BE1001901A3

BE1001901A3 - Composition a utiliser en therapie combinee au moyen d'interleukine-2 et de glucocorticoides.

Info

Publication number: BE1001901A3
Application number: BE8700444A
Authority: BE
Original assignee: Cetus Corp
Priority date: 1986-04-24
Filing date: 1987-04-23
Publication date: 1990-04-10
Also published as: AU7189087A; GB8709764D0; GB2189393A

Abstract

Composition se prêtant à l'administration parentérale ou sous-cutanée à des hôtes mammifères pour le traitement thérapeutique d'un cancer, qui comprend un mélange d-IL-2 humaine et d'un ou plusieurs gluco-corticoïdes en quantités synergiquement efficaces.

Description


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   Composition   ä   utiliser en thérapie combinée au moyen d'interleukine-2 et de glucocorticoides
La présente invention concerne une combinaison d'interleukine-2 humaine (IL-2) et d'un ou plusieurs stéroides, outre l'utilisation de cette combinaison comme agent thérapeutique antitumoral. 



   L'interleukine-2, qui est une lymphokine qui est produite par des lymphocytes du sang périphérique normal et qui induit la prolifération des cellules T stimulées par un antigène ou un mitogène après exposi- tion à des lectines végétales. des antigènes ou d'autres stimuli, a été décrite pour la première fois par Morgan,
D. A., et al., Science (1976), 193 : 1007-1008. Elle a été appelée ensuite facteur de croissance des cellules T en raison de son aptitude à induire la prolifération des lymphocytes T stimules, mais il est à présent re- connu qu'en plus de ses propriétés comme facteur de croissance, elle module diverses fonctions des cellules du système immunitaire in vitro et in vivo et elle a reçu le nouveau nom   d'interleukine-2   (IL-2). 



     L'IL-2   a été produite initialement par culture de lymphocytes du sang périphérique humain   (PBL)   ou d'autres lignées cellulaires produisant de l'IL-2. Voir, par exemple, le brevet EUA   nO 4. 401. 756.   La technologie de   l'ADN   recombinant a offert un moyen pour remplacer les lymphocytes du sang périphérique et les lignées cellulaires pour la production de   l'IL-2.   Taniguchi,
T. et   al.,   Nature   (1983),   302 : 305-310 et Devos, R.,
Nucleic Acids Research (1983), 11 : 4307-4323 ont décrit le clonage du gène de IL-2 humaine et son expression dans des micro-organismes. 



   Le brevet EUA   4. 518. 584 décrit   des mutines de l'IL-2 dans lesquelles la cystéine occupant normale- ment la position 125 de la molécule sauvage ou native est remplacée par un aminoacide neutre tel que la sérine. 

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  Ces mutines ont une activité biologique. Le brevet EUA   n"4. 604. 377 décrit   une composition d'IL-2 propre   ä   la reconstitution dans un véhicule aqueux pharmaceutiquement acceptable, qui est composée d'IL-2 recombinante produite par voie microbienne et oxydée. 



    L'IL-2   est notée comme utile en combinaison avec la chimiothérapie cytotoxique ou l'irradiation ou avec la chirurgie pour le traitement d'affections malignes ou pré-malignes dans une stratégie thérapeutique directe ou adjuvante ou en combinaison avec d'autres médicaments immunomodulateurs, des lymphokines (par exemple IL-1,   IL-3,   CSF-1 et les IFN), ou des toxines anti-cellulaires d'origine naturelle ou susceptibles d'inductiondans le traitement d'affections malignes. 



   Différentes applications thérapeutiques de l'IL-2 humaine ont été étudiées et décrites par S. 



  Rosenberg et ses collègues (voir Mule et   al.,   Science (1984), 225 : 1487 et S. Rosenberg et al., New England Journal of Medicine (1985), 313 : 1485-1492, par exemple). 



   La chimiothérapie combinée au moyen de deux ou plusieurs médicaments anticancéreux pour le traitement des tumeurs malignes chez l'etre humain est d'usage courant en recherche et en clinique. Les médicaments anticancéreux peuvent être des antimétabolites, des agents alkylants, des antibiotiques, des poisons   gene-   raux etc. Les combinaisons de médicaments sont administrées en vue d'exercer un effet cytotoxique synergique sur la plupart des cancers, par exemple les carcinomes, les mélanomes, les lymphomes et les sarcomes, outre de réduire ou de supprimer l'apparition de cellules résistantes aux médicaments et d'atténuer les effets secondaires de chaque médicament. 



