1H),6.24(s,1H),6.01(d,J＝16.4Hz,1H),5.74(d,J＝16.4Hz,1H),4.88(s,1H),4.46(d,J＝11.2Hz,1H),3.62(t,J＝11.6Hz,1H),2.34-2.25(m,2H),1.81-1.80(m,2H).
实施例16 1-(4-氨基苯并吡喃-5-基)甲基)-7-甲基-2-硫代-1,2,3,5-四氢-4H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-4-酮
合成路线：
步骤A：合成化合物3-((4-(双(叔丁氧羰基)氨基)色满-5-基甲基)氨基)-4-甲基吡咯-2-羧酸乙酯
室温下，将3-氨基-4-甲基吡咯-2-羧酸乙酯(80毫克，0.39毫摩尔)和DIEA(0.07毫升，0.39毫摩尔)加入到乙醇中(10毫升)，反应5分钟后，加入冰乙酸(0.02毫升，0.39毫摩尔)，在室温下反应30分钟，加入叔丁基(叔丁氧羰基)(5-甲酰基色满-4-基)氨基甲酸酯(124毫克，0.33毫摩尔)，在室温下反应1小时后，加入氰基硼氢化钠(62毫克，0.99毫摩尔)，在室温下反应12小时。反应结束，旋干反应液中的乙醇，加入水(20毫升)，乙酸乙酯萃取(20毫升×3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩至干。所得残余物用反相柱层析纯化(洗脱剂：0.1％碳酸氢铵水溶液:乙腈＝65％)，得到90毫克白色固体产物3-((4-(双(叔丁氧羰基)氨基)色满-5-基甲基)氨基)-4-甲基吡咯-2-羧酸乙酯(收率:51.72％)。
LC-MS:[M+H]+＝529.63；1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.60(s,1H),7.17(t,J＝7.9Hz,1H),6.95(d,J＝7.5Hz,1H),6.71(d,J＝8.2Hz,1H),6.58(d,J＝3.1Hz,1H),5.46–5.28(m,2H),4.47–4.32(m,2H),4.17(dt,J＝10.6,9.8Hz,4H),2.12–2.02(m,2H),2.01(d,J＝11.0Hz,3H),1.23(dd,J＝13.8,6.5Hz,21H).
步骤B：合成化合物叔丁基(5-((7-甲基-4-氧代-2-硫代-2，3，4，5-四氢-1H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-1-基)甲基)色满-4-基)氨基甲酸酯
在室温下，将3-((4-(双(叔丁氧羰基)氨基)色满-5-基甲基)氨基)-4-甲基吡咯-2-羧酸乙酯(90毫克，0.17毫摩尔)和苯甲酰基异硫氰酸酯(0.04毫升，0.2毫摩尔)加入到10毫升的无水甲醇中，在室温下反应2小时，再加入碳酸铯(222毫克，0.68毫摩尔)，在65℃下反应2小时。反应结束，旋干反应液中的甲醇，加入水(20毫升)，乙酸乙酯萃取(30毫升×3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩至干。所得残余物用反相柱层析纯化(洗脱剂：0.1％碳酸氢铵水溶液:乙腈＝65％)，得到90毫克白色固体产物叔丁基(5-((7-甲基-4-氧代-2-硫代-2，3，4，5-四氢-1H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-1-基)甲基)色满-4-基)氨基甲酸酯(收率：97.61％)。
LC-MS:[M+H]+＝542.65；1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.31(s,2H),7.10(dd,J＝33.8,25.9Hz,2H),6.73(d,J＝8.1Hz,1H),6.26(s,1H),6.03–4.80(m,3H),4.41(s,1H),4.19–4.03(m,1H),2.24(d,J＝22.5Hz,2H),1.99(dd,J＝45.5,37.5Hz,3H),1.28(d,J＝32.4Hz,18H).
