WO2024225457A1 - ＩｇＡ腎症の判定方法 - Google Patents

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WO2024225457A1
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iga nephropathy
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nephropathy
marker protein
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和男 高橋
友香子 大山
哲郎 榎本
恵司 山本
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Fujita Health University
Oriental Yeast Co Ltd
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Fujita Health University
Oriental Yeast Co Ltd
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    • G01N2800/347—Renal failures; Glomerular diseases; Tubulointerstitial diseases, e.g. nephritic syndrome, glomerulonephritis; Renovascular diseases, e.g. renal artery occlusion, nephropathy

Definitions

  • the present invention relates to a method for determining the possibility of developing IgA nephropathy or disease activity by blood-mediated liquid biopsy.
  • Immunoglobulin A (IgA) nephropathy is a chronic glomerulonephritis characterized by deposition of IgA1 and complement C3 in the mesangial region of the glomerulus, mesangial cell proliferation, and matrix proliferation. Autoantibodies are formed against glycosylated IgA1, and immune complexes containing galactose-deficient glycosylated IgA1 and its autoantibodies are formed in the blood. It is believed that the deposition of the formed immune complexes in the mesangial region of the glomerulus induces nephritis and leads to renal damage.
  • IgA nephropathy is the most frequent primary glomerulonephritis, but approximately 20-40% of cases develop end-stage renal failure 20-30 years after renal biopsy, and it is a disease with a poor prognosis, requiring renal replacement therapy such as hemodialysis. For this reason, early diagnosis and treatment, as well as accurate evaluation of disease activity, are important for IgA nephropathy.
  • the initial symptom of IgA nephropathy is mainly abnormal urine test results, and the disease is often discovered when hematuria or proteinuria is detected during a health check.
  • a definitive diagnosis of IgA nephropathy requires a pathological diagnosis based on renal tissue findings from a renal biopsy, but renal biopsy requires hospitalization and is highly invasive. It is not easy to perform frequent renal biopsies on the same patient to evaluate disease activity. Meanwhile, the traditional methods of evaluating disease activity based on proteinuria, hematuria, or serum creatinine used in diagnosis are simple and useful methods, but there are limitations to their accuracy.
  • IgA nephropathy the main treatments for IgA nephropathy are supportive therapy centered on RA (renin-angiotensin) system inhibitors, and aggressive therapy that includes supportive therapy plus immunosuppressants such as corticosteroids or tonsillectomy.
  • RA renin-angiotensin
  • immunosuppressants such as corticosteroids or tonsillectomy.
  • simple tests such as serum tests, that can diagnose IgA nephropathy or evaluate disease activity, as a means of determining whether or not to perform aggressive treatment at the time of initial onset and recurrence.
  • the complement pathways involved in IgA nephropathy are said to be the alternative pathway and the lectin pathway. It has been reported that the serum concentration of complement factor H-related protein 1 (FHRP1), one of the regulatory factors in the blood of the alternative pathway, tends to be increased in patients with IgA nephropathy compared to healthy individuals (Non-Patent Document 1). However, the difference in serum concentration between healthy individuals and patients with IgA nephropathy is slight, making it difficult to use clinically as a marker for the onset of IgA nephropathy.
  • FHRP1 complement factor H-related protein 1
  • the present invention aims to provide a method for determining the possibility of developing IgA nephropathy or disease activity by blood-mediated liquid biopsy, instead of the highly invasive renal biopsy or the conventionally used proteinuria or hematuria.
  • the inventors conducted intensive research to solve the above problems, and as a result, they used a mass spectrometer to analyze samples from patients with IgA nephropathy and samples from people without IgA nephropathy, and succeeded in identifying a new protein that is specifically elevated in patients with IgA nephropathy. They discovered that by using this protein as a marker, it is possible to obtain useful information about the presence or absence of IgA nephropathy and the state of the disease, and thus completed the present invention.
  • a method for determining a possibility of developing IgA nephropathy or disease activity in a test animal comprising: (a) measuring an IgA nephropathy marker protein contained in an IgA immune complex in a blood sample collected from the test animal; (b) determining the possibility of developing IgA nephropathy or disease activity of the subject animal based on the amount of the IgA nephropathy marker protein measured in the step (a); having A method for determining IgA nephropathy, wherein the IgA nephropathy marker protein is a protein contained in an IgA immune complex, and the amount of the protein contained in the IgA immune complex of a group of IgA nephropathy patients is greater than the amount contained in the IgA immune complex of a group of healthy subjects.
  • the step (a) (c-1) separating serum or plasma from a blood sample collected from a subject animal; (c-2) recovering the IgA immune complexes contained in the serum or plasma obtained in the step (c-1); (c-3) measuring the IgA nephropathy marker protein in the IgA immune complex recovered in the step (c-2); The method for diagnosing IgA nephropathy according to [1] above, [3]
  • the subject animal is an animal diagnosed as having IgA nephropathy, The method for determining IgA nephropathy according to any of [1] to [10] above, wherein, in the step (b), if the amount of the IgA nephropathy marker protein measured in the step (a) is lower than the amount of the IgA nephropathy marker protein contained in the IgA immune complex in a blood sample collected from the test animal before the blood sample provided in the step (a) was collected, it is determined that the pathological condition of the IgA nephropathy of the test animal has improved.
  • a kit for determining the possibility of developing IgA nephropathy or disease activity in a test animal comprising:
  • the present invention relates to a method for treating IgA nephropathy comprising the steps of:
  • the subject animal is an animal diagnosed as having IgA nephropathy
  • the method for determining IgA nephropathy according to the present invention can provide information useful for the presence or absence of IgA nephropathy or for evaluating treatment methods using blood as a sample. Since the method does not require a renal biopsy on a subject animal, it is expected that the burden on patients will be reduced and appropriate treatment can be provided to patients.
  • the kit for diagnosing IgA nephropathy according to the present invention the method for diagnosing IgA nephropathy can be carried out more simply.
  • FIG. 1 shows the results of comparing the relative abundance of proteins in IgA immune complexes between an IgA nephropathy group (supportive therapy group + aggressive therapy group) (at the time of kidney biopsy) and a healthy control group in Example 1.
  • FIG. 2 shows the results of comparing proteins in IgA immune complexes before and after treatment in the active IgA nephropathy treatment group in Example 1.
  • FIG. 2 shows the measurement results of the amount of FHRP1 contained in IgA immune complexes (amount of FHRP1 contained per 10 ⁇ g of IgA [ng/10 ⁇ g of IgA]) in each group in Example 1.
  • FIG. 1 shows the results of comparing the amount of FHRP1 (amount of FHRP1 contained per 10 ⁇ g of IgA [ng/IgA 10 ⁇ g]) before and after treatment in each group in Example 1.
  • an "IgA nephropathy marker protein” is a protein contained in the IgA immune complex in the blood, and is contained in a greater amount in the IgA immune complex of a group of IgA nephropathy patients than in a group of healthy subjects.
  • IgA nephropathy marker proteins can be identified by the following method. First, blood samples are taken from a group of IgA nephropathy patients who have been definitively diagnosed with IgA nephropathy by other means such as kidney biopsy, and a group of healthy individuals, and the amount of each protein contained in the IgA immune complex in the blood samples is measured. The average amount of protein contained in the IgA immune complex is calculated for the IgA nephropathy patients and healthy individuals, and proteins whose average value for the IgA nephropathy patients is significantly higher than the average value for the healthy individuals can be identified as IgA nephropathy marker proteins.
  • IgA nephropathy marker proteins include alpha-1-antitrypsin, apolipoprotein C-1, FHRP1 (Complement factor H related protein 1), cathepsin G, SLC13A4 (Solute carrier family 13 member 4), alpha-2-macroglobulin, myeloperoxidase, C1QB (Complement C1q subcomponent subunit B), RhoGAP42 (Rho GTPase-activating protein 42), and C1QC (Complement C1q subcomponent subunit C).
  • the method for determining IgA nephropathy is a method for determining the possibility of developing IgA nephropathy or disease activity in a test animal, and comprises the following steps: (a) measuring an IgA nephropathy marker protein contained in an IgA immune complex in a blood sample collected from a test animal; (b) determining the possibility of developing IgA nephropathy or disease activity of the subject animal based on the amount of the IgA nephropathy marker protein measured in the step (a).
  • the above steps (a) and (b) are steps carried out in vitro.
  • the IgA nephropathy marker protein used in the present invention may be one type, or two or more types may be used in combination.
  • the IgA nephropathy marker protein may be one or more types selected from the group consisting of alpha 1-antitrypsin, apolipoprotein C-1, FHRP1, cathepsin G, SLC13A4, alpha 2-macroglobulin, myeloperoxidase, C1QB, RhoGAP42, and C1QC.
  • FHRP1 as the IgA nephropathy marker protein.
  • step (a) the IgA nephropathy marker protein contained in the IgA immune complex in a blood sample collected from the subject animal is measured.
  • the method for determining IgA nephropathy according to the present invention makes it possible to accurately determine whether or not a subject animal has developed IgA nephropathy.
  • the method for determining IgA nephropathy according to the present invention provides information useful for evaluating disease activity in cases where the subject has IgA nephropathy.
  • the method for measuring the amount of IgA nephropathy marker protein contained in the IgA immune complex in a blood sample collected from a test animal is not particularly limited.
  • serum or plasma can be prepared from the blood sample, the IgA immune complex contained therein can be recovered, and the IgA nephropathy marker protein in the recovered IgA immune complex can be measured.
  • the measurement of the IgA nephropathy marker protein in the IgA immune complex in the step (a) can be carried out, for example, by the following steps (c-1) to (c-3).