   Par exemple, il est connu que   l'IL-2   peut etre utilisé avec   l'IFN-   pour traiter des patients porteurs de tumeurs en exerçant des effets synergiques (publica- 

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 tion de demande de brevet européen   149.551, publiée   le 24 juillet 1985 (Genentech) et publication de demande de brevet allemand 3411184 publiée le 31 octobre 1985   (Deut. Rote Kreuz))   ou en augmentant l'activité des cellules tueuses naturelles (Svedersky et al., J. Immunol. 



  (1984), 133 : 714-718 et Shalaby et   al.,     J. Interferon Res.   



  (1985),    : 571-581).   De plus, 1'U. S. Statutory Invention Reg.   n"H22, publié   le 4 février 1986, de Creasey et al., décrit une composition manifestant un effet cytotoxique synergique dans une thérapie combinée de certaines lignées de cellules de myélome et de cancer mammaire au moyen de quantités synergiquement efficaces de 5-fluorouracile et d'interféron bêta recombinant humain. 



   Le Dr. S. Rosenberg au NIH a observé au printemps de 1985 que chez un patient recevant de   l'IL-2   et des corticostéroides ensemble, les corticostéroïdes étant administrés pour traiter une compression aiguë de la moelle épinière, la toxicité due à   l'IL-2   était notablement atténuée par l'administration concomitante des   corticostéroides.   La plupart des praticiens dans ce domaine auraient prévu que le stéroïde bloquerait aussi l'activité antitumorale de   l'IL-2.   



   La présente invention concerne les découvertes inattendues qu'une régression de tumeurs induite par l'IL-2 n'est pas bloquée par l'administration concomitante de glucocorticoldes et qu'un effet antitumoral synergique est exercé à des doses spécifiques de glucocorticoldes avec l'IL-2. 



   La présente invention a dès lors pour objet une composition propre à l'administration parentérale ou sous-cutanée à des hotes mammifères en vue du traitement thérapeutique d'un cancer, qui comprend un melange d'IL-2 humaine et d'un ou plusieurs glucocorticoides en quantités synergiquement efficaces. 



   De préférence, l'IL-2 est une protéine re- 

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 combinante produite par voie microbienne et le glucocorticoide est la   dexamethasone.   



   La combinaison de   l'IL-2   et des glucocorticoldes exerce une étonnante synergie dans le traitement des cellules cancéreuses et les glucocorticoldes abaissant étonnamment les degrés de toxicité. 



   Tel qu'il est utilisé ici, le terme traitement "thérapeutique" désigne l'administration de l'IL-2 et du ou des stéroides à l'hôte après que celui-ci a contracté un cancer tel que mis en évidence de façon quelconque. Le traitement n'est pas considéré comme thérapeutique si une tumeur apparaît après le traitement ou bien si une tumeur existante n'est pas supprimée ou diminuée. L'effet de la dose diminue avec le temps, une durée de 3 à 7 jours après que la tumeur est devenue visible étant typiquement la durée maximale au cours de laquelle le traitement peut être administré aux animaux, principalement suivant le type de tumeur, la dose, la voie d'administration et le programme d'administration. 



   Tel qu'il est utilise ici, le terme "cancer" désigne toute affection néoplasique, notamment des troubles cellulaires tels que, par exemple, le cancer rénal, le sarcome de Kaposi, la leucémie chronique, le cancer mammaire, le sarcome, le carcinome de l'ovaire, le cancer rectal, le cancer de la gorge, le mélanome, le cancer du colon, le cancer de la vessie, le mastocytome, le cancer pulmonaire et le cancer de l'intestin ou de l'estomac. De préférence, le cancer est le sarcome. 