步骤C：合成化合物1-(4-氨基苯并吡喃-5-基)甲基)-7-甲基-2-硫代-1,2,3,5-四氢-4H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-4-酮盐酸盐
在室温下，将叔丁基(5-((7-甲基-4-氧代-2-硫代-2，3，4，5-四氢-1H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-1-基)甲基)色满-4-基)氨基甲酸酯(90毫克，0.17毫摩尔)溶于DCM(10毫升)中，加入盐酸-乙酸乙酯(1.3毫升，5毫摩尔)，在室温下反应12小时。反应结束,旋干二氯甲烷。所得残余物加入二氯甲烷(30毫升)打浆1小时，过滤得到固体产物1-(4-氨基苯并吡喃-5-基)甲基)-7-甲基-2-硫代-1，2，3，5-四氢-4H-吡咯并[3，2-d]嘧啶-4-酮盐酸盐40毫克。(收率：70.5％)。
LC-MS:[M+H]+＝342.42；1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.33(d,J＝28.3Hz,2H),8.62(s,3H),7.20(t,J＝8.0Hz,2H),6.80(d,J＝8.2Hz,1H),6.33(d,J＝7.5Hz,1H),4.87(s,1H),4.40(d,J＝7.9Hz,1H),4.28(t,J＝12.1Hz,1H),2.36(t,J＝14.3Hz,1H),2.14(dd,J＝17.1,7.0Hz,1H).
实施例17 1-((4-氨基色满-5-基)甲基)-7-甲氧基-2-硫代-1,2,3,5-四氢-4H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-4-酮
合成路线：
步骤A：5-溴-4-苯并二氢吡喃-胺
室温下，将5-溴-4-苯并二氢吡喃酮(45克，198毫摩尔)溶于无水乙醇(500毫升)中，加入乙酸铵(124克，1.98摩尔)和氰基硼氢化钠(76克，0.99摩尔)，100℃回流反应12小时。LC-MS显示反应结束后，将溶液中溶剂旋干，加水(300毫升)，用饱和碳酸氢钠溶液调PH至10，乙酸乙酯萃取(500毫升×2)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。所得粗品用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝20/1)，得到29克白色固体5-溴-4-苯并二氢吡喃-胺收率(64％)。。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.16–7.01(m,2H),6.86–6.76(m,1H),4.32–4.17(m,2H),4.09–3.98(m,1H),1.96–1.77(m,2H).
步骤B：合成化合物叔丁基(5-溴-4-苯并二氢吡喃-胺)氨基甲酸酯
将5-溴-4-苯并二氢吡喃-胺(29克，127毫摩尔)，二碳酸二叔丁酯(56克，254毫摩尔)和三乙胺(39克，381毫摩尔)溶于二氯甲烷(300毫升)中，室温反应12小时。反应结束，将反应液加入200毫升水，用二氯甲烷(300毫升x 3)萃取，合并有机相经NaHCO3水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干。所得残余物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝10/1)，得到30克叔丁基(5-溴-4-苯并二氢吡喃)氨基甲酸酯(收率：71％)。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.41(d,J＝7.6Hz,1H),7.16-7.09(m,2H),6.81(dd,J＝8.0,1.2Hz,1H),4.63(s,1H),4.25(d,J＝10.8Hz,1H),4.04(dd,J＝17.2,6.4Hz,1H),1.98–1.78(m,2H),1.42(s,9H).
步骤C：合成化合物叔丁基(5-溴-4-苯并二氢吡喃)(叔丁氧基羰基)氨基甲酸酯
将叔丁基(5-溴-4-苯并二氢吡喃)氨基甲酸酯(30克，91.4毫摩尔)、二碳酸二叔丁酯(199克，914毫摩尔)和4-二甲氨基吡啶(22克，183毫摩尔)溶于二甲基四氢呋喃(300毫升)，60℃反应12小时。反应结束，冷却至室温后旋干，加入100毫升水，用乙酸乙酯(300毫升x 3)萃取，合并有机相经NaHCO3水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥,过滤,旋干。所得残余物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝10/1)，得到32克黄色固体叔丁基(5-溴-4-苯并二氢吡喃)(叔丁氧基羰基)氨基甲酸酯(收率：82％)。1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.19–7.08(m,2H),6.87–6.78(m,1H),5.26(t,J＝4.2Hz,1H),4.37-4.32(m,1H),4.27–4.15(m,1H),2.16–2.00(m,2H),1.34(s,18H).