  • (c-1) separating serum or plasma from a blood sample collected from a subject animal;
  • (c-2) recovering the IgA immune complexes contained in the serum or plasma obtained in the step (c-1);
  • (c-3) A step of measuring an IgA nephropathy marker protein in the IgA immune complex recovered in the step (c-2).
  • the subject animal is not particularly limited as long as it is an animal that has kidneys.
  • mammals are preferred, and experimental animals such as humans, mice, rats, and monkeys, and livestock or pets such as rabbits, dogs, cats, cows, horses, and sheep are more preferred, and humans are particularly preferred.
  • the subject animal in the method for determining IgA nephropathy according to the present invention is preferably an animal suspected of developing nephropathy.
  • animals suspected of developing nephropathy include animals in which an increase in the amount of protein in the urine or pathologies observed in nephropathy, such as hematuria, have been confirmed, and in particular, animals diagnosed with hematuria or proteinuria are preferred.
  • the amount of protein in the urine is 0.15 g/day or more in terms of creatinine, the onset of nephropathy is suspected, and therefore such animals are suitable as subject animals in the method for determining IgA nephropathy according to the present invention.
  • the preparation of plasma or serum from blood collected from a subject animal can be carried out by a conventional method.
  • blood can be collected from a subject animal in a blood collection tube that has already contained an anticoagulant such as sodium citrate, heparin, EDTA, or sodium fluoride, and then the blood collection tube can be centrifuged to precipitate blood cell components and recover the supernatant, which is plasma.
  • the blood can be coagulated and then centrifuged to precipitate blood cell components and recover the supernatant, which is serum.
  • the blood collected from a subject animal, or the plasma or serum prepared from it can be used to recover IgA immune complexes immediately after preparation, or can be used to recover IgA immune complexes after a predetermined period of storage.
  • the plasma or serum can be stored in a refrigerator or freezer, at room temperature, or as a frozen powder after freeze-drying.
  • the plasma or serum can be diluted with an appropriate buffer or various additives can be added as a pretreatment.
  • additives include surfactants, protease inhibitors, nuclease inhibitors, pH adjusters, and pH indicators.
  • the recovery of IgA immune complexes contained in serum or plasma can be carried out by various methods that can increase the concentration of IgA immune complexes compared to before recovery.
  • the anti-IgA antibody is not particularly limited as long as it is an antibody that can selectively bind to IgA in the IgA immune complexes, and various anti-IgA antibodies can be used.
  • an antibody that specifically recognizes IgA with abnormal glycosylation such as galactose-deficient IgA
  • galactose-deficient IgA can also be used as the anti-IgA antibody in the present invention, and can be used to recover IgA immune complexes.
  • the method for measuring the IgA nephropathy marker protein in the collected IgA immune complex is not particularly limited as long as it is a method that can generally measure the concentration of the target protein.
  • the IgA nephropathy marker protein can be measured by an immunological method using an antibody against the IgA nephropathy marker protein.
  • immunological methods include ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay), latex agglutination, and immunochromatography. These methods can be performed by standard methods using an antibody against the IgA nephropathy marker protein.
  • the IgA nephropathy marker protein can also be measured by a method that utilizes mass spectrometry, such as liquid chromatography mass spectrometry.
  • the "amount of IgA nephropathy marker protein in IgA immune complexes” may be the value obtained by quantifying the IgA nephropathy marker protein itself, but it is preferable to use a "relative value to the amount of IgA protein in IgA immune complexes" since this allows for more accurate comparison of the amount of IgA nephropathy marker protein between samples. Specifically, it is preferable to carry out step (a) in the following steps (c-1) to (c-5). Steps (c-1) to (c-3) can be carried out in the same manner as described above.
  • c-1) separating serum or plasma from a blood sample collected from a subject animal; (c-2) recovering the IgA immune complexes contained in the serum or plasma obtained in the step (c-1); (c-3) measuring the IgA nephropathy marker protein in the IgA immune complex recovered in the step (c-2); (c-4) measuring the IgA protein in the IgA immune complexes recovered in the step (c-2); (c-5) a step of calculating the amount of IgA nephropathy marker protein contained in the IgA immune complex in the blood sample collected from the test animal by dividing the amount of IgA nephropathy marker protein measured in the step (c-3) by the amount of IgA protein measured in the step (c-4) ([amount of IgA nephropathy marker protein in IgA immune complex]/[amount of IgA protein in IgA immune complex]).
  • the measurement of IgA protein in step (c-4) can be carried out, for example, by an immunological method using an anti-IgA antibody or a method using mass spectrometry such as liquid chromatography mass spectrometry.
  • immunological methods include ELISA, latex agglutination, and immunochromatography.
  • step (c-4) the amount of IgA protein in step (c-4) by the same method as that used to measure the amount of IgA nephropathy marker protein in step (c-3).
  • step (b) the presence or absence of onset of IgA nephropathy in a test animal, or the possibility of onset, is determined based on the amount of IgA nephropathy marker protein measured in step (a).
  • the amount of the IgA nephropathy marker protein used in the present invention contained in IgA immune complexes in the blood tends to be significantly higher in patients with IgA nephropathy than in healthy subjects.
  • the amount of the IgA nephropathy marker protein contained in IgA immune complexes in the blood of the test animal can be used to determine the presence or absence of onset of IgA nephropathy in a test animal, or the possibility of onset.
  • a threshold value for distinguishing between IgA nephropathy sufferers and non-affected individuals is set in advance, the amount of IgA nephropathy marker protein contained in the IgA immune complexes in the blood of the test animal is measured, and it is determined whether the amount of said protein is equal to or greater than the threshold value set in advance for distinguishing between IgA nephropathy patients and healthy subjects. If the measured amount of IgA nephropathy marker protein is equal to or greater than the specified threshold, it is determined that there is a high possibility that the test animal has developed (has) IgA nephropathy.
  • the threshold value for separating the group of IgA nephropathy patients from the group of healthy individuals can be experimentally set, taking into consideration the method for measuring the IgA nephropathy marker protein, etc.
  • the IgA nephropathy determination method according to the present invention can be performed on blood collected from a group known not to have IgA nephropathy and blood collected from a group known to have IgA nephropathy, measuring the amount of IgA nephropathy marker protein contained in the IgA immune complexes in each blood sample, and comparing the measured values for both groups, thereby appropriately setting the threshold value.
  • the amount of IgA nephropathy marker protein contained in the IgA immune complex in the blood tends to decrease rapidly after active treatment. From this, it is expected that the amount of IgA nephropathy marker protein contained in the IgA immune complex in the blood is positively correlated with the disease activity of IgA nephropathy. Therefore, by setting an appropriate threshold, it is possible to accurately evaluate not only the presence or absence or possibility of onset of IgA nephropathy, but also the disease activity of IgA nephropathy, and it is preferable that the obtained evaluation is provided to a physician as information useful for formulating a treatment plan.
  • the disease activity of IgA nephropathy can also be determined.
  • the disease activity of IgA nephropathy in a test animal can also be evaluated by measuring the amount of IgA nephropathy marker protein contained in IgA immune complexes in blood samples collected from the same test animal over time and comparing these amounts.
  • the amount of IgA nephropathy marker protein measured in step (a) is lower than the amount of IgA nephropathy marker protein contained in IgA immune complexes in a blood sample collected from the same test animal before the blood sample used for the measurement was collected, it can be determined that the disease activity of IgA nephropathy in the test animal has decreased and the pathological condition has improved.
  • the obtained evaluation is preferably provided to a doctor as information useful for formulating a treatment plan.
  • subject animals assessed as having a high probability of developing IgA nephropathy and subject animals assessed as having high disease activity have a high amount of IgA nephropathy marker protein contained in IgA immune complexes in their blood. Therefore, aggressive treatment such as corticosteroid therapy and tonsillectomy is predicted to be effective for subject animals assessed as having a high probability of developing IgA nephropathy or having high disease activity in the method for assessing IgA nephropathy according to the present invention.
  • the method for assessing IgA nephropathy according to the present invention can be performed on IgA nephropathy patients diagnosed with IgA nephropathy in order to obtain information for selecting a treatment method.
  • FHRP1 is one of the control factors of the complement pathway, such as the alternative pathway or the lectin pathway
  • the IgA nephropathy marker protein contained in the IgA immune complex in the blood is high
  • the IgA nephropathy that the subject develops is likely to be caused by complement activation. Therefore, in the method for determining IgA nephropathy according to the present invention, it is predicted that treatment with a complement inhibitor targeting the alternative pathway or the lectin pathway will be effective for subject animals that are evaluated as having a high possibility of developing IgA nephropathy or high disease activity.
  • the method for determining IgA nephropathy according to the present invention can provide useful information for selecting patients who will use complement treatment drugs and predicting the effectiveness of treatment.
  • Examples of complement treatment drugs for the alternative pathway include LNP023 (manufactured by Novartis), and examples of complement treatment drugs for the lectin pathway include Narsoprimab (manufactured by Omeros).
  • the method for determining IgA nephropathy according to the present invention can be carried out more easily by preparing a kit including reagents and devices used for recovering IgA immune complexes and quantifying IgA nephropathy marker proteins and IgA proteins.
  • a kit for determining the possibility of developing IgA nephropathy or disease activity in a subject animal preferably contains an anti-IgA antibody and an antibody against the IgA nephropathy marker protein.
  • the kit for determining the disease activity of IgA nephropathy in a test animal according to the present invention can be used to predict the effectiveness of treatment for a patient with IgA nephropathy.
