AT12090U1 - Verfahren und kit zur detektion von mikroorganismen - Google Patents
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Description
österreichisches Patentamt AT12 090U1 2011-10-15
Beschreibung [0001] Die vorliegende Erfindung betrifft ein Verfahren und einen Kit zur Detektion von Mikroorganismen, wie Chlamydien in einer Probe.
[0002] Chlamydien verursachen verschiedene akute und zum Teil auch chronische Erkrankungen beim Menschen. Typische Erkrankungen, die von Chlamydien verursacht werden, sind venerische Urogenital-Infektionen, Augeninfektionen und atypische Pneumonien. Die Gattung Chlamydia enthält die Spezien Chlamydia trachomatis, Chlamydia pneumoniae und Chlamydia psittaci.
[0003] Chlamydia trachomatis ist primär für den Menschen krankheitserregend. Bei Chlamydia trachomatis werden 18 Serotypen unterschieden und es ist der häufigste bakterielle Erreger sexuell übertragbarer Infektionen.
[0004] Chlamydia trachomatis kann beispielsweise je nach Manifestationsform der Serotype zu Augeninfektionen bis hin zur Erblindung führen.
[0005] Um rechtzeitig eine Chlamydieninfektion zu diagnostizieren und infolgedessen rechtzeitig eine Therapie zu beginnen, um Komplikationen zu verhindern, ist es von entscheidender Bedeutung eine derartige Infektion rasch zu diagnostizieren.
[0006] Neben Chlamydien gibt es eine Vielzahl weiterer Mikroorganismen, die für den Menschen von Bedeutung sind. Beispiele solcher Mikroorganismen sind Gonokokken, die für Gonorrhoe verantwortlich sind, und Pilze.
[0007] Die am Markt üblichen Diagnosetests zur Bestimmung von mikrobiellen Infektionen sind Kits, welche zumindest teilweise von Fachpersonal angewendet werden müssen oder welche ausschließlich im Labor Anwendung finden. Daher ist die rasche Feststellung, ob eine mikrobielle Infektion vorkommt, für die betroffene Person nicht möglich.
[0008] Es ist somit eine Aufgabe der vorliegenden Erfindung, Mittel und Verfahren zur Verfügung zu stellen, die es einer Person ermöglichen rasch und ohne fachliche Unterstützung eine mikrobielle Infektion festzustellen.
[0009] Die vorliegende Erfindung betrifft einen Kit zur Bestimmung von Mikroorganismen, insbesondere von Chlamydien, Gonokokken und Pilzen, in einer Probe umfassend: [0010] a) mindestens ein Mittel zur Probennahme, vorzugsweise min- destens einen Wattetup fer oder einen Tampon, [0011] b) ein Behältnis umfassend ein Reagenz zum Aufschließen von Mikroorganismen, insbesondere von Chlamydien, Gonokokken und Pilzen, und geeignet zur Aufnahme des Mittels zur Probennahme, vorzugsweise des Wattetupfers oder Tampons, [0012] c) ein Behältnis, vorzugsweise eine Tropferflasche, zum Neutralisieren des Reagenzes zum Aufschließen von Mikroorganismen, und [0013] d) ein Mittel zur Bestimmung von Mikroorganismen, insbesondere von Chlamydien,
Gonokokken und Pilzen, wobei das Behältnis b) oder c) ein basisches Reagenz mit einem pH-Wert von 10 bis 14, vorzugsweise 11 bis 13, insbesondere 12,7, oder ein saures Reagenz mit einem pH-Wert von 1 bis 6,5, vorzugsweise von 2,5 bis 6,4, umfasst, wobei der Kit jeweils ein basisches und ein saures Reagenz zum Aufschließen von Mikroorganismen oder zum Neutralisieren des Reagenzes zum Aufschließen von Mikroorganismen umfasst.
[0014] Mit dem erfindungsgemäßen Kit ist es aufgrund der einfachen Handhabung der einzelnen Bestandteile erstmals möglich, eine mikrobielle Infektion zu diagnostizieren.
[0015] Die bereitgestellten Mittel zur Probennahme, vorzugsweise ein Wattetupfer oder ein Tampon, die idealerweise in steriler Form dem Kit beigegeben sind, dienen dazu die zu untersuchende Probe zu entnehmen. Mit diesen Mitteln können beispielsweise Abstriche, wie Vagi- 1 /7 österreichisches Patentamt AT12 090U1 2011-10-15 nalabstriche, vorgenommen werden.