步骤D：合成化合物叔丁基(5-乙烯基-4-苯并二氢吡喃)(叔丁氧基羰基)氨基甲酸酯
将叔丁基(5-溴-4-苯并二氢吡喃)(叔丁氧基羰基)氨基甲酸酯(31克，72毫摩尔)、乙烯三氟硼酸钾(12.5克，93.6毫摩尔)、1,1'-双(二苯基膦)二茂铁二氯化钯(5.2克，7.2毫摩尔)和碳酸钾(2.9克，216毫摩尔)溶于无水1,4-二氧六环(300毫升)和水(75毫升)中，氮气保护，100℃反应12小时。反应结束，冷却至室温，反应液用硅藻土过滤，收集滤液，然后加入100毫升水，用乙酸乙酯(300毫升x 3)萃取，合并有机相经NaCl水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥,过滤,旋干。 将所得残余物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝10/1)，得到16克黄色固体，叔丁基(5-乙烯基-4-苯并二氢吡喃)(叔丁氧基羰基)氨基甲酸酯(收率：59％)。1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.15–7.06(m,1H),7.06(d,J＝7.2Hz,1H),6.76-6.69(m,2H),5.65(dd,J＝17.2,1.2Hz,1H),5.41(t,J＝5.2Hz,1H),5.30–5.21(m,1H),4.36(dd,J＝7.2,3.6Hz,1H),4.17–4.08(m,1H),2.17–2.02(m,3H),1.26(s,18H).
步骤E：合成叔丁基(5-甲酰基-4-苯并二氢吡喃)(叔丁氧基羰基)氨基甲酸酯
将叔丁基(5-乙烯基-4-苯并二氢吡喃)(叔丁氧基羰基)氨基甲酸酯(5克，13.3毫摩尔)溶于四氢呋喃(120毫升)和水(30毫升)的混合液中，将锇酸钾(490毫克，1.33毫摩尔)加入到反应液中，室温搅拌30分钟后，将高碘酸钠(11.4克，53.2毫摩尔)加入到反应液中，室温反应2小时。反应结束，向反应液中加入50毫升水，用乙酸乙酯(200毫升x 2)萃取，合并有机相经无水硫酸钠干燥,过滤,旋干。将所得残余物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝10/1)得到2.6克黄色固体，叔丁基(5-甲酰基-4-苯并二氢吡喃)(叔丁氧基羰基)氨基甲酸酯(收率：52％)。LCMS:m/z(ESI),[M+Na]+＝400.1.1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.02(s,1H),7.42–7.39(m,2H),7.14-7.01(m,1H),5.89(t,J＝5.6Hz,1H),4.43–4.37(m,1H),4.23–4.18(m,1H),2.2-2.12(m,2H),1.26(s,18H).
步骤F：合成化合物3-(((4-(双(叔丁氧基羰基)氨基)吡喃-5-基)甲基)氨基)-4-甲氧基-1H-吡咯-2-羧酸乙酯
将3-氨基-4-甲氧基-1H-吡咯-2-羧酸乙酯(118毫克，0.64毫摩尔)溶于15毫升无水乙醇中，然后将N,N-二异丙基乙胺(83毫克，0.64毫摩尔)和冰乙酸(38毫克，0.64毫摩尔)加入到混合物中，室温下搅拌10分钟后，然后将叔丁基(5-甲酰基-4-苯并二氢吡喃)(叔丁氧基羰基)氨基甲酸酯(200毫克，0.53毫摩尔)加入到混合物中，室温下搅拌2小时后，将氰基硼氢化钠(100毫克，1.6毫摩尔)加入到混合物中，该混合物在室温下反应3小时。反应结束，将反应液中无水乙醇旋干。用水20毫升和乙酸乙酯(30毫升x 3)萃取，合并有机相经无水硫酸钠干燥,过滤,旋干。将所得残余物用反相柱纯化(洗脱剂：0.1％碳酸氢铵溶液)，得到150毫克黄色固体3-(((4-(双(叔丁氧基羰基)氨基)吡喃-5-基)甲基)氨基)-4-甲氧基-1H-吡咯-2-羧酸乙酯(收率：52％)。LCMS:RT＝1.99min,[Ms+H]+＝546；1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.34(s,1H),7.11(t,J＝7.9Hz,1H),6.88(d,J＝7.5Hz,1H),6.65(d,J＝8.2Hz,1H),6.54(d,J＝3.5Hz,1H),5.41(s,1H),5.31(d,J＝6.4Hz,1H),4.45(ddd,J＝18.0,13.0,7.4Hz,3H),4.29–4.09(m,5H),3.55(s,3H),2.17–2.01(m,3H),1.25(d,J＝10.1Hz,18H).