  • the present invention provides the use of an anti-IgA antibody and an antibody against an IgA nephropathy marker protein to manufacture a kit for predicting the efficacy of treatment for an IgA nephropathy patient.
  • the present invention provides an anti-IgA antibody and an antibody against an IgA nephropathy marker protein for predicting the efficacy of treatment for an IgA nephropathy patient.
  • the present invention may include other steps in addition to steps (a) and (b).
  • steps (a) and (b) include (c) treating a patient with IgA nephropathy based on the evaluation results of the possibility of developing IgA nephropathy or disease activity determined in step (b).
  • step (c) is further included in addition to steps (a) and (b)
  • the method of this embodiment may be a method for treating a patient with IgA nephropathy.
  • a treatment plan for IgA nephropathy can be determined based on the evaluation results of the likelihood of developing IgA nephropathy or disease activity.
  • Treatment for IgA nephropathy patients who are evaluated as having a high likelihood of developing IgA nephropathy or high disease activity may be complement inhibitor therapy targeting the alternative pathway or lectin pathway, or active treatment such as corticosteroid therapy and tonsillectomy. Of these, either or both of complement inhibitor therapy targeting the alternative pathway or lectin pathway and corticosteroid therapy are preferred.
  • a method for treating a patient with IgA nephropathy comprising: (a) measuring an IgA nephropathy marker protein contained in an IgA immune complex in a blood sample collected from a test animal; (b) determining the possibility of developing IgA nephropathy or disease activity of the subject animal based on the amount of the IgA nephropathy marker protein measured in the step (a); (c) treating a patient with IgA nephropathy based on the evaluation result of the possibility of developing IgA nephropathy or disease activity determined in the step (b); having A method for treating patients with IgA nephropathy, wherein the IgA nephropathy marker protein is a protein contained in an IgA immune complex, and the amount of the protein contained in the IgA immune complex of a group of IgA nephropathy patients is greater than the amount contained in the IgA immune complex of a group of healthy subjects.
  • Example 1 In order to identify novel biomarker candidate proteins that can diagnose IgA nephropathy and determine disease activity by measuring blood levels without performing renal biopsy in patients with IgA nephropathy, we performed proteomic analysis of IgA immune complexes in the blood to search for proteins that are specifically increased in patients with IgA nephropathy.
  • the supportive care group included cases in which renal dysfunction had already progressed, cases in which tissue obtained by renal biopsy showed few acute lesions, or cases in which urinalysis findings were mild.
  • Treatment consisted of conservative therapy centered on RA system inhibitors.
  • aggressive treatment group consisted of patients treated with tonsillectomy and steroid pulse therapy (the method of Pozzi et al.). This group included patients with histological acute lesions and severe urinalysis findings.
  • IgA immune complexes Separation and purification of IgA immune complexes from serum IgA immune complexes were separated and purified from 100 ⁇ L of each serum by affinity chromatography using a cyanogen bromide-activated Sepharose column bound with anti-human IgA antibody (product number: 0855068, manufactured by Cappel Laboratories). Specifically, 100 ⁇ L of serum and 1 mL of phosphate buffered saline were added, filtered through a 0.45 ⁇ m filter, and then adsorbed onto the affinity column. After washing the affinity column with phosphate buffered saline, the IgA immune complexes were eluted with 0.1 M glycine hydrochloride buffer (pH 2.7). The eluted solution was neutralized with 1.0 M Tris-HCl buffer (pH 9.0).
  • the separated and purified IgA immune complexes were concentrated using an ultrafiltration membrane (product name: Ultra-4 30K Centrifugal Filter Units, Amicon) by centrifugation at 2330 x g and 4°C for 20 minutes.
  • the absorbance at a wavelength of 280 nm was then measured using a Nano Vue spectrophotometer (GE) to calculate the protein concentration.
  • trypsin product name: V528A, manufactured by Promega
  • 100 mM ammonium bicarbonate solution pH 8.3
  • enzyme treatment was performed again overnight at 37° C.
  • the entire sample after enzyme treatment was desalted using a C18 spin column (product name: 89870, manufactured by Thermo Fisher Scientific). Finally, the sample was dried using a SpeedVac.
  • the dried measurement samples were dissolved in 20 ⁇ L of 0.1% formic acid, and the protein concentration was adjusted to 0.1 ⁇ g/L and the final concentration of DTT to 20 mM. Measurements were performed using liquid chromatography-high resolution mass spectrometry (LC-HRMS) and comprehensive analysis was performed using a label-free quantitative method.
  • LC-HRMS liquid chromatography-high resolution mass spectrometry
  • Mass spectrometry was performed using an EASY-nLC 1000 system and an Orbitrap Fusion mass spectrometer (both manufactured by Thermo Fisher Scientific). Liquid chromatography was performed using a concentration gradient of acetonitrile from 0% to 35%, with elution at a flow rate of 300 nL/min over 120 minutes.
  • Figure 1 shows the results of comparing the relative abundance of proteins in IgA immune complexes between the IgA nephropathy group (supportive care group + active treatment group) (at the time of kidney biopsy) and the healthy control group.
  • the horizontal axis shows the logarithm of the relative ratio of protein abundance in the IgA nephropathy group/healthy control group [Log2 (Fold change)], and the vertical axis shows the P value [-Log10 (P value)].
  • Black circles shifted in the positive direction of the logarithm [Log2 (Fold change)] indicate proteins that were abundant in IgA nephropathy, and black circles shifted in the negative direction indicate proteins that were abundant in healthy control subjects.
  • FHRP1 was present in higher amounts in IgA immune complexes compared to healthy control subjects. Proteins that were significantly more abundant in IgA nephropathy patients, including FHRP1, are shown in Table 4.
  • Figure 2 shows the results of comparing proteins in IgA immune complexes before and after treatment in the aggressive IgA nephropathy treatment group.
  • the horizontal axis shows the logarithm [Log2 (Fold change)] of the relative ratio of protein abundance before/after treatment (approximately 2 years later) in the aggressive IgA nephropathy treatment group
  • the vertical axis shows the P value [-Log10 (P value)].
  • Black circles shifted in the positive direction of the logarithm [Log2 (Fold change)] indicate proteins that were abundant before treatment
  • black circles shifted in the negative direction indicate proteins that were abundant after treatment.
  • FHRP1 was found to be a protein that is significantly more abundant in IgA nephropathy patients than in healthy subjects, and that is significantly reduced by aggressive treatment ( Figures 1 and 2).
  • the IgA concentration of the IgA immune complex solution collected in (2) above was calculated using a commercially available ELISA kit for measuring IgA (product name: "IgA Human Uncoated ELISA kit", manufactured by Thermo Fischer Scientific). Using this measured value, the IgA concentration was adjusted to 10 ⁇ g/mL, and the FHRP1 concentration was measured using a commercially available ELISA kit for measuring human CFHR (product name: "RayBio (registered trademark) Human CFHR1 ELISA kit", manufactured by RayBiotech) according to the procedure provided with the kit.

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Abstract

本発明は、ＩｇＡ腎症の発症可能性又は疾患活動性を、侵襲性の高い腎生検、従来から用いられてきた蛋白尿又は血尿に加えて、血液を介したリキッドバイオプシーにより判定する方法を提供する。本発明は、被験動物のＩｇＡ腎症の発症可能性又は疾患活動性を判定する方法であって、（ａ）被験動物から採取された血液試料中のＩｇＡ免疫複合体に含まれているＩｇＡ腎症マーカータンパク質を測定する工程と、（ｂ）前記工程（ａ）において測定された前記ＩｇＡ腎症マーカータンパク質の量に基づいて、前記被験動物のＩｇＡ腎症の発症可能性又は疾患活動性を判定する工程と、を有し、前記ＩｇＡ腎症マーカータンパク質は、ＩｇＡ免疫複合体に含まれているタンパク質であって、ＩｇＡ腎症罹患者群のＩｇＡ免疫複合体に含まれている量が、健常者群のＩｇＡ免疫複合体に含まれている量よりも多いタンパク質である、ＩｇＡ腎症の判定方法である。

Description

ＩｇＡ腎症の判定方法
　本発明は、ＩｇＡ腎症の発症可能性又は疾患活動性を、血液を介したリキッドバイオプシーにより判定する方法に関する。
　本願は、２０２３年４月２６日に、日本に出願された特願２０２３－０７２４５４号に基づき優先権を主張し、その内容をここに援用する。
　免疫グロブリンＡ（ＩｇＡ）腎症は、ＩｇＡ１と補体Ｃ３の糸球体メサンギウム領域への沈着、メサンギウム細胞増多、及び基質増生を特徴とする、慢性糸球体腎炎である。糖鎖異常ＩｇＡ１に対して自己抗体が形成され、ガラクトースが欠損した糖鎖異常ＩｇＡ１とその自己抗体を含む免疫複合体が血中で形成される。形成された免疫複合体が糸球体のメサンギウム領域に沈着することで、腎炎が惹起され、腎障害を生じると考えられている。ＩｇＡ腎症は、最も高頻度な原発性糸球体腎炎であるが、腎生検から２０～３０年後に約２０～４０％の症例が、血液透析などの腎代替療法が必要となる末期腎不全に陥る予後不良な疾患である。このため、ＩｇＡ腎症は、早期診断・早期治療、及び疾患の活動性の的確な評価が重要な疾患である。
　ＩｇＡ腎症の初発症状は、検尿異常が主体であり、健診時における血尿又はタンパク尿が発見の契機となることが多い。ＩｇＡ腎症の確定診断には、腎生検による腎組織的所見に基づく病理診断が必要であるが、腎生検は入院を要し、侵襲性が高い。疾患活動性の評価を目的に、同一患者で頻回に腎生検を行うことは容易ではない。一方で、従来から診断で用いられている蛋白尿、血尿、又は血清クレアチニンによる病勢の評価は、簡便で有用な方法ではあるが、的確に判断するには限界がある。
　現在、ＩｇＡ腎症の治療は、ＲＡ（レニン－アンギオテンシン）系阻害薬を中心とした支持療法と、支持療法に加えて副腎皮質ステロイド等の免疫抑制剤又は扁桃摘出術を行う積極的治療法とが主体である。積極的治療は、侵襲性が高く、合併症の危険性を伴うため、初発時及び再発時に積極的治療を行うか否かの判断材料として、血清検査などによる簡便な方法で、ＩｇＡ腎症の診断又は疾患活動性を評価できる検査が求められている。
　ＩｇＡ腎症がかかわる補体経路としては、副経路とレクチン経路があると言われている。副経路の血中における制御因子の一つである補体因子Ｈ関連タンパク質１（ＦＨＲＰ１；Factor H Related Protein1）は、血清中濃度が、健常者と比べてＩｇＡ腎症患者では増大している傾向にあることが報告されている（非特許文献１）。しかし、健常者とＩｇＡ腎症患者との血清中濃度差はわずかであり、ＩｇＡ腎症の発症マーカーとして臨床上使用することは困難である。
Medjeral-Thomas, et al., Kidney International, 2017, vol.92（4）, p.942-952.