[0016] Um die in der Probe möglicherweise vorkommenden Mikroorganismen besser bestimmen zu können, werden die Probeentnahmemittel mit einem Reagenz in Kontakt gebracht, welches die Zellen größtenteils aufschließt. Durch diesen Aufschluss werden die Epitope der Zellen, beispielsweise, für Antikörper, besser zugänglich, wodurch der Nachweis der Zellen mit erhöhter Effizienz erfolgen kann.
[0017] Der Behälter, der geeignet ist die Probeentnahmemittel aufzunehmen, umfasst vorzugsweise eine Mindestmenge an Reagenz von 50-1000 pl, vorzugsweise 100-500 μΙ, insbesondere 300 μΙ, die ausreichend ist um die Zellen aufzuschließen und vom Mittel herunterzulösen, so-dass die Zellen bzw. Zellfragmente in der Lösung verbleiben.
[0018] Da der Aufschluss der Mikroorganismen entweder im basischen oder sauren pH-Bereich durchgeführt wird, ist es notwendig die Reagenzlösung entweder mit einem sauren oder basischen Reagenz zu neutralisieren, bevor dieses mit einem Mittel zur Detektion von Mikroorganismen in Kontakt gebracht wird. Handelt es sich bei dem Mittel zur Detektion von Mikroorganismen nämlich z.B. um Antikörper kann ein zu saurer bzw. zu basischer pH-Wert dazu führen, dass keine Bindung von Antikörpern an Antigenen stattfindet. Es ist wesentlich, dass bei der Verwendung eines sauren Aufschließungsreagenzes ein basisches Neutralisierungsreagenz eingesetzt wird und umgekehrt.
[0019] Mittel zur Bestimmung von Mikroorganismen, insbesondere von Chlamydien, Gonokokken und Pilzen, sind in der Fachwelt hinreichend bekannt. Aufgrund des Einsatzgebiets des erfindungsgemäßen Kits und insbesondere aufgrund des Personenkreises, der den erfindungsgemäßen Kit anwendet, ist es von Vorteil, dass derartige Mittel möglichst einfach und unkompliziert aufgebaut und ohne die Verwendung aufwendiger Apparaturen anwendbar sind. Solche Mittel sind in der Fachwelt hinreichend bekannt und werden bereits häufig eingesetzt. Der Großteil dieser Nachweismittel beruht auf der Bindung von Antikörpern an Oberflächenantigene der zu bestimmenden Mikroorganismen.
[0020] Erfindungsgemäß umfasst das Behältnis b) oder c) ein basisches Reagenz mit einem pH-Wert von 10 bis 14, vorzugsweise 11 bis 13, insbesondere 12,7, oder ein saures Reagenz mit einem pH-Wert von 1 bis 6,5, vorzugsweise von 2,5 bis 6,4, wobei der Kit jeweils ein basisches und ein saures Reagenz umfasst.
[0021] Der erfindungsgemäße Kit umfasst - wie eingangs erwähnt - ein Behältnis mit einem Aufschlussreagenz und ein Behältnis mit einem Neutralisierungsreagenz. Je nach Art des gewählten Aufschlusses (sauer oder basisch) ist das Neutralisierungsreagenz auszuwählen (sauer oder basisch).
[0022] Das basische Reagenz umfasst vorzugsweise 3 bis 5 g, vorzugsweise 4 g, NaOH, 3 bis 4 g Ethylendiamintetraessigsäure (EDTA), 1 bis 3 g, insbesondere ca. 2 g, das Natrium-Salz des Cholsäurehydrats in 1 L Wasser.
[0023] Das saure Reagenz umfasst vorzugsweise 3 bis 5 g, vorzugsweise 4 bis 4,5 g, KH2PO4, 5 bis 9 g, vorzugsweise 7 bis 8 g, Na2HP04, 2 bis 8 ml, vorzugsweise 3 bis 6 ml, insbesondere 5 ml, eines Gemisches aus 2-methyl-4-isothiazolin-3-on und 5-chlor-2-methyl-4-isothiazolin-3-on (Proclin) in 1 L Wasser, wobei der pH Wert auf pH 6 bis 6,5 eingestellt ist.
[0024] Der pH-Wert dieses Reagenzes kann durch die Zugabe von Säure auf den entsprechenden pH-Wert eingestellt werden, wobei vorzugsweise HCl verwendet wird.