步骤G：合成化合物叔丁基(叔丁氧基羰基)(5-((7-甲氧基-4-氧代-2-硫代-2,3,4,5-四氢-1H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-1-基)甲基)吡喃-4-基)氨基甲酸酯
将3-(((4-(双(叔丁氧基羰基)氨基)吡喃-5-基)甲基)氨基)-4-甲氧基-1H-吡咯-2-羧酸乙酯(150毫克，0.27毫摩尔)和苯甲酰基异硫氰酸酯(68毫克，0.42毫摩尔)溶于甲醇(15毫升)，室温下搅拌3小时后，加入碳酸铯(274毫克，0.84毫摩尔)，该反应液在65℃反应3小时。反应结束，将反应液中无水甲醇旋干。将所得残余物反相柱纯化(洗脱剂：0.1％碳酸氢铵溶液)，得到150毫克白色固体叔丁基(叔丁氧基羰基)(5-((7-甲氧基-4-氧代-2-硫代-2,3,4,5-四氢-1H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-1-基)甲基)吡喃-4-基)氨基甲酸酯(收率：76％)。LCMS:RT＝1.82min,[Ms+H]+＝559.
步骤H：合成化合物1-((4-氨基色满-5-基)甲基)-7-甲氧基-2-硫代-1,2,3,5-四氢-4H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-4-酮盐酸盐
将叔丁基(叔丁氧基羰基)(5-((7-甲氧基-4-氧代-2-硫代-2,3,4,5-四氢-1H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-1-基)甲基)吡喃-4-基)氨基甲酸酯(150毫克，0.27毫摩尔)溶于EA(2毫升)，将盐酸乙酸乙酯溶液(2毫升,8.1毫摩尔)加入到反应液中，室温下搅拌2小时。将反应液过滤得白色固体粗品。所得滤饼粗品经冻干得到35毫克白色固体产物1-((4-氨基色满-5-基)甲基)-7-甲氧基-2-硫代-1,2,3,5-四氢-4H-吡咯并[3,2-d]嘧啶-4-酮盐酸盐。LCMS:RT＝1.29min,[Ms+H]+＝359；1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.35(s,1H),12.14(s,1H),8.59(s,3H),7.25–7.10(m,2H),6.76(d,J＝8.2Hz,1H),6.43(d,J＝7.7Hz,1H),6.31–5.95(m,1H),5.55(s,1H),4.87(s,1H),4.37(dt,J＝20.6,10.4Hz,2H),3.60(d,J＝29.0Hz,3H),2.43(d,J＝14.8Hz,1H),2.13(t,J＝13.8Hz,1H).