　本発明は、ＩｇＡ腎症の発症可能性又は疾患活動性を、侵襲性の高い腎生検又は従来から用いられてきた蛋白尿若しくは血尿にかえて、血液を介したリキッドバイオプシーにより判定する方法を提供することを目的とする。
　本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意研究した結果、ＩｇＡ腎症患者の検体とＩｇＡ腎症に罹患していないヒトの検体について、それぞれ質量分析装置を用いて分析して、ＩｇＡ腎症患者特異的に高値を示すタンパク質を新たに同定することに成功した。当該タンパク質をマーカーとすることにより、ＩｇＡ腎症の発症の有無及び病態の状態についての有用な情報を得られることを見出し、本発明を完成させた。
　すなわち、本発明に係るＩｇＡ腎症の判定方法及びＩｇＡ腎症の判定用キットは、下記の通りである。
［１］　被験動物のＩｇＡ腎症の発症可能性又は疾患活動性を判定する方法であって、（ａ）被験動物から採取された血液試料中のＩｇＡ免疫複合体に含まれているＩｇＡ腎症マーカータンパク質を測定する工程と、
（ｂ）前記工程（ａ）において測定された前記ＩｇＡ腎症マーカータンパク質の量に基づいて、前記被験動物のＩｇＡ腎症の発症可能性又は疾患活動性を判定する工程と、
を有し、
　前記ＩｇＡ腎症マーカータンパク質は、ＩｇＡ免疫複合体に含まれているタンパク質であって、ＩｇＡ腎症罹患者群のＩｇＡ免疫複合体に含まれている量が、健常者群のＩｇＡ免疫複合体に含まれている量よりも多いタンパク質である、ＩｇＡ腎症の判定方法。
［２］　前記工程（ａ）を、
（ｃ－１）被験動物から採取された血液試料から血清又は血漿を分離する工程と、
（ｃ－２）前記工程（ｃ－１）において得られた血清又は血漿に含まれているＩｇＡ免疫複合体を回収する工程と、
（ｃ－３）前記工程（ｃ－２）において回収されたＩｇＡ免疫複合体中のＩｇＡ腎症マーカータンパク質を測定する工程と、
により行う、前記［１］のＩｇＡ腎症の判定方法。
［３］　前記工程（ａ）を、
（ｃ－１）被験動物から採取された血液試料から血清又は血漿を分離する工程と、
（ｃ－２）前記工程（ｃ－１）において得られた血清又は血漿に含まれているＩｇＡ免疫複合体を回収する工程と、
（ｃ－３）前記工程（ｃ－２）において回収されたＩｇＡ免疫複合体中のＩｇＡ腎症マーカータンパク質を測定する工程と、
（ｃ－４）前記工程（ｃ－２）において回収されたＩｇＡ免疫複合体中のＩｇＡタンパク質を測定する工程と、
（ｃ－５）前記工程（ｃ－３）で測定されたＩｇＡ腎症マーカータンパク質の量を、前記工程（ｃ－４）で測定されたＩｇＡタンパク質の量で除した値を、前記被験動物から採取された血液試料中のＩｇＡ免疫複合体に含まれているＩｇＡ腎症マーカータンパク質の量として求める工程と、
により行う、前記［１］のＩｇＡ腎症の判定方法。
［４］　前記工程（ｃ－２）において、ＩｇＡ免疫複合体の回収を、抗ＩｇＡ抗体を用いたアフィニティークロマトグラフィーにより行う、前記［２］又は［３］のＩｇＡ腎症の判定方法。
［５］　ＩｇＡ免疫複合体中の前記ＩｇＡ腎症マーカータンパク質の測定を、前記ＩｇＡ腎症マーカータンパク質に対する抗体を用いた免疫学的手法により行う、前記［１］～［４］のいずれかのＩｇＡ腎症の判定方法。
［６］　前記免疫学的手法が、ＥＬＩＳＡ法、ラテックス凝集法、又はイムノクロマトグラフィー法である、前記［５］のＩｇＡ腎症の判定方法。
［７］　ＩｇＡ免疫複合体中の前記ＩｇＡ腎症マーカータンパク質の測定を、液体クロマトグラフ質量分析法により行う、前記［１］～［４］のいずれかのＩｇＡ腎症の判定方法。
［８］　前記ＩｇＡ腎症マーカータンパク質が、アルファ１－アンチトリプシン、アポリポプロテインＣ－１、ＦＨＲＰ１、カテプシンＧ、ＳＬＣ１３Ａ４、アルファ２－マクログロブリン、ミエロペルオキシダーゼ、Ｃ１ＱＢ、ＲｈｏＧＡＰ４２、及びＣ１ＱＣからなる群より選択される１種以上である、前記［１］～［７］のいずれかのＩｇＡ腎症の判定方法。
［９］　前記工程（ｂ）において、前記工程（ａ）において測定された前記ＩｇＡ腎症マーカータンパク質の量が、ＩｇＡ腎症患者群と健常者群を鑑別するための予め設定された閾値よりも多い場合に、前記被験動物はＩｇＡ腎症を発症している可能性が高いと判定する、前記［１］～［８］のいずれかのＩｇＡ腎症の判定方法。
［１０］　前記被験動物がＩｇＡ腎症を発症している可能性が高いと判定された場合に、前記被験動物は、副腎皮質ステロイド治療が有効であると予測する、前記［９］のＩｇＡ腎症の判定方法。
［１１］　前記被験動物がＩｇＡ腎症を発症している可能性が高いと判定された場合に、前記被験動物は、副経路又はレクチン経路を標的とした補体阻害薬治療が有効であると予測する、前記［９］のＩｇＡ腎症の判定方法。
［１２］　前記被験動物が、腎症の発症が疑われている動物である、前記［１］～［１１］のいずれかのＩｇＡ腎症の判定方法。
［１３］　前記被験動物が、血尿又はタンパク質尿と診断された動物である、前記［１］～［１２］のいずれかのＩｇＡ腎症の判定方法。
［１４］　前記被験動物がＩｇＡ腎症を発症していると診断された動物であり、
　前記工程（ｂ）において、前記工程（ａ）において測定された前記ＩｇＡ腎症マーカータンパク質の量が、前記工程（ａ）において供された血液試料が採取された時点以前に前記被験動物から採取された血液試料中のＩｇＡ免疫複合体に含まれている前記ＩｇＡ腎症マーカータンパク質の量よりも低下している場合に、前記被験動物のＩｇＡ腎症の病態が改善したと判定する、前記［１］～［１０］のいずれかのＩｇＡ腎症の判定方法。
［１５］　被験動物のＩｇＡ腎症の発症可能性又は疾患活動性を判定するためのキットであって、
　抗ＩｇＡ抗体と、ＩｇＡ腎症マーカータンパク質に対する抗体とを備え、
　前記ＩｇＡ腎症マーカータンパク質は、ＩｇＡ免疫複合体に含まれているタンパク質であって、ＩｇＡ腎症罹患者群のＩｇＡ免疫複合体に含まれている量が、健常者群のＩｇＡ免疫複合体に含まれている量よりも多いタンパク質である、ＩｇＡ腎症の判定用キット。
［１６］　前記ＩｇＡ腎症マーカータンパク質が、アルファ１－アンチトリプシン、アポリポプロテインＣ－１、ＦＨＲＰ１、カテプシンＧ、ＳＬＣ１３Ａ４、アルファ２－マクログロブリン、ミエロペルオキシダーゼ、Ｃ１ＱＢ、ＲｈｏＧＡＰ４２、及びＣ１ＱＣからなる群より選択される１種以上である、前記［１５］のＩｇＡ腎症の判定用キット。
［１７］　前記被験動物のＩｇＡ腎症の発症可能性を判定するために用いられる、前記［１５］又は［１６］のＩｇＡ腎症の判定用キット。
［１８］　前記被験動物がＩｇＡ腎症を発症していると診断された動物であり、
　前記被験動物の治療法の選択のための情報を得るために用いられる、前記［１５］又は［１６］のＩｇＡ腎症の判定用キット。
　本発明に係るＩｇＡ腎症の判定方法により、血液をサンプルとして、ＩｇＡ腎症の発症の有無又は治療法の評価のために有用な情報を提供することができる。当該判定方法では、被験動物に腎生検を行う必要はないため、患者の負担が軽減され、適切な治療を患者に提供できることが期待される。
　本発明に係るＩｇＡ腎症の判定用キットを用いることにより、前記ＩｇＡ腎症の判定方法をより簡便に実施することができる。
実施例１において、ＩｇＡ免疫複合体中タンパク質の相対存在量を、ＩｇＡ腎症群（支持療法群＋積極的治療群）（腎生検時）と健常者群で比較した結果を示した図である。 実施例１において、ＩｇＡ腎症積極的治療群におけるＩｇＡ免疫複合体中タンパク質の治療前後の比較結果を示した図である。 実施例１において、各群におけるＩｇＡ免疫複合体中に含まれるＦＨＲＰ１量（ＩｇＡ１０μｇあたりに含まれるＦＨＲＰ１量［ｎｇ／ＩｇＡ１０μｇ］）の測定結果を示した図である。 実施例１において、各群における治療前後でのＦＨＲＰ１量（ＩｇＡ１０μｇあたりに含まれるＦＨＲＰ１量［ｎｇ／ＩｇＡ１０μｇ］）を比較した結果を示した図である。
　本発明及び本願明細書において、「ＩｇＡ腎症マーカータンパク質」とは、血液中のＩｇＡ免疫複合体に含まれているタンパク質であって、ＩｇＡ腎症罹患者群のＩｇＡ免疫複合体に含まれている量が、健常者群のＩｇＡ免疫複合体に含まれている量よりも多いタンパク質である。
