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Verfahren zur Herstellung von Gibberellin-Säure
EMI1.1
bleibt, um den Erfordernissen des Pilzes während der Bildung der Gibberellin-Säure entsprechen zu können.
Ein Medium, das für die Stufe bzw. Stufen des aktiven Wachstums geeignet ist, soll Kohlen- stoffquellen (d. i. ein Zucker, z. B. Sucrose oder
Glucose oder ein mehrwertiger Alkohol, z. B.
Glyzerin), Stickstoffquellen (z. B. ein Ammonium- salz, ein Nitrat, Maisquellwasser [corn steep liquor] oder ein abgebautes Protein, wie z. B. ein Pepton oder andere assimilierbaren Stickstoff enthaltende Quellen), ferner Magnesium, Schwefel (zweckmässigerweise Magnesiumsulfat), Kalium,
Phosphor (zweckmässigerweise Kaliumdiphosphat) und Spuren von Metallen, wie z. B. Eisen,
Kupfer, Zink, Mangan und Molybdän enthalten.
Die Stickstoffkonzentration in dieser Stufe soll 0, 017-0, 25 gj100 cm3, z. B. in Form von 0, 05 bis 0, 75 g/100 cm3 Ammoniumnitrat und vor- zugsweise 0, 07-0, 17 g/100 cm3 Stickstoff, z. B. in Form von 0, 2 bis 0, 5 g/100 cm3 Ammoniumnitrat betragen. Die Konzentration des Kohlenstoffes, der z. B. in Form eines Zuckers, z. B. von Sucrose, Glucose oder einem mehrwertigen Alkohol, z. B. Glyzerin vorliegen kann, wird dann so gewählt, dass für das aktive Wachstum des Pilzes ein sogenanntes ausgeglichenes Medium vorhanden ist, d. h., dass das Verhältnis der Konzentration an Kohlenstoff zur Konzentration an Stickstoff, vorzugsweise zwischen den Werten 10 : I und 25 : I liegt. Ein für das aktive Wachstum geeignetes typisches ausgeglichenes Medium enthält z.
B. 0, 24g/100cm3 Ammoniumnitrat und 3, 18 gj100 cm3 Glucosemonohydrat, was einem Verhältnis von C : N von 14 : 1 entspricht oder 0, 48 gj100 cm3 Ammoniumnitrat und 10 g/100 cm3 Glucosemonohydrat, was einem Verhältnis von C : N von 21 : 5 gleichkommt.
In dem bevorzugten unausgeglichenen Medium eines hohen Kohlenstoff/Stickstoffverhältnisses, in welchem das aktive Wachstum gehemmt und Gibberellin-Säure gebildet wird, liegt ein geeigneter C : N-Verhältnisbereich zwischen 25 : 1 bis 200 : 1. Die Auswahl der Stickstoffkonzentration in dem Medium wird von dem erforderlichen Wachstum, das vorsichgehen soll, bevor es infolge eines Mangels an Stickstoff gehemmt wird, abhängig sein. Bei Beginn der Säurebildungsstufe ist ein gewisses Wachstum von
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Vorteil, um die Fermentatorenkapazität voll auszunützen, wobei sich ein Stickstoffgehalt in dem unausgeglichenen Medium eignet, der zwischen 0, 14-0, 17 g/100 cm3, z. B. in Form von 0, 11 bis 0, 5 g/100 cm3 Ammoniumnitrat liegt.
Ein bevorzugterer c : N-Verhä1tnisbereich liegt in der Grössenordnung von 30 : 1 bis 55 : 1 und auf Basis eines Stickstoffgehaltes in dem unausgeglichenen Medium von zwischen 0, 04 bis 0, 17 g/100 cm3, wobei der entsprechende Kohlenstoffgehalt in diesem Medium zwischen 1, 2 und 9, 4 g/100 cm3 gelegen ist. Eine geeignete Stickstoffquelle zur Bildung dieser erwünschten Stickstoffkonzentration ist z. B. 0, 11 bis 0, 5 g/100 cm3 Ammoniumnitrat ; eine geeignete Kohlenstoffquelle zur Herstellung der erwünschten Kohlenstoffkonzentration ist z. B. durch 3, 3-26 g/lOO cm3 Glucosemonohydrat gegeben.