实施例18：本发明化合物在体外对人髓过氧化物酶(hMPO)活性抑制评价实验
在黑色不透光低蛋白吸附的96孔板(购自Perkinelmer，6005270)中加入50μL 2×底物(由3’-(p-aminophenyl)fluorescein和H2O2构成，3’-(p-aminophenyl)fluorescein和H2O2均为Km浓度，购自Invitrogen，A36003)，并加入45μL不同浓度的2×化合物(DMSO终浓度为1％)，充分吹打混匀后，加入5μL 2μg/mL人髓过氧化物酶(购自PLANTA NATURAL，700-03-001)并混匀，立即使用酶标仪在Ex/Em:488/520nm波长下使用动力学模式读取0～30min荧光值(每20s读取一次)。计算不同浓度的化合物抑制剂：抑制率(％)＝[1-(SlopeControl-Slopecpd)/SlopeControl–SlopeBlank)]*100，其中SlopeBlank为不加化合物对照和MPO孔0～5min的斜率(Ex/Em:544/620nm读值/反应时间t)；SlopeControl为不加化合物孔(含1％DMSO)的0～5min(线性反应阶段)的斜率；Slopecpd为化合物0～5min的斜率。以化合物浓度的对数值为横坐标，抑制率为纵坐标，进行4参数非线性回归曲线拟合，计算IC50值(Y＝Bottom+(Top-Bottom)/(1+10^((LogIC50-X)*HillSlope))，其中：Hillslope表示拟合曲线的斜率，IC50表示半抑制浓度。测试结果见表1。
表1化合物在体外对人髓过氧化物酶(hMPO)过氧化循环抑制活性


结论：本发明化合物具有抑制hMPO活性的作用。
实施例19：本发明化合物大鼠药代动力学研究
19.1实验材料
SD大鼠：雄性，180-350g，购于浙江维通利华实验动物技术有限公司。
试剂：DMSO(二甲亚砜)，PEG-400(聚乙二醇400)，生理盐水，乙腈，甲酸，普萘洛尔(内标)均为市售可得。
仪器：赛默飞LC-MS(Ultimate 3000 UPLC，TSQ QUANTUMN ULTRA三重四级杆质谱)。
19.2实验方法
称取化合物溶于DMSO-PEG-400-生理盐水(5：60：35，v/v/v)体系中，大鼠静脉或灌胃给药后，于15min、30min、1h、2h、5h、7h、24h(iv组加采5min)采集静脉血200μL于EDTA-K2抗凝管中，10000rpm离心2min，取血浆-80℃冻存待测。精密称取一定量供试品用DMSO溶解至2mg/mL，作为储备液。准确吸取适量的化合物储备液，加入乙腈稀释制成标准系列溶液。准确吸取上述标准系列溶液各4μL，加入到36μL空白血浆中，涡旋混匀，配制成相当于血浆浓度为1、3、5、10、30、100、300、1000、3000ng/mL的血浆样品，每一浓度进行双样本分析，建立标准曲线。取30μL血浆(静脉给药5min、15min、30min血浆稀释5倍)，加入普萘洛尔乙腈溶液(内标，50ng/mL)沉淀蛋白，再加100μL水涡旋混匀后，4000rpm离心5min，取上清LC-MS分析。LC-MS检测条件如下：
色谱柱：YMC-Triart C18 50×3.0mmI.D.S-3μm,12nm
流动相A：水(0.1％甲酸)，流动相B：乙腈，流速：0.5mL/min，梯度洗脱：
19.3数据处理
LC-MS检测血药浓度后，采用WinNonlin 6.1软件，非房室模型法计算药动学参数，测试结果见表2。
表2本发明化合物对大鼠药代动力学结果
由表2的实验结果可知，本发明化合物在大鼠体内代谢更慢，具有更高的口服暴露量和生物利用度。
实施例20：本发明化合物酶诱导试验研究
20.1实验材料与仪器
材料：Williams’Medium E(without phenol red)购于西格玛奥德里奇贸易有限公司；Williams'Medium E、人重组胰岛素、GlutaMAX和HEPES购于Life Technologies；Isotonic Percoll购于General Electric；Fetal bovine serum购于Corning；地塞米松市售可得；CellTiter-FluorTM Cell Viability Assay kit购于Promega；Taqman Gene Expression Assay probe(20×,CYP1A2,FAM labeled)、Taqman Gene Expression Assay probe(20×,CYP2B6,FAM labeled)、Taqman Gene Expression Assay probe(20×,CYP3A4,FAM labeled)和Taqman Gene Expression Assay probe(20×,ACTB,VIC labeled)购于AB(Applied biosystems)；人原代肝细胞，购于BioIVT。
仪器：QuantStudio 6。
20.2实验设计