　ＩｇＡ腎症マーカータンパク質は、後記実施例で述べたように、下記の方法で特定することができる。まず、ＩｇＡ腎症を発症していることを腎生検等の他の手段で確定診断されたＩｇＡ腎症罹患者群と、健常者群とから、それぞれ血液試料を採取し、当該血液試料中のＩｇＡ免疫複合体に含まれている各タンパク質の量を測定する。ＩｇＡ腎症罹患者群と健常者群について、ＩｇＡ免疫複合体に含まれているタンパク質量の平均値を算出し、ＩｇＡ腎症罹患者群の平均値のほうが、健常者群の平均値よりも有意に高濃度であるタンパク質を、ＩｇＡ腎症マーカータンパク質として特定できる。
　本発明及び本願明細書において、「ＩｇＡ腎症マーカータンパク質」としては、具体的には例えば、アルファ１－アンチトリプシン（Alpha-1-antitrypsin）、アポリポプロテインＣ－１（Apolipoprotein C-1）、ＦＨＲＰ１（Complement factor H related protein 1）、カテプシンＧ（Cathepsin G）、ＳＬＣ１３Ａ４（Solute carrier family 13 member 4）、アルファ２－マクログロブリン（Alpha-2-macroglobulin）、ミエロペルオキシダーゼ（Myeloperoxidase）、Ｃ１ＱＢ（Complement C1q subcomponent subunit B）、ＲｈｏＧＡＰ４２（Rho GTPase-activating protein 42）、及びＣ１ＱＣ（Complement C1q subcomponent subunit C）等が挙げられる。
　本発明に係るＩｇＡ腎症の判定方法は、被験動物のＩｇＡ腎症の発症可能性又は疾患活動性を判定する方法であって、下記の工程を有する。
（ａ）被験動物から採取された血液試料中のＩｇＡ免疫複合体に含まれているＩｇＡ腎症マーカータンパク質を測定する工程と、
（ｂ）前記工程（ａ）において測定された前記ＩｇＡ腎症マーカータンパク質の量に基づいて、前記被験動物のＩｇＡ腎症の発症可能性又は疾患活動性を判定する工程。
　上記工程（ａ）及び（ｂ）は、ｉｎ　ｖｉｔｒｏで行われる工程である。
　本発明において用いられるＩｇＡ腎症マーカータンパク質は、１種類であってもよく、２種類以上を組み合わせて用いてもよい。本発明においては、ＩｇＡ腎症マーカータンパク質として、アルファ１－アンチトリプシン、アポリポプロテインＣ－１、ＦＨＲＰ１、カテプシンＧ、ＳＬＣ１３Ａ４、アルファ２－マクログロブリン、ミエロペルオキシダーゼ、Ｃ１ＱＢ、ＲｈｏＧＡＰ４２、及びＣ１ＱＣからなる群より選択される１種以上を用いることができる。本発明においては、ＩｇＡ腎症マーカータンパク質として、特に、ＦＨＲＰ１を用いることが好ましい。
　工程（ａ）においては、被験動物から採取された血液試料中のＩｇＡ免疫複合体に含まれているＩｇＡ腎症マーカータンパク質を測定する。本発明においては、血液試料中のＩｇＡ腎症マーカータンパク質量ではなく、血液試料中のＩｇＡ免疫複合体に含まれているＩｇＡ腎症マーカータンパク質量を指標とすることにより、ＩｇＡ腎症罹患者とＩｇＡ腎症非罹患者との鑑別をより精度よくすることができる。このため、本発明に係るＩｇＡ腎症の判定方法により、被験動物のＩｇＡ腎症の発症の有無を精度よく判定することができる。また、本発明に係るＩｇＡ腎症の判定方法により、ＩｇＡ腎症に罹患している場合の疾患活動性を評価するために有用な情報が得られる。
　被験動物から採取された血液試料中のＩｇＡ免疫複合体に含まれているＩｇＡ腎症マーカータンパク質の量を測定する方法は、特に限定されるものではない。例えば、血液試料から血清又は血漿を調製し、これらに含まれているＩｇＡ免疫複合体を回収して、回収されたＩｇＡ免疫複合体中のＩｇＡ腎症マーカータンパク質を測定することができる。
　工程（ａ）におけるＩｇＡ免疫複合体中のＩｇＡ腎症マーカータンパク質の測定は、具体的には、例えば、下記工程（ｃ－１）～（ｃ－３）により実施できる。
（ｃ－１）被験動物から採取された血液試料から血清又は血漿を分離する工程と、
（ｃ－２）前記工程（ｃ－１）において得られた血清又は血漿に含まれているＩｇＡ免疫複合体を回収する工程と、
（ｃ－３）前記工程（ｃ－２）において回収されたＩｇＡ免疫複合体中のＩｇＡ腎症マーカータンパク質を測定する工程。
　本発明に係るＩｇＡ腎症の判定方法においては、被験動物としては、腎臓を有している動物であれば、特に限定されるものではない。本発明に係るＩｇＡ腎症の判定方法における被験動物としては、哺乳動物が好ましく、ヒト、マウス、ラット、サル等の実験動物、ウサギ、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ヒツジ等の家畜若しくは愛玩動物がより好ましく、ヒトが特に好ましい。
　本発明に係るＩｇＡ腎症の判定方法における被験動物としては、腎症の発症が疑われている動物であることが好ましい。腎症の発症が疑われている動物としては、具体的には、尿中のタンパク質量の増大、又は血尿などの腎症で観察される病態が確認された動物が挙げられ、特に、血尿又はタンパク質尿と診断された動物が好ましい。例えば、ヒトの場合、尿中のタンパク質量がクレアチニン換算で０．１５ｇ／日以上であると、腎症の発症が疑われるため、本発明に係るＩｇＡ腎症の判定方法における被験動物として好適である。
　被験動物から採取された血液からの血漿又は血清の調製は、常法により行うことができる。例えば、クエン酸ナトリウム、ヘパリン、ＥＤＴＡ、又はフッ化ナトリウム等の抗凝固剤を予め含有させた採血管に被験動物から血液を採取した後、当該採血管を遠心分離処理することによって血球成分を沈殿させ、上清である血漿を回収することができる。また、血液を凝固させた後、遠心分離処理することによって血球成分を沈殿させ、上清である血清を回収することができる。被験動物から採取された血液、又はこれから調製された血漿若しくは血清は、調製後直ちにＩｇＡ免疫複合体の回収に供してもよく、所定期間保存した後にＩｇＡ免疫複合体の回収に供してもよい。血漿又は血清の保存は、冷蔵又は冷凍で行ってもよく、室温で保存してもよく、凍結乾燥処理を行って凍結粉末として保存してもよい。その他、血漿又は血清は、前処理として、適当なバッファー等で希釈してもよく、各種添加剤を添加してもよい。添加剤としては、界面活性剤、タンパク質分解酵素阻害剤、核酸分解酵素阻害剤、ｐＨ調整剤、ｐＨ指示薬等が挙げられる。
　血清又は血漿に含まれているＩｇＡ免疫複合体の回収は、回収前よりもＩｇＡ免疫複合体の濃度が高くなる方法であればよく、各種の方法で実施することができる。特に、夾雑物がより少ない状態でＩｇＡ免疫複合体を回収できる点から、ＩｇＡ免疫複合体の回収は、抗ＩｇＡ抗体を用いたアフィニティークロマトグラフィーにより行うことが好ましい。抗ＩｇＡ抗体としては、ＩｇＡ免疫複合体中のＩｇＡと選択的に結合可能な抗体であれば特に限定されるものではなく、各種の抗ＩｇＡ抗体を用いることができる。例えば、ガラクトース欠損ＩｇＡ等の糖鎖異常ＩｇＡを特異的に認識する抗体も、本発明における抗ＩｇＡ抗体として用いることができ、これを用いてＩｇＡ免疫複合体の回収を行うことができる。
　回収されたＩｇＡ免疫複合体中のＩｇＡ腎症マーカータンパク質を測定する方法は、一般的に目的のタンパク質の濃度を測定可能な方法であれば、特に限定されるものではない。例えば、ＩｇＡ腎症マーカータンパク質の測定は、ＩｇＡ腎症マーカータンパク質に対する抗体を用いた免疫学的手法により行うことができる。当該免疫学的手法としては、ＥＬＩＳＡ法（酵素結合免疫吸着測定法）、ラテックス凝集法、及びイムノクロマトグラフィー法等が挙げられる。これらの方法は、ＩｇＡ腎症マーカータンパク質に対する抗体を用い、常法により行うことができる。ＩｇＡ腎症マーカータンパク質の測定は、液体クロマトグラフ質量分析法等の質量分析を利用した方法で行うこともできる。
「ＩｇＡ免疫複合体中のＩｇＡ腎症マーカータンパク質の量」は、ＩｇＡ腎症マーカータンパク質を定量した値自体であってもよいが、ＩｇＡ腎症マーカータンパク質の量の多寡を、サンプル間でより精度よく比較できるため、「ＩｇＡ免疫複合体中のＩｇＡタンパク質の量に対する相対値」とすることが好ましい。具体的には、工程（ａ）を、下記工程（ｃ－１）～（ｃ－５）で行うことが好ましい。工程（ｃ－１）～（ｃ－３）は前記と同様にして行うことができる。