[0025] Das saure Reagenz umfasst vorzugsweise 3 bis 5 g, vorzugsweise 4 bis 4,5 g, KH2P04, 5 bis 9 g, vorzugsweise 7 bis 8 g, Na2HP04, in 1 L Wasser, wobei der pH-Wert auf pH 2 bis 3, insbesondere auf pH 2,5, eingestellt ist.
[0026] Gemäß einer bevorzugten Ausführungsform der vorliegenden Erfindung ist das Mittel zur Bestimmung von Mikroorganismen ein Teststreifen.
[0027] Erfindungsgemäß eignen sich aufgrund der einfachen Handhabung Teststreifen beson- 2/7 österreichisches Patentamt AT12 090U1 2011-10-15 ders gut.
[0028] Der Teststreifen umfasst vorzugsweise einen festen Träger aus einer saugfähigen Matrix, welche Matrix in einen Aufgabebereich, in einen Reaktionsbereich, in mindestens einen Nachweisbereich und in mindestens einen Kontrollbereich unterteilt ist.
[0029] Im Reaktionsbereich sind vorzugsweise Antikörper mobil angeordnet, die in der Lage sind an ein Epitop eines Oberflächenantigens der zu bestimmenden Mikroorganismen zu binden, wobei die Antikörper vorzugsweise mit einem Farbstoff, gefärbten, fluoreszierenden oder magnetischen Pratikeln, insbesondere Latexpartikeln, oder mit kolloidalem Gold markiert sind.
[0030] Gemäß einer bevorzugten Ausführungsform der vorliegenden Erfindung sind im Nachweisbereich Antikörper immobilisiert, die in der Lage sind an ein Epitop eines Oberflächenantigens der zu bestimmenden Mikroorganismen zu binden, wobei das Epitop des Antigens in der Lage ist, oder nicht in der Lage ist, an den im Reaktionsbereich mobil angeordneten Antikörper zu binden. Erfindungsgemäß können im Nachweisbereich Antikörper immobilisiert sein, die an dasselbe oder ein anderes Epitop eines Antigens des zu bestimmenden Mikroorganismen binden. Es hat sich herausgestellt, dass die Teststreifen, welche in der US 5,073,484 und US 5,654,162 beschrieben sind, am besten geeignet sind, um im erfindungsgemäßen Verfahren eingesetzt zu werden.
[0031] Im Kontrollbereich sind vorzugsweise Antikörper immobilisiert, die in der Lage sind an die im Reaktionsbereich mobil angeordneten Antikörper zu binden.
[0032] Gemäß einer bevorzugten Ausführungsform der vorliegenden Erfindung umfassen die Behältnisse b) und c) 50-1000 pl, vorzugsweise 100-500 μΙ, insbesondere 300 μΙ, des jeweiligen Reagenzes.
[0033] Um zu testen, ob die Mittel zum Nachweisen der Mikroorganismen ordnungsgemäß funktionieren, umfasst der Kit vorzugsweise weiters eine Positivkontrolle.
[0034] Gemäß einer besonders bevorzugten Ausführungsform der vorliegenden Erfindung umfasst Reagenz b) und/oder c) einen pH Indikator, vorzugsweise Bromthymolblau, vorzugsweise in einer Menge von 0,001 bis 0,005 g, insbesondere in einer Menge von 0,003 g.
[0035] Die Zugabe eines Indikators erlaubt es dem Anwender festzustellen, ob der pH-Wert des Reagenzes den Erfordernissen entspricht und als neutralisiert angesehen werden kann.
[0036] Ein weiterer Aspekt der vorliegenden Erfindung betrifft ein Verfahren zur Diagnose einer mikrobiellen Infektion, insbesondere einer Chlamydien-, Gonokokken- oder Pilzinfektion, umfassend die Schritte: [0037] a) Überführen einer an einem bereitgestellten Mittel zur Probennahme, vorzugsweise mindestens einem Wattetupfer oder eine Tampon, befindlichen Probe in ein Behältnis umfassend ein Reagenz zum Aufschließen von Mikroorganismen, insbesondere von Chlamydien, Gonokokken und Pilzen, [0038] b) Inkubieren der Probe mit dem Reagenz für 5 Sekunden bis 30 Minuten, vorzugsweise für 30 Sekunden bis 15 Minuten, mehr bevorzugt für 1 bis 10 Minuten, insbesondere für 5 Minuten, [0039] c) Zugabe eines Reagenzes zum Neutralisieren des Reagenzes zum Aufschließen von
Mikroorganismen, wobei optional das Mittel zur Probennahme aus dem Behältnis entfernt wird, [0040] d) Überführen des neutralisierten Reagenzes in ein Mittel zur Bestimmung von Mikroor ganismen, und [0041] e) Diagnostizieren einer mikrobiellen Infektion, wenn in Schritt d) Mikroorganismen detektiert werden, wobei das Behältnis a) ein basisches Reagenz mit einem pH-Wert von 10 bis 14, vorzugsweise 11 bis 13, insbesondere 12,7, oder ein saures Reagenz mit einem pH-Wert von 1 bis 6,5, vorzugsweise von 2,5 bis 6,4, umfasst. 3/7 österreichisches Patentamt AT 12 090 U1 2011-10-15 [0042] Ein weiterer Aspekt der vorliegenden Erfindung betrifft die Verwendung eines erfin-dungsgemäßen Kits zur Bestimmung einer mikrobiellen Infektion, insbesondere einer Chlamydien-, Gonokokken- oder Pilzinfektion.