Mit Ausnahme von Kohlenstoff und Stickstoff können die Konzentrationen der andern Nährmittel jenen gleich sein, die bei der Stufe des aktiven Wachstums in ausgeglichenen Medien eingesetzt werden.
Sich besonders eignende Kohlenstoffkonzentrationen, z. B. in Form von Glucosemonohydrat und Stickstoffkonzentrationen, z. B. in Form von Ammoniumnitrat sind folgende :
EMI2.1
<tb>
<tb> Konzen- <SEP> Konzentration <SEP> an <SEP> Kohlenstoff- <SEP> tration <SEP> an <SEP> StickstoffGlucosemo- <SEP> konzen- <SEP> Ammonium- <SEP> konzen- <SEP> Verhältnis
<tb> nohydrat <SEP> tration <SEP> nitrat <SEP> tration <SEP> C <SEP> :
N <SEP> (N-1)
<tb> Gew./Vol.% <SEP> Gew. <SEP> /Vol.% <SEP> Gew./Vol.% <SEP> Gew./Vol.%
<tb> 11,11 <SEP> 4,0 <SEP> 0,24 <SEP> 0,084 <SEP> 47,6
<tb> 8,0 <SEP> 2,88 <SEP> 0,24 <SEP> 0,084 <SEP> 34,3
<tb> 12,6 <SEP> 4,54 <SEP> 0,36 <SEP> 0,126 <SEP> 36,0
<tb> 20 <SEP> 7,2 <SEP> 0,4 <SEP> 0,14 <SEP> 51,4
<tb> 12 <SEP> 4,32 <SEP> 0,3 <SEP> 0,105 <SEP> 41,1
<tb> 10 <SEP> 3,6 <SEP> 0,24 <SEP> 0,084 <SEP> 42,9
<tb> 5,5 <SEP> 1,98 <SEP> 0,12 <SEP> 0,042 <SEP> 47,1
<tb> 20 <SEP> 7,2 <SEP> 0,44 <SEP> 0,154 <SEP> 46,8
<tb>
Um die metabolische Herstellung von Gibberel- lin-Säure in zwei oder mehr Stufen auszuführen, soll das ausgeglichene Mycel, das zur Herstellung dieser Säure verwendet werden soll, so schnell und so ökonomisch wie möglich gezüchtet werden.
Dies kann erfolgen, indem das Mycel bei Bedingungen wachsen gelassen wird, in welchen die Wachstumsgeschwindigkeit gross ist, wobei dann das Mycel verwendet wird, um ein weitaus grösseres Volumen an unausgeglichenem säure- produzierenden" Medium zu impfen, wodurch während der unproduktiven Wachstumsperiode die Fermentatorenkapazität verbessert wird.
Ferner wurde gefunden, dass in einem Mehrstufenverfahren das Mycel in der unausge- glichenen "säureproduzierenden"Stufe Säure mit einer grösseren Geschwindigkeit bildet, als dies der Fall ist, wenn das Mycel in dem gleichen unausgeglichenen Medium in einem Einstufenverfahren, wie in Beispiel 1 erläutert, kultiviert wird.
Im Verlauf der Säurebildung in dem unausgeglichenen Medium, kann der als Kohlenstoffquelle dienende Zusatz, z. B. Glucose in gewissen Zeitabständen portionenweise hinzugefügt werden, um eine bestimmte Kohlenstoffkonzentration, z. B. in Form von 2 bis 10 g/100 cm3 eines Zuckers, z. B. Glucose innerhalb des Nährmediums aufrecht zu erhalten und dadurch die Bildung von grösseren Mengen zu ermöglichen.
Die Erfindung wird an Hand folgender Beispiele ohne Einschränkung auf dieselben erläutert.