精密称取受试化合物、阳性诱导剂、阴性诱导剂、内标，配成相应浓度储备液。准备好细胞复苏液和孵育液、mRNA提取、反转录和荧光定量PCR的相关试剂和耗材。
将冻存的人原代肝细胞复苏，按一定密度接种于合适的细胞培养板上进行单层细胞培养以达到细胞生长要求。
在相应孔中加入用孵育液新鲜配制并预热好的含阳性/阴性诱导剂或受试物溶液(10μM)，每个浓度两个复孔，连续孵育3天并每天换液，然后测试CYP酶的mRNA水平。mRNA的提取、反转录和荧光定量PCR的操作根据相关试剂盒说明书进行实验。
20.3实验结果
受试化合物对CYP酶mRNA水平的诱导作用试验结果见下表3。
表3实验结果
由表3的实验结果可知，本发明的化合物与实施例3(CN201580065064.2)化合物相比诱导风险降低。
实施例21：本发明化合物酶抑制试验研究
21.1实验材料与仪器
材料：咪达唑仑和睾酮购于Cerilliant和PANPHY；酮康唑购于MCE；人肝微粒体，购于Corning。
仪器：AB Sciex5500+。
21.2实验设计
使用含有0.2mg/mL人肝微粒体的磷酸缓冲盐(100mM，pH 7.4)体系来评价化合物对细胞色素P450酶CYP3A的抑制潜能。化合物的测试浓度为0.068、0.206、0.62、1.85、5.56、16.67和50μM。孵育体系中阳性底物分别为1μM咪达唑仑和40μM睾酮(CYP3A)，孵育体系中阳性抑制剂酮康唑(CYP3A)的浓度为0.05μM。孵育在37℃进行，并加入终浓度为1mM的NADPH溶液起始反应，孵育时间为10分钟，孵育结束后所有样品加入300μL含3％甲酸和内标(0.5μM甲苯磺丁脲)的乙腈溶液沉淀蛋白并且采用UPLC-MS/MS检测标记底物的代谢产物生成量，从而计算化合物抑制的IC50值。
21.3实验结果
受试化合物对CYP3A抑制作用的IC50值见下表。
表4实验结果
由表4的实验结果可知，本发明的化合物与实施例3(CN201580065064.2)化合物相比CYP3A的抑制风险降低。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (13)

  1. 式(I)的化合物：
    或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐，其中：
    R1、R2、R3、R4、R5独立地选自氢、卤素、羟基、氨基、氰基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、烷氧烷基、环烷基、芳基或杂芳基，其中芳基和杂芳基可以任选被一个或多个独立地选自卤素、羟基、氰基、羧基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、和卤代C1-6烷基取代；
    X、Y独立地选自O、CH2、NR6，R6独立地选自氢、卤素、C1-6烷基、C2-6烯基、C1-6烷氧基、烷氧烷基、环烷基、羟基、氨基、氰基、氰基取代的C1-6烷基、氨基取代的C1-6烷基、卤代C1-6烷基、卤代C1-6烷氧基、-(CH2)n-C(＝O)-R7、-(CH2)n-C(＝O)OR8、-(CH2)n-NHC(＝O)-R9；R7、R8、R9独立地选自氢、C1-6烷基；
    n为0、1、2或3。
  2. 根据权利要求1所述化合物，或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐，其特征在于，所述化合物如式(II)所示：
    其中：X、Y、R1、n如上定义。
  3. 根据权利要求1所述化合物，或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐，其特征在于，所述C1-6的烷基选自甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、仲戊基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、叔戊基、1,2-二甲基丙基、异戊基、新戊基、正己基、异己基、仲己基、叔己基、新己基、2-甲基戊基、1，2-二甲基丁基、1-乙基丁基；
    所述C2-6的烯基选自乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基、1-甲基乙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基、3-丁烯基、1-甲基-1-丙烯基、2-甲基-1-丙烯基、1-甲基-2-丙烯基、2-甲基-2-丙烯基、1-戊烯基、2-戊烯基、3-戊烯基、4-戊烯基、1-甲基-1-丁烯基、2-甲基-1-丁烯基、3-甲基-1-丁烯基、1-甲基-2-丁烯基、2-甲基-2-丁烯基、3-甲基-2-丁烯基、1-甲基-3-丁烯基、2-甲基-3-丁烯基、3-甲基-3-丁烯基、1，1-二甲基-2-丙烯基、1，2-二甲基-1-丙烯基、1，2-二甲基-2-丙烯基、