   Tel qu'il est utilise ici, le terme "quantité synergiquement   efficace" s'appliquant à 1'IL-2   et   au (x)   glucocorticoïde (s) désigne la quantité de chaque constituant du mélange qui est efficace pour la survie de l'hôte et qui induit un taux de survie qui ne recoupe, dans un diagramme dose-réponse de la dose de glucocor- 

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 ticolde en fonction de la dose d'IL-2 en fonction de la survie de l'hôte, ni l'axe de la dose de glucocorticolde ni l'axe de la dose d'IL-2. La courbe doseréponse utilisée pour déterminer la synergie aux fins de l'invention est décrite plus en détail par Sande et   al.,   pages 1080-1105 dans A. Goodman et al., éd., The Pharmacological Basis of   Therapeutics, MacMillan   Publishing   co.,   Inc., New York (1980).

   Pour les besoins de la synergie, la survie est définie comme étant la survie de   l'hate   au-delà de 14 jours depuis la date d'implantation de la tumeur chez l'hôte. Les quantités synergiques optimales peuvent être déterminées, en prenant une limite de friabilité   ä   95%, en modifiant des facteurs tels que la dose, le programme d'administration et la réponse et en utilisant un modèle produit par ordinateur qui trace des isobologrammes à partir des courbes dose-réponse pour différentes combinaisons de   l'IL-2   et du ou des glucocorticoldes. Les taux de survie les plus élevés sur la courbe dose-réponse sont en corrélation avec les doses optimales. 



   Tel qu'il est utilisé ici, le   terme"recombi-     nant" désigne l'IL-2   produite par les techniques de l'ADN recombinant, suivant lesquelles, de façon générale, le gène codant pour l'IL-2 est clone suivant la technique connue de   l'ADN   recombinant. Par exemple,   l'ARN   messager de l'IL-2 humaine servant de modèle, le gène présentant la complémentarité à l'égard de l'ARN messager de   l'IL-2   humaine est inséré dans un ADN vecteur approprié, par exemple un plasmide d'E. coli pour la formation d'un plasmide recombinant, et le plasmide est utilisé pour transformer un hôte approprié. Le gène est exprimé dans l'hôte pour produire la protéine recombinante.

   Des exemples de plasmides recombinant propres à cet effet sont notamment pBR322, pCR1, pMB9 et pSC1.   L'hôte   transformé peut être un eucaryote ou 

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 un procaryote. 



   Tel qu'il est utilisé ici, le   terme"pharma-   ceutiquement acceptable" désigne un excipient qui ne nuit pas à l'efficacité de l'activité biologique des constituants actifs et qui n'est pas toxique pour les hotes auxquels il est administré. 



     L'IL-2   et le ou les glucocorticoides peuvent   etre   combinés in vitro avant administration ou être administrés   séparément à l'hôte,   dans un ordre ou l'autre ou bien simultanément, toute seconde administration ayant en règle générale lieu dans la minute à l'heure de la première administration. 



   L'invention a donc aussi pour objet une trousse qui comprend un récipient contenant de l'IL-2 en mélange avec un excipient pharmaceutiquement acceptable et un autre récipient contenant un ou plusieurs glucocorticoldes en mélange avec un excipient pharmaceutiquement acceptable. 



   La ou les administrations sont faites suivant toute technique appropriée, notamment l'administration sous-cutanée ou parentérale, mais de préférence parentérale. Des exemples pour l'administration parentérale sont les administrations intraveineuse,   intra-arté-   rielle, intramusculaire et   intraperitoneale,   la preference allant à l'administration intraperitoneale. 



   La dose et le programme d'administration dépendent principalement du fait que   l'IL-2   et le ou les glucocorticoldes sont administrés spéarément ou bien   ä   l'état de mélange, du type de cancer, du patient et du passé du patient. La quantité doit être efficace pour induire une réduction de la tumeur qui est synergique. 



  Les doses peuvent être des doses uniques ou multiples. 



  Si des doses multiples sont utilisées, comme il est préféré, la fréquence d'administration dépend, par exemple, de l'hôte, du type de cancer, des quantités dosées etc. 

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  Pour certains types de cancers ou lignées cancéreuses, une administration quotidienne peut être efficace, tandis que pour d'autres, l'administration un jour sur deux ou trois peut être efficace alors que l'administration quotidienne est inopérante. Le praticien est   ä   même d'évaluer par expérimentation de routine quelle voie d'administration et quelle fréquence d'administration sont les plus efficaces dans chaque cas particulier. 