（ｃ－１）被験動物から採取された血液試料から血清又は血漿を分離する工程と、
（ｃ－２）前記工程（ｃ－１）において得られた血清又は血漿に含まれているＩｇＡ免疫複合体を回収する工程と、
（ｃ－３）前記工程（ｃ－２）において回収されたＩｇＡ免疫複合体中のＩｇＡ腎症マーカータンパク質を測定する工程と、
（ｃ－４）前記工程（ｃ－２）において回収されたＩｇＡ免疫複合体中のＩｇＡタンパク質を測定する工程と、
（ｃ－５）前記工程（ｃ－３）で測定されたＩｇＡ腎症マーカータンパク質の量を、前記工程（ｃ－４）で測定されたＩｇＡタンパク質の量で除した値（［ＩｇＡ免疫複合体中のＩｇＡ腎症マーカータンパク質の量］／［ＩｇＡ免疫複合体中のＩｇＡタンパク質の量］）を、前記被験動物から採取された血液試料中のＩｇＡ免疫複合体に含まれているＩｇＡ腎症マーカータンパク質の量として求める工程。
　工程（ｃ－４）におけるＩｇＡタンパク質の測定は、例えば、抗ＩｇＡ抗体を用いた免疫学的手法又は、液体クロマトグラフ質量分析法等の質量分析を利用した方法により行うことができる。当該免疫学的手法としては、ＥＬＩＳＡ法、ラテックス凝集法、及びイムノクロマトグラフィー法等が挙げられる。工程（ｃ－５）において、「ＩｇＡタンパク質量当たりのＩｇＡ腎症マーカータンパク質量」（［ＩｇＡ免疫複合体中のＩｇＡ腎症マーカータンパク質の量］／［ＩｇＡ免疫複合体中のＩｇＡタンパク質の量］）が測定しやすいことから、工程（ｃ－４）におけるＩｇＡタンパク質量の測定は、工程（ｃ－３）におけるＩｇＡ腎症マーカータンパク質量の測定と同種の方法で行うことが好ましい。
　本発明に係るＩｇＡ腎症の判定方法においては、工程（ｂ）として、工程（ａ）において測定されたＩｇＡ腎症マーカータンパク質の量に基づいて、被験動物のＩｇＡ腎症の発症の有無、又は発症可能性を判定する。本発明において用いられるＩｇＡ腎症マーカータンパク質は、血液中のＩｇＡ免疫複合体に含まれている量が、ＩｇＡ腎症罹患者群では健常者群よりも有意に高い傾向にある。このため、被検動物の血液中のＩｇＡ免疫複合体に含まれているＩｇＡ腎症マーカータンパク質の量を利用して、被験動物のＩｇＡ腎症の発症の有無、又は発症可能性を判断することができる。
　予めＩｇＡ腎症の罹患者と非罹患者とを分ける閾値を設定し、被検動物の血液中のＩｇＡ免疫複合体に含まれているＩｇＡ腎症マーカータンパク質の量を測定し、当該タンパク質量が、ＩｇＡ腎症患者群と健常者群を鑑別するための予め設定された閾値以上であるか否かを判定する。測定されたＩｇＡ腎症マーカータンパク質量が所定の閾値以上であった場合に、被検動物がＩｇＡ腎症を発症（罹患）している可能性が高いと判断する。
　ＩｇＡ腎症罹患者群と健常者群とを分ける閾値は、ＩｇＡ腎症マーカータンパク質の測定方法等を考慮して、実験的に設定することができる。例えば、ＩｇＡ腎症に罹患していないことが分かっている集団から採取された血液と、ＩｇＡ腎症に罹患していることが分かっている集団から採取された血液とに対して、本発明に係るＩｇＡ腎症の判定方法を行って、各血液中のＩｇＡ免疫複合体に含まれているＩｇＡ腎症マーカータンパク質の量を測定し、両集団の測定値を比較することにより、適宜設定することができる。
　後記実施例に示すように、ＩｇＡ腎症罹患者では、積極的治療後には、血液中のＩｇＡ免疫複合体に含まれているＩｇＡ腎症マーカータンパク質の量が急激に低下する傾向がある。このことから、血液中のＩｇＡ免疫複合体に含まれているＩｇＡ腎症マーカータンパク質の量は、ＩｇＡ腎症の疾患活動性と正の相関があると予想される。このため、適当な閾値を設定することにより、ＩｇＡ腎症の発症の有無、又は発症可能性のみならず、ＩｇＡ腎症の疾患活動性を的確に評価することができ、得られた評価は、治療計画策定に有用な情報として医師に提供されることが好ましい。すなわち、本発明に係るＩｇＡ腎症の判定方法においては、ＩｇＡ腎症の疾患活動性を判定することもできる。工程（ａ）において測定されたＩｇＡ腎症マーカータンパク質の量が多いほど、疾患活動性が高いと評価される。
　血液中のＩｇＡ免疫複合体に含まれているＩｇＡ腎症マーカータンパク質の量とＩｇＡ腎症の疾患活動性と正の相関があるとの予想から、同一の被験動物個体から経時的に採取された血液に対してそれぞれ血液中のＩｇＡ免疫複合体に含まれているＩｇＡ腎症マーカータンパク質の量を測定し、これ等の量を比較することによっても、当該被験動物のＩｇＡ腎症の疾患活動性を評価することができる。例えば、ＩｇＡ腎症を発症していると診断された動物に対して、工程（ａ）において測定されたＩｇＡ腎症マーカータンパク質の量が、当該測定に供された血液試料が採取された時点以前に当該同一の被験動物から採取された血液試料中のＩｇＡ免疫複合体に含まれているＩｇＡ腎症マーカータンパク質の量よりも低下している場合に、当該被験動物のＩｇＡ腎症の疾患活動性が低下し、病態が改善したと判定することができる。得られた評価は、治療計画策定に有用な情報として医師に提供されることが好ましい。
　本発明に係るＩｇＡ腎症の判定方法において、ＩｇＡ腎症の発症可能性が高いと評価された被験動物及び疾患活動性が高いと評価された被験動物は、血液中のＩｇＡ免疫複合体に含まれているＩｇＡ腎症マーカータンパク質の量が多い。そこで、本発明に係るＩｇＡ腎症の判定方法においてＩｇＡ腎症を発症している可能性が高い又は疾患活動性が高いと判定された被験動物に対しては、副腎皮質ステロイド治療及び扁桃摘出術などの積極的治療が有効であると予測される。このように、本発明に係るＩｇＡ腎症の判定方法は、治療法の選択のための情報を得るために、ＩｇＡ腎症を発症していると診断されたＩｇＡ腎症患者に対して行うことができる。
　ＦＨＲＰ１は、副経路又はレクチン経路といった補体経路の制御因子の１つであるため、血液中のＩｇＡ免疫複合体に含まれているＩｇＡ腎症マーカータンパク質の量が多い場合には、当該被験動物が発症するＩｇＡ腎症は、補体活性化に起因している可能性が高い。そこで、本発明に係るＩｇＡ腎症の判定方法において、ＩｇＡ腎症の発症可能性が高い又は疾患活動性が高いと評価された被験動物に対しては、副経路又はレクチン経路を標的とした補体阻害薬治療が有効であると予測される。すなわち、本発明に係るＩｇＡ腎症の判定方法により、補体治療薬を使う患者の選択、及び治療効果の予測に対して有用な情報を提供できる。副経路の補体治療薬としては、例えば、ＬＮＰ０２３（Ｎｏｖａｒｔｉｓ社製）が挙げられ、レクチン経路の補体治療薬としては、例えば、Ｎａｒｓｏｐｌｉｍａｂ（Ｏｍｅｒｏｓ社製）が挙げられる。
　ＩｇＡ免疫複合体の回収並びに、ＩｇＡ腎症マーカータンパク質及びＩｇＡタンパク質の定量などに使用する試薬・装置等をキット化することにより、本発明に係るＩｇＡ腎症の判定方法をより簡便に実施することができる。被験動物のＩｇＡ腎症の発症可能性又は疾患活動性を判定するためのキットとしては、抗ＩｇＡ抗体と、ＩｇＡ腎症マーカータンパク質に対する抗体と、を含むことが好ましい。
　本発明に係る被験動物のＩｇＡ腎症の疾患活動性を判定するためのキットは、ＩｇＡ腎症患者に対する治療の有効性を予測するために用いることができる。
　一実施形態において、本発明は、ＩｇＡ腎症患者に対する治療の有効性を予測するキットを製造するための、抗ＩｇＡ抗体及びＩｇＡ腎症マーカータンパク質に対する抗体の使用を提供する。
　一実施形態において、本発明は、ＩｇＡ腎症患者に対する治療の有効性を予測するための、抗ＩｇＡ抗体及びＩｇＡ腎症マーカータンパク質に対する抗体を提供する。
　一実施形態において、本発明は、工程（ａ）及び（ｂ）に加えて、他の工程を含んでもよい。他の工程としては、（ｃ）工程（ｂ）において判定されたＩｇＡ腎症の発症可能性又は疾患活動性の評価結果に基づいて、ＩｇＡ腎症患者に対して治療する工程等が挙げられる。工程（ａ）及び（ｂ）に加えて、さらに工程（ｃ）を含む場合、本実施形態の方法は、ＩｇＡ腎症患者に対する治療方法であってもよい。