[0043] Der Gegenstand der vorliegenden Erfindung wird anhand des folgenden Beispiels eingehender erläutert, ohne jedoch auf dieses beschränkt zu sein. BEISPIEL: [0044] Dieses Beispiel zeigt den Nachweis von Chlamydia trachomatis, einer der drei bekannten Spezies aus der Familie der Chlamydien-Bakterien, Infektionen mit Chlamydia trachomatis sind die häufigsten sexuell übertragenen Infektionen. Allein für Deutschland wird die Zahl der Neuinfektionen auf 300.000 bis 500.000 pro Jahr geschätzt. Jüngere Erwachsene (15-25 Jahre), Personen mit häufig wechselndem Geschlechtspartner, Sexualpartner (auch unbemerkt und symptomlos) infizierter Personen sowie Neugeborene infizierter Mütter sind am häufigsten betroffen. Infektionen ohne Sexualkontakt (z.B. im Schwimmbad) sind selten, aber nicht auszuschließen.
[0045] Chlamydia trachomatis-Infektionen verursachen häufig keine Symptome. Chlamydia trachomatis kann jedoch auch zu Beschwerden wie Augenentzündungen, Arthritis und Entzündungen des Harntraktes führen. Weiters führen unbehandelte Infektionen häufig zu Unfruchtbarkeit und erhöhen das Risiko von Eileiterschwangerschaften und Frühgeburten. In den Entwicklungsländern sind Infektionen mit Chlamydia trachomatis die häufigste Ursache für das Erblinden von Neugeborenen.
[0046] Besonders wichtig ist eine Behandlung von Chlamydien-Infektionen in der Schwangerschaft. Rund 50 % der infizierten Mütter geben die Infektion an das Neugeborene weiter. Häufige Komplikationen beim Neugeborenen sind Bindehautentzündungen und Lungenentzündung.
VORBEREITUNGEN
[0047] Testkomponenten: Probebehälter mit 300 pl Puffer A, kleine Flasche mit 400 μΙ Puffer B, Abstrichtupfer (=SWAB) und Folienverpackung mit Teststreifen und Trockenmittel
Puffer A
NaOH 4g EDTA 3,722 g
Natriumcholhydrat 2 g
Wasser 1 L pH 12,7
Puffer B KH2P04 4, 47 g
Na2HP4 7,87 g
Proclin 5 ml pH Einstellung mit HCl auf pH6,4 [0048] Der Abstrichtupfer (=SWAB) wurde vorsichtig bis zum Gebärmutterhals (Ende des Vaginalkanals) eingeführt. Der Abstrichtupfer wurde gleichmäßig für ca. 30 Sekunden gedreht und langsam herausgezogen.
[0049] Da sich in der Pufferflasche bewusst wenig Flüssigkeit befindet, musste diese durch Schütteln am Flaschenboden gesammelt werden.