Beispiel 1 : In einem Zweistufenverfahren wurde die erste Stufe in einem Fermentationsgefäss ausgeführt, das 301 des folgenden Mediums enthielt :
EMI2.2
<tb>
<tb> Glucosemonohydrat <SEP> 10 <SEP> gj10U <SEP> cm"
<tb> Ammoniumnitrat......... <SEP> 0, <SEP> 48 <SEP> g/100 <SEP> cm3 <SEP>
<tb> Kaliumdiphosphat........ <SEP> 0, <SEP> 5 <SEP> g/100 <SEP> cm3 <SEP>
<tb> Magnesiumsulfatheptahydrat................ <SEP> 0, <SEP> 1 <SEP> g/100 <SEP> cm3 <SEP>
<tb>
EMI2.3
*) Dieses Konzentrat hatte folgende Zusammensetzung :
EMI2.4
<tb>
<tb> Ferrosulfatheptahydrat............ <SEP> 0, <SEP> 1 <SEP> g
<tb> Kupfersulfatpentahydrat........... <SEP> 0, <SEP> 015 <SEP> g
<tb> Zinksulfatheptahydrat <SEP> 0, <SEP> 01 <SEP> g
<tb> Mangansulfatheptahydrat.......... <SEP> 0, <SEP> 01 <SEP> g
<tb> Kaliummolybdat <SEP> (K2Mo04)....... <SEP> 0, <SEP> 01 <SEP> g
<tb> Wasser <SEP> 100 <SEP> cm3
<tb>
Das Medium zeigte ein C : N-Verhältnis von 21, 5 : 1.
Das Medium wurde mit einem aktiven Stamm des Gibberella fujikuroi geimpft (Muster hinterlegt in den Sammlungen von Kulturen des Commonwealth Mycological Institute, Kew, des Bureau voor Schimmelcultures, Baarn und des Northern Utilisation Research and Development Division of the United States Department of Agriculture, Peoria, Illinois, USA) und wurde bei einer Temperatur von 26, 2 C und Durchleitung eines Luftstromes von 15 l/min gehalten, bis das Mycel auf ein Trockengewicht von 16 mg/l gewachsen war, was nach 100 Stunden erreicht wurde.
3 l dieser belüfteten Kultur wurden dann verwendet, um 30 l eines für die zweite Stufe bestimmten Mediums zu inokulieren, das folgende Zusammensetzung hatte :
EMI2.5
<tb>
<tb> Glucosemonohydrat...... <SEP> 20 <SEP> g/100 <SEP> cm3
<tb> Ammoniumnitrat <SEP> 0, <SEP> 24 <SEP> g/100 <SEP> cm3 <SEP>
<tb> Kaliumdiphosphat........ <SEP> 0, <SEP> 5 <SEP> g/100 <SEP> cm3 <SEP>
<tb> Magnesiumsulfatheptahydrat <SEP> 0, <SEP> 1 <SEP> g/100 <SEP> cm3 <SEP>
<tb> Konzentrat <SEP> nicht <SEP> wesentlicher <SEP> Zusätze*)....... <SEP> 0, <SEP> 2 <SEP> cm3/100 <SEP> cm3 <SEP>
<tb>
*) Die Zusammensetzung des Konzentrates war die gleiche wie oben.
Dieses Medium zeigte ein C : N-Verhältnis von 85, 5 : 1.
Die Züchtung wurde in diesem Medium bei einer Temperatur von 26, 2 C bei Durchleitung eines Luftstromes von 15 l/min fortgesetzt.
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Als Vergleichsversuch wurde ein mit einer Agarkultur inokulierter Einstufenansatz in ein Medium, das mit obigem Medium der zweiten Stufe identisch war, unter denselben Temperaturund Durchlüftungsbedingungen einfliessen gelassen.