　工程（ｃ）においては、判定されたＩｇＡ腎症の発症可能性又は疾患活動性の評価結果に基づいてＩｇＡ腎症の治療方針を決定することができる。ＩｇＡ腎症の発症可能性が高い又は疾患活動性が高いと評価されたＩｇＡ腎症患者に対しての治療としては、副経路又はレクチン経路を標的とした補体阻害薬治療であってもよいし、副腎皮質ステロイド治療及び扁桃摘出術などの積極的治療であってもよい。中でも、副経路又はレクチン経路を標的とした補体阻害薬治療、及び副腎皮質ステロイド治療のいずれか一方又は両方が好ましい。
　本発明は、以下の態様を含み得る。
　ＩｇＡ腎症患者に対する治療方法であって、
（ａ）被験動物から採取された血液試料中のＩｇＡ免疫複合体に含まれているＩｇＡ腎症マーカータンパク質を測定する工程と、
（ｂ）前記工程（ａ）において測定された前記ＩｇＡ腎症マーカータンパク質の量に基づいて、前記被験動物のＩｇＡ腎症の発症可能性又は疾患活動性を判定する工程と、
（ｃ）前記工程（ｂ）において判定されたＩｇＡ腎症の発症可能性又は疾患活動性の評価結果に基づいて、ＩｇＡ腎症患者に対して治療する工程と、
を有し、
　前記ＩｇＡ腎症マーカータンパク質は、ＩｇＡ免疫複合体に含まれているタンパク質であって、ＩｇＡ腎症罹患者群のＩｇＡ免疫複合体に含まれている量が、健常者群のＩｇＡ免疫複合体に含まれている量よりも多いタンパク質である、ＩｇＡ腎症患者に対する治療方法。
　次に実施例等を示して本発明をさらに詳細に説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。
［実施例１］
　ＩｇＡ腎症患者に腎生検を行うことなく、血液を測定することによりＩｇＡ腎症の診断及び疾患活動性の判断ができる新規バイオマーカー候補タンパク質を同定するために、血液中のＩｇＡ免疫複合体をプロテオーム解析することにより、ＩｇＡ腎症患者で特異的に増加しているタンパク質を探索した。
（１）血清サンプルの取得
　健常者（ｎ＝２０）、膜性腎症や微小変化型ネフローゼ症候群の他腎疾患（ＩｇＡ腎症以外）患者群（ｎ＝８）、ＩｇＡ腎症患者の支持療法群（ｎ＝８）、及び、ＩｇＡ腎症患者の積極的治療群（ｎ＝２４）から血清を回収した（表１）。ＩｇＡ腎症患者の支持療法群と積極的治療群の分類は、藤田医科大学の治療アルゴリズムに基づき、分類した。
　支持療法群は、すでに腎機能障害が進行した症例、腎生検で得られた組織において急性病変に乏しい症例、あるいは検尿所見が軽微である症例が含まれる。治療は、ＲＡ系阻害薬を中心とした保存療法が行われた。一方、積極的治療群は、扁桃摘出とステロイドパルス療法（Ｐｏｚｚｉらの方式）で治療した患者群である。組織学的急性病変が認められ、検尿所見が重度である患者がこれに該当する。
　健常者を除く患者からの採血は、腎生検のタイミングで行った。他腎疾患群（ＩｇＡ腎症以外の腎疾患群）及びＩｇＡ腎症患者の一部については、治療開始後約２年後の時期にも採血した。臨床検体の内訳、その臨床情報について、表１及び２に示す。ＩｇＡ腎症及び他腎疾患群の治療前後の臨床情報について、表３に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000001
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000002
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000003
（２）血清からＩｇＡ免疫複合体の分離・精製
　各血清１００μＬから、抗ヒトＩｇＡ抗体（製品番号：0855068、Cappel Labporatories社製）を結合した臭化シアン活性化セファロースカラムを用いたアフィニティークロマトグラフィー法により、ＩｇＡ免疫複合体を分離・精製した。具体的には、血清１００μＬとリン酸緩衝食塩水1ｍＬを加え、０．４５μｍフィルターで濾過した後、アフィニティーカラムに吸着させた。当該アフィニティーカラムをリン酸緩衝食塩水で洗浄した後、ＩｇＡ免疫複合体を０．１Ｍ グリシン塩酸緩衝液（ｐＨ２．７）で溶出した。溶出した溶液は、１．０Ｍ トリス塩酸緩衝液（ｐＨ９．０）を用いて中和した。
　分離・精製したＩｇＡ免疫複合体を、限外濾過膜（製品名：Ultra-4 30K Centrifugal Filter Units、Amicon社製）を用いて、２３３０×ｇ、４℃で２０分間遠心して濃縮した。その後、吸光度計Nano Vue（GE社）を用いて、波長２８０ｎｍでの吸光度を測定し、タンパク質濃度を算出した。
（３）ＩｇＡ免疫複合体のプロテオーム解析
　ＩｇＡ免疫複合体５μｇを、冷却したアセトンを用いて沈殿させた。その沈殿を２５０ｍＭ リン酸ナトリウムバッファー（ｐＨ６．０）で溶解させ、シアリダーゼＡ（製品名：GK80040、Prozyme社製）を２．５ｍＵ添加して、３７℃で一晩の酵素処理を行った。その後、ジチオスレイトール（ＤＴＴ）を終濃度２０ｍＭで添加して、室温で１５分間還元処理を行った。還元後のサンプルに、１００ｍＭ 炭酸水素アンモニウム溶液（ｐＨ８．３）で溶解したトリプシン（製品名：V528A、Promega社製）０．１ｇを添加して、再び３７℃で一晩の酵素処理を行った。酵素処理後のサンプル全量に対して、Ｃ１８スピンカラム（製品名：89870、Thermo Fisher Scientific社製）を用いて、脱塩処理を行った。最後に、SpeedVacを用いて、サンプルを乾固させた。
　乾固させた測定サンプルを０．１％ ギ酸２０μＬに溶解し、タンパク濃度を０．１μｇ／Ｌ、ＤＴＴを終濃度２０ｍＭとなるよう調製し、液体クロマトグラフィー－高分解能質量分析計（ＬＣ－ＨＲＭＳ）を用いて測定し、ラベルフリー定量法を用いた網羅的解析を行った。質量分析には、EASY-nLC 1000システム及びOrbitrap Fusion質量分析計（いずれもThermo Fisher Scientific社製）を用いた。液体クロマトグラフィーは、０％から３５％までのアセトニトリルの濃度勾配を使用して、３００ｎＬ／分の流速で、１２０分間かけて溶出した。
　上記により得られたマススペクトル情報をもとに、「Proteome Discoverer 2.2 software」（Thermo Fischer Scientific社製）を用いて、データベース検索〔MASCOT　(version 2.6.1, Matrix Science社製）、EQUEST HT｝を行い、タンパク質同定及びラベルフリー定量を行った。
（４）ＭＳ（質量分析）データを用いたタンパク質の差違解析
　Proteome Discovererで同定されたタンパク質の相対存在量を、Perseus （version 1.6.15.0）を用いて、差違解析した。タンパク質の相対存在量をＬｏｇ２変換し、各サンプルの中央値を差し引いて正規化した。欠損値に関しては、正規分布に基づいて補完した（width = 0.3、downshift = 1.8）。統計学的有意差は、Student’s t-testで検定し、P-value＜0.05 かつLog2（Fold change）絶対値＞０．５８を満たすタンパク質を、有意差のあるタンパク質とした。
　ＩｇＡ腎症の病態によって変化するＩｇＡ免疫複合体中タンパク質の網羅的定量解析のため、質量分析で同定されたタンパク質の相対存在量を、ＩｇＡ腎症患者・健常者、ＩｇＡ腎症患者（積極的治療群）の治療前後で比較した。
　ＩｇＡ免疫複合体中タンパク質の相対存在量を、ＩｇＡ腎症群（支持療法群＋積極的治療群）（腎生検時）と健常者群で比較した結果を図１に示す。図１中、横軸は、ＩｇＡ腎症群／健常者群のタンパク質存在量の相対比の対数値〔Log2（Fold change）〕を、縦軸は、P value〔-Log10（P value）〕を表す。対数値〔Log2（Fold change）〕のプラス方向にシフトした黒丸はＩｇＡ腎症で多く存在したタンパク質を、マイナス方向にシフトした黒丸は健常者に多く存在したタンパク質を、それぞれ示す。ＩｇＡ腎症患者では、健常者に比して、ＦＨＲＰ１がＩｇＡ免疫複合体中に多く存在した。ＦＨＲＰ１を含めて、ＩｇＡ腎症患者で有意に多く存在したタンパク質を表４に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000004