[0050] Der Abstrichtupfer wurde mit der Probe bis zum Flaschenboden eingetaucht. Der Abstrichtupfer wurde in der Flüssigkeit gedreht und mehrfach an der Seitenwand ausgedrückt, damit sich ihr Probenmaterial gut in der Pufferlösung verteilt. 4/7
Claims (17)
- österreichisches Patentamt AT 12 090 U1 2011-10-15 [0051] Der Abstrichtupfer wurde für ca. 5 Minuten in der Flasche belassen. [0052] Aus der kleinen Pufferflasche B wurden 6 Tropfen in die große Pufferflasche A getropft. [0053] Die Pufferflasche A wurde verschlossen und geschwenkt. [0054] 2 Tropfen der Probe wurden auf das Probenaufgabenfeld des Teststreifens (US 5,073,484, US 5,654,162, Glad et al., Acta Chem. Scand. 6:449-450 (1980), Glad et al, Anal. Bioch. 85:180 (1978), Norgard-Pederson, Clinica Chemica Acta 48:345 (1973) und Laureil et al., Methods in Enzymology, 73, Part B, 339 et seq. (1981)) aufgebracht. [0055] Nach ca. 15 Minuten konnte das Testergebnis am Teststreifen abgelesen werden. Ansprüche 1. Kit zur Bestimmung von Mikroorganismen, insbesondere von Chlamydien, Gonokokken und Pilzen, in einer Probe umfassend: a) mindestens ein Mittel zur Probennahme, vorzugsweise mindestens ein Wattetupfer oder ein Tampon, b) ein Behältnis umfassend ein Reagenz zum Aufschließen von Mikroorganismen, insbesondere von Chlamydien, Gonokokken und Pilzen, und geeignet zur Aufnahme des Mittels zur Probennahme, vorzugsweise des Wattetupfers oder Tampons, c) ein Behältnis, vorzugsweise eine Tropferflasche, zum Neutralisieren des Reagenzes zum Aufschließen von Mikroorganismen, und d) ein Mittel zur Bestimmung von Mikroorganismen, insbesondere von Chlamydien, Gonokokken und Pilzen, wobei das Behältnis b) oder c) ein basisches Reagenz mit einem pH-Wert von 10 bis 14, vorzugsweise 11 bis 13, insbesondere 12,7, oder ein saures Reagenz mit einem pH-Wert von 1 bis 6,5, vorzugsweise von 2,5 bis 6,4, umfasst, wobei der Kit jeweils ein basisches und ein saures Reagenz zum Aufschließen von Mikroorganismen oder zum Neutralisieren des Reagenzes zum Aufschließen von Mikroorganismen umfasst.
- 2. Kit nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass das basische Reagenz 3 bis 5 g, vorzugsweise 4 g, NaOH, 3 bis 4 g Ethylendiamintetraessigsäure (EDTA), 1 bis 3 g, insbesondere ca. 2 g, das Natrium-Salz des Cholsäurehydrats in 1 L Wasser umfasst.
- 3. Kit nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass das saure Reagenz 3 bis 5 g, vorzugsweise 4 bis 4,5 g, KH2P04, 5 bis 9 g, vorzugsweise 7 bis 8 g, Na2HP04, 2 bis 8 ml, vorzugsweise 3 bis 6 ml, insbesondere 5 ml, eines Gemisches aus 2-methyl-4-isothiazolin-3-on und 5-chlor-2-methyl-4-isothiazolin-3-on (Proclin) in 1 L Wasser umfasst, wobei der pH-Wert auf pH 6 bis 6,5 eingestellt ist.
- 4. Kit nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass das saure Reagenz 3 bis 5 g, vorzugsweise 4 bis 4,5 g, KH2P04, 5 bis 9 g, vorzugsweise 7 bis 8 g, Na2HP04, in 1 L Wasser umfasst, wobei der pH Wert auf pH 2 bis 3, insbesondere auf pH 2,5, eingestellt ist.
- 5. Kit nach einem der Ansprüche 1 bis 4, dadurch gekennzeichnet, dass das Mittel zur Bestimmung von Mikroorganismen ein Teststreifen ist.
- 6. Kit nach Anspruch 5, dadurch gekennzeichnet, dass der Teststreifen einen festen Träger aus einer saugfähigen Matrix umfasst, welche Matrix in einen Aufgabebereich, in einen Reaktionsbereich, in mindestens einen Nachweisbereich und in mindestens einen Kontroll-bereich unterteilt ist.
- 7. Kit nach Anspruch 6, dadurch gekennzeichnet, dass im Reaktionsbereich Antikörper mobil angeordnet sind, die in der Lage sind an ein Epitop eines Oberflächenantigens der zu bestimmenden Mikroorganismen zu binden, wobei die Antikörper vorzugsweise mit einem Farbstoff, gefärbten, fluoreszierenden oder magnetischen Partikeln, insbesondere Latexpartikeln, oder mit kolloidalem Gold markiert sind. 5/7 österreichisches Patentamt AT 12 090 U1 2011-10-15
- 8. Kit nach Anspruch 7, dadurch gekennzeichnet, dass im Nachweisbereich Antikörper immobilisiert sind, die in der Lage sind an ein Epitop eines Oberflächenantigens der zu bestimmenden Mikroorganismen zu binden, wobei das Epitop des Antigens in der Lage ist oder nicht in der Lage ist, an den im Reaktionsbereich mobil angeordneten Antikörper zu binden.