   La dose qui apparait la plus efficace aux fins de l'invention est une dose qui a pour effet qu'il n'ap- 
 EMI7.1 
 paralt pas de tumeur et qui n'est pas toxique pour l'hôte. De plus, la dose des glucocorticoides ne peut être importante au point d'inhiber l'activité antitu- morale de l'IL-2. Cette quantité optimale dépend de nombreux facteurs, par exemple la nature de l'hôte et celle du cancer, la voie, le programme et la sequence d'administration, l'existence d'une tumeur décelée, la nature de   l'IL-2   et du glucocorticolde et la définition de la toxicité. La toxicité à l'égard de l'hôte peut être définie par l'ampleur et la nature des effets secondaires ou par l'ampleur de la perte du poids du corps ou par la mort après un certain temps.

   Si la perte de poids du corps est le critère de la toxicité, typiquement une perte de 10 à 20% du poids sera tolérée, une perte supérieure   ä   20% étant   ä   considérer comme toxique. 



  Si une perte de poids du corps de plus de 20% est considérée comme toxique, si l'hote est la souris et si la voie d'administration est   intraperitoneale   chaque jour ou un jour sur deux pour un mélange préparé in vitro, la dose   ä   chaque administration d'IL-2 recombinante produite par voie microbienne et de. dexaméthasone est de préférence d'environ   zede   dexa- 
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 méthasone (plus avantageusementenvirun 5-10) et ) et d'environ 3-50g d'IL-2 (plus avantageusement 10-3Qg). 

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   En vue de   l'actmj. nistration   parenterale,   l'IL-2   et le ou les   glucocorticoides   seront en général mis en composition en une dose unitaire injectable (solution, suspension, émulsion), de préférence dans un excipient pharmaceutiquement acceptable qui est par nature non toxique et non thérapeutique. Des exemples de tels véhicules sont l'eau, la solution physiologique salée, la solution de Ringer, la solution de dextrose et l'albumine de sérum humain   ä     5%.. Des véhicules   non aqueux comme des huiles fixées et l'oléate   d'éthyle   peuvent être utilisés aussi. L'excipient peut contenir des quantités mineures d'additifs tels que des substances qui améliorent l'isotonicité et la stabilité chimique, par exemple des tampons et des conservateurs.

   L'IL-2 et le ou les glucocorticoides seront normalement mis en composition dans de tels excipients   ä   une concentration d'environ 0, 1 mg/ml   ä   100 mg/ml. 



   En variante, l'IL-2 et les glucocorticoldes peuvent etre présentés en une composition lyophilisée stérile stable dans laquelle l'IL-2 purifieeetle ou les glucocorticoldes sont mélangés avec un excipient hydrosoluble tel que le mannitol qui donne du volume, outre une quantité suffisante de dodécylsulfate de sodium oour assurer la solubilité de l'IL-2 recombinant aans l'eau. La composition se prète à la reconstitution dans des milieux aqueux injectables pour administration parentérale et est stable et bien tolérée par les patients humains. Le procédé de mise en composition est décrit plus en détail dans le brevet EUA   n  4. 604.   377. 



   Comme indiqué ci-dessus,   l'IL-2   humaine pour l'invention peut   etre   toute IL-2 d'origine humaine, mais est de préférence de   l'IL-2   recombinante. 



  L'IL-2 recombinante peut être obtenue comme décrit par Taniguchi et al., Nature, 302 : 305-310 (1983) et Devos, Nucleic Acids Research, 11 : 4307-4323 (1983) en clonant 

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 le gene de   l'IL-2   humaine et en l'exprimant dans des micro-organismes. Elle peut   etre   aussi une mutéine d'IL-2 telle que décrite dans le brevet EUA   n      4. 518. 584,   dans laquelle la cystéine occupant normalement la position 125 de la molecule native ou sauvage a été remplacée par un aminoacide neutre tel que la sérine. 