Die folgende Tabelle zeigt die Konzentrationen (mit Korrekturen für die Verdampfung) von Gibberellin-Säure in beiden Medien bei fortschreitender Züchtung : Gibberellin-Säure mg/l
EMI3.1
<tb>
<tb> Alter <SEP> (Stunden <SEP> Einstufen- <SEP> Zweistufen- <SEP>
<tb> nach <SEP> der <SEP> Inoku <SEP> verfahren <SEP>
<tb> lation) <SEP> verfahren <SEP> zweite <SEP> Stufe
<tb> 48, <SEP> 4 <SEP> 0 <SEP>
<tb> 66, <SEP> 0 <SEP> 21
<tb> 89, <SEP> 6 <SEP> 63
<tb> 115, <SEP> 8 <SEP> 108
<tb> 138, <SEP> 3 <SEP> 151
<tb> 141, <SEP> 9 <SEP> Spur
<tb> 166, <SEP> 0 <SEP> 19
<tb> 185, <SEP> 7 <SEP> 169
<tb> 189, <SEP> 6 <SEP> 35
<tb> 215, <SEP> 8 <SEP> 60
<tb> 234, <SEP> 4 <SEP> 273
<tb> 238, <SEP> 3 <SEP> 72
<tb> 285, <SEP> 7 <SEP> 127
<tb> 305, <SEP> 8 <SEP> 353
<tb> 334, <SEP> 4 <SEP> 160
<tb> 401, <SEP> 7 <SEP> 413
<tb> 405, <SEP> 8 <SEP> 218
<tb> 501,
<SEP> 7 <SEP> 308
<tb>
Die Tabelle zeigt deutlich :
1. dass bei Beginn der Säurebildung die Bildungsgeschwindigkeit in der zweiten Stufe des Zweistufenverfahrens grösser ist, als in dem Einstufenverfahren und
2. dass, wenn dafür gesorgt wird, dass während der ersten Stufe genügend Mycel gebildet wird, um zehn Ansätze der zweiten Stufe zu inokulieren, die ursprüngliche Wachstumsphase ausgedrückt in Stunden der Fermentatorenkapazität weit niedriger ist, als in dem Einstufenverfahren.
Beispiel 2 : Herstellung des Inokulums (Wachstumsstufe).
In einem 1135 1 (250 Gallon) fassenden Fermentationsgefäss wird ein Nährmedium folgender Zusammensetzung hergestellt :
EMI3.2
<tb>
<tb> Glucosemonohydrat...... <SEP> 12 <SEP> g/100 <SEP> cm"
<tb> Ammoniumnitrat <SEP> 0, <SEP> 48 <SEP> gj100 <SEP> cm3 <SEP>
<tb> Magnesiumsulfatheptahydrat <SEP> 0, <SEP> 1 <SEP> g/100 <SEP> cm3 <SEP>
<tb> Kaliumdiphosphat........ <SEP> 0, <SEP> 5 <SEP> g/100 <SEP> cm3 <SEP>
<tb> Konzentrat <SEP> nicht <SEP> wesentlicher <SEP> Zusätze*)....... <SEP> 0, <SEP> 2 <SEP> cm3/lOO <SEP> cm3 <SEP>
<tb>
Wasser zum Auffüllen auf 4541 (100 Gallons) *) Die Zusammensetzung dieses Konzentrats entspricht der in Beispiel l angegebenen.
Das Medium zeigte ein C : N-Verhältnis von 25, 6 : 1.
Das Nährmedium wird sterilisiert, dann abgekühlt und mit einer Kleiekultur von Gibberella fujikuroi inokuliert. Hierauf wird das Medium gerührt, bei einer Temperatur von 26 C gehalten und mit einem Luftstrom von 0, 5 Vol.- Luft/Vol. Kulturmedium/min während 66, 5 Stunden belüftet. Es entwickelt sich ein dickes Mycelwachstum ; das Mycel kann zur Inokulation der Erzeugungsfermentationen verwendet werden. Die Analyse ergibt, dass der Stickstoffgehalt des Mediums fast erschöpft ist.
Erzeugungsfermentation (Säurebildungsstufe).