　ＩｇＡ腎症積極的治療群におけるＩｇＡ免疫複合体中タンパク質の治療前後比較の比較結果を図２に示す。図２中、横軸は、ＩｇＡ腎症積極的治療群の治療前／治療後（約２年後）のタンパク質存在量の相対比の対数値〔Log2（Fold change）〕を、縦軸は、P value〔-Log10（P value）〕を表す。対数値〔Log2（Fold change）〕のプラス方向にシフトした黒丸は治療前に多く存在したタンパク質を、マイナス方向にシフトした黒丸は治療後に多く存在したタンパク質を、それぞれ示す。ＩｇＡ腎症では、積極的治療により、ＩｇＡ免疫複合体中、ＦＨＲＰ１が減少することが明らかとなった。このように、健常者と比較してＩｇＡ腎症患者で有意に多く存在し、積極的治療によって有意に減少するタンパク質として、ＦＨＲＰ１を見出した（図１、２）。
（５）ＩｇＡ免疫複合体のＥＬＩＳＡによる解析
　免疫学的な手法であるＥＬＩＳＡを用いて、健常者、ＩｇＡ腎症患者、他腎疾患患者（サンプル量不足のためｎ＝７）のＩｇＡ免疫複合体中に含まれるＦＨＲＰ１量を測定した。ＦＨＲＰ１の測定は、ＩｇＡ濃度を揃えて測定し、ＩｇＡ１０μｇあたりに含まれるＦＨＲＰ１量（ｎｇ／ＩｇＡ１０μｇ）を算出した。測定値を、Kruskal Wallis testにて検定し（P＜0.0001）、その後の検定をDunn’s multiple comparisons testにて行った。
　具体的には、市販のＩｇＡ測定用ＥＬＩＳＡキット（製品名：「IgA Human Uncoated ELISA kit」、Thermo Fischer Scientific社製）を用いて、前記（２）で回収したＩｇＡ免疫複合体溶液のＩｇＡ濃度を算出した。その測定値を用いて、ＩｇＡ濃度１０μｇ／ｍＬになるよう調製し、市販のヒトＣＦＨＲ測定用ＥＬＩＳＡキット（製品名：「RayBio（登録商標） Human CFHR1 ELISA kit」、RayBiotech社製）を用いて、当該キット添付手順に基づいてＦＨＲＰ１濃度を測定した。
　各群におけるＩｇＡ免疫複合体中に含まれるＦＨＲＰ１量（ＩｇＡ１０μｇあたりに含まれるＦＨＲＰ１量［ｎｇ／ＩｇＡ１０μｇ］）の測定結果を図３に示す。各患者群における治療前後でのＦＨＲＰ１値を比較した結果を図４に示す。
　図３に示すように、健常者とＩｇＡ腎症積極的治療群との間に、有意差を認めた（P=0.0001）。他腎疾患とＩｇＡ腎症積極的治療群との間にも、有意差を認めた（P<0.0001）。このように、ＩｇＡ免疫複合体中に含まれるＦＨＲＰ１は、健常者及び他腎疾患患者と比較して、ＩｇＡ腎症患者において顕著に量が多く（one-way ANOVA, Tukey’s multiple comparison test , P<0.0001, P=0.0002）、ＩｇＡ腎症の中でも、重症度が高い群である積極治療群において高値を示した。他腎疾患患者では、健常者と比べても顕著な差は見られておらず、ＩｇＡ免疫複合体中ＦＨＲＰ１は、ＩｇＡ腎症で特異的に高値を示すことが明らかとなった。図４に示すように、ＩｇＡ腎症支持療法群（図４（Ａ））、積極的治療群（図４（Ｂ））ともに、治療前に比して、治療後にＩｇＡに結合するＦＨＲＰ１値が有意に低下した（Wilcoxon test、P=0.0156、0.0020）。他腎疾患患者群（図４（Ｃ））では、治療前に比べて治療後に有意に増加した（Paired t test、P=0.0471）。
　以上、本発明の好ましい実施形態を説明及び図示してきたが、これらは本発明を例示するものであり、限定的なものとみなされるべきではないことを理解すべきである。本発明の精神又は範囲から逸脱することなく、追加、省略、置換、及びその他の変更を行うことができる。したがって、本発明は、前述の説明によって限定されるものとはみなされず、添付の請求の範囲によってのみ限定される。

Claims (11)

  1. 　被験動物のＩｇＡ腎症の発症可能性又は疾患活動性を判定する方法であって、
    （ａ）被験動物から採取された血液試料中のＩｇＡ免疫複合体に含まれているＩｇＡ腎症マーカータンパク質を測定する工程と、
    （ｂ）前記工程（ａ）において測定された前記ＩｇＡ腎症マーカータンパク質の量に基づいて、前記被験動物のＩｇＡ腎症の発症可能性又は疾患活動性を判定する工程と、
    を有し、
    　前記ＩｇＡ腎症マーカータンパク質は、ＩｇＡ免疫複合体に含まれているタンパク質であって、ＩｇＡ腎症罹患者群のＩｇＡ免疫複合体に含まれている量が、健常者群のＩｇＡ免疫複合体に含まれている量よりも多いタンパク質である、ＩｇＡ腎症の判定方法。
  2. 　前記工程（ａ）を、
    （ｃ－１）被験動物から採取された血液試料から血清又は血漿を分離する工程と、
    （ｃ－２）前記工程（ｃ－１）において得られた血清又は血漿に含まれているＩｇＡ免疫複合体を回収する工程と、
    （ｃ－３）前記工程（ｃ－２）において回収されたＩｇＡ免疫複合体中のＩｇＡ腎症マーカータンパク質を測定する工程と、
    により行う、請求項１に記載のＩｇＡ腎症の判定方法。
  3. 　前記工程（ｃ－２）において、ＩｇＡ免疫複合体の回収を、抗ＩｇＡ抗体を用いたアフィニティークロマトグラフィーにより行う、請求項２に記載のＩｇＡ腎症の判定方法。
  4. 　ＩｇＡ免疫複合体中の前記ＩｇＡ腎症マーカータンパク質の測定を、前記ＩｇＡ腎症マーカータンパク質に対する抗体を用いた免疫学的手法により行う、請求項１～３のいずれか一項に記載のＩｇＡ腎症の判定方法。
  5. 　前記ＩｇＡ腎症マーカータンパク質が、アルファ１－アンチトリプシン、アポリポプロテインＣ－１、ＦＨＲＰ１、カテプシンＧ、ＳＬＣ１３Ａ４、アルファ２－マクログロブリン、ミエロペルオキシダーゼ、Ｃ１ＱＢ、ＲｈｏＧＡＰ４２、及びＣ１ＱＣからなる群より選択される１種以上である、請求項１～３のいずれか一項に記載のＩｇＡ腎症の判定方法。
  6. 　前記工程（ｂ）において、前記工程（ａ）において測定された前記ＩｇＡ腎症マーカータンパク質の量が、ＩｇＡ腎症患者群と健常者群を鑑別するための予め設定された閾値よりも多い場合に、前記被験動物はＩｇＡ腎症を発症している可能性が高いと判定する、請求項１～３のいずれか一項に記載のＩｇＡ腎症の判定方法。
  7. 　前記被験動物がＩｇＡ腎症を発症している可能性が高いと判定された場合に、前記被験動物は、副腎皮質ステロイド治療が有効であると予測する、請求項６に記載のＩｇＡ腎症の判定方法。
  8. 　前記被験動物がＩｇＡ腎症を発症している可能性が高いと判定された場合に、前記被験動物は、副経路又はレクチン経路を標的とした補体阻害薬治療が有効であると予測する、請求項６に記載のＩｇＡ腎症の判定方法。
  9. 　前記被験動物がＩｇＡ腎症を発症していると診断された動物であり、
    　前記工程（ｂ）において、前記工程（ａ）において測定された前記ＩｇＡ腎症マーカータンパク質の量が、前記工程（ａ）において供された血液試料が採取された時点以前に前記被験動物から採取された血液試料中のＩｇＡ免疫複合体に含まれている前記ＩｇＡ腎症マーカータンパク質の量よりも低下している場合に、前記被験動物のＩｇＡ腎症の疾患活動性が低下したと判定する、請求項１～３のいずれか一項に記載のＩｇＡ腎症の判定方法。
  10. 　被験動物のＩｇＡ腎症の疾患活動性を判定するためのキットであって、
    　抗ＩｇＡ抗体と、ＩｇＡ腎症マーカータンパク質に対する抗体とを備え、
    　前記ＩｇＡ腎症マーカータンパク質は、ＩｇＡ免疫複合体に含まれているタンパク質であって、ＩｇＡ腎症罹患者群のＩｇＡ免疫複合体に含まれている量が、健常者群のＩｇＡ免疫複合体に含まれている量よりも多いタンパク質である、ＩｇＡ腎症の判定用キット。
  11. 　前記ＩｇＡ腎症マーカータンパク質が、アルファ１－アンチトリプシン、アポリポプロテインＣ－１、ＦＨＲＰ１、カテプシンＧ、ＳＬＣ１３Ａ４、アルファ２－マクログロブリン、ミエロペルオキシダーゼ、Ｃ１ＱＢ、ＲｈｏＧＡＰ４２、及びＣ１ＱＣからなる群より選択される１種以上である、請求項１０に記載のＩｇＡ腎症の判定用キット。
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