   De   préférence, l'IL-2   est une protéine non glycosylée qui est produite par un micro-organisme qui a été transformé au moyen de la séquence d'ADN d'IL-2 humaine ou d'une séquence d'ADN d'IL-2 humaine modifiée qui code pour une protéine dont la séquence des aminoacides est au moins sensiblement identique à la séquence des aminoacides de   l'IL-2   humaine native, y compris la liaison disulfure des cystéines aux positions 58 et   105, et qui   a une activité biologique commune à   l'IL-2   humaine native.

   L'identité sensible des séquences d'aminoacides signifie que les séquences sont identiques ou bien diffèrent par une ou plusieurs altérations d'aminoacides (délétions, additions, substitutions) qui n'induisent pas de dissimilitude fonctionnelle nuisible entre la protéine synthétique et l'IL-2 humaine native. Des exemples de protéines IL-2 ayant de telles propriétés sont notamment celles décrites dans les brevets   européens publiés nO 91. 539   et 88. 195 et dans le brevet EUA 4. 518. 584 précité. De préférence,   l'IL-2   
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 est la mutéine des-ala-IL-2, c dans laquelle l'ala- nine terminale initiale a subi la   deletion   et la cysteine à la position 125 est remplacée par un reste de serine. 



   L'IL-2 peut etre produite et purifiée suivant le procédé décrit dans le brevet EUA   n      4. 604. 377.   



   Dans une autre composition, que décrit la publication PCT   n    W087/00056, la protéine hydrophobe peut être solubilisée non par un détergent, mais grâce   ä   la réaction de la protéine avec un homopolymere ac- 

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 tivé choisi entre le polyéthylèneglycol, le polypropylèneglycol et le   polybutylèneglyco1,   cet homopolymere ayant un poids moléculaire de 500   ä   20. 000 daltons et de préférence de 2000   ä   10. 000 daltons.

   L'homopolymere est active par conjugaison avec un agent de couplage comprenant des radicaux terminaux réactifs avec les deux radicaux thiol ou amino libres de la protéine et avec le radical hydroxyle de   l'homopolymère.   Des exemples de tels agents de couplage sont notamment les esters de l'acide   hydroxynitrobenzènesulfonique,   le chlorure d'acide cyanurique et le N-hydroxysuccinimide. 



  Cette modification supprime la nécessité d'ajouter des détergents pour solubiliser la protéine au pH physiologique. La protéine est ensuite mise en composition directement avec l'excipient et le tampon hydrosolubles comme décrit ci-dessus et la composition peut être lyophylisée, puis le mélange lyophilisé peut être reconstitué comme décrit précédemment. 



   Le glucocorticolde qui peut etre utilisé aux fins de l'invention peut être tout steroide entrant dans la classe des glucocorticoïdes, notamment, par exemple, les sels de béclométhasone, les sels de bêtaméthasone, les sels de   clobetasol, le   butyrate de clo-   bêtasone, l'acétate   de cortisone, le cortivazol, l'acétate de désoxycortone, le pivalate de désoxycortone, le désonide, la désoxyméthazone, la dexaméthasone, le valérate de diflucortolone, l'acétonide de fluclorolone, l'acétate de fludrocortisone, le pivalate de fluméthasone, l'acétonide de fluocinolone, le fluocinonide, la fluocortolone, la fluorométholone, la   flurandrénolone, l'halcinonide, l'hydrocortisone,   la médrysone, le méprednisone, la méthylprednisolone, l'acetate de paraméthasone, la prednisone,

   le prednylidène et la triamcinolone, outre des stéroides fluo-   rés   tels que la cronolone, la fluoxymestérone et la 

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 fluprednisolone. De préférence, le glucocorticoïde est la   dexaméthasone.   



   Les différents aspects de l'invention sont davantage illustrés par les exemples suivants qui ne sont pas conçus comme limitant l'invention de l'une ou l'autre façon. Dans ces exemples, les parties sont en poids pour les solides et les pourcentages sont en volume pour les liquides et les gaz, sauf indication contraire, et toutes les températures sont données en 
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 degrés Celsius. 



  EXEMPLE 1 A. Traitement général Souris
Onautilisé des souris femelies CDl toutes âgées de 6-8 semaines pour les essais in vivo comme hôtes syngénériques pour les tumeurs Meth A. 