In einem 1135 l (250 Gallon) Fermentationsgefäss wird ein Nährmedium folgender Zusammensetzung hergestellt :
EMI3.3
<tb>
<tb> Glucosemonohydrat...... <SEP> 12 <SEP> g/100 <SEP> cm3
<tb> Ammoniumnitrat......... <SEP> 0, <SEP> 3 <SEP> gj100 <SEP> cm3 <SEP>
<tb> Magnesiumsulfatheptahydrat <SEP> 0, <SEP> 1 <SEP> g/100 <SEP> cm3 <SEP>
<tb> Kaliumdiphosphat........ <SEP> 0, <SEP> 5 <SEP> g/100 <SEP> cm3 <SEP>
<tb> Konzentrat <SEP> nicht <SEP> wesentlicher <SEP> Zusätze*)....... <SEP> 0, <SEP> 2 <SEP> cm3/lOO <SEP> cm3 <SEP>
<tb>
Wasser zum Auffüllen auf 658, 31 (145 Gallons) *) Der Zusatz war der gleiche wie in Beispiel l.
Dieses Medium zeigte ein C : N-Verhältnis von 41, 1 : 1.
Das Medium wird sterilisiert, abgekühlt und mit 68, 1 I (15 Gallons) des oben beschriebenen Inokulums beimpft, hierauf wird gerührt, bei einer Temperatur von 26 C gehalten und schliesslich mit einem Luftstrom von 0, 5 Vol.-Luft/Vol.- Kulturmedium/min belüftet.
Die folgende Tabelle zeigt die Konzentration an gebildeter GibberellinSäure in dem Medium bei fortschreitender Fermentation :
EMI3.4
<tb>
<tb> Alter <SEP> (Stunden <SEP> nach <SEP> Gibberellin-Säure
<tb> der <SEP> Inokulation) <SEP> (mg/l)
<tb> 49 <SEP> 43
<tb> 74 <SEP> 124
<tb> 78 <SEP> 238
<tb> 122 <SEP> 348
<tb> 145 <SEP> 394
<tb> 167 <SEP> 386
<tb> 194 <SEP> 436
<tb> 218 <SEP> 362
<tb>
Der Inhalt des Fermentationsgefässes wird dann filtriert und das Filtrat (600 1) mit Äthylacetat zur Entfernung der Gibberellin-Säure extrahiert, die dann mittels bekannter Verfahren, z. B. durch Konzentration und Reinigung durch Kristallisation isoliert wird. Man erhält auf diese Weise 204, 1 g Gibberellin-Säure als ein farbloses kristallines Pulver, F = 233-235 C unter Zersetzung.
Beispiel 3 : Das Verfahren gemäss Beispiel 2 wird wiederholt, wobei jedoch die 12 g/100 cm3 Glucosemonohydrat und die 0, 3 g/lOO cm3
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Ammoniumnitrat, die in dem Nährmedium zur Erzeugungsfermentation verwendet worden waren, ersetzt werden durch 10 g/100 cm3 Glucosemonohydrat und 0, 24 gj100 cm3 Ammonium- nitrat. Die folgende Tabelle zeigt die Konzentration an Gibberellin-Säure in dem Medium bei fortschreitender Fermentation.
Das Medium zeigte ein C : N-Verhältnis von 42, 9 : 1.
EMI4.1
<tb>
<tb>
Alter <SEP> (Stunden <SEP> nach <SEP> Gibberellin-Säure
<tb> der <SEP> Inokulation) <SEP> (mg/l)
<tb> 49 <SEP> 52
<tb> 74 <SEP> IM <SEP>
<tb> 98 <SEP> 226
<tb> 122 <SEP> 336
<tb> 145 <SEP> 324
<tb> 167 <SEP> 332
<tb>
Der Inhalt des Fermentationsgefässes wird dann filtriert und das Filtrat (577 1) zur Entfernung der gebildeten Säure mit Äthylacetat extrahiert ; die Säure wird mittels bekannter Verfahren durch Konzentration und Reinigung durch Kristallisation isoliert. Man erhält auf diese Weise 140, 8 g Gibberellin-Säure als farbloses, kristallines Pulver, F = 233-235 0 C unter Zersetzung.