1-乙基-1-丙烯基、1-乙基-2-丙烯基、1-己烯基、2-己烯基、3-己烯基、4-己烯基、5-己烯基、1-甲基-1-戊烯基、2-甲基-1-戊烯基、3-甲基-1-戊烯基、4-甲基-1-戊烯基、1-甲基-2-戊烯基、2-甲基-2-戊烯基、3-甲基-2-戊烯基、4-甲基-2-戊烯基、1-甲基-3-戊烯基、2-甲基-3-戊烯基、3-甲基-3-戊烯基、4-甲基-3-戊烯基、1-甲基-4-戊烯基、2-甲基-4-戊烯基、3-甲基-4-戊烯基、4-甲基-4-戊烯基、1，1-二甲基-2-丁烯基、1，1-二甲基-3-丁烯基、1，2-二甲基-1-丁烯基、1，2-二甲基-2-丁烯基、1，2-二甲基-3-丁烯基、1，3-二甲基-1-丁烯基、1，3-二甲基-2-丁烯基、1，3-二甲基-3-丁烯基、2，2-二甲基-3-丁烯基、2，3-二甲基-1-丁烯基、2，3-二甲基-2-丁烯基、2，3-二甲基-3-丁烯基、3，3-二甲基-1-丁烯基、3，3-二甲基-2-丁烯基、1-乙基-1-丁烯基、1-乙基-2-丁烯基、1-乙基-3-丁烯基、2-乙基-1-丁烯基、2-乙基-2-丁烯基、2-乙基-3-丁烯基、1，1，2-三甲基-2-丙烯基、1-乙基-1-甲基-2-丙烯基、1-乙基-2-甲基-1-丙烯基和1-乙基-2-甲基-2-丙烯基。
  4. 根据权利要求1所述化合物，或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐，其特征在于，所述C1-6烷氧基选自甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、正戊氧基、仲戊氧基、1-乙基 丙氧基、2-甲基丁氧基、叔戊氧基、1,2-二甲基丙氧基、异戊氧基、新戊氧基、正己氧基、异己氧基、仲己氧基、叔己氧基、新己氧基、2-甲基戊氧基、1，2-二甲基丁氧基、1-乙基丁氧基；所述烷氧烷基选自C1-4的烷氧C1-4的烷基，进一步选自甲氧甲基、甲氧乙基、甲氧丙基、甲氧丁基、乙氧甲基、乙氧乙基、乙氧丙基、乙氧丁基、丙氧甲基、丙氧乙基、丙氧丙基、丙氧丁基、丁氧甲基、丁氧乙基、丁氧丙基、丁氧丁基等。
  5. 根据权利要求1所述化合物，或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐，其特征在于，所述卤素选自氟、氯、溴、碘，卤代C1-6烷基指C1-6烷基一个以上的氢原子被卤素取代，卤代C1-6烷氧基指C1-6烷氧基一个以上的氢原子被卤素取代，氰基取代的C1-6烷基指C1-6烷基一个以上的氢原子被氰基取代，氨基取代的C1-6烷基指C1-6烷基一个以上的氢原子被氨基取代。
  6. 根据权利要求1所述化合物，或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐，其特征在于，所述芳基选自苯基；所述杂芳基选自5至12元杂芳基，所述5至12元杂芳基选自
  7. 根据权利要求1所述化合物，或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐，其特征在于，所述环烷基选自C3-6的环烷基，C3-6的环烷基选自环丙基、环丁基、环戊基、环己基。
  8. 根据权利要求1所述化合物，或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐，其特征在于，所述R1选自氢或氯；
    R2、R3、R5选自氢；
    R4选自氢、甲基、甲氧基；
    X为O、CH2、N-CH3、N-C(＝O)-O-CH2-CH3；
    Y为O、CH2、N-CH3；
    n为0、1、2。
  9. 根据权利要求1所述化合物，或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐，其特征在于，选自以下化合物：

  10. 根据权利要求1所述化合物，或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐，其特征在于，选自以下化合物：

  11. 根据权利要求1所述化合物，或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐，其特征在于，所述药学上可接受的盐是指化合物与药学上可接受的酸或碱制备。
  12. 一种药物组合物，其特征在于，包括前述权利要求1-11任一项所述化合物，或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐和一种以上药学上可接受的载体。
  13. 根据权利要求1-11任一项所述化合物，或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐在制备用于制备治疗髓过氧化物酶相关疾病的药物用途，优选心血管相关疾病的药物用途。
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