  IL-2
L'IL-2 recombinante utilisée dans le présent exemple est la    dés-alal-IL-2ser125 La sequence des   aminoacides de cette IL-2 diffère de la séquence des aminoacides de l'IL-2 humaine native du fait qu'il lui manque l'alanine initiale de la molécule native et que la cystéine à la position 125 a été remplacée par la sérine. Des échantillons dE. coli qui produisent cette IL-2 ont été deposes par la societe Cetus Corporation   ä   l'American Type Culture Collection, 12301 Parklawn Drive, Rockville, Md, EUA le 26 septembre 1983 sous le numéro d'accès   39. 452   et le 6 mars 1984 sous le numéro d'accès 39. 626, sous les conditions du traité de Budapest. 



     L'IL-2   a été traitée et purifiée comme décrit dans le texte et   ä   la figure 1 du brevet EUA   ne 4.604.377,   sauf que l'oxydation a été exécutée à l'aide de chlorure de cuivre, comme décrit dans le brevet EUA   n    4. 572. 798 plutöt qu'au moyen   d'o-iodosobenzoate. Lorsque l'IL-2   

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 a été collectée après le ou les stades de chromatographie, elle a été lyophilisée et remise en suspension dans un tampon aqueux neutre contenant l'agent réducteur (DTT) afin de maintenir l'IL-2 dans un état réduit, outre un agent solubilisant afin de la maintenir en solution.

   La pureté de l'IL-2 recombinante après le ou les stades de chromatographie était d'au moins environ 95% et l'IL-2 contenait moins d'environ 0, 02 ng/ml d'endotoxine, comme déterminé par épreuve sur l'amibocyte de limule. 



   On   amis l'IL-2 purifiée   en composition à une concentration de 0, 3 mg/ml avec 50 mg/ml de mannitol et une quantité efficace de SDS suivant la nécessité. 



   Dans une autre composition, on a mis l'IL-2 en composition par réaction avec du polyéthylèneglycol (PEG) qui a été conjugué à l'IL-2 au moyen de N-hydroxysuccinimide. On a mis la protéine conjuguée en composition directement dans de l'eau (dite ci-après IL-2-PEG). 



  Le stéroïde
Le glucocorticolde utilisé était la dexaméthasone disponible dans le commerce. 



  Lignée de cellules cancéreuses et injections de la tumeur
Les cellules cibles utilisées étalent des cellules du sarcome (Balb/c) induit par le Méthacho-   lanthène-A   (Meth A) de Sloan-Kettering. Ces cellules ont été implantées par voie sous-cutanée dans le cou de la souris höte. 



  B. Résultats
Le tableau I indique les résultats obtenus lorsque l'IL-2 seule, la dexaméthasone seule et divers mélanges d'IL-2 et de dexaméthasone   (prepares   in vitro) ont été administrés par voie intrapéritonéale à des souris groupées par deux en commençant le lende- 

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 main de l'implantation de la tumeur et en poursuivant chaque jour pendant 7 jours, les mesures étant effectuées au 7e Jour. Le témoin a reçu en injection de la solution physiologique salée tamponnée au phosphate (PBS). 

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  TABLEAU 1 
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 - ,, 
 EMI14.2 
 
<tb> 
<tb> @@@@@@@@@@@@@ <SEP> PBS
<tb> Témoin <SEP> 10 <SEP>  g <SEP> IL-2 <SEP> 30 <SEP>  g <SEP> IL-2 <SEP> Témoin
<tb> Vol. <SEP> Poids <SEP> Vol. <SEP> Poids <SEP> Vol. <SEP> Poids <SEP> Vol. <SEP> Poids
<tb> tumeur <SEP> souris <SEP> tumeur <SEP> souris <SEP> tumeur <SEP> souris <SEP> tumeur <SEP> souris
<tb> (mm3) <SEP> (g) <SEP> (mm3) <SEP> (g) <SEP> (mm3) <SEP> (g) <SEP> (mm3) <SEP> (g)
<tb> 500 <SEP>  g <SEP> 140 <SEP> ¯ <SEP> 23 <SEP> 18, <SEP> 2 <SEP> 157 <SEP> + <SEP> 67 <SEP> 17, <SEP> 6 <SEP> 106 <SEP> + <SEP> 39 <SEP> 18, <SEP> 1
<tb> Dexaméthasone
<tb> 50 <SEP>  g <SEP> 373 <SEP> + <SEP> 94 <SEP> 19, <SEP> 5 <SEP> 132 <SEP> + <SEP> 41 <SEP> 19, <SEP> 8 <SEP> 38 <SEP> + <SEP> 5 <SEP> 18, <SEP> 6
<tb> Dexamethasone
<tb> 5 <SEP>  g <SEP> 1379 <SEP> + <SEP> 281 <SEP> 21, <SEP> 4 <SEP> 51 <SEP> + <SEP> 12 <SEP> 21,