Beispiel 4 : Das Verfahren gemäss Beispiel 2 wird wiederholt, wobei jedoch die 12 g/100 cm3 Glucosemonohydrat und die 0, 3 gjlOO cm3 Ammoniumnitrat in dem Nährmedium, das während der Erzeugungsfermentation verwendet worden war, ersetzt werden durch 12, 6 g/100 cm3 Glucosemonohydrat und 0, 36 g/100 cm3 Ammoniumnitrat. Die folgende Tabelle gibt die Konzentration an gebildeter Säure in dem Medium bei fortschreitender Fermentation an :
Das Medium zeigte ein C : N-Verhältnis von 36, 0 : 1.
EMI4.2
<tb>
<tb>
Alter <SEP> (Stunden <SEP> nach <SEP> Gibberellin-Säure
<tb> der <SEP> Inokulation) <SEP> (mg/l) <SEP>
<tb> 108 <SEP> 30
<tb> 132 <SEP> 80
<tb> 156 <SEP> 158
<tb> 177 <SEP> 246
<tb> 201 <SEP> 298
<tb> 225 <SEP> 370
<tb> 249 <SEP> 390
<tb>
Die Säure kann nach bekannten Verfahren, z. B. nach dem am Ende des Beispiels 2 angegebenen, isoliert werden.
Beispiel 5 : Das Verfahren gemäss Beispiel 2 wird wiederholt, wobei jedoch die 12 g/100 cm3 Glucosemonohydrat und die 0, 3 g/100 cm3 Ammoniumnitrat in dem Nährmedium, das zur Erzeugungsfermentation verwendet worden war, ersetzt werden durch 11, 11 g/100 cm3 Glucosemonohydrat und 0, 24 g/100 cm3 Ammonium- nitrat. Die folgende Tabelle zeigt die Konzentration an Gibberellin-Säure in dem Medium bei fortschreitender Fermentation :
Das Medium zeigte ein C : N-Verhältnis von 47, 6 : 1.
EMI4.3
<tb>
<tb>
Alter <SEP> (Stunden <SEP> nach <SEP> Gibberellin-Säure
<tb> der <SEP> Inokulation) <SEP> (mg/l)
<tb> 132 <SEP> 66
<tb> 156 <SEP> 100
<tb> 177 <SEP> 158
<tb> 225 <SEP> 270
<tb> 249 <SEP> 292
<tb> 273 <SEP> 320
<tb> 296 <SEP> 368
<tb>
Die Säure kann nach bekannten Verfahren, z. B. nach dem am Ende des Beispiels 2 angegebenen Verfahren, isoliert werden.
Beispiel 6 : Ein Inokulum wird nach dem am Beginn des Beispiels 1 beschriebenen Verfahren für die Wachstumsstufe hergestellt und dann für die Säurebildungsstufe (zweite Ver- fahrensstufe), wie unten beschrieben, verwendet.
Erzeugungsfermentation.
Ein Nährmedium folgender Zusammensetzung wird hergestellt :
EMI4.4
<tb>
<tb> Glucosemonohydrat...... <SEP> 16 <SEP> g/100 <SEP> cm3
<tb> Ammoniumnitrat <SEP> 0, <SEP> 4 <SEP> gjlOO <SEP> cm3 <SEP>
<tb> Kaliumdiphosphat........ <SEP> 0, <SEP> 5 <SEP> g/100 <SEP> cm3 <SEP>
<tb> Magnesiumsulfatheptahydrat <SEP> 0, <SEP> 1 <SEP> gjl00 <SEP> cm3 <SEP>
<tb> Konzentrat <SEP> nicht <SEP> wesentlicher <SEP> Zusätze*)....... <SEP> 0,2 <SEP> cm3/100 <SEP> cm3 <SEP>
<tb>
Wasser zum Auffüllen auf 75 1 *) Das Konzentrat ist das gleiche wie in Beispiel 1.
Das Medium zeigte ein C : N-Verhältnis von 41, 1 : 1.
Das Medium wird sterilisiert, dann abekühlt und mit 2, 5 1 des oben beschriebenen Inokulums
EMI4.5
Tabelle zeigt die Konzentration an GibberellinSäure in dem Medium bei fortschreitender Fermentation.