- 9. Kit nach Anspruch 7 oder 8, dadurch gekennzeichnet, dass im Kontrollbereich Antikörper immobilisiert sind, die in der Lage sind an die im Reaktionsbereich mobil angeordneten Antikörper zu binden.
- 10. Kit nach einem der Ansprüche 1 bis 9, dadurch gekennzeichnet, dass die Behältnisse b) und c) 50-1000 pl, vorzugsweise 100-500 μΙ, insbesondere 300 μΙ, des jeweiligen Reagenzes umfassen.
- 11. Kit nach einem der Ansprüche 1 bis 10, dadurch gekennzeichnet, dass der Kit weiters eine Positivkontrolle umfasst.
- 12. Kit nach Anspruch 10, dadurch gekennzeichnet, dass Reagenz b) und/oder c) einen pH Indikator, vorzugsweise Bromthymolblau, vorzugsweise in einer Menge von 0,001 bis 0,005 g, insbesondere in einer Menge von 0,003 g umfasst.
- 13. Verfahren zur Diagnose einer mikrobiellen Infektion, insbesondere einer Chlamydien-, Gonokokken- oder Pilzinfektion, umfassend die Schritte: a) Überführen einer an einem bereitgestellten Mittel zur Probennahme, vorzugsweise mindestens einem Wattetupfer oder einem Tampon, befindlichen Probe in ein Behältnis umfassend ein Reagenz zum Aufschließen von Mikroorganismen, insbesondere von Chlamydien, Gonokokken und Pilzen, b) Inkubieren der Probe mit dem Reagenz für 5 Sekunden bis 30 Minuten, vorzugsweise für 30 Sekunden bis 15 Minuten, mehr bevorzugt für 1 bis 10 Minuten, insbesondere für 5 Minuten, c) Zugabe eines Reagenzes zum Neutralisieren des Reagenzes zum Aufschließen von Mikroorganismen, wobei optional das Mittel zur Probennahme aus dem Behältnis entfernt wird, d) Überführen des neutralisierten Reagenzes in ein Mittel zur Bestimmung von Mikroorganismen, und e) Diagnostizieren einer mikrobiellen Infektion, wenn in Schritt d) Mikroorganismen detek-tiert werden, wobei das Behältnis a) ein basisches Reagenz mit einem pH-Wert von 10 bis 14, vorzugsweise 11 bis 13, insbesondere 12,7, oder ein saures Reagenz mit einem pH-Wert von 1 bis 6,5, vorzugsweise von 2,5 bis 6,4, umfasst.
- 14. Verfahren nach Anspruch 13, dadurch gekennzeichnet, dass das basische Reagenz 3 bis 5 g, vorzugsweise 4 g, NaOH, 3 bis 4 g Ethylendiamintetraessigsäure (EDTA), 1 bis 3 g, insbesondere ca. 2 g, das Natrium-Salz des Cholsäurehydrats in 1 L Wasser umfasst.
- 15. Verfahren nach Anspruch 13 oder 14, dadurch gekennzeichnet, dass das saure Reagenz 3 bis 5 g, vorzugsweise 4 bis 4,5 g, KH2P04, 5 bis 9 g, vorzugsweise 7 bis 8 g, Na2HP04, 2 bis 8 ml, vorzugsweise 3 bis 6 ml, insbesondere 5 ml, eines Gemisches aus 2-methyl-4-isothiazolin-3-on und 5-chlor-2-methyl-4-isothiazolin-3-on (Proclin) in 1 L Wasser umfasst, wobei der pH-Wert auf pH 6 bis 6,5 eingestellt ist.
- 16. Verfahren nach Anspruch 13 oder 14, dadurch gekennzeichnet, dass das saure Reagenz 3 bis 5 g, vorzugsweise 4 bis 4,5 g, KH2P04, 5 bis 9 g, vorzugsweise 7 bis 8 g, Na2HP04, in 1 L Wasser umfasst, wobei der pH-Wert auf pH 2 bis 3, insbesondere auf pH 2,5, eingestellt ist.
- 17. Verfahren nach einem der Ansprüche 13 bis 16, dadurch gekennzeichnet, dass das Mittel zur Bestimmung von Mikroorganismen ein Teststreifen ist. 6/7
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