   <SEP> 1 <SEP> 8 <SEP> + <SEP> 12 <SEP> 19, <SEP> 0
<tb> Dexamethasone
<tb> IL-2 <SEP> - <SEP> - <SEP> 62 <SEP> + <SEP> 27 <SEP> 21, <SEP> 3 <SEP> 56 <SEP> + <SEP> 30 <SEP> 20, <SEP> 5
<tb> Témoin
<tb> PBS <SEP> 1236¯233 <SEP> 22,4
<tb> Témoin
<tb> 
 

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Le tableau II indique les mêmes résultats lorsque l'IL-2-PEG seule, la dexaméthasone seule et divers mélanges d'IL-2 et de dexaméthasone (préparés in vitro) ont été administrés dans les mêmes conditions, les résultats étant observés 7 jours après l'implantation. 

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  TABLEAU II 
 EMI16.2 
 
<tb> 
<tb> Dexamethasone <SEP> 3'pg <SEP> IL-2- <SEP> PBS
<tb> Témoin <SEP> PEG <SEP> Témoin
<tb> Vol. <SEP> Poids <SEP> Vol. <SEP> Poids <SEP> Vol. <SEP> Poids
<tb> tumeur <SEP> souris <SEP> tumeur <SEP> souris <SEP> tumeur <SEP> souris
<tb> (mm3) <SEP> (g) <SEP> (mm3) <SEP> (g) <SEP> (mm3) <SEP> (g)
<tb> 500 <SEP>  g <SEP> 461 <SEP> ¯ <SEP> 71 <SEP> 19, <SEP> 0 <SEP> 261 <SEP> + <SEP> 12 <SEP> 19, <SEP> 5
<tb> Dexamethasone
<tb> 50 <SEP>  g <SEP> 1398 <SEP> ¯ <SEP> 395 <SEP> 20, <SEP> 9 <SEP> 37 <SEP> + <SEP> 25 <SEP> 20, <SEP> 1
<tb> Dexaméthasone
<tb> 5 <SEP>  g <SEP> 1875 <SEP> + <SEP> 320 <SEP> 22, <SEP> 7 <SEP> 14 <SEP> + <SEP> 11 <SEP> 20, <SEP> 0
<tb> Dexaméthasone
<tb> IL-2-PEG <SEP> - <SEP> - <SEP> 13 <SEP> ¯ <SEP> 8 <SEP> 22, <SEP> 0
<tb> Témoin
<tb> PBS <SEP> - <SEP> - <SEP> - <SEP> - <SEP> 2649 <SEP> + <SEP> 303 <SEP> 22,

   <SEP> 4
<tb> Témoin
<tb> 
 

 <Desc/Clms Page number 17> 

 
Les résultats montrent qu'une dose de   zig   de dexaméthasone administrée quotidiennement conjointement avec 10-30  g dIL-2 est synergique et qu'il est possible de définir un intervalle qui comprendrait toutes les doses synergiquement efficaces pour   l'IL-2   et les protéines ayant une activité semblable   ä   celle de l'IL-2, par exemple l'IL-2 modifiée par le polyéthylèneglycol. 



   Le praticien peut prédire que ces résultats s'appliqueraient   ä   l'être humain sur base de la corrélation connue entre les effets antitumoraux en fonction de la dose d'IL-2 chez l'homme et les animaux. 



  Les réponses précliniques de l'IL-2 seule se sont trou-   vees   en correlation avec les réponses cliniques de l'IL-2 pour le cancer du côlon, le cancer pulmonaire, le mélanome, le carcinome des cullules rénales et le carcinome de l'ovaire. 