EMI4.6
<tb>
<tb>
Alter <SEP> (Stunden <SEP> nach <SEP> Gibberellin-Säure
<tb> der <SEP> Inokulation) <SEP> (mg/l)
<tb> 75 <SEP> 10
<tb> 88 <SEP> 42
<tb> 93 <SEP> 60
<tb> 100 <SEP> 88
<tb> 111 <SEP> 107
<tb> 136 <SEP> 198
<tb> 148 <SEP> 206
<tb> 160 <SEP> 253
<tb>
<Desc/Clms Page number 5>
Die gebildete Säure kann nach bekannten Ver- fahren, z. B. nach dem am Ende des Beispiels 2 beschriebenen Verfahren, isoliert werden.
Beispiel 7 : Gemäss dem am Beginn des Beispiels 1 beschriebenen Verfahren wird ein Ino- kulum hergestellt und dieses dann für die zweite
Verfahrensstufe, wie unten beschrieben, ver- wendet.
Erzeugungsfermentation.
Es wird ein Nährmedium folgender Zu- sammensetzung hergestellt :
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<tb>
<tb> Glucosemonohydrat...... <SEP> 20 <SEP> g/lUU <SEP> cm" <SEP>
<tb> Ammoniumnitrat <SEP> 0, <SEP> 4 <SEP> g/100 <SEP> cm3 <SEP>
<tb> Kaliumdiphosphat........ <SEP> 0,5 <SEP> g/100 <SEP> cm#
<tb> Magnesiumsulfatheptahydrat <SEP> 0, <SEP> 1 <SEP> g/100 <SEP> cm3 <SEP>
<tb> Konzentrat <SEP> nicht <SEP> wesentlicher <SEP> Zusätze*) <SEP> 0, <SEP> 2 <SEP> cm3/100 <SEP> cm3 <SEP>
<tb>
Wasser zum Auffüllen auf 75 1 *) Das Konzentrat ist das gleiche wie in Beispiel 1.
Das Medium zeigte ein C : N-Verhältnis von 51, 4 : 1.
Das Medium wird sterilisiert, dann abgekühlt und mit 2, 5 1 des weiter oben beschriebenen Inokulums geimpft. Hierauf wird das Medium gerührt, bei 260 C gehalten und mit einem Luftstrom von 0,5 Vol.-Luft/Vol.-Knlturmedium/ min belüftet. Die folgende Tabelle zeigt die Konzentration an gebildeter Säure in dem Medium bei fortschreitender Fermentation :
EMI5.2
<tb>
<tb> Alter <SEP> (Stunden <SEP> nach <SEP> Gibberellin-Säure
<tb> der <SEP> Inokulation) <SEP> (mg/l) <SEP>
<tb> 82 <SEP> 6
<tb> 106 <SEP> 46
<tb> 118 <SEP> 79
<tb> 130 <SEP> 133
<tb> 142 <SEP> 138
<tb> 154 <SEP> 229
<tb>
Die Säure kann nach bekannten Verfahren, z. B. nach dem am Ende des Beispiels 2 beschriebenen Verfahren, isoliert werden.
PATENTANSPRÜCHE :
1. Verfahren zur Herstellung von GibberellinSäure durch Züchtung eines aktiven Stammes von Pilzen der Gattung Gibberella fujikuroi in einer durchlüfteten, Kohlehydrat und assimilierbaren Stickstoff enthaltenden Nährlösung, wobei in einer Wachstumsstufe ein C- und N-Über- schuss in der Nährlösung und anschliessend in einer Säurebildungsstufe der N-Vorrat schliesslich aufgebraucht und die Säure schliesslich aus der Nährlösung isoliert wird, dadurch gekennzeichnet, dass während der Wachstumsstufe ein C : N-Verhältnis von 10 : 1 bis 25 : 1 und eine N-Konzentration von 0, 017 bis 0,25 g/ 100 cm3 Nährlösung und in der Säurebildungsstufe ein C :
N-Verhältnis von über 25 : 1 bis 200 : 1 und eine N-Konzentration von 0, 017 bis
EMI5.3