  EXEMPLE 2 on a soumis des souris nudes commercialisées de souche Balb/c ayant reçu en implantation sous-cutanée au cou des cellules OVCAR-3, qui est une lignée de cellules ovarienne d'origine humaine provenant du National Institutes of Health (Dr. Hamilton) et disponible à l'American Type Culture Collection, Rockville, MD, à un traitement quotidien pendant 7 jours au moyen d'IL-2-PEG, de dexaméthasone ou d'IL-2-PEG avec de la dexaméthasone, les résultats étant indiqués au tableau   111.   



   TABLEAU III 
 EMI17.1 
 
<tb> 
<tb> Traitement <SEP> Nombre <SEP> de <SEP> morts <SEP> par
<tb> jour
<tb> Dexaméthasone <SEP> zig <SEP> par <SEP> dose) <SEP> 0/8
<tb> IL-2-PEG <SEP> (l/tg <SEP> par <SEP> dose) <SEP> et <SEP> 2/8
<tb> dexaméthasone <SEP> zag <SEP> par <SEP> dose) <SEP> *
<tb> IL-2-PEG <SEP> (1 <SEP>  g <SEP> par <SEP> dose) <SEP> 6/8
<tb> 
 

 <Desc/Clms Page number 18> 

 * Pour la première injection, la dexaméthasone a été administrée en premier lieu suivie dans l'heure par l'IL-2 et les injections ultérieures ont été faites au moyen d'un mélange   d'IL-2   et de   dexaméthasone.   



   Les mêmes résultats ont été obtenus en mélangeant la dexaméthasone et   l'IL-2   initialement avant la première administration. 



   Ces résultats confirment qu'à des doses égales d'IL-2, les animaux recevant conjointement de la dexaméthasone présentent des symptômes de toxicité affaiblis. 



   En résumé, la présente invention procure une combinaison d'IL-2 et de   glucocorticoide (s) qui   a une activité antitumorale et une toxicité plus faible que l'IL-2 seule chez   les hotesnammifères.   Un avantage inattendu mals évident est que les glucocorticoides en doses modérées ne font pas obstacle à l'efficacité antitumo-   rale de I'lL-2   et que les glucocorticoides sont synergiques avec l'IL-2   ä   des doses spécifiques (doses physiologiquement admissibles) pour faire régresser une tumeur de souris induite par Meth A transplantée dans un hôte   syngénérique.

Claims

REVENDICATIONS 1 - Composition propre ä l'administration parentérale ou sous-cutanée à des hôtes mammifères en vue du traitement thérapeutique d'un cancer, caractérisée en ce qu'elle comprend un mélange d'IL-2 humaine et d'un ou plusieurs glucocorticoldes en quantités synergiquement efficaces.
2 - Composition suivant la revendication 1, caractérisée en ce qu'elle comprend en outre un excipient pharmaceutiquement acceptable pour l'IL-2 et pour le ou les glucocorticoldes.
3 - Composition suivant l'une quelconque des revendications 1 et 2, caractérisée en ce que l'IL-2 est recombinante et le cancer est un sarcome.
4 - Composition suivant l'une quelconque des revendications 1 et 2, caractérisée en ce que l'IL-2 est recombinante et le cancer est un cancer de l'ovaire.
5 - Composition suivant l'une quelconque des revendications 3 et 4, caractérisée en ce que l'IL-2 est une mutéine recombinante.
6 - Composition suivant la revendication 5, caractérisée en ce que l'IL-2 est la dés-alal-IL-2serl25.
7 - Composition suivant l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce qu'elle comprend un seul glucocorticolde qui est la dexaméthasone.
8 - Composition suivant l'une quelconque des revendications 1 ä 5, caractérisée en ce qu'elle comprend plus d'un glucocorticoldes, dont l'un est la dexaméthasone.
9 - Trousse à utiliser dans le traitement thérapeutique d'un cancer, caractérisée en ce qu'elle comprend un recipient contenant de l'IL-2 en mélange avec un excipient pharmaceutiquement acceptable et un autre <Desc/Clms Page number 20> récipient contenant un ou plusieurs glucocorticoldes en mélange avec un excipient pharmaceutiquement acceptable.